MXPA99009549A

MXPA99009549A - Peptidos de union del receptor de la calcitonina

Info

Publication number: MXPA99009549A
Application number: MXPA/A/1999/009549A
Authority: MX
Inventors: T Dean Richard; R Bush Larry; A Pearson Daniel; Listerjames John
Original assignee: Diatide Inc
Priority date: 1997-05-01
Filing date: 1999-10-18
Publication date: 2000-06-01

Abstract

La presente invención se refiere a reactivos de unión del receptor de la calcitonina que comprenden compuestos que se unen covalentemente a un quelante de metales radiactivos. La invención se materializa como derivados peptídicos de unión del receptor de la calcitonina y análogos de la calcitonina, que pueden marcarse radiactivamente con un isótopo adecuado y ser utilizados como agentes para diagnóstico radiológico o radioterapéuticos.También se proporcionan métodos y equipos para fabricar, marcar radiactivamente y utilizar estos reactivos diagnóstica y terapéuticamente, en el cuerpo de un mamífero.

Description

PÉPTIDOS DE UNIÓN DEL RECEPTOR DE LA CALCITONINA Esta invención se relaciona con los reactivos de unión del receptor de la calcitonina, que son capaces de formar compuestos complejos con ionesXetálicos, incluyendo iones metálicos radioactivos, y con modalidades marcadas de estos reactivos, para utilizarse en los sitios para la formación de imágenes, en el cuerpo de un mamífero, o para ser utilizados en terapia, particularmente para ser utilizados en la terapia del cáncer.

- ANTECEDENTES D^ A INVENCIÓN En" los últimos 60 años" se han realizado grandes progreá^s para reducir las "tendencias de mortalidad a largo plazo, para algunos tipos de cánceres, como el cáncer^de estómago. Sin embargo, durante el mismo periodo, las tejndencias de la mortali~cTad para otros cánceres han permanecido estables, o han incrementado. Por ejemplo, el cáncer*~de pulmón es el cáncer más frecuente a escala mundial, representando la principal causa de la mortalidad por cáncer entre hombres y mujeres. El cáncer de mama es el cáncer más común entre las mujeres y la segunda causa principal de mortalidad por cáncer en las mujeres, y las tasas de mortalidad por e í~ cáncer de ovarios estén incrementando en algunos países. Los cánceres linfáticos en la "niñez y en los adultos, como las leucemias y los rSÍ ~=í l mf oma s que no s on de l t i po l i nf oma de Hodg ki n , t ambi én 7- *- REF. : 31387 continúan representando causas importantes de la mortalidad por cáncer. El diagnóstico inicial y el tratamiento efectivo permanecen como un objetivo contra todos estos cánceres. Hace varios años, se propusieron el diagnóstico y la terapia dirigidos a un sitio para permitir la búsqueda i n vi vo de sitios particulares de la enfermedad dentro del cuerpo _ de un animal. En gelie ral, el diagnóstico o la terapia, dirigidos a un sitio, emplea una molécula cazadora, como puede ser un anticuerpo especifico para el sitio de la enfermedad, o para •fe*:*el organismo que originó la enfermedad, acoplada a un marcador, en el caso de un agente de diagnóstico, o a un agente citotóxico, en el caso de un agente terapéutico". Existe un gran cuerpo de literatura que se relaciona con los anticuerpos, o fragmentos de anticuerpos," para radiomarcaj e , para propósitos de formación de imágenes de diagnóstico. De manera _ similar, se han propuesto diversos agentes terapéuticos dirigidos hacia un sitio, que emplean anticuerpos monoclonales y con el tiempo se ha propuesto una variedad de radioisótopos," e.g., como se establece en s* ^*~ las Patentes Norteamericanas Nos. 4,454,106; 4,472,509; ~ ***- 4,828, £91; 5,246,691; 5,355X394; y 5,641,471; en EP 429624,^ EP 585986; WO 90/1562?, y similares. Estos agentes basados en anticuerpos producen efectos colaterales relaciTnados con las respuestas inmunes del animal tratado hacia el anticuerpo, aún si se emplean fragmentos de anticuerpos o anticuerpos humanizados como la molécula cazadora. _ " Las desventajas de los agentes de diagnóstico y terapéuticos dirigidos hacia un sitio, basados en an icuerpos, pueden ser evitadas cuando se emplean moléculas cazadoras con pesos moleculares bajos, como los ' péptidos específicos de receptores o moléculas pequeñas.

Sin embargo, el acoplamiento' de un péptido o molécula pequeña' a un agente marcador coagente citotóxico, mientras que mantiene la especif icidadXel receptor del compuesto, puede ser técnicamente difícil. Los métodos para el marcado" radiactivo de los péptidos y otras moléculas pequeñas, que conservan la capacidad del compuesto para unxrset_ de m'an*era especifica a X un receptor, son descritos en las Patentes Norteamericanas de propiedad común Nos. 5,225,180; 5,405,597; 5 , 443 ,J315 ; 5,508,020; 5,552,525; 5,561,220; 5,620,675; 5, 645 ^815; 5,654,272; 5,711,931; 5,716,596; 5,720,934; y 5,73*6, 122; en la solicitud de Patente, Nor eamericana Abandonada, Serie No. 07/955,466; y en V 92/13572; O93/10747; W093/17719; W093/21962; O93/23085; W093/25244; O94/00489; WO94/07918; y W094/28942. Los métodos que - se describen en estas patentes y publicaciones son' particularmente adecuados para la manufactura de agentes de formación de imágenes, para diagnósjt ico , dirigidos hacia un sitio. Las Patentes Norteamericanas de Asignación Común, Nos. 5,620,675; 5,716,596; WO94/00489; O95/03330; WO95/00553; W095/31221; y 09~d7?4308, describen análogos peptídicos de la somatostatina, que pueden ser utilizados para la radioterapia dirigida hacia un sitio. La Patente de Asignación Común W?95/33497_ describe análogos de la somatostatina, péptidos de unión del receptor gpIIb/IIIa, y pépfidos de unión de leucocitos que pueden ser utilizados para el diagnostico radiológico o la radioterapia dirigidos hacia^ un sitio. La Patente de Asignación Común WO96/30055 describe péptidos de unión del receptor del péptido intestinal vasoactivo (VIP vasoactive intestinal peptidé ), los cuales pueden ser utilizados para el diagnostico radiológico o la radioterapia dirigida hacia un sitio. Las células tumorales_ a menudo expresan o sobreexpresan, de manera ocasional, un receptor o subtipo de receptor particular, como és indicado por los estudios de unión del receptor. En algunos tipos de cáncer, los marcadores de la célula tumoral pueden cambiar a medida que la enfermedad progresa, 'reflejando, posiblemente, la etapa de la enfermedad y, por" consiguiente, el pronóstico del paciente. El tipo de receptor que expresa una célula tumoral' puede ser característico de la etiologia del tumor y, po'r consiguiente, puede" proporcionar un marcador relativamente específico para =el tumor. Por ejemplo, se ha demostrado que los análogos de la somatostatina marcados radiacti amente se unen específicamente a los tumores neuroendocrinos , a melanomas, al cáncer del pulmón, y a ciertosl cánceres de mama. Uno de estos análogos, pIIn-OCTREOSCAN, ha recibido aprobación de mercado para ser utilizado en la formación deT imágenes de los tumores neuroerf ocrinos . ün segundo análogo de la somatostatina marcado*^ radiactivamente, ""Tc-Depreot ide , ha completado los ensayos Clínicos de la Fase III, para ser utilizado en la formación de imágenes de los cánceres de pulmón. Se ha mo s t rado que el péptido int e~s tinal 123I-vasoactivo caza adenoca'rcinomas del colon y deX estómago. Lan cal cit onina (CT) es urrT péptido de 32 aminoácidos secretado de la tiroides en respuesta a niveles elevados de sos efe de la las en ara la món y s la res CT inc el sistema nervioso central, el péptido induce analgesia, secreción de ácido gástrico X la inhibición del apetito. Pequeñas cantidades de CT Xan sido administ adas a A animales y humanos sin efectos tóxicos, y la CT del salmón es utilizada clínicamente para" tratar trastornos del hueso como la enfermedad de Paget, la hipercalcemia maligna y la osteop rósis . La calcitonina administrada intravenosamente clarea ola sangre rápidamente y es excretada principalmente en la orina. Los sitios principales de localización para la CT administrada son el riñon, el higado y -iraps epífisis de los "huesos largos. Los niveles circulantes de CT son considerados como marcadores para algunos tipos o etapas del cáncer, por ejemplo, el carcinoma medular de la tiroides, el cáncer de las células pequeñas del pulmón, carcinoides, cáncer de mama y el cáncer gastrointestinal. Los receptores de alta afinidad, de la CT, han sido identificados en células linfoides, líneas celulares del cáncer de pulmón humano, las lineas celulares del cáncer de mama humano, y en el tejido del cáncer de mama inicial. Findlay et al., (1981) Bi och em J. 196: 513-520, reporta que los receptores de la CT son sobreexpresados en ciertas líneas celulares del cáncer de mama, de pulmón, de ovarios y linfomas. Las secuencias de aminoácidos de la CT de diversas especies (humano, de salmón y de anguila) se establecen e n s e gu ída : hCT CG LSTCMLGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVG .AP . amida (SEQ ID NO. 1) sCT CGNlSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSG.*fP . amida (SEQ ID NO. 2) eCT CGNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTDVGAG .~TP . amida (SEQ ID NO. 3) (don ra, para los amin Biochemistry, 2da . 33, y donde los residuos de cist del péptido, representan un enlace disulfüro) . Entre las especies se conser an, nueve residuos, incluyendo los residuos de la amida "parolina del carboxílo terminal y los residuos de i - ?_ cisteína unidos con enlace disulfuro, en las posiciones 1 y 7 tes que en los nte es ono for ibe en gos de la reg la mol ión débil con los receptores de la CT . Pueden realizarse muchas_ sus tituciones de aminoácidos entre los residuos 8 y 22 de la molécula de CT para generar análogos biológicamente activos de la CT. Algunos análogos de la CT que presentan sólo una mínima homología de secuencia con cualquier forma natural de la CT tienen actividad biológiXa similar a la de la CT del salmón. Los derivados peptídicos de la CT truncada (como Cbz -LHYKLQY-Ome ) también retienen una actividad sustancial de unión del receptor. Debido a que los tumores pueden expresar o sobreexpresar diferentes receptores, se requiere de una variedad de agentes para ^Xiagnós t ico radiológico y radioterapéuticos para lograr modalidades de diagnóstico y terapéutica óptimas contra el cáncer.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Los' receptores de CT en las superficies de las células del aáenocarcinoma del pulmón y de los ovarios, de los cánceres de mama y de los linfomas, pueden ser explotados como marcadores para localilar, identificar, y tratar estos tumores in vivo. Los inventores de la presente han desarrollado por primera vez pequeños compuestos • sintét rTcos , incluyendo péptidos derivados de la CT, que poseen- la capacidad para una unión de alta afinidad con .los receptores de la CT y con una farmacocinética favorable, con lo cual si" permite la localización eficiente in vivo de los agentes de diagnóstico y terapéuticos en los sitios de los tumores. Los reactivos de" la ^invención proporcionan la base para procedimientos de formación de imágenes jara diagnósticos rápidos, efectivos con respecto al costo, no invasivos, útiles para la detección de los tumores, la caracterización de las etapas de la enfermedad y la evaluación de la distribución metastática de los tumores", caracterizadas por la expresión o sobreexpresión de .os receptores de la C . Los reactivos de la invención también proporcionan las bases para "evaluar la efectividad terapéutica de otras modalidades de tratamiento, por ejemplo, por medio de la localización de las células tumorales que expresan los receptores de la CT después de una cirugía, terapia por radicaciones o quimiote apia. Los reactivos de la invención también pueden ser utilizados como moléculas cazadoras para la radioterapia di rigida hacia un sitio. La invención proporciona reactivos de unión del receptor de la CT que comprenden compuestos de unión del receptor de la CT, preferiblemente péptidos de la CT, JJ derivacíos de la CT o . análogos de la CT, que se unen covalentemente a un agente quelante de un metal radiactivo. Los compuestos de "unión del receptor de la CT que se^emplean en los reactivos de la invención, tienen un peso m lecular menor a aproximadamente 10,000 daltones. En algunas" modalidades, los reactivos de la invención están caracterizados como péptidos, en virtud de la presencia de un enlace peptídico ya sea en la porción de unión del receptor de la CT, del reactivo, o en virtud de la presencia de un enlace peptídico en el agente quelante del metal radiactivo. Los reactivos de la invención tienen una afinidad de unión del receptor de la CT que no es menor a aproximadamente un décimo de la afinidad de la CT natural, con yodo radiactivo, para el receptor, cuando se compara en un ensayo estandarizado, como los ensayos que se describen en el Ejemplo 4 más adelante. En las modalidades pre fe ridas, los reactivos de la invención tienen una afinidaTd de unión del receptor de la CT igual o mayor que la CT natural o las especies con yodo radiactivo de la CT natural^ para el receptor, cuando se comparan en el ensayo estandarizado. Los compuestos farmacéuticos radiactivos de la invención pueden ser empleados como agentes de diagnóstico específicos de un sitio o agentes terapéuticos. Cuando se marcan"" con tecnecio-99m, yodo-123 y yodo-131, los reactivos de la invención pueden ser empleados como agentes escintigráficos paradla formación de imágenes. Cuando se marcan con un metal magnético, paramagnético, supermSgné tico o superparamagñé t i co , los reactivos de la invención pueden ser empleados como agentes de contraste para 'resonancia magnética. Cuando se marcan con radionúclidos citotóxicos, los reactivos de la invención pueden ser utilizados para la radioterapia dirigida hacia un sitio. La invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de unión del receptor de la CT marcados radiactivamente de la invención y un Xrehículo farmacéuticamente aceptable. También se proporcionan los métodos para fabricar los reactivos de unión .del receptor de la CT, de la invención, y las modalidades marcadas radiactivamente de los mismos. La invención también proporciona equipos para la preparación de los compuestos "de unión del receptor de la CT, marcados radiactivamente, a partir de los reactivos de la invención. Los equipos de- la invención comprenden un r -"5- ^í_ vial cerrado herméticamente que contiene una cantidad predeterminada de un reactivo de la invención y, opcionálmente , una cantidad"" suficiente de un agente reductor para marcar radiactivamente el reactivo. Esta invención proporciona métodos para utilizar los — rrr. reactivos de unión del receptor de la CT, marcados radiactivamente, de la invención, para diagnóstico y terapéutica. En una modalidad, se proporcionan métodos para utilizar los reactivos de la invención, en forma marcada_, para los sitios de formación de imágenes, dentro del cuerpo de un mamífero, para obtener imágenes m vivo.

Estos métodos comprenden las* etapas de administrar una cantidad efectiva para el diagnóstico de los reactivos marcados de la invención, y detectar el marcador localizado en el sitio, dentro"" del cuerpo del mamífero. La invención también proporciona métodos para aliviar enfe me ades caracterizadas"*" por la expresión, o sobreexpresión, de los receptores de la CT, que comprende la etaTpa de admi i s t rar una cantidad terapéuticamente efectiva de un reactivo de unión al receptor de la CT, marcado radiactivamente, de la invención, al mamífero. Otros aspectos y ventajas de la presente invención se hacen aparentes a partir de la siguiente descripción más detallada de las modalidades ^preferidas establecidas más adelante . "~~"~ 2-. DESCRIPCIÓN DETALLADA DB LA INVENCIÓN La" presente invención proporciona reactivos de unión al receptor de la CT, útiles en la preparación de agentes farmacéuticos de unión al receptor de la CT, para diagnóstico y terapia. Para los propósitos de esta invención, el término "compuesto de unión del receptor de la CT" .pretende abarcar la CT natural, los fragmentos de la C?Xlos análogos de la CT y derivados de la CT que se unen específicamente al receptor de la CT expresado en una variedad de tipos celulares, reconocidos por aquellos entrenados en la técnica. Los compuestos que se diseñan para igualar las propiedades de la CT, en cuanto a la unión al receptor, también están incluidos en esta definición y están dentro del alcance de la invención. Para los propósitos de esta invención, el término "afinidad de unión al receptor de la CT" pretende significar la afinidad de unión, tal como se mide por cualesquiera métodos conocidos por aquellos entrenados en la técnica, incluyendo, entre otros, los métodos que miden la afinidad de unión por medio de una constante de disociación, una constante de inhibición o un valor de I C 50 • El término "que tiene una afinidad de unión al receptor de la CT de al menos" un décimo de la afinidad de la CT con yodo radiactivo, para ese receptor", pretende significar que la constante de disociación (Kd) del reactivo no es menor a diez veces el valor de la Kd de la CT con yodo radiactivo, según se mide en un ensayo de unión directa al receptor de la CT o de inhibición competitiva, o que la constante de inhibición (KJ , o la IC50 del reactivo no es más d -*-e 10 veces la de la CT con yodo radiactivo, según se mide en un ensayo de inhibición competitiva del receptor de la*~CT. El término "que tiene una afinidad de unión al receptor de la CT igual o mayor a la de la CT natural, o de las especies yodadas radiactivamente de la CT, para el receptor de la CT" , significa que abarca los reactivos que tienen una constante de disociación (Kd) igual o mayor a la de la CT no marcada o de la CT con yodo radiactivo, según es medida por un ensayo de unión directa al receptor de la CT, o de inhibición competitiva. Alternativamente, este término puede interpretarse qXe incluye los reactivos que tíenen_ una constante de inhibición (K o IC50 igual o menor _al de la CT natural o CT con yodo radiactivo, según se mide en un ensayo de inhibición competitiva del receptor de la CT. De acuerdo con la invención, los reactivos de la invención tienen una afinidad de unión al receptor de la CT al "menos diez veces mayor que la afinidad de la CT natural con yodo radiactivo para este receptor, cuando se compara en un ensayo estandarizado, como se describe más adelante. En las modalidades preferidas, los reactivos de la invención tienen una afinidad del receptor de unión de la CT igual o mayor que la CT natural o las especies yodadas radiactivamente de la CT para ése receptor, cuando se comparan en el ensayo estandarizado. La? constantes de disociación o las constantes de inhibición de la unión de los compuestos farmacéuticos radiactivos de la invención relacionados con el receptor de la CT, así como la comparación de la afinidad o avidez de esta unión con la unión de la CT misma marcada con 125I, puede ser determinada utilizando métodos conocidos, como los que se establecen en Re cep to s , A Qu a n t i ta ti ve Approa ch (Recep t ores , un a Aproxima ci ón Cu a n t i t a t i va ) , A. Levitzki, The Benj amin/Cummings Publishing Company (California, 1984) . Preferiblemente, se emplea un ensayo de unidn del receptor de la ~ CT estandarizado, como los ensayos establecidos en el Ejemplo 4, más adelante, para medir la afinidad de unión del receptor de la CT, de los reactivos de la invención.

Además del compuesto de unión del receptor de la CT, los reactivos proporcionados por esta invención comprenden un agente quelante de un metal radiactivo que se une covalentemente al compuesto de tal forma que la especificidad de unión del compuesto para el receptor de la CT ""no se altera sustancialmente. Cualquier agente quelante del metal radiactivo puede estar unido covalentemente a un compuesto Xe unión del receptor de la CT, para proporcionar un" reactivo de la invención. Por ejemplo, un compuesto de unión del receptor de la CT, preferiblemente un péptido, puede unirse covalentemente a un agente quelante de la fórmula: T C(pgp) 5- (aa) -C (pgp) 5 donde (pgp)5 es hidrógeno o un grupo protector de tiol y (aa) es cualquier a- o ß-aminoácido que no comprende un grupo tiol. En una modalidad preferida, el aminoácido es glicina. " Como otro ejemplo, un agente quelante de un metal radiactivo útil en los reactivos de la invención comprende un grupo que contiene un solo tiol, de la fórmula: A-CZ (B) - {C (RaR ) }n-X donde A es H, HOOC, H2NOC, ( pep t ido ) -NHOC , ( pépt ido ) -OOC , RSNCO, o Rd; B es H, SH o -NfíR0, -N ( Rc )'- (pépt ido ) o Rd; Z es H o_Rd; X es SH o -NHRC; -Ñ ( Rc )-( pépt ido ) o Rd ; Ra, Rb , Rc y Rd_son, independientemente, H o un alquilo inferior de cadenaXecta o _ ramif icada, o cíclico; n es 0, l o 2; Re es alquilo__C?-Ci, un aminoácido o un péptido que comprende desde aproximadamente 2 hasta 10 aminoácidos; y: (1) donde B es -NHRC o -N (Rc) - (péptido) ,~X es SH y n es 1 o 2; (2) donde x" es -NHRC o -N (Rc) - (pép€ido ) , B es H y n es 1 o 2; (3) donde B es H o Rd, A es HOOC, H2NOCm (péptido) -NHOC, o (péptidd) -OOC, X es SH y n es 0* o 1; (4) donde A es H o Rd, entonces, cuando B es SH, X es -NHRC o -N (Rc )- (péptido) y donde X* es SH, B es -NHRC o -N ( Rc )- (péptido ) y n es 1 o 2; (5) donde X es H o Rd, A es HOXC, H2NOC, (péptido ) -NHOC , o (péptido) -OCC y B es SH; (6) donde Z es metilo, X es metilo," A es HOOC, H2NOC, ( péptfido ) -NHOC , o ( pépti do ) -OOC y B es SH_ y n es 0; y (7) donde "B es SH, X no es SH y donde X es SH, B no es SH. Las modalidades preferidas" de este agente quelante de metales radiactivos tienen la fórmula química: R^CO- (aminoácido) x- (aminoácido) 2-Z donde ""(aminoácido)1 y (aminoácido)2 son, cada uno, de manera independiente, cualquier a- o ß-aminoácido primario que no "comprenda un grupo tiol, Z es un grupo químico que contiene tiol, que es cisteína", homocisteína , isocisteína, penici?amina , 2-mercaptoet ilamlna o 3-mercapt opropi lamina , y R1 es alquilo inferior (Ct-C4), un amino^ácido o un péptido que comprende de 2 a 10 aminoácidos. Cuando Z es cisteína, homocisteína o penicilamina, el grupo carbonilo de este, grupo químico está unido covalentemente a un grupo hidroxilo, un grupo NR3R4; donde R3 y R4 son, independientemente, H o alquilo inferior {C_,-C4), un aminoácido o un péptido que comprende de 2 a 10 aminoácidos; o Y- (aminoácido) 2- (aminoácido) 1-NHR2 donde 'Y es un grupo quirmicq_ que contiene tiol que es cisteina, homocis teína, isocisteína, penicilamina, 2-mercaptpacet ato o 3-mercapfoacetato, (aminoáci o)1 y (aminoácido)2 son, cada uno independientemente, cualquier a- o ß-aminoácido primario que no comprende un grupo tiol, y R2 es" H o un alquilo inferior (C?-C4), un aminoácido o un péptido que contiene de 2 a to aminoácidos. Cuando Y es cisteína, homocis teina, isocisteína o penicilamina, el grupo aminoácido del grupo químico se encuentra unido covalentemente a -H, un aminoácido o un péptido que comprende de 2 a 10 aminoácidos. En modalidades particulares de este aspecto de la invención, la fórmula de este agente quelante del metal radiactivo se" selecciona del gtupo que consiste de: - (aminoácido) 1 - (aminoácido) 2-A-CZ (B) - {C (R^2) }n-X) / -A-CZ (B)X {C (R2R2) }n-X} - (aminoácido) x - (aminoácido) 2, -(un a,?- o ß, ?-diaminoácido primario )-( aminoácido ) 1-A-CZ (B) ~{C (RaR2) }n-X}, y -A-CZ (B) - {C (R^2) }n-X}- (aminoácido) 1 - (un a,ß- a,?-diaminoácido primario), donde (aminoácido)1 y (aminoácido)2 son, cada uno, independientemente, cualquier ce- o ß-aminoácido natural, modificado, sustituido o alterado, que no contiene el grupo tiol; A es H, HOOC, H2NOC, (aminoácido o péptido) -NHOC, (aminoácido o* pépt ido ) -OOC , o R4 ; B es H, SH o -NHR3, -N (R3) - (aminoácido" o p^éptido) o R4 ; Z es H o R4; X es SH o -NHR3, - ( R3 )-( aminoácido o péptido) o R4 ; R1 , ¿ R" son, cada uno, independientemente, H un alquilo inferior de cadena recta o ramificada o alquilo inferior cíclico; n es un entero que es ya sea 0, 1 o 2; (péptido) es un péptido de 2^ a 10 aminoácidos; y: (1) donde B es -NHR3 o -N (R3) - (aminoácido o péptido), X es SH y n es 1" o 2; (2) donde X es -NHR3 o -N ( R3 )-( aminoácido o péptido) , B es SH y n es 1 o X; (3) donde B es H o R4 , A es HOOC, H2NOC, (aminoácido o peptido) -NHOC , (aminoácido o péptido) -OOC, X es SH y N es 0" o 1; (4) donde A es H o R , entoncejs, donde B es SH, X es -NHR3 o -N ( R3 )-( aminoácido o péptido") y donde X es SH, B es NHR3 o -N ( R3 )-( aminoácido o péptido) y n es 1 o 2; (5) donde X es H o R4 , A es HOOC, H2NOC ,_( aminoácido o pépt ido ) -NHOC , (aminoácido o péptido) -OOC X B es SH; (6) donde "Z es metilo, X es metilo, A es -HOOC, H2NOC, (aminoácido o pépt ido ) -NHOC , (aminoácido o péptido) -OOC y B es SH y n es 0; y (7) donde B es SH, X no es SH, y donde X es SH, B no es SH. Las modalidades específicas preferidas de este aspecto de la* invención incluyen agentes quelantes de metales radiactivos, que tienen una formula que se selecciona del grupo "que consiste de: -Gly-Gly-Cys- , Cys-Gly-Gly- , Gly-Gly-Cys"-, - ( e-Lys ) -Gly-Cys - , (" -Orn ) -Gly-Cys , - (?-Dab ) -Gly-Cys-, - (ß-Dap) -Lys-Cys-, y -"Tß-Dap) -Gly-Cys- . (En estas fórmulas, se -comprenderá que e-Lys representa -un residuo de lisina en el cual el grupo e-amino, más que el típico grupo a-amino, se encuentra unido covalentemente al grupo carboxilo del aminoácido adyacente para formar un enlace peptídico; d-Orn representa un residuo de ornitina en el cual el grupo d-amino, más que el típico grupo a-amino, se encuentra unido covalentemenfe al grupo carboxilo del aminoácido adyacente para formar un enlace peptídico; ?-Dab representa un resido de ácido 2 , 4 -diaminobuti rico en el cual eí grupo ?-amino está unido covalentemente al grupo carboxilo del aminoácido adyacente para formar un enlace peptídico; y ß-Dap representa un residuo de ácido 1,3-diaminopropiónico en el cual el grupo ß-amino está unido covalentemente al grupo "carboxilo del aminoácido adyacente, para formar un enlace peptídico) . E _ otra modalidad, el __agente quelante del metal radiactivo, del reactivo de "la invención, es un agente quelante bisamino-bistiol que tiene la fórmula: NH Tj-A-CO-pépíMo (CR?, s-G?gp)J s-ípgp)1 donde cada R puede ser, independientemente, H, CH3 o C2H5; cada (pgp)5 puede ser, independientemente, un grupo protector de tiol o H; m, n y p son, independientemen e, 2 o 3; A es un alquilo inferior lineal o cíclico, arilo, heterociclilo, combinaciones o derivados sustituidos de los mismos; y X es péptido. Alternati amente, el agente quelante_ bisamino bistiol, en esta modalidad de la invención, tiene la fórmula: donde cada R es, independientemente, H, cH3 o C2H5; m, n y p son," independientemente, 2. O 3; A es un alquilo inferior lineal o cíclico, arilo, heterociclilo, combinaciones o derivados sustituidos de los mismos; V es H o CO^-péptido; R' es H o péptido; a condición de que cuando V es H, R' es péptido y cuando R' es H, V es C0-péptido. Para los propósitos de esta invención, los grupos químicol quelantes que tienen estas estructuras serán denomiXados grupos químicos "BAT". Alternativamente, el agente quelante del metal radiactivo utilizado en el reactivo de la invención, puede tener una formula seleccionada del grupo que consiste de: ácido _ diet ilent iaminopentaacét ico (DTPA) (H00CCH2) 2N(CR2) (CR2)N(CH2COOH) (CR2) ( CR2 ) N ( CH2COOH ) ; donde cada R es, independientemente, H, alquilo C_.-C4, o arilo y una R está unida covalentemen€e a un enlazador divalente; ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) (H00CCH2) 2N (CR2) (CR2)N (CH2COOH) ; donde cada R es, independientemente, H, alquilo C_-C4, o arilo y una R está unida covalentemente a un enlazador divalente; ácido 1, 4, 7, 10-tetraazadodecanotetraaXético; donde n es un entero que es "2 o 3; y donde cada R es, independientemente, H, alquilo C1-C4, o arilo y una R está unida covalentemente al compuesto de unión del receptor de la CT; y desferpoxamina . La mayor parte de los metales radiactivos pueden ser quelados con los reactivos de la invención, comprendiendo los agentes quelantes de metales radiactivos mencionados anteriormente. Los reactivos de la _ invención también pueden comprender un agente quelante de metales radiactivos seleccionado del grupo que consiste de: (i) un grupo que tiene la fórmula: ( i i ) un grupo que ti ene l a fórmula : donde n, y p son, cada uno, enteros que son, independientemente, 0 o 1; cada R' es, independientemente, H, alquilo inferior, hidroxialquilo C2-C4, o alcoxialquilo C2-C4; y cada R es, independientemente, H o R" , donde R" es alquilo inferior o fenilo sustituido o no sustituido que no comprenden un grupo tiol, y una R o R' es L, donde L es un grupo químico enlazador divalente, que une el agente quelante del metal con el grupo cazador y donde, cuando una R' es L, NR'2 es una amina. En las modalidades preferidas, L es un grupo alquilo Ci-Ce, de cadena lineal o ramificada, o cíclico, un éster carboxílico, una carboxamida, una sulfonamida, un éter, un tioétef , una amina, un alquerfo, un alquino, un anillo de benceno enlazado en 1,2-, 1,3- o 1,4-, opcionalmente sustituido, o un aminoácido o péptido desde 2 hasta aproximadamente 10 a inoácido's, o combinaciones de los mismos . En las modalidades preferidas, R" es un grupo alquilo C_-C6, ""de cadena lineal o ramificada, o cíclico; un grupo -CqOCr-, CqNHCr- o donde q y r son enteros y cada uno es, independientemente, de 1 a 5, donde la suma de q+r no es mayor a 6; alquilo-X (C?-C6), donde X es un grupo hidroxilo, una amina sustituida, una guanidina, una amidina, un grupo tiol sustituido, o un ácido carboxílico, un grupo éster, fosfato, o sulfato; un grupo fenilo o un grupo fenilo sustituido con un halógeno, hidroxilo, amina, guanidina, amidina sustituidas, un grupo tiol, éter, fosfato o sulfato sustituidos; un grupo indol; un grupo hetero cíclico d-C6 que contiene de 1 a 3 átomos de nitrógeno, oxígeno o azufre, o combinaciones de los mismos . — De acuerdo con la invención, el agente quelante del metal radiactivo, del reactivo de unión del receptor de la CT, puede tener la fórmula: donde R1 y R2 so cada uno, independientemente, H, alquilo inferior, hidroxialquilo C2 ~ C? Z o alcoxialquilo C;-C ; R3 , R4, R5 y R6 son, independientemente, H, alquilo inferior o fenilo sustituido o no sustituido que no comprenden un grupo tiol; R7 y R8 son, cada uno, independientemente, H, alquilo^ inferior, hidroxialquilo inferior o rlroxialquilo inferíqr ; L es un grupo en1á zador divalente y X es un péptido de la C . Los agentes quelantes del metal preferidos, adicionales, de la invención, incluyen los agentes quelantes de la fórmula: donde R1 y R2 son cada uno, independientemente, H, alquilo inferior, hidroxialquilo 2 - _j_ o alcoxialquilo C2-C4; R3, R , R y R son, independientemente, H, alquilo inferior o fenilo sustituido o no sustituido que no comprenden un grupo tiol; y una de R3 , R4 , R^ o R6 es Z-L-HN ( CH2 ) n- , donde L es un grupo enlazador divalente, Z es un grupo químico cazador, y n es un entero de ? a 6; R7 y R8 son cada uno, independientemente, H, alquilo inferior, hidroxialquilo inferior o alcoxialquilo inferior; y X es un grupo amino, un grupo amino sustituido ó -NRX-Y, donde Y es un aminoácido, una amida de aminoácido, o un péptido que comprende de 2 a 10 aminoácidos. Más agentes quelantes del metal, preferidos, de la invención incluyen los agentes quelantes que tienen la fórmula': donde R1 y R2 son cada uno, independientemente, H, alquilo inferior, hidroxialquilo inferior, o alquenilalquilo inferior; R3 y R4 son, independientemente, H, alquilo inferior o fenilo sustituidos o no sustituidos que no comprenden un grupo tiol; n es un entero de 1 a 6; L es un grupo ^enlaz dor divalente; y "" Z es un grupo químico de péptido de la CT . Grupos químicos quelantes adicionales, preferidos, incluyen los agentes quelantes de la fórmula: donde L es un grupo enlazador divalente y Z es un grupo químico de un péptido d« la CT. Los grupos químicos quelantes más preferidos de la invención incluyen los agentes quelantes que tienen las siguientes fórmulas: (aminoácido) x- (aminoácido) 2-cisteína-, ( aminoácido) 1- (aminoácido) 2-isocisteína-, (aminoácido) x- (aminoácido ) 2-homocisteína- , ( aminoácido ) x- (aminoácido) 2 -penicilamina- , (aminoácido)1-(aminoácido) 2- 2 -mercaptoet ilamina- , (aminoácido) x - ( aminoácido) 2- 2 -me captopropi lamina- , (aminoácido) x- (aminoácido) 2-2-mercapto-2-me ti lpropi lamina- , (aminoáci o) x- (aminoácido) 2-3-mercaptoprppil amina-, donde (aminoácido) es un a- o ß-aminoácido que no comprende un grupo tiol y donde el agente quelante se encuentra unido a cualquiera de un grupo químico cazador o un grupo enlazante vía un enlace covalente con el término carboxílico del agente quelante, o una cadena lateral sobre uno de los grupos de aminoácido. La mayor parte de los agentes quelantes preferidos también" incluyen los agentes quelantes de la fórmula anterior donde (aminoácido)1 es ya sea un a,?- o ß,?-aminoácido donde el grupo a- o ß-amino es una amina libre y el a,?- o ß , ?-aminoácido se encuentra unido covalentemente vía el grupo ? ammo.

Otros agentes quelantes más preferidos incluyen aquellos seleccionados del grupo que consiste de: -cis teína- ( aminoácido )- (a, ß- o ß, ?-diaminoácido > ; -isocisteína- (aminoácido) - (a, ß- o ß, ?-diaminoácido); -homocisteína- ( aminoácido) - (a, ß- o ß, ?-diaminoácido ) ; -penicilamina- ( aminoácido )- (a, ß- o ß, ?-diaminoácido ) ; -ácido 2 -mercaptoacético- ( aminoácido )- (a, ß- o ß,?-diamino ácido ) ; _ -ácido 2- o 3-mercaptopropiónico- ( aminoácido )- (a, ß- o ß,?-diaminoácido); -ácido 2-mercapto-2-metilpropiónico- (aminoácido) - (a, ß- o ß, ?-diaminoácido ) ; donde (aminoácido) es un a- o ß-aminoácido que no comprende un grupo tiol y donde el agente quelante se encuentra unido a cualquiera de un grupo químico cazador o un grupo enlazante vía un enlace covalente con el término amino del agente quelante, o una cadena lateral sobre uno de los grupos de aminoácido. Los agentes quelantes del metal par icularmente preferidos se seleccionan del grupo que consiste de: Gly-Gly-Cys-, Arg-Gly-Cys- , - ( e-Lys ) -Gly-Cys- , -(d-Orn)- Gly-Cys-, - (?-Dab) -Gly-Cys-, - ( ß-Dap) -Lys-Cys- , y -(ß-Dap)-Gly-Cys-. (En estas fórmulas, las designaciones de aminoácido tienen el mismo significado que el establecido anteriormente) . ün _ ejemplo de un agente quelante de metales radiactivos que tienen la estructura III mencionada anteriormente, es Gly-Gly-Cys- , donde el grupo químico del agente quelante tiene la estructura: de calcitonina Los ligandos quelantes que tienen la estructura del tipo VII forman complejos de oxotecnecio que tienen la es tru de caicitonina ün ejemplo de agentes quelantes de metales radiactivos que tienen la estructura del tipo V, como se mostró anteriormente, es Lys- ( ?-pépt ido ) -Gly-Cys . amida , que forma un quelante de la siguiente estructura: -compuesto de unón de receptor e calcitonina -HN NH2 HS IX.

Los ligandos quelantes que tienen la estructura del tipo IX forman complejos de oxotecnecio que tienen la estructura : compuesto de % ün" ejemplo de un reactivo de la invención que comprende un quelante de un metal radiactivo, que tiene la estructura II, como se mostró anteriormente, es (grupo cazador ) -Cys-Gly-a, ß-diaminopropionamida que forma un quelante de estructura: compuesto de unión Los agentes para diagnóstico radiológico que tienen la estructura del tipo XI forman complejos de oxotecnecio que tienen la estructura: compuesto de unión del receptor En "los quelantes de metal radiactivo y los reactivos de unión del receptor de la CT proporcionados por la invención, que contienen un tiol unido covalentemente a un grupo protector de tiol { (pgp)5}, los grupos protectores de tiol pueden ser los mismos o diferentes y pueden ser, sin limitarse a: ~ "~ -CH2-arilo (arilo es fenilo o alquilo o fenilo sustituido con alquiloxilo); -CH-(arilo)2, (arilo es ferrilo o alquilo o fenilo sustituido con alquiloxilo); -C-(arilo)3, (arilo es fenilo o_ alquilo o fenilo sustituido con alquiloxilo); -CH2- ( 4 -met oxifenilo ) ; -CH- ( 4 -piridil ) (fenilo)2; -C(CH3)3; _ -9-fenilfluoroenilo; -CH2NHCOR (R es alquilo o arilo sustituido o no sustituido); -CH2-NHCOOR (R es alquilo o arilo sustituido c no sustituido); -CONHR (R es alquilo o arilo sustituido o no sustituido); -CH2-S-CH2-f enilo . Los grupos protectores preferidos tienen la fórmula -CH2- NHCOR, donde R es un alquilo inferior que tiene entre 1 y 8 átomos de carbono, fenilo o fenilo sustituido con alquilo inferior, hidroxilo, alcoxilo inferior, carboxilo, o alcoxicarbonilo inferior. El grupo protector más preferido es un grupo acet amidómet ilo . Cuando el reactivo de la invención comprende un compuesto de unión del receptor de la CT, que es un péptido, el péptido preferiblemente comprende la secuencia de aminoácidos: CH2CO. SNLSTX- SEQ ID NO. : 10 donde X se selecciona del grupo que consiste de un residuo de cisteína, un residuo de homocis teína , y un residuo de ho ohomocís teína . Alternativamente, el péptido puede comprender la secuencia de aminoácidos: CHzCO.X^LSTX2- SEQ ID NO. : 11 donde X1 se selecciona del grupo que consiste de un residuo de alanina, un residuo de glicina, y un residuo de serina; y X2 se selecciona del grupo que consiste de un residuo de cisteína, un residuo de homocisteína y un residuo de homohomocis teína . Estos péptidos incluyen los análogos de la CT humana natural y los análogos peptídicos de la CT, como los que se ejemplifican específicamente en las secuencias de aminoácidos que se establecen enseguida: CH2CO.SNLST.Hhc . VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP . amida (SEQ ID No . 5) ", CH2CO. SNLST . H cy . VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP. amida (SEQ ID No . 6) , CH2CO . SNLST .Cys . VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP . amida (SEQ ID No . 7 ) , y SNLST. s u. VLGKLSCELHKLQ YPRTNTGSGTP. amida (SEQ ID No. 8 ) . Las modalidades particularmente preferidas de los reactivos de la invención incluyen: CH2CO. SNLST . Hhc. VLGKLSC (BAT) ELHKLQTYPRTNTGSGTP. amida (SEQ ID No . 4) , CH2CO. SNLST. Hhc . VLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP (e-K) GC. amida, CH2CO. SN S T . Hhc. VLGKLSC ( CH2CO . GGCK . ami a ) ELHKLQTYPRT?TGSGTP . amida, CH2CO. S'?LST. Hhc. VLGKLSC (CH2CO. fß -Dap ) KCK . amida ) ELHKLQTYPRT ?TGSGTP . amida, CH2CO. S?LST .Hhc .VLGKLSC (CH2CO. (e-K)GCE. amida) ELHKLQTYPRT?TG SGTP . amida, CH2CO. ¿NL S . Hcy .VLGKLSC (CH2CO. GGCK. amida) ELHKLQTYPRT?TGSG P . amida , CH2CO. S'?LST . Hcy .VLGKLSC (CH2CO. (*ß-Dap ) KCK . amida ) ELHKLQTYPRT ?TGSGTP. amida, CH2CO. S?LST .Hcy .VLGKLSC (CH2CO. (e-K) GCE. amida) ELHKLQTYPRT?TG SGTP. amida, CH2CO. S~?LST . Cys .VLGKLSC (CH2CO. GGCK. amida) ELHKLQTYPRT?TGSGTP . amida , CH2CO. S?LST. Cys .VLGKLSC (CH2CO. (ß-Dap) KCK. amida) ELHKLQTYPRT ?TGSGTP. amida, CH2CO. S?LS .Cys .VLGKLSC (CH2CO. (e-K) GCE. amida) ELHKLQTYPRT?TG SGTP. amida, SNLST. su. VLGKLSC (CH2CO. (ß-Dap)'KCK. amida) ELHKLQTYPRTNTGSG TP . amida , y SNLST. Asu. VLGKLSC (CH2CO. (ß-Dap)'?CK. amida) ELHKLQTYPRTDVGAG TP. amida. Todos los aminoácidos "naturales son abreviados utilizando las abreviaturas estándar (que pueden encontrarse en G. Zubay, Bi och emi s try (2a Ed.), 1988 (MacMiílen Publishing: New York) p. 33. Para los propósitos de esta invención, los aminoácidos naturales se caracterizan como lipofílicos (alanina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina, prolina, triptofano y valina, así como los derivados S-alquilados de la cisteína), hidrof11 i cos ( asparragina , glutamina, treonma, serina), ácidos (ácido glutámico y ácido aspártico) , básicos (arginina,"" histidina y lisina) . e-K, d-Orn, ?-Dab y ß-Dap tienen los significados establecidos anteriormente. (BAT) representa el ácido N6,N9-bis(2-mercapto-2 -met il-propil ) - 6 , 9-diazanonanóico ; K . ( BAT ) y Lys. (BAT) representan el aminoácido lisina acilado en el s. grupo "e-amino, sobre la cadena lateral del aminoácido, hasta (BAT); C . ( BA ) y Cys (BAT) representan S- (N6 , N9-bi s ( 2 -mercapto-2-metilpropil ) -6, 9-diazanonan-l-il ) cisteína; (BAM) " "es (Nx,N4-bis ( 2 -mercapto-2 -met i lpropi 1 ) -1, 4 , 10-triazadecano; (BAT-BM) es N- { 2- (N' , N' -bis ( 2 -maleimidoeti 1 ) aminoetil }-N9- (t-butoxicarbonil) -N6, N9-bis ( 2 -met il-2 -tri fenil-metiltiopropil ) -6, 9-diazanonanamida ; (BAT-BS) es N-{2-(NXN'-bis (2-succinimidoeti ) aminoetil) -N6,N5-bis (2-mercapto-2-metilpropil ) -6, 9-diazanonanamida ; (BMH) es bis-maleimidohexano ; (BSH) es bis-succinimidohexano ; (BMME) es bis-maleimídometiléter ; (BSEE) es bis-succinimidoet i léter ; (BMEE) es bi s-maleimidoet i léte r ; y (BSME) es bis-succinimido et iléter . Tal cómo se utiliza aquí, los siguientes aminoácidos y análogos de aminoácidos se pretende que queden representados p las siguientes abreviaturas: Acrm es el grupo protector de sulfhidrilo, acetamidometilo; Pen es penicilamina; Aca es el ácido 6-a inocapróico ; Hly es homolisina; Apc es L-{S-(3-aminopropil ) cisteína ; FD es D-fenilalanina ; WD es triptofano; YD es D-tirosina; Cpa es L-(4-clorofení 1 ) alanina ; Thp es el ácido 4-amino-tet rahidrot iopiran- -carboxí 1 ico ? D-Nal es D-2-naft ilalanina ; Dpg es dipropilgli ciña ; Nle es norleucina; Hcy es homocisteína ; Aib es ácido aminoisobut i rico ; Nal es 2-naft ilalanina ; D-Nal es D-2-naft ilalanina ; Ain es el ácido _ 2-aminoindan-2-carboxí lico ; Achxa es 4-amino-ciciohexilalanina; Amf es 4 -aminomet il-fenilalanina ; Aec es . S- ( 2 -aminoet i 1 ) cis teína ; Apc es S-(3-aminopropi 1 ) cis eína ; Aes es O- ( 2 -aminoet i 1 ) serina ; Aps es O- ( 3-aminopropil ) serina ; Abu es ácido 2 -aminobut i rico ; Nva es norvalina; y Asu es el ácido 2-aminosubérico, donde los aminoácidos amino terminales de los péptidos que contienen un residuo Asu son cicli zados via un enlace amida entre el grupo ammo, del extremo amino terminal, y el grupo químico de ácido carboxílico de la cadena lateral, del residuo Asu. De acuerdo con la invención, los péptidos de unión del receptor de la CT pueden comprender uno o más derivados de aminoácidos que tengan un quelante de metal radiactivo unido a una cadena lateral de aminoácidos. Preferiblemente, el quelante del metal radiactivo es incorporado en el péptido en el término carboxilo del péptido de unión del receptor de la CT . Más preferiblemente, el quelante del metal radiactivo es incorporado en el péptido sintético de unión del receptor de la CT, en el átomo de azufre de la cadena lateral de una cisteína, que corresponda con la posición 14 del pépt do natural. Más preferiblemente, el quelante del metal radiactivo es incorporado en una cadena lateral de un aminoácido del péptido de unión del receptor de la CT, que tiene la -secuencia : CH;CQ. Sj^LST . Hhc. VLGKLSCELHKLQ YPRTNTHG SGTP . amida (SEQ ID NO. : 9) . Más preferiblemente, el quelante del metal radiactivo es incorporado en el péptido de unión del receptor de la CT en el átomo de azufre de la cisteína, de la cadena lateral, en la posición 13 del péptido de la SEQ ID NO.: 9 (resaltado por las negritas en la SEQ ID NO. : 9) .

Modalidades .adicionales de los reactivos de la invención comprenden al menos dos compuestos sintéticos de unión del receptor de la CT, donde cada compuesto se encuentra unido covalentemente a un quelante de un metal radiactivo, y un enlazador polivalente que forma un enlace covalente, seleccionado del "grupo que consiste de un enlace a cada compuesto, un enlace a cada agente quelante, y un enlace a un compuesto y al agente quelante del otro compuesto. También pueden presentarse permutaciones adicionales de esta modalidad, de acuerdo con la invención. Los enlazadores polivalentes adecuados para utilizarse en esta modalidad de la invención comprenden al menos dos grupos funcionales idénticos, capaces de efectuar enlaces covalentes con los análogos de la CT, compuestos de unión del receptor de la CT, péptidos de la CT o quelantes de metal radiactivo, o que son capaces de unirse tanto a un compuesto de unión del receptor de la CT como a un quelante del metal radiactivo. Los grupos funcionales preferidos incluyen, sin limitaciones, las aminas ^primarias, las aminas secundarias, los grupos hi droxi_l o , los grupos de ácido carboxílico o los grupos reactivos con el grupo t ol. En las modalidades preferidas, los enlazadores polivalentes comprenden bis-succinimidi lmet ilét er (BSME), bi s -s uccinimidi let i léter (BSEE), ácido 4 - ( 2 , 2 -dimet i 1 acet i 1 ) ben zói co (DMBA), N-{2-(N' ,N'-bis(2-succinimido-etil) aminoetil ) }-N6,N9-bis (2-me til -2 -mercaptopropil ) -6, 9-diazanonanamida (BAT-BS ) , tris ( succinimidiletil ) amina (T"SEA), bis-succinimidohexano ( BSH ) , 4 - ( 0-CH2CO-Gly-Gly-CyeT. ami a ) -2 -met i Ipropiofenona (ETAC), tris ( acetamidoet il ) amina , bis-acetamidomet il éter, bi s -aceta idoet i 1 éter, a, e-b"i s -aceti 1 -1 i s ina , lisma y 1 , 8 -bis-acetamido-3 , 6-dioxa-octano , o derivados de -los mismos . Los"" compuestos de unión del receptor de la CT proporcionados por la presente invención pueden ser sintetizados químicamente in vitro utilizando cualquier método sintético adecuado. Preferiblemente, los péptidos de la CT pueden ser sintetizados, de acuerdo con la invención, utilizando métodos recombinantes. Más preferiblemente, los péptidos de la CT, los derivados peptídicos de la CT, y los análogos peptídicos de la CT, pueden ser preparados vent josamente, en general, de acuerdo con la presente invención, utilizando un sintetizador de péptidos. Los" péptidos de la CT de esta invención son sintetizados, preferiblemente, enlazando covalentemente el quelante del metal radiactivo al péptido durante la síntesis química in vitro, utilizando técnicas bien conocidas por aquellos entrenados en la técnica, como es la síntesis peptídica en fase sólida. De esta manera, los quelantes del metal radiactivo pueden ser incorporados al pépt do en una forma selectiva del sitio, virtualmente en cualquier posición en el péptido, evitando de este modo una reducción en la afinidad y especificidad del péptido por elXreceptor de la -CT . _ De acuerdo con la invención, los péptidos de unión del receptor de la CT son preparados conteniendo un aminoácido que contenga un grupo tiol protegido, típicamente un residuo de cisteína, incorporado en el péptido. Después de la separación del péptido de la resina sintética y de la ciclización de los residuos __amino terminales, el grupo tiol protegido es desprotegido y elaborado con un grupo prostético que contiene un quelante del metal radiactivo y un grupo que reacciona con el tiol. Como se estableció anteriormente, los, reactivos de unión del receptor de la CT de la invención, son capaces de ser marcados radiactivamente para proporcionar agentes para diagnóstico radiológico o agentes para radioterapia. Un ejemplo de aplicación para diagnóstico radiológico utilizando los reactivos marcados radiactivamente, de la invención, es la formación de imágenes por es cint igrafí a , donde puede determinarse la ubicación y extensión de los tumores que tienen el receptor de la C . El término "agente es cint igráfi co de formación de imágenes", tal como se utiliza aquí, abarca un reactivo marcado radiactivamente capaz de ser detectado con un dispositivo para la detección de la radiactividad (incluyendo, aunque sin ser limitado a, una cámara gama o una sonda detectora de centelleo) . En las modalidades radi oterapéut i cas de la invención, los reactivos de unión del receptor de la CT son marcados con compuestos nuclídicos radiactivos citotóxicos y son útiles para el tratamiento de las enfermedades u otros males e_n animales, preferiblemente humanos, donde estas enfermedades o males están incluyen, aunque no se limitan a, cáncer de mama, cáncer de ovarios, cáncer de pulmón, linfoma y otras enfermedades caracterizadas por el crecimiento de tumores malignos o benignos que son capaces de unirse a los compuestos de unión del receptor de la CT, o derivados o análogos de los mismos, vía la expresión de los receptores de la CT sobre la superficie celular de las células que comprenden estos tumores . Cualquier metal radiactivo puede ser acomplejado con los reactivos de la invención" para proporcionar un agente para diagnóstico radiológico o radioterapéut ico . Por ejemplo, los reactivos de la invención pueden ser marcados radiactivamente con tecnecio- 99m, yodo-125 o yodo-123, para proporcionar un agente es cint igráfi co de formación de imágenes. Esta invención también proporciona reactivos de unión del receptor de la CT capaces de formar un complejo con .un átomo, ion o partícula metálica magnética, paramaghé t ica , supermagnét i ca , o superparamagnét i ca . Los reactivos de unión del receptor de la CT, de la invención, también pueden ser marcados radiactivamente, de manera ventajosa, con un isótopo radiactivo citotóxico s e 1 e c c ionado del grupo que cons iste de escandio-47, cobre-67, galio-72, itrio-90, estaño-117m, yodo-125, yodo-131, samario-153, gadol ini o- 159 , di spros i o- 165 , holmio-166, iterbio-175, lutecio-177, rhenio-186, renio-188, astatino-211, bismuto-212 y bismuto-213, para proporcionar un agente radioterapéut ico . Cuando los reactivos de la invención son utilizados para formar un complejo de un tecnecio o renio radiactivo, el complejo de tecnecio, preferiblemente una sal, pertecnetato de tecnecio- 99m, o renio en forma de per-renato, se hacen reaccionar con el reactivo en presencia de un agente reductor. Los agentes reductores preferidos son ditionita, iones estanosos y ferrosos; el agente reductor más preferido es el cloruro estanoso. Alternativamente, el complejo puede ser formado haciendo reaccionar un reactivo de esta invención con un complejo inestable, preformado, de tecnecio o renio y otro compuesto conocido como un ligando de transferencia. Este proceso es conocido como intercambio del ligando y es bien conocido por aquellos entrenados en la técnica. El complejo inestable puede ser formado utilizando ligandos de transferencia como tartrato, citrato, gluconato o manitol, por ejemplo. Entre el pertecnetato de tecnecio-99m y las sales de renio útiles con la presente invención, se incluyen las sales de metales alcalinotérreos como la sal de sodio, o las sales_ de amonio, o las sales inferiores de alquil amonio. La invención también se aplica en un equipo para preparar reactivos marcados con un metal radiactivo, para ser utilizados como compuestos químicos radiactivos. El equipo de la invención comprende un vial cerrado herméticamente que contiene una cantidad predeterminada del reactivo de unión del receptor de la CT y, opcionalmente, cuando el met al_radiacti vo es tecnecio-99m, renio-186, o renio-188, un agente reductor. Por ejemplo, una cantidad adecuada del reactivo de la invención es introducida en un vial que contiene un agente reductor, como cloruro estanoso, en una cantidad suficiente para marcar el reactivo con el tecnecio-99m, renio-186 o renio-188. una cantidad adecuada de un ligando de transferencia, como se ha descrito (como el táTrtrato, citrato, gluconato, glucoheptanat o o manitol, por ejemplo) también puede ser incluida en -el equipo. El equipo también puede contener materiales adyuvantes, farmacéuticos, convencionales, como, por ejemplo, sales farmacéuticamente aceptables para ajustar la presión osmótica, amortiguadores, conservadores y similares. Los componentes del equipo pueden encontrarse en forma líquida, congelada "o seca. En una modalidad preferida, los componentes del equipo son proporcionados en forma liofilizada. Los compuestos farmacéuticos radiactivos de tecnecio- 99m, "renio-186 y -renio-188, de acuerdo con la presente invención, pueden ser preparados mediante la adición de una cantidad adecuada de tecnecio-99m, renio-186 o renio-188, o complejos radionucl i dicos de los mismos, en los viales y por la reacción bajo las condiciones descritas en los Ejemplos que se dan más adelanté . El equipo de la invención puede aplicarse en una forma adecuada para el diagnóstico mediante formación de imágenes, o como un agente ^terapéutico, utilizando un isótopo radiactivo del yodo, incluyendo yodo-123 y yodo-131, y preferiblemente, yodo-123. En esta modalidad, el equipo comprende un vial cerrado herméticamente que contiene una cantidad predeterminada de un reactivo de unión del receptor de la CT, capaz de ser marcado radiactivamente con un isótopo del yodo. Los reactivos de unión del receptor de la CT, adecuados para ser utilizados en esta modalidad, incluyen la misma CT, un derivado de la CT, un análogo de la CT, compuestos que imitan la CT y compuestos peptídicos que imitan la CT, que específicamente se unen al receptor de la CT . Cuando se emplean reactivos de unión del receptor de la CT, de origen peptídico y de péptidos que igualan la CT, en esta modalidad, un resido de tirosina en el reactivo puede ser yodado radiactivamente. Este residuo de tirosina puede presentarse de manera natural en el péptido o en el péptido de imitación, o el resido de tirosina puede ser adicionado en una posición en el péptído o en el péptido de imitación que no perturbe la unión del reactivo a los receptores de la CT. Las dosis, los sitios y las rutas de administración, las formulaciones y la radiactividad especifica administrada mediante el uso del equipo de esta modalidad, son como se describen aquí para los reactivos marcados con tecnecio y renio, para usos escint igráf i cos y terapéuticos . Los" agentes de formación de imágenes proporcionados por la invención tienen utilidad para la formación de imágenes de tumores, particularmente para la formación de imágene"s" de los sitios neoplásticos primarios y metast sicos, caracterizados por células neoplásticas que expresan o sobreexpresan los receptores de la CT y, en particular, las células primarias y especialmente las metastásicas derivadas de los tumores de mama, de pulmón y de ovarios que clínicamente no han respondido al tratamiento de detección utilizando las metodologías convencionales. Los reactivos para la formación de imágenes proporcionados por 1 á~ presente invención también pueden ser utilizados para visualizar órganos como el riñon o el hueso, para diagnosticar trastornos en estos órganos. — Para propósitos de diagnóstico, se administra una cantidad efectiva, de diagnóstico, del agente de diagnóstico o de diagnóstico radiológico, de la invención, preferiblemente por vía intravenosa. En las modalidades para diagnóstico radiológico, la localización de la marca radiactiva es detectada _ utilizando metodologías convencionales como la es cint igraf í a gama. En las modalidades de diagnóstico no radiactivo, la localización de los sitios de acumulación de los agentes de diagnóstico marcados con el metal paramagnético, de la invención, se lleva a cabo utilizando metodologías de formación de imágenes mediante resonancia magnética. De acuerdo con esta invención, para la formación es cint igráfi ca de imágenes, los reactivos marcados con t ecnecio-99m, proporcionados por la invención, pueden ser administrados intravenosamente en cualquier medio convencional para inyección intravenosa, como un medio salino acuoso, o un medio de plasma sanguíneo. Generalmente, la unidad de dosis que se va a administrar tiene una radiactividad desde aproximadamente 0.01 mCi hasta aproximadamente 100 mCi, preferiblemente de 1 mCi a 20 mCi . La solución que se va^ a inyectar a una unidad de dosis es desde aproximadamente 0.01 mL hasta aproximadamente 10 mL . Después de la administración intravenosa, la formación de imágenes in vivo puede realizarse en cosa de pocos minutos. Sin embargo, la formación de imágenes puede tomar, si se desea, algunas horas o todavía más, después de que el reactivo marcado radiactivamente es inyectado en un paciente. En la mayor parte de los casos, una cantidad suficiente de la dosis administrada se acumulará en el área que se va a someter a formación de imágenes en aproximadamente 0.1 horas, para permitir que se tomen fotos escint igráf i cas . Puede utilizarse cualquier método convencional de formación escintigráf ica de imágenes para propósitos de diagnóstico, de acuerdo con esta invención. Para los propósitos de esta invención, la radioterapia abarca cualquier efecto terapéutico que va desde la disminución del dolor hasta la ablación del tumor o remisión de los síntomas asociados con el cáncer particular que se está tratando. Cuando los reactivos de la invención son utilizados para propósitos terapéuticos, son marcados radiactivamente con una cantidad efectiva de un isótopo radiactivo citotóxico. Para este propósito, una cantidad de isótopo radiactivo citotóxico, desde aproximadamente 10 mCi hasta aproximadamente 200 mCi, puede ser administrada vía cualquier ruta clínica adecuada, preferiblemente mediante inyección intravenosa. De acuerdo con esta invención, los agentes para el diagnóstico radiológico y r adi ot erapéuti cos pueden ser identificados como sigue. Los reactivos de la invención que comprenden los compuestos de unión del receptor de la CT, incluyendo fragmentos de la CT, los análogos peptídicos de la CT y los derivados de la CT, son sintetizados utilizando los métodos de la invención, y un quelantßy del metal radiactivo es unido covalentemente al compuesto. Los reactivos son entonces acomplejados con un metal radiactivo o un isótopo no radiactivo que tiene características quelantes similares a las del metal radiactivo deseado, y la unión con el receptor de la CT es entonces evaluada en ensayos de unión de competición vitro, como se describe aquí, utilizando CT con yodo radiactivo. Como ejemplo de esta metodología . se emplea ReO para evaluar qué tan adecuados son los péptidos de unión del receptor de la CT para ser utilizados como agentes de formación es cint igráfi ca de imágenes con tecnecio- 99m, como se describe en el Ejemplo 4, más adelante. Los" métodos para fabricar y marcar estos compuestos se ilustran más completamente en los siguientes Ejemplos, que ilustran ciertos aspectos de la invención descrita anteriormente y se presentan resultados ventajosos en forma meramente ilustrativa y no limitante.

EJEMPLO 1 Síntesis de los Quelantes de BAT Los quelantes de BAT, en particular los quelantes de BAT derivados de la S-cisteína y los derivados de la e-amino Lísma, son preparados de acuerdo con los métodos de la patente norteamericana coposeída y copendiente Serie No. 08/XL4,424, incorporada aquí como referencia.

EJEMPLO 2 Síntesis Peptidica en Fase Sólida La síntesis peptídica en fase sólida (SPPS) fue efectuada a una escala de 0.25 milimoles (mmol), utilizando un Sintetizador de Péptidos de Applied Biosystems, Modelo 431A, y utilizando la protección del término amino con 9-fluorenilmet iloxicarboni 1 Fmoc), acoplamiento con diciclohexilcarbodiimida/hidroxbenzo triazol o hexafluorofosfato de 2 - ( IH-benzot riazol-1-i 1 ) -1, 1, 3, 3 -tetrameti luronio/hidroxibenzotriazol (HBTU/HOBT) , y usando la resina de hidroximetil henoximet ilpolies t i reno (HMP) o Sasrin™ o la resina de clorotritilo para los ácido del carboxilo terminal o la resina de amida de Rink, para las amidas del carboxilo terminal. Donde era apropiado, se sintetizaron Fmoc-Cys ( BAT ) y Na-Fmoc-Ne- (BAT) Lys , como se describe en la patente norteamericana coposeída y copendiente Número de Serie 08/414,424, incorporada aquí como referencia. Donde era apropiado, se introducen grupos 2-cloreacet ilo , 2 -bromoacet i 1 o y 2 -bromo- 3 -feni lpropioni lo ya sea mediante el uso del ácido 2-halo adecuado como el último residuo acoplado durante la SPPS, o mediante tratamiento del péptido del aminoácido libre N-terminal, unido a la resma ya sea con el ácido 2 -hal o/di i s opropi 1 carbodiimida/N-hidroxisuccinimída/NMP o el anhídrido del ácido 2-halo/diisopropileti lami a /NMP . Donde era adecuado, los péptidos 2 -halocilados , purificados mediante HPLC, son ciclizados mediante la agitación de una solución de 0.1 a 1.0 mg/mL, en amortiguador de fosfatos o de bicarbonato, o hidróxido de amonio diluido (pH 8.0), que contiene opcionalmente de 0.5 a 1.0 mM de EDTA, o acetonitrilo o THF, durante 1 a 48 h, seguidCL opcionalme te por lá acidificación con ácido acético, liofilización y purificación por medio de HPLC. Donde era adecuado, los péptidos que contienen tiol se hacen reaccionar con grupos químicos acomplejantes del t ecneci_o- 99m, protegidos para el tiol, que contienen cloroacetilo, a pH 10, durante 0.5 a 4 horas, a temperatura ambiente, seguido .por acidificación con ácido acético y evaporación de la solución para dar el correspondiente aducto de pépt ido-sulfuro . La desprotección y purificación se realizan de manera rutinaria co o se describió para dar el conjugado quelante -péptido . Donde era adecuado, se prepararon los aductos BSME, BSEE y BSH, haciendo reaccionar péptidos que contienen un solo tíol (de 5 a 50 mg/mL en DMF amortiguado a pH 7 con N-metilmorfolina o N-e t i lmor f ol ina , o amortiguador de fosfato de sodio 50 mM, pH 7-8, que contiene opcionalmente EDTA 0.5 mM o DMF o THF o acetonitrilo) con 0.5 equivalentes molares de BMME (bis- aleimidometiléter ) , BMEE (bis-maleimidoetiléter) o BMH (bis-maleimidohexano ) , respectivamente, predisueltos en acetonitrilo, a temperatura ambiente, durante aproximadamente 1-18 horas. La solución fue concentrada y el producto fue purificado mediante HPLC. Donde era apropiado, se prepararon aductos de TSEA haciendo reaccionar un péptido que contenía un solo tiol (a concentraciones de 10 a 100 mg/mL del péptido en DMF amortiguado a pH 7 con N-metilmorfolina o N-et ilmorfol ina , o de 5 a 50 mg/mL del péptido en fosfato de sodio 50 mM, pH 7-8, que contenía opcionalmente 0.5 mM de EDTA o DMF o THF o acetonitrilo) con 0.33 equivalentes molares de TMEA ( tris ( 2 -maleimidoet il ) amina ) predisueltos en acetonitrilo o DMF, con o sin 1 equivalente molar de trietanolamina, a temperatura ambiente durante aproximadamente 1-18 horas. Estas mezclas de reacción que contienen aductos son concentradas y entonces los' aductos son purificados utilizando HPLC. Donde era apropiado, "(BAM) (N1 , N4-bis ( 2-mercapt o-2-meti lpropil ) -1 , 4 , 10- tr iazade cano ) se conjuga con el péptido activando primero el carboxilato peptídico con una mezcla "de di i s op opi 1 ca rbodi imida /N-hidroxi succinimida o HBTU/HOBt, en DMF, NMP o cloruro de metileno, seguido por acoplamiento en presencia de diisopropiletilamina. Después del acoplamiento, los conjugados son desprotegidos como se describió anteriormente. Donde era apropiado, (BAT) (ácido N6,N9-bis(2-mercapto-2-met ilpropil ) -6 , 9-diazanonanói co ) es incorporado en los péptidos como derivados protegidos de los aminoácidos, como (Na ( Fmoc ) -Ne (N-Boc ) -S , S ' -bi s tri til -BAT) lisina preparado a partir de Na ( Fmoc ) -1 is ina y Ne(N-Boc ) -S , S ' -bis t rit i 1-BAT , como se describe en el Ejemplo 2 de la " Solicitud de Patente . Norteamericana coposeída y copendiente, Serie No. 08/044,825, incorporada aquí como referenXia), o como ( ( Fmoc ) -S , S ' -bis t ri t i 1 -BAT ) ci s t e i na (preparado como se describe en el Ejemplo ÍF de la Patente Norteamericana coposeída y copendiente, Serie No. 08/414,424, incorporada como referencia) durante la síntesis peptídica y luego son desprotegidos después de la separación del péptido completo de la resina sintética. Donde era apropiado, se preparan aductos de BAT-BS (N-{2-(N',N'-bis (2-succinimidoetil ) aminoetil ) }-N6,N9-bis (2-metil-2-mercaptopropil)-6, 9-diazanonamida) haciendo reaccionar péptidos que contienen solamente un tiol (a concentraciones de 2 a 50^mg/mL de péptido en DMF amortiguado a pH 7 con N-metilmorfolina o N-et i lmorfol ina , o en fosfato de sodio 50 "mM (pH 7-8), que contiene opcionálmente EDTA o DMF o THF o acetonitrilo, 0.5 mM) con 0.5 equivalentes molares de BAT-BM ( N- { 2 - ( N' , N' -bi s ( 2 -maleimidoetil) aminoetil) }-N9- (t-butoxicarbonil) -N6,N9-bis ( 2-me til-2 -trifenil e tiltiopropil) -6, 9-diazanonamída) predisueltos en acetonitrild o THF, a temperatura ambiente, durante aproximadamente 1-18 horas. La solución se evapora entonces sequedad y se desprotegen los conjugados mediante tratamiento con 10 mL de TFA y 0.2 mL de trie ti ls i laño durante 1 hora. La solución se concentra, el producto de aductos es precipitado con éter, y luego es purificado con HPLC. ~ Donde era apropiado, los- precursores peptídicos son ciclizados (entre los términos amino- y carboxilo-) mediante la reacción de la amina libre N-terminal y el ácido libre C-terminal, de la cadena lateral protegida, con difenilfosforilazida . Los péptidos unidos la res a Sasrin son desprendidos utilizando una solución de TFA al 1%, en diclorometano, para dar el péptido protegido. Donde era adecuado, los precursores peptídicos protegidos son ciclizados entre los términos amino- y carboxilo- mediante la reacción de la amina libre, amino-terminal, y el ácido libre, carboxilo-terminal, de la cadena lateral protegida, utilizando di feni 1 fos for i 1 a z ida . Los productos unidos a la resina HMP o de amida de Rink son separados rutinariamente y los péptidos ciclízados protegidos son desprotegidos utilizando una solución comprendida de ácido trifluoroacético (TFA), o TFA y cloruro de metileno, conteniendo opcionalmente agua, t i o ani s o-l , etanoditiol, _ y trietilsilano o t r i isopropi lsilano en las relaciones de 100:5:5:2.5:2, durante 0.5 a 3 horas, a temperatura ambiente. Donde era adecuado, los productos se sometieron a una re-S-tritilación en" tri feno lmet anoi /TFA, y se re int rodu j e ron grupos N-Boc en el péptido utilizando (Boc)20. Donde era apropiado, los grupos funcionales tiol, dentro del péptido o secuencia pept idomét ica , diseñada para una elaboración adicional con un grupo prostético, fueron protegidos utilizando compuestos como el S-t-butilo (para producir disulfuros mezclados de t-butilo) o p-me toxibencilo . Los grupos S-t-buti'lo son eliminados mediante tratamiento con una ^solución de ditiotreitol o me rcapt e tanol , mientras que los grupos p-me toxibenci 1 o son eliminados utilizando eterato de trifluoruro de boro en ácido trifluoroacético, en ^presencia de un eliminador de radicales libres, como el m-cresol. Los péptidos prostéticos que contienen grupos químicos de unión del metal "radiactivo, son preparados mediante SPPS con terminación de un grupo 2 -haloace t i 1 o N-terminal. Los grupos prostéticos son eliminados de la resina y cualesquiera grupos tiol son protegidos, por ejemplo, con un grupo tritilo. La secuencia haloacet ilada es entonces acoplada con el péptido que contiene tiol, bajo esencialmente las mismas condiciones que se describieron anteriormente, para la preparación de los tioéteres cíclicos. La eliminación de los grupos protectores restantes se logra, entonces, utilizando los métodos descritos aquí, para dar el producto final. Los péptidos crudos son purificados mediante cromatografía líquida de alta presión (HPLC) , preparativa, utilizando una columna Waters Delta Pack C18, y un gradiente de elución utilizando ácido trifluoroacético al 0.1% (TFA), en el agua modificada con ace t oni t ri 1 o . El acetonitrilo es evaporado de las fracciones eluidas, que luego son liofilizadas. La idintidad de cada producto es confirmada por medio de espectrometría de masas de bombardeo atómico rápido (FABMS) o mediante espectrometría de masas por elect rorociadura (?SMS) . Los péptidos de unión del receptor de la CT, derivados y análogos sintetizados como se proporciona aquí, así como los productos de la síntesis, identificados mediante ESMS o FABMS, se muestran en la Tabla I, más adelante.

TABLA I *=M+ determinada mediante espectrometría de masas por electro-rociado, M+ fue determinada mediante espectrometría de masas de rápido bombardeo atómico para todas las otras propiedades.

EJEMPLO 3 Un Método General para el Marcado Radiactivo con Tecnecio- 99m 0.1 mg de un péptido preparado como en el Ejemplo 2 fueron "disueltos en 0.1 mL, o 0.2 mL de agua o solución salina al 0.9%. El gluceptato de tecnecio-99m fue preparado reconstituyendo un vial de Glucoscan (E.l. DuPont de Nemours, Inc., Wilmington, DE) con 0.25 mL de pertecnetato de sodio de Tecnecio-99m, que contenía hasta 200 mCi y se dejó reposar durante 15 minutos a temperatura ambiente. 25 µL del gluceptato de Tecnec?o-99m fueron entonces adicionados al péptido y se dejó que la reacción se llevara a cabo a temperatura ambiente durante 15 a 60 minutos, o a 100°C durante 10 a 30 minutos, y luego se filtró a través .de un filtro de 0.2 µm. La pureza del péptido marcado con Tecnecio-99m fue determinada mediante HPLC de fase inversa utilizando las siguientes condiciones: una columna analítica Waters Delta Pack C-18, de 5µ, de 3.9 mm x 150 mm, fue cargada con cada uno de los péptidos marcados radiactivamente y .los péptidos se eluyeron a una velocidad de flujo del solvente igual a 1 mL/min (Delta-Pack) . El gradiente de elución fue realizado utilizando un gradiente de 20-50% de Solvente B/Solvente A (el Solvente A es CF3COOH al 0.1% en agua y el Solvente B es CF3COOH al 0.1% en CH3CN/H20, 90/10) durante 20 minutos, seguido por B/A 100% durante 3 minutos.

Los componentes radiactivos fueron detectados utilizando un detector radiométrico en línea, unido a un registrador integrador. El gluceptato de Tecnecio-99m y el pertecnetato de sodio de Tecnecio-99m eluyen a un tiempo entre 1 y 4 minutos bajo estas condiciones, mientras que los péptidos marcados con Tecnecio-99m eluyeron después de un periodo de tiempo mucho más largo. Los péptidos fueron detectados mediante detección espectrofotomét rica en línea a 220 nm. LOST complejos no radiactivos de renio fueron preparados mediante la co-disDlución de cada uno de los reactivos peptídicos, de la invención, con aproximadamente un equivalente molar de oxot etrabromorenato (+5) de tetrabutilamonio, preparado como se describió por Cotton et al. "" (1966, Inorg. Chem. 5_:9-16), en dimetilformamida o acetonitrilo/agua y se agitó durante un tiempo desde 0.5 a 5 días. Los complejos de renio fueron aislados mediante HPLC e^ fase inversa, como se describió anteriormente para los péptidos marcados con Tecnecio-99m y fueron caracterizados mediante FABMS~ o ESMS. Los péptidos no radiactivos fueron detectados como péptidos mediante la detección espectrofotomét ri ca en línea a 220 nm. Los complejos de renio radiactivo, utilizando, por e emplol Re-186 o Re-188, son preparados a partir de las sales adecuadas de perrenato, utilizando el mismo protocolo que para el marcado con Tecnecio- 99m, o mediante la adición de un agente reductor a una solución del péptido y el perrenato, o utilizando, opcionalmente , un agente de transferencia de ligandos, como el citrato, e incubando la reacción a una temperatura entre la temperatura ambiente y 100°C, para un tiempo entre 5 y 60 minutos . Los resultados de la purificación de los péptidos mediante HPLC, de los péptidos marcados con Tecnec?o-99m y de los péptidos acomplejados con ReO, se muestran en la Tabla II.

TABLA II Los datos representan los tiempos de retención de la HPLC en minutos .

EJEMPLO 4 Ensayos Biológicos A. Ensayos de Inhibición de la Unión Los" reactivos peptídicos, dentro del alcance de la invención, o las modalidades acomplejadas con ReO, de los mismos, fueron probadas utilizando ensayos in vitro que miden su capacidad de inhibir la unión especifica de la 125I-CT al receptor de la CT, utilizando membranas" de la línea celular del cerebro de rata o de un tumor de mama, y en células enteras de las líneas celulares del tumor de mama, como se describe en detalle más adelante. Los ensayos utilizando fracciones de la membrana microsomales del cerebro de rata y de las células T-47D (obtenidas de la American Type Culture Collection, Rockville, MD, ATCC Accesión No. HTB-133) fueron usados para identificar análogos con alta afinidad por el receptor de la CT, de acuerdo con el método de Fisher et al. (1977, British J. Cáncer 35_: 777-784) . Brevemente, el tejido fue troceado y homogenei zado . Las membranas se lavaron varias veces, se les determinó el contenido de proteína y fueron utilizadas en el ensayo de unión. La proteína de la membrana fue incubada con la CT del salmón marcada con 125I, a 0.1 mCi (Amersham, Cleveland, OH) en presencia o ausencia de concentraciones variables de los reactivos a evaluar. Se probaron ambos reactivos, los no acomplejados y los acomplejados con ReO.- El cien por ciento de unión específica de la 1:5I-CT con el receptor de la CT fue definido como la diferencia entre la unión total de 125 I-CT y la unión no específica de 'I-CT, medida en presencia de una concentración de saturación del receptor (1 µM) de un exceso de la CT del salmón no marcada (Sigma, St . Louis, MO) . La concentración a la cual los reactivos probados inhibieron la unión 'específica de la 125I-CT en 50% fue definida como el valor IC50. Los resultados de la unión a las preparaciones de membrana de los receptores de la CT, para cada uno de los reactivos evaluados, se muestran en la Tabla III. Estos resultados indican que los reactivos peptídicos, dentro del alcance de la invención, y los complejos de ReO de estos reactivos, se unieron con alta afinidad a la célula de tumor y a las membranas del cerebro que expresaban el receptor de la CT. ~ Se realizaron experimentos similares con reactivos peptídicos adicionales, dentro del alcance de la invención, utilizando células completas T-47D y células MCF-7 (ATCC Accesión No. HTB-22) . Los ensayos de unión celular" fueron realizados esencialmente por el método de Findlay et al. (1990, J. Endocrinol, 130 : 321-326) . Brevemente, las células fueron lavadas en solución salina y resuspendidas en solución salina balanceada de Hank. Se incubaron de uno a dos millones de células, con la 125I-CT del salmón, con 0.1 µCi, en ausencia y en presencia de la CT del salmón, no marcada, IµM, para determinar un valor de unión específica del 100%. Las células fueron incubadas con 125I-CT, de 0.1 µCi, en presencia o ausencia de concentraciones variables de los reactivos a evaluar, en forma hd" acomplejada y/o acomplejada con ReO. Los valores IC50 fueron determinados como se describió anteriormente. Los resultados para cada uno de los reactivos probados se muestran en la Tabla IV.

„ TABLA III Desplazamiento de la 125I-CT de CTR en las Membranas de las células" T-47D y en las células del Cerebro de Rata por los Péptidos Miméticos de la CT Cerebro T-47D Estructura del Péptido de rata 1. CH2CO . SNLST .Hhc .VLGKLSC (BAT) ELHKLQTYPRTNTGSGTP. amida 0.53 0.41 2.6 ND 2. CH2CQ. SNLST .Hh .VLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP (e-K) GC . amida 16 12 18 ND 1. CH2CO. SNLST . Hhc .VLGKLSC (BAT) ELHKLQTYPRTNTGSGTP . amida (ReO) 1.5 1.2 3.0 ND 2. CH-r-CO. SNLST .Hhc.VLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP (e-K) GC.a da (ReO) 28 22 22 ND TABLA IV Desplazamiento de la 125 -CT de las células T-47D (Células y Membranas) y de las células MCF-7 IC8 IC50 IC.0 Secuencia <nM)x (tiM)1 (nM) 3. CH?CQ . SNLST . Hhc . VLGKL?CELHKLQTYPRTNTGSGTP . amida 1 6 nd Nd 4. CH?CQ . SNLST . Hhc . VLGKLSC (CH2CO . GGCK . amida) ELHKLQTYPRTNTGSGTP . amida 2.6 nd Nd 5. CH?C0. SNLST .Hhc .VLGKLSC (CH?CO . (ß-Dap) KCK. amida) ELHKLQTYPRT nd 0.42 5.8 NTGSGTP. am?da»Re0 6. CH;CO . SNLS .Hhc .VLGKLSC (CH2CO . (e-K) GCE . amida) ELHKLQTYPRTNTG nd 0.33 3.3 SGTP . am?da»ReO 8. CH?CO . SNLS . Hcy . VLGKLSC (CH2CO . GGCK . amida) ELHKLQTYPRTNTGSGT . am?da»ReO nd 0.83 4.8 9. CH2CO . SNLS . Hcy . VLGKLSC (CH2CO . (ß-Dap) KCK. amida) ELHKLQTYPRT nd 0.8 nd NTGSGTP . am?da»ReO 10. CH2CO. SNLST. Hcy. VLGKLSC (CH?CO. (e-K) GCE . amida) ELHKLQTYPRTNTG nd 0.89 nd SGTP.am?da»Re0 12. CH2CO . SNLST . Cys . VLGKLSC (CH?CQ . GGCK . amida ) ELHKLQTYPRTNTGSGTP . am?da»ReO n 1.0 5.2 13. CH2CO . SNLST . Cys . VLGKLSC ( CH?CQ . (ß-Dap) KCK. amida) ELHKLQTYPRT nd 2.9 nd NTGSGTP . am?da»ReO 14. CH2CO . SNLST . Cys .VLGKLSC (CH2CO. (e-K) GCE. amida) ELHKLQTYPRTNTGSG nd 2.6 1.9 TP.am?da»ReO 16. SNLST .Asu. VLGKLSC (CH,CO. (ß-Dap) KCK. amida) ELHKLQTYPRTNTGSG nd 2.7 8.0 TP.am?da»ReO 18. SNLST. Asu. VLGKLSC (CH2CO. (ß-Dap) KCK. amida) ELHKLQTYPRTDVGAG Nd 0.55 7.0 TP.am?da«ReO CSNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP-NH2(calc?ton?na de salmón) nd nd 12.3 nd=no se realizó donde: x: membranas de las células T-47D y: células T-47D completas - z: células MCF-7 completas EstTos resultados indicaron que los reactivos peptídicos, dentro del alcance de la invención, y los complejos ReO de estos péptidos, fueron capaces de unirse de manera específica a los receptores de la CT sobre células enteras y que los reactivos eran potentes inhibidores de la unión de la CT en dos diferentes líneas celulares del tumor de mama que expresan el receptor de la CT.

B. Expresión del Receptor de la CT en las Líneas Celulares del Cáncer de Mama. La unión de la 125I-CT a células enteras fue utilizada para evaluar la densidad del receptor de la CT en siete líneas celulares del cáncer de mama humano. La densidad del sitio, por célula, fue determinada para las células MCF-7 en presencia de diferentes concentraciones de la CT para lograr la saturación de los receptores. Los datos se sometieron entonces a 1 ineari zación mediante el método de Scatchard et al. (1949, N.Y., Acad. Sci. 5^: 600-672) para estimar la densidad del receptor. Brevemente, las curvas de saturación fueron linearizadas y se calculó la Kd como el valor (- 1 /pendiente ) , y B,ax_ fue igual a la intersección del eje~X con la curva. Otras líneas celulares (cada una de las cuales fue obtenida de ATCC, Rockville, MD) fueron comparadas con las células MCF-7 a una sola concentración de 125I-CT y, de este modo", se estimó su densidad del receptor de la CT. Los datos se resumen en la Tabla V.

TABLA V Estos datos muestran que el 86% (6 de 7) de las líneas celulares del cáncer de mama ensayadas, fueron positivas para los receptores de la CT . Por consiguiente, el receptor diana para los reactivos de la invención se encuentra presente en la mayor parte de las líneas celulares del cáncer de mama evaluadas. Recientemente, se encontró que el receptor diana para los reactivos de la invención se sobreexpresaba ei los cánceres primarios de mama (Gillespie, et al. (1997) Int. J. Cáncer 73, 812-815) . Estos resultados indican que los péptidos de la CT, de la invención, so adecuados para la preparación de reactivos útiles, específicos para el sitio, para el diagnóstico y tratamiento de los tumores en humanos.

C. Ensayo in vivo Las líneas celulares del cáncer de mama fueron exploradas en busca de la expresión • del receptor y se escogieron las mejores líneas celulares para una implantación por injerto externo (xenoinjerto) en ratones con deficiencia inmune. Estos modelos de tumor fueron utilizados para evaluar el potencial de cazador del tumor in vivo de los péptidos de alta afinidad identifi ca dos en los ensayos in vivo, mencionados anteriormente. Las células del cáncer _de mama que expresan el receptor de la CT (T47D y MCF-7) fueron implantadas en los ratones con deficiencia inmune„_ o en las ratas de la cepa Sprague-Dawley, y se dejó que -desarrol laran tumores. Para evaluar nuevos péptidos de la 99mTc-CT, los ratones que tenían los tumores o las ratas, fueron inyectados con aproximadamente 0.025 mCi, a aproximadamente 6 mCi/10 nmol del péptido. Los animales fueron dislocados cervi cálmente y se sometieron a formación de imágenes, de manera estadística, durante 15 minutos utilizando una cámara de rayos gama La biodistribución del péptido de la 99m Tc-CT fue determinada, entonces, mediante el conteo de la sangre, el tumor, los órganos diana y el músculo, en un contador gama, junto con alícuotas estándar de la dosis inyectada. Los puntos del tiempo para la distribución fueron "elegidos para que representaran, diariamente, las fases inicial, media y terminal de la eliminación del análogo 99mTc-CT. .Los estudios _de biodistribución indicaron que las relaciones óptimas señal a ruido se presentaron a los 90 minutos después de la_ inyección. Para evaluar el potencial de formación de imágenes del tumor de los análogos seleccionados, la relación de la radiactividad en la sangre y diversos tejidos fue comparada con la del tumor. Los datos de biodistribución representativos, después de 90 minutos, se muestran en la siguiente Tabla VI . TABLA VI La numeración del péptido corresponde con la de las Tablas I a vi .-_ tumor T-47D en el ratón desnudo Xnjerto externo en las células MCF-47 del cáncer de mama, en los ratones desnudos diferentes preparaciones Debe comprenderse que la descripción anterior enfatiza ciertas modalidades específicas de la invención y que todas las modificaciones o alternativas equivalentes a las mismas, se encuentran dentro del espíritu y alcance de la invención, tal como se establece en las reivindicaciones anexadas . Se hace constar que, con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención es el convencional para la manufactura de los objetos o sustancias a que la misma se re fiere . Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes.

LISTADO DE LA SECUENCIA (1) INFORMACIÓN GENERAL: (i) SOLICITANTE: Dean, Richard T. Bush, Larry R. Pearson, Daniel A. Lister-Jar es, John (ii) TÍTULO DE LA INVENCIÓN: REACTIVOS DE UNIÓN DEL RECEPTOR DE LA CALC?TONINA (iii) NÚMERO DE SECUENCIAS: 11 (iv) DIRECCIÓN PARA CORRESPONDENCIA: (A) DESTINATARIO: Diatide Inc. (B) CALLE: 9 Delta Drive (C) CIUDAD: Londonderry __ (D) ESTADO: NH (E) PAÍS: USA (F) CÓDIGO POSTAL: 03053 Z (v) FORMA QUE PUEDE LEERSE EN COMPUTADORA: (A) TIPO DE MEDIO: Disco flexible (B) COMPUTJADORA: PC Compatible con IBM (C) SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS ~ (D) SOFTWARE: Patentln Reléase #1.0, Versión #1.30 (vi) DATOS DE LA SOLICITUD: _ (A) NÚMERO DE SOLICITUD: - (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: (C) CLASIFICACIÓN: (vii)_ DATOS ANTERIORES DE LA SOLICITUD: ..(A) NÚMERO DE LA SOLICITUD: US 08/847,007 ?_ (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: Ol-MAY-1997 ( iii) INFORMACIÓN DEL APODERADO/AGENTE : (A) NOMBRE: McDaniels, Patricia A. . (B) NÚMERO DEL REGISTRO: 33,194 (C) NÚMERO DE REFERENCIA/REGISTRO: DITI 125.1PCT (ix) INFORMACIÓN DE TELECOMUNICACIÓN: (A) TELÉFONO: (603) 437-8970 (B) TELEEAX: (603) 437-8977 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 1: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: "" (A) LONGITUD: 32 aminoácidos _ (B) TIPO: aminoácido (C) ESTRUCTURA DE TRENZA: ~ (D) TOPOLOGÍA: ambas ~* (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (vi) FUENTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: CALCITONINA--HUMANO (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: Enlace disulfuro (B) UBICACIÓN: 1..7 (IX) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: De sitio modificado (B) UBICACIÓN: 32 (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto^ "PROLINA 32" /rmarca= amida (Xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ_ ID NO. 1: Cys Gly Asn Leu Ser Thr Cys Met Leu Gly Thr Tyr Thr Gln Asp Phe 1 5 10 15 Asn Lvs Phe His Thr Phe Pro Gln Thr Ala He Gly Val Gly Ala Pro 20 25 30 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 2: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 32 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) ESTRUCTURA DE TRENZA: (D) TOPOLOGÍA: ambas (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (vi) FUENTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: CALCITONIN —SALMÓN (ix) CARACTERÍSTICA: - (A) NOMBRE/CLAVE: Enlace disulfuro (B) UBICACIÓN: 1..7 (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE : De sitio modificado (B) UBICACIÓN: 32 (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto= 'PROLINA 32" /marca= amida (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 2: Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Lys Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro 20 25 " 30 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 3: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 32 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) ESTRUCTURA DE TRENZA: (D) TOPOLOGÍA: ambas (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (vi) FUENTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: CALCITONINA—ANGUILA (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE : Enlace disulfuro (B) UBICACIÓN: 1..7 (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: De sitio modificado (B) UBICACIÓN: 32 (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto= "PROLINA 32" /marca= amida (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 3: Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Lys Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asp Val Gly Ala Gly Thr Pro 20 25 30 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 4: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 31 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) ESTRUCTURA DE TRENZA: (D) TOPOLOGÍA: ambas (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: Región Z (B) UBICACIÓN: 1..6 (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto= "SI está acetilado y X 6 es Hhc" , /marca= ciclizado /nota= *E1 péptido es ciclizado mediante un enlace tioéter entre el grupo acetilo N-terminal de la serina 1 y el tiol de la homohomocisteína 6" (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: De sitio modificado (B) UBICACIÓN: 13 — (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto= *C 13" /marca= BAT /nota= *E1 grupo tiol de la cisteína 13 está unido a un quelante bistiol bisamino" (ix) CARACTERÍSTICA: I (A) NOMBRE/CLAVE: De sitio modificado (B) UBICACIÓN: 31 ._ (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto= 'Prolina 31" /rmarca= amida (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 4: Ser Asn Leu Ser Thr XaaXal Leu Gly Lys Leu Ser Cys Glu Leu—His 1 - 5 10 15 Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro 20 25 30 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 5: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 31 aminoácidos y (B) TIPO: aminoácido (C) ESTRUCTURA DE TRENZA: _ (D) TOPOLOGÍA: ambas — (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (íx) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: Región " (B) UBICACIÓN: 1..6 (D) OTRA INFORMACIÓN: /prodUcto= 'SI está acetilado y X 6 es Hhc" /marca= ciclizado /nota= 'El péptido es ciclizado mediante un enlace tioéter entre el grupo acetilo N-terminal de la serina 1 y el tiol de la homohomocisteina 6" (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: De sitio modrTficado (B) UBICACIÓN: 31 Z (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto= 'PROLINA 31" /marca= amida (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 5: Ser Asn Leu Ser Thr Xaa Val Leu Gly Lys Leu Ser Cys Glu Leu His 1 5 10 15 Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro 20 25 30 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 6: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 31 aminoácidos ™ (B) TIPO: aminoácido (C) ESTRUCTURA DE TRENZA: ZZ (D) TOPOLOGÍA: ambas (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: Región (B) UBICACIÓN: 1..6 (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto^ 'SI está acetilado y X 6 es Hhc" /marca= ciclizado /nota= 'El péptido es ciclizado mediante un enlace tioéter entre el grupo acetilo N-terminal de la serina 1 y el tiol de la ho ohomocisteína 6" (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: De sitio modificado " "(B) UBICACIÓN: 31 (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto^ 'PROLINA 31" /marca= amida ( i) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 6: Ser Asn Leu Ser Thr Xaa Val Leu Gly Lys Leu Ser Cys Glu Leu His 1 5 10 15 Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro 20 25 30 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 7: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 31 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) ESTRUCTURA DE TRENZA: (D) TOPOLOGÍA: ambas (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (ix) CARACTERÍSTICA: _ ._ (A) NOMBRE/CLAVE : Región (B) UBICACIÓN: 1..6 (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto= 'SI está acetilado" /marca= ciclizado /nota= 'El péptido es ciclizado mediante un enlace tioéter entre el grupo acetilo N-terminal de la serina 1 y el tiol de la cisteína 6" (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: De sitio modificado " (B) UBICACIÓN: 31 - (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto= 'PROLINA 31" /marca= amida (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 7: Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Lys Leu Ser Cys Glu Leu His 1 5 10 15 Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro 20 25 "" 30 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 8: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 31 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido . (C) ESTRUCTURA DE TRENZA: (D) TOPOLOGÍA: ambas (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: Región - (B) UBICACIÓN: 1..6 "" (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto= 'X6 es Asu" /marca= ciclizado /nota= 'El péptido es ciclizado mediante un enlace entre la serina 1 y el ácido 2-aminosubérico 6" (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE : De sitio modificado _ (B) UBICACIÓN: 31 (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto= 'PROLINA 31" /marca= amida (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 8: Ser Asn Leu Ser Thr Xaa Val Leu Gly Eys Leu Ser Cys Glu Leu His 1 . 5 10 15 Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro 20 25 - 30 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 9: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 31 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) ESTRUCTURA DE TRENZA: (D) TOPOLOGÍA: ambas (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: Región ^ (B) UBICACIÓN: 1..6 (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto= 'SI está acilado y X6 es Hhc" _ /marca= ciclizado /nota= 'El péptido es ciclizado medíante un enlace tioéter entre el grupo acetilo N-terminal de la serina 1 y el tiol de la homohomocisteína 6" (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: De sitio modificado (B) UBICACIÓN: 31 (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto= 'PROLINA 31" /marcá= amida (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 9: Ser Asn Leu Ser Thr Xaa Val Leu Gly Lys Leu Ser Cys Glu Leu His 1 _ 5 10 15 Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro 20 25 - 30 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 10: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 6 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) ESTRUCTURA DE TRENZA: - (D) TOPOLOGÍA: circular (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE : Región _ (B) UBICACIÓN: 1..6 - (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto= 'SI está acilado y X6 es C, Hcy o Hhc" /marca= ciclizado /nota= *E1 péptido es ciclizado mediante un enlace tioéter entre el grupo acetilo N-terminal de la serma 1 y el tiol de X6" (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 10: Ser Asn Leu Ser Thr Xaa 1 5 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO. 11: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 6 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) ESTRUCTURA DE TRENZA: (D) TOPOLOGÍA: circular (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (íx) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: Región (B) UBICACIÓN: 1..6 (D) OTRA INFORMACIÓN: /producto= 'XI es A, G, o S; X6 es C, Hcy o Hhc" /marca= ciclizado /nota= 'El péptido es ciclizado mediante un enlace tioeter entre el metileno N-termmal y el t ol de X6" _ (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO. 11: Xaa Asn Leu Ser Thr Xaa 1 5

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un compuesto sintético, de unión del receptor de la calcitonina, que tiene un peso molecular menor a aproximadamente 10,000 Daltones y que se encuentra unido covalentemente a un quelante de metal radiactivo, para formar un reactivo, donde el compuesto está caracterizado porque : -el reactivo tiene una afinidad de unión para un receptor de la calcitsnina igual o mayor que la afinidad de la calcitonina natural, yodada radiactivamente, para el receptor .
2. Un compuesto sintético, de unión del receptor de la calcítonina, que tiene un peso molecular menor a aproximadamente 10,000 Daltones y que se encuentra unido covalentemente a un quelante de metal radiactivo, para formar un reactivo, donde el compuesto está caracterizado porque : -el reactivo tiene una afinidad de unión para un receptor de la calcitonina no menor que aproximadamente un décimo de la afinidad de unión de la calcitonina natural, yodada radiactivamente, para el receptor.
3. El reactivo, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque el quelante se selecciona del grupo que consiste de: a) C (pgp) - (aa) -C (pgp)5 donde (pgp)5 es H o un grupo protector de, tioles, y (aa) es cualquier a- o ß-aminoécido primario; b) un quelante que comprende un solo grupo químico que contiene tiol, de la fórmula: A-CZ (B) -{C (?^R2) -X donde A es H, HOOC, H2NOC, (aminoácido o péptido ) -NHOC , (aminoácido o pépt ido ) -OOC , R4 ; B es H, SH o -NHR3, -N ( R3 )-( aminoácido o péptido) o R4; X es H, SH o -NHR3, -N ( R3 )-( aminoácido o péptido) o R4; Z es H o R4; R1, R2 , R3 y R4 son, independientemente, H o un alquilo de cadena recta o ramificada, o cíclico; n es 0, 1 o 2; (aminoácido) es cualquier_a- o ß-aminoácido primario que no contenga un grupo tiol; (péptido) es un péptido de 2 hasta aproximadamente 10 aminoácidos; y donde B es -NHR3 o -N ( R3 )-( aminoácido o péptido), X es SH, y n e s 1 o 2 ; donde X es -NHR3 o -N ( R3 )-( aminoácido o péptido), B es SH, y n e s "1 o 2 ; donde B es H o R4, A es HOOC, H2NOC, (aminoácido o pépt ido ) -NHOC , o (aminoácido o pépt ido ) -OOC ; X es SH; y n es 0 o '1 ; donde A es H o R¿ , entonces donde B es SH, X es -NHR3 o -N ( R3 )- [aminoácido o péptido) y n es 1 o 2; donde X es H o R4, A es HOOC, H2NOC , (aminoácido o pépt ido ) -NHOC , o (aminoácido o péptido ) -OOC ; y B es SH; donde Z es metilo, X es metilo; A es HOOC, H2N0C, (aminoácido o pépt ido ) -NHOC, o (aminoácido o pépt ido ) -OOC ; B es SH y n es 0; donde B es SH, X no es SH y donde X es SH, B no es SH; y donde el grupo químico tiol se encuentra en la forma reducida: c) o NH N-A-CO-péptMo s^pgp Spfegp)' donde cada R es, independientemente, H, CH3 o C2H5; cada (pgp)5 es, independientemente, un grupo protector de tiol o H; m, n y p son, independientemente, 2 o 3; A = alquilo inferior lineal o cíclico, arilo, heterociclilo, una combinación de los mismos, o un derivado sustituido de los mismos; <CR*>. (CRA S-{psp)s donde cada R es, independientemente, H, CH3 o C2H5; m, n y p son, independientemente, 2 o 3; A = alquilo inferior lineal o cíclico, arilo, heterociclilo, una combinación de los mismos, o — un derivado sustituido de los mismos; V = H o -CO-péptido; R1 = H o péptido; y donde cuando V = H, R1 =^péptido y cuando R1 = H, V = -CO-pépt i do ; donde n, m y p son, independientemente, 0 o 1; cada R' es, independientemente, H, alquilo inferior, hidroxia íqui lo (C2-d), o alcoxialquilo (C2-C4) ; cada R es, independientemente, H o R" , donde R" es alquilo inferior _o fenilo sustituidos o no sustituidos, que no comprenden un grupo tiol; una R o R' es L, donde cuando R' es L, -NR'; es una amina; y L es un grupo divalente que une el quelante al compuesto; donde: n, m y p son cada uno, independientemente, 0 o 1; cada R' es, independientemente, H, alquilo inferior, hidroxialquilo (C2-C4), o alcoxialquilo - (C2-C«) ; cada R es, independientemente, H o R" , donde R" es alquilo inferior o fenilo sustituidos o no sustituidos, que no comprenden un grupo tiol; una R o R' es L, donde cuando R' es L, -NRS es una amina; y L es un_ grupo divalente que une el quelante al compuesto; g) (HOOCCH2) 2N (CR2) (CR3) (CH2COOH) (CR2) ( CR2 ) N ( CH^COOH ) donde cada R es, independientemente, H, alquilo C1-C4, o arilo y una R está unida covalentemente a un enlazador divalente ; h) (HOOCCH,) 2N (CR2) (CR2) N (CH2COOH) ; donde cada R es, independientemente, H, alquilo C1-C4, o arilo y una R está unida covalentemente a un enlazador divalente; i) ácido 1 , 4 , 7 , 10-te traazadodecanote t raacético ; j) donde n es un entero que es 2 o 3, y donde cada R es, indpendientement e , H, alquilo C1-C4, o arilo y una R está unida covalentemente al compuesto de unión del receptor de la calcitonina; y k ) des fe rrioxamina .
4. El reactivo, de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el quelante se selecciona del grupo que cons i s te e: - (aminoácido) x- (aminoácido) 2- { A-CZ ( B ) - { C ( RXR2 ) }n-X} ; -{A-CZ(B)-{C(R1R2) }n-X}- (aminoácido) 1 - (aminoáci o) 2; -(un , ß- o ß, ?-diaminoácido )-( aminoácido ) 1 - {A-CZ ( B ) -{C(RXR2) }n-X}; y - {A-CZ (B) - {C (RXR2) }n-X}- (aminoácido) x- (un a, ß- o ß,?-diaminoácido); donde (aminoácido)1 y (aminoácido)' son cada uno, independientemente, cualesquiera a- o ß-aminoácidos naturales modificados, sustituidos o alterados, que no contienen un grupo tiol.
5. El reactivo, de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el quelante se selecciona del grupo que consiste de: ( aminoácido ) 1- ( aminoácido ) 2- cis teína; (aminoácido) 1- (aminoácido) 2-isocisteína; ( aminoáci o ) 1 - (aminoácido) 2-homocisteína; (aminoácido) a- (aminoácido) z-peni ci lamí na ; (aminoácido) l - (aminoácido) 2-2 -me eaptoet ilamina ; (aminoácido) 1- (aminoácido) -2-mercaptopropilamina; ( aminoácido ) 1- (aminoácido) 2-2 -merca?to-2 -me tilpropi lamina; y (aminoácido) 1- ( aminoáci o ) 2-2 -me rcapt opropi lamina ; donde un término carboxilo o una cadena lateral del quelante se encuentra unido(a) de manera covalente al compuesto .
6. El reactivo, de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque (aminoácido)1 se selecciona del grupo que consiste de_ un cc, ß-diaminoácido que tiene un grupo a-amino libre y un ß , ?-di aminoácido que tiene un grupo ß-amino libre .
7. El -reactivo, de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el quelante se selecciona, del grupo que consiste de: -ci steí na- ( aminoácido )- (a, ß- o. ß , ?-diaminoácido ) ; -isocis teína- ( aminoácido )- (a, ß- o ß , ?-dí aminoácido ) ; -homoci steí na- ( aminoácido )- (a, ß- o ß , ?-diaminoácido ) ; -penicilamina- ( aminoácido )-( a, ß- o ß , ?-diaminoécido ) ; -ácido 2 -mercaptoacético- ( a, ß- o ß , ?-diaminoácido ) ; -ácido 2- o 3 -mercaptopropiónico- (a, ß- o ß , ?-diaminoácido ) ; -ácido 2 -mercapto-2-met ilpropióni co- ( a, ß- o ß,Y~ dia inoáci do ) ; donde un término amino o una cadena lateral del quelante se encuentra unido covalentemente al compuesto.
8. El "reactivo, de conoformidad con la rei vindicació 1 o 2, caracterizado porque el quelante se" selecciona del grupo que consiste de: -Gly-Gly-Cys; Z. -Ala-Gly-Cys ; - (e-Lys) -Gly-Cys ; -(d-Orn) -Gly-Cys ; - (?-Dab) -Gly-Cys; - (ß-Dap) -Lys-Cys; - (ß-Dap) -Gly-Cys ; y -Cys (BAT) .
9. El reactivo, de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el quelante tiene la fórmula: donde : R1 y R2 son cada uno, independientemente, H, alquilo inferior, hidroxialquilo ( C2-C4_) o alcoxialquilo (C;-C4) ; R3, R4, R5 y R6 son, independientemente, H, alquilo inferior o fenilo sustituido o no sustituido que no comprenden un grupo tiol; R7_y R8 son, cada uno, independientemente, H, alquilo inferior, hidroxialquilo inferior o alcoxialquilo, inferior; L es un grupo enlazador divalente; y Z es un péptido .
10. El reactivo, de conformidad con la rei indicación 3, caracterizado porque el quelante tiene la fórmula: donde : R1 y R2 son cada uno, independientemente, H, alquilo inferior, hidroxialquilo (C=-C4) o alcoxialquilo (C2-C4); R3, R4, R5 y R6 son, independientemente, H, alquilo inferior o fenilo sustituido o no sustituido que no comprenden un grupo tiol, y uno de R3, R4 , Rs y R6 es Z-L-(CR2)n-; R7 y R8 son, cada uno, independientemente, H, alquilo inferior, hidroxialquilo inferior o alcoxialquilo inferior; L es un grupo enlazador divalente; y Z es un péptido; y X es -NH2, -NRXR2, o -NRX-Y, donde Y es un aminoácido, una amida de aminoácido o un. péptido que tiene desde 2 hasta aproximadamente 20 aminoácidos.
11. El reactivo, de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el quelante tiene la fórmula: donde R1 y R2 son cada uno, independientemente, H, alquilo inferior, hidroxialquilo (C2-C ) o alcoxialquilo (C2-C,;); R3, R4, R5 y R6 son, independientemente, H, alquilo inferior o fenilo sustituido o no sustituido que no comprenden un grupo tiol; n es un entero de 1 a 6; - L es un grupo enlazador divalente; y Z es un péptido;
12. El reactivo, de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el quelante tiene la fórmula: do nde : L es un grupo enlazador; y Z es un péptido.
13. El reactivo, de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque el compuesto e s un péptido .
14. El reactivo, de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el péptido tiene una secuencia de aminoácidos CH2CO . SNLST . Hhc . VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP . amida (SEQ ID No. 9) y porque el el quelante se incorpora en el péptido en una cadena lateral de un aminoácido de la secuencia.
15. El reactivo, de conformidad co.n la reivindicación 13, caracterizado porque el péptido comprende un dominio de unión del receptor de la calcitonma, que es ciclizado por medio de un tioéter.
16. El reactivo, de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el péptido comprende una secuencia de aminoácidos: CH2CO. SNLSTX- XEQ ID No. 10 donde : X se selecciona del grupo que consiste de un residuo de cisteína, un residuo de homocis teína , y un residuo de homohomocisteína.
17. El reactivo, de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el péptido comprende una secuencia de aminiácidos CHzCO-X^LSTX2- = SEQ ID No. 11 donde : X1 se selecciona del grupo que consiste de un residuo de alanina, un residuo de glicina, y un residuo de serina; y X2 se selecciona del grupo que consiste de un residuo de cisteína, un residuo de homocisteína y un residuo de homohomocis teína .
18. Un reactivo, caracterizado porque tiene una fórmula que se selecciona del grupo que consiste de: CH2CO. SNLST . Hhc .VLGKLSC (BAT) ELHKLQTYPRTNTGSGTP . amida (SEQ ID No. 4); CH2CO. SNLST . Hhc.VLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP (e-K) GC. amida; CH2CO. SNLST .Hhc.VLGKLSC (CH2CO. GGCK. amida) ELHKLQTYPRTNTGSGTP. amida; CH2CO. SNLST . Hhc.VLGKLSC (CH2CO. (ß-Dap) KCK. amida) ELHKLQTYPRTNTGSGTP. amida; CH2CO. SNLST . Hhc .VLGKLSC (CH2CO. (e-K) GCE. amida) ELHKLQTYPRTNTGSGTP. amida; CH2CO. SNLST . Hcy .VLGKLSC (CH2CO. GGCK. amida) ELHKLQTYPRTNTGSGTP. amida; CH2CO. SNLST . Hcy.VLGKLSC (CH2CO. (ß-Dap) KCK. amida) ELHKLQTYPRTNTGSGTP . amida; CHgCO. SNLST . Hcy .VLGKLSC (CH2CO. (e-K) GCÉ . amida) ELHKLQTYPRTNTGSGTP . amida; CH2CO. SNLST . Cys .VLGKLSC (CH2CO. GGCK. amida) ELHKLQTYPRTNTGSGTP. amida; CH:CO. SNLST . Cys .VLGKLSC (CH2CO. (ß-Dap) KCK. amida) ELHKLQTYPRTNTGSGTP. amida; CH2CO . SNLST .Cys .VLGKLSC (CH2CO. (e-K) GCE . amida) ELHKLQTYPRTNTG SGTP. amida; SNLST .Asu.VLGKLSC (CH2CO. (ß-Dap) KCK. amida) ELHKLQTYPRTNTGSG TP.amida; SNLST .As"u .VLGKLSC (CH2CO. (ß-Dap) KCK. amida) ELHKLQTYPRTDVGAG TP.amida; CH2CO. SNLST .Hhc .VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP . amida (SEQ ID No. 5) ; CH2CO. SNLST . Hcy.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP. amida (SEQ ID No. 6) ; CH2CO. SNLST . Cys .VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP. amida (SEQ ID No. 7); y SNLST.Asu.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP .amida {SEQ ID No. 8) .
19. El reactivo, de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada porque tiene la fórmula: CH2CO. SNLST.Hhc.VLGKLSC (CH2CO. (e-K) GCE.amida) ELHKLQTYPRTNTGSGTP . amida .
19. Un reactivo que comprende: a) al menos dos compuestos sintéticos del receptor de la calcitonina, donde cada uno se encuentra unido covalentemente a un quelante de metal radiactivo; y b) un compuesto enlazador polivalente, que forma un enlace covalente, seleccionado del grupo que consiste de un enlace con cada compuesto, un enlace con cada quelante y un enlace con un compuesto y con el quelante del otro compuesto; donde el reactivo está caracterizado porque: el reactivo tiene un peso molecular menor a aproximadamente 10,000 daltones; y cuando el quelante es quelado con un metal radiactivo, el reactivo tiene una afinidad de unión para un receptor de la calcitonina ~que es no menor a un décimo de la afinidad de unión con la calcitonína natural, con yo o radiactivo, para este receptor.
21. Un agente de formación de imágenes es cint igráfi co , caracterizado porque comprende el reactivo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20 y tecnecio-99m.
22. Una composición, caracterizada porque comprende el reactivo de cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 20 y un ion . es t añoso .
23. Un agente radioterapéut ico, caracterizado porque comprende el reactivo de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 20 y un isótopo radiactivo citotóxico .
24. El agente, de conformidad con la reivindicación '23, caracterizado porque el isótopo radiactivo se selecciona del grupo que consiste de escandio-47, cobre-67, galio-72, itrio-90, estaño-117m, yodo-125, yodo-131, samario-153, gadolinio-159 , di spros i o- 165 ,"" holmio-166", iterbio-175, lutecio-177, renio-186, renio^~188, as t a t ino-211 , bismuto-212 y b"ismuto-213.
25. Un complejo, caracterizado porque se forma haciendo reaccionar el reactivo de conformidad con cualesquiera de las re vindicaciones 1 a 20, con tecnecio-99m, renio-186 o renio-188, en presencia de un agente reductor.
26. El_complejo, de conformidad con la rei indicación 25, caracterizado porque el agente reductor es un ion estanoso .
27. Un complejo caracterizado porque se forma marcando el reactivo, de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 20, con tecnecio-99m mediante intercambio de ligando de un complejo de tecnecio-99m prereducido.
28. Un complejo caracterizado porque se forma marcando el reactivo, de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 20, con renio-186 o renio-188 mediante intercambio de ligando de un complejo de tecnecio-99m prereducido.
29. Un equipo para preparar una preparación farmacéutica radiactiva, donde el equipo ^ está caracterizado porque comprende un vial cerrado herméticamente que contiene una cantidad predeterminada del reactivo, de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 20, y una cantidad suficiente de un agente reductor, para marcar el reactivo con tecnecio-99m, renro-186 o renio-188.
30. Un equipo para preparar una preparación farmacéutica radiactiva, donde el equipo está caracterizado porque comprende un vial cerrado herméticamente que contiene una cantidad predeterminada del reactivo, de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 20.
31. Un método para marcar el reactivo, de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 20, caracterizado porque _comprende la etapa de hacer reaccionar el reactivo con tecnecio-99m, renio-186 o renio-188_^_ en presencia de un agente reductor.
32. El método, de conformidad con la rei indicación 30, caracterizado porque el agente reductor es un ion es tañoso .
33. Un Tiétodo para fabricar el reactivo, de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 20, caracterizado porque se fabrica mediante síntesis química in vitro.
34. El método, de conformidad con la rei indicación 3, caracterizado porque la síntesis es una síntesis de péptidos en fase sólida.
35. El método, de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 33 o 34, caracterizado porque el quelante se une covalentemente al compuesto durante la síntesis.
36. El-"-uso ' del reactivo, de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 20, caracterizado porque e s para la manufactura de un medicamento para la formación de imágenes de un sitio, dentro del cuerpo de un mamífero.
37. El- uso del reactivo, de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 20, caracterizado porque es para el tratamiento de una enfermedad caracteri zada" por la presencia de los receptores de_'la calcitonina.