MXPA99008247A - Composicion farmaceutica o cosmetica que contieneal menos un retinoide, y el metodo para el tratamiento cosmetico de los cambios asociados con elenvejecimiento de la piel y/o del dermatoesqueleto - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a una composición farmacéutica o cosmética, caracterizada porque condene una combinación de al menos un retinoide con al menos un oligosacárido que comprende entre 2 y 6 residuos de monosacárido y tiene una galactosa en la posición terminal no reductora, o un derivado de este oligosacárido sustituido con un residuo hidrofóbico, y excipientes farmacéuticamente o cosméticamente aceptables;la invención también se refiere al uso de esta combinación para la preparación de una composición diseñada para prevenir y/o tratar los cambios en la piel y en el dermatoesqueleto que están asociados con el envejecimiento, asícomo también el método de tratamiento cosmético usando estas combinaciones.

Description

COMPOSICIÓN FARMACÉUTICA O COSMÉTICA QUE CONTIENE AL MENOS UN RET1NOIDE, Y EL MÉTODO PARA EL TRATAMIENTO COSMÉTICO DE LOS CAMBIOS ASOCIADOS CON EL ENVEJECIMIENTO DE LA PIEL Y/O DEL DERMATOESQUELETO MEMORIA DESCRIPTIVA La presente invención se refiere a las composiciones farmacéuticas o cosmetológicas diseñadas para mejorar el aspecto de la piel y para combatir los efectos del envejecimiento de la piel. La piel está compuesta por tres compartimentos, la epidermis, que incluye a la capa externa y al estrato córneo, la dermis y, más profundamente, ia hipodermis. Existen intercambios entre los diferentes compartimentos dérmicos y epidérmicos, que pretenden asegurar la renovación, cohesión y humectación de las células de las capas externas. Se sabe que el envejecimiento es un fenómeno fisiológico que sigue a un período de crecimiento. Se refleja en particular por un afinamiento de la piel y una pérdida de elasticidad, conduciendo a la aparición de arrugas profundas o finas; también se produce un secado de la superficie y puede observarse una pigmentación desordenada. Todos estos signos reflejan los cambios en la epidermis, en la unión epidérmica y en la dermis.

La dermis resulta de una actividad biosintética de fibroblastos, que desarrollan constituyentes de la matriz extracelular; esta última se forma con cuatro grandes familias de macromoléculas: colágenos, elastina, glicoproteínas estructurales y proteoglicanos. El colágeno es la proteína estructural más importante de la dermis ya que representa el 70 % del peso seco de la dermis. Existen diferente tipos genéticamente distintivos del colágeno. Entre los principales colágenos, el colágeno tipo I se encuentra en los tejidos conectivos y representa a todo el colágeno en huesos y dentina; el colágeno del tipo III está asociado con el colágeno del tipo I en la mayoría de los tejidos conectivos, pero no se encuentra en huesos y tendones. Por lo tanto, es un marcador del tejido conectivo subepidérmico. Muchos agentes activos han sido propuestos para prevenir o retardar el efecto del envejecimiento. Se ha demostrado que los retinoides, y en particular el retinol, tiene un efecto favorable para fomentar el aspecto y el estado de la piel y para combatir los signos del envejecimiento. El solicitante ha descubierto que la combinación de retinoides con otra clase de compuestos hace posible potenciar la actividad del mantenimiento de la piel en buenas condiciones y mejorar su aspecto. De acuerdo con esto, el objeto de la presente invención es una composición farmacéutica o cosmetológica, caracterizada porque contiene una combinación de al menos un retinoide con al menos un oligosacárido que comprende entre 2 y 6 residuo de monosacárido y tiene una galactosa en la posición terminal no reductora, o un derivado de un oligosacárido substituido con un residuo hidrofóbico. Preferentemente, el oligosacárido se elige del grupo formado por melibiosa, lactosa y sus derivados que obtenerse por medio del agregado de un residuo hidrofóbico. Se entiende por el término "substituyentes hidrofóbicos" en particular a alquilos lineales o ramificados de C2-C18, alquilaminos de C1-C18 lineales o ramificados, opcionalmente ácidos carboxílicos de C C18 opcionalmente substituidos, amidas primarias, secundarias o terciarias de C1-C-ia lineales o ramificadas, y arialquilos de C-i-C-ia. Los derivados de oligosacáridos adecuados para llevar a cabo la invención pueden en particular pertenecer a una de las categorías anteriormente mencionadas, en las que el oligosacárido corresponde a la siguiente fórmula general: galactosa-n(a o ß) - (Hex)p. en la que n representa la posición 1 , 2, 3, 4, 0 6, Hex representa una pentosa o hexosa ß-enlazada, p es un número entre 1 y 5; a) glicósidos correspondientes a las fórmulas: (I) oligosacárido l-O-R, en el que R es un residuo de alquilo ramificado o lineal de 1 a 18 átomos de carbono, (II) oligosacárido l-O-R-O-l-oligosacárido en el que R=(CH2)m- rn es entre 2 y 10, b) una osilamina acilada de acuerdo con una de las siguientes fórmulas, en que el oligosacárido preferentemente es lactosa, melibiosa o estaquiosa: -osilaminas aciladas correspondientes a una de las siguientes fórmulas: (III) oligosacárido l-NH-CO-R; en el que R es un residuo de alquilo de entre 2 y 18 átomos de carbono que contienen 0, 1 o 2 enlaces dobles (IV) oligosacárido l-NH-CO-R-CO-NH-1 -oligosacárido, en el que R-(CH2)m, siendo m entre 2 y 8, c) una alquilamina acilada con un ácido aldónico obtenido por oxidación de un oligosacárido (IV) oligosacárido-CO-NH-R, en el que R tiene el mismo significado que en la fórmula (lll), (VI) oligosacárido CO-NH-R-NH-CO-oligosacárido, donde R tiene el mismo significado que en la fórmula (III) d) o un producto de la reducción de bases Schiff formadas por los oligosacáridos con mono- o diaminas alifáticas, y correspondientes a una de las siguientes fórmulas: (Vil) Gal-(Hex)n-X-HN-R; (VIII) Gal-(Hex)n-X-HN-R-NH-X-(Hex)n-Gal, en la que: n=0, 1 o 2 X=1-NH2-hexitol, y R tiene el mismo significado que en (lll). Estos oligosacáridos han sido descritos en particular en la solicitud SO 95/05155 para su uso en la prevención del envejecimiento de los tejidos, modificando la producción de elastasa. En el contexto de la presente invención, se ha demostrado que otros mecanismos para combatir ios efectos del envejecimiento pueden ser potenciados. En particular, la síntesis de colágeno por medio de los fibroblastos se ve aumentada por la melibiosa; también se aumenta por medio del retinol, y existe un sinergismo de estas actividades ante la presencia de dos moléculas. El retinoide que entra en las composiciones de acuerdo con la invención preferentemente se elige del grupo formado por ácido retinoico o tretinoina, retinol, retinaldehidos, sus sales y sus esteres. Las sales típicas son las sales de álcali metal, amonio y amonio de C2-C30. Las sales de sodio, potasio trietanolamonio y amonio son las particularmente preferidas. Las combinaciones de todos los compuestos anteriores pueden estar presentes en las composiciones. Además, los términos "retinol" y "ácido retinoico" debe entenderse incluyen a los isómeros hidrogenados y no hidrogenados como por ejemplo, 9-cis-retinol, didehidroretinol, ácido 13-cis-retinoico, ácido 13-trans-retinoico y ácido didehidroretinoico.

Las composiciones que son particularmente adecuadas para llevar a cabo la invención contienen una combinación de retinol y melibiosa. También comprenden excipientes adecuados para la administración tópica, en particular en los excipientes dermatológicamente aceptables. De acuerdo con otra realización de la invención, las composiciones contienen excipientes adecuados para la administración oral. Los excipientes adecuados par la formulación son conocidos por las personas entrenadas en el arte y comprenden en particular espesadores, emulsificadores, agentes conservantes, tinturas, fragancias, etc. Las composiciones pueden tener, por ejemplo, la forma de soluciones, geles, lociones, cremas, emulsiones aceite-en-agua, agua-enaceite o pueden ser emulsiones múltiples, o pueden tener la forma de liposoma. Las composiciones también pueden contener otros agentes humectantes o suavizantes. Por medio de la actividad sinergística del retinoide y del oligosacárido, en particular la combinación de retinol con melibiosa y/o lactosa, las composiciones de acuerdo con la invención tienen un efecto mejorado sobre los principales signos de envejecimiento, en términos de la eficacia y velocidad de acción. Pueden obtenerse los primeros resultados luego de seis semanas de tratamiento con las composiciones y son ejercidos profundamente. Estos efectos comprenden una reducción en la cantidad y/o profundidad de las arrugas, una firmeza de la piel y una mejor humectación: las composiciones de acuerdo con la invención también unificarán el cutis y/o prevendrán o decrecerá el aspecto de las marcas de la edad. Las composiciones de acuerdo con la invención serán particularmente adecuadas para combatir las arrugas y la flojedad de los tejidos. También protegen a la piel contra los ataques ambientales, en particular UV, y la polución. Ofrecen un aspecto unificado y preparan a la piel para recibir otros productos cosméticos o de maquillaje. Las composiciones de acuerdo con la invención pueden elegirse para usar a la mañana y/o a la tarde sobre la cara o las manos. Sobre la epidermis de las manos, serán particularmente adecuadas para mejorar la pigmentación y combatir el aspecto de las marcas de la edad, así como también para aumentar la firmeza de los tejidos en esta región, que tienen una tendencia a volverse flácidos con la edad. Las composiciones de acuerdo con la invención también permiten el fortalecimiento de las uñas previniéndolas de volverse quebradizas y permitiendo la mejora de su aspecto, en particular combatiendo la aparición de estrías y/o marcas. Las composiciones de acuerdo con la invención son particularmente adecuadas para tratar las áreas alrededor de los ojos y los labios, que son muy frágiles y son altamente susceptibles a la aparición de arrugas y la flojedad de la piel. Las composiciones de acuerdo con la invención se toleran muy bien en esta área sensible, donde su actividad anti- envejecimiento, debido al sinergismo entre los diversos componentes, será ejercido a partir de la sexta semana de aplicación. Hacen posible la reducción visible de la cantidad de arrugas y de las bolsas debajo de los ojos; afirman la piel particularmente sensible alrededor de los ojos y la boca. Las composiciones también pueden aplicarse al dermatoesqueleto y en particular al cabello. De manera ventajosa, la concentración de retinoides en particular de retinol, es mayor que o igual a alrededor de 0.0001 % y menor que el 3% con respecto al peso total de la composición. Preferentemente, entre el 0.001 % hasta alrededor de 1 % en peso, e incluso más preferentemente menor o igual a alrededor de 0.5%. La melibiosa está presente a una concentración entre alrededor del 0.0001 % y alrededor del 5%, de manera ventajosa, su concentración será mayor o igual a alrededor del 0.001 % y menor o igual a alrededor del 2% en peso con respecto al peso total de la composición, preferentemente menor o igual a alrededor del 1 %. De acuerdo con otro aspecto, el objetivo de la invención es el uso de una combinación de al menos una retinoide con al menos un oligosacárido que comprende entre 2 y 6 residuos de monosacárido y que tienen una galactosa en la posición terminal no reductora, o un derivado de dicho oiigosacárido substituido con un residuo hidrofóbico, para la preparación de una composición diseñada para mejorar la elasticidad de la piel y/o combatir los cambios en la piel que son provocados por el envejecimiento.

Más particularmente, las composiciones dermocosméticas de acuerdo con la invención están diseñadas para mejorar las propiedades de viscoelasticidad de la piel y prevenir o reducir la formación de arrugas, y esto se logra ya que el Solicitante ha demostrado que el retinol posee una actividad anti-elatasa, que refuerza el efecto conocido de la melibiosa. Estimulando la síntesis de colágeno, la combinación de retinol/melibiosa conduce a la densificación de haces de colágeno con una mejor organización de los haces. También se observa un espesamiento de la substancia de la mucosa en la forma de la expansión epitelial por la invaginación en la dermis. También se incluye en la invención un método para el tratamiento cosmético del foto-envejecimiento y del envejecimiento intrínseco de la piel, las mucosas y el dermatoesqueieto, en particular de la cara y las manos, que consiste en la aplicación de las composiciones de la manera descrita anteriormente. Los ejemplos que siguen están diseñados para ilustrar ciertos aspectos de la invención.

EJEMPLO 1 Efecto del retinol. ácido retinoico, melibiosa o de la combinación reti nol -melibiosa sobre la expresión del marn para el colágeno y los fibroblastos En un modelo in vitro basado en el uso de los fibroblastos dérmicos humanos cultivados en reticuiados de colágeno (equivalente dérmico) se seleccionaron para evaluar los efectos del retinol, melibiosa y la combinación retinol + melibiosa. El nivel de investigación seleccionado fue el de los ARNs mensajeros (mARN) que codifican al procolágeno lll (que será referido en adelante como colágeno lll). Los mARNs fueron detectados por un método de transcripción inversa/amplificación sensible al calor. Esta técnica tiene ventajas con respecto a los otros métodos para estudiar los ARNs, en particular con respecto a la sensibilidad y a la posibilidad de cuantificar (semi-cuantitativo) los efectos.

I - EQUIPO Y MÉTODOS Sistema de prueba El medio de cultivo del fibroblasto (MCF) está formado por MEM/199 (3/4, 1/4; v/v) suplementados con penicilina (100 I U/ml), estreptomicina (100 µg/ml), glutamina (2 mM) y bicarbonato de sodio (0.2 %, p/p).

La solución para el lavado del sistema de prueba era una solución salina regulada con fosfato (PBS); 8 g/l NaCI; 1.15 g/l Na2HPO4; 0.2 g/l KH2P04; 0.2 g/l KCl; 0.1 g/l CaCI2; 0.1 g/l MgCI2; pH 7.4. Los fibroblastos se aislaron de una mamoplastía realizada en una mujer de 34 años. Las células se obtuvieron cultivando los explantes de piel; y se usaron en el séptimo pasaje. Los fibroblastos se suspendieron en una solución que contiene colágeno I (2 mg/ml), un medio FCM y 5% (v/v) FCS. La suspensión se dividió en placas de cultivo de 6 recipientes y las placas se colocaron a 37°C, en una atmósfera que contiene 5% CO2. Los sistemas de prueba estaban formados por reticulados contraídos con los fibroblastos luego de un cultivo durante 96 horas. La melibiosa (M) se probó en 0.01 ; 0.1 y 1 µg/ml (por ejemplo 0.01 , 0.1 y 1 ppm). El retinol (R) se probó a 10"6, 10"5 y 10"*% (por ejemplo, 0.01 , 0.1 y 1 ppm). El ácido retinoico (RA) se probó a 10"6, 10"5 y 10"4% (por ejemplo, 0.01 , 0.1 y 1 ppm). La combinación de los productos M y R se probó en 0.1 ppm + 0.01 ppm y 0.1 ppm + 0.1 ppm, respectivamente. La melibiosa y el retinol se disolvieron directamente en el medio MCF. El ácido retinoico se disolvió al 0.1 % (p/v) en DMSO y luego se diluyó en el medio FCM.

La vitamina C, tomada como control positivo, se probó en 1 mM en el medio FCM. Los reticulados de colágeno se incubaron durante 96 horas con los productos de prueba o el producto de referencia, a 37°C en una atmósfera que contiene el 5% CO2. El ARN total se extrajo y purificó de fibroblastos incluidos en los reticuiados de colágeno usando el equipo Instapur ARN (Eruogentec, lote 17). La integridad de los ARNs extraídos y la ausencia del ADN genómico contaminante fue verificado por medio del la separación de los ARNs al 1 % (p/v) del gel de agarosa que contiene 10 µm/ml de BET. La concentración y la pureza de las preparaciones de ARN se determinaron por medio de la espectrofotometría a ? = 260 nm y 280 nm. La relación entre OD 260 / OD 280 necesita ser mayor que 2. Los ARNs mensajeros se transformaron en cADN por medio de la transcripción inversa en n volumen total de 20 µl de la mezcla de la reacción que contiene 500 ng del cebador aleatorio, 0.5 mM de cada dNTP, 22 U del inhibidor de ribonucleasa, el regulador para ia enzima y 200 U de la transciptasa inversa MmLV (Promega). Esta reacción se llevó a cabo a 42°C durante 1 hora.

Amplificación sensible al calor Para cada mARN estudiado, 2 oligonucleótidos (llamados "cebadores") complementarios a una codificación de secuencia para el gen fueron elegidos como una función de los siguientes criterios: -tamaño del cebador, 20 nucleótidos, -distancia entre los cebadores entre 300 y 1000 pares de base, -porcentaje de [guanina + citosina] en la secuencia entre el 50 % y el 80 %. Las características de los oligonicleótidos usados se determinan en la cuadro siguiente: CUADRO 1 CARACTERÍSTICAS DE LOS OLIGONUCLEOTIDOS USADOS PARA LA REACCIÓN DE AMPLIFICACIÓN SENSIBLE AL CALOR Tamaño del mARN objetivo Temperatura de Cantidad de ciclos fragmento (/mARN estándar hibridación del de amplificación amplificado (en enlazado) cebador (°C) sensible al calor pares de base) Colágeno I (/ß- 61 actinaA) 35 922 Colágeno lll (/ß- 56 actina-A) 30 661 Colágeno Vil (/ß- 62 actina-A) 30 300 838 Las secuencias objetivo de los cADNs obtenidos se amplificaron en 20 µl de la mezcla de reacción que contiene 1 mM de cada uno de los oiigonucleótidos (5'? 3' y 3* ? 5'), 0.25 mM de cada nNTP, 1.5 mM de MgCI2, el regulador para la enzima y 0.1 U de la polimerasa Taq (Eurogentec). La cantidad de ciclos que permiten una reacción proporcional con la cantidad inicial de cADN se determinó para cada cADN. Un cADN se incluyó como estándar interno en cada amplificación, el de la ß-actina. Dos conjuntos de cebadores que difieren por la temperatura de hibridación óptima y por el tamaño del fragmento amplificado se usaron para la ß-actina: esto permitió una separación o reacción correcta, para las diversas secuencias objetivo estudiadas. Además, se llevó a cabo una amplificación en paralelo comenzando por los ARNs de transcripción no inversa y un ADN genómico, como controles complementarios, en cada serie experimental. Cada reacción de amplificación se llevó a cabo en duplicado. Los productos obtenidos de la amplificación sensible al calor (referidos como ampliconas) se separaron por medio de la electroforesis sobre el 2 % (p/v) de gel de agarosa que contiene 10 µg/ml de BET, una tintura para la ampliconas. La intensidad de las bandas correspondientes a las ampliconas estudiadas se midieron usando un densímetro conectado al programa Densylab). Los resultados se expresaron como una intensidad de banda y también en la forma de una relación entre la intensidad de la banda para la amplicona obtenida del mARN estándar. 2 - Resultados La expresión de los mARNs objetivo se estudiaron por medio de una técnica de la transcripción inversa -amplificación sensible al calor. Varios controles se llevaron a cabo en cada paso para poder comparar y (semi) cuantificar los niveles de expresión de los mARNs. Estos controles eran, en particular, los siguientes: -calidad de los ARNs extraídos, -ausencia de la contaminación de ADN genómico, -especificidad de los cebadores, -linealidad de la reacción de amplificación, -inclusión de un estándar interna. Los resultados se expresaron en términos de una relación mARN objetivo / mARN estándar. Las diferencias mayores que el factor 1.5 fueron consideradas como significativas.

Colágeno lll La relación de las intensidades observadas para ios fibroblastos cultivados ante la presencia del producto de referencia (vitamina C), probados en 1 mM, fue mayor que la del control por medio de un factor de 2.6 (Cuadro 2). La relación de las intensidades observadas para los fibroblastos cultivados ante la presencia de melibiosa (M), probada en 0.01 ppm, fue mayor que la del control por medio del factor de 1 .5.

En las otras concentraciones de prueba, las relaciones de intensidad obtenidas fueron comparables con las del control (Cuadro 2). Las relaciones de intensidades observadas para los fibroblastos cultivados ante la presencia del ácido retinoico (RA), probadas a 0.01 ppm, fue mayor que la del control por medio de un factor de 2.4 (Cuadro 2). Las relaciones de intensidad observadas para los fibroblastos cultivados ante la presencia del producto M + R, probadas en 0.1 ppm + 0.01 ppm y 0.1 ppm + 0.1 ppm, fueron mayores que las del control por medio de un factor de 3.4 y 2.7, respectivamente, (Cuadro 2). La comparación de las relaciones de intensidad densimétrica del mARN objetivo / mARN estándar demuestra un efecto de los productos de prueba M, R; RA y M + R sobre la expresión de los mARNs que codifican al colágeno lll por medio de los fibroblastos dérmicos humanos cultivados en un reticulado de colágeno. Los productos de prueba aumentan la expresión de los mARNs que codifican al colágeno lll. La intensidad de este efecto fue variable dependiendo de los productos. El efecto mayor se observó con el producto M + R, seguido por el producto RA y R. Los productos M, RA y M + R exhibieron una relación de efecto de dosis; los efectos más significativos fueron observados en las menores concentraciones probadas.

CUADRO 2 EFECTO DE LOS PRODUCTOS DE PRUEBA M, R, RA Y M + R DEL PRODUCTO DE REFERENCIA SOBRE LOS NIVELES DEL ARN MENSAJERO QUE CODIFICA AL COLÁGENO lll PARA LOS FIBROBLASTOS DÉRMICOS HUMANOS NORMALES CULTIVADOS SOBRE UN RETICULADO DE COLÁGENO Product o de DMSO Amplic referen Control de Producto de prueba ona cia control vitamin a C M [ppm] R ÍPPml RA [ppm] 0.1 0.1 0.01 0.1 1 0.01 0.01 1 0.01 0.1 mk -vl 0.01 0.1 Coláge 2564 1902 1020 1833 1638 498 1926 1662 1748 1968 1613 1678 1906 232 no lll ß- actina- 465 241 120 309 286 60 180 259 92 240 280 89 124 16 C Rendim iento del coláge 5.51 7.89 8.50 5.93 5.72 8.30 10.70 6.41 19.00 8.20 5.76 1 8 1 ^'3 14.50 o / no lll/ß- actina- C CONTINUACIÓN CUADRO 2 Rendi 100 154 108 104 151 194 146 342 278 264 miento en % 240 104 73 del 100 control oo Los resultados se expresaron como intensidad densimétrica de las bandas y en la forma de una relación (intensidad de mARN objetivo / intensidad de mARN objetivo / intensidad de mARN estándar). En bastardilla: relación de las intensidades como un porcentaje del control Las diferencias mayores al factor de 1 .5 se consideraron como significativos.

EJEMPLO 2 Efecto sobre la piel humana del retinol solo o en combinación con melibiosa Los efectos de las tres cremas cosméticas sobre la piel humana se analizaron después de 28 días de aplicación. Para esto, se utilizó un modelo de piel humana mantenida viva por medio del cultivo orgánico. 1 - Equipo y métodos Los cultivos orgánicos se llevaron a cabo de acuerdo con el siguiente procedimiento. En una primer etapa, los fragmentos de piel (fuente: cirugía plástica) se colocaron en insertos que en sí mismos estaban ubicados en recipientes para cultivo. Los tres productos se colocaron directamente sobre la piel. El medio de cultivo (antibiótico, FCS) se agregó a la base de los recipientes, se realizó un pasaje preparado por medio de la difusión lenta entre dos compartimentos por medio de una membrana porosa (0.45 µm). El montaje se mantuvo bajo condiciones de cultivo de órgano durante 28 días. El medio de cultivo en los recipientes también se renovó tres veces a la semana. Las tres cremas se renovaron tres veces a la semana sobre las pieles: -crema 1 : retinol crema 2 : retinol + melibiosa -crema 3 : excipiente Manteniendo la piel no tratada viva durante 28 días permite realizar un control de la manipulación del cultivo. 1-1 -Estudio del Epitelio y del colágeno a) Análisis del epitelio -por medio de un análisis histológico luego de colocar en un líquido Bouin y la inclusión en parafina con manchado usando eosina-haemalum que permite: -calcular la cantidad de capas en la substancia mucosa y el espesor de la capa córnea; -por medio de un análisis inmunohistoquímíco de la diferenciación epitelial usando anticuerpos desarrollados contra las citoqueratinas totales. (b) Estudio del colágeno -por medio de un análisis histológico luego del manchado con manchas de verde Masson tricromo. -análisis por electroforesis de qel de los colágenos tipo I y lll Se recogieron otra serie de pieles y el colágeno se extrajo luego del tratamiento con pepsina. La electroforesis de gel (SDS-PAGE con 7.5 % de acrilamida) con reducción usando ß-mercaptoetanol hace posible aislar y cuantificar las cadenas de colágeno específicas de los tipos I y lll como una función de su peso molecular con respecto a las otras proteínas de la piel (técnica de Sykes y otros). 1-2-análisis de la actividad anti-elastasa estudiando la protección de las fibras elásticas en las pieles humanas mantenidas vivas EX VIVO Usando el modelo de piel humana sobre el cual se usó un procedimiento experimental de destrucción de la red de fibra elástica por medio de las elastasas de los leucocitos polimorfonucleares y de los macrófagos. Para esto, se agregó la elastasa de leucocito humana (HLE) sobre la superficie de la piel tres veces a la semana, cremas que opcionalmente contienen un agente activo anti-elastasa colocados sobre la epidermis al mismo tiempo tres veces a la semana.

Al final de los 28 días de cultivo, los fragmentos de piel se fijaron a un líquido Bouin y las fibras elásticas se revelaron por medio del manchado con (+)- catechina. La conservación de las fibras elásticas se analizaron: -histológicamente, -por medio de la cuantifícación por medio del análisis de imagen de la superficie de las fibras elásticas. 2- Resultados 2.1 Estudio del epitelio por medio de las técnicas histológicas e inmunohistoguimicas a) Análisis histológico del espesor del epitelio y de la capa córnea La cantidad de capas luego del cultivo ex vivo durante 28 días se calculó para la substancia de la mucosa, así como también el espesor de la capa córnea (promedio ± SD) usando las porciones histológicas manchadas con haemalumeosina (HE). Se contó la cantidad mínima y máxima de capas (expansiones dérmicas) de la substancia de la mucosa.

Cantidad de capas en la epidermis Capa córnea Substancia de la mucosa Min. cantidad de Expansión Capas Piel tratada con la 5.95 ± 2.55 7 ± 2.9* 7 ± 0.7* crema 1 Piel tratada con la 6.65 ± 3.1 5.3 ± 1.5 8.36 ± 1.65 crema 2 Piel tratada con la 7.6 ± 2.9 3.9 ± 0.9 0 crema 3 * resultado estadísticamente diferente al del excipiente, la crema Nr. 3 (p < 0.05; ^ Prueba Student). b) Resultados con respecto a la capa córnea: Las pieles tratadas con las cremas 1 , 2 y 3 no muestran cambios significativos en el espesor de la capa córnea.

Resultados con respecto a la substancia de la mucosa: En el caso de las pieles tratadas con las cremas 1 y 2, se notó la presencia de un engrosamiento de la substancia de la mucosa en la forma de la expansión con respecto a la crema 3 (excipiente). Esta expansión es mayor para la crema Nr. 2 (retinol + melibiosa). c) El análisis inmunohistoquímico de la diferenciación epitelial usando los anticuerpos desarrollados contra las citoqueratinas totales Con las pieles tratadas con la crema 2, se observó en 6 de 8 casos un aumento en la intensidad de la rotulación (reflejando una mejora en la diferenciación) de un aspecto substancialmente idéntico. 2.2 Análisis histológico y bioguímico del colágeno a) Análisis histológico (manchado con la mancha de Masson tricromo). Para cada crema, se realizó comparativamente una evaluación por medio de un microscopio óptico de la intensidad de la rotulación y de la organización de los haces de colágeno. Se observó lo siguiente en todos los casos: -crema Nr. 2 > crema Nr. 1 > crema Nr. 3 Se observó claramente con la crema 2 la densificación de haces de colágeno con un aumento en el espesor de haces y su cantidad, reduciendo así los espacios intercelulares; este fenómeno es especialmente visible en la dermis superior en contacto con la membrana basal. Esta modificación en la organización de haces es responsable del aumento en la intensidad de la rotulación con la mancha con tricromo. Los haces también parecen estar mejor organizados. b) Análisis de la electroforesis de gel de los colágenos del tipo I y lll La electroforesis de gel hizo posible demostrar un aumento en la síntesis del colágeno para las pieles tratadas con las cremas 1 y 2, ya que las bandas de proteína correspondientes a los colágenos del tipo I y lll revelaron tener una mayor intensidad de rotulación que la de la crema 3. Debe notarse que el aumento en la síntesis parece mayor para el colágeno del tipo I que para el colágeno del tipo lll. La cantidad de colágeno (tipo I y II) en las pieles tratadas con la crema 3 no es diferente a la de la piel normal. 2-3 Evaluación de los cambios adversos en las fibras elásticas inducidas por HLE en las pieles mantenidas vivas y la evaluación de su protección después del tratamiento con tres cremas gue tienen funciones anti-envejecimiento a) Análisis histológico de las fibras elásticas Sobre las 6 pieles analizadas, el procedimiento experimental de destruir las fibras elásticas usando HLE permitió la degradación parcial de la red de fibras elásticas a ser obtenidas. Esta destrucción varía de una piel a otra. De esta manera, la comparación de la protección porcentual de las fibras elásticas se llevará a cabo entre la biopsia tratada con HLE y la tratada con crema. En segundo lugar, el promedio de los porcentajes se tomó sobre las 6 pieles. Para las pieles tratadas con la crema Nr 1. la protección, evaluada semi-cuantitativamente, es igual al 40%. Para las pieles tratadas con la crema Nr. 2, la protección obtenida es del 41.25%. Por último, para las pieles tratadas con la crema Nr. 3, la protección es del 0%; la destrucción de las fibras elásticas es idéntica a la obtenida con la elastasa de leucocito humano sola. b) Cuantificación por medio del análisis de la imagen de las fibras elásticas Un análisis cuantitativo de la red elástica de la dermis se llevó a cabo sobre las pieles tratadas con la enzima HLE ante la presencia o ausencia de cuatro cremas de prueba.

Se midió el área porcentual de la dermis ocupada por las fibras elásticas manchadas con (+)-catechina. Los resultados obtenidos en un promedio de 6 casos analizados son: % del área de superficie Pieles de control 12.6% + 0.6 pieles + HLE 4% + 0.5 pieles tratadas con la crema 1 + HLE 7.5% ± 0.5* pieles tratadas con la crema 2 + HLE 7.8% ± 0.7* pieles tratadas con la crema 3 + HLE 4.2% + 0.2 *resultado estadísticamente diferente a la de la piel + HLE (p < 0.05; Prueba Student) Las cremas 1 y 2 hicieron posible proteger al tejido elástico dérmico contra la destrucción por la elastasa de leucocito humano. Por otro lado, no se obtuvo ninguna protección con la crema Nr. 3. La evaluación dei tamaño de las fibras elásticas hace posible medir el promedio de las fibras elásticas más largas (µm) sobre varias áreas. µm Pieles de control 58 + 5 pieles + HLE 36 + 8.6 pieles tratadas con la crema 1 + HLE 54 + 4.7 pieles tratadas con la crema 2 + HLE 54 + 5.4* pieles tratadas con la crema 3 + HLE 35 + 7.7 *resultado estadísticamente diferente a la de la piel / HLE (p < 0.05; prueba Student) Las pieles tratadas con las cremas 1 y 2 tienen fibras similares en su longitud a las pieles de control para las fibras más largas. Luego del tratamiento con HLE, la aparición fragmentada histológicamente observada para las fibras elásticas se confirma por medio del análisis de imagen: las fibras elásticas tienen una longitud máxima de 36 µm, este resultado es significativamente diferente al de las pieles de control (p < 0.05; prueba Student). Las pieles tratadas con la crema 3 no permitieron la protección de las fibras elásticas contra la fragmentación inducida por la elastasa de leucocito humano. La longitud obtenida es, de hecho 35 µm como máximo para las fibras más largas.

EJEMPLO 3 Influencia del retinol y melibiosa sobre la actividad anti-elastasa sobre porciones de piel humana normal EQUIPO Y MÉTODOS Las porciones congeladas de 8 µm de espesor se prepararon de muestras obtenidas en la cirugía plática. Se aplicó la elastasa de leucocito humano (HLE a 10 µg/ml) sobre las porciones de piel durante 2 horas a temperatura ambiente y en una atmósfera húmeda con o sin retinol o melibiosa. De esta manera, las fibras elásticas se sometieron directamente a la acción enzimática. Luego de colocar en acetona y de la deshidratación en etanol a 70°C, las fibras elásticas que permanecieron después del tratamiento fueron manchadas con (+)-catechina. La evaluación semi-cuantitativa de las fibras elásticas se completó por cuantificación por medio del análisis de imágenes. La actividad anti-elastasa del retinol y melibiosa se comparó con la del PMSF (fluoruro de fenilmetil-sulfonilo), un inhibidor de elastasa poderoso. Resultados Los resultados experimentales se recogieron en la siguiente cuadro: Productos % de actividad anti-elastasa Retinol 1 mg/ml 80% 100 µg/ml 70% 10 µg/ml 60% Melibiosa 1 mg/ml 15% El retinol de esta manea tiene una actividad considerable de anti-elastasa. Este efecto depende de la dosis. La melibiosa también tiene actividad anti-elastasa, pero este efecto no depende de la dosis.

EJEMPLO 4 Composiciones que contienen combinaciones de acuerdo con la invención Fórmula A: emulsión O W dimeticona 2 alcohol de cetearilo 0.5 ciclometicona 1.5 palmitato de isopropilo 2 BHF 0.1 trialquil citrato-C14-C15 4 alcohol 90° 6 cafeína 2 retinol 0.3 butilén glicol 2 lactosa 4.5 ácido esteárico 1 .0 hidróxido de sodio 0.1 Fórmula B: emulsión O W parabeno Benzoato de alquilo C12-15 0.500 Retinol 0.092 Dimeticona 1.000 Totai 100.- Fórmula C: emulsión O/W Fórmula D: emulsión O/W Fórmula E: Gel Cetearil alcohol 0.5 Ciclometicona 1.5 Isopropil palmitato 2 BHT 0.1 trialquil citrato C14-C 15 4 alcohol 90° 6 Cafeína 2 Melibiosa 0.5 Retino! 0.3 Butilén giicol 2 Lactosa 4.5 Fórmula F: emulsión O/W % Glicerol 5 EDTA disodio 0.2 Metil parabeno/fenoxietanol/propil 1 parabeno Agua 65.4 Poliacrilamida e isoparafina C13-14 y 2 laureth-7 Dimeticona 2 Cetearil alcohol 0.5 Ciclometicona 1.5 Isopropil palmitato 2 BHT 0.1 Trialquil citrato C14-C15 4 alcohol 90° 6 Cafeína 2 Melibiosa 0.5 Retinol 0.3 Butilén glicoi 2 Lactosa 4.5 Acido esteárico 1 .0 Hidróxido de sodio 0.1 Cetearil alcohol/cetearil glucósido 1 .0 Fórmula G: emulsión O/W % Agua 60.491 Carbómero 0.300 Agua 1.000 Hidróxido de sodio 0.135 Chondrus crispusxx 1.000 Silicato de magnesio aluminio 0.250 EDTA disodio 0.200 Lactosa 4.000 Caolina 1 .000 PEG 8 1.000 Acido glicirhetínico 0.500 Melibiosa 1 .00 Sorbitol 2.000 Fenoxietanol/metil parabeno/ propil 0.200 parabeno Isocetil estearato 5.500 Cetearil octanoato/isopropil miristato 4.000 Estearato de sorbitano 4.080 Estearato PEG 20 7.920 Cetearil alcohol 2.000 BHT 0.100 Fenoxietanol/ metil parabeno/ propil 0.800 parabeno Isocetil estearato 0.500 Retinol 0.024 Hamamelis virgiana 2.000

Claims (9)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1 .- La composición farmacéutica o cosmetológica caracterizada porque contiene una composición de al menos un retinoidexx con al menos un oligosacárido que comprende entre 2 y 6 residuos de monosacárido y que tiene una galactosa en la posición terminal no reductora, o un derivado de este oligosacárido substituido con el residuo hidrofóbico , y excipientes farmacéuticamente y cosmetológicamente aceptables.

2.- La composición farmacéutica o cosmetológica de la reivindicación 1 , caracterizada porque el oligosacárido corresponde a la siguiente fórmula general: galactosa -n (a o ß) - (Hex)p en la que n representa la posición 1 , 2, 3, 4, o 6, Hex representa una pentosa o hexanosa ß-enlazada, p es el número entre 1 y5; y porque el derivado de oligosacárido se elige del grupo formado por los compuestos de las siguientes categorías, en el que el oligosacárido corresponde a la fórmula general (A): a) glicósidos correspondientes a las fórmulas: (I) oligosacárido l-O-R, en el que R es un residuo de alquilo ramificado o lineal de 1 a 18 átomos de carbono, (II) oligosacárido l-O-R-O-l-oligosacárido en el que R= (CH2) m, m es entre 2 y 10, b) una osilamina acilada de acuerdo con una de las siguientes fórmulas, en las que el oligosacárido preferentemente es lactosa, melibiosa o estaquiosa: -osilaminas aciladas correspondientes a una de las siguientes fórmulas: (lll) oligosacárido l-NH-CO-R; en el que R es un residuo de alquilo de entre 2 y 18 átomos de carbono que contienen 0,1 o 2 enlaces dobles (IV) oligosacárido I-NH-CO-R-CO-NH-1-oiigosacárido, en el que R- (CH2)m. siendo m entre 2 y 8, c) una alquilamina acilada con un ácido aldónico obtenido por oxidación de un oligosacárido (V) oligosacárido-CO-NH-R; en el que R tiene el mismo significado que en la fórmula (lll), (VI) oligosacárido CO-NH-R-NH-CO-oligosacárido, donde R tiene el mismo significado que en la fórmula (lll), d) o un producto de la reducción de bases Schiff formadas por los oligosacárido con mono- o diaminas alifáticas, y correspondientes a una de las siguientes fórmulas: (Vil) Gal-(Hex)n-X-HN-R; (VIII) Gal-(Hex)n X-HN-R-NH-X-(Hex)n-Gal, en la que: Hex es una hexosa o una pentosa, n=0,1 o 2 X=1-NH2-hexitol, y R tiene el mismo significado que en (lll).

3.- Una composición farmacéutica o cosmetológica de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, caracterizada porque el oligosacárido se elige en el grupo formado por melíbiosa, lactosa y sus derivados que pueden obtenerse por medio del agregado de un residuo hidrofóbico.

4.- La composición farmacéutica o cosmetológica de la reivindicación 1 o 2, caracterizada porque el oligosacárido se elige del grupo formado por melibiosa, lactosa y sus mezclas.

5.- Una composición farmacéutica o cosmetológica de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, caracterizada porque el oligosacárido es melibiosa.

6.- Una composición farmacéutica o cosmetológica de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque ei retinoidexx se elige del grupo formado por retinol, sus sales y sus esteres.

7.- La composición farmacéutica o cosmetológica de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizados porque contiene una combinación de retinol y melibiosa.

8.- Una composición farmacéutica de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada porque contiene excipientes dermatológicamente aceptables.

9.- La composición farmacéutica de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada porque también contiene excipientes adecuados para la administración oral. 1 .- La composición de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada porque el retinoidexx, está presente a una concentración entre 0,0001 y el 3% en peso, en combinación con melibiosa en una concentración entre 0,0001 hasta 5% en peso, con respecto al peso total de la composición. 1 1.- La composición de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada porque el retinol está presente a una concentración entre el 0,0001 % hasta el 3% y, porque la melibiosa está presente a una concentración entre el 0,001 % hasta el 2%. 12.- El uso de una combinación de al menos un retinoidexx con al menos un oligosacárido que comprende entre 2 y 6 residuos de monosacárido y tiene una galactosa en la posición terminal no reductora o un derivado de este oligosacárido substituido con un residuo hidrofóbico, para la preparación de una composición diseñada para mejorar la elasticidad de la piel y/o prevenir o tratar cambios en la piel y el dermatoesqueleto debido al envejecimiento. 13.- El uso de acuerdo con la reivindicación 12, caracterizado porque el oligosacárido corresponde a la siguiente fórmula general: galactosa-n( o ß) - (Hex)p (A) en la que n representa la posición 1 , 2, 3, 4, o 6, Hex representa una pentosa o hexanosa o ß-enlazada, p es un número entre 1 y 5; y porque el derivado de oligosacárido se elige del grupo formado por los compuestos de las siguientes categorías, en el que el oligosacárido corresponde a la fórmula general (A): a) glicósidos correspondientes a las fórmulas: (I) oligosacárido l-O-R, en el que R es un residuo de alquilo ramificado o lineal de 1 a 18 átomos de carbono, (II) oligosacárido l-O-R-O-l-oligosacárido en el que R=(CH2)m. m es entre 2 y 10, b) una osilamina acilada de acuerdo con una de las siguiente fórmulas, en las que el oligosacárido preferentemente es lactosa, melibiosa o estaquiosa: -osilaminas aciladas correspondientes a una de las siguientes fórmulas: (lll)oligosacárido l-NH-CO-R; en el que R es un residuo de alquilo de entre 2 y 18 átomos de carbono que contienen 0,1 o 2 enlaces dobles (IV) oligosacárido l-NH-CO-R-CO-NH-1-oligosacárido, en el que R-(CH2)m. siendo m entre 2 y 8, c) una alquilamina acilada con un ácido aldónico obtenido por oxidación de un oligosacárido (V) oligosacárido-CO-NH-R; en el que R tiene el mismo significado que en la fórmula (lll), (VI) oligosacárido CO-NH-R-NH-CO- oligosacárido, donde R tiene el mismo significado que en la fórmula (lll) d) o un producto de la reducción de bases Schiff formadas por los oligosacáridos con mono- o diaminas alifáticas, y correspondientes a una de las siguientes fórmulas: (Vil) Gal-(Hex)n-X-HN-R; (VIII) Gal-(Hex)n-X-NH-R-NH-X-(Hex)n-Gal, en la que: Hex es una hexosa o una pentosa, n=0,1 o 2, X=1 -NH2-hexitol y R tiene el mismo significado que en (lll) 14.- El uso de una combinación de acuerdo con la reivindicación 12 o 13, caracterizada porque el retinoide es retinol y el oligosacárido es meiibiosa o sus derivados que pueden obtenerse por medio del agregado de un residuo hidrofóbico. 15.- El uso de acuerdo con las reivindicaciones 12 a 14 caracterizado porque el oligosacárido es melibiosa. 16.- El uso de acuerdo con las reivindicaciones 12 a 15, para la preparación de una composición dermocosmética diseñada para mejorar las propiedades de viscoelasticidad de la piel y para prevenir o reducir la formación de las arrugas. 17.- El uso de un retinoide para la preparación de una composición que hace posible la degradación de las fibras elásticas en el tejido conectivo. 18.- El método para ei tratamiento cosmético de los cambios asociados con el envejecimiento de la piel y/o de! dermatoesqueleto, caracterizado porque la composición de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 7, 10 y 11 se aplica a la piel y/o ai dermatoesqueleto.