MXPA99007225A - Metodo para el tratamiento de aterosclerosis y lesion vascular mediante prevencion de la proliferacion de celulas de musculo liso vascular - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un método para el tratamiento de la aterosclerosis y lesiones vasculares al utilizar exoquelinas y más en particular exoquelinas de Mycobacterium tuberculosis para impedir la proliferación de células de músculo liso vascular. La administración de una cantidad efectiva de desferri-exoquelinas a un organismo viviente tal como un animal o un humano, mediante una ruta oral, intravenosa o directa al sitio en el cual se desea el efecto protegeráa los vasos sanguíneo en un organismo viviente de la restenosis enseguida de la cirugía de angioplastía o vascular e impediráo frenaráel avance de la aterosclerosis, hipertensión sistémica, daños por radiación a la vasculatura, estenosis o cierre de injertos de desviación a las arterias coronarias u otros vasos sanguíneos enseguida de un procedimiento quirúrgico y varias formas de hipertensión pulmonar.

Description

MÉTODO PARA EL TRATAMIENTO DE ATEROSCLEROSIS Y LESIÓN VASCULAR MEDIANTE PREVENCIÓN DE LA PROLIFERACIÓN DE CELULAS DE MÚSCULO LISO VASCULAR Descripción de la invención La presente invención es concerniente con un método para el tratamiento de la aterosclerosis y daños vasculares al utilizar exoquelinas y más en particular las exoquelinas de Micobacterium tuberculosis para impedir la proliferación de células del músculo liso vascular.

Antecedentes de la invención .La proliferación no apropiada del músculo liso vascular es un componente integral de la patofisiologia de varias formas clínicamente importantes de la enfermedad vascular. La proliferación y migración de células de músculo liso vascular son un mecanismo importante de la génesis de las placas aterosclerdticas que provocan ataques al corazón, accidentes cerebrovasculares o enfermedad vascular periférica (N Eng. J. Med; 314 : 488-500, 1986). La restenosis después del tratamiento de lesiones vasculares ateroscieróticas con angioplastia transluminal percutánea es un resultado clínico adverso común de este procedimiento. La restenosis involucra una respuesta prolifera del músculo liso vascular en el sitio de la lesión (J. Am. Coll. Cardiol; 6:369-375, 1985). Finalmente, se ha propuesto a la proliferación del músculo liso vascular como un componente importante en la génesis de otras formas de lesión vascular u obstrucción, en las que se incluyen el cierre de sistemas de desviación quirúrgicos (J. Vascular Research; 29:405-409, 1992), lesiones por irradiación a la vasculatura (J. Am. Coll. Cardiol; 19:1106-1113, 1992) hipertensión sistémica (J. Hyper-tension; 12:163-172, 1994) e hipertensión pulmonar neonatal o primaria (J. Clin. Invest; 96:273-281, 1995 y Circulation; 42:1163-1184, 1970). Las preparaciones de cultivo celular in vitro se utilizan frecuentemente para estudiar la proliferación de células de músculo liso vascular. La proliferación de células en cultivo después de exposición a suero que contiene factores de crecimiento o exposición a factores de crecimiento individuales puede ser cuantificada mediante la medición de la absorción de timidina radioactiva en las células (Circulation; 90:1908-1994). Los compuestos que inhiben el crecimiento de células de músculo liso vascular cultivadas tienen el potencial de impedir la proliferación del músculo liso vascular anormal en las enfermedades humanas (Am. J. Physiol; 269.H1641, 1995). Hay evidencia de que el hierro puede ser un requerimiento importante para el desarrollo de la aterosclerosis . La sobrecarga de hierro debida a las inyecciones de hierro-dextran aumenta la formación de lesiones ateroscieróticas arteriales en conejos hipercolesterolémicos (Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol; 15:1172-1180, 1995). La oxidación de colesterol de lipoproteína de baja densidad es una etapa importante en las primeras etapas del desarrollo de la aterosclerosis y es dependiente del hierro (J. Clin. Invest; 95:2104-2110, 1995) . Esto puede reflejar la capacidad del hierro libre para catalizar la formación de radicales libres de oxígeno altamente reactivos (Biochem. J; 184:469-472, 1979) . Sin embargo, la quelación del hierro inhibe el crecimiento celular o el avance del ciclo celular en otros modelos, en los que se incluyen el crecimiento de linfocitos y células de neuroblastoma, en donde se pueden presentar mecanismos no relacionados con la oxidación del colesterol de lipoproteína de baja densidad (Blood; 86:2268-2280, 1995). Finalmente, la deferoxamina quelante del hierro impide la proliferación de células de músculo liso vascular in vitro e impide el engrosamiento íntimo in vivo en conejos (Arterioscler. Thromb; 14:299-304, 1994). La deferoxamina también reduce la proliferación del músculo liso intimo en injertos de vena experimentales (J. Vascular Research; 29:405-409, 1992). Sin embargo, la deferoxamina, un compuesto que no es extraible en cloroformo y por consiguiente no es soluble en lipidos tiene limitaciones considerables como un tratamiento para la arteriosclerosis, restenosis u otras formas de lesión vascular. La deferoxamina tiene efectos secundarios significativos cuando se administra en altas dosis in vivo y en general obtiene niveles no mayores de 10 µmoles/litro (Br. J. Haematol; 42:547-555, 1979), que se cree que no son niveles suficientemente altos para tener un efecto antiprolífero en el hombre. La deferoxamina puede solamente ser administrada intravenosamente, entra a las células o tejidos sólo muy lentamente mediante pinocitosis y requiere administración continua debido a que es excretada rápidamente (Biochem. Pharmacol; 41:1361-1363, 1991). Hay la necesidad de la prevención de la aterosclerosis mediante la provisión de un agente que tenga capacidad de quelación de hierro e impida la producción de radicales libres mediada por hierro, pero que en contraste a la deferoxamina sea soluble en lipidos . Es probable que un agente quelante de hierro soluble en lipidos con estas propiedades tenga capacidad de administración oral o transcutánea y que tenga una eficacia considerable para áiapedir la proliferación de la célula de músculo liso vascular y la oxidación de lípidos, ambos mecanismos principales en el desarrollo de la aterosclerosis. La administración crónica de tal agente quelante de hierro soluble en lípidos sería un tratamiento ideal para prevenir o impedir el avance de la aterosclerosis . Además, hay necesidad de impedir la restenosis después de la angioplastia u otras técnicas que alivien las obstrucciones vasculares al proporcionar un agente que, de manera semejante a la deferoxamina, tenga la capacidad de quelación del hierro y de impedir la producción de radicales libres mediada por hierro, pero que sea soluble en lípidos. Así, hay la necesidad de la prevención de la aterosclerosis al proporcionar un agente que sea soluble en lípidos, que tenga la capacidad de impedir la peroxidación de lípidos y que pueda administrarse oralmente. Además, la prevención de la restenosis requiere un agente que sea efectivo en las primeras horas después que se lleva a cabo una angioplastia (J. Clin. Invest; 90:2044-2049, 1992); J. Vasc. Surg. 1994; 19:1084-1091, 1992). Idealmente, este agente debe ser administrado directamente al vaso que está siendo tratado mediante angioplastia durante el procedimiento o en un periodo de unos pocos minutos o menos después de esto. Para ser efectivo, el agente debe ser absorbido rápidamente por las células vasculares en la región que es tratada. Los agentes solubles en lípidos son capaces de entrar rápidamente a la porción de lípidos de las membranas celulares e interactuar intracelularmente, mientras que los agentes tales como la deferoxamina, que no son solubles en lípidos entran a las células mucho más lentamente. Puesto que la deferoxamina no es soluble en lípidos, no es útil cuando se administra en un bolo mediante la ruta intravascular. Sin embargo, se esperaría que un agente quelante de hierro soluble en lípidos tuviera la capacidad de una administración intravascular rápida debido a que sería probable que se absorba rápidamente por las células del músculo liso en el vaso. Así, hay necesidad de un agente que pueda ser administrado de una manera diferente a la vía intravenosa y que pueda entrar rápidamente a las células del músculo liso vascular e impedir su proliferación. Tal agente sería potencialmente útil para impedir la aterosclerosis, restenosis u otros resultados adversos de la lesión vascular.

Breve descripción de la invención La deferoxamina no cumple con estos criterios. Sin embargo, se ha descubierto que exoquelinas específicas, descritas posteriormente en la presente, son agentes quelantes de hierro únicos debido a que son solubles en lípidos, lo que les permite entrar rápidamente a la porción de lípidos de la membrana celular e impiden la producción mediada por hierro del radical hidroxilo u otros radicales libres altamente reactivos. Como resultado se ha demostrado que son capaces de impedir la proliferación del músculo liso. Todos los otros agentes quelantes de hierro que están actualmente disponibles no pueden entrar rápidamente a las células o no se ha demostrado que impidan la proliferación de células de músculo liso vascular.

Dibujos Estas y otras características, aspectos y ventajas de la presente invención se comprenderán mejor con referencia a la siguiente descripción, reivindicaciones adjuntas y dibujos adjuntos en donde: La figura 1 muestra la estructura química de un quelato de hierro de exoquelina (ferriexoquelina) y la molécula de desferriexoquelina (hierro libre) . La figura 2 muestra un perfil de elución de un filtrado de cultivo de M. tuberculosis verificado a 220 nm y 450 nm. La figura 3 muestra un perfil de elución del mismo filtrado monitoreado a 450 nm, se muestra el peso molecular de cada pico. La figura 4a muestra la estructura de una exoquelina principal que contiene serina a m/z = 720.3. La figura 4b muestra los espectros del espectrómetro de masa de la exoquelina que contiene serina de la figura 4a. La figura 5 es una gráfica que compara la inhibición de la lesión celular como resultado del uso de desferriexoquelina 772C o deferoxamina sobre miocitos cardiacos. La figura 6 muestra la estructura química de un quelato de hierro de exoquelina (ferriexoquelina) y la molécula de desferriexoquelina (libre de hierro) con sitios para modificación identificados.

La figura 7 es una gráfica que compara varias muestras de células de músculo liso vascular cultivadas tratadas con diferentes concentraciones de desferriexoquelina. La figura 8 es una gráfica que compara el efecto del tratamiento de los cultivos de célula de músculo liso vascular con desferri-exoquelina, ferri-exoquelina y deferoxamina. La figura 9 es una gráfica que muestra los efectos sobre la función sistólica ventricular izquierda (LV) durante la recuperación de isquemia a diferentes dosificaciones de desferri-exoquelina . La figura 10 es una gráfica que muestra las mediciones del flujo de efluente coronario antes y después de la isquemia a diferentes dosis de desferri-exoquelina. La figura 11 es una gráfica que muestra las mediciones de 2,3 DHBA y 2,5 DHBA, en el tejido cardiaco después de 30 minutos de reperfusión a diferentes dosis de desferri-exoquelina .

Descripción detallada de la invención Se ha encontrado que las exoquelinas son agentes solubles en lípidos que pueden efectuar la quelación de hierro y bloquear las reacciones mediadas por hierro, tales como la producción de radical hidroxilo por medio de la reacción de Fenton. Debido a su solubilidad en lípidos, las exoquelinas son capaces de entrar a las células mucho más rápidamente que los agentes quelantes de hierro no solubles en lípidos tales como deferoxamina. La solubilidad en lípidos también puede permitir que las exoquelinas localicen y efectúen la quelación del hierro en diferentes porciones de las células que los agentes quelantes de hierro insolubles en lípidos tales como la deferoxamina. Se ha demostrado que las exoquelinas son capaces de impedir la proliferación de la célula de músculo liso vascular cultivada. También se ha encontrado que las exoquelinas pueden bloquear o reducir significativamente los daños oxidantes a los tejidos resultantes de la catálisis mediada por hierro de las reacciones de tejido/radicales libres, tales como la producción de radical hidroxilo (-OH) mediante la reacción de Fenton. Esta reacción es una causa importante de lesión de reperfusión que se presenta cuando el flujo de sangre es restaurado después de una interrupción temporal. Se ha encontrado además que las exoquelinas son efectivas para retardar o impedir las lesiones de reperfusión cuando se administran durante la reperfusión. Adicionalmente, se ha encontrado que las exoquelinas abarcan una clase mucho más amplia de materiales y tienen una estructura química diferente que aquella que se proponía originalmente por la teoría de acha et al., y Barclay et al.

Se ha encontrado además que estos materiales pueden efectuar la quelación de un amplio rango de metales para dar como resultado materiales no previamente conocidos. Además de impedir la lesión de reperfusión, las exoquelinas modificadas apropiadamente pueden ser usadas para tratar ciertas enfermedades y atacar ciertas células, tales como las células del cáncer. En particular, es conocido que el crecimiento de las células de neuroblastoma puede ser afectado negativamente mediante la remoción del hierro al utilizar el compuesto quelante de hierro deferoxamina, sin afectar adversamente el crecimiento de las células normales. Otras aplicaciones de las exoquelinas incluyen el tratamiento de sobrecarga de hierro de transfusiones o quimioterapia de cáncer. Como resultado de aislar y purificar las exoquelinas, se ha encontrado que las exoquelinas son una familia de moléculas que tienen un rango de pesos moleculares y varias cadenas laterales diferentes. Además, se han preparado exoquelinas purificadas y se ha demostrado por primera vez su utilidad como secuestrantes de hierro libre, de tal manera que son efectivas para impedir la formación de radicales hidroxilo que dañan el tejido (-OH). En particular, se han aislado exoquelinas purificadas de M. tuberculosis y se ha demostrado que eliminan efectivamente el hierro de la transferrina, lactoferrina y ferritina a pH fisiológico sin transmitir ninguna de las propiedades infecciosas de las bacterias de las cuales son derivadas. También se ha demostrado por primera vez que estas exoquelinas bloquean la formación de radicales hidroxilo mediante la reacción de Fenton y en base a la respuesta de los miocitos cardiacos pueden ser efectivas para impedir la lesión de reperfusión después del infarto al miocardio o daños vasculares a otros tejidos cuando son administradas después que se presenta el ataque también como varias horas después del episodio. En tanto que las micobactinas se han estudiado extensamente, las exoquelinas individuales no han sido aisladas o purificadas y su estructura y composición no ha sido definida previamente. Además, se ha encontrado que las referencias de la técnica previa han caracterizado incorrectamente las exoquelinas y así han fracasado en identificar la estructura de estos compuestos. En particular, Macham (ibid.) los identifica como penta- o hexapéptidos que tienen un peso molecular de 750 a 800, que contienen 3 moles de e-N-hidroxilisina, e— -acetil-e-N-hidroxilisina o e-N-hidroxiornitina y 1 mol de treonina. Se ha encontrado que las exoquelinas tienen un rango mucho más amplio de pesos moleculares, constituyente varias series de compuestos con una diferencia identificable en pesos moleculares, incluyen solamente 2 moles de e-N-hidroxilisina y no son péptidos. Un péptido es un polímero de un aminoácido (NH2-CHR-COOH) formado mediante la condensación del grupo carboxílico de una primera molécula con el grupo amino de otra molécula para formar un enlace amida (-CO-NH-) . Las exoquelinas no pueden ser consideradas como péptidos. En lugar de esto contienen tres aminoácidos y otras porciones estructurales (ácido salicílico, ácidos dicarboxílicos o análogos de monoéster y ácidos hidroxicarboxílieos) formados mediante condensaciones de amida (-NH-CO-), hidroximato (-NH (OH) -C0-) y éster (-C0-0-) . Las formas ferri y desferri son mostradas en la figura 1.

Preparación - Se generan exoquelinas y son purificadas a partir de una cepa virulenta (Erdman) y avirulenta (H37Ra) de M. tuberculosis. Para mejorar la producción de exoquelinas de M. tuberculosis, las bacterias fueron cultivadas en un medio deficiente de hierro. En particular, la cepa de Erdman de M. tuberculosis (colección de cultivo tipo American 35801) y H37Ra (ATCC 25177) fueron cultivadas en placas de agar Middlebrook 7H11 a 37°C en C02 al 5%. Después de 14 días las bacterias fueron cosechadas, suspendidas en 150 ml de medio de Sauton modificado en matraces de cultivo e incubadas durante 3 a 8 semanas. El medio de Sauton modificado contenía 0.12 mg/litro de citrato de amonio férrico sin tensioactivo agregado. Luego se recuperaron exoquelinas (ferriexoquelinas) ricas en hierro mediante filtración, saturación con hierro y extracción con cloroformo y purificadas mediante cromatografía líquida a alta presión (HPLC) . Específicamente, el fluido sobrenadante de la suspensión anterior fue filtrado a través de filtros sucesivos de baja aglutinación de proteína de 0.8 µm y 0.2 µm. Luego, las exoquelinas fueron cargadas con hierro mediante la saturación del fluido sobrenadante filtrado mediante exposición al cloruro férrico (150 mg por litro de filtrado cultivado) . Las exoquelinas férricas fueron mezcladas con cloroformo (1 volumen de filtrado de cultivo por 1.5 volúmenes de cloroformo) y después de la separación de las capas, la capa de cloroformo rica en exoquelina fue retirada y almacenada bajo sulfato de magnesio anhidro (2 g/litro) . Luego el extracto de cloroformo se hace pasar a través de un filtro de vidrio fritado y es evaporado mediante evaporación rotativa para dejar atrás un residuo café. El residuo café fue purificado adicionalmente mediante suspensión en 5 ml de una primera solución de pH regulado (ácido trifluoroácetico al 0.1%) que fue introducida a una columna de cromatografía líquida (cartucho Sep-Pak C- 18) . La banda café que se formó cerca de lo alto de la columna fue eluida con una segunda solución reguladora de pH (TFA al 0.1%, acetonitrilo al 50%). Luego, el material parcialmente - purificado fue diluido tres veces en ácido trifluoroacético al 0.1% y sometido a cromatografía líquida a alta presión de fase inversa a una velocidad de 1 ml/minuto, seguida por exposición a una columna C-18. La presencia de las exoquelinas ricas en hierro en el producto de elución de la HPLC fue detectada mediante la verificación simultánea de la absorbancia de UV del pico de 450 nm (compuestos de hierro) y el pico de 220 nm que es indicador de grupos amida y aromáticos . Aproximadamente 5 picos mayores y 10 picos menores mostrados en la figura 2 eluidos de la columna C-18 final exhibieron una alta proporción de absorbancia de 450/220 nm. Se confirma que se trata de exoquelinas mediante espectrometría de masas. Los picos mayores fueron purificados adicionalmente mediante una segunda HPLC de fase inversa sobre una columna de alquilfenilo. Las exoquelinas recuperadas de la cepa de Erdman de M. tuberculosis fueron idénticas a las exoquelinas recuperadas de la cepa H37Ra.

Caracterización - En base al análisis de LSIMS y ESI-MS de numerosos picos, en su forma ferri (Fe3+) eluidas de la columna (véase figura 3), las hierro-exoquelinas no están confinadas a las dos moléculas específicas detalladas anteriormente, sino que incluyen una familia de especies que fluctúan en masa -de 716 a 828 daltons. Cada miembro de la familia parece diferir de su vecino por 14 daltons, que refleja el número de grupos CH2 en la cadena lateral de alquilo Ri y/o 2 daltons que refleja la presencia de un doble enlace en la cadena lateral de alquilo Ri. Así, las exoquelinas parecen formar dos series con los elementos subsecuentes de cada serie que difieren en masa por 14 daltons, las series saturadas tienen masas de aproximadamente 716, 730, 744, 758, 772, 786, 800, 814 y 828 daltons y las series insaturadas tienen masas de 742, 756, 770, 784, 798, 812 y 826. Adicionalmente, la presencia o ausencia de un grupo metilo en R3 (esto es, H o CH3) define además dos series adicionales de moléculas a las que se hace referencia como la serie de serina (R3 = H) y la serie de treonina (R3 = CH3) tal como se confirma mediante análisis de aminoácidos. Los compuestos más polares están a la izquierda de la figura (eluidos anteriormente) y los menos polares (más solubles en lípidos) están a la derecha. Sin embargo, todos los picos son solubles en agua. Cuando se encuentra que más de un pico tiene el mismo peso molecular, cada pico es designado además como A, B o C (esto es 758A, B y C) para indicar el nivel de polaridad, A representa el compuesto más polar y C representa la forma menos polar. Se cree que las formas más polares resultan de un grupo metilo unido en un sitio diferente en la molécula.

Estructura de la exoquelina - La figura 4 muestra los resultados del análisis espectrométrico de masa en tándem bajo disociación inducida por colisión (He se hace flotar a 2 KeV para una energía de colisión de 6 KeV) de la desferriexoquelina que contiene serina saturada principal con (M+H)+ a m/z = 720.3. Los iones del fragmento fueron asignados a una de las seis porciones estructurales A-F resultantes de los productos escindidos generados alrededor de los enlaces de amida o éster con las transferencias de hidrógeno en relación con la molécula neutra asociados con cada pico indicado en el espectro mostrado en la figura 4. La hidrólisis de ácido y metilación de las exotelinas dan como resultado la formación de ácido salicílico y ácido pimélico. El análisis espectrográfico de masas indica que el ácido pimélico está presente en la exoquelina como un éster de metilo. En base a este análisis la estructura general de las ferriexoquelinas y las desferriexoquelinas es mostrada en la figura 1. El grupo metilo mostrado en la figura 1 en la posición R4, como se define en la figura 6, puede estar en la posición R5 también definida en la figura 6. La molécula central de hierro-exoquelina es circular con el hierro en el centro. Contiene 3 porciones de aminoácido (dos N-hidroxilisinas y 1 serina o treonina, dependiendo de si R3 es un hidrógeno o un grupo metilo) . La diferencia principal entre las exoquelinas y las micobactinas de M. tuberculosis es que el Ri en las exoquelinas existe normalmente ya sea como un éster de metil alquilo saturado ( (CH2) NCOOCH3) , un sólo éster de metil alquilo insaturado (CH2) XCH=CH (CH2) yCOOCH3 o un ácido carboxílico y las exoquelinas tienen una cadena lateral de alquilo mucho más corta que las micobactinas con estas cadenas laterales más cortas que terminan en porciones de éster de metilo. Estas diferencias proporcionan la solubilidad en agua de las exoquelinas y su capacidad para funcionar en el ambiente extracelular. La figura 5 compara la prevención de lesión celular cuando la deferoxamina o una cantidad mucho más pequeña de exoquelina son agregadas a un cultivo de células miocíticas cardiacas de rata tratadas con H202. Esta gráfica demuestra que la exoquelina puede entrar rápidamente a las células y reducir o impedir los daños, en tanto que la deferoxamina no tiene ningún resultado benéfico. En los ejemplos descritos posteriormente en la presente las desferri-exoquelinas y las ferri-exoquelinas son denominadas mediante la masa de las ferri-exoquelinas como se muestra en la figura 3. Una letra enseguida del número de masa (A, B, C, etc.) designa que existen compuestos del mismo peso molecular pero diferentes características de elución, lo que indica una ubicación diferente de las cadenas laterales u orientación óptica diferente que afecta la polaridad de los compuestos (solubilidad) . Los picos de la misma masa son denominados adicionalmente con una letra (A, B, C) por el orden en el cual se eluyen de la columna, A procede primero, luego B y luego C. Un número seguido por SM indica que el compuesto es un número de la serie de serina (S) o un éster de metilo (M) , en tanto que TM designa un elemento de la serie de treonina (T) también como un éster de metilo (M) . La masa de la forma libre de hierro (desferri) es 53 menor que la forma ferri debido a que la forma ferri pierde de un átomo de hierro (56) pero gana 3 átomos de H (1) .

Ejemplo 1 Se obtuvieron células de músculo liso vascular humanas a partir de segmentos de vena safeno retirados en el curso de cirugía opcional. La capa muscular interna de los segmentos de vena fue separada del resto del segmento de vaso, picada y sometida a digestión con una mezcla de colagenasa y elastasa a pH 7.4. Luego, se llevaron a cabo cuatro digestiones subsecuentes secuencialmente con medio que contiene tripsina bovina, alfa-quimiotripsina y elastasa. Esto dio como resultado la separación de células de músculo liso viables de los componentes restantes del vaso. Después de la centrifugación para separar los desechos, las células fueron resuspendidas en matraces de 25 cm3 en un medio con suero al 10% (50% de suero de ternero bovino y 50% de suero de sangre de cordón umbilical humano neonato que fue inactivado térmicamente) durante dos semanas. Luego, las células fueron sembradas en platos de cultivo de 24 cavidades (20,000 células/cavidad) durante 2 días en suero al 10%. Luego, las células fueron inactivadas en un medio con suero bovino al 0.1% durante tres días. Luego, las células fueron pre- incubadas durante 30 minutos en un medio con suero al 0.1%. Dos concentraciones de 10 ó 20 micromolar de desferriexoquelina 772SM (designada previamente como 1120., véase ' figura 3) fueron luego agregadas a las cavidades en prueba que contienen ya sea suero bovino al 0.1%, 1.% o 2% durante 24 horas. Las cavidades de control o referencia recibieron las mismas concentraciones de suero pero no recibieron 772SM. Se estudiaron muestras por triplicado para cada condición. Cuatro horas antes del final de la exposición de 24 horas se agrega timidina titulada 0.5 µCi/ml a cada cavidad. Al final del periodo de incubación de 24 horas las células fueron sometidas a lisis (destrucción mediante lisina) y se mide la radioactividad del contenido de cada cavidad con un contador de centelleo líquido. Los resultados son mostrados en la figura 7 en donde se grafican los conteos para cada grupo triplicado de cavidades para cada una de las 12 condiciones estudiadas (total = 36 cavidades) . Las barras representan valores de la media para cada grupo de tres cavidades y las líneas verticales por encima de cada barra ilustran el error estándar de la media. Cada grupo de tres muestras de cavidad es denominado según el % de suero presente (0.1%, 1.0% o 2.0%) y la concentración molar de desferri-exoquelina 772SM (0.2, 10 o 20 µM) si es agregada. En cada una de las tres concentraciones de suero, una concentración ya sea de 10 ó 20 micromolar de desferri-exoquelina 772SM reduce notablemente la absorción de timidina en comparación con las cavidades que contienen la misma concentración del suero, pero nada o una concentración baja (2 µM) de desferri-exoquelina. Puesto que la absorción de la timidina es una medida de la proliferación celular, se puede concluir que la desferri-exoquelina 772SM en concentraciones mayores de 10 micromolar y particularmente en el rango de 10-29 micromolar impide el crecimiento de la célula de músculo liso vascular humana estimulada por suero.

Ejemplo 2 Se obtuvieron células de músculo liso vascular humano y se procesaron de la misma manera como se describe en el ejemplo 1. Las células fueron sembradas en platos de cultivo de 24 cavidades (aproximadamente 12,800 células/cavidad) durante 2 días en suero al 10% y luego se inactivaron en un medio con suero bovino al 0.1% durante 4 días. Luego, se llevaron a cabo experimentos en cavidades que contiene ya sea suero bovino al 0.1% o 2% durante 24 horas. Durante el periodo de prueba de 24 horas, las cavidades que no contienen medicamento (de control o referencia), desferri-exoquelina 10 uM 798TM (Des-Exo 798TM) , ferri-exoquelina 10 µM 798TM (Ferri-Exo 798TM) o deferoxamina 25 µM (Deferox.). La desferri-exoquelina 798TM (Des-Exo 798TM) y ferri-exoquelina 798TM (Ferri-Exo 708TM) son compuestos que tienen masas de 745 y 798 respectivamente (véase figura 3) . Se estudiaron muestras por triplicado para cada condición. Durante las últimas cuatro horas de la exposición de 24 horas, se agrega timidina titulada 0.5 µCi/ml a cada cavidad. Al final del periodo de incubación de 24 horas, las células fueron sometidas a lisis y se miden la radioactividad en el contenido de cada cavidad con un contador de centelleo líquido. Los resultados son mostrados en la figura 6, en donde se muestra el conteo para cada grupo triplicado de cavidades para cada una de las 8 condiciones estudiadas (total = 24 cavidades) . Las barras representan los valores promedio o de la media para cada grupo de tres cavidades y las líneas verticales por encima de cada barra ilustran el error estándar de la media. Cada grupo de tres muestras de cavidades es denominado con respecto al % de suero presente y la concentración molar de medicamento agregado, si lo hay. Hubieron solamente pequeñas cantidades de absorción de timidina, indicadas por los conteos por minuto, en las cavidades que contienen suero al 0.1% debido a que se presenta muy poca proliferación celular a esta concentración de suero. Sin embargo, las cavidades de control (sin tratar) tuvieron una alta absorción de timidina después de 24 horas en suero al 2.0%. En contraste, en las cavidades tratadas con desferriexoquelina 798TM no hubo virtualmente ningún incremento en la absorción de timidina durante la exposición al suero al 2.0% sobre los niveles medidos en las células sin tratar en suero al 0.1%. En las cavidades tratadas con ferri-exoquelina 798TM que es exoquelina plenamente saturada de hierro 798TM y expuesta a suero al 2%, hubo una absorción sustancial de timidina, pero menor de la que fue observada en las células de control o referencia en suero al 2.0%. En las cavidades tratadas con deferoxamina y expuestas a suero al 2.0% hubo una absorción de timidina similar a las células de control expuestas a suero al 2.0%. Puesto que la absorción de timidina es una medida de la proliferación celular, la desferriexoquelina 798TM en una concentración de 10 micromolar impide el crecimiento de la célula del músculo liso vascular humano estimulada por suero. La ferri-exoquelina 798TM tiene un pequeño efecto inhibidor sobre el crecimiento de la célula de músculo liso vascular humano estimulada por suero y la deferoxamina 25 micromolar (2.5 veces la concentración de desferri-exoquelina) no tiene ningún efecto sobre el crecimiento de la célula del músculo liso vascular humano estimulado por suero, lo que indica que la exoquelina sometida a prueba tiene un efecto inhibidor del crecimiento de la célula que es separado de su capacidad para quelar el hierro.

Ejemplo 3 Para determinar si las desferri-exoquelinas solubles en lípidos eran capaces de ser absorbidas rápidamente por el tejido cardiaco durante una breve inyección, se llevaron a cabo estudios en corazones de conejo aislados. Los efectos protectores contra la lesión por reperfusión y acumulación de metabolitos de radical hidroxilo fueron medidos enseguida de una breve inyección de desferri-exoquelinas a la raíz de la aorta. También se midieron las exoquelinas en el efluente venoso que, en este sistema no recirculante, requiere una absorción inicial rápida por el tejido cardiaco de las desferri-exoquelinas inyectadas.

Preparación de corazón aislado, sometido a perfusión - Se administra heparina (1000 U/Kg) a quince conejos blancos adultos de Nueva Zelandia, ya sea de un sexo u otro, que pesan 2.3 - 3.5 Kg y fueron anestesiados con pentobarbital de sodio (60 mg/Kg i.v.). Los corazones fueron extirpados rápidamente y sometidos a perfusión con solución reguladora del pH Krebs- Henseleit modificada al utilizar la técnica de Langerdorff no recirculante. Con el fin de atrapar los isómeros de radical hidroxilo, se agrega ácido salicílico 1 mM a la solución reguladora del pH. El producto sometido a perfusión de pH regulado fue administrado al corazón a través de una cánula aórtica a una presión de 73 mm de Hg. Un globo de látex lleno de fluido fue insertado al ventrículo izquierdo para las mediciones de presión. Antes de cualquier medición de presión, el volumen del globo fue ajustado para obtener una presión REI INDICACIONES 1. Una capa de recubrimiento permeable a los líquidos (1) para un artículo absorbente como puede ser un pañal, un protector contra incontinencia, una toalla higiénica (300) o similares, que presenta una capa portadora permeable a los líquidos (2) con una primera superficie y una segunda superficie, en donde la primera superficie de la capa portadora (2) presenta una multitud de fibras arregladas individualmente (3), cada fibra presentando un primer extremo de fibra y un segundo extremo de la fibra, y estando unidas con un extremo de la fibra contra la primera superficie de la capa portadora (2), se caracteriza porque la capa portadora (2) presenta una pluralidad de regiones (4) que son prácticamente libres de fibras (3) y que ocupa una superficie, de modo que un círculo con un diámetro de 3 a 15 mm y de preferencia con un diámetro de 3 a 10 mm puede ser acomodado dentro de cada región libre de fibras (4) . 2. La capa de recubrimiento permeable a los líquidos de acuerdo con la reivindicación 1, se caracteriza porque las fibras individuales (3) están constituidas de fibras bicomponentes que presentan una superficie de fibra y un núcleo, en donde cuando menos la superficie de la fibra es hidrofóbica. 3. La capa de recubrimiento permeable a los líquidos de Se prepararon curvas estándar de ácidos 2,3-, 2,4-, 2,5- y 3,4-dihidroxibenzóico en metanol a una serie de concentraciones que fluctúan de 1 a 1,000 picomoles. El estándar interno (ácido 2, 6-dihidroxibenzóico) fue agregado a una concentración de 100 pmoles. Se analizaron los estándares y extractos biológicos por triplicado mediante GCMS utilizando una cromatógrafo de gases Hewlett Packard 5890 interconectado a una detector selectivo de masa 5970. Las condiciones de cromatografía de gases consistieron de una temperatura inicial de la columna de 100°C durante 5 minutos que fue incrementada a 10°C por minuto a 300°C. Los iones fueron verificados a m/z 355, 356 y 357 para los ácidos dihidrobenzóicos . Todos los iones tuvieron tiempos de residencia de 25 ms. Los niveles de detección mínima de los ácidos 2,3 y 2, 5-dihdiroxibenzóico estuvieron en el rango de concentración de 200 femtomoles. Las mediciones en miocardio homogenizado fueron expresadas como pmoles/gramos de miocardio. Las mediciones en el efluente coronario fueron expresadas como picomoles/gramos de miocardio/minuto.

Protocolo - Después de un periodo de equilibrio de 10 minutos durante el cual se adquirieron los datos de referencia, la cánula aórtica fue sujetada y el marcapasos fue apagado. Después de un periodo isquémico de 30 minutos, se inició la reperfusión y se volvió a asumir la marcación.

Durante el periodo de reperfusión de 30 minutos, se registraron las presiones y el efluente coronario fue recolectado cada 5 minutos. Al final del periodo de reperfusión, los corazones fueron inmediatamente sujetados en estado congelado con tenazas de aluminio, enfriados en nitrógeno líquido y almacenados a una temperatura de -70°c para su análisis subsecuente. Los controles o referencias recibieron una solución salina normal y los corazones tratados recibieron una infusión de desferri-exoquelina en solución salina normal a una dosis de 0.1, 0.2, 0.4 µmoles. a la raíz aórtica durante los primeros 3 minutos de reperfusión.

Resultados - Seis corazones de control (sin tratar) , tres corazones" tratados con 0.1 µmoles de desferri-exoquelinas, tres corazones tratados con 0.2 µmoles de desferri-exoquelinas y tres corazones tratados con 0.4 µmoles de desferri-exoquelinas fueron estudiados. Los efectos sobre la. función - sistólica ventricular izquierda (LV) durante la recuperación de isquemia son mostrados en la figura 9. Los corazones de control mostraron sólo una mínima mejora en la presión ventricular izquierda tal como se presenta mediante su primera derivada positiva (LV dp/dt MAX) y presión desarrollada durante el periodo de recuperación de 30 minutos tal como se indica mediante toda la curva de presión en el periodo de 30 minutos. Al final del periodo de recuperación de 30 minutos ambas LV dp/dp MAX y LV desarrollaron una presión incrementada más de dos veces a todas las dosis de desferriexoquelina en comparación con el control o referencia. Había una relación directa de la dosificación a la respuesta con la concentración probada más alta que muestra por lo menos un incremento triplicado. Por consiguiente, se ha demostrado que los corazones tratados con 0.1, 0.2 y 0.4 µmoles de desferriexoquelina administrada a la raíz aórtica en un periodo de tres minutos demuestra una mejora sustancial en la función sistólica LV en comparación con las referencias y hay una relación de respuesta de dosis directa. La figura 10 muestra las mediciones de flujo del efluente coronario antes y después de la isquemia. El flujo coronario durante la reperfusión fue menor en los corazones de control que en los corazones tratados con desferri-exoquelina. Los flujos coronarios más altos en los corazones tratados durante la reperfusión reflejan una reducción en la lesión vascular coronaria. La figura 11 muestra mediciones de 2,3 DHBA y 2,5 DHBA en el tejido cardiaco después de 30 minutos de reperfusión. El 2,3 DHBA y el 2,5 DHBA son isómeros de salicilato del radical hidroxilo. Seis corazones sin tratar y 3 corazones a cada concentración de desferri-exoquelina (0.1, 0.2 y 0.4 µmoles) fueron estudiados. Los niveles de 2,3- y 2,5-DHBA fueron reducidos en los corazones tratados de una manera relacionada con la dosis, lo que indica que hay una reducción relacionada con la dosis en los metabolitos de radicales hidroxilo en los corazones tratados con desferri-exoquelinas . Esto es debido a la producción reducida de radical hidroxilo como resultado de la quelación de hierro mediante las desferri-exoquelinas. En uno de los corazones a los que se efectúa infusión de 0.2 µmoles de desferri-exoquelinas solubles en lípidos, el efluente venoso fue recolectado cada cinco minutos durante la reperfusión y se midió la cantidad de exoquelina presente. Se efectúa infusión a este corazón con exoquelinas sustancialmente libres de hierro, relativamente no polares, (altamente solubles en lípidos) - 0.042 µmoles de 770SM (designado alternativamente como 770 en la figura 3), 0.110 µmoles de 784SM (designado alternativamente como 784B en la figura 3) y 0.047 µmoles de 798TM (designado alternativamente como 798 en la figura 3) . La infusión de exoquelinas a la raíz de la aorta dió como resultado exoquelinas < 5% saturadas de hierro, (> 95% en la forma desferri) . Durante la reperfusión, se cuantificaron las cantidades de desferri-exoquelinas y la cantidad total de exoquelinas (las formas de desferri y ferri) en el efluente. La cantidad de ferri-exoquelina en el efluente fue determinada al extraer una muestra del efluente con cloroformo para separar las exoquelinas, evaporación de este extracto de cloroformo a sequedad, suspensión de las exoquelinas en solución reguladora del pH, someter al extracto a una cromatografía líquida a alta presión de fase inversa, medición del área bajo el máximo de absorbancia de 450 nm correspondiente a cada exoquelina y conversión de esta área a unidades de masa al utilizar una curva estándar. La cantidad total de exoquelina en el efluente fue determinada mediante la saturación de una alícuota del efluente con hierro para convertir todas las exoquelinas en la muestra a la forma ferri-exoquelina y luego al someter a análisis las exoquelinas mediante el procedimiento recién descrito. El efluente recolectado durante los primeros cinco minutos de reperfusión contenían 0.048 µmoles de exoquelina. No hubo ninguna exoquelina mensurable en las últimas muestras. Puesto que hubo un total de 0.2 µmoles de exoquelina que penetraron a la aorta, el porcentaje recuperado del efluente fue de 0.048 µmoles/0.2 µmoles x 100 = 23.8%. Esto indica que cantidades sustanciales (76.2%) de las exoquelinas inyectadas fueron retenidas en el corazón. Además, las exoquelinas medidas en el efluente estuvieron 25.9% saturadas de hierro. De aquí, aún durante un solo paso a través del corazón, las desferri-exoquelinas fueron capaces de adquirir cantidades sustanciales de hierro. El efecto combinado de las desferri-exoquelinas sobre la función sistólica ventricular izquierda y la producción de metabolitos de radicales hidroxilo, la cantidad reducida de exoquelinas en el efluente coronario y la evidencia de que una cantidad sustancial de las desferri-exoquelinas permeadas al corazón adquirieron hierro durante su paso a través del corazón confirman que cantidades fisiológicamente efectivas de desferri-exoquelinas son absorbidas por el corazón durante una sola breve inyección cerca del origen de las arterias coronarias. Tal como se ha demostrado en el ejemplo 1 (figura 7) anterior, las desferri-exoquelinas son capaces de impedir la proliferación del músculo liso vascular. Este hallazgo, en combinación con los resultados de los otros ejemplos demuestra que estos compuestos son útiles para impedir enfermedades relacionadas con la proliferación de células de músculo liso vascular, tales como aterosclerosis, restenosis vascular enseguida de la angioplastia coronaria o cirugía de desviación coronaria u otras formas de lesión vascular o enfermedades que incluyen hipertensión sistémica y varias formas de hipertensión pulmonar. Como se ha demostrado en el ejemplo 8 anterior, la forma desferri de una exoquelina impide la proliferación del músculo liso vascular, mientras que la forma ferri de esta exoquelina sólo la inhibe moderadamente y 2.5 veces tanto de un agente quelante de hierro no soluble en lípidos, deferoxamina no tiene ningún efecto sobre la proliferación del músculo liso vascular humano. Como se ha demostrado en el ejemplo 9 anterior, las desferri-exoquelinas son capaces de entrar al corazón lo suficientemente rápido para quelar el hierro e impedir los efectos oxidantes adversos cuando se proporciona como una sola inyección breve. Esta propiedad única de las desferri-exoquelinas indica que una sola dosis de exoquelina, cuando se administra a un vaso tratado después o durante la angioplastia o cirugía vascular, impide la lesión vascular. La deferoxamina, el único otro agente quelante de hierro sugerido por tener potencial para impedir la proliferación de células de músculo liso vascular requiere una administración intravenosa continua debido a que no es absorbido rápidamente por las células. Aun cuando se administra de manera continua, hay una duda considerable de si dosis lo suficientemente altas no tóxicas de este agente quelante de hierro soluble en lípidos, polar, (deferoxamina) se pueden obtener con una administración intravenosa para proteger los vasos contra las lesiones. En contraste, la administración local de las desferri-exoquelinas al vaso lesionado o enfermo obtiene respuestas fisiológicas rápidas y efectivas. Además, la demostración de la inhibición moderada de la proliferación el músculo liso vascular por la forma ferri de una exoquelina es evidencia de un beneficio de las exoquelinas que es aparte de su propiedad de quelación de hierro. En tanto que la estructura de las exoquelinas recuperadas de M. tuberculosis es mostrada en la figura 1, se sabe que otras micobacterias pueden generar exoquelinas y que estas exoquelinas pueden tener una estructura diferente e incluyen diferentes aminoácidos dependiendo de las micobacterias de las cuales son derivadas. Sin embargo, todas las exoquelinas se comportarán de una manera semejante y existen en series similares con miembros subsecuentes de las mismas que tienen una progresión similar de pesos moleculares. La efectividad de los diferentes miembros de la serie también dependerá de la polaridad relativa de las moléculas. Por consiguiente, la invención contempla exoquelinas generadas a partir de otras micobacterias en las que se incluyen, pero no están limitadas a M. tuberculosis, M. microti, M. bovis, M. africanum, M. kansasii, M. marinum, M. gastri, M. nonchromogenicum, M. terrae, M. triviale, M. malmoense, M. shimoidei, M. gordonac, M. asiticum, M. szulgai, M. si iae, M. scrofulaceum, M. avium, M. intracellulare, M. xenopi, M. ulcerans, M. haemophilum, M. farcinogenes, M. lepraemurium, M. paratuberculosis, M. chelonae subsp. chelonae, M. chelonae subsp. abscessus, M. fortuitum, M. chitae, M. senegalense, M. agri, M. smegmatis, M. phlei, M. thermoresistibile, M. aichiense, M. aurum, M. chubuense, M. duvalii, M. flavescens, M. gadium, M. givu , M. komossense, M. neoaurum, M. obuense, M. parfortuitum, M. rhodesiae, M. sphagni, M. tokaiense o M. vaccae.

También se contempla que las exoquelinas pueden ser modificadas para afectar sus propiedades de solubilidad, capacidad de quelación de metales o velocidades de absorción celular. En particular, con referencia a las estructuras de los compuestos que contienen metal y los compuestos libres de metal mostradas en las figuras 6A y 6B, se contemplan las siguientes sustituciones: Ri =(CH2)n H3 como una cadena lineal o ramificada; (CH2)nC000H, un ácido graso; (CH2)nCOOR, un éster de ácido graso en donde R es un grupo alquilo; (CH2)n ONH2; R2 = una sustitución en cualquiera de los 4 sitios de anillo abierto de grupos alquilo, sulfonamidas, hidroxilo, halógeno, acetilo, carbamilo, aminas, N02 o cualquier combinación de los mismos; R3 - el H (serina) o CH3 (treonina) pueden ser reemplazados por cadenas laterales encontradas en ß-hidroxiaminoácidos que son capaces de formar estructuras de oxazolina delicias. R4a y Rb = H, CH3 u otros grupos alquilo o alquilo sustituidos; &5a y Rdb = H, CH3 u otros grupos alquilo o alquilo sustituidos; X = O, NH, S, CH2; M = metales mono-, di o trivalentes tales como Pb, Al, Cd, Ni, Ag, Au, As, Mg, Mn, Zn, Cu, Ru, Nb, Zr, Ta, V, Ga, Pt, Cr, Sc, Y, Co, Ti, Na, K; * representa centros quirales los cuales pueden ser R ó S; Los varios grupos hidroxilo (OH) involucrados en la quelación del metal pueden ser reemplazados por varios grupos funcionales tales como H o un halógeno, para hacer variar la afinidad del compuesto por el metal quelato o para convertir la molécula a un antagonista de metal. En base a estos resultados se concluye que la administración de una cantidad efectiva de una desferriexoquelina a un organismo viviente tal como un animal o un humano mediante administración oral, intravenosa o directa al sitio en el cual se desea el efecto: a) protegerá los vasos sanguíneos en un organismo viviente de la restenosis debido a la proliferación de las células de músculo liso vascular enseguida de la angioplastia o cirugía vascular, b) impedirá o frenará el avance de la aterosclerosis en el paciente, c) impedirá o frenará el avance de la hipertensión sistémica del paciente, d) impedirá o frenará el avance de los daños por radiación a la vasculatura, e) impedirá o frenará el avance de la estenosis o cierre de injertos de desviación a las arterias coronarias u otros vasos sanguíneos enseguida de un procedimiento quirúrgico, f) impedirá o frenará el avance de varias formas de hipertensión pulmonar, en las que se incluyen pero no están limitadas a hipertensión hipóxica, neonatal y pulmonar primaria y g) impedirá o frenará el avance de la angiogénesis (formación de nuevos vasos) . Se ha llegado a estas conclusiones debido a que cada uno de estos eventos enumerados son el resultado del crecimiento incontrolado y no deseado y/o proliferación del crecimiento de tejidos inducidos por trauma o enfermedad, todos los cuales serán controlados mediante la administración de las desferri-exoquelinas. Todas las enfermedades a las que se hace referencia anteriormente, involucran la proliferación de músculo liso vascular como un mecanismo crítico. Por ejemplo, la restenosis seguida de la dilatación u otros procedimientos para eliminar obstrucciones en arterias, tales como angioplastia o ateroctomía, involucran la proliferación del músculo liso vascular en el sitio en donde el procedimiento fue llevado a cabo, para dar como resultado en que el vaso se obstruya otra vez. Este proceso es iniciado en las primeras pocas horas después de la angioplastia o aterectomía. Los ejemplos anteriores indican que la inyección intracoronaria de un bolo de desferri-exoquelina inmediatamente después de una angioplastia o procedimiento de aterectomía inhibirá la proliferación del músculo liso vascular durante este periodo crítico cuando el proceso de restenosis usualmente comenzaría y mediante esto impediría que se presente la restenosis.

Puesto que la restenosis se presenta en un alto porcentaje de procedimientos de angioplastia y la inyección intracoronaria es fácil de llevar a cabo inmediatamente después de la angioplastia o aterectomía ambos de los cuales requieren el uso de catéteres intracoronarios, la administración de desferri-exoquelinas ofrece una nueva forma de tratamiento para este problema muy común y serio. No se conoce ningún otro agente que se pueda inyectar como un bolo intravascular, que sea absorbido rápidamente por el tejido cardiovascular y que también impida el crecimiento del músculo liso vascular. Puesto que los catéteres intracoronarios pueden ser dejados en su lugar solamente por breves periodos, la rápida absorción de cualquier agente utilizado para el tratamiento es esencial. El uso de desferri-exoquelinas es un tratamiento nuevo para la restenosis. La solubilidad en lípidos de las desferri-exoquelinas las hace capaces de una manera única de una rápida absorción mediante el tejido, una propiedad no compartida por los agentes no solubles en lípidos tales como el agente quelante de hierro deferoxamina y también los hace atractivos de manera única para impedir la oxidación del colesterol de lipoproteína de baja densidad. Dos mecanismos esenciales para la formación de las placas ateroscieróticas, que forman las obstrucciones vasculares en enfermedad de arteria coronaria y otras condiciones vasculares son tomados del colesterol de lipoproteína de baja densidad oxidado en la pared del vaso y proliferación del músculo liso vascular. Puesto que las desferri-exoquelinas son antioxidantes solubles en lípidos que son capaces de impedir la oxidación de colesterol de lipoproteína de baja densidad, también como impedir la proliferación del músculo liso. Ningún otro agente y en particular agentes quelantes de hierro no solubles en lípidos, tales como deferoxamina, tiene tal combinación de propiedades. Por consiguiente, las desferri-exoquelinas son un tratamiento nuevo para la prevención de la aterosclerosis. La administración crónica de las desferri-exoquelinas mediante rutas orales o transcutáneas se propone como un tratamiento potencial para impedir la formación de placa aterosclerótica. Similarmente, la administración crónica mediante rutas orales, transcutáneas o inhaladas podría impedir la proliferación del músculo liso que es un mecanismo integral de la hipertensión sistémica o pulmonar o lesión vascular inducida por irradiación. Ningún otro agente es apropiado para la administración crónica mediante tales rutas y todavía es capaz de impedir la proliferación del músculo liso vascular esencial para estos procesos. Por ejemplo, la diferoxamina, un agente quelante de hierro no soluble en lípidos debe ser administrado intravenosamente mediante infusiones prolongadas y no es apropiado o efectivo. Además, no ha habido ninguna evidencia de la toxicidad de las desferri-exoquelinas a las concentraciones anti-prolíferas u antioxidantes efectivas de estos agentes en las células del músculo liso vascular, del miocardio o endotelial vascular. Aunque la presente invención se ha descrito en considerable detalle con referencia a ciertas versiones preferidas y usos de la misma, otras versiones y usos son posibles. Por ejemplo, variaciones de las exoquelinas descritas incluyen isómeros ópticos y compuestos modificados como se describen anteriormente pueden tener propiedades benéficas similares o mejoradas. Además, se contempla que las exoquelinas generadas mediante otras bacterias también serían útiles para los procedimientos descritos. BCG de M. bovis tiene la mismas exoquelinas como M. tuberculosis. M. avium tiene exoquelinas muy similares. Sin embargo, la utilidad descrita en la presente no está limitada a estas exoquelinas enlistadas. Además, se cree que la utilidad de las exoquelinas incluye la disminución de la formación y crecimiento de nuevos vasos sanguíneos en el cuerpo y órganos tales como los ojos. Por consiguiente, el espíritu y alcance de las reivindicaciones adjuntas no deben estar limitados a la descripción de las versiones preferidas contenidas en la presente.

Claims (24)

1. Reivindicaciones 1. Un método para proteger los vasos sanguíneos en un organismo viviente de la restenosis debida a la proliferación de células de músculo liso vascular enseguida de la angioplastia o cirugía vascular, caracterizado porque comprende la administración al organismo viviente de una composición que contiene una cantidad efectiva de una desferri-exoquelina.
2. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la administración de la composición que contiene una cantidad efectiva de una desferri-exoquelina es mediante administración intraarterial directa.
3. 3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la administración de la composición que contiene una cantidad efectiva de una desferri-exoquelina es mediante administración intravenosa sistémica.
4. 4. Un método para impedir o retardar el avance de la aterosclerosis en un organismo viviente, caracterizado porque comprende la administración de una composición que contiene una cantidad efectiva de una desferri-exoquelina al organismo viviente.
5. 5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la cantidad efectiva de una desferriexoquelina es administrada oralmente.
6. 6. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la cantidad efectiva de una desferriexoquelina es administrada intravenosamente.
7. 7. Un método para impedir o retardar el avance de la hipertensión sistémica en un organismo viviente, caracterizado porque comprende la administración de una composición que contiene una cantidad efectiva de una desferri-exoquelina al organismo viviente.
8. 8. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque la cantidad efectiva de una desferriexoquelina es administrada oralmente.
9. 9. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque la cantidad efectiva de una desferriexoquelina es administrada intravenosamente.
10. 10. Un método para impedir o retardar el avance de los daños por radiación a la vasculatura de un organismo viviente, caracterizado porque comprende la administración de una composición que contiene una cantidad efectiva de una desferri-exoquelina al organismo viviente.
11. 11. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la cantidad efectiva de una desferriexoquelina es administrada oralmente.
12. 12. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la cantidad efectiva de una desferri-exoquelina es administrada intravenosamente.
13. 13. Un método para impedir o retardar el avance de la estenosis o cierre de injertos de desviación a las arterias coronarias u otros vasos sanguíneos enseguida de un procedimiento quirúrgico en un organismo viviente, caracterizado porque comprende la administración al organismo viviente de una composición que contiene una cantidad efectiva de una desferri-exoquelina.
14. 14. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque la cantidad efectiva de una desferri-exoquelina es administrada oralmente. .
15. 15. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque la cantidad efectiva de una desferriexoquelina es administrada intravenosamente.
16. 16. Un método para impedir o retardar el avance de la hipertensión pulmonar en un organismo viviente, caracterizado porque comprende la administración de una composición que contiene una cantidad efectiva de una desferri-exoquelina.
17. 17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la cantidad efectiva de una desferriexoquelina es administrada oralmente.
18. 18. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la cantidad efectiva de una desferriexoquelina es administrada intravenosamente.
19. 19. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la cantidad efectiva de una desferriexoquelina es inhalada por el organismo.
20. 20. Un método para impedir o retardar el avance de la hipertensión hipóxica, neonatal y pulmonar primaria en un organismo viviente, caracterizado porque comprende la administración al organismo viviente de una composición que contiene una cantidad efectiva de una desferri-exoquelina.
21. 21. Un método para impedir o retardar el crecimiento de proliferación de células del músculo liso vascular en un organismo viviente, caracterizado porque comprende la administración al organismo viviente de una composición que contiene una cantidad efectiva de una desferri-exoquelina, derivada de Mycobacterium tuberculosis.
22. 22. Un método para impedir o retardar la formación de nuevos vasos en un organismo viviente, caracterizado porque comprende la administración al organismo viviente de una composición que contiene una cantidad efectiva de una desferri-exoquelina.
23. 23. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque la desferri-exoquelina es administrada oral o intravenosamente.
24. 24. El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque la desferri-exoquelina es administrada intraocularmente e impide la formación de nuevos vasos sanguíneos en el ojo.