MXPA99001875A - Metodos para incrementar la sensibilidad de un individuo a la proteina ob mediante la regulacion del receptor de la proteina ob - Google Patents

Abstract

Se describe el uso y método para incrementar la sensiblidad y funcionalidad del receptor de la prtoteína OB:

Description

MÉTODOS PARA INCREMENTAR LA SENSIBILIDAD DE UN "INDIVIDUO A LA PROTEINA OB MEDIANTE LA REGULACIÓN DEL RECEPTOR DE LA PROTEINA OB.

CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a métodos de reducir cantidades de composiciones de proteina OB administrada para un efecto cosmético o terapéutico deseado a través del uso de agentes los cuales incrementan la sensitividad a la proteina OB o la afinidad o disponibilidad del receptor funcional de la proteina OB.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN A pesar de que las bases moleculares para la obesidad son ampliamente desconocidas, la identificación del "gen OB" y la proteina que los codifica ("proteina OB" o "leptina") ha puesto alguna luz en los mecanismos que el cuerpo usa para regular el depósito de la grasa corporal. Ver, Publicación PCT, EO 96/05309 (12/22/96), Friedman et al.; Zhang et al., Nature 372: 425-432 (1994); ver también, the Correction at Nature 374: 479 (1995) . La proteina OB está activa in vivo en ya sea ob/ob mutante de ratón (ratón REF.: 29420 obeso debido al defecto en la producción del producto del gen OB) asi también como en uno normal, o en un ratón de tipo silvestre. La actividad biológica se manifiesta asi mismo en, entre otras cosas, pérdida de peso. Ver en general, Barinaga, "Obese" Protein Slims Mice, Science 269: 475-476 (1995) . La proteina OB, derivados y empleos de las mismas como moduladoras para el control del peso y adiposidad de animales, incluyendo mamíferos y humanos, se ha descrito en gran detalle en la Publicación de PCT WO 96/05309 (12/22/96), incorporada aqui por referencia, incluyendo las figuras.

Los otros efectos biológicos de la proteina OB no están bien caracterizados. Se conoce por ejemplo, que en el ob/ob mutante de ratón, la administración de la proteina OB resulta en una disminución en los niveles de la insulina del suero,, y niveles de glucosa del suero. Se conoce también que la administración de la proteina OB resulta en una disminución en la grasa corporal. Esto se observa en ambos, ob/ob de ratón mutante, así también como en un ratón normal no obeso. Pelleymounter et al., Science 269: 540-543 (1995); Halaas et al., Science 269: 543-546 (1995). Ver también, Ca pfield et al., Sciene 269: 546-549 (1995) (administración periférica y central de las dosis en microgramos de' la cantidad consumida de alimento reducido de la proteína OB y peso corporal de ob/ob y ratón obeso bajo dieta pero no en db/ratón obeso db.) En ninguno de estos ratones se han observados toxicidades, aún a dosis elevadas. Hay otros agentes los cuales pueden jugar un papel en la regulación del metabolismo de la insulina. Las tiazolidinodionas son una clase de agentes antihiperglicémicos con un mecanismo de acción asi aún desconocido. Ver Wilson et al., J. Med. Chem., 39: 665-668 (1996); Kallen et al., P.N.A.S., 93: 5793-5796 (1996); Shoda et al., Chem. Pharm. Bull., 43: 2168-2172 (1995); Swanson et al., Drug Dev. Res., 35: 69-82 (1995); Kletzien et al., Mol. Pharmacol., 42: 558-62 (1992). Es hipotético que esta clase de medicamentos actúan para reducir la hiperglicemia por 1) el incremento de la sensibilidad a la insulina o 2) por la activación del factor de transcripción, del receptor de la peroxisoma proliferador activado (PPAR) (gamma) . El PPAR está a pesar de todo jugando un papel en la conversión de fibroblastos primarios a adipocitos. Ver Wilson et al., J. Med. Chem., 39: 665-668 (1996); Kallen et al., P.N.A.S., 93: 5793-5796 (1996); Swanson et al., Drug Dev. Res., 35: 69-82 (1995) . Recientemente se ha reportado que una de las tiazolidnodionas es viable para reducir significantemente el RNA de la leptina adiposa y los niveles de leptina del suero en ratas obesas y ratones, sin efecto substancial en el consumo de alimentos, con elevaciones menores en el peso corporal." Zhang et al., J. Biol. Chem., 271: 9455-9459 (1996) . Otros reportes indican que el BRL496553, otro tipo de tiazolidinodionas, también reducen el mRNA leptina en adipocitos in vitro. Kallen et al., P.N.A.S., 93: 5793-5796 (1996) . Además, las tiazolidinodionas se piensa, disminuyen la proteína OB endógena. A pesar de que se piensa que las tiadozilidonionas incrementan la sensibilidad a la insulina, no hay actualmente agentes conocidos los cuales incrementan en un individuo la sensibilidad a la proteína OB (o leptina) . Tal sensibilidad incrementada podrá ser ventajosa a los consumidores de leptina, como la sensibilidad incrementada puede contribuir a dosis bajas requeridas o a dosificaciones menos frecuentes.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención está basada en la hipótesis de que las composiciones tiozilidinodionas se proporcionan para incrementar la sensibilidad a la proteína OB. A pesar de no se desea unir con la teoría, es posible que las composiciones de tiazolidinodionas "regulandoras" del receptor de la proteina OB disponible para la señal de transducción, es decir, incrementan el número del .receptor OB para este ligando (proteina OB) . Este incremento en la disponibilidad o afinidad del receptor funcional de la proteina OB se suministra para la transducción de la señal incrementada de la proteina OB endógena y/o exógena. Sorprendentemente, es importantemente, este medio se proporciona para reducir la cantidad y/o frecuencia de dosificaciones de la proteína OB exógena para propósitos terapéuticos y/o cosméticos. Por lo tanto, en un aspecto, la presente invención proporciona métodos de modulación del peso y/o deposición de la grasa en un individuo por la administración de una o más composiciones en la cual la función incrementa la disponibilidad o afinidad de los receptores funcionales de la proteina OB en un individuo, tal como composiciones de tiazolidinodionas . En otro aspecto, la presente invención se proporciona para métodos de la modulación del peso y/o deposición de la grasa en un individuo por la administración de una o más composiciones en la cual la función incrementa la disponibilidad de los receptores funcionales de la proteina OB, tal como una composición de tiazolidinodiona, en un individuo, en combinación como una administración de una proteína OB. Aún en otro aspecto, la presente invención se proporciona para reducir la cantidad y/o la frecuencia de las dosificaciones de una proteina OB exógena por la administración de una composición la que funciona para incrementar la disponibilidad de los receptores funcionales de la 'proteina OB, tal como una composición de tiazolidinodiona . Aún en otros aspectos, la presente invención se proporciona para métodos para el tratamiento de las co-morbiditas asociadas con exceso de grasa, tal como diabetes, dys o hiperlipidemias, carentes de fertilidad, y también potencialmente un incremento en la sensibilidad a la insulina y/o e incremento en la masa de tejido delgado. También se proporcionan composiciones relacionadas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Figura 1: OB aproximado al recombinante murina (doble hebra) DNA (SEC ID NOS: 1 y 2) y secuencia de aminoácidos (SEC ID NO: 3). Figura 2: OB análogo aproximado al recombinante humano (doble hebra) DNA (SEC ID NOS: 4 y 5) y secuencia de aminoácidos (SEC ID NO: 6) .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Composiciones Las composiciones que tienen la habilidad para incrementar la sensibilidad a la proteina OB o la disponibilidad del receptor funcional de la proteína OB en un individuo puede seleccionarse de entre varias composiciones tiazolidinodionas, tales como: 2, 4-tiazolidinodionas; tiazolidinodionas opcionalmente substituidas; 5- [4- [2- (5-metil-2-fenil-4-oxazolil) -2-hidroxietoxi] enzil] -2, -tiazolidinodiona (AD-5070) ; clofibrato; ciglitazona; englitazona; pioglitazona; BRL 49653; troglitazona; M16209; oxazolidinodionas; así también como sus derivados, análogos, tautómeros, enantiómeros, diastereómeros, epimeros, sales, solvatos, esteres, promedicamentos o pro-drogas y metabolitos de tiazolidinodionas o los compuestos de arriba. La proteina OB puede seleccionarse a partir del recombinante murina expuesto abajo (SEC. ID No. 3 de la Figura 1), o la proteína recombinante humana como se expone en Zhang et al, Nature, supra, en la página 428) . Uno puede usal también la proteina OB humana recombinante análoga como se expone en la SEC ID NO. 6 de la figura 2, la cual contienen 1) una arginina en lugar de la lisina en la posición 35 y 2) una leucina en lugar de la isoleucina en la posición 74. (Una abreviación acortada para este análogo es el recombinante humano R->K35, L->I74) . Las secuencias de aminoácidos para el recombinante humano análogo y las proteínas del recombinante murina como se expone abajo con un residuo metionilo en la posición -1, sin embargo, como con cualquiera de las proteínas OB y análogos presentes, el residuo metionilo podrá estar ausente. La proteina murina es substancialmente homologa a la proteina humana, particularmente como una proteina madura, y, además, particularmente en el N-término. Uno puede preparar un análogo de la proteína humana recopib-únan e por la alteración (tal como residuos aminoácidos substituyentes) , en la secuencia recombinante humana, de los aminoácidos los cuales difieren de la secuencia murina. Debido a que la proteina recombinante humana tiene actividad biológica en el ratón, tal análogo podria similarmente ser activo en humanos. Por ejemplo, usando una proteina humana que tiene una lisina en el residuo 35 y una isoleucina en el residuo 74 de conformidad con la numeración de la SEC ID NO. 6, en donde el primer aminoácido es valina, y el aminoácido en la posición 146 es cisteina, uno puede substituir con otro aminoácido uno o más de los aminoácidos en las posiciones 32, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 89, 97, 100, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142 y 145. Uno puede seleccionar el aminoácido en la posición correspondiente de la proteína murina, (SEC ID NO. 3), u otro aminoácido. Uno puede preparar además "en consenso general" moléculas basadas en la secuencia de la proteina OB de la rata. Murakami et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 209: 944-952 (1995) aquí incorporado por referencia. La proteina OB de la rata difiere de la proteína OB humana en las siguientes posiciones (usando la numeración de la SEC ID NO. 6) : 4, 32, 33, 35, 50, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 101, 102, 105, 106, 107, 108, 11, 118, 136, 138 y 145. Uno puede substituir con otro "aminoácido uno o más de los aminoácidos a estas posiciones diferentes. Las posiciones en letra negrita son aquellas que en las cuales las proteína OB murina así también como la proteína OB de rata son diferentes de la proteína humana OB, y además, son particularmente adecuadas para la alteración. A uno o más de estas posiciones, uno puede substituir un aminoácido de la proteina OB de rata correspondiente, u otro aminoácido. Las posiciones a partir de ya sea proteína OB murina y de rata, las cuales difieren de la proteína OB humana madura son: 4, 32, 33, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142, y 145. Una proteína OB humana de conformidad con la SEC ID NO. 6 (con lisina en la posición 35 e isoleucina a la posición 74) que tiene uno o más de los aminoácidos anteriores suprimidos o reemplazados con otro aminoácido tal como el aminoácido encontrado en la secuencia correspondiente murina o rata pueden ser efectivos también. Además, los aminoácidos encontrados en rhesus de la proteina OB de mono, el cual difiere de la proteína OB humana madura son (con identidades notadas en paréntesis en una carta de abreviación de aminoácidos): 8 (S), 35 (C), 48(V), 53(Q), 60(1), 66(1), 67 (N) , 68 (L) , 89(L), 100 (L) , 108 (E), 112 (D), y 118 (L) . Dado que la proteína OB humana recombinante está activa en los cinomólogos de monos, una proteina OB humana de conformidad con la SEC ID NO. 6 (con la lisina en la posición 35 e isoleucina en fa posición 74) que tienen uno o más de los rhesus de mono diferentes de los aminoácidos reemplazados con otro aminoácido, tal como los aminoácidos en paréntesis, pueden ser efectivos. Deberá notarse que ciertos rhesus diferentes de los aminoácidos también son esos encontrados en las especies murina anteriores (posiciones 35, 68, 89, 100 y 112) . Además, uno puede preparar un molécula de consenso general murina/rhesus/humana que tiene (usando la numeración de SEC ID NO.6 que tiene una lisina en la posición 35 y una isoleucina en la posición 74) que tiene uno o más de los aminoácidos en las posiciones reemplazadas por otro aminoácido: 4, 8, 32, 33, 35, 48, 50, 53, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 11, 112, 118, 136, 138, 142, y 145. Otros análogos pueden prepararse por la eliminación de una parte de la secuencia de aminoácidos de la proteína.

Por ejemplo, la proteína madura carece de un secuencia líder (-22 a -1) . Uno puede preparar las siguientes formas truncadas de moléculas de proteína OB humana (usando la numeración de la SEC ID NO. 6) : (a) aminoácidos 98-146 (b) aminoácidos 1-32 (c) aminoácidos 40-116 "(d) aminoácidos 1-99 y (conectados a) 112-146. (e) aminoácidos 1-99 y (conectados a) 112-146 que tienen uno o más de los aminoácidos 100-111 colocados entre los aminoácidos 99 y 112. Además, las formas truncadas pueden también tener alterados uno o más de los aminoácidos los cuales son divergentes o diferentes (en el rhesus, rata o proteina OB murina) de la proteína OB. Además, cualquiera de las alteraciones pueden ser en la forma de aminoácidos alterados, tales como peptidomiméticos o D-aminoácidos.

Derivados La presente proteína (aquí el término "proteína" se usa para incluir "péptidos" y análogos OB, tal como aquellos recitados infra, a menos que se indique de otro modo) pueden también estar derivados por la unión de una o más porciones químicas a la porción de la proteina. Los derivados químicamente modificados pueden ser además formulados por administración intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea, intravenosa, oral, nasal, pulmonar, tópica u otras vías de administración. La modificación química de las proteínas biológicamente activas se han encontrado por proporcionar ventajas adicionales bajo ciertas circunstancias, tales como el incremento de la estabilidad y el tiempo de circulación de la proteína terapéutica y la disminución de la inmunogenicidad. Ver. Patente Norteamericana No. 4, 179,337, Davis et al., p'ublicada el 18 de diciembre de 1979. Para una revisión, ver Abuchowski et al., en Enzimas como medicamentos. (J.S. Holcerberg y J. Roberts, eds. Pp. 367-383 (1981)). Un articulo de revisión que describe la modificación de la proteina y las propiedades de fusiones en Francis, Focus en Factores de Crecimiento 3: 4-10 (Mayo 1992) (publicado por Mediscript, Mountview Court, Fiern Barnet Lañe, Londres N20, OLD, UK) . Las porciones químicas para la derivación pueden seleccionarse de entre varios polímeros solubles en agua. El polímero seleccionado deberá ser soluble en agua de manera que la proteína a la cual está unido no se precipita en un medio ambiente acuoso, tal como un medio ambiente fisiológico. Preferiblemente, para uso terapéutico de la preparación del producto final, el polímero será farmacéuticamente aceptable. Un experto en la técnica será capaz de seleccionar el polímero deseado basado en tales consideraciones como si el conjugado de polímero/proteína se usara terapéuticamente, y así, la dosificación deseada, tiempo de circulación, resistencia a la proteólisis, y otras consideraciones. Para las proteínas presentes y los péptidos, la efectividad de la derivación puede acertarse por la administración del derivado en la forma deseada (es decir., por bomba osmótica, o, más preferiblemente, por inyección o infusión, "o, además, formulados por ejemplo, para liberación oral, pulmonar o nasal) , y observando los efectos biológicos como se describe aquí. El polímero soluble en agua puede seleccionarse del grupo que consiste de, por ejemplo, polietilenglicol, copolímeros de etilenglicol/propilenglicol, carboximetilcelulosa, dextran, alcohol de polivinilo, pirrolidona de polivinilo, poli-1, 3-dioxolano, poli-1,3,6-trioxano, etileno/copolímero anhídrido maléico, poliaminoácidos (ya sea homopolímeros o copolímeros aleatorios o no aleatorios), y dextran o poli (pirrolidona de n-vinilo) polietilenglicol, propilenglicol, homopolimeros, copolímeros de óxido de polipropileno/óxido de etileno, polioles polioxietilados, poliestirenomaleato y alcohol de polivinilo. El propionaldehido de polietilenglicol puede tener ventajas en su elaboración debido a su estabilidad en agua . La fusión de proteínas puede prepararse por la unión de los poliaminoácidos a la porción de la proteína OB (o análogo) . Por ejemplo, el poliaminoácido puede ser una proteína portadora la cual sirve para incrementar la circulación de la media vida de la proteína. Para el presente propósito terapéutico o cosmético, tal poliaminoácido deberá ser aquel el cual no ha creado una respuesta antigénica neutralizantes, u otra respuesta adversa. Tal poliaminoácido puede seleccionarse a partir del grupo que consiste de albúmina de suero (tal como albúmina de suero humano) , un anticuerpo o una porción del mismo (tal como una anticuerpo de región constante, algunas veces llamado "Fc") u otros poliaminoácidos. Como se indica abajo, el sitio de unión del poliaminoácido puede estar en el N-término de la porción de la proteína OB, el C-término, u otro lugar, y también puede estar conectado por una porción "enlazadora" química a la proteína OB. El polímero puede ser de cualquier peso molecular, y puede ser ramificado o no ramificado. Para el polietilenglicol, el peso molecular el peso molecular preferido está entre aproximadamente 2 kDa y aproximadamente 100 kDa (el término "aproximadamente" indica que en las preparaciones de polietilenglicol, algunas moléculas pesarán más, algunas menos, y que el peso molecular establecido) para facilidad en la manipulación y elaboración. Pueden usarse otros tamaños, dependiendo del perfile terapéutico deseado (por ejemplo, la duración de la liberación sostenida deseada, los efectos, de cualquiera en la actividad biológica, la facilidad en la manipulación, el grado o carencia de antigenicidad y otros efectos conocidos del polietilenglicol a una proteina terapéutica o análogo) . El número de moléculas de polímeros así unidas puede variar. Un experto en la técnica será capaz de averiguar el efecto en la función. Se puede mono-derivar, o se puede proporcionar para un di-, tri, tetra, o alguna"combinación de derivación, con la misma o diferentes porciones químicas (o por ejemplo, polímeros, tales como pesos diferentes de polietilen glicoles) . La porción de las moléculas de polímeros a las moléculas de proteína (o péptidos) variarán, como serán sus concentraciones en la mezcla de reacción. En general, la relación óptima (en términos de eficiencia de reacción en que no hay exceso de proteína o polímero sin reaccionar) se determinará por los factores tal como el grado deseado de derivación (por ejemplo, mono, di-m tri, etc.), el peso molecular del polímero seleccionado, si el polímero es ramificado o no ramificado, y las condiciones de reacción. Las porciones químicas deberán unirse a la proteína con la consideración de los efectos en un dominio antigénico o funcional de la proteina. Hay un número de métodos adjuntos disponibles a aquellos expertos en la técnica. Por ejemplo, EP 0 401 384 aqui incorporado por referencia (acoplamiento PEG a G-CSF), ver también Malik et al., Exp. Hematol. 20: 1028-1035 (1992) (reportan pegilación de GM-CSF usando cloruro de tresilo) : Por ejemplo, el polietilenglicol puede ser un enlace covalentemente a través de residuos de aminoácidos vía un grupo reactivo, tal como, un grupo carboxilo o libre de aminoácido. Los grupos reactivos son aquellos a los cuales una molécula de polietilenglicol puede enlazarse.' El residuo aminoácido que tiene un grupo libre de aminoácidos puede incluir residuos de lisina" y el residuo amino N-terminal. Aquellos que tienen un grupo carboxilo libre pueden incluir residuos de ácido aspártico, _ residuos de ácido glutámico, y el residuo aminoácido C-terminal. Los grupos sulfhidrilos pueden también ser usados como un grupo reactivo para unir la molécula (s) de polietilenglicol. Preferidos para propósitos terapéuticos es la unión a un grupo amino, tal como la unión al N-término o grupo lisina. La unión a residuos importante para el receptor enlazante deberá evitarse si se desea el receptor enlazante. Se puede desear específicamente la proteína N-terminalmente químicamente modificada. Usando el polietilenglicol como una ilustración de las presentes composiciones, se pueden seleccionar de una variedad de moléculas de polietilenglicol (por peso molecular, ramificaciones, etc.), la proporción de las moléculas de polietilenglicol a las moléculas de la proteína en la mezcla de reacción, el tipo de reacción de pegilación a ser realizada, y el método de obtener la proteina N-terminalmente pegilada seleccionada. El método de obtener la preparación N-terminalmente pegilada (es decir., separando esta porción de otras porciones onopegiladas si es necesario) puede ser por purificación del material N-terminalmente pegilado a partir de una población de moléculas de proteínas pegiladas. La modificación química N-terminal selectiva puede estar acompañada por la alquilación reductiva la cual "explica la reactividad diferencial o tipos diferentes de grupos amino primarios (Usinas contra el N-terminal) disponibles para la derivación en una proteína particular. Bajo las condiciones de reacción apropiadas, se alcanza la derivación substancialmente selectiva de la proteína a el N-término con un grupo carbonilo que contiene el polímero. Por ejemplo, uno puede pegilar N-terminalmente selectivamente la proteina para la realización de la reacción a un pH el cual permite tomar una ventaja de las diferencias de pKa entre el grupo e-amino del residuo lisina y del grupo a-amino del residuo N-terminal de la proteína. Para tal derivación selectiva, se controla la unión de un polímero soluble en agua a una proteína: la conjugación con el polímero toma lugar predominantemente en el N-término de la proteína y no tiene modificación significante de los otros grupos reactivos, tal como ocurren los grupos amino de cadena lateral lisina . Usando la alquilación reductiva, el polímero soluble en agua puede ser del tipo descrito arriba, y deberá tener un solo aldehido reactivo para acoplar a la proteina. El propionaldehído de polietilenglicol que contiene un solo aldehido reactivo puede ser usado. Un derivado N-terminalmente monopegilado es preferido por una facilidad en la producción de un terapéutico. La pegilación N-terminal asegura un producto - lí homogéneo como la caracterización del producto es relativo simplificado a di-, tri-, u otros productos multipegilados . El uso de 1 proceso de alquilación reductiva anterior para la preparación de un producto N-terminal se prefiere por una facilidad en la elaboración comercial.

Complejos La proteína OB, análogo o derivado puede ser administrado como complejo a una composición enlazante. Tal composición enlazante puede tener el efecto de prolongación al tiempo de circulación de la proteína OB, análogo o derivado. Tal composición puede ser una proteína (o sinónimamente, péptido) : Un ejemplo de una proteína enlazante es el receptor de la proteína OB o una porción del mismo, tal como una porción soluble del mismo. Otras proteínas enlazantes pueden ser verificadas por la examinación de la proteina OB en suero, o por la protección empíricamente por la presencia del enlazante, tal enlazante típicamente no interferirá con la capacidad de la proteina OB o análogo o derivado para enlazar al receptor de la proteína OB endógeno y/o en el efecto de la señal de transducción.

Composiciones farmacéuticas. En aún otro aspecto de la presente invención se proporcionan métodos de usar las composiciones farmacéuticas de las proteínas y derivados. Tales ~ composiciones farmacéuticas pueden ser por administración por inyección, o por administración oral, pulmonar, nasal, transdermal u otras formas de administración. En general comprendidas por la invención son las composiciones farmacéuticas que comprenden cantidades efectivas de la proteina o productos derivados de la invención junto con diluyentes farmacéuticamente aceptables, conservadores, solubilizadores, emulsificadores, adyuvantes y/o portadores. Tales composiciones incluyen diluyentes de varios amortiguadores contenidos (por ejemplo, Tris-HCl, acetato, fosfato) , pH y fuerza iónica; aditivos tales como detergentes y agentes solubilizantes (por ejemplo, Tween 80, Polisorbato 80), anti-oxidantes (por ejemplo, ácido ascórbico, metabisulfito de sodio) , conservadores (por ejemplo, Thimersol, alcohol de bencilo) y substancias abultantes (por ejemplo, lactosa, mannitol) ; incorporación del material en preparaciones particulada de compuestos poliméricos tal como ácido poliláctico, ácido poliglicólico, etc. o en liposomas. El ácido hilaurónico puede ser usado también, y este puede tener el efecto de promoción de la duración mantenida en la circulación. Tales composiciones pueden influenciar el estado físico, estabilidad, relación de la liberación in vivo, y relación de la habilitación in vivo de las presentes proteínas y derivados. Ver, por ejemplo., ' Remington' s Pharmaceutical Sciences, 18 Ed. (1990, Mack Publishing Co., Easton, PA 18042) páginas" 1435-1712 los cuales están aqui incorporados por referencia. Las composiciones pueden ser preparadas en forma líquida o pueden ser en polvos secos, tal como una forma liofilizada. Las formulaciones de liberación sostenida implantadas están también contempladas, como son las formulaciones transdermales . Las formas de dosificación sólidas orales son las contempladas para uso aquí, las cuales están descritas en general en Remington' s Pharmaceutical Sciences, 18 Ed. 1990 (Mack Publishing Co. Easton PA 18042) en el Capitulo 89, el cual está incorporado aquí por referencia. Las formas de dosificación sólidas incluyen tabletas, cápsulas, pildoras, pastillas o grageas. También, la encapsulación liposomal o proteinoide puede ser usada para formular las composiciones presentes (como, por ejemplo, microesferas proteinoides reportadas en la Patente Norteamericana No, 4,925,673): La encapsulación liposomal puede ser usada y las liposomas pueden ser derivadas con varios polímeros (por ejemplo, La patente Norteamericana No. 5,013,556). Una descripción de las formas de dosificación posibles para la terapéutica están dadas por Marshall, K. In: Modern Pharmaceutics Editado por G.S. Banker y C.T. Rhodes Chapter 10, 1979, aquí incorporados por referencia. En general, la formulación incluirá la proteina "(o análogo o derivado) , y los ingredientes inertes los cuales permiten la protección contra" e? ambiente estomacal, y la liberación del material biológicamente activo en el intestino. También contempladas específicamente son las formas de dosificación oral de las proteínas derivadas arriba. La proteina puede ser modificada químicamente de manera que la liberación oral de derivado es eficaz. En general, la modificación química contemplada es la unión de al menos una porción a la misma molécula de proteína (o péptido) , en donde dicha porción permite (a) la inhibición de la proteólisis; y (b) actualización en la corriente sanguínea a partir del estómago o intestino. También es deseado el incremento en la estabilidad total de la proteína e incremento en el tiempo de circulación en el cuerpo. Ejemplos de tales porciones incluyen: polietilenglicol, copolímeros de etilenglicol y propilenglicol, carboximetilcelulosa, dextran, alcohol de polivinilo, pirrolidona de polivinilo y poliprolina. Abuchowski y Davis, Aductos de polímeros de enzima solubles. En: "Enzymes as Drugs", Hocenberg y Roberts, eds., Wiley-Interscience, New York, NY, (1981), pp 367-383; Newmark. Otros polímeros que podrán ser usados son el poli-1,3-dioxolano y el poli-1, 3, 6-tioxocano. Para la proteína (s) o derivado (s) el sitio de liberación puede ser el estómago, el intestino delgado (el duodeno, "el yeyuno o el Íleon) o el intestino grueso. Un experto en la técnica tiene formulaciones disponibles las cuales no se disuelven en el estómago, aún liberando el material en el duodeno o en otra parte en el intestino. Preferiblemente, la liberación evitará los efectos dañinos del medio ambiente estomacal, ya sea por la protección del material biológicamente activo más allá del medio ambiente estomacal, tal como en el intestino. Para asegurar la resistencia gástrica total es esencial una cubierta impermeable en al menos de un pH 5.0. Ejemplos de los ingredientes inertes más comunes que son usados como cubiertas entéricas son el trimelitato de acetato de celulosa (CAP) ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMCP) , HPMCP 50, HPMCP 55, ftalato de acetato de polivinilo (PVAP) Eudragit L30D, Acuateric, ftalato de acetato de celulosa CAP, Eudragit L, Eudragit S, y Shellac estas cubiertas pueden ser usadas como películas mezcladas. Una cubierta o mezcla de cubiertas pueden también ser usadas en tabletas, las cuales no están propuestas para protección contra el estómago. Estas pueden incluir cubiertas de azúcar, o cubiertas las cuales hacen a la tableta fácil de ingerir. Las cápsulas pueden consistir de una capa dura (tal como gelatina) para la liberación de terapéuticos secos es decir polvo; para formar líquidas, pueden ser usada una capa de gelatina suave. La capa del material de las cápsulas puede ser almidón espeso u otro papel comestible. Para pildoras, grageas, tabletas moldeadas o tabletas trituradas" pueden ser usadas las técnicas de masa húmedas. El terapéutico puede ser incluido en la_ formulación como multiparticulas finas en la fórmula de granulos o pelotillas de tamaño de partícula aproximado de 1 mm. La formulación del material para la administración en cápsula puede también ser como un polvo, obturadores ligeramente comprimidos o aún como tabletas. El terapéutico deberá prepararse por compresión. Los colorantes y agentes saborizantes pueden ser incluidos todos. Por ejemplo, la proteina o derivado puede formularse (tal como por encapsulación de liposomas o microesferas) y después estar contenidas además dentro de un producto comestible, tal como una bebida refrigerada que contiene colorantes y agentes saborizantes. Se puede diluir o incrementar el volumen del terapéutico con un material inerte. Estos diluyentes pueden incluir carbohidratos, especialmente manitol, alfa-lactosa, lactosa anhídrida, celulosa, sucrosa, dextranes modificados y almidón. Pueden ser usarse también como rellenadores ciertas sales inorgánicas que incluyen trifosfato de calcio, carbonato de magnesio y cloruro de sodio. Algunos diluyentes comercialmente disponibles son Fast-Flo, Emdex, STA-Rx 1500, Emcompres y Avicel. Los desintegradores pueden estar incluidos en la formulación del terapéutico en una forma de dosificación sólida. Los materiales usados como desintegradores incluyen pero no están limitados a almidones incluyendo el desintegrador comercial basado en almidón, Explotab. Pueden usarse también glicoiato de almidón de sodio, Amberlita, carboximetilcelulosa de sodio, ultramelopectina, alginato de sodio, gelatina, cascara de naranja, ácido de carboximetilcelulosa, esponja y bentonita. Otras formas de los desintegradores son las resinas de intercambio catiónico insolubles. Las gomas en polvo pueden ser usadas como desintegradores y como aglutinantes y estos pueden incluir gomas en polvo tales como agar, karaya o tragacanto. El ácido algínico y su sal de sodio son también empleados como desintegradores . Los aglutinantes pueden ser usados para rellenar el agente terapéutico juntos para formar una tableta dura e incluir materiales de productos naturales tales como acacia, tragacanto, almidón y gelatina. Otros incluyen metilcelulosa (MC) , etilcelulosa (EC) y carboximetilcelulosa (CMC) . Pirrolidonas de polivinilo (PVP) e hidroximetilcelulosa (HPMC) podrán ambas ser usadas en soluciones alcohólicas para granular el terapéutico. Un agente antifriccional puede estar incluido en la formulación del terapéutico para prevenir la adherencia durante el proceso de formulación. Los lubricantes pueden ser usados como una capa entre el terapéutico y la" pared dada, y estos pueden incluir pero no están limitados a; ácido esteárico incluyendo sus sales de magnesio y calcio, politetrafluoroetileno (PTFE) , parafina líquida, aceites vegetales y ceras. Los lubricantes solubles pueden también ser usados como sulfato lauril de sodio, sulfato lauril magnesio, polietilenglicol de varios pesos moleculares, Carbowax 4000 y 6000. Se podrán agregar los aglutinantes que podrán mejorar las propiedades del flujo del medicamento durante la formulación y en la redisposición auxiliar durante la compresión. Los aglutinantes pueden incluir almidón, talco, sílice pirogénico y silicoaluminato hidratado. A la disolución auxiliar del terapéutico en el medio ambiente acuoso se podrá agregar un tensioactivo con un agente humectante. Los tensioactivos pueden incluir detergentes aniónicos tales como sulfato lauril de sodio, sulfoxinato de sodio dioctilo y sulfato de sodio dioctilo. Los detergentes catiónicos podrán ser usados y pueden incluir cloruro de benzalconio o cloruro de bencetonio. La lista de los detergentes no iónicos potenciales que pueden ser incluidos en la formulación como tensioactivos son lauromacrogol 400, estearato de polioxilo 40, aceite de ricino polioxietileno hidrogenado 10, 50 y 60, monoestearato de gliceról, polisorbato 40, 60, 65 y 80, sucrosa de esteres de ácidos grasos, metilcelulosa y carboximetilcelúlosa. Estos tensioactivos pueden estar presentes en la formulación de la proteína o del derivado ya sea solos o con un mezcla en proporciones diferentes. Los aditivos los cuales actualizan potencialmente el incremento de la proteina (o derivado) son por ejemplo el ácido oleico de ácidos grasos, ácido linoleico y el ácido linolénico. Pueden ser deseables las formulaciones de liberación controlada. El medicamento podrá estar incorporado en un matriz inerte la cual permite la liberación ya sea por el mecanismo de difusión o lixiviación es decir gomas. Las matrices de degeneración muy lenta pueden estar también incorporadas en la formulación. Otras formas de una liberación controlada de este terapéutico son por un método basado en los sistemas terapéuticos Oros (Alza Corp.), es decir, el medicamento se une en una membrana semipermeable la cual permite la entrada del agua y empujar el medicamento hacia fuera a través de una sola abertura pequeña debido a los efectos osmóticos. Algunas cubiertas entéricas también tienen un efecto de liberación retardada. Otras cubiertas pueden ser usadas para la formulación. Estas incluyen una variedad de azucares las cuales pueden ser aplicadas en un substrato de cubierta. El agente terapéutico puede también estar dado en una tableta con una película de cubierta y los materiales usados en este ejemplo" "se dividen en dos grupos. El primero son los materiales no entéricos y que incluyen metilcelulosa, hidroxietilcelulosa, metilhidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, povidona y los polietilenglicoles. El segundo grupo consiste de los materiales entéricos que son comúnmente los esteres de ácidos itálicos. Una mezcla de los materiales pueden usados para proporciona la película de cubierta óptima. Las películas de cubierta pueden ser realizadas en un substrato protector o en una cama fluidizada o por una cubierta de compresión. También contempladas aqui son las liberaciones pulmonares de la proteína presente o derivados del mismo. La proteina (derivado) se libera en los pulmones de un mamífero pasando la inhalación y la sección transversal del revestimiento epitelial del pulmón a la corriente sanguínea (otros reportes de estos incluyen Adjei et al., Pharmaceutical Research 7: 565-569 (1990); Adjei et al., International Journal of Pharmaceutics 63: 135-144 (1990) (acetato de leuoprolida) ; Braquet et al., Journal of Cardiovascular Pharmacology 13_ (suppl. 5): s. 143-146 (1989) (endothelin-1) ; Hubbard et al., Annals of Internal Medicine 3: 206-212 (1989) (1-antitrypsin) ; Smith et al., J. Clin. Invest. 84: 1145-1146 (1989) (a-1-proteinase) ; Oswein et al., "Aerosolization of Proteins", Proccedings of" Symposium on Respiratory Drug Delivery II, Keystone, Colorado, March, 1990 (recombinant humano growth hormone) ; Des et al., The Journal of Immunology 140: 3482-3488 (1988) (interferon-g and tumor necrosis factor alpha) y Platz et al., Patente Norteamericana No. 5,284,656 (granulocyte colony stimulating factor. Contemplados para uso en la práctica de esta invención está una amplia gama de dispositivos mecánicos designados para la liberación dentro del pulmón de los productos terapéuticos, incluyendo pero no limitando a nebulizadores, inhaladores de dosis medidas, inhaladores en polvo, de los cuales todos son familiares para aquellos expertos en la técnica. Algunos ejemplos específicos de dispositivos comercialmente disponibles para la práctica de esta invención son los nebulizadores Ultravent elaborados por Mallinckrodt, Inc., St. Louis, Missouri; el nabulizador Acorn II, fabricado por Marquest Medical Products, Englewood, Colorado: el inhalador de dosis medida Ventolin, fabricado por Glaxo In., Research Triangle Park, North Carolina; y el inhalador de polvo Spinhaler, fabricado por Fisons Corp., Bedford, Massachusetts . Todos estos dispositivos requieren el uso de formulaciones adecuadas para la dispersión de la proteína, análogo 'o derivado. Típicamente, cada formulación es especifica al tipo de dispositivo empleado y puede involucrar el uso de un material propelante adecuado, además de los diluyentes, adyuvantes y/o portadores empleados en la terapia. La proteina (o derivado) deberá ser ventajosamente preparado en formas particuladas con un tamaño de partícula promedio menor de 10 mm (o micrones), más preferiblemente 0.5 a 5 mm, para una mayor liberación efectiva en el pulmón distal . Los portadores incluyen carbohidratos tales como trehalosa, manitol, xilitol, sucrosa, lactosa y sorbitol. Otros ingredientes para usar en las formulaciones pueden incluir DPPC, DOPE, DSPC y DOPC . Pueden usarse los tensioactivos naturales o sintéticos. Puede ser usado el polietilenglicol (aún aparte de su uso en la liberación de la proteína o el análogo) . Pueden ser usados los dextranes tales como el ciclodextran. Pueden ser usadas las sales biliares y otros incrementadores. Pueden ser usados la celulosa y derivados de celulosa. Pueden ser usados aminoácidos tales como los usados en una formulación amortiguadora. También se contempla el uso de liposomas microcápsulas o microesferas, complejos de inclusión u otros tipos de portadores. Las formulaciones adecuadas para usar con un nebulizadór ya sea jet o ultrasónico comúnmente comprenderán proteínas (o derivados) disueltos en agua a una concentración de aproximadamente 0.1 a 25 mg de la proteína biológicamente activa por mi de solución. La formulación pueden también incluir un amortiguador y un azúcar simple (por ejemplo, para la estalización de la proteína y la regulación de la presión osmótica) . La formulación del nebulizador puede también contener un tensioactivo, para reducir o prevenir la agregado 'n inducida en la superficie de la proteina causada por la atomización de la solución en la forma de aerosol. Las formulaciones para usar con un dispositivo inhalador de dosis medidas en general comprendrán un polvo finamente dividido que contiene la proteína (o derivado) suspendido en un propelante con la ayuda de un tensioactivo. El propelante puede ser cualquier material convencioanl empleado para este propósito tal como un clorofluorocarburo, un hidroclorofluorocarburo, un hidrofluorocarburo, o un hidrocarburo, incluyendo triclorofluorometano, diclorodifluorometano, diclorotetrafluoroetanol, y 1,1,1,2-tetrafluoroetano o combinaciones de los mismos. Los tensioactivos adecuados incluyen triolato de sorbitan y lecitina de soya. El ácido oleico puede también ser empleado como un tensioactivo. Las formulaciones para la dosificación de un dispositivo inhalador en polvo comprenderá una proteína que contiene polvo seco finamente dividido (o derivado) y puede también incluir un agente de volumen tal como lactosa, sorbitol, sucrosa, manitol, trehalosa, o xilitol en cantidades las cuales facilitan la dispersión del polvo a partir del dispositivo, por ejemplo, 50 a 90% en peso de la formulación. La liberación nasal de la proteína (o análogo o derivado) también se contempla. La liberación nasal permite el paso de la proteina a la corriente sanguínea directamente después de la administración del producto terapéutico a la nariz, sin la necesidad de la dosificación del producto en el pulmón. Las formulaciones para liberación nasal incluyen aquéllas con dextran o ciclodextran. También se contempla la liberación via transporte transversal de otras membranas mucosas.

Dosificaciones Un experto en la técnica será capaz de averiguar las dosificaciones efectivas para administración y la observación del efecto terapéutico deseado. La presente invención proporciona que las dosificaciones de la proteina OB sola requeridas para un efecto dado se reducirán cuando una composición incremente la sensibilidad del receptor OB, por ejemplo, también ser proporciona incrementando la afinidad del receptor OB a su ligando (proteína OB) o "regulando" al receptor de la proteína OB. Preferiblemente, la formulación de la molécula será tal que estará entre aproximadamente .10 µ~/kg/día y 100 mg/kg/día proporcionarán el efecto terapéutico deseado. Las dosificaciones efectivas pueden ser determinadas utilizando con el tiempo herramientas de diagnóstico. Por ejemplo un diagnóstico para medir la cantidad de la proteína OB en la sangre (o plasma o suero) puede usarse primero para determinar los niveles endógenos de la proteina OB. Tales herramientas de diagnóstico pueden estar en la forma de un ensayo de anticuerpo, tal como un ensayo de tipo intercalado de un anticuerpo. La cantidad de la proteína OB endógena se cuantifica inicialmente y se determina una línea base. Las dosificaciones terapéuticas están determinadas como la cuantificación de la proteina endógena y exógena OB (esto es, proteína, análogo o derivado encontrado dentro del cuerpo ya sea producida así mismo o administrada) continuada durante el curso de la terapia. Las dosificaciones pueden por lo tanto variar durante el curso de la terapia, con una dosificación relativamente alta que se usa inicialmente, hasta que se observa el beneficio terapéutico y dosificaciones bajas usadas para mantener los beneficios terapéuticos. Idealmente, en situaciones en donde se desea solamente un incremento en la masa corporal escasa, las dosificaciones serán insuficientes para el resultado en la pérdida de peso. Además, durante un curso inicial de la terapia de una persona obesa, las dosificaciones que se administrarán son aquéllas en las que se alcance una pérdida de peso y "la "disminución del tejido graso concomitante/incremento de la masa escasa. Una vez que se alcanza la pérdida de peso suficiente, puede administrarse una dosificación suficiente para prevenir el re-aumentó de peso, aún suficiente para mantener el incremento de la masa escasa deseado (o, prevención de la reducción de la masa escasa) . Estas dosificaciones pueden ser determinadas empíricamente, en tanto los efectos de la proteina OB sean reversibles. Por ejemplo, Campfield et al., Science 269: 546-549 (1995) a 457. Además si se observa una dosificación resultante en pérdida de peso cuando no se desea esta pérdida de peso se podrá administrar una dosis baja a fin de alcanzar el incremento deseado en la masa de tejido escaso aún manteniendo el peso deseado. Para incrementar una sensibilidad del individuo a la insulina, las consideraciones de dosificaciones similares pueden tomarse en cuenta. El incremento de la masa escasa sin la pérdida de peso puede ser alcanzada lo suficiente para disminuir la cantidad de la insulina (o, potencialmente, amilina u otros medicamentos potenciales para el tratamiento de la diabetes) en un individuo deberá administrarse para el tratamiento de la diabetes. Para incrementar el vigor total, se harán consideraciones de dosificaciones similares. El incremento en la masa escasa con incremento concomitante en el vigor total puede alcanzarse con dosis insuficiente que resultan en la pérdida de peso. Otros beneficios, tales como un incremento en las células rojas de la sangre (y oxigenación en la sangre) y un decremento o disminución en la resorción ósea u osteoporosis pueden alcanzarse también en la ausencia de pérdida de peso.

Combinaciones Los presentes métodos pueden usarse en conjunto con otros medicamentos, tales como aquéllos empleados para el tratamiento de la diabetes (por ejemplo, insulina, tiazolidinodionas posiblemente, amilina o antagonistas de los mismos), medicamentos que disminuyan la presión sanguínea y el colesterol (tale como aquéllos los cuales reducen los niveles lipidos de la sangre y otros medicamentos cardiovasculares), y medicamentos incrementadores de la actividad (por ejemplo anfetaminas) . Los supresores del apetito pueden ser usados también (tales como aquéllos que afectan los niveles de la serotonina o del neuropéptido Y) . Tal administración puede ser simultánea o puede ser en serie.

Además, los presentes métodos pueden ser usados en conjunto con procedimientos quirúrgicos tales como cirugías cosméticas diseñadas para alterar la apariencia total de un cuerpo (por ejemplo, liposucción o cirugías con láser diseñadas para reducir la masa corporal, o cirugías de implantes designadas para incrementar la apariencia de la masa corporal) . Los beneficios en salud de las cirugías cardiacas, tales como cirugías de las vias de circulación y otras cirugías designadas para aliviar una condición dañina causada por el bloqueo de los vasos sanguíneos por los depósitos de grasa, tales como las plaquetas arteriales, puede incrementarse con el uso concomitante de las composiciones y métodos de la presente invención. Los métodos para eliminar las molestas piedras, tales como los métodos ultrasónicos o de láser, pueden también usarse ya sea antes a, durante o después de un curso de los presentes métodos terapéuticos. Además, los presentes métodos pueden ser usados como un ayudante para las cirugías o terapias para la fractura de huesos, músculos dañados u otras terapias las cuales podrán mejorarse por un incremento en la masa del tejido escaso. Por lo tanto, la presente invención proporciona un método para incrementar en un individuo, la sensibilidad a la proteína OB o análogo o derivado del mismo, comprendido la administración de una cantidad efectiva de una composición la cual incrementa la disponibilidad, afinidad o sensibilidad del receptor funcional de la proteína OB en dicho individuo. Opcionalmente, dicho método también involucra la administración, ya sea simultáneamente o en serie de una proteína OB, análogo o derivado del mismo. Dicha composición la cual incrementa la disponibilidad o sensibilidad del receptor funcional de la próteína OB puede seleccionarse de entre las composiciones de tiazolidinodionas: 2, 4-tiazolidinodionas; tiazolidinodionas opcionalmente substituidas; 5- [4- [2- [5-metil-2-fenil-4-oxazolil) -2-hidroxietoxi] enzil] -2, 4-tiazolidinodiona (AD-5070) ; clofibrato; ciglitazona; englitazona; pioglitazona; BRL 49643; troglitazona; M16209; oxazolidinodionas; así también como derivados, análogos, tautómeros, enantiómeros, diastereómeros, epimeros, sales, solvantes, esteres, promedicamentos o metabolitos de tiazolidinodionas o los compuestos anteriores. La proteina OB, análogo o derivado del mismo puede seleccionarse de entre: a) la secuencia de aminoácidos 1-146 como se expone en la SEC ID No: 3 (abajo) o SEC ID No: 6 (abajo), b) la serie de secuencias de aminoácidos 1-146 como se expone en la SEC ID No: 6 (abajo) que tiene un residuo lisina en la posición 35 y un residuo isoleucina en la posición 74; c) la secuencia de aminoácidos de la subparte (b) que tiene un aminoácido diferente substituido en una o más de las siguientes posiciones (usando la numeración de conformidad con la SEC ID No: 6, y maniendo la misma numeración aún en la ausencia de un residuo glutaminilo en la posición 28) : 4, 8, 32, 33, 35, 48, 50, 43, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 80, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 112, 118, 136, 80, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, ?12," 118, 136, 138, 142, y 145) ; (d) la secuencia de aminoácidos de las subpartes (a) , (b) o (c) carentes opcionalmente de un residuo glutaminilo en la posición 28; (e) la secuencia de aminoácidos de las subpartes (a), (b) , (c) o (d) que tienen un residuo en el N-término. (f) un análogo de proteína OB truncado seleccionado de entre (usando la numeración de la SEC ID No: 6 que tiene un residuo lisina en la posición 35 y un residuo leucina en la posición 74) : (i) aminoácidos 98-146 (ii) aminoácidos 1-32 (iii) aminoácidos 40-116 (iv) aminoácidos 1-99 y 112-146 (v) aminoácidos 1-99 y 112-146 que tienen un o más de los aminoácidos 100-111 secuencialmente colocados entre los aminoácidos 99-112; y (vi) o el análogo OB truncado de la subparte (i) que tiene o más de los aminoácidos 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 112, 118, 136, 138, 142 y 145 substituidos con otro aminoácido; (vii) el análogo truncado de la subparte (ii) que tiene uno o más de los aminoácidos 4, 8 y 32 substituidos con otro aminoácido; tiene uno o más de los aminoácidos 50, 53, 6u, "64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111 y 112 remplazados con otro aminoácido; (vix) el análogo truncado de la subparte (iv) que tiene uno o más de los aminoácidos 4, 8, 32, 33, 35, 48, 50, 43, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 112, 118, 136, 138, 142 y 145 remplazados con otro aminoácido; (x) el análogo truncado de la subparte (v) que tiene uno o más de los aminoácidos 4, 8, 32, 33, 35, 48, 50, 53, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 112, 118, 136, 138, 142 y 145 remplazados con otro aminoácido; (xi) el análogo truncado de cualquiera de las subpartes (i-x) que tiene un residuo metionilo N-terminal; y (g) la proteína OB o análogo derivado de cualquiera de las subpartes (a) hasta (f) comprendida de una porción química conectada a la porción de la proteína; (h) un derivado de la subparte (g) en donde dicha porción química es una porción de polímero soluble en agua; (i) un derivado de la subparte (h) en donde dicha porción del polímero soluble en agua es un polietilenglicol; (j) un derivado de la subparte (h) en donde dicha porción del polímero soluble en agua es una porción de un poliaminácido; (k) un derivado de la subparte (h) en donde dicha porción del polímero soluble en agua está unida solamente al N-término de dicha porción de la proteína; (1) una proteína OB, análogo o derivado de cualquiera de las subpartes (a) hasta (k) en un portador farmacéuticamente aceptable. Se presenta el siguiente ejemplo para ilustrar de una manera más completa la invención, pero no está construida como limitante del ambiente de la misma. El ejemplo 1 es un ejemplo profético del uso humano el cual demuestra que las composiciones de tiazolidinodionas incrementan la afinidad o disponibilidad de los receptores de la proteína OB en un individuo y en aquéllos individuos que tienen una sensibilidad incrementada para dicha proteína OB. Siguen materiales y métodos.

Ejemplo 1 Un paciente humano obeso desea una pérdida de peso (BMI > 27) . Al paciente se le administra una composición de tiazolidinodiona efectiva para incrementar la disponibilidad de la proteina OB por una semana. El paciente es entonces dosificado con una cantidad de proteína OB, o un derivado o análogo del mismo, suficiente que resulte en una disminución en peso. Los niveles de la proteina OB circulatoria o el análogo o derivado pueden monitorearse utilizando un estuche de diagnóstico, tal como un ensayo de anticuerpo contra la proteina OB (o se aplica otra fuente antigénicá) . "El paciente pierde peso, y obtiene un peso corporal deseado y/o masa de grasa. La proteina OB o análogo o derivado del mismo opcionalmente en combinación con una composición de tiazolidinodiona es posteriormente crónicamente administrado por un período de tiempo deseado para mantener el peso deseado y/o los niveles de grasa en el cuerpo.

MATERIALES Y MÉTODOS Administración de la proteina OB o Vehículo Proteína: Las secuencias ID NOS: 1, 2 y 3 presentan el recombinante murina OB DNA y proteina (Figura 1, y las secuencias ID NOS: 4, 5 y 6 presentan un análogo DNA recombinante humano OB y proteína (Figura 2) . La proteína OB del recombinante humano como en la SEC ID No: 6 que tiene un residuo lisina en la posición 35 y un residuo isoleucina en la posición 64 se usó en el EJEMPLO 1. Como se indica arriba, las proteínas recombinantes análogas humana y murina posteriores son ilustrativas de la proteina OB la cual puede ser usada en los métodos presentes de tratamiento y elaboración de un medicamento. Otras proteínas OB o análogos o derivados del mismo pueden usarse. Aquí, el primer aminoácido de las secuencias de aminoácidos para la proteína recombinante está" referido como +1, y su valina, y el aminoácido en la posición -1 es la metionina. El aminoácido C-terminal es el número 146 (cisteína) .

MÉTODOS PARA LA PRODUCCIÓN Los métodos siguientes para la producción han sido usados para producir la proteína OB análoga humana o el recombinante murina metionilo biológicamente activo. Los métodos similares pueden ser usados para preparar a la proteina OB humana recombinante metionilo biológicamente activo.

Vector de Expresión y Cepas Huéspedes El vector de expresión plásmido es pCFM11656, ATTC Acceso No. 69576. El DNA anterior se ligó en el vector de expresión de línea pCFM11656 con Xbal y BamHI y transformado en las cepas huéspedes E. coli, FM5. Las células E. coli FM5 fueron derivadas en Amgen Inc. Thousand Oaks, CA de la cepa K-12 E. Coli (Bach ann et al., Bacteriol. Rev. 40: 116-167 (1976) y contienen el gen represor de fase lambda integrado, CI857 (Sussman et al., CR. Acad. Sci. 254; 1517-1579 (1962)). El vector de producción, la transformación celular y la selección de las colonias se realizan por métodos estándares. E.g. , Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d Edition, Cold Spring Harbor Laboratdry "Press, Cold Spring Harbor, NY. Las células huésped crecieron en un medio LB. _ .

Proceso de fermentación Se uso un protocolo de fermentación de tres fases conocido como un proceso de alimentación por lotes. Las composiciones del medio se exponen a continuación. Lotes: Una fuente de fosfato y nitrógeno se esterilizó (por el enjuague a 122°C por 35 minutos, 18-20 psi) en el recipiente de fermentación (Biolafitte, 12 litros de capacidad) después del enfriado, se agregaron asépticamente las fuentes de carbono, magnesio, vitamina y trazos de metal. Se agregó al termentador durante la noche un cultivo de la bacteria que produce la proteina murina recombinante anterior (16 horas o más) de 500 mi (creció en caldos LB) . Alimento I: Después de alcanzar entre 4.0-6.0 OD6oo, los cultivos se alimentaron con el alimento I. La glucosa se alimentó a una proporción limitante a fin de controlar la proporción de crecimiento (m) . Un sistema automatizado (llamado el sistema de control distributivo) se ordenó para controlar la proporción de crecimiento a 0.15 generaciones por hora. Alimento II: Cuando el OD600 ha alcanzado 30, la temperatura del cultivo se disminuyó lentamente a 42 °C y el alimento cambió a Alimento II, seguido. La fermentado 'n se dejo continuar por 10 horas como muéstreos cada 2 horas. Después de 10 horas, los contenidos del termentador se calentaron se enfriaron por debajo de 20°C y se cosecharon por centrifugación Composición del Medio Lote : 10 g/L Extracto de levadura 5.25 g/L (NH4)2S0 3.5 g/L K2HP04 4.0 g/L KH2P04 5.0 g/L Glucosa 1.0 g/L MgS04.7H20 2.0 ml/L Solución de vitamina 2.0 ml/L Solución de trazos de metal 1.0 mL/L Antiespuma P2000 Alimento I: 50 g/L Bactotriptona 50 g/L Extracto de levadura 450 g/L Glucosa 8.75 g/L MgS04.7H20 10 mL/L Solución de vitamina 10 mL/L Solución de trazo de metal Alimento II: 200 g/L Bactotriptona 100 g/L Extracto de levadura 110 g/L Glucosa La solución de vitamina (lote Alimento I) : 2.5 g de biotina, 0.4 g de ácido fólico, y 4.2 g de riboflavina se disolvieron en 450 mi de H20 y 3 mi de NaOH 10 N, y se llevaron a 500 mLs en H20. 14 g de piridoxina-HCl y 61 g de miacina se disolvieron en 150 mL de H20 y 50 mi de NaOH N, y se llevaron a 250 mi en H20. 54 g de ácido pantoténico se disolvieron en 200 mi de H20, y se llevaron a 250 mi. Las tres soluciones se combinaron y se llevaron a 10 litros del volumen total. Solución de trazo de Metal (Lote y Alimento I) : Cloruro férrico (FeCl3.6H20) : 27 g/L Cloruro de Zinc (ZnCl2.4H20) : 2 g/L Cloruro de Cobalto (CoCl2.6H20) : 2 g/L Molibdato de sodio (NaMo04.2H20: 2 g/L Cloruro de calcio (CaCl2.2H20) : 1 g/L Sulfato cúprico (CuS04.5H20) : 1.9 g/L Acido Bórico (H3B03) : 0.5 g/L Cloruro de Manganeso (MnCl2.4H20) : 1.6 g/L Dihidrato de citrato de sodio: 73.5 g/L Proceso de Purificación para la Proteina OB Murina La purificación está abarcada por las siguientes etapas (a menos que se indique de otra manera, se realizaron las siguientes etapas a 4°C): 1.- Pasta celular. La pasta celular É7 coli se suspendió en 5 veces el volumen de 7 mM de EDTA, pH 7.0. Las células en EDTA se sacudieron adicionalmente por^dos pasos a través de un icrofluidizador. Las células sacudidas se centrifugaron a 4.2 k rpm por una hora en un centrifugador Beckmann J6-B con un roto JS-4.2. 2.- Lavado No. 1 del cuerpo de inclusión. El sobrenadante anterior se eliminó, y las pelotillas se resupendieron o se suspendieron nuevamente con 5 veces el volumen de 7 mM EDTA, pH 7.0 y se homogeneizaron. Esta mezcla se centrifugó como en la etapa 1. 3.- Lavado No. 2 del cuerpo de inclusión. El sobrenadante anterior se eliminó, y las pelotillas se resupendieron o se suspendieron nuevamente con 10 veces el volumen de 20 mM tris, pH 8.5, 10 mM de DTT, y 1% de desoxicolato, y se homogeneizó. Esta se mezcla se centrifugó como en la etapa 1. 4.- Lavado No. 3 del cuerpo de inclusión. El sobrenadante anterior se eliminó, y la pelotilla se resuspendió en 10 veces del agua destilada y se homogeneizó. Esta mezcla se centrifugó como en la etapa 1. 5.- Redoblado. La pelotilla se redobló con 15 volúmenes de 10 mM de HEPES pH 8.5, 1% de sarcosina de sodio (sarcosina de N-lauroilo) , a temperatura ambiente. Después de 60 minutos la solución se elaboró para hacer 60 mM de sulfato de cobre, y después se agitó durante la noche. 6.- Eliminación de la sarcosina. La mezcla redoblada se diluyó con 5 volúmenes de 10 mM de amortiguador tris, pH 7.5 y se centrifugó como en la etapa 1. El sobrenadante se colectó y se mezcló con agitación por 1 hora con una resina Dowex® 1-X4 (Dow Chemicals Co., Midland, MI), malla 20-50, forma de cloruro, a un volumen total 0.066% de la mezcla redoblada diluida. Ver el documento WO 89/10932 en la página 26 para más información sobre Dowex . Esta mezcla se vertió en una columna y el eluyente se colectó. La eliminación de la sarcosina se verificó por HPLC de fase inversa. 7.- Precipitación del ácido. Se colectó el eluyente de la etapa previa, y se ajustó el pH a pH 5.5, y se incubó por 30 minutos a temperatura ambiente. Esta mezcla se centrifugó como en la etapa 1. 8.- Cromatografía de intercambio de cationes. El pH del sobrenadante de la etapa previa se ajustó a pH 4.2, y se cargaron en 20 volúmenes en una columna de flujo rápido de Sepharose CM (a 7% del volumen) del gradiente salado a 20 mM de NaOAC, pH 4.2, 0 M a NaCl 1.0 M. 9.- Cromatografía de interacción hidrofóbica. El combinado de Sepharose CM de las fracciones de los picos (verificado a partir de la absorbencia ultravioleta) de la etapa anterior se hizo para hacer sulfato de amonio 0.2 M. Se realizó un gradiente salado inverso en un volumen de columna 20 a 5 mM NaOAC, pH 4.2, con 4.1 M a sulfato de amonio 0 M. Este material se concentró y se diafiltró en PBS.

Fermentación del Análogo Recombinante Humano de la Proteína OB: La fermentación de las células huéspedes anteriores para producir el análogo recombinante humano de la proteína OB (SEC ID No: 6) se puede abarcar usando las condiciones y composiciones como se describen arriba para el material recombinante murina.

Purificación del Análogo Recombinante Humano de la Proteína OB: El análogo recombinante humano de la proteína se puede purificar utilizando los métodos similares a aquéllos usados para la purificación de la proteína recombinante murina como se describe arriba. Para la preparación del análogo recombinante humano de la proteína OB, la etapa 8 deberá realizarse por el ajuste del pH del sobrenadante de la etapa 7 a pH 5.0, y cargando esto en una columna de flujo rápido de Sepharose CM. El gradiente salado del volumen de la columna 20 deberá realizarse a NaOAC 20 mM, pH 5.5, 0 M a NaCl 0.5. La etapa 9 deberá realizarse por la dilución de los cuatro doblados combinados de Sepharose CM con agua, y ajustar el pH a 7.5. Esta mezcla deberá elaborarse para sulfato de amonio 0.7 M. El volumen del gradiente salado inverso eñ una columna veinte deberá hacerse a NaOAC 5 mM, pH 5.5, 0.2 M a sulfato de amonio 0 M. De otro modo, las etapas anteriores son idénticas. La proteina recombinante humana de la SEC ID No: 6 que tiene una lisina 35 e isoleucina 34 se formuló en un amortiguador que contiene 10 mM de histidina, 4.3% de arginina, a pH 6. Mientras la presente invención se ha descrito en términos de las modalidades preferidas, se entiende que las variaciones y modificaciones ocurrirán para aquéllos expertos en la técnica. Por lo tanto, se entiende que las reivindicaciones adjuntas cubre todas las variaciones equivalentes las cuales están dentro del ámbito de la invención como se reivindica.

LISTADO DE SECUENCIAS (i) INFORMACIÓN GENERAL: (i) SOLICITANTE: AMGEN INC. (ii) TITULO DE LA INVENCIÓN: MÉTODOS PARA INCREMENTAR LA SENSIBILIDAD DE UN INDIVIDUO A LA PROTEINA OB MEDIANTE LA REGULACIÓN DEL RECEPTOR DE LA PROTEINA OB (iii) NUMERO DE SECUENCIAS: 6 (iv) DIRECCIÓN CORRESPONDIENTE: (A) DIRECCIÓN: AMGEN INC. (B) CALLE: 1810 DEHAVILLAND DRIVE (C) CIUDAD: THOUSANDS OAKS (D) ESTADO: CA (E) PAÍS: US (F) ZIP: 91320-1789 (v) LEÍDO EN LA COMPUTADORA DESDE: (A) TIPO DE MEDIO: Floppy disk (B) COMPUTADORA: IBM PC compatible (C) SISTEMA DE OPERACIÓN: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentln Reléase #1.0, Versión #1.30 (viii) INFORMACIÓN DEL ABOGADO/AGENTE: (A) NOMBRE: KNIGHT MATHEW, W (B) NUMERO DE REGISTRO: 36,846 (C) REFERENCIA/NUMERO DE DOCUMENTO: A-421 (2) INFORMACIÓN PARA SEC ID NO:l: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 491 pares base (B) TIPO: ácido nucleico (C) HEBRA: una sola (D) TOPOLOGÍA: lineal ( i i ) TIPO DE MOLÉCULA: CDNA ( xi ) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NO : 1 : TCTAGATTTG AGTTTTAACT TTTAGAAGGA GGAATAACAT ATGGTACCGA TCAGAAAGT 60 TCAGGACGAC ACCAAAACCT TAATTAAAAC GATCGTTACG CGTATCAACG ACATCAGTCA 120 CACCCAGTCG GTCTCCGCTA AACAGCGTGT TACCGGTCTG GACTTCATCC CGGGTCTGCA 180 CCCGATCCTA AGCTTGTCCA AAATGGACCA GACCCTGGCT GTATACCAGC AGGTGTTAAC 240 CTCCCTGCCG TCCCAGAACG TTCTTCAGAT CGCTAACGAC CTCGAGAACC TTCGCGACCT 300 GCTGCACCTG CTGGCATTCT CCAAATCCTG CTCCCTGCCG CAGACCTCAG GTCTTCAGAA 360 ACCGGAATCC CTGGACGGGG TCCTGGAAGC ATCCCTGTAC AGCACCGAAG TTGTTGCTCT 420 GTCCCGTCTG CAGGGTTCCC TTCAGGACAT CCTTCAGCAG CTGGACGTTT CTCCGGAATG 480 TTAATGGATC C 491 (2) INFORMACIÓN PARA SEC ID NO:2: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 491 base par (B) TIPO: ACIDO NUCLEICO (C) HEBRA: única (D) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: cDNA (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NO: 2: AGATCTAAAC TCAAAATTGA AAATCTTCCT CCTTATTGTA TACCATGGCT AGGTCTTTCA 60 AGTCCTGCTG TGGTTTTGGA ATTAATTTTG CTAGCAATGC GCATAGTTGC TGTAGTCAGT 120 GTGGGTCAGC CAGAGGCGAT TTGTCGCACA ATGGCCAGAC CTGAAGTAGG GCCCAGACGT 180 GGGCTAGÜ?T Te?AACAGGT TTTACCTGGT CTGGGACCGA CATATGGTCG TCCACAATTG 240 GAGGGACGGC AGGGTCTTGC AAGAAGTCTA GCGATTGCTG GAGCTCTTGG AAGCGCTGGA 300 CGACGTGGAC GACCGTAAGA GGTTTAGGAC GAGGGACGGC GTCTGGAGTC CAGAAGTCTT 360 TGGCCTTAGG GACCTGCCCC AGGACCTTCG TAGGGACATG TCGTGGCTTC AACAACGAGA 420 CAGGGCAGAC GTCCCAAGGG AAGTCCTGTA GGAAGTCGTC GACCTGCAAA GAGGCCTTAC 480 AATTACCTAG G 91 (2) INFORMACIÓN PARA SEC ID NO: 3: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 147 AMINOÁCIDOS (B) TIPO: AMINOÁCIDO (C) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteina (íx) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: proteina (B) LOCACIÓN: 1..147 (D) OTRA INFORMACIÓN: /nota= "NOTA: EL RESIDUO DE METIONILO COMIENZA EN LA POSICIÓN 1. (XI) DESCRIFSION DE SECUENCIA: SEC ID NO:3: Mee Val Pro He Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Xle Lys 1 5 10 15 Thr He Val Thr Arg He Asn Asp He Ser His Thr Gln Ser Val Ser 20 25 30 Ala Lys Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe He Pro Gly Leu His Pro 35 40 45 He Leu Ser Leu Ser Lys Mßt Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln 50 55 60 Val Leu Thr Seix Leu Pro Ser Gln Asn Val Leu G n He Ala Asn Asp 65 70 75 80 Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser 85 90 95 Cys Ser Leu Pro Gln Thr Ser Gly Leu Gln Lys Pro Glu Ser Leu Asp 100 105 110 Gly Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser 115 120 125 Arg Leu G n Gly Ser Leu Gln Asp He Leu Gln G n Leu Asp Val Ser 130 135 140 Pro Glu Cys 145 (2) INFORMACIÓN PARA SEC ID NO: 4: (1) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 454 base par (B) TIPO: ACIDO NUCLEICO (C) HEBRA: única (D) TOPOLOGÍA, lineal (11) TIPO DE MOLÉCULA: CDNA (XI) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NO: : CATATGGTAC CGATCCAGAA AGTTCAGGAC GACACCAAAA CCTTAATTAA AACaATCGTT 60 ACGCGTATCA ACGACATCAG TCACACCCAG TCGGTGAGCT CTAAACAGCG TGTTACAGGC 120 CTGGACTTCA TCCCGGGTCT GCACCCGATC CTGACCTTGT CCAAAATGGA CCAGACCCTG 180 GCTGTATACC AGCAGATCTT AACCTCCATG CCGTCCCGTA ACGTTCTTCA GATCTCTAAC 240 GACCTCGAGA ACCTTCGCGA CCTGCTGCAC GTGCTGGCAT TCTCCAAATC CTGCCACCTG 300 CCATGGGCTT CAGGTCTTGA GACTCTGGAC TCTCTGGGCG GGsTCCTGGA AGCATCCGGT 360 TACAGCACCG AAGTTGTTGC TCTGTCCCGT CTGCAGGGTT CCCTTCAGGA CATGCTTTGG 420 CAGCTGGACC TGTCTCCGGG TTGTTAATGG ATCC 454 (2) INFORMACIÓN PARA SEC ID NO: 5: (1) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 454 base par (B) TIPO: ACIDO NUCLEICO (C) HEBRA: única (D) TOPOLOGÍA: lineal (11) TIPO DE MOLÉCULA: CDNA (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA SEC ID NO: 5: GTATACCATG GCTAGGTCTT TCAAGTCCTG CTGTGGTTTT GGAATTAATT TTGCTAGCAA 60 TGCGCATAGT TGCTGTAGTC AGTGTGGGTC AGCCACTCGA GATTTGTCGC ACAATGTCCG 120 GACCTGAAGT AGGGCCCAGA CGTGGGCTAG GACTGGAACA GGTTTTACCT GGTCTGGGAC 180 CGACATATGG TCGTCTAGAA TTGGAGGTAC GGCAGGGCAT TGCAAGAAGT CTAGAGATTG 240 CTGGAGCTCT TGGAAGCGCT GGACGACGTG CACGACCGTA AGAGGTTTAG GACGGTGGAC 300 GGTACCCGAA GTCCAGAACT CTGAGACCTG AGAGACCCGC CCCAGGACCT TCGTAGGCCA 360 ATGTCGTGGC TTCAACAACG AGACAGGGCA GACGTCCCAA GGGAAGTCCT GTACGAAACC 420 GTCGACCTGG ACAGAGGCCC AACAATTACC TAGG 454 (2) INFORMACIÓN PARA SEC ID NO: 6: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 147 AMINOÁCIDOS (B) TIPO: AMINOÁCIDO (C) TOPOLOGÍA: lineal (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteina (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOMBRE/CLAVE: proteina (B) LOCACIÓN: 1..147 (D) OTRA INFORMACIÓN: /nota= "NOTA: EL RESIDUO DE METIONILO COMIENZA EN LA POSICIÓN 1. (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID NO: 6: Met Val Pro He Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu He Lys 1 5 10 15 Thr He Val Thr Arg He Asn Asp He Ser His Thr Gln Ser Val Ser 20 25 30 Ser Lys Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phß He Pro Gly Leu His Pro 35 40 45 He Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gn Gln 50 55 60 He Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Leu G n He Ser Asn Asp 65 70 75 80 Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser 85 90 95 Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thx Leu Asp Ser Leu Gly 100 105 110 Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser 115 120 12S Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser '130 135 140 Pro Gly Cys 145

Claims (4)

REIVINDICACIONES

1.- Un método para incrementar, en un individuo, la sensibilidad a una proteina OB o análogo o derivado del mismo, por la administración de una composición caracterizada porque incrementa la afinidad o disponibilidad del receptor funcional de la proteina OB dentro de dicho individuo, dicho método está opcionalmente en combinación con la administración de la proteína OB o análogo o derivado del mismo.

2.- Un método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque dicha composición la cual incrementa la afinidad o disponbilidad del receptor funcional de la proteína OB es una composición de tiazolidinodiona.

3. Un método de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque la proteína OB, análogo o derivado del mismo puede seleccionarse de entre: (a) la secuencia de aminoácidos 1-146 como se expone en la SEC ID No: 3 o SEC ID No: 6; (b) la serie de secuencias de aminoácidos 1-146 como se expone en la SEC ID No: 6 que tiene un residuo lisina en la posición 35 y un residuo isoleucina en la posición 74; (c) la secuencia de aminoácidos de la subparte (b) que tiene un aminoácido diferente substituido en una o" más de las siguientes posiciones (usando la numeración de conformidad con la SEC ID No: 4): 4, 8, 32, 33, 35, 48, 50, 53, 60, 64, 66, 61 , 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 112, 118, 136, 138, 142, y 145; (d) la secuencia de aminoácidos de las subpartes (a) , (b) o (c) carentes opcionalmente de un residuo glutaminilo en la posición 28; (e) la secuencia de aminoácidos de las subpartes (a), (b) , (c) , o (d) que tienen un residuo en el N-término. (f) un análogo de proteina OB truncado seleccionado de entre: (usando la numeración de la SEC ID No: 6 que tiene un residuo lisina en la posición 35, y un residuo leucina en la posición 74) : (i) aminoácidos 98-146 (ii) aminoácidos 1-32 (iii) aminoácidos 40-116 (iv) aminoácidos 1-99 y 112-146 (v) aminoácidos 1-99 y 112-146 que tienen un o más de los aminoácidos 100-111 secuencialmente colocados entre los aminoácidos 99-112; y (vi) el análogo OB truncado de la subparte (f) (i) que tiene o más de los aminoácidos 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 112, 118, 136, 138, 142 y 145 substituidos con otro aminoácido; (vii) el análogo truncado de la subparte (f) (ii) que tiene uno o más de los aminoácidos 4, 8 y 32 substituidos con otro aminoácido; (viii) el análogo truncado de la subparte (f) (iii) que tiene uno o más de los aminoácidos 50, 53, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111 y 112 remplazados con otro aminoácido; (vix) el análogo truncado de la subparte (f) (iv) que tiene uno o más de los aminoácidos 4, 8, 32, 33, 35, 48, 50, 53, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 112, 118, 136, 138, 142 y 145 remplazados con otro aminoácido; (x) el análogo truncado de la subparte (f) (v) que tiene uno o más de los aminoácidos 4, 8, 32, 33, 35, 48, 50, 53, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 112, 118, 136, 138, 142 y 145 remplazados con otro aminoácido; (xi) el análogo truncado de cualquiera de las subpartes (f) (i)-(x) que tiene un residuo metionilo N- terminal; y (g) la proteina OB o análogo derivado de cualquiera de las subpartes (a) hasta (f) comprendida de una porción química conectada a la porción de la proteina; (h) un derivado de la subparte (g) en donde dicha porción química es una porción de polímero soluble'én agua; (i) un derivado de la subparte (h) en donde dicha porción del polímero soluble en agua es un polietilenglicol; (j) un derivado de la subparte (h) en donde dicha porción del polímero soluble en agua es una porción de un poliaminoácido; (k) un derivado de la subparte (h) en donde dicha porción del polímero soluble en agua está unida solamente al N-término de dicha porción de la proteína; (1) una proteína OB, análogo o derivado de cualquiera de las subpartes (a) hasta (k) en un portador farmacéuticamente aceptable.

4.- Un método de conformidad con las reivindicaciones 1, 2, ó 3, caracterizado porque dicha administración es para el tratamiento para una condición seleccionada de entre peso excesivo, diabetes, nivel de los lipidos de la sangre elevado, esclerosis arterial, plaquetas arteriales, la reducción o prevención de la formación piedras molestas, masa del tejido escaso, sensibilidad insuficiente a la insulina y golpes .