MXPA98006044A - Vacuna de streptococcus equi - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere al uso de bacterias atenuadas vivas de la especie Streptococus equi para la manufactura de vacunas para la aplicación sistemática con el fin de combatir infección por Streptococcus equi.

Description

VACUNA DE STREPTOCOCCUS EQUI La presente invención se refiere al uso de Estreptococcus equi atenuado vivo para la manufactura de vacunas Por mucho tiempo se ha sabido que el Estreptococcus equi es la causa de una enfermedad aguda del tracto respiratorio superior en caballos (Sweeney y otros, Compendium Equine 9 689-693 (1987)) Esta enfermedad altamente contagiosa se caracteriza por fiebre, descarga nasal mucopurulenta, linfoadenopatia y formación de absceso subsecuente de los nodos linfáticos de la cabeza y el cuello (Sweeney y otros, Compendium Equine ) 845-851 (1987)) Con frecuencia la hinchazón de los nodos linfáticos es tan severa que se obstruye en las vías respiratorias Este fenómeno explica el nombre común de la enfermedad, paperas La enfermedad solamente es fatal en una minoría de los casos como se describe por Sigmund (Sigmund, O H and Fraser, C M eds The Merck Vetepnary Manual, 5th Ed Merck and Company Ine Rahway, N J 313-315 (1979)) Contrario a esto, la morbidez generalmente es alta, y puede ser tan alta como el 100% en poblaciones susceptibles Las vacunas contra la enfermedad también han sido conocidas durante mucho tiempo (Bazely, P L , Austr Vet J 16243 (1940)) y (Bazely, P L , Austr Vet J 18 141-155 (1942) Hasta recientemente solamente estuvieron disponibles dos clases de vacunas a) vacunas basadas en bactepnas clasicas y b) vacunas de sub-unidades basadas en la M-protema, una proteina inmunogénica Ambas clases de vacunas tienen sus propios inconvenientes severos. Las bacterinas son notorias por sus reacciones adversas y se sabe que proveen relativamente poca protección (Subcomittee on the Eficacy of Stragles Bactepn, Report, American Association of Equine Practitioners) Srivastava y Barmum (Can. J Comp. Med 45: 2025 (1981)) demostraron que las vacunas de células enteras muertas, comerciales y autólogas no son capaces de inducir un nivel suficiente de anticuerpos para proteger contra las paperas. Woolcock Austr Vet J. 51:554-559 (1975) mostró que un esquema de vacuna de tres dosis en intervalos de diez días es esencial para obtener por lo menos protección parcial Boschwitz llega a la conclusión para la sub-unidad inmunogénica principal de S equi, la M-proteína, de que los anticuerpos con tres antígenos no son suficientes para proteger a los caballos de las infecciones naturales o experimentales (Comell Vet 81 25-36 (1991)) En un estudio comparativo, en el cual se compararon las vacunas de células enteras y de subunidades M, Spvastava y Barnum, Can J Comp Med. 49351-356 (1981) reportó de nuevo los resultados muy débiles con estas clases de vacunas son necesarias vacunas de refuerzo repetidas para obtener titulaciones de anticuerpos razonables y la longevidad de las titulaciones altas es corta Se deben proporcionar vacunas de refuerzo adicionales por lo menos una vez al año (Sweeney y otros, Compendium Equine 9 845-851 (1987)) Además, esto es difícilmente cualquier correlación entre titulación de anticuerpos y protección. Aún las paperas recientes, en las cuales el S. equi muerto se ha administrado intraperitoneal u oralmente solamente describen protección parcial contra la confrontación con Estreptococcus equi vivo (Wallace y otros, Vet. Immunol. and Immunopath. 48: 139-154 (1995)). Las vacunas clásicas basadas en bacterinas o subunidades están v.gr., disponibles de Forth Dodge Laboratories, Coopers Animal Health and the Mobay Company (Patente de E.U.A. 4,944,942). La evidencia establecida en la literatura indica que la inmunidad a S. equi es local, en lugar de sistemática. La importancia principal de inmunidad local para conferir protección contra la infección estreptococal es i. a. bien documentado por Bassen y Fischetti, en J. Exp. Medicine 167: 1945-1950 (1988), y en Infect. and Immun. 56:2555-2672 (1988)). Se ha establecido que la inmunidad local es mediada por anticuerpos mucosales como se resumió i. a. por Bernadette (J. Gen. Microbiol. 137:2125-2133 (1991). Y dado que la nasofaringe es la puerta natural de entrada para el Streptococcus equi, ahora generalmente se acepta que la vacuna exitosa requiere necesariamente estimulación de la respuesta inmune nasofaríngea. (Galán y otros, Inf. Immun, 47: 623-628 (1985), (Galán y otros, Inf. Immun. 54: 202-206 (1986), (Timoney y otros, en Kimura, y., Kotami, S., Shiokawa, y. (ed ). Recent advances in streptococci and streptococcal diseases. Reed Books, Danbury, N.H.).

La importancia bien establecida de estimulación directa de la respuesta inmune nasofaríngea ha contribuido en gran parte a la opinión actual de que solamente la aplicación intranasal de una vacuna puede proveer por lo menos protección parcial Un problema general, con vacunas atenuadas vivas dadas intranasalemente es el hecho de que la vacuna no se queda en la nariz, sino que se fuga a través de estornudos, goteo y similares Esta es una situación no deseada por dos razones la mayoría de los virus de la vacuna se difunden en el ambiente y puede darse una sobredosis para asegurar un nivel suficiente de vacuna. Sin embargo, estas desventajas son aceptadas en la práctica dado que la motivación sobre la vacuna intranasal se considera actualmente la única manera de tener por lo menos protección parcial Hasta donde sabemos una cepa atenuada viva solamente se ha descrito en WO/87/00436 En esta solicitud una vez más establece que la vacuna intranasal/oral con Streptococcus equi es la única manera de obtener protección posible, dado que otras rutas de vacunación y/o el uso de vacunas de subunidades se conocen como inefectivas Sin embargo, la desventaja de esta vacuna es que es una mutante no encapsulada Por lo tanto, no se tiene respuesta inmune contra la porción de hpopolisacápdos de la bacteria Es un objetivo de la presente invención circunvenir los problemas encontrados con las vacunas atenuadas vivas mencionadas antes Sorprendentemente ahora se ha encontrado que el desafío de la opinión actual acerca de la importancia de la estimulación directa de la respuesta inmune nasofaríngea, una protección virtualmente perfecta contra paperas, se puede obtener si se administra sistemáticamente, en lugar de localmente, una cepa de Streptococcus equi atenuada viva Este nivel muy alto de protección es aún mas inesperado en vista del hecho de que el grado de protección obtenido cuando la misma cepa atenuada viva se da intranasalmente, es dramáticamente menos completa Por lo tanto, la presente invención provee el uso de una bacteria atenuada viva de la especie Streptococcus equi ostra la manufactura de una vacuna para la aplicación sistemática con el fin de combatir la infección por Streptococcus equi La aplicación sistemática se considera el opuesto a la aplicación local La aplicación local, la aplicación considerada actualmente como la única manera efectiva de vacuna contra Streptococcus equi, significa la aplicación de las vacunas sobre las membranas mucosas Las membranas mucosales están en contacto directo con el mundo externo y se encuentran v gr , en el tracto digestivo, la nasofapnge y la vagina Las aplicaciones locales severas actualmente están en uso aplicación intranasal oral e intravaginal La aplicación sistemática, la ruta de aplicación a la cual se refiere la invención, es una aplicación en la cual la vacuna se lleva dentro o debajo de la dermis del animal que sera vacunado Ejemplos bien conocidos de aplicación sistemática son la vacuna intramuscular y la aplicación subcutánea Otras rutas de vacunación sistemática son v gr , una vacuna intradérmica, vacuna intravenosa y vacuna intrapeptoneal La vacuna intradérmica se ha vuelto una manera atractiva de vacunación en la actualidad, debido a que la vacuna puede administrarse fácilmente rociando a través de una boquilla de alta presión que se coloca sobre la piel Otra manera atractiva de administración de la vacuna es la vacuna intramuscular En primer lugar debido a que se utilizan muchos practicantes para esta forma de vacunación Además, la vacunación intramuscular tiene la ventaja de que la vacuna se libera lentamente de los músculos en la sangre Por lo tanto el sistema inmune se acciona por la vacuna durante un tiempo extendido Por lo tanto, en una forma preferida la invención se refiere al uso de una bacteria atenuada viva de la especie Streptococcus equi para la manufactura de una vacuna para aplicación intramuscular Las vacunas atenuadas vivas con frecuencia tienen un nivel relativamente alto de virulencia dejada Mientras mayor es el nivel de virulencia, mayor es el nivel de inmunidad inducida Por otro lado, evidentemente la desventaja de niveles de alta virulencia es que el efecto patogénico de cepas de vacunas virulentas es mas estrecho al de la infección de campo Las vacunas de Streptococcus equi vivas en la practica significa el balance entre buena protección pero de reacciones adversas en el sitio de inmunización, o sin reacciones de inmunización pero baja eficacia de la vacuna. Por lo tanto, una manera de vacunar contra Streptococcus equi atenuado vivo que por un lado da suficiente protección, y por el otro lado evita las reacciones adversas en el sitio de la vacuna, es altamente conveniente. Ahora se encontró sorprendentemente que la vacuna en tejidos blandos, debajo de la mucosa, resuelve inesperadamente este problema. Cuando la vacuna atenuada viva se administra en dicho tejido, todas las ventajas de la ruta de administración sistemática se mantienen y adicionalmente no se encuentran o se encuentran algunas reacciones locales menores en el sitio de administración Los tejidos adecuados para dichas vacunas son v.gr , la boca Dichos tejidos tienen todos una capa mucosal La vacuna de estos tejidos se puede realizar sistemáticamente y por lo tanto debajo de esta capa La vacuna del tejido debajo de la mucosa generalmente se llama vacuna submucosal Por lo tanto, en otra forma preferida la invención se refiere al uso de una bacteria atenuada viva de la especie Streptococcus equi para la manufactura de una vacuna para aplicación submocosal Cuando toma lugar la vacunación en la boca, la vacuna se administra ventajosamente submucosalmente en la mejilla, o en el labio superior o inferior. Alrededor de la boca, los labios de un caballo son el lugar más fácil de vacunar desde el punto de vista del manejo de animal Por lo tanto, en una forma más preferida la invención se refiere al uso de una bacteria atenuada viva de la especie Streptococcus equi para la manufactura de una vacuna para la aplicación labial. Como una cepa de Streptococcus equi atenuada viva, cada cepa se puede usar teniendo un carácter atenuado al nivel que no ocasione efectos laterales inaceptables. El carácter atenuado se puede obtener a través de los métodos de atenuación clásicos tales como crecimiento bajo diferentes temperaturas, crecimiento en presencia de agentes mutagénicos, radiación de alta energía, luz UV y similares. El carácter atenuado también se puede obtener por técnicas de ADN recombinantes, v.gr., la supresión de factores de virulencia. Durante la manufactura de la vacuna, también se puede agregar un vehículo farmacéuticamente aceptable. Un vehículo posible es una solución salina fisiológica, otro vehículo farmacéuticamente aceptable es por ejemplo, el medio de crecimiento utilizado para desarrollar la bacteria. Si se desea, también se incorpora un auxiliar y posiblemente uno o más emulsificadores tales como Tween ® y Span(R) en la vacuna viva. Los auxiliares adecuados son por ejemplo solubilisato de acetato de vitamina E, hidróxido, fosfato u óxido de aluminio (emulsiones de aceites minerales) tales como Bayol(R) y Marcol52<p y saporinas- Por lo tanto, en una forma más preferida de esta modalidad, además de la bacteria atenuada viva se utiliza un auxiliar para manufactura de dicha vacuna. En una forma aún más preferida de esta modalidad, además de la bacteria atenuada viva se utiliza otro patógeno o material antigénico de otro patógeno para la manufactura de dicha vacuna. Dicho patógeno puede ser v.gr., otra bacteria o un parásito. También puede ser de origen viral. Usualmente, el otro patógeno o material antigénico del mismo será un patógeno de caballo. Una vacuna que comprende dicho patógeno atenuado adicional, o material antigénico de otro patógeno atenuado tiene la ventaja de que induce protección contra varias infecciones al mismo tiempo. En una forma aún mejor, los patógenos o material antigénico de los mismos se seleccionan del grupo de agentes de fiebre Potomac. Rhodococcus equi, Clostridium tetanii, Mycobacterium pseudomallei, Streptococcus zoópidemicus, Virus de Estomatitis vesicular, Virus de enfermedad de Boma, virus de influenza de Equino, virus de enfermedad de caballo africano, virus de arteritis de Equino, virus de herpes de Equino 1-4, virus de anemia infecciosa, virus de encefamielitis de Equinos y virus de encefalitis Japonesa B. En una forma más preferida, la bacteria utilizada para la manufactura de la vacuna de acuerdo con la invención es la cepa de Streptococcus equi TW 928 como se describe la Solicitud de Patente Europea número 0786518. Esta cepa se ha depositado en relación con esta solicitud bajo el número CBS 813.95 con Centraalbureau voor Schimmelcultures, P O box 273, 3740 AG Baam, The Netherlands También hay varias maneras de almacenar Streptococcus equi atenuado vivo El almacenamiento en un refrigerador es v gr., un método bien conocido También con frecuencia se usa el almacenamiento a -70°C en una solución reguladora de pH que contiene ghcerol Las bacterias también se pueden mantener de nitrógeno líquido El secado por congelación es otra manera de conservación Las bacterias secadas por congelación se pueden almacenar y mantener viables durante muchos años Las temperaturas de almacenamiento para bacterias secadas por congelación pueden estar por arriba de cero grados sin perjudicar la viabilidad El secado por congelación se puede realizar de acuerdo con todos los procedimientos de secado por congelación normales bien conocidos Los aditivos benéficos opcionales, tales como v gr leche descremada, trehalosa, gelatina o albúmina de suero de bovino se puede agregar en el proceso de secado por congelación Por lo tanto, en una forma mas preferida, la vacuna, una vez manufacturada, está en una forma secada por congelación Las dosis que se pueden dar dependen parcialmente del nivel de atenuación Generalmente, las dosis que vanan entre 103 y 10 9 son dosis adecuadas La vacuna se puede administrar en principio en todos los músculos adecuados pero mas convenientemente se administra en los músculos del cuello y las patas traseras y delanteras EJEMPLOS Eiemplo 1: Preparación de vacuna atenuada viva La cepa de Streptococcus equi atenuada viva T2 928 se desarrolló bajo condiciones normales en medio que contiene: Triptosa 5.0 g Peptona de soya neutra 5.0 g Extracto de levadura 2.5 g Extracto de Res 5.0 g D-glucosa 10.0 g Ácido ascórbico 0.5 g Fosfato de B-glicerlol 19.0 g Sulfato de magnesio 7H20 0.25 g Agua destilada 1 litro Cuando se usó como una cepa atenuada viva, las bacterias se administraron en el medio mencionado antes. Cuando se da como una vacuna inactivada, las células primero se inactivaron en 0.02% de cloruro de benzalconio. Diseño experimental: Doce caballos (de 12-16 meses de edad) sin historia de paperas se dividieron en 4 grupos de tres caballos cada uno. El día 0, 21 y 42, los caballos del grupo I se vacunaron intranasalmente con 2x1ml de vacuna de S. equi viva conteniendo 1095 CFU/ml (1ml cada ollar) Los caballos del grupo II se vacunaron intramuscularmente en el cuello con 2 ml de la misma vacuna de S equi viva y los caballos del grupo lll se vacunaron intramuscularmente en el cuello con 2 ml de una vacuna de células completas inactivadas conteniendo 5x109 CFU/ml en auxiliar de saporina. Los 3 caballos del grupo IV se dejaron sin tratar como controles de confrontación no vacunados. En el día 56 los 12 caballos se confrontaron intranasalmente con 3ml de 109 3 CFU/ml de cultivo de cepa de S equi Árnica. Las temperaturas rectales se determinaron por lo menos dos veces a la semana antes de la confrontación y diariamente después de la confrontación Durante todo el experimento, un biotéctico observó diariamente a los caballos para cualquier anormalidad Después de cada vacuna, los caballos se observaron diariamente para reacciones locales o sistemáticas hasta que las reacciones hubieron desaparecido durante dos días subsecuentes El examen clínico por un veterinario se realizó regularmente antes de la confrontación y diariamente después de la confrontación A las 1 a 4 semanas después de la confrontación (dependiendo de los signos clínicos y/o condición) los caballos se mataron y se sometieron a investigación post-mortem completa con atención especial a los signos de paperas y se tomaron muestras para volver a aislar S equi Signos clínicos Un mes antes de la primera vacuna los caballos se alojaron juntos para intercambiar flora microbiológica El día de la primera vacuna los caballos no tuvieron signos clínicos o ligeros signos respiratorios superiores (v gr , descarga nasal) y además estaban en buenas condiciones. Después de las vacunas (hasta la confrontación) los caballos no tuvieron signos clínicos o los mismos signos del tracto respiratorio superior que antes de la vacuna Después de la confrontación los 3 caballos de control, los 3 caballos vacunados con vacuna viva intranasalmente así como los tres caballos que se vacunaron intramuscularmente con la vacuna inactivada, desarrollaron signos claros de paperas caracterizados por temperaturas altas repentinas, nodos linfáticos inflamados de la cabeza y el cuello y descarga nasal purulenta (en donde el último grupo parece ligeramente menor afectado comparado con los controles). En contraste notorio, los caballos con vacuna viva intramuscular permanecieron completamente libres de signos de paperas. Los únicos signos observados fueron signos del tracto respiratorio superior moderado ocasionalmente (es decir, algunos signos se observaron antes de la confrontación y/o vacunación) El sistema de clasificación clínico se describe en la tabla 1 Las clasificaciones clínicas se resumen en la Tabla 2 La clasificación clínica total después de la confrontación se obtiene por adición de las clasificaciones de cada día de observación después de la confrontación, para cada uno de los días de sobrevivencia Resultado como es claro a partir de la Tabla 2, la vacunación intramuscular con una vacuna de Streptococcus equi atenuada viva reduce los efectos clínicos de una infección de confrontación de Streptococcus equi virulento con 98%, mientras que la vacunación intranasal con la misma vacuna solamente reduce los efectos clínicos solamente con 26% La vacunación con células inactivadas de la misma cepa de vacuna reduce los efectos de confrontación con 39% La vacunación intramuscular con una vacuna Streptococcus equi atenuada viva da no contraria a la vacunación intranasal o vacuna con vacuna mactivada, una protección virtualmente completa contra infección con cepas de Streptococcus equi virulentas Streptococcus ß-hemolíticos en lavados nasales La primera semana después de la confrontación se aisló S equi en número bajos de solamente unos cuantos caballos Después, la frecuencia en números se incrementó fuertemente excepto por los caballos vacunados intramuscularmente vivos y parecieron correlacionarse con presencia de descarga nasal purulenta originando posiblemente abscesos de nodos linfáticos rotos La identidad de estos aislados se confirmó por la cepa de confrontación utilizando PCR Resultado: la aplicación intramuscular de vacunas de Streptococcus equi atenuadas evita el derrame de vacuna en el ambiente y provee mejores posibilidades de dosis Examen, bacteriología e histología Post-mortem Los hallazgos post-mortem confirmaron los hallazgos clínicos es decir los 3 caballos con vacunas vivas intramusculares parecieron completamente libres de signos microscópicos a microscópicos de paperas y excepto por el sitio de inyección de la vacuna S equi no se volvió aislar, mientras que los demás caballos (excepto por el caballo 35) mostraron uno o mas nodos linfáticos agrandados (fuertemente) y abscesados del cual se aisló S. equi. El examen microscópico de los nodos linfáticos retrofaringeos del caballo 35 mostraron que ese caballo también tuvo una linfoadenitis (moderada) de la cual se aisló S. equi. Resultado: los resultados post-mortem están completamente en línea con los hallazgos clínicos después de la concentración. Eiemplo 2: La vacuna labial submucosal de caballos con una vacuna de S. equi atenuada viva En este experimento se probó la seguridad y eficacia de una vacuna de cepa de S. equi viva administrada submucosalmente en el labio. Preparación de una cepa S. equi de vacuna para administración labial submucosal. El contenido de ampolletas de vacuna seca congelada se disolvió en 1.0 ml de agua destilada. Una dosis = 200µl de vacuna reconstituida. Para iniciar la vacunación la titulación de la vacuna reconstituida fue de 3.0x109 CFU/ml y vacunación de refuerzo 1.2x109 CFU/ml. Sistema de Prueba Animales: Se utilizaron para el experimento caballos tipo Shetland, seronegativos para S. equi, de 9-11 meses de edad, sin historia de paperas ESTABLECIMIENTO EXPERIMENTAL Vacuna/confrontación Después de un periodo de aclimatación de dos semanas, se vacunaron 5 caballos submucosalmente en el labio (2 inyecciones arriba del labio y 2 inyecciones debajo del labio, 200 µl por inyección) con la cepa de vacuna atenuada viva Otros 5 caballos no se vacunaron con la cepa de la vacuna A las 4 semanas después de iniciar la vacunación, las 5 vacunas se reforzaron como se describió antes A 2 semanas después de la vacuna de refuerzo, tos caballos se confrontaron intranasalmente con cepas de S equi Árnica Después de la vacunación los caballos se observaron diariamente para cualquier reacción sistemática o local Al final del experimento o antes en caso de signos clínicos severos, los caballos se mataron y se sometieron a investigación post-mortem Dos semanas después de las vacunas de refuerzo todos los caballos se confrontaron intranasalmente 2 ml de un cultivo fresco de 6 horas de cepa de S equi de tipo silvestre Árnica en medio M17 + glucosa en cada ollar El conteo viable se determino (inmediatamente después de la confrontación por conteo de placa El conteo viable fue de 7 7x108 CFU/ml Reacciones local y sistemática En el día de vacunación (justo antes), después 6 horas y regularmente durante el experimento, los caballos se observaron para reacciones sistemáticas y local Temperaturas rectales En el día -1, O (justa antes y 6 horas después de la vacunación), 1 y 2 después de cada vacuna y regularmente después de la confrontación (aún post-mortem), un biotécnico midió las temperaturas rectales RESULTADOS Reacciones de vacunación A las 6 horas después de la vacunación con la cepa de vacuna atenuada viva se encontró un incremento en la temperatura rectal Las temperaturas medias se incrementaron +1°C comparado con los controles a las 6 horas después de la vacuna y +1 7°C comparados con las temperaturas antes de la vacunación Las temperaturas fueron normales de nuevo al siguiente día Después de la vacunación los caballos parecieron tener buena condición y tuvieron un apetito normal y además del efecto sobre la temperatura rectal a 6 horas después de la vacuna no se observaron reacciones sistemáticas adicionales Después de ambas vacunas con la cepa de vacuna, se encontraron reacciones locales temporales La mayoría de las reacciones desaparecieron a las 3 semanas después de iniciar la vacunación y 2 semanas después de la vacuna de refuerzo Examen post-morten y bacteriología Cuando se realizaron examenes post-mortem, cambio que los caballos vacunados no tuvieron paperas y por lo tanto estuvieron protegidos Los demás caballos tuvieron paperas Es decir abscesos en los nodos linfáticos retrofapngeos de los cuales se volvió a aislar S. equi o nodos linfáticos retrofaringeos fibróticos que indica una etapa más crónica de paperas, en donde se resolvieron (parcialmente) los abscesos. No se encontraron residuos ni reacciones de tejidos locales en los sitios de la vacuna. DISCUSIÓN A partir de los resultados es evidente que una vacuna de Streptococcus equi atenuada viva induce la protección completa contra paperas (5/5 caballos completamente protegidos) mientras que los demás caballos tuvieron paperas. Después de la vacuna con la cepa atenuada, los caballos parecieron estar en una buena condición y tuvieron un apetito norma además de una elevación a la temperatura rectal a las 6 horas después de la vacuna, no se observaron reacciones sistemáticas adicionales. Además, después de las vacunas solamente se encontraron pequeñas reacciones locales temporales que se resolvieron completamente (no se encontraron residuos o daños/reacciones de tejidos locales post-mortem). CONCLUSIÓN La vacuna submucosal en el labio con cepa de vacuna atenuada viva indujo la protección completa contra paperas y es aceptable con respecto a seguridad.

Sistema de clasificación cl ínica Impresión general 0=Normal Tipo de Respiración 0=cost?lla-abdom?nal 1 =menos activa 2=l?geramente abdominal 2=l?geramente deppmido 4=abdom?nal 4=depnm?do 6=fuertemente abdominal 6=severamente deppmido Estridor 0=ausente Anorexia 0=normal 2=l?gera 4=perd?da de apetito 4=moderada Temperatura 0=<38 5 6=severa 1=38 6-39 0 Auscultación 0=normal 3=39 6-40 0 2=estertores ligeros 4=40 1-40 5 4=estertores secos o húmedos 5=40 6-41 0 6=area sin sonido 6=>41 0 Palpación linfática 0=normal Descarga nasal 0=ausente 2=l?geramente agrandada 1 =serosa 4=moderadamente agrandada 2=mucupurulenta 6=fuertemente agrandada o 3=purulenta roto (también es doloroso 1 (si es excesivo 1 punto extra) punto extra) Descarga Ocular 0=ausente Palpitación de laringe 0=s?n tos 1 = serosa 1=uno o dos toados 2=mucupurulenta 2=vapos tocidos 3=purulenta (si es doloroso 1 punto extra) (si es excesivo 1 punto extra) Palpitación de traquea 0=s?n tos Hinchazón de 0=ausente 1 =uno o dos tosidos garganta 2=l?gera 2=var?os tocidos 4=moderada (si es doloroso 1 punto extra i 6=severa Tos espontánea 0=ausente Régimen de 0=<35 2=despues de la inspección respiración (min ) 1=36-45 4=antes de la inspección 2=46-55 Debilidad 0=ausente 3=56'65 3=detectable al caminar 4=>65 6=rastra o salta para avanzar la pata debilitada (por cada articulación hinchada, 3 puntos extras independientes de debilidad Ta bla 1 Grupo Número Clasificación clínica total eutanizado/muerto Clasificación clínica total de de después de confrontación después del día después de confrontación Vacuna Caballo Cías total Media %reducc?ón de confrontación das/total media %reducc?ón vida 35 140 21 6.7 intranasalmente 38 294 218 26% 10 294 17 3 16% 39 220 14 15 7 vida 34 9 21 04 intramuscularmente 40 8 6 98% 21 04 0 3 99% 41 2 21 0.1 inactividad 37 168 21 8 0 intramuscularmente 42 249 182 39% 14 17 8 106 49% 45 129 21 6.1 control 36 156 16 9.8 43 295 296 0% 14 21.1 20.7 0% 44 436 14 31 1 División General de Clasificaciones Clínicas después de la Confrontación Tabla 2

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1 Uso de una bacteria atenuada viva de la especie Streptococcus equi para la manufactura de una vacuna para la aplicación sistemática con el fin de combatir infección por Streptococcus equi 2 Uso de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por que dicha bacteria se usa para la manufactura de una vacuna para aplicación intramuscular 3 Uso de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada por que dicha bacteria se usa para la manufactura de una vacuna para aplicación submucosal 4 Uso de acuerdo con la reivindicación 3, caracterizado por que dicha bacteria se usa para la manufactura de una vacuna para aplicación labial 5 Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-4, caracterizada por que ademas de la bacteria atenuada viva se usa un auxiliar para la manufactura de dicha vacuna 6 Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1-5, caracterizado por que ademas de la bacteria atenuada viva se utiliza otro patógeno atenuado o material antigénico de otro patógeno para la manufactura de dicha vacuna 7 Uso de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizada por que dicho otro patógeno atenuado o material antigenico de dicho otro patógeno se selecciona del grupo de agente de fibra Potomac, Rhodococcus equi, Clostridium tetanu, Mycobacterium pseudomallei, Streptococcus zoópidemicus, Virus de Estomatitis vesicular, Virus de enfermedad de Borna, virus de influenza de Equino, virus de enfermedad de caballo africano, virus de arteritis de Equino, virus de herpes de Equino 1 -4, virus de anemia infecciosa , virus de encefamielitis de Equinos y virus de encefalitis Japonesa B . 8. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 -7 , caracterizada por que la bacteria usada para la manufactura de dicha vacuna es la cepa Streptococcus equi TW 928 , depositada bajo el número C BS 813.95. 9. Uso de acuerdo con las reivi ndicaciones 1 -8, caracterizada por que además en la manufactu ra la vacuna se seca por congelación . RESU MEN La presente invención se refiere al uso de bacterias atenuadas vivas de la especie Streptococcus equi para la manufactura de vacunas para la aplicación sistemática con el fin de combatir infección por Streptococcus equi.