MXPA98002759A - Metodos para inhibir el inhibidor 1 del activadorde plasminogeno - Google Patents

Abstract

Se describe un método para inhibir al inhibidor 1 activador de plasminógeno, que comprende la administración a un humano en necesidad del mismo, de una cantidad efectiva de un compuesto que tiene la fórmula (I), en donde R1 y R2 son independientemente hidrógeno, -CH3, (a) o (b), en donde Ar es fenilo opcionalmente sustituido;R2 se selecciona del grupo que consiste de pirrolidina, hexametilenimino, y piperidino;o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

MÉTODOS PARA INHIBIR EL INHIBIDOR 1 DEL ACTIVADOR DE PLASMINÓGENO ANTECEDENTES DE LA INVENCION El sistema fibrinolí tico juega un papel clave en el mantenimiento del balance hemostático normal. Un factor crítico en este sistema es el inhibidor I del activador del plasminógeno (PAI-1), el cual reduce la habilidad endógena para eliminar la fibrina al inhibir los activadores de plasminógeno, tales como el activador de plasminógeno tipo tisular (tpA) . Los estudios han documentado que las elevaciones de PAI-1 están asociadas con el riesgo incrementado de trombosis venosa profunda. Además, las elevaciones en PAI-1 se encuentran en pacientes que sufren de infarto del miocardio y de septicemia. Debido a que la capacidad fibrinolí tica deteriorada está asociada con el riesgo cardiovascular incrementado, la disminución de PAI-1 debe dar como resultado la cardioprotección . De hecho, estudios recientes sobre el análisis de los niveles de PAI-1 en mujeres pre- y post-menopaúsicas en el Estudio de Progenie de Framingham han demostrado que las mujeres REF: 27000 post-menopaúsicas tienen niveles notablemente más altos de PAI-1, los cuales pueden ser reducidos a niveles premenopáusicos con terapia con estrógeno. Esta reducción en el efecto de PAI-1 se cree que contribuye al efecto completo de la terapia de reemplazo de estrógeno sobre el riesgo reducido de enfermedad cardiaca.

Mientras que PAI-1 puede ser producido en una variedad de tejidos, niveles sustanciales son secretados por una célula endotelial vascular. El endotelio vascular constituye un órgano principal que funciona en la regulación de la coagulación de la sangre, la inflamación y el intercambio de fluidos y mediadores entre el compartimiento intravascular y los tejidos parenquimatosos . Como tal, la función adecuada del endotelio es crítica para la homeostasis completa. Debido a que PAI-1 puede ser incrementado en células endoteliales en respuesta a ciertos estímulos, incluyendo citocinas, esto contribuye a un estado disfuncional que puede dar como resultado defectos de la coagulación, inflamación vascular local y sistémica, y aumento en la progresión y ruptura de la placa aterosclerótica . Estos efectos pueden dar como resultado además, condiciones que incluyen infartos del miocardio, trombosis venosa profunda, y trombosis intravascular diseminada.

Debido al control local de PAI-1 en la interfaz célula endotelial/plasma, que juega un papel importante en muchos procesos patológicos, los agentes que inhiben la expresión de PAI-1 en el endotelio, podrían ser útiles en el tratamiento de las condiciones tales como sepsis, heridas o daños que involucran daño tisular mayor y trauma, síndrome de la respuesta inflamatoria sistémica, síndrome séptico, choque séptico y síndrome de disfunción de órganos múltiples (incluyendo DIC) así como infarto del miocardio, trombosis venosa profunda, trombosis intravascular diseminada, ruptura de la placa aterosclerótica y sus secuelas asociadas. Además, debido al papel crítico de la fibrina en la biología de las células tumorales, los agentes que modulan PAI-1 pueden encontrar uso como agentes anti-metastas icos .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Esta invención proporciona los métodos para inhibir el inhibidor 1 activador de plasminógeno, que comprende el administrar a un humano en necesidad del mismo, una cantidad de un compuesto de la fórmula I ( i ) en donde R1 y R3 son independientemente hidrógeno, O I I -CH3, -C- (alquilo de 1 a 6 átomos de carbono), o O -C-Ar, en donde Ar es fenilo opcionalmente sustituido; R2 se selecciona del grupo que consiste de pirrolidino, hexametilenimino, y piperidino; y las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere al descubrimiento de que un selecto grupo de 2-fenil-3-aroilbenzotiofenos (benzotiofenos ) , aquellos de la fórmula I, son útiles para inhibir PAI-1.

Los métodos de uso proporcionados por esta invención son practicados al administrar a un humano en necesidad del mismo, una dosis de un compuesto de la fórmula I o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, que sea efectivo para inhibir PAI-1 o una condición fisiológica asociada con un exceso del mismo. El término "inhibir" incluye su significado generalmente aceptado, el cual incluye la prohibición, prevención, restricción, y disminución, detención, o reversión de la progresión de la severidad o un síntoma resultante.

El raloxifeno, un compuesto de esta invención en donde éste es la sal de clorhidrato de un compuesto de la fórmula I, R1 y R3 es hidrógeno y R es 1-piperidinilo, es una molecular reguladora nuclear. Se ha mostrado que el raloxifeno se enlaza al receptor de estrógeno y se pensó originalmente que era una molécula cuya función y farmacología era aquella de un antiestrógeno, y que éste bloqueaba la habilidad del estrógeno para activar el tejido uterino y los cánceres de mama dependientes del estrógeno. Por supuesto, el raloxifeno bloquea la acción del estrógeno en algunas células; sin embargo, en otros tipos 'celulares, el raloxifeno activa los mismos genes que el estrógeno y muestra la misma farmacología, por ejemplo, osteoporosis , hiperlipidemia . Como resultado, el raloxifeno ha sido denominado como un ant i-estrógeno con propiedades agonistas-antagonistas mixtas. El perfil único que muestra el raloxifeno y que difiere de aquel del estrógeno, se piensa ahora que es debido a la activación y/o supresión única de diversas funciones génicas por un complejo de raloxifeno/receptor de estrógeno, en oposición a la activación y/o supresión de genes por el complejo de estrógeno/receptor de estrógeno. Por lo tanto, aunque el raloxifeno y el estrógeno utilizan y compiten por el mismo receptor, la consecuencia farmacológica de la regulación del gen de los dos, no es fácilmente predicha y es única para cada uno.

En general, el compuesto es formulado con excipientes, diluyentes o portadores comunes, y comprimido en tabletas, o formulado como elíxires o soluciones para la administración oral conveniente, o administrado mediante las rutas intramuscular o intravenosa. Los compuestos pueden ser administrados transdérmicamente, y pueden ser formulados como formas de dosificación de liberación sostenida y similares .

Los compuestos utilizados en los métodos de la presente invención pueden ser elaborados de acuerdo a los procedimientos establecidos, tales como aquellos detallados en las Patentes Norteamericanas Nos. 4,133,814, 4,418,068, y 4,380,635, todas las cuales se incorporan por referencia en la presente. En general, el proceso comienza con un benzo[b]tiofeno que tiene un grupo 6-hidroxilo y un grupo 2- (4-hidroxifenilo) . El compuesto inicial es protegido, acilado y desprotegido para formar los compuestos de la fórmula I. Los ejemplos de la preparación de tales compuestos se proporcionan en las Patentes Norteamericanas descritas anteriormente. El fenilo opcionalmente sustituido incluye fenilo y fenilo sustituidos una o dos veces con alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, hidroxilo, nitro, cloro, fluoro o tri (cloro o fluoro ) metilo .

Los compuestos utilizados en los métodos de esta invención forman ácidos por adición de sales o bases farmacéuticamente aceptables, con una amplia variedad de ácidos y bases orgánicas e inorgánicas, e incluyen las sales fisiológicamente aceptables, las cuales son frecuentemente utilizadas en la química farmacéutica. Tales sales son también parte de esta invención. Los ácidos inorgánicos típicos utilizados para formar tales sales incluyen los ácidos clorhídrico, bromhídrico, yodhídrico, nítrico, sulfúrico, fosfórico, hipofos fórico y similares. Pueden también ser utilizadas las sales derivadas de ácidos orgánicos, tales como los ácidos alifáticos mono y dicarboxí lieos, los ácidos alcanoicos sustituidos con fenilo, los ácidos hidroxialcanoicos e hidroxialcandioicos, ácidos aromáticos, ácidos alifáticos y aromáticos sulfónicos. Tales sales farmacéuticamente aceptables incluyen de este modo las sales de acetato, fenilacetato, trifluoroacetato, acrilato, ascorbato, benzoato, clorobenzoato , dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, metilbenzoato, o-acetoxibenzoato, naftalen-2-benzoato, bromuro, isobutirato, fenilbutirato, ß-hidroxibutirato, butin-1 , 4-dioato, hexin- 1 , 4-dioato, caprato, caprilato, cloruro, cinamato, citrato, formiato, fumarato, glicolato, heptanoato, hipurato, lactato, malato, maleato, hidroximaleato, malonato, mandelato, esilato, nicotinato, isonicotinato, nitrato, oxalato, ftalato, tereftalato, fosfato, fosfato monoácido, fosfato diácido, metafosfato, pirofosfato, propiolato, propionato, fenilpropionato, salicilato, sebacato, succinato, suberato, sulfato, bisulfato, pirosulfato, sulfito, bisulfito, sulfonato, bencen-sulfonato, p-bromofenilsufonato, clorobencensul fonato, etansulfonato, 2-hidroxietansul fonato, metansulfonato, naftalen-1-sulfonato, naftalen-2-sulfonato, p-toluensulfonato, xilensulfonato, tartrato, y similares. Una sal preferida es la sal de clorhidrato.

Las sales por adición de ácido farmacéuticamente aceptables son típicamente formadas mediante la reacción de un compuesto de la fórmula Icón una cantidad equimolar o en exceso de ácido. Los reactivos son en general combinados en un solvente mutuo tal como éter dietílico o benceno. La sal precipita normalmente de la solución, dentro de aproximadamente una hora a 10 días y puede ser aislada mediante filtración o el solvente puede ser eliminado por medios convencionales.

Las bases comúnmente utilizadas para la formación de sales incluyen hidróxido de amonio e hidróxidos de metal alcalino y alcalinotérreo, carbonatos, así como aminas alifáticas y primarias, secundarias y terciarias, y diaminas alifáticas. Las bases específicamente útiles en la preparación de las sales de adición incluyen hidróxido de amonio, carbonato de potasio, metilamina, dietilamina, etilendiamina y ciclohexilamina .

Las sales farmacéuticamente aceptables tienen en general características de solubilidad aumentada en comparación al compuesto a partir del cual éstas son derivadas, y de este modo son frecuentemente más susceptibles a la formulación como líquidos o emulsiones.

Las formulaciones farmacéuticas pueden ser preparadas mediante los procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los compuestos pueden ser formulados con excipientes, diluyentes o portadores comunes, y formados en tabletas, cápsulas, suspensiones, polvos, y similares. Los ejemplos de excipientes, diluyentes y portadores, que son adecuados para tales formulaciones, incluyen los siguientes: rellenadores y extensores tales como almidón, azúcares, manitol, y derivados silísicos; agentes aglutinantes tales como carboximetilcelulosa y otros derivados de celulosa, alginatos, gelatina, y polivinilpirrolidona; agentes humectantes tales como glicerol; agentes desintegradores tales como carbonato de calcio y bicarbonato de sodio; agentes para retardar la disolución tales como parafina; aceleradores de la resorción tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes activos de superficie tales como alcohol cetílico, monoestearato de glicerol; portadores adsortivos tales como caolín y bentonina; y lubricantes tales como talco, calcio y estearato de magnesio y polietilglicoles sólidos.

Los compuestos pueden también ser formulados como elíxires o soluciones para la administración oral conveniente o como soluciones apropiadas para la administración parenteral, por ejemplo mediante las rutas intramuscular, subcutánea o intravenosa. Además, los compuestos son muy adecuados para la formulación como formas de dosis de liberación sostenida y similares. Las formulaciones pueden ser constituidas de modo que éstas liberen el ingrediente activo única o preferentemente en una parte particular del tracto intestinal, posiblemente en un periodo de tiempo. Los recubrimientos, envolturas, y matrices protectoras pueden ser elaborados, por ejemplo, a partir de sustancias poliméricas o ceras.

La dosis particular de un compuesto de la fórmula I requerida para inhibir PAI-1, o cualquier otro uso descrito en la presente, y de acuerdo a esta invención, dependerá de la severidad de la condición, de la ruta de administración, y de los factores relacionados que serán decididos por el médico que atiende. En general, las dosis diarias aceptadas y efectivas serán de aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 1000 mg/día, y más típicamente de aproximadamente 50 hasta aproximadamente 200 mg/día.

Tales dosis serán administradas a un sujeto en necesidad del mismo de una vez hasta aproximadamente tres veces al día, o más frecuentemente como sea necesario para inhibir de manera efectiva PAI-1, o cualquier otro uso descrito en la presente. Se prefiere usualmente administrar un compuesto de la fórmula I en la forma de una sal por adición de ácido, como es acostumbrado en la administración de productos farmacéuticos que poseen un grupo básico, tales como el anillo piperidino. Es también ventajoso administrar tal compuesto mediante la ruta oral. Para tales propósitos son disponibles las siguientes formas de dosis oral.

Formulaciones En las formulaciones siguientes "Ingrediente Activo" significa un compuesto de la fórmula I.

Formulación 1 ; Cápsulas de Gelatina Se preparan cápsulas de gelatina utilizando lo siguiente: Ingrediente Cantidad (mg/cápsula) Ingrediente Activo 0.1 - 1000 Almidón, NF 0 - 650 Polvo de almidón fluible 0 - 650 Silicona fluida de 350 0 - 15 centistokes Los ingredientes se mezclan, se hacen pasar a través de un tamiz de malla Norteamericana No. 45, y se llenan dentro de cápsulas de gelatina dura.

Los ejemplos de formulaciones específicas de cápsulas de raloxifeno que han sido elaboradas, incluyen aquellas mostradas en seguida: Formulación 2 : Cápsulas de Raloxifeno Ingrediente Cantidad (mg/cápsula) Ingrediente Activo 1 Almidón, NF 112 Polvo de almidón fluible 225.3 Silicona fluida de 350 1.7 centis tokes Formulación 3 : Cápsulas de Raloxifeno Ingrediente Cantidad (mg/cápsula)^ Ingrediente Activo 5 Almidón, NF 108 Polvo de almidón fluible 225.3 Silicona fluida de 350 centistokes 1.7 Formulación 4 : Cápsulas de Raloxifeno Ingrediente Cantidad (mg/cápsula: Ingrediente Activo 10 Almidón, NF 103 Polvo de almidón fluible 225.3 Silicona fluida de 350 centistokes 1.7 Formulación 5: Cápsulas de Raloxifeno Ingrediente Cantidad (mg/cápsula Ingrediente Activo 50 Almidón, NF 150 Polvo de almidón fluible 397 Silicona fluida de 350 centistokes 3.0 Las formulaciones específicas anteriores pueden ser cambiadas en cumplimiento con las variaciones razonables proporcionadas.

Una formulación de tableta se prepara utilizando los siguientes ingredientes: Formulación 6 Tabletas Ingrediente Cantidad (mg/tableta' Ingrediente Activo 0.1 - 1000 Celulosa, microcristalina 0 - 650 Dióxido de silicio, 0 - 650 ahumado Ácido esteárico 15 Los componentes se mezclan y se comprimen para formar tabletas.

Alternativamente, las tabletas que contienen cada una 0.01- 1000 mg de ingrediente activo, están constituidas como sigue: Formulación 7: Tabletas Ingrediente Cantidad (mg/tableta) Ingrediente Activo 0.1 - 1000 Almidón 45 Celulosa, microcristalina 35 Polivinilpirrolidona 4 (como solución al 10% en agua) Carboximetilcelulosa 4.5 sódica Estearato de Magnesio 0.5 Talco 1 El ingrediente activo, el almidón y la celulosa, se hacen pasar a través de un tamiz de malla norteamericana No. 45 y se mezclan perfectamente. La solución de polivinilpirrolidona es mezclada con los polvos resultantes, los cuales se hacen luego pasar a través de un tamiz de malla norteamericana No. 14. Los granulos producidos así son secados a 50-60°C y se hacen pasar a través de un tamiz de malla norteamericana No. 18. El carboximetilalmidón sódico, el estearato de magnesio, y el talco, que se hacen pasar previamente a través de un tamiz de malla norteamericana No. 60, son agregados luego a los granulos los cuales, después del mezclado, son comprimidos en una máquina tableteadora para producir tabletas.

Las suspensiones que contienen cada una 0.1 a 1000 mg de medicamento por dosis de 5 mL, se elaboran como sigue: Formulación 8: Suspensiones Ingrediente Cantidad (mg/5 mi) Ingrediente Activo 0.1 - 1000 mg Carboximetilcelulosa Sódica 50 mg Jarabe 1.25 mg Solución de ácido benzoico 0.10 mg Sabor c . s . s .

Color c . s . s Agua purificada hasta 5 mL El medicamento se hace pasar a través de un tamiz de malla norteamericana No. 45 y se mezcla con la carboximetilcelulosa sódica y el jarabe para formar una pasta suave. La solución de ácido 1 ?nzoico, el saborizante, y el color se diluyen con algo de agua y se agregan con agitación. Se agrega luego suficiente agua para producir el volumen requerido .

Ensayo de PAI-1 de células endoteliales Se prepararon placas para cultivo de tejido de 96 pozos con 5 x 104 células endoteliales humanas (HUVEC) por pozo en Medio de Crecimiento de Células Endoteliales de Clonetics (EGM) complementado con 2% de FBS. Después de la incubación por toda la noche a 37°C, el medio fue reemplazado con medio libre de suero (medio DMEM/F-12, 20 mM-HEPES, pH 7.5, 50 µg/ml de gentamicina, 1 µg/ml de transferrina humana y 1 µg/ml de insulina bovina) con o sin el compuesto 1, (donde Ri y R2 son hidroxilo, y R2 es pirrolidino ) , y con o sin IL-1-beta 1 nM. Después de la incubación toda la noche a 37°C, se probaron muestras del medio de cultivo para PAI-1 secretado utilizando ELISA para PAI-1 plasmático, Imubind (American Diagnostic Inc. #822/lS) .

Resultados Células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC) fueron tratadas con el compuesto 1, concurrente a la inducción de PAI-1 con IL-1. En experimentos iniciales con varios lotes de células obtenidas de un proveedor comercial (Clonetics), se encontró que no todos los lotes respondían al 17-beta-estradiol, y de este modo, no fueron utilizados en experimentos para determinar el efecto del compuesto 1, sobre la secreción de PAI-1. Como se muestra en la tabla 1, utilizando una línea que responde al estrógeno, se observó que el compuesto 1 redujo significativamente la inducción de PAI-1 por IL-1 a una concentración de 0.5 nM. Como se muestra en la tabla 2, utilizando un lote diferente de células que responden al estrógeno, el compuesto 1 inhibió la secreción inducida por IL-1 de una manera dependiente de la concentración. Estos datos demuestran que el compuesto 1 es un inhibidor muy potente de la inducción de PAI-1 proveniente de células endoteliales activadas, y debe dar como resultado un efecto cardioprotector , por ejemplo reducción en la incidencia de los eventos cardiovasculares, debido al aumento del potencial fibrinolítico . Además, el efecto positivo del compuesto 1 al reducir PAI-1 puede proporcionar usos agudos en condiciones en donde los niveles elevados están asociados con la patología.

Tabla 1. Efecto del compuesto 1 sobre la secreción de PAI-1 a partir de células endoteliales humanas Tratamiento Nivel de PAI-1 (ng/ml) ""*~"~ medio +/- SE, n=4) Sin 11-1 control 328 +/- 46 IL-1 735 +/- 11 IL-1 y compuesto 1 0.5 nM 521 +/- 52 Tabla 2. Respuesta de la concentración para el efecto del compuesto 1 sobre la secreción de PAI-1 a partir de células endoteliales humanas Tratamiento Nivel de PAI-1 (M) (% de inhibición; Compuesto 1 5 x 10" 9M 82 +/- 17 Compuesto 1 5 x 10"10M 65 +/- 8 Compuesto 1 5 x 10_11M 48 +/- 11 Compuesto 1 5 x 10"12M 22 +/- 4 Compuesto 1 5 x 10~13M -1 +/- 7 Compuesto 1 5 x 10_1 M 0 Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes:

Claims (3)

REIVINDICACIONES

1. Uso de un compuesto que tiene la fórmula si¬ guiente para la manufactura de un medicamento para inhibir el in — hibidor 1 del activador de plasminógeno al administrar el mismo a un humano en necesidad del mismo. (I) en donde R1 y R' son independientemente hidrógeno, 0 -CH3, -C- (alquilo de 1 a 6 átomos de carbono), -C-Ar, en donde Ar es fenilo opcionalmente sustituido; R" se selecciona del grupo que consiste de pirrolidina, hexamet i lenimino, y piperidino; o una sal y solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. El uso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto es la sal de clorhidrato del mismo.

3. El uso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto es o su sal de clorhidrato