MXPA97006654A - Ensayo de flujo lateral de lectura directa para elementos a analizar pequeños - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un método y dispositivo de ensayo para detectar pequeños elementos a analizar. Los resultados del ensayo pueden leerse directamente a partir del dispositivo que es un dispositivo de flujo lateral.

Description

ENSAYO DE FLUJO LATERAL DE LECTURA J RECTA PARA ELEMENTOS A ANALIZAR PEQUEROS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un ensayo y método de flujo lateral novedoso para detectar pequeños elementos a analizar. Los resultados pueden leerse directamente a partir del ensayo. Se puede'n detectar pequeños elementos a analizar para diagnósticos médicos mediante la utilización del dispositivo y método de la presente invención. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Aún cuando exis en numerosos inmunoensayos para la detección de pequeños elementos a analizar, hoy en día los productos existentes co er la lme e disponibles proporcionan resultados de inhibición competitiva "típicos", lo que significa una reducción de la señal con una concentra ión creciente del elemento a analizar. Sin embargo, el presente ensayo, mediante el método y dispositivo descritos aquí proporciona una señal incrementada con un incremento de la concentra ión del elemento a analizar. Ademas, los productos actualmente existentes comercialmente disponibles incorporan una zona de lectura que requiere que el usuario compare el resultado con una gama de colores. La presente invención describe un ensayo que proporciona una lectura múltiple. linea (s) adicional (e ) aparecen en concentraciones discretas de elemento a analizar.

La presente invención proporciona un ensayo y método que puede p oporcion una lectura directa de los resul ados de un ensayo de inhibición competitiva para pequeños elementos a anal i zar. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención =><a refiere a un ensayo de flujo lateral y a un método para detectar pequeños elementos a analizar. Par icul rmente, este ensayo es típicamente un ensayo de inhibi ión competitiva. Los resultados de este ensayo pueden leerse directamente a partir del dispositivo de ensayo. El dispositivo se contempla para su uso para detectar pequeños elementos a anali ar útiles en vanos tipas de pruebas de diagn sti o médico. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FISURAS La figura 1 es una representación esquemática de un dispositivo de la presente invención. La figura 2 es una representa i n esquemática de otra modalidad del dispositivo de la presente invención de conformidad con lo establecido en la figura 1. La figura 3 es una representación gráfica de la lectura instrumentada de la línea de lectura 1 en intensidad de pixel vs. Log (PCB). La figura 4 es una representa ión esquemática de los resultados de un ensayo de flujo lateral de lectura directa para PCB con* a) O ppm de elemento a analizar* b) ""'O y '5 ppm de elemento a analizar; c) 5 ppm de elemento a analizar; d) ,>5 y '50 ppm de elemento a analizar; y e> 5*0 ppm de elemento a analizar. DESCRIPCIÓN DFTAL LADA DE LA INVENCIÓN La presente invención enfoca hacia un método y dispositivo para detectar pequeños elementos a analizar. En una modalidad preferida de la presente invención, una muestra (es decir, un extracto a solución) de la cual sospecha que contiene un elemento a analizar específico se agrega a una preparación de anticuerpo ant ?-el emento a analizar que, con el elemento a analizar, constituye un par de enlace específico. A esta mezcla se agrega un reactivo que contiene un trazador como por ejemplo partículas de color revestidas con elemento a analizar o bien análogo de elemento a analizar. El elemento a analizar o bien análogo de elementa a analizar puede fijarse sobre las partículas coloridas directamente o bien a través de una molécula portadora. Las partículas coloridas contendrán también un indicador adicional que es un miembro de un segundo pa. r de enlace específico. Este indicador puede ser, por ejemplo, biotina. La mezcla de muestra, solución de anticuerpo anti-elemepto a analizar y reactivo que contiene partículas coloridas se aplica a un dispositivo de flujo lateral que contiene un soporte sólido (como por ejemplo una membrana de ni troce! ulosa ) que contiene tres áreas específicas: 1. Un ái-ea de adición de muestra; 2. Un é r&A de captura que contiene el elemento a analizar o bien análogo de elemento a analizar' inmovilizado en el área de captura. 3. Un área de lectura que contiene una o vanas Don , ca a zona en el área de lectura contiene uno o drici» de lo* siguientes: anticuerpo ant ?~tí3 ¿mentó a analizar inmovili ado, socio de enlace complementa io inmovilizado sobre el indicador c- la partícula colorida (por ejemplo antibiotina o bien avidina), y elemento a analizar o bien análogo de elemento a analiza inmovili ado. En el caso en el cual una muestra no contenga un elemento a analizar específico, una fracción del anticuerpo se enlaza con e] trazador como por <*- emplo partículas coloridas que contienen elemento a analizar o bien análogo de elemento a analizar. Solamente una pequeña población de partículas igran más allá del área de captura. El número mínimo de partículas coloridas debería estar disponible para desplazarse y enlazarse sobre materiales en la(s) zona(s) del área de lectura. En el caso en el cual la muestra contenga un elemento a analizar específico a determinar en el presente ensayo, algunos anticuerpos se enlazarán al elemento a analizar y menos estarán disponibles para enlazarse al elemento a analizar o bien análogo de elemento a analizar que contiene la-:-> partículas coloridas. Una población mayor de p rtícul s coloridas igran más allá d>sl raa. de captura para enlazarse en una ct " arias de las zonas del área de lectura. Conforme la muestra contien** cantidades cada vez mayores de elemento a analizar, cantidades cada vez mayores de partículas de elemento a analizar no enlazadas se encuentran libres de enlazarse a más z nas en el ár>~>a de lectura lo que resulta en una señal más fuerte o bien en la aparición de líneas adicionales o bien símbolos adicionales en el dispositivo de ensayo. Por consiguiente se pueden determinar los resultados en forma in trumentada y, de manera más ignificativa, en forma no instrumentada. El sistema de ensayo de la presente invención puede detectar pequeños elementos a analizar para diagnósticos méch os co o por ejemplo nutrientes (vitaminas), hormonas como por ejemplo estrógeno y progesterona, drogas de abuso, y péptidos, así como pequeños elementos a analizar de interés ambiental y agrícola como por ejemplo PCB y aflato* in . Otros elementos a analizar pequeños de interés pueden incluir, sin limitarse a ellos, metales menores y venenos como por ejemplo toxinas domésticas y fármacos terapéuticos. Una modalidad preferida del dispositivo de la presente invención se plantea en la figura 1. Un soporte sólido 1 que puede ser, por ejemplo, una membrana de ni trocelulosa , tiene un área 8 de adición de muestra; un área de captura 2 que tiene elemento a analiza a bien análogo de elemento a analizar inmovilizado ahí; y un área de lectura 3 que contiene, en esta modalidad, tres zonas. Sin embargo, se entenderá que esta área. de lectura de conformidad con la presente invención contiene al menos una o vanas zonas para propor ionar los resultados deseados y puede contener más que tres zonas o menos que t es zonas si se desea. En la moda lidad presentada en la figura 1, la zona 4 es una zona r de control que tiene un anticuerpo ant i -elemento a analizarirrelevante inmovilizado ah donde es un anticuerpo antielemento a analizar de un segundo elemento a analizar irrelevante diferente del primer elemento a analizar a determinar, y donde este elemento a analizar irrelevante se fi a sobre un trazador que puede ser, por ejemplo, una partícula colorida. El elemento a analizar írrelevante y e3 trazador se agregan a la solución/muestra a aplicar al presente dispositivo antes de la aplicación de esta mezcla de solución/muestra al área 8. Las otras zonas 5 y 6 en el Ar&a. de lectura tendrán un socio de enlace complementario inmovilizado ahí sobre el indicador en la partícula colorida. Este socio de enlace complementario puede ser, por ejemplo, neutrav idipa . El Ár&a 7 indica el extremo distante del soporte sólido (o bien banda de membrana de ni trocelulosa, por ejemplo) donde el ensayo llegara a su término.

La figura 2 presenta otra modalidad del dispositivo mostrado en la figura 1. En esta modalidad, el soporte sólido o bien banda 1 de la figura 1 se inserta en un bastidor (como por ejemplo un bastidor de plástico) 10. E3 bastidor 10 tiene un marco que tiene un orificio 11 ubicado en el extremo frontal del dispositivo, y una "ventana" de lectura 12 que abarca una sección del ár-ea de lectura 3 y zonas 4, 5 y 6 como se muestra en la figura 1. El marco de este bastidor 10 tiene también ?na "ventana" 16 rectangular en el extremó distante del bastidor de plástico se cubre el soporte s lido que se? empleará para ver el final del ensayo. Un marcador o trazador diferente puede agregarse a la muestra para permitir que el usuario pueda leer el final del ensayo viendo este trazador o marcador en la ventana ló). En l a modalidad del dispositivo planteado en la figura 2, una sección del área de adición de muestra puede observarse a través del orificio 31 y una sección del área de lectura puede verse a través de la ventana 12, así como zonas de presentación 4, ""» y 6. Sin embargo, el área de captura 2 no se encuentra visible a simple vista. Se encuentra debajo del bastidor 10 entre el orificio 11 y la ventana 12. El soporte sólido que se emplea en el ensayo es generalmente un éster de celulosa, con ni trocelulosa proporcionando resultados encepe i sn 1 mente buenos. Se entenderá que el término "nitrocel ulosa" se refiere a esteres de ácido e nítrico de celulosa que pueden ser ni rocel?losa sola, o bien un é et mi to de ácido nítrico y de otros á idos, partí cularmente á idos carboxi lieos alifáticos que tienen de l a 7 átomos de carbono, prefiriéndose el ácido acético. T le, soportes bólidos que se forman a partir de celulosa est n f icada con ácido nítrico solo o bien una ezc l a de ácido nítrico y otro ácido como por ejemplo ácido acético, se conocen frecuentemente como p3pel de ni rocelulosa . t Aún cuando la ni rocelulosa es un material preferido para la producción del soporte sólido, se entenderá que otros materiales que tienen un área superficial suficiente para soportar un aglomerante en una concentración de conformidad con lo planteado anteriormente pueden también emplearse para la producción de tales soportes sólidos incluyendo, sin limitarse a esto, nailon. El soporte sólido empleado en el ensayo es de preferencia en forma de hoja, y el sustrato en forma de hoja tiene generalmente la forma de una tarjeta, una banda de prueba o bien una varilla de medición, etc. Se entenderá sin embargo que otras formas se encuentran también dentro del espíritu y alcance de la presente invención. El trazador de la presente invención puede, por ejemplo, ser una partícula colorida. Una partícula colorida preferida que es una bolsa que incluye un colorante o bien otra sustancia colorida como marcador, mientras que el trazador, cuando se emplea en el ensayo, se encuentra visible sin destrucción de la bolsa p ra liberar la sustancia colorida. La bolsa puede ser cualquiera de una amplia gama de bolsas, incluyendo, sin limitarse a ellos, eritrocitos intactos, eritrocitos fantasmas, liposomas (de pared única, llamados a veces vesículas, o bien mu 1111 amela res ) , m icracápsul ** de polímero, por ejemplo, las elaboradas mediante coacerva ión, o bien polimeri ación mtrafacial, etc. t Microcápsulas de polímero se producen mechante procedimientos conocidos en la técnica excepto que la soluci n en la cual las microcápsulas se forman incluye también un marcador por lo que la parte interna de la icr cápsul de polímero incluye el marcador. La preparación de tales microcápsulas se presenta, por ejemplo, en "Microencapsulat ion Processes and Applications" (Procesos y Aplicaciones de Microencapsulación) , editado por Jan E. Vandegger (Plenum Press 1974) que se incorpora aqui por referen ia . Co o se sabe en la técnica, los liposomas pueden prepararse a partir de una gran variedad de 3 íquidos, incluyendo fosfolípidos, 1 icol íp idos, esteraides, esteres de alquilo de cadena relativamente larga, por ejemplo fosfato de lquilo, esteres de ácido graso, como por ejemplo, le i tina, aminas grasas y similares. Una mezcla de materiales grasos puede emplearse, como por ejemplo una combinación de e*.tero?de neutro, un a fífilo cargado y un fosfol í pudo. Los ejemplos de fosfolípidos incluyen lecitina, es f ingomiel in , di palmi toi 1 fosfat idi ICCDI i na , y similares. Los esteroides pueden incluir colesterol, colestapol, anesterol, y similares. Los compuestos a fifí li os cargados p>ueden contener en general de 12 a ZC> átomos de carbono y pueden incluir esteres de mono 3 qu 11 fosf to o bien día Iqu 11 fosfato o bien una alqui lamina, por ejemplo, di et i 1 fosfato, r esteap lamina , hexadeci 3am? na , di lauri 1 fosfato, y similares. Las bolsas de liposoma se preparan en una solución acuosa que incluye el marcador por lo que las bolsas incluyen el marcador en l a parte interna de las mismas. Las bolsas de 1 iposo as se preparan fácilmente mediante agitación vigorosa en 13 solución, seguido por la remoción de marcador del exterior de l a bolsa. Para la preparación de los liposomas, véase Patente Norteamericana No. 4,342,826, Publicación Internacional PCT No. WO 80/01515, Patente Norteamericana No. 4,539,376 y Patente Norteamericana No. 4,522,803 que se incorporan aquí por referencia. El trazador que incluye la partícula colorida puede también producirse mediante el uso de una dispersión acuosa de un colorante o pigmento hidrofóbico, o bien de núcleos de polímeras revestidos con tal colorante o pigmento. Tales trazadores se describen con mayores detalles en la Patente Norteamericana No. 4,373,932, que se incorpora aquí por r ren í . Ejemplos de partículas que pueden emplearse en la presente invención incluyen, sin limitarse a ellos, ferptina, f icoep r i ña , o bien otras proteínas de ficabilis, metales precipitados • • bien insolubles o bien aleaciones firec ip i tadas o bien insolubles, pigmentos fúngales, de algas o bien bacterianos o bien derivados como por ejemplo clorofila bacteriana, materiales vegetales o bien derivados y similares. Las partículas coloridas visibles pueden ser fiartículas poliméricas visibles, como por ejemplo partículas de poliestireno coloridas de forma esférica (es decir, cuenta ) . Por consiguiente, el proceso de la presente invención puede ser el siguiente para un ensayo para un pequeño elemento a analizar específico: se mezcla un anticuerpo anti-elemepto a analizar con trazador co o por ejemplo partículas coloridas que contienen el elemento a analizar o bien análogo de elemento a analizar en su superficie, así co o una segunda molécula (como por ejemplo biotina) también sobre la superficie y una muestra que contiene el elemento a analizar. Durante la formación de un complejo entre el anticuerpo ant i-elemento a analizar y el elemento a analizar o bien análogo de elemento a analizar en las partículas, entre más elementos a analizar se encuentran presentes en la muestra, más partículas coloridas no se aso iarán con el complejo (e= decir, es la fracción libre). La mezcla se aplica después a un dispositivo de flujo lateral de la presente invención, q?e consiste en ?n soporte sólido como por ejemplo una banda de nitrocelulasa sobre la cual se deposita una. línea ele elemento a analizar en un área de captura, y una o vanas zonas en una área de lectura. Conforme a la muestra penetra en el soporte, el complejo es demasiado grande p ra fluir, de tal manera que permanece en el' extremo frontal del soporte. Las partículas "libres" fluyen por la banda. Las partículas que tienen ant i -elemento a analizar enlazado a ellas estarán atrapadas por la línea de elemento a anali ar» El resto de las partículas puede ser atrapado por la avidina <o bien neutravidi na o bien estrepavidina ) . Entre mayor el número de partículas "libres", más oscura se vuelve la línea de avidina o bien las líneas de avidina. Si existen vanas lineas de avidina, se puede también contar las líneas como medición de la concentración de elemento a analizar en la muestra. El elemento a analizar puede, como establecido arriba, ser cualquier pequeña molécula o familia de moléculas, como por ejemplo difenilos pol íclopnados (PCB), fármacos de abuso, hormonas esteroides, etc. Si existen análogos de elemento a analizar que se enlazan a anticuerpo anti-ele ento a analizar es una afinidad menor que lo hace el elemento a analizar, pueden colocarse en la superficie de las partículas para optimizar la interacción con el elemento a analizar en la muestra y el anticuerpo apt i -elemento a analizar-, en vez del anticuerpo fijándose sobre las par ículas. Si no hay elemento a analizar en l a muestra, todas las partículas se enlazan al complejo, y/o están atrapadas por la línea de elemento a analizar en el área de captura en el soporte sólido. Si esta línea se encuentra escondida íes deci , bajo el bastidor de p á t?co como se muestra en la figura 2), no se lee ninguna señal en el área de lectura y en la o las zona(s) de la misma. Conforme se incrementa el elemento a analizar en la muestra, se forma una cantidad menor de complejo, y más partículas se encuentran "libres", lo que provoca una lectura positiva. La ventaja de emplear un aglomerante como por ejemplo biotina para lograr el atrapamiento de las partículas "libres" es que se enlaza a una molécula como por ejemplo avidina con una afinidad extremadamente alta y que el enlace ocurre muy rápidamente. Puesto que el elemento a analizar a determinar es, para este ensayo, una molécula pequeña, puede fijarse químicamente sobre un vehículo para su fijación sobre la superficie de partícula y/a la línea de elemento a analizar en el área de captura en el soporte sólido. El siguiente ejemplo tiene el prop sita de ilustrar pero no de limitar de ninguna manera la presente invención.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 ENSAYO DE PC*B DE LECTURA DIRECTA REACTIVOS: 1. Se preparó un conjugado de análogo de PCB y de gamma globulina de conejo (Conjl). 2. El conjugado fue acoplado con partículas de lá'ex azul carboxi mediante EDC (l-et?l-3(3 di e i laminopropí 1 ) carbodi imida . La suspensión de látex fue marcada con biot na mediante reacción con N-hidroxi s?cc ínimi dob íot i n . 3. Se purificó anticuerpo anti-PBC proveniente de suero por cromatografía en agarosa de proteína A. 4. Se preparó una solución e anticuerpo anti-hCG purificado para el sistema de control. 5. Se acopló hCG a las partículas de látex azul car-box i para el sistema de control. 6. Se preparó una solución al VA de eptssina B para un indicador de colorante de fin de ensayo. PROCEDIMIENTO: 1. S& cortó una banda de membrana de ni trocel?losa dej 0.7 x 8.2 cm. 2. Se aplicó ?na línea de Conjl a la membrana de nitrocelulosa (área de captura). 3. Se aplicó una línea de solución de anticuerpo anti-hCG a 3a membrana de ni trocelulosa (zona de control dentro del área de lec ura), 4. Se aplicaron dos líneas de Conjl mezclado con neutravidina a la membrana de ni rocelulosa (dos zonas de área de lectura). 5. Una línea de solución de en tos ina al VA B se aplicó cerca del extremo distante de la banda para indicador de fin de ensayo. 6. La banda fue secada durante minutos a una temperatura de 45ßC y se sujetó un cojín de espuma en el extremo de la muestra. 7. La banda fue insertada en u bastidor con un orificia ubicado en e3 ár&a de muestra, una ventana en el ^ &a de lectura (incluvepdo la zona central v dos otras zonas), v una ventana el extrem* distante de la banda para leer el marcador de fin de ensayo. 8. Se colocaron con pipeta 20 µL de extracto de etanal en un tubo. 9. Se colocaron con pipeta 50 µL de anticuerpo apti-PCB en un regulador acuoso en el tubo y se mezcló. 10. Se colocaron con pipeta 10 µL de una suspensión de partículas de látex hCG y partículas de látex Conj 1-b?ot?na en el tubo, se mezclaron y se incubaron durante 5 minutos a temperatura ambiente. 11. Toda la suspensión se agregó al área de muestra de la banda (en el bastidor). 12. Después de llenar la ventana de fin de ensayo con col or ro o, se leyeron los resultados que fueron los siguientes: A. Lectura visual de líneas múltiples (se muestra en la fi ura 3) . i. Lina línea de control visible: 0 ppm de PCB muestra en l fi ura 3 ) . li. Una línea de control más una línea de lectura ( igual o superior a la línea de control en cuanto a la intensidad): 5 ppm de PCB (se muestra en la figura 3c). Existe una segunda lectura de intensidad menor que la línea de control . iii. Una lí ea de control más dos línea de lectura (iguales o superiores a la línea de control en cuanto a intensidad): 50 ppm de PCB íse muestra en la figura 3e ) . La figura 3b muestra resultados para elementos a analizar ubicados entre 0 y 5 ppm; y la figura 3d muestra resultados para elementos a analizar entre 5 y 50 ppm. B. Lectura visual de línea única (esta versión debe tener una zona (línea) de lectura única dentro del área de lectura) i. Una línea de control visible: 0 ppm de PCB ii. La intensidad de la línea de lectura se comparó con una gráfica de intensidad. C. Lectura instrumentada en 3 ínea única (esta versión debe tener una zona (línea) de lectura única dentro del área de lectura con o sin una línea de control en el área de lectura ) i. La reflectancia de la línea de lectura se determinó con un espectrofató etro de reflectancia. Se leyó la concentración de; PCB (0, 0.5, 3, 5, 10 y 22 ppm). La absorbencia obtenida a partir de la línea 1 de lectura de cada banda se examinó con Sigma Sean Image. Se determinó un valor de pi el para cada banda y se gráfico contra el r logaritmo de PCB (ppm). Los datos aparecen en la siguiente Tabla I. TABLA I PCB ppm Log (PCB) Valor de pixel 0.5 - . 1 16.3 3 ,477 50,4 3 .477 48.7 5 .699 54.3 10 1 68.8 22 1.342 81.6 22 1.342 78.7 Estos datos se grafican en la gráfica que apa rece en la figura 4. Una regresión lineal de X ~ log (PCB) e Y = valor de pixel proporcionó r = 0.99.

Claims (10)

1. REIVINDICACIONES 1. Un proceso para determinar la presencia o ausencia o cantidad de un elemento a analizar en una m?e=tra, que comprende: a) suministrar un soporte sólido donde dicho soporte sólido tiene tres áreas que comprenden: (i) un área de adición de muestra; (íi) un área de captura; y r (iii) un área de lectura que tiene al menos una zona, donde dicha área de captura tiene elemento a analizar o bien análogo de elemento a analizar inmovilizado ahí, donde dicha al menos una zona de dicha área d<=*1 lectura tiene inmovilizado ahí un socio de enlace complementario pa ra un indicador en un trazador-; y donde además dicha área de adición de muestra se encuentra en el ex remo frontal de dicho soparte sólido; b) poner en contacto el área de adición de muestra con la muestra de la cual se sospecha que con iene un elemento a analizar, donde dicha muestra ha sido mezclada con una preparación que contiene anticuerpos anti-ele ento a analizar o bien anticuerpos antianálogo de elemento a analizar y trazador donde dicho trazador se encuentra cubierto con elemento a analizar o bien análogo de elemento a analizar y un indicador que puede fijarse sobre dicho socio de enlace complementario; c) hacer fluir di?_ha mezcla de muestra y sol li ión a lo largo de la vía de flujo del soporte sólido a partir del área de adición de muestra hacia el área de captura a través de3 área de lectura hacia el extremo distante del soporte sol ido; y d) detectar la presencia, ausencia a bien cantidad de trazador en una o vanas zona ( s ) en el área de lectura en función de la cantidad de elemento a analizar en la muestra. r
2. 2. El proceso de la reivindicaci n í donde dicho trazador es un primer trazador, donde dicha área de lectura tiene al menos dos zonas, donde la primera zona es una zona de con) rol que tiene anticuerpo apt i -e3 mento a analizar para un segundo elemento a analizar irrelevante, donde dicho segundo elemento a analizar irrelevante, fijado sobre un segundo trazador, se agrega a la muestra para propósitos de control, y donde además dicha segunda zona es una zona de conformidad con la reivindicaci n 1, y donde cualquier zona adicional es idéntica a la segunda zana.
3. 3. El proceso de la reivindicación i donde dicho soporte sólido comprende además un bastidor para dicho soporte sólido, dicho bastidor comprende un marco que rodea y cubre la totalidad del soporte sólido, dicho marco ti ne un orificio que se abre sobre el área de adición de muestra en el extremo frontal del soporte sólido, una ppmera ventana en el marco para ver el área de lectura de soporte, y una "O segunda ventana en el marco para ver- el extremo distal del soporte; y donde además dicha mezcla de muestra se encuentra ert contar o con dicha área de adición de muestra mediante el vaciado de dicha mezcla a través de dicho orificio en el marco del bastidor.
4. 4. El proceso de 3a rei indicación 1 donde otro trazador se agrega a la mezcla para detectar el final del ensayo viendo r la segunda ventana en el marco del bastidor q?e cubre el soporte sólido,
5. 5. El proceso de la rei indicación 2 donde dicho soporte sólido comprende además un bastidor para dicrho soporte sólido, dicho bastidor comprende un cuadro que rodea y cubre la totalidad del soporte sólido, dicho marco tiene un orificio que se abre sobre el área de adición de muestra en el extremo frontal del soporte sólido, una primera ventana en el marco para observar el área de lectura del soporte, y una segunda ventana en el marco para observar el extremo distal del soporte; y donde además dicha mezcla de muestra se encuentra en contacto con dicha área de adición de muestra mediante el vaciado de dicha mezcla a través de dicho orificio en el cuadro del bas idor.
6. 6. El proceso de la rei indicación 2, donde se agrega un tercer trazador a la mezcla para detectar el final del ?1 ensayo viendo la seyun a ventana en el marco del bas idor que cubre el soporte sólido.
7. 7. Un conjunto de elementos para determinar la presencia, ausencia o cantidad de un elemento a analizar en una mues ra, que comprende: un soporte sólido que tiene una vía de flujo y sec?enc íal ente, tres áreas que comprenden: (i) un área de adición de muestra; (11) un área de captura; y (???> un área de lectura que contiene al menos una zona, donde dicha ^ a de captura tiene elemento a analizar o bien análogo de elemento a analizar inmovilizado ahí, donde dicha al menos una zona tiene un socio de enlace complementario p ra un indicador en ?n trazador inmovilizado ahí; y donde además dicha área de adición de muestra se encuentra en el extremo frontal de dicho soporte sólido; y una preparación a agregar a dicha muestra, dicha preparación contiene anticuerpos apti-elemento a analizar o bien anticuerpos antianálogo de elemento a analizar y el trazador, donde dicho trazador se encuentra revestido con elemento a analizar o bien análogo de elemento a analizar y dicho indicador.
8. 8. El conjunto de elementos de la rei indicación 7 donde dicha área de lectura tiene al menos dos zonas, donde la primera zona es una zona de control que tiene anticuerpo para un segundo elemento a analizar irrelevante que es un elemento a analizar de control, y donde además dicha segunda zona tiene socio de enlace complementario inmovilizado ahí para dicho indicador en dicho trazador y donde cualquier zorta adicional es la misma que la segunda zona, y el conjunto de elementos comprende además: una preparación adicion l a agregar a la muestra y preparación de 3a reivindicación 19, dicha preparación adicional contiene dicho segundo elemento a analizar i rr levante, donde dicho segundo elemento a analizar se encuentra fijado sobre un segundo trazador.
9. 9. El conjunto de elementos de la reivindicación 7 donde dicho soporte sólido comprende además un bastidor para dicho soporte sólido, dicho bastidor comprende un marco que rodea y cubre la totalidad del soporte sólido, dicho marco tiene un orificio que abre sobre el área de adición de muestra en el extremo frontal del soporte sólido, una primera ventana en el bastidor para ver el área de lectura del soporte, y una segunda ventana en el marco para ver el extremo distante del soporte.
10. 10. El conjunto de elementos de la reivindicación 8 donde dicho soparte sólida comprende además un bastidor para dicho soporte sólido, dicho bastidor comprende un marco que rodea y cubre la totalidad del soporte sólido, dicho cuadro tiene un orificio que abre sobre el área de adición de muestra en el extremo frontal del soporte sólida, una primera ventana en el marco para ver el área de lectura del soporte, y una segunda ventana en el marco para ver el extremo distante del soporte.