MXPA97006649A - Pozo revestido para muestras para su uso en ensayos de acidos nucleicos e inmunoensayos - Google Patents

Abstract

Se proporciona un pozo mejorado para muestra para llevar a cabo un proceso biológico o químico, como por ejemplo un ensayo deácido nucléico o bien un inmunoensayo, en una muestra líquida. El pozo para muestra incluye una tapa con una abertura restringida suficiente en cuanto a tamaño para recibir el extremo distante de una punta de pipeta desechable. La punta de pipeta se inserta inicialmente en la abertura para introducir una muestra líquida en el pozo para muestra, y permanece en la abertura durante el período de reacción de la muestra con un reactivo contenido dentro del pozo para muestra. De esta forma, la punta dela pipeta cierra efectivamente el pozo para muestra mientras se lleva a cabo la reacción, reduciendo asípérdidas de muestra debido a la evaporación y evitando una contaminación cruzada con muestras contenidas en pozos adyacentes para muestra. Los pozos para muestra pueden también construirse de materiales diferentes o bien incluir materiales diferentes que llevan a cabo funciones diferentes en el proceso biológico o químico, permitiendo asíel ensamblaje de grupos diferentes de pozos para muestra para formatos diferentes de ensayo.

Description

POZO REVESTIDO PARA MUESTRAS PARA SU USO EN ENSAYOS DE ÁCIDOS NUCLEICOS E I MUNOENSAYOS PEFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS Se presenta y reclama una materia relacionada en una solicitud de patente copendiente de Hugh V. Cottingham et al, No. de Serie 08/470,326, presentada el día 6 de Junio de 1995, para "Nucleic Acid Amp> 1 i f íc at ion Method and Apparatus", (Método y Aparato de Amplif cación de Acido Nucleico); en una solicitud de patente copendiente de Michael L. Lamos et al, No. de Serie 08/410,245, presentada el día 24 de Marzo de 1995, y titulada "Pip tte Tip" (Punta de Pipeta); en una solicitud de patente xpendiente» de Alien S. Reichler et al., No. de Serie 08/409,821, presentada el día 24 de Marzo de 1995 y titulada "System for Nucleic Acid Based Diagnostic Assa "; (Sistema para un Ensaco de Diagnóstico Basado en Ácidos Nucleicos); y en una solicitud de patente copendiente de Alien S. Rr->?chler et al., No. de Sene 08/409,405, presentada el día 24 de Marzo de 1995 y titulada "Nucleic A id A p] i ficat ion Method and Apparatus" (Método y Aparato de Amplifica ión de Á idos Nucleicos); y en una solicitud de patente copendiente de Hugh V. Cottingham et al, No. de Serie 08/213,304, presentada el día 14 de Marzo de 1994 y titulada "Nucleic Acid Ampl íf ication Method and Apparatus" (Método y Aparato de Amplifica ión de cidos Nucleicos), cuyas presenta iones se incorporan aquí expresamente por referencia. CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un pozo mejorado para muestras útil para llevar a cabo un proceso biológico o qifímico (como por ejemplo un ensayo de cidos nucleicos o bien un inmunoensayo) en una muestra de líquido, y se refiere particul rmente a un pozo cubierto para muestras que reduce la evaporación de 3a muestra y evita la contaminación cruzada entre muestras di ferentes cuando se usa en combinación con un aparato automático para manipular pipetas, con pozo ¡ip muestra elaborados d>? materiales diferentes o bi^n revestidos con materiales diferentes para permitir su uso para spectos diferentes de un proceso biológico o químico cuando se emplea con otros pozos para muestra en una placa o un formato de conjunto de elementos. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN En ensayos de diagnósticos clínicos se emplean frecuentemente procesos biológicos. Sin embargo, los pisos de los procesos se llevan a cabo frecuentemente en aireas diferentes de laboratorio y/o en recipientes o vasos diferentes, lo que requiere del transporte de muestras bi lógicas y reactivos y provoca un nesgo incrementado de contaminación de otras muestras clínicas. El nesgo de contamina ión es una preocupación especial cuando el proceso incluye reacciones de amplificación de ácidos nucleicos como por ejemplo Amplificaci n por Desplazamiento de Hebra (SDA), Amplificación por Desplazamiento de Hebra termof llica (tSDA), o bien Reacción en Cadena de Poli ersa (PCP), que pueden multiplicar una hebra única de Á idos nucleicos (Acido nucleico blanco) en millones de copias (am 1 icones ) . Mientras tienen una utilidad potencial extremadamente importante en el labotano de diagnósticos clínicos, las reacciones de amplificación de ácidos nucleicos pueden sin embargo contaminarse fácilmente con los productos de la amplificación (ampl icones) de reacciones de amplificación previas. Tales amp1 icones contaminantes pueden a su vez contaminar nuevas muestra.- que entran al laboratorio, provocando una indicación positiva falsa del sustrato a detectar en la muestra contaminada (por ejemplo, un diagnósitca incorrecto). El problema de la contaminación por a pl icones ha llevado al desarrollo de numerosas t cnicas de descontamina ión. Para ser efectivas, estas técnicas de descontaminación requieren generalmente q?e e3 paso de descontaminación de proceso se de antes del paso de amplificaci n, disminuyendo así en gran medida la posibilidad de reconocer un amplicon contaminante como ácido nucleico blanco durante el paso de amplificación. Reactivos de descontaminación y reactivos de amplificación frecuentemente no son compatibles entre ellos y pueden requerir de sus propias condiciones de reacción. A veces, si los reactivos para la descontaminación y la amplificación se combinan, se desac ivan entre ellos. En una solicitud de pantente copendiente, mancomunada de Hugh V. Cottingham et al, No. de Sene 08/213,304, presentada el día 14 de Marzo de 1994 y titulada "Nucleic Acid Ampl íf ication Method and Apparatus", (Método y Aparato de Amplificación de Ácidos Nucl icos) se describe un aparato que reduce o elimina estos problemas permitiendo la descontaminación y amplificación dentro de los límites de un solo módulo. En términos generales, el módulo presentado incluye un pozo para muestran para la introducción y remoción de una muestra biológica líquida, al menos una cámara de reacción en comunicación fluida con el pozo para muestra, una cámara neumá ica en comunica ión neumá ica con la cám ra de reacción y el pozo para muestra, y un orificio neumático en la cámara neumática para permitir la conexión del aparato a un dispositivo de aspiración/suministro neumático. La operación del dispositivo de aspiración/suminist o neumático provoca q?e la muestra biológica líquida fluya entre el pozo para muestra y la cámara de reacción de manera controlada. En una modalidad preferida, el módulo tiene generalmente una forma alargada, con el pozo para muestra y el orificio neumático en extremos opuestos y la cámara de reacción entre ellos. Los reactivos necesarios para las reacciones de descontaminación u amplificación se fijan en ubicaciones separadas, discretas, dentro de la cámara de reacción, y la muestra biológica líquida se desplaza en esta ubicaciones mediante la operación del dispositivo de aspiración/suministro neumático. El módulo descrito en documento No. de Serie 08/213,304, es especialmente adecuado para su uso en un aparato de procesamiento automati ado, puesto que las transf rencias necesarias de líquido y los movimientos de muestra pueden llevarse a cabo automáticamente usando un sistema automatizado de tr nsferencia de pipeta. El sistema au omu t i r-ído de transf ren ia de pjp>-?l3 puede ser de tipo convencional, aún cuando modifica iones son necesarias (incluyendo el suministro de una punta de pipeta neumática especializada) para permi ir la aspiración neumática y el suministro en el orificio neumático del módulo. Un ejemplo de tal aparato automatizado del procesamiento se presenta en una solicitud de patente copendiente, mancomunada de Alien S. Reichler et al, No. de Serie 08/409,821, presentada el día 24 de Marzo de 1995 y titulada "System for N?cleic Acid Based Diagnostic Assay" (Sistema para Ensayo de Diagnóstico Basado en Ácidos Nucleicos). En el módulo descrito en el documento No. de Sene 08/213,304, se emplea un dispositivo de control de flujo de líquido en forma de icrocanales para controlar el flujo de la muestra biológica líquida entre el pozo para muestra y la cámara de reacción, y se proporcionan más de una cámara de reacción, entre las cámaras de reacción mismas. Además de llevar a cabo la función deseada de control de flujo de líquido, los í rocana 3 es reducen también la evaporación de la muestra biológica líquida del módulo durante los pasos de descontamina ión y amplificación. Dada la cantidad relativamente pequeña de muestra biológica líquida empleada r (típicamente aproxi adamente 55 icrol i tros) , las temperaturas relativamente ltas empleadas durante ciertas partes del ro e o (hasta 8 °C) y la longitud del período de tiempo reqnfi ido para terminar las reacciones de descontaminación y amplificación (aproximadamente 1 y 2 horas, respe ti amente), la evaporación de la muestra puede representar un problema importante. En casos extremos, la magnitud de la evaporación puede ser tal que existe una cantidad insuficiente de muestra biológica líquida restante a recuperar y ensayar después de terminar los pasos de descontaminación y amplificación. Con el uso de micracanales adecuadamente di en ionados, sin embargo, el problema de pérdida por evaporación puede controlarse. Desafortunadamente, a pesar de sus ventajas, los micracanales requieren de tolerancias dimensionales relativamente precisas y son por consiguiente difíciles de fabricar. Como se muestra en una solicitud de patente copendi nte No. de Serie 08/213,304, el control del flujo entre cámaras de reacción sucesivas es posible sin el uso de (nicroeana les haciendo que la muestra biológica líquida fluya en forma de una unidad única no dividida (bolo) dentro del módulo. Sin embargo, se conservan microcanales en ambos entremos del aparato, en parte para reducir las pérdidas por evaporación en el pozo para muestra y en el orificio neumático. r Numerosas mejorías al módulo arpba descrito se presentan en una solicitud de patente Norteamericana copendiente, mancomunada de Alien . Reichler et al., No. de Serie 08/409,805, presentada el día 24 de Marzo de 1995 y titulada "Nu leic Acid A pl i f i cat ion Method and Apparatus" (Método y Aparato de Amplificación de cidos Nucleicos). Entre estas mejorías se encuentran el uso de una torre de muestra en comunicación fluida con el área de recepción de muestras del módulo para reducir la evaporación de la muestra biológica líquida en el orificio de muestra, y una torre neumática para reducir la evaporación de la muestra biológica líquida en el cuerpo neumático en el extremo opuesto del módulo. La torre de muestra y la torre neumática capturan vapores de liquido producidos por l a muestra biológica líquida mientras se encuentra sometida a procesos de descontaminación y amplifi ación dentro del módulo, produciendo por consiguiente gradientes de humedad que reducen la velocidad de pérdida por evaporación a partir del módulo. Las torres sirven también para cubrir las aberturas en extremos del módulo contra corrientes de aire, y para proporcionar superficies de condensación que devuelven los vapores de líquido al módulo en forma de gotas pequeñas condensadas. Debido a la torre de muestra y a la torre neumá ica, se reduce la necesidad de microcanal es dentro del aparato pa ra controlar las pérdidas por evaporación. A pesar de e tas mejorías, el módulo descrito en la solicitud copendiente No. de Sene 08/409,805 sigue presentando numerosas desventajas y limitaciones. Por ejemplo, aún cuando la torre de muestra y la torre neumática reducen efec ivamente la pérdida por evaporación de la muestra biológica líquida, sigue ocurriendo cierta pérdida puesto que el orificio de muestra y el orificio neumático están abiertos mientras se llevan a cabo las reacciones de descontaminación y amplificación y proporcionan por consiguiente una vía de escape pa ra vapores de líquido. Un problema relacionado es la liberación de aerosoles líquidos del módulo, que puede ocurri r durante operaciones automáticas de toma de pipeta. Cuando numerosos módulos se procesan en cercanía estrecha entre ellos en un aparato de procesamiento automatizado del tipo presentado en la solicitud copendiente No. de Serie 08/409,823, la formación de aerosol puede resultar potencia l ente en una contami ación cruzada entre muestras diferentes. Otras desventajas del módulo descrito en el documento No. de Sene 08/409,805 es que es difícil de fabricar (debido a su configuración especializada), y sus dimensiones, geometría y materiales deben sele cion rse cuidadosamente para permitir el movimiento ese do de bolo de la muestra de líquido dentro del área de reacción del módulo. La necesidad de un dispositivo neumático de aspiración/sumi istro para controlar el movimiento de la muestra dentro del módulo es también indeseable puesto q?e impone requerimientos adicionales al aparato au oma i o de procesamiento en duffití t» emplea el módulo. Por consiguiente es un objeto de la presente invención ofrecer un aparato para llevar a cabo un proceso biológico o químico, co o por ejemplo ensayo de ácido nucleico o bien inmunaepsaya, en donde se reducen o eliminan los problemas provocados por la pérdida por evaporación de la muestra 1 íquid . Es otro objeto de la presente invención ofrecer ?n aparato para llevar a cabo un proceso biológico o químico, como por ejemplo ensayo de ácidos nucleicos o bien mmunoensayos, en donde el potencial para contaminación cruzada entre muestras líquidas diferentes que reduce o elimina, especialmente cuando las muestras se están procesando simultáneamente y en cercanía estrecha entre ellas en un aparato de procesamiento automa i zado . Es un objeto adicional de la presente invención ofrecer un aparato para llevar a cabo un proceso biológico o químico, q?e es sencillo y económico para su fabricación, y que no presenta limitaciones en términos de geometría, dimensiones y selecci n de material. Es un objeto adicional de la pr-esente invención ofrecer ?n aparato para llevar a cabo un proceso biológico o químico, co o por ejemplo ensayo de ácido nucleico o bien inmuno sayo, que tiene una configuración similar a la configuración de tipos existentes de recipientes para muestras biológicas y químicas, y que puede por consiguiente fabricarse mediante métodos similares a los empleados actualmente. Es un objeto adicional de la presente invención ofrecer un aparato para llevar a cabo un proceso biológico químico como por ejemplo ensayo de ácidos nucleicos o bien un inmunoensayo, compatible con tipos convencionales de sistemas automatizados de toma de pipeta y que no requiera del uso de dispositivos especi lizados de aspi ación y suministros neumáticos para desplazar la muestra de líquido de un sitio de reacción a otro. Es otro objeto adicional de la presente invención ofrecer un aparato para llevar a cabo un proceso biológico o químico, como por ejemplo un ensayo de ácidos nucleicos o bien un inmunoensayo, que iene pozos diferentes para funciones diferentes, tales pozos se encuentran disponibles para su ensamblaje en configuraciones diferentes para ofrecer a un usuario opciones múltiples para configuración de ensayo o bien fabricación de conjuntos de elementos. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN De conformidad con la presente invención, las desventajas y limitaciones anteriores se evitan mediante la realización de un proceso biológico o químico, como por ejemplo un ensayo de ácidos nucleicos o bien un inmunoensayo, en un pozo para muestra cubierto o tapado que tiene una abertura restringida suficiente en cnanto a tamaño para re ibir el extremo distante de una punta de pipeta desechable. La punta de pipeta se inserta ínicialmente en la abertura para introducir una muestra de líquido en un pozo para muestra, y se deja dentro de la abertura mientras la muestra reacciona con un reactivo contenido dentro del pozo para muestra. De esta forma, la punta de pipeta cierra efectivamente el pozo de la muestra mientras se lleva a cabo la reacción, reduciendo así las pérdidas de muestra por evaporación y evitando la contaminación cruzada cort muestras contenidas en pozos para muestra adyacentes. En un aspecto por consiguiente la presente invención se enfoca hacia un aparato para llevar a cabo un proceso biológico o químico en una muestra líquida. El aparato comprende un pozo para muestra para recibir la muestra líquida, el pozo para muestra tiene una parte interna y una parte superior que comunica con 3a parte interna. Una tapa puede alojarse en la abertura superior del pozo para muestra, y tiene una abertura restringida menor que la abertura superior del pozo para muestra para comunicar con la parte interna del pozo para muestra. Se coloca un reactivo dentro de la parte interna del pozo para muestra para su reacción con la muestra líquida. En una modalidad preferida de la invención, el reactivo es adecuado fiara su uso en un ensayo de ácidos nucleicos y puede comprender como por ejemplo, un reactjvo de amplificaci n de ácido nucleico s& o o bien un reactivo de detección de ácido nucleico inmovilizado. En otras modalidades, el reactivo puede ser adecuado para su uso en un inmunoensayo, o bien adaptado para su uso en cualquier proceso biológico o químico deseado. En un aspecto, la presente invención se enfoca hacia un método para llevar a cabo un proceso biológico o químico en una muestra liquida. El método comprende los pasos de extraer la muestra líquida en una punta de pipeta, introducir una parte distante de la punta de pipeta en un pozo para muestra a través de una abertura restringida en el pozo para muestra, transferir una muestra liquida a partir de la punta de pipeta hacia el pozo para muestra, y llevar a cabo una reacción en la muestra líquida en el pozo para muestra mientras se mantiene la parte distante de la punta de» pipeta en la abertura restringida. De preferencia, las superficies externas de la punta de pipeta se acercan sufi ientemente a los bordes de 3a abertura de tal manera que 3a punta de pipeta forme un cierre para la abertura durante 3a reacción. Se prefiere también q?e el extremo distante de la punta de pipeta esté cerca del fondo del pozo para muestra, de tal manera que la muestra liquida pueda extraerse de nuevo en la punta de pipeta después de terminada la reacci n. En un aspecto adicional, I A presente invención se enfoca hacia un conjunto de elementos para llevar a cabo ?n ensayo de ácidos nucleicos en una muestra biológica líquida. El conjunto de elementos comprende una primera pluralidad de pozos para muestra que contienen reactivos de descontaminación de ácido nucleico secos, una segunda pluralidad de pozos para muestra que contienen reactivos de amplificación de ácido nucleicos secos y una tercera pluralidad de pozos para muestra que contienen reactivos de detección de ácido nucleico inmovilizados. El conjunto de elementos comprende también un soporte para soportar al menos uno de la primera pluralidad de pozos para muestra, al menos uno de la segunda pluralidad de pozos para muestra, y al menos uno de la tercera pluralidad de pozos para muestra.

De preferencia, pozos diferentes de la primera pluralidad de pozos para muestra contienen reactivos de descontaminación de ácidos nucleicos secos diferentes, pozos diferentes de la segunda pluralidad de pozos para muestra contienen reactivos de amplificación de ácido nucleico secos diferentes., y pozos di ferientes de la tercera pluralidad de pozos para muestra contienen rea ivos de detección de ácidos nucleicos inmovilizados diferentes. Con este arreglo, el usuario puede seleccionar los pozos para muestra específicos necesarios para un ensayo de ácido nucleico específico, ensamblar los pozos para muestra seleccionados en el orden requerido usando >-»! soporte, y colocar el -soporte en un aparato de procesamiento automatizado para llevar a cabo el ensayo deseado. En una modalidad preferida, cada pozo para muestra en la primera pluralidad, segunda pluralidad y tercera pluralidad de pozos para muestra comprende ?n pozo de una serie de pozos para muestra conectados sustanc íal ente idénticos entre ellos, y el soporte se adapta para soportar todos los pozos para muestra conectados en cada una de la primera pluralidad, segunda pluralidad y tercera pluralidad de pozos para muestra. De esta forma, se pueden llevar a cabo numerosos ensayos de ácido nucleico simul áneamente en muestras biológicas liquidas diferentes. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Los vanos objetos, ventajas y características novedosas de la presente invención se entenderán más fácilmente a partir-de la siguiente descripción detallada leída en combinación con los dibujos anexos, en donde: La figura 1 es una vista en perspectiva de un conjunto de pazos para muestra cubiertos construidos de conformidad con una modalidad preferida de la presente invención, los pozos para muestra están conectados entre ellos en hileras y llevados en un soporte adecuado para su uso en un aparato de p ocesa iento automa 1 r ado; la figura 2 es una vista en perspectiva similar a la figura 1, en donde pn=? hilera de pozos para muestra conectados muestra removida del soporte y las tapas se presentan removidas de los pozos para muestra de la hilera; La figura 3 es una vista en perspectiva similar a las listas de las figuras 3 y 2, con todos los pozos para muestra removidos para mostrar la configuración del soporte vacío; La figura 4 es una vista en corte tomada a lo largo de la línea 4-4 en 3a figura 2, que ilustra los detalles internos de los pozos para muestra y ciertas características de un aparato de procesami nto automatizado con el cual se pueden emplear los pozos para muestra y el soporte; La figura 5 es una vista en planta superior de una parte de un aparato de procesamiento automatizado en donde los pozos p ra muestra pueden colocarse, que muestra la confi uración de las placas de calefacción que se emplean para calentar las muestras líquidas dentro de los pozos para muestra; Las figuras 6-11 son vistas en secuencia que ilustran la forma como un ensayo de ácido nucleico puede llevarse a cabo usando los pozos para muestra de la presente invención; Las figuras 12 y 13 ilustran pozos para muestra modificados de conformidad cron la presente invención, que emplean tipos diferentes de estructuras de tapa; Las figuras 14 y 15 ilustran pozos para muestra modificados de conformidad con la presente invención, q?e emplean confi uraciones de fondo diferentes; y La figura 16 ilustra la forma en la cual los pozos para muestra de la presente invención pueden propor ionarse en forma de un conjunto de elementos que permite al usuario seleccionar los pasos de proceso específicos a llevar a cabo en una muestra líquida en ?n aparato de procesamiento autom tizado. En los dibujos, números de referencias similares se referirán a partes y componentes similares. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS MODALI ADES PREFERIDAS Un conjunto 20 de pozos p ra muestra múltiples construidos de conformidad con una mod lidad preferida de la presente invención se ilustra en las figuras 1-3. El conjunto comprende un soporte o bien charola 12, que tiene una forma generalmente rectangular, y una pluralidad de hileras 24 de pozos 26 de muestra conectados. En la modalidad preferida, cada hilera 24 incluye 12 pozos para muestra 26, divididos en 4 grupos 28 de 3 pozos de muestra 26 cada uno. Otras configuraciones de hileras y grupos de pozos para muestra son evidentemente posibles. Los grupos 28 se conectan entre ellos por medio de le>nguetas rompibles 30 proporcionadas en lados alternos de la hilera 24 de pozos para muestra, según se presenta. Al romper una o vanas de las lengüetas 30, el usuario puede reducir el número de pozos para muestra 26 en cada hilera 24 (en múltipl s de 3) para adecuarse a los requeri ientos del ensayo que se está realizando. Dentro de cada grupo 28, los pozos para muestra 26 están conectados entre ellos por medio de una brida 32 horizontal superior tejidos verticales (no visibles en las figuras 1-3) que se forman entre pozos adyacentes inmediatamente deba o de las bridas 32. Los pozos para muestra 26 tienen una forma cilindrica con superficies inferiores planas y partes superiores abiertas. Cada hilera 24 de pozos para muestra 26 se forman de preferencia de manera integral a partir de un material plástico adecuado, como por ejemplo pol íest ireno, aún cuando se pueden emplear otros materi les si se desea. Como se ha descrito hasta aquí, la construcción de la hilera 24 de pozos para muestra 26 es esencialmente idéntica a la descrita en la solicitud de patente copendiente antes mencionada No. de Sene 08/409,821, en donde los pozos se emplean en el paso de detección de un ensavo de ácido nu leico autom tizado. El soporte 22 se proporciona con una rejilla o reticulado 34 rectangular para recibir varias hileras 24 de pozos 26 de muestra conectados. Cada abertura rectangular 36 en la rejilla 34 tiene dimensiones adecuadas para recibir con fricción y sujetar las partes 38 de base cilindricas de dos pozos para muestra 26 adyacentes de hileras aledañas 24. Las aberturas de la rejilla rectangular son cortadas por paredes 39 en rebajes hacia abajo q?e se extienden en la dirección longitudinal del soporte 22. Las paredes 39 están proporcionadas con huecos 40 alternativos a 45°, co o se muestra en la figura 3, para da a las paredes algunas resiliencia, Gracias a estos huecos 40, cada pared 39 se divide en dos secciones q?e pueden doblarse independientemente entre ellas y en direcciones opuestas. Esto permite que las paredes 39 ejerzan una fuerza de agarre independiente en cada hilera 24 de pozos para muestra 26 independientemente, sin tomar en consideración la presencia o ausencpa de una hilera adyacente 24 de pozos para muestra 26 en el soporte 22. En la modalidad preferida, el soporte 22 aloja 8 hileras 24 de pozos para muestra 26 y por consiguiente lleva un total de 96 pozos p ra muestra individuales 26 cuando el soporte 22 se encuentra totalmente lleno. El formato de 96 pozos es el preferido puesto que es similar al formato de una placa de microt i tulac ion estándar de 96 pozos, aún cuando se pueden emplear si se desea otras configura iones. El soporte 22 se moldea de preferencia o bien se maqui a en una sola pieza a partir de un material plástico adecuado, co o por ejemplo pol íest i reno, aún cuando otros materiales pueden emplearse para adecuarse a los requerimientos de aplicaciones particulares. Específicamente, si el proceso llevado a cabo en e3 pozo para muestra requiere de calor, el soporte 22 puede r construirse de plástico resistente al calor o bien de otros materiales como por ejemplo G.E. ULTEM (mr) (pol leti lenunida ) o bien DELPIN (mr) disponibles en DuPont.

Alterna ivamente, las placas de calefacción que proporcionan calor a través del soporte a los pozos para muestra pueden diseñarse de manera al 3 imitar el & e del soporte que se callenta, permitiendo así el uso adecuado de materiales plásticos otros que plásticos resistentes al calor. Co o ejemplo, pero sin ser limitativo, el soporte 22 puede tener una longitud de apro imadamente 12.7 cm, una anchura de aproximadamente 8.38 cm y una altura de aproximadamente 1.27 cm. Las aberturas de rejilla 36 son rectangulares con dimensiones de aproximadamente 0.76 cm por 1.77 cm, y las dividen las paredes en rebajo 39 para crear aberturas cuadradas que tienen una dimensión de aproximadamente 0.76 cm de lado. Cada hi lera 24 de pozos de m?estrs 26 tiene aprox imadamente 0.9] cm de ancho (medido en los bordes externos de la brida 32) y aproxi adamente 1.27 cm de altura. Cada pozo para muestra 26 tiene una forma generalmente cilindrica con una parte ligeramente ahusada hacia dentro de aproximadamente 2ß desde la parte superior hasta la parte inferior. El diámetro de la abertura superior 42 del pozo para muestra 26 es de apro imadamente .66 cm, y el volumen interno del pozo para muestra 26 es de aproximadamente 4.25 icralitros (µL). Dé conformidad con un aspecto importante de la presente invención, se proporcionan dispositivos para cubrir o bien tapar los pozos para muestra 26 para reducir las pérdidas de muestra debido a la evaporación y íir-a evitar la contaminación cruzada entre las muestras cuando se usan los pozos para muestra 26 en un ensayo de ácido nucleico, inmunoensayo o bien otros procesos biológicos o químicos. En la modalidad preferida, esto se logra por medio de una hilera 44 de tapas 46 de hule o de plástico flexible, proporcionándose una tapa 46 para cada uno de los pozos de muestrs 26. El espacia iento de centro a centro entre tapas adyacentes 46 corresponde a l espac lamiento de centro a centro entre las aberturas 42 superiores respectivas de los pozos para muestra 26. Cada tapia 46 tiene una forma cilindrica o bien una forma de disco y se encuentra conectada a la siguiente tapa por medio de una lengüeta 48 rompible, de tal manera que la hilera 44 de tapas 46 pueda romperse o bien s?bdividirse por parte del usuario de la misma manera que la hilera 24 de pozos para muestra 26. En la parte inferior de cada tapa 46, se forma una parte 52 de tapón cilindrica resiliente integral. La parte de tapón 52 se di ensiona de tal manera que quepa apretadamente dentro de la abertura superior 42 del pozo para muestra correspondiente 26 cuando 3a tapia 46 se encuentra instalada en e3 pozo para muestra 26. Durante el uso normal del ensamble de pozos para muestra, todos los pozos para muestra 26 en e3 soporte 22 tendrán tapas 46 en sus aberturas superiores como se ilustra en la figura 1. Como será evidente -i parti de las figuras 1 y 2, cada tapia 46 se proporciona con un orificio por perforación 54 circular preformada que tiene un e e vertical y que se ubica en el centro de la tapa o bien cerca del centro de la tapa. Cuando la tapa 46 se encuentra instalada en el pozo 26 de muestra correspondiente, 3a abertura 54 comunica con la tapa externa del pozo para muestra 26 y proporciona una abertura de acceso a través de la cual los líquidos de muestra pueden introducirse en el pozo pa ra muestra 26 (o bien extraerse de dicho pozo) por medio de ?n apar-tt de tomas de pipeta manual o bien automático, como se describirá con mayores detalles más adelante. En la modalidad preferida, el diámetro de la abertura 54 es de aproximadamente 0,22 cm, lo que corresponde al diámetro de una punta de pipeta estándar desechable (que tiene una configura ión cónica) en un punto a aproximadamente 3,19 cm arriba del extremo distante ci la punt . La fi ura 4 es una vista en corte a lo largo de la línea 4.4 en la figura 1, que ilustra la forma cómo los pozos 26 de muestra pueden emplearse para rea l i zar un ensayo de ácido nucleico. En 3a figura 4 se muestran ocho pozos fiara muestra 26A-26H, y cada pozo para muestra es parte de una hilera diferente 24 de pozos para muestra en las figuras 3 y 2. En una aplicación típica, cada hilera 24 de pozos para muestra 26 en las figuras l y 2 3*=» adaptará para llevar a cabo un paso diferente del ensayo de- ári o nucleico, y un aparato de toma de pipeta manual o bien automático se emplea para transferir 3a muestra líquida a partir de cada pozo de una hilera dada a l pozo correspondi nte de la siguiente hilera. Por consiguiente, con el arreglo de 96 pozos presentado en las figuras 1 y 2, se pueden llevar a cabo simultáneamente ensayos de ácido nucleico en hasta doce muestras (una para cada posición de pozo en una hilera 24 dada), y para cada muestra los pasos del ensays pueden llevarse a cabo en hasta ocho pozos para muestra diferentes (lo q?e corresponde al número de hileras 24 de pozos para muestra 26 que se encuentran en el soporte 22). La figura 4 ilustra también vanas placas de calefacción y detectores ópticos que pueden emplearse en un aparato de procesamiento automatizado cuando se está llevando a cabo un e rayo de ácido nucleico, y la operación de estos lem nto será aparente en la descripción ig? i ente. Cort referencia a la figura 4, el primer pozo piara muestra 26A puede emplearse como ?n pozo de "pico térmico" en un ensayo de ácido nu leico. Por esta razón, el aparato ci procesamiento automático en el cual se coloca e3 soporte 22 tá equipado con una placa 56 de calefacción que se encuentra debajo del piozo para muestra 2¿>A. La placa de calefacción 56 se acti a para elevar la temperatura de la ?t»f-tr líquida en el pozo p.ra muestra 26A a apro: imadamente 80*C durante el pía so inicial de pico térmico. Puesto que algunos tipos de materiales plásticos (co o piar ejemplo pol íest i reno) pueden ablandarse o bien derretirse en esta temperatura, el pozo para muestra 26 puede elaborarse de ?n material de cerámica o bien de otro material resistente al calor si se desea. Esto se aplica también a todos los demás pozos para muestra en la hilera 24 a la cu l pertenece el pozo 26A de la figura 4. El segundo pozo para muestra 26B en la figura 4 servirá típicamente como pozo de descontaminación cuando se lleva a cabo un ensayo de ácido nucleico. El objeto del paso de descontaminación es desactivar los amp 1 icones contaminantes en la muestra líquida antes de llevar a cabo el paso de amplificación, de tal manera q?e se amplifique solamente la secuencia de á ido nucleico blanco deseada. Los reactivos de descontamina ión requeridos pa ra la reacción de descontami ación se proporcionan de preferencia en forma de un punto serado 58 que se adhiere sobre el fondo del pozo para muestra 26B. Se pueden emplear equipos convencion les para la formación de puntos en los pozos de micro i tu lac i n para formar los puntos 58 en una pluralidad de hileras 24 de pozos para muestra (incluyendo un soporte entero de hileras de pozos para muestra) durante el proceso de fabricación, y los puntos pueden secarse en un horno de secacio convencional ba o cond i io es ci temperatura y humedad controladas o bien 1 ?of 13 i za r-ití. Sin embargo, el método preferido para el secado de ciertos reactivos de descontaminación 58 es el secado le los reactivos en presencia de trehalosa co o se presenta en la Patente Norteamericana No. 4,891,339 y en la Publicación Internacional del Tratado de Cooperación sobre Patentes No. WO 87/00196, ambas propiedades de Quadrant Bioresources, Ltd. y que se incorporan aquí por referencia. Ert resumen, la técnica de secado preferida protege los materiales biológicos contra desnatur lización durante &1 secado e incluye el hecho de someter un sistema acuoso que contiene el material biológico a una temperatura superior al punto de congelación en presencia de trehalosa y en una cantidad comprendida entre 0.05 y 20*/í en peso en base al peso total del sistema acuoso. La trehalosa es un disecando que ocurre n turalmente, no reductor, conocido también co o al f -D-gl ucop i ranosi 1-a 1 fa-D-glucopí ranosi o . El secado en presencia de trehalasa puede ser el secado sencillo a3 aire, de preferencia bajo presión atmosférica. En el secado de los reactivos 58 d^> descontaminación, la tecnología de la t rehalo s-i es un sistema exrelente para el >w a o en el aso de reactivos a usar ert 3a presente invención. Los reactivos de descontaminación pueden proporcion se en cualquier forma adecuada, incluyendo (sin limitarse a ellos) un sólido co o por ejemplo película seca, pellas 1 lof i 11 ada , o bien papel impregnado con los reactivos. Puesto que? e3 paso de descontamina ión se 3 leva a cabo generalmente en una temperatura de apro imadamente 41°C o bien a una temperatura át, elevada, se proporciona ?na placa de calefacción 62 en el aparato de procesamiento automatizado, dicha placa se ubica deba o del pozo de descontaminación 26B. La placa de calefacción 62 se encuentra de preferencia separada de la placa de calefacción 56 puesto que esta última placa de calefacción opera a una temperatura más alta. Mechante la separa ión de las placas de calefacción 56 y 62, el pozo de descontamina ión 26B puede aislarse de la temperatura más alta q?e se aplica al pozo 26A de pico térmico, y por consiguiente el pozo 26B no requiere su elaboración de un material resistente al calor. El tercer pozo para muestra 26C en la figura 4 servirá típicamente co o po o de a pil i f icac i ón durante un ensayo de á i o nucleico. Para este propósito, ?n punto 60 secado que contiene reactivos de amplificación de ácido nucleico adecuado se adhiere sobre el fondo de un pozo para muestra 26C , como muestra. La tecnología de ena losa empleada para secar los rea i os. de descontamina ión 58 también una tecnología preferida para el secado e los reactivos de amplificaci n 60. Co o en el caso de los reactivos e r descontami a ión, los rea tivos de amplifica ión 60 pueden proporcionarle en cualquier adecuada, incluyendo (sin limitarse a ellos) un sólido como por ejemplo una película se*.ada, fifi la =- 11 of J 3 i zadas , o bien papel impregnado cort 3 os reactivos. En la modalidad preferida de la presente invención, 3 método de amplifi a ión empleado es 3 a Amplifica ión por Desplazami nto de Hebra, incluyendo Ampli icaci n por Desplazamiento de Hebra ter af í 3 ica . Sin embargo, se pueden emplear otras técnicas de amplificación, incluyendo Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR), Reacción en Cadena ci L i ga sa (LCP), amplificación basada en transcripción, replicaci?n e secuencia autososteni da (3SR), el sistema Qbeta replicada, la amplificación basada en secuencia de ácido nucleico (NASBA) , la reacción en cadena de reparación (RCP), y la amplificación de ADN boo erang (BDA) . Por ejemplo, durante el paso de amplificación de SDA, 3a muestra líquida ^ incuba durante apro imadamente 2 horas a una temperatura de aproximadamente 41 °C„ Para calentar 3a muestra líquida a la temperatura deseada, ^ proporciona una placa 64 de calefacción ert un aparato de procesamiento automatizado, y dicha p3aca se coloca deb-¿jo del pozo de amplific ión 26C , como se muestr-i. A 3 término del período de incubación, la eacción de amplifica ión se suspende mediante 3a operación de la placa de calefacción para elevar 3a temperatura de la muestra a apro imadamente 80"C durante apro i adamen e 5 minutos. El pozo íe amplifi aci n 26C puede elaborarse de un material de erá.m -í o bien otro mnlenal resistente al calor ar-, esi tir es a tempera t«?ra . Co o antea, la l^ --» de calefacción 64 i elabota cié preferencia f í ? amerp e separada de las placas de calefacción a ec n s de tal manera que los pozos para muestra asociados con las placas adyacentes no requieren de resistir a temperaturas elevadas. Con referen ia a la figura 4, los siguientes tres pozos para muestra 26D, 26E" , y 26F se emplearán típicamente para llevar a cabo pasos de detec ión de se uen ia blanco de ADN al concluir un ensayo de ácido nucleico. Fl número de pozos de detección empleado dependerá del tipo específico cié ensayo que se está llevando a cabo y del método de detección emp ea cío. En el presente ejemplo, se considera que el objeto del enrayo es d ectar 5C»c?enc í s ci ADN de b-tcilo de tubérculo en la muestra amplifi ada. En este caso, tres reacciones sepiaradas de detección se llevan a cabo cié preferencia en los pozos para muestra respe ti os 26D, 26E , y 26F. La primera reacción de detección, llevada a cabo en el pozo piara mues ra 26D es una reac i n de control de amplificación interne que determina si ha ocurrido una amplifica ión de ác ido nucleico en la muestra de líquido. La segunda reacción de detección, llevada a r abo en el piozo para mués) ra 26F e=, na reacción de "géneros" que detecta si una secuencia de ADN mi c robac ter i artes ha sido a pil i f ícacla . La tercera reacción de i ón, llevado a i a n en un pozo pa a muestra 26F, es una reacción de "e-sper: íes" que detecta cualquier secuencia e ADN de bacilo d*=> tubérculo en la muestra ampli i ada. Típicamente, 3 -i muestra a pilif icada es removida del pozo de amplifi a ión 2AC y es dividida después en tres partes iguales (alícuotas) por medies de un aparato de manipulación automática de pipetas, cada alícuota se suministra en uno de los pozos de detección 26D, 26E y 26F. Para afrec&r un volumen suficiente de liquides en cada uns de los pozos para muestra 26D, 26E y 26F , la muestra amplificada removida del pozo de am lific i n 26C puede me.i- i rse con un líquido inerte (como pior ejemplo una solución salina) despul s de íta'?et ni dividido n r 3 =5 pozos cié detecci n 26D, 26F y 26F . Los pp os de detección 26D, 26F , y 26F pue en s*=>r ya sea genér i eos "para varios tipos diferentes de secuencias cié ADN blanco, o bien específicos para un tipes particular de secuencia de ADN. Para crear pozos genéricos, las pía redes internas de los pozos de detección 26D, 26E y 26F están recubiertas durante la fabricación con un agente de captura secado ( t ípi i camente BSA b i ot i m 3 ada/estrep ta v i d iría ) , y las sondas ci captura espiecí icas y las sondas ele» detección se introducen des u lo» pozos pi ra muestra en forma líquida durante el ensayo usando un aparato e uta ni pi?lac i ón e pipeta manual o bien automático. Si se desean pozos específicos para blanco, las on as de u tura, y las sondas de dé - ió , están incluidas ert el reves imiento que se propon- i una en 1.5 paredes internas de los pozos piara, muestra durante el proceso de fabricación. ura t el paso de cletece ion de un ensayo de ácido nucleico, las muestras líquidas en los pozo=. piara muestra 26D, 26F y 26F se incuban durante uri período de apro: uña amente una hora a una temperatura de apro imadamente 33ßC después de la adición de las sondas de capitura y sondas de detección. Para calentar las muest as de líquido a la temperatura deseada, se proporciona una placa de calefacción 66 en el apsarato de proee-saín t ento automá ico ¿ se coloc-a deb jo los pozos para muestra ?6D, 26E v 26F. Fl u so de mu plica de calefacción 6 compartida e posible p??-ñto que los pozos para muestra 2< D, 26F y 26F se c lien an a la misma ;o temperatura; sin embargo, si esto no es e3 caso para un ensayo dado, se pueden emplear p 3 acras de calefacción separadas. El pases final en e3 proceso de detección es típicamente la adición de reactivo qu imi ol uminiscente liquides a 3 css pozos de detección 26D, 2¿>E y 26F . Esto mrluye también un paso de incubación (apro; imadamente 30 mi utos a 37*C) y produce luminis n ia dentro de 1 css micrapazcss 26D, 26E y 26F cuando el reactivo quimu o lumini cente reacciona con el material amplificado hi ridado q?e se ha nlazado a las pía e es internas tle los pozos de detección. Tal 1 u ini .ac re- 1 a que indica que una secuencia de á ido nu leico blanco Lia sido de tet tadj puede detectarse medí -inte la remoción del soporte "* del aparato de automatizado y colocarse en un 3 mi nómet ro convencional , Alternativamente, la detección de la 1'rn?? ni sic ene ía en l o -pozos de dwteccióp 26D , 2<bE y 26F puede llevarse a cabo dentro del aparato de procesamiento automatizado mismo, como se ilustra en la figura 4. Para lograr esto, los pozos de detección 26D, 26E y 26F se ha» n un material plástico transpia ren te de tal manera que 3 a lumi is ncia dentro de ad-t pozo pueda detectarse e: termínente. s tapas 6 pueden ser transparentes, pero no es necesario que sean ransparentes^. Se dirigen fibra -a óp icas 68, 70 72 través de los orificios en la placa de calefac ión 66 para que terminen en una relación frontal con los fondos de los pozos para muestra Z6D-26F. Los e:- t re os opuestos e las figuras ópticas 68, 70 y 72 se conectan a un -ais ema 74 de deteci ion op toel ec t rom L. o que detecta la pres n ia de luminiscencia en Ci a no ele los p>_,;oa de detección "6D— 6F y proporciona "na presentación >» lec ur adecuadla ,4 ] usu r ío. I 'i dos di imo* pozov. p r muestra 2?#B y 26H rtc> se emplean en la modalidad ilustrada, et o se p roporc i >if?au pi a. acomodar otros ipo de en-.a p-, e ¿i ielo nuc l icci o b?>-n i nmunoens-i os que pueden requerir e pasos a íe lesnale-- de I riS f e?'e¡-|> j e l íquido y. O re-» tlV S =- l> lu?i-? 1 >"- •> , (-i p»?iedon firoporc i nrru p?3 ->ca-? de calefac í ?órt 7? y ~^S at -< pc>,.os para itiuc -. I i a a ii lorrlá? 26G y "6H si 1 t •> i -==? > i r j r i — — , l levada - -i abo n fr>! r- pozos piara iHui-' l r'í i qui e ^ que 3a ome=t, ? a e 1 l qu i do s<- mintfpgs t tem e t -i lut .»:> ele- =d?-3. De ot. ra forma, ¿^ pueden elimirur la-" l3c-«s de ,-=? le í" = - ._ 1 ,',? , 76 y 78. La figura 5 es una vista de arriba que ilust ra el ar reglo preferido de l -> ?la> as de cale acc i n deb 4 jo del sopor- te 22 en la f igura 4. Er este arreglo preferido, cada una cíe las >?la, al e 1 a e. >n 5¿, 641 66, 76 , T'R ti.^p ' una. o >n f 1 iju r e 1 ón gener -11 mente pe ba ngu r, >. on una -¡ 31 u r a apro; unidamente igual a 3a Imtiji tu de UI? hj let - 24 de e» -- pp ra muestra 26 \ una anr hur-r; -j t'o t ota d a m ~d e igual al i ámetro cíe ] as ar ¡es ba--e 39 ele lo-. t?e>- -i-., ¡ ari .nue-.it -"'a 2í> 'o bien, en e3 caso de la placa de calefacc ión 66, un anchura sufic iente para entenderse a través cj l s par s de base 38 de fu leras sucesivas 24 ele pci-o-, p:-ra mues ra T "< , Otras conf i gi r 3>" iones alt rna i s de pilaca de '"a le f ace i ón r.-or? pessitile ?n>. luvepdo placas ej calefao ion ci r ul ar s i ndi i d?a 3 es para cada poza para muestra o b i n lañ ís e c a 3 ef ac •" i órt móviles capaces de c lt'iitjr'nP -' t mpera uras diferentes y o pueden c oloca > ->e ÜIJI J ele- hi leras cJi fet entes de pri-i p?- '3 ues ra , l -" f?b> -i > ópti as 68, 70, v 72 pa-"-ar? a través de las abertur s en la » ptl > as de >. 1 >j f ac •: i ón 66, sl 3S aberturas ien n un os i aro i erd"o de f tt 'i -. tli?l,¡ ?i igual a] eapai. i - -ni ent o de nt r o a centro ent, e los |i?v..?, i a m>>e:t? a 26 de n -. Ii. l r-- dad- 2 . rar a eie t e>. Lar lumi i enc i en los os íio;'íi? 26 de u t en ca?a una ele 3 a-, tu let * s 4 e pío., s de deíe. ión, J as placas 76 i n> luyen 12 f ibr as pi i. a.;, 7R , 12 f i t -->-:, ticas 7 o _, j ^ fibra ópt s 72. Las figuras 6-11 son viít.5 n secuencia que i lust ran J a forma cómo un en..ayo de >. ido nucleic puede Mevat ;e a cabo li ando la const ucc ión d>. poro i^í- ?íic>e.d r=< .tie jor ía de 3a pu esente inven i ón,, fn f i n. i r -, , ;,e nr, ., i der a iiue el =tjp í te 22 y lo-, .?S para muestra - s-.- instal an en ?>>t acia i -tt.-j d ?ro> .- --i n n au Lom 1 1 *- i i del ti o descri t p ? e i amen) >-• en rela i n con l a i g?t a 4. Hdem-*»?> de 3 :< s placa:, >; al ef ;?>", > .--,-. pu pu J arm-ru desc i t as - del --, i ? f. em a e detección ópi ica", el aparat » de procesamiento auto ati za incluirá í i ente un si stema au ma i zad de manipulac ión de pipetas ue puede aiiirijiii ñti .r y t i jifcfcri r l íqui os en forma program id i . Un si stema an orn ? I i '-do d m in i piu 3 -a>~ i ? ¡ 5 de p> i p?«> I -¡ adecuado es el i nstrumento de map?pu3a>" i ón de pipeta antoiiiHn TFCA modelo PSP 96*32 fabru do por TEC.f-ttt AG cié Hombreen, t il on, Suira . F l bra.-o -u . to a t i a o el sis e de m impn lac ion de p?p>et-?-s ??t> l y>~. un enssmbl.- .je eye>. tor que 3 l ^- una punt a de pipeta de l p-st ioi u ^erhabl í ( '.< SO. l ufit a 8? de p?p»'l--t ei. ?t> 1 e < 1 ;-; par te rente al de l a >: -iJ s lemfio - n las f iyin a-, t-j— 11 ) I ínfi? un t c on f i gnr ac i óu genet < 1 itter» te > onua, lms-ind se ¡ a ti r de un i-s el r e t o? ?i?"i de -¡p "o, i i?i :d -piien te >",„71 e fii en si i -"•• * ¡ pr * i o 8? •? ipr : i madaim- ni e <"• .O7 c en = ? e. irc-ii di stante 04. L a a de p»? eta 0<"< ->e l ab ra r ^fíi ni i a e pol ipropileno .utol a ,|j>3 e con ?m -Olumi-n u, ¡ mo de 3 itiicT'ol i 1 ?r> ' pt ^ , n ertc erd i a. equ i ia a con un tap n interno o inserto 86 de material de fi ltro cerca de su e;- I-cerno piró, i mo 87. » El material e fi H i o permi e que el 0 ire piase de ta 3 manera q?e los líquidos puedan e' traerse fior la ibertur ? ( .-.mnim at.-a.rse a par tir de d ich t a ertu a / efi el t-? r m di ctan e 84 de la punto de pipeta 80, pero bloques el ása t ele fluido-». El material ele f i l tr .e de-enbe con detal les en ur,? aol ic i ti.nj .Je patento 5 copenrl lent le Mi cha el l . L=?mcs=> fl 3. , No. d>> Ser i 08''41O,245, presentada el 24 de Marzo de 1995, y t itulada "Pipette Tip" (Punta de Pipeta) . Ert la f igura c , una u st ES biológica líquida -* ^n:,a ar Ita sido t a i r-f er i d i deaclo un re ..píente de ue^t c-i ( ni.s i lustrado) hacia el pu.O 26A de s i >. o térmico, Al real izar esta transf r nc ia, el apa rs to de manipul n- ión de f>?net -t au o a 1 zado desplaza el r i a te B4 de l a uní-, e i.iipeta RO - trs í de la a¡->>?. tura 54 en l -< l pa del LIO o 26f-? de pico t i mico y sigue pa i a b3 i >" l a ?>»nta .le 3 a n i pe t, a 80 en el piozo 26A hasta que el e< t re o di stante 84 se e . u>.?r?! ro jus o arr ib? e l i superf i ie interna de fondo del pozo. El diám t o |-, aberl.i . a 54 e,e oge de ta l manera que, . n indo 1 < piurd Í de 1 * pipe- ; P 'J •> 1 > • n- >-' e -t,a p raí. ion, la abet tura 5-3 e-3t,é s>-:?l a n>"" t a l>t. ot e |-f[ r a l o bien o luida por la u t e la pipeta 80. Pe nec ho, pior consigui nte, i-¡ pimita de ipe!* 8 (junto • o la a -16> iirv** como c ierre. o sel les del pozo 26A d spué de 3 a i r¡t, roeluc: - i ón de la muestra líquida 88. l a punta de pipeta 80 p r e en 3 a posición o- rada en la fiym a 6 =s l l argo del intervalo de i o t rmo, o ( u a te el cual e op ra 1 ¡ pl ac a de ale fac i ón 5 parí elevar 1-' --f..p ? , t nra 1 "t mi i . ¿I r ? l íquida 88 a una tem e a ura de apu'o; ím* da. men e5 , reduc tf. i'fp o el ?m? nadej -¡sí las pt?rd id-s de ue-d-r t por " _pn? C i oTi ui'Piifde >rí .te jjepíodO- El t 'S.-/} ¡ 1 q>_. ojo qoe pineda fo? n<a> - en el p co 76A nc ue sal ir- ,-|el p -o por 1 - piresertcia de la punta ele la pipeta 80, evitando así una contaminación cruzada con otras muestras líquidas procesadas pcsr el aparato de procesami nto automa 11 zads. Cuando termina el periodo de pico térmico, 3a muestra líquida es e¡ traída ci nuevo bacía la punta de pipeta SO por el apta ra tes de manipulación de pipeta autom tizado de tal manera que pueda transf rirse al siguiente pozes para muestra 26?P piara su descontaminación. Se» puede emplear una nueva punta de pipeta para esta trans rencia de muestra. En la figura 7, la muestra biológica líquida 88 tía sido t, r irafer i d-"-¡ ert el pozo de desc opt s m i óu 26B por el aparato de manipulación de pipeta automa izado. Comes ante*-, descrito n relación con la figura 6, el e, tremo dist int 84 de la pi?nta de ipeta 80 ha pasado a través de l a abe tur-a 54 en 3a tapia 46 del ptozo 26F¡, y ha entrado casi en contacto la superficie interna de fondo del pozo 26B , En esta. condición, la punta cié pipeta 80 cierra efe i amente el pozo de descontaminaci n 2613 del medio ambiente. Cuando la muestra líquida 88 se introduce en el pozo de descontaminaci n 26B a través de 3a punta de pipeta 80, se mezcla con los reactivos de descontaminación secados en el punto 58 y 3 os rehidrata. l pilar de calefacción 62 se opera pa ra elevar la temper ura de la muestra líq?icia 88 una tempiec ura de apros i madamente 41 °p, y"es.ta temperatura se mantiene durante un período de incubación de 7, apro:- uñadamente 50 minutos. Durante este intervalo, la punta de pipeta disponible 80 se mantiene en 3a posición ilustrada en la figura 7 para minimizar la pérdida de la muestra 88 por evaporación y para evitar el escape de aerosoles del pozo de descontaminación 26B. Cuando la reacción de desconta inación ha terminado, la placa de ca 3 facción 64 se desactiva y 3a muestra liquida 88 es e:-tra?da de nuevo en 3a punta de pipeta 80. En la fig?ia 8, 3a muestra líquida ha sido transferida desde el poso de descontamina ión 26P has a el piozes d amplificaci n 26C mediante la punta de i e 80„ Cuando la muestra de liquido 88 es íntrciduci . en el pozo de ampl i f i crac i n 26C , se mere" l a con los reactivos cié amplifica ión secados en e3 punto 6 y los rehidrata. La placa de c lef cción 64 se espera pata elevar la temperatura de la muestra líquida a apro:, i madamente 42'C, y esta temperatura se mantiene durante un período de incubación de aproximadamente 2 horas. Durante este intervalo, la punta de pipiet 80 permanece en la posici n ilus r-ada en la figura 8 para reduci la pérdida de la muest?-3 líquida por evaporación y para evitar 13 conta inaci n cruzada cort oras muestras, la reacción de amplific ci n se detiene mediante la operación de l placa de calefacción 64 fiara e3ev r 3a temperatura de la muestra l quida a 80°C urante aproM maclamertt e 5 minutos. spu s de3 pico térmico e 5 minutos (durante el cual la punta ele pipeta 80 permanece en la posición ilustrada), la placa de calefacción 64 s desactiva y la muestra de líquido 88 se e: trae en la punta de pipeta 80. Si se desea, el paso de puro térmico que determina la reacción de amplificaci n puede 3 levarse a cabo ert un pozes para muestra separado que ti n mejores características de resistencia, en lugar de llevarse a cabes en e] pozo de amplifica ión 26C. La parte ci te ción del ensayo de ?u i o nucleico, ue incluye los piozos de detección 2!6 , 26F y 26F , se muestra e*n l s figuras 9 - 11, En la figura 9, lodo o parte d las muestra 3 íquiela 88 ( la cual , en el 63 timo caso, se puede agregar una solución s lina .-, bi n otro 3 liuid inerte para mantener un volumen de muestra adecuado) tí i ci introduci o en el primer poi-o de detección 26D i cruda paredes internas está revestidas con r*aact?vo(s) cié captura secarles í =. ) . (Si se desea, partes o al i cuestas de la muestra SC pueden introducirse en los pozos para muestra 26E y 26F en este momento, comes se muestra ("método de a 1 ?c?otas" ) 5 lternativamente, puesto que las reacciones de detección son indepiend 1 entes entre el 3 as, la muestra entera 88 pu e transfet irse ele un pozo pa a muestra al si uien durante e3 procedimi nto de detecc ton), Sond-ta de -a lura adecuidas y sondas de detecci n adecuadas (en forma liquida) se obtienen después a parti de recipientes e:- tet no de reactivos 58 agregan a la muestra líquida 88 pior medio de la punta de pipeta 80. Se requiere de una nueva punta de pipeta piara la adición de cada sonda, para evitar la contaminación de los recipientes de reactivos. Después eje la adición de la sondas de captura y eletección, la placa de calefacción 66 se opera para elevar la temperatura ci la mue ra líquida, a aprox uñadamente 33°C, y esta temperatura se mantiene durante un periodo de incubación de apro;. uñadamente una hora. Durante este período, la ptunta de pupeta 80 permanece en la po te ion ilustrada ert la figura 9 para cerv3 r el pozo de detección 26B. Desfi s l período de i cuba ión, l a placa de c l f cci n 66 se desac iva y la muestra líquida 88 se remueve del poro de detección 26B por me io 3a punta de pipeta 80 y o bien se desecha (método de alícuotas) o bien se transfiere al siguí ert te pozo de tec i n 26F . Se puede llevar a catto un fiases de 3 -'ado (ya sea por medio de la punta de pipet 80 o bien por medio ele-1 una cabera de lavado separada) para remover cualquier muestra y reactivo restantes del picszcs de detección 26D. Es deja solamente el material que reaccionó el cual se encuentra unido a las paredeas internas del pozo ""6D. La pipd a ele pipeta RO 3e emplea después piara e: traer una cantidad de reactivo qu ímie lu i ru scente a partir de un re. luient reactives e; terno, y o^ra introducir el teac.1 ivo cjuími col?mi máten e en l peizo de detecci n 26D. (T pi amente, el volumen de reactivo quími col umi msc ente es de apiro:- i madamente tres veces el volumen de la alícuota de muestra que se ene ontraLsa en el pozo para muestra). La placa de calefacción 66 se opera pi ra incubar e3 reactivo qu fmíe o3 um im scente en el pozo de detección 26D a una temperatura 37°C durante aproximadamente 30 minutos. Durante este intervlao, el reactivo qu ímicolumi niscente reacciona cron cualquier material amplificado hilsrid do que pudo haberse aeihepdo sobre las pía redes internas del pozo de detección 26D, la luminiscencia resultante, que indica la detección de una secuen ia de acieio nucleico blanco, es detectada por el sistema de detección 74 de la figura 4 a través de> la fibra óptica 68. la punta de pipeta 80 pueeie permanecer en la posición ilustrada en 3a figura 9 durante e3 pe íodo de incubación qu ími col ?mi ni r nte, si se desea, a¡'m cuando esto nes es esencial puesto que 3a pérdida pior evaporación y la contaminación r_ ru .zada no es una preocupación importante en esta etapa. En la modalidad preferida de la invención, la reacrción de detección llevada a cabo ert el pozo de detección 26P es una reacción de control de amplificación interna que m n- <a i ha ocurrido una amplifica i n de ac i do nucleico en la muestra liquida 88. E-.to se sigue por una reacción de "g n réis" qu se lleva a cabo ert el pozo de e ci n 26E, y pcir una reac i n de "especies" que se realiza en el ?'?3t3,o pozo de detección 26F . Estas reacciones de detección se ilustran en las figuras > y 31, respecti amente. La sene de operaciones 3 levacias a cabo durante las reacciones de género y especie son las mismas que las descritas 5 previamente en relación con la figura 9, excepto que se emplean sondas diferentes de captura y detección. En la descripción anterior de 335 figuras 6-11, se ha considerado que los pozos eie detección 26D, 26E y 26F son del tipo "genérico", requiriendo de sondas de captura y !<"> detección específicas que se obtienen de» recipiente.» externos ele rea tivos. Sin embargo, las sondas de cap tu ra y detección pueden piropiesrc lona G-S co o parte del revestimiento en las paredes internas de los p»ozos de detección 26D, 26E y 26F, junto con el o los reactivoís) de captura se.-ado(s) 1 p ra minimizar el número ele pasos de transf renci de líquidos que deben llevarse a cabo pior piarte del aparato de transferencia au omatizada de pipietas. En otras modalidades alternativas, 3a captura y la detección de numerosos blancos pueden ocurrir si ul áneamente ert un soles psozo mediante el 0 uses de sistemas diferentes de detección fiara blancos di f entes. Al introducir 3a punta de piipeta 8o en c da uno de Jos psozess para muestra 26A a 26F, el aparato de r nsf rencia automático de pipetas provoca que e3 extremo distante 84 de 5 la punta 80 de pipe-Ha desechable se detiene en un punto predeterminado justo arriba de la superficie de fondo del pozo para muestra antes de suministrar líquido al pozo, y después para que pearmanezca ert esta posición durante cualquier intervalo subsecuente de incubación o reacción para cerrar el pozo piara muestra. Si embargo, este no es el i'inico modo psosible de operación. Puede preferi se, por ejemplo, dejar i ni o lal mente un huec un poco í*s grande entre el ex remo distante 84 de la punta de pipeta SO y e*l fondo del pozo fiara muestra mientras se es é i nt rociue i endo la muestra líquida en el pozo piara muestra. Esto evita el ierre de la abertura en el extremo de la punta de pupieta por la superficie de fondo del pozo para muestra, y mantiene también un ligero hueco anular entre la punta e pi e a y los bordes circu f renci les de la abertura 54 para u ar a ventilar ire desde el piozo para muestra mientr .= se esté suministrando la muestra liquida. Después de termi ar la opieración ele suministro, el e; tremo distante 84 de 33 punta de pipeta 80 puede bajarse a un punto mes cercano a 3a supe ficie e fondo del pozo para muestra (o bien en contacto con dicha superficie de fondo). En esta posición, las paredes e: ternas de la punta de pipeta e-st^n muy cercanas a los borde*» c i rcunfei ene la 1 es de la abet l?r=< 54 ío bien estén en cunta', to con dicho-, bordes ci cunferencial s^, sellando así f c i amente el pozes fiara muestra durante el oei iodo subsecuente de incubación o reacción. Cuando la muestra líquida debe retirarse del piozo para muestra, el extremo distante 84 de la punta de pipeta 80 puede elevarse ligeramente arriba de la superficie de fondo del poro para muestra para permitir que la muestra de J íquido fluya libremente en la abertura de la punta de pipeta \ pai a permitir la ventilación del pozo para muestra 26. La figura 12 ilustra un estructura cié tapia modificada que puede emplearse en relación con l s pozos para muest ra 26, La<s tapas 46' de 3a 'figura 12 son similares a la.-» tapia-.» 46 descritas previamente en relac ión con 3a figura 2, excepto que las aberturas pn-ef ormada-» 54 no se usan. En u lugar, la parte central superior 88 de ca t"»pa se proporcinna en forma de i i-ya membrana resi l iente delgada o ti i en septo elaborada de hule, pel ícula de pilést ires o bien similar, se forman d»-ss endidnras 90 y 92 .que =-e i rttersec tan en u patrón de ruz que atraviesa l -¡ membrana. La membrana pai tida sirve como el equivalente de una tapia es cubierta só3 ?da cuando 3a punta de pipeta 80 no se encuentra presente, peres e3 extremo distante 84 de 3a punta de pipveta 80 piuede penetrar fací Intente cuarteto se desea introducir una muestra líquida en el pozo 2¿> o bien retirar una muestra líquida ?¡-e'-' i -úñente in oduc ida a pim-tir del pozo 2 . En alguno*. casos, 3 a partida 88 ine o cr ar un mejor .sel lo >. on las superficies externa e" la punta e pipeta 8 de lo u sería posible con las aberturas pre rinadas 54 os ad s en la figura 2. Una modificación adiciona] de la estructura de tapa empleada para los pozos piara muestra 26 se ilustra en las figuras 13. En esta modalidad, las tapias discretas 46 o 46r ' eatSn remplazadas pcsr una hilera continua 94, sustane ?al mente plana, de material flexible delgado co o por ejemplo hoja o película de acetato, hule o bien es ireno fijada por medi de un adhesivo sobre las aberturas superiores 42 de los pozo?» piara muestra 26. E3 adhesivo pue e proporcionarse ya sea sobre la superficie inferior de l a hilera 94 o bien en las supe ficies <aup?er íesres de los poz>~ss p-tra muestra 26. Líneas de u cas 6 y 98 pueden foiiTiarse p cialment en 3a superficie superio de la hilera "-?+ (d preferencia en un patrón de cruz om se muestra) para fac i 1 itai la peneti ción del extremo distante 84 de la punta de pipeta 80 en la hilera 94. la longitud de ls hilera 94 e-, til que una hilera cínica es suficiente para cubrir todos los poros 26 en una hilera 24 dada de pozos piara muestra, aún cuando la hilera 94 puede cortarse o subel i v i >d? rse i se emplea un numero menor que tocios los pozos 26 en una hilera 24 dada de pozos para muestra. La=» figuras 34 y 15 ilustran d>ss configura iones de fond»:? alternativas que pueden emplearse para lo, pozos pa a muestra 26. Fn 3a figura 34, fondo 100 cte3 pozn p? r-3 muestra 26' es esf ricamente redondeado, mientras .que ert la figura 15 las paredes laterales 302 del pono piara muestra 26" son cónicas. Estas configuraciones alternativas pueden ser útiles para proporcionar un érea superficial útil mayor dentro del pozo para muestra (p rticularmente cuando se adhieren reactivos a las paredes interna a del pozo para muestra), y para promover una mezcla mejor entre la muestra liquida propor i nada a partir de la punta de pipeta 80 y los reactivos que pueeien propor ionarse en un pozo para m?ev» ¡ >-a -La figura 16 ilustra 3a forma en la cual los pozos piara muestra 26 y el soporte 22 pueden proporcionarse a 3 usuario final en forma de un coniunt»:» de elementos que permite al usu? ?o >i i. señar un tipo espiec í f o. o de ensayes de ácido nucleico íes»:.og i do entre varias opciones posibles) para lie-1va i a - lio manualmente o bien en un aparato de procesami nto autom i ado. Fn el ejemplo ilustrado, el conjunto de el eméritos incluye t>-e hileras de poros de descontaminación 24-1, 24-2 y 24-3 de tipos diferentes. Como ejemplo, la hilera 24-3 de pozos de descontamina ión puede contener rea ti os fiara ..na. reacción estándar de liescontaiitifiición e ?racil ADN •j l ?»:os i l asa (liDG), 3a hilera 24-2 » pío: os »de descontaminaci n piuerie contener reactivos pia a una reaopón de des»~ont ami nac i n re i atente a la tempeí a ti.u a , y la hilera 24-3 de poz s e descon tami par i ót, puede contener re i I, i VÜ-= pira un=» reacción de descontamina ión química. Una de estas hileras se escoge por parte del fabricante o usuario para un ensayo específico que debe realizarse, y se coloca en el soporte 22 ert la posición reservada para la hilera >e pozos de deacontaminacióp. De manera similar, dos hileras de pozos de-" <nitpl if icación 24-4 y 24-5 se propore íonan en el conjunto de elementess. los pozos de la primera hiler; 24-4 pueden p op rciona s c n reactivo^» adecuados piara la amplifi ación de las secuencias de ADN blanco a partir del bacilo de tubérculo, la s gund hilera 24-5 puede proporcionarse con r^ac tivns a cuarai para la detección e =.e»; uenc i as >1e ADM blanco a partir de otros ? ?.fr de bacteria, como por ejemplo la bacter H clamidíH,, Según el - t,o»^ ¡-?>"i específico par-a el cn.? se est-3- realizando el ensayo, u-? de lat» hileras 24-4 o bien 24-5 se seleccionará por parte d usuario y -.».- c o3 o =? r á n la posición reservada para 3a hilert de amplific ión en el scspor e 22. Finalmente, el c»"in junto ele elem r<t_ss incluye seis hileras 24-6 24--11 con pozos de dfet^cción. Una o varias de estas huleras s escogen p?>or piarte del usuario y se colocan c?rt el soporte 77 ert las posiciones reservadas para las hileras de po. os de etecci n. Fn el ejemplo ilustrado, 3 as hileras pozos de detección 24-6, 24-7 y 24-8 pueden c nt ner reactivos de delec>~?ón de fir , género espe i , resp>e._ !, i vamente, para sec uene ja de ADN blanco proveniente eje bacila de tub rculo. Las Hil ra restantes 74-9, 24-10 y 24-13 de pozos ci detección pueden contener reactivos similares para detectar lamidia, gonorrea y otros pa ógenos. En general , la muestra líquida e pleacía en 3a presente invención será una pireparación acuosa que contiene el c udo nucleico blanco (es decir-, áci o i-iüonucleieo (ARN) o bien ác ido deso; i r ibcmuc 1 ei co (ADN) ) y a pl icones contaminantes, con ya á>" ido nucleico blanco o bien amp l i tone, o bien ambas cosas, en forma de hebra única. Por ejemplo, el ácido rtuc3e?»:cs blanco ptuede comprender fragmentos de ADN genómico l atoriamente cort idos. La preparación se encontrará en una fcsr?tt3 adecuada piara su uso en un procedí míen to de a pl i f i c ?c i ón -1 ác i o nuc lei , de » onf esi-mi dad con té' nic-is csnoc i a , La descontaminación piara remover a pil icones contaminantes ert una muestra que contiene» secuencias de a i es nucleico blanco puecle 33evarse a • abo por cualquier medio adecuado, incluyendo las técnicas enseñadas en 3a Patente Norteamericana No, ^,035,996 o bien en la Solici ud de Patente Europea Publicada No. 0 415 755 A2, ambas se incorporan aquí por- referencia. Estas pub 3 icrar iones de patente sesrt piropiedact de L if Tffhrtologie-. Inc. y describe una ?cnici de descontamina, ion >=>n donde se em le denü! lupdina ídUTP) en el pro etiim l es ele amplificac ión, Después de la ampl ificac ión, -_m 3 i c cines que pueden contaminar otra muestra se someten a un tratamiento enzimático con urarnl ADN glicosilasa (UDG) para que estos am 1 icones que conti nen dUTP se vuelvan sustanc í 1 ment ina pl i f i ables . La amplificación de una secuencia de acides nucleico seleccionada >:> tu en blanco puede llevarse a >::abc? pcsr cualquier medio adecuado. Véase, generalmente D. I'w»_sh y T. woh , A . Biotechpol. Lab. 8, 34 - 25 (1990). Ejemplos de técnicas adecuadas de amplificación incluyen, sin limitarse a ellos, Reacción en Cadena cíe Poli merasa (PCP), reace ion en cadena de 3 igasa U_CR), Amplifi ación ps»sr Desplazamiento de Hebra (SDA) incluyendo tSDA, amplificación basada en transcripci n (vése D. I «oh et ] . Pretc. N3tl. Acad Se i . USA 86 , 3173-11"7? (1989)), rep 3 icación en secuencia autosos tenida (»» bi n "3BP") (véase T. Guatelli et al, Prc»r. Nati, Acad Sci. USA 87, 1874-1878 (1990)), e] sistema de Obeta replicase (véase P. l izardi et, al, Rio Technology 6, 1197 - 1202 (1988)), amplificación basada en secuencia de ácido nucleico (o bien "NASBA") (véase P. Le?>ns, Genetic Engineermg Ne«?s 12 (9), 1 (1992)), la reacción ert cadena de reparación ( o bi n "RCP") (véase P, l.ßwia, supra), y amplificación de ADN b»:somerang íes bien "BDA) (véase R, Lewiñ, suni-i). Se prefiere 3a Amp 3 i f te a.; i ón por Desplar miento de Hebra ío bien -'"SDA"), incluyendo la Amplifi a ión por Desplazami nto de Hebra termoffliea ("t-SDA") . La Amplificación por Desplazami nto de Hebra a bien tSDA puede llevarse a cabo de? conformidad con cualquier técnica conocida. Véase generalmente G. Waller et al, Proc, Nati. Acad. Sei. USA 89, 392-396 (1992); G Wa l l er et al, Nucl ic Acids Res. 20, 1691 - 1696 (1992), Patente Norteamericana No. 5,455,166, Patente Norteamericana No. 5,270,184 y Patente Norteamericana No. 5,422,252, todas las cuales se incorporan aquí por referencia. Lo anterior es una ilustración de la presente inven»:: i ón y no >debe >:ans?derarse como limitativo de la mi ama, puesto que numerosas lterna i as a los cl i ai s i 11 vos y métodos descritos que incorporan 3a presente invención .t»erán aparentes a los e; peí tos en 3a aleci-a. P \- ejemplo, dentro del alcance de 3 presente invención se encuentra 3a formaci n e tapas 46 ert forma integral con 3 css pozos piara muestra 26, o bien e3 cierre e las abertura?» 54 en las tapias 46 con dispositivos o estructuras otros q?e 3 as puntas de pipetas desee habí es. Dentro de3 alcance de 3a presente invención se encuentra también la e, tracción de tocia, o parte de la mue-a ta líquida 88 de g eses n 3a punta >-¿ pipeta mientras ocurre una reacpón denlreí de uno »-Je 3 os p»"sr»"is piara muestra 26 pi ra re u»:?? idi». i ona I ent»? las pérdidas por evapiesrac i n y contamina», i ón crur.aeJ-,, _F? na Intente, aún cuando la invención se ha clescpt»z p im ri mente con referencia a ensayos de acides nucleico, puede aplicarse también a ipm?noensayos y a otros procesos biológicos y químicos que se llevan a cabes en muestras líquidas. La invención por consiguiente se .define mediante las siguientes reivin icaciones, y se incluyen los equivalentes de las re i v i nd i cae: i >_snes .

Claims (8)

1. REIVINDICACIONES 1. Un aparato para llevar a cabo un piracescs b?o3óg?co o químico en una muestra líquida, que comprendes un piozo para muestra para re ibi dicha muestra líquida, dicho pozo para muestra i ne una piarte interna _-. una abertura superior que comunica con dicha parte interna; una tapa que se ajusta en dicha abertura super oor, dicha tapa tiene una abertura rest r i ng i >Ja menor que dicha abertura supierior para comunicar con 3a parte -interna de >i?>~ho poz»-s pira muestra; y un reactivo coloc do dentro de la piarte interna e >:i?oho pozo para muestra para reaccionar con dicha muestra lt» u]da.
2. 2. Un aparato »ie »-opf esrmí dad ron la reivindicación 1 , clesnde dicha abertura restr mg i > a es sustan»-: i a.3 en te c ircular y tiene un diámetro suficiente para rec ibir al menos una parte di=tante ci una punta cónica e pipeta desechable»
3. 3. Un aparato de coníesrmidad con la reivindicación 2, clon.de el ciiArnetro de dicha abertura es sustancia luiente igual al diámetro de dicha punta cónica de pipeta desechable en un punto a lo largo de la longitud de clieha punta de pipeta.
4. 4. Un aparato de conformniad con la reivindi. ación 3 , donde di ho reac i o comprende un reacti o secado de descontaminación de Acido nucleico, un reactivs se>- ¿do de amp 3 i f i cae i ón ele ^r ido nucleico, -y/o un reactivo inmo ilizado de detección de ai ido nu»~le?co adherido sobre una pared interna de dicho pozo para muestra.
5. 5. Un aparato de conformidad con la reivindi a ión t, donde dicho pozo para muestra consiste de un pozo de una pluralidad de pozos p ra muestra conectados y sus aficiaJtuente idénticos entre ello-.-.,
6. 6. Un aparato de conformidad con la reivindi ación 5, desude dicha tapia consi te >ie una tapia de una pluralidad de t pas conectadas y sustanc i luiente idénticas entre ellas.
7. 7. Urt aparates ci conformi ad cort la rei indi ación 6, >:iesnde dichos varios pozos para muestra sea encuentran conectados entre ] loa en una primera hilera sustanc la 3 ent lineal , y dichas varias tafias están con cta a entre el laa en una segunda hilera su st a nc i a 3 mente l i e l.
8. 8. Urt método para llevar a cabo un p> ro eso b?oló»g?co o químico en una muestra 11 efund , que comprende los pi^sc-s de, fj-ít.raer dicha muestra l íquida en una punta psipet-i; introducir una parte distante de dicha punta de pipeta en un pozo para muestra a ra s de una abertura restringida en d?ch>> pozes para muestra; transfe ir dicha muestra l iquida de dicha punta de pipeta hacia dicho pozo para muestra; y llevar a cabo una reacción en dicha muestra líquida en dicho piozo piara muestra mientras se mantiene 3 a p rte dis -inte dicha punta >"3e pipeta en dicha abertura restringida» 9, E3 método ci la rei indica ión 2, donde las s?peí f tcies e;- ternas de d?c:ha punta de pipeta están suficientemente cercanas de los bordes de dicha abertura de tal manera que dicha; punta de pipeta forme un ie as para dicha abertura dm-ante dicha reacción. ÍO. El método de la reí v i neii cae i ón 9, donde el e: tremo distante? de dicha punta de pipeta se encuentra cerca »del fon o de dicho poso para muestra, y donde dicho método compsrende ademas el paso de ei traer dicha muestra líquida de reso a dicha punta de pipieta después de terminada dicha re-:ic.c i ón. 31 , F3 método cíe la reivindica ión 8, donde 3 pa o >_ie l levar a cabo una reacción en dicha mueatra líquida en dicho pozo para muestra incluye 33 puesta ert con ac ) » e dicha mu st a líquida con un react ivo contenido dentro de la parte interua ele dicho pozo para muesti . 12. Fl tocio de la reivindicación 8, donde ?>.:ha abertura restringida se forma durante dicho paso de introducc ión ele una parte distante de dicha punta de pipeta en dicho pozo para muestra provocando que dic ha punta de pipeta penetre en una parte penetrable de dicho pozo para muestra . I I. Uu conjunto eie ele e s para 3 levar a cabo un ensayo de ac ido nucleico en una muestra biológica l quida, que >:: esmf i rende j una primera plural idad de p»jz».ss para muestra que contienen r ac ivos seeaeios de ciese.ont no na., i ón ele Aci o nucleicos; una segunda pluralidad de pozos para muest.ra que contienen reactivos secados de ampli ficación de ácido nucleico; una tercera plural tdaci de pozos piara muestra que contienen reacti os inmovili ados de detección de ácido nucleico; y un soporte pi ra contener al menos unes de dicha p imera pluralidad de pozos para muestra, al menos no de dicha segunda plural idad de piceos piara muestra, y al menos uno de dicha tercera plural idad ie pozos para muestra. 34, Un ' oniunto ele elementos eie e:c»nf ormí elael con la reivindicación 13, donde . d3 poro para .nuestra en dichas pin mera, segunda y tercera plural idades ci pozos para muest.ra compr nde un pozo ele una ser ?e »de pozos para ntuesi va i onect idos ;us ta u i 1 mente ici n t ico.-, ent r el J s, y donde dicho soporte se encuentra d ta o para contener todos los eco--- par muestra ropec t adu-, en erada una cíe dichas pr miera, segunda y tercera plur lidades pso,-».ss para muestra. Ff?SUMEN DE LA INVENCIÓN Be proporciona un punzo mejorado para muestra para llevar a cabo un proceso biológico o uímico, co o pior ejemplo un ensayo ele ác ido nucleico o bien un inmunoensayo, en una muestra l íquida. El pozo piara muestra incluye una tapa con una abertura restringida suficiente en cuan o a tamaño par-i recibir e3 tremo di tante de una punta >de pnpieta de -.-.ec hab le. I -> punt a de piipieta se ipwi t? inicialmente en la aber ura piai ^ ird roduc i r un=» muestra l íq?icta en el po; o fiara ít?ue-»tra, y pet manee e en 3a atiertura elu.-art « e3 pie r leído eje e ;.; i ón de la muestra con uri teaol-ivo onteni o dentro te.3 p . i piara mu str . De esta lor a, la punta >:ie-' la pitpet >: te* ra efe i amente el pozo par-t muestr a mientras se 3 leva s cabo la rea» ión, redu iendo así p ndidas de muestra debn'jci a 3a evaporaci n evitando una conta inaci n »~ cura a con mu a-.-» contenida-» en pozos ady-icentes ciara mué. i ra, Less pe?r>:>s piara muestra pueden también construirle de materiales diferentes o bien incluir materiales diferentes que llevan a cabo funciones diferentes en el procese» biológico o químico, permitiendo asi e3 ens.amblaje.de grupos d i feren tos de pej css p-¡ra muest r-, ^r f.jr a t o a i f e? ent e„-, .Je f 1 ?:l v o .