MXPA06006377A - Metodos para modular la actividad de citocina y reactivos relacionados. - Google Patents

Abstract

Se proporcionan metodos para modular la actividad de citocina, por ejemplo, con el proposito de tratar inflamacion de las vias respiratorias y pulmones, tambien se proporcionan reactivos en el uso en el cribado en la busqueda de agonistas o antagonistas de IL-19 o IL-24.

Description

MÉTODOS PARA MODULAR LA ACTIVIDAD DE CITOCINA Y REACTIVOS RELACIONADOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona de manera general con uso de citocinas de mamífero. Más específicamente, la invención describe la función de citocinas en hiperreactividad de las vías respiratorias.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El sistema inmunológico funciona para proteger a los individuos de agentes infecciosos, por ejemplo bacterias, organismos multicelulares y virus así como de cánceres. Este sistema incluye varios tipos de células linfoides y mieloides tales como monocitos, macrófagos, células dendríticas (DC), eosinófilos, linfocitos T, linfocitos B y neutrófilos. Estas células linfoides y mieloides con frecuencia producen proteína de señalización conocidas como citocinas. La respuesta inmunológica incluye inflamación, es decir, acumulación de células inmunológicas sistémicamente o en un lugar particular del cuerpo. En respuesta a un agente infeccioso o una sustancia extraña, las células inmunológicas secretan citocinas las cuales a su vez modulan la proliferación, desarrollo, diferenciación o migración de células inmunológicas. Se han relacionado a las citocinas en la patología de numerosos trastornos que involucran hiperreactividad de las vías respiratorias y macrófagos alveolares, es decir, infiltración o activación de macrófagos alveolares (véase, por ejemplo Abbas, et al. (eds.) (2000) Cellular and Molecular Immunology, W.B. Saunders Co., Filadelfia, PA; Oppenheim and Feldmann (eds.) (2001) Cytokine Reference, Academic Press, San Diego, CA; von Andrian and Mackay (2000) New Engl. J. Med. 343:1020-1034; Davidson and Diamond (2001) New Engl. J. Med. 345:340-350; Riffo-Vasquez and Spina (2002) Pharmacol. Therapeutics 94:185-121; Evans, et al. (2003) Int. Rev. Immunol. 22:173-194; Lysaght, et al. (2003) Curr. Opin. Investig. Drugs 4:716-721 ; Engleman (2003) Semin. Oncol. 30(3 Suppl. 8):23-29). La hiperreactividad de las vías respiratorias, también conocida como hipersensibilidad de las vías respiratorias, la cual involucra estrechamiento inapropiado de las vías respiratorias en respuesta a un estímulo, es característico de varios trastornos de las vías respiratorias, por ejemplo asma, rinitis alérgica, bronquitis, bronquiolitis y posiblemente trastorno pulmonar obstructivo crónico (COPD). La hiperreactividad puede ser desencadenada, por ejemplo, por infecciones respiratorias, humo y alérgenos respiratorios. El asma, un trastorno crónico, puede ser mortal, afecta a uno de siete niños en los Estados Unidos y constituye más de 15% de las urgencias pediátricas. Los síntomas involucran diseña e hipersecreción de moco (véase, por ejemplo, Crain, et al. (1995) Arch. Pediatr. Adolesc. Med. 149:839-901; Grunig, et al. (1998) Science 282:2261-2263; Crystal, et al. (eds.) (1997) The Lung, Vols. 1-2, 2pd ed., Lippincott-Raven, Phila, PA; Holgate, et al. (2001) Allergy, 2nd ed., Mosby, Nueva York; Marañe (1998) Immunol. Today 19:5-9; Barnes and Lemanske (2001) New Engl. J. Med. 344:350-362). Otro trastorno de hiperreactividad de las vías respiratorias es rinitis alérgica, una de las formas más comunes de todas las condiciones crónicas que involucra inflamación de las vías respiratorias superiores y es responsable de aproximadamente 2 millones de días perdidos de trabajo cada año en los Estados Unidos (véase, por ejemplo Marone (1998) Immunol. Today 19:5-9; Kumar (2001 ) Pharmacol. Therapeutics 91 :93-104; Homer (1997) New. Engl. J. Med. 337:1461-1463; Platts-Mills and Cárter (1997) New Engl. J. Med. 336:1382-1384; James (2003) Pediatrics 111 :1625-1630; Robinson, et al. (1996) Pediatr. Pulmonol. 22:248-254; Beckett (2000) New Engl. J. Med. 342:406-413; Siroux, et al. (2003) Clin. Exp. Allergy 33:746-751 ; Kessler, et al. (2001) Annals Allergy Asthma Immunol. 87:289-295). La hiperreactividad de las vías aéreas está caracterizada por infiltración por linfocitos T, eosinófilos, macrocitos, neutrófilos y células presentadoras de antígeno (APC) en las vías respiratorias. Las APC del pulmón incluyen las DC, linfocitos B y macrófagos alveolares, cada uno de los cuales puede expresar citocinas y contribuyen a la hiperreactividad de las vías respiratorias (véase, por ejemplo, Lawrence, et al. (1998) J. Pharm. Exp. Thera. 284:222-227; Alexis, et al. (2001 ) Am. J. Physiol. Lung. Cell Mol. Physiol. 280:L369-L375; Akabari, et al. (2002) Nature Medicine 8:1024-1032; MacLean, et al. (1999) Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 20:279-387; Hamelmann, et al. (1999) Am. J. Respír. Cell Mol. Viol. 21:480-489; Gonzales, et al. (2000) Annals Internal Medicine 133:981-991 ; Li, et al. (2002) Pulmonar/ Pharmacol. Therapeutics 15:409-416; Zimmermann, t al. (2003) J. Allergy Clin, immunol. 111 :227-242; Riffo-Vasquez and Spina (2002) Pharmacol. Therapeutics 94:185-211). Los macrófagos de las vías respiratorias, los cuales incluyen los macrófagos alveolares, células dendríticas y macrófagos pleurales, intersticiales e intravasculares median las respuestas inmunológicas por interacción directa con los linfocitos T y por producción de citocinas, por ejemplo, en respuesta a patógenos y alérgenos (y en trastornos tales como asma y alergias). Los macrófagos alveolares son fagocíticos contra las bacterias, esporas, hongos tales como Pneumocystis carinii, Cryptococcus neoformans, virus, por ejemplo virus sincicial respiratorio (RSV), tumores y humo de cigarro. Además, estas células inmunológicas modulan la respuesta inmunológica adquirida por las citocinas secretantes (véase, por ejemplo, McNamara, et al. (2002) Brit. Med, Bull. 61 :13-28; Openshaw (2002) Respír. Res. 3 (Suppi.1 ) S15-S20; Gordon and Read (2002) Brit Medical Bulletin 61 :45-61 ; Guidi-Rontani (2002) Trends Microbio!. 10:405-409; Eifuku, ef al. (2000) Jpn. J. Clin. Oncol. 30:295-300; Fathi, et al. (2001 ) Exp. Mol. Pathol. 70:77-82; leong, et al. (2002) Am. J. Resp. Crit. Care Med. 162:966-970; Yi (2002) Crit. Rev. Clin. Lab Sci. 39:581-629; Friedman, ef al. (1998) Semin. Respir. Infecí 13:100-108; Brummer (1998-1999) Mycopathologia 143:121-125; Vassallo, et al. (2000) Sarcoidosis Vasc. Diffuse Lung Dis. 17:130-139; Benten, et al. (2003) J. Medical Virol. 71 :290-297; Rigden, et al. (2002) Immunology 106:537-548).

Los macrófagos alveolares también se han relacionado en la patología del trastorno pulmonar obstructivo crónico (COPD) un trastorno que involucra infiltración bronquiolar con macrófagos, neutrófilos y linfocitos T, por ejemplo, linfocitos T CD8+. La COPD, la cuarta causa de muerte en Estados Unidos está caracterizada por engrosamiento del músculo liso de las vías respiratorias e inflamación de las vías respiratorias. Esta respuesta parece deberse a la infiltración de monocitos, macrófagos, linfocitos T CD4+, linfocitos T CD8+ y neutrófilos a los pulmones. Los macrófagos alveolares, elevados en COPD, expresa citocinas que, a su vez, promueven la inflamación e incrementan la activación de la célula inmunológica. La COPD involucra bronquitis crónica y enfisema. El enfisema está caracterizado por destrucción permanente del parénquima, los espacios aéreos distales a los bronquíolos terminales, véase, por ejemplo, Hautamaki, et al. (1997) Science 277:2002-2004; Barnes (2000) Chest 117:10S-14S; Barnes (2003) Annu. Rev. Med. 54:113-129; Jeffery (1998) Thorax 53:129-136; Barnes (2000) New Engl. J. Med. 343:269-280. El asma y la COPD, así como las defensas mediadas por macrófagos alveolares contra infecciones y cáncer permanecen poco comprendidas y se requieren tratamientos nuevos. La presente invención satisface esta necesidad al identificar dos citocinas relacionadas con la inflamación, hiperreactividad de ' las vías respiratorias y actividad de macrófagos y al proporcionar reactivos y métodos para el tratamiento y diagnóstico de estos trastornos respiratorios.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se basa, en parte, en el descubrimiento de que los animales deficientes en IL-19 o IL-24 presentan hiperreactividad reducida en las vías respiratorias. La invención proporciona un método para modular la actividad de una célula que comprende poner en contacto la célula con un agonista o antagonista de IL-19 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 1 ó 2) o IL-24 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 3 ó 4); en donde la célula modula la hiperreactividad de las vías respiratorias o la inflamación de las vías respiratorias. También se proporciona el método anterior en donde la célula es un monocito o macrófago, un linfocito T o un linfocito B, una célula dendrítica o una célula epitelial o endotelial; el método anterior, en donde el macrófago es un macrófago alveolar; el método anterior en donde el agonista o antagonista es una composición de unión derivada de un sitio, de un anticuerpo, que une antígeno; y el método anterior en donde el agonista o antagonista se unen específicamente a un polipéptido o ácido nucleico de IL-19 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 1 ó 2); IL-24 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 3 ó 4); IL20R1 ; IL-20R2; o IL-22R. En otra modalidad, la invención proporciona el método anterior para modular una actividad, en donde el agonista o antagonista comprende un anticuerpo policlonal; un anticuerpo monoclonal; un anticuerpo humanizado; un fragmento Fab, Fv o F(ab')2, un péptido mimético o de un anticuerpo; un ácido nucleico o una marca detectable. En otro aspecto, la ¡nvención proporciona un método para tratar un sujeto que padece de un trastorno de hiperreactividad de las vías respiratorias o un trastorno inflamatorio de las vías respiratorias que comprende administrar una cantidad eficaz de un agonista o antagonista de IL-19 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 1 ó 2) o de IL-24 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 3 ó 4); el método anterior en donde los trastornos son mediados por monocitos o macrófagos, linfocitos T o linfocitos B, células dendríticas o células epiteliales o endoteliales; y el método anterior en donde los macrófagos son macrófagos alveolares; así como el método anterior en donde el trastorno comprende asma, rinitis alérgica, bronquitis; bronquiolitis o trastorno pulmonar obstructivo crónico (COPD). En otra modalidad adicional de la presente invención se proporciona el método anterior para tratar a un sujeto, en donde el antagonista reduce o inhibe la hiperreactividad de las vías respiratorias; en donde el agonista o antagonista es una composición de unión derivada de un sitio de un anticuerpo en donde se une un antígeno; en donde el agonista o antagonista se unen específicamente a un polipéptido o un ácido nucleico que comprende la IL-19 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 1 ó 2); IL-24 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 3 ó 4); y IL-20R1 , IL- 20R2 o IL-22R; o el método anterior en donde el agonista o antagonista comprende un anticuerpo policlonal, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado; un fragmento Fab, Fv o F(ab')2; un péptido mimético de un anticuerpo; un ácido nucleico o una marca detectable. La presente invención también proporciona un método para el diagnóstico en un trastorno de hiperreactividad de las vías respiratorias o un trastorno inflamatorio de las vías respiratorias que comprende poner en contacto una muestra de un sujeto de prueba con una composición de unión que une específicamente a un polipéptido o ácido nucleico de IL-19 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 1 ó 2) o de IL-24 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 3 ó 4); IL-20R1 ; IL-20R2 o IL-22R; así como el método anterior que comprende además poner en contacto la composición de unión con una muestra derivada de un sujeto control o muestra control; y comparar la unión encontrada con el sujeto de prueba y la unión encontrada con el sujeto control o la muestra control. Otra modalidad de la presente invención proporciona un método de cribado en búsqueda de un compuesto que modula una actividad fisiológica, que comprende poner en contacto un compuesto candidato con una ratón con gen para IL-19 inactivado (IL-19KO) para proporcionar un ratón IL-19KO en contacto, y determinar la actividad fisiológica del ratón IL-19KO en contacto; determinar la actividad fisiológica de un ratón IL-19KO que no está en contacto con el compuesto candidato; y comparar las actividades fisiológicas del ratón IL-19KO en contacto y el ratón IL-19KO que no está en contacto; así como el método anterior en donde la actividad fisiológica comprende una actividad inmunológica; inflamación de las vías respiratorias; hiperreactividad de las vías respiratorias o una actividad proliferativa. Otra modalidad adicional de la presente invención es un método de cribado (detección sistemática) de un compuesto que modula una actividad fisiológica que comprende poner en contacto un compuesto candidato con un ratón con el gen para IL-24 inactivado (IL-24KO) para proporcionar un ratón IL-24KO en contacto, y determinar la actividad fisiológica en el ratón IL-24KO en contacto; determinar la actividad fisiológica en un ratón IL-24KO que no está en contacto, con el compuesto candidato; y comparar las actividades fisiológicas del ratón IL-24KO en contacto y el ratón IL-24KO que no está en contacto; así como el método anterior en donde la actividad fisiológica comprende una actividad inmunológica; inflamación de las vías respiratorias; hiperreactividad de las vías respiratorias o una actividad proliferativa. Un aspecto adicional de la presente invención es un método para tratar o diagnosticar obesidad o diabetes que comprende administrar una cantidad eficaz de un agonista o antagonista de IL-19; o de IL-24.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS Como se utiliza en la presente, incluyendo las reivindicaciones anexas, las formas singulares de las palabras tales como "un", "una" y "el" incluyen sus referencias en plural correspondientes a menos que el contexto lo determine claramente en otro sentido. Todas las referencias mencionadas en la presente se incorporan en este documento como referencia en la misma medida a si cada publicación o solicitud de patente individuales hubieran sido indicadas específica e individualmente como incorporadas como referencia.

I. Definiciones Los términos "activación", "estimulación" y "tratamiento", como se aplican a las células o receptores, pueden tener el mismo significado, por ejemplo, activación, estimulación o tratamiento de una célula o receptor con un ligando, a menos que se indique de otra manera por el contexto o de manera explícita. El término "ligando" abarca ligandos naturales y sintéticos, por ejemplo citocinas, variantes de citocina, análogos, muteinas y composiciones de unión derivados de anticuerpos. El término "ligando" también abarca moléculas pequeñas, por ejemplo péptido miméticos de citocinas y péptido miméticos de anticuerpos. El término "activación" se puede referir a activación celular como es regulada por mecanismos internos también como por factores externos a ambientales. El término "respuesta", por ejemplo de una célula, tejido, órgano u organismo, abarca un cambio en el comportamiento bioquímica o fisiológico, por ejemplo, concentración, densidad, adhesión o migración dentro de un compartimiento biológico, tasa de expresión de genes o estado de diferenciación, en donde ei cambio se relaciona con la activación, estimulación o tratamiento o con mecanismos internos tales como programación genética. El término "actividad" de una molécula puede describir o referirse a la unión de la molécula a un ligando o a un receptor, a actividad catalítica; a la capacidad para estimular la expresión de un gen o la señalización, diferenciación o maduración de células; a actividad antigénica, a la modulación de actividades de otras moléculas y similares; el término "actividad" de una molécula también se puede referir a la actividad en la modulación o mantenimiento de las interacciones célula a célula, por ejemplo adhesión o actividad en el mantenimiento de una estructura de una célula, por ejemplo membranas celulares o citoesqueleto. El término "actividad" también significa actividad específica, por ejemplo [actividad catalítica]/[mg de proteína] o [actividad ¡nmunológica]/[mg de proteína] concentración en un compartimiento biológico o similar. El término "actividad proliferativa" abarca una actividad que promueve, que es necesaria para el que está relacionado específicamente, por ejemplo, con la división normal de las células, así como con el cáncer, tumores, displasia, transformación celular, metástasis y angiogénesis. El término "administración" y "tratamiento", como se aplican al tratamiento de un sujeto humano, un sujeto de investigación, un sujeto veterinario, animal o célula, se refieren al contacto de un agente o composición farmacéutica, terapéutica o de diagnóstico, o placebo al sujeto humano, animal o célula. El tratamiento de una célula abarca el contacto de un reactivo con la célula, así como el contacto de un reactivo con un fluido, en donde el fluido está en contacto con la célula. Los términos "administración" y "tratamiento" también abarcan el tratamiento ex vivo, por ejemplo el tratamiento ex vivo a una célula, tejido u órgano seguido por contacto de la célula, tejido u órgano al sujeto o animal, incluso cuando el agente o composición ha sido metabolizado, alterado, degradado o extraído durante o después del tratamiento ex vivo. El término "compuesto candidato" se refiere, por ejemplo a una molécula, complejo de moléculas o mezcla de moléculas, en donde el compuesto candidato se utiliza en el desarrollo o identificación de un agente terapéutico o de diagnóstico. La prueba o cribado de un compuesto candidato se utiliza para determinar si el compuesto será útil como una sustancias terapéutica o de diagnóstico. El término "compuestos candidatos" abarca, por ejemplo, polipéptidos, anticuerpos, productos naturales, sustancias químicas y sintéticas, compuestos orgánicos, compuestos inorgánicos y combinaciones de los mismos con un segundo compuesto terapéutico o de diagnóstico o un portador, diluyente, estabilizante o excipiente. El término "trastorno" se refiere a un estado patológico o una condición que se relaciona o que predispone a un estado patológico. El término "trastornos infecciosos" se refiere, por ejemplo, a un trastorno que resulta de un microbio, bacteria, parásito, virus y similar, así como a una respuesta inmunológica inapropiada, ineficaz o patológica del trastorno. Un "trastorno oncogénico" abarca un cáncer, una célula transformada, un tumor, displasia, angiogénesis, metástasis y similares, así como a una respuesta inmunológica inapropiada, ineficaz o patológica al trastorno. Un "gen" abarca la región codificante de un polipéptido y cualquier secuencia reguladora, por ejemplo promotores, operadores, mejoradores y señales de inicio y de detención de transcripción. La región codificante puede comprender uno, un marco de lectura abierto continuo (ORF) o puede comprender más de un ORF, es decir, puede estar interrumpido por uno o más intrones. El término "cantidad eficaz" significa, por ejemplo una cantidad de un agonista, antagonista o compuesto o composición de unión de IL-19, o un agonista, antagonista o compuesto o composición de unión de II-24 suficiente para disminuir un síntoma o signo de un trastorno, condición o estado patológico. Una "cantidad eficaz" también se relaciona con una cantidad de un agonista, antagonista o compuesto o composición de unión de IL-19 o un agonista, antagonista o compuesto o composición de unión de IL-24 suficiente para diagnosticar un síntoma o signo de un trastorno, condición o estado patológico. El término "expresión" se refiere a una medida de ARNm o un polipéptido codificado por un gen específico. Las unidades de expresión pueden ser una medida, por ejemplo, del número de moléculas de ARNm o polipéptido/mg de proteína en una célula o tejido, o en un extracto celular o extracto de tejido. Las unidades de expresión pueden ser relativas, por ejemplo una comparación de una señal de control y mamíferos experimentales o una comparación de señales con un reactivo que es específico para el ARNm o polipéptido versus con un reactivo que es no específico. El término "trastorno inflamatorio" significa un trastorno o condición patológica en donde la patología resulta, en su totalidad o en parte, de un incremento en el número y/o incremento en la activación de células del sistema inmunológico, por ejemplo de linfocitos T, linfocitos B, monocitos o macrófagos, macrófagos alveolares, células dendríticas, células NK, células NKT, neutrófilos, eusinófilos o mastocitos. El término "inactivado" (KO) se refiere a la reducción de expresión parcial o completa de por lo menos una porción de un polipéptido codificado por un gen, por ejemplo IL-19 o IL-24, en donde el gen es endógeno para una célula única, células seleccionadas o la totalidad de las células de un mamífero. KO también abarca modalidades en donde se reduce la función biológica pero en donde la expresión no necesariamente se reduce, por ejemplo, un polipéptido IL-19KO que comprende un polipéptido IL-19 expresado que contiene un péptido, oligopéptido o polipéptido inactivante insertado. Las interrupciones en una secuencia codificante o una secuencia reguladora son abarcadas por la técnica de inactivación. La célula o el mamífero pueden ser un "heterocigoto con gen inactivado", en donde un alelo del gen endógeno ha sido interrumpido. De manera alternativa, la célula o el mamífero pueden ser un "homocigoto de gen inactivado" en donde ambos alelos del gen endógeno se han interrumpido. El término "homocigoto de gen inactivado" no se pretende que limite la interrupción de ambos alelos a técnicas idénticas o a resultados idénticos en el genoma. Se incluyen dentro del alcance de esta invención a un mamífero en el cual uno o ambos alelos IL-19 y/uno o ambos alelos II-24 han sido inactivados. El término "transgénico" se refiere a un cambio genético, producido por una técnica de ingeniería genética, que es heredado de manera estable. Los métodos transgénicos, células y animales incluyen cambios genéticos que resultan del uso de una técnica de inactivación. Un "marcador" se relaciona con el fenotipo de una célula, tejido, órgano, animal, por ejemplo de un ratón IL-19KO o un ratón IL-24KO o un sujeto humano. Se utilizan los marcadores para detectar células, por ejemplo durante la purificación, cuantificación, migración, activación, maduración o desarrollo celulares y se pueden utilizar para estudios tanto in vitro como in vivo. Un marcador de activación es un marcador que está asociado con la activación de las células. El término "sensibilidad", por ejemplo sensibilidad de receptor a un ligando, significa que la unión de un ligando al receptor resulta en un cambio detectable en el receptor, o en eventos o moléculas relacionados específicamente con el receptor, por ejemplo un cambio conformacional, fosforilación, naturaleza o cantidad de las proteínas relacionadas con el receptor o un cambio en la expresión genética medido o asociado con el receptor.

Un "receptor soluble" se refiere a receptores que son hidrosolubles y que se producen, por ejemplo, en fluidos extracelulares, fluidos intracelulares o débilmente asociados con una membrana. El receptor soluble se refiere adicionalmente a receptores que son alterados para que sean hidrosolubles. Los términos "especificidad de unión", "selectividad de unión" y similares, se refieren a una interacción de unión entre un ligando predeterminado y un receptor predeterminado que permite a una persona distinguir entre el ligando predeterminado y otros ligandos, o entre un receptor predeterminado y otros receptores. Las uniones "específicas" o "selectivas", cuando se refieren a un par de unión ligando/receptor, anticuerpo/antígeno u otro par, indican una reacción de unión que es determinante de la presencia de la proteína en una población heterogénea de proteínas y otras sustancias biológicas. Por lo tanto, bajo las condiciones designadas, un ligando especificado se une a un receptor particular y no se une en una cantidad significativa a otras proteínas presentes en la muestra. El anticuerpo, o composición de unión derivado del sitio de unión a antígeno de un anticuerpo se une a un antígeno con una afinidad que es por lo menos dos veces mayor, preferiblemente por lo menos 10 veces mayor, de manera más preferible por lo menos 20 veces mayor, y de manera mucho más preferible por lo menos 100 veces mayor que la afinidad a cualquier otro antígeno. En una modalidad preferida, el anticuerpo tendrá una afinidad que es mayor de aproximadamente 109 litros/mol, véase, por ejemplo, Munsen, eí al. (1980) Analyt. Biochem. 107:220-239.

II. Generalidades IL-19 e IL-24 (también conocida como mda-7) son miembros de la familia IL-10 de citocinas, comparten 21-22% de identidad de secuencias de aminoácidos con IL-10. IL-10, IL-19 e IL-24 se encuentran en el cromosoma humano 1q32 y se expresan, por ejemplo en linfocitos T. Se han identificado ortólogos de roedor de IL-24, por ejemplo c49a (también conocido como mob-5) de rata y FISP del ratón, en donde estos ortólogos funcionan de una manera un poco diferente en comparación con lL-24 humano. También se han identificado receptores de IL-19 e IL-24. El complejo de receptor IL-19 es un eterodímero de IL-20R1 (también conocido como crf2-8) e IL-20R2 (también conocido como DIRS1 ; crf2-11). IL-24 se une a dos complejos receptores diferentes, es decir, el heterodímero de IL-22R1 e IL-20R2 y el heterodímero de IL-20R1 (también conocido como IL-20RA) e 1L-20R2 (también conocido como IL-20RB) (véase, por ejemplo Gallagher, eí al. (2000) Genes Immunity 1 :442-450; Dumoutier, eí al. (2001 ) J. Immunol. 167:3545-3549; Fickenscher, et al, (2002) Trends Immunol. 23:89-96; Parrish-Novak, eí al, (2002) J. Biol. Chem. 277 r:47517 '-47 '523; Wang, eí al, (2002) J. Biol. Chem. 277:7341-7347; Publicación de Patente de E.U.A. No. US 2003/0078381). Numerosos factores pueden estimular la expresión de IL-19 o de IL-24 los cuales, a su vez, pueden generar eventos tales como apoptosis o expresión de otras citocinas. Los factores estimuladores incluyen lipopolisacárido (LPS), IL-4, factores estimulante de la colonia de granulocitos y monocitos (GM-CSF) y fitohemaglutinina (PHA). IL-19 e IL-24 y/o sus complejos receptores se han identificado con numerosas actividades fisiológicas. La expresión del receptor IL-19 se ha relaciona con psoriasis. lL-24 inhibe la angiogénesis así como la diferenciación y migración de células endoteliales. Adicionalmente, IL-24 desencadena la expresión de citocinas, por ejemplo interleucina-6 (IL-6) y factor a de necrosis tumoral (TNFalpha). C49a, el ortólogo de rata de IL-24 se relaciona con proliferación celular aumentada, por ejemplo sanado de heridas y transformación del oncogen ras (véase, por ejemplo Ramesh, eí al. (2003) Cáncer Res. 63:5105-5113; Sauane, eí al. (2003) Cytokine Growth Factor Revs. 14:35-51; Parrish-Novak, eí al., supra; Wolk, eí al. (2002) J. Immunol. 168:5397-5402; Liao, et al. (2002) J. Immunol. 169:4288-4297; Ghoreschi, eí al. (2003) Nature Medicine 9:40-46; Caudell, eí al. (2002) J. Immunol. 168:6041-6046; Dumoutier, et al., supra; Sarkar, et al. (2002) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 99:10054-10059; Jiang, et al. (1996) Proc. Nati. Acad. Sci. 93:9160-9165; Chang, eí al. (2003) J. Biol. Chem. 278:3308-3313; Fickenscher, eí al. (2002) Trends Immunol. 23:89-96; Gallagher, eí al. (2000) Genes Immunol. 1 :442-450; Vandenbroeck, eí al. (2002) J. Biol. Chem. 277:25668-25676; Sauane, et al. (2003) J. Cellular Physiol. 196:334-345). Los efectos biológicos de 1L-19 e lL-24 y los agonistas y antagonistas para los mismos se pueden determinar con el uso de ciertos "marcadores" fenotípicos relacionados con una célula. Se encontraron células bajas en CPH CD11c+ que se incrementan en ratones IL-24KO, en comparación con ratones control naturales (no alterados) determinado por análisis de células en el fluido de lavado broncoalveolar BAL. CD11c, un marcador del desarrollo de células inmunológicas y activación celular, es un miembro de la familia CD11 de las proteínas de integrina a. CD11 media la adhesión y migración celular, incluyendo el movimiento de células inmunológicas a través de las células epiteliales a la luz de las vías respiratorias. CD11 es un marcador para activación, por ejemplo de las DC, macrófagos, linfocitos T y linfocitos B, véase, por ejemplo Kadowaki, eí al. (2001) J. Immunol, 166:2291-2295; Kadowaki, eí al. (2001) J. Exp. Med. 194:863-869; Liu (2002) Human Immunology 63:1067-1071 ; Shelley, eí al. (2002) J. Immunol. 168:3887-3893; Kidney and Proud (2000) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 23:389-395; Taborda and Casadevall (2002) Immunity 16:791-802. La expresión de CPH Clase II se incrementa en el ratón IL-24KO, en comparación con un ratón control no alterado, determinado con mediciones de células en BAL. CPH Clase l i es un marcador para la activación o maduración de células, por ejemplo de las DC, monocitos, macrófagos, linfocitos B, linfocitos T y células endoteliales. Una vez que una célula presentadora de antígeno (APC), tal como DC o los linfocitos B, expresan CPH Clase II, la APC puede activar otros tipos de célula, es decir, linfocitos T, véase, por ejemplo, Waldburger, et al. (2001 ) J. Exp. ;ed. 194:393-406; Pai, eí al. (2002) J. Immunol. 169:1326-1333; Villadangos, eí al. (2001) immunity 14:739-749; Xaus, eí al. (2000) J. Immunol. 165:6364-6371 ; Kwak, eí al. (2000) Nature Medicine 6:1399-1402; March, et al. (1996) Annu. Rev. Immunol. 14:301-331. Las proporción de células dendríticas que expresan B220 es mayor en ratones IL-19KO no expuestos en comparación con los ratones control no alterados y no expuestos. B220 es una proteína que se encuentra, por ejemplo, en las DC. Esta proteína se ha relacionado con una actividad mayor o menos de DC, dependiendo del contexto. Las DC CD11C+B220+ son atraídas a más tipos de quimiocinas en comparación con las DC CD11C+B220", en contraste evidente, las DC CD11c+B220+ tienen una menor capacidad para estimular la proliferación de linfocitos T en comparación con las DC CD11c+B220- (Brawand, eí al. (2002) J. Immunol. 169:6711-6719).

III. Alteración genética de ácidos nucleicos, células y organismos. Los ácidos nucleicos, células y organismos pueden ser modificados genéticamente, por ejemplo al alterar o suprimir secuencias existentes de ácido nucleico o al introducir secuencias cromosómicas o extracromosómicas nuevas. La alteración genética abarca introducir genes nuevos, mutar o inactivar genes existentes y alterar las propiedades reguladoras de los genes. Estas alteraciones incluyen modificaciones covalentes así como una modificación no covalente de los elementos cromosómicos o extracromosómicos. Una construcción de citocina inactivada (KO) por ejemplo una construcción IL-19KO o una construcción IL-24KO, se prepara típicamente al aislar una porción de la secuencia nucleotídica para citocina genómica o de ADNc e insertando una secuencia marcadora dentro a la secuencia de citocina. La molécula de ADN para citocina será suficientemente larga para proporcionar una secuencia complementaria insuficiente para reconocimiento con ADN cromosómico, es decir, recombinación homologa, cuando la construcción KO se introduce dentro del ADN 'genómico de un citoblasto (ES) embriónico. Un fragmento de citocina genómica que se encuentra de manera natural o una molécula de ADNc, es decir, que codifica para IL-19 o lL-24, para ser utilizada en la preparación de una construcción KO se puede obtener utilizando métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo amplificación por reacción en cadena de polimerasa (PCR) de una secuencia particular de ADN, o por cribado de una biblioteca genómica preparada a partir de células o tejidos que contienen el gen para citocina, en donde el cribado utiliza una sonda de ADNc que codifica para por lo menos una porción de la misma o un gen para citocipa altamente homólogo con el fin de obtener por lo menos una porción de la secuencia genómica para citocina. De manera alternativa, si se va a utilizar una secuencia de ADNc en una construcción KO, el ADNc se puede obtener por cribado de una biblioteca de ADNc.

La posición apropiada para la inserción del gen marcador es aquella que servirá para disminuir o evitar la transcripción o traducción del gen para citocina endógeno de longitud completa o uno que permita la traducción pero en donde la proteína de citocina esté biológicamente inactiva. El procedimiento de inserción se puede llevar a cabo con o sin supresión de la secuencia del gen para citocina, es decir, con o sin supresión de intrones y/o exones. Un gen marcador habitualmente está unido operablemente a su propio promotor o a otro promotor fuerte, por ejemplo el promotor de timidina cinasa (TK) o el de fosfoglicerol cinasa (PGK). El marcador no necesita tener su propio promotor unido, dado que se puede transmitir utilizando el promotor del gen que va a ser inactivado. Los genes marcadores preferidos son cualquier gen que confiera resistencia a antibióticos tal como neo, el cual codifica para un gen de resistencia a neomicina, o ß-gal, el cual codifica para ß-galactosidasa. En algunos casos, será preferible insertar la secuencia marcadora en la orientación inversa o antisentido con respecto a la secuencia de ácido nucleico para citocina. La inserción inversa se prefiere cuando el gen marcador está unido operablemente a un promotor particularmente fuerte. La construcción KO de ADN ligado se puede transfectar directamente en células ES o se puede colocar primero dentro de un vector adecuado para amplificación antes de su inserción. Las construcciones IL-19KO o IL-24KO típicamente se transfectan en un ES, en donde la línea de células Es se selecciona por su estabilidad para integrarse y volverse parte de la línea germinal de un embrión en desarrollo de manera que se genera una transmisión de línea germinal de la construcción KO. Las líneas de células ES para generar ratones KO incluyen, por ejemplo, las líneas de células murinas D3 y E14 (American Type Culture Collection, Roekville, MD, cat. nos. CRL 1934 y CRL 1821 ) y RW4 (Genome Systems, Inc., St. Louis, MO, catálogo no. ESVJ-1182). La transfección de la construcción KO se puede llevar a cabo, por ejemplo, por electroporación, microinyección o tratamiento con fosfato de calcio. La descendencia que es positiva para la construcción IL-19KO o IL-24KO típicamente será heterocigota, aunque pueden existir algunos homocigotos inactivados. Sí se desean mamíferos homocigotos inactivados, se pueden preparar por cruza de la descendencia de heterocigotos que se considera que presenten la construcción inactivada en su línea germinal, entre si. Se describen métodos de biología molecular para producir construcciones de KO para citocina, véase, por ejemplo, Power (2003) J. Immunol. Methods 273:73-82; Sauer (1998) Methods 14:381-392; Copeland, eí al. (2001 ) Nature Revs. 2:769-779; Voorhoeve and Agamí (2003) Trends Biotechnol. 21 :2-4; Walke, et al. (2001) Curr. Opinión Biotechnol. 12:626-631 ; Galli-Taliadoros, eí al. (1995) J. Immunol. Methods 181 :1-15; Lovik (1997) Toxicology 119:65-76; Charreau, eí al. (1996) Transgenic Res. 5:223-234; te Riele, et al. (2001) Methods Mol. Biol. 158:251-262; Osada and Maeda (1998) Methods Mol. Biol. 110:79-92; Ravirajan and Isenberg (2002) Lupus 11 :843- 849; van del Weyden, et al. (2002) Physiol. Genomics 11 :133-164. Se describen métodos para utilizar citoblastos para producir ratones KO para citocina, véase, por ejemplo, la Patente de E.U.A. No. 6,087,555 expedida para Dunstan, eí al.; Porten (ed.) (1997) Stem Cells, Academic Press, San Diego, CA; Sell (ed.) (2003) Stem Cells Handbook, Human Press, Totowa, NJ; Marshak, eí al. (eds.) (2002) Stem Cell Biology, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Turksen (ed.) (2001) Embryonic Stem Cells; Human Press, Totowa, NJ; Durum, et al. (eds.) (1998) Cytokine Knockouts, Humana Press, Totowa, NJ; Jacob (ed.) (1994) Overexpression and Knockout of Cytokines in Transgenic Mice, Academic Press, San Diego, CA; Tymms and Kola (eds.) (2001 ) Gene Knockcout Protocols, Humana Press, Totowa, NJ. La expresión de 1L-19 por el ratón IL-19KO y la expresión de IL- 24 por el ratón IL-24KO típicamente es menor de 60%, de manera más típica menor de 30%, generalmente menor de 15%, preferiblemente inferior a 5% y de manera más preferible inferior a 2%, y de manera mucho más preferible inferior a 1% en comparación con la de un ratón no alterado adecuado. Al comparar un ratón KO con un ratón no alterado adecuado, es preferible que el ratón KO y el ratón no alterado estén relacionados tan cercanamente como se pueda, por ejemplo, el ratón no alterado debe ser de la misma cepa que el ratón utilizado como la fuente de citoblastos en la preparación del ratón KO. La invención contempla métodos para utilizar ratones IL-19KO o ratones IL-24KO para cribado y pruebas de agentes diagnósticos, farmacéuticos y terapéuticos. Para propósitos de cribado, los animales 1L- 19KO o IL-24KO se pueden tratar con diversos análogos de IL-19 o IL-24, con el fin de determinar cuál análogo funciona de manera más similar, o superior, administrado IL-19 o IL-24. Un criterio de valoración en el ensayo de cribado puede ser un cambio en la actividad de macrófagos o la concentración a un nivel predeterminado, un cambio en la actividad o concentración de las células dendríticas a un nivel predeterminado, un incremento en la hiperreactividad de las vías respiratorias a un nivel predeterminado, por ejemplo el nivel encontrado en ratones naturales o en ratones control adecuados.

IV. Composiciones agonistas, antagonistas y de unión. Se proporcionan anticuerpos y composiciones de unión derivadas de un sitio de un anticuerpo el cual une antígeno. Estos incluyen anticuerpos humanizados, anticuerpos humanos, anticuerpos monoclonaies o policlonales, fragmentos de unión, por ejemplo fragmentos Fab, F(ab)2 y Fv, y versiones alteradas de los mismos. El término "derivado" incluye derivado por modificación química de un anticuerpo, por modificación recombinante de un anticuerpo así como derivado por modelado por computadora de la composición de unión después de las características estructurales del anticuerpo. La composición de anticuerpo o de unión puede ser agonista o antagonista. Los anticuerpos que se unen simultáneamente a un ligando y receptor, a ambas subunidades de un ligando dimérico o ambas subunidades de un receptor dimérico también se contemplan. También se abarcan péptido miméticos de moléculas pequeñas de IL-19, IL-24, anticuerpo anti-IL-19 y anticuerpo anti-IL-24. Los anticuerpos habitualmente se unirán con por lo menos una KD de aproximadamente 10"3 M, de manera más habitual por lo menos 10"6 M, típicamente por lo menos 10"7 M y de manera más típica por lo menos 10"8 M, de manera preferible por lo menos aproximadamente 10"9 M, de manera más preferible por lo menos 10"10 M y de manera mucho más preferible por lo menos 10"11 M (véase, por ejemplo, Presta, eí al. (2001 ) Thromb. Haemost. 85:379-389; Yang, eí al. (2001) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 38:17-23; Carnahan, et al. (2003) Clin. Cáncer Res. (Suppl.) 9:3982s-3990s). La invención proporciona agonistas y antagonistas de IL-19, por ejemplo muteínas y variantes de IL-19, como se encuentran en la naturaleza, composiciones de unión tales como anticuerpos IL-19, versiones solubles de los polipéptidos receptores de IL-19 y composiciones de unión y anticuerpos para los polipéptidos receptores de IL-19. También se proporcionan agonistas y antagonistas de IL-24, por ejemplo muteínas y variantes de IL-24 como se encuentran de manera natural, composiciones de unión tales como anticuerpos anti-IL-24, versiones solubles de los polipéptidos receptores de IL-24 y composiciones de unión y anticuerpos para los polipéptidos del receptor de IL.24. Se pueden preparar anticuerpos para IL-19 humana (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 2). Las regiones de . antigenicidad aumentada en IL-19 humana incluyen KRAIQAKD (aminoácidos 45-52 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 2); TKNLLA (78-83 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 2); KDHQ (91-94 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 2) y KTLR (116-119 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 2). También se contemplan los anticuerpos o variantes de hlL-19, véase, por ejemplo Genbank Accesos Nos. NP_758846; NP_443104 y AAH09681. Se pueden preparar anticuerpos para IL-24 humana (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 4). Las regiones de antigenicidad aumentada en IL-24 humana incluyen AVKD (aminoácidos 48- 51 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 4); SARLLQ (61-66 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 4); LVHTLL (81-86 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 4); LKTVFKNYHN (90-99 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 4); DSAHRR (137-142 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 4) y RRAFKQLDVEAALTKAL (147-163 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 4). También se contemplan anticuerpos para variantes de hlL-24, véase, por ejemplo Genbank Accesos Nos. NP_715639 yNP_037503. Se pueden preparar anticuerpos para los polipéptidos receptores de IL-19 y polipéptidos receptores de IL-24, es decir, IL-20R1 (también conocido como crf2-8; zcytor7); IL-20R2 (también conocido como crf2-11; DIRS 1) e IL-22R. Están disponibles los anticuerpos anti-IL-22R (Dumoutier, el al. (2001) J. Immunol. 167:3545-3549). Las regiones de antigenicidad aumentada de IL-20RA humana incluyen los aminoácidos 79-85; 103-114; 155-163; 200-205; 234-243 y 278-287 de GenBank Aceso No. NM_014432. Las regiones de antigenicidad aumentada de IL-20RB humana incluyen los aminoácidos 49-51 ; 77-81 ; 111-116; 127-130; 147-152 y 233-237, de GenBank Acceso No. AAQ47003. La antigenicidad se determina por la gráfica Welling de Vector NTIMR Suite (Informax, Inc, Bethesda, MD). Los anticuerpos monoclonales, policlonales y humanizados se pueden preparar, véase, por ejemplo, Sheperd and Dean (eds.) (2000) Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, Nueva York, NY; Kontermann and Dubel (eds.) (2001 ) Antibody Engineering, Springer-Verlag, Nueva York; Harlow and Lañe (1988) Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp. 139-243; Carpenter, eí al. (2000) J: Immunol. 165:6205-6213; He, eí al. (1998) J. Immunol. 160:1029- 1035; Tang, et al. (1999) J Biol. Chem. 274:27371-27378; Li, et al. (2002) Immunol. Revs. 190:53-68; Sato, el al. (1994) Mol. Immunol. 31 :371-381 ; Morea, et al. (2000) Methods 20:267-279. El anticuerpo humanizado contiene la secuencia de aminoácidos de seis regiones determinadoras de complementariedad (CDR) del anticuerpo de ratón de origen, las cuales están injertadas en la infraestructura del anticuerpo humano. Las alternativas para humanización incluyen el uso de anticuerpos completamente humanos, así como bibliotecas de anticuerpos humanos presentadas en fagos o bibliotecas de anticuerpos humanos contenidas en ratones transgénicos, véase, por ejemplo, Vaughan, eí al. ( 996) Nat. Biotechnol. 14:309-314; Barbas (1995) Nature Med. 1:837-839; de Haard, et al. (1999 ) J. Biol. Chem. 274:18218-18230; McCafferty et al. (1990) Nature 348:552-554; Clackson eí al. (1991) Nature 352:624-628; Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222:581-597; Méndez, et al. (1997) Nature Genet. 15:146- 156; Hoogenboom and Chames (2000) Immunol. Today 21 :371-377; Barbas, eí al. (2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, Nueva York; Kay, eí al. (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA; de Bruin, et al. (1999) Nat. Biotechnol. 17:397-399. Se han descrito anticuerpos humanizados, anticuerpos quiméricos, anticuerpos de cadena única, anticuerpos de dominio único, anticuerpos biespecíficos y péptido miméticos de anticuerpos (véase, por ejemplo, Maynard and Georgiou (2000) Annu. Rev. Biomed. Eng. 2:339-376; Malecki, eí al. (2002) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 99:213-218; Conrath, eí al. (2001) J. Biol. Chem. 276:7346-7350; Desmyter, eí al. (2001) J Biol. Chem. 276:26285-26290, Kostelney, et al. (1992) New Engl. J. Med. 148:1547-1553; Casset, et al. (2002) Biochem. Biophys. Res. Commun. 307:198-205; Patentes de E.U.A. Nos. 5,932,448; 5,532,210; 6,129,914; 6,133,426; 4,946,778). No es necesaria la purificación del antígeno para la generación de anticuerpos. La inmunización se puede llevar a cabo por inmunización con un ADN vector, véase, por ejemplo Wang, et al. (1997) Virology 228: 278-284. De manera alternativa, los animales pueden ser inmunizados con células que presenten el antígeno de interés seguido por producción de hibridoma, véase, por ejemplo Meyaard, eí al. (1997) Immunity 7:283-290; Wright, eí al. (2000) Immunity 13:233-242; Prestan, et al. (1997) Eur. J. Immunol. 27:1911-1918; Kaithamana, etal. (1999) New Engl. J. Med. 163:5157-5164. Se pueden medir las propiedades de unión anticuerpo/antígeno, por ejemplo, por resonancia de plasmen de superficie o ensayo inmunosorbente unido a enzima (ELISA) (Nerí, eí al. (1997) Nat. Biotechnol. 15:1271-1275; Jonsson, eí al. (1991) Biotechniques 11 :620-627; Hubble (1997) Immunol. Today 18:305-306). Los anticuerpos de esta invención se pueden utilizar para cromatografía de afinidad en el aislamiento del antígeno objetivo del anticuerpo y las proteínas asociadas (Wilchek, eí al. (1984) Meth. Enzymol. 104:3-55). Se proporcionan receptores solubles que comprenden los dominios extracelulares de los polipéptidos receptores de IL-19 o IL-24. Se describen los dominios extracelulares de IL-20R1 (también conocido como crf2-8), IL-20R2 (también conocido como crf2-11), r IL-22R (también conocidos como crf2-9; zcytor 11), véase, por ejemplo Kotenko (2002) Cytokine Growth Factor Revs. 13:223-240; Kotenko, eí al. (2001) J. Immunol. 166:7096-7103; Dumoutier, eí al. (2001) J. Immumol. 166:7090-7095. Los receptores solubles se pueden preparar y utilizar de acuerdo con métodos estándar, véase, por ejemplo, Jones, eí al. (2002) Biochim. Biophys. Acta 1592:251-263; Prudhomme, et al. (2001) Experí Opinión Biol. Ther. 1 :359-373; Femandez-Botran (1999) Grit. Rev. Clin. Lab Sci. 36:165-224. Se proporcionan compuestos de unión de ácido nucleico para usos de diagnóstico o de equipo, por ejemplo ácido nucleico que codifica para la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 2 ó 4, o un fragmento antigénico del mismo para uso, por ejemplo, como cebadores de PCR, cebadores de hibridación y balizas moleculares.

IV. Métodos para composiciones terapéuticas La composición proporciona IL-19, anticuerpos anti-IL-19, IL-24 y anticuerpos anti-IL-24 para uso, por ejemplo en el tratamiento de trastornos inflamatorios y autoinmunes. Los ácidos nucleicos también se proporcionan para estos usos terapéuticos, por ejemplo ácidos nucleicos que codifican para las SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 2 ó 4, un fragmento antigénico del mismo, los ácidos nucleicos antisentido correspondientes y productos de hibridación de los mismos. La invención también proporciona composiciones para interferencia de ARN, véase, por ejemplo, Arenz and Schepers (2003) Naturwissenschaften 90:345-359; Sazani and Kole (2003) J. Clin. Invest. 112:481-486; Pirollo, el al, (2003) Pharmacol. Therapeutics 99:55-77; Wang, eí al. (2003) Antisense Nucí. Acid Drug Devlel. 13:169-189. Para preparar composiciones farmacéuticas o estériles que incluyen un agonista o antagonista de IL-19, un agonista o antagonista de IL-24, por ejemplo la citocina, análogo de citocina o muteína, o un anticuerpo del mismo, se mezcla con una pluralidad de portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables los cuales preferiblemente son inertes, véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences and US. Pharmacopeia: National Formulan , Mack Publishing Company, Easton, P A (1984). Las formulaciones de agentes terapéuticos y de diagnóstico se pueden preparar por mezclado con portadores, excipientes o estabilizantes fisiológicamente aceptables en forma, por ejemplo, de polvos liofilizados, suspensiones, soluciones o suspensiones acuosas, véase, por ejemplo Hardman, eí al. (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, Nueva York, NY; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, Nueva York, NY; Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, eí al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, eí al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., Nueva York, NY. La selección de un régimen de administración para una sustancia terapéutica depende de varios factores que incluyen el suero o la velocidad de recambio de tejido de la entidad, el nivel de los síntomas, la inmunogenicidad de la entidad y la accesabilidad de las células objetivo en la matriz biológica. Preferiblemente, un régimen de administración maximiza la cantidad de sustancia terapéutica derivada al paciente, consistente con un nivel aceptable de efectos secundarios. En consecuencia, la cantidad de sustancias biológicas suministradas depende, en parte, de la entidad particular y la gravedad de la condición que es tratada. La guía en la selección de las dosis apropiadas de anticuerpos, citocinas y moléculas pequeñas están disponibles, véase, por ejemplo Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.) (1991 ) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, Nueva York, NY; Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, Nueva York, NY; Baert, eí al. (2003) New Engl. J. Med. 348:601-608; Milgrom, eí al. (1999) New Engl. J. Med. 341 :1966-1973; Slamon, eí al. (2001 ) New Engl. J. Med. 344:783-792; Beniaminovitz, eí al. (2000) New Engl. J. Med. 342;613-619; Ghosh, eí al. (2003) New Engl. J. Med. 348:24-32; Lipsky, eí al. (2000) New Engl. J. Med. 343:1594-1602. Los anticuerpos, fragmentos de anticuerpo y citocinas se pueden proporcionar por infusión continua o por dosis a intervalos, por ejemplo, de un día, una semana o 1-7 veces a la semana. Se pueden proporcionar dosis por día intravenosa, subcutánea, tópica, oral, nasal, rectal, intramuscular, intracerebral o por inhalación. Un protocolo de dosis preferida es uno que involucra una dosis máxima o una frecuencia de dosis que evita los efectos secundarios indeseables significativos. Una dosis semanal total generalmente es de por lo menos 0.05 µg/kg de peso corporal, de manera más general por lo menos 0.2 µg/kg, de manera mucho más general por lo menos 0.5 µg/kg, típicamente por lo menos 1 µg/kg y de manera más típica por lo menos 10 µg/kg, y de manera mucho más típica por lo menos 100 µg/kg, de manera preferible por lo menos 0.2 mg/kg, de manera más preferible por lo menos 1.0 mg/kg, de manera mucho más preferible por lo menos 0.2 mg/kg y de manera óptima por lo menos 10 mg/kg, de manera más óptima por lo menos 25 mg/kg y de manera mucho más óptima por lo menos 50 mg/kg, véase, por ejemplo, Yang, eí al. (2003) New Engl. J. Med. 349:427-434; Herold, eí al. (2002) New Engl. J. Med. 346:1692-1698; Liu, et al. (1999) J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67:451-456; Portielji, et al. (20003) Cáncer Immunol. Immunother. 52:133-144. La dosis deseada de una molécula pequeña terapéutica, por ejemplo un péptido mimético, un producto natural o una sustancia química orgánica es aproximadamente la misma que para un anticuerpo o polipéptido, en una base en moles/kg. Una cantidad eficaz para un paciente particular puede variar en base en factores tales como la condición que es tratada, la salud general del paciente, el método de ruta y dosis de administración y la gravedad de los efectos secundarios, véase, por ejemplo, Maynard, et al. (1996) A Handbook of SOPs for Good Clinical Practice, Interpharm Press, Boca Ratón, FL; Dent (2001) Good Laboratory and Good Clinical Practice, Urch Publ., Londres, Reino Unido. Los sujetos veterinarios, experimentales o de investigación típicos incluyen monos, perros, gatos, ratas, ratones, conejos, cobayos, caballos y humanos. La determinación de la dosis apropiada se realiza por el médico, por ejemplo, utilizando parámetros o factores conocidos o determinados en la técnica que alteran el tratamiento o que se predice que alteren el tratamiento. Generalmente, la dosis comienza con una cantidad un poco menor de la dosis óptima y se aumenta por incrementos pequeños posteriormente hasta que se alcanza el efecto deseado u óptimo en relación a cualquier efecto secundario negativo. Las medidas de diagnóstico importantes incluyen aquellas de los síntomas, por ejemplo, de inflamación o nivel de citocinas inflamatorias producidas. Preferiblemente, el material biológico que se utiliza se deriva de la misma especie que el animal objetivo para tratamiento, por lo que se minimiza una respuesta humoral hacia el rectivo. Los métodos de coadministración o tratamiento con un segundo agente terapéutico, por ejemplo una citocina, esferoide, agente quimioterapéutico, antibiótico o con radiación, son bien conocidos en la técnica, véase, por ejemplo Hardman, et al. (eds.) (2001) Goodman and Gilman 's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed., McGraw-Hill, Nueva York, NY; Poole and Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice: A Practical Approach, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., FA; Chabner and Longo (eds.) (2001) Cáncer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., P A. Una cantidad eficaz de sustancia terapéutica disminuirá los síntomas típicamente en por lo menos 10%; habitualmente en por lo menos 20%; de manera preferible por lo mer s aproximadamente 30%; de manera más preferible por lo menos 40% y de manera mucho más preferible por al menos 50%.

X. Equipos y reactivos de diagnóstico Esta invención proporciona polipéptidos de IL-19 e IL-24, fragmentos de los mismos, ácidos nucleicos de 1L-19 e IL-24 y fragmentos de los mismos en un equipo de diagnóstico, por ejemplo para el diagnóstico de asma, hiperreactividad de las vías respiratorias, trastornos mediados por células dendríticas y trastornos mediados por macrófagos. También se proporcionan las composiciones de unión que incluyen anticuerpos o fragmentos de anticuerpos para la detección de IL-19 e IL-24 y metabolitos y productos de descomposición de los mismos. Típicamente, el equipo tendrá un compartimiento que contiene ya sea el polipéptido 1L-19 o lL-24 o un fragmento antigénico del mismo, una composición de unión para el mismo o un ácido nucleico, tal como sonda, cebador o una baliza (boya) molecular, véase, por ejemplo Rajendran, et al. (2003) Nucleic Acids res. 31 :5700-5713; Cockerill (2003) Arch. Pathol. Lab. Med. 127: 1112-1120, et al. (2002) Biotech. Annu. Rev. 8: 85-101 ; Klein (2002) Trends Mol. Med. 8: 257-260. Un método de diagnóstico puede comprender poner en contacto una muestra de un sujeto, por ejemplo un - sujeto de prueba, con una composición de unión que se une específicamente a un polipéptido o ácido nucleico de IL-19 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 1 ó 2); IL-24 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 3 ó 4); IL-20R1 ; IL-20R2 o IL-22R.E1 método puede comprender además poner en contacto una muestra de un sujeto control, un sujeto normal o tejido o fluido normal de un sujeto de prueba, con la composición de unión. Además, el método puede comprender adicionalmente comparar la unión específica de la composición al sujeto de prueba con la unión específica de la composición al sujeto normal, sujeto control o tejido o fluido normales del sujeto de prueba. La expresión o actividad de una muestra de prueba o sujeto de prueba se pueden comparar con la de una muestra control o un sujeto control. Una muestra control puede comprender, por ejemplo, una muestra de tejido no aceptado o no inflamado en un paciente que padece de un trastorno inmunológico. La expresión o actividad de un sujeto control o una muestra control se pueden proporcionar como un valor predeterminado, por ejemplo adquirido a partir de un grupo estadísticamente apropiado de sujetos control. El equipo puede comprender, por ejemplo, un reactivo y un compartimiento, un reactivo e instrucciones para uso o un reactivo con un compartimiento e instrucciones para uso. El reactivo puede comprender un agonista o antagonista de IL-19 o IL-24, o un fragmento antigénico del mismo, una composición de unión o un ácido nucleico en una orientación directa y/o antisentido. Un equipo para determinar la unión de un compuesto de prueba, por ejemplo adquirido de una muestra biológica o de una biblioteca química, puede comprender un compuesto control, un compuesto marcado y un método para separar el compuesto marcado libre y el compuesto marcado unido. El compuesto control puede comprender un segmento de las SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 2 ó 4, o un ácido nucleico de las SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 1 ó 3 que codifican para un segmento de las SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 2 ó 4. El segmento puede comprender cero, uno, dos o más fragmentos antigénicos.

Una composición que es "marcada" es detectable, directa o indirectamente por métodos espectroscópicos, fotoquímicos, bioquímicos, inmunoquímicos, isotópicos o químicos. Por ejemplo, las marcas útiles incluyen los isótopos estables 32P, 33P, 35S, 14C, 3H, 125l, colorantes fluorescentes, reactivos electrodensos, sustratos, etiquetas de epitópo o enzimas, por ejemplo, como se utilizan los inmunoensayos unidos a enzima o fluorettes (Rozinov y Nolan (1998) Chem. Biol. 5: 713-728). Los ensayos de diagnóstico se pueden utilizar con matrices biológicas tales como células vivas, extractos celulares, lisados de células, células fijas, cultivos celulares, fluidos corporales o muestras de cadáveres. Los anticuerpos conjugados útiles para diagnóstico o propósito de equipo incluyen anticuerpos acoplados a colorantes, isótopos, enzimas y metales, véase, por ejemplo, Le Doussal ef al. (1991) New Engl. J. Med. 146: 169-175; Gibellini et al. (1998) J. Immunol. 160: 3891-3898; Hsing y Bishop (1999) New Engl. J. Med. 162: 2804-2811 ; Everts, et al. (2002) New Engl. J. Med. 168: 883-889. existen varios formatos de ensayo tales como rayo inmunoensayos (RÍA), ELISA y laboratorio en un chip (Patente de E. U. A. Nos. 6,176,962 y 6,517,234).

X. Usos La invención proporciona métodos para el tratamiento y diagnóstico de numerosos trastornos que incluyen trastornos inflamatorios de las vías respiratorias, hiperreactividad de las vías respiratorias y fibrosis pulmonar. Se proporcionan métodos para el tratamiento y diagnóstico de condiciones pulmonares que involucran parénquima pulmonar, epitelio cuboidal, epitelio alveolar tipo I, epitelio alveolar tipo II, espacios alveolares o intersticio. También se proporcionan métodos de tratamiento y diagnóstico que involucran muestras de BAL, esputo y biopsias (véase, por ejemplo, Doerschuk (2000) Respir. Res. 1 : 136-140; Cosió, eí al. (1999) Am. J. Respir. Crit. Care Med. 160: S21-S25; Cosió, et al (2002) Chest 121 : 160S-165S. La invención proporciona métodos para tratar y diagnosticar trastornos que son modulados por monocitos o macrófagos, células dendríticas, neutrófilos, eosinofilos, mastocitos, linfocitos T que incluyen células tipo TH1 y células tipo TH2, linfocitos B, células epiteliales; o células endoteliales. Estos trastornos incluyen, por ejemplo, trastornos de las vías respiratorias, parénquima o alvéolos que incluyen asma, bronquitis, bronquiolitis, estado asmático y COPD. Se proporcionan métodos para modular células que median el remodelado de las vías respiratorias, por ejemplo células epiteliales, células de músculo liso y otras células estromales (Kumar (2001 ) Pharmacol. Therapeutics 91 : 93-104). Se proporcionan métodos de tratamiento y/o diagnóstico de fibrosis y granulomas. La fibrosis y los granulomas son característicos de trastornos pulmonares intersticiales, por ejemplo fibrosis pulmonar idiopática, granuloma eosinofilico y neumonitis por hipersensibilidad. Estos trastornos involucran células epiteliales alveolares activadas, macrófagos activados y/o iinfocitos (Kamp (2003) Chest 124: 1187-1189; Patel, eí al. (2001) J. Allergy Clin. Immunol. 108: 661-670). Los trastornos tratados y/o diagnosticados por la presente invención no se limitan a trastornos de las vías respiratorias sino que también incluyen, por ejemplo trastornos de intestino inflamatorio (IBD), artritis reumatoide o sinovitis, psoriasis, rechazo de injerto en transplante, lupus eritematosus sistémico (SLE), inflamación del sistema nervioso central, por ejemplo esclerosis múltiple, septisemia, arterosclerosis, diabetes mellitus así como inmunidad innata e inmunidad adquirida a patógenos, tales como bacterias, parásitos y virus. Se proporcionan agonistas o antagonistas de IL-19 o IL-24 para modular trastornos y condiciones que dependen de monocitos o macrófagos, véase, por ejemplo, Chedevergne, eí al. (2000) Arch. Dis. Child. 82 (suppl. 2) H6-9; Jeffery (1999; Clin. Exp. Allergy 29 (suppl. 2): 14-26; Essadki, eí al. (1998; Eur. Radiol. 8: 1674-1676; Jeffery (2000) Chest 117 (suppl. 1): 251 S-260S; Berrebi eí al. (2003) Gut 52: 840-846; Hibi, eí al. (2003) J. Gastroenterol. 38 (suppl. 15): 36-42; Watanabe, et al. (2003) Dig. Dis. 48: 408-414; Shimizu, eí al. (2002; Histochem. Cell Biol. 118: 251-257; Zander, eí al. (1999) J. Heart Lung Transplant. 18: 646-653; Slegers, et al. (2003) Curr. Eye Res. 26: 73-79; Milne, et al. (1998) Transplantation 15: 671-673; Steinbach, eí al. (2000; Ann. Rheum. Dis. 59: 283-288; Schwartz (2003) J. Cereb. Blood Flow Metab. 23: 385-394; Underhill (2003) Eur. J. Immunol. 33: 1767-1775; Openshaw (2002) Respir. Res. 3 (suppl. 1 ): S15-S20; Qian, et al. (1999) Am. J. Pathol. 155: 1293-1302; Brettschneider, et al. (2002) J. Neuroimmunol. 133: 193-197; Klebl, et al. (2001 ) J. Pathol. 195: 609-619; Szekanecz, et al. (2001) Curr. Rheumatol. Rep. 3: 53-63; Boehncke, eí al. (1995) Am. J. Dermatopathol. 17: 139-144; Sica, eí al. (2002) Int. Immunopharmacol. 2: 1045-1054; La invención proporciona un agonista o antagonista que comprende una composición de unión derivada del sitio de unión de antígeno de un anticuerpo, en donde el agonista o antagonista se une específicamente a un polipéptido de IL-19 (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 2); IL-24 (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 4); IL-20R1; IL-20R2; ó IL-22R. También se proporciona un agonista o antagonista que comprende un ácido nucleico que se une específicamente a un ácido nucleico de IL-19 (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 1 ); IL-24 (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 3); IL-20R1 ; 1L-20R2; ó IL-22R. Se encontró que IL-19 modula el espesor del tejido adiposo, es decir, los ratones IL-19KO muestran un incremento en el espesor del tejido adiposo, determinado por mediciones histológicas. Las citocinas y compuestos similares a citocina, por ejemplo leptina y receptor de leptina, son reguladores establecidos del metabolismo del tejido adiposo, obesidad, diabetes y tal vez el sanado de heridas o reparación de la piel. El espesor en el tejido adiposo y la obesidad pueden determinarse por métodos de histología y antropometría (véase, por ejemplo, Veniant y LeBel (2003) Curr. Pharm. Des. 9: 811-818; Sandoval y Davis (2003) J. Diabetes Complic 17: 108-113; Coppack (2001 ) Proc. nutr. Soc. 60: 349-356; Fantuzzi y Faggioni (2000) J.

Leukocyte Biol. 68: 437-446; Goren, et al. (2003) Diabetes 52: 2821-2832; Piemonti, eí al. (2003) Diabetes Care 26: 2883-2999; Taggart, et al. (1967) Brit. J. Nutr. 21 : 439-451; Lee y Nieman (1996) Nutritional Assessment, 2nd ed., Mosby Year Book, St. Louis, MO; Rolland-Cachera, et al. (1997) Am. J. Clin. Nutr. 65: 1709-1713; Jen, eí al. (1985) Int. J. Obes. 9: 213-224). El aspecto amplio de esta invención se comprende mejor con referencia a los siguientes ejemplos, los cuales no se pretende que limiten las invenciones a las modalidades específicas.

EJEMPLOS I. Métodos Generales Algunos de los métodos estándar se describen o se hace referencia, por ejemplo, en Maniatis, et al. (1982) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook, et al (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (2d ed.), vols. 1-3, CSH Press, NY; Ausubel, eí al., Biology, Greene Publishing Associates, Brooklyn, NY; o Ausubel et al. (1987) Current Protocols in Molecular Biology y suplementos, Greene/Willey, New York. Los métodos para purificación de proteínas incluyen, por ejemplo, cromatografía en columna, electroforesis, centrifugación, inmunoprecipitación y clonación y expresión de vectores y células, véase, por ejemplo Amersham Pharmacia Biotech (2003) Catalogue, Piscataway, NJ; Invitrogen (2003) Catalogue, Carlsbad, CA; Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, MO. Los métodos para citometría de flujo, que incluyen clasificación de células activado por fluorescencia (FACS) están disponibles, véase, por ejemplo, Owens, et al. (1994) Flow Cytometry Principies for Clinical Laboratory Practice, John Wiley y Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001) Flow Cytometry, segunda edición; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003) Practica! Flow Cytometry, John Wiley y Sons, Hoboken, NJ. El conteo de células se puede llevar a cabo con la ayuda de esferas o microesferas, por ejemplo esferas de conteo CaltagMR (Caltag Labs, Burlingame, CA) y PerfectcountMR (Exalpha Biologicals, Watertown, MA). Los reactivos fluorescentes adecuados para modificar ácidos nucleicos, que incluyen cebadores y sondas de ácido nucleico, polipéptidos y anticuerpos para uso, por ejemplo como reactivos de diagnóstico, están disponibles (molecular Pribes (2003) Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR; sigma-AIdrich (2003) Catalogue, St. Louis, MO). Los métodos estándar de histología del sistema inmunológico se describen, véase, por ejemplo Muller-Harmelink (ed.) (1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlang, New York, NY; Hiatt, et al. (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, y Wilkins, Phila, PA; Louis et al. (2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY. Están disponibles métodos en relación al lavado broncoalveolar y pruebas de exposición de pulmón, por ejemplo que involucran Aspergillus, histamina y metacolina. Los macrófagos, neutrófilos y eosinofilos participan en la defensa del hospedador contra Aspergillus, véase, por ejemplo, Kurup y Grunig (2002) Mycopathologia 153: 165-177; Schuh, et al. (2002) EMBO J. 16: 1313-1315; Wark, et al. (2000) Eur. Respir. J. 16: 1095-1101 ; Philippe, et al. (2003) Infect Immun. 71 : 3034-3042, Felleer-Kopman y Ernst (2003) Semin. Respir. Infecí. 18: 87-94; Marr, et al. (2002) Infecí. Dis. Clin. Noríh Am. 16: 875-894; Kurup y Grunig (2002) Mycopathologia 153: 165-177; Jóos (2003) Curr. Opin. Pharmacol. 3: 233-238; Cockcroft, et al. (2001) Chest 120: 1857-1860; Brusasco y Crimi (2001) Allergy 56: 1114-1120; O'Byrne y Inman (2000) J. Asthma 37: 293-302; Buckingham y Hansell (2003) Eur. Radiol. 13: 1786- 17800; Kurup, et al. (2002) Iní. Arch. Allergy Immunol. 129: 181-188; Wheat, et al. (2002) Semin. Respir. Infecí. 17: 158-181. Los métodos para uso en modelos en animales, por ejemplo ratones con genes inactivados y ensayos basados en célula para la prueba, evaluación y cribado de agentes de diagnóstico, terapéuticos y farmacéuticos están disponibles, véase, por ejemplo, Car y Eng ( 2001 ) Veí. Pafhol. 38: 20-30; Kenyon, et al. (2003) Toxicol. Appl. Pharmacol. 186: 90-100; Deurloo, et al. (2001) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 25: 751-760; Zuberi, et al. (2000) J. Immunol. 164: 2667-2673; Temelkovski, et al. (1998) Thorax 53: 849-856; Horrocks, et al. (2003) Curr. Opin. Drug Discov. Devel. 6: 570-575; Johnston, et al. (2002) Drug Discov. Today 7: 353-363. Están disponibles paquetes de software para determinar, por ejemplo, fragmentos antigénicos, secuencias de señal y líder, naturalización de proteínas y dominios funcionales véase, por ejemplo, Vector NTIMR Suite (Informax, Inc. Bethesda, MD); GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA), y DeCypherMR (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada); Menne, et al. (2000) Bioinformaíics 16: 741-742. También se pueden utilizar bases de datos de secuencias públicas, por ejemplo de GenBank y otros. II. Ratones con genes inactivados Se elaboran ratones con genes inactivados para IL-19 (1L-19KO) utilizando los métodos generales descritos por Chensue, et al. (2001) J. Exp. Med. 193: 573-584. La cepa de ratones de origen es 129 SvEv. Brevemente, se inserta un cásete para neomicina dentro de un exon del gen para IL-19, lo que resulta en un producto de gen que alberga el gen para neomicina. Utilizando una sonda de ADNc para IL-19 de ratón, se identifica un clon BAC que contiene la totalidad del locus IL-19. Se subclona un fragmento EcoRI de 12 kilobases (kb) que contiene los exones 1-5. Utilizando este plásmido se construye un vector dirigido con un fragmento BamHI de 1.752 pares de bases (pb) (región 5' de homología) y un fragmento Xmnl de 4,044 pb (región 3' de homología). El locus dirigido tiene exones 3 y 4 sustituidos con un cásete Neo floxed impulsado por un promotor TK de HSV en la dirección opuesta de IL-19. El locus dirigido adecuadamente se identifica por digestión del ADN genómico de los clones de células ES resistentes a Neo con Ncol y que hibridizan con una sonda de 372 pb generada utilizando PCR en el fragmento EcoRI de 12 kb con los cebadores 1 : AAGTGATTTCGTTTGGCTG (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 5) y 2: TGTCTGGTAAGATCCTATC (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6). La verificación de la integración del brazo 3' se realiza al digerir ADN genómico de los clones de las células del tallo embriónico resistentes a Neo (ES) con EcoRl e hibridación con una sonda de 322 pb generada utilizando PCR en 12 kb. El fragmento EcoRI con el cebador número 1 : CACCATCAGCAGCTTGGTC (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 7) y el cebador número 2: TAATCCTCATGCAGCTCTG (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8). Se generan clones de células ES dirigidos a IL-19. Las células ES se someten a electrodeposición con un vector de direccionamiento linealizado, como se ha descrito (Joyner (1993) Gene Targefing: A Pracíical Approach, IRL Press, Oxford, Reino Unido). Seis de 1367 clones resistentes a G418 se detectan como recombinantes homólogos por análisis Southern con una sonda externa 5' y 3'. La sustitución de una copia única de la construcción objetivo se confirma por análisis Southern utilizando una sonda neo. Se generan ratones quiméricos, heterocigotos y homocigotos. Se inyectan dos clones ES dirigidos en blastocitos de 3.5 dpc C57BL/6 (CRL), los cuales después se transfieren a ratones hembra seudoembarazadas CD1 en el día 2.5 dpc para gestación. La descendencia masculina quimérica se cruza con hembras C57BL/6 ( CRL) y se reconoce la transmisión de línea germinal por el color del recubrimiento agouti en la descendencia. Los ratones heterocigotos que heredan el alelo mutado de un padre se detectan por PCR o por análisis Southern del ADN. La descendencia de las cruzas de heterocigotos de analizan genotípicamente por PCR o análisis Southern del ADN.

Los ratones IL-24KO se preparan utilizando los métodos generales descritos por Lemckert, et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 917- 918. La cepa de ratones de origen es C57BL/6. Brevemente, se inserta un cásete para neomicina dentro de un exon de IL-24 y después se elimina por pliegue, lo que resulta en la supresión del exon y del gen para neomicina. Los detalles adicionales respecto al método Cre-Lox utilizados en la preparación de lL-24Ko han sido descritos (Ruuls, et al. (2001) I munity 15: 533-543). Utilizando una sonda de ADNc para IL-24 de ratón, se identifica un clon BAC que contiene la totalidad del locus lL-24. Se secuencia un subclon del locus IL-24 de 12,763 pb y se encuentra que contiene cinco exones para lL-24. Se construye un vector dirigido que contiene un fragmento Stul y Hpal de 1.6 kb (región 5' de homología) y un fragmento Xbal y Pací de 5.34 kb (región 3' de homología). El locus dirigido tiene exones 1 y 2 sustituidos con un cásete Neo floxed que es impulsado por un promotor TK de HSV en la dirección opuesta de IL-24. El locus dirigido apropiadamente se identifica por digestión de ADN genómico de clones de células ES resistentes a Neo con Hindlll e hibridación con una sonda de la región 1220-1600 pb del subclon del locus IL-24. La verificación de la integración del brazo 3' se realiza al digerir ADN genómico de clones de células ES resistentes a Neo con Hpal e hibridación con una sonda de la región 11050-11391 pb del subclon del locus IL-24.

III. Análisis celular del fluido de lavado broncoalveolar (BAL) Aspergillus fumigatus (Asp; tratamiento con Asp; exposición a Asp) induce numerosos signos de asma y otros trastornos inmunológicos en los pulmones, por ejemplo hiperreactividad de las vías respiratorias, hiperplasia de células goblet, sobreproducción de moco e inflamación de las vías respiratorias eosinofílicas. Los ratones se tratan intranasalmente con antígeno de Aspergillus o con solución salina amortiguada con fosfato (PBS) a intervalos de cuatro días en t = 1, 5, 9, 12 y 16 días (cuadro 1). Las células se identifican en BAL a partir de ratones naturales (no alterados), ratones IL- 19KO y ratones 1L-24KO. La totalidad de las cuentas de células representan números de células por esfera. Se proporcionan muestras de BAL con 32,000 esferas fluorescentes para facilitar el conteo (Cuadro 1). El tratamiento con Asp modula el número total de células BAL, en donde el tratamiento incrementa las células BAL en la totalidad de los tres genotipos de ratones: ratones naturales, IL-19Ko e IL-24KO. Como se muestra en el cuadro 1 con el tratamiento con Asp, el número de células en el BAL de IL-19KO y BAL de IL-24KO es un poco menor que BAL natural (cuadro 1 ). El tratamiento con Asp también incrementa las células bajas en CPH CD11c+ en la totalidad de los tres genotipos de ratón, en donde el número de células bajas CPH CD11c+ en el BAL de ratón IL-19KO tratado con Asp es menor que el BAL de un ratón natural tratado con Asp (cuadro 1 ). Las células bajas en CPH CD11c+ son principalmente DC, monocitos y macrófagos.

Las respuestas en el número de linfocitos B y la expresión de linfocitos B de CPH clase II difieren en IL-19KO e IL-24KO, en relación a un ratón no alterado. Con el tratamiento con Asp, el número de linfocitos B es bajo en ratones IL-19KO y alto en ratones IL-24KO, en relación a la cuenta de linfocitos B en el ratón no alterado (cuadro 1). Con el tratamiento con Asp, la expresión de CPH clase II se incrementa en linfocitos B de IL-19Ko y disminuye en linfocitos B de IL-24KO (cuadro 1). Las cuentas de macrófagos y DC se reducen en ratones IL-19KO, en relación a las cuentas de ratones no alterados (cuadro 1). Respecto a los ratones naturales (no alterados), se probaron dos tipos de ratones naturales para determinar el porcentaje de células que expresan CD11c y CPH clase II. Estos dos tipos son ratones hembra 129 SvEv (12 semanas de edad) y ratones hembra C57 BL/6 (7 semanas de edad). La expresión de CD11c en ratones IL-19KO se reduce, cuando se compara ya sea con cualquiera de los dos tipos anteriores de ratones no alterados.

CUADRO 1 Células identificadas en BAL. ND significa no determinado El análisis histológico demuestra que los pulmones de ratones IL-19KO tratados con Asp se inflaman menos en comparación con los dos tipos naturales tratados con Asp, en particular inflamación del parénquima. Tanto los ratones naturales tratados con Asp como los IL.19KO tratados con Asp muestran hiperplasia de células goblet. Los ratones IL-24KO presentan inflamaciones más estructuradas en comparación con los naturales, es decir, tienen estructuras de tipo de folículo linfático en los pulmones, un hallazgo que concuerdan con los datos de FACS que muestran linfocitos B aumentados en el BAL de ratones IL-24KO tratados con Asp. Los pulmones de ratones naturales tratados con Asp o IL-24Ko tratados con Asp muestran inflamación e hiperplasia de células goblet similares, de acuerdo con el análisis histológico. La histología también muestra que los ratones naturales C57 BL/6 son de alguna manera menos sensibles a Aspergillus en comparación con los ratones 129 SvEv naturales, es decir, los ratones 129 SvEv naturales muestran más inflamación inducida por Asp. Se encontró que los ratones IL-19KO tienen depósitos de tejido adiposo aumentados, determinado por ensayos de tejido adiposo en la piel.

IV. Hiperreactividad de vías respiratorias después de exposición Se mide la hiperreactividad de las vías respiratorias después de: tratamiento control con PBS; exposición únicamente con Aspergillus; tratamiento únicamente con metacolina o tratamiento tanto con metacolina como con Aspergillus (cuadro 2). Se utiliza metacolina para determinar la hiperreactividad de las vías respiratorias en pacientes humanos así como en animales experimentales (Gronke, et al. (2002) Clin. Exp. All. 32: 57-63; Obase, et al. (2003) Allergy 58: 213-220). Se prueba la hiperreactividad de las vías respiratorias por el método de penh (véase, por ejemplo, Kenyon, et al. (2003) Toxicol. Applied Pharmacol. 191: 2-11 ; Hantos, et al. (2002) J. Appl. Physiol. 93: 1196-1197; Hamelman, et al. (1997) Am. J. Respir. Crifical Care Med. 156: 766-775). El protocolo de exposición involucra dosis de metacolina de 4.17 o 10.0 mg/ml. El protocolo de dosificación consiste de tres ciclos, cada ciclo comprende tres etapas, es decir, una fase en aerosol (3.0 min), una fase de secado (0.5 min) y una fase de registro (5 min). Cada ciclo de tres etapas dura 8.5 min. Se administran a cada ratón tres dosis separadas de una cantidad idéntica de metacolina en tres ciclos sucesivos (MCh 1 ; MCh 2; y MCh 3). La prueba se lleva a cabo con 0, 4.17 ó 10 mg/ml de metacolina, seguido por determinaciones de hiperreactividad de las vías respiratorias. La reactividad con PBS se establece en 100% (cuadro 2). El protocolo de tratamiento con Aspergillus involucra antígeno de Aspergillus fumigafus intranasal a intervalo de cuatro días, es decir, en t = 1 , 5, 9, 12 y 16 días. Los ratones IL-19KO tratados con Asp muestran menos hiperreactividad que los ratones alterados, tratados con Asp. De manera similar, los ratones KO tratados con Asp muestran menos hiperreactividad en comparación con los ratones naturales, tratados con Asp. El IL-19KO muestra hiperreactividad reducida en respuesta a únicamente metacolina y a metacolina más Aspergillus (cuadro 2). De manera similar, los ratones IL-24KO también presentan hiperreactividad reducida en respuesta a metacolina sola o a metacolina más Aspergillus (cuadro 2). Los ratones con un valor de hiperreactividad de 300% o mayor, después del tratamiento con metacolina, presentan dispnea. Sin la exposición a Aspergillus, la hiperreactividad de las vías respiratorias parece ser la misma en los ratones tanto naturales como IL-24KO. No obstante, con la exposición, la hiperreactividad es menor en ratones IL-24KO en comparación con los ratones no alterados. Debido al papel establecido de las interacciones entre los linfocitos B a los linfocitos T en la hiperreactividad de las vías respiratorias, la expresión^reducida de CPH clase II en los linfocitos B en los ratones IL-24KO puede explicar la hiperreactividad reducida en estos animales (Waldburger, et al. (2001) J. Exp. Med. 194- 393- 406; Pai, et al. (2002) J. Immunol. 169: 1326-1333).

CUADRO 2 Hiperreactividad de las vías respiratorias después del tratamiento con metacolina V. Análisis de las células en nodulos linfáticos Se trata a ratones intranasalmente con antígeno Aspergillus fumigafus a intervalos de cuatro días, es decir, en t = 1 , 5, 9, 12 y 16 días. Se identifican células de los nodulos linfáticos de ratones no alterados, ratones IL-19KO y ratones IL-24KO. Los ratones se tratan con Aspergillus (Asp) como se indica (cuadro 3). Se proporcionan muestras de nodulo linfático con 64,000 esferas para facilitar el conteo de células. El número de linfocitos B de nodulo linfático se incrementa en los ratones 1L-24KO en relación a los normales (datos no mostrados) y en los ratones IL-24KO tratados con Asp, en relación a los ratones normales tratados con Asp (cuadro 3). Se mide la expresión CPH clase II por fluorescencia y se describe en unidades arbitrarias de fluorescencia. La intensidad de fluorescencia es relativa al número de moléculas expresadas por la célula.

CUADRO 3 Células identificadas en nodulos linfáticos de ratón. ND significa no determinado Además de los cambios descritos en el cuadro 3, existe una tendencia así un número reducido de las DC en nodulos linfáticos de ratones IL-19KO, en comparación con ratones normales. También existen números reducidos de DC en nodulos linfáticos de ratones 1L-19KO tratados con Asp, en comparación con ios ratones no expuestos, tratados con Asp. Los macrófagos de nodulo linfático también se reducen en ratones IL-19KO tratados con Asp, en comparación con ratones naturales tratados con Asp.

VI. Análisis por PCR de distribución de 1L-19 e IL-24 Se determina la expresión y contribución de IL-19 e IL24 en células y tejidos humanos y de ratón, por PCR en tiempo real TaqmanMR (PE applied biosystems, Foster City, CA), en donde los resultados son relativos a la expresión de ubiquitina (cuadros 4 y 5), La expresión de ubiquitina se establece en uno (1.0). En particular, la expresión de IL-19 e IL-24 se incrementa en respuesta a monocitos/macrófagos o activación de células dendríticas o a exposición a antígeno en el pulmón (cuadros 4 y 5).

CUADRO 4 Expresión de IL-19 por análisis Taqman MR , en relación a ubiquitina (1.0) CUADRO 5 Expresión de IL-24 por análisis Taqman , en relación a ubiquitina (1.0) Vil. 1L-19 Modula el espesor del tejido adiposo La inactivación de IL-19 provoca un incremento en el espesor de tejido adiposo en los ratones IL-19KO. El espesor de la capa de tejido adiposo entre la dermis y el panículo carnoso se incrementa 2-3 veces, determinado por métodos histológicos. La ¡nvención proporciona métodos para modular el espesor del tejido adiposo, la adiposidad, obesidad y diabetes, por un agonista o antagonista de IL-19 o IL-24. La invención proporciona un agonista de IL-19 o de IL-24, por ejemplo un polipéptido de IL-19 o un ácido nucleico que codifica para IL-19, para el tratamiento de obesidad, adiposidad o diabetes. También se proporcionan métodos para el diagnóstico de obesidad, adiposidad o diabetes. Todas las citas en la presente se incorporan en este documento como referencia en el mismo grado a cada publicación, solicitud de patente o patente individuales como si hubieran sido indicadas específica e individualmente como incorporadas con referencia. Muchas modificaciones y variaciones de esta invención, como serán evidentes para una persona habitualmente experta en la técnica pueden realizarse para adaptarse a una situación, material, composición de materia, procedimiento, etapa o etapas de procedimiento particulares para conservar el objetivo, espíritu y alcance de la invención. Se pretende que todas las modificaciones se encuentren dentro del alcance de las reivindicaciones anexas a la presente sin que por esto se aparten del espíritu y alcance de la ¡nvención. Las modalidades específicas descritas en la presente se ofrecen a modo de ejemplo únicamente, y la ¡nvención va a estar limitada por los términos de las reivindicaciones anexas, junto con el alcance completo de los equivalentes a los cuales están intitulados dichas reivindicación; y la invención no está limitada por las modalidades específicas que se han presentado en la presente a modo de ejemplo.

Claims (20)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un método para modular una actividad de una célula que comprende poner en contacto la célula con un agonista o antagonista de: a) IL-19 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 1 ó 2); o b) IL-24 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 3 ó 4); en donde la célula modula la hiperreactividad de las vías respiratorias o la inflamación de las vías respiratorias.

2.- El método de conformidad con las reivindicación 1 , caracterizado además porque la célula es: a) un monocito o macrófago; b) un linfocito T o un linfocito B; c) una célula dendrítica; o d) una célula epitelial o endotelial.

3.- El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el macrófago es un macrófago alveolar.

4.- El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el agonista o antagonista es una composición de unión derivada de un sitio de un anticuerpo, para unión de un antígeno.

5.- El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el agonista o antagonista se une específicamente a un polipéptido o ácido nucleico de: a) lL-19 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 1 ó 2); b) IL-24 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 3 ó 4); c) IL-20R1; d) IL-20R2 o e) IL-22R.

6.- El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque el agonista o antagonista comprende: a) un anticuerpo policlonal; b) un anticuerpo monoclonal; c) un anticuerpo humanizado; d) un fragmento Fab, Fv o F(ab')2; e) un péptido mimético de un anticuerpo; f) un ácido nucleico; o g) una marca detectable.

7.- El uso de un agonista o antagonista de: a) IL-19 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 1 ó 2); o b) lL-24 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 3 ó 4), para preparar un medicamento para tratar a un sujeto que padece de un trastorno de hiperreactividad de vías respiratorias o un trastorno inflamatorio de las vías respiratorias.

8.- El uso que se reclama en las reivindicación 7, en donde el trastorno es mediado por: a) monocitos o macrófagos; b) linfocitos T o linfocitos B; c) células dendríticas; o d) células epiteliales o endoteliales.

9.- El uso que se reclama en la reivindicación 8, en donde los macrófagos son macrófagos alveolares.

10.- El uso que se reclama en la reivindicación 7, en donde el trastorno comprende: a) asma; b) rinitis alérgica; c) bronquitis; d) bronquiolitis; o e) trastorno pulmonar obstructivo crónico (COPD). «

11.- El uso que se reclama en la reivindicación 7, en donde el antagonista reduce o inhibe la hiperreactividad de las vías respiratorias.

12.- El uso que se reclama en la reivindicación 7, en donde el agonista o antagonista es una composición de unión derivada de un sitio de un anticuerpo que se une a un antígeno.

13.- El uso que se reclama en la reivindicación 7, en donde el agonista o antagonista se une específicamente a un polipéptido o ácido nucleico que comprende: a) 1L-19 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 1 ó 2); b) IL-24 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 3 ó 4); c) IL-20R1 ; d) IL-20R2 o e) IL-22R.

14.- El uso que se reclama en la reivindicación 13, en donde el agonista o antagonista comprende: a) un anticuerpo policlonal; b) un anticuerpo monoclonal; c) un anticuerpo humanizado; d) un fragmento Fab, Fv o F(ab')2; e) un péptido mimético de un anticuerpo; f) un ácido nucleico; o g) una marca detectable.

15.- Un método para el diagnóstico de un trastorno de hiperreactividad en vías respiratorias o un trastorno inflamatorio de las vías respiratorias que comprende poner en contacto una muestra de un sujeto de prueba con una composición de unión que se une específicamente a un polipéptido o ácido nucleico de: a) IL-19 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 1 ó 2); b) IL-24 (SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 3 ó 4); c) IL-20R1 ; d) IL-20R2 o e) IL-22R.

16.- El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado además porque comprende: a) poner en contacto la composición de unión con una muestra derivada de un sujeto control o una muestra control; y b) comparar la unión encontrada con el sujeto de prueba, con la unión encontrada con el sujeto control o muestra control.

17.- Un método para cribado para determinar un compuesto que module una actividad fisiológica, que comprende: a) poner en contacto un compuesto candidato con un ratón con gen para IL-19 inactivado (IL-19KO) para proporcionar un ratón IL-19KO con contacto, y determinar la actividad fisiológica en el ratón IL-19KO con contacto; b) determinar la actividad fisiológica de un ratón IL-19Ko que no se ha puesto en contacto con el compuesto candidato; y c) comparar las actividades fisiológicas del ratón IL- 19KO que ha estado en contacto y el ratón IL-19KO que no ha estado en contacto.

18.- El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado además porque la actividad fisiológica comprende: a) una actividad inmunológica; b) inflamación de las vías respiratorias; c) hiperreactividad de las vías respiratorias; o d) una actividad proliferativa.

19.- Un método para cribar para buscar un compuesto que module una actividad fisiológica, que comprende: a) poner en contacto un compuesto candidato con un ratón con gen para IL-24 inactivado (IL-24KO) para proporcionar un ratón IL-24KO con contacto, y determinar la actividad fisiológica en el ratón IL-24KO con contacto; b) determinar la actividad fisiológica en un ratón IL-24KO que no ha estado en contacto con el compuesto candidato; y c) comparar las actividades fisiológicas del ratón IL- 24KO en contacto y el ratón IL-24KO que no ha estado en contacto.

20.- El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado además porque la actividad fisiológica comprende: a) una actividad inmunológica; b) inflamación de las vías respiratorias; c) hiperreactividad de las vías respiratorias; o d) una actividad proliferativa. 21- El uso de un agonista o antagonista de: a) IL-19; o b) IL-24, para preparar un medicamento para tratar o diagnosticar obesidad o diabetes.