MXPA04009733A

MXPA04009733A - Control integrado para elementos analiticos.

Info

Publication number: MXPA04009733A
Application number: MXPA04009733A
Authority: MX
Inventors: Dreibholz Joerg
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 2003-10-09
Filing date: 2004-10-05
Publication date: 2005-05-18
Also published as: US7914752B2; KR100650970B1; CA2483757A1; US20050123441A1; DK1522859T3; AU2004218604A1; EP1522859A1; US20110177605A1; SG111220A1; KR20060091278A; CN1605865A; HK1076868A1; JP2005156544A; AU2004218604B2; KR20050034563A; US8137980B2; DE10346863A1; PL1522859T3; JP4115438B2; EP1522859B1

Abstract

La invencion se refiere a un sistema reactivo para el control integrado de los llamados elementos analiticos, en particular a cintas de prueba, que contienen un N-oxido organico o un compuesto nitroso. La invencion tambien se refiere a elementos analiticos que contienen un sistema reactivo para una reaccion de deteccion y un sistema reactivo para un control integrado. Ademas, la invencion se refiere a un metodo para verificar elementos analiticos en donde un sistema reactivo para un control integrado se examina opticamente o electroquimicamente con la ayuda de un instrumento de medicion para cambios que podrian indicar un esfuerzo del elemento analitico.

Description

CONTROL INTEGRADO PARA ELEMENTOS ANALITICOS DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a un sistema reactivo de control para un elemento analítico, por ejemplo, en la forma de una cinta de prueba y en particular una cinta de prueba para determinar un parámetro de coagulación que permite una diferenciación entre elementos analíticos de funcionamiento y elementos analíticos de no funcionamiento. La invención también se refiere a los correspondientes elementos analíticos y a los métodos para su control. Las pruebas portadoras ligadas llamadas así están siendo utilizadas hasta un punto que incrementa el análisis cualitativo y cuantitativo de los componentes de una muestra líquida, en particular de un fluido corporal de seres humanos o animales. Los elementos analíticos (también referidos como elementos de prueba) son utilizados para esto cuando al menos un reactivo es insertado en un campo de prueba que consiste de una o más capas, el cual se pone en contacto con la muestra. La reacción de la muestra y del reactivo resulta en un cambio en el elemento analítico que puede ser evaluado visualmente o con la ayuda de un instrumento (usualmente por fotometría de reflexión o de manera electroquímica) . Después que se ha llevado a cabo una prueba, se dispone del elemento analítico empleado.

(Ref. 158256) Son conocidos numerosos tipos diferentes de elementos analíticos, los cuales difieren en su origen de medición (por ejemplo, óptico o electroquímico) y de los reactivos que son utilizados y en su construcción, y en particular con respecto a la disposición y fijación de las capas de prueba. Los elementos analíticos en forma de cinta son de importancia práctica particular. Estos elementos analíticos que son también referidos como cintas de prueba están esencialmente compuestos de una capa de soporte alargada elaborada de un material plástico sobre el cual están unidos uno o más campos de prueba. Los elementos analíticos son envasados en un envase primario en el interior del cual están almacenados hasta su uso, es decir, hasta que sean removidos por el usuario y que se haya llevado a cabo una prueba con distribución posterior. Los elementos analíticos pueden envasarse individualmente en su propio envase primario. Las unidades de envase del elemento analítico son utilizadas comúnmente, en las cuales una pluralidad de elementos analíticos está colocada en el interior de un envase primario común. El envase primario comúnmente contiene un desecante . El interior del envase primario es usualmente sellado sustancialmente de manera hermética. Por lo tanto las condiciones de almacenamiento son esencialmente determinadas mediante las condiciones ambientales en el envase primario durante el almacenamiento. Muchos elementos analíticos contienen reactivos que pueden dañarse por ciertas condiciones de almacenamiento, por ejemplo, temperatura, humedad, oxígeno, luz, etc., que los hace inusables para llevar a cabo una prueba confiable. Por lo tanto para evitarles deterioro es necesario almacenar la unidad de envase del elemento analítico bajo ciertas condiciones apropiadas recomendadas por el fabricante. De parte del fabricante, la duración de almacenaje del elemento analítico es garantizada durante un cierto período cuando se almacena adecuadamente. El uso de un elemento analítico con un reactivo dañado puede llevar a un resultado de prueba falso que puede resultar en una mala interpretación seria de, por ejemplo, el estado de salud de una persona. Por lo tanto en el pasado, se han hecho varios intentos para reducir el riesgo de utilizar elementos analíticos con deterioro en almacenaj e . Por ejemplo reactivos de prueba que se han desarrollado son relativamente insensibles a efectos externos. El propósito de otro desarrollo es utilizar un envase primario elaborado para minimizar efectos externos en los reactivos de los elementos analíticos. Ambas soluciones están asociadas con costos de manufacturación sustancialmente aumentados. Por razones de seguridad se establece una duración en almacenaje relativamente corta. Como resultado los elementos analíticos no pueden utilizarse más tiempo después de que la fecha de duración de almacenaje ha expirado, aunque no es posible comprobar si en realidad han existido condiciones que podrían haber resultado en el deterioro de los reactivos. Las cintas de prueba para exámenes de diagnóstico de sangre están sujetas a un control de calidad extenso antes de su venta. Las condiciones de envío y almacenaje adecuadas son examinadas intensivamente antes de que sean lanzadas al mercado y están por ejemplo descritas en el envase o adjuntas al envase. No obstante, puede no estar completamente excluido que las cintas están deterioradas o dañadas antes de la fecha de expiración durante la transportación de las mercancías al cliente o debido al almacenamiento incorrecto por el cliente y que existe un riesgo que se obtengan mediciones falsas cuando son utilizadas . Las condiciones de transportación y/o almacenamiento inadecuadas pueden descubrirse mediante mediciones utilizando controles líquidos que son distribuidos como componentes adicionales del sistema además del instrumento y cintas para la mayoría de sistemas de punto de cuidado (sistemas de PoC) llamados así, que son utilizados en forma decéntrica (es decir, fuera de laboratorios especiales, es decir, por ejemplo en oficinas de doctores, farmacias o por el paciente en el hogar) . Las desventajas de utilizar controles líquidos para sistemas de PoC) por ejemplo para sistemas de medición de coagulación) son en cierto modo su manejo complicado, los costos para utilizar normalmente dos cintas de prueba y dos líquidos de control (control de nivel 1 y de nivel 2) y el hecho que aunque se miden normalmente cintas del mismo lote de producción y envase con los controles, sin embargo, son inevitablemente otras cintas que aquellas con las cuales se examina en realidad la muestra de sangre de un paciente . Estas desventajas son evitadas por un control integrado (abreviado como OBC en lo siguiente) que se integra en cada cinta de prueba y no requiere un líquido de prueba adicional . Los sistemas con controles integrados no requieren líquidos sino que requieren hacerlos funcionar con el mismo líquido de muestra a partir del cual se determina el parámetro a ser determinado con el sistema de medición. Tales controles integrados están descritos por ejemplo en las patentes de US 5,504,011 (ITC), US 6,084,660 (Lifescan) y US 6,060,323 (Hemosense) . Una característica común de los sistemas de control expuesta en los documentos es que una muestra de sangre se recoge en un elemento analítico a través de un canal capilar y se transporta por fuerzas capilares a un sitio de examen dentro del elemento analítico. La muestra se divide por una o más ramificaciones del sistema capilar y se conduce a uno o más canales laterales. Se colocan luego reactivos en esos canales laterales que constituyen el OBC actual. Una desventaja común de estos controles integrados es que las cintas de prueba - además del canal de medición actual para la muestra del paciente - requieren varios canales adicionales (normalmente dos) . Después de ser llenados con la misma sangre del paciente, se llevan a cabo las mediciones en esos canales adicionales que deben dar información acerca de la integridad de la cinta. Este concepto resulta en altos costos de fabricación, ya que los canales individuales tienen que ser proporcionados por separado con reactivos diferentes. Además, tales sistemas de control requieren volúmenes comparativamente grandes ya que, además del canal de medición actual, al menos uno y normalmente incluso varios canales de control tienen que ser llenados con la muestra. Grandes volúmenes de muestra son considerados como una desventaja particular donde los mismos pacientes tienen que obtener regularmente la muestra, es decir, por ejemplo en monitoreo del hogar llamado así, especialmente en el caso de diabéticos o pacientes que tienen que monitorear sus valores de coagulación ya que la colección de las muestras de sangre por punción de la piel es doloroso y aún más doloroso cuando se requiere más muestra de sangre. Además, los sistemas de control integrado de multicanales padecen de mecanismos de llenado difíciles ya que la muestra tiene que penetrar automáticamente en varios canales y llenándolos . Es conocido de la DE-A 198 31 519 que pueden estar unidos elementos indicadores de la humedad o temperatura irreversibles a elementos de prueba o su envase que debe indicar el deterioro a elementos de prueba, por ejemplo, por temperaturas excesivas o humedad del aire, luz o los efectos del oxígeno. El objeto de la invención es desarrollar un sistema de control integrado que no tenga las desventajas, especialmente con respecto a los costos de fabricación y volumen de la muestra, pero no obstante con seguridad indica el potencial no utilizable de los elementos de prueba, especialmente como resultado de las condiciones inadecuadas de almacenamiento y transporte. En particular el deterioro de esfuerzo de la humedad y/o temperatura en los elementos de prueba debe detectarse con la ayuda del OBC de acuerdo con la invención. Además, el OBC propuesto no debe hacerse reaccionar demasiado pronto para hacer posible un almacenamiento largo del producto a temperatura ambiente y debe hacer posible una buena discriminación entre cintas intactas y defectuosas con una alta precisión. Este objeto se logra por medio de la materia objeto de la invención. La invención se refiere a un sistema reactivo de control como se reivindica en la reivindicación 1, su uso como se reivindica en la reivindicación 8, un elemento analítico correspondiente como se reivindica en la reivindicación 9 y un método para controlar elementos analíticos como se reivindica en la reivindicación 12. Las modalidades ventajosas de la invención son una materia objeto de las subreivindicaciones . La invención se aclara además por la siguiente descripción detallada, las figuras y ejemplos. El concepto de acuerdo con la invención que puede también referirse como un control integrado de 1-canal, proporciona que una zona reactiva sobre un elemento de prueba que puede de preferencia también utilizarse para la medición actual de la muestra del paciente, contiene una substancia que cambia cuando se somete a esfuerzo. El cambio en esta substancia de preferencia resulta en un producto de degradación que puede ya sea detectarse visualmente o mediante el instrumento proporcionado para medir la cinta de prueba. Una cinta que ha sido reconocida por ser efectiva no puede por ejemplo liberarse por el instrumento de medición para medir la muestra del paciente . El sistema reactivo de acuerdo con la invención es adecuado para el control integrado de elementos analíticos. El sistema reactivo contiene al menos una substancia química, pero de preferencia una mezcla de substancias químicas. Al menos una de estas substancias es adecuada para indicar de manera directa o indirecta las condiciones ambientales que podrían deteriorar la seguridad de funcionamiento de un elemento analítico. Esta propiedad es referida como una propiedad de control integrado. Para este propósito el deterioro de los efectos ambientales tales como temperatura, humedad, luz, oxígeno etc., son utilizados para llevar a cabo un cambio preferiblemente irreversible en la substancia o con la substancia que hace posible una detección posterior de los efectos de deterioro. En esta conexión es normalmente irrelevante determinar el tipo exacto de efectos de deterioro; es normalmente suficiente establecer el hecho de que se ha llevado a cabo un efecto de deterioro . El sistema reactivo para un control integrado puede contener ya sea otras substancias auxiliares además de la substancia que tiene la función del control integrado actual . Estas pueden ser substancias tampón, agentes de relleno, formadores de película y similares, los cuales son conocidos por una persona experta en la técnica en numerosas modalidades en unión con las formulaciones reactivas de elementos de prueba analíticos. En el sentido de la invención, los elementos analíticos (también referidos como elementos de prueba, elementos de prueba analíticos, cintas de prueba, fragmentos de prueba, -dispositivos de prueba) son de preferencia adecuados para determinar analitos u otros parámetros en muestras líquidas y especialmente en muestras líquidas de origen humano tales como sangre, suero, plasma, orina y similares. Los elementos analíticos en el sentido de la invención siempre contienen un reactivo o un sistema reactivo sobre un material de soporte que genera una señal perceptible que es dependiente del analito a ser examinado en la muestra o en la propiedad de la muestra a ser examinada. Tales elementos analíticos son conocidos por una persona experta en la técnica en numerosas modalidades. Son ejemplos cintas de prueba ópticas o electroquímicas para detectar metabolitos en la sangre o líquidos de muestra derivados de los mismos y en particular para determinar la glucosa, colesterol y similares. Además, son conocidas cintas de prueba que pueden utilizarse para determinar los parámetros de coagulación en una muestra de sangre . El sistema reactivo que está ubicado en el elemento analítico y que es responsable de una señal de detección perceptible de un analito en la muestra o una propiedad de la muestra puede de preferencia resultar en una señal de medición ópticamente perceptible y evaluable o una señal que puede detectarse por electroquímica. Ambas variantes son conocidas por una persona experta en la técnica en numerosas modalidades . El sistema reactivo de un control integrado de acuerdo con la invención se integra de preferencia en el sistema reactivo para la reacción de detección. Sin embargo, también es concebible y posible adaptar sistemas reactivos para la reacción de detección y sistemas reactivos para el control integrado en zonas separadas espacialmente sobre el elemento analítico. En el caso preferido de que el sistema reactivo para el control integrado sea integrado en el sistema reactivo para el cuidado de la reacción de detección, debe considerarse que los reactivos no se afecten negativamente entre sí . El sistema reactivo para el control integrado y el sistema reactivo para la reacción de detección puede basarse en los mismos o en diferentes principios de detección. De esta forma de acuerdo con la invención es posible evaluar de manera óptica o electroquímicamente el control integrado. También es posible detectar de manera óptica o electroquímica la reacción de detección actual. Se prefiere particularmente detectar electroquímicamente el control integrado así como también la reacción de detección. En esta conexión puede llevarse a cabo una detección óptica visualmente o por medio de un aparato con la ayuda de un fotómetro en cuyo caso pueden utilizarse cualesquiera métodos familiares para una persona experta en la técnica tales como medida ' de reflexión, medida de absorción, medida de transmisión, medida de luminiscencia y similares. A su vez, son adecuadas para los métodos de detección electroquímicos como la potenciometría , amperimetría , coulometría, crono-amperimetría y similares. En particular un cambio óptico en el campo del control integrado o campo reactivo de detección puede evaluarse a simple vista sin utilizar un instrumento de medición. Sin embargo, es preferible evaluar el control integrado y el campo de detección con la ayuda de un instrumento de medición, por ejemplo un fotómetro o un instrumento de medición electroquímica. También es posible evaluar el control integrado sin un instrumento de medición pero para evaluar la reacción de detección con un instrumento de medición. Las formulaciones del reactivo para el control integrado y para el campo de detección pueden aplicarse a un soporte de un elemento analítico utilizando cualesquiera métodos conocidos para una persona experta en la técnica. En esta conexión pueden aplicarse diversos reactivos utilizando los mismos o diferentes métodos. Algunos de los métodos posibles son por ejemplo: aplicación en una forma líquida y secado posterior sobre o en un soporte; aplicación como una masa de revestimiento por revestimiento de cuchilla, revestimiento de tobera con ranuras y similares; procesos de impresión tales como impresión de chorro de tinta; estampado con estarcido, dispersión, etc. También es posible montar reactivos ya aplicados a un primer soporte junto con este primer soporte sobre el segundo soporte actual del elemento analítico y juntarlos por ejemplo, por encolado, soldadura, etc . El control integrado de acuerdo con la invención debe ser capaz de detectar con seguridad elementos de prueba sometidos a esfuerzo. En este esfuerzo de conexión se entiende que significa que los elementos de prueba han sido expuestos a condiciones ambientales que podrían llevar al daño o deterioro de los reactivos para la reacción de detección actual. En el caso de elementos analíticos que están destinados a ser almacenados a temperatura ambiente en latas cerradas provistas de desecantes o provistas de hojas metálicas impermeables a la humedad, el esfuerzo ej . : se entiende como la exposición a altas temperaturas en las latas cerradas u hojas metálicas (por ejemplo durante la transportación al cliente o detrás de un panel de vidrio en luz solar) o almacenamiento en húmedo (en el caso de latas cerradas inadecuadamente después de remover las cintas de prueba o envase de hoja metálica defectuosas) . Naturalmente combinaciones de casos de esfuerzos tales como humedad concurrente o temperatura elevada puede resultar en deterioro. En este caso es importante únicamente que un esfuerzo finalmente resulte en un deterioro o falla del sistema reactivo de detección. Estas condiciones específicas pueden efectivamente ser diferentes para los diversos elementos analíticos. Una persona experta en la técnica sabe cómo puede identificar tales casos de deterioro del sistema reactivo respectivo. De acuerdo con la invención, un esfuerzo del elemento analítico o del sistema reactivo para el control integrado resulta en un cambio - de preferencia irreversible - en el sistema reactivo del control integrado. Esto asegura que los efectos ambientales de deterioro son también detectados cuando las condiciones ambientales han cambiado entretanto a condiciones favorables. Por ejemplo una elevación de temperatura con deterioro simple o un efecto breve único de humedad que ha resultado en deterioro, puede ser de esta forma identificada con seguridad. Sorprendentemente se encontró que los reactivos que contienen N-óxidos o compuestos nitrosos, en particular en combinación con agentes reductores tales como azúcares, polialcoholes, proteínas que contienen cisteína, glicina, etc., pueden reducirse bajo las mismas condiciones y efectos ambientales bajo los cuales un OBC debe indicar efectos indeseados y cambios negativos de una cinta de prueba. Los productos de degradación formados por reducción de los N-óxidos o compuestos nitrosos pueden detectarse en la cinta de prueba por métodos adecuados de preferencia electroquímicos u ópticos. En particular si se utilizan azúcares como los agentes reductores, las propiedades redox y por lo tanto la cinética de la reacción redox puede ajustarse por medio del pH del reactivo. De acuerdo con la invención el Resazurin de N-óxido ha resultado ser una molécula particularmente adecuada de la reacción indicadora descrita y se prefiere así. El Resazurin azul se reduce con el Resorufin rojo (cf. figura 1) cuando se somete a esfuerzo bajo condiciones que podría dañar una cinta de prueba (temperaturas elevadas, humedad y luz) cuando se lleva a cabo la reducción, especialmente en presencia de un par redox adecuado, de preferencia aquellos de la formulación reactiva. El cambio, es decir, la disminución en la concentración de resazurin con un aumento simultáneo en la concentración de resorufin puede determinarse visualmente por un detector óptico en un instrumento de medición o por un sensor electroquímico.

En el caso de resazurin, se encontró sorprendentemente que la glicina es un agente reductor específico. Una combinación de cantidades adecuadas de resazurin y glicina en un reactivo de OBC es particularmente preferida de acuerdo con la invención. Una concentración mínima de ca . 0.01 g/1 de resazurin ha resultado ser preferida ya que la detección de resazurin se encuentra prácticamente muy difícil debajo de esta concentración. La cantidad máxima de resazurin no debe exceder de 20 mmol/1 ya que pueden ocurrir de otra manera los problemas de solubilidad. Como se describió anteriormente la glicina no es absolutamente necesaria para la función de el resazurin que contiene OBC; una concentración de aproximadamente 250 g/1 ha comprobado ser la cantidad máxima de glicina ya que ocurren problemas de solubilidad por arriba de esta cantidad y la glicina puede cristalizarse a partir de la solución que a su vez puede causar problemas cuando ocurre el revestimiento de la masa reactiva y puede llevar a inhomogeneidades en la masa con revestimiento. El resazurin y/o el resorufin restantes que se forman pueden cuantificarse para la detección electroquímica de la reacción de OBC. Se prefiere una cuantificación de resazurin para grandes cambios en la concentración y puede por ejemplo llevarse a cabo por reducción electroquímica del resazurin en un potencial de -700 mV contra Ag/AgCl . En este potencial el resorufin que se forma se reduce además a dihidro-resorufin (cf . figura 1) . Si está presente principalmente resazurin en el reactivo de OBC (y por lo tanto el reactivo no se somete a esfuerzo o se somete a esfuerzo difícilmente) se provoca una transición de 4 -electrones que resulta en una corriente superior que cuando está presente principalmente resorufin cuya reducción únicamente lleva a una conversión de 2 electrones. La corriente o carga medida a un potencial predeterminado y en particular a un potencial preferido de -700 mV contra Ag/AgCl permitiendo así deducciones que se hacen por arriba del punto del esfuerzo de temperatura y/o humedad del reactivo. El resorufin puede no ser cuantificada por (re) oxidación electroquímica de resorufin a resazurin debido a que la reducción de resazurin a resorufin es irreversible. Una detección reductiva en el sistema de OBC descrito únicamente requiere que la reducción de resorufin sea detectada específicamente pero no la reducción de resazurin que puede estar presente en el reactivo. Esto puede por ejemplo realizarse utilizando un potencial de reducción específico que de preferencia está en el intervalo de -450 a -550 mV contra Ag/AgCl .

Se encontró sorprendentemente que la cuantificación de resorufin en el sistema de OBC descrito puede lograrse especialmente bien cuando en una primera etapa el resorufin presente en la cinta de prueba se convierte electroquímicamente a dihidro-resorufin (referido como preparado de OBC) y la dihidro-resorufin generada in si tu se oxida otra vez electroquímicamente a resorufin en una segunda etapa (referido como prueba de OBC en lo siguiente) . Esta reacción de oxidación corre específicamente de manera particular, de preferencia a un potencial de -100 mV contra Ag/AgCl . La intensidad y especificidad de la señal de prueba de OBC puede controlarse por la longitud de la fase preparada de OBC. Además del sistema de resazurin/resorufin particularmente preferida, los compuestos nitrosos y en particular las p-nitrosoanilinas son otros preferidos, ejemplo de una clase de substancias que pueden convertirse en productos que pueden indicar un deterioro posible de la cinta de prueba bajo condiciones que pueden dañar las cintas de prueba. Las p-nitrosoanilinas pueden por ejemplo ser reducidas bajo condiciones que pueden también dañar reactivos en un reactivo de detección. Los productos (tales como fenilendiaminas) producidos por reducción pueden también detectarse ópticamente o electroquímicamente. Otros compuestos nitrosos que pueden utilizarse de acuerdo con la invención se describen en US 5,206,147, US 5,334,508, US 5,122,244 y US 5,286,362. Una combinación de los compuestos nitrosos descritos en estas 4 patentes de los Estados Unidos con heteropol iácidos , en particular heteropoliácidos en una forma precipitada de acuerdo con US 5,240,860 que cuando se someten a esfuerzo se prefiere particularmente heteropoli-azules formados fácilmente visibles en presencia de agentes reductores . Breve descripción de las figuras La Figura 1 muestra las fórmulas estructurales de resazurin 1 que se convierte por reducción a resorufin 2 y por otra reducción a dihidro-resorufin 3. La Figura 2 muestra espectros de absorción (absorción A relativa representada en gráfica contra la longitud de onda ? (en nra) ) de resazurin 1 y resorufin 2. La Figura 3 muestra los espectros de reflectancia (reflectancia relativa R (en %) representada en gráfica contra la longitud de onda ? (en nm) ) de los campos reactivos de los elementos de prueba que han sido sometidos a esfuerzo a diferentes grados (1 no sometido a esfuerzo, 2 sometido a esfuerzo ligeramente, 3 sometido a esfuerzo intensamente) . La Figura 4 muestra el aumento en el producto de degradación (resorufin) en una película reactiva que contiene resazurin con base en el aumento de la reflectancia relativa R (en %) (medida a una longitud de onda de 620 nm) durante el tiempo t de esfuerzo (en h) . La Figura 5 muestra el cambio de la señal que puede medirse electroquímicamente durante una primera fase de medición que dura por 3 segundos a -700 mV contra Ag/AgCl (Q700) (dos curvas inferiores) y una segunda fase de medición que dura por 1.5 segundos a -100 mV contra Ag/AgCl (Qi00) (dos curvas superiores) sobre la base de la dependencia de la carga Q de medición en el tiempo t de esfuerzo (en h) . La invención se caracteriza en mayor detalle por los siguientes ejemplos que describen las ventajas y propiedades del OBC de acuerdo con la invención utilizando cintas de prueba para mediciones de coagulación como un ejemplo (prueba de tiempo de protrómbina o prueba de PT) . Es claro para una persona experta en la técnica que las declaraciones hechas sobre la base del ejemplo de la cinta de prueba de coagulación también aplica a otros tipos de cintas de prueba y en particular aquellas utilizadas para la determinación óptica o electroquímica de la glucosa sanguínea, lípidos tales como colesterol y colesterol HDL, triglicéridos , etc., para la determinación de otros parámetros de coagulación de PT tales como pruebas de aPTT, ACT, ECT, anti-factor X y también para elementos de prueba inmunológicos , en particular cintas de prueba por cromatografía que pueden evaluarse ópticamente y pueden aplicarse a ellos. Ejemplo 1 : Dos formulaciones reactivas que contienen diferentes agentes reductores para un control integrado que puede evaluarse ópticamente Tabla 1 Formulación para un OBC que contiene glicina como un agente reductor que puede evaluarse ópticamente 1HEPES: ácido [ 4 - (2-hidroxietil ) -piperazino] -etanosulfónico Las substancias listadas en la tabla 1 se mezclan homogéneamente y se ajustan a un pH de 7.4 con NaOH. La masa de reacción obtenida en esta forma se revistió en una cinta de prueba que puede medirse por fotometría de reflexión como una cinta reactiva de 20 mm de ancho y ca . 10 m de Tabla 2 Formulación para una glucosa que contiene OBC como un agente reductor que puede evaluarse ópticamente 140 g/1 de polivinilpirrolidona (PVP) se dispersó en agua y se reagitó durante aproximadamente 30 minutos 2HEPES: ácido [4- (2-hidroxietil) -piperazino] -etanosulfónico 3CHES: ácido 2- ( ciclohexilamino ) -etanosulfónico 4CAPS : ácido 3- (ciclohexilamino) -1-propanosulfónico 56.8 g/1 de Keltrol se dispersó en agua mientras que se agitaba y se reagitó durante varias horas. Para asegurar un aumento de volumen completo, la preparación se dejó reposar durante la noche a temperatura ambiente antes de otro uso. 615 de dióxido de titanio se dispersó en 38 mi de agua mientras que se agitaba y luego se homogeneizó en un agitador disolvente a una velocidad de agitación elevada. El pH de la masa reactiva se ajusta en cada caso al valor establecido con una solución de hidróxido de sodio. Las substancias listadas en la tabla 2 se mezclan homogéneamen e. La masa de reacción obtenida en esta manera se revistió en una cinta de prueba que puede medirse por fotometría de reflexión como una cinta reactiva de 20 mm de ancho y ca . 10 µp\ de grosor. La velocidad de reacción de la reacción de OBC es decir, la conversión de resazurin a resorufin que depende de las condiciones ambientales puede ajustarse por medio del pH. Cuanto más alcalina, más rápida es esta conversión y por lo tanto más sensible es el OBC. Ejemplo 2: Determinación de la masa espectroscópica del producto de degradación después del esfuerzo en la formulación reactiva de acuerdo con la tabla 1 del ejemplo 1 En el caso de las cintas de prueba que están destinadas a ser almacenadas a temperatura ambiente en latas cerradas provistas de hojas metálicas impermeables a la humedad, la reacción de degradación no debe ocurrir o únicamente a un grado muy ligero bajo estas condiciones de almacenamiento . El control integrado debe en particular detectar lo siguiente como almacenamiento incorrecto! • altas temperaturas en latas cerradas / hojas metálicas (por ejemplo durante la transportación al cliente o detrás de un panel de vidrio en luz solar) , y • almacenamiento húmedo (latas que no han sido cerradas adecuadamente después de retirar las cintas de prueba o envase de hoja metálica defectuosa) . Estos requerimientos fueron simulados por los siguientes modelos de esfuerzo: • Almacenamiento durante varias semanas a 50°C en latas cerradas. • Almacenamiento durante horas y varios días a 50°C y humedad del aire elevado (50 %/75 %) . • Almacenamiento durante varios días en un envase abierto o defectuoso bajo condiciones ambientales de zona de clima 4 (30°C, 70% de humedad del aire ) . El espectro de masa de una formulación reactiva sometida a esfuerzo que se preparó de acuerdo con la tabla 1 en el ejemplo 1 muestra que después del esfuerzo (6 horas a 50°C y 75% de humedad del aire relativa) poco porcentaje del resazurin se convirtió a resorufin (cf . también la figura 1) . El máximo principal del espectro de resorufin (212.20 unidades de masa) está presente además del máximo principal del espectro de masa de resazurin a 228.17 unidades de masa . Ejemplo 3: Espectro de absorción de resazurin y resorufin (fig. 2) El espectro de absorción mostrada en la figura 2 de resazurin (un tinte azul) y resorufin 2 (un tinte rojo) muestra que en principio es posible detectar ópticamente (por ejemplo visualmente o por fotometría de reflexión) la conversión de resazurin 1 a resorufin 2 que ocurre cuando se somete a esfuerzo una formulación reactiva como se muestra en el ejemplo 2. Ejemplo 4: Espectro de reflexión de cintas de prueba no sometidas a esfuerzo y sometidas a es fuerzo Cintas de prueba cuyas películas reactivas se prepararon con base en la formulación de la tabla 1 del ejemplo 1 se sometieron a esfuerzo durante 0 horas (no sometidas a esfuerzo; cf . curva 1 en la figura 3) , 6 horas (sometidas a esfuerzo ligeramente; cf. curva 2 en la figura 3) y 12 horas (sometidas a esfuerzo intensamente; cf . curva 3 en la figura 3) a 50°C y 75% de humedad del aire. El cambio en el espectro de reflectancia correspondiente se midió (fig. 3) . Con un aumento en el esfuerzo, un aumento en la reflectancia a una longitud de onda de 620 nra se observó que está asociado con una disminución en la cantidad de resazurin . Ejemplo 5: Detección óptica del producto de degradación de resorufin en cintas de prueba que se sometieron a esfuerzo a diferentes grados Cintas de prueba cuyas películas reactivas se prepararon sobre la base de la formulación de la tabla 1 del ejemplo 1 se sometieron a esfuerzo durante diferentes períodos a 50 °C y 75% de humedad del aire y luego se midieron en un fotómetro de reflexión cuyo LED funcionó con luz a una longitud de onda de 620 nm. La Fig. 4 muestra el aumento en el producto de degradación (reconocible por el aumento en la reflectancia R) sobre el tiempo t de esfuerzo (en h) . El cambio en el campo de prueba puede también detectarse fácilmente de manera visual, es decir, por el usuario a simple vista. La zona reactiva de la cinta de prueba no sometida a esfuerzo que es principalmente azul, cambia su color a rosa a medida que el período de esfuerzo aumenta.

Ejemplo 6 : Formulación de una prueba de coagulación de PT con OBC integrado y detección electroquímica Tabla 3 Formulación de una prueba de tiempo de protrombina amperométrica con reactivos de OBC integrados 1HEPES: ácido [ 4- (2-hidroxietil ) -piperazino] -etanosulfónico Las substancias listadas en la tabla 3 se mezclaron homogéneamente y se ajustaron con NaOH a un pH de 7.4. La masa de reacción obtenida en esta manera se revistió en una anchura de 4 mm y un grosor de ca. 90 \im (húmeda) o ca. 10 pm (seca) en una cinta de prueba que es para ser medida anperométricamente de tal manera que el área total del electrodo funcional se cubrió con reactivo. Un electrodo de Ag/AgCl que también sirve como el electrodo contador se utilizó como un electrodo de referencia. Ejemplo 7: Detección electroquímica de resazurin y el producto de degradación de resorufin en cintas de prueba que se sometieron a esfuerzo a diferentes grados Las cintas de prueba preparadas de acuerdo con el ejemplo 6 se sometieron a esfuerzo durante períodos diferentes a 50°C y 75% de humedad del aire. Se midió luego la sangre total amperometricamente con estas tiras de prueba. Se aplicaron los siguientes potenciales para cuantificar resazurin y resorufin: -700 mV vs . Ag/AgCl durante 3 segundos (llamada fase de preparar el OBC) ; posteriormente -100 mV vs . Ag/AgCl durante 1.5 segundos (llamada fase de prueba de OBC) ; posteriormente +200 mV vs . Ag/AgCl durante 90 segundos (para la medición de la coagulación actual) . Para cuantificar las señales de "preparar el OBC" y la "prueba de OBC", se calcularon los cambios integrales bajo las curvas de tiempo-corriente. La Figura 5 muestra cómo estos cambios integrales (referidos como Q700 y Q100) con un esfuerzo creciente de las cintas de prueba.

Mientras que exista un cambio mejor en las señales de OBC, el tiempo de formación del coágulo medido con cintas de prueba sometidas a esfuerzo es casi estable hasta un periodo de esfuerzo muy grande (cf. tabla 4). Tabla 4 Efectos de esfuerzo a 50°C y 75% de humedad del aire relativa en la medición del tiempo de formación del coágulo Esto asegura que el OBC indica almacenamiento inadecuado de las cintas de prueba antes de que se generen los tiempos de formación del coágulo. Ejemplo 8: Indicación del OBC con detección electroquímica cuando se almacenan cintas sin envase en zonas de clima IV El riesgo máximo de deterioro de cintas de prueba cuyo envase es defectuoso o no ha sido cerrado de nuevo es en el caso de clientes que viven en zonas de clima IV (calientes y húmedas) . Para estas zonas de clima una humedad del 70% y una temperatura de 30°C se ha descrito en la literatura como "condiciones de clima promedio". La tabla 5 muestra que el OBC con detección electroquímica indica cambios en la cinta de prueba debido al almacenamiento bajo estas condiciones. La tabla 5 muestra sobre la base de la carga medida Q (en nAs) contra el tiempo de esfuerzo t (en h) el cambio en la señal electroquímicamente mensurable durante una fase de medición de 3 segundos a -700 mV vs . Ag/AgCl (Q700) y durante una fase de medición de 1.5 segundos a -100 mM vs . Ag/AgCl (Q100) para diferentes materiales de muestra (sangre normal (N) 1 y 2; sangre de donadores que han sido tratados con Marcumar (M) 1 y 2) .

Tabla 5 Efectos de un esfuerzo a 30 °C y 70% de humedad del aire relativa en el control integrado electroquímico para diferentes materiales de muestra De esta forma los elementos analíticos "sometidos a esfuerzo" pueden identificarse sobre las bases de los datos de medición que se obtuvieron durante la fase de preparar del OBC llamado así (cf. ejemplo 7) así como también durante la fase de prueba del OBC llamado así (cf . ejemplo 7) . Como se muestra en la tabla 6, los tiempos de formación del coágulo son también mucho más estables bajo estas condiciones y por lo tanto las cintas de prueba sometidas a esfuerzo pueden detectarse fácilmente por el OBC antes de que los valores de medición de coagulación falsos hayan sido generados posiblemente.

Tabla 6 Efectos de esfuerzo a 30°C y 70% de humedad del aire relativa sobre la medición del tiempo de formación del coágulo Ejemplo 9: Glicina como un par redox especifico para resazurin Si los elementos de prueba que contienen la formulación del ejemplo 6 son almacenados durante 48 horas a 25°C, la proporción de cambios de resazurin a resorufin debido a que se convierte el formador al segundo debido a la "reacción de OBC" . La siguiente tabla 7 muestra que la velocidad de reacción de esta reacción es influenciada por la presencia o ausencia de glicina. Un OBC también es posible en ausencia de glicina; sin embargo, la sensibilidad del OBC es aumentada considerablemente por la presencia de glicina.

Tabla 7 Cantidad relativa de resorufin (%) en relación a la cantidad total de resorufin y resazurin contra el periodo de esfuerzos Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un sistema reactivo para el control integrado de elementos analíticos, caracterizado porque contiene un N-óxido orgánico o un compuesto nitroso. 2. El sistema reactivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque sufre un cambio cuando se somete a esfuerzo que puede detectarse ópticamente o electroquímicamente . 3. El sistema reactivo de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque contiene un agente reductor . . El sistema reactivo de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el agente reductor se selecciona del grupo que comprende azúcares, polialcoholes , glicina y proteínas que contienen cisteína. 5. El sistema reactivo de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el agente reductor es glicina o glucosa. 6. El sistema reactivo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el N-óxido es resazurin. 7. El sistema reactivo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el compuesto nitroso es una p-nitrosoanilina opcionalmente sustituida. 8. Uso de un sistema reactivo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para el control integrado de elementos analíticos. 9. Un elemento analítico, caracterizado porque contiene un sistema reactivo para una reacción de detección y un sistema reactivo para un control integrado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7. 10. El elemento analítico de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el control integrado está integrado en el sistema reactivo para la reacción de detección . 11. El elemento analítico de conformidad con la reivindicación 9 ó 10, caracterizado porque el sistema reactivo para la reacción de detección contiene reactivos para determinar los parámetros de coagulación. 12. Un método para el control de elementos analíticos de conformidad con las reivindicaciones 9 a 11, caracterizado porque el sistema reactivo para el control integrado se examina ópticamente o electroquímicamente con la ayuda de un instrumento de medición para cambios que pueden indicar un esfuerzo del elemento analítico. 13. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque los elementos analíticos para los cuales se ha detectado un esfuerzo, no son liberados por el instrumento de medición para la medición de una muestra líquida con la ayuda de un sistema reactivo para la reacción de detección. 14. El método de conformidad con la reivindicación 12 ó 13, caracterizado porque los reactivos para la reacción de control así como los reactivos para la reacción de detección son examinados ópticamente. 15. El método de conformidad con la reivindicación 12 ó 13, caracterizado porque los reactivos para la reacción de control y los reactivos para la reacción de detección son examinados electroquímicamente. 16. El método de conformidad con la reivindicación 12 ó 13, caracterizado porque los reactivos para la reacción de control son examinados ópticamente y los reactivos para la reacción de detección son examinados electroquímicamente. 17. El método de conformidad con la reivindicación 12 ó 13, caracterizado porque los reactivos para la reacción de control son examinados electroquímicamente y los reactivos para la reacción de detección son examinados ópticamente.