MXPA04005518A - Prueba de heparina de bajo peso molecular, sistema y reactivo para el mismo. - Google Patents

Abstract

Se suministra un metodo, equipo, sistema y reactivo para medir la heparina de bajo peso molecular en una muestra de sangre total, que involucra el uso de un activador Factor Xa, tal como, Veneno de Vibora de Russell como el iniciador de la prueba de coagulacion.

Description

PRUEBA DE HEPARINA DE BAJO PESO MOLECULAR, SISTEMA Y REACTIVO PARA EL MISMO ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Campo de la Invención La presente invención se refiere a una prueba de formato químico seco para la medición del contenido de heparina de bajo peso molecular contenida de una muestra de sangre total, y a un sistema y reactivo para desarrollar tal prueba.

Argumento de los Antecedentes Las heparinas de bajo peso molecular (LMWHs) son un grupo heterogéneo de medicamentos antitrobóticos, producidos de heparina no fraccionada (UFH), utilizando diversos procesos químicos y enzimáticos. Las LMWHs, tipo UFH, muestran un efecto anticoagulante, a través de la complexión con antitrombina (AT) para inactivar varias de las enzimas de coagulación previniendo la formación de fibrina. De estas, el Factor Xa y trombina (lia) son las más sensibles a la inhibición. Las LMWHs, introducidas como medicamentos antitrombóticos a mediados de los 80s, hoy en día se establecen como el medicamento de elección para tromboprofilaxis quirúrgica y están reemplazando en forma acelerada a la UFH, en el tratamiento intenso de desórdenes tromboembólicos venosos. La heparina de bajo peso molecular, enoxaparina, se utiliza cada vez más en pacientes con angina inestable (UA) e infarto de miocardio sin onda Q (NQMOI) (J. Fareed y otros, Consideraciones pasadas, presentes y futuras acerca de la diferenciación de heparina de bajo peso molecular: un epílogo. Semin Thromb Hemost, 25 Supl 3: 145-7 (1999), y J. Hirsh y otros, Heparina y heparina de bajo peso molecular: mecanismos de acción , farmacocinética, dosificación, monitoreo, eficacia, y seguridad. Chest, Jan; 1 19 (1 Supl):64S-94S (2001 ), que transitan a intervención coronaria por medios cutáneos (PCI) (Lovenox (sodio de enoxaparina) insertar un paquete de inyección, ©1 998, rev.01 /2001 ). Aunque el tiempo de tromboplastina parcial activado (aPTT) y el tiempo de coagulación activado (ACT) son los métodos más comunes utilizados para monitorear la UFH, estos son relativamente insensibles a las L WHs, tal como enoxaparina. Mientras que las pruebas cromogénicas anti-Xa se utilizan comúnmente para monitorear la concentración de las LMWHs, tales pruebas suministran una medida indirecta de la concentración del medicamento y los resultados no están disponibles rutinariamente en una instalación de un laboratorio de cateterización cardiaco. Las LMWHs tienen pesos moleculares promedio entre 4000 a 6000 daltones, y tienen menor habilidad para desactivar a la trombina, comparada con la UFH. Cada LMWH es una mezcla específica que a menudo evidencia una proporción anti-Xa-anti l ia única y perfil anticoagulante de signatura. El resultado es una proporción anti-Xa/anti-11a de aproximadamente 3 a 14: 1 (dependiendo de la marca de LMWH, dosificación, y vía de administración), comparado a la proporción 1 : 1 observada con UFH (Loveno P l >. La LMWH, enoxaparina, tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 4,500 daltones y, proporcionada en una dosis de 1 .5 mg/kg subcutáneamente (SC), se caracteriza por una proporción mayor de actividad anti-Factor Xa a anti-Factor lia (promedio +, SD, 14.0 + 3.1 ) (basado en áreas bajo actividad anti-Factor contra curvas de tiempo) comparado a las proporciones observadas para heparina (promedio + SD, 1 .22 + 0.13) (Loveno p l ). Esta es una distinción importante porque la habilidad de prolongar el APTT y ACT es proporcional a la actividad anti-lla. Las pruebas cromogénicas anti-Xa suministran estimaciones de la concentración de enoxaparina únicamente en plasma complementado y diluido y no son convenientes para pruebas de punto de asistencia (POC). Más recientemente, experimentos clínicos confirman la seguridad y eficacia de la LMWH, sodio de enoxaparina (Lovenox®, Clexane®), en el manejo de los síndromes coronarios agudos (ACS) (J. Fareed y otros, Tromosis y Hemostasis, Suplemento 3, Vol.25, 3-4 ( 999)). En general, las reacciones de coagulación de sangre, se emplean como pruebas clínicas para medir el tiempo requerido para la formación de un coágulo de fibrina. Las pruebas de coagulación de sangre, se utilizan principalmente para la protección , diagnóstico y para el monitoreo de pacientes que reciben terapia anticoagulante. Existen muchos tipos de pruebas de coagulación. Estas incluyen tiempo protrombina (PT), tiempo trombopiastina parcial (PTT), tiempo trombopiastina parcial activada (APTT), prueba fibrinógeno, tiempo de coagulación trombina (TCT), tiempo de coagulación activada (ACT), etc. Antes de realizar las pruebas de coagulación convencionales, se recolecta una muestra de sangre en un tubo o jeringa que contiene anticoagulante (citrato). La muestra de sangre se centrifuga, y se separa el plasma (por ejemplo por decantación) de los glóbulos rojos. Una cantidad medida (usualmente 0.1 mi) de plasma, se entuba en un tubo o vaso de reacción. Entonces, se añade manualmente una cantidad medida de reactivo a través de la pipeta o automáticamente por medio de otros sistemas de suministro volumétricos, capaces de medir una cantidad conocida y programada de reactivo. Alternativamente, la muestra se puede añadir directamente al reactivo. Típicamente, se emplean 0.2 mi de reactivo. La adición del reactivo inicia la reacción. Muchas pruebas de coagulación de sangre existentes, sufren de al menos de una de las siguientes desventajas: dificultad en el desarrollo, requerimiento de personal altamente calificado, inexactitud en la medición, inestabilidad en el reactivo, gran consumo de reactivo, etc. Una solución a este problema se dirigió en Oberhardt, Patente de E.U. 5, 1 10,727, en la cual un parte de reacción a base de reactivo seco se suministra para realizar las pruebas de coagulación de forma rápida, exacta y simple. Tales pruebas se comercializaron por Pharmanetics, Inc. La capacidad de la sangre para coagularse, así como para no coagularse, depende de un gran número de factores y cofactores enzimáticos. La habilidad de los laboratorios clínicos centrales para probar confiada y convenientemente LMWH en las muestras de plasma o la sangre total puede ser decisiva en los individuos monitoreados en terapia LMWH. El sistema de coagulación de la sangre es dominado por las reacciones de la activación proteolítica secuencial de los precursores inactivos, llamados cimógenos. Las reacciones de coagulación promovidas, se controlan a través de activación simultánea de cimógenos anticoagulantes que sirven para limitar le extensión de la formación de coágulo e iniciar el sistema fibrinolítico para resolver el coágulo. De este modo, se siente una necesidad muy fuerte por un método sencillo, muy fácil y exacto para el desarrollo de pruebas de coagulación de sangre, por ejemplo, en aplicaciones médicas. Tal método se debe basar en un número mínimo de manipulaciones, tanto de una muestra como de un reactivo. Idealmente, tal método debe ser utilizado fácilmente por personas sin entrenamiento de laboratorio clínico extenso y debe requerir una muestra o reactivo que no contenga preparación en solución. No debe sufrir los problemas asociados con la inestabilidad de reactivo y debe ser muy exacto. Debe permitir la mezcla efectiva de la muestra y el reactivo. Debe requerir únicamente una cantidad muy pequeña de muestra. Y debe ser capaz de desarrollar tratamientos automáticos de la muestra, por ejemplo, no debe requerir centrifugación de la muestra de sangre o de cualquier otro proceso de separación de célula fuera de línea. Las pruebas de parámetro de coagulación disponibles, del mismo modo sufren desventajas sobresalientes. Puesto que las pruebas actualmente utilizadas para LMWHs son pruebas cromogénicas que requieren aislamiento de plasma derivado, de las muestras de sangre total y tiempo de procesamiento importante para el desarrollo de la prueba, se necesita una prueba que pueda medir cuantitativamente las LMWHs rápida y fácilmente, utilizando sangre total y que se desarrolle al lado de la cama, con el propósito de suministrar determinaciones rápidas de niveles terapéuticos de LMWH. Adicionalmente, las pruebas cromogénicas convencionales miden los niveles actuales de LMWH en la muestra de plasma, pero no reflejan las dinámicas de coagulación actuales de la sangre del paciente. Puesto que las dinámicas de coagulación pueden depender o ser confundidas por una variedad de factores, se necesita una prueba que asociará el tiempo de coagulación con la cantidad de LMWH en la muestra, y, también detectará otros problemas posibles en las dinámicas de coagulación que son independientes de LMWH. Las pruebas de parámetro de coagulación, se refieren aquí como pruebas de función y a base de estructura en la amplia área de diagnósticos de coagulación, los cuales no utilizan procesos de formación de coágulo o disolución de coágulo para generar puntos de conclusión. La mayoría de estas pruebas utilizan substratos sintéticos cromogénicos para cuantificar los marcadores moleculares o factores o componentes específicos asociados con la coagulación. Típicamente, estas son pruebas basadas en reacción funcional en comparación con la mayoría de las pruebas inmuno, las cuales pueden detectar las mismas moléculas, pero utilizan reconocimiento de estructura y, por consiguiente, puede, no obstante, identificar componentes inhibidos o componentes defectuosos, ninguno de los cuales puede ser funcional.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En consecuencia, un objetivo de la presente invención es suministrar una prueba de coagulación mejorada para LMWHs, particularmente enoxaparina. Otro objetivo de la presente invención es suministrar una prueba tal que pueda ser llevada a cabo utilizando la sangre total. Otro objetivo de la presente invención es suministrar una prueba tal que se base en un formato químico seco. Otro objetivo de la presente invención es suministrar reactivos para las pruebas de coagulación para la medición de LMWHs. Otro objetivo de la presente invención es suministrar una prueba de coagulación basada en formato químico seco que relacione el tiempo de coagulación a los niveles de LMWH en la muestra de sangre total, mientras que permanezca sensible a los factores que pueden afectar el tiempo de coagulación de la muestra. Estos y otros objetivos de la presente invención pueden ser satisfechos, a través del descubrimiento de pruebas, reactivos, métodos y equipos para la medición de la concentración de heparina de bajo peso molecular en una muestra de sangre total, utilizando una reacción en cascada de coagulación y monitoreando los tiempos de coagulación o cinética, en donde el reactivo de coagulación es un reactivo de formato seco que comprende partículas magnéticas y un activador factor Xa, tal como Veneno de Víbora de Russell.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Muchas características acompañantes de esta invención se apreciarán fácilmente, mientras que lo mismo serán mejor entendidas por referencia a la siguiente descripción detallada, cuando se consideren en conexión con los dibujos que la acompañan: Fig. 1 suministra una descripción gráfica de la parte relativa a la cascada de coagulación en la sangre. Fig. 2 suministra una representación gráfica del tiempo de respuesta de la coagulación in vitro de la sangre total citrada en niveles diferentes de la enoxaparina LMWH preferente. Fig. 3 suministra una representación gráfica de un tiempo de respuesta de la coagulación in vitro de la sangre total citrada en niveles diversos de otras cuatro LMWHs. Fig. 4 muestra la respuesta de la prueba de ENOX preferente y los valores de plasma anti-Xa derivados correspondientes, como una función del tiempo de administración de enoxaparina. Fig. 5 muestra el relación entre los tiempos de coagulación de la prueba de ENOX para CWB y los valores STACHROM® LMWH anti-Xa lU/ml (del plasma derivado), en un experimento clínico pequeño. Fig. 6 muestra los resultados de un estudio sobre la reducción de diversos factores en muestras de sangre sobre los tiempos de coagulación de la prueba de ENOX.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS MODALIDADES PREFERENTES La presente invención se refiere a un método para la medición de concentraciones de heparina de bajo peso molecular, en una muestra de sangre total, que comprende: (i) combinar un primer componente, la sangre total, de la prueba con un segundo componente de la prueba, caracterizado porque el segundo componente comprende un reactivo de prueba de coagulación seco colocado en una configuración substancialmente aplanada y que contiene partículas magnéticas distribuidas de forma sustancialmente homogénea a través de este, y comprende un activador factor Xa, y caracterizado porque la mezcla resultante está sujeta a (ia) un campo magnético oscilante o (ib) un campo magnético permanente en movimiento o (ic) una combinación de un campo magnético oscilante y un campo magnético permanente fijo o (id) un campo magnético giratorio, por medio del cual, la combinación del primer componente con el segundo componente inicia substancialmente al mismo tiempo el movimiento de las partículas magnéticas y una medición de prueba de coagulación; y (ii) monitorear el movimiento inducido en las partículas magnéticas por medio de (ia) o (ib) o (ic) o (id) para obtener la medición de la prueba de coagulación, caracterizado porque la medición de la prueba de coagulación se correlaciona a una concentración de heparina de bajo peso molecular en la muestra de sangre total. En el método de la presente invención, el método se lleva a cabo en un elemento para desarrollar el método, caracterizado porque el elemento comprende una estructura de canal que define una cavidad de muestra y un volumen de reacción en comunicación fluida entre sí, el volumen de reacción preferentemente contiene al segundo componente. Preferentemente, la estructura de canal tiene una geometría que ocasiona que el primer componente, la sangre total, colocado en la cavidad de muestra sea introducido y llene el volumen de reacción a través de acción capilar, caracterizado porque después de que se llena el volumen de reacción, el primer componente, la sangre total, (ahora combinado con el segundo componente y formando una mezcla de reacción resultante) queda fijo en ese lugar. Además, preferentemente, el otro elemento es un medio para el canalizar luz de una fuente externa a un volumen de reacción, tal como, aquellos descritos en las patentes Farmacéuticas. El método de la presente invención, además comprende la utilización de un medio para detectar la luz esparcida o absorbida o reflejada del volumen de reacción para monitorear la reacción. Medios convenientes para detectar la luz, se describen en las patentes Farmacéuticas. Preferentemente, el elemento de reacción se coloca en una proximidad suficientemente estrecha a un imán permanente y a un electroimán, tal que, el imán permanente y el electroimán, suministren una combinación de un campo magnético oscilante y un campo magnético permanente fijo. Más preferentemente, el elemento se coloca entre el imán permanente y el electroimán. Además, la presente invención se refiere a un método para la medición de la concentración de heparina de bajo peso molecular en una muestra de sangre total, que comprende: (i) la adición de una muestra de sangre total a una cavidad de muestra de un elemento, que comprende: una estructura de canal que define la cavidad de muestra y un volumen de reacción en comunicación fluida entre sí, caracterizado porque el volumen de reacción se define por una superficie superior que tiene atado a ella una capa de reflectancia, comprendiendo una matriz semipermeable en donde el volumen de reacción contiene una cantidad medida de al menos un reactivo de prueba de coagulación seco, dispuesto en una configuración substancialmente aplanada y contiene partículas magnéticas distribuidas substancialmente de forma homogénea a través de este, caracterizado porque un volumen específico de la muestra se vacía en el volumen de reacción por medio de acción y contactos capilares, junto con la capa semipermeable, el reactivo por esta razón inicia substancialmente de forma simultánea, una medición de prueba de coagulación; y (ii) realizar la medición de la prueba de coagulación mediante la medición de la reflectancia de la capa semipermeable, en donde, el reactivo de prueba de coagulación seco comprende un activador Factor Xa. Además, la presente invención se refiere a equipos para la medición de la concentración de heparina de bajo peso molecular en una muestra de sangre total, que comprende, en uno o más contenedores, un imán permanente", un medio de cronometraje, y un elemento que contiene al menos un reactivo de prueba de coagulación seco dispuesto en un formato substancialmente aplanado y contiene partículas magnéticas distribuidas substancialmente de forma homogénea a través de este, caracterizado porque al menos un reactivo de prueba de coagulación seco comprende un activador Factor Xa. Adicionalmente, la presente invención se refiere a un sistema para la medición de la concentración de heparina de bajo peso molecular en una muestra de sangre total, que comprende: (i) una instrumento con un medio para el control de temperatura, un medio para producir un campo magnético oscilante o para mover un campo magnético permanente, un medio de iluminación, y un medio de monitoreo fotométrico; y (ii) un elemento para desarrollar la medición, el elemento comprende una estructura de canal que define una cavidad de muestra y un volumen de reacción en comunicación fluida entre sí, la estructura de canal tiene una geometría que causa que una muestra líquida colocada en una cavidad de muestra sea introducida y llene el volumen de reacción a través de acción capilar, el volumen de reacción comprende al menos un reactor de prueba de coagulación seco dispuesto en una configuración substancialmente aplanada y contiene partículas magnéticas distribuidas substancialmente de forma homogénea a través del mismo, en donde al menos un reactor de prueba de coagulación seco comprende un activador Factor Xa. El sistema de la presente invención, además puede comprender una pipeta de transferencia, hecha preferentemente de un material esencialmente no trombogénico, y comprende una terminación abierta. La pipeta de transferencia preferentemente es capaz de ser llenada con una muestra líquida por medio de acción capilar, y es capaz de expulsar la muestra líquida por medio de presión, después de cubrir o sellar la terminación abierta. Además, el instrumento del sistema puede comprender un medio de calentamiento que comprende una banda calentadora resistente y un termisor localizado en una proximidad estrecha al elemento. En el sistema de la presente invención, el elemento es preferentemente conveniente para desarrollar una prueba de coagulación de la sangre total, con la estructura de canal con una geometría que causa que una muestra de sangre colocada en la cavidad de muestra sea introducida y llene el volumen de reacción a través dé acción capilar, en donde después de que el volumen de reacción se llena, la muestra de sangre se queda fija ahí dentro, y caracterizado porque además el elemento comprende un medio de información codificable óptica o magnéticamente, o ambos, capaz de suministrar al menos un parámetro de prueba, control de calidad o calibración e información del paciente. El medio de iluminación del sistema, incluye preferentemente una o más fuentes de luz para iluminar el elemento. El medio de monitoreo fotométrico, comprende preferentemente uno o más detectores para monitorear de forma fotométrica las especies cromogénicas o de cromomodulación, presentes en al volumen de reacción. Medios convenientes para los mecanismos físicos del sistema de la presente invención se describen en las patentes Farmanéticas. La presente invención, se refiere además a un sistema para la medición de la concentración de heparina de bajo peso molecular en una muestra de sangre total, que comprende: (i) un elemento de reacción que comprende (1 ) una cavidad de muestra para recibir una muestra líquida y (2) una cámara de reacción que contiene un reactivo de prueba de coagulación seco dispuesto en una configuración substancialmente aplanada y en la cual se meten, de forma homogénea substancialmente a través de este, partículas magnéticas; (ii) la cavidad de muestra y la cámara de reacción están en comunicación fluida a través de una zona de transporte de geometría, tal que, un volumen de muestra líquida colocado en la cavidad de muestra y correspondiente al volumen de la cámara de reacción se transporta de la cavidad de muestra a la cámara de reacción, simultáneamente; (iii) un medio para monitorear de forma óptica la cámara de reacción; (iv) un medio para someter la cámara de reacción a un campo magnético oscilante; (v) por lo que, cuando la muestra se introduce en la cámara de reacción, el reactivo de prueba de coagulación seco se disuelve y las partículas magnéticas son, por ello, liberadas para moverse en un patrón oscilante inducido por el campo magnético oscilante, de esta manera suministrando una medición de la cinética de la prueba de coagulación correspondiente a los cambios en el grado de movimiento de las partículas magnéticas relacionadas al campo magnético oscilante, caracterizado porque, el reactivo de prueba de coagulación seco, comprende un activador Factor Xa. Además, preferentemente el sistema comprende un medio para controlar el momento cuando se inicia el transporte de la muestra líquida de la cavidad de muestra a la cámara de reacción. Tal medio conveniente se describe en las patentes Farmanéticas. El sistema de la presente invención, además puede comprender una pluralidad de cámaras de reacción en comunicación fluida con la cavidad de muestra, y un medio para transportar la sangre total o muestra de plasma de una de las pluralidades de cámara de reacción a otra de la pluralidad de las cámaras de reacción. En tal arreglo, es posible tener la muestra del paciente para ser dividida entre la pluralidad de cámaras de reacción, con cada una de las cámaras de reacción teniendo diferentes reactivos de coagulación presentes para monitorear diferentes aspectos de la sangre del paciente. Tales elementos convenientes de cámara de reacción plurales, son los mismos descritos en las patentes Farmanéticas. Además, la presente invención se refiere a un método para la medición de la concentración de heparina de bajo peso molecular en una muestra de sangre total, que comprende: (i) someter a un campo magnético oscilante un elemento de reacción que lleva (1) una cavidad de muestra para recibir la totalidad de una muestra y (2) una cámara de reacción que contiene un reactivo de prueba de coagulación seco dispuesto en un formato substancialmente aplanado y en el cual se mete, de forma homogénea substancialmente a través de este, partículas magnéticas, la cavidad de muestra y la cámara de reacción están en comunicación fluida a través de una zona de transporte de geometría tal que un volumen de muestra colocado en la cavidad de muestra y correspondiente al volumen de la cámara de reacción, se transporta simultáneamente de la cavidad de muestra a la cámara de reacción; (ii) añadir la muestra de sangre total susceptible de coagulación a la cavidad de muestra, por lo que al menos una parte de la muestra se introduce simultáneamente a la cámara de reacción, el reactivo se disuelve y partículas se liberan para moverse en un patrón oscilante inducido por el campo magnético oscilante; y (iii) monitorear de forma óptica la cámara de reacción para medir la cinética para la prueba de coagulación correspondiente a los cambios en el grado del movimiento de partículas relacionadas al campo magnético. caracterizado porque, el reactivo de la prueba de coagulación seca comprende un activador Factor Xa. La presente invención se refiere a una prueba para una L WH, en particular para enoxaparina (ENOX), en una muestra de sangre total, utilizando un reactivo de formato químico seco. Preferentemente, los elementos de la prueba (tales como tarjetas de prueba) y sus métodos de preparación, se describen en las Patentes de E.U. 4,849,340; 5, 1 10,727; 5,350,676; 5,508,521 ; 5,601 ,991 ; 5,658,723; 5,670,329; 5,677, 133; 6,165,795; y 6,197,494, los contenidos completos de las cuales se incorporan aquí como referencia (de ahora en adelante referidos como las "patentes Farmanéticas"). Sin embargo, la prueba se puede desarrollar utilizando elementos de prueba de otro tipo, como se describe abajo. La prueba de la presente invención se diseña para suministrar resultados rápidos del efecto anticoagulante suministrado por LMWH, preferentemente sodio de enoxaparina (Lovenox®, Clexane®). Es un método de coagulación de un paso, desarrollado en el analizador Rapidpoint Coag, disponible de Bayer Corp. O en el analizador TAS, disponible de Pharmanetics, Inc. La prueba utiliza la sangre total citrada o no citrada. Como otros mecanismos de prueba, descritos en las patentes Farmanéticas, la prueba de LMWH es una tarjeta de prueba química seca. Todos los componentes, necesarios para desarrollar la prueba, con excepción de la muestra de) paciente, se incluyen en la cámara de reacción de la tarjeta. En la prueba de la presente invención, el factor X es rápidamente convertido a factor Xa por medio del reactivo que contiene un activador factor Xa, tal como veneno de víbora de Russell (RVV-X), iniciando el proceso de coagulación, ver Fig. 1. El elemento de prueba, preferentemente una tarjeta de prueba, se describe en las patentes Farmanéticas, contiene el activador Factor Xa, pero todos los factores de coagulación necesarios para la función de prueba (Factor X y V, protrombina, fibrinógeno, y antitrombina) se proporcionan por la muestra del paciente. La prueba mide, la actividad combinada anti-Xa y anti-lla de la heparina de bajo peso molecular y se diseña para medir los tiempos de coagulación en la sangre total cifrada (CWB) sobre todo lo ancho del rango de CWB-acabada comparables, derivadas de actividades de plasma. Las pruebas convencionales para LMWH son aplicables únicamente hasta alrededor de un rango de actividades anti-Xa de 0.0 a 1 .0 anti-Xa lU/m. Sin embargo, la presente prueba suministra la actividad combinada anti-Xa y anti-lla de la LMWH y mide los tiempos de coagulación en CWB comparable a un CWB-acabada, derivada de plasma con un rango anti-Xa de 0.0 a 3.0 anti-Xa lU/ml LMWH. Los resultados generados a través de la presente prueba son indicativos del efecto anticoagulante en conjunto, producido por la LMWH en la sangre total. El reactivo comprende partículas magnéticas y un activador factor Xa. Activadores convenientes de factor Xa incluyen varios enzimas de activación Xa, derivadas de venenos de serpiente, incluyendo pero no limitado a, Veneno de Víbora de Russeli (RVV-X), Víbora aspis aspis, Bothrops atrox, veneno carinatus Echis de víbora de sierra-escamosa, y veneno Cerasta cerasta. El reactivo de prueba de L WH de la presente invención, puede además comprender uno o más miembros seleccionados del grupo consistente de reguladores, ayudantes de liofilización, proteínas y detergentes no iónicos. Reguladores convenientes incluyen, pero no está limitado a, HEPES, TRIS, y PIPES en el rango de pH de 6.0 a 8.0, más preferentemente de un pH de 6.0-7.0, más preferentemente de un pH de 6.3-6.8. Los ayudantes de liofilización preferentes incluyen, pero no están limitados a, sucrosa, lactosa, manitol y trehalosa, trehalosa es más preferente. Los detergentes no iónicos son preferentemente uno o más poiisiloxanos combinados con uno o más detergentes seleccionados de agentes tensoactivos Pluronic®, y copolímeros de bloque PEO/PPO. Esto componentes se utilizan preferentemente en un combinación de polisiloxano de 1 -10% de peso y 90-99% de peso del Pluronic® o copolímero de bloque PEO/PPO, más preferentemente en una proporción 1 :99 de polisiloxano.Pluronic® o copolímero de bloque PEO/PPO. Los polisiloxanos utilizados en esto pueden ser cualquier tipo de detergente polisoloxano, preferentemente detergentes polidimetilsiloxano PDMS. Las proteínas útiles en el reactivo presente incluyen preferentemente, pero no está limitado a, albúmina suero bovino (BSA) y ovalbúmina, siendo BSA más preferente. En la prueba de la presente invención, el factor X es convertido rápidamente a factor Xa por medio del activador Xa, iniciando el proceso de coagulación. La LMWH, preferentemente enoxaparina, de ia sangre del paciente, compleja con antitrombina, para inhibir el factor Xa y alargar el tiempo de coagulación en una forma de dosis dependiente. El tiempo de coagulación reportado incrementa en una forma de dosis dependiente a la concentración LMWH, presente en la muestra. Los resultados generados a través de la prueba, son indicativos del efecto anticoagulante producido por la LMWH en la sangre total. Adicionalmente, los resultados de la presente prueba se pueden utilizar para determinar si un paciente está respondiendo normalmente a la terapia de LMWH. Por ejemplo, en ciertos pacientes, la sangre está carente de antitrombina, un factor esencial que se necesita para el efecto anticoagulante de UFH o LMWH, para trabajar. Cuando tales pacientes se monitorean, utilizando pruebas LMWH cromogénicas convencionales, la prueba regresa únicamente el nivel de LMWH, sin reflejar las dinámicas de coagulación del sistema de coagulación del paciente. Sin embargo, con la prueba de la presente invención, uno obtiene una medición del tiempo de coagulación que mostrará en seguida al médico que el nivel del LMWH tiene en efecto pequeño o nulo en el paciente, puesto que sus tiempos de coagulación serán relativamente iguales, por encima de la adición de niveles incrementados de LMWH. Esto rápidamente dirá al médico que existe otra cuestión en juego en el estatus de anticoagulación del paciente, y por esta razón salvando tiempo precioso en la modificación de la terapia. Utilizando pruebas cromogénicas convencionales, tales resultados requerirían dos o más pruebas por obtener y podrían fácilmente ser olvidadas.

La tarjeta de prueba de la presente invención se puede utilizar para monitorear los efectos de la heparina de bajo peso molecular (LMWH), preferentemente de Lovenox®/Clexane® (sodio de enoxaparina), en la sangre total cifrada o no cifrada. La prueba suministra información sobre la respuesta de la sangre total del paciente a la LMWH, tal como, enoxaparina, por medio de la medición del tiempo de coagulación, utilizando un método de coagulación activado factor Xa. Para el conocimiento del presente inventor, la prueba presente suministra la primera prueba para LMWH que se puede desarrollar de forma exacta, utilizando la sangre total. En la presente invención, las partículas magnéticas se inducen a moverse, por medio de sujetarlas o a (1 ) un campo magnético oscilante o (2) a un campo magnético permanente en movimiento o (3) una combinación de un campo magnético oscilante y un campo magnético permanente estacionario, o (4) un campo magnético giratorio. Entonces, el movimiento de las partículas magnéticas se monitorea en el desarrollo de la prueba. El campo magnético de la presente invención se puede generar utilizando cualquiera de los medios de generación de campo magnético descritos en la patentes Farmanéticas. El movimiento de las partículas magnéticas es preferentemente detectado y analizado, así como también descrito, en las patentes Farmanéticas. Las pruebas de coagulación, de esta invención, se desarrollan en un elemento de reacción. Este elemento de reacción puede ser cualquier elemento el cual soportará los reactivos utilizados en la prueba y permite monitorear el movimiento de las partículas magnéticas. Tales elementos de reacción incluyen, platos de microconcentración, sus equivalentes, superficies substancialmente planas o deslizamiento de la reacción suministrado a través de las patentes Farmanéticas. Las partículas magnéticas de las pruebas de la presente invención se presentan en una cantidad de 0.5 o inferiores, para 50 miligramos de partículas magnéticas, preferentemente de 1 a 10 miligramos, por mililitro de reactivo seco. Ejemplos de esta invención se exponen abajo. Sin embargo, se entiende que estos ejemplos se proporcionan únicamente como medio de ilustración y no se interpretan como limitantes de la invención o en espíritu o en ámbito, cuando a la vez pueden ser posibles muchas modificaciones en dosis y métodos para aquellos expertos en la técnica. EJEMPLOS Respuesta a la Dosis para modalidad de Enoxaparina de la presente prueba Una relación respuesta-dosis in vitro entre el promedio de los tiempos de coagulación ENOX STC para 10 individuos y las concentraciones enoxaparina derivado de plasma, se muestra en la FIG. 2 y la TABLA 1 .

La sangre total de un adulto normal se vació en un tubo de colección de muestra marca Vacutainer, conteniendo 0.105 (3.2%) de citrato de sodio en una proporción de 9 partes de sangre por 1 parte de citrato.

Después de mezclar el tubo por medio de ligera inversión, la sangre total citrada fue alícuotada en tubos de plástico y complementada con la heparina de bajo peso molecular (L WH), Lovenox® (sodio de enoxaparaina) para producir cinco soluciones enoxaparina de la sangre total con concentraciones nominales en el rango de alrededor de 0.0 a alrededor de 3.0 IU/ml enoxaparina. Cada muestra se evaluó una vez en una prueba LMWH química-seca. Las soluciones de la sangre total se centrifugaron en un plazo de 5 minutos para obtener plasma pobre en plaqueta. Entonces, el plasma pobre en plaqueta se evaluó para la concentración de enoxaparina, utilizando la prueba STACH OM® LMWH cromogénica (catalogo #00906; Parsippany, NJ), desarrollado en un analizador Electra 900C (Laboratorio Médico de Automatización, Inc. , Pleasantville, NY). Los resultados se calibraron a una preparación de enoxaparina (Aventis L/N WSD3075). Se repitió este procedimiento por un total de 10 adultos normales. Los resultados individuales y el promedio para los 10 individuos, se muestran en la Tabla 2 y en la Figura 2. Tabla 2: Respuesta in vitro de la Prueba de Heparina de Bajo peso molecular (LMWH) para enoxaparina en sangre total R (correlación) Concentración Enoxaparina* 0.00 0.32 0.76 2.29 2.98 Donado Prueba de LMWH ? 142.7 Tiempo de coagulación (segundos) 222.1 253.0 312.3 444.8 0.951 Concentración de enoxaparina* 0.00 0.37 0.78 1.94 2.75 Donado Prueba de LMWH 127.6 r2 Tiempo de coagulación (segundos) 193.8 259.6 346.8 405.2 0.981 Concentración de enoxaparina* 0.00 0.33 0.75 1.67 3.29 Donado Prueba de LMWH 147.7 r 3 Tiempo de coagulación (segundos) 259.1 314.8 396.0 420.1 0.872 Concentración de enoxaparina* 0.00 0.35 0.75 1.67 2.32 j Donado Prueba de LMWH 104.8 196.8 r 4 Tiempo de coagulación (segundos) 260.5 309.6 351.0 0.944 Concentración de enoxaparina* 0.00 0.41 0.81 1.64 2.70 Donado Prueba de LMWH 139.0 214.8 270.1 316.6 422.8 0.983 r 5 Tiempo de coagulación (segundos) Concentración de enoxaparina* 0.00 0.37 0.80 1.82 3.16 Donado Prueba de LMWH 152.0 206.8 272.0 350.8 381.1 0.942 r6 Tiempo de coagulación (segundos) Concentración de enoxaparina* 0.00 0.46 0.88 2.18 3.30 Donado Prueba de L WH 101.2 192.0 238.8 290.8 337.2 0.938 r 7 Tiempo de coagulación (segundos) Concentración de enoxaparina* 0.00 0.44 0.93 2.23 3.32 Donado Prueba de LMWH 111.1 196.6 252.6 307.6 365.5 0.955 r 8 Tiempo de coagulación (segundos) Concentración de enoxaparina* 0.00 0.37 0.87 1.82 2.96 Donado Prueba de LMWH 101.2 177.8 236.1 297.8 348.9 0.958 r 9 Tiempo de coagulación (segundos) Concentración de enoxaparina* 0.00 0.41 0.82 1.97 3.04 Donado rep 1 101.0 171.3 210.8 278.2 330.5 0.0972 r 10 Promedio de Concentración 0.00 0.38 0.82 1.92 2.98 Enoxaparina Promedio de Prueba LMWH Tiempo de Coagulación 122.8 203.1 256.8 320.7 380.7 0.963 (segundos) STDEV 21.1 24.9 27.3 34.7 40.2 Estos resultados muestran un incremento en el tiempo de coagulación para concentraciones incrementadas de enoxaparina, y una buena correlación para la prueba de referencia de laboratorio. El promedio de correlación (r) de la relación de respuesta-dosis los 10 individuos, fue de 0.963.

Modalidad de Enoxaparina Preferente Una pequeña prueba clínica se condujo en cuatro centros con pacientes que consintieron, recibiendo principalmente enoxaparina, para el tratamiento de síndromes coronarios intensos y/o intervención coronaria por medio cutáneo (PCI) (n=35), y en segundo lugar aquellos que recibieron enoxaparina para la prevención de trombosis venenosa profunda (DVT) durante un reemplazo rodilla/cadera total (TKHR) (n=8). De dos a cuatro muestras se colectaron de pacientes TKHR, recibiendo dosificación subcutánea (30 mg-BID SC) con enoxaparina. Las muestras se colectaron para reflejar la actividad pico anti-Xa (3-5 horas después de la dosis) y en ei punto más bajo (justo anterior a la dosificación), para obtener muestras que abarquen el rango completo de actividad anti-Xa. Al menos 3 muestras se colectaron en pacientes que sufren de PCI. Los pacientes de PCI recibieron medicamento por medio de bolo (0.75 mg/kg) intravenoso (IV) al inicio del procedimiento (D.J. Kereiakes y otros, Combinación enoxaparina y terapia abciximab durante la intervención coronaria por medio cutáneo: "Los buenos muchachos acaban primero". J Invasive Cardiol Feb; 12 Supl A: 1A-5A, (2000)). Las muestras se colectaron antes de la administración del medicamento (línea de inicio), pico (5-15 minutos después del bolo), rango terapéutico (45-60 minutos después del bolo). Los pacientes que recibieron UFH, inhibidores trombina directos, y vitamina K antagonistas, no se eligieron para este estudio. La serie de determinaciones anti-Xa se desarrollaron utilizando la prueba STACHROM® LMWH (Diagnostica Otago, Parsippany, NJ) en un analizador Electra 900C (Laboratorio Medico de Automatización), Inc. Pleasantvilie, NY) la cual mide la actividad anti-Xa, utilizando el método amidolítico. Los resultados se calibraron para una preparación estándar de enoxaparina (L/N WSD3075 Aventis Pharmaceuticals, Inc., Strasbourg 67917, Francia). Las muestras se colectaron en cuatro lugares, de 31 pacientes masculinos y 12 pacientes femeninos. Demografía, fecha de cumpleaños, sexo, edad, estatura, y área total de la superficie del cuerpo (TBSA) de cada paciente, se encuentra en la TABLA 3. La indicación primaria para la hospitalización en el lugar 3 fue para cirugía de reemplazo de rodilla y cadera, mientras que en los otros lugares la indicación fue para PCI. La información del tratamiento en los cuatro lugares que contribuyen esta resumida en la Tabla 4. La inclusión de enoxaparina administrada IV, alcanzó niveles anti-Xa de 1 -2 anti-Xa lU/ml en plasma derivado. Un total de 1 16 muestras de 43 pacientes se incluyeron en el estudio.

Los tiempos de coagulación (CT) de las muestras de la sangre total citrada CWB estuvieron en rangos de 80 a 470 segundos como se midió a través de la prueba Rapidpoint® ENOX. Cincuenta y un muestras (44%) tuvieron CT de 199 segundos o menos, 36 muestras (31 %) tuvieron un CT de 200 a 300 segundos, y 29 muestras (25%) tuvieron un CT mayor a 300 segundos. El coeficiente de población de variación (CV) para mediciones de tiempo de coagulación duplicado fue de 8.8% en la sangre total. Estos coeficientes de variación son aceptables. Las correspondientes concentraciones de exnoxaparina derivada de plasma, estuvieron en el rango de 0.0 a 1 .8 anti-Xa IU/ml. La distribución de las concentraciones de enoxaparina observadas en el derivado de plasma de estas muestras clínicas (n=1 16), fueron 41 muestras (36%) < 0.1 lU/ml, 49 muestras (43%) 0.1 a 1.01 lU/ml, y 26 muestras (22%) 1.1 a 1.8 IU/ml, como midió la prueba Stago Stachrom anti-Xa. El coeficiente de población de variación para el método STACHROM® LMWH . utilizando mediciones anti-Xa IU/ml duplicadas fue de 9.4%. Este CV relativamente alto puede ser debido al error adicional introducido por medio de dilución de las muestras que contienen concentraciones de enoxaparina, más allá del rango de la prueba de STACHROM® LMWH (Este rango es 0.0 - 1 .0 anti-Xa IU/ml). La relación entre los tiempos de coagulación de la prueba de ENOX para CWB y los valores de STACHROM® LMWH anti-Xa IU/ml (del plasma derivado), se muestran en la FIGURA 5. La correlación entre los tiempos de coagulación de la tarjeta de prueba de ENOX y los resultados de STACHROM® LMWH, se muestra con regresión lineal, y tiene un coeficiente de correlación (r) de 0.805. Una relación similar entre la prueba de ENOX y el STACHROM® LMWH se observó si lo resultados de las mediciones de tiempo de coagulación individual se comparan a la medición única STACHROM ® LMWH anti-Xa IU/ml (r=0.777). En conjunto, la prueba suministró un rango de concentración apropiado de muestras que contienen enoxaparina para la evaluación de la tarjeta de prueba ENOX, especialmente para pacientes de PCI en el rango de 0.6 a 1 .8 anti-Xa IU/ml de enoxaparina (J.P. Collet y otros, Intervención Coronaria por medio Cutáneo después de un pretratamiento de enoxaparaina subcutánea, en pacientes con angina de pecho inestable. Circulación Feb 6;103(5):658-63 (2001 )). La Figura 4 muestra la respuesta de la prueba de ENOX y los valores anti-Xa del plasma derivado, como una función del tiempo de administración de enoxaparina. Los dos conjuntos de datos se reflejan uno a otro con el pico in vivo de la concentración de enoxaparina, tomando lugar en un plazo de 10 minutos de inyección y la respuesta de la prueba ENOX también máxima en este momento. Estos resultados indican que la respuesta de la prueba de ENOX sigue la farmacocinética de la enoxaparina.

ESTUDIOS DE INTERFERENCIA A. Estudios de plasma deficiente Estudios in vitro desarrollados con plasmas de reunión normal y, agotados de afinidad para determinar el factor de sensibilidad de la prueba. En el plasma equivalente de 1.0 anti-Xa lU/ml el tiempo de coagulación de enoxaparina aumentó 20% o más cuando los niveles de fibrinógeno, protrombina, y Factor X disminuyeron a niveles de <10%, <1 0%, y 60% de lo normal, respectivamente. Un resumen representativo de los estudios para el Factor X se muestra en la Fig. 6. Una disminución en la antitrombina de 90% de normal llevó a una disminución en el tiempo de coagulación del 25%. La prueba de ENOX depende de estos factores de coagulación críticos en la cascada común. B. Efectos del Medicamento e Interferencias Comunes Experimento ¡n vitro, utilizando ia sangre total citrada, indican que la prueba de ENOX no es sensible a los lípidos (a 20 mg/ml), agentes antiplaqueta (abciximag, eptifibatide, tirofiban, aspirina) y los agentes fibrinolíticos (alteplase,. tenectepalse), y hematocrito. La hemodilución con IsoLyte o salino al 15% no afecta los resultados de la prueba, Tabla 5.

Repetición en la preparación de la prueba v desarrollo de la misma Los valores CV dentro de una tendencia para muestras de enoxaparina de 0.0 y 1 .0 lU/ml, fueron 6.3 y 5.5% y los valores CV parte a parte para las muestras de enoxaparina de 0.0 y 1.0 lU/ml, fueron de 5.2 y 5.5%, respectivamente. La imprecisión total en enoxaparina 1.0 lU/ml, fue de <7.0%. Será hará evidente a partir de la descripción arriba detallada, que existen muchas variaciones en la presente invención y las mismas se estiman que se sujetan a esta invención, como se expone en las reivindicaciones anexas.

Claims (26)

1. REIV1NDICACIONES 1 . Un método para la medición de la concentración de heparina de bajo peso molecular en una muestra de sangre total, comprende: (i) combinar un primer componente, la sangre total, de la prueba con un segundo componente de la prueba para formar una mezcla resultante, caracterizado porque dicho segundo componente comprende un reactivo de prueba de coagulación seco dispuesto en una configuración substancialmente aplanada y que contiene partículas magnéticas distribuidas de forma sustancialmente homogénea a través del mismo, y comprende un activador factor Xa, y caracterizado porque dicha mezcla resultante está sujeta a (ia) un campo magnético oscilante o (ib) un campo magnético permanente en movimiento o (ic) una combinación de un campo magnético oscilante y un campo magnético permanente fijo o (id) un campo magnético giratorio, por medio del cual, dicha combinación de dicho primer componente con dicho segundo componente inicia substancialmente al mismo tiempo, el movimiento de dichas partículas magnéticas y una medición de prueba de coagulación; y (ii) monitorear el movimiento inducido en dichas partículas magnéticas por medio de (ia) o (ib) o (ic) o (id) para obtener dicha medición de la prueba de coagulación, caracterizado porque dicha medición de la prueba de coagulación se correlaciona a una concentración de heparina de bajo peso molecular en la muestra de sangre total.
2. 2. El método de la reivindicación 1 , caracterizado porque dicha muestra de sangre total es una muestra de sangre total citrada.
3. 3. El método de la reivindicación 1 , caracterizado porque dichas partículas son inducidas a moverse por medio de la aplicación de un campo magnético oscilante a ellas.
4. 4. El método de la reivindicación 1 , caracterizado porque dichas partículas magnéticas son inducidas a moverse por medio de la aplicación de un campo magnético permanente en movimiento a ellas.
5. 5. El método de la reivindicación 1 , caracterizado porque dicho método se lleva a cabo en un elemento para el desarrollo de dicho método, dicho método comprende la adición de dicho primer componente, la sangre total, a dicho elemento, caracterizado porque dicho elemento comprende una estructura de canal que define una cavidad de muestra y un volumen de reacción en comunicación fluida entre sí, dicho volumen de reacción contiene dicho segundo componente, dicha estructura de canal tiene una geometría causando que dicho primer componente, la sangre total, se coloque en dicha cavidad de muestra para ser introducido y llenar dicho volumen de reacción a través de acción capilar, caracterizado porque después de dicho volumen de reacción, dicho primer componente, la sangre total, queda fijo en ese lugar.
6. 6. El método de la reivindicación 5, caracterizado porque dicho elemento además comprende un medio para canalizar luz de una fuente externa a dicho volumen de reacción.
7. 7. El método de la reivindicación 6, además comprende el uso de un medio para detectar la luz dispersada o absorbida o reflejada de dicho volumen de reacción.
8. 8. El método de la reivindicación 7, caracterizado porque dicho elemento se coloca en una cercanía suficientemente estrecha a un imán permanente y a un electroimán, tal que, dicho imán permanente y dicho electroimán suministran dicha combinación de un campo magnético oscilante y un campo magnético permanente fijo.
9. 9. El método de la reivindicación 8, caracterizado porque dicho elemento se localiza entre dicho imán permanente y dicho electroimán.
10. 10. El método de la reivindicación 1 , caracterizado porque dichas partículas magnéticas son inducidas a moverse por medio de la aplicación de un campo magnético giratorio. 1 1 . El método de la reivindicación 1 , caracterizado porque dicho activador Factor Xa es Veneno de Víbora de Russe
11. ll.
12. 12. El método de la reivindicación 1 , caracterizado porque dicha heparina de bajo peso molecular es enoxaparina.
13. 13. Un método para la medición de la concentración de heparina de bajo peso molecular en una muestra de sangre total, comprende: (i) la adición de una muestra de sangre total a una cavidad de muestra de un elemento, que comprende: una estructura de canal que define la cavidad de muestra y un volumen de reacción en comunicación fluida entre sí, caracterizado porque dicho volumen de reacción se define por una superficie superior que tiene atado a ella una capa de reflectancia, comprendiendo una matriz semimpermeable caracterizada porque dicho volumen de reacción contiene una cantidad medida de al menos un reactivo de prueba de coagulación seco, dispuesto en una configuración substancialmente aplanada y contiene partículas magnéticas distribuidas de forma homogénea substancialmente a través de este, caracterizado porque un volumen específico de dicha muestra se vacía en dicho volumen de reacción por medio de acción y contactos capilares, junto con dicha capa semipermeable, por esta razón, dicho reactivo inicia substancialmente de forma simultánea, una medición de prueba de coagulación; y (ii) realizar dicha medición de la prueba de coagulación mediante la medición de la reflectancia de dicha capa semipermeable, caracterizado porque, dicho reactivo de la prueba de coagulación seco, comprende un activador Factor Xa.
14. 14. Un equipo para la medición de la concentración de heparina de bajo peso molecular en una muestra de sangre total, que comprende, en uno o más contenedores, un imán permanente, un medio de cronometraje, y un elemento que contiene al menos un reactivo de prueba de coagulación seco dispuesto en un formato substancialmente aplanado y contiene partículas magnéticas distribuidas de forma homogénea substancialmente a través de este, caracterizado porque al menos un reactivo de la prueba de coagulación seco, comprende un activador Factor Xa
15. 15. El equipo de la reivindicación 14, además comprende una pipeta de transferencia.
16. 16. El equipo la reivindicación 15, caracterizado porque dicha pipeta de transferencia, esta hecha esencialmente de material no trombogénico, comprende una terminación abierta, es capaz de ser llena con una muestra líquida por medio de acción capilar, y es capaz de expulsar dicha muestra líquida por medio de presión, después de cubrir o sellar dicha terminación abierta.
17. 17. Un sistema para la medición de la concentración de heparina de bajo peso molecular en una muestra de sangre total, comprende: (i) un instrumento con un medio para el control de temperatura, un medio para producir un campo magnético oscilante o para mover un campo magnético permanente, un medio de iluminación, y un medio de monitoreo fotométrico; y (ii) un elemento para desarrollar dicha medición, dicho elemento comprende una estructura de canal que define una cavidad de muestra y un volumen de reacción en comunicación fluida entre sí, dicha estructura de canal tiene una geometría que causa que una muestra líquida colocada en dicha cavidad de muestra sea introducida y llene dicho volumen de reacción a través de acción capilar, dicho volumen de reacción comprende al menos un reactivo de prueba de coagulación seco dispuesto es una configuración substancialmente aplanada y contiene partículas magnéticas distribuidas de forma homogénea substancialmente a través del mismo, caracterizado porque al menos un reactivo de la prueba de coagulación seco, comprende un activador Factor Xa.
18. 18. El sistema de la reivindicación 17, además comprende una pipeta de transferencia.
19. 19. El sistema de la reivindicación 18, caracterizado porque dicha pipeta de transferencia está hecha de un material esencialmente no trombogénico, comprende una terminación abierta, es capaz de ser llenado con una muestra líquida por medio de acción capilar, y es capaz de expulsar dicha muestra líquida por medios de presión, después de cubrir o sellar la terminación abierta.
20. 20. El sistema de la reivindicación 17, caracterizado porque dicho instrumento, además comprende un medio de calentamiento que comprende una banda calentadora resistente y un termisor localizado en una proximidad estrecha a dicho elemento.
21. 21 . El sistema de la reivindicación 17, caracterizado porque dicho elemento es conveniente para desarrollar una prueba de coagulación de la sangre total, dicha estructura de canal tiene una geometría que causa que una muestra de sangre colocada en dicha cavidad de muestra sea introducida y llene dicho volumen de reacción a través de acción capilar, caracterizado porque después de que dicho volumen de reacción se llena, dicha muestra de sangre se queda fija ahí dentro, y caracterizado porque dicho elemento además comprende un medio de información codificable óptica o magnéticamente, o ambos, capaz de suministrar al menos un parámetro de prueba, control de calidad o de calibración e información del paciente.
22. 22. El sistema de la reivindicación 17, caracterizado porque dicho medio de iluminación, incluye una o más fuentes de luz para iluminar dicho elemento y caracterizado porque dicho medio de monitoreo fotométrico, comprende uno o más detectores para monitorear de forma fotométrica las especies cromogénicas o de cromomodulación, presentes en dicho volumen de reacción.
23. 23. Un sistema para la medición de la concentración de heparina de bajo peso molecular en la totalidad de un muestra de sangre, comprende: (i) un elemento de reacción que comprende (1 ) una cavidad de muestra para recibir una muestra líquida y (2) una cámara de reacción que contiene un reactivo de prueba de coagulación seco dispuesto en una configuración substancialmente aplanada y en la cual se meten, de forma homogénea substancialmente, a través de este, partículas magnéticas; (ii) dicha cavidad de muestra y dicha cámara de reacción están un comunicación fluida a través de una zona de transporte de geometría, tal que, un volumen de muestra líquida colocado en dicha cavidad de muestra y correspondiente al volumen de dicha cámara de reacción se transporta de dicha cavidad de muestra a dicha cámara de reacción, simultáneamente; (iii) un medio para monitorear de forma óptica dicha cámara de reacción; (iv) un medio para someter dicha cámara de reacción a un campo magnético oscilante; (v) por lo que, cuando dicha muestra se introduce en dicha cámara de reacción, dicho reactivo de la prueba de coagulación seco se disuelve y dichas partículas magnéticas son, por ello, liberadas para moverse en un patrón oscilante inducido por dicho campo magnético oscilante, de esta manera suministrando una medición de la cinética de dicha prueba de coagulación correspondiente a los cambios en el grado de movimiento de dichas partículas magnéticas relacionadas a dicho campo magnético oscilante, caracterizado porque, dicho reactivo de la prueba de coagulación seco, comprende un activador Factor Xa.
24. 24. El sistema de la reivindicación 23, además comprende un medio para controlar el momento en que se inicia el transporte de dicha muestra líquida de dicha cavidad de muestra a dicha cámara de reacción.
25. 25. El sistema de la reivindicación 23, además comprende una pluralidad de cámaras de reacción en comunicación fluida con dicha cavidad de muestra, y un medio para transportar muestra de sangre total o plasma de una de dichas pluralidades de cámaras de reacción a otra de dicha pluralidad de las cámaras de reacción.
26. 26. Un método para la medición de la concentración de heparina de bajo peso molecular en una totalidad de muestra de sangre, comprende: (i) someter a un campo magnético oscilante un elemento de reacción que lleva (1 ) una cavidad de muestra para recibir la totalidad de una muestra de sangre y (2) una cámara de reacción que contiene un reactivo de prueba de coagulación seco dispuesto en un formato substancialmente aplantado y en el cual se meten, de forma homogénea substancialmente a través de este, partículas magnéticas, dicha cavidad de muestra y cámara de reacción están en comunicación fluida a través de una zona de transporte de geometría tal que un volumen de muestra colocada en dicha cavidad de muestra y correspondiente al volumen de dicha cámara de reacción, se transporta simultáneamente de dicha cavidad de muestra a dicha cámara de reacción; (ii) la adición de la muestra de sangre total susceptible de coagulación a dicha cavidad de muestra, por lo que al menos una parte de dicha muestra se introduce simultáneamente a dicha cámara de reacción, dicho reactivo se disuelve y dichas partículas se liberan para moverse en un patrón oscilante inducido por dicho campo magnético oscilante; y (iii) monitorear de forma óptica dicha cámara de reacción para medir la cinética para la prueba de coagulación correspondiente a los cambios en el grado del movimiento de dichas partículas relacionadas a dicho campo magnético. caracterizado porque, dicho reactivo de la prueba de coagulación seco, comprende un activador Factor Xa.