MXPA02007782A

MXPA02007782A - Composiciones de poliamina-epihalohidrina con alto contenido de solidos, reducido contenido de subproductos.

Info

Publication number: MXPA02007782A
Application number: MXPA02007782A
Authority: MX
Inventors: Richard J Riehle
Original assignee: Hercules Inc
Priority date: 2000-12-09
Filing date: 2001-12-07
Publication date: 2003-03-10
Also published as: WO2002050163A3; CN1293122C; WO2002050163A2; PL365882A1; KR20020074510A; EP1337576A2; JP4266635B2; PT1337576E; CA2398630C; CN1636030A; AU2002230664B2; US7303652B2; AU3066402A; EP1337576B1; ES2391552T3; ZA200207234B; US20030000667A1; KR100856600B1; CA2398630A1; JP2004516394A

Abstract

Se describen los procesos para volver una resina poliamina-epihalohidrina estable durante el almacenamiento, se incluyen los procesos para preparar una resina estable durante el almacenamiento y/o los procesos que tratan las resinas. Una composicion que contiene una resina poliamina-epihalohidrina con un contenido de solidos de cuando menos 15% en peso tratada con cuando menos un agente enzimatico. Un proceso para tratar la resina poliamina-epihalohidrina para reducir el nivel del compuesto organohalogeno libre de nitrogeno, mediante la adicion de cuando menos un microorganismo, o cuando menos una enzima aislada de cuando menos un microorganismo, a una composicion acuosa que tenga un contenido de solidos de cuando menos 15% en peso, en condiciones para deshalogenar el compuesto organohalogeno libre de nitrogeno para reducir un nivel del compuesto organohalogeno libre de nitrogeno dejando al mismo tiempo la resina poliamina-epihalohidrina practicamente intacta. Un proceso para hacer que una resina poliamina-epihalohidrina sea estable durante el almacenamiento. Un producto de papel que contiene la resina poliamina-epihalohidrina estable durante el almacenamiento, cuando se corrige para adicionar a una concentracion de adicion de aproximadamente 1% en peso de la resina, contiene menos que aproximadamente 250 ppb de CDP.

Description

rex C\ n COMPOSICIONES tí#fOLIAMlNA-ÉPIHíffiOHIDR?NA COÍJ ALTO CONFá???DO DE SÓLIDOS, REDUCIDO CON?ÉN?DO DÉ SUBPRODUCTOS., CA?PO DÜ LA TNVENCIc Esta invención se refiere a resinas y composiciones acuosas que contienen resina y a procesos para formar composiciones de resina, especialmente para la # industria de papel, incluyendo agentes de refuerzo tales como agentes de refuerzo en húmedo y refuerzo en seco, y '' J * agentes de cedencia gradual (creping) . la presente 1*0 invención también se refiere a resinas así como a procesos vpara su producción, en donde las resinas y composiciones y productos, tales como productos de papel, que contienen las #*' resinas, tienen residuos reducidos tales como' epihalohidrinas y productos de hidrólisis de lé- epihaiohidrina. Aún más, la presente invención se refiere a resinas y composiciones y productos tales como pr ductos de papel, que maintienen bajos niveles de residuos, tales * r< epihalohidrinas y productos de hidrólisis de epihaiohidrina, cuando se almacenan. Aún más, cada aspecto 20 de la presente invención ee refiere a composiciones que tiene la resina a diversos contenidos de sólidos especialmente alto contenido de sólidos. , ANTECEDENTES DE LA ÜTVENCION Las resinas de resistencia en húmedo a menudo se agregan a papel y cartón al tiempo d®*° fabricación. En la ausencia de resinas de resistencia en húmedo, el papel normalmente retiene solo 3% a 5% de su resistencia después de ser humectado con agua. Sin embargo, el papel elaborado con resinas de resistencia en húmedo generalmente retiene al menos 10-50% de su resistencia cuando está húmedo. La resistencia en húmedo es útil en una amplia variedad de aplicaciones de papel, algunos ejemplos de los cuales son toallas, recipientes de cartón para leche y jugos, bolsas de papel y cartón de forro para recipientes corrugados . La resistencia en seco también es una propiedad crítica del papel, particularmente a la luz de la reciente tendencia de los fabricantes de papel en utilizar pulpas de madera de alto rendimiento en papel, a fin de lograr menores costos. Estas pulpas de madera de alto rendimiento generalmente producen papel con resistencia significativamente reducida cuando se comparan con papel elaborada a partir de pulpas altamente refinadas. Resinas de resistencia en húmedo comercialmente disponibles incluyen resinas de resistencia en húmedo KymeneMR557H, KymeneMR557LX, KymeneMRSLX, KymeneMRPlus, KymeneMR450 y KymeneMR736, disponibles de Hercules Incorporated, Wilmington, Del. Las resinas de resistencia en húmedo, tales como aquéllas anteriormente enlistadas * ?" también proporcionan incrementada rel^#- . »cia en seco al papel . ' Resinas similares a aquéllas ''empleadas para F„ impartir resistencia a papel también a menudo se emplean como adhesivos de cedencia gradual. En la fabricación de algunos productos de papel tales como tisú facial, tisú de JB= baño o toallas de papel, la trama de papel se somete convencionalmente a un proceso de cedencia gradual a fin de proporcionar características texturales deseables, tales 10 como suavidad y volumen. El proceso de cedencia gradual típicamente involucra adherir la trama, una trama de celulosa en el caso de papel, a un cilindro de cedencia gradual giratorio, tal como el aparato conocido como el secado Yankee y luego desprender la trama adherida con una 15 cuchilla doctor. El impacto de la trama contra la cuchilla doctor rompe algunos de los enlaces de fibra-a-fibra dentro de la trama y provocan que la trama se encoja o se arrugue. La severidad de esta acción de cedencia gradual depende de una cantidad de factores, incluyendo el grado de 20- , adhesión entre la trama y la superficie del cilindro de cedencia gradual. Mayor adhesión provoca incrementada suavidad, aunque en general con algo de pérdida de resistencia. A fin de incrementar la adhesión, puede - emplearse un aditivo de cedencia gradual para mejorar 25 cualquier adhesión de origen natural que pueda tener la y trama debido a su contenido de agua, lo que variará ampliamente de e iendo de la extensión a la cual se ha secado fa trama. Adhesivos de cedencia gradual ¿ también habrán de evitar desgaste de la superficie de * --8 secador y proporcionar lubricación entre la cuchilla doctor , y la superficie de secador y reducir la corrosión química, t, . así como controlar la extensión de cedencia gradual. Un revestimiento adhesivo de cedencia gradual que adhiere la hoja justo lo suficientemente apretada al tambor dará una "10 buena cedencia gradual o crepé, impartiendo absorbancia y suavidad con la pérdida mínima posible de resistencia de papel. Si es muy fuerte la adhesión al tambor secador, la hoja puede recoger o incluso "taponar" es decir recorrer por debajo de la cuchilla u hoja doctor, y envolverse 15 alrededor del tambor secador. Si no hay suficiente adhesión, la hoja se desprenderá muy fácilmente y se someterá a muy poca cedencia gradual . El adhesivo de cedencia gradual, usualmente como una dispersión o solución acuosa, generalmente se rocía JO sobre lá superficie del tambor o cilindro de cedencia gradual, por ejemplo un secador Yankee. Esto mejora la transferencia de calor, permitiendo un secado más eficiente de la hoja. Si la materia prima de pulpa se adhiere muy ' fuertemente al cilindro de cedencia gradual, agentes de 25 liberación pueden rociarse en el cilindro. Los agentes de ¡¿a ** liberación típicamente son aceites hidrodarburos . Estos agentes ayudan en la liberación uniforme de la trama de " tisú en la cuchilla de cedencia gradual, y también lubrican y protegen la cuchilla contra desgaste excesivo. 5 Ejemplos de composiciones adhesivas de cedencia „* gradual incluyen aquéllas descritas en la patente de los E.U.A. No. 5,187,219 otorgada a Furman, que se incorpora aquí por referencia completamente. Las composiciones comprenden polímero de acrilamida/cloruro de 10 dialildímetil-amonio glioxilado soluble en agua y un poliol soluble en agua que tiene un peso molecular inferior a 3000 como un plastificante para el polímero. ß§? La patente de los E.U.A. No. 5,246,544 otorgada a Hollenberg y colaboradores, que se incorpora aquí por 15 referencia completamente, describe un adhesivo de cedencia • gradual entrelazado reversible, que contiene un material no auto-entrelazable que es un polímero u oligómero que tiene grupos funcionales que pueden ser entrelazados por entrelazamiento iónico y al menos un metal, agente de 20 entrelazamiento catiónico que tiene una valencia de cuatro o más. El adhesivo también puede contener aditivos para modificar las propiedades mecánicas de los polímeros entrelazados, por ejemplo glicoles, polietilen glicoles y otros polioles tales como azúcares simples y 25 oligosacáridos.

Adhesivos de cedencia gradual de poliaminoamida/epiclorohidrina, se describen en la patente de los E.U.A. Í$o . 5,338,807 otorgada a Espy y colaboradores, en la patente de los E.U.A. No. 5,994,449 5 otorgada a Maslanka, y en la Patente Canadiense 979,579 otorgada a Giles y colaboradores, que aquí se incorporan ^ por referencia totalmente. En la patente de los E.U.A. No. 5,374,334 otorgada a Sommese y colaboradores, que se incorpora aquí 10 por referencia completamente, describe un adhesivo de cedencia gradual que es un polímero de vinil amina/alcohol vinílico entrelazado, que contiene de aproximadamente 1 a aproximadamente 99% de vinil amina. Se describe epichlorohidrina como agente de entrelazamiento. 15 Las patentes de los E.U.A. Nos. 4,684,439 y 4,788,243 otorgadas a Soerens, que se incorporan aquí por referencia completamente, describe adhesivos de cedencia gradual, que comprenden mezclas de alcohol polivinílico y resina poliamida termoplástica soluble en agua que J¡0 comprende el producto de reacción de una polialquilenpoliamina, un ácido carboxílico dibásico alifático saturado y una poli (oxietilen) diamina. En las patentes de los E.U.A. Nos. 4,501,640 y 4,528,316 otorgada a Soerens, que se incorporan aquí por 25 referencia completamente, se describe un adhesivo de cedencia gradual que comprende una mezcla de alcohol polivinílico y una resina poliamida catiónica termofija soluble en agua. Adhesivos de cedencia gradual cómercialmente disponibles, incluyen polímeros catiónicos de CrepetrolMR 190, CrepetrolMR 290, y CrepetrolMR 80E disponibles de Hercules Incorporated, Wilmington, Del. Aún más, resinas poliamina-epihalohidrina, tales como resinas poliaminopoliamida-epihaiohidrina a menudo contienen grandes cantidades de productos de hidrólisis de epihaiohidrina. Por ejemplo, resinas comerciales de poliamino-poliamida-epiclorohidrina típicamente contienen 1-10% en peso (base seca) de los sub-productos de epiclorohidrina (epi), 1, 3-dicloropropanol (1,3-DCP), 2 , 3-dicloropropanol (2,3-DCP) y 3-cloropropandiol (CPD). Los sub-productos epi se conocen como residuos epi. La producción de estas resinas con niveles reducidos de sub-productos epi ha sido el objeto de mucha investigación. Presionas ambientales para producir resinas con menores niveles de especies de halógeno orgánico adsorbibles (AOX) , se han incrementado. "AOX" se refiere al contenido de halógeno orgánico adsorbible de la resina, que puede determinarse mediante adsorción sobre carbón. AOX incluye epiclorohidrina (epi) y sub-productos epi ( 1 , 3 -dicloropropanol , 2 , 3 - dicloropropanol y 3-cloropropanediol) -í como halógeno orgánico ligado a la estructura principal de polímero. Se han diseñado varias formas para reducir las cantidades de productos de hidrólisis de epihaiohidrina. 5 La reducción en la cantidad de epihaiohidrina empleada en la etapa de síntesis es una alternativa mostrada en la 7 patente de los E.U.A. No. 5,171,795. Resulta un más largo tiempo de reacción. El control sobre el proceso de fabricación se ilustra en la patente de los E.U.A. No. 10 5,017,642 para dar composiciones de concentración reducida de productos de hidrólisis. Estas patentes se incorporan aquí por referencia completamente. Los tratamientos post-síntesis también se ilustran. La patente de los E.U.A. No. 5,256,727, que se 15 incorpora aquí por referencia completamente, ilustra que reaccionar epihaiohidrina y sus productos de hidrólisis con "'' sales fosfato dibásico o alcanolaminas en proporciones , equimolares convierten los compuestos orgánicos clorados en especies no cloradas. Para hacer esto es necesario 20 realizar una segunda etapa de reacción por al menos 3 iv horas, que también contribuye significativamente a costos y genera cantidades de materiales orgánicos o inorgánicos indeseados en la composición de resistencia en húmedo. En composiciones que contienen grandes cantidades de 25 epihaiohidrina y productos de hidrólisis de epihaiohidrina *J (por efi,eft? f o. aproximadamente 1- 6%- en peso de la '' comppsiciónf j la cantidades de material ó??gáijico formado „ igualmente está presente en cantidades indeseablemente * grandes . 5 La patente de los E.U.A. No. 5,516,885 y WO 92/22601, que se incorporan por referencia totalmente, describen que sub-productos halogenados puede retirarse de productos que contienen altos niveles de sub-productos halogenados así como bajos niveles de sub-productos 10 halogenados por el uso de resinas de intercambio de iones . Sin embargo, es claro de los datos presentados que hay pérdidas de rendimiento significantes en composición de resistencia en húmedo y una reducción en efectividad de • ' resistencia en húmedo. 15 Se conoce que compuestos que contienen órgano halógeno libre de nitrógeno, pueden convertirse en una substancia relativamente inocua. Por ejemplo, 1, 3 -dicloro-2 -propanol, 3 -cloro-1, 2-propandiol (también conocido como 3-cloropropandiol, 3 -monocloropropandiol, 20 l monocloropropandiol, cloropropandiol, CPD, 3-CPD, MCPD y 3-MCPD) y epiclorohidrina, se ha tratado con álcali para producir glicerol . La conversión de compuestos órgano halógeno libre de nitrógeno, con microorganismos que contienen una 25 dehalogenasa, también se conoce. Por ejemplo, C E. Castro, y colaboradores ("Bíological Cleavage of Carbon-Halo ?n Bonds Metabo ísm of 3-Bromopropanol by Pseudomonas sp."r (Escisión Biológica de Metabolismo de Enlaces Carbón-Halógeno de 3 -Bromopropanol por Pseudomonas sp) , Biochimica et Biophysica Acta. 100, 384-392, 1965), que se incorpora completamente por referencia, describe el uso de Pseudomonas sp . aislado de tierra que metaboliza 3 -bromopropanol en secuencia a ácido 3-bromopropiónico, 4 ácido 3-hidroxipropiónico y C02. 10 Diversas patentes de los E.U.A. también describen el uso de microorganismos para deshalogenar halohidrinaß, por ejemplo las patentes de los E.U.A. Nos. 4,452,894; «jA 4,477,570; y 4,493,895. Cada una de estas patentes aquí se incorpora por referencia como si se estableciera 15 completamente. Las patentes de los E.U.A. Nos. 5,470,742, 5,843,763 y 5,871,616, que se incorporan aquí completamente por referencia, describen el uso de microorganismos o enzimas derivadas de microorganismos para retirar 20 epihaiohidrina y productos de hidrólisis de epihaiohidrina de composiciones de resistencia en húmedo, sin reducir la efectividad de resistencia en húmedo. La Solicitud de patente de los E.U.A. No. 09/629,629, presentada en Julio 31, 2000, que aquí se 25 incorpora por referencia completamente, se dirige al uso de microorgani?mos o enzimas derivadas de microorganismos para retirar epihaiohidrina y productos de hidrólisis de epíhalófc drina de composiciones de resina, y describe un método secuencial preferido para crecimiento de los 5 microorganismos. Aún más, la patente de los E.U.A. No. 5,972,691 y WO 96/40967, que se incorporan por referencia f . completamente, describen el tratamiento de composiciones de resistencia en húmedo con una base inorgánica después que 10 la etapa de síntesis (es decir después de la reacción de polimerización para formar la resina) se ha completado y la resina se ha estabilizado a bajo pH, para reducir el -* _ t contenido de ogaño halógeno de las composiciones de resistencia en húmedo (por ejemplo productos de hidrólisis 15 clorados) a niveles moderados (por ejemplo aproximadamente 0.5% con base en peso de la composición) . La composición así formada puede luego tratarse con microorganismos o enzimas para producir en forma económica composiciones de resistencia en húmedo con muy bajos niveles de f. 20 . epíhalohidrinas y productos de hidrólisis de epihaiohidrina . * También se conoce que la epihaiohidrina e hidrolízados de epihaiohidrina pueden reaccionarse con bases para formar ion cloruro y alcoholes polihídricos. La 25 patente de los E.U.A. No. 4,975,499 ilustra el uso de bases durante la etapa de síntesis para reducir contenidos de órgano cloro de composición de resistencia en húmedo a niveles moderados (por ejemplo niveles moderados desde aproximadamente 0.11 a aproximadamente 0.16%) con base en 5 el peso de la composición. La patente de los E.U.A. No. 5,019,606 ilustra el reaccionar composiciones de resistencia en húmedo con una base orgánica o inorgánica.

^ Estas patentes se incorporan por referencia completamente < Aún más, las solicitudes de los E.U.A. No. 10 09/001,787, presentada en Diciembre 31, 1997, y 09/224,107, presentada en Diciembre 22, 1998 otorgadas a Riehle, y WO 99/33901, y que se incorporan completamente por referencia, describen entre otras características un proceso para reducir el contenido de AOX de una resina de resistencia en 15 húmedo soluble en agua, de partida, que comprende iones azetidinio y aminohalohidrina terciaria, que incluye tratar la resin en solución acuosa con base para formar la resina tratada, en donde al menos aproximadamente 20 % en mol de aminohalohidrina terciaria presente en la resina de partida 20 se convierte en epóxido y el nivel de ion azetidinio está •^ substancialmente sin cambio y la efectividad de la resina tratada para impartir la resistencia en húmedo es al menos aproximadamente tan grande como la de la resina de resistencia en húmedo de partida.

Aún más, las solicitudes de patentes de los E.U.A. Nos. 09/592*,681, presentada en Junio 12, 2000, 09/363,224, presentada en Julio 30, 1999, 09/330,200, presentada en Junio 11, 1999, cada una de las cuales se 5 incorpora por referencia completamente, se dirigen a productos de resina poliamina-epihalohidrina, particularmente productos de resina • poliamina-epihalohidrina que pueden almacenarse con al menos formación reducida de residuos que contienen halógeno 10 tales como 3 -cloropropandiol (CPD) . Aún más, estas aplicaciones describen el uso de microorganismos o enzimas derivadas de microorganismos para retirar epihaiohidrina y ''^--§ productos de hidrólisis de epihaiohidrina de composiciones de resistencia en húmedo sin reducción en la efectividad de 15 resistencia en húmedo. WO 99/09252 describe resinas de resistencia en * húmedo termofijas preparadas a partir de polímeros de poliaminoamida terminados en extremo. Los terminadores de extremo empleados son ácidos monocarboxílicos o esteres 20 carboxílicos monofuncionales y se emplean para controlar el # peso molecular de la políaminamida, a fin de obtener resinas de resistencia en húmedo con alto contenido de sólidos. Cada uno de los enfoques anteriores ha 25 proporcionado diversos resultados, y ha habido una -viscosidad continua por mejora en el uso de resinas de poliamina-epihalohidrína, especialmente con alto contenido * de sólidos. En particular, aún hay necesidad e*n composiciones de resina tales como resinas de resistencia 5 en húmedo, resistencia en seco y agente de cedencia gradual que puedan proporcionarse en soluciones o dispersión de viscosidad razonable a concentraciones de sólidos de polímero relativamente altas. De esta manera, aún hay una f necesidad por resinas que pueden prepararse, almacenarse, 10 » tratarse y transportarse como una dispersión o solución que contiene altas concentraciones de sólidos sin deterioro del producto de entrelazamiento de polímero, tales como problemas de gelación.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN 15 El tratamiento de enzima de resinas basadas en amina terciaria puede llevarse a cabo a una superior concentración que la que se describió previamente, cuando se utiliza el equilibrio correcto de condiciones de tiempo, temperatura, pH y concentración de enzima. *20 La presente invención se dirige a productos de • resina poliamina-epihalohidrina, particularmente productos de resina poliamina-epihalohidrina que pueden almacenarse con al menos formación reducida de residuos que contienen halógeno tales como 3 -cloropropandiol (CPD) .

La preserfte invención también se dirige a diversos usos de resinas poliamina-epihaiohidrina que tienen al menos formación reducida de residuos que contienen halógeno, tales como agentes de resistencia, incluyendo agentes de resistencia en húmedo y en seco v agentes de cedencia gradual . La presente invención también se dirige a productos de resina de poliamina-epihalohidrina que tienen niveles reducidos de formación de CPD ante almacenamiento, particularmente en productos de papel. La presente invención también Sé dirige a diversos tratamientos de resinas poliamina-epihaiohidrina que incluyen tratamientos para reducir la concentración de residuos que contienen halógeno asociados con las resinas y/o composiciones que contienen las resinas. La presente invención también se dirige a la preparación de resinas de poliamina-epihalohidrina estables en almacenamiento y/o el tratamiento de resinas de poliamina-epihalohidrina para hacer estas resinas estables en almacenamiento, especialmente a altas concentraciones de sólidos . DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN A menos de que de otra forma se establezca, todos los porcentajes, partes, proporciones, etc., se dan en peso .

A menos de que de otra forma se establezca, una , referenci a bn compuesto o componente incluye el compuesto o componente por sí mismo, así como en combinación con otros compuestos o componentes, tales como mezclas de ? 5 compuestos . Además, cuando una cantidad, concentración u otro valor o parámetro se da como una lista de alores preferibles superiores y valores preferibles inferiores, habrá dé entenderse esto como que describe específicamente 10 todos los rangos formados de cualquier par de valor preferido superior y valor preferido inferior independientemente de si los rangos están descritos por separado . Las solicitudes de patente de los E.U.A. Nos. 15 09/592,681, presentada en Junio 12, 2000, 09/363,224. presentada en Julio 30, 1999, y 09/330,200, presentada en Junio 11, 1999, cada una de las cuales se incorpora completamente por referencia se dirigen al descubrimiento de que CPD que se forma en resinas 2*0 poliamina-epihaiohidrina, después de almacenamiento se debe a especies de formación CPD que se asocian con el componente oligomérico y/o polimérico de la resina. Se describe en estas solicitudes que resinas pollamina-epihaiohidrina pueden tratarse durante y/o 25 subsecuente a producción de manera tal que eviten la **,, formación de, inhiben y/o retiran elementos asociados con la resina poliamina-epihalohidrina que forman CPD ante almacenamiento. Por ejemplo, estas aplicaciones describen tratamiento con ácido, tratamiento con base, grupos extremo de bajo contenido ácido en el prepolímero, y tratamiento de enzima, para retirar o reducir las especies formadoras de CPD. De esta manera, en un aspecto de la invención descrito en la solicitud de la patente de los E.U.A. No. 09/592,681, productos de resina poliamina-epihalohidrina que tienen niveles reducidos de formación de CPD ante almacenamiento y niveles minimizados de CPD en productos de papel, pueden producirse al tratar la resina con agente enzimático. De esta manera, las especies formadoras de CPD en la resina pueden reducirse y/o retirarse al tratar la resina con un agente enzimático que es capaz de liberar especies formadoras CPD de la resina. El agente enzimático puede comprender una o más enzimas que son capaces de liberar las especies formadoras CPD de la resina, tal como al menos una de esterasas, lipasas y proteasas. Se prefiere que el agente enzimático tenga actividad esterasa. Una persona con destreza en la técnica sabe que la clase de enzimas proteasa puede tener actividad esterasa y que la clase de enzimas esterasa puede tener actividad proteasa. Una clase preferida de proteasas es el grupo subtilisina (E.C. 3.4.21.62. Homology modeling and protein engineering strategy of subtilases, the family of subtilisin-like serine proteinases (Modelación de homología y estrategia de ingeniería de proteína de subtilasas, la familia de serina ; proteinasas tipo subtilisina) , Siezen RJ, de Vos WM, Leunissen JA, Dijkstra BW, Protein Eng. 1991, 4, 719-37), particularmente las enzimas producidas de Bacillus licheniformis (Número de Acceso Swiss-Prot: P00780) , Bacillus amyloliquifaciens (P00782) , y Bacillus lentus 10 (P29600) . La enzima puede estar en forma pura, o la enzima puede estar sin purificar. Aún más, mezclas de enzimas pueden emplearse, estas mezclas pueden incluir mezclas de * enzimas puras, mezclas de enzimas no purificadas o mezclas de ambas. Particularmente, agentes enzimático preferidos 15 son ALCALASE y SAVINASE, que se obtienen de Novozymes North America, Inc. Franklinton, North Carolina (previamente conocida como Novo Nordisk Biochem, North America, Inc.) . Abundando sobre lo anterior, en trabajo previo, resinas poliamina-epiclorohidrina con aproximadamente *H 12-13.5% en peso de sólidos, se trataron con ALCALASE 2.5 # L tipo DX (Novozymes) para reducir o retirar especies formadoras de CPD. Bajo las condiciones de tratamiento, tales como pH 8, 40°C, 6-8 horas y 0.25 g de ALCALASE por 30 g de resina, las resinas tuvieron tendencia en desarrollar alta viscosidad y quedar inútiles. Se ha descubierto sorprendentemente de acuerdo con la presente invención que al equilibrar las condiciones de tratamiento, incluyendo pH, temperatura, concentración de agente J enzimático, viscosidad de partida y concentración de sólidos de composiciones que contienen resina -poliamin -epihalohidrina, estas composiciones de resina fi spoliaminopolíamida- piclorohidrina, pueden tratarse con agente enzimático para reducir o retirar especies 10 ., formadóras de CPD con características de viscosidad deseada y excelente liberación de CPD. Estas condiciones recientemente descubiertas para tratamiento enzimático permiten que se incremente la viscosidad de resina, "- " disminuye o mantenga a nivel deseado, y permite el 15 tratamiento enzimático a bajo contenido de sólidos, así como altas concentraciones de sólidos de 15 % en peso o mayores . Sin desear estar ligados por teoria, se considera que conforme se incrementa el contenido de sólidos activos, 20 la velocidad de entrelazamiento se incrementa y por lo tanto aumenta la viscosidad. Por selección juiciosa de ¿ondiciones de reacción, la velocidad de reacción de , entrelazamiento que incrementa la viscosidad puede equilibrarse con la velocidad de reacción de hidrólisis eazimática, que disminuye la viscosidad, para obtener en ; forma pronosticable la viscosidad deseada. La presente invención es útil debido a que permite superior rendimiento de producción, para el 5 tratamiento enzimático y debido a que menores niveles de la enzima costosa, pueden ser empleados. Esta tecnología por "v lo tanto deberá permitir (1) producción de resinas de alta efectividad con alto contenido de sólidos, al permitir un más largo tiempo de formación de azetidinio, y (2) 10 producción de resinas que contienen menor AOX al incrementar la conversión de funcionalidad aminoclorohidrina terciaria en funcionalidad azetidinio. ?k- De esta manera, de acuerdo con la presente invención, se ha descubierto que el tratamiento de enzima 15 * para reducir o retirar especies formadoras de CPD puede realizarse a superiores contenidos de sólidos de resina que el esperado. En este aspecto, los ejemplos de tratamiento enzimático en la solicitud de patente de los E.U.A. anteriormente anotada No. 09/592,681 se realizaron a 20 aproximadamente 13-14% en peso de sólidos. De esta mañera, i---------- el tratamiento de enzimas de acuerdo con la presente invención puede incluir contenidos de sólidos como se describen en la técnica previa, incluyendo concentraciones tan bajas como 4% en peso o inferior. Sin embargo, en 25 contraste con la técnica previa, los contenidos de sólidos de la composición de resina acuosa tratada con un agente enzimático de acuerdo con la presente invención, puede ser superior a 15% en peso, más preferible superior a aproximadámé&te 20% en peso y puede ser superior a aproximadamente 25% en peso y especialmente con agentes de cedencia gradual. Contenido de sólidos preferidos está en el rango incluyendo desde aproximadamente 15 a 50% en peso, más preferible aproximadamente 18 a 40% en peso. De preferencia, para agentes de resistencia en húmedo, el contenido de sólidos es aproximadamente 15 a 40% en peso, más preferible aproximadamente 18 a 25% en peso, con un valor de sólidos preferido que es aproximadamente 21% peso; y para agentes de cedencia gradual, el contenidos de sólidos es aproximadamente 20 a 40% en peso, más preferible aproximadamente 22 a 30% en peso, con un valor de sólidos preferido que es aproximadamente 26 % en peso. Los términos auxiliar de cedencia gradual, resina de cedencia gradual, agente de cedencia gradual, y adheéívo de cedencia gradual, se utilizan en forma intercambiable y todos tienen el mismo significado a través de la especificación. El agente enzimático como mínimo se agrega a la resina bajo condiciones convenientes para lograr suficiente hidrólisis de especies formadoras de CPD en la composición "dé solidos de alto contenido de resina. De preferencia, condiciones de tiempo, temperatura, pH, concentración de enzima, viscosidad de partida, y contenidos de sólidos, e equilibran a fin de permitir la reacción hidrólisis mientras que se minimiza la degradación de desempeño de la resina, tal como resistencia en húmedo o efectividad de cedencia gradual de la resina o evitar alta viscosidad de resina, indeseable. De esta manera, inesperadamente, la hidrólisis de especies formadoras de CPD puede realizarse a altas concentraciones de sólidos al equilibrar las condiciones de tiempo, temperatura, pH, concentración de enzima, viscosidad de partida y contenido de sólidos. Por ejemplo, conforme se incrementa la concentración de sólidos, el pH y/o temperatura usualmente habrán de disminuirse. Aún más, conforme se incrementa la concentración de sólidos, la concentración de enzima también deberá usualmente incrementarse . Se nota que la viscosidad de la composición de resina puede incrementar o disminuir desde una viscosidad de partida durante tratamiento enzimático, y puede permanecer igual o substancialmente igual dependiendo de las condiciones de reacción como se anotó anteriormente. Para agentes de cedencia gradual, usualmente se prefiere pero no se limita a, que la viscosidad al final del tratamiento enzimático sea la misma o substancialmente la misma que la viscosidad de partida. Por ejemplo, con agentes de resistencia en húmedo, usualmente se prefiere, pero no se limita a que la viscosidad se mantenga o disminuya desde la viscosidad de partida en la parte inicial del tiempo de tratamiento y luego se mantiene o incrementa a la viscosidad de entrada al final del tiempo de tratamiento. Por ejemplo, con una resina que tiene una viscosidad Brookfield de partida de aproximadamente 100 a F- 300 cps y aproximadamente 20-22% en peso de sólidos activos, se prefiere que se elijan las condiciones de 10 manera tal que después de tratamiento, la viscosidad de la resina se mantenga o disminuya con los sólidos activos que son aproximadamente 19-22% en peso. Además, por ejemplo, con una resina que tiene una viscosidad Brookfield de partida de aproximadamente 100 a 300 cps y aproximadamente '15 20-22% en peso de sólidos activos, se prefiere que la viscosidad de Gardner-Holdt al inicio de la reacción sea aproximadamente G a J, luego es conveniente que la viscosidad Gardner-Holdt disminuya durante la reacción a aproximadamente F al final de la reacción. Además, por 20 ejemplo, con una resina que tiene una viscosidad Brookfield de partida de aproximadamente 100 a 300 cps y aproximadamente 20-22% en peso de sólidos activos, también se prefiere si la viscosidad Gardner-Holt al inicio de la reacción es aproximadamente G a J, luego es conveniente que 25 la viscosidad Gardner-Holt disminuya durante la reacción a s*F?* aproximadamente A a E hacia el fin dß la Reacción, es conveniente «1 incrementar la temperatura de tratamiento - st que la viscosidad Gardner-Holt se haya incrementado a aproximadamente F a l. Ademas, por ejiemplo con KymeneMR E7219 (disponible de Hercules Incorporated, Wilmington, DE) que tiene una viscosidad Brookfield de partida de .#. V aproximadamente 200 a 300 cps, con aproximadamente 20-22% en peso de sólidos activos si la viscosidad Gardner-Holt al inicio de la reacción es aproximadamente I, entonces es 10 conveniente que la viscosidad Gardner-Holt disminuya durante la reacción a aproximadamente F al final de la reacción, resultando en una resina final (estabilizada a * " ^ aproximadamente pH 3-3.5) con una viscosidad Brookfield de * aproximadamente 100-150 cps. Por ejemplo con KymeneMR É7219 15 (disponible de Hercules Incorporated, Wilmington, DE) que tiene una viscosidad Brookfield de partida de aproximadamente 200 a 300 cps, con aproximadamente 20-23% eh peso de sólidos activos si la viscosidad Gardner-Holt al inicio de la reacción es aproximadamente I, entonces es 20 conveniente que la viscosidad Gardner-Holt disminuya f * durante la reacción a aproximadamente C hacia el fin de la reacción, es conveniente el incrementar la temperatura de tratamiento hasta que la viscosidad Gardner-Holt se ha incrementado a aproximadamente F.

Por ejemplo, con agentes de cedenáia gradual, usualmente se prefiere pero no se limita qué la viscosidad de partida sea inferior a aproximadamente ifeo cps, más pref rible inferior a aproximadamente 100 cps, e 5 particular inferior a aproximadamente 80 cps y en especial inferior a aproximadamente 40 cps. De preferencia la viscosidad de partida de la mezcla de reacción está en el ' rango desde aproximadamente 10 cps a 150 cps, más preferible 20 cps a 100 cps aproximadamente, y aún más 10 preferible de aproximadamente 40 a 80 cps. Con respecto a lo anterior, se prefiere minimizar o al menos equilibrar reacciones secundarias, tales como l <( descomposición polimérica o incremento de peso molecular a J fin de que la viscosidad de la mezcla de reacción se 15 mantenga por debajo de una viscosidad que no permita que proceda la reacción. De preferencia, se mide viscosidad utilizando un viscómetro programable Brookfield LVDV-II+ 25 °C o un equivalente tal como un Brookfield DV-II+ husillo LV2 a 60 o 100 rpm, dependiendo de la viscosidad. Para el 20 viscómetro programable, el procedimiento empleado se basa en las Instrucciones Operativas, Manual No. M/97-164. Este viscómetro determinará la viscosidad solo si se utilizan las rpm y husillos correctos para la viscosidad de la muestra de acuerdo con el manual de instrucciones .

Es preferible que las propiedades de ún agente de cedencia gradual, sean aproximadamente las mismas subsecuentes a tratamiento como fueron antes de tratamiento. Por lo tanto, como se anotó anteriormente de preferencia la viscosidad de la mezcla de reacción se - mantiene constante o substancialmente constante durante la reacción para agentes de cedencia gradual. En particular, 0k la viscosidad de la mezcla de reacción no se incrementa más de aproximadamente 50%, más preferible no más que 10 aproximadamente 20% y en particular no más que * aproximadamente 10% desde la viscosidad de partida. Además se nota que las condiciones, de temperatura, pH y concentración de agente enzimáticó, pueden variarse durante la reacción. Por ejemplo, si la 15 viscosidad de la mezcla de reacción es superior a la deseada, el pH y/o temperatura pueden bajarse y/o puede agregarse más agente enzimático. Por el contrario, por ejemplo si la viscosidad de la mezcla de reacción es inferior a la deseada, pueden elevarse el pH y/o 20 temperatura. La presente invención también se dirige a un proceso para reducir viscosidad o peso molecular de una , composición que contiene resina poliamina-epihalohidrina, que comprende tratar la composición que contiene resina 25 poliamina*-epihaloh?drina con al menos un agente enzimático.

La composición puede comprender un alto contenido de sólidos, tal como un contenido de sólidos de al menos 15% en peso. El variar las condiciones de reacción usualmente cambiará el tiempo de reacción. El pH y/o temperatura 5 pueden bajarse y/o puede agregarse agente enzimático adicional . Para resinas de resistencia en húmedo y con el • uso de ALCALASE 2.5L tipo DX como la enzima, ejemplos específicos de condiciones preferibles incluyen lo 10 siguiente. Con una resina que tiene una viscosidad de partida Brookfield de aproximadamente 150 a 300 cps y aproximadamente 20-22% en peso de sólidos activos, se prefiere utilizar temperatura de aproximadamente 20 a 33 °C, *# un pH de aproximadamente 6.8 a 7.8, una proporción de 15 ALCALASE 2.5L tipo DX (como base recibida) a sólidos activos de aproximadamente 1.0:20 a 1.0.5.0. Más específicamente, con KymeneMR E7219 (disponible de Hercules Incorporated, Willmington, DE) que tiene una viscosidad de partida Brookfield de aproximadamente 200 a 300 cps con 20 aproximadamente 22-22% de sólidos activos, se prefiere utilizar una temperatura de aproximadamente 23-27°C, un pH de aproximadamente 6.8-7.5, una proporción de ALCALASE 2.5L tipo DX (como base recibida) a sólidos activos de aproximadamente 1.0:8.0 a 1.0:18.0 con un tiempo en 25 tratamiento de 6 a 10 horas. Habrá de notarse que conforme se incrementa el tiempo de tratamiento, la cantidad de CPD liberado de las especies que producen CPD se incrementa convenientemente, con un tiempo de tratamiento preferido que es de 6 a 10 horas. Otro ejemplo de condiciones es el siguiente: KymeneMR E7219 (disponible de Hercules Incorporated, Willmington, DE) que tiene una viscosidad de partida Brookfield de aproximadamente 200 a 300 cps con aproximadamente 20-22% de sólidos activos, una temperatura de aproximadamente 35°C, un pH de aproximadamente 7.5, una 10 proporción en peso de ALCALASE 2.5L tipo DX (como base recibida) a sólidos activos de aproximadamente 1.0:8.3. La temperatura puede ser al menos aproximadamente 0°C, más preferible aproximadamente 10°C a 80°C, o más preferible aproximadamente 20°C a 60°C, en especial de 15 aproximadamente 20°C a 40°C y particularmente de aproximadamente 20°C a 30°C. El tiempo de reacción puede ser aproximadamente 3 minutos a 350 horas, más preferible aproximadamente 30 a 48 horas y en especial aproximadamente 30 minutos a 96 horas, más preferible aún aproximadamente 20 1 hora a 24 horas y en especial en particular - aproximadamente 2 horas a 12 horas . El pH del tratamiento enzimático dependerá de la dependencia del pH de la enzima específica y las otras condiciones de tratamiento, y puede variar entre 1 a 11, de preferencia 2 a 10, o más 25 preferible aproximadamente 2.5 a 9, y aún más í, Í-L- preferiblemente 7-9 y en especial de 7 a 8. Rangos de pH íjprs§:féri#ós adicionales incluyen 5.0 a 8.0, 5.5 a 7.5, 6 a 9, 6 a 8.5, 6.5 a 8. Por ejemplo, el tratamiento combinado puede iniciarse a pH 6.8-7.8 para las primeras 4-24 horas y luego -reducirse a pH 5.5-7.0 o el pH puede dejar que se desplace 0 flote descendiendo a 6.5-7.2 por las últimas 8-48 horas •*" del tratamiento combinado. La concentración de la enzima dependerá de su 1 * * actividad. Por ejemplo, pero no limitado a, la enzima puede estar presente en una cantidad de aproximadamente '• 0.04 g de enzima activa (base seca) a 1600 g de resina /- poliamina-epiclorohidrina (base seca) a 0.04 g de enzima activa (base seca) a 1.5 g de resina L5 poliamina-epiclorohidrina (base seca) , también la enzima puede estar presente en una cantidad de aproximadamente 0.04 g de enzima activa (base seca) a 160 g de resina n poliamina-epiclorohidrina (base seca) a 0.04 g de enzima activa (base seca) a 4 g de resina poliamina-epiclorhidrina 2 * . (base seca) . • La concentración de la enzima dependerá de su actividad. Por ejemplo, no limitado a, en el caso de ALCALASE, la enzima puede estar presente en una cantidad de aproximadamente 1 g de ALCALASE 2.5L tipo DX (como se 25? recibe) a 1600 g de resina poliamina-epiclorohidrina (baáe seca) a 1 g de ALCALASE 2.5L tipo DX (como se recibe) a 1.5 g de resina poliamina-epiclorohidrina (base seca) , también la enzima puede estar presente en una cantidad de aproximadamente 1 g de ALCALASE 2.5L tipo DX (como se 5 recibe) a 160 g de resina poliamina-epiclorohídrina (base seca), a 1 de ALCALASE 2.5L tipo DX (como se recibe), a 4 g de resina poliamina-epiclorohidrina (base seca) . ' ^J •" Se nota que siguiendo las guías y los ejemplos no limitantes, establecidos en la presente solicitud, una 10 persona con destreza ordinaria en la especialidad será capaz de determinar condiciones de tratamiento y el equilibrio de condiciones de tratamiento para obtener *^ * hidrólisis de especies formadores de CPD a altas concentraciones de sólidos y/o para obtener una reducción 15 en peso molecular o viscosidad. Por ejemplo, conforme Se incrementa la concentración de sólidos, el pH y/o temperatura usualmente se disminuirán, y la concentración de agente enzimático usualmente se incrementará. Aún más, siguiendo las guías, una persona con destreza ordinaria en 20 la especialidad será capaz de determinar agentes enzimáticos que son útiles para retirar especies formadores de CPD y/o para obtener una reducción de peso molecular o viscosidad. Aún más, pueden variarse condiciones de reacción 25 preferidas al utilizar tipos y cantidades apropiadas de /* enzimas. Por ejemplo, si el agente é'aziraático tiene a 'superior actividad de proteasa en comparación con esterasa (equilibrio proteasa/esterasa) con una resina pfliamina-epíclorohidrina, entonces las condiciones de 5 >reacción pueden variarse a superiores pH, temperatura y/o sólidos, tales como condiciones de reacción sobre k- aproximadamente pH 8 y/o temperatura sobre aproximadamente 40°C, y/o sólidos tan altos como aproximadamente 40% en peso. Práctico se define como obtener una resina formadora 10 de CPD reducida mientras que tiene una resina con la viscosidad deseada. Aunque las condiciones dependerán del tJ equilibrio de actividad de esterasa y proteasa de una '^ enzima particular, las condiciones preferidas con la presente invención con ALCALASE 2.5L tipo DX son las 15 Siguientes: 15-50% en peso de sólidos activos, pH 6.9 a V< i 7.9, a 0 a 35°C por 4 a 24 horas y 8-20 g de sólidos í - activos por 1 g de ALCALASE 2.5L tipo DX (como se recibe) y viscosidad de partida de 10 cP a 1000 cP. Aún más, se nota que a través de la solicitud se utiliza la 20 terminología de concentración de agente enzimático. Sin •* embargo, una persona con destreza ordinaria en la especialidad comprenderá que las enzimas pueden tener diferentes actividades, y la concentración de la enzima puede ajustarse dependiendo de la actividad.

El tratamiento de enzima puede aplicarse a resinas como se producen en un proceso de síntesis de resina, sin mayor tratamiento. Aún más, las resinas pueden tratarse por diversos procesos antes de reducción y/o remoción de las especies formadoras de CPD. Aún más, después de tratamiento para reducir y/o retirar especies formadoras de CPD, la resina puede tratarse con diversos procesos. Aún más, sin embargo, la resina puede tratarse por diversos procesos antes de reducción y/o remoción de las especies formadoras de CPD y la resina también puede tratarse por diversos procesos después de tratamiento, para reducir y/o retirar especies formadoras de CPD. Por razones de brevedad, una descripción completa de estos procesos no se repite aquí, y se hace referencia a la anteriormente identificadas solicitudes de patente de los E.U.A. Nos. 09/629,629, 09/592,681, 09/363,224 y 09/330,200, que se incorporan aquí por referencia completamente . Las resinas de acuerdo con la presente invención eon capaces de almacenarse sin indebida formación de CPD. Más específicamente, como un ejemplo, la solución obtendrá menos de aproximadamente 10 ppm (partes por millón) más preferible menos de aproximadamente 5 ppm y en especial menos de 1 ppm de CPD, cuando se almacenan a aproximadamente 13.5% en peso de contenido de sólidos de resina. En el contexto de la presente invención la frase "sólidos de resina" significa la poliamina-epihalohidrina activa de la composición. Para determinar estabilidad en almacenamiento de 5 soluciones de resina de acuerdo con la presente invención, se realiza una prueba de estabilidad de solución de resina A en donde la solución de resina de almacena un periodo de 2 F semanas a 50°C y un pH de aproximadamente 2.5 a 8, de preferencia 2.8 y el contenido de CPD se mide al final del 10 periodo de 2 semanas. De esta manera, una solución que contiene resina poliamina-epihalohidrina de acuerdo con la presente invención, será estable en almacenamiento si 'F contiene menos de aproximadamente 250 ppm de base seca de CPD cuando se mide al final del periodo de 2 semanas, más 1 preferible menos de aproximadamente 150 ppm de base seca de CPD cuando se mide al final del periodo de 2 semanas, aún más preferible menos de aproximadamente 75 ppm de base seca de CPD, cuando se mide al final del periodo de 2 semanas, aún todavía más preferible con menos de aproximadamente 40 20 ppm de base seca de CPD cuando se mide al final del periodo -p f de 2 semanas y en especial menos de aproximadamente 10 ppm de base seca de CPD, cuando se mide al final del periodo de 2 semanas . La prueba de estabilidad de solución de resina 25 puede realizarse en soluciones que tienen un contenido » 'variante de sólidos de resina en por ciento; sin embargo, 1 el CPD producido deberá ser corregido para contenido de sólidos. Por ejemplo, una solución de contenido de sólidos de 15% en peso de resina que tiene un contenido de CPD medido de 15 ppm, el CPD corregido en una base seca será „ 100 ppm de base seca (15 ppm/0.15 en peso de contenido de * sólidos de resina) . «e La prueba de estabilidad de solución de resina se realiza al cargar una porción de la resina 10 poliamina-epihalohidrina en un recipiente que contiene un agitador. El recipiente se coloca en un baño de agua a 50°C y mantiene a 50°C con agitación. Se retira una alícuota del recipiente y somete a análisis de cromatografía de gases (GC = Gas Chromatography) de acuerdo 15 * con el procedimiento GC como se establece a continuación. Típicamente, un detector de ionización de flama (FID = , Fíame Ionization Detector) primero se enfría para analizar " la muestra. Un detector de conductividad electrolítica (ELCD) o un detector específico de halógeno (XSD) se emplea ',,20 " cuando se requiere sensibilidad incrementada, especialmente « a menos que aproximadamente 20 ppm de las especies a analizar. Pueden emplearse otros detectores sensibles, por ejemplo detectores de captura electrones. Esta prueba es una prueba de añejamiento acelerada para modelar mx-..^ , • añejamiento a más largos periodos de tiempo a J aproximadamente 32 °C. Una prueba adicional para determinar estabilidad *, en almacenamiento de soluciones de resina de acuerdo con la 5 presente invención es la siguiente prueba ("Prueba Acida") : Una porción de la resina a probar, se carga en un recipiente que contiene un agitador. El pH se ajusta a 1.0 ™ü^^ 'con ácido sulfúrico al 96% en peso. El recipiente se cierra y coloca en un baño de agua a 50°C y mantiene 50°C 10 con agitación. Se retira una alícuota del recipiente a 24 horas y somete a análisis GC en la forma descrita a continuación, para proporcionar una indicación de la *> estabilidad de almacenamiento. La prueba acida puede realizarse en soluciones 15 con un contenido de sólidos de resina en por ciento, variante; sin embargo, el CPD producido deberá corregirse para contenido de sólidos. Por ejemplo, para una solución con contenido de sólidos de resina de 15% en peso que tiene un contenido de CPD medido de 15 ppm, el CPD corregido en 20 una base seca, será 100 ppm de base seca (15 ppm/0.15 de contenido de sólidos de resina en peso) . Para la modalidad de la invención en donde el tratamiento de enzima se aplica a la resina en un proceso de síntesis de resina sin necesidad por mayor tratamiento, 25 aunque puede emplearse mayor tratamiento, la cantidad de - CPD liberado y/o pr d^cido por la resina, cuando se * almacena a pS 1 por 24 horas a 50°C y medido a 24 hora , libera y/p produce menos que aproximadamente 1000 ppm en base seck? {d^ CPD, más preferiblemente libera y/o produce menos de- aproximadamente 750 ppm de base seca de CPD, aún más preferible libera y/o produce menos de aproximadamente 500 ppm de base seca de CPD, aún más preferible libera y/o - » produce menos de aproximadamente 250 ppm de base seca de CPD, aún más preferible libera y/o produce menos de 10 aproximadamente 200 ppm de base seca de CPD, aún más f preferible libera y/o produce menos de aproximadamente 150 f- ppm de base seca de CPD, aún más preferible libera y/o * j. produce menos de aproximadamente 100 ppm de base seca de J CPD, aún más preferible libera y/o produce menos de 15 aproximadamente 75 ppm de base de CPD, aún más preferible ' ~ libera y/o produce menos de aproximadamente 50 ppm de base seca de CPD, aún más preferible libera y/o produce menos de aproximadamente 25 ppm de base seca de CPD, aún más preferible libera y/o produce menos de aproximadamente 15 ->20 ppm de base seca de CPD, aún más preferible libera y/o produce menos de aproximadamente 5 ppm de base seca de CPD, y aún más preferible libera y/o produce menos de aproximadamente 3 ppm de base seca de CPD, y aún más preferible libera y/o produce menos de aproximadamente 1 25 ppm de base seca de CPD. i*- e t í i? leSí Para la modalidad de la invención en donde el tratamiento de enzima es simultáneamente con, antes de o subsecuente a un tratamiento adicional para reducir cuando menos Uno de epihalohidrinas, sub-productos de epihaiohidrina y halógeno orgánico ligado a la estructura principal de polímero, este tratamiento adicional puede ser, pero no está limitado a, contactar la resina formadora de CPD reducida con al menos un microorganismo o al menos una enzima aislada del microorganismo como mínimo, en una cantidad y a un pH y temperatura efectivos para deshalogenar cantidades residuales de halógeno ligado orgánicamente, cuando se almacenan a pH 1 por 24 horas a 50°C y medido a 24 horas, contiene menos de aproximadamente 1000 ppm de base seca de CPD, más preferible que contiene menos de aproximadamente 750 ppm de base seca de CPD, aún más contiene menos de aproximadamente 500 ppm de base seca de CPD, más preferible que contiene menos de aproximadamente 250 ppm de base seca de CPD, más preferible que contiene menos de aproximadamente 200 ppm de base seca de CPD, más preferible que contiene menos de aproximadamente 150 ppm de base seca de CPD, más preferible que contiene menos de aproximadamente 100 ppm de base seca 'de CPD, más preferible que contiene menos de aproximadamente 75 ppm de base seca de CPD, más preferible que contiene menos de aproximadamente 50 ppm de base seca. de CPD, más preferible que contiene menos ?je aproximadamente 25 ppm de base seca de CPD, más preferible que contiene menos de aproximadamente 15 ppm de base seda de CPD, más preferible que contiene menos de 5 aproximadamente 5 ppm de base seca de CPD, y aún más preferiblemente contiene menos de aproximadamente 3 ppm de " base eeca de CPD, y en particular de preferencia contiene f- menos de aproximadamente 1 ppm de base seca de CPD. Procedimiento e Instrumentación de GC : GC se 10 emplea para determinar epi y sub-productos epi en las resinas tratada y sin tratar, utilizando el eiguiente método. La muestra de resina se absorbe en una columna Extrelut disponible de EM Science, Extrelut QE, Parte # 901003-1) y extrae al pasar acetato de etilo a través de la 15 columna. Una porción de la solución de etil acetato se cromatografía en una columna capilar de orificio amplio. Si se utiliza el detector de ionización de flama (FID) , los componentee se cuantifican utilizando n-octanol como norma interna. Si ee utiliza un detector de conductividad 20 * electrolítica (ELCD) o si el detector específico de ^-^ halógeno (XSD) , un método estándar externo se utiliza cuantificación de correspondencia pico ee emplea. El sistema de datos ya fue un Milllenium 2010 o pH CienStation. El detector FID se adquiere de 25 Hewlett-Packard (HP) como parte de un Modelo 5890 GC. El -* detector ELCD, Modelo 5220, ee adquirió de 01 Analytical. " El detector XSD se adquirió de Oí Anal tiCal, Modelo 5360 XSD. El instrumento GC empleado fue un HP Modelo 5890 ^ seri 'l?' La columna fue DB-WAX (Megabore, J&W Scientific, 5 Inc.) 30 m x 0.53 mm con espeeor de película de 1.5 mieras. Para el FID y ELCD, el gas portador fue helio con un gasto de flujo de 10 mL/min. El programa de horno fue 35°C por 7 minutos seguido por aumento en rampa a 8 C/min hasta 200°C y manteniendo a 200°C por 5 minutoe. EL FID empleó no hidrógeno a 30 mL/minuto y aire a 400 mL/minuto a 250°C. El ELCD utilizó n-propanol como electrólito con un ajuste de gasto flujo de electrolito de 50% con una temperatura de reactor de 900°C. El reactor XSD se opera en un modo oxidativo a 1000°C con un gasto de flujo de aire de alta 15 pureza de 25 mL/minuto. Aún más, productos de papel que contienen resinae de acuerdo con la presente invención son capaces de almacenarse sin indebida formación de CPD. De esta manera, productos de papel de acuerdo con la presente invención 20 pueden tener niveles bajos iniciales de CPD, y pueden, T mantener bajos niveles de CPD sobre un periodo de almacenamiento extendido. Máe específicamente, productos de papel de acuerdo con la presente invención elaborados con un nivel de adición de 1% en peso de resina contendrán 25 menos de aproximadamente 250 partes por billón (ppb) de 7 ««* CPD, más preferible menos de aproximadamente 100 ppb de CPD, aún más preferible menos de aproximadamente 50 ppb fde CPD, y aún más preferible menos de aproximadamente 10 ppb de CPD, y aún máe preferible menoe de aproximadamente 1 ppb 5 de CPD, cuando ee almacenan por periodos tan largos como 2 semanas, de preferencia tan largos como al menos 6 meses y más preferible tan largos como al menoe un año. Aún más, productos de papel de acuerdo con la presente invención, elaborados con aproximadamente un nivel de adición de 1% en 10 peso de resina, tendrán un incremento de contenido de CPD inferior a aproximadamente 250 ppb, más preferible inferior a aproximadamente 100 ppb de CPD, aún más preferible inferior a aproximadamente 50 ppb de CPD, aún más preferible inferior a aproximadamente 10 ppb de CPD, y aún 15 más preferible inferior a aproximadamente 1 ppb de CPD, cuando se almacenan por periodos tan largos como 2 semanas, más preferible tan largos como al menos 6 meses y aún más preferible tan largos como al menos 1 año. En otras palabras, los productos de papel de acuerdo con la presente 20 invención tienen estabilidad de almacenamiento y rio ^ generarán contenido de CPD excesivo en productoe de papel cuando loe productoe de papel se almacenan por tan poco como un día y por periodos de tiempo mayores a un año. De eeta manera, las resinas de acuerdo con la preeente 25 invención da formación mínima de CPD en productos de papel, ?gÉt .í. rám&. ,-4Í particularmente aquéllos expuestos a ambientes acuosos, especialmente ambientes acuosos calientes, por ejemplo una bolea de té, filtroe de café, etc. Adicionales ejemplos de productos de papel incluyen grado cartón de empaque y grado de tisú y toalla. El papel puede elaborarse al agregar la resina a niveles adicionales diferentes a aproximadamente 1% en peso; ein embargo, el contenido de CPD deberá corregiree para el nivel adicional. Por ejemplo, para un producto de 10 papel elaborado al agregar una reeina a un nivel de adición dé 0,5% en peso que tiene un contenido de CPD medido de 50 ppb, el CPD corregido en una baee a nivel de adición de 1% y*- ?r en peeo será 100 ppb (nivel de adición 50 ppb/0.5 por ciento) . 15 Para medir CPD en productos de papel, el producto de papel ee extrae con agua de acuerdo con el método descrito en la norma Europea EN 647, con fecha de Octubre 1993. Luego, 5.80 gramos de cloruro de sodio se disuelven en 20 ml del extracto de agua. El extracto de agua y 20 salificado se tranefiere a una columna Extrelut con capacidad de 20 gramoe y ee deja que sature la columna por 15 minutos. Después de tres lavados de 3 ml de etilf acetato y saturación de la columna, la columan Extrelut se, eluye hasta que se han recuperado 300 ml de eluyente en 25 aproximadamente 1 hora. Los 300 ml de extracto de etil 4 s i I acetato se concentran a aproxiraadamente 5 ml utilizando un aparato de concentración Kuderna-Danish de 500 ml de ser necesario, se realiza mayor concentración al utilizar un aparato micro Kuderna-Danish. El extracto concentrado se analiza por GC utilizando el procedimiento e instrumentación descritos anteriormente. Típicamente, ee utiliza un detector de conductividad electrolítica (ELCD) o un detector eepecífico de halógeno (XSD) . Otroe detectores seneiblee pueden emplearse, por ejemplo detectores de captura de electrones. En forma alterna, CPD en productos de papel puede medirse utilizando el procedimiento descrito en el Ejemplo 4. Las resinas pueden tratarse con agente enzimático de acuerdo con la presente invención, pueden comprender cualesquiera resinae poliamina-epihalohidrina. Eeta invención también ee dirige a la preparación, uso y tratamiento de resinas poliamino-epihalohidrina, tales como resinae poliaminopoliamida-epiclorohidrina, elaboradas al reaccionar epihaiohidrina tal como epiclorohidrina, con un prepolímero (también referido en forma intercambiable aquí como polímero) tal como prepolímero de poliaminoamida. En el caso de resinas poliaminopoliamida, se nota que el prepolímero poliaminoamida también se refiere como poliamidoamina, poliaminopoliamida, poliamidopoliamina, - poliamidapoliamina, poliamida, poliamida básica, poliamida catiónica, aminopoliamida, amidopoliamina o poliaminamida. Un grupo preferido de polímeros para utilizar en la presente invención incluye polímeros catiónicoe, eoloe o en conjunto con otros polímeros. Polímeros catiónicos particularmente preferidos incluyen aquéllos empleadoe con el propóeito de impartir resietencia en húmedo al papel así -IW como agtentes de cedencia gradual. Una lista de muchos polímeros útiles en formulacionee de elaboración de papel 10 tales como agentes de cedencia gradual y de resistencia en húmedo, se describe en Paper Chemistry (Química de Papel) , ISBN 0-216-92909-1, páginas 78-96, publicada en los E.U.A. 01 por Chapman Hail, New York, Capítulo 6 de este libro tiene como título "Wet Strengh Chemistry" ( (Química de 15 Resistencia en Húmedo) y aquí se incorpora completamente por referencia. El capítulo 6 describe varias clasee de polímeroe que se utilizan para impartir resistencia en húmedo al papel, incluyendo: resina poliaminoamida-epiclorohidrina, resina urea-formaldehído, 20 resina melamina-formaldehído, resina poliamida epoxidada, resina poliacrilamida glioxalada, resina polietileniminá, almidón dialdehído, adhesivo proteináceo tratado con formaldehído, celulosa xantato (viscosa) , látex sintético, goma vegetal y glioxal. La reeina 25 poliaminoamida-epiclorohidrina puede eer resina póliaminoamida-epiclorohidrina marca Kymene-.MraR? tales coraq KymeneMR 557LX, SLX2 o KymeneMR 617 o Una resifta poliamiila ' --épiclorohidrina tales como resinas KymeneMR 2Ó64, KymeneMR 367 y KymeneMR 736 o resinae 5 póliamida-poliurileno-epihalohidrina talee como KymenßMR 450. La invención ee dirige a polímeros catiónicos -"^ÜÜF tales como resinas poliamina-epiclorohidrina que puedan emplearse solos o en combinación con otros polímeros 10 utilizados para el reforzamiento en húmedo de papel y , agentee de cedencia gradual . Estas resinae incluyen resinas epiclorohidrina y polímeros catiónicos que contienen nitrógeno, ambos de los cuales se derivan de reactivos epiclorohidrina. Resinae preferidas para los 5 propósitos de esta invención incluyen resinae de resistencia en húmedo de poliaminoamida-epiclorohidríiia como se describe en lae patentee de loe E.U.A. Nos. 2,926,154; 3,332,901; 3,891,589; 3,197,427; 4,240,935; 4,857,586; Publicación de Patente Europea No. 0,349,935 y 20 , patente de Gran Bretaña 865,727 y Solicitudes de Patente de los E.U.A. Noe. 09/629,629, 09/592,681, 09/363,224 y '* 09/330,200. Ademáe, resinas incluyen CrepetrolMR 80E y ' CrepetrolMR A3025, CrepetrolMR A6115, CrepetrolMR A8225, CrepetrolMR 870, SPC 003, y RezosolMR 8289 como agentes de 25 cedencia gradual, que están disponiblee de Hercules " Incorporated, Willington, Delaware. Se nota que estas resinas en general se refieren aquí como resinas poliamina-epihalohidrina, y estae reemas incluyen, pero no están limitadas a resinas poliaminopoliamida- 5 t <»pihalohidrina, (que también se conocen como reeinas poliaminoamida-epihalohidrina, resinas poliamidapoliamina-epihalohidrina, resinas F pol i aminopol iamida - epihal ohi dr ina , resinas aminopoliamida-epihalohidrina, resinas 10 poliamida-epihalohidrina; polialquilen poliamina-epihalohidrina y resinae poliaminourileno-epilhalohidrina, resinas copol iamida-poliurileno- epihaiohidrina, resinae poliamida-poliurileno-epihalohidrina, con epihaiohidrina 15 que de preferencia ee epiclorohidrina en cada caso. Procesos par producir estas reeinae conocidas también se describen en estos documentos que se incorporan completamente aquí por referencia. Resinas epiclorohidrina ejemplares en estas 0 patentes se caracterizan por la preeencia de grupoe F N-clorohídrina de la fórmula: N-CH2-CH(OH) -CH2C1 25 y grupos N-clorohidrina cuaternarios de la fórmula: ít I + ?- -N-CH2-CH(OB) -CH2C1 Én donde el átomo de nitrógeno tetrasubstituido está cargado positivamente (un nitrógeno cuaternario) , y por lo tanto catíónico; y grupos cloruro de 3-hidroxiazetidinio isoméricos de la fórmula: Un polímero catiónico preferido utilizado en la "• presente invención es un polímero que tiene la siguiente fórmula : ***í!i I i &A en donde el átomo de nitrógeno tetrasubstituido con 10 asterisco está cargado poeitivamente (un nitrógeno cuaternario) y por lo tanto catiónico. El átomo de nitrógeno está en un anillo de 4 miembros (es decir un *fr grupo 3-hidroxiazetidinio) . Otras unidades de polímero sin carga también co-existen eobre cadenae de polímero de este 15 'tipo de resina. Aún cuando unos cuantos grupos cargados negativamente (es decir aniónicos) también pueden estar presentee en el polímero, la carga neta sobre la cadena de polímero ee poeitiva. X" ee un anión eimple, que no eetá ligado covalentemente a la cadena de polímero. En general, 20 el anión ee un ion cloruro, y n ee un entero deede aproximadamente 5 a varioe miles, de preferencia 5 a 3000. Agentes de cedencia gradual, incluyen sin limitación, CrepetrolMR 80E, o CrepetrolMR A3025, CrepetrolMR A6115, CrepetrolMR A8225, CrepetrolMR 870, SPC 003 y RezosolMR 25 8289.

¿ Para agentes de resietencia en húmedo, mientras que pueden emplearse proporciones mayores a l, se prefiere * que la reeina comprenda una resina formada en una reacción * de poliamida-epihalohidrina que tiene una proporción molar 5 de epihaiohidrina a grupo amina secundario inferior a 1, más preferiblemente la proporción molar de epihaiohidrina a grupo amina secundario es menoe que aproximadamente • 0.975, con un rango preferido de la proporción molar de epihaiohidrina al grupo amina secundario que es 10 aproximadamene 0.5 a 0.975, más preferible la proporción molar de epihaiohidrina al grupo amino secundario es de aproximadamente 0.6 a 0.975 y aún máe preferible f^ aproximadamente 0.8 a 0.975. Para agentee de cedencia gradual, ee prefiere que la reeina comprenda la reeina &5 formada en una reacción de poliamida-epihalohidrina que tiene una proporción molar de epihaiohidrina a grupo amina eecundario inferior a aproximadamente 0.50, máe preferible inferior a aproximadamente 0.25 y aún puede eer menor a 0.1%, con un límite inferior preferido de aproximadamente Aún más, agentes de cedencia gradual de acuerdó con la preeente invención no requieren tantae funcionalidades de entrelazamiento como los agentes de resistencia en húmedo, y por lo tanto tienen un nivel de 25 azetidinio inferior que los agentes de resistencia en -húmedo. De esta *manera, de preferencia ©1 nivel de de agentes de cedencia gradual, menor ftíe Xaproximadamente 10% en mol, con un rango pireferidó de *t* aproximadamente 5 a 10% en mol, y de preferencia el nivel 5 de azetidinio de agentes de resistencia en húmedo es mayor * ,'que aproximadamente 30% en mol, con un rango preferido de aproximadamente 30 a 70% en mol. El % en mol de azetidinio y el % en mol de otras especiee pueden determinarse por el siguiente procedimiento RMN, 10 * Procedimiento RMN, Los espectros RMN 13C se adquieren utilizando % espectrómetros BRUKER AMX equipadoe con una sonda de banda ^ß ' - amplia de 10 mm. Una frecuencia de operación RMN 13C de 100 MHz o (AMX400) o 125 MHz (AMX500) es suficiente para 15 * recolección de datos. En cualquier caso, los espectros ie adquieren con desacoplamiento -"? continuo. Integración electrónica de las señales apropiadas proporciona concentraciones de loe siguientes componentes de alquilación: ACH, EPX, GLY y AZE. 4 f 20 * En donde ACH = aminoclorohidrinae poliméricas, EPX = » epóxidos poliméricos, GLY = glicoles poliméricos, AZE = iones azetidinio. A fin de calcular las concentraciones de cada uña de estas especiee, los valores integrales deben colocaree 25 en una base de un (1) carbono. Por ejemplo, la región M** *jl "S? espectral entré 20-42 ppm representa seis (6) carbonos de la estructura principal por lo tanto el valor integral se divide por &$ & . Este valor se utiliza come- Denominador Común de Polímero (PCD = Polymer Common Denomi?^ator) para cálculo de las especiee de alquilación. Los desplazamientoe químicos de estas f f-~ eepecíee se proporcionan a continuación (utilizando una referencia de campo acetonitrilo de 1.3 ppm) . El valor integral correspondiente de cada producto de alquilación se 10 utiliza en el numerador para cálculo, con referencia a loe ejemploe a continuación: - eeñal ACH a 68-69 ppm representa un carbono; *^HP integral de ACH + PCD = fracción mol ACH -GLY señal a 69-70 ppm representa un carbono,- 15 integral de GLY - PCD = fracción mol GLY carbono EPX a 51-52 ppm representa un carbono; integral de EPX - PCD = fracción mol EPX - señal AZE a 73-74 ppm repreeenta dos carbonos, de esta manera un factor de división de dos se requiere; O integral de AZE/2 - PCD = fracción mol AZE Los siguientes parámetros espectrales son condiciones experimentales estándar para análisis RMN 13C de resinas Kymene o agentes de cedencia gradual en el aparato Bruker AMX400. 25 Temperatura 25°C ,.1X Frecuencia de Resona-jacia 100 MHz # de Puntos de Datos 64K Tiempo de Reeidencia 20 micro- egundoe Tiempo de Adquisición 1.3 segundos Ancho de Barrido 25000 Hz Número de Recorridos 1 K Rftardo de Relajamiento 3 segundos 9- Ángulo de Punta de Pulso 70 grados Programa de Pulso zgdc 10 Tamaño Espectral Procesado 64K Función de Apodización exponencial *? Ensanchamiento de Línea 3 Hz Aún más, de acuerdo con la presente invención, para agentes de cedencia gradual derivadoe de prepolímeros 15 que contienen funcionalidad amina terciaria, el agente de cedencia gradual de preferencia tendrá una aminohalohidrina cuaternaria, por ejemplo aminoclorohidrina, contenido inferior a aproximadamente 30% en mol, mientrae que agentee de resistencia en húmedo de acuerdo con la presente 20 invención, de preferencia tienen una aminohalohidrina cuaternaria, por ejemplo aminoclorohidrina, contenido mayor a 30% en mol. Aún más, sin desear estar ligados por teoría, se considera que los compuestos de amina secundaria tales como dietilentriamina, forman grupos azetidinio, 25 mientras que los compuestos de tipo amina terciaria tales -.como metilbis (3 -aminopropil) amina forman grupos aminoclorohidrina cuaternaria. Ejemplos de compuestos de tipo amina terciaria incluyen pero no están limitados, al producto de reacción de ácido adípico y una 5 metilbis (3 -ammopropilamina) , que resulta en un prepolímero de amina terciaria. Este prepolímero se utiliza para hacer una resina basada en amina terciaria que contiene grupos aminohalohidrina cuaternarios . Poliaminas preferidae para esta invención se 10 producen al reaccionar un ácido dicarboxílico o su derivado, con metil bis (3 -aminopropil) amina o con una polialquilenpoliamina que contiene de dos a cuatro grupos A '- alquileno que tienen dos a cuatro átomos de carbono, dos grupos de amina primaria, y uno a tres grupos de amina 15 secundaria. Derivados de ácido dicarboxílico adecuados para preparar las poliaminoamidae incluyen esteres, anhídridos y haluroe de ácido. Procedimientoe para preparar poliaminoamidae a partir de polialquilenpoliaminas, ee deecribe en la patente 20 de loe E.U.A. No. 2,926,154, otorgada a Keim, que ee incorpora aquí por referencia completamente. Procedimientoe que utilizan metil bie (3 -aminopropil) amina para preparación de poliaminoamidae ee deecriben en la patente de los E.U.A. No. 5,338,807 otorgada a Espy y colaboradores y la patente de los E.U.A.. Ño. 5,994,449, que se incorpora por referencia aquí completamente. Abundando sobre lo anterior, resinas poliaminopoliamida-epiclorohidrina comprenden el producto 6 de reacción polimérico soluble en agua de epiclorohidrina y poliamida derivado de polialquilen políamina y ácido "* carboxílico dibásico alifático saturado que contiene de O aproximadamente 2 a aproximadamente 10 átomos de carbono. Se ha encontrado que resinae de eete tipo imparten 10 resistencia en húmedo a papel, ya sea elaboradae bajo condiciones acídicas, alcalinas o neutras. Aún máe, estas resinas son eubstantivas para fibras celulósicas de manera .-•d^L tal que pueden aplicarse económicamente a las mismas mientras que las fibras están en suspeneiones acuosae 1,15 diluidae de la coneistencia empleada en fábricas de papel. En la preparación de resinas catiónicas contempladae para uso aquí, el ácido carboxílico dibáeico primero se reacciona con la polialquilen poliamina, bajo condiciones para producir una poliamida soluble en agua que -^0 contiene los grupos recurrentes -NH (CnH2pNH) x-CORCO- en donde n y x son cada uno 2, o máe y R ee el radical hidrocarburo divalente del ácido carboxílico dibásico. Esta poliamida soluble en agua luego ee reacciona con una 25 epihaiohidrina para formar lae reeinae catiónicae eolublee en agua-. Los ácidos dicarboxílicos contei ladoS para utilizar en preparar lae resinas de la invención son os ácidos sarboxílicos dibáeicoe alifáticos saturados que contienen de 2 a 10 átomoe de carbono tales como ácido 5 oxálico, ácido malónico, ácido succínico, ácido glutáríco, ácido adípico, ácido azelaico y semejantes. Los ácidoe dibáeicoe saturados tienen de 4 a 8 átomos de tíarbono en la molécula, tales como ácidos adípico y glutárico ee „ prefieren. Mezclae de dos o más de los ácidos carboxílicos "1*0 dibásicoe saturados también pueden emplearse. Derivados de ácidos carboxílicoe dibásicos tales como esteres, í semi-éeteres y anhídridos también pueden emplearse en la •«-"«Hjí''-' presente invención, tales como dimetil adipato, dietil adipato, dimetil glutarato, dietil glutarato, dimetil 15 succinato y dietil succinato. Mezclas de dos o más de los derivados de ácidos carboxílicos dibásicos también pueden emplearse, así como mezclas de uno o más derivados de ácidos carboxílicoe dibáeicos con ácidos carboxíliecus t dibásicoe. 20 Una variedad de polialquilen poliaminae #' incluyendo polietilen poliaminae, polipropilen poliarainae, polibutilen poliaminae, polipentilen poliaminas, polihexilen poliaminas y así en adelante y sus mezcl ^/ , pueden emplearse de las cualee lae polietilen poliamirias 25 representan una clase económicamente preferida. Más específicamente, las polialquilen poliaminas eontemplac?&e para utilizarse pueden representaree como poliaminas ßn donde loe átomoe de nitrógeno eetán enlazadoe en conjuntó por grupos de la fórmula -CnH2n- en donde n es un entero 5 pequeño mayor que la unidad y el número de estoe grupoe en la molécula están en el rango de dos hasta aproximadamente ocho. Los átomos de nitrógeno pueden conectarse con átomos de carbono adyacentes en el grupo -CnH2n- o átomos de carbono más alejadoe, pero no al mismo átomo de carbono. 10 Esta invención contempla no solo el uso de poliaminae talee como dietilentriamina, trietilentetramina, tetraetilenpentamina y dipropilentriamina, que pueden obternerse en forma razonablemente pura, sino también a mezclas y diversos materiales de poliamina crudos. Por 15 ejemplo, la mezcla de polietilen poliaminas que se obtiene por la reacción de amoníaco y dicloruro de etileno,. refinadas solo en la proporción de remoción de cloruros, agua, amoníaco en exceso y etilendiamina es un material de , partida satisfactorio. El término "polialquilen poliamina" ' Í 20 * empleado en las reivindicaciones por lo tanto, se refiere a #* " e incluye cualquiera de las poliaquilen poliaminas referidas previamente o a una mezcla de estas polialquilen poliaminas y sus derivados. Poliaminas adicionales que son adecuadas para la presente invención incluyen: 25 bie-hexametilentriamina (BHMT) , metilbieaminopropilamina ' -' (MBAÍA) , otras polialquilen poliamínas (por ejemplo espermina, espermidina) . De preferencia, las poliamirtas eon dietilentriamina, trietilen etramina, tetraetilenpentamina y dipropilentriamina. 5 Es conveniente en algunos casoe el incrementar el . espaciamiento de grupoe amino eecundarios en la molécula poliamida a fin de cambiar la reactividad del complejo * poliamida-epiclorohidrina. Esto puede lograree al substituir una diamina tal como etilendiamina, 4 0 nJ propilendiamina , hexametilendiamina y semejantee, por una porción de la polialquilen poliamina. Para este propósito, hasta aproximadamente 80% de la polialquilen poliamina puede reemplazarse por una cantidad molecularmente equivalente de la diamina. Usualmente, eervirá al 5 propóeito un reemplazo de aproximadamente 50% o menos . Ácidos aminocarboxílicoe apropiados que contienen cuando menos tree átomoe de carbono o eus lactamae también son adecuadoe para utilizar en incrementar el espaciamiento en la presente invención. Por ejemplo ácido 0 6-aminohexanoico y caprolactama. Resinas po1 iaminourilen-epihaiohidrina, particularmente resinas poliaminourilen-epiclorohidrina, también se contemplan en la presente invención, tal como se discute en las patentes de los E.U.A. Nos. 4,487,884 y 5 3,311,594, que ee incorporan por referencia totalmente, -W^ -- .**. tales como las résinae tipo KymeneMR 450 (Hercules Incorporated de Willmington, Delaware) . Las resinas poliaminourileno contempladas para la preparación y uso aquí se preparan al reaccionar epiclorohidrina con poliaminourilenos que contienen grupoe amina libre. Estos poliaminourilenos son materiales solubles en agua que contienen grupos de amina terciaria y/o mezclas de grupos de amina terciaria con grupos amino primarios y/o secundarios y/o grupos amonio cuaternarios. Sin embargo, grupos amino terciarios deberán representar cuando menos 70% de loe grupos de nitrógeno básicos presentes en el poliaminourileno. Estos poliaminoureilenos pueden prepararse al reaccionar urea o tiourea con una poliamína que contiene al menos tres grupos amino, al menos uno de los cuales es un grupo amino terciario. La reacción puede, si ee deeea, llevaree a cabo en un solvente conveniente tal como xileno. El reactivo poliamina deberá de preferencia tener al menos tres grupos amino, al menos uno de los cuales es un grupo amino terciario. El reactivo poliamina también puede tener grupos amino secundarios en cantidades limitadas. Poliaminas típicas de este tipo adecuadas para utilizar como se describió previamente son metil bie(3- aminopropil) amina (MBAPA), metil bie (2-aminoetil) amina, N- (2-aminoetil) piperazina, 4, 7-dimetiltrietilentetramina y así en adelante, que pueden obtenerse en forma razonablemente pura, pero también mezclas de diversos materiales poliamina crudos. Para preparar el prepolímero a partir de diácido 5- y pol alquilenpoliamina, se calienta de preferencia una . mezcla de los reactivoe a una temperatura de »? aproximadamente 125-200°C de preferencia por 9F aproximadamente 0.5 a 4 horas, a presión atmosférica. Cuando una presión reducida se emplea, pueden utilizaree 10 menoree temperaturas tales como 75°C a 150°C. Esta reacción de policondensación produce agua como un sub-producto, que se retira por destilación. Al final de Sl - eeta reacción, el producto reeultante se disuelve en agua a una concentración de aproximadamente 50% en peso del 15 total de eólidos de polímero. Cuando se utiliza diéster en lugar de diácido, puede realizaree la prepolime ización a menor temperatura de aproximadamente 100-175°C a preeión atmosférica. En este caso, el sub-producto será un alcohol, el tipo de 20 alcohol depende de la identidad del diéeter. Por ejemplo, cuando ee emplea un dimetil éeter, el sub-producto alcohol eerá metanol, mientras que el etanol será el sub-producto obtenido de un dietil éster. Cuando se emplea una presión reducida, pueden emplearse temperaturas menores tales como 25 75°C a 150°C. hasta ap ontadamente 100°C y de 'preferencia entre aproyimttdaméíiíe 35°C a aproximadamnte 70°C hasta que la viscoeidad de una solución a 20% de sólidos a 25°C ha alcanzado aproximadamente un valor C o superior en la eecala Gardner-Holdt. Esta reacción de preferencia se 10 lleva a cabo en solución acuosa para moderar la reacción. Aunque no es necesario, puede realizarse ajuste de pH para incrementar o disminuir la velocidad de entrelazamiento. Cuando se alcanza la viscosidad deseada, puede agregarse agua suficiente para ajustar el contenido de 15 sólidoe de la solución de resina a la cantidad deseada, es decir aproximadamente 15% en peso máe o menos, el producto puede enfriarse a aproximadamente 25°C y luego estabilizarse para permitir almacenamiento al mejorar la eetabilidad de gelación agregando suficiente ácido para 20 reducir el pH a menos de aproximadamente 6, de preferencia menos de aproximadamente 5, y más preferible menos de aproximadamente 4. Cualquier ácido inorgánico u orgánico conveniente tal como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido metansulfónico, ácido nítrico, ácido fórmico, ácido 25 fosfórico y ácido acético, puede utilizarse para estabilizar el producto. Ácidos que no contienen halógeno tales cómo ácido sulfúrico, se prefieren. Tramas fibrosae se someten a cedencia gradual utilizando las composiciones de esta invención al: (1) 5 aplicar la composición anteriormente descrita a una superficie de secado para la trama o a la trama; (2) prenear la trama fibroea contra la euperficie de eecado para efectuar la adhesión de la trama a la superficie de secado; y (3) deeprender la trama de las superficies de 10 secado, con un dispositivo de cedencia gradual tal como una hoja doctor para la trama fibrosa. De preferencia, en la etapa (2) , la composición se aplica a la euperficie de f> secado para la trama. La trama fibrosa preferida es una trama celulósica. 15 De preferencia, el adhesivo de cedencia gradual se aplica en solución acuosa que contiene aproximadamente 0.1 a aproximadamente 10 por ciento en peso de la compoeición de reeina. Máe preferiblemente, la compoeición de reeina está en solución a nivel de aproximadamente 0.25 -0 hasta aproximadamente 5 por ciento en peso y más preferible de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 2 por ciento en peso. Para agentee de cedencia gradual en una base de peso seco, ee emplea una cantidad mínima de aproximadamente 0.001 por ciento en peeo con baee en el peeo seco de la - 25 pulpa o papel . Una cantidad mínima más preferible es &*s* 61 aproximadamente 0.0(lt|ldf§r ciento en pso y la cantidad mínima más preferible O.Ol por ciento ewTpe-so. La cantidad ~máxima preferible de composición de resina es " proximadamente 2 por ciento en peso. Uñ máximo mas 5 preferible es aproximadamente 1 por ciento en peso y él máximo más preferible aproximadamente de 0.5 por ciento <<§n peso. La superficie de secado más comúnmente empleada en * ~ operaciones comerciales es un secador Yankee, y la solución acuosa de adhesivo más a menudo ee aplicará al cilindro o 10 tambor de cedencia gradual por rociado. En forma alterna, sin embargo puede agregaree por aplicación a la trama fibroea, de preferencia por rociado. En el caso de trama de celulosa, es decir papel, el adhesivo de cedencia gradual puede agregarse en el extremo húmedo de la máquina 15 de papel por aplicación a la trama húmeda. En algunas situacionee puede eer poeible el agregar el adhesivo de cedencia gradual a la pulpa antes de formación de la hoja. Otros ingredientes, en particular agentes que modifican la adhesión de la trama a la superficie de O secado, pueden utilizarse en conjunto con los adhesivos de ^W^ cedencia gradual de esta invención. Estos agentes, también conocidos como agentes de desprendimiento o plastificantes, incluyen polioles solubles en agua, glícoles, polietilen glicoles, azúcares, 25 „ oligasacáridoe y aceites de hidrocarburos. ~ i , .

El proceso "para producir pjfel utilizando las composiciones de resina de esta inVeapsaón comprende: (a) proporciona -s-una suspensión de pulpa acuosa; (b) agrega 'a la suspeneión de pulpa acuoea la resina y (c) laminar y secar la euepeneión de pulpa acuosa producida en (b) para obtener papel . La suspensión de pulpa acuosa de la etapa (a) del proceso se obtiene por medios bien conocidos en la especialidad, tales como procesos de pulpado conocidos mecánicos, químicos y semiquímicoe, etc. Normalmente, después de la etapa de molienda mecánica y/o pulpado químico, la pulpa se lava para retirar productos químicos de pulpado residuales y componentes de madera solubilizados. Ya sea fibras de pulpa blanqueadas o sin blanquear, pueden utilizarse en el proceso de eeta invención. También eon adecuadas para utilizar fibras de pulpa recicladas. En la etapa (b) de reeina de esta invención de preferencia se agrega a fango de pulpa en una cantidad mínima de aproximadamente 0.1 por ciento en peso, con base en el peso secado de la pulpa. Una cantidad mínima más preferible es aproximadamente 0.2 por ciento en peso. La cantidad máxima preferible de composición de resina es aproximadamente 5 por ciento en peso. Un máximo más preferible es aproximadamente 3 por ciento en peso y el máximo más preferible aproximadamente 1.5 por ciento en peso. La composición de resina generalmente ie* agrega en la forma de una solución acuosa. Además de la resina, otros materiales normalmente empleados en papel pueden 5 agregarse por igual. Estoe incluyen, por ejemplo agentee de apresto, pigmentos, alumbre, agentes abrillantadores, colorantes y agentes de resistencia en seco, agregados en ^^P^ cantidadee bien conocidae en la eepecialidad. La etapa (c) ee lleva a cabo de acuerdo con los 10 procedimientos bien conocidos por aquéllos con deetreza en la técnica de producción de papel . Como se discutió anteriormente, resinas que * tienen al menos nivelee reducídoe de formación de CPD pueden eer reeinas que ee producen en un proceso de síntesis de resina sin mayor tratamiento. Aún más las resinas pueden tratarse por diversoe procesos antes de reducción y/o remoción de las especies formadoras de CPD. Aún máe, después de tratamiento para reducir y/o retirar las especies formadoras de CPD, la resina puede tratarse 20 por diversos procesos. Aún máe, la resina puede tratarse por diversos procesos antes de reducción y/o remoción de las especiee formadoras de CPD, y la resina también puede tratarse por diversos procesos después de tratamiento para reducir y/o retirar las especies formadoras de CPD. Por 25 ejemplo, la resina puede tratarse por diversos procesos, fe productos de epihalohidrífáit, de bajo peso molecular, pdr ejemplo epid orohidriíia y eub-producto^ de epiclorohidrina, por ejemplo CPD en l§jÉtf3µc?ón de reSii?. Sin limitar los tratamientos1 o resinas que pueden emplearse, se nota que resinas tales como KymeneMR SLX2, Kymene1^ 617 y KymeneMR 557LX, (disponibles de Hercules Incorporated Willmíngton, Delaware) , y CrepetrolMR 80E o CrepetrolMR A3025, CrepetrolMR A6115, CrepetrolMR A8225 y CrepetrolMR 870, SPC 003, y 10 RezosolMR 8289 como agentes de cedencia gradual, puede tratarse antee y/o subsecuente a reducción o remoción de especies formadoras de CPD con una columna de intercambio de iones base, tal como se describe en las patentes de los E.U.A. No. 5,516,885 y WO 92/22601, con adsorción dé 15 carbón, tal como se describe en WO 93/21384; separación de membrana, por ejemplo ultrafiltración; extracción, por ejemplo etil acetato tal como se describe en el Regietro de Invención Estatutopo de los E.U.A. H1613; o biodeshalogenación, tal como se describe en las patentes de 20 los E.U.A. No. 5,972,691, WO 96/40967 y las patentes de los FF" E.U.A. Nos. 5,470,742, 5,843,763, y 5,871,616, así como en la solicitud de patente de loe E.U.A. No. 09/629,629. La descripción de cada uno de estos documentos se incorporan por referencia completamente. Aún más, cualquier 25 combinación de reducción o remoción de eepecies formadoras de CPD como se describe en las solicitudes de patente de los E.U.A. anteriormente anotadas Nos. 09/592,681, 09/363,224 y 09/330,200, cada una de las cuáles aquí se incorpora por referencia completamente, pueden utilizarse con el tratamiento enzimático para reducción y/o remoción de especies formadoras de CPD. Aún más, de acuerdo con la preeente invención, ee nota adicionalmente que el tratamiento enzimático para retirar o reducir especies formadoras de CPD puede realizaree en una forma de superposición con biodeshalogenación o puede realizarse simultáneamente con la biodeshalogenación. De esta manera, la presente invención también se relaciona a un proceso combinado en donde tanto se inicia la liberación enzimática de 3-CPD de lae resinas, como ocurre la reducción simultánea de compueetos órgano halógenos libres de nitrógeno. Además se nota que, adicionalmente al tratamiento enzimático seguido por el tratamiento de biodeshalogenación, los dos tratamientos pueden realizarse simultáneamente (también conocidos como tratamiento combinado) . "Simultáneamente" significa que el segundo tratamiento (ya eea biodeehalogenación o enzimático) puede iniciaree antes de que se complete el primer tratamiento (ya sea biodeshalogenación o enzimático) . Para la presente invención, la viscosidad deseada se obtiene al equilibrar ÍJilitlitri feítlili itiMii ^i? <4 66 las condiciones de tiempo, temperatura, pS, concentración 'enzimátiCa, viscosidad de partida y contenido de solidptí, , Por ejemplo, el tratamiento combinado puede iniciarse a JDH 6.8-7.8 por las primeras 4-24 horas y luego reducirse a pH t 7 de 5.5-7.0 o el pH puede dejarse que Se desplace ''descendiendo a 6.5-7.2, por lae últimas 8-4$ horas del, tratamiento combinado. Condiciones de tratamiento combinado preferidas incluyen, pero no eetán limitados a pH 6.5 a 8.0, máe preferible pH 6.8 a 7.6; rango "de * temperatura preferido de 20°C a 35°C, más preferible 25°C «r a 33 °C. Concentraciones de enzima para condiciones de tratamiento combinado dependerán de su actividad. Por ejemplo, en el caso de ALCALASE, la enzima ••puede éetar preeente en una cantidad de aproximadamente 1 g de ALCALASE 2.5L tipo DX (como se recibe) a 1600 g de resina poliamina- epiclorhidrina (base seca) a 1 g de ALCALASE 2.5L tipo DX (como ee recibe) a 1.5 g de resina poliamina-epiclorhidrina (base seca) , también, la enzima puede estar presente en una cantidad de aproximadamente 1 g de ALCALASE 2.5L tipo DX (como se recibe) a 160 g de resina poliamina-epiclorhidrina (base seca) a 1 g de ALCALASE 2.5L tipo DX (como se recibe) a 4 g de reeina poliamina-epiclorhidrina (base seca) . Se prefiere que el tratamiento combinado ee complete en 48 horae o menos . Se prefiere más que el tratamiento combinado se complete en 24 horas o menos . Para auxiliares y. 6? de cedencia gradual, el nivel de sólidos cuando se utilizan las condiciones de tratamiento combinado puede ser menor que 15 por ciento en peeo, típicamente 4-14.5 por ciento en peeo y de preferencia aproximadamente 8% en peso a 5 aproximadamente 14.5% en peso. El tratamiento combinado para auxiliares de cedencia gradual también puede realizarse a nivel de sólidos de 15% en peso y superior, F> los niveles de sólidos totales preferidos son 15 a 40 por ciento en peso, de preferencia 18-35 por ciento en peso y 10 aún máe preferible de 18-28 por ciento en peeo. Un rango adicional que puede emplearee en la preeente invención ee 15 a 30 por ciento en peso. El nivel de sólidos total preferido cuando se utilizan las condiciones de tratamiento combinado para las 15 resinas de resistencia en húmedo con 15% en peso o superior ee 15-40 por ciento en peso, de preferencia 16-35 por ciento en peso, y aún máe preferible 18-28 por ciento en peso. Cuando se realiza el tratamiento combinado de resinas de resistencia en húmedo con menos de 15 por ciento 20 en peso, los rangos preferidos son desde aproximadamente F 4% en peso a aproximadamente 14.5% en peso y de aproximadamente 8% en peso a aproximadamente 14.5% en peso. Aún más, la presente invención permite biodeehalogenación con alto contenido total de sólidos, así 25 como tratamiento enzimático combinado para retirar o "a* * i -J 68 reducir especies fotmadoras de CPD y ^bíóifdshalogenación a alto contenido total de sólidos, con 'la4 posibilidad de reducir tiempo de ciclo de proceso, y al mismo tíempo crear un uso de volumen de reactor optimizado cuando se corre el 5 proceso en un modo por lotes o alimentación por lotes (repetido) . La biodeshalogenación puede lograrse en diversae F- formas, tal como se describe en cualquiera de las patentes de los E.U.A. Nos. 5,470,742, 5,843,763 y 5,871,616 y en la $@ solicitud de patente de los E.U.A. No. 09/629,629, o previo tratamiento base y biodeshalogenación como se deecribe en la patente de los E.U.A. No. 5,972,691 y WO 96/40967, con 9" • o sin un tratamiento base inorgánico previo, en donde la composición de resina puede reaccionarse con un 15 microorganismo o enzima en cantidades adecuadas paía procesar hidrolizados de epihaiohidrina a muy bajos niveles. Microorganiemos utilizan enzimas dehalogenasa para liberar ion haluro de la epihaiohidrina y haloalcohol, y luego utilizar más enzimae para descomponer los productos j¡g? de reacción finalmente en dióxido de carbono y agua. Mientras que no se desea estar ligados por teoría, se nota que cuando lae especies formadoras de CPD se retiran o reducen, CPD se libera del componente oligomérico y/o polimérico de la resina, y por lo tanto CPD 25 es un componente de la solución de resina. Con esto en mente, la resina de preferí! iíée, somete a tratamiento para retirar o reducir las *j§ipécies foSrmadorás de CPD, y luego la resina eí , biodeshalogena . De esta manera, epihalohidrína e hidao feado de epihalohifrína (referidoá como también como sut»-productos de hidrolíáis) , incluyen ún CPD liberado; pueden retirarse, tal como por la bíodeshtklogeuación. Sin embargo, la resina puede tratarse v inicialmente, tal como por biodeshalogenación y luego someterse a tratamiento para retirar, inhibir y/o reducir 0 las especies formadoras de CPD. En particular, cualquier 1 CPD que se libere por el tratamiento deberá ser fácilmente soluble, y por lo tanto ser cuando menos parcialmente lavado por arrastre de la resina. Por ejemplo, cuando la resina con CPD liberado se incluye en un producto de papel, 15 el CPD puede al menos lavarse por arrastre parcialmente del producto de papel y debido al tratamiento, la resina en el producto de papel no producirá CPD o no producirá cantidades indeseables de CPD. Aún más, como se discutió anteriormente, el tratamiento enzimático para retirar o 20 reducir especies formadoras de CPD puede realizarse en una ,* forma superpuesta/simultánea con la biadeshalógenación. El biocatalizador puede proporcionarse en la forma ya sea de células vivas o como un extracto libre de células inmovilizado, no refinado o dehalogenasa refinada. 25 El término "biodeshalogenación" se refiere a las libre de nitrógeno utilizando un í -talizador. Como el biocatalizador capaz de puede utilizarse cualquier microorganismo que sea capaz de deshalogenar compuestos de organohalógeno libres de nitrógeno, de preferencia CPD y DCP, mientras que deja polímeroe catiónicos que contienen FF nitrógeno substancialmente intactos durante la déshalogenación de loe compuestos organohalógeno libres de 10 nitrógeno. De preferencia, los microorganismoe utilizados eon Agrobacteri um radiobacter (HK7) o Anthrobacter histidinolovorans (HKl) y de preferencia ee utiliza una mezcla de dos componentes de AgrobStcterium radiobacter {HKl) o Anfchrojac er histidinolovorans (HKi; Cuando solo 15 está presente CPD, se prefiere utilizar un solo microorganismo, HKl. Cuando solo está presente DCP, se prefiere utilizar un solo microorganismo HKl. Aunque la identidad precisa de las enzimas que hacen al método operable no se ha realizado, se considera que las enzimas • 2 que efectúan el método pertenecen a la clase de enzimas denominadas "dehalogenasa tipo haluro de hidrógeno liasa" . En particular, una cantidad de cepas bacteri na ee deecriben en las patentes de los E.U.A. Nos. 5,470,742, 5,843,763, 5,871,616 y 5,972,691 y en la solicitud de 25 patente de los E.U.A. No. 09/629,629, la descripciones de las cuales se incorporan por referencia aquí coíapletamentf. Estas cepas bacterianas incluyen pjicroo^ganiemo qtie contienen enßimas deshalogenantee capaces dé deshaloge?ár haloalcoholes y epihalohidrinas depositadas b jo los Nos. de Acceeo y DepóeitO NCIMB 40271, 40272, 40273, 40274, 40313 y 40383. NCIMB representa "National Collection ®f /industrial and Marine Bacteria" (Colección Nacional de - Bacterias Industriales y Marinas) . NCIMB, ubicado en 23 St. Machar Drive, Aberdeen AB2 IRY, Escocia, Reino Unido, 10 es una organización en el Reino Unido, responeable por documentar y retener mueetrae de bacteriae presentadas para propósitos de solicitudes de patente. En asuntos de «s,. a patentes, NCIMB suministrará a las partes interesadas que lo soliciten, muestrae auténticas de bacterias reclamadas 15 en literatura de patente. NCIMB 40271 (especíee Anthrobacter) , 40272 (Agrobacteri um radio?aate?r HK7) , 40273 (Burkholders cepacia anteriormente 'donocida como Pseudomonas cepacia) y 40274 (An throbacter histidinolovorans HKl) ee depositaron en Abril 2, 1990.

NCLMB 40383 ( especie Rhodococcus) fue depositada en Marzo 11, 1991 y NCIMB 40313 (Burkholdernan cepacia anteriormente conocida como Pseudomonas cepacia) fue depositada en Agoeto 30, 1990. De eeta manera, loe microorganismoe ee han preeentado en un depóeito bajo las dispoeiciones de Tratado de Budapest, y las cepas en forma irrevocable y s^n * restricción o condición, i-^e t fféreionarán el público ante la expedición de una patenl Aún más, se nota que las db teepas bacterianas, que se aislaron de etras del terreno y el coneorcío 5 díeeñado HKC, de preferencia ee emplean, ee decir Anfchrobacter histi($$,holovorans (HKC) que ee depoeitara en el Centraalbureau voor Schimmelcultures en Ooeteretraat 1, P.O. Box 273, 3740 AG BAARN, Holanda, como Número de Acceso CBS 108919 en Julio 10, 2000 y Agrobacteriiun radiobacter 10 (HK7) que se depositara en el Centraalbureau voor Schimmelcultures en Oosteretraat 1, P.O. Box 273, 3740 AG BAARN, Holanda, como Número de Acceso CBS 108920 en Julio 10, 2000. En materia de patentee, Centraalbureau voor Schimmelcultures, que es un depósito en cumplimiento con ©1 15 Tratado de Budapest, suministrará a las partes interesadas que lo soliciten, muestras auténticas de bacteriae reclamadas en literatura de patentes. De esta manera, los microorganismos se han preeentado en un depósito bajo las disposiciones del Tratado de Budapest, y las cepas serán en forma irrevocable y sin restricción o condición distribuidae al público ante la expedición de la patente. Se nota que NCIMB 40272 y CBS 108920 se consideran microorganiemos idénticos, y que NCIMB 40274 y CBS 108919 se consideran microorganiemo idénticoe. 25 Cada una de eetoe microorganismos es capaz de degradar tanto 1,3-DCP como 3-CPC. Aún más, agrobacterium radiobacter (HK7 ) es capaz dé flfl &ucir niveles de 1 , 3 -DCP más rápido que Aptrho ucter histidunolovotans HKl, mientras que Antrh6 ^tér histidinolovorans <HK1) mostró una preferencia por degradación de 3-CPD. De esta manera, 5 como se deecribe en la eolicitud de patente de loe E.U.A, * No. 09/629,629, ee considera que el mejor desempeño <e 1 biodeshalogenación se obtiene cuando ambas bacterias estaban preeentee. Para aeegurar que ambas bacterias están presentes en el proceso de biodeshalogenación, se prefiere 10 el iniciar el proceso con agrobacterium radíobacter (HK7) y eubsecuentemente agregar Arthrobacter histidinolovorans »> F (HKl) . Esta sería especialmente la situación para iniciar un proceso de biodeshalogenación continua. Los microorganismos que contienen enzimas 15 " convenientes se utilizan para deshalogenar los hidrolizados de epihaiohidrina contenidos en la composición de resina con o sin un tratamiento base inorgánico inicial. Las1 enzimas y microorganismos se mantienen en una concentración conveniente para metabolizar en forma eubstancial los •** 2? hidrolizados en ion cloruro y finalmente dióxido de carbono y agua. De esta manera, la concentración de hidrolizados en la composición de resina de la presente invención después de tratamiento de biodeshalogenación, de preferencia es inferior a aproximadamente 100 ppm (partes 2f por millón en peso respecto al peso total de la solución - -X acuosa que de bioreacción) , 50 ppm (partes por millón en peso respecto" al peso* total de la solución acuosa que resinas ditápuée de la etapa de bioreacción) , máe preferible inferior a aproximadamente 10 ppm (partes por millón en peeo reepecto al peso total de la solución ácu<É^á que contiene resinas después de la etapa de bíoreacción) , más preferiblemente menos de a aproximadamente 5 ppm (partes por millón en peso respecto 10 al peso total de la solución acuosa que contiene resinas indespués de la etapa de bioreacción) , y aún más preferible menos de aproximadamente 1 ppm (partee por millón en peso reepecto al peeo total de la eolución acuosa que contiene resina después de la etapa de bioreacción) . 15 Para lograr esto, la concentración de mlcoorganismos deberá eer al menoe aproximadamente 5 x 107 cél lae/mL, de preferencia cuando menos aproximadamente 108 células/mL y más preferible cuando menos aproximadamente 109 célulae/mL. Para mantener óptimo contenido activo de 2*0 célulae en el reactor, la reacción ee lleva a cabo mejor» a F ^ aproximadamente 30°C +/-5°C en la presencia de oxígeno (por ejemplo de aproximadamente 5 a aproximadamente 100% DOT) y nutrientes en un reactor de tanque agitado. Como se emplea aquí, el término "DOT", se refiere a "tensión de oxígeno 25 disuelto" y es la cantidad de oxígeno, expresado como porcentaje, disuelto en un volumen determinado de agua respecto al agua saturada con oxígeno a las mismas temperatura y presión. En un proceso continuo, el tiempo de residencia se controla por un gasto de flujo y verifica para asegurar reacción completa. De esta manera, en estado estable la concentración de hidrolizado de epihaiohidrina -i en un reactor será de aproximadamente 1 a aproximadamente 1000 ppm, en un modo por lotes o fermentación por lotes, que de preferencia puede repetirse, reacción completa puede 10 asegurarse por monitoreo, por ejemplo por análisis GC, para lograr el nivel reducido deseado de hidrolizado de epihaiohidrina . " * El método de biodeshalogenación de acuerdo con la presente invención se lleva a cabo al contactar un 15 microorganismo o extracto que contiene enzima libre de células con la composición acuosa que contiene los contaminantes órgano halógeno indeseados. Este contacto típicamente ee logra al formar una suspensión o fango del microorganismo o extracto libre de células en la 20 composición acuosa con agitación suficiente. áf y- W Si se desea, el microorganismo o enzimas pueden retirarse de la corriente de producto por filtración, eedimentación, centrifugación u otroe medios conocidos por aquéllos con destreza en la especialidad. En forma 25 alterna, los microorganismos o enzimas pueden permanecer en 76 el prpducto final y opcionalménte desactivarse por esterilización térmica (por ejemplo por tratamiento a 14?°Cs por 20 segundos) o por la adición de una concentración conveniente de un agente biocida adecuado . Agentes biocidas adecuados pueden seleccionare fácilmente por aquéllos con destreza ordinaria en la especialidad. De esta manera, la desactivación del radbroorganiemo pued realizaree por reducción del pH o de la mezcla acuoea a 2.8, luego agregar un agente biocida de propiedad (por 10 ejemplo agente biocida ProxellMR BD, que comprende 1,2- benzísotiazolin-3-ona) en cantidad suficiente, normalmente 0.02% a 0.1% con base en el peso de la compoeición acuosa. -^ ), -%. El agente biocida puede agregarse junto con sorbato de potasio. 15 La remoción del microorganismo puede realizarse por una o más de las etapas de filtración, centrifugación, sedimentación o cualesquiera otras técnicas conocidas pata retirar microbios de una mezcla. Los microorganismos mineralizan los compuestos de órgano halógeno libres de nitrógeno, produciendo C02, agua y biomasa, sin glicejrol que queda en la resina. Cuando el biocataliz*.dor es uila deíialogenasa inmovilizada, el producto de la reacción es glicidol, que puede hidrolizarse en glicerol con una hidrolasa inmovilizada. 3KW **» o con la remoóión de loe microbio dé la mezcla, ee que métodoe intensos de separaciéá alee cppío microfiltración no eolo retiran microbioe 5 con el reeultado de que las propiedades dé reáietencia en húmedo Se reducen, lo que es indeseable. ?Or lo tanto, es preferible el dejar el microorganismo de-sactivado en la # mezcla para evitar el problema de reducir las propiedades de resistencia en húmedo. 10 Se ha determinado inesperadamente que las composiciones de resina que tienen altas concentraciones de sólidos, es decir mayores a 15% en peso, más preferible mayor que 20% en peso, en eepecial mayores de 25% en peso, pueden biodeshalogenarse utilizando microorganismos y/o 15 enzimas, cuando la resina comprende resinas basadas en amina terciaria, tales como KymeneMR 450, CrepetrolMR A3025 o CrepetrolMR 80E. En el pasado, resinas basadas en amina secundaria tales como KymeneMR 557H, KymeneMR 557LX, KymeneMR SLX, KymeneMR Plus, no se biodeshalogenaban eficientemente 20 concentraciones de sólidos de 15 o mayor % en peso. En la presente invención, resinas basadae en amina eecundaria pueden biodeehalogenaree eficientemente a 15 o mayor % en peeo. Además, se ha encontrado que resinas Daniel pueden biodeshalogenarse a 15% o mayor % en peso.

Con respecto a resinas Daniel, s*e nota que resinae., solubles en agua, catiónicas, derivadas de la reacción de epihalohidrinas, tales como epiclorohidrina 'y polialquilen poliaminas, talee como etilendíamina (ÉDA) , 5 bís-héxametilentriamina (BHMT) y hexametilendiamina (HMDA) , se han conocido por mucho tiempo. Estae resinas de polialquilen poliamina-epihalohidrina se describen en patentes tales como la patente de loe E.U.A. No. 3,655,506 otorgada a J. M. Baggett, y colaboradoree, y otrae talee 10 como la patente de los E.U.A. No. 3,248,353 y la patente de los E.U.A. No. 2,595,935 otorgada a Daniel y colaboradores, de la cual eu deecripción genérica como "Reeinae Daniel" surge. Las descripciones de estas patentes se incorporan por referencia aquí completamente. 15 La polialquilen poliamina empleada en la presente invención de preferencia puede seleccionarse del grupo que consiste de polialquilen poliaminas de la fórmula: H2-N[CHZ- (CH2)n-NR]x-H en donde n = 1-7, x = 1-6, R = H o CH2Y, Z=H o CH3 e Y=CH2Z, 20 H, NH2 o CH3, * polialquilen poliaminas de la fórmula: H2N- [CH2- (CHZ)m- (CH2) n-NR]x-H - en donde m=l-6, n=l-6, y m-t-n =2.7, R=H o CH2Y, Z=H o CH3 e Y=CH2Z, H, NH2 o CH3 y sus mezclas. 7 9 Residas polialquilen polí&mi*? -epihaiohidrina comprenden el producto de reacción polira riCó soluble en agua de epihálohidrina y polialquilen polaamina. Al ;t producir resinas Daniel, la polialquilen poliamina se ,*> agrega a una mezcla acuosa de la epihalohidrlna de manera tal que durante la adición, la temperatura de la mezcla no excede 60°C. Menores temperaturae llevan a adicionales 9; mejorae, aunque una temperatura muy baja puede acumular reactividad latente en forma peligrosa en el sistema. Lae 10 temperaturae preferidas caen dentro del rango de aproximadamente 25°C a aproximadamente 60°C. Más preferible es un rango de aproximadamente 30°C a aproximadamente 45°C.

J* La alquilación de la poliamina ocurre rápidamente avanzando para formar aminae secundarias y terciarias 15 dependiendo de las cantidades relativas de epihaiohidrina y poliamina. Los niveles de epihaiohidrina y poliamina son tales que entre aproximadamente 50% y 100% de los sitios de nitrógeno de amina disponibles, se alquilan en aminas terciarias . Niveles preferidos están entre aproximadamente 50% y aproximadamente 80% de alquilación de los sitios de nitrógeno de amina. Epihaiohidrina e? exceso, más allá de la requerida para alquilar completamente todoe loe sitios de amina a la amina terciaria se prefiere menos debido a que esto resulta en 25 producción incrementada de sub-producto de epihaiohidrina.

Siguiendo la adición completa de la poliamina, la temperatura de la mezcla se deja qué aumente y/o la mezcla se calienta para efectuar entrelazamiento y formación de azetidinio. La velocidad de entrelazamiento es una función de la concentración, temperatura, agitación y condiciones de adición de la poliamina, todas lae cualee pueden determinarse fácilmente por aquéllos con destreza en la . especialidad. La velocidad de entrelazamiento puede aceleraree por la adición de pequeñas cargas o inyecciones de la poliamina u otras poliaminae de la preeente invención o adición de diversos álcalis en o cerca d'e la temperatura de entrelazamiento. La resina puede estabilizarse contra, mayor entrelazamiento a gelación por adición de ácido, dilución por agua o una combinación de ambos . Acidificación a pH 5.0 o menoe, en general ee adecuada. Lae poliaminae preferidae son biehexametilentriamina, hexametilendiamina y sus mezclas. Mientras que no se desea estar ligado por teoría, se nota que las resinae tales como KymeneMR con altes concentraciones de solidos, tienen dificultad y son menos fácilmente biodeshalogenadas a altas concentraciones ,de sólidos, tales como sobre 15% del total de sólidos a incremento de viscosidad y gelificación de las resinas lo que resulta en crecimiento reducido para lae bacteriae y M 81 pérdida de funclt«tl¡ dad de producto debido a entrelazamiento (= pérdida de grupos funcionales) . Al controlar las condiciones, incluyendo pñ, tiempo, temperatura, concentración de microorganismo o enzima, 5 puede lograrse biodeshalogenación para reeinae Daniel y reeinae baeadae en amina terciaria, a superior contenido de sólidoe total, puede lograrse. Condiciones preferidas para # resinas Daniel, por ejemplo KymeneMR 736 son nivel total de sólidos de 15 a 40 por ciento en peso, de preferencia 18-30 10 por ciento en peso, aún más preferible 18-22 por ciento en - peso. Condiciones preferidas para resinas de base amina terciaria son nivel total de sólidos de 15 a 40 por ciento " '->* * *en peso, de preferencia 18-35 por ciento en peso y aún más de preferencia 18-28 por ciento en peso. Rangos de pH 15 preferidoe tanto para reeinae Daniel como resinas de base amina terciaria son pH 5.0 a 8.0, más preferible rangos de pH de 5.5 a 7.5. Rangoe de temperatura preferidos para - ambas resinas Daniel y resinas de base amina terciaria son 20 a 40°C, más preferible de 25 a 35°C. Se prefiere que la 20 etapa de biodeshalogenación, partiendo para inoculación se , "4- ^m Complete en 48 horas o menos. Aún más se prefiere que la etapa de biodeshalogenación se completa en 24 hpras o menoe partiendo de la inoculación. No ee esperaba que la biodeshalogenacíón pudiera 25 lograrse a alta concentración de sólidos debido a la carencia de agua para los microorganismos, supelrior presión osmótica para superior contenido de eólídos y problemas no definidos, tales como la concentración de especiee de bajo peso molecular. Aún más, se eeperaría que el pre- 5 tratamiento para retirar superiores residualee puede eer „ neceeario, tal como por dilución o filtración. Aún más, no se esperaría que la biodeshalogenación pudiera lograrse en un periodo de tiempo razonable tal como dentro de 48 horas. Aún máe, habría expectativa de ineetabilidad en 10 almacenamiento a altas concentraciones de sólidos; sin embargo, lae composiciones de resina de acuerdo con la presente invención son establee en almacenamiento, y no eon eusceptibles a gelificación. Las ventajas de la preeente invención se obtienen para altos contenidos de sólidos ya sea que la composición de resina o no se trate para retirar o reducir las especiee formador de CPD. Aún máe, en la presente invención, pueden biodeshalogenaree resinas de alto contenido de sólidos de resistencia en húmedo. Adicionalmente, el tratamiento enzimático puede realizarse simultáneamente con el tratamiento de biodéshalogenación. Aunque resinas basadas en prepolímeros sin terminación en extremo, tales como KymeneMR E7219, pueden biodeshalogenarse o tratarle enzimáticamente durante biodeshalogenación, se prefiere que» 25 estae reeinae de reeistencia en húmedo sean resinas dé ? terminación en extremo como se describe én WO 09/O9252f y patente de los E.U.A. No. 6,222,006, que se incorporan aquí por referencia completamente. Mientrae que no ee deeea estar ligado por teoría, ee nota que el terminador de extremo, de preferencia no ee un inhibidor de ; biodeshalogenación. Por ejemplo ácido hexanoico residual de la producción de un prepolímero terminado en extremo inhibe la bisdeshalogenación microbiana, mientras que ácido acético residual no inhibe la biodeshalogenación 10 microbiana. El nivel de sólidos preferido para resinas de resietencia en húmedo es 15 a 40 por ciento en peso, de preferencia 16-35 por ciento en peeo y aún más de ß preferencia 18-28 por ciento en peeo. Un rango adicional que puede emplearse en la presente invención es 15-30 por 15 ciento en peso. A fin de describir más claramente la presente invención, se proporcionan los siguientes ejemplos no limitantes con el propósito de representación, y no habrán de consideraree como limitantes del alcance de la invención. Todas las partes y porcentajes en los ejemploe ee dan en peeo a ménoe de que ee indique de otra forma . Aún máe, ND en los Ejemplos indica "No Detectado". EJEMPLOS A menos de que de otra forma ee anote, Viecosidad 25 Brookfield se determina con un Viscómetro Programable correctos husillo y r^ se emplean paréí la viscosidad de ^á 5 muestra. A ?étios de que de otra forma se anote, todas las mediciones dfe CPD y DCP son en una base én peJo. Ejemplo 1. Síntesis de resina poliaminopoliaahida de alto contenido de sólidos Un matraz de fondo redondo de 3 L se adaptó con 10 un condeneador, un medidor de pH, un baño de circulación de v temperatura controlada, un embudo de adición y un agitador mecánico. A la marmita o matraz se agregan 775.0 g de *^ poli (ácido adípico-co-dietilentriamina) al 49.6% en peso (disponible de Hercules Incorporated) y 505.3 g de agua. 15 La solución se calentó a 25°C y luego 162.5 g de epíclorohidrína (Aldrich, 99%) se agregan durante aproximadamente 2 minutos. Se deja que la temperatura aumente a 40°C y se mantiene a esta temperatura. 2.45 horas después de la adición de epiclorohidrina, 1046.5 g de 20 agua se agregan y la mezcla de reacción se calienta. Deepuée de que la mezcla de reacción alcanzara 50°C (20 minutos), 7.54 g de ácido sulfúrico a 96% se agregan. La temperatura se eleva a 70°C y la viscosidad Gardner-Holdt a 25°C se verificó. Después de que la viecoeidad Gardner- 25 Holdt alcanzara G, la reacción se neutralizó por la adición r%.% de 187.5 g de agua q e contiene 12.90 g de ácido sulfúrico al 96%. La mezcla dé reacción se dejó que enfriara a 25°C. El pSt se ajustó a 3.5 con 3.00 gramos adicionales de ácido sulfúrico al 96%. La resina tuvo 21.08% total de eólidos 5 y una viscosidad Brookfield de 153 cps. * Ejemplo 2. Tratamiento de enzima de una resina poliaminopoliamida-epi (Ejemplo 1) Un matraz de fondo redondo de 250 mL se adaptó con un condensador, un medidor de pH, un baño de 10 circulación de temperatura controlada y agitador mecánico. Al matraz se agregan 200.0 g del Ejemplo 1. El pH ee elevó a 7.58 con 4.88 g de hidróxido de eodio acuoso al 30%. Se Ff retiró una alícuota de 5 g, el pH se redujo a aproximadamente 3 con ácido sulfúrico al 96% y analizó por 15 GC. Luego 5.18 g de ALCALASE 2.5 L tipo DX (disponible de Novozynes, que se empleó como se recibió) fue agregada. La temperatura se elevó de 21°C a 30°C en 15 minutos y la viscosidad Gardner-Holdt a 25°C se verificó. Alícuotas de cinco gramos de la mezcla de reacción se retiraron y el pH 20 se redujo a aproximadamente 3 con ácido eulfúrico a 96% a 1, 2, 4, 6 y 8 horas despuée de la adición de ALCALASE y analizó por GC. El pH se ajustó a 7.5 a 2 horas con 0.27 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y a 4 horas con 0.18 g de hidróxido de sodio acuoso al 30%. Después de 8 horas, 25 el pH se redujo a 3.4 por adición de 2.22 g de ácido sulfúrico al 96%. La resina tuvo una viscosidad Brookfifld de 95 cps (a 25°) . Ejemplo 3. Biodeshalogenación del Ejemplo 2 Un matraz de fondo redondo de 250 mL ee adaptó 5 con un condensador, un medidor de pH, un baño de circulación de temperatura controlada y un tubo de burbujeó ,1 de aire y agitador mecánico. Al matraz se agregan 100.0 g del Ejemplo 2 y 55.56 g de agua. El pH se eleva a 5.9 con 2.24 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 7.28 *g 10 de una mezcla de microorganiemoe que comprenden un inoculo de una resina poliaminopoliamida-epiclorohidrina biodeshalogenada. Esto representó un valor de partida de concentración celular desde aproximadamente 105 a aproximadamente 105 células/ml. Este valor de partida 3.5 corresponde a un nivel de tratamiento final de aproximadamente 109 células/ml conformé avanza el proceso. El inoculo se agrega, junto con 1.36 g de una solución nutriente. (La solución nutriente consiete de 8026 ppm de 1 dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm J2*G de sulfato de magneeio y 840 ppm de cloruro de calcio én agua corriente) . Loe microorganiemos empleados fueron: ArthroJbacter histidinolovarans (HKl) y Agrobacterium radiobacter (HK7) . El burbujeo de aire se inicia, la temperatura ee mantiene a 30°C y el pH se mantiene a 5.8 25 por adición periódica de hidróxido de sodio acuoso al 30%. xx Después de 48 horas, lá mezcla se enfría a temperatura ambiente y el pH se ajusta a 3.0 cbn 0.97 g de ácido sul úriéo'áí.* 6% y 2.05 g de solución biocida se agregan. [La solución biocida consiste de ProxelMR BD activo al 10% (de Zeneca Biocidas) y sorbato de potasio 1.67% en agua desionizada] . La resina tuvo un total de sólidos de 14.5% en peso y una viscosidad Brookfield de 2 cps (a 25°C) . Prueba Acida La cantidad de especies productoras de CPD de 10 ésta, se estima utilizando la siguiente prueba acida. Una porción de resina a probar se carga en una botella que contiene un agitador magnético. El pH se ajusta a 1.0 con ßc' F ácido sulfúrico al 96%. La botella se tapa y coloca en un baño de agua a 50°C y mantiene a 50°C con agitación. 15 Periódicamente, se retiraron alícuotas de la botella y sometieron para análieie por GC. El CPD producido deepués de 24 horae ee emplea para eetimar la cantidad de eepeciee productoras de CPD. Ver Tabla 1 para resultados.

Qf Je-™» Tabla 1 , 10 15 I ,2'0 Ejemplo Comparativo 4. Tratamiento con enzima de una resina poliaminopoliamida-epi. tAf .L. fe.

Tratamiento c?llíMf?-zíma: Una porción del Ejemplo 1 se diluye a 13.5% total de sólidoe. Se adapta un matraz dé fondo redondo de 1-L con un condensador, un medidor de pH, un baño de circulación de temperatura Controlada y 5 agitador mecánico. Al matraz ee agregan 900.0 g de 13.5% del Ejemplo l. El pH se eleva a 7.54 con 13.85 g de hidróxido de sodio acuoso al 30%. Se retira una alícuota de 5 g, el pH se reduce a aproximadamente 3 con ácido sulfúrico al 96% y analiza por GC. Luego 15.0 g de 10 ALCALASE 2.5 L tipo DX (disponible de Novozymes, empleado como se recibe) se agregan. La temperatura ee eleva de 22°C a 35°C en 15 minutos y la viscosidad Gardner-Holdt a 25°C se verifica. Alícuotas de 5 gramos de la mezcla de Jß reacción se retiraron y el pH se reduce a aproximadamente 15 3 con ácido eulfúrico al 96% a l, 2, 4, 6 y 8 horae después de adición de ALCALASE y analiza por GC. El pH ee ajusta a 7.5 a 2 horas con 0.80 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% a 4 horas con 0.48 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y a 6 horas con 0.78 de hidróxido de eodío acuoso al 20 30%. A 6 horas, la temperatura se aumenta a 38°C. Después * 9¡- de 8 horas, el pH se reduce a 3.5 por adición de 6.54 g de ácido sulfúrico a 96%. La resina tuvo una viscosidad Brookfield de 32 cps (a 25°C) .

Biodeshalogenación: Un matraz de fondo* redondo de 1-L se adapta con un condensador, un medidor de pH, un baño de circulación de temperatura controlada y, un tubo de burbujeo de aire y agitador mecánico. Al matraz se ag^e<J n 5 700.0 g de la resina producida anteriormente. El pfí se eleva a 9.9 con 8.21 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 77.8 g de una mezcla de microorganismos que i comprenden un inoculo de la resina poliaminopoliamida- epiclorohidrina biodeshalogenado. Esto representa un valor 10 de partida de la concentración de células desde aproximadamente 105 a aproximadamente 106 células/mL. Este valor de partida corresponde a un nivel de tratamiento t final de aproximadamente 105 células/mL conforme avanza el proceso. El inoculo se agrega, junto con 6.12 g de una 15 solución nutriente. (La solución nutriente consiste de 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de eulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua corriente) . Los microorganismos empleados fueron: AnfcroJacter histidinolovans (HKl) y 20 Agrobacterium radiobacter (HK7) . Se inició el burbujeo de . aire, la temperatura se mantuvo a 30°C y el pH se mantuvo a 5.8 por adición periódica de hidróxido de sodio acuoso al 30%. Después de 48 horas, la mezcla se enfría a temperatura ambiente y el pH se ajusta a 3.0 con 4.02 g de ^ ¿1 'ácido sulfúrico al 96% y 8.42 g de solución biocida ee agregan. fLa*ieolución biocida consiste de ProxelMR BD al 10% activo (de Zeneca Biocides) y 1.67% de sorbato de potasio en agua desionizada] . La resina tuvo un total de sólidos 5 de 14.77% en peso y una viscosidad Brookfield de 61 cps (a 25°C) . Ejemplo 5. Evaluación de Hoja de Prueba de Ejemplo 3 y Ejemplo Comparativo 4. Hoja de prueba de papel se prepararon en una 10 máquina de hojas de prueba Noble y Wood a pH 7.5 con pulpa de hoja plegada seca Kraft de madera dura blanqueada Kraft: Crown Vantage Rayonier 50:50 refinada a 500 mL de refinado estándar canadiense. Se generaron hojas que tienen .065 kg/m2 (40 libras/3000 pies cuadrados) peeo base 15 que contiene 0.5-1.0% de resina tratada (con base en sólidoe de resina sin tratar) . Hojas de prueba se prensaron en húmedo a 33% de sólidoe y secaron en un secador de tambor a 230°C por 55 segundos para 3-5% de humedad. El papel se acondicionó de acuerdo con el Método' TAPPI T-402 y probó. Resistencia a la tracción en seco se determina utilizando el Método TAPPI T-494. La resietencia a la tracción en húmedo ee determina utilizando el Método TAPPI T-456 con un tiempo de impregnado de dos horas. El CPD en productos de papel se determina por el siguiente 25 procedimiento: CPD en Procedimiento. 4e Jfe?oductos de Papel Extracción de papel en Agua Fría La muestra se corta y extrae con agua a 23 °C (+/- 2°C) por 24 horae, mezclando ocasionalmente. Después del periodo de extracción, el extracto se filtra de ser neceeario . ' Nota: Asegúr se que todo el papel se sumerge en agua. Procedimiento 1. Usando guantes protectores, corte la muestra en 10 pequeñas trozos (aproximadamente 1 cm x 1 cm) y recolecte en una bolsa de plástico. Mezcle los trozos $&. bien. t - 2 . Pese 10 gramos de la muestra, al más cercano 0.0001 g y coloca en un matraz cónico. 15 1 3. Agregue 200 mL de agua grado reactivo y tapone el matraz . 4. Coloque el matraz en un baño de agua por 24 horas a 23°C (+/-2°C) . 5. Decante la solución en un matraz volumétrico de 250 fe&; O mL . De ser necesario, filtre la preparación utilizando un embudo de filtro de vidrio fritado con matraz filtro. Enjuague los trozos dos veces con agua grado reactivo adicional y llene hasta la marca. APARATO ¡-2,1*- sí ?ffsl i. -- 3. Vacié la solución en una columna extrelut y dejé que repfse "por 15 minutos . „ 4. Deepuée del período de espera, eluya con 250 raL de solución eluyente (95% dietil éter/isooctano. 5 J (Recolecte el eluyente en un matraz volumétrico) . 5. Vacíe el eluyente en un matraz de fondo redondo de 15 mL. •Fmf 6. El solvente se retira utilizando un evaporadór rotatorio (note: el vacío no debe exceder 200 mm de 10 Hg) , hasta que aproximadamente 15 mL queden. 7. Se pipetea 1 mL de solución Estándar Interna en el ieo-octano reetante. 8. Una preforma de método con agua grado reactivo preparada de acuerdo con las etapas 2 a 7, también 15 debe correrse para verificar interferencia. DE&I ATIZACION 1. Utilizando una jeringa o micropipeta, se agregan 200 µL de HFBI al matraz . Se tapona el matraz y se agita a turbulencia la solución para mezclar bien. 0 2. Se deje que repoee el matraz por 5 minutoe a temperatura ambiente . 3. Traneferencia cuantitiva de la solución a un cilindro de mezclado de 25 mL y se llena la marca por isooctano. 95 4. Se agregan aproximadamente 1.5 mL dé agua grado reactivo al volumétrico, taponan y agitan para mezclar bien. Un precipitado se habrá formado pero desaparecerá cuando se mezcla bien con el agua. 5 5. Despuée de separación de fase, se retira aproximadamente 20 mL de la fase orgánica y se pone en una ampolleta de vidrio de 30 mL, que contiene 2 mL de ^¡ agua grado reactivo. Se agita vigorosamente por 1 minuto . *10 6. Deepuée de eeparación de fases. Se retira la capa de agua y descarta. La fase orgánica se analizará por cromatografía de gases utilizando un detector de .iifßp Captura /¿-Electron (ECD) . REACTIVOS 15 1. Di-etil éter, disponible de FLUKA, P.O. Box 355, Milwaukke, Wl, Cat. No. 31690 ** deben utilizar calidad a.p.; el éter no puede ser ni seco ni estabilizado con etanol. 1. Agua disponible de Burdick & Jackson, cat. #365-4 20 2. Cloruro de eodio 3. 1,3 -DCP; disponible de TCl Americas, Cat. No. D0402. 4. 3-CPD; disponible de Aldrich, Cat. No. 10227-1. 5. Acetonitrilo, Nanogrado; disponible Fisher, Cat. No. 2442. 25 6. Iso-octano, EM Science, Cat. No. TX1389. 7. Eluyente: 95 mL éter/5 mL ieo-octano. 8. Heptafluorobutirilimidazol (HFBI) , dieponible de Pierce, Cat. No. 4-211. 9. 3 -Metoxi-1, 2 -propandiol (norma interna). 5 10. Columna de extracción de fase sólida, Supelco, Supelco, Park, Bellefonte, PA. 16823, 0048, preparada de acuerdo con la Sección XXX. Cat. No. 57022. 11. Varian Hydromatríx; dieponible de Varian, Inc., Cat. No. 00198003. 10 APARATO 1. Cromatógrafo de Gases, Hewlett Parkard Modelo 5890 o equivalente capaz de programación de temperatura en F columna lineal y equipado con un detector de Captura µ-Electron (µ-ECD) . 15 -2. Sistema de manejo de datos, Hewlett Packard ChemStation o equivalente. 3. Columna cromatográfica, DB-SMS, 60 metros X 0.25 mm I.D. - disponible de J & W Scientific Inc., Blur Ravin Road. Foleom, CA 96630, Cat. No. 122-5562. 20 4. Matracee, volumétrico, con tapón de vidrio, 5 mL; 10 ^Wf^ mL, 25 mL, 50 mL, 100 mL, 350 mL . 5. Ampolletae, vidrio con tapae roecadae con forro de teflón 17 mL, 30 mL, 113.4 g (4 onzae) . 6. Pipetae de traneferencia 0.5, 1, 2, 3, 5, 10, 20 mL 25 Claee A. 7. Goteros de medicina, vidrio - Fisher. Cat. No. 13- 701. 8. Báscula analítica, capaz de pesar al más cercano punto 0.0001 g. 5 9. Columna de extracción de faee sólida, Supelco, Supelco Park Bellefonte, PA 16823- 0048, preparada de acuerdo con Sección XXX. Cat. No. 57022. 10. Lana de vidrio. 11. Matraz de fondo redondo de 500 mL con tapón disponible 0 de Lab Glase, Cat. No. 113 y Cat. No. 114. 12. Evaporador de vacío, rotatorio, que opera a 35-40°C; 800 mbar. 13. Jeringa de 500 µL o micropipetas desechables. 14. Cilindros de mezclado tipo A, 25 mL; disponibles de 5 Fisher, Cat. No. 08-363-1F. SOLUCIÓN DE NORMA INTERNA (Bajo Nivel) 1. Se pesan 50 mg de 3 -metoxi-1, 2 -propandiol en un matraz volulmétrico de 50 mL y registra el peso al más cercano 0.0001 g. 0 2. Diluye a la marca con acetonitrilo. 3. Pipetea 0.25 mL de solución en la etapa 2 en un matraz volumétrico de 100 mL y diluyen a volumen con dietil éter. 4. Pipetea 10.0 mL de solución en la etapa 3 en un volumétrico de 100 mL y diluyen a volumen con dietil éter. 1,3 -DCP, 3 -CPD SOLUCIÓN DE CALIBRACIÓN (Bajo Nivel) 5 1 Se pesan 50 mg de 1, 3 -dicloro~2 -propandiol en un matraz volulmétrico de 50 mL y regietra el peeo al más cercano 0.0001 g. - 2 Diluye a la marca con acetonitrilo. 3 Pipetea 0.5 mL de solución en la etapa 2 en un matraz 10 volumétrico de 10 mL y diluyen a volumen con dietil éter. Se pesan 50 mg de 3 -cloro- 1, 2 -propandiol en un matraz volumétrico de 50-mL y registra el peso al más cercano 0.0001 g. 15 5 Se diluye a la marca con acetonitrilo. 6 Se pipetea 0.5 mL de eolución en la etapa 5 a un matraz volumétrico de 10 -mL y diluyen al volumen con dietil éter. Se combinan lae eolucionee en la etapa 3 y la etapa 6 en una ampolleta de 30 mL y se mezclan bien. Se pipetean 2.5 mL de solución en la etapa 7 a un matraz volumétrico de 100 -mL y diluyen a volumen con dietil éter. Se pipetean 10.0 mL de solución en la etapa 8 en un 25 matraz volumétrico de 100-mL y diluyen a volumen con n dietil éter. ESl I la solución de Material de Calibración. CURVAS DE CÜ.Í3PRACIÓN (Bajo Nivel) : 1. Se pipetea 0.1 mL de la solución de Material de 5 Calibración en un matraz volumétrico de 25-mL que contiene 1.0 mL de la Solución Interna Eetándard. Ueando una pipeta, ee agregan 5.9 mL de dietil éter al 1 matraz. Este será el Nivel de calibración #1. 2. Se pipetea 0.2 mL de la solución de Material de 10 Calibración en un matraz volumétrico de 25-mL que contiene 1.0 mL de la Solución Interna Estándard. Usando una pipeta, ee agregan 5.8 mL de dietil éter al matraz . Eete eerá el Nivel de calibración #2. 3. Se pipetea 0.5 mL de la eolución de Material de 15 Calibración en un matraz volumétrico de 25-mL que contiene 1.0 mL de la Solución Interna Eetándard. Ueando una pipeta, ee agregan 5.5 mL de dietil éter al matraz. Eete eerá el Nivel de calibración #3. 4. Se pipetea l.O mL de la eolución de Material de 20 Calibración en un matraz volumétrico de 25-mL que contiene l.O mL de la Solución Interna Estándard. Usando una pipeta, ee agregan 5.0 mL de dietil éter al matraz. Este será el Nivel de calibración #4. 5. Se pipetean 2.0 mL de la solución *de "Material de Calibración en un matraz volumétrico de 25-mL que contiene 1.0 mL de la Solución Interna Estándard. Usando una pipeta, se agregan 4.0 mL de di'etil éter al 5 matraz. Este será el Nivel de calibración #5. 6. Se agregan 15 mL de iso octano a cada uno de los matraces volumétricos de lae etapas 1 a 6. 7. Usando una jeringa, se agregan 200 µL de HFBI a cada uno de loe matracee volumétricoe de la etapa 7, luego 10 taponan y ee dejan repoear a temperatura ambiente por 15 minutos con agitación ocasional. 8. Cada matraz se diluye a un volumen final de 25-mL con iso-octano. 9. Se agregan aprox. 1.5 mL de agua grado reactivo a cada 5 volumétrico, taponan y agitan para mezclar bien. Un precipitado se formará pero desaparecerá cuando se i mezcla bien con el agua. 10. Después de separación de fase, ee tranefieren aproximadamente 20 mL de la faee orgánica a una 20 ampolleta de vidrio de 30 mL, en donde cada una ^ contiene 2 mL de agua de grado reactivo. Se agitan vigoroeamente por 1 minuto . 11. Después de separación de fase. Se retira la capa agua y descarta. Las fases orgánicas se analizarán por 25 cromatografía de gases utilizando un detector de i.4 it A. A ¡*? 1 captura, µ-Ele tron (µ-ECD) para determinar la curva de calibración. CONDICIONES DE OPERACIÓN GC Temperaturas j t ,„ Columna Inicial 50°C Tiempo de retención inicial 2 min Velocidad inicial 1.5°C/min Segunda temperatura 100°C Segunda retención 5 min Segunda velocidad 25°C/min Final 300°C Tiempo de retención final 10 min Entrada 250°C Temperatura de detector 320°C Gasto de flujo Helio (gas portador) 1.5 mL/min a 1.406 kg/cm2 (20 psi) (presión de cabeza de columna a 35°C) Argón/Metano 60 mL/min SECCIÓN XXX •PREPARACIÓN DE LAS COLUMNAS EXTRELUT QE jilfe&a^?^..^..--- 1. Utilizando un depósito de extracción de fase solióla- se empuja aproximadamente 0.5 g de lana de vidrio a-1 fondo . 2. Se pesan 18 g de Varian Hydromatrix y vacían en el 5 depósito. Usando una sonda de vidrio, se empaca extrelut apretadamente. 3. Se coloca aproximadamente 0.5 g de lana de vidrio s '•W* sobre el recipiente. Los resultados se reportan en la Tabla 2. Los 10 datos muestran que el tratamiento de enzima a 21% de eólidoe dió eeencialmente loe mismos resultadoe que el tratamiento a 13.5% de sólidoe. Estos resultadoe permiten un tratamiento enzimático más económico. ^(^ Tabla 2. Resultados de Papel con Añejado Natural 15 Papel con Añejado Natural ^^ 20 _•-:-„-, -i .- -1,1 «-Jjfaá.-Aj----- " A ***tfl J.»»^-.-^*»*'5" >*" »-»,at M.i-^^A-at^AiAi- ---, (Continua) ¿ 10 Ejemplo 6-17. Procedimiento general para tratamiento de enzima de resinas poliaminopoliamida-epi Un matraz de fondo redondo de 500 mL, se adapta con un condensador, un medidor de pH, un baño de lii AJ ÁÁL? . ,tt---JMü-.i._i. ...-..--.ifc-J rt ft, ?jt-mto__-t a---- 4 '*- " MMiHIt^*"'* circulación de temperatura controlada y un agitador mecánico. Al matraz se agregan 400.0 g de KymeneMR É7219 (disponible de Hercules Incorporated, Willmington, DE; 21.51% de sólidoe, 267 cpe de viecosidad de Brookfield a 5 25°C) . El pH se incrementa con hidróxido de sodio acuoso al 30%. Se retira una alícuota de 5 g, el pH se reduce a aproximadamente 3 con ácido sulfúrico al 96% y analiza por GC. ALCALASE 2.5 L tipo DX (disponible de Novozymes, empleado como se recibe) se agrega (cantidad indicada en la 10 * Tabla 3) . La temperatura se eleva en 15 minutos a la temperatura de tratamiento deseada y se verifica la viscoeidad Gardner-Holdt a 25°C. Alícuotas de 5 gramos de la mezcla de reacción se retiran y el pH se reduce a aproximadamente 3 con ácido sulfúrico al 96% a l, 2, 4, 6 15 y 8 horas después de la adición de ALCALASE y analiza por GC. El pH se verifica cada hora y se ajusta con hidróxído de sodio acuoso al 30% si el pH se desplaza por más de 0.10. Después de 8 horas, el pH se reduce a 3.5 por adición de ácido sulfúrico al 96%. Si la lectura de 20 viscoeidad Gardner-Holdt fue entre letras, ambas letras ee *^F regietran en la Tabla. Si la viscosidad se incrementa más de lo deseado, los ajustes de pH con hidróxido de sodio acuoso al 30%, ee interrumpen. Si la viecoeidad se incrementa al punto de arriesgar gelación, el pH se reduce 25 a 3.5 por adición de ácido eulfúrico al 96%. BV (cpe) es la Viscosidad Brookfield (medida a $°C) de la reeina final. La proporción de ALCALASE : sólidos activos, se define cómo la cantidad de ALCALASE 2.5L tipo DX, empleada como se recibió, comparado con la cantidad de sólidos 5 - activos fn la resina. Ver Tabla 3 para detalles. Ejemplo* 18-19. Procedimiento General para Tratamiento de ^^ . Enzima de una Resina Poliaminopoliamida-epi # Un matraz de fondo redondo de 250 mL, se adapta con un condensador, un medidor de pH, un baño de 10 circulación de temperatura controlada y un agitador mecánico. Al matraz se agregan 200.0 g del Ejemplo 1. El pH se incrementa con hidróxido de sodio acuoso al 30%. Una alícuota de 4 g se retira, el pH se reduce a aproximadamente 3 con ácido eulfúrico al 96% y analiza por 15 GC. ALCALASE 2.5 L tipo DX (disponible de Novozymes, usado como se recibe) , se agrega (cantidad indicada en la Tabla 3) . La temperatura se eleva en 15 minutos a la temperatura de tratamiento deseada y ee verifica la viecosidad Gardner- Holdt a 25°C. Alícuotas de 4 gramos de la mezcla de ^^ ,.20 reacción se retiraron y el pH se reduce a aproximadamente 3 con ácido sulfúrico al 96% a l, 2, 4, 6 y 8 horas (si no gelifica) deepuée de la adición de ALCALASE y analiza por GC. El pH se verifica cada hora y se ajusta con hidróxido de eodio acuoso al 30% si el pH se desplaza por más de 25 0.10. Después de 8 horas, el pH se reduce a 3.5 por adición de ácido sulfúrico al 96%. Si la lectura de *ifviscosidad Gardner-Holdt fue entre letras, ambas letras -se registran en la Tabla 3. Si la viscosidad se incrementa más de lo deeeado, los ajustes de pH con hidróxido de sodio acuoso al 30% se interrumpen. Con ambas reacciones, se deja que la viscosidad incremente al punto de gelación. BV (cps) es la Viscosidad Brookfield (medida a 25°C) de la resina final. La proporción de ALCALASE: sólidos activos se define como la cantidad en peso de ALCALASE 2.5L tipo 10 DX, utilizada como se recibe, en comparación con la cantidad en peso de eólidos activos en la resina. Ver Tabla 3 para detalles. Tabla 3 15 F 20 15 AO ^ *9> 10 15 20 F ' 10 15 ^SPF 20 F- 10 15 • 20 tfí-aj-t....i i i.--.j -..? £---,.« A- j"H rr nütntn n --ttl---aiA.<.. ^^¡¿ 10 15 20 i.i i l j. 2 Á . í .¿ÍÍ?..r.,it M&í?í&,*t - .--at-fe -. «j Ejemplo 20. Tratamiento de Enzima Combinado y Biodeshalogenación de una resina poliamino3?ol4?amida-epi* s Escala-AScendénte 1 (Preparación de inicio) : Una porción de KymeneMR E7219 (disponible de 5 Hercules Incorporated, Wilmington, DE; 21.51% de sólidos, «*267 cps de viscosidad Brookfield a 25°C) se diluye a 13.5% de total de sólidoe. Un matraz de fondo redondo de 400 L se adapta con un condensador, un medidor de pH, un baño de circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo 10 de aire y un agitador mecánico. Al matraz se agregan 400 g de KymeneMR E7219 al 13.5%. El pH ee eleva a 7.54 con 7.42 g de hidróxido de sodio acuoso al 30%. Una alícuota de 5 g se retira, el pH se reduce a aproximadamente 3 con ácido sulfúrico al 96% y analiza por GC . Luego 3.33 g de 15 ALCALASE 2.5L tipo DX (dieponible de Novozymes, se utiliza como ee recibe) ee agregan y luego 44.4 g de una mezcla de microorganiemos que comprenden un inoculo de una resina poliaminopoliamida-epiclorohidrina biodeshalogenada. Esto representa un valor de partida de concentración celular 20 desde aproximadamente 105 a aproximadamente 106 células/ml. 9' Este valor de partida correeponde a un nivel de tratamiento final de aproximadamente 109 célulae/ml conforme avanza el proceso. El inoculo se agrega, junto con 3.50 g de una solución nutriente. (La solución nutriente consiste de 25 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro * de calcio en agua corriente) . Los microorganismos ,- empleadoe fueron: Anthrobacter Histidinolovorans (HKl) y Agrobacterium radiobacter (HK7) . El burbujeo de aire &e 5 inicia, la temperatura se mantiene a 10°C. El tratamiento se verifica por viscosidad Gardner-Holdt, y el crecimiento bacteriano se verifica por densidad óptica (OD600) / OD60o ee determina al medir la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm, utilizando un espectrofotómetro SpectronicMR 10 GenesyeMR UV/Vie (Spectronic Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E . U . A J y una cuva desechable con una longitud de ruta de 1 cm. Periódicamente, se retiraron alícuotae de 5 g, el pH se reduce a aproximadamente 3 con ácido sulfúrico al 96% y analiza por GC. El pH del 15 tratamiento se mantiene por las primeras 30 horas a 7.1- 7.5, por adición periódica de hidróxido de eodío acuoso al 30%. Después de 30 horas, el pH se reduce a 5.8 por adición de ácido sulfúrico al 96%. Después de 48 horas, la mezcla resultante se utiliza como un inoculo para la Escala 20 ascendente 2 siguiente. Escala aecendente 2 : Una porción de KymeneMR E7219 (disponible de Hercules Incorporated, Wilmington, DE; 21.51% de sólidoe, 267 cpe viscosidad de Brookfield a 25°C) se diluye a 13.5% 25 del total de sólidoe. Un matraz de fondo redondo de 2L se % fr«g|irÉMÍÉÉll¡É? ?iá---.-- -t --j_¡ ^..---h-a-h-h JJ-AttaL - adapta con un condensador, un medidor de pH, un baño de circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y un agitador mecánico. Al matraz se agregan 1600 g de KymeneMR E7219 al 13.5%. El pH se eleva a 7.52 con 5 30.38 g de hidróxido de sodio acuoso al 30%. Se retira una alícuota de 5 g, el pH se reduce a aproximadamente 3 con ácido sulfúrico al 96% y analiza por GC . Luego 13.32 g de ALCALASE 2.5L tipo DX (disponible de Novozymes, empleado como se recibe) se agregan y luego 177.8 g del inoculo de 10 escala ascendente anterior se agrega, junto con 14.0 g de una eolución nutriente. (La solución nutriente consiste de 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de A urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro /de calcio en agua corriente) . El burbujeo de aire se 15 inicio, la temperatura se mantiene a 30°C. El tratamiento se verifica por viecosidad Gardner-Holdt, y el crecimiento bacteriano se verifica por densidad óptica (OD600) , OD600 se determina al medir la densidad óptica a una longitud de onda 600 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronicMR 20 GéneeysMR UV/Vis (Spectronic Inetruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.) y una cuba desechable con una longitud de ruta de 1 cm. Periódicamente, se retiran alícuotas de 5 g, el pH se reduce a aproximadamente 3 con ácido sulfúrico al 96% y analiza por GC. El pH del 25 tratamiento se mantiene por las primeras 8.5 horas a 7.2- l-i.---«.--.. ?-t---L*i„ 7.5 por adición periódica de hidróxido de sodio acuoso ál 30%. Para el tiempo de tratamiento restante, el pH se mantiene a pH 6.8-7.2 por adición periódica de hidróxido de sodio acuoso al 30%. Después de 48 horas, la mezcla Se enfría a temperatura ambiente y el pH se ajusta a 2.8 con 12.80 g de ácido sulfúrico al 96% y 19.26 g de solución biocida se agregan. [La solución biocida consiste de ProxelMR BD activo al 10% (de Zeneca Biocides) y sorbato de potasio 1.67% en agua desionizada] . Ver Tabla 4 para loe reeultados de verificación de tratamiento. Tabla 4 yfk 15 20 10 15 Ejemplo 21. Tratamiento de Enzima Combinada y BiodeshalogeAación de una resina poliamintípo iamida-epM. (Utilizando el doble de Alcalase que en el Ejemplo 20) . - Escala-ascendente 1 (Preparación de inicio) : 5 Una porción de KymeneMR E7219 (disponible de Hercules Incorporated, Wilmington, DE; 21.51% de sólidos, F 267 cps de viscosidad Brookfield a 25°C) se diluye a 13.5% del total de sólidos. Un matraz de fondo redondo de 400 t^ se adapta con un condeneador, un medidor de pH, un baño rde 10 circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y un agitador mecánico. Al matraz se agregan 400 g de KymeneMR E7219 al 13.5%. El pH se eleva a 7.52 con 7.38 g de hidróxido de sodio acuoso al 30%. Se retira una alícuota de 5 g, el pH ee reduce a aproximadamente 3 oon 15 ácido eulfúrico al 96% y analiza por GC. Luego 6.66 g de ALCALASE 2.5L tipo DX (disponible de Novozymes, utilizada como se recibe) se agrega y luego 44.4 g de una mezcla de * microorganismos que comprenden un inoculo de una resina poliaminopolíamida-epiclorohidrina biodeshalogenada. Esto F 20 representa un valor de partida de concentración celular desde aproximadamente 105 a aproximadamente 106 células/ml. Este valor de partida corresponde a un nivel de tratamiento final de aproximadamente 103 células/ml conforme avanza el proceso. El inoculo se agrega, junto con 3.50 g de una solución nutriente. (La solución nutriente consiste de "•««8026 ppm de dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua corriente) . Los microorganismos empleados fueron: Artnrobacter Histidinolovorans (HKl) y Agrobacterium radiobacter (HK7) . El burbujeo de aire se inicia, la temperatura se mantiene a 30°C. El tratamiento se verifica por viscosidad Gardner-Holdt, y el crecimiento bacteriano se verifica por densidad óptica (OD€00) / OD600 se determina al medir la densidad óptica a una longitud de onda 600 nm utilizando un eepectrofotómetro SpectronicMR GeneeyeMR UV/Vie (Spectronic Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.) y una cuba desechable con una longitud de ruta de 1 cm. Periódicamente, se retiran alícuotas de 5 g, el pH se reduce a aproximadamente 3 con ácido sulfúrico al 96% y analiza por GC. El pH del tratamiento se mantiene por las primeras 24 horas a 7.2-7.5 por adición periódica de hidróxido de sodio acuoso al 30%. Después de 24 horas, el pH se deja que se deeplace des?endiendo a 6.71 durante el cureo de 24 horas. Deepués de 48 horas, la mezcla resultante tuvo una viscosidad Bróokfield de 71 cps (medida a 25°C) . Esta mezcla se emplea como el inoculo para la Eecala aecendente 2 eiguiente. Eecala aecendente 2 : Una porción de KymeneMR E7219 (disponible de » Hércules Incorporatéd, Wilmington, DE; 21.51% de sólidos, 267 cps de viscoeidad de Brookfield a 25°C) se diluye a 13.5% total de sólidoe. Un matraz de fondo redondo de 2L „ee adapta con un condeneador, un medidor de pH, un baño de circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y un agitador mecánico. Al matraz ee agregan 1600 g de KymeneMR E7219 al 13.5%. El pH ee eleva a 7.55 con 29.99 g de hidróxido de eodio acuoso al 30%. Se retira una alícuota de 5 g, el pH se reduce a aproximadamente 3 con ácido sulfúrico al 96% y analiza por GC . Luego 26.64 g de ALCALASE 2.5L tipo DX (disponible de Novozymes, empleada como ee recibe) se agregan y luego 177.8 g del inoculo de escala ascendente anterior se agrega, junto con 14.0 g de una nutriente. (La solución nutriente coneiste de 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua corriente) . Se inicia el burbujeo de aire, la temperatura se mantiene a 30°C. El tratamiento se verifica por viscosidad Gardner-Holdt, y el crecimiento bacteriano se verifica por densidad óptica (OD600) , OD600 se determina al medir la densidad óptica a una longitud de onda 600 pm utilizando un espectrofotómetro SpectronicMR GenesysMR UV/Vie (Spectronic Inetrumente, Incorporated, Rocheeter, New York, E.U.A.) y una cuba desechable con una longitud de ruta de j i--..- .- ¿ ^.¿^^ ALlÉákáí^ílMMi^ülr^á?U^kl 1 cm. Periódicamente, se retiran alícuotae de 5 g, el pH se reduce a aproximadamente 3 con ácido sulfúrico al 96% y analiza por GC . El pH del tratamiento se mantiene por las primeras 8.5 horas a 7.1-7.5 por adición periódica de hidróxido de sodio acuoso al 30%. Por el tiempo de tratamiento restante, el pH se mantiene a pH 6.8-7.2 por adición periódica de hidróxido de sodio acuoso al 30%. •Después de 48 horas, la mezcla se enfría a temperatura ambiente y el pH se ajusta a 2.8 con 12.85 g de ácido 10 sulfúrico al 96% y 19.26 g de solución biocida se agregan. [La solución biocida consiste de ProxelMR BD 10% activo (de Zeneca Biocides) y eorbato de potaeio 1.67% en agµa j- desionizada] . La reeina tuvo una viecoeidad Brookfield de 30 cps (medida a 25°C) . Ver Tabla 5 para los resultadoe de 15 verificación de tratamiento. Tabla 5 • ' , r Escala Ascendente 2 .MüiA^?i,>^ .iük Los Ejemplos 20 y 21 claramente mueetran que el tratamiento de enzima y el tratamiento de biodeehalogenación pueden 10 combinarse efectivamente. Cuando se empleó el doble de *TB Alcalase, un equilibrio de condiciones preferidas permitió que se obtuviera una viscosidad preferida. Ejemplo 22 Alcalase-Biodeshalogenación de KymeneMR E7219 (ver Tabla 6 15 para datos y- detalles) KymeneMR E7219 (disponible de Hercules , Incorporated, Wilmington, DE; Zwijndrecht, planta de Holanda) se diluyó a 13.40% y tuvo una viscosidad de Brookfield de 76 cps. 20 Paeteurización: Un matraz de fondo redondo de 3 L ee adapta con un condensador, un baño de circulación de temperatura controlada y un agitador mecánico. Al matraz se agregan 2800 g de la resina. El pH se ajustó a 3.4» -.a, 3.0 con ácido sulfúrico concentrado y se calentó sobre 15 minutos desde 25°C a 80°C. La reeina se mantuvo a 80°C por 15 minutoe, enfrió a 75°C en 10 minutoe y luego enfrió a 5 30°C. La reeina paeteurizada tuvo una viscosidad Brookfield de 48 cpe y se almacenó en recipientes estériles . Esterilización de KymeneMR E7219. Una porción de 500 g de KymeneMR E7219 se diluyó 10 a 8%, colocó en una botella para autoclave y c lentó en un •«* autoclave a 121°C por 10 minutos. La reeina ee dejo que enfriara y se utilizó para iniciar la preparación de escala ascendente 1 del inoculo de resina. Nota: KymeneMR E7219 pasteurizado (utilizando las condiciones descritas 15 anteriormente) también se ha empleado exitosamente al iniciar la preparación de escala ascendente 1 del inoculo de resina. Biodeshalogenación: Preparación de inoculo de resina [escala ascendente 1 (SUI) ] : Un matraz de fondo redondo de 20 250 mL ee adapta con un condensador, un medidor de pH, un baño de circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y un agitador mecánico. Al matraz se agregan 200 g de KymeneMR E7219 esterilizado y el pH se eleva a 7.2 con 3.28 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% 25 y luego 400 microlitros de cultivo iniciador concentrado " '' fcAjjJ Í, A«*-t.Aji ||r,|r1 in illlillitt «*---. ?ÍM¡^4.^**áiÁi l¿t~¿???,?.J* *á. ./ i.J.Jt?r.

HK7 se agregan (1-500, HK7 a resina) [Ver Ejemplo 24 para *" preparación de cultivo iniciador concentrado] y 1.75 g de una solución nutriente se agregan. (La solución nutriente consiste de 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de potasio, 5 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua corriente) . Se inicia el burbujeo de aire, la temperatura ee mantiene a 30°C. El crecimiento bacteriano se verificó por densidad óptica (OD600) y la biodeshalogenación se verificó por GC. OD600 ee 10 determina al medir la deneidad óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronicMR GenesysMR UV/vis (Spectronic Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.) y una cuba desechable con una #* longitud de ruta de 1-cm. El pH de la mezcla de reacción 15 se mantiene por una adición periódica de 30% de hidróxido de sodio acuoso. Deepués de 34 horae, 68 microlitros de cultivo iniciador concentrado HKl se agregan (1:3000, HKl a resina) [Ver Ejemplo 24 para preparación de cultivo iniciador concentrado] , se agregan. Después de 34 horas, 20 , la reeina reeultante se utiliza como un inoculo para SU2. Escala ascendente 2 (SU2) : Un matraz de fondo redondo de 500 mL se adaptó con un condensador, un medidor de pH, un baño de circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo 25 de aire y un agitador mecánico. Al matraz se agregaron 350 g de la reeina paeteurizada. El pH ee elevó a 7.5 con 7.40 g de hidróxido de eodio acuoeo al 30% y luego 5.03 g de Alcalase 2.5L tipo DX (disponible de Novozymes) , 87.5 g §l inoculo de resina SUI (velocidad de inoculación al 20%) ,y •" 5 3.06 g de una solución nutriente, se agregaron. (La solución nutriente consistió de 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua corriente) . El burbujeo de aire se inició, la temperatura 10 se mantuvo a 30°C. El crecimiento bacteriano se verificó por deneidad óptica (OD600) y la biodesiialogenación se verificó por GC . OOmo se determina al medir la deneidad óptica a una longitud de onda 600 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronicMR GeneeyeMR UV/Vie (Spectronic 15 Inetrumente, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.) y una cuba desechable con una longitud de ruta de l-cm. El pH de la mezcla de reacción ee mantiene por adición periódica de hidróxido de sodio acuoso al 30%. Después de 23 horas, la resina resultante se emplea como inoculo para 20 SU3. Para incrementar el peso molecular de la resina (como se indica por Gardner-Holdt, o viscoeidad Brookfield) , una porción de 200 g de la resina restante (viecoeidad Brookfield de 10 cpe) se elevó a pH 8.5 con 1.17 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y la temperatura se 25 aumentó a 40°C. Despuée de 3 horae, la reeina tuvo una viscoeidad deseable y la reacción se neutralizó por la adición de ácido sulfúrico concentrado a pH 2.7. La resina • resultante tuvo una viscosidad Brookfíeld de 25 cps. Escala ascendente 3 (SU3) y Procedimiento General para modo p por lotes repetidos. Se adaptó un matraz de fondo redondo de 250 mL 4 *• con un condensador, un medidor de pH, un baño de • circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y un agitador mecánico. Al matraz se agregaron 350 10 g de la resina pasteurizada. El pH se elevó a 7.6 con 8.59 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 4.38 g de Alcalaee 2.5L tipo DX (dieponible de Novozymee) , 87.5 g del inoculo de resina SU2 (velocidad de inoculación 20%) y 3.06 g de una solución nutriente se agregaron. (La solución 15 nutriente consíetió de 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua corriente) . Se inició el burbujeo de aire, la temperatura se mantuvo a 30CC. El crecimiento bacteriano ee verificó por densidad 2& óptica (OD600) y la biodeshalogenación se verificó por GC.

Fr OD600 se determina al medir la densidad óptica a una longitud de onda 600 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronicMR GenesysMR UV/vis (Spectronic Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.) y una cuba 25 desechable con una longitud de ruta de 1-cm. El pH de la Jfnezcla de reacción se mantiene por adición periódica de hidróxido de sodio acuoso al 30%. Después de " 3 horas, la resina resultante se empleó como inoculo para SU4. El pH de' la resina restante se ajustó a 2.8 con ácido sulfúrico . concentrado y 300 ppm de sorbato de potasio se agregan como solución acuosa al 10%. Esta resina tuvo una viscosidad Brookfield de 49 cps. Lote de escala ascendente 4 (SU4) : El procedimiento fue similar a SU3 , ver Tabla 6 para datos y detalles. 10 Lotes de escala aecendente 5-10: El procedimiento fue eimilar a SU3 excepto porque KymeneMR E7219 a 13.40% se empleó sin pasteurización (ver Tabla 6 para datos y , detallee) . ? Un juego eemejante de experimentos con una 15 velocidad de inoculación del 10% para los lotes SU3-SU8, resultó en biodeshalogenaciones por lotee exitoeae y eficíentee .

W hita*WMHÉHHA"*--^-^.l ^a-^ Tabla 6 "•f-ásr**-; £?5fcala ascendáfafce 2: 350 g de E7219 al 13.5% (pasfteür izado) , 5.03 g de Alcalame, 87.5 g de - 15, solución nutriente 3.06 g. Muestra Tiem(pH ViscoCPD-i po 7.50) sidad (ppm> (hopH(30C) Gardner x9 ras) FF X33031-18- 13 7.47- 0.56 5 7.59 X33031-18- 23 7.56 A-l/A 0.38 6 Inoculo se retiró para el siguiente lote, el resto se , apartó para entrelazamiento. La viscosidad Brookfield fue 10 cps (a pH 7.50), entrelazamiento de 200 g de -18 empezó 8 horas después: 7.2 10 (24C) 7.11 (31C) 0 8.5 1.2 (31C) 15 0.5 8.23 (40C) 1 8.01 1.5 7.93 A-l/A 2 7.82 * 7 - La reeina final tuvo una viecoeidad Brookfiel de 25 cps La resina final tuvo una viscosidad Brookfield de 49 cps. 15 La reeina final fue un gel suave (dispereable) La reeina final tuvo una viecoeidad Brookfield de 87 cps 15 -*, La reeina fiftal tuvo una viecosidad Brookfield de 77 cps 5T "* ?^> T^^ -"F* 10 15 20 La resina final tuvo una viscosidad Brookfield de 66 cps Escala ascendente 9: 700 g de E72l9 13.5% (sin pasteurizar), 8.76 g de Alcalase, 175 g de -31 solución nutriente 6.12 g, Muestra Tiem(pH ViscoOD 30% DCP CPD po 7.25) sidad (abs NaOH (ppm) (ppm) (hrs) pH Gardner (g) (300 Prueba Acida <0.1 2.9 0 La resma final tuvo una viscoeidad Brookfield de 40 cps La resina final tuvo una viscoeidad Brookfield de 34 cps. 10 Ejemplos: Para los siguientee ejemploe pueden tomaree TS eignifica total de sólidos. Agua demi significa agua desmineralizada DO significa oxígeno disuelto t5 Ejemplo 23: Demuestra factibilidad de aplicar la tecnología de biodéshalogenación para cedencia gradual y CrepetrolMR 80E con incrementado % TS para reducir ante niveles 1,3-DCÍP y/o 3-CPD a concentraciones inferiores a 1 ppm. CrepetrolMR 80E (=A3025) reeina auxiliar de cedencia gradual (26.6% TS como se recibe), una resina basada en amina terciaria, disponible de Hercules Incorporated (Wilmington, DE) , ee obtiene de la planta Voreppe, Francia. Tres matraces Erlenmeyer de 250 ml, estériles se cargaron con lotes de 50 ml de resina con incrementado %TS (Tabla 7) . Diluciones de la resina se realizaron con agua desmineralizada esterilizada. Tabla 7 Residuos EPI y total de sólidos de Crepetrol*0180E.

Previo a inoculación, cada resina 50 ml diluida se suminietra con 0.5 ml de solución nutriente y el pH de la solución se ajusta a-, K 5*8 utilizando una solución NaOH ' al 33%. Esta solud'ión nutri nte contiene los siguientes componentes por L de agua desraineralizada es e ilizando : 33 g de Urea, 5 g de KH2P04, 5 g de MgS04.7H20 y 1 g de CaCl2.2IÍ20. Un 1 ml de cultivo iniciador concentrado ta?íto , de Art?robacter histidinolovorans (HK1J y A§robacteri a radiobacter (HK7) se retira del congelador a -80°C y descongela en un baño de agua por 1-2 minutos a 30°C. Una alícuota de 50 µl de la suspensión de A . Histidinolovorans (HKl) y una alícuota de 200 µl de la suspensión de A . radiobacter (HK7) ambas se emplearon para inocular un matraz de agitación Erlenmeyer estéril de 250 ml que contiene las diluciones descritas de 50 ml de CrepetrolMR 80E suplementado. Después de inoculación, los cultivos se incubaron por 48 horas a 30°C en un incubador de agitación rotatoria (250 rpm; modelo G25; New Brunswick Scientific Co., Inc. New Jereey, E.U.A.) . Se eiguió el crecimiento bacteriano en tiempo y determinó al medir la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un espectrofotómetro Ultrospec 1000 UV/Vis (Pharmacia Biotech, Suecia) y una cuba desechable de 3 ml con una longitud de ruta de 1-cm (Tabla 8) . Las muestrae se ajustaron en pH a 3.5 utilizando ácido eulfúrico concentrado y se agregó ProxelMR BD al 0.1% (disponible de Zeneca Biocides) . Las muestras se probaron por análieis de residuos EPI (1,3-DCP y 3-CPD) por GC (Tabla 8) . Tabla 8: Crecimiento bacteriano en CrepetrolMR 80E Con incrementado % TS . ,5 10 ^9 15 Ejemplo 24: Bio-proceso y Enzima Secuencial con alto % TS: Demuestra la eficiencia del proceso iniciado con liberación de 3 -CPD mediante tratamiento por ALCALASE dé CrepetralMR 25 8'E seguido por biodeshalogenación. Producto biodeehalógenado de prueba para 3-CPD ligado, a polímero residual utilizando la prueba acida. A. Tratamiento de 2.5 de CrepetrolMR 80E Un bioreactor de 2.5 L limpio y estéril 5 (bioreactor BioFlo3000, controlado mediante soporte lógico AFS-BioCommand; New Brunswick Scientific Co., Inc., New Jersey, E.U.A.) se carga con 2.5 kg de resina CrepetrolMR 80E (26.6% TS) que se obtiene de la planta Herculee Voreppe, Francia. El pH de CrepetrolMR 80E ee ajueta a j?H 1 ¿» ^ 7.5 utilizando una solución de NaOH al 33% y el controlador pH-PlD (Exhibidor Integral Proporcional - Proportíonal Integral Display) del bioreactor instalado. El tratamiento t. * '" de enzimas se inicia por adición de 12.5 g Alcalase -CrepetrolMR 2.5 DX (Novozymes). La resina fue una enzima 15 tratada por un periodo de tiempo de 6 horas utilizando las siguientes condiciones de incubación: - pH 7.5 - Temperatura controlada a 25°C - Agitación controlada a 600 pm 20 Mueetrae (25 ml) ee tomaron en tiempo después de 2, 4 y 6 horas para verificar residuos epi (Tabla 9) . Muestras recolectadas fueron ajustadae a pH de 3.5 con ácido eulfúrico concentrado y almacenaron a 4°C para mayor análieis. Los residuos EPI (3-CPD y 1,3-DCP) se analizaron 25 por GC.

Tabla 9: Libración de 3-CPD en tíempo" de CrépetrolMR 80E tratado a 26.6% TS F A1, 10 B. Preparación de pre-cultivos de HKl y HK7 para iniciar proceso de biodeshalogenación. Una sola colonia de A. Histidinolovorans (HKl) y una eola colonia de A . Radiobacter (HK7) (ambas desarrolladas por separado en medio de ealee de medio 15 mínimo que contienen DCP/CPD) , ee emplearon para inocular cada uno separadamente un matraz de agitación Erlenmeyer estéril (250 ml) que contiene 50 ml del medio de Infusión de Cerebro Corazón estéril (BHl; Oxord, Ltd, Basingtoke Hampehire, Inglaterra; medio lieto, cat. no. CM225) . Ambos 20 pre-cultivos se incubaron por separado por 24 horas a 30°C en un incubador de agitación rotatoria dé temperatura controlada (250 rpm; modelo G25; New Brunswick Scientífic Co., Inc., New Jersey, E.U.A.). La densidad óptica 143 cultivos HKl y HK7 desarrolladoe por lotee, Se determinó , -utilizando un eepectrofotómetro Ultroepec 1000 WJ/tís (Pharmacia Biotech, Suecia) a una longitud de onda de 600 nm y utilizando una cuba deeechable 3-ml con longitud de onda con 1-cm. El crecimiento ee determina al medir la densidad ** óptica a una longitud onda de 600 nm, utilizando una muestra de cultivo diluida 20 veces (agua) (Tabla 10) . Estos pre-cultivos se utilizaron para iniciar el proceso de 10 biodeshalogenación de CrepetrolMR 80E tratado con enzima. Tabla 10: Densidad óptica de cultivo de lote HKl y HIC7 desarrolladoe en BHl por 24 horas. ^ f 1* Para preparar cultivos iniciadores concentradoe, los pre-cultivos se concentraron mediante centrifugación (10,000 rpm por 10 minutoe a 4°C) y suplementaron con 20 - glicerol al 10% y luego almacenaron a -80°C. C. Biodeshalogenación de Crepetrol1® 80E tratado. Después de 6 horas de tratamiento con enzima ( sección A) , el pH de la resina en el bioreactor se ajueta a pH 5.8 con ácido sulfúrico concentrado. El contenido del 25 reactor se suplementa con 25 ml de solución nutriente y PPG2000 0.04%' i (anti-espuma) (polipropilen glicol P2000 (Fluka Che íé AG; Alemania) ) . Esta solución nutriente contiene los siguientee componentes por L de agua de i esterilizada; 33 g de Urea, 5 g de KH2P04, 5 g de MgS057H20 y 1 g de C2C12.2H20. Pre-cultivos de A . Histidinolovorans (HKl) y A . Radiobacter (HK7) (50 ml cada uno; sección B) se emplearon para iniciar el proceso de bíodeshalogenación de F la resina tratada con enzima. Ambos cultivos Se emplearon simultáneamente para inocular una fermentación por lote en 10 el bioreactor de 2.5L. Los ajuetee de parámetroe de la unidad de control bioreactor, operada en modo por lote, fueron como eigue: > k - pH controlado a pH 5.8 (adición controlada de PID de solución NaOH al 25%) 15 - Temperatura controlada a 30°C Velocidad de Agitador 600 rpm (velocidad máxima de 800 rpm, por valor DO controlado) - Aereación ajustada a 10 vvm (2.5L/mih; aire 2 comprimido) , valor de OD mínimo ajustado a 5% de saturación de aire. Remoción completa de residuos epi del contenido de bioreactor ee verifica cercanamente en tiempo, por , análisis por cromatografía de gases (GC-XSD; tabla 11) . ..*----«-<--*, » n^?MJ UU¿A?Stuíí1M ???^Á Después de un total de tiempo de incubación de 51 horas, el cultívo debióte se termina. El pH de la resina biodeshalogenada y tratada con enzima se ajusta a pH .5 utilizando ácido sulfúrico concentrado y el producto se * 5- suplementa con sorbato de potasio al 0.2% y 0.12% Proxel BD- Una muestra de producto terminado se emplea en una prueba acida para determinar la fracción 3 -CPD ligada a polímero. El pH de esta muestra (25 ml) se ajusta a pH 1.0 con ácido sulfúrico concentrado, subsecuentemente la jo muestra se incuba por 24 horas a 50 °C. Después de incubación, el pH se reajusta a pH 3.5 con una solución de NaOH al 33%. Residuos epi se determinaron por medición GC- XSD ( tabla 11) Tabla 11 Residuos Epi después de tratamiento de enzima 15 secuencial, bio-tratamiento y prueba acida. 20 * * * fs-* 4 í¡ÉÍ¿-!Í---?-i-iÍ-l----------íi¿-É-l .«. t------j- i aJ ,~ .*« 152 ^JLO Ejemplo 25: Bio-proceso de Enzima Combinado con alto % »4e TS : Demuestra eficiencia del proceso con liberación de 3- CPD iniciada simultáneamente por tratamiento de CrepetrolWR fe'* SOE y al mismo tiempo biodeshalogenación de 3 -CPD librg. ^. Prueba de producto biodeshalogenado por 3 -CPD ligado' "a polímero residual utilizando la prueba acida. Un bioreactor de 2.5 L limpio y estérJ»! (bioreactor B?oFlo3000, controlado por soporte lógico AFS- BioCo mand; New Brunswick Scientific Co . , ?nc . de NTW 20 Jersey E.U. A.) Se cargó con 2.5 kg de resina CrepetrolMR 80E (26.6% TS) que se obtiene de la planta H rcules Voreppe, Francia. La res a se ajustó a pH 7.5 con una solución de r- *« 153 NaOH comcentarada ( 33%) suplementada con solución nutríérjtfá ?- 25 ml y PPG20OO 0.04% (antiespuma) . La soluci| ?-n nutrierfee " '?X- contiene los siguientes componentes por L dé agua #i » ' * esterilizada: 33 g de Urea, 5 g de KH2P04, 5 g de MgS047É0 '5 y 1 g de CaCl2 .2H20. Alícuotas de cultivo iniciadoras *. concentrados de A . Histidinolovorans (HKl) y A . Radiobacter (HK7) se retiraron del congelador a -80°C y descongelado en un baño con agua por 1-2 minutos a 30°C. Para iniciar simultáneamente el proceso de 1 biodeshalogenación - enzima, las siguientes cantidades de enzima/bacteria se agregaron a la resina suplementada: * X •¡ - 12.5 g AlcalaseMR 2.5L DX (Novozymes) - 0.83 ml cultivo iniciador de A . Histidinolovorans (HKl) - 4.17 ml de cultivo iniciador de A . Radiobacter (HK7) «& Los ajustes de parámetro para la unidad de control de bioreactor, operado en modo por lotes,- inicialmente se ajustaron para la " fase de tra tamiento de , enzima" como sigue: - pH controlado a pH 5.8 (adición controlada de PID de ¥ 20 solución NaOH al 25%) - Temperatura controlada a 30°C Velocidad de Agitador 600 rpm (velocidad máxima de 800 rpm, por valor DO controlado) J *Aereación ajotada a 10 vvm (2.5L/min^, aire comprimido), valor de OD ígánimo ajustado a 5% de saturadüón de aire1. Se tomaron muestras en tiempo después de 2 , 4 y 6 horas para verificar residuos epi (tabla 12) . Residuos epi se midieron por GC. Estas muestras (25 ml) se " ajustaron en pH a 3.5 con ácido sulfúrico concentrado y almacenaron a 4°C para mayor análisis. Después de 6 horas de incubación, el pH en el lote se redujo a 5.8 con ácido sulfúrico concentrado y la temperatura de incubación se elevó a 30°C. Los ajustes de parámetros para la unidad de control de bio-reactor, operada en modo por lote durante la " f se de tratamiento de biodeshalogenación" se establecen como sigue: - pH controlado a pH 5.8 (adición controlada de PID de solución NaOH al 25%) - Temperatura controlada a 30°C Velocidad de Agitador 600 rpm (velocidad máxima de 800 rpm, por valor , DO controlado) " Aereación ajustada a 10 vvm (2.5 L/min; aire comprimido), valor de DO mínimo ajustado a 5% de saturación «de aire . Remoción completa de residuos epi del contenido de bio-reactor se verificó cercanamente en tiempo, por *-< 155 ?análísis por cromatografía de gas (GC-XSD; tabla 12) . Después de un tiempo de incubación total de 52 horas, el cultivo por lotes se termina. El pH de la resina r, biodeshalogenada y tratada con enzima simultáneamente se 5 "ajustó a pH 3.5, utilizando ácido sulfúrico concentrado y * el producto se suplemento con sorbato de potasio al 0.2% y 0.12% Proxel BD. Una muestra de producto terminado se f t mplea en una prueba acida para determinar la fracción 3- CPD ligada a polímero. El pH de esta muestra (25 ml) se 10 ajusta a pH 1.0 con ácido sulfúrico concentrado, subsecuentemente la muestra se incuba por 24 horas a 50°C. Después de incubación, el pH se reajusta a 3.5 con solución 0' J NaOH al 33%. Residuos epi se determinaron por medición GC- XSD ( tabla 12) 15 Tabla 12 Residuos Epi durante bio-trata iento y enzima simultáneos y después de prueba acida. 20 Completo llenado con agua caliente (90°C) , -se * , inician aereación y agitación. Se agregfe cáustico hasta U , 11. > Se mantiene a 90°C por 30 minutos. il- - r * fj . Se descarga el contenido de reactor caliente/cáustico en el recipiente de SUI. (3) Limpieza de recipiente SUI: Se llena completamente con agua caliente ( 90 °C) /cáustico de reactor SU2. 10 . Se activa la aereación y agitación en recipiente SUI durante limpieza/calentamiento. Se descarga el contenido después de 60 minutos» Fí <* Se completa el llenado con agua caliente (90°C) y descarga el contenido (2° enjuague) del 15 recipiente . Salidas de recipiente de tratamiento térmico (vapor) , conectores y todas las tuberías empleadas para descarga libre. (4) Pasteurización de Crepetrol A3025: 20 . S ellena reactor SU2 con 3225L Crepetrol A3025 (26% ^ TS) y se calienta el material de alimentación a 80°C. Se inician la aereación y agitación en reactor SU2 durante procedimiento de pasteurizació - Se mantiene el material de alimentación por 15 25 minutos a 80°C.

Se descargan 175 L de A3025 (caliente) en * recipiente SUI pasteurizado. Se descargan 2000 L de A3025 (caliente) en no o varios recipientes de almacenamiento pasteurizados. Se mantienen los restantes 1050 L de A3025 pasteurizado en reactor SU2 hasta mayor uso en SU2. 4r Se interrumpen la aereación y agitación. (5) Se utiliza solo agua pasteurizada (15 min. 90°C) para la etapa de dilución en SUI. 10 (6) Se agregan cantidades apropiadas de nutrientes K4 en forma seca (ver a continuación para cantidades de nutrientes) . (7) Se prepara solución de glicerol estéril 0.5 L (161 gramos de glicerol; 500 mL; esterilizada 15 minutos a 15 121°C) . Escala ascendente 1 (SUI) : Preparación de InósUlo de Resina (1) Limpieza y pasteurización de recipientes de SUI (ver anteriormente) . (2) Se utiliza un material de alimentación pasteurizado y 20 diluido al 50% en recipientes SUI: ff Se carga recipiente en SUI con 175 L de Crepetrol A3025 pasteurizado (26% TS) y 175L de agua pasteurizada (15 min. 90°C) . (3) Se inicia la agitación. (4) Se ajusta el pH en SUI a pH 5.8 +/- 0.2 con hidróxido de sodio al 30% " |5) Se inicia al reactor de aereación (0.5 vvm) (6) Se ajusta y mantiene a temperatura en SUI a 30 + 1°C. 5 (7) Se agrega nutriente K4 en forma seca (mediante un recipiente limpio) : '*' . Componente Concentración (g/L) 350 L volumen Urea 0.33 115.5 gramos KH2P04 0.10 35.0 gramos 10 (8) Se agrega 0.5L (161 g/500ml) de solución de glícerol estéril (= 460 ppm de concentración final) . X 9) Se inocula SUI tanto con iniciador HKl y HK7 (Densidad de inoculación aplicada para HKl 1:3500 y HK7 1:700, proporción de inoculo: resina) . [Ver Ejemplo 24 para 15 preparación de cultívo iniciador concentrado) ] . (10) Muestras para medición: - OD600 cada 2 horas - valores DCP/CPD a SUI final (11) Incuba por 16-24 horas a 30 + 1°C y pH 5.8 + 0.2 * (Cuando sea necesario corregir para incrementos en (12) Transferencia a SU2 cuando: - OD500 > 0.5 o valores OD600 iniciados en meseta Escala ascendente 2 25 (1) Limpia y pasteuriza reactor SU2 (ver anterior) .

Usa 1050L de material de alimentación Crepetrol A3025 pasteuri^ado . (3) Inicia agitación. (4) Se ajusta el pH en SU2 a pH 5.8 = 0.2 con hidróxido de sodio al 30% (5) Inicia el reactor de aereación (0.5 vvm) (6) Ajusta y mantiene a temperatura en SU2 a 30 + 1°C. (7) Agrega nutriente K4 en forma seca (mediante un recipiente limpio) : 10 Componente Concentración (g/L) 1050 L volumen Urea 0.33 346.5 gramos KH2P04 0.10 105.0 gramos (8) Inocula SU2 con 350 L de cultivo SUI (densidad de inoculación 25%) por gravedad, utilizando un 15 conector/tubería, limpios y pasteurizados (ver anteriormente) . (9) Muestras para medición: - OD600 cada 2 horas - valores DCP/CPD a final de SU2 20 110 Incuba por 16-24 horas a 30 + 1°C y pH 5.8 + 0.2 (Cuando sea necesario se correge por incrementos de pH) . (n: Inicia SU3 cuando: Valores DCP/CPD < 5 ppm o cuando se incrementa el 25 nivel de Oxígeno Disuelto.

Tiempo de inc B&aión > 24 horas . Escala ascendente 3 (1) "Material de alimentación Pasteurizado" en o \?s recipientes de almacenamiento: 5 . Termo-tratamiento (con vapor) de todo el equipo empleado para mezclar material de alimentación. Ajuste pH a 5.0 + 0.2 con hidróxido de sodio al 30%. (2) Descarga el o los recipientes de almacenamiento por gravedad en el reactor SU2 (mediante conector/tubería, 10 limpios/pasteurizados (ver anteriormente) . (3) Incrementa el volumen de aereación de acuerdo con volumen incrementado (0.5 vvm) . . (4) Control agitación y temperatura (30°C = 1°C) a valores ^^ß* determinados . 15 (5) Agrega nutriente K4 en forma seca (por recipiente limpio) para incremento de volumen de 2000 L: Componente Concentración (g/L) 2000 L volumen Urea 0.33 660 gramos KH2P04 0.10 200 gramos 20 (6) Muestras para medición: - OD600 cada 2 horas - valores DCP/CPD cada 4 horas. - muestras para prueba acida al final de SU3. (7) Incuba por 16-24 horas a 30 + 1°C y pH 5.8 + 0.2 25 (Cuando sea necesario corregir por incrementos de pH) . (8) Proceso de biodeshalogénación en SU3 se completa cuando : Nivel total de [DCP] - [CPD] < 5 ppm. (9) Terminado de Productos: Adusta a pH con ácido sulfúrico concentrado a pH 3.Q + 0.2 Agrega 2000 ppm (0.2%) de sorbato de potasio Descarga producto terminado a través de filtro de 50-100 µm en tolvas o recipientes para granel, frescos. 10 Resultados: ANÁLISIS DE RESIDUOS EPI Tabla 13 : Resultados de determinación residual Epi por GC- FID.

Muestra EPI 1,3 -DCP 2, 3 -DCP 3 -CPD [ppm] [ppm] [ppm] [ppm] Material de ND 42 ND 131 15 Alimentación Crepetrol 80E Este ejemplo ND N ND ND Material de ND 38 ND 227 Alimentación • 20 Crepetrol 80E Después de Prueba Acida No Detectado tes de Detección: EPI [ppm] : 10, 1,3 -DCP [ppm] : 10, 2, 3 -DCP [ppm] : 10, 3 -CPD [ppm] : 10. 10 Ejemplo 27: Biodeshalogenación de KymeneMR SLX2 con incrementado % de TS Un matraz de 500 ml limpio y estéril se carga con 380 g de KymeneMR SLX2 (25.3% TS) que se obtiene por la planta Hercules Zwijndrecht, Holanda. El pH de la resiria V 15 *se ajustó a pH 5.8 por adición gradual (mientras que con agitación vigorosa) de 8.3 g de NaOH al 33% en solución.

Tabla 14 : Rango de dilución de RymeneX 3LX2 • F' 10 Inoculación previa, cada muestra de resina diluida se suplemento con 0.5 ml de solución nutriente esterilizada de filtro. La solución nutriente contiene los 15 siguientes componentes por L de agua demi esterilizada: 33 g de Urea, 5 g de KH2P04, 5 g de MgS04.7H20 y 1 g de CaCl2.2H20. Una muestra de 1 ml de cultivo iniciador concentrado tanto de A . histidinolovorans (?Klj y A . radiobacter (HK7) se retiró del congelador a -80°C y 20 descongeló en un baño de agua por 1-2 minutos a 30°C. Una alícuota de 20 µl de la suspensión de A . Hißtidínolovorans 3W-^ (HKl) y una alícuota de 100 µl de la suspensión de A . radiobacter (HK7) ambas se emplearon para inocular las diluciones de 50 ml descritas de KymeneMR SLX2 suplementado. 25 Después de inoculación, los cultivos se incubaron por 22 horas a 30°C en un incubador de agitación rotatoria (250 rpm; modelo G25; New Brunswick Scientific Co . , Inc. New Jersey, USA) . Se siguió el crecimiento bacteriano en tiempo y determinó al medir la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm, utilizando un espectrofotómetro Ultrospec 1000 UV/Vis (Pharmacia Biotech, Suecia) y una cubeta deseshable de 3ml con longitud de ruta de 1-cm (Tabla 8) . Las muestras se ajustaron a pH 2.8 utilizando ácido sulfúrico concentrado y se agregó ProxelMR BD al 0.1% 10 Se midieron muestras para análisis de residuos EPI (3 -CPD y 1,3-DCP) por GC (Tabla 15). Tabla 15 : Crecimiento bacterino en KymeneMR SLX2 con f incrementado %TS 15 w ' 20 - : no viscoso, similar a material de partida. + : viscoso, viscosidad incrementada en comparación con material de partida. ++: muy viscoso, viscosidad fuertemente incrementada en .comparación con material de partida. +++ : resina gelificada límite de detección 10 ppm de 1,3 -DCP 10 ppm de 3 -CPD. s Ejemplo 28: Biodeshalogenación de Kymene"11 E7220 (material tratad© con ácido) con incrementado % TS Un matraz de 500 ml limpio y estéril se cargó con " 300 g de KymeneMR E7220 (22.5% TS) obtenido de la planta Hercules Voreppe, Francia. El pH de la resina se ajustó a pH 7.0 por adición gradual (con agitación vigorosa) de 15.3 g de solución NaOH al 33%. Una serie de matraoee? cßrlenmeyer de 250 ml esterilizados se cargó con lotes « ^° ' ml de resina con incrementado % de TS . Diluciones de la resina se realizaron utilizando agua desmineralízada esterilizada (Tabla 16) . T&bla 16 : Rango de dilución de KymeneMR El 220 * Previa inoculación, cada muestra de resina diluida se suplemento con 0.5 ml de solución nutriente esterilizada con filtro. La solución nutriente contieae 20 los siguientes componentes por L de agua demi esterilizada: 33 g de Urea, 5 g de KH2P04, 5 g de MgS04.7H20 y 1 g de CaCl2.2H20. Una muestra de 1 ml de cultivos iniciadores concentrados tanto de A . histidinolovorans (?KlJ como A . radiobacter (HK7) se retira del congelador a -80°C y > *. descongela en un baño de agua por 1-2 minutos a 30°C. Una alícuota de 20 µl de la suspensión de A . Histidínolovórans (HKl) y una alícuota de 100 µl de la suspensión de A . radiobacter (HK7) ambas se emplearon para inocular las diluciones de 50 ml descritas de KymeneMR E7220 suplementado. Después de inoculasión (inicio de OD600 = 0.20B), los cultivos se incubaron por 91 horas a 30°C en un • incubador de agitación rotatoria (250 rpm; modelo G25; New Brunswick Scientific Co . , Inc. New Jersey, USA) . El 10 crecimiento bacteriano se siguió en tiempo y determinó al medir la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un espectrofotómetro Ultrospec 1000 UV/Vís (Pharmacia Biotech, Suecia) y una cuba desechable de 3 ml con longitud de ruta de 1-cm (Tabla 17) . Las muestras se 15 ajustaron en pH 2.8 utilizando ácido sulfúrico concentrado y se agregó Proxel BD al 0.1%. Las muestras se midieron por residuos EPI (3-CPD y 1,3-DCP) o análisis GC (Tabla 17) . Tabla 17 : Crecimiento bacteriamo en Kymene" E7220 don " '° incrementado % TS. -f^ ' l* « nd: no determinado -: no viscoso, similar a material de partida. i 15 +: viscoso, viscosidad incrementada en comparación aon material de partida. ++: muy viscoso, viscosidad fuertemente incrementada en ^^^ comparación con material de partida. +++: resina gelificada 20 límite de detecsión 10 ppm de 1,3-DCP 10 ppm de 3 -CPD.

Ej emplo 29 : Biodesjlai donación de Kymene1111 736 (resina basada en 15 -20% en ua lote de 50 ml . - Ky eneMR 736 (CrepetrolMR 73) dé resina auxiliar de cedencia gradual, (39.6% TS como se recibe), una resina de poliamma/azétidmio disponible de Hercules Incorporated Francia, un matraz de 250 ml limpio y esterilizado se cargó , con 100 g de KymeneMR 736 (39.6% TS) y el pH de la res a se 10 ajustó a 7.0 por adición gradual (mientras que con mezclado vigoroso) de una solución de NaOH al 33%. Dos matraces Erlenmeyer de 250 ml estériles se cargaron con un lote de » JF 50 ml de resma diluida ya sea a 15 o 20 % de TS. Diluciones de la resina se realizaron utilizando agua 15 des ineralizada esterilizada (Tabla 18) . Tabla 18 : Rango de dilución de KymeneMR 736 20 Previa inoculación, cada muestra de resina diluida se suplementa con 0.5 ml de solución nutriente esterilizada de filtro. La solución nutriente contiene los siguientes componentes por L de agua demi esterilizada: 33 g de Urea, 5 g de m mt , 5 g dé MgS04.7HaF y 1 g a CaCl2.2H20. Una muestra de 1 ml de ultivos » iniciadores concentrados tanto de A . histidinolovorans "• d?Klj y ,4- radaobacter (HK7) se retira del congelador a -80°C y * descongela en un baño de agua por 1-2 minutos a 30°C.' U?ia alícuota de 50 µl de la suspensión de A . Histítiinolovoréns (HKl) y una alícuota de 200 µl de la suspensión de A . radiobacter (HK7) ambas se emplearon para inocular las diluciones de 50 ml dessritas de Kymen@MR 736 suplementado. 10 Después de inoculación, los cultivos se incubaron por 43 horas a 30°C en un incubador de agitación rotatoria (250 rpm; modelo G25; New Brunswick Scientific Co . , Inc. N w Jersey, USA) . Crecimiento bacteriano se iguió en tiempo y determina al medir la densidad óptica a una longitud de 15 onda de 600 nm utilizando un espectrofot6metro Ultrospec 1000 UV/Vis (Pharmacia Biotech, Suecia) y una cuba desechable de 3 ml con longitud de ruta de 1-cm (Tabla 19) . Las muestras se ajustaron en pH 2.8 utilizando ácido sulfúrico concentrado y Proxel BD se agregó. JF? Tabla 19: Crecimiento bacteriano en Kymene*111 736- con incremento % TS • nd: no determinado 10 Ejemplo 30: Biodeshalogenación de KymeneMR 736 a 20% TS en un lote de 2 L de KymeneMR 736 (CrepetrolMR 73) resina auxiliar de cedencia gradual (39.6% TS como se recibe), una resina basada en poliamina/azetidinio disponible de Hercules Incorporated (Wilmington, DE) , se obtiene de la 15 planta Voreppe, Francia. Un bioreactor: 2.5 L limpio y estéril (bioreactor BioFlo 3000, controlado por soporte (, lógico AFS-BioCommand; New Brunswick Scíentífic Co . , Inc., New Jersey, É.U.A.) se cargó con 1010 ml de resina KymeneMR 736 (39.6% TS) y 990 ml de agua desmineralizada estéril. 20 La res a diluida (20% TS) se ajustó a pH 7.0 con una solución NaOH concentrada (33%) , suplementada con 20 ml de solución nutriente y PPG2000 0.0025% (antiespuma). La solución nutriente contiene los siguientes componentes por •> L de agua demi esterilizada: 33 g de Urea, 5 g de KH2P04, 5 25 g de MgS04.7H20 y 1 g de CaCl2.2H20. Alícuotas de cultivos iniciadores A . histidinolovorans (?Kl y A . radiobacter (HK7) se retiraron del congelador a -80°C y "descongelaron en un baño de agua por 1-2 minutos a 30°C. Una muestra de 2 ml de la suspensión de A . Histidinolovorans (HKl) y una muestra de 8 ml de la suspensión de A . radiobacter (HK7) , se utiliza para inocular simultáneamente el contenido del bioreactor de 2.5L. Ajustes de parámetros de la unidad de control de bioreactor, operados en modo por lotes fueron como sigue: pH controlado a 7.0 (PID de adición controlada de solución de NaOH al 25%) " Temperatura controlada a 30°C Velocidad de agitador 600 rpm (velocidad máxima de 800 rpm; mediante valor DO controlado) "Aereación ajustada a 1.0 vvm (2.0L/min; aire comprimido) , ajuste de valor DO mínimo a 5% de saturación de aire Remoción completa de residuos epi del bioreactor del contenido del bioreactor se verifica en tiempo, mediante análisis con cromatografía de gas (GC-XSD; Tabla 20) . Después de un tiempo de incubación total de 48 horas, el cultivo de lotes se terminó. El pH de la resina biodeshalogenada se ajustó a 2.8 utilizando ácido sulfúrico concentrado y la yesrülf se suplement con sor ato e potasio al 0.02% y Proxel DB a^f.1 %. Tabla 20: Residuos <-rp-fi y crecimiento !b $be$ aft¿ ®& Kymene*1* .1 736 a 20% 'TS. l * 10 *^ß * : no determinado EJEMPLO 31 - Tratamiento con AlcalaseMR de re ana basada en 15 amina terciaria. Se ha empleado el siguiente procedimiento para promover formación de 3 -MCPD por hidrólisis de las especies clorohidrma ligadas a polímero en CrepetrolMR A3025 (Hercules Incorporated, Wilm gton, DE) . Una muestra de 191.88 g de CrepetrolMR A3025, que no contiene conservadores agregados, se colocó en un matraz de vidrio de 250 ml , proporcionado con una tapa roscada sellada de plástico. El peso de la muestra se midió con una báscula digital de Mßttler Laboratory con una precisión *'de ±0.005 g. La concentración de sólido total de CrepetroJ.858 A3025 se determinó en un experimento separado que mide la , pérdida de peso después de 15 minutos a 150°C. La concentración de sólidos total de muestra se encontró qúfe pH se ajustó cuidadosamente a 7.00 con una " Solución NaOH 10% p/p (total 12.52 g) , mientras que se agitan con un agitador magnético, verificando el pH con un "•-medidor de pH Mettier (MP 220) , equipado con un electrodo InLab (electrodo de combinación, referencia interna ARGENTHAL con trampa de ion Ag) . El medidor de pH se calibra para el rango 7.00-10.00, antes del ajuste de pH. La muestra se colocó en un baño de fusión de hielo (0°C) . 0.9 g de AlcalaseMR 2.5 L DX (que se obtiene de Novozymes) se agrega a la muestra de CrepetrolR A3025. El matraz luego se coloca en un baño termostático de agitación horizontal (200 golpes/min.) a 25°C y se deja en agitación por 14 horas. Después de 14 horas, la muestra se retira y el pH se ajusta con H2S04 conc. a 3.5. Una muestra de material original (CrepetrolMR A3025) y una muestra de material después de tratamiento izando una técnica de .*í edir su contenido de 3- monocloropropandiol _¡ La cantidad de 3-monocloropropand£c£l pro ucid La viscosidad reducida de la muestra final 10 también se mide utilizando un capilar Ubbelohde a 25°C. Una solución al 2% en Cloruro de Amonio ÍN se prepara y el i tiempo para circular a través del capilar se mide. El tiempo de flujo de la solución de Cloruro de Amonio se mide por igual . Se calcula viscosidad reducida de acuerdo con 15 la ecuación: * RSV [dl/g] = { (tiempomuestra [seg/tiemposolvente [seg]) - l}/- Cónsrauestra [g/100 ml] Los resultados para liberación de CPD fueron los siguientes : '20 3 -MCPD liberado [ppraj = Conc . después de tratam?ent0 [ppm] - Conc . lBlClßl •í [ppm] = 182 - 101.9 = 80.1 ppm. En la siguiente página se reporta una tabla que muestra los resultados de una serie de experimentos que é,e realizaron con este procedimiento, cambiando las 10 ' ' 15 20 25 188»*** signifitíante, de manl^^Bl' que s á nnos verificar si era detectable cualquiera caída ir btfcan e en la adhesión. - % La-Prueba de desprendimiento se mide &1 impregna . urta tira* "de tela en una solución al 2% de sólidos cfel , 5 auxiliar de cedencia gradual y luego curar la tira por 7.5 * minutos a 92°C en contacto con una placa de metal estándar $> (acero suave) . La fuerza promedio para desprender la tira de la placa se mide utilizando una máquina de prueíba, universal Zwick005. 10 Los resultados se trazan contra la variación de viscosidad observada después del tratamiento con enzima. 1 " Es claramente visible que la adhesión de la muestra se distribuye aleatoriamente (con una oscilación debida a variación experimental) , independientemente del cambio 15 observado en viscosidad. Además, todos los valores se distribuyen alrededor del valor típico para el material no tratado (0.75-0.8 N/cm) . Estos resultados indican que el tratamiento de 20 enzima no provocan ningún incremento mesurable en la resistencia de adhesión del polímero. > , 184 Pasteurización: Un pfetsr&fs de fondo redondo de 2-L se adapta con un condensador, baño de circulación de temperatura controlada y agitador mecánico. Al matraz se a egan 17*80 g de la resma al 18.9%. La resina tuvo un pH-de 4.6 y se calentó durante 1 hora de 25°C a 85°C. La resina se mantuvo a 85°C por 20 minutos y luego enfrió a 25°C en 45 minutos. La resma pasteurizada se almacena en un recipiente estéril . Biodeshalogenación: Preparación de inoculo de resina | 10 [Escala ascendente 1 (SUI)] : Un matraz de fondo redondo de 250 mL se adaptó con un condensador, medidor de pH, baño de ctirculación de temperatura controlada, tubo de burbujeo de aire y agitador mecánico. Una porción de la res a pasteupzada se diluye a 10% con agua desionizada estéril. 15 Al matraz se agregan 198 g de esta resina al 10% y 2.0 g de glicerol estéril 5 mM en solución de agua. El pH se eleva a 5.8 con 3.18 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego se agregan 68 microlitros de cultivo de inicio o de arranque concentrado HKl (1.3000, HKl a resina). [Ver SQ Ejemplo 24 para preparación de cultivo de inicxo • concentrado] y se agregan 1.75 g de una solución nutriente. (La solución nutriente consiste de 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en ágata 25 corriente) . Se inició el burbujeo de aire, la temperatura se mantuvo a 30°C. ?-1 crecimiento bacteriano se verifica por densidad óptica (OD500) y la biodeshaloíjenación s-e verifica por GC. OD400 se determina al medir la densidad «,* % *** óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronicsMR Genesys™ UV/Vís (Spectronic Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.), y una cuba desechable con una longitud de ruta de 1-cm. , < Después de 17 horas, la resina resultante se emplea co o inoculo para SU2. 10 Escala Ascendente 2 (SU2) : Un matraz de fondo redondo de 250 mL, se adapta con un condensador, un medidor de pH, un baño de 4* circulación de temperatura controlada, Un tubo de burbujeo de aire y agitador mecánico. Al matraz se agregan 150 g de 15 resina 18.9% pasteurizada. El pH se eleva a 5.8 con 4.52 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego se agregan ,50.0 g de inoculo de resina SUI (25% de velocidad de inoculación) y se agregan 1.31 g de una solución nutriente. (La solución nutriente consiste de 8026 ppm de díhidrógeno 20 fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua corriente) . Se inició el burbujeo de aire, la temperatura se mantuvo a 30°C. El crecimiento bacteriano se verifica por densidad óptica (OD600) y la biodeshalogenación se 25 verifica por GC. OD600 se determina al medir la densidad i $X "í óptica a una longitud de onda de 600 nm Utilizando un espectrofotómetro SpectronicMR UV/Vís Spectron;c Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.), y una cuba desechable con una longitud de ruta de 1-cm. 5 Después de 8 horas, la resina resultante se utilizó corrió * . inoculo para SU3. ascendente 3 (SU3) : Un matraz de fondo redondo de 250 mL se adaptó con un condensador, un medidor de pH, un baño de 10 circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y agitador mecánico. Al matraz se agregan 150 g de resina 18.9% pasteurizada. El pH se eleva a 5.8 con 4.45 J!VT * g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 50.0 g de inoculo de resina SU2 se agregan (25% de velocidad de 15 inoculación) y 1.31 g de una solución nutriente se agregan. (La solución nutriente consiste de 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato s.de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua 4 corriente) . Se inició el burbujeo de aire, la temperatura 20 se mantiene a 30°C. El crecimiento bacteriano se verifida por densidad óptica (OD500) y la biodeshalogenación se verifica por GC. OD600 se determina al medir la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronicMR Genesys^ UV/Vis (Spectronic 25 Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.) , y una cuba gitud de ruta de 1-tím.

Después de 14.5 horas, la res na resultante §¡e utiliáa cc|nfd inoculo para SU4. £»a res a ralb n e no empleada para el inoculo se descarta, pero pudtrtiberse e plea o para daír el producto obtenido . f " Escala ascendente 4 (SU4) : , r« Un matraz de fondo redondo t$ S O ífL se adapta con un condensador, un medidor de pH, Un baño de circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo 10 de aire y agitador mecánico. Al matraz se agregan 300 g de resina 18.9% pasteurizada. El pH se eleva a 5.8 con 8.94 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 100.0 g de i inoculo de resma SU3 se agregan (25% de Velocidad de inoculación) y 2.62 g de una solución nutriente se agregan. 15 (La solución nutriente consiste de 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de caldio en agua corriente) . Se inició el burbujeo de aire, la temperatura , se mantiene a 30°C. El crecimiento bacteriano se verifica 20 por densidad óptica (OD600) y la biodeshalogenación Se ^^ r verifica por GC. OD600 se determina al medir la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un '" ' espectrofotómetro SpectronicMR GenesysM UV/Vís (Spectron?o Instruments, Incorporated, Rochester,. New York, E.U.A.) , y 2S una cuba desechable con una longitud de ruta de 1-cm.

Después de 8 horas, L aesina resultante se utiliza inoculo para SU5. La resina restante no empleada pacía inoculo se descarta, pero pudo haberse empleado- para dar u t producto terminado . Escala ascendente 5 (SU5) : Un matraz de fondo redondo de 500 mL se adapta con un condensador, un medidor de pH, un baño de circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y agitador mecánico. Al matraz se agregan 300 g eje resina 18.9% pasteurizada. El pH se eleva a 5.8 con 8.95 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 100.0 g de inoculo de resina SU4 se agregan (25% de velocidad de inoculación) y 2.62 g de una solución nutriente se agregad.

(La solución nutriente consiste de 8026 ppm de dihidrógesií 15 fosfato de potasio, 27430 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en aga^ corriente) . Se inició un burbujeo de aire, la temp ratura se mantuvo a 30°C. El crecimiento bacteriano se veí?fi' ^ por densidad óptica (OD60o) Y la biodeshalogenacíón s¡& 20 verifisa por GC. OD600 se determina al medir la densidad ' óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronicMR Genesys^ UV/Vis (Spectronic Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.), y una cubeta desechable con una longitud de 1-cm. Después de 25 15.5 horas, la resina resultante se utiliza como inoculo' el inoculo se convierte al producto terminado al redusir el pH 4.7 cforí ácido fosfórico 85% y agregando 2000 ppra de sorbato *de -potasio como biocida. 5 Escala ascendente 6 (SU6) . " Un matraz de fondo redondo de* 500 plL se adapta con un condensador, un medidor de pH, un baño de F?FF' circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y un agitador mecánico. Al matraz se agregan 300 10 . g de resina 18.9% pasteurizada. El pH se eleva a 5.8 aon 8.84 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 100.0 g -f de inoculo de resina SU5 se agregan (25% de velocidad de inoculación) y 2.62 g de una solución nutriente se agregan. (La solución nutriente consiste de 8026 ppm de díhidrógeno 15 fosfato de potasio, 27430 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calGio en agua corriente) . Se inició el burbujeo de aire, la temperatura se mantuvo a 30°C. El crecimiento bacteriano se verifica por densidad óptica (OD600) Y l biodeshalo?jenacíón se * ,. 20 verifica por GC. OD600 se determina al medir la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronicMR Genesys™ UV/Vis (Spectronic Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.), y una cuba desechable con una longitud de ruta de 1-cm. producto terminado al reducir el pH a , ,.7 don 7.20 g de ácido fosfórico al 85% y agregar 2000 tn de sorbato de potasio (7.11 mL de sorbato de potasio acuoso al 10% en peso) como biocida. ' 5 Ver Tabla 23 para el resultado de verificar o monitoreo de tratamiento . Tabla 23 : 15 $0 F F 10 fe»! Escala ascendente 4: 300 g de Crepetrol 870 18.87%, Muestra X33047-47-1 X33047-47-2 X33047-47-3 ,*»- Ejemplo 34: Prueba de Adhesión para en es* de Cedenaáfa *Gradual Un dispositivo para evaluar las propiedades adhesivas de adhesivos de cedencia gradual potenciales, se ha construido. Este aparato consiste de un bloque de hierro fundido calentado, que se monta en el accionador de un instrumento de psvéia MTS. Esta platina se calienta a 120 °C. Una muestra de papel se ccfpfécta a la plantila superior de la celda de carga del instrumento de prueba, con cinta de doble lado adhesivo. Para realizar la prueba, 5 una cantidad conocida de una solución acuosa de adhesivo de cedencia gradual con una concentración conocida, se rocía sobre el bloque calentado. Esto se logra al utilizar uíl t cepillo de aire que -Se ha adaptado con una botella de rocío tvolumétrico. La botella de rocío volumétrico permite medir 0 exactamente el volumen de solución que se va aplicar a la platina de prueba. Nuestras condiciones de prueba estándar utilizan un volumen de 1.2 mL de una solución acuosa de 4.0% de sólidos. El pH de la solución puede ser ambiente o puede ajustarse a 7.0 antes de prueba. Después de que la 5 solución de resina se rocía sobre el bloque calentado, e'l accionador se sube para contactar el bloque calentado con la muestra de papel con una fuerza de 10 kg. El accionador luego se baja y se mide la fuerza para desprender la * platina del papel que ha contactado. Esta fuerte medida es 0- .Jel valor del adhesión de la resina particular probada. Ya que la fuerza aplicada no siempre es exactamente de 10 kg, íi el valor de adhesión se normaliza para tomar en cuente ligeras variaciones en la fuerza aplicada. Esto se logara al multiplicar el valor de adhesión medido por [10/ (fuerza 5 aplicada en kg) ] . El papel utilizado para prueba es una hoja de 18.16 kg (40 libras) de peso base preparada a partir de materia prima Kraft lixiviada de madera dura/madera blanda 50/50. La siguiente tabla contiene la prueba de adhesión y datos de viscosidad Brookfield. tabla 24 10 15 Los datos en esta tabla indican que la presente invención tiene pruebas de adhesión y viscosidad comparables con resinas no tratadas, indicando que el - * desempeño de las resinas biodeshalogenadas es comparable FSFG con las resinas que no fueron biodeshalogenadas. 20 Ejemplo 35: Biodeshalogenación de Alcalase de Crepetrol*™1 870 (ver Tabla 25 para datos y detalles) Una porción de Crepetrol"15 870 sin biocida (disponible de Hercules l?ftington, DE; * Voreppe, planta de Francia) se diluyó a 18.7% total de sólidos con agua desionizada. Esta resina diluida tuvo una ? viscosidad Brookfield de 53 cps. Pasteurización: Un matraz de fondo redondo de 2 JL, *s • se adaptó con un condensador, baño de circulación de temperatura controlada y agitador mecánico. Al matraz se agregaron 2942 g de la resina al 18.7%. La resina tuvo un 10 pH de 4.6 y se calentó durante 1.5 horas desde 25°C a 85°C. ? La resina se mantuvo a 85°C por 20 minutos y luefo enfrió • a 25°C en 20 minutos. La resina pasteurizada se almacenó en un recipiente estéril.

Biodeshalogenación: Preparación de inoculo de* 15- resina [Escala ascendente 1 (SUI)] : Un matraz de fondo redondo de 250 mL se adaptó con un condensador, un medídqr de pH, baño de circulación de temperatura controlada, t?b,o ^de burbujeo de aire y agitador mecánico. Una porción de la - resina pasteurizada se diluyó a 10% con agua , desionizada -20 -^estéril. Al matraz se agregan 198 g de esta resina al 10% '9 y 2.0 g de glicerol estéril 5 mM en solución de agua. Bl ' pH se elevó a 7.2 con 8.31 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 68 microlitros de cultivo iniciador * concentrado HKl se agregaron (1:3000, HKl a resina) [Ver 25 Ejemplo 24 para preparación de cultivo iniciadtír concentrado] y 1 . 75 g agregaron. (La solución ' dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4169 p$i ' de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio fl ; 5 agua corriente) . Se inició el burbujeo de aire, $a temperatura se mantuvo a 30°C. El crecimiento bact ría?lfo , p al medir la densidad óptica a una longitud de onda de 600 10 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronicMR Gehesys*41* UV/Vis (Spectronic, Instruments, Incorporated, Rochester New York, E.U.A.), y una cuba desechable con longitud de ruta de 1-cm. Después de 16 horas, la resina resultante se empleó como inoculo para SU2. 15 Escala ascendente 2 (SU2) : Un matraz de fondo redondo de 250 L se adaptó con un condensador, un medidor de pH, baño de circulación de temperatura controlada, tubo de burbujeo de aire y agitador mecánico. Al matraz se agregan 150 g de la re id 20 al 18.7% pasteurizada. El pH se elevó a 7.2 con 10.97 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 1.02 g de Alcalase 2.5L tipo DX (disponible de Novozymes), 50.0 g de inoculto de resina SUI (25% de velocidad de inoculación) y 1.31 g de una solución nutriente se agregaron. (La solución 25 nutriente consistió de 8026 ppm de dihídrógeno fosfato <de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de Sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua corriente) . Bl f burbujeo de aire se inició, la temperatura se mantuvo "a 30°C. El crecimiento bacteriano se verificó por densidad 5 óptica (OD600) Y la biodeshalogenación se verificó por GG. OD600 se determina al medir la densidad óptica a lina longitud de onda de 600 nm utilizando un espectrofotómetro F' SpectronícMR GenesysMR UV/Vis (Spectronic, Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.), y una cuba 10 desechable con longitud de ruta de 1-cm. Después de 8 horas, la resina resultante se emplea como inoculo para SU3. "( Escala ascendente 3 (SU3) : F Un matraz de fondo redondo de 250 mL, se adaptó 15 con un condensador, un medidor de pH, baño de circulación de temperatura controlada, tubo de burbujeo de aire y agitador mecánico. Al matraz se agregan 150 g de la resiria 18.7% pasteurizada. El pH se elevó a 7.2 con 11.42 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 0.87 g Alcalase 20 2.5L tipo DX (disponible de Novozymes), 50.0 g del inoculo ^^ de resina SU2 (velocidad de inoculación al 25%) y 1.31 g de una solución nutriente, se agregaron. (La solución nutriente consistió de 8026 ppm dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio 25 ry 840 ppm de cloruro de calcio en agua corriente) . %1 burbujeo de aire se n c , a temperatura se mantuvo a 30°C. Él crecimiento bafcteriano se verificó f>or densídá-4 * óptica (OD600) Y Ia biodeshalogenación se verificó por GQ . * OD600 se determina al medir la densidad óptica a una , 5 longitud de onda de 600 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronicMR GenesysMR UV/Vis (Spectronic, Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.), y una cutía desechable con longitud de ruta de 1-cm. Después de 14 horas, la resina resultante se utiliza como inoculo para 10 SU4. La resina restante no utilizada para inoculo Se descartó, pero pudo haberse empleado para dar el producto terminado . Escala ascendente 4 (SU4) : Un matraz de fondo redondo de 500 mL se adaptó 15 con un condensador, un medidor de pH, baño de circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y agitador mecánico. Al matraz se agregan 300 g de la resina 18.7% pasteurizada. El pH se elevó a 7.2 con 22.17 g e hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 1.73 g de Alcalase 20 2.5L tipo DX (disponible de Novozymes) , 100.0 g del inoculo ^?P-r de resina SU3 (velocidad de inoculación 25%) y 2.62 g de una solución nutriente se agregaron. (La solución nutriente consistió de 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio 25 y 840 ppm de cloruro de calcio en agua corriente) . El burbujeo de aire se inició, la temperatura se mantuvo a 30°C. El crecimiento bacteriano se verificó por densidad óptica (OD60o) y la biodeshalogenación se verificó por GC. f OD600 se determinó al medir la densidad óptica a una 5 longitud de onda de 600 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronícMR GenesysMR UV/Vis (Spectronic, Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.) , y una cuba desechable con longitud de ruta de 1-cm. Después de 8 horas, la resina resultante se empleó como inoculo pana 10 SU5. La resina restante no empleada para inoculo se convirtió en producto terminado al reducir el pH a 4.7 con ácido fosfórico a 85% y agregando 2000 ppm de sorbato de ípotasio como biocida.

Escala ascendente 5 (SU5) : 15 Un matraz de fondo redondo de 500 mL, se adaptó con un condensador, un medidor de pH, baño de circulación de temperatura controlada, tubo de burbujeo de aire y agitador mecánico. Al matraz se agregan 300 g de la resina , al 18.7% pasteurizada. El pH se elevó a 7.2 con 22.77 g de 20 hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 1.73 g de Alcalase 2.5L tipo DX (disponible de Novozymes) , 100.0 g del inoculo de res a SU4 (velocidad de inoculación 25%) y 2.62 g de una solución nutriente se agregaron. (La solución nutriente consistió de 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de 25 potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio A y 840 ppm de cloruro de calcio en agua corriente) . burbujeo de aire se inició, la temperatura se mantuvo 'a * --- 30°C. El creé?miento bacteriano se verificó por densidad Un matraz de fondo redondo de 500 raL se dap ó l? 2- con un condensador, un medidor de pH, baño de 1 circulación . ,4de resina SU5 (velocidad de inoculación 25%) *y 2.62 g de ''iiaa solución nutriente, se agregaron. (La solución 25 * nutriente consistió de 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de : *#„"« << 20g i ' *r% Itpot^sio, 27480 ppm de» urea, 4160 ppm*de ¡Salía fcp dé magnesio ^ OD600 se determina al medir la densidad óptica a una 15 biocida. Ver Tabla 25 para resultados de Verificación del .•tratamiento. Hay que notar que utilizandf esta velocidad * de inoculación, el lote SU6 no se biodeshalogeno ., completamente en un tiempo de reacción de 8 horas . ün , experimento lado-por-lado con los mismos tiempo de reacción utilizando una velocidad de inoculación de 33% en el lote * SU4 y una velocidad de inoculación de 50% en los lotes Stt5 4»y SU6 proporcionan una completa biodeshalogenación en el lote SU6 (ver Tabla 26) . Tabla 25 A4 10 JJfe- ) Escala ascendent ' 3 : 150 g de! rt €Ítarol 87Q 18.73%, 50. g -64, 0.87 g de Alcalase, 1.31 g de polución Muestra X33047-66-1 X33047-66-2 ~ * ;J*.3 Tabla 26 ,»-% -4» O ff 20 templo436: A6115 ( ßr fSá^la BS4 pata datos y detalles) . Una porción de agente de cedenóía gradual CrepetrolMR A6115 sin biocida (disponible de Hercules , ?ncorporated, Wilmíngton, DE; Milwaukee, planta de Wisconsin) se filtró a través de un tamiz malla 100. La resma tuvo 15.73% total de sólidos, un pH de 5.1 y una ?, viscosidad Brookfíeld de 86 cps. Pasteurización: Un matraz de fondo redondo de 3-L Se adaptó con un condensador, un baño con circulación controlada de temperatura y un agitador mecánico. Al matraz se agregaron 2770 g de la resma. La resina se calentó sobre 1.5 horas de 25°C a 85°C. La resina se mantuvo a 85°C por 20 minutos y luego enfrió a 25°C en 30 15 minutos. La resina pasteurizada se almacenó en un recipiente estéril. Biodeshalogenación: Preparación de inoculo de res a [Escala ascendente 1(SU1)] : Un matraz de fondo fe- redondo de 250 mL se adaptó con un condensador, un medidor «de pH, baño de circulación de temperatura controlada, un **tubo de burbujeo de aire y un agitador meóánico. Una - porción de la resina pasteurizada se diluye a 10% con agua desionizada estéril. Al matraz se agregan 198 g de esta resina al 10% y 2.0 g de glicerol estéril 5 mM en solución 25 de agua. El pH se eleva a 6.0 con 1.04 g de hidróxido de * ^ ?£ t, sodio acuoso al 30% y luego 133 mifrolitros de cultivo iniciador de concentrado HKl se agregan (l1; 1500, HKl a _ resina) [Ver Ejemplo 24 para preparación de cultivo ..iniciador concentrado] y 1.75 g de una solución nutriente * se agregan. (La solución nutriente consiste de 8026 ppm de 'dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm , de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calsio en , agua sorriente) . Se inició el burbujeo de aire, la temperatura se mantuvo a 30°C. El crecimiento bacteriano XQ se verificó por densidad óptica (OD600) y la * biodeshalogenación se verificó por GC. OD600 se determinó al medir la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronícMR GenesysMR UV/Vis (Spectronic, Instruments, Incorporated, Rochester, 15 * New York, E.U.A.), y una cuba desechable con longitud de ruta de 1-cm. Después de 16 horas, la resma resultante se empleó como inoculo para SU2. Escala ascendente 2 (SU2) : Un matraz de fondo redondo de 250 mL se adaptó 2 con un condensador, un medidor de pH, un baño de cirsulasión de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y un agitador mecánico. Al matraz se agregan 15«D 'g de la resina pasteurizada. El pH se elevó a 5.8 con 0.96 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 50.0 g del m 5 inoculo de resina SUI se agregan (25% de velocidad de 'i. * inoculación) y 1.31 de uilá solución nutriente se agregan. (La solución nu ri sen consiste de 8021 -ppm de dihidrógemo fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua corriente) . El burbujeo de aire se inició, la temperatura se mantuvo a 30 °C. El crecimiento bacteriano se veríficía verifica por GC. OD500 se determina al medir la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronicMR GenesysMR UV/Vis (Spectronic?, Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.), y una cuba desechable con longitud de ruta de 1-cm. Después de 8 horas, la resina resultante se emplea como inoculo para SU3. m Escala ascendente 3 (SU3) : Un matraz de fondo redondo de 250 raL se adapta con un condensador, un medidor de pH, un baño con -9. circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y un agitador mecániso. Al matraz se agregan 15O Jg de la resina pasteurizada. El pH se eleva a 5.8 con 0.96 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 50.0 g del inoculo de resina SU2 se agregan (25% de velocidad de inoculación) y 1.31 g de una solución nutriente se agregan. (La solución nutriente consiste de 8026 ppm de dihidrógeno 5 fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en a^gua corriente) . Se inició el burbujeo de aire, la temperatura se mantiene a 30°C. El crecimiento bacteriano se verifica por densidad óptica (ODg00) Y la biodeshalogenación se 5 verifica por GC. OD600 se determina al medir la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronicMR GenesysMR UV/Vis (Spectronic, • Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.), y una cuba desechable con longitud de ruta de 1-cm. Después 10 de 14.5 horas, la resina resultante se emplea como inoculo para SU4. La resina restante no empleada para el inoculo se descarta, pero pudo haberse empleado para dar el producto terminado. *ff Escala ascendente 4 (SU4) : 15 Un matraz de fondo redondo de 500 mL se adapta con un condensador, un medidor de pH, un baño con circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y un agitador mecániso. Al matraz se agregan 300 g de la resina pasteurizada. El pH se eleva a 5-8 con 1.40 26 g de hidróxido de sodio acuoso a 30% y luego 100.0 g de inoculo de resina SU3 se agregan. (25% de velocidad de inoculación) y 2.62 g de una solución nutriente se agregan. (La solución nutriente consistió de 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato 25 de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua *¥ corriente) . Se inició» el burbujeo de aire, la ^temperatura se mantuvo a 30QC. lll crecimiento ha^tfjrjuano se verifitía ** por densidad óptica (OD600) y la bíodeshalbgenación s^e verifica por GC. OD600 se determina al medir la densidad Óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un * espectrofotómetro SpectronicMR GenesysMR UV/Vis (Spectronic, f Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.), y una cuba desechable con longitud de ruta de 1-cm. Después *J de 8 horas, la resina resultante se emplea como inoculo 10 para SU5. La resina restante no empleada para inoculo se descarta, pero pudo haberse empleado para dar el producto terminado. * "** Escala ascendente 5 (SU5) : Un matraz de fondo redondo de 500 raL se adaptó %£ con un condensador, un medidor de pH, un baño con circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y un agitador mecánico. Al matraz s® agregan 300 • g de la resina pasteurizada. El pH se eleva a 5.8 con 1.69 f g de hidróxído de sodio acuoso al 30% y luego 100.0 g del inoculo de resina SU4 se agregan (25% de velocidad de inoculación) y 2.62 g de una solución nutriente se agregan.

(La solución nutriente consiste de 8026 ppm de dihidrógerto fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua 25 corriente) . Se inició el burbujeo de aire, la temperatura *se mantiene a 30°C. El crecimiento bacteriano se verifica r or densidad óptica, (OD600) y la bÍ9&e¿¡stealo|enación se verificó por GC. OD600 se determina al* ?aedir 5- densidad* f "Vóptica a una longitud de onda de 600 * Utilizando un * espectrofotómetro SpectronicM Genesys1*1 UV/Vis y una cuba desechable con una longitud de ruta de 1 cm. Después de 15 horas, la resina resultante se empleó como inoculo para -SU6. La resina restante no empleada para inoculo se convierte en producto terminado al reducir el pH en 5.3 con L ácido sulfúrico concentrado (96%) y agregar 2000 ppm de » sorbato de potasio como biocida. Escala ascendente 6 (SU6) : Un matraz de fondo redondo de 500 mL se adapta * * y con un condensador, un medidor de pH, un baño de circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y un agitador mecánico. ,A1 matraz se agregan 300 g de la resina pasteurizada. El pH_ se eleva a 5.8 con 1.82 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 100.0 g del inoculo de resina SU5 se agregan (25% de velocidad de ^inoculación) y 2.62 g de una solución nutriente se agregan. (La solución nutriente consistió de 8026 ppra de dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua corriente). Se inició el burbujeo de aire, la, temperatura 2"5 se mantiene a 30°C. El crecimiento bacteriano se verifica por densidad óptica (OD600) Y la bíodesf?al, enación 4 '-^¿i. ** ' 'Í- ^X , , r.. , ~ ~„ -*#. J» .««verifico por GC OE^oo se determina al medir la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronicMR Genesysw UV/Vis " (Spectronic Instruments, Insorporated, Rochester, New York E.U.A.) y una cuba desechable con una longitud de ruta de 1 cm. Después de 8 horas, la res a resultante se convierte en producto terminado al reducir el pH 5.3 con 0.73 g de ácido sulfúrico concentrado (96%) y agregar 2000 ppm de sorbato 10 de potasio (7.6 mL de sorbato de potasio acuoso al 10% en peso) como biocida. Ver Tabla 27 para los resultados de monitoreo de tratamiento . Tabla 27 je Escala ascendente 1: 198 g de Crepetrol A6115 10% (pasteurizado), 2 g de glicerol 0.5 M, 133 microlitros de HKl (1:1500, inoculo de resina), 1.75 g de solución nutriente, Muestra Tiempo pH ViscoOD 600 NaOH DCP CÍ>D (ho(30C) sidad (abs.) 30*1 , (ppm) (ppm) ras) Gardner (g) 20 0 5.96 1.04 1.7 30 X32989- 0.25 5.95 0.059 ND 30 68-1 10 15 '*1S - Pasteurización; Un araz de fondo redondo de 3-L ^se adaptó con un condensador, un bafió de circulación de ítt6f emperatura controlada y agitador mecánico. Al matraz se * agregan 2770 de la resina. La resina se calienta durante 'l.5 horas de 25°C a 85°C. La resma se mantuvo a 85°C por ?*20 minutos y luego enfrió a 25°C en 30 minutos. La resina pasteurizada se almacenó en un recipiente estéril. Biodeshalogenación: Preparación de inoculo de resina [Escala ascendente l(SUl)]: Un matraz de fondo 10 redondo de 250 mL se adapta con un condensador, un medidor «"de pH, baño de circulación de temperatura controlada, xx?x r tubo de burbujeo de aire y un agitador mecánico. Una porción de la resina pasteurizada se diluye a 10% con agua desionizada estéril. Al matraz se agregan 198 g de esta »^ resina al 10% y 2.0 g de glicerol estéril 5 mM en solución ¡t de agua. El pH se eleva a 7.2 con 2.65 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 0.62 g de Alcalase 2.5L tipo DX (disponible de Novozymes) y 133 microiítros de cultivo iniciador concentrado HKl se agregan (1:500, HKl a resina) 20 [Ver Ejemplo 24 para preparación de cultivo iniciador concentrado] y 1.75 g de una solución nutriente se agregan.

(La solución nutriente consiste de 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppra de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua 2^ corriente) . Se inició el burbujeo de aire, la temperatura . * #J*Í 22Í \ dr vepfisa por GC. ? 6ß0 ® dete'rraina al * medir la d nsi a óptisa a una longitud de onda de 600 nm utilizando ti espectrofotóáetro SpectronicMR GenesysMR UV/Vis (Spectronic, 'Instruments, Incorporated, Rochester, New York, E.U.A.), y una cuba desechable con longitud de ruta de 1-cm. Después de 8 horas, la resina resultante se emplea como inoculo para SU3. Escala ascendente 3 (SU3) : Un matraz de fondo redondo de 250 mL se adaptó 10 con un condensador, un medidor de pH, un baño de circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y un agitador mecánico. Al matraz se agregan 150 g de la resina pasteurizada. El pH se eleva a 7.2 con 3.02 * ' g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 0.73 g de 15 Alcalase 2.5L tipo DX (disponible de Novozymes), 50.0 g del inoculo de resina SU2 (25% de velocidad de inoculación) y , 1.31 g de una solución nutriente se agregaron. (La *. ( solución nutriente consistió de 8026 ppm de dihidrógenjo *•* fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppra de sulfato fr de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua f* corriente) . Se inició el burbujeo de aire, la temperatura se mantuvo a 30°C. El crecimiento bacteriano se verifica por densidad óptica (OD600) y la biodeshalogenasión s verifica por GC. OD600 se determina al medir la densidad 25 . óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando up » espectrofotómetro f Spectroníc, , Instruments , ?ncorpofcated, Rochestte-t^ iÉéw York , E . U .A. ) , una cuba desdchable son longitud de ruta de l -<*pn . D sp és de 14 . 5 horas , la resina resultante se emplea somo inoculo para SU , La resina restante no empleada para el inoculo se descartó ^ pero pudo haberse empleado para dar el >r - J' ",! producto terminado.

Escala ascendente 4 (SU4) : Un matraz de fondo redondo de 500 mL se adaptó * con un condensador, un medidor de pH, un baño de circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo » de aire y un agitador mecánico. Al matraz se agregan 300 ' g de la res a pasteurizada de % . El pH se elevó a 7.2 con 6.03 g de hidróxido de sodio acuoso a 30% y luego 100.0 g 'de inoculo de resina SU3 se agregan. (25% de velocidad de inoculación) y 2.62 g de una solución nutriente se agregaron. (La solución nutriente consiste de 8026 ppm de **d?h?drógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 pp?rv de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en J agua corriente) . El burbujeo de aire se inició, la temperatura se mantuvo a 30°C. El crecimiento bacteriano se verificó por densidad óptica (OD6ß0) y la jbiodeshalogenación se verifica por GC. OD600 Se determina al medir la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un espectrofotómetro SpectronisMR Genesyáw UV/Vis (Spectronic, íü ^ru ents, Incorporatßd,; Roshester, New York, E.U.A.), y una cuba con "longitud de ruta de 1-cm. Después de 8 horas, la resina resultante *se emplea como inoculo para SU5. La resina restante no empleada para inoculo fue descartada, pero pudo haberse - empleado para dar el producto terminado. Escala ascendente 5 (SU5) : Un matraz de fondo redondo de 500 mL se adaptó con un condensador, un medidor de pH, un baño de 10 * circulación de temperatura controlada, un tubo de burbujeo de aire y un agitador mecánico. Al matraz se agregan 300 g de la resina pasteurizada. El pH se eleva a 7.2 con 6.26 g de hidróxido de sodio acuoso a 30% y luego 1.46 g de Alcalase 2.5L tipo DX (disponible de Novozymes), 100.0 g 15 del inoculo de resina SU4 (25% de velocidad de inoculación,) y 2.62 g de una solución nutriente se agregaron. (La solución nutriente consiste de 8026 ppm de dihidrógeno fosfato de potasio, 27480 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua i corriente) . El burbujeo de aire se inició, la temperatura se mantuvo a 30°C. El crecimiento bacteriano se verificó por densidad óptica (OD600) y la biodeshalogenación se verificó por GC. OD600 se determinó al medir la densidad óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un 25 espectrofotóraetro SpectronicMR GenesysMR UV/Vis (Spectronic -E ' Instruments, Incorpc|§i ed, Roc?ister, Ifew York;, E.U.A.) y una cuba desechable con una longitud de ruta de l*catot. 'Después de 15 lloras, la resina resultante se emplea como el inoculo para SU6. La resina restante no empleada ^a' a 3 inoculo se convierte en producto terminado al reducir el pß a 5.3 con ácido sulfúriso soncentrado (96%) y agreganíSo -.,2000 ppm de sorbato de potasio como biocida. Escala ascendente 6 (SU6) : Un matraz de fondo redondo de 500 mL se adaptó 10 __ con un condensador, un medidor de pH, un baño de* circulación de temperatura controlada, Un tubo de burbujeo de aire y un agitador mecánico. Al matraz se agregan 300 g de la resina pasteurizada. El pH se aumenta a 7.2 con 6.02 g de hidróxido de sodio acuoso al 30% y luego 1.46 g 15 de Alcalase 2.5 L tipo DX (disponible de Novozymes), 100.0 g del inoculo de resina SU5 (velocidad de inoculación 'd,e* 25%) y 2.62 g de una solución nutriente se agregaron. (La y solución nutriente consistió de 8026 ppm de dihidrógen *- - fosfato de potasio, 27430 ppm de urea, 4160 ppm de sulfato <-J|¡J? . ' de magnesio y 840 ppm de cloruro de calcio en agua ¿p ^'corriente) . Se inició el burbujeo de aire, la temperatura se mantuvo a 30°C. El crecimiento bacteriano se verificó por densidad óptica (OD600) y la biodeshalogenación se verificó por GC. OD600 se determina al medir la densidad 25 óptica a una longitud de onda de 600 nm utilizando un X. ,f f- J»f^ 1 15 i - adípico, dietilentriamina y ácido acético, se prepararon al ¿condensar estos reactivos a 170°C por tres horas en una 10 proporción molar de 1:0.9:0.2. Los productos de reacción se diluyeron a 50% de sólidos. Estos polímeros se reacsionaron con e i c 1 or ohi dr i na en una proporsión de ep?cloroh?drina:d?etilentr?araína de 0.82 por 3.5 horas a 15 -40 °C y agua se agregó de manera tal que el contenido total de sólidos del reactor fue 40%. En una siguiente etapa, las mezclas de reacsión se diluyeron a un sontenido total de sólidos de 31% y ' calentaron a 68°C para funcionalizasión y entrelazamiento. Se detuvieron las reacciones a viscosidad Gardner-Holt "I/J" deápués de aproximadamente dos horas y 10 minutos <a esta temperatura por adición de ácido sulfúriso al 30% y de. manera tal que el pH después de la adición de sulfúrico flue 4.5. Los productos de reacción se enfriaron a tempera utra , 1.75% de ácido fosfórico (peso a volumen de se agregan y el pH se ajusta después de adición de ácido fosfórico utilizando ácido sulfúrico a pH 2.7. El propósito de agregar ásido fosfópso y sulfúrico a este pH es obtener resinas viscométrisamente estables. Las resinas se analizaron por su nivel *de organosloro residual y niveles 1,3 -DCP se ensontraron de 816 ppm para el material que sontiene ásido asétiso. Estas resinas se sometieron a una prueba de papel y se ensontró que eran tan efestivas como KymeneMR SLX2 para impartir resistencia en húmedo al papel. Las resmas se almacenaron por 6 semanas a 32°C y durante este período no ocurrió gelación de las resinas. Biódeshalogenación (ver Tabla 29 para datos y detalles) : * Un inósulo se preparó son una resina sin terminasión de extremo (KymeneMR E7219) (ver Essala ascendente 1 y Escala ascendente 2 en la Tabla 29) . La resina terminada en extremo preparada anteriormente se diluyó a 13.5% de sólidos, el pH se elevó a pH 7.2 con hidróxido de sodio , «acuoso al 30%, el oaáálizal?íi ' (Alcalase, Novozymes) para ' "hidrolizar la especie formadora de CSÍ), el inoculo de Escala ascendente 2 y la solución nutriente, se agregaron. No desean estar ligados por teoría, se s??sidera que esta "etapa intermedia de bajo contenido de sólidos es útil para mejorar la adaptación de la población microbiana a la nuei . resina. Después de completar la biodeshalogenación, se inició el siguiente lote (Escala ascendente 4) . La resina 'terminada en extremo preparada anteriormente se diluyó a 10 l* 0% de sólidos, el pH se elevó a 7.2 con hidróxido de sodio -"'acuoso al 30%, el catalizador (Alcalase, Novozymes) para hidrolizar las especies formadoras de CPD, el inoculo de Escala ascendente 3 (20% de velocidad de inoculación) y la- solución nutriente, se agregaron. El -cresimiento 15 misrobiano fue rápido, somo se indisa por densidad óptica (?D60o) (ver escala ascendente 4 en la Tabla 29) . La biodeshalogenación también fue rápida, como se indica por la rápida pérdida de DCP y CPD. Tabla 29. Biodehalocfenación de Alcalasa de una Resina de ,-2« Resistencia en Húmedo de Alto Contenido de Sólidos T ? « «.

Claims

,t* * «i- almasenaí fentb una resina de poliamina^epibalohídrin^a., caracterizado porque comprende: tratar una cortiposíción u sontiene una resina de poliamina-epihalohídrina «Je resistencia en húmedo, la composisión sOmprende un de sólidos de al menos 15% en peso e insluye formadoras de CPD, con al menos un agente enzimátíco bajo condiciones para cuando renos uno e 10 inhibir, reducir y retirar las especies formad ras de CPD, ** para obtener una resina formadora de CPD reducida, estable a gelacíón en almacenamiento, de manera tal que la composición que contiene la resina de poliamink- epihalohidrina formadora de CPD reducido cuando se almacena 15 ~ 24 horas a 50°C, y un pH de aproximadamente 1.0, liberten menos de aproximadamente 250 ppm de base seca de CPD. 2. Un procedimiento para hacer estable el ¡^almacenamiento a una res a de poliamina-epihalohidrina, caracterizado porque comprende: tratar una composición que contiene una resina de cedencia gradual de poliamina- "epihalohidrma, la composición comprende un contenido de áólidos de al menos 15% en peso e incluye especies formadoras de CPD, con al menos un agente enzíraátíco, bajo condiciones para al menos una de inhibir, reducir y retiraír 25 las especies formadoras de CPD, para obtener una resina Contiene4 lá resina poliamina-epihalohldrítia íbrmadora de * CPD reducido cuando se almacena por 24 horas a 50 °C, y un pH de aproximadamente 1.0, libera menos de ap FXirtradailir e 100 ppm en base seca de CPD. 3. Procedimiento de conformidad con l*a * reivindicación 1 o 2, caracterizado porque la composición que contiene la resina de poliamina-epilialohidrina O. -v formadora de CPD reducido, cuando se almacena por 24 horas ** a 50 °C y un pH aproximado de 1.0, contiene menos de aproximadamente 50 ppm de base seca de CPD. 4. Procedimiento de conformidad con la reivindicación 1 a 2, caracterizado porque las ctondiciones 15 de tratamiento comprenden una temperatura desde aproximadamente 20°C a 60°C. 5. Procedimiento de conformidad con la reivindicación 1 a 2, caracterizado porque las condiciones* de tratamiento comprenden una temperatura desde 20 aproxiraadamente 20 °C a 40°C. ü ** 6. Procedimiento de conformidad con la ^------^*-^ reivindicación 1 a 2, caracterizado porque las condicione^ * de tratamiento comprenden un tiempo de reacción desde aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 96 horas. * i 7 . Procedimiento de c<J?tffc>3fmid d con la reivindicación 6 , caracterizado po qt^Ü?st condicion de aproximadamente 2 horas a aproximadamente 12 libras . 8 . Procedimiento de a nj&ótmídad con la i 'reivindicación 1 a 2, caracterizado porque las condicionéis ' * de tratamiento comprenden un pH desde aproximadamente 2.5 $ - p. a aproximadamente 9. 9. Procedimiento de conformidad con la 10 reivindicación 8, caracterizado porque las condiciones de »L Vf tratamiento comprenden un pH desde aproximadamente 7 a < aproximadamente 9. 10. Procedimiento de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque las condiciones de 15 tratamiento comprenden un pH desde aproximadamente 6 a aproxiraadamente 8.5. 11. Procedimiento de conformidad con l reivindicación 1 a 2, caracterizado porque la proporción de al menos un agente enzimático a resina políamina- 20 epihalohidpna (base seca) es de aproximadamente 1:1600 a aproximadamente 1:5. 12. Procedimiento de conformidad con la -o reivindicación 11, caracterizado porque la proporción de al ^ menos un agente enzimático a resina políamina- (base feca) es de ap oximdamente l:160sa i,ap oxim d4t*er??te 1 : 4 • ¡ ,13. Procedimiento de conf rmidad con la reivindicación 1 a 2, caracterizado porque la proporción ?js al menos un agente enzimático (enzima actiya, .base seca) te resina poliamina-epihalohidrina (base seca) es £te aproximadamente 0.04:1600 a aproximadamente 0.04:1.5. \ + 14. Procedimiento de conformidad con la «reivindicación 1 a 2, caracterizado porque el contenido de 10 sólidos es de 15 a 50% en peso de sólidos activos, las % « *r condiciones de tratamiento comprenden una temperatura desófe aproximadamente 0°C a aproximadamente 35 °C, un tiempo de reacción desde aproximadamente 4 a aproximadamente 24 horas, un pH desde aproximadamente 6.9 a aproximadamente 15 7.9, la proporción de al menos un agente enzimático a resina poliamina-epihalohidrina (base seca) es de aproximadamente 1:20 a 1:8. 15. Procedimiento de conformidad con la ^reivindicación 1 a 2, caracterizado porque al menos un 20 agente enzimático se elige del grupo que consiste de una esterasa,t una lipasa, una proteasa, o una combinación de "las misrrlas . 16. Procedimiento de conformidad con ia reivindicación 15, caracterizado porque al menos un agente enzimático es una proteasa en el grupo subtilisina. J k !. 242 17. Procedimiento de conformidad con la reivindi?átfión 1 a 2, caracterizado -|iifrc|ue al menos un agente enzimático tiene actividad de esterasa. 18. Procedimiento de conformidad con la reivindicación 1 a 2, caracterizado porgue ál meaos un agente enzimático se produce a partir de un microorganismo seleccionado del grupo que consiste de Bacillus Licheniformis (Número de Acceso Swiss-Prot: P00780) o Bacillus amyloliquifaciens (P00782) , y Bacillus lentus 10 (P29600) . 19. Procedimiento de conformidad con la reivindicación 1 a 2, caracterizado porque el agente enzimático como mínimo es ALCALASE. 20. Procedimiento de conformidad con la 15 reivindicación 1 a 2, la resina se caracteriza por la presencia de la funcionalidad representada por la fórmula * 21. Procedimiento de conformidad con la reivindicación 1 a» 2, la resma se eí&r#oteriza por ia 'presencia de la funcionalidad represent da por la fórmul j 22. Procedimiento de conformidad con la .^B£ reivindicación 1 a 2, la resma se caracteriza por la f -t,. presencia de la funcionalidad representada por la fórmu|a 10 | + X- -N-CH2-CH(OH) -CH2C1 en donde X" es un anión. 23. Procedimiento de conformidad con la 15 reivindicación 1 a 2, caracterizado porque al menos de , irX simultáneamente con, antes de o subsecuente al tratamiento de una composición que contiene resina poliamana>- epihalohidpna para obtener una resina formadora de G?t> reducido, la resina se contacta con al menos un O microorganismo, o al menos una enzima aislada dei 9G '-«fe X*f* microorganismo como mínimo, en una cantidad y a un pH y temperatura efectivos para deshalogenar cantidades * residuales de halógeno ligado orgánicamente. 24. Procedimiento de conformidad con ia 25 reivindicación 1 a 2, caracterizado porque simultáneamente • & ***gt J & epihaiohidrina (base seca) es de aproximadamente 1:600 a ""^ aproximadamente 1:1.5. 32. Procedimiento de conformidad con la . reivindicación 23 o 24, caracterizado porque las * condiciones de tratamiento comprenden un tiempo* de reacción -5- A i de 48 horas o menos, una temperatura desde aproximadamente 20°C a 35°C, un pH de aproximadamente 6.5 a aproximadamente 8.0 y la proporción de al menos un agente enzimático a resina poliamina-epihalohidrina (base seca) es de ^aproximadamente 1:1600 a aproximadamenten 1:1.5 y el 25 microorganismo como mínimo comprende una mezcla que consiste de al menos Uno de ?grob&c€^Sfíffl raditX^acter (HK7) - y Antrhokaq&iar his dinolovorans (HKÍ 33. Procedimiento de conformi d con lte reivindicación 1 o 2, caracterizado simultáneamente, étates *- de o subsecuente al tratamiento de una composición que contiene resina poliaraina-epihalohidrina para obtener uhste -A <# , resina formadora de CPD reducido, la resina se trata para reducir al menos uno de epihalohidrínas, sub-productos de hidrólisis de epihaiohidrina y halógeno orgánico ligado a *0 la estructura principal de polímero. 34. Un proceso para preparar un producto de s* papel, caracterizado porque comprende: tratar una composición que contiene una resina poliarama- epihalohidrina de resistencia en húmedo, la composición 15 Comprende un contenido de sólidos de al rfienos 15% en peso e incluye especies formadoras de CPD, con al menos un agente enzimático bajo condiciones para al menos uno de >inhibir, reducir y retirar las especies formadoras de CPD, para obtener una resina formadora de CPD reducida, en ?° ( "almacenamiento estable a gelación, y formar un producto de jtfk "papel con la resina de poliamina-epihalohidrina formadora de CPD reducido, de manera tal que un producto de papejL, cuantío se corrige para agregar a aproximadamente 1% en pegp. '- nivel de adición de la resma formadora de CPD reducido,, , 25 contiene mínimo de aproximadamente 250 ppb de CPD. 35. Un procedimiento para preparar,un producto de papel, caracterizado porque comprende: tratar una í composición que contiene una resina tíe cedenciá gradual de poliamina^epihalohidrina, la composición comprende un contenido de sólidos de al menos 15% en peso e incluye especies formadoras de CPD, con al menos un agente bajo condiciones para al menos uno de inhibir, reducir y retirar las especies formadoras de CPD, para fe iJ-f obtener una resina formadóra de CPD reducido, en 10 almacenamiento estable a gelación, y formar un producto de .papel con la resina de poliamina-epihalohidrina formadora de CPD reducido, de manera tal que un producto de papel, ? cuando se corrige para agregar aproximadamente 1% en peso de nivel de adición de la resina formadora de CPD reducido, 15 contiene menos de aproximadamente 250 ppb de CPD. 36. Procedimiento de conformidad con la J reivindicación 34 o 35, caracterizado porque el producto de papel, cuando se corrige para agregar a aproxiraadamente 1% x en peso del nivel de adición de la resina formadora de CPD reducido, contiene menos de aproximadamente 50 ppb de CPD. 37. Procedimiento de conformidad con la reivindicación 34 o 35, caracterizado porque el contenido * de sólidos es 15 a 50% en peso de sólidos activos, la temperatura de la reacción es de aproximadamente 0°C a 25 aproximadamente 35°C, el tiempo de reacción es de menos 15% en peso, bajo condiciones para deshalogenar i - compuesto órgano halógeno libre de nitrógeno, a fin dej t reducir un nivel del compuesto órgano halógeno libre dé nitrógeno, mientras que deja substancialmente intacta la resina poliam a-epihalohidrma. 1 39. El procedimiento de conformidad con la rf reivindicación 38, caracterizado porque el contenido de ^^r **"S lidos es aproximadamente 18-35 por ciento en peso. 40. Un procedimiento para ha,cer estable al ^almacenamiento una resina de poliamina-epihaiohidrina, * caracterizado porque comprende: tratar una composición que 25 contiene resma poliam a-epihalohidrina de resistencia en inferior a 15% en pf o e incluye especies £o?radoras CPD,1 f | con al menos «tn agente enziraático bajo condiciones 4f§ * fer cuando menos una de inhibir, reducir y retirar las especien « formadoras de QPD, para obtener una resina |?>r«?adora de CPD doade, simultáneamente con tratar, una composición qise. orgánicamente . 41. Un procedimiento para hacer estable a,l . 20 almacenamiento a una resina de poliamina-epihalohidrma, caracterizado porque comprende : tratar una composición que contiene una resina de cedencia gradual de poliamina- epihalohidrina, la composición comprende un -contenido de sólidos inferior a 15% en peso e incluye especies ' 25 formadoras de CPD, con al menos un agente enziipá ico, li jo < . i5 . resina poliamina-epihalohidrina forraadora de CPD re uc a cuando se almacena por 24 horas a 50°C y un pü aproximado de 1.0, libera menos de aproxiraadamente 100 D m de xbás& seca de, en donde, simultáneamente cp tratar, una composición que contiene resina poliaminá-epihalohidrina para obtener una resina formadora de CPD reducidoa, la CPD se contacta con al menos un menos una enzima aislada de al menos un una cantidad y a un pH y temperatura efectivos para deshalogenar cantidades residuales de - halógeno ligado orgánicamente. 42. Procedimiento de conformidad con Isa . reivindicación 40 a 41, caracterizado porque la composición ' que contiene la resina poliamina-epihalohídrina formadora de CPD reducido, cuando se almacena a 24 a 50°C y pH aproximado de 1.0, contiene menos de aproximadamente 50 ppm en base seca de CPD. 43. Procedimiento de conformidad con la reivindicación 40 a 42, caracterizado porque el contenido de sólidos es 4.% en peso a aproximadamente 14.5% en peso. 44- de confor-fng?dlßd con la 46. Procedimiento de conformidad con la 10 ^ reivindicación 38 a 42, caracterizado porque el "^microorganismo como mínimo o al menos una enzima aislada de r, al menos un microorganismo, comprende al menos upa Arthrobacter Histidinolovorans (HKl) y Agrobacterium *'t * radiobacter (HK7) . « t < 47. Procedimiento de conformidad con la reivindicación 38 a 40, caracterizado porque el 4 microorganismo como mínimo comprende una mezcla que consiste de al menos uno de Agrobacterium radíobacter (HK7) ~* " y Arthrobacter Histidinolovorans (HKl) . políaminá- se incluyen ios procesos para preparar una refina estable * 5 durante el almacenamiento y/o los procesos que tratan las L -<f» r. resinas. Una, composición que contiene una resina k con un contenido de solidos de # * cuando menos 15% en peso tratada con cuando menos un agente * enzimático. Un proceso para tratar la resítía 10 poliamina-epihalohidrina para reducir el nivel del compuesto organohalógeno libre de nitrógeno, mediante la adición de cuando menos un microorganisrao, o cuando men s „ una enzima aislada de cuando menos un microorganismo, a una composición acuosa que tenga un contenido de solidos 15 de cuando menos 15% en peso, en condiciones paira deáhalogenar el compuesto organohalógeno libre de nitrogeto * para reducir un nivel del compuesto organohalógeno libre d-e oontiene la resina poliamina-epihalohidrina estable durante el almacenamiento, cuando se corrige para adicionar a una -concentración de adición de aproximadamente 1% en peso de >?* •»*£ «¡ PA/a/ 2002\ ??n ? ^