MXPA01009151A - Polinucleotidos y polipeptidos casb618 y su uso - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a polipéptidos y polinucleótdos CASB618 y los métodos para la producción de tales polipéptidos mediante técnicas recombinantes. También se exponen métodos para utilizar polipéptidos y polinucleótidos CASB618 en diagnósticos y vacunas para el tratamiento profiláctico y terapéutico de cánceres, particularmente de ovario y de colon, enfermedades autoinmunes y las condiciones relacionadas.

Description

POLINUCLEÓTIDOS Y ROLIPÉPTIDOS CASB618 Y SU USO Campo de la Invención La presente invención se refiere a polinucleótidos, referidos en presente como polinucleóticjlos CASB61 8, polipéptidos codificados por los mismos (referidos en la presente como polipéptidos CASB618), materiales recombinantes y mé odos para su producción. En otro aspecto, la invención se refiere a métodos para el uso de tales polipéptidos y polinucleótidos, incluyendo el tratamiento de cáncer, en particular en el tratamiento de cáncer de co n, y enfermedades autoinmunes y otras condiciones relacionadas. En un aspecto adicional, la invención se refiere a métodos para identificar ago nistas y antagonistas/inhibidores mediante el uso de materiales proporcio nados por la invención y el tratamiento de condiciones asociadas con pol péptido CASB618 en desequilibrio con los compuestos identificados. En un aspecto aún adicional, la invención se refiere a ensayos de diagnóst ¡co para detectar enfermedades asociadas con actividad o niveles inapropi ados de polipéptido CASB618.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los polipéptidos y polinucleótidos de la presente invención con inmunogenes importante s para la inmunización profiláctica o terapéutica específica contra tumores, debido a que se expresan de manera específica o se so bre-expresan altamente en tumores en comparación con las células normales y pueden distinguirse mediante mecanismos inmunes espec icos de antígeno que conducen a la destrucción de la célula tumorosa. También pueden utilizarse para diagnosticar la ocurrencia de células tumorosas. Además, su expresión inapropiada en ciertas circunstancias puede originar una inducción de respuestas autoinmunes, inmunes inapropiadas, que pueden corregirse a través de la vacunación apropiada mediante el uso de los mismos polipéptidos o polinucleótidos. En este aspecto, las propiedades biológicas más importantes son las actividades antigénicas e inmunogénicas del polipéptido de la presente invención. Un polipéptido de la presente invención también puede exhibir al menos otra actividad biológica de un polipéptido CASB618, lo cual podría calificarlo como un objetivo para la intervención terapéutica o profiláctica diferente a la relacionada a su uso como un inmunoterapéutico. Los genomas funcionales dependen enormemente de las tecnologías de ordenamiento en secuencia de ADN de alto rendimiento y de las diversas herramientas de la bioinformática para identificar secuencias genéticas de interés potencial provenientes de las muchas bases de datos de biología molecular ahora disponibles. Las bibliotecas de cADN enriquecidas de genes de relevancia para un tejido o situación fisiológica en particular, pueden construirse mediante el uso de estrategias de clonación substractiva, recientemente desarrolladas. Además, los cADNs encontrados en bibliotecas de ciertos tejidos y no otros, pueden identificarse mediante el uso de métodos de selección electrónica, apropiados. La biología en base a genoma o genes de alto rendimiento permite nuevos enfoques para la identificación y clonación de genes objetivo para respuestas inmunes útiles en la prevención y terapia de vacuna de enfermedades tales como cáncer y autoinmunidad .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En un primer aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos CASB618. Tales péptidos incluyen polipéptidos aislados que comprenden una secuencia amino acida que tiene al menos 70% de identidad, preferentemente al menos 80% de identidad, más preferentemente al menos 90% de identidad, aún más preferentemente al menos 95% de identidad, más preferentemente al menos 97-99% de identidad, con la de la SEQ ID NO:2 sobre la longitud entera de la SEQ ID NO:2. Tales polipéptidos incluyen aquellos que comprenden el amino ácido de la SEQ ID NO:2. Péptidos adicionales de la presente invención incluyen polipéptidos aislados en los cuales la secuencia amino acida tiene al menos 70% de identidad, preferentemente al menos 80% de identidad, más preferentemente al menos 90% de identidad, aún más preferentemente al menos 95% de identidad, lo más preferentemente al menos 97-99% de identidad, con la secuencia amino acida de la SEQ ID NO:2 sobre la longitud entera de la SEQ ID NO:2. Tales polipéptidos incluyen el polipéptido de la SEQ ID NO:2. Péptidos adicionales de la presente invención incluyen polipéptidos aislados, codificados por un polinucleótido que comprende la secuencia contenida en la SEQ ID NO: 1 . La invención también proporciona un fragmento inmunogénico de un polipéptido CASB618, es decir, una porción contigua del polipéptido CASB618 que tiene propiedades inmunogénicas iguales o similares al polipéptido que comprende la secuencia amino acida de la SEQ ID NO:2. Es decir, el fragmento (si es necesario cuando se acopla a un vehículo) es capaz de promover una respuesta inmune que reconoce el polipéptido CASB618. Tal fragmento inmunogénico puede incluir, .por ejemplo, el polipéptido CASB618 que carece de una secuencia guía de terminal N, un dominio de transmembrana o un dominio de anclaje de terminal C. En un aspecto preferido, el fragmento inmunogénico de CASB618 de acuerdo a la invención comprende substancialmente todo el dominio extracelular de un polipéptido que tiene al menos 70% de identidad, preferentemente al menos 80% de identidad, más preferentemente al menos 90% de identidad, aún más preferentemente al menos 95% de identidad, lo más preferentemente al menos 97-99% de identidad, con la de la SEQ ID NO:2 sobre la longitud entera de la SEQ ID NO:2. Los fragmentos péptidos que incorporan un epítope de CASB618 típicamente comprenderán al menos 7, preferentemente 9 o 1 0 amino ácidos contiguos de la SEQ ID NO:2. Los epítopes preferidos se muestran en la SEQ ID NO:5 a la SEQ ID NO.77. Los péptidos que incorporan estos epítopes forman un aspecto preferido de la presente invención. Los mimótopes que tienen las mismas características que estos epítopes, y los inmunogenes que comprenden tales mimótopes que generan una respuesta inmune que es trans-reactiva con un epítope en el contexto de la molécula de CASB618, también forman parte de la presente invención. Por consiguiente, la presente invención incluye péptidos aislados que abarcan estos epítopes por sí solos y cualquier mimótope de los mismos. El significado de mimótope se define como una entidad que es lo suficientemente similar al epítope nativo de CASB618 a fin de ser capaz de reconocerse por anticuerpos que reconocen la molécula nativa; (Gheysen, H.M. , eí al. , 1986, Synthetic peptides as antigens. Wiley, Chichester, Ciba foundation symposium 1 19, pág. 1 30-149; Gheysen, H.M. , 1 986, Molecular Immunology, 23, 7, 709-71 5); o son capaces de promover anticuerpos, cuando se acoplan a un vehículo adecuado, cuyos anticuerpos trans-reaccionan con la molécula nativa. Los mimótopes péptidos de los epítopes arriba identificados, pueden diseñarse para un propósito particular mediante la adición, omisión o substitución de amino ácidos electos. Por lo tanto, los péptidos de ia presente invención pueden modificarse para propósitos de facilidad de conjugación con un vehículo de proteína. Por ejemplo, puede ser deseable para ciertos métodos de conjugación química el incluir una cisteína terminal en el epítope. Además, puede ser deseable para péptidos conjugados con un vehículo de proteína el incluir un término hidrofóbico distal del término conjugado del péptido, de tal manera que el extremo no conjugado libre del péptido permanezca asociado con la superficie de la proteína vehículo. Esto reduce los grados conformaciones de libertad del péptido y por lo tanto incrementa la probabilidad de que el péptido se presente en una conformación que se parece bastante a la del péptido tal como se encuentra en el contexto de la molécula completa. Por ejemplo, los péptidos pueden alterarse para tener una cisteína de terminal N y una cola amidada hidrofóbica de terminal C. De manera alternativa, la adición o substitución de una forma de estereoisómero D de uno o más de los amino ácidos, puede llevarse a cabo para crear un derivado benéfico, por ejemplo, para mejorar la estabilidad del péptido. Aquellos expertos en la materia se darán cuenta de que tales péptidos modificados o mimótopes, podrían ser un mimótope completa o parcialmente sin péptido, en donde los residuos constituyentes no se confinan necesariamente a los 20 amino ácidos que ocurren de manera natural. Además, estos pueden ciclarse mediante técnicas conocidas en la materia para constreñir al péptido a una conformación que se parezca en gran medida a su forma cuando la secuencia péptida se encuentre en el contexto de la molécula completa. Un método preferido para ciclar un péptido comprende la adición de un par de residuos de cisteína para permitir la formación de un puente de disulfuro. Además, aquellos expertos en la materia se darán cuenta de que los mimótopes o inmunogenes de la presente invención pueden ser más grandes que los epítopes arriba identificados y, por lo tanto, pueden comprender las secuencias aquí expuestas. De acuerdo con lo anterior, los mimótopes de la presente invención pueden consistir en la adición de extensiones de terminal N y/o C de un número de otros residuos naturales en uno o ambos extremos. Los mimótopes péptidos también pueden ser secuencias retro de las secuencias naturales, ya que se invierte la orientación de la secuencia; o alternativamente, las secuencias pueden comprenderse por completo o al menos en parte de amino ácidos estéreo isómeros D (secuencias inversas). También, las secuencias péptidas pueden ser de carácter retro-inverso, ya que la orientación de la secuencia se invierte y los amino ácidos son de la forma de estereoisómero D. tales péptidos retro o retro-inversos tienen la ventaja de no ser independientes y por lo tanto pueden superar problemas de auto-tolerancia en el sistema inmune. Alternativamente, los mimótopes péptidos pueden identificarse mediante el uso de anticuerpos que son capaces por sí solos de enlazarse a los epítopes de la presente invención mediante el uso de técnicas tales como tecnología de despliegue fago (EP 0 552 267 B1 ). Esta técnica genera un gran número de secuencias péptidas que imitan la estructura de los péptidos nativos y, por consiguiente, son capaces de enlazarse a anticuerpos péptidos anti-nativos, pero no necesariamente comparten por sí solos una homología de secuencia significativa con el péptido nativo. Este enfoque puede tener ventajas significativas al permitir la posibilidad de identificar un péptido con propiedades inmunogénicas mejoradas o puede superar cualquier problema de tolerancia auto-antígena potencial que pueda asociarse con el uso de la secuencia péptida nativa. De manera adicional, esta técnica permite la identificación de un patrón de reconocimiento para cada péptido nativo en término de sus propiedades químicas compartidas entre las secuencias mimótopes reconocidas. El acoplamiento covalente del péptido al vehículo inmunogénico puede llevarse a cabo en una manera muy conocida en la materia. Así, por ejemplo, para su acoplamiento covalente directo es posible utilizar una carbodiimida, glutaraldehído o (N-[?-maleimidobutiriloxi] éster de succinimida, utilizando enlaces heterobifuncionales comercialmente disponibles, comunes, tales como CDAP y SPDP (utilizando instrucciones de los fabricantes). Después de la reacción de acoplamiento, el inmunogen puede aislarse y purificarse fácilmente por medio de un método de diálisis, un método de filtración de gel, un método de fraccionamiento, etc. Los tipos de vehículos utilizados en los inmunogenes de la presente invención serán fácilmente conocidos por las personas expertas en la materia. La función del vehículo es proporcionar ayuda de citocina con objeto de ayudar a inducir una respuesta inmune contra el péptido. Una lista no exhaustiva de vehículos que pueden utilizarse en la presente invención incluyen: Hemocianina de lapa en U (KLH), albúminas de suero tales como albúmina de suero bovino (BSA), toxinas bacterianas inactivadas tales como toxinas de tétanos o difteria (TT y DT), o fragmentos recombinantes de las mismas (por ejemplo, Dominio 1 de Fragmento C de TT o el dominio de translocación de DT), o el derivado de proteína purificado de tuberculina (PPD). De manera alternativa, los mimótopes o epítopes pueden conjugarse directamente con vehículos de liposoma, los cuales pueden comprender adicionalmente inmunogenes capaces de proporcionar ayuda de célula T. Preferentemente, la proporción de mimótopes respecto a su vehículo es del orden de 1 : ! a 20: 1 y preferentemente cada vehículo debe contener entre 3-15 péptidos. En una modalidad de la invención, un vehículo preferido es Proteína D de Haemophilus influenzae (EP 0 594 610 B1 ). La proteína D es una proteína de enlace a IgD proveniente de Haemophilus influenzae y se ha patentado por Forsgren (WO 91 /18926, otorgada EP 0 594 610 B1 ). En algunas circunstancias, por ejemplo en sistemas de expresión inmunogénica recombinantes, puede ser deseable utilizar fragmentos de proteína D, por ejemplo, Proteína D 1 /3 (que comprende 1 00-1 1 0 amino ácidos de terminal N de proteína D (GB 971 7953.5). Otro método preferido para presentar los péptidos de la presente invención es en el contexto de una molécula de fusión recombinante. Por ejemplo, EP 0 421 635 B describe el uso de partículas antigénicas de núcleo de hepadnavirus quiméricos para presentar secuencias péptidas ajenas en una partícula similar a un virus. Por lo tanto, los inmunogenes de la presente invención pueden comprender péptidos presentados en partículas quiméricas que consisten en antígeno de núcleo B de hepatitis. De manera adicional, las proteínas de fusión recombinantes pueden comprender los mimótopes de la presente invención y una proteína vehículo, tal como NS1 del virus de influenza. Para cualquier proteína expresada de manera recombinante, que forma parte de la presente invención, el ácido nucleico que codifica dicho inmunogen también forma un aspecto de ia presente invención. Los péptidos utilizados en la presente invención pueden sintetizarse fácilmente mediante procedimientos de fase sólida muy conocidos en la materia. Las síntesis adecuadas pueden llevarse a cabo mediante la utilización de procedimientos "T-boc" o "F-moc". Los péptidos cíclicos pueden sintetizarse mediante el procedimiento de fase sólida que emplea el procedimiento muy conocido de "F-moc" y la resina de poliamida en el aparato completamente automatizado. De manera alternativa, aquellos expertos en ia materia conocerán los procedimientos de laboratorio necesarios para llevar a cabo el proceso de manera manual.

Las técnicas y procedimientos para la síntesis de fase sólida se describen en 'Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach' de E. Atherton y R.C. Sheppard, publicado por IRL en la Oxford University Press (1989). De manera alternativa, los péptidos pueden producirse mediante métodos recombinantes, incluyendo la expresión de moléculas de ácido nucleico que codifican los mimótopes en una línea celular bacteriana o mamífera, seguida por purificación del mimótope expresado. Las técnicas para la expresión recombinante de péptidos y proteína se conocen en la materia y se describen en Maniatis, T., Fritsch, E. F. y Sambrook et al. , Molecular cloning, a laboratory manual, 2a Ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York (1989). Los polipéptidos o fragmento inmunogénico de la invención pueden encontrarse en la forma de la proteína "madura" o pueden ser parte de una proteína mayor tal como un precursor o una proteína de fusión. Con frecuencia es ventajoso incluir una secuencia amino acida adicional que contiene secuencias secretoras o guía, pro-secuencias, secuencias que ayudan en la purificación tales como residuos de histidina múltiples, o una secuencia adicional para estabilidad durante la producción recombinante. Además, también se considera la adición de polipéptido exógeno o cola de lípido o secuencias polinucleótidas para incrementar el potencial inmunogénico de la molécula final. En un aspecto, la invención se refiere a proteína de fusión solubles, genéticamente diseñadas, que comprenden un polipéptido de la presente invención o un fragmento del mismo y diversas porciones de las regiones constantes de cadenas pesadas o ligeras de inmunoglobulinas de diversas subclases (IgG, IgM, IgA, IgE). La preferida como inmunoglobulina es la parte constante de la cadena pesada de IgG humano, particularmente lgG1 , donde la fusión toma lugar en la región de articulación. En una modalidad particular, la parte de Fe puede retirarse simplemente mediante la incorporación de una secuencia de disociación que puede separarse con factor Xa de coagulación sanguínea. Además, esta invención se refiere a procesos para la preparación de estas proteínas de fusión mediante diseño genético, y al uso de las mismas para la selección de fármacos, diagnósticos y terapia. Un aspecto adicional de la invención también se refiere a polinucleótidos que codifican tales proteínas de fusión. Los ejemplos de tecnología de proteína de fusión pueden encontrarse en las Solicitudes de Patente Internacionales Nos. WO94/29458 y WO94/22914. Las proteínas pueden conjugarse típicamente o expresarse como proteínas de fusión recombinantes, permitiendo que se produzcan niveles incrementados en un sistema de expresión en comparación con proteínas no fusionadas. El socio de fusión puede ayudar en la proporción de epítopes auxiliares T (socio de fusión inmunológica), preferentemente epítopes auxiliares T reconocidos por humanos, o ayudar en la expresión de la proteína (mejorador de expresión) a mayores rendimientos que la proteína recombinante nativa. Preferentemente, el socio de fusión será tanto un socio de fusión inmunológica como un socio de mejora de expresión. Los socios de fusión incluyen proteína D proveniente de Haemophilus influenzae B y la proteína no estructural proveniente del virus de influenza, NS 1 (hemaglutinina). Otro socio de fusión inmunológica es la proteína conocida como LYTA. Preferentemente, se utiliza la porción de terminal C de la molécula. Lyta se deriva de Streptococcus pneumoniae que sintetiza una amidasa de N-acetil-L-alanina, LYTA de amidasa, (codificada por el gen lytA {Gene, 43 (1986) página 265-272 } una autolisina que degrada específicamente ciertas uniones en la estructura del péptidoglicano. El dominio de terminal C de la proteína LYTA es responsable de la afinidad hacia la colina o ciertos análogos de colina tales como DEAE. Esta propiedad se ha explotado para el desarrollo de E.Coli C-LYTA que expresa plásmidas útiles para la expresión de proteína de fusión. Se ha descrito la purificación de proteína híbridas que contienen el fragmento C-LYTA en su término amino ácido {Biotechnology: 10, (1992) página 795-798}. Es posible utilizar la porción de repetición de la molécula de Lyta encontrada en el extremo de terminal C que comienza en el residuo 178, por ejemplo, los residuos 188-305. La presente invención también incluye variantes de los polipéptidos arriba mencionados, es decir, polipéptidos que varían de los referentes mediante substituciones amino acidas conservadoras, mediante lo cual un residuo se substituye por otro con características similares. Substituciones típicas de tales se encuentran entre Ala, Val, Leu e He; entre Ser y Thr; entre los residuos acídicos Asp y Glu; entre Asn y Gln; y entre los residuos básicos Lys y Arg; o residuos aromáticos Phe y Tyr. Las particularmente preferidas son variantes en las cuales varios amino ácidos, 5-10, 1 -5, 1 -3, 1 -2 o1 , se substituyen, omiten o agregan en cualquier combinación.

Los polipéptidos de la presente invención pueden prepararse de cualquier manera adecuada. Tales polipéptidos incluyen polipéptidos aislados que ocurren de manera natural, polipéptidos producidos de manera recombinante, polipéptidos producidos de manera sintética o polipéptidos producidos mediante una combinación de estos métodos. Los medios para preparar tales polipéptidos son bastante comprendidos en la materia. En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a polinucleótidos CASB618. Tales polinucleótidos incluyen polinucleótidos aislados que comprenden una secuencia nucleótida que codifica un polipéptido que tiene al menos 70% de identidad, preferentemente al menos 80% de identidad, más preferentemente al menos 90% de identidad, aún más preferentemente al menos 95% de identidad, con la secuencia amino acida de la SEQ ID NO:2, sobre la longitud entera de la SEQ ID NO:2. En este aspecto, los polipéptidos que tienen al menos 97% de identidad se prefieren altamente, aunque aquellos con al menos 98-99% de identidad son más altamente preferidos y aquellos con al menos 99% de identidad son los más altamente preferidos. Tales polinucleótidos incluyen un polinucleótido que comprende la secuencia nucleótida contenida en la SEQ ID NO: 1 que codifica el polipéptido de la SEQ ID NO:2. Poiinucleótidos adicionales de la presente invención incluyen polinucleótidos aislados que comprenden una secuencia nucleótida que tiene al menos 70% de identidad, preferentemente al menos 80% de identidad, más preferentemente al menos 90% de identidad, aún más preferentemente al menos 95% de identidad con una secuencia nucleótida que codifica un poiipéptido de la SEQ ID NO:2, sobre la región de codificación entera. En este aspecto, los polinucleótidos que tienen al menos 97% de identidad se prefieren altamente, aunque aquellos con al menos 98-99% de identidad son más altamente preferidos y aquellos con al menos 99% de identidad son los más altamente preferidos. Polinucleótidos adicionales de la presente invención incluyen polinucleótidos aislados que comprenden una secuencia nucleótida que tiene al menos 70% de identidad, preferentemente al menos 80% de identidad, más preferentemente al menos 90% de identidad, aún más preferentemente al menos 95% de identidad con la SEQ ID NO: 1 , sobre la longitud entera de la SEQ ID NO: 1 . En este aspecto, los polinucleótidos que tienen al menos 97% de identidad se prefieren altamente, aunque aquellos con al menos 98-99% de identidad son más altamente preferidos y aquellos con al menos 99% de identidad son los más altamente preferidos. Tales polinucleótidos incluyen un polinucleótido que comprende el polinucleótido de la SEQ ID NO: 1 así como también el polinucleótido de la SEQ ID NO: 1 . Dicho poiinucleótido puede insertarse en una plásmida adecuada o vector de microorganismo recombinante y utilizarse para inmunización (ver, por ejemplo, Wolff eí al. , Science 247: 1465-1468 (1990); Corr eí al. , J. Exp. Med. 184: 1555-1560 (1996); Doe eí al. , Proc. Nati. Acad. Sci. 93: 8578-8583 (1996)). La invención también proporciona polinucleótidos que son complementarios a todos ios polinucleótidos arriba descritos. La invención también proporciona un fragmento de un polinucleótido CASB 618 que, cuando se administra a un sujeto, tiene la mismas propiedades inmunogénicas que el polinucleótido de la SEQ ID NO: 1 . La invención también proporciona un polinucleótido que codifica un fragmento inmunológico de un polipéptido CASB618 como se define con anterioridad en la presente. La secuencia nucleótida de la SEQ ID NO: 1 muestra homología con el cromosoma de Homo sapiens 1 5 clona 163_P_1 0 mapa 1 5 (acceso GB_HTG4:AC009700). La secuencia nucleótida de la SEQ ID NO: 1 es una secuencia de cADN y comprenden una secuencia codificadora de polipéptido (nucleótido 259 a 1219) que codifica un polipéptido de 320 amino ácidos, el polipéptido de la SEQ ID NO:2. La secuencia nucleótida que codifica el polipéptido de la SEQ ID NO:2 puede se idéntica al polipéptido que codifica la secuencia contenida en la SEQ ID NO: 1 , la cual, como resultado de la redundancia (degeneración) del código genético, también codifica al polipéptido de la SEQ ID NO:2. El polipéptido de la SEQ ID NO:2 no se relaciona con ninguna otra proteína de función conocida, excepto con Caenorhabditis elegans hipotético 42.1 kd proteína c06e1 .3 (acceso P34298). Los polipéptidos y polinucleótidos preferidos de la presente invención se espera que tengan, entre otras cosas, funciones/propiedades biológicas similares con sus polipéptidos y polinucleótidos homólogos. Además, los polipéptidos, fragmentos inmunológicos y polinucleótidos preferidos de la presente invención tienen al menos una actividad de ya sea SEQ ID NO.1 o SEQ ID NO:2, según sea apropiado.

La presente invención también se refiere a secuencias polinucleótidas y polipéptidas parciales u otras incompletas que se identificaron primero antes de la determinación de las secuencias de longitud completa, correspondientes, de la SEQ ID NO: 1 y la SEQ ID NO:2.. De acuerdo con lo anterior, en un aspecto adicional, la presente invención proporciona un polinucleótido aislado que: (a) comprende una secuencia nucleótida que tiene al menos 70% de identidad, preferentemente al menos 80% de identidad, más preferentemente al menos 90% de identidad, aún más preferentemente al menos 95% de identidad, incluso más preferentemente al menos 97-99% de identidad con ia SEQ ID NO:3 sobre la longitud entera de la SEQ ID NO:3; (b) tiene una secuencia nucleótida que tiene al menos 70% de identidad, preferentemente al menos 80% de identidad, más preferentemente al menos 90% de identidad, aún más preferentemente al menos 95% de identidad, incluso más preferentemente al menos 97-99% de identidad con la SEQ ID NO: 1 sobre la longitud entera de la SEQ ID NO:3; (c) el polinucleótido de la SEQ ID NO:3. La secuencia nucleótida de la SEQ ID NO:3 se deriva de secuencias EST (Identificador de Secuencia Expresada). Se reconoce por aquellos expertos en la materia que inevitablemente existirán algunos errores de lectura de secuencia nucleótida en secuencias de EST (ver Adams, M.D. eí al. , Nature 377 (supp) 3, 1 995). De acuerdo con lo anterior, la secuencia nucleótida de la SEQ ID NO:3 se sujeta, por consiguiente, a las mismas limitaciones inherentes en la exactitud de secuencia. Los polinucleótidos de la presente invención pueden obtenerse, mediante el uso de técnicas estándares de , clonación y de selección, a partir de una biblioteca de cADN derivada de mARN en células de cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer uterino y tejidos fetales humanos (por ejemplo, Sambrook eí al. , Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a Ed. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)). Los polinucleótidos de la invención también pueden obtenerse de fuentes naturales tales como bibliotecas genómicas de ADN o pueden sintetizarse mediante el uso de técnicas bastante conocidas y comercialmente disponibles. Cuando los polinucleótidos de la presente invención se utilizan para la producción recombinante de polipéptidos de la presente invención, el polinucleótido puede incluir la secuencia codificadora para el polipéptido madura, en sí; o la secuencia codificadora para el polipéptido maduro en la estructura de lectura con otras secuencias codificadoras, tales como aquellas que codifican una secuencia guía o secretora, una secuencia de pre-, o pro- o prepro-proteína u otra porción péptida de fusión. Por ejemplo, puede codificarse una secuencia marcadora que facilita la purificación del polipéptido fusionado. En ciertas modalidades preferidas de este aspecto de la invención, la secuencia marcadora es un péptido de hexa-histidina, como se proporciona en el vector pQE (Qiagen, Inc.) y se describe en Gentz eí al. , Proc. Nati. Acad. Sci. USA (1989) 86: 821 -824, o es un identificador de HA. El polinucleótido también puede contener secuencias no codificadores 5' y 3', tal como se transcriben, secuencias no traducidas, señales de separación y poliadenilación, sitios de enlace a ribosomas y secuencias que estabilizan mARN. Las modalidades adicionales de la presente invención incluyen polinucleótidos que codifican variantes polipéptidas que comprenden la secuencia amino acida de la SEQ ID NO:2 y de la cual varios residuos amino ácidos, por ejemplos desde 5 hasta 10, 1 a 5, 1 a 3, 1 a 2, o 1 , se substituyen, omiten o agregan en cualquier combinación. Los polinucleótidos que son idénticos o lo suficientemente idénticos con una secuencia nucleótida contenida en la SEQ ID NO: 1 pueden utilizarse como sondas de hibridización para cADN y ADN genómico o como cargas de inicio para una reacción de amplificación de ácido nucleico (PCR) a fin de aislar cADNs de longitud completa y clonas genómicas que codifican polipéptidos de la presente invención y aislar cADN y clonas genómicas de otros genes (incluyendo genes que codifican parálogos de fuentes humanas y ortólogos y parálogos de especies no humanas) que tienen una elevada similitud de secuencia con la SEQ ID NO: 1 . Típicamente estas secuencias nucleótidas son 70% idénticas, preferentemente 80% idénticas, más preferentemente 90% idénticas, más preferentemente 95% idénticas a las del referente. Las sondas o cargas de inicio generalmente comprenderán al menos 15 nucleótidos, preferentemente, al menos 30 nucleótidos y pueden tener al menos 50 nucleótidos. Las sondas particularmente preferidas tendrán entre 20 y 25 nucleótidos. En particular, los polipéptidos o polinucleótidos derivados de secuencias de origen animal homólogo podrían utilizarse como inmunogenes para obtener una respuesta inmune trans-reactiva para el gen humano. Un polinucleótido que codifica un polipéptido de la presente invención, incluyendo homólogos de especies diferentes la humana, pueden obtenerse mediante un proceso que comprende las etapas de: seleccionar una biblioteca apropiada bajo estrictas condiciones de hibridización con una sonda etiquetada que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 1 o un fragmento de la misma; y aislar cADN de longitud completa y clonas genómicas que contienen dicha secuencia polinucleótida. Tales técnicas de hibridización son muy conocidas por los artesanos expertos. Las estrictas condiciones de hibridización preferidas incluyen incubación durante la noche a 42°C en una solución que comprende: 50% de formamida, 5XSSC (150mM de NaCI, 15mM de citrato trisódico), 50 mM de fosfato de sodio (pH 7.6), 5X solución de Denhardt, 10% de sulfato de dextrano y 20 microgramos/ml de ADN de esperma de salmón cortado, desnaturalizado; seguido por enjuague de los filtros en O. l xSSC a aproximadamente 65°C. De esta manera, la presente invención también incluye polinucleótidos obtenibles mediante selección de una biblioteca apropiada, bajo estrictas condiciones de hibridización con una sonda etiquetada que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 1 o un fragmento de la misma. Los artesanos expertos apreciarán que, en muchos casos, una secuencia de cADN aislada se encontrará incompleta ya que la región que codifica el polipéptido es corta en el extremo 5' del cADN.

Existen varios métodos disponibles y muy conocidos por aquellos expertos en la materia para obtener cADNs de longitud completa, o extender cADNs cortos, por ejemplo, aquellos en base al método de Amplificación Rápida de extremos de cADN (RACE) (ver, por ejemplo, Frohman eí al. , PNAS USA 85, 8998-9002, 1988). Las modificaciones recientes en la técnica, ejemplificadas por la tecnología Marathón™ (Clontech Laboratories, Inc.), por ejemplo, han simplificado significativamente la búsqueda de cADNs más largos. En la tecnología de Marathón™, se han preparado cADNs de mARN extraído de un tejido elegido y una secuencia 'adaptadora' ligada a cada extremo. La amplificación de ácido nucleico (PCR) se lleva a cabo entonces para amplificar el extremo 5' 'faltante' del cADN mediante el uso de una combinación de cargas de inicio oligonucleótidas específicas de gen y específicas del adaptador. La reacción de PCR se repite entonces mediante el uso de cargas de inicio 'inclusivas', es decir, cargas de inicio diseñadas que fortalecen más 3' en la secuencia adaptadora y una carga de inicio específica de gen que fortalece más 5' en la secuencia genética conocida). Los productos de esta reacción pueden entonces analizarse por ordenamiento en secuencia de ADN y un cADN de longitud completa construido ya sea mediante la unión del producto directamente al cADN existente para dar una secuencia completa o llevando a cabo una PCR de longitud completa separada mediante el uso de la nueva información de secuencia para el diseño de la carga de inicio 5'. Los polipéptidos recombinantes de la presente invención pueden prepararse mediante procesos muy conocidos en la materia de células huéspedes genéticamente diseñadas que comprenden sistemas de expresión. De acuerdo con lo anterior, en un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un sistema de expresión que comprende un polinucleótido de la presente invención, para alojar células que se diseñan de manera genética con tales sistemas de expresión y para la producción de polipéptidos de la invención mediante técnicas recombinantes. Los sistemas de traslación libres de células también pueden emplearse para producir tales proteínas mediante el uso de ARNs derivados de las construcciones de ADN de la presente invención. Para la producción recombinante, las células huésped pueden diseñarse genéticamente para incorporar sistemas de expresión o porciones de los mismos para polinucleótidos de la presente invención. La introducción de polinucleótidos en células huésped puede efectuarse mediante métodos descritos en muchos manuales de laboratorio estándares, tales como Davis eí al. , Basic methods in Molecular Biology (1 986) y Sambrook eí al. , Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a Ed. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989). Los preferidos de tales métodos incluyen, por ejemplo, transfección de fosfato de calcio, transfección mediada por dextrano de DEAE, transvección, microinyección, transfección mediada por lípidos catiónicos, eiectroporación, transducción, carga de desguace, introducción o infección balística. Preferentemente, las proteínas de la invención se coexpresan con tioredoxina en trans (TIT). La coexpresión de tioredoxina en trans versus en cis, se prefiere para mantener al antígeno libre de tioredoxina sin necesidad de proteasa. La coexpresión de tioredoxina facilita la solubilización de las proteínas de la invención. La coexpresión de tioredoxina también tiene un impacto significativo sobre el rendimiento de purificación de la proteína, en la solubilidad y calidad de la proteína purificada. Los ejemplos representativos de huéspedes apropiados incluyen células bacterianas, tales como células de Streptococci, Staphylococci, E. coli, Streptomyces y Bacillus subtilis; células fúngales, tales como células de levadura y células de Aspergillus; células de insectos tales como células de Drosophila S2 y Spodoptera Sf9; células animales tales como células de CHO, COS, HeLa, C127, 3T3, BHK, HEK 293 y melanoma de Bowes; y células de plantas. Pueden utilizarse una gran variedad de sistemas de expresión, por ejemplo, sistemas cromosomales, episomales y derivados de virus, por ejemplo, vectores derivados de plásmidas bacterianas, de bacteriófago, de transposones, de episomas de levadura, de elementos de inserción, de elementos cromosomales de levadura, de virus tales como baculovirus, virus de papova, tales como SV40, virus de vacuna, adenovirus, virus pustular de aves, virus y retrovirus de pseudorabia, y vectores derivados de combinaciones de los mismos, tales como aquellos derivados de plásmidas y elementos genéticos bacteriófagos, tales como cósmidos y fagémidos. Los sistemas de expresión pueden contener regiones de control que regulan así como también engendran expresión, generalmente, puede utilizarse cualquier sistema o vector que sea capaz de mantener, propagar o expresar un polinucleótido para producir un polipéptido en un huésped. La secuencia nucleótida apropiada puede insertarse en un sistema de expresión mediante cualquier variedad de técnicas muy conocidas y de rutina, tales como, por ejemplo, aquellas establecidas en Sambrook eí al. , Molecular Cloning, A Laboratory Manual (supra). Pueden incorporarse señales de secreción apropiadas en el polipéptido deseado para permitir la secreción de la proteína trasladada al lumen del retículo endoplásmico, el espacio periplásmico o el ambiente extracelular. Estas señales pueden ser endógenas al polipéptido o pueden ser señales heterólogas . El sistema de expresión también puede ser un microorganismo vivo recombinante, tal como un virus o bacteria. El gen de interés puede insertarse en el genoma de un virus o bacteria recombinante, vivo. La inoculación y la infección in vivo con este vector vivo conducirán a la expresión in vivo del antígeno y la inducción de respuestas inmunes. Los virus y bacterias utilizados para este propósito son, por ejemplo, virus de aves (por ejemplo, vacunas, pustular de aves, pustular de canarios), alfavirus (virus de Sindbis, Virus del Bosque de Semliki, Virus de Encefalitis Equina de Venezuela), adenovirus , virus adeno-asociados, picornavirus (poliovirus, rinovirus), virus de herpes (virus zoster de varicela, etc.), Listeria, Salmonela, Shigela, BCG. Estos virus y bacterias pueden ser virulentos o atenuarse de diversas maneras con objeto de obtener vacunas vivas. Tales vacunas vivas también forma parte de la invención. Los polipéptidos de la presente invención pueden recuperarse y purificarse de cultivos celulares recombinantes mediante métodos muy conocidos que incluyen precipitación de etanol o sulfato de amonio, extracción de ácido, cromatografía de intercambio aniónico o catiónico, cromatografía de fosfocelulosa, cromatografía de interacción hidrofóbica, cromatografía de afinidad, cromatografía de hidroxilapatita y cromatografía de lectina. Más preferentemente, la cromatografía de afinidad metálica iónica (IMAC) se emplea para purificación. Pueden emplearse técnicas muy conocidas para regenerar la conformación activa cuando el polipéptido se desnaturaliza durante la síntesis intracelular, aislamiento y/o purificación. Otro aspecto importante de la invención se refiere a un método para inducir, re-forzar o modular una respuesta inmune en un mamífero que comprende la inoculación del mamífero con un fragmento o el polipéptido o polinucleótido entero de la invención, adecuado para producir anticuerpos y/o respuesta inmune de la célula T para profilaxis o para tratamiento terapéutico de cáncer y enfermedad autoinmune y las condiciones relacionadas. Todavía otro aspecto de la invención se refiere a un método para inducir, reforzar o modular la respuesta inmune en un mamífero, el cual comprende el suministro de un polipéptido de la presente invención a través de un vector o célula que dirige la expresión del polinucleótido y la codificación del polipéptido in vivo con objeto de inducir tal respuesta inmune a fin de producir respuestas inmunes para la profilaxis o el tratamiento de enfermedades en dichos mamíferos. Un aspecto adicional de la invención se refiere a una formulación inmunológica/de vacuna (composición) la cual, cuando se introduce en un huésped mamífero, induce, refuerza o modula una respuesta inmunológica en ese mamífero a un polipéptido de la presente invención, en donde la composición comprende un polipéptido o polinucleótido de la invención o un fragmento inmunológico del mismo, según se define con anterioridad en la presente. La formulación de vacuna puede comprender además un vehículo adecuado. Ya que un polipéptido puede fraccionarse en el estómago, preferentemente se administra de manera parental (por ejemplo, inyección subcutánea, intramuscular, intravenosa o intradérmica). Las formulaciones adecuadas para ia administración parenteral incluyen soluciones de inyección estéril acuosas y no acuosas que pueden contener anti-oxidantes, reguiadores, bacterioestatos y solutos que vuelven isotónica la formulación con la sangre del recipiente; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión o agentes de engrosamiento. Las formulaciones pueden presentarse en contenedores de dosis por unidad o múltiples dosis, por ejemplo, ampolletas selladas y frascos y puede almacenarse en una condición iiofiiizada que requiere solo de la adición del vehículo líquido estéril inmediatamente antes de utilizarse. Un aspecto adicional de la invención se refiere a la inducción in vitro de respuestas inmunes a un fragmento o el polipéptido o polinucleótido entero de la presente invención o una molécula que comprende el polipéptido o polinucleótido de la presente invención, utilizando células del sistema inmune de un mamífero y volviendo a formar la infusión de estas células inmunes activadas del mamífero para el tratamiento de la enfermedad. La activación de las células del sistema inmune se logra mediante la incubación in vitro con el polipéptido o polinucleótido entero de la presente invención o una molécula que comprende el polipéptido o polinucleótido de la presente invención en presencia o ausencia de diversas moléculas inmunomoduladoras. UN aspecto adicional de la invención se refiere a la inmunización de un mamífero mediante la administración de células que presentan antígeno, modificadas mediante carga in vitro con parte o todo el polipéptido de la presente invención o una molécula que comprende el polipéptido de la presente invención y administradas in vivo en una manera inmunogénica. De manera alternativa, las células que presentan antígenos pueden transfectarse in vitro con un vector que contiene un fragmento o el polinucleótido entero de la presente invención, de tal manera que se exprese el polipéptido correspondiente y se administre in vivo en una manera inmunogénica. La formulación de vacuna de la inyección también puede incluir sistemas adyuvantes para mejorar la inmunogenicidad de ia formulación. Preferentemente, el sistema adyuvante promueve preferentemente un tipo de respuesta TH1 . Una respuesta inmune puede distinguirse ampliamente en dos categorías extremas, siendo un respuesta inmune humoral o mediada por célula (caracterizada tradicionalmente por anticuerpos y mecanismos efectores celulares de protección, respectivamente). Estas categorías de respuesta se han llamado respuestas de tipo TH1 (respuesta mediada por célula) y respuestas inmunes de tipo TH2 (respuesta humoral). Las respuestas inmunes de tipo TH1 extremas pueden caracterizarse por la generación de linfocitos T citotóxicos, restringidos de haplotipo, específicos de antígeno y a respuestas de célula eliminadora natural. En los ratones, las respuestas de tipo TH 1 con frecuencia se caracterizan por la generación de anticuerpos del subtipo lgG2a, mientras que en los humanos estos corresponden a anticuerpos de tipo lgG1 . Las respuestas inmunes de tipo TH2 se caracterizan por la generación de un amplio rango de isotipos de inmunoglobulina, que incluyen en ratones lgG 1 , IgA e IgM. Puede considerarse que la fuerza motriz detrás del desarrollo de estos dos tipos de respuestas inmunes son las citocinas. Los niveles elevados de citocinas de tipo TH1 tienden a favorecer la inducción de respuestas inmunes mediadas por células al antígeno dado, mientras que los niveles elevados de citocinas de tipo TH2 tienden a favorecer la inducción de respuestas inmunes humorales al antígeno. La distinción de respuestas inmunes de tipo TH1 y TH2 no es absoluta. En realidad, un individuo soportará una respuesta inmune que se describe como predominantemente TH1 o predominantemente TH2. Sin embargo, con frecuencia es conveniente considerar las familias de citocinas en términos de lo descrito en clonas celulares T de CD4 + ve, murinas, de Mosmann y Coffman (Mosmann, T.R. and Coffman, R.L. (1989) TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties. Annual Review of Inmmunology, 7, p145-173). Tradicionalmente, las respuestas de tipo TH 1 se asocian con la producción de las citocinas INF-? e IL-2 por linfocitos T. Otras citocinas que con frecuencia se asocian directamente con la inducción de respuestas inmunes de tipo TH 1 no se producen por células T, tales como IL-1 2. En contraste, las respuestas de tipo TH2 se asocian con la secreción de IL-4, IL-5, IL-6 e IL-13. Se sabe que ciertos adyuvantes de vacuna son particularmente adecuados para la estimulación de respuestas de citocina ya sea de tipo TH1 o TH2. Tradicionalmente, los mejores indicadores del equilibrio TH 1 :TH2 de la respuesta inmune después de una vacunación o infección incluyen la medición directa de la producción de citocinas de TH 1 o TH2 mediante linfocitos T in vitro después de la re-estimulación con antígeno y/o la medición de la proporción de lgG1 :lgG2a de respuestas de anticuerpo específicas de antígeno. Por lo tanto, un adyuvante de TH 1 es uno que preferentemente estimula poblaciones aisladas de célula T a fin de producir niveles elevados de citocinas de tipo TH1 cuando se re-estimulan con antígeno in vitro, y promueve el desarrollo tanto de linfocitos T citotóxicos de CD8+ como de respuestas de inmunoglobulina específicas de antígeno asociadas con isotipo de tipo TH 1 . Los adyuvantes que son capaces de estimulación preferencial de la respuesta de célula T, se describen en la Solicitud Internacional de Patente No. WO 94/00153 y la WO 95/17209. El lípido A de monofosforilo 3 De-O-acilado (3D-MPL) es uno de tales adyuvantes. Se conoce de GB 222021 1 (Ribi). Químicamente es una mezcla de lípido A de monofosforilo 3 De-O-acilado con cadenas aciladas 4, 5 o 6 y se fabrica por Ribi Immunochem, Montana. Una forma preferida de lípido A de monofosforilo 3 De-O-acilado se expone en la Patente Europea 0 689 454 B1 (SmithKIine Beecham Biologicals SA).

Preferentemente, las partículas de 3D-MPL son lo suficientemente pequeñas para filtrarse por esterilización a través de una membrana de 0.22 micrones (Patente Europea Número 0 689 454). 3D-MPL se presentará en el rango de 10µg - 1 00µg, preferentemente 25-50µg por dosis, en donde el antígeno se presentará típicamente en un rango de 2-50µg por dosis. Otro adyuvante preferido comprende QS21 , una fracción no tóxica purificada con Hplc, derivada de la mordida de Quillaja Saponaria Molina. Opcionalmente, este puede mezclarse con lípido A de monofosforilo 3 De-O-acilado (3D-MPL), opcionalmente junto con un vehículo. El método de producción de QS21 se expone en la Patente de EU No. 5,057,540. Las formulaciones adyuvantes no reactogénicas que contienen QS21 se han descrito previamente (WO 96/33739). Tales formulaciones que comprenden QS21 y colesterol han demostrado ser exitosos adyuvantes estimuladores de TH1 cuando se formulan junto con un antígeno. Los adyuvantes adicionales que son estimuladores preferenciales de respuesta celular de TH 1 incluyen oligonucleótidos inmunomoduladores, por ejemplo, secuencias de CpG no metiladas como se expone en WO 96/02555. Las combinaciones de diferentes adyuvantes estimuladores de TH1 , tales como aquellos mencionados con anterioridad en la presente, también se contemplan en cuanto a la proporción de un adyuvante que es un estimulador preferencial de la respuesta celular de TH 1 . Por ejemplo, QS21 puede formularse junto con 3D-MPL. La proporción de QS21 :3D-MPL será típicamente del orden de 1 : 1 0 a 10: 1 ; preferentemente de 1 :5 a 5: 1 y con frecuencia substancialmente de 1 : 1 . El rango preferido para la sinergia óptima es de 2.5: 1 a 1 : 1 de 3D-MPL:QS21 . Preferentemente también se presenta un vehículo en la composición de vacuna de acuerdo a la invención. El vehículo puede ser una emulsión de aceite en agua o una sal de aluminio, tal como fosfato de aluminio o hidróxido de aluminio. Una emulsión preferida de aceite en agua comprende un aceite metabolisable, tal como escualeno, alfa-tocoferol y Tween 80. En un aspecto particularmente preferido, los antígenos en la composición de vacuna de acuerdo a la invención se combinan con QS21 y 3D-MPL en tal emulsión. De manera adicional, la emulsión de aceite en agua puede contener un intervalo 85 y/o lecitina y/o tricaprilina. Típicamente, para la administración en humanos, QS21 y 3D-MPL se presentarán en una vacuna en el rango de 1 µg-200µg, tal como 10-100µg, preferentemente 10µg-50µg por dosis. Típicamente, el aceite en agua comprenderá desde 2 hasta 10% de escualeno, desde 2 hasta 10% de alfa tocoferol y desde 0.3 hasta 3% de tween 80. Preferentemente, la proporción de escualeno:alfa tocoferol es igual o menor a 1 , ya que esto proporciona una emulsión más estable. El intervalo 85 también puede presentarse a un nivel de 1 %. En algunos casos puede ser ventajoso que las vacunas de la presente invención contengan además un estabilizador.

Las emulsiones no tóxicas de aceite en agua preferentemente contienen un aceite no tóxico, por ejemplo, escualeno o escualano, un emulsificador, por ejemplo, Tween 80, en un vehículo acuoso. El vehículo acuoso puede ser, por ejemplo, solución salina regulada con fosfato. Una formulación de adyuvante particularmente potente que involucra QS21 , 3D-MPL y tocoferol en una emulsión de aceite en agua se describe en WO 95/1 721 0. La presente invención también proporciona una composición de vacuna polivalente que comprende una formulación de vacuna de la invención en combinación con otros antígenos, en particular, antígenos útiles en el tratamiento de cánceres, enfermedades autoinmunes y condiciones relacionadas. Tal composición de vacuna polivalente puede incluir un adyuvante inductor de TH1 como se describe con anterioridad en la presente. Esta invención también se refiere al uso de polinucleótidos. en la forma de cargas de inicio derivadas de los polinucleótidos de la presente invención y de polipéptidos en la forma de anticuerpos o reactivos específicos para el polipéptido de la presente invención, como reactivos de diagnóstico. La identificación de marcadores genéticos o bioquímicos en la sangre o tejidos que permitan la detección de cambios muy tempranos a lo largo de la trayectoria de carcinogénesis ayudará en la determinación del mejor tratamiento para el paciente. Los marcadores de tumor subrogados, tales como la expresión de polinucleótidos, pueden utilizarse para diagnosticar diferentes formas y estados de cáncer. La identificación de niveles de expresión de los polinucleótidos de la invención será útil tanto en la determinación de la etapa del desorden canceroso como en la clasificación de la naturaleza del tejido canceroso. El proceso de determinación de la etapa monitorea el avance del cáncer y se determina en presencia o ausencia de tejido maligno en las áreas estudiadas en la biopsia. Los poiinucleótidos de la invención pueden ayudar a perfeccionar el proceso de determinación de la etapa al identificar marcadores de la agresividad del cáncer, por ejemplo, la presencia en diferentes áreas del cuerpo. La clasificación del cáncer describe qué tanto se parece un tumor a tejido normal de su mismo tipo y se determina mediante su morfología celular y otros marcadores de diferenciación. Los polinucleótidos de la invención pueden ser útiles en la determinación del grado tumoroso y pueden ayudar en la determinación del estado de diferenciación de las células de un tumor. Los ensayos de diagnóstico ofrecen un proceso para diagnosticar o determinar una susceptibilidad a los cánceres, enfermedad autoinmune y condiciones relacionadas a través del diagnóstico mediante métodos que comprenden la determinación a partir de una muestra derivada de un sujeto con un nivel anormalmente disminuido o incrementado de polipéptido o mARN. Este método de diagnóstico se conoce como expresión diferencial. La expresión de un gen particular se compara entre un tejido enfermo y un tejido normal. Una diferencia entre el gen relacionado con el polinucleótido, el mARN, o la proteína en los dos tejidos se compara, por ejemplo en peso molecular, secuencia amino acida o nucleótida, o abundancia relativa, indica un cambio en el gen que lo regula, en el tejido del humano que se sospecha se encuentra enfermo. La expresión disminuida o incrementada puede medirse en el nivel de ARN. El poliA ARN se aisla primero de los dos tejidos y la detección de mARN codificado por un gen correspondiente a un polinucleótido diferencialmente expresado de la invención puede detectarse, por ejemplo, mediante hibridización in situ en secciones de tejido, PCR de transcriptasa inversa, mediante el uso de manchados Northern que contienen poli A + mARN o cualquier otro método de detección de ARN directo o indirecto. Una expresión incrementada o disminuida de un ARN dado en un tejido enfermo en comparación con un tejido normal sugiere que ia transcripción y/o la proteína expresada tienen un papel en la enfermedad. Por lo tanto, la detección de un nivel mayor o inferior de mARN correspondiente a la SEQ ID NO:1 o 3 con relación al nivel normal es indicativo de la presencia de cáncer en el paciente. Los niveles de expresión de mARN en una muestra pueden determinarse mediante la generación de una biblioteca de identificadores de secuencia expresados (ESTs) de la muestra. La representación relativa de ESTs en la biblioteca puede utilizarse para determinar la representación relativa de la transcripción genética en la muestra de inicio. El análisis de EST de la prueba puede entonces compararse con el análisis de EST de una muestra de referencia para determinar los niveles de expresión relativa del polinucleótido de interés. Pueden llevarse a cabo otros análisis de mARN mediante el uso de análisis en serie de la metodología de expresión genética (SAGE) (Velculescu eí al. , Science (1995) 270:484), metodología de despliegue diferencial (por ejemplo, Patente de EU No. 5,776,683) o análisis de hibridización que depende de la especificidad de las interacciones nucleótidas. De manera alternativa, la comparación podría hacerse al nivel de la proteína. Los tamaños de la proteína en los dos tejidos pueden compararse mediante el uso de anticuerpos para detectar polipéptidos en manchados Western de extractos de proteína provenientes de los dos tejidos. Los niveles de expresión y la localización subcelular pueden detectarse también de manera inmunológica mediante el uso de anticuerpos para la proteína correspondiente. Las técnicas de ensayo adicionales que pueden utilizarse para determinar los niveles de una proteína, tal como un polipéptido de la presente invención, en una muestra derivada de un huésped, son muy conocidas por aquellos expertos en la materia. Un nivel elevado o disminuido de expresión de polipéptidos en el tejido enfermo en comparación con el mismo nivel de expresión de proteína en el tejido normal indica que la proteína expresada puede estar involucrada en la enfermedad. En los ensayos de la presente invención, el diagnóstico puede determinarse mediante la detección de niveles de expresión de productos genéticos codificados por al menos una secuencia establecida en las SEQ ID NOS: 1 o 3. Una comparación de los niveles de mARN o proteína en un tejido enfermo contra uno normal, también puede utilizarse para dar seguimiento al progreso o remisión de una enfermedad. Un gran número de secuencias polinucleótidas en una muestra puede ensayarse mediante el uso de instalaciones polinucleótidas. Estas pueden utilizarse para examinar la expresión diferencial de genes y para determinar la función genética. Por ejemplo, las instalaciones de las secuencias polinucleótidas SEQ ID NO: 1 o 3 pueden utilizarse para determinar si cualquiera de los polinucleótidos se expresa de manera diferencial entre una célula normal y una de cáncer. En una modalidad de la invención, una instalación de sondas oligonucleótidas que comprende la secuencia nucleótida de la SEQ ID NO: 1 o 3 o un fragmento de la misma, puede construirse para conducir la selección eficiente de, por ejemplo, mutaciones genéticas. Los métodos de la tecnología de instalación son muy conocidos y tienen una aplicación general y pueden utilizarse para dirigir una variedad de cuestiones en genética molecular, incluyendo expresión genética, enlace genético y variabilidad genética (ver, por ejemplo: M. Chee eí al. , Science, Vol. 274, pág. 610-613 (1996)). Según se utiliza en la presente, "diagnóstico" incluye la determinación de la susceptibilidad de un sujeto a una enfermedad, determinación en cuanto a si un sujeto realmente tiene la enfermedad y también al pronóstico de un sujeto afectado por la enfermedad. La presente invención se refiere además a un equipo de diagnóstico para llevar a cabo un ensayo de diagnóstico, el cual comprende: (a) un polinucleótido de la presente invención, preferentemente ia secuencia nucleótida de la SEQ ID NO: 1 o 3, o un fragmento de la misma; (b) una secuencia nucleótida complementaria a la de (a); (c) un polipéptido de la presente invención, preferentemente el polipéptido de la SEQ ID NO:2, o un fragmento de la misma; o (d) un anticuerpo para un polipéptido de la presente invención, preferentemente para el polipéptido de la SEQ ID NO:2. Las secuencias nucleótidas de la presente invención también son valiosas para la localización cromosómica. La secuencia se dirige de manera específica y puede hibridizarse con una ubicación en particular sobre un cromosoma humano individual. La representación de la secuencias relevantes para los cromosomas de acuerdo a la presente invención, es una primer etapa importante en correlación de aquellas secuencias con la enfermedad asociada al gen. Una vez que se ha representado una secuencia en una ubicación cromosómica precisa, la posición física de la secuencia en el cromosoma puede correlacionarse con los datos del mapa genético. Tales datos se encuentran en, por ejemplo, V. McKusick, Mendelian Inheritance in Man (disponible en línea a través de Johns Hopkins University Welch Medical Library). La relación entre los genes y enfermedades que se han representado para la misma región cromosómica se identifica entonces a través de análisis de enlace (co-herencia de genes físicamente adyacentes). También pueden determinarse las diferencias en el cADN o secuencia genómica entre los individuos afectados y no afectados. Los polipéptidos de la invención o sus fragmentos o análogos de los mismos, o células que los expresan, también pueden utilizarse como inmunogenes para producir anticuerpos inmunoespecíficos para polipéptidos de la presente invención. El término "inmunoespecífico" significa que los anticuerpos tienen una afinidad substancialmente mayor con los polipéptidos de la invención que su afinidad respecto a otros polipéptidos relacionados en la técnica anterior. En un aspecto adicional, la invención proporciona un anticuerpo inmunoespecífico para un polipéptido de acuerdo a la invención o un fragmento inmunológico del mismo, según se define con anterioridad en la presente. Preferentemente, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. Los anticuerpos generados contra ios polipéptidos de la presente invención pueden obtenerse mediante la administración de los polipéptidos o fragmentos que contienen ei epítope, análogos o células a un animal, preferentemente un animal no humano, mediante el uso de protocolos de rutina. Para la preparación de anticuerpos monoclonales, puede utilizarse cualquier técnica que proporcione anticuerpos producidos por cultivos de línea celular continua. Los ejemplos incluyen la técnica de hibridoma (Kohler, G. y Milstein, C. .Nature (1975) 256: 495-497), la técnica de trioma, la técnica de hibridoma de célula B humana (Kozbor eí al. , Immunology Today (1983) 4:72) y la técnica de hibridoma de EBV (Colé eí al. , Monoclonal Antibodies and Cáncer Therapy, 77-96, Alan R. Liss, Inc. , 1985). Las técnicas para la producción de anticuerpos de una sola cadena, tales como aquellas descritas en la Patente de E.U. No. 4,946,778, también pueden adaptarse para producir anticuerpos de una sola cadena para polipéptidos de esta invención. También, los ratones transgénicos u otros organismos, incluyendo otros mamíferos, pueden utilizarse para expresar anticuerpos humanizados. Los anticuerpos arriba descritos pueden emplearse para aislar o para identificar clonas que expresan el polipéptido o para purificar los polipéptidos mediante cromatografía de afinidad. El anticuerpo de la invención también puede emplearse para prevenir o tratar cáncer, particularmente cáncer de ovarios y colon, enfermedad autoinmune y las condiciones relacionadas. Otro aspecto de la invención se refiere a un método para inducir o modular una respuesta inmunológica en un mamífero, el cual comprende inocular el mamífero con un polipéptido de la presente invención, adecuarse para producir el anticuerpo y/o respuesta inmune de célula T para proteger o disminuir los síntomas o el progreso de la enfermedad. Todavía otro aspecto de la invención se refiere a un método para inducir o modular una respuesta inmunológica en un mamífero, el cual comprende el suministro de un polipéptido de la presente invención a través de un vector que dirige la expresión del polinucleótido y la codificación del polipéptido in vivo con objeto de inducir una respuesta inmunológica para producir anticuerpos a fin de proteger a dicho animal de las enfermedades. Por consiguiente, se apreciará que la presente invención proporciona un método para tratar condiciones anormales tales como, por ejemplo, enfermedades autoinmunes y de cáncer, en particular, cáncer de ovarios y de colon, relacionadas ya sea con la presencia o exceso, o una expresión baja de, actividad de polipéptido de CASB618.

La presente invención proporciona además un método para seleccionar compuestos a fin de identificar aquellos que estimulan o que inhiben la función del polipéptido CASB618. En general, pueden emplearse agonistas o antagonistas para propósitos terapéuticos y profilácticos para enfermedades tales como las mencionadas con anterioridad en la presente. Los compuestos pueden identificarse a partir de una variedad de fuentes, por ejemplo, células, preparaciones libres de células, bibliotecas químicas y mezclas de productos naturales. Tales agonistas, antagonistas o inhibidores así identificados pueden ser substratos naturales o modificados, ligandos, receptores, enzimas, etc. , según pueda ser el caso dei polipéptido; o pueden ser imitadores estructurales o funcionales de los mismos (ver Coligan eí al. , Current Protocols in Immunology 1 (2):Capítulo 5 (1991 )). Los métodos de selección se conocerán por aquellos expertos en la materia. Pueden encontrarse métodos adicionales de selección en, por ejemplo, D. Bennett eí al. , J Mol Recognition, 8: 52-58 (1995); y K. Johanson eí al. , J Biol Chem, 270.(16): 9459-9471 (1995) y las referencias en la presente. Por lo tanto, la invención proporciona un método de selección para identificar compuestos que estimulan o que inhiben la función del polipéptido de la invención, que comprende un método seleccionado a partir del grupo que consiste en: (a) medir la unión de un compuesto candidato al polipéptido (o a las células o membranas que contienen el polipéptido) o una proteína de fusión del mismo por medio de una etiqueta directa o indirectamente asociada con el compuesto candidato; (b) medir la unión de un compuesto candidato al polipéptido (o a las células o membranas que contienen ei polipéptido) o una proteína de fusión del mismo en presencia de un competidor etiquetado; (c) probar si el compuesto candidato da como resultado una señal generada mediante la activación o inhibición del polipéptido, utilizando sistemas de detección apropiados para las células o membranas celulares que contienen el polipéptido; (d) mezclar un compuesto candidato con una solución que contiene un polipéptido según la reivindicación 1 , para formar una mezcla, medir la actividad del polipéptido en la mezcla y comparar la actividad de la mezcla con un estándar; o (e) detectar el efecto de un compuesto candidato sobre la producción de mARN que codifica dicho polipéptido y dicho polipéptido en las células, mediante el uso, por ejemplo, de un ensayo de ELISA. El polipéptido de la invención puede utilizarse para identificar ia unión de membrana o receptores solubles, si es que existen, a través de técnicas estándares de unión a receptor conocidas en la materia. También pueden utilizarse métodos muy conocidos de selección para identificar agonistas y antagonistas del polipéptido de la invención que compiten con la unión del polipéptido de la invención a sus receptores, si es que existen. Por lo tanto, en otro aspecto, la presente invención se refiere a un equipo de selección para identificar agonistas, antagonistas, ligandos, receptores, substratos, enzimas, etc. , para polipéptidos de la presente invención; o compuestos que disminuyen o mejoran la producción de tales polipéptidos; el cual comprende: (a) un polipéptido de la presente invención; (b) una célula recombinante que expresa un polipéptido de la presente invención ; (c) una membrana celular que expresa un polipéptido de la presente invención; o (d) un anticuerpo para un polipéptido de la presente invención; cuyo poiipéptido es preferentemente el de la SEQ ID NO:2 Se apreciará fácilmente por el artesano experto que un polipéptido de la presente también puede utilizarse en un método para el diseño en base a estructura de un agonista, antagonista o inhibidor del polipéptido, al: (a) determinar en el primer caso la estructura tridimensional del polipéptido; (b) deducir la estructura tridimensional para el probable sitio(s) reactivo(s) o de unión de un agonista, antagonista o inhibidor; (c) sintetizar los compuestos candidatos que se predice se unirán o reaccionarán con el sitio reactivo o de unión deducido; y (d) probar si los compuestos candidatos son agonistas, antagonistas o inhibidores. La terapia genética también puede emplearse para efectuar la producción endógena de polipéptido CASB618 mediante las células relevantes en el sujeto. Para una idea general de la terapia genética, ver Capítulo 20, Gene Therapy and Other Molecular Genetic-based Therapeutic Approaches, (y las referencias citadas en la presente) en Human Molecular Genetics, T Strachan y A P Read, BIOS Scientific Publishers Ltd (1996). La preparación de la vacuna se describe en general en Pharmaceutical Biotechnology, Vol. 61 Vaccine Design - el enfoque de subunidad y adyuvante, editado por Powell y Newman, Plenum Press, 1995. New Trends and Developments in Vaccines, editado por Voller eí al. , University Park Press, Baltimore, Maryland, E. U.A. , 1978. La encapsulación dentro de los liposomas se describe, por ejemplo, por Fullerton, Patente de E.U. No. 4,235,877. La conjugación de las proteínas con macromoléculas se expone, por ejemplo, por Likhite, Patente de E.U. No. 4,372,945 y por Armor eí al. , Patente de E.U. No. 4,474,757. La cantidad de vacuna en cada dosis de vacuna se selecciona como una cantidad que induce una respuesta inmunoprotectora sin efectos colaterales adversos, significativos, en vacunados típicos. Tal cantidad variará dependiendo del inmunogen específico que se emplea. En general, se espera que cada dosis comprenda de 1 -1000µg de proteína, preferentemente 2-100µg, más preferentemente 4-40µg. Una cantidad óptima para una vacuna particular puede determinarse mediante estudios estándares que involucran la observación de títulos de anticuerpo y otras respuestas en sujetos. Después de una vacunación inicial, los sujetos pueden recibir un refuerzo en aproximadamente 4 semanas. "Aislado" significa alterado "por la mano del hombre" a partir del estado natural. Si una composición o substancia "aislada" ocurre en la naturaleza, se ha cambiado o retirado de su ambiente original, o ambos.

Por ejemplo, un polinucleótido o un polipéptido naturalmente presente en un animal vivo no se "aisla", pero el mismo polinucleótido o polipéptido separado de los materiales coexistentes de su estado natural se "aisla", según se emplea el término en la presente. "Polinucleótido" se refiere en general a cualquier poliribonucleótido o polideoxiribonucleótido, que puede ser ARN o ADN no modificado o ARN o ADN modificado que incluye regiones de doble filamento y de un solo filamento. "Variante" se refiere a un polinucleótido o polipéptido que difiere de un polinucleótido o polipéptido de referencia, pero que retiene las propiedades esenciales. Una variante típica de un poiinucleótido difiere en la secuencia nucleótida de otro polinucleótido de referencia. Los cambios en la secuencia nucleótida de la variante pueden o no alterar la secuencia amino acida de un polipéptido codificado por el polinucleótido de referencia. Los cambios nucleótidos pueden dar como resultado substituciones amino acidas, adiciones, omisiones, fusiones y truncaciones en el polipéptido codificado por la secuencia de referencia, según se discute a continuación. Una variante típica de un polipéptido difiere en la secuencia amino acida de otro polipéptido de referencia. En general, las diferencias se limitan a fin de que las secuencias del polipéptido de referencia y la variante sean bastante similares en general e idénticas en muchas regiones. Una variante y polipéptido de referencia pueden diferir en la secuencia amino acida en una o más substituciones, adiciones, omisiones en cualquier combinación. Un residuo amino ácido substituido o insertado puede o no codificarse por el código genético. Una variante de un polinucleótido o polipéptido puede ser naturalmente ocurrente, tal como una variante alélica, o puede ser una variante que no se sepa que ocurre naturalmente. Las variantes de polinucleótidos y polipéptidos que no ocurren de manera natural, pueden elaborarse mediante técnicas de mutagénesis o mediante síntesis directa. Como se conoce en la materia, "identidad" es una relación entre dos o más secuencias polipéptidas o dos o más secuencias polinucleótidas, según se determine al comparar las secuencias. En la materia, "identidad" también significa el grado de relación de secuencia entre las secuencias polipéptidas y polinucleótidas. "Identidad" y "similitud" pueden calcularse fácilmente mediante métodos conocidos, incluyendo pero sin limitarse a aquellos descritos en (Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed. , Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W. , ed. , Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M. , and Griffin, H.G. , eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; y Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds. , M Stockton Press, New York, 1 991 ; y Carrillo, H. , and Lipman, D. , SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988). Los métodos preferidos para determinar la identidad se diseñan para dar la mayor concordancia entre las secuencias examinadas. Los métodos para determinar la identidad y similitud se codifican en programas computarizados públicamente disponibles. Los métodos de programa computarizado preferidos para determinar la identidad y similitud entre dos secuencias incluye, pero sin limitarse, el paquete de programa de GCG (Devereux, J. eí al. , Nucleic Acids Research 12(1): 387 (1 984)), BLASTP, BLASTN y FASTA (Atschul, S. F. eí al. , J. Molec. Biol. 215: 403-41 0 (1 990). El programa de BLAST X se encuentra públicamente disponible en NCBI y otras fuentes (BLAST Manual, Altschul, S. , eí al. , NCBI NLM NIH Bethesda, MD- 20894; Altschul, S. , eí al. , J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990). También puede utilizarse el muy conocido algoritmo Smith Waterman para determinar la identidad. El algoritmo preferido utilizado en FASTA. Los parámetros preferidos para la secuencia polipéptida o polinucleótida en comparación mediante el uso de este algoritmo, incluye lo siguiente: Penalidad de Intervalo: 12 Penalidad de extensión de Intervalo: 4 Tamaño de la palabra: 2, máximo 6. Los parámetros preferidos para la comparación de secuencia polipéptida con otros métodos, incluyen lo siguiente: 1 ) Algoritmo: Needleman y Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443-453 (1970) Matriz de Comparación: BLOSSUM62 de Hentikiff and Hentikoff, Proc. Nati. Acad. Sci, USA 89: 10915-10919 (1992) Penalidad de lntervalo: 12 Penalidad de Longitud de Intervalo: 4 Un programa útil con estos parámetros es el programa de "intervalo" públicamente disponible en Genetics Computer Group, Madison Wl. Los parámetros antes mencionados son los parámetros por omisión para las comparaciones de polipéptidos (junto con penalidad nula para intervalos finales).

Los parámetros preferidos para la comparación de polinucleótidos incluyen los siguientes: 1 ) Algoritmo: Needleman y Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443-453 (1970) Matriz de Comparación: concordancia = +1 0, no concuerda = 0 Penalidad de Intervalo: 50 Penalidad de Longitud de Intervalo: 3 Un programa útil con estos parámetros es el programa de "intervalo" públicamente disponible en Genetics Computer Group, Madison Wl. Los parámetros antes mencionados son los parámetros por omisión para las comparaciones de polinucleótidos. A manera de ejemplo, una secuencia polinucleótida de la presente invención puede ser idéntica a la secuencia de referencia de la SEQ ID NO: 1 , es decir, ser 100% idéntica o puede incluir hasta un cierto número entero de alteraciones nucleótidas en comparación con la secuencia de referencia. Tales alteraciones se seleccionan a partir del grupo que consiste en al menos una omisión nucleótida, substitución, incluyendo transición y transversión o inserción y en donde dichas alteraciones pueden ocurrir en las posiciones de terminal 5' o 3' de la secuencia nucleótida de referencia o donde sea entre aquellas posiciones terminales, interpuestas ya sea de manera individual entre los nucleótidos en la secuencia de referencia o en uno o más grupos contiguos dentro de la secuencia de referencia. El número de alteraciones nucleótidas se determina mediante la multiplicación del número total de nucleótidos en ia SEQ ID NO: 1 por el porcentual numérico de la identidad porcentual respectiva (dividida entre 100) y la substracción de ese producto de dicho número total de nucleótidos en la SEQ ID NO: 1 , o: nn < Xn - (Xn - Y). en donde n„ es el número de alteraciones nucleótidas, xn es el número total de nucleótidos en la SEQ ID NO: 1 e y es, por ejemplo, 0.70 para 70%, 0.80 para 80%, 0.85 para 85%, 0.90 para 90%, 0.95 para 95%, etc. , y en donde cualquier producto no entero de x„ e y se redondea al número entero más cercano antes de restarlo de xn. Las alteraciones de la secuencia polinucleótida que codifica el polipéptido de la SEQ ID NO:2 pueden crear mutaciones de no detección, detección errónea o de desplazamiento de estructura en esta secuencia codificadora y alterar así el polipéptido codificado por el polinucleótido que sigue tales alteraciones. De manera similar, una secuencia polipéptida de la presente invención puede ser idéntica a la secuencia de referencia de la SEQ ID NO:2, es decir 100% idéntica, o puede incluir hasta un cierto número entero de alteraciones amino acidas en comparación con la secuencia de referencia, de tal manera que el % de identidad es de menos de 100%. Tales alteraciones se seleccionan a partir del grupo que consiste en al menos una omisión amino acida, substitución, incluyendo substitución conservativa y no conservativa, o inserción, y en donde dichas alteraciones pueden ocurrir en las posiciones de terminal amino o carboxi de la secuencia polipéptida de referencia o donde sea entre aquellas posiciones terminales, intercalarse ya sea de manera individual entre los amino ácidos en la secuencia de referencia o en uno o más grupos contiguos dentro de la secuencia de referencia. El número de alteraciones amino acidas para un % de identidad dado se determina mediante la multiplicación del número total de amino ácidos en la SEQ ID NO:2 por el porcentaje numérico de la identidad porcentual respectiva (dividida entre 1 00) y después la substracción de ese producto de dicho número total de amino ácidos en la SEQ ID NO:2, o: na < xa - (xa • y), en donde na es el número de alteraciones amino acidas, xa es el número total de amino ácidos en la SEQ ID NO:2 e y es, por ejemplo, 0.70 para 70%, 0.80 para 80%, 0.85 para 85%, etc. , y en donde cualquier producto no entero de xa e y se redondea al número entero más cercano antes de restarlo de xa. "Homólogo" es un término genérico utilizado en la materia para indicar una secuencia polinucleótida o polipéptida que posee un alto grado de relación de secuencias con una secuencia sujeto. Tal relación puede cuantificarse mediante la determinación del grado de identidad y/o similitud entre las secuencias que están siendo comparadas, según se describe con anterioridad en la presente. Cayendo dentro de éste término genérico, se encuentran los términos "ortólogo", que significa un polinucleótido o polipéptido que es el equivalente funcional de un polinucleótido o polipéptido en otra especie y "parólogo" que significa una secuencia funcionalmente similar cuando se considera dentro de la misma especie.

LEYENDAS DE LAS FIGURAS Figura 1 La figura 1 muestra los niveles de expresión de CASB618 en muestras comparadas de colon tumoral y normal. Los valores se dan en un nivel de actina equivalente. N se refiere a colon normal, T se refiere a colon tumoral. Figura 2 Las figuras 2A, 2B, 2C y 2D muestran los datos de PCR de tiempo real de la expresión de CASB618 en tejidos normales. Las abreviaturas significan: Figura 2A: Co:colon; Ce:cervix; Bra:cerebro; Bo_Ma: médula ósea; B cuchilla; Ao:aorta; Ad_GI:glándula adrenal Figura 2B: Ov:ovario; Oe:esófago; Ly_No:nodo linfático; Lu:pulmón; Li:hígado; K riñón; ll:íleo; He orazón; Fa_Tu:trompa de faiopio Figura 2C: Sp:bazo; Sm_ln:intestino delgado; Sk_Mu:músculo esquelético; Sk:piel; Re:recto; Pr:próstata; P placenta; Pa_Thy:glándula paratiroide Figura 2D: Tptráquea; Thy:tiroide; Te:testículos; St:estómago; Spkbazo Figura 3 La figura 3 muestra un gel de SDS-PAGE (12.5%) del extracto de E. coli AR120/pRIT15081 , con o sin inducción con ácido nalidíxico; revelado con anticuerpo monoclonal anti-NS1 . La hilera 1 es el marcador de peso molecular; la hilera 2 muestra 3 hrs. sin inducción de E. coli AR120/pRIT15081 ; la hilera 3 muestra al E. coli AR120/pRIT15081 inducido 3 hrs. ; la hilera 4 muestra al E. coli AR120/pRIT15081 sin inducción 4h30; la hilera 5 muestra al E. coli AR120/pRIT15081 inducido 4h30. Figura 4 La figura 4 muestra geles de SDS-PAGE de CASB618 purificado. Las hileras 1 y 8 muestran el marcador de peso molecular; la hilera 2 muestra la pelotilla celular pasada por lisis; la hilera 3 muestra la proteína purificada antes de la diálisis; la hilera 4 muestra la proteína purificada pasada por diálisis; la hilera 6 muestra los 0.22 µm de proteína purificada pasada por diálisis.

EJEMPLOS Ejemplo 1 Análisis de RT-PCR en tiempo real La RT-PCR de tiempo real (U. Gibson. 1996. Genome Research: 6,996) se utiliza para comparar la abundancia de transcripción de mARN del antígeno candidato en tejidos de colon tumorales y normales, comparados, provenientes de múltiples pacientes. Además, los niveles de mARN del gen candidato en un panel de tejidos normales se evalúa mediante este enfoque. El ARN total de colon tumoroso y normal se extrae de biopsias congeladas rápidamente mediante el uso de reactivo TriPure (Boehringer). El ARN total proveniente de tejidos normales se adquiere en InVitrogen o se extrae de biopsias congeladas rápidamente mediante el uso de reactivo TriPure. El poli-A+ mARN se purifica a partir de ARN total después del tratamiento de ADNasa mediante el uso de glóbulos oligo-dT magnéticos (Dynal). La cuantificacíón del mARN se lleva a cabo mediante espectrofluorimetría (VersaFluor, BioRad) utilizando tintura Sybrll (Molecular Probes). Las cargas de inicio para la amplificación de PCR de tiempo real se diseñan con el software Primer Express de Perkin-Elmer mediante el uso de las opciones por omisión para condiciones de amplificación TaqMan. Las reacciones de tiempo real se ensamblan de acuerdo a protocolos estándares de PCR mediante el uso de 2 ng de mARN para cada reacción. La tintura Sybrl (Molecular Probes) se agrega a una dilución final de 1 /75000 para la detección de tiempo real. La amplificación (40 ciclos) y la detección en tiempo real se llevan a cabo en un sistema de BioSystems PE7700 de Perkin-Elmer mediante el uso de disposiciones de instrumentos convencionales. Los valores de Ct se calculan mediante el uso del software Detector de Secuencia PE7700. Se obtienen dos valores de Ct para cada muestra de paciente: el Ct de tumor (CtT) y el Ct de colon normal comparado (CtN). Los valores de Ct obtenidos mediante PCR de tiempo real se relacionan de manera lineal por logaritmo con el número de copias del templado objetivo. Ya que la eficiencia de la amplificación de PCR bajo las condiciones experimentales prevalecientes es cercana a la eficiencia de amplificación teórica, 2(CtN CtT) es un estimado de los niveles de transcripción relativos en los dos tejidos (es decir, la sobre-expresión de doblez de mARN en el tumor). Las reacciones de PCR de tiempo real se llevan a cabo en biopsias provenientes de 23 pacientes. Algunas muestras de pacientes se midieron dos veces. El nivel de la sobre-expresión de mARN se calcula como se describe para cada paciente. El nivel promedio de la sobre-expresión de mARN para el antígeno candidato y la proporción de la sobre-expresión en pacientes del antígeno candidato se calcula entonces a partir de este conjunto de datos. Los valores individuales se estandarizan con respecto a la actina en la misma muestra (proporción) y se muestran en la figura 1 . Un valor de 1 corresponde, por lo tanto, al mismo nivel de expresión de actina. Los resultados se muestran en una escala logarítmica. Un total de 81 muestras de tejido normal, que representan 28 tejidos diferentes, también se examinaron mediante el mismo procedimiento. Los valores de Ct para el antígeno candidato se compararon con aquellos de la actina obtenidos con la misma muestra de tejido. Los valores estandarizados se muestran en las figuras 2A-D.

Resultados de PCR de tiempo real en muestra de cáncer de colon/colon normal Resumen Conclusión: el CASB618 se sobre-expresa en una proporción elevada de tumores con respecto al colon adyacente normal. Solamente se expresa marginalmente por otros tejidos normales, en particular, una muestra de próstata. etiquetadas se hibridizan entonces de manera competitiva con las secuencias de la plaqueta de ADN. La proporción de las dos señales fluorescentes se determina para cada secuencia en la plaqueta. Esta proporción se utiliza para calcular la abundancia relativa de la transcripción en las dos muestras. Los protocolos detallados se encuentran disponibles a partir de un número de fuentes, incluyendo "DNA Microarrays: A practical approach. Schena M. Oxford University Press 1999" y la Red a Nivel Mundial (http://cmgm.stanford.edu/pbrown/protocols/index.html), http://arrayit.com/DNA-Microarraya-Protocols/) y los distribuidores especializados (por ejemplo, Affymetrix).

Ejemplo 3 Perfiles de EST Un enfoque complementario para una caracterización de expresión de tejido antígeno experimental es explorar la base de datos "Expressed Sequence Tags" (ESTs). Los ESTs son fragmento pequeños de cADN hecho a partir de una colección de mARN extraído de un tejido o línea celular en particular. Tales bases de datos proporcionan actualmente una cantidad masiva de ESTs (106) de varios cientos de bibliotecas de tejido de cADN, incluyendo tejidos tumorales de diversos tipos y estados de enfermedad. Por medio de herramientas informáticas (Blast), se lleva a cabo una búsqueda de comparación de la secuencia de CASB616 con objeto de tener un discernimiento adicional en la expresión del tejido.

Distribución de EST de CASB618 Tc:tumor de colon; Dc:colon enfermo; NP:próstata normal; Tep:tumor epitelial; Ta:otro tipo de tumor.

La proporción elevada de ESTs de cáncer de colon sugiere claramente así una sobre-expresión de este gen en cáncer de colon. De manera adicional, otros tumores (páncreas, tiroide) también podrían expresar el gen.

Ejemplo 4 Análisis Northern-Southern blot Las cantidades limitadas de cADN de colon normal comparado y de tumor mezclado, se amplifican mediante PCR Advantage (ver arriba). El ARN mensajero proveniente de múltiples tejidos normales también se amplifica mediante el uso del mismo procedimiento. El cADN amplificado (1 µg) experimenta electroforesis en un gel de agarosa al 1 .2% y se transfiere a una membrana de nylon. La membrana se hibridiza (AlkPhos Direct System) con una sonda preparada mediante el uso de un fragmento del cADN de TAA candidato. Los análisis Northern-Southern proporcionan información sobre el tamaño de la transcripción, la presencia de variantes de división y la abundancia de transcripción en tejidos tumorales y normales.

Ejemplo 5 Análisis Northern blot Los manchados Northern se producen de acuerdo a protocolos estándares mediante el uso de 1 µg de poli A+m ARN. Las sondas radioactivas se preparan mediante el uso del sistema Ready-to-Go (Pharmacia).

Ejemplo 6 Identificación de la secuencia de cADN de longitud completa Las bibliotecas de cADN de tumor de colon se construyen mediante el uso del sistema Lambda Zap II (Stratagene) a partir de 5 µg de poliA+mARN. El protocolo suministrado se sigue excepto que se utiliza Superscript II (Life Technologies) para la etapa de transcripción inversa. Se construyen bibliotecas con carga de inicio de oligo dT y carga de inicio aleatoria. Aproximadamente 1 .5 x 1 06 fagos independientes se colocan en placas para cada selección de la biblioteca. Las placas de fagos se transfieren a filtros de nylon y se hibridizan mediante el uso de una sonda de cADN etiquetada con AlkPhos Direct. Los fagos positivos se detectan mediante quimioluminiscencia. El fago positivo se extrae de la placa de agar, se leviga en 500 µl de regulador de SM y se confirma mediante PCR específica de gen. Los fagos levigados se convierten en bacteriófago M13 de un solo filamento mediante extirpación in vivo. El bacteriófago se convierte entonces en un ADN de plásmida de doble filamento mediante infección de E. coli. Las bacterias infectadas se colocan sobre placas y se someten a una segunda vuelta de selección con la sonda de cADN. El ADN de plásmida se purifica a partir de clonas bacterianas positivas y se ordena en secuencia en ambos filamentos. Cuando la longitud completa del gen no puede obtenerse directamente de la biblioteca de cADN, la secuencia faltante se aisla mediante el uso de tecnología RACE (Marathón Kit, Clon Tech). Este enfoque depende de la transcripción inversa de mARN en cADN de doble filamento, enlazadores ligantes sobre los extremos del cADN y la amplificación de la extremidad deseada del cADN mediante el uso de una carga de inicio específica de gen y uno de los oligonucleótidos de enlace. Los productos de PCR de Marathón se clonan en una plásmida (pCRIl-TOPO, InVitrogen) y se ordenan en secuencia.

La secuencia obtenida (SEQ ID NO: 1 ) tiene una estructura de lectura abierta putativa de 259 amino ácidos (SEQ ID NO:2). La secuencia de proteína deducida se somete a algoritmos de predicción para localización celular (PSORT: http://psort.nibb.ac.jp/ y TopPred: http://www.biokemi.su.se/~server/toppred2/toppred_source, html). Se predice que tiene de 4 a 5 segmentos de transmembrana; solamente uno de los 2 métodos utilizados predice la secuencia de la señal. Existe un motivo de cierre de leucina potencial que se sobrepone a uno de los segmentos de transmembrana predichos. Existen 3 sitios potenciales de N-glicosilación. La localización subcelular no es clara, siendo ia membrana de plasma la más probable.

Ejemplo 7: 7.1 Expresión v purificación de antígenos específicos de tumor La expresión en huéspedes microbianos, o transcripción/traslación alternativamente in vitro, se utiliza para producir el antígeno de la invención para propósitos de vacuna y para producir fragmentos de proteína o proteína completa para la rápida purificación y generación de anticuerpos necesarios para la caracterización de la proteína naturalmente expresada mediante inmunohistoquímica o para seguimiento de purificación. Las proteínas recombinantes pueden expresarse en dos huéspedes microbianos, E. coli y en levadura (tales como Saccharomyces cerevisiae o Pichia pastoris). Pichia. Esto permite la selección del sistema de expresión con las mejores características para esta producción de antígenos en particular. En general, el antígeno recombinante se expresará en E. coli y la proteína reactivo se expresará en levadura. La estrategia de expresión involucra primero el diseño de la estructura primaria del antígeno recombinante. En general, un socio de fusión de expresión (EFP) se coloca en la extremidad de terminal N para mejorar los niveles de expresión que también podrían incluir una región útil para modular las propiedades inmunogénicas del antígeno, un socio de fusión inmune (IFP). Además, un socio de fusión de afinidad (AFP) útil para facilitar la purificación adicional se incluye en el extremo de terminal C. Cuando las cepas recombinantes se encuentran disponibles, el producto recombinante se caracteriza por la evaluación del nivel de expresión y la predicción de solubilidad adicional de la proteína mediante análisis del comportamiento en el extracto crudo. Después de desarrollar un medio de cultivo apropiado y de la inducción de la expresión de la proteína recombinante, se analizan extractos totales mediante SDS-PAGE. Las proteínas recombinantes se visualizan en geles teñidos y se identifican mediante análisis de Western blot utilizando anticuerpos específicos. Una evaluación comparativa de las diferentes versiones del antígeno expresado permitirá la selección del candidato más prometedor a utilizarse para la purificación y evaluación inmunológica adicionales. Expresión en E. co// AR120 La siguiente construcción se diseñó y elaboró: el gen de CASB618 que contiene omisiones del término N y del término C (? 1 -74; ? 247-320 aa) se clonó en un vector pMG81 (largo por PL), con la adición de un IFP (secuencia de ADN de NS 1 que codifica de 1 a 81 amino ácidos de terminal N de la proteína NS 1 del virus de Influenza) en el término N, y una cola de histidina de terminal C (SEQ ID NO:4). NS1 - Met Thr Metí C 61 -8 Thr Ser Gly 6xHIS 75 246 La plásmida obtenida se llama pRIT 15081 . La célula huésped no dúctil de ácido nalidíxico E. coli se utiliza. La inducción de tres títulos de cultivos de E. coli en medio de LB + Kanamicina se obtuvo mediante la adición de ácido nalidíxico a una concentración final de 60 ng/ml. Los cultivos se incubaron 4h30 a 37°C. La pelotilla obtenida después de la centrifugación de ios cultivos inducidos se volvió a suspender en 60 ml de regulador de PBS. Las células experimentaron iisis subsecuentemente mediante el uso de una prensa Francesa. El lisado se centrifugó entonces durante 20 minutos a 16000 g. Encontramos la proteína expresada en la pelotilla (figura 3). El esquema de purificación sigue un enfoque clásico en base a la presencia de una cola de afinidad His en la proteína recombinante. En un experimento típico, las células interrumpidas se filtran y los extractos acelulares se cargan en una Cromatografía de Afinidad de Metal Iónica (IMAC; Ni++NTA de Qiagen) que retendrá específicamente la proteína recombinante. Las proteínas retenidas se levigan mediante 0-500 mM de gradiente de Imidazol (posiblemente en presencia de un detergente) en un regulador de fosfato.

El esquema de purificación se detalla abajo. So lubilización de la pelotilla en GuHCl 6M + IMAC: Qiagen NTA NI++ Regulador de equilibrio: NaH2Po4 100 mM pH 8 Tris 10 mM NaCI 1 50 mM GuHCl 6 mM Muestra: pelotilla en GuHCl 6M Regulador de enjuague: NaH2PO4 100 mM pH 6,3 Tris 1 0 mM Urea 8 M Reguiador de Levigación: NaH2PO4 100 mM PH 4.5 Tris 10 mM Imidazol 500 mM Urea 8 M Proteína levigada en 500 mM de imidazol + 8M de urea DIÁ 1LISIS - PBS PH 7.5 + sarcosil 2% + 6M urea 1 hrs 4M urea 1 hrs 2M urea 1 hrs OM urea durante noche a 4°C Congelamiento, filtración 0,22 µm Un estimado de la concentración final (1 mg/ml) se obtiene mediante un ensayo de proteína de Lowry en el producto purificado final (ver figura 4). Transcripción/traslación in vitro El producto genético de CASB618 se caracterizó por transcripción/traslación acopladas in vitro. La secuencia codificadora de longitud completa de la clona CASB618 se clonó en el vector SP72 (Promega), un vector que permite ia transcripción in vitro. La expresión in vitro que utiliza lisado de reticulocito acoplado a TNT T7 (Promega cat.n0 L461 1 ) con incorporación de metionina S35 muestra un producto de 35 Kd, el cual se reduce a 30 Kd en presencia de membranas microsomales pancreáticas caninas (Promega cat. N° Y4041 ). Este resultado sugiere el procesamiento del péptido de señal de acuerdo con la predicción de péptido de señal de 47 amino ácidos (y sugiere que la proteína in vivo se ancla o se segrega a la membrana. Para estos experimentos, se siguieron los protocolos recomendados por Promega. 7.2 Producción de anticuerpos e inmunohistoguímica Pueden utilizarse pequeñas cantidades de proteína relativamente purificada para generar herramientas inmunológicas con objeto de a) detectar la expresión mediante inmunohistoquímica en secciones de tejido normales y de cáncer; b) detectar la expresión y seguir ia proteína durante el proceso de purificación (ELISA/Western Blot); o c) caracterizar/cuantificar la proteína purificada (ELISA). 7.2.1 Anticuerpos policlonales Inmunización Se inmunizaron 2-3 conejos de manera intramuscular (I.M.), 3 veces en intervalos de 3 semanas con 100 µg de proteína, formulada en el adyuvante 3D-MPL/QS21 . Tres semanas después de cada inmunización, se tomó una muestra de sangre y el título del anticuerpo se estimó en el suero mediante ELISA, utilizando la proteína como antígeno de recubrimiento, siguiendo un protocolo estándar.

ELISA Microplacas de 96 cavidades (maxisorb Nunc) se cubrieron con 5 µg de proteína durante la noche a 4°C. Después de 1 hora de saturación a 37°C con PBS NCS al 1 %, la dilución serial del suero del conejo se agregó durante 1 H 30 a 37°C (comenzando en 1 /10). Después de 3 enjuagues en Tween de PBS, se agrega anti suero bioestañado de anti conejo (Amersham) (1 /5000). Las placas se enjuagan y se agrega estreptavidina acoplada a peroxidasa (1 /5000) durante 30 min a 37°C. Después del enjuague, se agregan 50 µl de TMB (BioRad) durante 7 min y la reacción se detiene entonces con 0.2M de H2SO4. El OD puede medirse en 450 nm y las diluciones del punto medio pueden calcularse mediante SoftmaxPro 7.2.2 Anticuerpos monoclonales: Inmunización 5 ratones de BALB/c se inmunizan 3 veces en intervalos de 3 semanas con 5 µg de proteína purificada. Los sangrados se llevan a cabo 14 días después de II y 1 semana después de 3. El suero se examinó por ELISA en proteína purificada utilizada como antígeno cubierto. En base a estos resultados (dilución de punto medio > 10000) se selecciona un ratón para la fusión.

Fusión/selección de HAT Las células de bazo se fusionan con el mieloma SP2/0 de acuerdo a un protocolo estándar mediante el uso de PEG al 40% y DMSO al 5%. Las células se siembran entonces en placas de 96 cavidades, 2.5 x 104 - 1 05 células/cavidad y se seleccionan clonas resistentes en un medio de HAT. El sobrenadante de estos hibridomas se examinará respecto a su contenido en anticuerpos específicos y cuando sea positivo, se someterá a 2 ciclos de dilución limitada. Después de 2 vueltas de selección, se seleccionarán 3 hibridomas para la producción de ascitis. 7.2.3 Inmunohistoquímica Cuando los anticuerpos se encuentran disponibles, el inmunoteñido se lleva a cabo en secciones de tejido de cáncer o normales, con objeto de determinar: el nivel de expresión del antígeno de la invención en tejido de cáncer con relación a tejido normal o la proporción de cáncer de un cierto tipo que expresa el antígeno si otro tipo de cáncer también expresa el antígeno la proporción de células que expresan el antígeno en un tejido de cáncer Preparación de la muestra de tejido Después de la disección, la muestra de tejido se monta en un disco de corcho en un compuesto de OCT y se congela rápidamente en isopentano previamente super enfriado en nitrógeno líquido (-160°C). El bloque se conservará entonces a -70°C hasta utilizarse. Se realizarán secciones de 7-10 µm en una cámara de criostato (-20, -30°C).

Teñido Las secciones de tejido se secan durante 5 minutos a temperatura ambiente (RT), se fijan en acetona durante 10 minutos a RT, se secan nuevamente, y se saturan con PBS al 0.5%, BSA al 5% de suero. Después de 30 minutos a RT se lleva a cabo un teñido ya sea directo o indirecto mediante el uso de anticuerpos específicos de antígeno. Un teñido directo conduce a una mejor especificidad pero a un teñido menos intenso mientras que un teñido indirecto conduce a un teñido más intenso pero menos específico. 7.3 Análisis de respuestas inmunes celulares humanas al antígeno de la invención La relevancia inmunológica del antígeno de la invención puede determinarse mediante la carga de inicio in vitro de células T humanas. Todas las líneas de linfocito celular T y células dendríticas se derivan de PBMCs (células mononucleares de sangre periférica) de donadores saludables (subtipo preferido HLA-A2). Los ratones transgénicos de HLA-A2.1/K" también se utilizan para la selección de péptidos de HLA-A2.1 . Las líneas de célula CD8+T específicas de antígeno recientemente descubiertas se elevan y mantienen mediante estimulación semanal in vitro. La actividad lítica y la producción de ?-IFN de las líneas CD8 en respuesta al antígeno o péptidos derivados del antígeno, se examina mediante el uso de procedimientos estándares. Se utilizan dos estrategias para elevar las líneas celulares de CD8+ T: un enfoque en base a péptido y un enfoque en base al gen completo. Ambos enfoques requieren del cADN de longitud completa del antígeno recientemente descubierto en la estructura de lectura correcta ya sea para clonarse en un sistema de suministro adecuado o para utilizarse a fin de predecir la secuencia de los péptidos de unión a HLA Enfogue en base a oéotido Las secuencias de péptido de unión a HLA-A2 se predicen ya sea por el algoritmo de Parker (Parker, K.C. , M.A. Bednarek y J.E. Coligan. 1994. Esquema para variar péptidos potenciales de unión a HLA- A2 en base a la unión independiente de cadenas laterales de péptidos individuales. J. Immunol. 152: 163 y http://bimas.dcrt.nih.gov/molbio/hla bind/) o el método de Rammensee (Rammensee, Friede, Stevanovic, ligando de MHC y motivos péptidos: 1 er listado, Immunogenetics 41 , 178- 228, 1 995; Rammensee, Bachmann, Stevanovic: ligando de MHC y motivos péptidos. Landes Bioscience 1997 y http. /1 34.2.96.221 /scripts/hiaserver.dll/home. htm). Los péptidos se seleccionan entonces en el modelo de ratones transgénicos HLA-A2.1 /Kb (Vitiello eí al.). La secuencia utilizada para llevar a cabo la predicción es EPHB2v, ya que es idéntica a EPHB2 con una extensión de secuencia de terminal C, adicional. a) Epítopes predichos que unen el alelo HLA_A0201 : a.1 ) HLA-A*0201 nonámeros 0 Estimado de medio tiempo de disociación de una molécula que contiene esta subsecuencia. a.2) HLA A02_01 decámeros 0 Estimado del medio tiempo de disociación de una molécula que contiene esta subsecuencia.

En resumen, los ratones transgénicos se inmunizan con péptidos de HLA-A2 adyuvados, aquellos incapaces de inducir una respuesta de CD8 (como se define por una lisis eficiente de las células de bazo autólogas impulsadas por péptido) se analizaron posteriormente en el sistema humano. Las células dendríticas humanas (cultivadas de acuerdo a Romani eí al.) se impulsarán con péptidos y se utilizarán para estimular células T ordenadas por CD8 (por Facs). Después de varias estimulaciones semanales, las líneas de CD8 se examinarán primero en BLCL autólogo impulsado por péptido (líneas celulares transformadas con EBV-B). Para verificar el adecuado procesamiento in vivo del péptido, las líneas de CD8 se examinarán en células tumorales transfectadas con cADN (LnCaP transfectado con HLA-A2, células tumorales Skov3 o CAMA).

Enfoque en base al gen completo Las líneas celulares CD8+ T serán cargadas de inicio y estimuladas con ya sea células dendríticas transfectadas por pistola genética, fibroblastos transfectados con B7.1 transducido de manera retroviral, virus de ave recombinante (Kim eí al.) o células dendríticas infectadas con adenovirus (Butterfield eí al.). Las células infectadas por virus son muy eficientes para presentar péptidos antigénicos ya que el antígeno se expresa a un nivel elevado pero solamente puede utilizarse una vez para evitar el sobre-desarrollo de líneas celulares T, virales. Después de estimulaciones alternadas, las líneas de CD8+ se examinan en células tumorales transfectadas con cADN como se indica arriba. La especificidad e identidad del péptido se determina para confirmar la validación inmunológica.

Referencias Vitiello eí al. (L. Sherman), J. Exp. Med. , J. Exp. Med. , 1991 , 173: 1 007-1015. Romani eí al. , J. Exp. Med. , 1994, 180: 83-93. Kim et al. , J. Immunother., 1997, 20: 276-286. Butterfield et al. , J. Immunol, 1998, 161 : 5607-5613.

Todas las publicaciones, incluyendo, pero sin limitarse, las patentes y solicitudes de patentes, citadas en esta especificación, se incorporan en la presente para referencia como si cada publicación individual se indicara de manera específica e individual a incorporarse para referencia en la presente como si se estableciera por completo. del cADN y amplificando la extremidad deseada del cADN mediante el uso de una carga de inicio específica del gen y uno de los oligonucleótidos de enlace. Los productos de PCR Marathón se clonan en una plásmida y se ordenan por secuencia.

LISTADO DE SECUENCIAS <110> Vinals-Bassols, Carlotta Bruck, Claudine Cassart, Jean-Pol Coche, Thierry <120> POLINUCLEÓTIDOS Y POLIPÉPTIDOS CASB618 Y SU USO <130> BC45225 <160> 77 <170> FastSEQ for Windows Versión 3.0 <210> 1 <211> 1441 <212> ADN <213> Humano <400> 1 aaagtaacgg ctacagacag tgagaaatag tttcgctcgc cggctagaaa aactctgtcg 60 gtaccaaccc cagagcgttg agagcagccc acctccacgc ttccttaacg gagaggtgca 120 ggactcagac ttcaccagcc cactcggtcc cagccttgta cgcaaagaga cgccaaggac 180 gcgctctccc gcgtccaggc agccccagct tgctggcttg cctgcccgcc tgcgtgcagc 240 actcggccgg cgtgcagcat gaccctgtgg aacggcgtac tgccttttta cccccagccc 300 cggcatgccg caggcttcag cgttccactg ctcatcgtta ttctagtgtt tttggctcta 360 gcagcaagct tcctgctcat cttgccgggg atccgtggcc actcgcgctg gttttggttg 420 gtgagagttc ttctcagtct gttcataggc gcagaaattg tggctgtgca cttcagtgca 480 gaatggttcg tgggtacagt gaacaccaac acatcctaca aagccttcag cgcagcgcgc 540 gttacagccc gtgtcggtct gctcgtgggc ctggagggca ttaatattac actcacaggg 600 accccagtgc atcagctgaa cgagaccatt gactacaacg agcagttcac ctggcgtctg 660 aaagagaatt acgccgcgga gtacgcgaac gcactggaga aggggctgcc ggacccagtg 720 ctctacctgg cggagaagtt cacaccgagt agcccttgcg gcctgtacca ccagtaccac 780 ctggcgggac actacgcctc ggccacgcta tgggtggcgt tctgcttctg gctcctctcc 840 aacgtgctgc tctccacgcc ggccccgctc tacggaggcc tggcactgct gaccaccgga 900 gccttcgcgc tcttcggggt cttcgccttg gcctccatct ctagcgtgcc gctctgcccg 960 ctccgcctag gctcctccgc gctcaccact cagtacggcg ccgccttctg ggtcacgctg 1020 gcaaccggcg tcctgtgcct cttcctcgga ggggccgtgg tgagtctcca gtatgttcgg 1080 cccagcgctc ttcgcaccct tctggaccaa agcgccaagg actgcagcca ggagagaggg 1140 ggctcacctc ttatcctcgg cgacccactg cacaagcagg ccgctctccc agacttaaaa 1200 tgtatcacca ctaacctgtg agggggaccc aatctggact ccttccccgc cttgggacat 1260 cgcaggccgg gaagcagtgc ccgccaggcc tgggccagga gagctccagg aagggcactg 1320 agcgctgctg gcgcgaggcc tcggacatcc gcaggcacca gggaaagtct cctggggcga 1380 tctgtaaata aacctttttt tcttttgttt tttaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1440 a 1441 <210> 2 <211> 320 <212> PRT <213> Humano <400> 2 Met Thr Leu Trp Asn Gly Val Leu Pro Phe Tyr Pro Gln Pro Arg His í 5 10 15 Ala Ala Gly Phe Ser Val Pro Leu Leu He Val He Leu Val Phe Leu 20 25 30 Ala Leu Ala Ala Ser Phe Leu Leu He Leu Pro Gly He Arg Gly His 35 40 45 Ser Arg Trp Phe Trp Leu Val Arg Val Leu Leu Ser Leu Phe He Gly 50 55 60 Ala Glu He Val Ala Val His Phe Ser Ala Glu Trp Phe Val Gly Thr 65 70 75 80 Val Asn Thr Asn Thr Ser Tyr Lys Ala Phe Ser Ala Ala Arg Val Thr 85 90 95 Ala Arg Val Gly Leu Leu Val Gly Leu Glu Gly He Asn He Thr Leu 100 105 110. Thr Gly Thr Pro Val His Gln Leu Asn Glu Thr He Asp Tyr Asn Glu 115 120 125 Gln Phe Thr Trp Arg Leu Lys Glu Asn Tyr Ala Ala Glu Tyr Ala Asn 130 135 140 Ala Leu Glu Lys Gly Leu Pro Asp Pro Val Leu Tyr Leu Ala Glu Lys 145 150 155 160 Phe Thr Pro Ser Ser Pro Cys Gly Leu Tyr His Gln Tyr His Leu Ala 165 170 175 Gly His Tyr Ala Ser Ala Thr Leu Trp Val Ala Phe Cys Phe Trp Leu 180 185 190 Leu Ser Asn Val Leu Leu Ser Thr Pro Ala Pro Leu Tyr Gly Gly Leu 195 200 205 Ala Leu Leu Thr Thr Gly Ala Phe Ala Leu Phe Gly Val Phe Ala Leu 210 215 220 Ala Ser He Ser Ser Val Pro Leu Cys Pro Leu Arg Leu Gly Ser Ser 225 230 235 240 Ala Leu Thr Thr Gln Tyr Gly Ala Ala Phe Trp Val Thr Leu Ala Thr 245 250 255 Gly Val Leu Cys Leu Phe Leu Gly Gly Ala Val Val Ser Leu Gln Tyr 260 265 270 Val Arg Pro Ser Ala Leu Arg Thr Leu Leu Asp Gln Ser Ala Lys Asp 275 280 285 Cys Ser Gln Glu Arg Gly Gly Ser Pro Leu He Leu Gly Asp Pro Leu 290 295 300 His Lys Gln Ala Ala Leu Pro Asp Leu Lys Cys He Thr Thr Asn Leu 305 310 315 320 <210> 3 <211> 498 <212> ADN <213> Humano <400> 3 ctctagcgtg ccgctctgcc cgctcccgcc taggctcctc cgcgctcacc actcagtacg 60 agcgccgcct tctgggtcac gctggcaacc ggcgtcctgt gcctcttcct cggaggggcc 120 gtggtgagtc tccagtatgt tcggcccagc gctcttcgca cccttctgga ccaaagcgcc 180 aaggactgca gccaggagag agggggctca cctcttatcc tcggcgaccc actgcacaag 240 caggccgctc tcccagactt aaaatgtatc accactaacc tgtgaggggg acccaatctg 300 gactccttcc ccgccttggg acatcgcagg ccgggaagca gtgcccgcca ggcctgggcc 360 aggagagctc caggaagggc actgagcgct gctggcgcga ggcctcggac atccgcaggc 420 accagggaaa gtctcctggg gcgatctgta aataaacctt tttttctttt gttttttaaa 480 aaaaaataaa agtcgacc 498 <210> 4 <211> 262 <212> PRT <213> Humano <400> 4 Met Asp Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp 1 5 10 15 His Val Arg Lys Arg Val Ala Asp Gln Glu Leu Gly Asp Ala Pro Phe 20 25 30 Leu Asp Arg Leu Arg Arg Asp Gln Lys Ser Leu Arg Gly Arg Gly Ser 35 40 45 Thr Leu Gly Leu Asp He Glu Thr Ala Thr Arg Ala Gly Lys Gln He 50 55 60 Val Glu Arg He Leu Lys Glu Glu Ser Asp Glu Ala Leu Lys Met Thr 65 70 75 80 Met Glu Trp Phe Val Gly Thr Val Asn Thr Asn Thr Ser Tyr Lys Ala 85 90 95 Phe Ser Ala Ala Arg Val Thr Ala Arg Val Gly Leu Leu Val Gly Leu 100 105 110 Glu Gly He Asn He Thr Leu Thr Gly Thr Pro Val His Gln Leu Asn 115 120 125 Glu Thr He Asp Tyr Asn Glu Gln Phe Thr Trp Arg Leu Lys Glu Asn 130 135 140 Tyr Ala Ala Glu Tyr Ala Asn Ala Leu Glu Lys Gly Leu Pro Asp Pro 145 150 155 160 Val Leu Tyr Leu Ala Glu Lys Phe Thr Pro Ser Ser Pro Cys Gly Leu 165 170 175 Tyr His Gln Tyr His Leu Ala Gly His Tyr Ala Ser Ala Thr Leu Trp 180 185 190 Val Ala Phe Cys Phe Trp Leu Leu Ser Asn Val Leu Leu Ser Thr Pro 195 200 205 Ala Pro Leu Tyr Gly Gly Leu Ala Leu Leu Thr Thr Gly Ala Phe Ala 210 215 220 Leu Phe Gly Val Phe Ala Leu Ala Ser He Ser Ser Val Pro Leu Cys 225 230 235 240 Pro Leu Arg Leu Gly Ser Ser Ala Leu Thr Thr Gln Tyr Thr Ser Gly 245 250 255 His His His His His His 260 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 5 Phe Leu Gly Gly Ala Val Val Ser Leu 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 6 Leu Leu He Val He Leu Val Phe Leu 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 7 Thr Leu Ala Thr Gly Val Leu Cys Leu <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 8 Pro Leu Tyr Gly Gly Leu Ala Leu Leu 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 9 Gly Leu Pro Asp Pro Val Leu Tyr Leu <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 10 Gly Leu Leu Val Gly Leu Glu Gly He 1 5 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 11 Trp Leu Val Arg Val Leu Leu Ser Leu 1 5 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 12 Phe He Gly Ala Glu He Val Ala Val 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 13 Cys Leu Phe Leu Gly Gly Ala Val Val 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 14 Val Leu Leu Ser Thr Pro Ala Pro Leu 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 15 Ser Leu Phe He Gly Ala Glu He Val 1 5 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 16 Leu Leu Thr Thr Gly Ala Phe Ala Leu 1 5 <210> 17 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 17 Gly Leu Glu Gly He Asn He Thr Leu 1 5 <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 18 Leu Ala Ala Ser Phe Leu Leu He Leu 1 5 <210> 19 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 19 Phe Ala Leu Ala Ser He Ser Ser Val 1 5 <210> 20 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 20 Phe Ala Leu Phe Gly Val Phe Ala Leu 1 5 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 21 Leu Leu Ser Asn Val Leu Leu Ser Thr 1 5 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 22 Tyr Ala Ala Glu Tyr Ala Asn Ala Leu 1 5 <210> 23 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 23 Ala Leu Ala Ala Ser Phe Leu Leu He 1 5 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 24 Phe Leu Ala Leu Ala Ala Ser Phe Leu 1 5 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 25 Ser Val Pro Leu Leu He Val He Leu 1 5 <210> 26 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 26 His Leu Ala Gly His Tyr Ala Ser Ala 1 5 <210> 27 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 27 Leu Thr Gly Thr Pro Val His Gln Leu <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 28 Ala Arg Val Gly Leu Leu 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9 <212> PRT <213> Humano <400> 40 Pro Leu Arg Leu Gly Ser Ser Ala Leu 1 5 <210> 41 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 41 Ala Leu Leu Thr Thr Gly Ala Phe Ala 1 5 <210> 42 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 42 He Val He Leu Val Phe Leu Ala Leu 1 5 <210> 43 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 43 Ala Ala Gly Phe Ser Val Pro Leu Leu 1 5 <210> 44 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 44 Val Leu Tyr Leu Ala Glu Lys Phe Thr 1 5 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 45 Thr Gln Tyr Gly Ala Ala Phe Trp Trp 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Humano <400> 46 Trp Val Ala Phe Cys Phe Trp Leu Leu 1 5 <210> 47 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 47 Ala Leu Ala Ala Ser Phe Leu Leu He Leu 1 5 10 <210> 48 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 48 Ala Leu Ala Ser He Ser Ser Val Pro Leu 1 5 10 <210> 49 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 49 Thr Leu Thr Gly Thr Pro Val His Gln Leu 1 5 10 <210> 50 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 50 Ala Leu Leu Thr Thr Gly Ala Phe Ala Leu 1 5 10 <210> 51 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 51 Pro Leu Leu He Val He Leu Val Phe Leu 1 5 10 <210> 52 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 52 Tyr Val Arg Pro Ser Ala Leu Arg Thr Leu 1 5 10 <210> 53 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 53 Leu Phe Leu Gly Gly Ala Val Val Ser Leu 1 5 10 <210> 54 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 54 Ser He Ser Ser Val Pro Leu Cys Pro Leu 1 5 10 <210> 55 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 55 Leu Leu Ser Leu Phe He Gly Ala Glu He 1 5 10 <210> 56 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 56 Trp Leu Leu Ser Asn Val Leu Leu Ser Thr 1 5 10 <210> 57 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 57 Leu Phe He Gly Ala Glu He Val Ala Val 1 5 10 <210> 58 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 58 Phe Leu Ala Leu Ala Ala Ser Phe Leu Leu 1 5 10 <210> 59 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 59 His Ala Ala Gly Phe Ser Val Pro Leu Leu 1 5 10 <210> 60 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 60 Ser Leu Gln Tyr Val Arg Pro Ser Ala Leu 1 5 10 <210> 61 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 61 Val Leu Cys Leu Phe Leu Gly Gly Ala Val 1 5 10 <210> 62 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 62 Val Thr Leu Ala Thr Gly Val Leu Cys Leu 1 5 10 <210> 63 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 63 Leu Leu Val Gly Leu Glu Gly He Asn He 1 5 10 <210> 64 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 64 Leu He Val He Leu Val Phe Leu Ala Leu 1 5 10 <210> 65 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 65 Leu Leu He Val He Leu Val Phe Leu Ala 1 5 10 <210> 66 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 66 Leu He Leu Gly Asp Pro Leu His Lys Gln 1 5 10 <210> 67 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 67 Thr Leu Trp Val Ala Phe Cys Phe Trp Leu 1 5 10 <210> 68 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 68 Gly Leu Pro Asp Pro Val Leu Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 69 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 69 Ala Leu Glu Lys Gly Leu Pro Asp Pro Val 1 5 10 <210> 70 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 70 Thr Ala Arg Val Gly Leu Leu Val Gly Leu 1 5 10 <210> 71 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 71 Phe Ser Ala Glu Trp Phe Val Gly Thr Val 1 5 10 <210> 72 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 72 Leu Ala Gly His Tyr Ala Ser Ala Thr Leu 1 5 10 <210> 73 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 73 Lys Gly Leu Pro Asp Pro Val Leu Tyr Leu 1 5 10 <210> 74 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 74 Gly Leu Glu Gly He Asn He Thr Leu Thr 1 5 10 <210> 75 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 75 Phe Trp Leu Val Arg Val Leu Leu Ser Leu 1 5 10 <210> 76 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 76 Ser Val Pro Leu Leu He Val He Leu Val 1 5 10 <210> 77 <211> 10 <212> PRT <213> Humano <400> 77 Ala Val His Phe Ser Ala Glu Trp Phe Val 1 5 10 INFORMACIÓN DE SECUENCIA SEQ ID NO:l AAAGTAACGGCACAGACAGTGAGAAATAGTT CGCTCGCCGGCTAGAAAAACTCTGTCGGTACCAACCCCA GAGCGTTGAGAGCAGCCCACCTCCACGCTTCCTTAACGGAGAGGTGCAGGACtCAGACTtCACCAGCCCACT CGGTCCCAGCCTTGTACGCAAAGAGACGCCAAGGACGCGCCTCCCGCGTCCAGGCAGCCCCAGCTTGCTGG CTTGCCTGCCCGCCTGCGTGCAGCACTCGGCCGGCGTGCAGCatgaccctgtggaacggcgtactgcctttt tacccccagccccggcatgccgcaggcttcagcgttccactgctcatcgttattctagtg ttttggc cta gcagcaagcttcctgctcatcttgccggggatccgtggccactcgcgctggttttggttggtgagagttctt ctcagtctgttcataggcgcagaaattgtggctgtgcacttcagtgcagaatgg tcgtgggtacagtgaac accaacacatcctacaaagccttcagcgcagcgcgcgttacagcccgtgtcggcctgctcgtgggcctggag ggcattaatattacactcacagggaccccagtgcatcagctgaacgagaccattgactacaacgagcagttc acctggcgtctgaaagagaattacgccgcggagtacgcgaacgcaccggagaaggggctgccggacccagtg ctctacctggcggagaagttcacaccgagtagcccttgcggcctgtaccaccagtaccacctggcgggacac tacgcctcggccacgctatgggtggcgttctgcttctggctcctctccaacgtgctgctctccacgccggcc ccgctctacggaggcctggcactgctgaccaccggagccttcgcgctcttcggggtcttcgccttggcctcc atctctagcgtgccgctctgcccgctccgcctaggctcctccgcgctcaccactca?racggcgccgccttc tgggtcacgctggcaaccggcgtcc gtgcc cttcctcggaggggccgtggtgagtctccagtatgttcgg cccagcgctcttcgcacccttcggaccaaagcgccaaggactgcagccaggagagagggggctcacccctt atcctcggcgacccactgcacaagcaggccgctctcccagacttaaaatgtatcaccactaacctgtgaGGG GGACCCAATCTGGACTCCTTCCCCGCCTTGGGACATCGCAGGCCGGGAAGCAGTGCCCGCCAGGCCTGGGCC AGGAGAGCTCCAGGAAGGGCACTGAGCGCTGCTGGCGCGAGGCCTCGGACATCCGCAGGCACCAGGGAAAGT CTCCTGGGGCGATCTGTAAATAAAC TTTtttTCTTTTGTTTTTTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA A SEQ IDNO:2 OTLWNGV PFYPQPRHAAGFSV 'L IVILVFIJ JÜ^F LILPGI GHSR F LVRVLLSLFIGAEIVAVHF SAEWFVGTVNTOT'SYKAFSAARVTARVGLLVGLEGINITLTGTPVHQLNETIDYNEQFTWR KENYAAEYAN AI?KG PDPVLYLAEKFTPSSPCGLYHQYH AGHYASATLWVAFCFW SNV LSTPAP YGG ALLTTGAF ALFGVFALASISSVPLCPLRLGSSALTTQYGAAF V LATGV C FLGGAVVSLQYVRPSALRTL DQSAKD CSQERGGSPLILGDPLHKQAA PDLKCITTNL SEQ NO:3 CtCTAGCGTGCCGCtCTGCCCGCTCCCGCCTAGGCTCCTCCGCGCtCACCACCAGTACGAGCGCCGCCTTC TGGGTCACGCTGGCAACCGGCGTCCTGTGCCTCTTCC CGGAGGGGCCGTGGTGAGTCTCCAGTATGTTCGG CCCAGCGCTC TCGC?CCCTTCTGGAC ^AAGCGCCAAGGACTGCAGCCAGGAGAGAGGGGGCTCACCTCTT ATCCTCGGCGACCCACTGCACAAGCAGGCCGCTCTCCCAGACTTAAAATGtATCACCACTAACCTGTGAGGG GGACCCAATCTGGACTCC TCCCCGCCTTGGGACATCGCAGGCCGGGAAGCAGTGCCCGCCAGGCCTGGGCC AGGAGAGCTCCAGGAAGGGCACTGAGCGCtGCTGGCGCGAGGCCTCGGACATCCGCAGGCACCAGGGAAAGT CTCCTGGGGCGATCTGTAAATAAACCTTTTTTTCTTTTGTTTTTTAAAAAAAAATAAAAGTCGACC SEQ ID NO:4 MDPNTVSSFQVDCFLWHVRKRVADQELGDAPFLDR RRDQKSLRGRGSTLGLDIETATRAGKQIVERILKEE SDEALKMTME FVGTVNTNTSYKAFSAARVTARVGLLVGLEGINITLTGTPVHQLNETIDYNEQFTWR KEN YAAEYANAI^KG PDPVXYIJ^KFtPSSPCGLYHQYHIAGHYASATLWVAFCFWL SNVLLSTPAPLYGGLA LLTTGAFALFGVFAASISSVP CPLRLGSSALTTQYTSGHHHHHH

Claims (34)

1. REIVINDICACIONES 1 . Un polipéptido aislado que comprende una secuencia amino acida que tiene al menos 70% de identidad con la secuencia amino acida de la SEQ ID NO:2 sobre la longitud entera de la SEQ ID NO:2.
2. 2. Un polipéptido aislado según la reivindicación 1 , caracterizado porque la secuencia amino acida tiene al menos 95% de identidad con la SEQ ID NO:2.
3. 3. El polipéptido según la reivindicación 1 , caracterizado porque comprende la secuencia amino acida de la SEQ ID NO:2.
4. 4. El polipéptido aislado según la SEQ ID NO:2.
5. 5. Un polipéptido caracterizado porque comprende un fragmento inmunogénico de un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, siendo dicho fragmento inmunogénico capaz de promover una respuesta inmune que reconoce el polipéptido de la SEQ ID NO:2.
6. 6. Un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque dicho polipéptido es parte de una proteína de fusión mayor.
7. 7. Un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque se conjuga químicamente con una proteína de vehículo.
8. 8. Un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.
9. 9. Un polinucleótido aislado caracterizado porque comprende una secuencia nucleótida que codifica un polipéptido que tiene al menos 70% de identidad con la secuencia amino acida de la SEQ ID NO:2, sobre la longitud entera de la SEQ ID NO:2, o una secuencia nucleótida complementaria a dicho polinucleótido aislado.
10. 10. Un polinucleótido aislado caracterizado porque comprende una secuencia nucleótida que tiene al menos 70% de identidad con una secuencia nucleótida que codifica un polipéptido de la SEQ ID NO:2, sobre la región codificadora; o una secuencia nucleótida complementaria a dicho polinucleótido aislado.
11. 1 1 . Un polinucleótido aislado caracterizado porque comprende una secuencia nucleótida que tiene al menos 70% de identidad con la de la SEQ ID NO: 1 , sobre la longitud entera de la SEQ ID NO: 1 , o una secuencia nucleótida complementaria a dicho polinucieótido aislado.
12. 12. El polinucleótido aislado según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 1 1 , caracterizado porque la identidad es de al menos 95%.
13. 13. Un polinucleótido aislado que se selecciona a partir de: (a) un polinucleótido que comprende una secuencia nucleótida que codifica el polipéptido de la SEQ ID NO.2; (b) el polinucleótido de la SEQ ID NO: 1 ; y (c) un polinucleótido obtenible mediante la selección de una biblioteca apropiada bajo estrictas condiciones de hibridización con una sonda etiquetada que tiene la secuencia de la SEQ ID NO: 1 o un fragmento de la misma, codificando dicho polinucleótido una proteína que tiene propiedades inmunogénicas similares a aquellas de la proteína de la secuencia ID NO:2 o una secuencia nucleótida complementaria a dicho polinucleótido aislado.
14. 14. Un vector de expresión caracterizado porque comprende un polinucleótido aislado según cualquiera de las reivindicaciones 8-1 3.
15. 15. Un microorganismo vivo recombinante, caracterizado porque comprende el vector de expresión según la reivindicación 14.
16. 16. Una célula huésped caracterizada porque comprende el vector de expresión según la reivindicación 14 o el polinucleótido aislado según las reivindicaciones 8 a 13.
17. 1 7. Un proceso para producir un polipéptido según las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque comprende el cultivo de una célula huésped según la reivindicación 16, bajo condiciones suficientes para la producción de dicho polipéptido y la recuperación del polipéptido a partir del medio de cultivo.
18. 18. Una vacuna caracterizada porque comprende una cantidad eficaz del polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
19. 19. Una vacuna caracterizada porque comprende una cantidad eficaz del polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13 y un vehículo farmacéuticamente eficaz.
20. 20. Una vacuna caracterizada porque comprende una cantidad eficaz de células que presentan antígenos, modificada mediante una carga in vitro con un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o genéticamente modificada in vitro para expresar un polipéptido según las reivindicaciones 1 a 7 y un vehículo farmacéuticamente eficaz.
21. 21 . Una vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 20, caracterizada porque adicionalmente comprende un adyuvante inductor de TH-1 .
22. 22. Una vacuna según la reivindicación 21 , caracterizada porque el adyuvante inductor de TH-1 se selecciona a partir del grupo de adyuvantes que comprende: 3D-MPL, QS21 , una mezcla de QS21 y colesterol, y un oligonucleótido de CpG.
23. 23. Un anticuerpo inmunoespecífico para el polipéptido o fragmento inmunológico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.
24. 24. Un método de selección para identificar compuestos que estimulan o que inhiben la función del polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque comprende un método seleccionado a partir del grupo que consiste en: (a) medir el enlace de un compuesto candidato a dicho polipéptido (o a las células o membranas que contienen el polipéptido) o una proteína de fusión del mismo, por medio de una etiqueta directa o indirectamente asociada con el compuesto candidato; (b) medir el enlace de un compuesto candidato a dicho polipéptido (o a las células o membranas que contienen el polipéptido) o una proteína de fusión del mismo en presencia de un competidor etiquetado; (c) examinar si el compuesto candidato da como resultado una señal generada por la activación o inhibición de dicho polipéptido, utilizando sistemas de detección apropiados a las células o membranas que contienen el polipéptido; (d) mezclar un compuesto candidato con una solución que contiene un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para formar una mezcla, midiendo la actividad del polipéptido en la mezcla, y comparar la actividad de la mezcla con un estándar; o (e) detectar el efecto de un compuesto candidato sobre la producción de mARN que codifica dicho polipéptido y dicho polipéptido en células, mediante el uso, por ejemplo, de un ensayo de ELISA.
25. 25. Un método para el tratamiento de un sujeto mediante inmunoprofilaxis o terapia, caracterizado porque comprende la inducción in Wíro de respuestas inmunes a una molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, utilizando la incubación in vitro del polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o el poiinucleótido según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13 con células provenientes del sistema inmune de un mamífero, y reinfusionando estas células inmunes activadas en el mamífero para el tratamiento de la enfermedad.
26. 26. Un método según la reivindicación 25, caracterizado porque el tratamiento es para el cáncer de ovarios o de colon.
27. 27. Un agonista o antagonista para el polipéptido según las reivindicaciones 1 a 5.
28. 28. Un compuesto que es: (a) un agonista o antagonista para el polipéptido según las reivindicaciones 1 a 5; (b) el polinucleótido aislado según las reivindicaciones 8 a 13; o (c) una molécula de ácido nucleico que modula la expresión de la secuencia nucleótida que codifica el polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5; para utilizarse en terapia.
29. 29. Un proceso para diagnosticar una enfermedad o una susceptibilidad a una enfermedad en un sujeto relacionada con la expresión o actividad de un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en un sujeto, caracterizado porque comprende analizar la presencia o cantidad de dicho polipéptido en una muestra derivada de dicho sujeto.
30. 30. Un proceso para diagnosticar una enfermedad o una susceptibilidad a una enfermedad en un sujeto relacionada con la expresión o actividad de un polinucleótido según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13 en un sujeto, caracterizado porque comprende analizar la presencia o cantidad de dicho polinucleótido en una muestra derivada de dicho sujeto.
31. 31. Un proceso para diagnosticar la presencia de cáncer de colon o una susceptibilidad a cáncer de colon en un sujeto, relacionada con la expresión o actividad de un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en un sujeto, caracterizado porque comprende analizar la presencia o cantidad de dicho polipéptido en una muestra derivada de dicho sujeto.
32. 32. Un proceso para diagnosticar la presencia de cáncer de colon o una susceptibilidad a cáncer de colon en un sujeto, relacionada con la expresión o actividad de un polinucleótido según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13 en un sujeto, caracterizado porque comprende analizar la presencia o cantidad de dicho polinucleótido en una muestra derivada de dicho sujeto.
33. 33. Un polinucleótido aislado, seleccionado a partir del grupo que consiste en: (a) un polinucleótido aislado caracterizado porque comprende una secuencia nucleótida que tiene al menos 90% de identidad con la SEQ ID NO:3 sobre la longitud entera de la SEQ ID NO:3; (b) un polinucleótido aislado caracterizado porque comprende el polinucleótido de la SEQ ID NO:3; (c) el polinucleótido de la SEQ ID NO:3.
34. 34. Una composición de vacuna viva caracterizada porque comprende un vector de expresión según la reivindicación 14 o microorganismo vivo recombinante según la reivindicación 1 5.