MXPA01008452A - Tratamiento de la infertilidad - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un método de fertilización in vitro, en donde una mujer es tratada con una hormona hipotálamica y/o una hormona pituitaria o un agonista o antagonista de la misma o un derivado activo de la misma por un periodo de tiempo corto, y posteriormente, usando un huevo o huevos de maduración in vitro de oocitos se recuperan de la mujer y se maduran usando un compuesto que activa la meiosis.

Description

TRATAMIENTO DE LA INFERTILIDAD CAMPO DE LA INV?NCIÓN Esta invención se refiere a un método mejorado de la fertilización iri vi tro (de aqui en adelante designada como IVF) .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Desde que el primer embarazo por IVF se logró en 1978, este procedimiento ha resultado en miles de embarazos y ha abierto una gran cantidad de fronteras de investigación y tratamiento para las parejas infértiles. Todavía, hoy existe una necesidad significante de modalidades mejoradas para el tratamiento de la infertilidad. Se presume que aproximadamente de una a siete parejas experimentan problemas con la subfertilidad o infertilidad. La IVF e oocitos humanos ha llegado a ser comúnmente usada para el tratamiento de la subfertilidad femenina y masculina. El tratamiento estándar para la IVF incluye una larga fase de estimulación de hormonas de la paciente femenina, por ejemplo, 30 dias, la cual se inicia al suprimir la hormona folículo estimulante propia del paciente (de aqui en adelante designada FSH) y la hormona REF:130456 luteinizante (de aqui en adelante designada LH) por la hormona de liberación de la gonadotrofina (de aqui en adelante designada como GnRH) , y esto es seguido por inyecciones de gonadotropinas exógenas, por ejemplo, FSH y/o LH, para asegurar el desarrollo de múltiples folículos pre-ovulatorios y la extracción por succión de múltiples oocitos madurados in vivo inmediatamente antes de la ovulación. El oocito aspirado o extraído por succión es subsecuentemente fertilizado in vi tro y cultivado, típicamente por tres dias antes de transferirlo de regreso al útero en la etapa celular 4-8. Se han realizado esfuerzos continuos para optimizar y simplificar este procedimiento. Sin embargo, el promedio de los embarazos totales no puede ser incrementado de una manera significante sobre un 20% con las modalidades de tratamientos actuales. En un gran estudio de pacientes europeos con IVF, se encontró que 7.2 oocitos de 11.5 oocitos extraídos por succión o aspirados por paciente, fueron sometidos a una reanudación de meiosis inmediatamente antes de la fertilización, solo 4.3 oocitos fueron fertilizados y solamente 2.2 oocitos alcanzaron la etapa de embrión de la célula 8 después de la fertilización y cultivo in vi tro (ESHRE, Edinburgh, 1997) .

Debido a la calidad muy impredecible de los estados en la técnica de los embriones hoy, mas de un embrión han sido transferidos solo para dar una oportunidad razonable de éxito. Por lo tanto es común transferir de 2 a 3 embriones (en algunos países hasta 5 embriones) , lo cual trae consigo un gran efecto colateral de múltiples embarazos con gran desconcierto y riesgo para tanto el paciente como el niño. Además, se ha estimado que los costos incrementados del cuidado en la salud debido a los nacimientos múltiples (mellizos, trillizos, etc.), son excedentes de los costos de IVF totales. En consecuencia, existen grandes desventajas con el tratamiento actual, las 4 más notables son: 1. el riesgo de la hiperestimulación ovárica con inyección de gonadotropinas, la cual es una condición potencial de muerte que requiere hospitalización, 2. embarazos múltiples (de 50 a 1,000 veces la frecuencia normal de mellizos y trillizos respectivamente) , 3. la existencia de segmentos de pacientes considerables que no soportan el método actual debido a, por ejemplo, el síndrome de ovario policistico y diversos diabéticos y, 4. un riesgo potencial de cáncer de larga duración Además, la ganancia de peso, inflamación, náuseas, vómitos, humor inestables y otras inconformidades que presenta el paciente junto con la renuencia del paciente a inyectarse, asi mismo se reportan como desventajas. Es sabido de la WO 96/00235 que ciertos derivados del esterol se usan para la regulación de la meiosis. Un ejemplo de este esterol es el 4, 4-dimetil-5a-colesta-8, 14, 24-trien-3ß-ol (de aqui en adelante designada como FF-MAS) . Incluso, el término compuestos MAS designa compuestos los cuales median la meiosis de oocitos. Mas específicamente, los compuestos MAS son compuestos los cuales en la prueba descrita en el Ejemplo 1 mostrado abajo, tiene un porcentaje de rompimiento de la vesícula germinal (de aqui en adelante designada como GVB) el cual es significativamente mas alto que el control. Los compuestos MAS preferidos tienen un porcentaje de GVB de al menos 50%, preferiblemente al menos del 80%.

Ejemplos de compuestos MAS son mencionados en WO 96/00235, 96/27658, 97/00884, 98/28323, 98/54965 y 98/55498, mas específicamente en la Reivindicación 1 de las mismas. En WO 95/00265, algunas sustancias potenciales de regulación de meiosis fueron probadas en ratones hembras inmaduras. 48 horas antes de la prueba, el animal fue sacrificado por dislocación cervical, se les suministró una única inyección de gonadotrofina menopáusica humana que contiene 20 Ul de FSH y 20 Ul de LH. Los ovarios fueron removidos, colocados en un medio de hipoxantina y liberados de tejido ajeno o extraño. Entonces, los oocitos se perforaron de los folículos, liberados de las células con cúmulos y se cultivaron en un medio que contiene un derivado que regula la meiosis. En la actualidad, la maduración in vi tro en humanos se ha probado, fracasando altamente debido al interés sustancial y a los esfuerzos clínicos.

Uno de los objetos de la presente invención es el tratar la infertilidad humana. Otro de los objetivos de la presente invención es mejorar la maduración de los oocitos humanos.

Otro de los objetivos de la presente invención es mejorar la sincronía en la maduración del oocito, nuclear, citoplásmico y/o de membrana. Otro de los objetivos de la presente invención es mejorar la fertilidad de los oocitos. Otro de los objetivos de la presente invención es mejorar el porcentaje de la implantación de los oocitos por humano en la fertilización y maduración in vi tro . Otro de les objetivos de la presente invención es disminuir la incidencia de los pre-e briones humanos con cromosomas anormales (aneuploidia) . Otro de los objetivos de la presente invención es mejorar la velocidad de desdoblamiento de los pre-e briones humanos . Otro de los objetivos de la presente invención es mejorar la calidad de los pre-embriones humanos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INV?NCIÓN Se ha encontrado sorprendentemente hasta ahora que el tratamiento de la IVF y el grado de efectos colaterales pueden mejorarse sustancialmente si la mujer, dentro de un periodo consecutivo de 30 dias, evita el tratamiento con hormonas hipotalámicas y/o hormonas pituitarias o un agonista o antagonista de las mismas o un derivado activo de las mismas (de aqui en adelante este tratamiento es designado como estimulación exógena) o si el tratamiento de estimulación exógena de la mujer es solo por un corto periodo de tiempo, por ejemplo, menor a 7 dias, preferentemente menor a 4 dias. Al usar este método mejorado que involucra menos o no la estimulación exógena, un compuesto MAS se usa para activar la madurez y sincronizar los oocitos humanos in vi tro, conduciendo a la fertilización y el desarrollo del embrión. Brevemente, la presente se refiere a un método para la fertilización humana in vi tro, en donde una mujer, dentro de un periodo consecutivo de 30 dias, se trata con una hormona hipotalámica y/o hormona pituitaria o un agonista o antagonista de las mismas o un derivado activo de las mismas por un periodo el cual es menor de 7 dias, preferentemente menor a 4 dias, y, posteriormente, se usa la maduración del oocito in vi tro en donde el huevo o huevos inmaduros son recuperados de la mujer y son madurados in vitro en una manera sincronizada usando una compuesto MAS como se define aqui. Las modalidades preferidas de la presente invención son aquellas declaradas en las sub reivindicaciones abajo.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA PRESENTE INVENCIÓN. Con referencia al ciclo femenino, una manera de desarrollar el tratamiento de la IVF de la presente invención es como sigue: Alrededor de los dias 6-9 en el ciclo: Se estimula con FSH, por ejemplo 75-600 Ul por dia, preferiblemente 150-225 Ul por dia, por ejemplo, por 3 dias. Alrededor del dia 9: Los huevos son recuperados de la mujer al usar ultrasonido guiado por aspiración o extracción por succión de folículos de tamaño pequeño a medio con un diámetro de 6-12 mm, preferiblemente de 8-10 mm. Alrededor del dia 9-11: Los huevos son madurados con una compuesto MAS para estimular la meiosis. En este paso de maduración, la concentración del compuesto MAS puede estar en el rango de 0.1-100 µmol por litro, por ejemplo, 10-20 µmol por litro. Este medio puede contener albúmina de suero humano, (de aqui en adelante designado como HSA) por ejemplo, 0.8% y este puede contener adicionalmente algo de etanol, por ejemplo 0.4%, el cual se usa para disolver la MAS. El tiempo de este paso de maduración puede estar en el rango de 15-60 horas, por ejemplo, 22-40 horas, mas específicamente de 30-36 horas. Alrededor de los dias 11-13: Los huevos son fertilizados in vi tro . Alrededor del dia 12-16: Los huevos son cultivados in vi tro en un medio adecuado. Del dia anterior a la aspiración o extracción por succión, la mujer recibirá un estrógeno, por ejemplo, valerato de estrógeno (2 x 10 mg diariamente) . Dos dias después, ella recibirá también un progestógeno, por ejemplo, vagetoria de progestano, diariamente, el cual proporcionará la alineación del útero más propensa para recibir los futuros embriones. La duración de este tratamiento será diseñada individualmente por paciente. El médico puede escoger entre una variedad de estrógenos y progestógenos . Alrededor del dia 15-16: Uno o más embriones son transferidos al útero de la mujer.

En consecuencia, en conjunto, el tratamiento completo toma alrededor de 10 a 15 dias.

Refiriéndose al ciclo femenino, otra manera de desarrollar el tratamiento de la IVF en la presente invención es como sigue: Alrededor de los dias 2-8 del ciclo: Estimulación con FSH, por ejemplo, 75-600 Ul por dia, preferiblemente 150-225 Ul por dia, por ejemplo, por 3 dias, eventualmente distribuido cada 6 dias. Alrededor del dia 7-9: Los huevos son recuperados de la mujer al usar aspiración o extracción guiada por ultrasonido de folículos de tamaño pequeño a medio con un diámetro de 6-15 mm, preferiblemente de 8-12 mm. Alrededor del dia 7-11: Los huevos son madurados con un compuesto MAS para estimular la meiosis. En este paso de maduración, la concentración del compuesto MAS puede estar en el rango de 0.1-100 µmol por litro, por ejemplo, 5-20 µmol por litro. Este medio puede contener albúmina de suero humano, (de aqui en adelante designado como HSA) por ejemplo, 0.8% y este puede contener adicionalmente algo de etanol, por ejemplo 0.1-0.4%, el cual se ha usado para disolver el MAS. El tiempo de este paso de maduración puede estar en el rango de 15-60 horas, por ejemplo, 22-40 horas, mas específicamente de 30-36 horas.

Alrededor del dia 9 al 13: Los huevos son fertilizados in vi tro . Alrededor del dia 10 al 16: Los huevos son cultivados in vi tro en un medio adecuado.

Del dia anterior a la aspiración, la mujer recibirá un estrógeno, por ejemplo, valerato de estrógeno (2 x 10 mg diariamente) . Dos dias después, ella recibirá también una progestogeno, por ejemplo, vagetoria de progestano, diariamente, el cual proporcionará la alineación del útero propenso para recibir los futuros embriones. La duración de este tratamiento será diseñada individualmente por paciente. El médico puede escoger entre una variedad de estrógenos y progestógenos . Alrededor del dia 13 al 16: Uno o más embriones son transferidos al útero de la mujer. En consecuencia, en conjunto, el tratamiento completo toma alrededor de 10 a 15 dias.

La mayoría de los pasos en el tratamiento y el procedimiento arriba mencionados, se desarrollan de una manera conocida y los pasos restantes son desarrollados en una manera conocida por se. Mas detalles acerca de la remoción de los oocitos del folículo en el ovario, cultivo de los oocitos aislados, medio de cultivo a usarse, fertilización con esperma y la transferencia del embrión a las trompas de Falopio, se encuentran en la literatura, por ejemplo, en la patente Estadounidense con la especificación No. 5,693,534 la cual es con ello, incorporada para referencia. De acuerdo a la presente invención, el compuesto MAS es agregada al medio de cultivo usado. En este medio, la cantidad de compuesto MAS está en el rango de aproximadamente 0.01 hasta aproximadamente 100 µM, preferiblemente en el rango de aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 100 µM. El riesgo reducido de efectos colaterales hace una alternativa atractiva al método de acuerdo a la presente invención, con los métodos actuales, donde el GnRH se usa por aproximadamente 22 dias y la FSH se usa por aproximadamente 9 dias antes de que los huevos sean recuperados y posteriormente, se usa un progestogeno por varias semanas. En consecuencia, al usar el tratamiento de acuerdo a la presente invención, el periodo en el cual el paciente femenino se trata con hormona hipotalámica y/o hormona pituitaria se reduce cerca del 80 al 90%. El periodo total del tratamiento por los métodos actuales es de aproximadamente a 4 semanas. En consecuencia, al usar el tratamiento de acuerdo a la presente invención, el periodo total de tratamiento se reduce del 50 al 60%. Las hormonas hipotalámicas son hormonas presentes en el hipotálamo humano. Las hormonas pituitarias son hormonas presentes en la glándula pituitaria humana. Las hormonas gonadotrópicas, son hormonas secretadas por el lóbulo anterior de la pituitaria en vértebras y por la placenta de mamífero, las cuales controlan la actividad de las gónadas . Químicamente, estas son glicoproteinas . Ejemplos de hormonas gonadotrópicas son la FSH, la LH y la gonadotrofina coriónica, por ejemplo la gonadotrofina coriónica humana (de aqui en adelante designada como hCG) . La FSH estimula el crecimiento de los folículos del ovario y sus oocitos en el ovario y la formación de los espermatozoos en los testículos. La FSH puede ser, por ejemplo, FSH menopáusica ó FSH recombinante. En mujeres, la LH activa el tejido de producción de estrógeno de los ovarios para producir la progesterona, probablemente promueve las etapas finales del desarrollo de los folículos ováricos, inicia la maduración final del oocito, induce la ovulación y en los mamíferos inicia el desarrollo del cuerpo lúteo. Estas hormonas son conocidas. Es obvio para el trabajador experto en la técnica que, alternativamente, se pueden usar los agonistas o antagonistas de estas hormonas. Es obvio para el trabajador experto en la técnica, que, alternativamente, se pueden usar análogos activos de estas hormonas. Algunos de estos agonistas, antagonistas y análogos se conocen y otros se preparan por procesos conocidos por se. Ejemplos de tales procesos conocidos son la síntesis química y la ingeniería genética. En una modalidad preferida, la presente invención se refiere a un método o uso en donde el periodo en el cual la mujer se trata con una hormona hipotalámica y/o una hormona pituitaria o una agonista o antagonista de las mismas o un derivado activo de las mismas, es de 0 (cero) dias. Además en una modalidad preferida, la presente invención se refiere a un método o uso en donde una mujer se trata por infertilidad y/o para mejorar la maduración de sus oocitos y/o para mejorar la sincronía de la maduración nuclear, citoplásmica y/o de la membrana del oocito y/o para mejorar la fertilidad de sus oocitos y/o para mejorar el promedio de implantación de sus oocitos por maduración y fertilización humana in vi tro .

Además en una modalidad preferida, la presente invención se refiere a un método o uso, en donde el periodo consecutivo es un ciclo menstrual. Además en una modalidad preferida, la presente invención se refiere a un método o uso, en donde las hormonas son hormonas de liberación gonadotrópicas o un agonista o antagonista de las mismas o análogos de las mismas u hormonas gonadotrópicas o un agonista o un antagonista de las mismas o análogos de las mismas. Además en una modalidad preferida, la presente invención se refiere a un método o uso en donde la hormona gonadotrópica es la FSH o un agonista o antagonista de la misma o análogos de las mismas. Además en una modalidad preferida, la presente invención se refiere a un método o uso en donde el periodo en el cual el paciente femenino se trata con la FSH o un agonista o antagonista de la misma o análogos de la misma, antes de recuperar el huevo, es menor a 7 dias, preferiblemente menor a 4 dias y es al menos de 1 dia. Además en una modalidad preferida, la presente invención se refiere a un método o uso en donde el periodo en el cual la paciente femenino se trata con la FSH o un agonista o antagonista de la misma o análogos de las mismas en 2, 3 o 4 dias. Además en una modalidad preferida, la presente invención se refiere a un método o uso en donde se usa la gonadotrofina no coriónica, por ejemplo, gonadotrofina coriónica humana o un agonista o un antagonista de la misma o análogo de la misma. Además en una modalidad preferida, la presente invención se refiere a un método o uso en donde se usa una hormona de liberación no gonadotrópica, por ejemplo, la GnRH o un agonista o un antagonista de la misma o análogo de la misma. Además en una modalidad preferida, la presente invención se refiere a un método o uso en donde la dosificación del compuesto MAS está en el rango de aproximadamente 0.01 µM por litro hasta aproximadamente 100 µM por litro, preferiblemente en el rango de 0.1 µM por litro hasta aproximadamente 100 µM por litro. Además en una modalidad preferida, la presente invención se refiere a un método o uso en donde el compuesto MAS es uno de los compuestos mencionados en WO 96/00235, 96/27658, 97/00884, 98/28323, 98/54965 y 98/55498, más específicamente compuestos mencionados en la Reivindicación 1 de la misma. Además en una modalidad preferida, la presente invención se refiere a un método o uso en donde el compuesto MAS es FF-MAS. Adicionalmente, la presente invención se refiere al uso de la hormona hipotalámica y/o la hormona pituitaria o un agonista o antagonista de las mismas o un derivado activo de las mismas, en la manufactura de un producto de hormona la cual se administra a una mujer quien, dentro de un periodo consecutivo de 30 dias, se trata con una hormona hipotalámica y/o una hormona pituitaria o un agonista o un antagonista de las mismas o un derivado activo de las mismas, por un periodo el cual es menor de aproximadamente 7 dias, preferiblemente menor de aproximadamente 4 dias y a quien, inmediatamente después de dicho periodo, se aspiran o extraen por succión, uno o más oocitos, donde después dicho (s) oocito (s) se cultiva (n) en un medio conveniente que contiene un compuesto MAS como se define aqui, donde después dicho (s) oocito (s) se fertiliza (n) con esperma humano, y, donde después, el (os) embrión (es) resultante (s) es/son transferido (s) a una mujer.

Adicionalmente, la presente invención se refiere al uso de una hormona hipotalámica y/o hormona pituitaria o una agonista o antagonista de las mismas o un derivado activo de las mismas, y un compuesto MAS para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de la fertilización humana in vitro, en donde una hormona hipotalámica y/o hormona pituitaria o una agonista o antagonista de las mismas o un derivado activo de las mismas, dentro de un periodo consecutivo de 30 dias, se usa para tratar una mujer por un periodo el cual es menor de aproximadamente 7 dias, preferiblemente menor de aproximadamente 4 dias y, posteriormente, el compuesto MAS se usa en una maduración del oocito in vi tro del huevo o huevos recuperados de esta mujer. Adicionalmente, la presente invención se refiere al uso de un equipo farmacéutico en forma de dosificación unitaria, para la fertilización in vi tro que comprende dosificaciones unitarias separadas 1-8, dicho equipo comprende menos de 7, preferiblemente menos de 4 y al menos 1 unidad de dosificaciones unitarias separadas, para la administración diaria secuencial de una hormona hipotalámica y/o hormona pituitaria o una agonista o antagonista de las mismas o un derivado activo de las mismas para la administración diaria secuencial y una dosificación unitaria de un compuesto MAS. Este equipo puede tener las características preferidas descritas abajo. La presente invención se ilustra además por los siguientes ejemplos, los cuales, sin embargo, no se construyen como limitantes. Las características descritas en la descripción anterior, en los siguientes ejemplos y en las reivindicaciones pueden ambas, separadamente o en cualquier combinación de las mismas, ser material para la liberación de la invención en diversas formas de las mismas.

Ejemplo 1 Método usado para la elección de compuestos MAS Los oocitos se obtuvieron de un ratón hembra inmadura (C57BL/6J x DBA/2J Fl, Bomholtgaard, Dinamarca) con un peso de 13-16 gramos, que se mantuvieron bajo una temperatura controlada (20-22 °C) , iluminación (luces sobre 06.00-18.00) y humedad relativa (50-70%) . Los ratones recibieron una inyección intra-peritonal de 0.2 ml de gonadotropinas (Gonal-F, Serono) , que contienen 20 Ul de FSH y 48 horas después los animales fueron sacrificados por dislocación cervical. Los ovarios se disectaron y los oocitos se aislaron en un medio Hx (mostrado abajo) , bajo un estereomicroscopio por ruptura manual de los folículos usando un par de agujas de calibre 27. Los oocitos esféricos que presentan una vesícula germinal intacta (de aqui en adelante designada como GV) , se dividieron en cúmulos de oocitos englobados (de aqui en adelante designado como CEO) y oocitos descubiertos (designados de aqui en adelante como NO) y colocados en un medio esencial minimo a (a-MEM sin ribonucleicos, Gibco BRL, Cat. No. 22561) suministrados con 3 mg/ml de albúmina de suero bovino (BSA, Sigma Cat. No. A-7030) 5 mg/ml de albúmina de suero humano (HSA, Statens Seruminstitut, Dinamarca), 0.23 mM de piruvato (Sigma, Cat. No. S-8636), 2 mM de glutamina (Cat. Flujo No. 16-801), 100 Ul/ml de penicilina y 100 µg/ml de estreptomicina (Cat. Flujo No. 16-700) . Este medio se suplemento con 3 mM de hipoxantina (Sigma Cat. No. H-9377) y se designó como un medio Hx. Los oocitos se enjuagaron tres veces en un medio HX y los oocitos de tamaño uniforme se dividieron en grupos de CEO y NO. Los grupos CEO y NO se cultivaron en multidiscos de 4 pozos (Nunclon, Dinamarca) en los cuales cada pozo contiene 0.4 ml de medio Hx y el compuesto se probó en una concentración de 10 µM. Un pozo de control (es decir, 35-45 oocitos cultivados en un medio idéntico sin la adición de un compuesto de prueba) siempre se cultivó simultáneamente con 3 pozos de prueba (de 35-45 oocitos por pozo suplementado con el compuesto de prueba) . Los oocitos se cultivaron en una atmósfera con humedad de C02 al 5% en aire por 24 horas a 37°C. Al final de periodo de cultivo, el número de oocitos con GV, GVB y cuerpos polares (de aqui en adelante PB) , respectivamente, se contaron usando un estereomicroscopio (Wildt, Leica MZ 12) . El porcentaje de GVB, se definió como un porcentaje de oocitos sometidos al GVB por el número total de oocitos en cada pozo, calculado como : % GVB = ((número de GVB + número de PB)/ número total de oocitos) x 100.

Ejemplo 2 Pacientes para una fertilización in vi tro (IVF) se someten normalmente a un largo protocolo (4 semanas) basado en gonadotropinas que conduce a la aspiración de oocitos madurados in vivo . Estos oocitos son fertilizados subsecuentemente in vitro y recolocados como embriones de 4-8 células en el útero del paciente por un catéter cervical.

Maduración in vi tro con FF-MAS Procedimiento Todos los pacientes para IVF pueden recibir potencialmente este tratamiento, el rango de edad es de 20 a 45 años con o sin presentar el síndrome del ovario policistico (PCO) y con o sin ciclo regular. En el caso de ciclo regular o amenorrea (sin actividad cíclica) este procedimiento puede precederse con un anticonceptivo oral por varios periodos (1-10 meses) y retirado después de la iniciación del siguiente procedimiento. En el inicio del ciclo (dia 1-6, preferiblemente del dia 3 al 6) (dia 1 = 1er. dia de la menstruación) , la paciente se examinará clínicamente y puede o no recibir un estimulo de FSH de selección reducido, diseñado individualmente por cada paciente (duración: 1 a 7 dias, dosis: De 75 a 750 Ul, preferencialmente 3-4 dias con dosis de 150 a 300 Ul recombinante o urinaria en base de FSH) con o sin el uso del antagonista de GnRH y con o sin hCG. Los folículos de tamaño pequeño a medio (tamaño: de 4 a 16 mm, de preferencia folículos de 8 a 12 mm) se aspiran o extraen por succión bajo la guia de un ultrasonido usando una presión de succión baja/reducida y agujas diseñadas especialmente (más rígidas) . Se buscará en los fluidos aspirados o extraídos por succión los complejos de cúmulos de oocitos (COC) y una vez identificados bajo el estereomicroscopio (con o sin el uso de filtros de embriones), los COC se colocarán en cultivo. Un trabajador experto puede usar una amplia variedad de medios de cultivos de oocitos o medios de componentes, sin embargo los oocitos se inducirán a una maduración meiótica resumida por la exposición a FF-MAS. Se puede o no agregar la albúmina de suero humano (HSA) al medio. Si se agrega, esta puede ser en una concentración de 0.1 a 100 mg/ml, preferentemente de 5 a 10 mg/ml o del 0.5 al 1.5 % (volumen/volumen) . La fórmula de FF-MAS puede estar en forma de solución de base de etanol, en el DMSO u otra solución de solvente orgánico o tal vez en forma de pozos revestidos en FF-MAS/HSA seco, listo para usarse solo al agregar el medio de cultivo adecuado. La relación de la maduración in vi tro puede variar desde 4 hasta 60 horas, preferentemente de 30 a 40 horas. La concentración del FF-MAS puede variar desde 0.01 µM hasta 100 µM, preferentemente de 0.1 µM hasta 100 µM, más preferido de 5 µM hasta 30 µM, aún más preferido de 10 µM a 30 µM. Al continuar la maduración in vitro, los oocitos se pueden fertilizar por IVF convencional o por inyección intracitoplasmática del esperma (ICSI designada de aqui en adelante) o por métodos apropiados de fertilización que conducen a zigotos fertilizados y los embriones desarrollados se pueden transferir del dia 1 al dia 6 de la fertilización, preferentemente en los dias 2 a 3, cada uno con una transferencia de huevos múltiples o transferencia de huevos única. El paciente puede recibir terapia de progesterona y/o estrógenos antes y después de la transferencia en protocolos diseñados individualmente para el linaje endometrial receptivo apropiado, sostenido y selecto. Comparado con los procedimientos conocidos, se obtuvieron mejores resultados usando el procedimiento anterior.

Ejemplo 3 Uso de FF-MAS para la maduración in vi tro de oocitos inmaduros humanos El paciente femenino se inicia con una estimulación ovárica breve con FSH recombinante con un promedio de dosis diaria de 225 en el dia 2 del ciclo y seguido por un total de 3 veces en dias alternados, es decir, 2°, 4°, y 6° dia del ciclo. Al menos 3 folículos de 10 mm o más en el dia 7, conducen a la aspiración o extracción por succión de los folículos inmaduros del tamaño entre 8 a 12 mm. Los folículos son aspirados o extraídos por succión (etapa GV) y los cúmulos englobados en cúmulos inmaduros, se cultivaron en el sistema de cultivo de oocitos que contiene un medio de cultivo estándar in vi tro (IVC) (20 IVF (la cual está disponible de Science AB de IVF Escandinava, Gotenburgo, Suecia) ) contiene adicionalmente albúmina de suero humano (0.8%) y FF-MAS (5 µM) . Todos los oocitos se cultivaron bajo condiciones normales a 37°C en la incubadora. Cada oocito se cultivó en un pozo en un disco de cultivo de 4 cámaras como un sistema de medio de cultivo. La duración de la exposición al medio de cultivo con tratamiento fue de 30 horas antes de ICSI o de que la fertilización in vi tro se realizara. Los pre-embriones que se evaluaron para la etapa de desdoblamiento y morfología/fragmentación en los dias 1, 2 y 3 post ICSI/IVF. Después de 3 dias de cultivo, se recolocan en el paciente femenino, una selección de los mejores pre-embriones, típicamente 2 pre-embriones. Comparados con los procedimientos conocidos, se obtienen resultados clínicos similares. Sin embargo, en este ejemplo, comparado con los procedimientos conocidos, se usa una reducida exposición de hormonas y consecuentemente se obtiene aqui un reducido perfil de efectos colaterales.

Ejemplo 4 Usando el procedimiento descrito en el Ejemplo 3, con la condición que en lugar de usar FF-MAS en una concentración 5 µM, se usó el FF-MAS en una concentración de 20 µm, se obtuvieron resultados clínicos similares en este procedimiento, que con los procedimientos conocidos. Sin embargo, en este ejemplo, se usó una exposición reducida de hormonas comparada con procedimientos conocidos y por consecuencia se obtuvo aqui un reducido perfil de efectos laterales.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención.

Claims (18)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un método 'para la fertilización humana in vitro caracterizado porque una mujer, dentro de un periodo consecutivo de 30 dias, se trata con una hormona hipotalámica y/o hormona pituitaria o un agonista o antagonista de las mismas o un derivado activo de las mismas, por un periodo el cual es menor de 7 dias, preferentemente menor de aproximadamente 4 dias, y, posteriormente, se usa la maduración del oocito in vi tro en donde el huevo o huevos inmaduros son recuperados de la mujer y son madurados usando un compuesto MAS como se define aqui .

2. El uso de la hormona hipotalámica y/o la hormona pituitaria o un agonista o antagonista de las mismas o un derivado activo de las mismas, en la manufactura de un producto de hormona la cual se administra a una mujer quien, dentro de un periodo consecutivo de 30 dias, se trata con una hormona hipotalámica y/o una hormona pituitaria o un agonista o un antagonista de las mismas o un derivado activo de las mismas, por un periodo el cual es menor de aproximadamente 7 dias, preferiblemente menor de aproximadamente 4 dias y a quien, inmediatamente después de dicho periodo, se aspiran o extraen por succión, uno o más oocitos, donde después dicho (s) oocito (s) se cultiva (n) en un medio conveniente que contiene un compuesto MAS como se define aqui, donde después dicho (s) oocito (s) se fertiliza (n) con esperma humano, y, donde después, el (os) embrión (es) resultante (s) es/son transferido (s) a una mujer.

3. El uso de una hormona hipotalámica y/o hormona pituitaria o una agonista o antagonista de las mismas o un derivado activo de las mismas, y un compuesto MAS para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de la fertilización humana in vi tro, en donde una hormona hipotalámica y/o hormona pituitaria o una agonista o antagonista de las mismas o un derivado activo de las mismas, dentro de un periodo consecutivo de 30 dias, se usa para tratar una mujer por un periodo el cual es menor de aproximadamente 7 dias, preferiblemente menor de aproximadamente 4 dias y, posteriormente, el compuesto MAS se usa en una maduración del oocito in vi tro del huevo o huevos recuperados de esta mujer.

4. Un método o uso de acuerdo a una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque una mujer se trata por infertilidad y/o para mejorar la maduración de sus oocitos y/o para mejorar la sincronía de la maduración nuclear, citoplásmica y/o de la membrana del oocito y/o para mejorar la fertilidad de sus oocitos y/o para mejorar el promedio de implantación de sus oocitos por maduración y fertilización humana in vi tro.

5. Un método o uso de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque dicho periodo en el cual la mujer se trata con una hormona hipotalámica y/o hormona pituitaria o una agonista o antagonista de las mismas o un derivado activo de las mismas es de 0 (cero) dias,,

6. Un método o uso de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el periodo consecutivo es un ciclo menstrual.

7. Un método o uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque las hormonas son hormonas de liberación gonadotrópicas o un agonista o antagonista de las mismas o análogos de las mismas u hormonas gonadotrópicas o un agonista o un antagonista de las mismas o análogos de las mismas.

8. Un método o uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la hormona gonadotrópica es la FSH o un agonista o antagonista de la misma o análo?ros de las mismas.

9. Un método o uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el periodo en el cual el paciente femenino se trata con la FSH o un agonista o antagonista de la misma o análogos de la misma, antes de recuperar el huevo, es menor a 7 dias, preferiblemente menor a 4 dias y es al menos de 1 dia.

10. Un método o uso de acuerdo con las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el periodo en el cual la paciente femenino se trata con la FSH o un agonista o antagonista de la misma o análogos de las mismas en 2, 3 o 4 dias.

11. Un método o uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque se usa la gonadotrofina no coriónica, por ejemplo, gonadotrofina coriónica humana o un agonista o un antagonista de la misma o análogo de la misma.

12. Un método o uso de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones previas, caracterizado porque se usa una hormona de liberación no gonadotrópica, por ejemplo, la GnRH o un agonista o un antagonista de la misma o análogo de la misma.

13. Un método o uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones previas, caracterizado porque la dosificación del compuesto MAS está en el rango de aproximadamente 0.01 µM, hasta aproximadamente 100 µM, preferiblemente en el rango de aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 100 µM.

14. Un método o uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones previas, caracterizado porque el compuests MAS se menciona en WO 96/00235, 96/27658, 97/00884, 98/28323, 98/54965 y 98/55498, mas específicamente los compuestos se mencionan en la Reivindicación 1 de las mismas .

15. Un método o uso de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones previas, caracterizado porque el compuesto MAS es FF-MAS.

16. Un equipo farmacéutico en forma de dosificación unitaria, para la fertilización in vi tro, caracterizado porque comprende dosificaciones unitarias separadas 1-8, dicho equipo comprende menos de 7, preferiblemente menos de 4 y al menos 1 unidad de dosificaciones unitarias separadas, para la administración diaria secuencial de una hormona hipotalámica y/o hormona pituitaria o una agonista o antagonista de las mismas o un derivado activo de las mismas para la administración diaria secuencial y una dosificación unitaria de un compuesto MAS.

17. Un equipo de acuerdo a la reivindicación previa, caracterizado porque tiene las características preferidas descritas en una cualquiera de las subreivindicaciones descritas arriba.

18. Cualquier nueva característica o combinación de características, como se describen aqui.