MXPA01007903A - Derivados de indol anti-inflamatorios - Google Patents

Derivados de indol anti-inflamatorios

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MXPA01007903A
MXPA01007903A MXPA/A/2001/007903A MXPA01007903A MXPA01007903A MX PA01007903 A MXPA01007903 A MX PA01007903A MX PA01007903 A MXPA01007903 A MX PA01007903A MX PA01007903 A MXPA01007903 A MX PA01007903A
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MXPA/A/2001/007903A
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Wellington Faull Alan
Jason Kettle
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Zeneca Limited
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Abstract

Compuestos de la fórmula (I) (Ver Fórmula) o su sal farmacéuticamente aceptable,éster hidrolizable in vivo o amida, en donde X es CH2 o SO2;R1 es un anillo arilo o heteroarilo opcionalmente substituido;R4 es un grupo OR15 o S(0)qR15, en donde q es 0, 1 o 2 y R15 es un grupo alquilo que contiene hidrógeno substituido;y R2, R3, R5, R6 y R7 son grupos orgánicos especificados. Estos compuestos sonútiles en terapia, en particular de enfermedad inflamatoria y métodos para producirlos as! como composiciones farmacéuticas que los contienen también se describen y reivindican.

Description

DERIVADOS DE INDOL ANTI-INFLAMATORIOS La presente invención se refiere a compuestos químicos, a su producción, así como a composiciones farmacéuticas que los contienen y a su uso en terapia, en particular de enfermedad inflamatoria. MCP-1 es un miembro de la familia quimioquina de citoquinas pro-inflamatorias que median quimiotaxia y activación de leucocitos. MCP-1 es una quimioquina C-C que es uno de los agentes activadores quimio atrayentes de monocitos y células T más potentes y selectivos conocidos. MCP-1 se ha implicado en la patofisiología de una gran cantidad de enfermedades inflamatorias incluyendo artritis reumatoide, nefritis glomerular, fibrosis de pulmón, restenosis (solicitud de Patente Internacional WO 94/09128) alveolitis (Jones y colaboradores, 1992 J. Immunol . 149, 2147) y asma. Otras áreas de enfermedad en donde MCP-1 se considera que juega una parte en su patología son la aterosclerosis (por ejemplo Koch y colaboradores, 1992, J. Clin . Invest . , 90, 772-779), soriasis (Deleuran y colaboradores, 1996, J". Derma tological Science, 13, 228-236) reacciones de hipersensibilidad de tipo retardadA de la piel, enfermedad de intestino inflamatario (Grimm y colaboradores, 1996, 7. Leu-ocyte Biol ; 59, 804-812) esclerosis múltiple y trauma del cerebro (Berman y colaboradores, 1996, J". Inmuno 1 . 156, 3017-3023). Un inhibidor MCP-1 también puede ser útil para tratar ataque, lesión de reperfusión, isquemia, infarto al miocardio y rechazo de transplante. MCP-1 actúa a través del receptor MCP-1 (también conocido como el receptor CCR2) . MCP-2 y MCP- 3 también pueden actuar, cuando menos en parte a través del receptor MCP-1. Por lo tanto en esta especificación, cuando se hace referencia a "inhibición o antagonismo de MCP-1" o "efectos mediados por MCP-1" esto incluye inhibición o antagonismo de efectos mediados de MCP-2 y/o MCP-3 cuando MCP-2 y/o MCP-3 actúan a través del receptor MCP-1. Las solicitudes de patente internacionales co-pendientes Nos. PCT/GB98/02340 y PCT/GB98/02341 describen y reivindican grupos de compuestos con base en la estructura de anillo indol que son inhibidores de MCP-1 y por lo tanto tienen aplicaciones en terapia. El uso de ciertos derivados indol como antagonistas NMDA se describe en USP 5,051,442, WO 93/12780, F-483881.
Otros índoles y sus usos como inhibidores de biosíntesis de leucotrieno se describen por ejemplo en EP-A-275-667 , EP-A-419049 y USP 5,190,968. Más recientemente, WO 99/33800 describe diversos derivados indol como inhibidores de factor XA. Los solicitantes han encontrado que una sustitución particular en la posición 4 en el anillo indol produce resultados ventajosos cuando se utilizan terapéuticamente como inhibidores de MCP-1. De acuerdo con la presente invención se proporciona un compuesto de la fórmula (I) (0 en donde X es CH2 o S02 R1 es un anillo arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, R2 es carboxi, ciano, -C(0)CH20H, -CONHR8, -S02NHR9, tetrazol-5-ilo, S03, H, o un grupo de la fórmula (VI) (VI) en donde R8 se elige de hidrógeno, alquilo, arilo, ciano, hidroxi, -S02R12, en donde R12 es alquilo, arilo, heteroarilo o haloalquilo o R8 es un grupo - (CHR13) r-COOH, en donde r es un entero de 1 a 3 y cada grupo R13 se elige independientemente de hidrógeno o alquilo; R9 es hidrógeno, alquilo, arilo opcionalmente sustituido tal como fenilo generalmente sustituido o heteroarilo generalmente sustituido tal como grupos heteroarilo de 5 o 6 miembros, o un grupo COR14 en donde R14 es alquilo, arilo, heteroarilo o haloalquilo; R10 y R11 se eligen independientemente de hidrógeno o alquilo, particularmente alquilo con 1 a 4 átomos de carbono; R3 es hidrógeno, un grupo funcional, alquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroclililo opcionalmente sustituido, alcoxi opcionalmente sustituido, aralquilo opcionalmente sustituido, aralquiloxi opcionalmente sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido; R4 es un grupo OR15 o S(0)qR15, en donde q es 0, l o 2, y R15 es un grupo alquilo que contiene hidrógeno sustituido; y R5, R6 y R7 se eligen independientemente de hidrógeno, un grupo funcional o un grupo hidrocarbilo opcionalmente sustituido o un grupo heterocíclico opcionalmente sustituido.
Convenientemente, R4 es diferente a OR15 en donde R15 es alquilo con 1 a 4 átomos de carbono sustituido por un solo fenilo sin sustituir tal como benciloxi. Además, la invención proporciona una sal farmacéuticamente aceptable, éster hidrolizable in vivo o amida del compuesto de la fórmula (I) . Compuestos de la fórmula (I) son inhibidores de la proteína- 1 quimio atrayente de monocitos. Además, parecen inhibir quimiotaxia inducida por RANTES. RANTES es otra quimioquina de la misma familia que MCP-1, con un perfil biológico semejante, pero que actúa a través del receptor CCRl. Como resultado, estos compuestos pueden emplearse para tratar enfermedad mediada por estos agentes, en particular enfermedad inflamatoria. De esta manera, la invención además proporciona un compuesto de la fórmula (I) para utilizar en el tratamiento de enfermedad inflamatoria. En esta especificación, el término "alquilo" cuando se utiliza ya sea solo o como un sufijo incluye estructuras de cadena recta o ramificada. Estos grupos pueden contener hasta 10, de preferencia hasta 6 y más preferiblemente hasta 4 átomos de carbono. Similarmente, los términos "alquenilo" y "alquinilo" se refieren a estructuras rectas o ramificadas insaturadas que contienen por ejemplo de 2 a 10, de preferencia de 2 a 6 átomos de carbono. Porciones cíclicas tales como cicloalquilo, cicloalquenilo o cicloalquinilo son similares en naturaleza, pero tienen al menos 3 átomos de carbono. Términos tales como "alcoxi" comprenden grupos alquilo como se entiende en la especialidad. Cuando se establece que el grupo alquilo "contiene hidrógeno" se entiende que al menos un átomo de hidrógeno está presente, de esta manera excluyendo grupos perhaloalquilo por ejemplo. El término "halo" incluye flúor, cloro, bromo e yodo. Preferencia a grupos arilo incluye grupos carbocíclicos aromáticos tales como fenilo y naftilo. El término "heterociclilo" incluye anillos aromáticos o no aromáticos, por ejemplo que contienen de 4 a 20, convenientemente de 5 a 8 átomos de anillo, al menos uno de los cuales es un heteroátomo tal como oxígeno, azufre o nitrógeno. Ejemplos de estos grupos incluyen furilo, tienilo, pirrolilo, pirrolidinilo, imidazolilo, triazolilo, tiazolilo, tetrazolilo, oxazolilo, isosaxolilo, pirazolilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridazinilo, triazinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, quinoxalinilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, benzotienilo o benzofurilo. "Heteroarilo" se refiere a aquellos grupos descritos anteriormente que tienen un carácter aromático. El término "aralquilo" se refiere a grupos alquilo sustituidos con arilo tales como bencilo.
Otras expresiones empleadas en la especificación incluyen "hidrocarbilo" que se refiere a cualquier estructura que comprende átomos de carbono e hidrógeno. Por ejemplo, estos pueden ser alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heterociclilo, alcoxi, alquilo, cicloalquilo, cicloalquenilo o cicloalquinilo. El término "grupo funcional" se refiere a sustituyentes reactivos. Puede comprender donación de electrones o extracción de electrones. Ejemplos de estos grupos incluyen halo, ciano, nitro, C(0)nR18, OR18, S(0)mR18, NR19R20, C(0)NR19R20, OC (0) NR19R20, -NR19C (O) nR18 , -NR18CONR19R20 , -N=CR18R19, S(0)nR19R20 o -NR19S (O) mR18 , en donde R18, R19 y R20 se eligen independientemente de hidrógeno o hidrocarbilo opcionalmente sustituido, o R19 y R20 juntos forman un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido como se definió anteriormente, que opcionalmente contiene adicionales heteroátomos tales como azufre S (O) , S02, oxígeno y nitrógeno, N es un entero de 1 o 2 , M es un entero de 1-3. Sustituyentes opcionales convenientes para grupos hidrocarbilo R18, R19 y R20 incluyen halo, perhaloalquilo, tales como trifluorometilo, mercapto, hidroxi, carboxi, alcoxi, heteroarilo, heteroariloxi, alqueniloxi, alquiniloxi, alcoxialcoxi, ariloxi (en donde el grupo arilo puede estar sustituido por halo, nitro o hidroxi) , ciano, nitro, amino, mono- o di-alquilamino, oximino o S(0)mR16, en donde m1 es 1 o 2 y R16 es alquilo. Cuando R19 y R20 forman un grupo heterocíclico, este puede estar opcionalmente sustituido por hidrocarbilo tal como alquilo, así como aquellos sustituyentes enlistados anteriormente para grupos hidrocarbilo. Sustituyentes convenientes para grupos hidrocarbilo o heterocíclicos, R5, R6 y R7 incluyen aquellos enlistados anteriormente para R18, R19 y R20. Convenientemente, R1 es un anillo fenilo, piridilo, naftilo, furilo o tienilo opcionalmente sustituido y en particular es un anillo fenilo o piridilo sustituido. Sustituyentes opcionales convenientes para R1 en la fórmula (I) incluyen alquilo, alquenilo, alquinilo, halo, haloalquilo incluyendo perhaloalquilo tales como trifluorometilo, mercapto, alcoxi, haloalcoxi, alqueniloxi, alquiniloxi, hidroxialcoxi, alcoxialcoxi, alcanoilo, alcanoiloxi, ciano, nitro, amino, mono- o di-alquilamino, oximino, sulfonamido, carbamoilo, mono- o di-alquilcarbamoilo o S(0)mR21 en donde M es como se definió anteriormente y R21 es hidrocarbilo . Ejemplos particulares de sustituyentes R5, Rd y R7 incluyen hidrógeno, hidroxi, halo, alquilo opcionalmente sustituido tal como aralquilo, carboxialquilo o su derivado amida; alcoxi; ariloxi, aralquiloxi; o un grupo amino que está opcionalmente sustituido con alquilo, arilo o aralquilo. Un grupo funcional específico que es adecuado para R , R y/o R7 es un grupo de sub- fórmula (IV) .
(IV) Ejemplos particulares de los grupos R5, R6 y R7 son hidrógeno, hidroxi, halo o alcoxi. En particular, R6 y R7 son hidrógeno. R5 puede ser hidrógeno pero además es convenientemente un pequeño sustituyente tal como hidroxi, halo o metoxi . Sustituyentes particulares para R1 incluyen trifluorometilo, alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, halo, trifluorometoxi, alcoxi con 1 a 4 átomos de carbono, alcanoilo con 1 a 4 átomos de carbono, alcanoiloxi con 1 a 4 átomos de carbono, nitro, carbamoilo, alcoxi con 1 a 4 átomos de carbono-carbonilo, alquilo con 1 a 4 átomos de carbono-sulfanilo, alquilo con 1 a 4 átomos de carbono-sulfinilo, alquilo con 1 a 4 átomos de carbono-sulfonilo, sulfonamido, carbamoilo-alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, N- (alquilo con 1 a 4 átomos de carbono) carbamoilo-alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, N- (alquilo con 1 a 4 átomos de carbono) 2 carbamoilo-alquilo con 1 a 4 átomos de carbono; hidroxi-alquilo con 1 a 4 átomos de carbono o alcoxi-alquilo con 1 a 4 átomos de carbono-alquilo con 1 a 4 átomos de carbono. En forma adicional o alterna, dos de estos sustituyentes juntos pueden formar un radical divalente de la fórmula -0(CH2)1_40- conectado a átomos de carbono adyacentes en el anillo R1. Sustituyentes preferidos para R1 son uno o más sustituyentes no polares tales como halo. En particular, R1 está sustituido por uno o más grupos halo, en particular cloro. Un ejemplo particular de un grupo R1 es 3 , 4-diclorofenilo, 3-fluoro-4-clorofenilo, 3-cloro-4-fluorofenilo o 2 , 3-dicloropiridil-5-ilo . Ejemplos de grupos R2 incluyen carboxi; ciano, tetrazol-5-ilo; S03H; -CONHR8 en donde R8 se elige de ciano, hidroxi, S02R12 en donde R12 es alquilo tal como alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, arilo tal como fenilo, heteroarilo, o trifluorometilo, o R8 es un grupo - (CHR13) r-COOH en donde R es un entero de 1 a 3 y cada grupo R13 se elige independientemente de hidrógeno o alquilo tal como alquilo con 1 a 4 átomos de carbono; o R2 es un grupo S02NHR9 en donde R9 es un fenilo opcionalmente sustituido o un grupo heteroarilo de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido, 0 un grupo COR14 en donde R14 es alquilo tal como alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, arilo tal como fenilo, heteroarilo, o trifluorometilo, o R12 es un grupo de la fórmula (VI) en donde R10 y R11 independientemente se eligen de hidrógeno o alquilo particularmente alquilo con 1 a 4 átomos de carbono. De preferencia R12 es carboxi o su sal o éster farmacéuticamente aceptable. Grupos convenientes R3 incluyen hidrógeno, flúor, cloro, bromo, yodo, y metilo, ciano, trifluorometilo, hidroximetilo, alcoxialquilo tal como alcoxi con 1 a 4 átomos de carbono-metilo, metoxi, benciloxi, carboxialcoxi tal como carboximetoxi , metilsulfañilo, metilsulfinilo, metilsulfonilo o carboxi-cicloalquilo con 3 a 6 átomos de carbono, - (CHR22) r-NR23R24 (en donde r es 0 o 2, cada R22 independientemente es hidrógeno o alquilo, en particular alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, R23 y R24 se eligen independientemente de H y alquilo con 1 a 4 átomos de carbono o R23 y R24 junto con el nitrógeno al cual se conectan forman un anillo de 5 o 6 miembros que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional seleccionado de O, N, S, S (0) o S02.
Convenientemente, R23 y R24 juntos forman un anillo heterocíclico tal como morfolino o piperazinilo. Otros de estos grupos R3 incluyen grupos arilo opcionalmente sustituidos tales como un grupo fenilo o naftilo opcionalmente sustituido. Sustituyentes convenientes para grupos fenilo R3 incluyen uno o más grupos seleccionados de cloro, flúor, metilo, trifluorometilo, trifluorometoxi, amino, formilo, fenilo, metoxi, fenoxi o fenilo. R3 puede comprender un rango de sustituyentes como se enlistó anteriormente, en particular hidrógeno o un pequeño grupo sustituyente tal como alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, en particular metilo o trifluorometilo y de preferencia es hidrógeno. Convenientemente, R15 como se emplea en la definición de R4 comprende un grupo alquilo con 1 a 3 átomos de carbono . Adecuados sustituyentes opcionales para el grupo R15 incluyen uno o más grupos seleccionados de grupos funcionales como se definió anteriormente, así como grupos arilo o heterociclilo, cualquiera de los cuales por sí mismo puede estar sustituido por uno o más grupos funcionales. De preferencia, cuando R15 es un grupo arilo tal como fenilo, el anillo fenilo está sustituido por ejemplo por un grupo funcional. De preferencia, cuando R15 tiene un sustituyente heteroarilo, está espaciado del anillo indol por más de un grupo CH2 y de manera tal que el grupo alquilo R15 es diferente a metilo. Más preferiblemente, cuando R15 tiene un sustituyente heterocíclico, no es aromático, tal como morfolino, tetrahidropirazinilo en donde el segundo átomo de nitrógeno es H, alquilo o hidroxialquilo sustituido (y en particular es H o alquilo sustituido) o un grupo en donde t es 0, 1 o 2 y de preferencia 2. Sustituyentes convenientes para grupos alquilo con 1 a 3 átomos de carbono R15 lo están con uno o más grupos seleccionados de halo; hidroxi; ciano; amino, mono- o di-alquilamino en donde cada grupo alquilo está sustituido opcionalmente por hidroxi, alcoxi, o heterociclilo; alcoxi con 1 a 4 átomos de carbono; carboxi; sulfonamido; C0HN2 ; morfolino, tetrahidropirazinilo que está opcionalmente N-substituido por alquilo o hidroxialquilo; tetrahidropiridilo opcionalmente sustituido por hidroxi o hidroxialquilo, piridilo, pirimidinilo, fenilo opcionalmente sustituido por carboxi, halo, hidroxi, alcoxi, carbamoilo, acilo o hidroxialquilo en donde el grupo alquilo convenientemente incluye cuando menos dos átomos de carbono.
De preferencia, cuando R15 es alquilo sustituido por fenilo, ya sea la porción alquilo transporta un sustituyente adicional como se describió anteriormente o el anillo fenilo está sustituido como se describió anteriormente. Ejemplos particulares de sustituyentes para grupos R15 como están presentes en R , incluyen uno o más grupos seleccionados de halo tal como cloro, hidroxi, ciano, amino, mono- o di-alquilamino, alcoxi con 1 a 4 átomos de carbono, carboxi, sulfonamido, C0HN2, morfolino, tetrahidropirazinilo que está opcionalmente N-substituido por alquilo o hidroxialquilo, piridilo, pirimidinilo, fenilo opcionalmente sustituido por carboxi, halo tal como cloro, hidroxi, alcoxi tal como metoxi, carbamoílo, acilo tal como acetilo, o hidroxi alquilo en donde el grupo alquilo convenientemente incluye cuando menos 2 átomos de carbono tal como hidroxietilo . Cuando R15 es un grupo heterocíclico, este puede estar sustituido por grupos funcionales o por grupos alquilo tales como metilo o etilo o grupos alquenilo o alquinilo, cualquiera de los cuales puede estar sustituido por ejemplo con hidroxi . Un grupo preferido para R4 es un grupo OR15, en donde R15 es un grupo alquilo de cadena recta o ramificada que transporta cuando menos un grupo hidroxi, por ejemplo uno o dos grupos hidroxi. Otros sustituyentes como se definió anteriormente, pueden proporcionarse en la cadena alquilo. De preferencia, R15 es un grupo de la fórmula - (CH2)a [ (CHOH) (CH2)b]dCH2OH en donde a es un entero de 1 a 4 , b es 0 o un entero de l a 4, y d es O o l. Ejemplos de estos R15 incluyen CH2CHOHCH2OH y CH2CH2OH, CH2CH2CH2OH. X es CH2 o S02 y de preferencia es CH2. Sales farmacéuticamente aceptables convenientes de los compuestos de la fórmula (I) incluyen sales base tales como sales de metales alcalinos por ejemplo sodio, una sal de metal alcalino terreo, por ejemplo calcio o magnesio, una sal de amina orgánica por ejemplo trietilamina, morfolina, N-metilpiperidina, iV-etilpiperina, procaína, dibencilamina, N, i\.-dibenciletilamina o amino ácidos, por ejemplo lisina. En otro aspecto, cuando el compuesto es suficientemente básico, sales convenientes incluyen sales de adición de ácido tales como metansulfonato, fumarato, hidrocloruro, hidrobromuro, citrato, maleato y sales formadas con ácido fosfórico y sulfúrico. Estos pueden ser más de un catión o anión dependiendo del número de funciones cargadas y la valencia de los cationes o aniones. Una sal farmacéuticamente aceptable preferida es una sal de sodio.
Un éster hidrolizable in vivo de un compuesto de la fórmula (I) que contiene el grupo carboxi o hidroxi, por ejemplo es un éster farmacéuticamente aceptable que se hidroliza en el cuerpo del humano o animal para producir el ácido principal o alcohol . Esteres farmacéuticamente aceptables convenientes para carboxi incluyen alquilo con 1 a 6 átomos de carbono esteres tales como metil o etil esteres, alcoxi con 1 a 6 átomos de carbono metilésteres por ejemplo metoximetilo, alcanoiloxi con 1 a 6 átomos de carbono metilésteres por ejemplo pivaloiloxi metil ftalidil esteres, cicloalcoxi con 3 a 8 átomos de carbono-carboniloxi-alquilo con 1 a 6 átomos de carbono esteres, por ejemplo 1-ciclohexilcarbonil oxietilo; 1 , 3-dioxolen-2-onil-metilésteres por ejemplo 5-metil-l, 3-dioxolen-2-onilmetilo; y alcoxi con 1 a 6 átomos de carbono carboniloxietil esteres por ejemplo 1-metoxicarboniloxietilo y pueden estar formados en cualquier grupo carboxi de los compuestos de esta invención. Un éster hidrolizable in vivo de un compuesto de la fórmula (I) que contiene un grupo hidroxi, incluye esteres inorgánicos tales como esteres fosfato y esteres -aciloxi alquilo y compuestos relacionados que como resultado de la hidrólisis in vivo del éster se descomponen para dar el grupo hidroxi principal. Ejemplos de a-aciloxi alquilésteres incluyen acetoximetoxi y 2 , 2-dimetilpropioniloxi metoxi. Una selección de grupos formadores de éster hidrolizable in vivo para hidroxi incluyen alcanoilo, benzoilo, fenilacetilo, y benzoilo sustituido y fenilacetilo, alcoxicarbonilo (para dar alquil carbonato esteres) , y alquil carbamoilo y N-dialquilaminoetil ( -_\7-alquilcarbamoilo) para dar carbamatos (dialquilaminoacetilo y carboxiacetilo) . Amidas convenientes incluyen, por ejemplo una N-alquilo con 1 a 6 átomos de carbono y N, N-di- (alquilo con 1 a 6 átomos de carbono) amida tal como N-metil, N-etil, N-propil, N,N-dimetil, N-etil-N-metil o N, N-dietilamida . Esteres que no son hidrolizables i n v i v o son útiles como intermediarios en la producción de los compuestos de la fórmula (I) y por lo tanto forman un aspecto adicional de la invención. De esta manera, ejemplos de compuestos de la fórmula (I) incluyen los siguientes: Tabla 1 Comp . No , 23 H 24 H H 26 H 7 H en donde * indica el punto de conexión del grupo al anillo indol. Compuestos de la fórmula (I) se preparan convenientemente por métodos análogos a aquellos descritos en las solicitudes de patente internacionales Nos.
PCT/GB98/02340 y PCT/GB98/02341. En particular compuestos de la fórmula (I) pueden prepararse al reaccionar un compuesto de la fórmula (VII) .
(Vil) en donde R1, R3, R5, R6, R7 y X son como se definió en relación a la fórmula (I), R2' es un grupo R2 definido en relación a la fórmula (I) o su forma protegida e Y es oxígeno o azufre con un compuesto de la fórmula (VIII) . Z- R15' (VIII) en donde Z es un grupo saliente y R15' es un grupo R15 como se define en la reivindicación 1 o su precursor, y posteriormente si se desea o es necesario llevar a cabo una o más de las siguientes etapas: (i) convertir un grupo precursor R15' a un grupo R15; (ii) convertir un grupo R15 en otro grupo tal; (iii) oxidar un grupo tiol R4 a un grupo sulfinilo o sulfonilo; (iv) desproteger un grupo R2' o convertir el grupo existente R2 a un grupo R2 diferente. Las reacciones de los compuestos de la fórmula (IIV) y (VIII) se efectúa convenientemente en un solvente orgánico tal como dimetil formamida (DMF) , en la presencia de una base tal como una sal hidruro o carbonato, en particular hidruro de sodio o carbonato de sodio. Temperaturas en el rango de 0o a 100 °C se emplean convenientemente. Ejemplos de grupos salientes convenientes Z incluyen halógeno tal como cloro y bromo. En general, el compuesto de la fórmula (VII) comprenderá un compuesto en donde R2' es un grupo éster. La desesterificación en la etapa opcional (iv) utilizando métodos convencionales como se ilustra a continuación, producirá el compuesto correspondiente de la fórmula (I) en donde R1 es un grupo de ácido carboxílico. La etapa opcional (i) anterior puede llevarse a cabo utilizando métodos convencionales, dependiendo de la naturaleza precisa del precursor involucrado. Por ejemplo, un precursor de un grupo alquilo disubstituido R15 puede ser un epóxido. La adición de una amina al epóxido, por ejemplo como se ilustró previamente resultará en la producción de un compuesto de la fórmula (I) en donde R15 transporta tanto un sustituyente hidroxi como una amina. Muchas otras reacciones posibles de esta naturaleza serán aparentes para un químico. Similarmente, la etapa opcional (II) puede efectuarse utilizando métodos convencionales. Por ejemplo, los sustituyentes halo pueden reemplazarse por otros utilizando una reacción de desplazamiento nucleofílica . De nuevo, ejemplos de estas reacciones se dan previamente, pero muchos otros serán fácilmente aparentes. La oxidación en la etapa opcional (iii) se efectúa convenientemente utilizando un agente oxidante apropiado. Por ejemplo puede reaccionarse peróxido de hidrógeno con un tiol para producir el compuesto sulfonilo correspondiente a la fórmula ( I) . Compuestos de la fórmula (VII) pueden prepararse en diversas formas dependiendo de la naturaleza del grupo Y. Por ejemplo, cuando Y es oxígeno, el compuesto de la fórmula (VII) puede prepararse al reaccionar un compuesto de la fórmula ( IX) . OR40 R7 (IX) en donde R3, R5, R6 y R7 son como se definió en relación a la fórmula (I) , R2' es como se definió en relación a la fórmula (VII) y R40 es un grupo protector tal como acetilo o bencilo; con un compuesto de la fórmula (IX) . R^X-Z1 (X) en donde R1 y X son como se definió en relación a la fórmula (I) y Z1 es un grupo saliente y posteriormente retirar el grupo protector R40. Grupos salientes convenientes para Z incluyen haluro, tal como cloruro, bromuro o yoduro, así como mesilato o tosilato. La reacción se efectúa convenientemente en un solvente orgánico tal como dimetilformamida (DMF) , tetrahidrofurano (THF) o DCM en la presencia de una base tal como hidruro de sodio, hidróxido de sodio, carbonato de potasio. Opcionalmente, la reacción se efectúa en la presencia de un catalizador de transferencia de fase conveniente. La selección de base y solvente es interdependiente en cierta proporción ya que ciertos solventes son compatibles con algunas bases solo como se entiende en la especialidad. Por ejemplo, puede emplearse hidruro de sodio con dimetilformamida o tetrahidrofurano e hidróxido de sodio de preferencia con diclorometano y un catalizador de transferencia de fase. La reacción puede llevarse a cabo a temperaturas moderadas, por ejemplo de 0 a 50 °C y convenientemente a una temperatura ambiente aproximada. De preferencia, R2' es un grupo éster en el compuesto de la fórmula (IX) y este puede convertirse subsecuentemente a un ácido o a otro éster o sal, por métodos convencionales posteriormente en el proceso. Por ejemplo, cuando X es un grupo S02 y R2 es un metiléster de carboxi puede convertirse al ácido carboxílico correspondiente por reacción con yoduro de litio en piridina seca o DMF. Las condiciones de reacción empleadas en la etapa de desprotección para retirar R40, dependerán de la naturaleza del grupo protector R40 y serán aparentes para una persona con destreza. Los grupos acetilo pueden retirarse por reacción con una base fuerte tal como metóxido de sodio, mientras que los grupos bencilo pueden retirarse por hidrogenación, por ejemplo en la presencia de un catalizador de paladio.
Compuestos de la fórmula (IX) pueden prepararse por ciclización de un compuesto de la fórmula (XII) R7 (XII) en donde R5, R6, R7 y R40 son como se definió anteriormente y R42 y R43 representan una combinación de porciones que pueden ciclizar para formar un anillo pirrol sustituido apropiadamente. Por ejemplo, R42 puede ser un grupo de la fórmula -CH=C (R44) N3 en donde R44 es un grupo R2 como se definió anteriormente, o su forma protegida, y R43 puede ser hidrógeno. La ciclización para formar un compuesto de la fórmula (XII) luego puede efectuarse al calentar por ejemplo bajo reflujo en un solvente orgánico, en particular un solvente aprótico de alto punto de ebullición tal como xileno o tolueno. En forma alterna, R43 puede ser nitro y R42 puede ser un grupo de la fórmula -CH2C(0)R2' en donde R2' es como se definió anteriormente con relación a la fórmula (VII) . Estos compuestos ciclizarán en la presencia de un catalizador tal como paladio en carbono en la presencia de hidrógeno. La reacción puede efectuarse a temperaturas moderadas, por ejemplo de 0 a 80 °C, convenientemente a temperatura ambiente aproximadamente . De esta manera, ejemplos de compuestos de la fórmula (XII) incluyen compuestos de la fórmula (XIII) y (XIV) .
R7 (XIII) R7 (XIV) en donde R27 R3, R5, 6 , 1 Y R4° son como se definió anteriormente . Los compuestos de la fórmula (XIII) en donde R3 es hidrógeno, pueden prepararse por ejemplo al reaccionar un compuesto de la fórmula (XV) con un compuesto de la fórmula (XVI ) N3CH2R2 ' (XVI) en donde R5, R6, R7 y R2' son como se definió previamente. La reacción puede efectuarse en un solvente orgánico tal como etanol a bajas temperaturas desde -20 a 0°C, convenientemente a 0°C aproximados. La reacción se efectúa convenientemente en la presencia de una base tal como un alcóxido, en particular un etóxido, por ejemplo etóxido de potasio. Cuando es necesario o conveniente, un grupo R3 que es diferente a hidrógeno, puede agregarse utilizando métodos convencionales, posteriormente en el proceso.
Compuestos de la fórmula (XVI) se preparan convenientemente al reaccionar un compuesto de la fórmula (XVII) R47CH2R2' (XVII) en donde R2' es como se definió anteriormente y R47 es un grupo saliente tal como haluro y en particular bromuro, con una sal de azida tal como una sal de azida de metal alcalino, en particular azida de sodio. Compuestos de la fórmula (XIV) pueden prepararse al reaccionar un compuesto de la fórmula (XVIII) R7 (XVIII) en donde R5, R6, R7' R3 y R40 son como se definió anteriormente, con un compuesto de la fórmula (XIX) (XIX) en donde R2' es como se definió anteriormente y R48 es un grupo saliente tal como alcoxi. Ejemplos de compuestos de la fórmula (XIX) son oxalatos tales como dietiloxalato . La reacción se efectúa convenientemente en la presencia de una base tal como hidruro de sodio, en un solvente orgánico tal como THF. Temperaturas moderadas de 0 a 40°C y temperatura ambiente se emplean convenientemente . Compuestos de la fórmula (VII) en donde Y es azufre pueden prepararse convenientemente utilizando métodos alternos. Por ejemplo, pueden prepararse al reaccionar un compuesto de la fórmula (XX) SCSOR49 (XX) en donde R1, R3, R5, R6, R7 y R2' son como se definió anteriormente y R49 es un grupo alquilo tal como etilo, con una amina tal como etilendiamina. La reacción se efectúa convenientemente en un solvente tal como tetrahidrofurano a temperaturas moderadas por ejemplo de 0 a 50 °C, convenientemente a temperatura ambiente .
Compuestos de la fórmula (XX) se derivan convenientemente de un compuesto de la fórmula (XXI) .
(XXI) en donde R1, R3, R5, R6, R7 y R2' son como se definió anteriormente, por una secuencia de reacciones que involucran por ejemplo la conversión del grupo nitro al grupo amino, luego a un grupo diazonio y subsecuentemente a un grupo xantilo. Condiciones de reacción convenientes para estas etapas serán aparentes de la literatura y se ilustran a continuación . Compuestos de la fórmula (XXI) se forman convenientemente por reacción de un compuesto de la fórmula (XXII) .
R7 (XXII) con un compuesto de la fórmula (X) como se definió anteriormente utilizando condiciones similares a aquellas descritas para la reacción del compuesto (IX) con el compuesto (X) . Compuestos de la fórmula (X), (XV), (XVI), (XVII), (XVIII), (XIX) y (XXII) son compuestos ya conocidos o pueden prepararse a partir de compuestos conocidos por métodos convencionales . De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un compuesto de la fórmula (I) como se define aquí, o su sal farmacéuticamente aceptable o un éster hidrolizable in vivo, para utilizar en un método de tratamiento del cuerpo humano o de animal por terapia. En particular, los compuestos se emplean en métodos de tratamiento de enfermedad inflamatoria. De acuerdo con un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un método para antagonizar un efecto mediado por MC-I en un animal de sangre caliente tal como un humano, que tiene necesidad de ese tratamiento, que comprende administrar al animal una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula (I) o su sal farmacéuticamente aceptable o su éster hidrolizable ín vivo . La invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula (I) como se define aquí, o su sal farmacéuticamente aceptable o éster hidrolizable in vivo en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. Las composiciones de la invención pueden estar en una forma conveniente para uso oral (por ejemplo como tabletas, pastillas, cápsulas duras o suaves, suspensiones acuosas o aceitosas, emulsiones, polvos o granulos dispersables, jarabes o elíxires), para uso tópico (por ejemplo como cremas, ungüentos, geles o soluciones o suspensiones acuosas o aceitosas) , para administración por inhalación (por ejemplo como un polvo finamente dividido o como un aerosol líquido) , para administración por insuflación (por ejemplo como un polvo finamente dividido) o para administración parenteral (por ejemplo como una solución acuosa o aceitosa estéril para dosificación intravenosa sub-cutánea intramuscular o intramuscular, o como un supositorio para dosificación rectal) . Las composiciones de la invención pueden obtenerse por procedimientos convencionales utilizando excipientes farmacéuticos convencionales, bien conocidos en la especialidad. De esta manera, composiciones pretendidas para uso oral pueden contener por ejemplo uno o más agentes colorantes, endulzantes, saborizantes y/o conservadores. Excipientes aceptables farmacéuticamente convenientes para una formulación de tableta incluyen por ejemplo diluyentes inertes tales como lactosa, carbonato de sodio, fosfato de calcio o carbonato de calcio, agentes de granulación y desintegrantes tales como almidón de maíz o ácido algénico; agentes aglutinantes tales como almidón; agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco; agentes conservadores tales como etil o propil p_-hidroxibenzoato, y agentes antioxidantes tales como ácido ascórbico. Formulaciones en tabletas pueden estar revestidas o sin revestir ya sea para modificar su desintegración y la absorción subsecuente del ingrediente activo dentro del tracto gastrointestinal, o para mejorar su estabilidad y/o apariencia en cualquier caso utilizando agentes y procedimientos de revestimiento convencionales bien conocidos en la especialidad. Composiciones para uso oral pueden estar en la forma de cápsulas de gelatina dura, en donde el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina suave en donde el ingrediente activo se mezcla con agua o un aceite tal como aceite de cacahuate, parafina líquida o aceite de oliva. Suspensiones acuosas generalmente contienen el ingrediente activo en forma finamente pulverulenta en conjunto con uno o más agentes de suspensión, tales como carboximetil celulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto y goma acacia; agentes dispersantes o humectantes tales como lecitina o productos de condensación de un alquilen óxido con ácidos grasos (por ejemplo polioxietilen estereato) o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo heptadecaetilenoxicetanol, o productos de condensación de óxido de etileno, con esteres parciales derivados de ácidos grasos y un exitol tal como polioxietilensorbitolmonoleato o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo heptadecaetilenoxicetanol, o productos de condensación de óxido de etileno con esteres parciales derivados de ácidos grasos y un exitol, tal como polioxietilensorbitol monooleato o productos de condensación de óxido de etileno con esteres parciales derivados de ácidos grasos y exitol anhídridos, por ejemplo polietilensorbitan monooleato. Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservadores (tales como etil o propil p_-hidroxibenzoato, antioxidantes (tales como ácido ascórbico) , agentes colorantes, agentes saborizantes y/o agentes endulzantes (tales como sacarosa, sacarina o aspartame) . Suspensiones aceitosas pueden formularse al suspender el ingrediente activo en un aceite vegetal (tal como aceite de cacahuate, aceite de oliva, aceite de ajonjolí o aceite de coco) o en un aceite mineral (tal como parafina líquida) . Las suspensiones aceitosas también pueden contener un agente espesante tal como cera de abejas, parafina dura, o alcohol cetílico. Agentes endulzantes tales como aquellos establecidos anteriormente, y agentes saborizantes pueden agregarse para proporcionar una preparación oral aceptable al paladar. Estas composiciones pueden preservarse por la adición de un antioxidante tal como ácido ascórbico. Polvos y granulos dispersables adecuados para la preparación de una suspensión acuosa por la adición de agua, generalmente contienen el ingrediente activo junto con un agente dispersante o humectante, agente de suspensión y uno o más conservadores. Agentes de dispersión o humectación convenientes y agentes de suspensión se ejemplifican por aquellos ya mencionados anteriormente. Excipientes adicionales tales como agentes endulzantes, saborizantes y colorantes también pueden estar presentes. Las composiciones farmacéuticas de la invención también pueden estar en la forma de emulsiones de aceite-enagua. La fase aceitosa puede ser un agente vegetal, tal como aceite de oliva o aceite de cacahuate, o un aceite mineral, tal como por ejemplo parafina líquida o una mezcla de cualquiera de estos. Agentes emulsificantes convenientes pueden por ejemplo ser gomas de origen natural, tales como goma acacia o goma tragacanto, fosfatidas de origen natural tales como frijol soya, lecitina, un éster o esteres parciales derivados de ácidos grasos y exitol anhídridos (por ejemplo monooleato de sorbitán) y productos de condensación de los esteres parciales con óxido de etileno tales como polioxietilensorbitán monooleato. Las emulsiones también pueden contener agentes endulzantes, saborizantes y conservadores . Jarabes y elíxires pueden formularse con agentes endulzantes tales como glicerol, propilen glicol, sorbitol, aspartame o sacarosa, y también pueden contener un desemulsionante, conservador, agentes saborizante y/o colorante . Las composiciones farmacéuticas también pueden estar en la forma de una suspensión acuosa o aceitosa inyectable estéril, que puede formularse de acuerdo con procedimientos conocidos utilizando uno o más de los agentes de dispersión o humectación apropiados y agentes de suspensión, que se han mencionado previamente. Una preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente solvente parenteralmente aceptable en lo tóxico, por ejemplo una solución en 1 , 3 -butandiol . Pueden prepararse formulaciones de supositorios al mezclar el ingrediente activo con un excipiente no irritante conveniente que es sólido a temperaturas ordinarias pero líquido a la temperatura rectal y por lo tanto se fundirá en . el resto para liberar la droga. Excipientes convenientes incluyen por ejemplo manteca de cacao y polietilenglicoles. Formulaciones tópicas tales como cremas, ungüentos, geles y soluciones o suspensiones acuosas o aceitosas, en general pueden obtenerse al formular un ingrediente activo con un vehículo o diluyente tópicamente aceptable convencional, utilizando procedimientos convencionales bien conocidos en la especialidad. Composiciones para administración por insuflación pueden estar en la forma de un polvo finamente dividido que contiene partículas de diámetro promedio por ejemplo de 30 µ o mucho menos, el polvo mismo comprende ya sea el ingrediente activo solo o diluido con uno o más portadores fisiológicamente aceptables tales como lactosas. El polvo para insuflación luego se retiene convenientemente en una cápsula que contiene por ejemplo 1 a 50 mg de ingrediente activo, para utilizar con un dispositivo turbo inhalador tal como se emplea para insuflación del agente conocido cromoglicato de sodio. Composiciones para administración por inhalación pueden estar en la forma de un aerosol a presión convencional, dispuesto para suministrar el ingrediente activo ya sea como un aerosol que contiene gotas de líquido o sólidos finamente divididos. Propulsores de aerosol convencionales tales como hidrocarburos fluorados volátiles o hidrocarburos que pueden emplearse en el dispositivo aerosol, se disponen convenientemente para surtir una cantidad dosificada de ingrediente activo. Para mayor información respecto a formulación, se refiere a lector al capítulo 25.2 del volumen 5 de Comprehensive Medicinal Chemistry (Química Medicinal Completa) Corwin Hansch; Presidente de la Junta Editorial (Pergammon Press 1990) . La cantidad de ingrediente activo que se combina con uno o más excipientes para producir una sola forma de dosificación, necesariamente variará dependiendo del huésped tratado y la ruta de administración particular. Por ejemplo, una formulación pretendida para administración oral a humanos, generalmente contendrá por ejemplo de 0.5 mg a 2 g de ingrediente activo mezclado con una cantidad apropiada y conveniente de excipientes que pueden variar de aproximadamente 5 a aproximadamente 98% en peso en composición total. Formas unitarias de dosificación generalmente contienen aproximadamente 1 mg a aproximadamente 500 mg de ingrediente activo. Para mayor información respecto a Rutas de Administración y Regímenes de Dosificación, se refiere al lector al capítulo 25.3 en el volumen 5 de Química Medicinal Completa (Corwin Hansh; Presidente de la Junta Editorial) Pergamon Press 1990.
El tamaño de la dosis para propósitos terapéuticos o profilácticos de un compuesto de la formula (I) naturalmente variará de acuerdo con la naturaleza y severidad de las condiciones, la edad y sexo del animal o paciente y la ruta de administración, de acuerdo con principios de medicina bien conocidos. Como se mencionó anteriormente, compuestos de la formula (I) son útiles para tratar enfermedades o condiciones médicas que se deben solo o en parte a los efectos de farnesilación de ratas. Al utilizar un compuesto de la formula (I) para propósitos terapéuticos o profilácticos, generalmente se administrará de manera tal que una dosis diaria en el rango, por ejemplo 0.5 mg a 75 mg por kg de peso corporal se recibe, administrada si se requiere en dosis divididas. En general, se administrarán dosis menores cuando se emplea una ruta parenteral. De esta manera, por ejemplo para administración intravenosa, una dosis en el rango, por ejemplo 0.5 mg a 30 mg por kg de peso corporal, se utilizará en general. Similarmente, para administración por inhalación, una dosis en el rango, por ejemplo 0.5 a 25 mg por kg de peso corporal, se utilizará. La administración oral sin embargo se prefiere . Un aspecto adicional de la invención comprende un compuesto de la fórmula (I) como se definió anteriormente o su sal farmacéuticamente aceptable o su éster hidrolizable in vivo, para utilizar en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria. La invención además se ilustra pero no limita por los siguientes ejemplos en donde los siguientes procedimientos generales se utilizaron a menos de que de otra forma se establezca. Preparación 1 Etil _V- ( 3 , 4 -diclorobencil) -4 -nitroindol -2 -carboxilato Etil 4-nitroindol-2-carboxilato (26g) [preparado de acuerdo con S.M. Parmerter y colaboradores , J. Amer . Chem .
Soc . , 1958, 80, 4621], cloruro de 3 , 4-diclorobencilo (16 ml) , carbonato de potasio (17 g) e yoduro de potasio (2 g) en DMF (250 ml) se agitaron a 60°C por dos horas. La reacción se concentra ín vacuo y el residuo se divide entre agua y diclorometano. Iso-hexano se agrega a los extractos orgánicos combinados resultando en cristalización del producto como agujas amarillas (39 g. 89%) RMN d (CD3SOCD3) 1.30 (t, 3H) , 4.32 (q, 2H) , 5.93 (s, 2H) , 6.88 (dd, 1H) , 7.18 (d, 1H) . 7.52 (d, 1H) , 7.56 (dd, 1H) , 7.78 (s, 1H) , 8.17 (m, 2H) ; M/z (+ )395 (MH+) , 393. Preparación 2 Etil N- (3 , 4 -diclorobencil) -4 -aminoindol- 2 -carboxilato Una solución de N- (3 , 4-diclorobenzil) -4-nitroindol- 2-carboxilato y (2.41 g) en tetrahidrofurano (100 ml) se agita en la presencia de tricloruro de titanio (solución acuosa al 15%, 50 ml) a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se trata con solución de hidróxido de sodio al 40% y extrae con 5% de metano en diclorometano. Extractos orgánicos combinados se secaron (MgS04) y concentraron al vacío para dar el producto como un sólido café (1.98 g, 89%); RMN d (CD3SOCD3) 1.3 (t, 3H) , 4.2 (q, 2H) , 5.7 (s, 4H) , 6.2 (d, 1H) , 6.6 (d, 1H) , 7.0 (m, 2H) , 7.25 (m, 1H) , 7.5 (d, 1H) , 7.6 (m, 1H) : M/z (+) 363.3 ( H+) . Preparación 3 Tetrafluoroborato de If- (3,4-diclorobencil) -2-etoxicarbonilindol -4 -diazonio . Etil N- ( 3 , 4 -diclorobenz il ) - 4 - aminoindol - 2 -carboxilato (1.98 g) se agita en agua (38 ml) y HCl (2 M, 15 ml) a 0°C y una solución de nitrito de sodio (940 mg) en agua (20 ml) se agrega por gotas durante 10 minutos. Esto fue seguido por adición de HCl concentrado (15 ml) . La reacción se agita por una hora a 0°C y se agrega una solución saturada de tetrafluoroborato de sodio (12 ml) . El precipitado resultante se recolecta por filtración, lava con agua y seca in vacuo sobre pentóxido de fósforo para dar el producto como un sólido café claro (2.51g, 100%); RMN d (CD3SOCD3) 1.3 (t, 3H) , 4.4 (q, 2H) , 6.0 (s, 2H) , 6.95 (m, 1H) , 7.3 (m, 1H) , 7.5 (d, 1H) , 7.8 (t, 1H) , 8.0 (m, 1H) , 8.7 (m, 2H) ; M/z ( + ) 348-6 [ -N3.BF4+] . Preparación 4 Etil S- . N- (3,4-diclorobenzil-2 - etoxicarbonil indol -4 -il"I ditiocarbamato Tetrafluoroborato de N- (3 , 4-diclorobencil) -2- etoxicarbonilindol-4-diazonio (2.5g) Se agrega en porciones durante 10 minutos a una solución agitada de etilxantato de potasio (0.96 g) en acetona (60 ml) bajo argón a 0°C. La mezcla de reacción se deja que caliente a temperatura ambiente, vacía en 50% de salmuera (200 ml) y extrae con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO , concentraron al vacío y el residuo se purifica por cromatografía en columna utilizando iso-hexano : % de etil acetato a 15% de etil acetato como eluyente para dar el producto como un aceite amarillo pálido (1 g. 39%) ; RMN d (CD3SOCD3) 1.1 (t. 3H) . 1.3 (t. 3H) , 4.3 (q, 2H) , 4.55 (q, 2H) , 5.9 (s, 2H) , 6.9 (m, 1H) , 7.4 (m, 4H) , 7.5 (m, 1H) , 7.8 (d, 1H) ; M/z ( + ) 468.3 ( í+) . Preparación 5 Etil N- (3.4-diclorobenzil) -4-mercaptoindol- 2-carboxilato Etilen diamina (0.12 ml) se agrega a una solución de etil S- [N- (3 , 4-diclorobenzil-2- etoxicarbonilindol-4-il] ditiocarbamato (730 mg) en tetrahidrofurano (25 ml) y la agitación se continua por 16 horas. La mezcla de reacción se concentra al vacío y el residuo se divide entre agua y diclorometano. Extractos orgánicos combinados se secaron (MgS04) y concentraron al vacío y el residuo se purifica por cromatografía en columna utilizando iso-hexano: 10% de etil acetato a 20% de etil acetato como eluyente para dar el producto como un aceite amarillo pálido (400 mg, 67%) ; RMN d (CD3SOCD3) 1.25 (t, 3H) , 4.3 (q, 2H) , 5.8 (s,2H), 6.85 (m, 1H) , 7.25 (s, 1H) , 7.3 (m, 2H) , 7.4 (m, 1H) , 7.5 (d, 1H) , 7.6 (d, 1H) ; M/z ( +) 379 (MH) . Preparación 6 2-Benziloxi-3-metoxibenzaldehido Bromuro de benzilo (8.6 ml) se agrega a una solución agitada de 3 -metoxisalicilaldehído (10 g) , carbonato de potasio (14.76 g) e yoduro de potasio (0.12g) en DMF (120 ml) bajo una atmósfera de argón. La reacción se calienta a 70 °C por 16 horas. Agua (200 ml) se agrega provocando la precipitación de un aceite café que cristaliza al enfriar. El sólido se filtra, lava con agua, disuelve en diclorometano y seca (MgS04) . El sólido se retira al vacío para dar un aceite que cristaliza ante trituración con íso-hexano para dar el producto como un sólido blancuzco (12.85 g, 81%); RMN d (CD3SOCD3) 3.91 (s,3H), 5.15 (s, 2H) , 7.14 - 7.22 (m, 2H) , 7.29 - 7.42 (m, 6H) , 10.10 (t, 1H) ; M/z (+ ) 243 (MH+) . Preparación 7 Metil azidoacetato. Metil bromoacetato (62 ml) se agrega a una suspensión de azida de sodio (44 g) en DMF (500 ml) a temperatura ambiente y la reacción se agita por 16 horas. La reacción se vacía sobre hielo-agua (1000 g) y extrae con éter. Extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y salmuera, secaron (MgS04) y concentraron para dar el producto como un aceite incoloro que se utiliza sin mayor purificación (64.2 g, 82%); RMN d (CDCl3) 3.80 (3H, s) , 3.90 (2H, s) . Preparación 7A Metil azidoacetato (solución de tolueno) A una solución agitada de metil bromoacetato (50 ml) y sulfato de hidrógeno tetra-n-butilamonio (3.4 g) en tolueno (200 ml) a 20-25°C, se agrega por gotas a una solución de azida de sodio (36 g) y carbonato de sodio (2.0 g) en agua (150 ml) durante 30 minutos. La mezcla se agita por una hora más, la capa orgánica se separa y seca (MgS04) para dar el producto como una solución de tolueno aproximadamente 2M (250 ml) . El producto se utiliza sin mayor caracterización.
Preparación 8 Metil -4 -benciloxi- 5 -metoxiindol -2 -carboxilato Una solución de 2-bencil-3-metoxibenzaldehído (6 g) y metilazidoacetato (4.27 g) en metanol (45 ml) se agrega por gotas a una solución agitada de metóxido de sodio (2.0 g) en metanol (60 ml) bajo argón a -40°C. La reacción luego se agita y deja que caliente a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se vacía en agua-hielo (100 ml) y extrae con dietil éter. Extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, secaron (MgS04) y concentraron cuidadosamente in vacuo . El residuo se disuelve en xileno (15 ml) y agrega por gotas a un matraz agitado de xileno (25 ml) a 16°C. La reacción se agita por una hora, luego concentra in vacuo y el residuo se purifica por cromatografía en columna utilizando 35% de dietiléter: iso-hexano como eluyente para dar el producto como un sólido amarillo (1.39 g, 42%); RMN d (CD3SOCD3) 3.79 (s,3H),3.82 (s, 3H) , 5.18 (s, 2H) , 7.10 (m,2H), 7.30 - 7.40 (m, 6H) , 11.78 (brs, 1H) ; M/z { + ) 312 (MH+) . Preparación 9 Metil-2- (benciloxifenil) -1-azidoacrilato . A una solución comercial de metóxido de sodio 25% p/p en metanol (500 ml) se agrega metanol (1 litro) y la mezcla se enfría a -20°C con agitación. Una solución de 2-benciloxibenzaldehído (125 g) y metilazidoacetato (253 g) en tolueno (1 litro), se agrega por gotas de manera tal que la temperatura de reacción no excede a 0°C. La mezclas se agita por 3 horas más a 0°C y los cristales amarillo pálido se separan por filtración y lavan sucesivamente con metanol frío (500 ml) y ácido acético acuoso ÍN (500 ml) para dar el producto (150 g, 82%); RMN d (CDCl3) 3.88 (s, 3H) , 5.15 (s. 2H) . 6.92 (d, 1H) , 7.00 (dd, 1H) , 7.3 - 7.4 (m. 6H) , 7.50 (s, 1H) , 8.20 (dd, 1H) . Preparación 10 Metil-4 -benciloxiindol-2-carboxilato Una solución de metil-2 (2-benciloxifenil) -1-azidoacrilato (50 g) en o-xileno (500 ml) se agrega por gotas a o-xileno al reflujo (200 ml) con agitación, se desprende nitrógeno durante 30 minutos. La solución amarilla pálida se deja que enfríe y los cristales resultantes se filtraron y lavaron con tolueno (200 ml) y luego hexano (200 ml) para dar el producto como agujas blancas (39 g, 86%) . RMN d (CD3SOCD3) 3.83 (s,3H). 5.22 (s, 2H) , 6.61 (d. 1H) , 7.03 (d, 1H) , 7.1 -7.2 (m,2H), 7.3 - 7.5 (m, 5H) , 11.9 (brs, 1H) . Preparación 11 Metil-4 -hidroxi-5 -metoxiindol -2 -carboxilato Paladio en carbón al 5% (0.3 g) y metil -4-benciloxi-5-metoxiindol-2-carboxilato (2.0 g) en acetato de etilo (30 ml) se agitaron vigorosamente bajo una atmósfera de hidrógeno por 16 horas. La reacción se filtró a través de celite y concentró al vacío para dar el producto como un sólido cremoso (1.29 g, 91 %); RMN d (CD3SOCD3) 3.74 (s,3H).3.82 (s. 3H) , 6.80 (d, 1H) , 7.00 (d, 1H) , 7.16 (s, 1H) , 9.10 (s, 1H),11.58 (brs, 1H) ; M/z ( +) 222 (MH+) . Preparación 12 Metil -4 -acetoxiindol-2 -carboxilato Una solución de metil-4-benciloxiindol-2-carboxilato (48 g) en metilacetato (1 litro) a 50-60°C, se hidrogena sobre catalizador Pd-C al 5% (4.0 g) a una atmósfera de presión por 6 horas, hasta que 3.7 litros de hidrógeno se absorben. El catalizador se separa por filtración y lava con etilacetato caliente (100 ml) . A los filtrados combinados se agrega anhídrido acético (40 ml) y 4-dimetilaminopiridina (1.0 g) , y la solución se agita por una hora a 25°C. Etanol (15 ml) se agrega y la solución se reduce a medio volumen por evaporación al vacío, luego hexano (1 litro) se agrega para provocar cristalización del producto como agujas blancas (37 g, 93%). RMN d (CD3SOCD3) 2.34 (s, 3H) , 3.85 (s. 3H) , 6.80 (d, 1H) , 7.06 (s, 1H) . 7.23 (t, 1H) , 7.29 - 7.35 (m, 1H) , 12.1 (bs, 1H) ; M/z (-) 232 ( -H+) .
Preparación 13 Metil -4 -hidroxiiindol -2 -carboxilato Tribromuro de boro (73.1 ml , solución 1.0 M en DCM) se agrega por gotas a una solución de metil-4-metoxiindol-2-carboxilato (5 g) en DCM (200 ml ) se enfriaron a -78°C bajo argón. La reacción se deja que caliente a temperatura ambiente luego divide entre diclorometano y solución de hidrógeno carbonato de sodio acuosa saturada. Extractos orgánicos combinados se secaron (MgS04) y concentraron al vacío y el residuo se purifica por cromatografía en columna utilizando iso-hexano- 50% de acetato de etilo como eluyente para dar el producto final como un sólido amarillo (2.98 g, 64%); RMN d (CD3SOCD3) 3.82 (s, 3H) , 6.36 (d, 1H) . 6.85 (d, 1H) , 7.02 (t, 1H) , 7.17 (d, 1H) , 9.66 (s, 1H) , 11.72 (bs, 1H) ; M/z { + ) 192 ( H+) .
Preparación 14 Metil -4 -acetoxi- 5 -metoxiindol-2 -carboxilato Una solución agitada de metil-4-hidroxi-5-metoxiindol-2-carboxilato (0.51 g) y DMAP (10 mg) en anhídrido acético (5 ml) , se calentó a 80°C por 4 horas. La reacción se concentró al vacío y el residuo se disuelve en diclorometano y lava con ácido clorhídrico (2.0 M) , solución de hidrógeno carbonato de sodio acuosa saturada, agua, solución de cloruro de sodio saturada acuosa y seca (MgS04) .
La solución se concentra al vacío y el residuo se purifica por cromatografía en columna utilizando dietiléter: isohexano al 50% como eluyente para dar el producto como un sólido blanco (0.58 g, 75%); RMN d (CD3SOCD3) 2.34 (s, 3H) , 3.75 (s, 3H) , 3.85 (s, 3H) , 6.99 (d, 1H) , 7.19 (d, 1H) , 7.29 (d, 1H) , 11.93 (brs, 1H) : M/z ( +) 264 ( _+) . Preparación 15 El procedimiento descrito en la preparación 14 anterior se repite utilizando el hidroxiindol apropiado. De esta manera se obtiene el compuesto descrito a continuación. Metil 4 -acetoxiindol-2 -carboxilato Rendimiento 72% ; RMN d (CD3,SOCD3) 2.34 (s, 3H) , 3.85 (s, 3H) , 6.80 (d, 1H) , 7.06 (s, 1H) . 7.23 (t, 1H) , 7.29 - 7.35 (m, 1H) , 12.1 (bs, 1H) ; M/z (-) 232 (M-H+) . Preparación 16 Metil 4-acetoxi--.- (3,4-diclorobenzil) - 5 -metoxiindol-2 -carboxilato Bromuro de 3 , 4-Diclorobenzil (1.02 g) se agrega a una solución agitada de metil 4 -acetoxi-5-metoxiindol-2-carboxilato (0.8 g) y carbonato de potasio (0.97 g) en acetonitrilo (30 ml) bajo una atmósfera de argón. La reacción se calienta a 80°C por 16 horas, luego concentra al vacío y el residuo se divide entre acetato de etilo y agua. Extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio acuosa saturada y seca (MgS04) . El solvente se retira al vacío para dar el producto como un sólido crema (1.05 g, 82%); RMN d (CD3SOCD3) 2.36 (s,3H),3.78 (s, 3H) , 3.80 (s,3H), 5.80 (s, 2H) , 6.92 (dd, 1H) , 7.21 (s, 1H) , 7.27 (d, 1H) , 7.36 (d, 1H) , 7.48 (d, 1H) , 7.52 (d, 1H) . Preparación 17 El procedimiento descrito en la preparación 14 anterior se repitió utilizando los apropiados indol y haluro de bencilo. De esta manera se obtuvieron los compuestos descritos a continuación. Metil 4 -acetoxi -N- - (3,4- -diclorobencil) indol -2 -carboxilato Rendimiento 81%; RMN d (CD3SOCD3) 2.4 (s,3H),3.8 (s,3H),5.85 (s, 2H) , 6.9 (m, 2H) , 7.3 (m, 3H) , 7.5 (m, 2H) ; M/z 7 ) 392.2 (MH+) . Metil 4-acetoxi -N- (3 , 4-difluorobencil) indol -2 -carboxilato rendimiento 66%; RMN d (CD3SOCD3) 2.49 (s,3H), 3.96 (s,3H), 5.93 (s,2H), 6.93 - 7.00 (m, 1H) , 7.03 (d, 1H) , 7.23 - 7.33 (m, 1H) , 7.37 - 7.49 (m, 3H) 7.60 (d, 1H) ; M/z (+ ) 360 (MH+) .
Metil 4 -acetoxi-N-benzi1indol- 2 -carboxilato rendimiento 78%: RMN d (CD3SOCD3) 2.38 (s,3H),3.81 (s,3H), 5.85 (s, 2H) , 6.89 (d, 1H),7.05 (d, 2H) , 7.17 - 7.34 (m, SH) , 7.48 (d, 1H) . Metil 4 -acetoxi - - (3 -clorobencil) indol-2 -carboxilato rendimiento 88%: RMN d (CD3SOCD3) 2.28 (s, 3H),3.74 (s, 3H) , 5.77 (s, 2H) , 6.80 - 6.90 (m, 2H) , 7.07 (s, 1H) , 7.16 - 7.27 (m, 4H) , 7.38 (d, 1H) ; M/z (+) 358 (MH+) .
Metil 4 -acetoxi -N- (4-clorobencil) indol-2 -carboxilato rendimiento 27%; RMN d (CD3SOCD3) 2.37 (s, 3H) , 3.81 (s, 3H) , 5.82 (s, 2H) , 6.90 (d, 1H) , 7.08 (d, 2H) , 7.31 (dd, 1H) , 7.49 (d, 1H) ; M/z 7 ) 358 (MH+) .
Preparación 18 Metil N- (3 , 4 -diclorobencil) -4 -hidroxi - 5 -metoxiindol-2 - carboxilato Metóxido de sodio (0.27 g) se agrega a una solución agitada de met il -4 -acetoxi - N- ( 3 , 4 -diclorobencil )- 5 -metoxiindol-2-carboxilato (1.05 g) en metanol (15 ml) bajo una atmósfera de argón. La reacción se agita a temperatura ambiente por dos horas, luego concentra al vacío y el residuo se divide entre etilacetato y agua. Extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, solución de cloruro de sodio acuosa saturada y secan (MgS04) . El solvente se retira al vacío y el residuo se purifica por cromatografía en columna utilizando 45% de dietil éter: iso-hexano como eluyente para dar el producto como un sólido blanco (0.83 g, 94%); RMN d (CD3S0CD3) 3.75 (s,3H), 3.80 (s, 3H),5.72 (s, 2H) , 6.87 - 6.94 (m, 2H) , 7.09 (d, 1H) , 7.30 (s, 1H) .7.40 (s, 1H) , 7.50 (d, 1H) , 9.38 (s, 1H) ; M/z ( +) 380 ( _+) .
Preparación 19 El procedimiento descrito en la preparación 18 anterior se repite utilizando el acetoxiindol apropiado. De esta manera se obtienen los compuestos descritos a continuación. Metil -N- (3 , 4 -diclorobencil) -4-hidroxiindol-2-carboxilato Rendimiento 97% RMN d (CD3SOCD3) 3.8 (s, 3H),5.65 (s, 2H) , 6.5 (d, 1H) , 6.9 (m.2H), 7.1 (t, 1H) , 7.3 (m. 1H) . 7.45 (s, 1H) , 7.5 (d, 1H) , 9.9 (s, 1H) ; M/z ( + ) 350 (MH+) .
Metil-N- (3.4-diflorobencil) -4-hidroxiindol-2-carboxilato Rendimiento 77%; RMN d (CD3SOCD3) 3.80 (s, 3H) . 5.84 (s. 2H) , 6.45 (d. 1H) , 6.75 - 6.81 (m, 1H) , 6.95 (d, 1H) , 7.05 - 7.16 (m, 2H) . 7.24 - 7.35 (m. 1H) . 7.41 (s. 1H) . 9.90 (S. 1H) ; M/z ( +) 318 (MH+). Metil -N-bencil -4 -hidroxiindol -2 -carboxilato Rendimiento 90%; RMN d (CD3SOCD3) 3.80 (s, 3H) , 5.77 (s, 2H) , 6.43 (d, 1H) , 6.90 - 7.28 (m, 7H) , 7.40 (s, 1H) . 9.88 (s, 1H) ; M/z ( + ) 282 ( í+) . Metil-N- (3 -clorobencil) -4 -hidroxiindol-2 -carboxilato Rendimiento 94%; RMN d (CD3SOCD3) 3.80 (s, 3H) , 5.78 (s. 2H) , 6.46 (d, 1H) , 6.90 - 6.97 (m. 2H) , 7.04 - 7.14 (m, 2H) , 7.21 - 7.31 (m, 2H) , 7.42 (s, 1 H) , 9.90 (s, 1 H) ; M/z { + ) 316 ( _+) . Metil-_V- (4 -clorobencil) -4-hidroxiindol-2-carboxilato Rendimiento 77%; NMR d (CD3SOCD3) 3.80 (s, 3H) , 5.75 (s, 2H) , 6.45 (d, 1H) , 6.94 (d, 1H) , 7.00 (d, 2H) , 7.10 (t, 1H) , 7.30 (d, 2H) , 7.40 (s, 1 H) , 9.89 (s, 1 H) ; M/z ( + ) 316 ( _+) . E emplo 1 Etil-N- (3.4 -diclorobencil) -4- (3 -hidroxipropiltio) indol -2 -carboxilato (etil éster del compuesto 19) Hidruro de sodio (20 mg) se agrega a una solución agitada de etil N- (3 , 4-diclorobencil) -4-mercaptoindol-2-carboxilato (170 mg) en DMF (7.5 ml) . Después de una hora, bromuro de 3-hidroxiprop-l-ilo (89 mg) se agrega y la agitación continúa por 16 horas. La mezcla de reacción se divide entre agua y acetato de etilo y los extractos orgánicos combinados se secaron (MgS04) concentraron ai vacío y el residuo se purificó por cromatografía en columna utilizando diclorometano como eluyente para dar el producto como una goma amarilla (30 mg, 14%); M/Z (+ ) 480.1 (M H+) . Eiemplo 2 Etil- - (3 , 4 -diclorobencil) -4- (3-hidroxipropilsulfonil (indol-2 -carboxilato) etiléster del compuesto 20. Et i l -Jí- ( 3 , 4 - diclorobenc i l ) - 4 - ( 3 -hidroxipropiltio (indol-2-carboxilato) (30 mg) se suspende en ácido acético (1 ml) y agita en la presencia de peróxido de hidrógeno (30%, 0.25 ml) por 16 horas. La mezcla de reacción se diluye con agua (20 ml) y extrae con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgS04) y concentraron al vacío para dar el producto deseado como una goma incolora (30 mg, 93%): M/z (+) 512.4 (M H+) . Eiemplo 3 Metil-_7-bencil-4- (2-hidroxietoxi) indol-2-carboxilato (metiléster del compuesto 1) Carbonato de potasio (0.2 g) se agrega a una solución agitada de metil-i\.-bencil-4-hidroxiindol-2-carboxilato (0.2 g) y 2-bromoetanol (98 mg) en DMF (15 ml). La reacción luego se agita por 16 horas a 80 °C bajo una atmósfera de argón. La mezcla de reacción se concentra al vacío y el residuo se divide entre etilacetato y agua.
Extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, secaron (MgS04) y concentraron al vacío y el residuo se purificó por cromatografía en columna utilizando 70% de etilacetato: isohexano como eluyente para dar el producto como un sólido cristalino incoloro (64 mg, 27%), RMN d (CD3SOCD3) 3.74 -3.82 (m, SH) . 4.10 (m, 2H) , 4.88 (m, 1H) , 5.80 (s, 2H) , 6.58 (m, 1H) , 6.98 (d, 2H) , 7.09 (m, 1H) , 7.14 - 7.27 (m, 4H) , 7.38 (m, 1H) ; M/z ( +) 326 ( í+) . Ei emplo 4 El procedimiento descrito en el Ejemplo 3 anterior, se repitió utilizando los apropiados hidroxiindol y haluro de alquilo. De esta manera se obtienen los compuestos descritos a continuación. Metil-N-bencil-4- (metoxietoxi) indol -2 -carboxilato (metiléster del compuesto 2) 55% de rendimiento: RMN d (CD3SOCD3) 3.35 (s, 3H) , 3.74 (m, 2H) , 3.79 (s. 3H) . 4.21 (m, 2H) . 5.80 (s, 2H) , 6.60 (d, 1H) , 6.99 (d, 2H) , 7.12 (d, 1 H) , 7.15 - 7.28 (m, 4H) , 7.30 (s, 1 H) ; M/z ( + ) 340 (MH+) .
Metil-N- (3.4-difluorobencil) -4- (metoxicarbonilmetoxi) indol -2- carboxilato (di-metiléster del compuesto 5) . RMN d (CD3SOCD3) 3.72 (s, 3H) , 3.82 (s, 3H) , 4.94 (s, 2H) , 5.80 (s, 2H) , 6.54 (d, 1H) . 6.79 (m, 1H) , 7.10-7.36 (m, 5H) ; M/z ( + ) 390 (Mñ+ ) .
Metil-N- ( 3 - clorobencil ) - 4 -metoxicarbonilme toxiindol - 2 - carboxilato (di-metiléster del compuesto 6) Rendimiento 93%: RMN d (CD3SOCD3) 3.72 (s, 3H) , 3.82 (s. 3H) , 4.93 (s, 2H) . 5.81 (s. 2H) . 6.54 (d, 1H) . 6.93 (m, 1 H) . 7.08 (s. 1H) , 7.14 - 7.37 (m. 6H) : M/z ( + ) 388 (MH+) . Metil -N-bencil-4 - (1 -metoxicarbonil- 1- fenilme oxi) indol -2 -carboxilato (di-metiléster del compuesto 7) .
Rendimiento 42%: RMN d (CD3 S0CD3) 3.66 (s,3H), 3.80 (s, 3H) , 5.81 (s, 2H) , 6.13 (s, 1H) 6.56 (dd, 1H) , 7.00 (d, 2H) , 7.14 - 7.29 (m, 5 H) , 7.37 - 7.50 (m, 4H) , 7.62 (d, 2H) ; M/z ( + ) 430 (M¥ ) .
Metil-N- (4 -clorobencil) -4- (metoxicarbonilmetoxi) indol-2-carboxilato (di-metiléster del compuesto 8) . Rendimiento 93%: RMN d (CD3SOCD3) 3.71 (s,3H), 3.80 (s, 3H) , 4.92 (s, 2H),5.80 (s, 2H) , 6.52 (d, 1H) , 7.01 (d, 2H) , 7.12 - 7.23 (m, 2H) , 7.31 (m, 3 H) ; M/z ( + ) 388 (MH+) .
Metil-N- (3 , 4 -diclorobencil) -4- (2 -metoxicarbonil) etoxi ( indol - 2-carboxilato (metilbiéster del compuesto 12). 89% de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 1.59 (d,3H), 3.68 (s, 3H) , 3.80 (s, 3H) , 5.08 (q, 1H) , 5.79 (s, 2H) , 6.47 (d, 1H) , 6.89 (dd, 1H) , 7.14 - 7.24 (m, 2H) , 7.33 - 7.36 (m, 2H) , 7.51 (d, 1H) ; M/z ( + ) 436 (MH+) . Metil N- (3 , 4-diclorobenzil) -4- [2- (2 -metoxi -4- metoxicarbonil -phenil) etoxi] -indol-2-carboxilato (Di-metil éster del Compuesto 13) 64% de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 3.80 (s,3H) , 3.86 (s, 3H) , 3.91 (s, 3H) , 5.26 (s, 2H) , 5.80 (s, 2H) , 6.68 (d, 1H) , 6.88 (dd, 1H) , 7.16 (d, 1H) , 7.25 (t, 1H) , 7.33 (d, 1H) , 7.40 (s, 1H) , 7.50 (d, 1H) , 7.54 (d, 1H) , 7.59 - 7.69 (m, 2H) ; M/z { + ) 528 (MH+) .
M e t i l N - ( 3 . 4 - d i c l o r o b e n z i l ) - 4 - ( 2 -hidroxietoxi) indol-2 -carboxilato (Metil éster del compuesto 141 63% de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 3.75 - 3.81 (m, 5H) , 4.10 (t, 2H) , 4.88 (t, 1H) , 5.80 (s, 2H) , 6.60 (d, 1H) , 6.88 (dd, 1H) , 7.12 (d, 1H) , 7.22 (t, 1H) , 7.28 (d, 1H) , 7.40 (s, 1H) , 7.50 (d, 1H) ; M/z ( + ) 394 (MH +) . Metil N- (3 , 4-diclorobenzil) -4- (3 -hidroxipropoxi) indol -2 -carboxilato (Metil éster del compuesto 15) 75 % de rendimiento: RMN d (CD3SOCD3) 1.92 (s, 2 H) , 3.60 (dd, 2 H) , 4.17 (t, 2H) , 4.53 (t, 1H) , 5.79 (s, 2H) , 6.61 (d. 1H) , 6.87 (dd, 1H) , 7.12 (d, 1H) , 7.24 (t, 1H) , 7.29 - 7.34 (m, 2 H) , 7.51 (d, 1H) ; M/z ( + ) 408 (MH+) . Metil N- (3 , 4-diclorobenzil) -4- (dimetilaminoetiloxi) -indol- 2 -carboxilato (Metil éster del compuesto 18) RMN d (CD3SOCD3) , 2.26 (s, 6H) , 2.71 (t, 2 H) , 3.80 (s, 3H) , 4.18 (t, 2H) , 5.79 (s, 2H) , 6.61 (d, 1H) , 6.87 (dd, 1 H) , 7.12 (d, 1 H ), 7.21 (d, 1 H) , 7.26 - 7.31 (m, 2 H) , 7.50 (d, 1 H) ; M/z ( + ) 421 (MH+) .
Metil N- (3 , 4-diclorobenzil) -5-metoxi-4- (metoxicarbonil -metoxi) -indol -2 -carboxilato (Di-metil éster del compuesto 9) 87% de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 3.67 (s,3H), 3.79 (S,3H), 3.82 (s, 3H) , 4.83 (s, 2H) , 5.79 (s, 2H) , 6.90 (m, 1H) , 7.16 - 7.30 (m, 2H) , 7.36 (s, 2H) , 7.52 (d, 1 H) ; M/z { + ) 452 (MH+) . Metil N- (3 , 4-diclorobenzil) -5-metoxi-4- (3-morfolinopropoxi) - indol -2 -carboxilato (Metil éster del compuesto 10) 84% de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 1.86 (m, 2H) , 2.24 - 2.44 (m, 6H) , 3.50 - 3.60 (m, 4H) , 3.78 (s, 3H) , 3.80 (s,3H), 4.16 (t, 2H) , 5.78 (s,2H), 6.90 (d, 1H) , 7.16 (d, 1H) , 7.23 (d, 1 H) , 7.34 (m, 2H) , 7.51 (d, 1H) ; M/z ( + ) 507 (MH+) Metil N - ( 3 , 4 - d i c 1 o r ob e n z i 1 ) -- 5 - met o x i - 4 - carbamoi .lmetoxiindol-2 -carboxilato (Metil éster del co puesto 111 74% de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 3.80 (s, 3H) , 3.81 (s, 3H) , 4.52 (s,2H), 5.77 (s, 2H) , 6.89 (dd, 1H) , 7.18 - 7.61 (m, 7H) ; M/z ( + ) 437 (MH +) .
Metil N- (3 , 4-diclorobenzil) -4- (2 , 3-epoxipropiloxi) indol -2- carboxilato (precursor de 16, 17, 22, 23, 24, 25, 26, 27 y 28) 60% de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 2.78 (m, 1H) , 2.87 (m, 1H) , 3.40 (m, 1H) .4.00 (dd, 1H) , 4.46 (dd, 1H) , 5.80 (s, 1H) , 6.65 (d, 1H) , 6.88 (dd, 1H) , 7.16 (d, 1H) , 7.24 (t, 1H) , 7.31 (d, 1H) , 7.36 (s, 1H) , 7.50 (d, 1H) ; M/z { + ) 406 (MH+) .
Ei emplo 5 Ácido N-bencil-4- (3 -morfolinopropoxi) indol -2 -carboxílico (compuesto 3) N-3 -cloropropilmorfolina (128 mg) se agrega a una solución agitada de metil N- (3 , 4 -diclorobenzil) - 4 -hidroxiindol -2 -carboxilato (0.2 g) y carbonato de potasio (0.2 g) en DMF (3 ml) . La reacción luego se agita por 48 horas a 80 °C bajo una atmósfera de argón. Se agrega agua (4 ml) y el producto se extrae con acetato de etilo. Extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y secaron (MgS04) concentraron al vacío y el residuo se purifica por cromatografía en columna utilizando 10% en metanol : diclorometano como eluyente para dar el producto como una goma café clara. El producto se utiliza sin mayor purificación. Solución de hidróxido de sodio acuosa (2.0 M, 4 ml) se agrega a una solución agitada del producto en metanol (2 ml) y THF (4 ml) . La reacción se agita por 16 horas a temperatura ambiente. El solvente se retira al vacío y el residuo se disuelve en agua. Ácido cítrico acuoso (l.O M) se agrega a la solución provocando la precipitación del producto como un sólido blanco. El sólido se filtra y seca al vacío (220 mg, 80%, dos etapas); RMN d (CD3SOCD3) 1.94 (m, 2H) , 2.37 (m, 4H) , 3.55 (m, 6H) , 4.12 (t, 2H) , 5.87 (s, 2H) , 6.55 (d,2H), 6.96 - 7.28 ( , 8H) ; M/z (-) 393 (M-H+) . Eiemplo 6 El procedimiento descrito en el Ejemplo 5 anterior se repite utilizando el haluro de alquilo apropiado. De esta manera se obtiene el compuesto descrito a continuación. Ácido N-bencil-4- (3- (4-metilpiperazinil-l-il) propoxi) indol-2-carboxilico (compuesto 4) Rendimiento 72% (dos etapas); RMN d (CD30D) 2.34 (m, 2H) . 2.92 (s, 3H) , 3.50 (t, 2H) , 3.62 - 3.84 (d, 8H) , 4.41 (t, 2H) , 5.80 (s, 2H) , 6.50 (d, 1H) 6.94 - 7.04 (m, 3H) . 7.09 - 7.26 (m, 4H) , 7.57 (s, 1H) ; M/z { - ) 406 (M-H+) . Eiemplo 7 Ácido N- (3,4-diclorobencil) -4- (2 -hidroxi- 3 -dimetilaminopropoxi) indol-2 -carboxílico (compuesto 16) Dimetilamina en metanol (2.0 M, 2.14 ml) se agrega a una solución agitada de metil-N- (3 , 4-diclorobencil) -4- (2 , 3 -epoxipropiloxi) indol-2-carboxilato (87 mg) en DMF (5 ml) bajo una atmósfera de argón. La reacción se calienta a 80°C por 16 horas. La reacción se concentra al vacío y el residuo se divide entre etilacetato y agua. Extractos orgánicos combinados se lavaron con solución de cloro de sodio acuoso saturada, secaron (MgS04) y concentraron al vacío . El residuo se disuelve en THF (3 ml) y metanol (1.5 ml) y NaOH (2M, 3 ml) se agregan, y la reacción se agita por 16 horas. La reacción luego se concentra al vacío y el residuo se disuelve en agua. La solución se acidifica por adición por gotas de ácido acético, resultando en la precipitación de un sólido blanco que se filtra, lava con agua y seca al vacío para dar el producto final deseado como un sólido blanco (50 mg, 54%, dos etapas); RMN d (CD3SOCD3) 2.85 (s, 6H) , 3.22 - 3.40 (m, 2H) , 4.01 - 4.14 (m, 1H) , 5.81 (s, 2H) , 6.01 (d, 1H) , 6.60 (d, 1H) , 6.88 (dd, 1H) , 7.13 (d, 1H) , 7.21 (t, 1H) , 7.28 (d. 1H) , 7.44 (s, 1H) , 7.53 (d, 1H) ; M/z (-) 435 (M-H+) . Eiemplo 8 El procedimiento descrito en el Ejemplo 7 anterior se repite utilizando las aminas apropiadas. De esta manera se obtuvieron los compuestos descritos a continuasión . Ácido N- (3,4-diclorobencil) -4- (2 -hidroxi-3 -morfolinopropoxi) indol-2 -carboxílico (compuesto 17). 36% de rendimiento (dos etapas) ; RMN d (CD3SOCD3) 2.83 - 3.41 (M, 6H) , 3.65 - 3.84 (M, 4H) , 4.07 (d, 2H) , 4.31 (M, 1H) , 5.80 (s, 2H) , 6.60 (d, 1H) , 6.89 (dd, 1H) , 7.12 (d, 1H) , 7.21 (t, 1H) , 7.29 (d, 1H) , 7.41 (s, 1H) , 7.52 (d. 1H) ; M/z ( + ) 479 (MH+) . Compuesto 23 Rendimiento 13% (dos etapas); M/z ( - ) 505 4 (M-H+) Compuesto 24 Rendimiento 8% (dos etapas) ; M/z (-) 520.3 (M-H+) Compuesto 25 Rendimiento 30% (dos etapas); M/z (-) 491.3 (M-H+) Compuesto 26 Rendimiento 75% (dos etapas): M/z (-) 523.4 (M-H+) Compuesto 27 Rendimiento 66% (dos etapas) : M/z (-) 505.4 (M-H+) Compuesto 28 Rendimiento 17% (dos etapas): M/z (-) 465.2 (M-H+) i emplo 9 Ácido N- (3, 4 -diclorobencil) -4- (2, 3 -dihidroxipropoxi) indol-2-carboxílico (compuesto 21) . Etil - - ( 3 , 4 -diclorobencil ) -4 - (2 , 3 -dihidroxipropoxi) indol-2-carboxilato (85 mg) se disuelve en THF (3 ml) y metanol (1 ml) e hidróxido de sodio (2M, 3.0 ml) se agrega y la reacción se agita por 16 horas. La reacción luego se concentra al vacío y el residuo se disuelve en agua.
La solución se acidifica por adición por gotas de ácido acético, resultando en la precipitación de un sólido blanco que se filtra, lava con agua y seca al vacío para dar el producto final deseado (70 mg, 81%); RMN d (CD3SOCD3) 3.40 -3.53 (m, 3H) , 3.98 - 4.10 (m, 2H) , 5.80 (s. 2H) . 6.59 (d, 1H) , 6.88 (d, 1H) , 7.09 (d, 1H) . 7.20 (t, 1H) , 7.30 (d, 1H) , 7.36 (s, 1 H) , 7.51 (d, 1H) ; M/z (-) 408 (M-H+) . Eiemplo 10 Metil -N- ( 3 , 4 -diclorobencil ) - 4 - (2 - (4 - ( 2 -hidroxietil) piperazinil-1-il) etoxi) indol -2 -carboxila o (metiléster del compuesto 22) . Trifenilfosfina (0.55 g) se agrega en pequeñas porciones durante dos horas a una solución agitada de tetrabromuro de carbono (0.47 g) y metil-N- (3 , 4-diclorobencil) -4- (hidroxietiloxi) indol-2-carboxilato (0.28 g) en diclorometano (10 ml ) . La reacción se agitó por tres horas a temperatura ambiente, concentró al vacío y el residuo se purificó por cromatografía en columna utilizando diclorometano como eluyente para dar metil N-(3,4-diclorobencilo) -4-bromoetiloxi) indol-2-carboxilato como un sólido blanco (0.29 g, 90%); RMN d (CD3SOCD3) 3.80 (s, 3H) , 3.89 (t, 2H) , 4.46 (t, 2H) , 5.80 (s, 2H) , 6.62 (d, 1H) , 6.88 (dd, 1H) , 7.17 (d, 1H) , 7.25 (t. 1H) , 7.30 - 7.36 (m, 2H) , 7.52 (d, 1H) ; M/z ( +) 456, 458 (MH+) . 1- (2-hidroxietil) piperazina (175 mg) se agrega a una solución agitada de metil-N- (3 , 4-diclorobencil) -4- (bromoetiloxi) indol-2-carboxilato (278 mg) e yoduro de potasio (10 mg) en acetonitrilo (15 ml) . La reacción se calienta a 80°C por 16 horas. La reacción se concentra al vacío y el residuo se disuelve en etilacetato, lava con agua, solución de cloruro de sodio acuosa saturada y seca (MgS04) . El solvente se retira al vacío para dar el producto como un aceite incoloro (215 mg, 70%); RMN d (CD3SOCD3) 2.31 - 2.57 (m, 10H) . 2.78 (t, 2H) , 3.47 (dd, 2H) , 3.80 (s, 3H) , 4.20 (t, 2H) , 4.30 (t, 1H) , 5.79 (s, 2H) , 6.61 (d, 1H) , 6.88 (dd, 1H) , 7.13 (d, 1H) , 7.22 (t, 1H) , 7.29 - 7.32 (m, 2H) , 7.51 (d, 1H) ; M/z { + ) 506 (MH+) . Eiemplo 11 Ácido N- (3 , 4 -diclorobencil) -4- (3 -hidroxipropoxi) indol -2 -carboxílico (compuesto 15) . Metil N- (3 , 4 -diclorobencil ) -4 - ( 3 -hidroxipropiloxi) indol-2-carboxilato (6.9 g) se disuelve en THF (140 ml) y se agregan metanol (140 ml) e hidróxido de sodio (3M, 110 ml) y la reacción se agita por 16 horas. - La reacción luego se concentra al vacío y el residuo se disuelve en agua. La solución se acidifica por adición por gotas de ácido acético, resultando en la precipitación de un sólido blanco que se filtra, lava con agua y seca al vacío, para dar el producto final deseado (5.58 g, 84%); RMN d (CD3SOCD3) 1.92 (m, 2H) , 3.60 (dd, 2H) , 4.13 (dd, 2H) , 5.89 (s, 2H) , 6.52 (s, 1H) , 6.94 - 7.11 (m, 4H) , 7.32 (d, 1H) , 7.47 (d, 1H) ; M/z (-) 392 (M-H+) . Eiemplo 12 Usando los procedimientos similares a los descritos en el Ejemplo 11 anterior, pero con los materiales de partida apropiados, se prepararon los siguientes compuestos. Ácido N- (3. -diclorobencil) -4- (3 -hidropropiltio) indol -2 -carboxílico (compuesto 19) . Rendimiento 70%: M/z (-) 408.3 (M-H+) . Ácido N- (3.4-Diclorobenzil) -4- (3 -hidroxipropilsulfonil) -indol-2 -carboxílico (Compuesto 20) 41% de rendimiento; M/z (-) 440.3 (M-H+) . Ácido N-Benzil-4- ( 2 -hidroxietiloxi ) indol- 2 -carboxílico (Compuesto 1) 82% de rendimiento, RMN d (CD3SOCD3) 3.78 (d, 2H) , 4.08 (t, 2H) , 4.87 (m, 1H) , 5.82 (s. 2H) , 6.56 (d, 1H) , 6.98 (d, 2H) , 7.06 (d, 1H) , 7.14 - 7.27 (m, 4H) , 7.32 (s, 1H) ; M/z (-) 310 (M-H+) . Ácido N-Benzil-4- (2-metoxietoxi) indol-2-carboxílico (Compuesto 2) 91 % de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 3.35 (s, 3H) , 3.74 (m, 2H) , 4.20 (m, 2H) , 5.81 (s. 2H) , 6.57 (d, 1 H ) , 6.99 (d, 2H) , 7.08 (d, 1H) , 7.14 - 7.27 ( m 5H ) , 12.84 (brs 1H ) ; M/z (-) 324 (M-H+) . Ác i do N- (3 ,4-Dif luorobenzil) -4- (carboximetoxi) -indol-2 -carboxílico (Compuesto 5) 86 % de rendimiento (dos etapas) ; RMN d (CD3SOCD3) 4.79 (s, 2 H) , 5.80 (s, 2 H) , 6.48 (d, 1 H ), 6.78 (m, 1 H ), 7.08 - 7.36 ( m, 5 H), 12.98 (brs, 1 H) ; M/z (-) 360 ( M-H+) . Ácido N- (3-Clorobenzil) -4- (carboximetoxi) indol-2 -carboxílico (Compuesto 6) 89 % de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 4.79 (s, 2H ), 5.81 (s, 2H) , 6.45 (d, 1H ), 6.91 (d, 1H) , 7.05 - 7.31 (m, 6H) ; M/z (-) 358 (M-H+) . Ácido N-Benzil-4- (1- carboxi - 1 -pheni lme toxi ) indol-2-carboxílico (Compuesto 7) 80 % de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 5.81 (s, 2H) , 5.94 (s, 1H ), 6.52 (d, 1H) , 7.00 (d, 2H) , 7.09 - 7.29 (m, 5H) , 7.33 - 7.48 (m, 4H) , 7.62 (d, 2H) ; M/z (-) 400 (M-H +) . Ác ido N- (4-Clorobenzil) -4- (carboximetoxi) indol-2 -carboxílico (Compuesto 8) 66 % de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 4.79 (s, 2H ) , .81 (s, 2H) , 6.48 (d, 1H ) , 7.00 (d, 2H) , 7.06 - 7.20 (m, 2H) , 7.26 - 7.34 (m, 3H) , 12.95 (brs, 1H) ; M/z (-) 358 (M-H + ) • Ác i do N- (3 ,4-Diclorobenzil) -4- (1-carboxietoxi) - indol -2 -carboxílico (Compuesto 12) 90 % de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 1.58 (d, 3H ) , 4.91 (q, 1H) , 5.80 (s, 2H) , 6.42 (d, 1H) , 6.88 (dd, 1 H) , 7.08 - 7.21 (m, 2H) , 7.29 (s, 1H) , 7.31 (d, 1H) , 7.50 (d, 1H) ; M/z (-) 406 (M-H+) . Ácido N- (3 , 4-Diclorobenzil) 1- (2- (4-carboxi- 2-metoxif enil) - etoxi) ) indol-2 -carboxílico (Compuesto 13) 81% de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 3.91 (s, 3H) , .26 (s, 2H) , 5.81 (s, 2H) ; 6.66 (d, 1H) , 6.90 (dd, 1H) , 7.10 - 7.25 (m. 2H) , 7.32 - 7.36 (m, 2H) , 7.48 - 7.56 (m, 2H) . 7.59 - 7.65 (m, 2H) , 12.97 (brs, 1H) ; M/z (-) 498 (M-H+) . Ác ido N- (3 , 4-Diclorobenzil) -4- (2-hidroxietoxi) - indol -2 -carboxílico (Compuesto 14) 83% de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 3.77 (m, 2H) , 4.08 (t, 2H) , 4.89 (m, 1H) , 5.80 (s, 2H) , 6.58 (d, 1H) , 6.89 (dd, 1H) , 7.08 (d. 1H) , 7.19 (t, 1H) , 7.29 (d. 1H) , 7.34 (s. 1H) , 7.50 (d, 1H) ; M/z (-) 378 (M-H +) . Ácido N- (3 , 4 -Diclorobenzil) -4 - (dimetil - a inoetiloxi) indol -2 -carboxílico (Compuesto 18) 13 % de rendimiento (dos etapas) ; RMN d (CD3SOCD3) 2.89 (s, 6 H) , 3.59 (t, 2 H) , 4.45 (t, 2 H) , 5.81 (s, 2 H) , 6.64 (d, 1 H) , 6.90 (dd, 1 H) , 7.18 (d, 1 H) , 7.22 (d, 1 H) , 7.28 (m, 1 H) , 7.48 - 7.54 ( m,2 H) ; M/z (-) 405 ( M-H+) . Ácido N- (3,4-Diclorobenzil) -4- (2- (4- (2-hidroxietil) -piperazin-1-il) etoxi) indol -2 -carboxílico (Compuesto 22) 90 % de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 2.40 - 2.67 (m. 10H) , 2.81 (t, 2 H) , 3.49 (dd, 2 H) , 4.20 (t, 2 H ), 5.82 (s, 2 H) , 6.59 (d, 1H) , 6.92 (dd, 1H) , 7.06 (d, 1H) , 7.11 - 7.19 (m, 2H) , 7.30 (s, 1H) , 7.50 (d, 1H) ; M/z (-) 490 (M-H +) . Ácido N- (3 , 4 -Diclorobenzil) -5-metoxi-4- (carboximetoxi) -indol-2 -carboxílico (Compuesto 9) 91 % de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 3.77 (s, 3H) , 4.64 (s, 2H) , 5.78 (s, 2H) . 6.91 (dd, 1H) , 7.13 (d, 1H) , 7.20 (d, 1H) , 7.30 (s, 1H ), 7.35 (d, 1H) , 7.51 (d, 1H) ; M/z (+) 424 (MH+) . Ácido N- (3,4-Diclorobenzil) -5-metoxi-4- (3-morfolinopropoxi) -indol-2 -carboxílico (Compuesto 10) 94% de rendimiento; RMN d (CD3SOCD3) 2.17 (m, 2H) , 3.10 (m, 2H) , 3.34 (m, 4H) , 3.79(t, 2H) , 3.80 (s, 3H) , 3.97 (m, 2H) . 4.20 (t, 2H) . 5.79 (s, 2H) , 6.93 (dd. 1H) , 7.16 (d, 1H) , 7.25 (d, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 7.34 (d. 1H) , 7.52 (d, 1H) ; M/z ( + ) 493 (MH+) .
Ejemplo 13 Ácido N- (3 , 4 -diclorobencil) - 5-metoxi-4- (carbamoilmetoxi) indol-2 -carboxílico (compuesto 11) Yoduro de litio (0.39 g) se agrega a una solución agitada de metil N- (3 , 4 -diclorobenzil ) -5 -metoxi-4 -carbamoilmetoxiindol -2 -carboxilato (0.12 g) en piridina (10 ml) bajo una atmósfera de argón. La reacción luego se calienta a 115°C por 16 horas. El solvente se retira al vacío y el residuo se divide entre etilacetato y ácido clorhídrico (2.0 M, 10 ml) . Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y solución de cloruro de sodio acuosa saturada, secaron (MgS04) y concentraron al vacío para dar el producto como un sólido incoloro crema (35 mg, 30%) ; RMN d (CD3SOCD3) 3.80 (s, 3H) , 4.51 (s,2 H ),5.79 (s, 2H) , 6.90 (dd, 1H) , 7.18 (d, 1H) , 7.25 (d, 1H) , 7.34 (d, 1H) , 7.39 (s, 1H) , 7.42 (brs, I H) , 7.51 (d, 1 H) , 7.57 (brs, 1 H) , 13.05 (brs, 1 H) ; M/z (-) 421 (M-H+) . Eiemplo 14 Pruebas Biológicas Los siguientes métodos de prueba biológicos datos de ejemplos sirven para ilustrar la presente invención. Abreviaturas : ATCC American Type Culture Collection (Colección de cultivos tipo Americano, Rockville, E.U.A.
ABS Ácido Bicincronínico (empleado con sulfato de cobre y su cobre para ensayo de proteína) BSA Bovine Serum Albumin (Albúmina de suero bovino) . DMEM Dulbecco 's modified Eagl ' s médium (Medio Eagle modificado con Dubelcco) . EGTA Ácido etilenbis (oxietilenitrilo) tetraacético . FCS Suero bovino fetal HEPES Ácido (N- [2 -Hidroxietil] piperazina-N ' - [2-etansulfónico) HBSS Solución de sal balanceada de Hank hMCP-1 Proteína- 1 quimioatrayente de monocito humano. PBS Salino amortiguado con fosfato. PCR Reacción de cadena polimerasa AMPLITAQ™, disponible de Perkin-Elmer Cetus, se emplea como la fuente de ADN polimerasa termo estable. El amortiguador de enlace es 50 mM HEPES, 1 mM CaCl2, 5 mM MgCl2, suero bovino fetal 0.5% ajustado a pH 7.2 con 1 M NaOH. Aminoácidos no esenciales (100X concentrado) son: L-alanina 890 mg/1; L-Asparagina 1320 mg/1; ácido L-Aspártico 1330 mg/1; ácido L-Glutámico 1470 mg/1; Glicina 750 mg/1; L-Prolina, 1150 mg/1 y; L-Serina, 1050 mg/1. Suplemento de timidina e hipoxantina (50x concentrado) es: hipoxantina, 680 mg/1 y timidina, 194 mg/1. Penicilina-Estreptomicina es: Penicilina G (sal sodio); 5000 unidades/ml; estreptomicina sulfato. 5000 µg/ml.
Células THP-l de línea celular de monocito humano están disponibles de ATCC, número de acceso ATCC TIB-202. Solución de sal balanceada de Hank (HBSS = Hank ' s Balanced Salt Solution) se obtiene de Gibco; ver Proc. Soc . Exp . Biol . Med, 1949, 71, 196. Medio de cultivo celular sintético, RPMI 1640 se obtiene de Gibco; contiene sales inorgánicas [Ca (N03) 2.4H20 100 mg/1; KCl 400 mg/1; MgS04.7H20 100 mg/1; NaCl 6000 mg/1; NaHC03 2000 mg/1 & Na2HP04 (anhid.) 800 mg/1], D-Glucosa 2000 mg/1, glutationa reducida 1 mg/1, amino ácidos y vitaminas. FURA-2/AM es penta acetoximetil éster de ácido 1-2- (5-carboxioxazol-2 -il) -6-aminobenzofurano-5-oxi] -2- (2 ' -am ino-5 ' -metilfenoxi) -etano-N, ,N' , ' -tetraacético y se obtiene de Probes, Eugene, Oregon, USA. Amortiguador de sedimentación de sangre contiene 8.5g/l NaCl y 10g/l de hidroxietil celulosa. Amortiguador lisma es 0.15M NH4C1", lOmM KHC03, ImM EDTA. Amortiguador de unión de células integral es 50 mM HEPES, 1 mM CaCl2, 5 mM MgCl2, 0.5% BSA, 0.01% NaN3 , ajustado a pH 7.2 con NaOH 1M. Amortiguador de lavado es 50mM HEPES. lmM CaCl2, 5mM MgCl2, FCS termoinactivado 0.5%, NaCl 0.5M ajustado a pH 7.2 con NaOH 1M. Procedimientos de biología molecular generales pueden seguirse de cualquiera de los métodos descritos en "Molecular Cloning - A Laboratory Manual" (Clonación molecular-manual de laboratorio) Segunda edición, Sambrook. Fritsch y Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory. 1989) . (i) Clonación y expresión de receptor hMCP-1 El receptor MCP-1 B (CCR2B) ADNc se clona por PCR a partir de ARN de células THP-l utilizando cebadores oligonucleótido con base en las secuencias de receptor MCP-1 publicadas (Charo y colaboradores, 1994, Proc. Nati. Acad.
Sci. USA, 91, 2752). Los productos PCR resultantes se clonaron en el vector PCR-II™ (In Vitrogen, San Diego, CA. ) . ADNc CCR2B libre de error se sub-clona como un fragmento Hind III-Not I en el vector de expresión eucariótico pCDNA3 (In Vitrogen) para generar pCDNA3/CC-CKR2A y pCDNA3/CCR2B respectivamente . pADNc3/CCR2B linearizado se transfecta en células CHO-Kl por precipitación con fosfato de calcio (Wigler y colaboradores, 1979, Cell , 16, 777) . Células transfectadas se seleccionaron por la adición de sulfato de geneticina (G418, Gibco BRL) a 1 mg/ml, 24 horas después de que las células se transfectaran. La preparación de ARN y tinción Northern, se llevaron a cabo como se describió previamente (Needham y colaboradores, 1995, Prot . Express . Purific , 6, 134) . Clon 7 CHO-Kl (CH0-CCR2B) se identifica como el expresor de receptor B MCP-1 más alto. (ii) Preparación de fragmentos de membrana Células CH0-CCR2B se desarrollaron en DMEM suplementado con suero bovino fetal al 10%, glutamina 2 mM, aminácidos no esenciales IX, suplemento de hipoxantina y Timidina IX y penicilina-estreptomicina (a 50 µg de estreptomicina/ml, Gibco BRL). Fragmentos de membrana se prepararon utilizando métodos de centrifugación diferencial/lisis celular como se describió previamente (Siciliano y colaboradores, 1990, J. Biol . Chem . , 265, 19658) . La concentración de proteína se estima por ensayo de proteína BCA (Pierce, Rockford, Illinois) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. (iii) Ensayo 125MCP-I se prepara utilizando la conjugación de Bolton y Hunter (Bolton y colaboradores 1973, Biochem . J. , 133, 5 79; Amersham International pie) . Ensayos de enlace de equilibrio se llevan a cabo utilizando el método de Ernst y colaboradores, 1994, J. Immunol . , 152, 3541. Brevemente, cantidades variantes de MCP-1 etiquetado con 125i- se agregaron a 7 µg de membranas celulares CH0-CCR2B purificadas en 100 µl de amortiguador de unión. Después de una hora de incubación a temperatura ambiente, las mezclas de reacción de unión se filtraron y lavaron 5 veces a través de un lavador de placas (cosechador celular Brandel MLR-96T) utilizando amortiguador de unión enfriado por hielo. Esteras de filtro (Brandel GF/B) se impregnaron previamente por 60 minutos em polietilenimina al 0.3% antes de uso. Después de filtración, se separaron filtros individuales en tubos de 3.5 ml (Sarstedt No. 55.484) y MCP-1 etiquetado con 125I ligado se determina (LKB 1277 Gammamaster) . Estudios de competencia en frío se realizaron como con anterioridad utilizando 100 pM de MCP-1 etiquetado con 125I en la presencia de concentraciones variantes de MCP-1 sin etiquetar. La unión no específica se determina por la inclusión de un exceso molar de 200 veces de MCP-1 no etiquetado en la reacción. Estudios de unión de ligando con fragmentos de membrana preparados a partir de células CHO-CCR2B mostraron que el receptor CCR2B está presente a una concentración de 0.2 pmoles/mg de proteína de membrana y MCP-1 ligado selectivamente y con alta afinidad (IC50 = 110 pM, Kd =120 pM) . La unión a estas membranas fue completamente reversible y alcanzó el equilibrio después de 45 minutos a temperatura ambiente y hubo una relación lineal entre unión de MCP-1 y concentración de membrana celular CHO-CCR2B cuando se utiliza MCP-1 a concentraciones entre 100 pM y 500 pM. Compuestos de prueba disueltos en DMSO (5 µl) se probaron en competencia MCP-1 etiquetado con 100 pM sobre un rango de concentraciones (0.01-50 µM) en duplicado utilizando curvas de respuesta de dosis de 8 puntos y concentraciones IC50 se calcularon.
Compuestos probados de la presente invención se dieron valores IC50 de 50 µM o menos en el ensayo de enlace receptor hMCP- 1 aquí descrito. Por ejemplo, el compuesto 5 en la Tabla 1 tuvo un IC50 de 2.3 µM. (b) Flujo de calcio mediado por MCP-1 en células THP-l. La línea celular de monocitos humanos THP-l se desarrolla en un medio de cultivo celular sintético RPMI 1640 suplementado con suero bovino fetal al 10%, 6 mM de glutamina y penicilina/estreptomicina (a 50 µg de estreptomicina/50ml de Gibco BRL) . Células THP-l se lavaron en HBSS (careciendo de Ca2+ y Mg2+) + 1 mg/ml de BSA y resuspendieron en el mismo amortiguador a una densidad de 3 x 106 células/ml. Las células luego se cargaron con lmM FURA-2/AM por 30 minutos a 37°C, lavaron dos veces con HBSS y resuspendieron a 1 x 106 células/ml. La suspensión celular de THP-l (0.9 ml) se agrega a una cuba desechable de 5 ml que contiene una barra agitadora magnética y 2.1 ml de HBSS precalentado (37°C) que contiene 1 mg/ml BSA. 1 mM MgCl2 y 2 mM CaCl2. La cuba se coloca en un espectrofotómetro de fluorescencia (Perkin Elmer, Norwalk, CT) y preincuba por 4 minutos a 37°C con agitación. La fluorescencia se registra sobre 70 segundos y se estimularon células por adición de hMCP- 1 a la cuba después de 10 segundos. [Ca2+] i se mide por excitación a 340 nm y 380 nm en forma alterna y subsecuentemente la medición de la intensidad de la emisión de fluorescencia a 510 nm . La proporción de intensidad es de la luz fluorescente emitida después de excitación a 340 y 380 nm, (R) , se calcula y exhibe para dar y estimar [Ca2+] citoplásmico de acuerdo con la ecuación. [Ca2+] i =Kd (R-Rmin) (Sf2/Sb2) (Rmax-R) en donde Kd para el complejo FURA-2 Ca2" a 37°C se toma como 224nm. Rmax es la proporción de fluorescencia máxima determinada después de adición de 10 mM, Ionomicina, Rmax es la proporción mínima determinada por la adición subsecuente de una solución libre de Ca2+ que contiene 5 mM EGTA, y Sf-2/Sb2 es la relación de valores de fluorescencia a excitación de 380 nm determinada a Rm?n y Rmax respectivamente. El estímulo de células THP-l con hMCP-1 induce un aumento transitorio rápido en [Ca2+] i en una forma dependiente de dosis y específica. Curvas de respuesta de dosis indican un EC50 aproximado de 2 nm. Compuestos de prueba disueltos en DMSO (10 µl) se ensayaron para inhibir la liberación de calcio al agregarles a la suspensión celular 10 segundos antes de adición de ligando y medir la reducción en el ascenso transitorio en [Ca2+]i. Compuestos de prueba también se verificaron por carencia de actividad agonista por adición en lugar de hMCP-1. c) Quimiotaxia mediada por hMCP-1 y RANTES Se realizaron ensayos de quimiotaxia in vi tro utilizando la línea celular monocítica humana THP- 1. La migración celular a través de membranas de policarbonato se mide al enumerar aquellas que pasan a través ya sea directamente por conteo Coulter o indirectamente por el uso de un ensayo de viabilidad colorimétrico que mide la escisión de una sal tetrazolio por la cadena respiratoria mitocondrial (Scudiero D.A. y colaboradores 1988, Cáncer Res . , 48, 4827-4833) . Se introdujeron quimioatrayentes en una placa de microtitulación de 96 pozos que forma el pozo inferior de una cámara de quimiotaxia adaptada con una membrana filtro enmarcada con adhesivo de policarbonato con tamaño de poro de 5 µm libre de PVP (Serie NeuroProbe MB, Cabin John, MD 20818, USA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El quimioatrayente se diluye según sea apropiado en medio de cultivo celular sintético, RPMI 1640 (Gibco) o suplementado con glutamina 2 mM y 0.5% BSA, o en forma alterna con HBSS con Ca2+ Mg2+ sin Phenol Red (Gibco) más 0.1 % BSA. Cada dilución se degasificó al vacío por 30 minutos y colocó (400 µl) en los pozos inferiores de la cámara y células THP-l (5 x 105 en 100 µl RPMI 1640 + 0.5%BSA) se incubaron en cada pozo de la cámara superior. Para la inhibición de quimiotaxia, el quimioatrayente se mantiene a una concentración sub-máxima constante determinada previamente (1 nM MCP-1 ) y agrega al pozo inferior junto con los compuestos de prueba disueltos en DMSO (concentración final de DMSO < 0.05% v/v) a concentraciones variantes. La cámara se incuba por dos horas a 37°C bajo 5% de C02. El medio se retira de los pozos superiores que luego se lavaron por arrastre con 200 µl de salino fisiológico antes de abrir la cámara, secando la superficie de membrana y centrifugando la placa de 96 pozos a 600 g por 5 minutos para cosechar las células. El sobrenadante (150 µl) se aspira y 10 µl de reactivo de p r o l i f e r a c i ó n c e l u l a r W S T - 1 , { 4 - (3 - (4 -yodofenil) -2 - ( 4 -nitrof enil ) -2H-5 -tetrazolio] -1, 3-fenildisulfonato} más un reactivo de acoplamiento de electrones (Boehringer Mannheim, Cat. no. 1644 807) se agrega de nuevo a los pozos. La placa se incuba a 37°C por 3 horas y la absorbancia del producto formazano soluble se lee en un lector de placas de microtitulación a 450 nm. Los datos se alimentan en una hoja de cálculo, corrigen por cualquier migración aleatoria en la ausencia de quimioatrayente y los valores de absorbancia promedio, error standard del promedio y pruebas de significancia, se calculan. Migración celular dependiente de concentración inducida por hMCP-1 con una respuesta bifásica característica, máxima 0.5-1.0 nm. En una forma alterna del ensayo anterior, células etiquetadas en forma fluorescente pueden utilizarse para ayudar en detección de punto extremo. En este caso, las células THP-l empleadas se etiquetan de manera fluorescente por incubación en la presencia de 5 mM calceína AM (glicina N, N ' - [ [3 ' 1-6 ' -bis (acetiloxi) -3 -oxospiro [isobenzofurano- 1 (3H) ,9' - [9H]xanteno] -2' ,7'-diil]bis(metilen)]bis[N- [2 - [ (acetiloxi) metoxi] -2-oxoetil] ] -bis [ (acetiloxi) metil] éster; Molecular Probes) por 45 minutos en la obscuridad. Células se cosechan por centrifugación y resuspenden en HBSS (sin rojo fenol) con Ca2+, Mg2+ y 0.1% de BSA. 50 µl (2 x 105 células) de la suspensión celular se colocan en el filtro sobre cada pozo y como con anterioridad, la unidad se incuba a 37°C por dos horas bajo 5% C02. Al final de la incubación, se lavan por arrastre células de la cara superior del filtro con salino amortiguado con fosfato, el filtro se retira de la placa y el número de células atraídas ya sea al lado inferior del filtro o del pozo inferior, estimadas por lectura de fluorescencia a excitación de 475 nm, longitudes de onda de emisión de 535 nm (fmax, Molecular Devices) . Los datos se alimentan en una hoja de cálculo, corrigen por cualquier migración aleatoria en la ausencia de quimioatrayente y los valores de fluorescencia promedio, error standard del promedio, inhibición en porciento IC50 de compuestos bajo prueba y pruebas de significancia pueden calcularse. Además de quimiotaxia inducida por MCP-1, esta forma alterna del ensayo también se emplea para medir inhibición de la quimiotaxia inducida por RANTES (2nM) . (d) Unión a células mononucleares de sangre periférica humana (PBMCs = Peripheral Blood Mononuclear Cells) . (i) Preparación de PBMCs humanas. Sangre humana fresca (200 ml) se obtiene de donadores voluntarios, recolecta en anticoagulante de citrato de sodio, para dar una concentración final de 0.38%. La sangre se mezcla con amortiguador de sedimentación e incuba a 37°C por 20 minutos. El sobrenadante se recolecta y centrifuga a 1700 rpm por 5 minutos (Sorvall RT6000D) . El nodulo obtenido se resuspende en 20 ml de RPMI/BSA (1 mg/ml) y 4 x 5 mis de células se forman en capas cuidadosamente sobre 20 ml RPMI/BSA (lmg/ml) y 4 x 5 mis en tubos de centrífuga de 15 ml . Los tubos se centrifugaron a 1700 rpm por 30 minutos (Sorvall RT6000D) y la capa resultante de células se retira y transfiere a tubos Falcon de 50 ml . Las células se lavaron dos veces en amortiguador de lisis para retirar cualesquiera glóbulos rojos de la sangre restantes seguido por dos lavados en RPMI/BSA. Las células se resuspendieron en 5 ml de amortiguador de unión. El número de células se mide en un contador Coulter y amortiguador de unión adicional se agrega para dar una concentración final de 1.25 x 107 PBMCs /ml . (ii) Ensayo [125I]MCP-1 se prepara utilizando la conjugación de Bolton y Hunter (Bolton y colaboradores . 1973. Biochem. J. , 133, 529; Amersham International pie] . Los ensayos de unión de equilibrio se llevan a cabo utilizando el método de Ernst y colaboradores, 1994, J. Immunol . , 152, 3541. Brevemente, 50µl de MCP-1 etiquetado con 125I (concentración final lOOpM) se agrega a 40 µl (5 x 105 células) células de suspensión celular en una placa de 96 pozos. Compuestos diluidos en amortiguador de unión de células íntegras de una solución de materia prima de 10 mM en DMSO, se agregan en un volumen final de 5 µl y para mantener una concentración de DMSO constante en el ensayo de 5%. La unión total se determina en la ausencia del compuesto, unión no específica se define por la adición de 5 µl de MCP-1 frío para dar una concentración de ensayo final de 100 mM. Pozos de ensayo se constituyeron a un volumen final de 100 µl con amortiguador de unión de células íntegras y las placas se sellan. Después de incubación a 37°C por 60 minutos, las mezclas de reacción de unión se filtraron y lavaron por 10 segundos utilizando amortiguador de lavado enfriado por hielo utilizando un lavador de placas (cosechador celular Brandel GF/B) . Esteras de filtro (Brandel GF/B) se impregnaron previamente por 60 minutos en polietilenimina a 0.3% más BSA a 0.2% antes de uso. Después de filtración, se separaron filtros individuales en tubos de 3.5 ml (Sarstedt No. 55.484) y MCP-1 etiquetado con 125I ligado se determina (LKB 1277 Gammamaster) . La potencia del compuesto de prueba se determina por ensayo en duplicado utilizando curvas de respuesta de 2 y de 6 puntos y se determinaron las concentraciones IC50. Por ejemplo, utilizando este método, el compuesto No. 9 en la Tabla 1 mostró un IC50 de 12.75 µM en el ensayo de quimiotaxia hMCP-1 y el compuesto No. 15 en la Tabla 1 mostró un IC50 de 3.64µM en el ensayo de quimiotaxia de RANTES. No se observa toxicidad fisiológicamente inaceptable a las dosis efectivas para compuestos probados en la presente invención. Eiemplo 15 Composiciones Farmacéuticas El siguiente ejemplo ilustra, pero no se pretende que limite, formas de dosificación farmacéutica de la invención como aquí se define (el ingrediente activo se denomina "compuesto X") para uso terapéutico o profiláctico en humanos : (a) (b) (d) (e) (f; (g) (h) (i) (j) (k) : i ) Nota: El compuesto X en la formulación anterior puede comprender un compuesto ilustrado en los ejemplos presentes. Las formulaciones anteriores pueden obtenerse por procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica farmacéutica. Las tabletas (a) - (c) pueden ser revestidas entéricas por medios convencionales, por ejemplo para proporcionar un revestimiento de celulosa acetato ftalato. Las formulaciones en aerosol (h) - (k) pueden utilizarse en conjunto con surtidores de aerosol con dosis medida standard, y los agentes de suspensión sorbitán trioleato y lecitina de soya pueden ser reemplazados por un agente de suspensión alterna tal como sorbitán monoleato, sorbitán sesquioleato, polisorbato 80, poliglicerol oleato o ácido oléico.

Claims (5)

  1. REIVINDICACIONES Un compuesto de la fórmula (I) (i) o su sal farmacéuticamente aceptable, éster hidrolizable in vivo o su amida, en donde X es CH2 o S02, R1 es un anillo arilo o heteroarilo opcionalmente substituido; R2 es carboxi, ciano, -C(0)CH2OH, -CONHR8, . -S02NHR9, tetrazol-5-ilo, S03H, o un grupo de la fórmula (VI) .
  2. (VI) en donde R8 se elige de hidrógeno, alquilo, arilo, ciano, hidroxi, -S02R12 en donde R12 es alquilo, arilo, heteroarilo o haloalquilo o R8 es un grupo- (CHR13) r-COOH, en donde r es un entero de 1 a 3 y cada grupo R13 se elige independientemente de hidrógeno o alquilo; R9 es hidrógeno, alquilo, arilo opcionalmente substituido, heteroarilo opcionalmente substituido o un grupo COR14 en donde R14 es alquilo, arilo, heteroarilo o aralquilo; R10 y R11 se eligen independientemente de hidrógeno o alquilo; R3 es hidrógeno, un grupo funcional, alquilo opcionalmente substituido, alquenilo opcionalmente substituido, alquinilo opcionalmente substituido, arilo opcionalmente substituido, heterociclilo opcionalmente substituido, alcoxi opcionalmente substituido, aralquilo opcionalmente substituido, aralquiloxi opcionalmente substituido, o cicloalquilo opcionalmente substituido; R4 es un grupo OR15 o S(0)qR15, en donde q es 0, 1 o 2, y R15 es un grupo alquilo que contiene hidrógeno substituido; y R5, Rd y R7 independientemente se eligen de hidrógeno, un grupo funcional o un grupo hidrocarbilo opcionalmente substituido o un grupo heteroclilo opcionalmente substituido. 2. - Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R15 es un grupo alquilo con 1 a 3 átomos de carbono, substituido con uno o más de un grupo funcional, arilo opcionalmente substituido por un grupo funcional o un grupo heterociclilo opcionalmente substituido por un grupo funcional . 3. - Compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, caracterizado porque R15 es un grupo alquilo con 1 a 3 átomos de carbono substituido con uno o más grupos seleccionados de halo; hidroxi; ciano; amino, mono- o di-alquilamino, en donde cada grupo alquilo está opcionalmente substituido por hidroxi, alcoxi o heterociclilo; alcoxi con 1 a 4 átomos de carbono; carboxi; sulfonamido; C0NH2; morfolino; tetrahidropirazinilo que está opcionalmente N-substituido por alquilo o hidroxialquilo; tetrahidropiridilo opcionalmente substituido por hidroxi o hidroxialquilo, piridilo, pirimidinilo fenilo opcionalmente substituido por carboxi, halo, hidroxi, alcoxi, carbamoilo, acilo o hidroxialquilo en donde el grupo alquilo convenientemente incluye al menos 2 átomos de carbono. 4. - Compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque R4 es un grupo OR15 en donde R15 es un grupo alquilo de cadena recta o ramificada que transporta cuando menos un grupo hidroxi. 5. - Compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque R15 es un grupo de la fórmula - (CH2) a [ (CHOH) (CH2) b] d CH2OH en donde a es un entero de 1 a , b es 0 o un entero de l a 4, y d es O o 1. 6. - Compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque R1 es 3-4 - dic loro f eni lo , 3 - f luoro - 4 - cl orof eni lo ,
  3. 3-cloro-
  4. 4-f luorof enilo o 2 , 3-dicloropirid-
  5. 5-ilo . 7. - Compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque X es CH2. 8.- Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. 9. - Compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para utilizar en la preparación de un medicamento para emplear en el tratamiento de enfermedad inflamatoria . 10.- Método para producir un compuesto de la fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1, este método comprende reaccionar un compuesto de la fórmula (VII) (Vil) en donde R1, R3, R5, R6, R7 y X son como se definió en relación a la fórmula (I) , R2' es un grupo R2 como se define en relación a la fórmula (I) o su forma protegida e y es oxígeno o azufre con un compuesto de la fórmula (VIII) . Z-R1 (VIII: en donde Z es un grupo saliente y R15' es un grupo R15 como se define en la reivindicación 1 o su precursor, y posteriormente si se desea o es necesario llevar a cabo una o más de las siguientes etapas: (i) convertir un grupo precursor R15' en un grupo R15; (ii) convertir un grupo R15 en otro grupo; (iii) oxidar un grupo tiol R4 a un grupo sulfinilo o sulfonilo; (iv) desproteger un grupo R2' o convertir el grupo R2 existente a un grupo R2 diferente.
MXPA/A/2001/007903A 1999-02-05 2001-08-03 Derivados de indol anti-inflamatorios MXPA01007903A (es)

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