MXPA00011048A

MXPA00011048A - Receptores novedosos acoplados con proteina g, nt2lp, que tienen homologia con receptores de neurotensina-2

Info

Publication number: MXPA00011048A
Application number: MXPA/A/2000/011048A
Authority: MX
Inventors: Rory Curtis; Maria Alexandra Glucksmann
Original assignee: Rory Curtis; Maria Alexandra Glucksmann; Millennium Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1998-05-11
Filing date: 2000-11-10
Publication date: 2002-05-09

Abstract

La presente invención se basa en la identificación de un receptor novedoso aclopado a proteina G (GPCR) expresado predominantemente en el cerebro y moléculas de acido nucleico que codifican el GPCR, conocidos aquícomo la proteína NT2LP y el gen NT2LP, respectivamente, la proteína NT2LP tiene una alta homología de secuencia con la familia NT de receptores, particularmente miembros de la subfamilia NT2. Con base en esta identificación, la presente invención ofrece:1) proteína NT2LP aislada, 2) moléculas deácido nucleico aisladas que codifican una proteína NT2LP, 3) anticuerpos que se unen selectivamente con la proteína NT2LP, 4) metodos para aislar variantes alélicas de la proteína y gen NT2LP, 5) métodos para identificar células y tejidos que expresan la proteína/gen NT2Lp, 6) mñetodos para identificar agentes y compuestos celulares que se unen con la proteína NT2LP, 7) métodos para identificar agentes que modulan la exposición del gen NT2LP, 8) métodos para modular la actividad de la proteína NT2LP en una célula u organismo y 9) un método para tratar enfermedades, patologías, o bien procesos biológicos, por ejemplo, dolor que comprende la administración de un agente que se une con proteínas NT2LP y/o modulan proteínas NT2LP.

Description

RECEPTORES NOVEDOSOS ACOPLADOS CON PROTEINA G, NT2LP, QUE TIENEN HOMOLOGÍA CON RECEPTORES DE NEUROTENSINA-2 REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud es una continuación en parte de la Solicitud Norteamericana No. de Serie 09/076,313, presentada el día 11 de Mayo de 1998. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Receptores acoplados con proteína G (GPCRs) son una de las clases principales de proteínas responsables de la transducción de señales dentro de las células. Los GPCRs son proteínas que tienen siete dominios de transmembrana. Al unirse un ligando sobre una porción extracelular de un GPCR, una señal es transducida dentro de la célula lo que resulta en cambio de una propiedad biológica o fisiológica de la célula. Receptores acoplados con proteína G (GPCRs) , juntos con proteínas G y efectores (enzimas intracelulares y canales modulados por proteínas G) , son los componentes de un sistema de señalización modular que conecta el estado de segundos mensajeros intracelulares con entradas extracelulares. Estos genes y productos de genes son agentes causantes potenciales de enfermedad (Spiegel et al., J. Clin. Invest. 92:1119-1125 (1993); McKusick y Amberger, J. Med. Genet. 30:1-26 (1993)).

Defectos específicos en el gen de rodopsina y en el gen de receptor de vasopresina V2 provocan varias formas de retinitis pigmentosa recesiva autosomal y dominante autosomal (ver Nathans et al., Annu. Rev. Genet. 26:403-424 (1992)), diabetes insipidus nefrogénica (Holtzman et al., Hum. Mol. Genet. 2:1201-1204 (1993) y referencias ahí). Estos receptores son de importancia crítica tanto para procesos del sistema nervioso central como para procesos fisiológicos periféricos. Análisis de la evolución sugieren que el ancestro de estas proteínas se desarrolló originalmente junto con planes de cuerpos complejos y sistemas nerviosos. Receptores acoplados con proteína G regulan muchos procesos fisiológicos importantes y ésta es una de las razones por la cual los receptores acoplados con proteína G son blancos farmacológicos comunes. Por ejemplo, existen por lo menos tres clases principales de receptores acoplados con proteína G opioide que regulan el dolor, mu, kappa, y delta. Los ligandos endógenos de estos receptores incluyen las encefalinas, dinorfinas y endorfinas. Fármacos analgésicos opioides que agonizan los receptores opioides y se emplean para el tratamiento del dolor incluyen la morfina, levorfanol, y fentanilo (para mayor información, ver Reisine y Pasternak (1996) , en "The Pharmacological Basis of Therapeutics Goodman y Gilman, Novena edición", páginas 521-555.) . La superfamilia de la proteína GPCR contiene ahora más que 250 tipos de parálogos, receptores que representan variantes generadas por duplicaciones de genes (o bien otros procesos) en oposición a ortólogos, el mismo receptor de especies diferentes y homólogos, formas diferentes de un receptor aislado a partir de un organismo individual. La superfamilia puede ser dividida en cinco familias: familia I, receptores tipificados por rodopsina y el receptor adrenérgico beta2 y representada actualmente por más de 200 miembros individuales (reseñado por Dohlman et al., Annu. Rev. Biochem. 60:653-688 (1991) y referencias ahí); familia II, la familia de receptor de hormona paratiroidea/calcitonina/secretina recién caracterizada (Juppner et al., Science 254:1024-1026 (1991); Lin et al., Science 254:1022-1024 (1991)); familia III, la familia de receptores de glutamato metabotrópico en mamíferos, incluyendo receptores NT (Nakanishi Science 258 597:603 (1992)); familia IV, la familia de receptores cAMP, importante en la quimiotáxis y el desarrollo de D. discoideum (Klein et al., Science 241:1467-1472 (1988)); y la familia V, los receptores de feromona de acoplamiento fungal tales como STE2 (reseñado por Kurjan, Annu. Rev. Biochem. 61:1097-1129 (1992) ) . Además de estos grupos de GPCRs, existe un pequeño número de otras proteínas que presentan siete segmentos hidrofóbicos putativos y que no parecen estar relacionadas con GPCRs; sin embargo, no se ha mostrado que se acoplarán con proteínas G. Drosofila expresa una unión de proteína específica para fotorreceptor de siete segmentos (boss), una proteína de siete segmentos de transmembrana que ha sido extensivamente estudiada y no muestra evidencia de ser un GPCR (Hart et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90:5047-5051 (1993)). El gen rizado (fz) en drosofila se considera también como una proteína con siete segmentos de transmembrana. De manera similar a boss, no se ha observado que fz se acoplara con proteínas G (Vinson et al., Nature 338:263-264 (1989)). Las proteínas G representadas en la familia de proteínas heterotriméricas compuestas de subunidades alfa, beta, y gamma que se unen con nucleótidos de guanina. Estas proteínas se enlazan habitualmente con receptores superficiales de célula, por ejemplo, receptores que contienen siete dominios de transmembrana como por ejemplo la familia de receptores NT. Después del enlace del ligando sobre el GPCR, un cambio conformacional es transmitido a la proteína G, lo que provoca que la subunidad alfa intercambie una molécula de GDP unida por una molécula de GTP, y se disocie de las subunidades ß?. La forma unida de GTP de la subunidad alfa funciona típicamente como una porción de modulación de efector, provocando la producción de segundos mensajeros tales como AMP cíclico (por ejemplo, por activación de adenilatciclasa) , diacilglicerol o bien fosfatos de inositol. Más que 20 tipos diferentes de subunidades alfa se conocen en el ser humano, dichos tipos se asocian con un conjunto más pequeño de subunidades ß y ?. Ejemplos de proteínas G de mamífero incluyen Gi, Go, Gq, Gs y Gt . Las proteínas G se describen extensivamente en Lodish H. et al. Molecular Cell Biology, (Scientific American Books Inc., Nueva York, N.Y., 1995), cuyo contenido se incorpora aquí por referencia. Los GPCRs son un blanco principal para la acción farmacológica y desarrollo farmacológico. Por consiguiente, es valioso para el ámbito del desarrollo farmacéutico identificar y caracterizar GPCRs previamente desconocidos. Una clase de GPCRs especialmente interesantes desde una perspectiva farmacéutica son las proteínas de receptor de neurotensina (NTRs) . La neurotensina (NT) , es un tridecapéptido distribuido tanto en el sistema nervioso como en los tejidos periféricos. La NT se encuentra involucrada en la medición de hipotensina, hiperglicemia, hipotermia, permeabilidad vascular incrementada y analgesia: sirve tanto como neurotransmisor como neuromodulador en el cerebro y como mediador celular y hormona en los tejidos periféricos. Particularmente, NT modula la transmisión de dopamina en las rutas nitroestriales y mesolímbicas . Estudios previos han indicado que NT se enlace con dos receptores distintos. Se identificaron representantes de NT1 en rata y en el ser humano (Tanaka et al., Neuron 4:847-854 (1990) y Vita et al., FEBS Ltr. 317:139-142 (1993) y representantes de NT2 han sido identificados en ratas y ratones (Chalón et al., FEBS Ltrs . 366:91-94 (1996) y Mazella et al., J. Neuro. 16:5613-5620 (1996)). Recientemente, se identificaron inhibidores no péptidos de NT1 (Labbe-Jullie, et al., Mol. Pharm. 47:1050-1056 (1995). La identificación de un inhibidor no péptido de un miembro de la familia NTR de proteínas hace que la identificación de otros miembros de familia sea importante en el ámbito del desarrollo de los fármacos. La presente invención adelanta el estado de la técnica proporcionando un GPCR previamente no identificado expresado predominantemente en el cerebro, con bajos niveles de expresión detectados en los ovarios, la proteína NT2LP. Formas humanas o de mono de la proteína NT2LP muestran una alta homología de secuencia con la familia de receptores de NT, especialmente miembros de la subfamilia NT2 de receptores. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se basa en la identificación de receptores acoplados a proteína G novedosa (GPCR) expresados predominantemente en el cerebro y moléculas de ácido nucleico que codifican el GPCR, conocidas aquí como proteína NT2LP y gen NT2LP, respectivamente. Las proteínas NT2LP son proteínas humanas o de mono que presentan una alta similaridad de secuencia con la familia de receptor de NT, particularmente ¡^ miembros de la subfamilia de receptores NT2. Con base en esta identificación, la presente invención ofrece; 1) proteínas y fragmentos de NT2LP aislados, 2) moléculas aisladas de ácido nucleico que codifican proteínas y fragmentos NT2LP, 3) anticuerpos que se unen selectivamente a las proteínas NT2LP, 4) métodos para aislar variantes alélicas de las proteínas y genes NT2LP, 5) métodos para identificar células y tejidos que expresan las proteínas/genes NT2LP, 6) métodos para identificar agentes y compuestos celulares que se unen con proteínas NT2LP, 7) métodos para identificar agentes que modulan la expresión de genes NT2LP, 8) métodos de modulación de la actividad de las proteínas NT2LP en una célula o en un organismo, y 9) un método para tratar enfermedades, patologías, o bien procesos biológicos, por ejemplo, dolor que comprende la administración de un agente que se une con proteínas NT2LP y/o modula proteínas NT2LP. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 ilustra un nucleótido de NT2LP de mono (SEQ ID NO:l) y la secuencia de aminoácidos NT2LP (SEQ ID NO: 2). Los codones de inicio y terminación se identifican en negritas.

La figura 2 ilustra el nucleótido NT2LP humano (SEQ ID Nos: 3 y 5) de dos variantes de empalme. Los codones de inicio son identificados en negritas y subrayados. La figura 3 representa la secuencia de aminoácidos de NT2LP humano (SEQ ID NO:4).

La figura 4 es una gráfica de hidropatía de NT2LP humano. La ubicación de los dominios de transmembrana predichos (TM) , citoplásmicos (IN), y extracelular (OUT) se indican como la posición de cisteínas (cys; barras verticales inmediatamente debajo de la gráfica) . La hidrofobicidad relativa se muestra arriba de la línea de puntos, y la hidrofilicidad relativa se muestra debajo de la línea de puntos. La figura 5 es una comparación de secuencia entre una porción de NT2LP humano y una secuencia de consenso de 7 receptores de transmembrana derivada de un modelo Markov escondido. La figura 6 es un conjunto de alineaciones entre porciones de NT2LP humano (sujeto) y porciones de un tipo 2 de receptor de neurotensina de rata (petición; Q63384) . La figura 7 es un conjunto de alineaciones entre porciones de NT2LP (sujeto) y porciones de tipo 2 de receptor de neurotensina de ratón (petición; P70310) . DESCRIPCIÓN DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS La presente invención se basa en el descubrimiento de una familia de moléculas novedosas de receptores acoplados con proteína G (GPCR) expresadas predominantemente en el cerebro, las proteínas NT2LP, y moléculas de ácido nucleico que codifican las proteínas NT2LP, los genes NT2LP o bien moléculas de ácido nucleico NT2LP. Las proteínas NT2LP son GPCRs que tienen una alta homología de secuencias con la familia NT de receptores, particularmente miembros de la subfamilia NT2 de receptores. Específicamente, se identificó un EST primero en una base de datos pública, que tenía una baja homología con receptores acoplados con proteína G. Se diseñaron iniciadores de reacción en cadena de polimerasa con base en esta secuencia y se identificó un ADNc mediante el tamizado de una biblioteca de ADNc de feto de mono (ver ejemplo 1) . Clones positivos fueron secuenciados y se ensamblaron contig. El análisis de la secuencia ensamblada reveló que la molécula de ADNc clonada codificaba un GPCR, indicado aquí como proteína NT2LP que tenía una homología significativa con la familia NT de receptores, particularmente miembros de la subfamilia NT2 de receptores . La secuencia de ácido nucleico NT2LP de mono fue empleada para tamizar varias bibliotecas de ADNc humanas. Varios clones fueron identificados y secuenciados. Dos contigs que representan dos formas diferentes de empalme del gen NT2LP humano entero fueron ensamblados y representaron clones de longitud total (SEQ ID Nos: 3 y 5) . Las proteínas NT2LP son GPCRs y desempeñan una función en las rutas de señalización dentro de las células que expresan la proteína NT2LP, particularmente células de cerebro. Varios aspectos de la presente invención se describen con mayores detalles en las siguientes subsecciones . I. PROTEÍNA NT2LP AISLADA La presente invención ofrece una proteína NT2LP humana y de mono así como fragmentos de péptido de las proteínas NT2LP. Como se emplea aquí, una proteína se dice que es "aislada" o bien "purificada" cuando se encuentra sustancialmente libre de material celular o bien cuando se encuentra aislada de células recombinantes y no recombinantes, o bien sin precursores químicos ni otros agentes químicos o bien cuando se sintetiza químicamente. La expresión "sustancialmente libre de material celular" incluye preparaciones de proteína NT2LP en donde la proteína es separada de los componentes celulares de las células en donde se produce naturalmente o bien de manera recombinante. En una modalidad, la expresión "sustancialmente libre de material celular" incluye preparaciones de una proteína NT2LP que tiene menos que aproximadamente 30% (en peso seco) de proteína no NT2LP (conocida también aquí como una "proteína contaminante") , con mayor preferencia menos que aproximadamente 20% de proteína no-NT2LP, con preferencia todavía mayor menos que aproximadamente 10% de proteína no-NT2LP, y especialmente menos que aproximadamente 5% de proteína no-NT2LP. Cuando la proteína NT2LP o fragmentos de la misma se produce de manera recombinante, de preferencia es también sustancialmente libre de medio de cultivo, es decir, el medio de cultivo representa menos que aproximadamente 20%, con mayor preferencia menos que aproximadamente 10%, y especialmente menos que aproximadamente 5% del volumen de la preparación de proteína. La expresión "sustancialmente libre de precursores químicos o bien otros agentes químicos" incluye preparaciones de proteína NT2LP en donde la proteína es separada de precursores químicos o bien otros agentes químicos involucrados en la síntesis de la proteína. En una modalidad, la expresión "sustancialmente libre de precursores químicos o bien otros agentes químicos" incluye preparaciones de proteína NT2LP que tienen menos que aproximadamente 30% (en peso seco) de precursores químicos o bien agentes químicos no NT2LP, con mayor preferencia menos que aproximadamente 20% de precursores químicos o bien agentes químicos no NT2LP, con preferencia aun mayor menos que aproximadamente 10% de precursores químicos o bien agentes químicos no-NT2LP, y especialmente menos que aproximadamente 5% de precursores químicos o agentes químicos no-NT2LP. En modalidades preferidas, proteínas o fragmentos aislados de las mismas no tienen proteínas contaminantes del mismo animal a partir del cual se derivó la proteína NT2LP. Típicamente, tales proteínas se producen por expresión recombinante, por ejemplo, de una proteína NT2LP humana o de mono en una célula no humana o no de mono . Como se emplea aquí, una proteína NT2LP se define como una proteína que comprende: 1) la secuencia de aminoácidos ilustrada en SEQ ID Nos: 2 o bien 4; 2) variantes alélicas que ocurren naturalmente funcionales y no funcionales de proteína NT2LP humana o de mono; 3) variantes producidas de manera recombinante de proteína NT2LP humana o de mono; y 4) proteína NT2LP aislada de organismos otros que seres humanos 5 o monos (ortólogos de proteína NT2LP humana o de mono) . Como se emplea aquí, una variante alélica de una proteína NT2LP humana o de mono se define como: 1) una proteína aislada de células o tejidos de seres humanos o de mono; 2) una proteína codificada o el mismo locus genético que el codifica la proteína NT2LP humana o de mono; y 3) una proteína que tienen una similaridad sustancial de secuencia con una proteína NT2LP de ser humano o de mono. Como se emplea aquí, dos proteínas son sustancialmente similares cuando la secuencia de aminoácidos de las dos proteínas (o bien una región de las proteínas) son por lo menos aproximadamente 60-65%, típicamente por lo menos aproximadamente 70-75%, más típicamente por lo menos aproximadamente 80-85%, y especialmente por lo menos aproximadamente 90-95% o más idénticas entre ellas. Para determinar el porcentaje de homología de dos secuencias de aminoácidos (por ejemplo, SEQ ID NO: 2 o 4 y una variante alélica de la misma) o bien de dos ácidos nucleicos, las secuencias son alineadas para propósitos de comparación óptima (por ejemplo, se pueden introducir huecos en la secuencia de una proteína o ácido nucleico para alineación •-*",a--*-' ^*- - ' - *•*'- - -?< »t. óptima con la otra proteína o ácido nucleico) . Los residuos de aminoácidos o nucleótidos en posiciones correspondientes de aminoácidos o posiciones de nucleótido se comparan después. Cuando una posición en una secuencia (por ejemplo, SEQ ID NO: 2 o 4) es ocupada por el mismo residuo de aminoácido o nucleótido que la posición correspondiente en la otra secuencia (por ejemplo, una variante alélica de la proteína NT2LP de ser humano o de mono) , entonces las moléculas son idénticas en esta posición. La identidad porcentual entre las dos secuencias depende del número de posiciones idénticas compartidas por las secuencias (es decir, porcentaje identidad = número de posiciones idénticas/número total de posiciones xlOO) . Variantes alélicas de proteína NT2LP de ser humano o de mono incluyen tanto proteínas NT2LP funcionales como no funcionales. Variantes alélicas funcionales son variantes de secuencias de aminoácidos que ocurren naturalmente de una proteína NT2LP de ser humano o de mono que conservan la capacidad de unir ligando (como por ejemplo NT con receptores de NT) y transducir una señal dentro de una célula, de preferencia una célula nerviosa. Variantes alélicas funcionales contendrán típicamente solamente sustitución conservadora de uno o varios aminoácidos de SEQ ID NO: 2 o 4 (variantes alélicas de NT2LP) o sustitución, remoción, inserción de los residuos no críticos en regiones no criticas de la proteína. Variantes alélicas no funcionales son variantes de secuencias de aminoácidos que ocurren naturalmente de una proteína NT2LP de ser humano o de mono que no tienen la capacidad de enlazar ligando (como por ejemplo NT con receptores de NT) y/o de traslucir una señal dentro de una célula. Variantes alélicas funcionales contendrán típicamente una o varias sustituciones, remociones, inserciones o truncado prematuro de aminoácidos no conservadores de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 o 4 (variantes alélicas de NT2LP) o una sustitución, inserción o remoción en residuos críticos o regiones críticas. La presente invención ofrece además ortólogos no humanos o no de mono y no humanos de las proteínas NT2LP humana o de mono de la presente invención. Un ortólogo de una proteína NT2LP de ser humano o de mono es una proteína aislada a partir de un organismo no humano o no humano o no de mono y posee el mismo enlace de ligando (como por ejemplo NT para receptores de NT) y capacidades de señalización de la proteína NT2LP. Ortólogos de la proteína NT2LP pueden ser fácilmente identificados como comprendiendo una secuencia de aminoácidos sustancialmente homologa de SEQ ID NOS: 2 o 4 (ortólogos de NT2LP) . La presente invención sin embargo no abarca las proteínas NT2 conocidas de rata y ratón (ver sección de antecedentes) .

La proteína NT2LP es un GPCR que participa en las rutas de señalización dentro de la células que expresan NT2LP, particularmente células del cerebro. Como se emplea aquí, una ruta de señalización se refieren a la modulación (por ejemplo, estimulación o inhibición) de función llamada actividad celular al unirse un ligando con el GPCR (proteína NT2LP) , de manera similar al enlace de NT sobre receptores de NT. Ejemplos de tales funciones incluyen la movilización de moléculas intracelulares que participan en una ruta de transducción de señales, por ejemplo, fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato (PIP2), inositol 1, 4, 5-trifosfato (IP3) o bien adenilatciclasa; polarización de la membrana plasmática; producción o secreción de moléculas; alteración de la estructura de un componente celular; proliferación celular, por ejemplo, síntesis de ADN; migración celular; diferenciación celular; supervivencia celular; y transducción de una señal de dolor. Puesto que la proteína NT2LP es¡ expresada sustancialmente en el cerebro, ejemplos de células que participan en una ruta de señalización de NT2LP incluyen células neurales, por ejemplo, células del sistema nervioso periférico y del sistema nervioso central tales como células cerebrales, como por ejemplo células del sistema límbico, células del hipotálamo, células del hipocampo, células de laj sustancia negra, células de la corteza, células del talle-cerebral, células de la neocorteza, células de gangliones básales, células de putamen caudato, células de tubérculo^ olfactorio, células de gangliones de raíz dorsal, células dé gangliones trigeminales, células de gangliones sensoriales, células neuronales nociceptoras, o bien células de colículos superiores. Según el tipo de célula, la respuesta mediada por la proteína NT2LP puede ser diferente. Por ejemplo, en algunas células, el enlace de un ligando sobre una proteína NT2LP puede estimular una actividad como por ejemplo liberación de compuestos, control de abertura de un canal, adherencia celular, migración, diferenciación, etc., a través de metabolismo de fosfatidilinositol o AMP cíclico y cambio mientras en otras células, el enlace de un ligando sobre la proteína de NT2LP producirá un resultado diferente. Independientemente de la actividad/respuesta celular modulada por la proteína NT2LP, es universal que la proteína NT2LP es un GPCR e interactúa con "proteínas G" para producir una o varias señales secundarias en varias vías de transducción de señales intracelulares, por ejemplo, a través de metabolismo de fosfatidilinositol o bien AMP cíclico y cambio, canalización del calcio, etc., en una célula. Las proteínas G representan una familia de proteínas heterotriméricas compuestas de subunidades alfa, beta y gamma, que unen nucleótidos de guanina. Estas proteínas están habitualmente enlazadas a receptores en la superficie de la célula, por ejemplo, receptores que contienen siete dominio de transmembrana, como por ejemplo los receptores NT. Después del enlace del ligando sobre el receptor, un cambio conformacional es trasmitido a la proteína G, lo que provoca que la subunidad a intercambie una molécula GDP unida por una molécula GTP y se disocie de las subunidades ß?. La1 forma unida de GTP de la subunidad a funciona típicamente cómo una porción de modulación de efector, provocando la producción de segundos mensajeros como por ejemplo AMP cíclico' (por ejemplo, por activación de adenilatciclasa) , diacilgliderol o bien fosfato de inositol, o calcio. Más que 20 tipos diferentes de subunidades a se conocen en el ser humano, las cuales están asociadas con un conjunto más pequeño de subunidades ß y ?. Ejemplos de proteínas G de mamífero incluyen Gi, Go, Gq, Gs, y Gt . Las proteínas G se describen de manera extensa en Lodish H. et al. Molecular Cell Biology, (Scientific American Books Inc., New York, N.Y., 1995), cuyo contenido se incorpora aquí por referencia. Como se emplea aquí, la expresión "cambio y metabolismo de fosfatidilinositol" se refiere a las moléculas involucradas en el cambio y metabolismo fosfatidilinositol 4, 5-bisfosfato (PIP2) así como a las actividades de estas moléculas. PIP2 es un fosfolípido encontrado en la hoja citosólica de la membrana plasmática. La unión del ligando sobre NT2LP puede activar, en algunas células, la fosfolipasa C de enzima de membrana plasmática que a su vez puede hidrolizar PIP2 para producir 1, 2-diacilglicerol (DAG) e inositol 1, 4, 5-trifosfato (IP3) . Una vez formado, IP3 puede difundirse hacia la superficie del retículo endoplásmico donde puede enlazar un receptor de IP3, por ejemplo, una proteína de canal del calcio que contienen un sitio de enlace para IP3. El enlace de IP3 puede inducir la abertura del canal, permitiendo la liberación de iones calcio en el citoplasma. IP3 puede también fosforilado por una quinasa específica para formar inositol 1, 3, 4, 5-tetrafosfato (IP4), una molécula que puede provocar la penetración del calcio en el citoplasma a partir del medio extracelular. IP3 y IP4 puede ser subsecuentemente hidrolizados muy rápidamente en los productos inactivos inositol 1, 4-bifosfato (IP2) e inositol 1, 3, 4-trifosfato, respectivamente. Estos productos inactivos pueden se reciclados por la célula para sintetizar PIP2. El otro segundo mensaje reproducido por la hidrólisis de PIP2, es decir 1, 2-diacilglicerol (DAG) permanece en la membran celular en donde puede servir para activar la enzima proteína quinasa C. La proteína quinasa C se encuentra habitualmente soluble en el citoplasma de la célula, pero al incrementarse la concentración de calcio intracelular, esta enzima puede desplazarse hacia la membrana plasmática donde puede ser activada por DAG. La activación de la proteína quinasa C en diferentes células resulta en varias respuesta celulares tales como la fosforilación de glicogensintasa, o bien la fosforilación de varios factores de transcripción, por ejemplo, NF-Kb. La expresión "actividad fosfatidilinositol", como se emplea aquí, se refiere a una actividad de PIP2 o bien de uno de sus metabolitos. Otra ruta de señalización en la cual puede participar la proteína NT2LP es la ruta de cambio cAMP. Como se emplea aquí, "el cambio y metabolismo de AMP cíclico" se refiere a las moléculas involucradas en el cambio y metabolismo de AMP cíclico (cAMP) así como las actividades de estas moléculas. AMP cíclico es un segundo mensaje reproducido en respuesta a la estimulación inducida por ligando de ciertos receptores acopladazos a proteína G. En la ruta de señalización de cAMP, en enlace de un ligando sobre un GPCR, como por ejemplo NT sobre un receptor de NT, puede provocar la activación de la adenilatciclasa enzimática, lo que cataliza la síntesis de cAMP. cAMP recién catalizado puede a su vez activar una proteína quinasa dependiente de cAMP. Esta quinasa activada puede fosforilar una proteína de canal de potasio controlado por la tensión, o bien una proteína asociada, y provocar la incapacidad del canal del potasio a abrirse durante un potencial de acción. La incapacidad del canal de potasio en el sentido de abrirse resulta en una disminución del flujo hacia afuera del potasio, lo que repolariza normalmente la membrana de una neurona, provocando una despolarización de membrana prolongada. La presente invención ofrece además fragmentos de pr teína NT2LP. Como se emplea aquí, un fragmento comprende por lo menos 8 aminoácidos contiguos de una proteína NT2LP. Fragmentos preferidos son fragmentos que proseen una o varias de las actividades biológicas de la proteína NT2LP, por ejemplo, la capacidad de enlazarse con una proteína G o ligando, así como fragmentos que puede emplearse como inmunógeno para generar anticuerpos anti-NT2LP. Los fragmentos más preferidos son los únicos para NT2LP, en ausencia de cualquier otra proteína conocida. Fragmentos biológicamente activos de la proteína NT2LP incluyen péptidos que comprenden secuencias de aminoácidos derivados de la secuencia de aminoácidos de una proteína NT2LP, por ejemplo, la secuencia de aminoácidos ilustrada en SEQ ID NO: 2, o bien la secuencia de aminoácidos de una proteína homologa a la proteína NT2LP, que incluyen menos aminoácidos que la proteína NT2LP de longitud completa o bien la proteína de longitud completa que es homologa a la proteína NT2LP, y presentan por lo menos una actividad de proteína NT2LP. Típicamente, fragmentos biológicamente activos (péptidos, por ejemplo péptidos que tienen, por ejemplo, 5, 10, 15, 20, 30, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 50, 100 o más aminoácidos de longitud) comprenden un dominio o motivo, por ejemplo, un domino de transmembrana, dominios extracelulares múltiples, o bien de dominio de enlace de proteína G. Fragmentos preferidos incluyen, sin limitarse a ellos: 1) péptidos solubles de SEQ ID NO: 2 o 4; y 2) péptidos que comprenden el sitio de enlace de proteína G de una proteína NT2LP. La proteína NT2LP asilada puede ser purificada a partir de células que expresan naturalmente la proteína, purificada a partir de células que han sido alteradas para expresar la proteína NT2LP, o bien sintetizada empleando métodos conocidos de síntesis de proteína. De preferencia, como se describe a continuación la proteína NT2LP aislada es producida por técnicas de ADN recombinantes. Por ejemplo, una molécula de ácido nucleico que codifica la proteína es clonada en un vector de expresión, el vector de expresión es introducido en una célula huésped y la proteína NT2LP es expresada en la célula huésped. La proteína NT2LP puede ser aislada de las células mediante un esquema de purificación apropiado empleando técnicas estándares de purificación de proteína. Una alternativa a la expresión recombinante es que la proteína NT2LP o bien fragmento de la misma puede ser sintetizada químicamente empleando técnicas estándares de síntesis de péptidos. Finalmente, se puede aislar una proteína NT2LP nativa de células que expresan naturalmente la proteína NT2LP (por ejemplo, células de hipocampo, o bien células de sustancia negra) . La presente invención ofrece además proteína NT2LP quimérica o de fusión. Como se emplea aquí, una "proteína quimérica" de NT2LP o bien una "proteína de fusión" de NT2LP compre?de una proteína NT2LP unida operativamente a una proteína no- NT2LP. Una "proteína NT2LP" se refiere a una proteína que tienen una secuencia de aminoácidos que corresponde a una proteína NT2LP, mientras que una "proteína no- NT2LP" se refier a una proteína heteróloga que tiene una secuencia de aminoácidos que corresponde a una proteína que no es sustancialmente homologa a la proteína NT2LP, por ejemplo, una proteína que es diferente de la proteína NT2LP. Dentro del contexto de proteínas de fusión, el término "enlazada operativamente" tienen el propósito de indicar que la proteína NT2LP y al proteína no- NT2LP se fusionan en cuadro entre ellas. La proteína no- NT2LP puede ser fusionada sobre la terminal N o la terminal C de la proteína NT2LP. Por ejemplo, en una modalidad, la proteína de fusión es una proteína de fusión GST- NT2LP en donde la secuencia NT2LP se fusionan sobre la terminal C de las secuencias GST. Otros tipos de proteínas de fusión incluyen, sin limitarse a ellas, proteínas de fusión enzimáticas, por ejemplo, fusiones beta-galactosidasa, fusiones GAL de dos híbridos, fusiones poli-His y fusiones Ig. Tales proteínas de fusión, particularmente las fusiones poli-His, pueden facilitar la purificación de la proteína NT2LP recombinante. En otra modalidad, la proteína de fusión es una proteína NT2LP que contienen una secuencia de señal heteróloga en su terminal N. En ciertas células huéspedes (por ejemplo, células huéspedes de mamífero) la expresión y/o secreción de una proteína NT2LP puede ser incrementada mediante el uso de una secuencia de señal heteróloga. De preferencia, una proteína quimérica o de fusión NT2LP se produce por técnicas de ADN recombinante estándares . Por ejemplo, fragmentos de ADN que codifican para las diferentes secuencias de proteína se ligan entre ellos en cuadro de conformidad con técnicas convencionales, por ejemplo, mediante el empleo de terminales de extremos chatos o extremos escalonados para ligado, digestión por enzima de restricción para proporcionar termínales apropiadas, relleno de extremos cohesivos según lo apropiado, tratamiento con fosfatasa alcalina para evitar una unión indeseable, y ligado enzimático. En otra modalidad, el gen de fusión puede ser sintetizado por técnicas convencionales incluyendo sintetizadores de ADN automatizados. Alternativamente, se puede llevar a cabo una amplificación por reacción en cadena de polimerasa de fragmentos de gen empleando iniciadores de anclaje que formaran salientes complementarias entre dos fragmentos de gen consecutivos que pueden subsecuentemente fusionarse y reamplificarse para generar una secuencia de gen quimérica (ver, por ejemplo, Current Protocols in Molecular Biology (Protocolos Actuales en Biología Molecular), eds. Ausubel et al. John Wiley & Sons: 1992). Además, muchos vectores de expresión están disponibles en el comercio los cuales codifican ya una porción de fusión (por ejemplo, una proteína GST) . Un ácido nucleico que codifica NT2LP puede ser clonado en un vector de expresión de este tipo de tal manera que la porción de fusión es enlazada en cuadro sobre la proteína NT2LP. La presente invención ofrece también formas alteradas de proteína NT2LP que han sido generadas empleando métodos/agentes mutagénicos o bien ADN recombinante. Formas alteradas de una proteína NT2LP pueden ser generadas mediante mutagénesis, por ejemplo, mutación de punto discreto o truncado de la proteína NT2LP y método de ADN recombinante bien conocidos en la técnica. II. ANTICUERPOS QUE SE UNEN CON UNA PROTEÍNA NT2LP La presente invención ofrece además anticuerpos que se unen selectivamente con una proteína NT2LP. Como se emplea aquí, un anticuerpo se dice que se une selectivamente sobre una proteína NT2LP cuando el anticuerpo se une con una proteína NT2LP y no se une sustancialmente con proteínas no relacionadas. Un experto en la materia reconocerá fácilmente que un anticuerpo puede ser considerado como sustancialmente unido con una proteína NT2LP aun cuando se una con proteínas que comparten homología con un fragmento o dominio de la -- --' • - - " " — -- ' • -•- -*-- II l ii i -HH Mili II IÉ II proteína NT2LP. El término "anticuerpo" como se emplea aquí se refiere a moléculas de inmunoglobulina así como fragmentos inmunológicamente activos de moléculas de inmunoglobulina, es decir, moléculas que contienen un sitio de enlace de antígeno que se une específicamente (inmunoreacciona con) un antígeno, como por ejemplo una proteína NT2LP. Ejemplos de fragmentos inmunológicamente activos de moléculas de inmunoglqbulina incluyen fragmentos F(ab) y F(ab')2 que pueden ser generados mediante el tratamiento del anticuerpo con una enzima, como por ejemplo pepsina. La invención ofrece anticuerpos policlonales y monoclonales que se unen con una proteína NT2LP. El término "anticuerpo monoclonal" o bien "composición de anticuerpo monoclonal" como se emplea aquí, se refiere a una población de moléculas de anticuerpo que contienen solamente una especie de un sitio de enlace de antígeno capaz de inmunoreaccionar con un epítopo particular de una proteína NT2LP. Una composición de anticuerpo monoclonal presenta así típicamente una afinidad de enlace específica para una proteína NT2LP particular con la cual inmunoreacciona. Para generar anticuerpos anti-NT2LP, una proteína NT2LP aislada, o un fragmento de la misma, se emplea como inmunógeno para generar anticuerpos que se unen con NT2LP empleando técnicas estándares para preparación de anticuerpos policlonales y monoclonales. La proteína NT2LP de longitud completa puede emplearse o bien, alternativamente, se puede emplear un fragmento de péptido antigénico de NT2LP como inmunógeno. Un fragmento antigénico de la proteína NT2LP comprende típicamente por lo menos 8 residuos de aminoácidos contiguos de una proteína NT2LP, por ejemplo, 8 aminoácidos contiguos de SEQ ID Nos: 2 o 4. De preferencia, el péptido antigénico comprende por lo menos 10 residuos de aminoácidos, con mayor preferencia por lo menos 15 residuos de aminoácidos, con preferencia aun mayor por lo menos 20 residuos de aminoácidos, y especialmente por lo menos 30 residuos de aminoácidos de una proteína NT2LP. Fragmentos preferidos para la generación de anticuerpos anti-NT2LP son regiones de NT2LP que se localizan en la superficie de la proteína, por ejemplo, regiones hidrofílicas, y se identifican en la gráfica de antigenicidad proporcionada en la figura 3. Un inmunógeno de NT2LP típicamente se emplea para preparar anticuerpos mediante la inmunización de un sujetado adecuado, (por ejemplo, conejo, cabra, ratón o bien otro mamífero) con el inmunógeno. Una preparación inmunogénica apropiada puede contener, por ejemplo, una proteína NT2LP expresada recombinantemente o bien un péptido NT2LP químicamente sintetizado. La preparación puede incluir además un adyuvante, por ejemplo un adyuvante completo o incompleto de Freund, o bien un agente inmunoestimulatorio similar. La inmunización de un sujeto adecuado con una preparación de NT2LP inmunogénica induce una respuesta de anticuerpo anti-NT2LP policlonal. Anticuerpos anti-NT2LP policlonales pueden prepararse de conformidad con lo descrito arriba mediante la inmunización de un sujeto adecuado con un inmunógeno de péptido NT2LP. La titulación de anticuerpo anti-NT2LP en el sujeto inmunizado puede ser monitoreada con el paso del tiempo a través de técnicas estándares tales como un ensayo inmunoabsorbente enlazado con enzima (ELISA) empleando una proteína NT2LP inmovilizada. Si se desea, las moléculas de anticuerpo dirigidas contra la proteína NT2LP pueden ser aisladas a partir del mamífero (por ejemplo, a partir de la sangre) , y purificadas adicionalmente a través de técnicas bien conocidas, como por ejemplo cromatografía de proteína A para obtener la fracción de IgG. En un momento apropiado después de la inmunización, por ejemplo, cuando las titulaciones de anticuerpo anti-NT2LP son las más elevadas, se pueden obtener células que producen anticuerpos a partir del sujeto y se pueden emplear para preparar anticuerpos monoclonales a través de técnicas estándares como técnica de hibridoma originalmente descritas por Kohler y Milstein (1975) Nature 256:495-497) (ver también, Brown et al. (1980) J. Biol. Chem. 255:4980-83; Yeh et al. (1976) PNAS 76:2927-31; y Yeh et al. (1982) Int. J. Cáncer 29:269-75), la técnica de hibridoma de célula B humana más reciente (Kozbor et al., (1983) Immunol Today 4:72), la técnica de hibridoma de EBV (Colé et al. (1985), Monoclonal Antibodies and Cáncer Therapy, (anticuerpos monoclonales y terapia contra el cáncer) Alan R. Liss, Inc., páginas 77-96) o bien técnicas de trioma. La tecnología para la producción de hibridomas de anticuerpo monoclonal es bien conocido (ver generalmente R.H. Kenneth, en Monoclonal Antibodies: A New Dimensión In Biological Analices, (Anticuerpos monoclonales: una nueva dimensión en análisis biológicos), Plenum Publishing Corp., Nueva York, Nueva York (1980); E.A. Lerner (1981) Yale J. Biol. Med., 54:387 402; M.L. Gefter et al. (1977) Somatic Cell Genet. 3:231 36). Brevemente, una línea de células inmortales (típicamente un mieloma) es fusionada con linfocitos (típicamente esplenocitos) a partir de un mamífero inmunizado con un inmunógeno de NT2LP de conformidad con lo descrito arriba, y los sobrenadantes de cultivo de las células de hibridoma resultantes son tamizados para identificar un hibridoma que produce un anticuerpo monoclonal que se une con NT2LP. Cualesquiera de muchos protocolos bien conocidos empleados para la fusión de linfocitos y líneas de células inmortalizadas pueden aplicarse para el propósito de generar un anticuerpo monoclonal anti-NT2LP (ver, por ejemplo, G. Galfre et al. (1977) Nature 266:55052; Gefter et al. Somatic Cell Genet., citado arriba; Lerner, Yale J. Biol. Med., citado arriba; Kenneth, Monoclonal Antibodies, citado arriba) . Además, una persona con conocimientos normales1 en la materia observará que existen muchas variaciones de tales métodos que podrían también ser útiles. Típicamente, la línea de células inmortales (por ejemplo, una línea de células de mieloma) es derivada de las mismas especies de mamífero que los linfocitos. Por ejemplo, hibridomas de murino pueden elaborarse mediante la fusión de linfocitos a partir de un ratón inmunizado con una preparación inmunogénica de la presente invención con una línea de células de ratón inmortalizadas. Líneas de células inmortales preferidas son líneas de células de mieloma de ratón sensibles al medio de cultivo que contiene hipoxantina, aminopterina y timidina ("medio HET") . Cualesquiera de varias líneas de células de mieloma pueden emplearse como socio de fusión de conformidad con técnicas estándares, por ejemplo, las líneas de mieloma P3-NSl/l-Ag4-l, P3-x63-Ag8.653 o bien Sp2/0-Agl4. Estas líneas de mieloma están disponibles en ATCC. Típicamente, células de mieloma de ratón sensibles a HAT se fusionan sobre esplenocitos de ratón empleando polietilenglicol ("PEG") . Células de hibridoma que resultan de la fusión son después seleccionadas empleando medio HAT, que mata las células de mieloma no fusionadas y fusionadas de manera no productiva (los esplenocitos no fusionados mueren después de varios días porque no son transformados) . Las células de hibridoma que producen un anticuerpo monoclonal de la invención son detectados mediante el tamizado de los sobrenadantes de cultivo de hibridoma para determinar la presencia de anticuerpos que se unen con una proteína NT2LP, por ejemplo, empleando un ensayo ELISA estándar. De manera alternativa a la preparación de hibridomas que secretan anticuerpos monoclonales, se puede identificar y aislar un anticuerpo anti-NT2LP monoclonal mediante el tamizado de una biblioteca de inmunoglobulina combinatoria recombinante (por ejemplo, una biblioteca de presentación de fagos de anticuerpo) con una proteína NT2LP para aislar de esta forma miembros de la biblioteca de inmunoglobulina que se unen con NT2LP. Conjuntos de elementos para generar y tamizar bibliotecas que presentan fagos están comercialmente disponibles (por ejemplo, el Sistema de Anticuerpo de Fagos Recombinantes de Pharmacia, No. de catálogo 27-9400-01; y el conjunto de elementos de presentación de fagos SurfZAP® de Stratagene, No. de catálogo 240612). Además, ejemplos de métodos y reactivos particularmente adecuados para su uso en la generación y tamizado de bibliotecas de presentación de anticuerpos pueden encontrarse, por ejemplo, en Ladner et al., Patente Norteamericana No. 5,223,409; Kang et al., Publicación Internacional PCT No. WO 92/18619; Dower et al., Publicación Internacional PCT No. WO 91/17271; Winter et al., Publicación Internacional PCT No. WO 92/20791; Markland et al., Publicación Internacional PCT No. WO 92/15679; Breitling et al., Publicación Internacional PCT No. WO 93/01288; McCafferty et al., Publicación Internacional PCT No. WO 92/01047; Garrard et al. Publicación Internacional PCT No. WO 92/09690; Ladner et al., Publicación Internacional PCT No. WO 90/02809; Fuchs et al, (1991) Bio/Technology 9:1370-1372; Hay et al. (1992) Hum. Antibod. Hybridomas 3:81-85; Huse et al. (1989) Science 246:1275-1281; Griffiths et al. (1993) EMBO J 12:725-734; Hawkins et al. (1992) J. Mol. Biol. 226:889-896; Clarkson et al. (1991) Nature 352:624-628,- Gram et al. (1992) PNAS 89:3576-3580; Garrad et al. ,(1991) Bio/Technology 9:1373-1377; Hoogenboom et al., (1991J Nuc. Acid Res. 19:4133-4137; Barbas et al. (1991) PNAS 88:7978-7982; y McCafferty et al. Nature (1990) 348:552-554. Además, anticuerpos anti-NT2LP recombinantes, tales como anticuerpos monoclonales quiméricos y humanizados, que comprenden tanto fragmentos humanos como no humanos, que pueden elaborarse empleando técnicas de ADN recombinantes estándares, se encuentran dentro del alcance de la presente invención. Tales anticuerpos monoclonales quiméricos y humanizados pueden ser producidos por técnicas de ADN recombinante conocidas en la técnica, por ejemplo, empleando métodos descritos en Robinson et al., Solicitud Internacional PCT No. PCT/US86/02269; Akira, et al. Solicitud de Patente Europea 184,187; Taniguchi, M., Solicitud de Patente Europea 171,496; Morrison et al., Solicitud de Patente Europea 173,494; Neuberger et al., Publicación Internacional PCT No. WO 86/01533; Cabilly et al., Patente Norteamericana No. 4,816,567; Cabilly et al., Solicitud de Patente Europea 125,023; Better et al. (1988) Science 240:1041-1043; Liu et al. (1987) PNAS 84:3439-3443; Liu et al. (1987) J. I unol . 139:3521-3526; Sun et al. (1987) PNAS 84:214-218; Nishimura et al. (1987) Canc. Res. 47:999-1005; Wood et al. (1985) Nature 314:446-449; y Shaw et al. (1988) J. Nati. Cáncer Inst. 80:1553-1559); Morrison, S.L. (1985) Science 229:1202-1207; Oi et al. (1986) BioTechniques 4:214; Winter Patente Norteamericana 5,225,539; Jones et al. (1986) Nature 321:552-525; Verhoeyan et al. (1988) Science 239:1534; y Beidler et al. (1988) J. Immunol. 141:4053-4060. Anticuerpos totalmente humanos son particularmente deseables para el tratamiento terapéutico de pacientes humanos. Tales anticuerpos pueden ser producidos empleando ratones transgénicos incapaces de expresar genes de cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulina endógena, pero que pueden expresar genes de cadenas pesadas y ligeras humanas. Tales ratones transgénicos pueden ser inmunizados en forma normal con un antígeno seleccionado, por ejemplo, la totalidad o una parte de NT2LP. Anticuerpos monoclonales dirigidos contra el antígeno pueden ser obtenidos empleando tecnología de hibridoma convencional. Los transgenes de inmunoglobulina humana alojados por los ratones transgénicos se reorganizan durante la diferenciación de células B y se someten subsecuentemente a conmutación de clase y mutación somática. Así, empleando tales ratones, es posible producir anticuerpos IgG, IgA y IgE humanos terapéuticamente útiles. Para una reseña de esta tecnología para la producción de anticuerpos humanos, véanse Lonberg y Huszar (1995, Int. Rev. Immunol. 13:65-93). Para un comentario detallado en cuanto a esta tecnología para la producción de anticuerpos humanos y anticuerpos monoclonales humanos así como protocolos para la producción de anticuerpos de este tipo, véanse, por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 5,625,126; Patente Norteamericana 5,633,425; Patente Norteamericana 5,569,825; Patente Norteamericana 5,661,016; y Patente Norteamericana 5,545,806. Anticuerpos totalmente humanos que reconocen un epítopo seleccionado pueden ser generados empleando una técnica conocida como "selección guiada". En este enfoque, un anticuerpo monoclonal no humano seleccionado, por ejemplo, un anticuerpo de murino, se emplea para guiar la selección de un anticuerpo totalmente humano que reconoce el mismo epítopo. Primero, un anticuerpo monoclonal no humano que se une con un antígeno seleccionado (epítopo), como por ejemplo, un anticuerpo que inhibe la actividad de NT2LP, es identificado.

La cadena pesada y la cadena ligera del anticuerpo no ¡humano son clonadas y empleadas para crear fragmentos Fab de presentación de fagos. Por ejemplo, el gen de cadena pesada puede ser clonado en un vector de plásmido de tal manara que la cadena pesada pueda ser secretada a partir de bacterias. El gen de cadena ligera puede ser clonado en un gen de proteína de revestimiento de fagos de tal manera que la cadena ligera pueda ser expresada en la superficie del fago. Un repertorio (colección aleatoria) de cadenas ligeras humanas fusionadas sobre fagos se emplea para infectar bacterias que expresan la cadena pesada no humana. Los fagos de progenia resultantes presentan anticuerpos híbridos (cadena ligera humana/cadena pesada no humana) . El antígeno seleccionado se emplea en un tamizado para seleccionar fagos que se unen con el antígeno seleccionado. Varias rondas de selección pueden ser requeridas para identificar tales fagos. Después, se aislan genes humanos de cadena ligera a partir del fago seleccionado que se unen con el antígeno seleccionado. Estos genes humanos de cadena ligera seleccionados son después empleados para guiar la selección de genes de cadena humana pesados de la siguiente manera. Los genes humanos seleccionados de cadena ligera son insertados en vectores para la expresión por parte de bacterias. Las bacterias que expresan las cadenas ligeras humanas seleccionadas son infectadas con un repertorio de cadenas pesadas humanas fusionadas sobre fagos. Los fagos de progenia resultantes presentan anticuerpos humanos (cadena ¡ligera humana/cadena pesada humana) . Después, el antígeno seleccionado se emplea en un tamizado para seleccionar1 fagos que se unen con el antígeno seleccionado. El fago seleccionado en este paso presenta un anticuerpo totalmente humano que reconoce el mismo epítopo reconocido por el anticuerpo monoclonal no humano seleccionado original. Los genes que codifican tanto las cadenas pesadas como ligeras son fácilmente aislados y pueden ser manipulados adicionalmente para la producción de anticuerpos humanos. Esta tecnología es descrita por Jespers et al. (1994, Bio/technology 12:899-903). Un anticuerpo anti-NT2LP (por ejemplo, anticuerpo monoclonal) puede emplearse para aislar una proteína NT2LP a través de técnicas estándares, como por ejemplo cromatografía por afinidad o bien inmunoprecipitación. Un anticuerpo anti-NT2LP puede facilitar la purificación de una proteína NT2LP natural a partir de células y proteína NT2LP producida de manera re combinante expresada en células huéspedes. Además, un anticuerpo anti-NT2LP puede ser empleado para detectar una proteína NT2LP (por ejemplo, en un lisado celular o bien sobrenadante de células) con el objeto de evaluar la abundancia y patrón de expresión de la proteína NT2LP. Es importante observar que la detección de fragmentos circulantes de proteína NT2LP puede emplearse para identificar la rotación de proteína NT2LP en un sujeto. Anticuerpos anti-NT2LP pueden emplearse para propósitos de diagnóstico con el objeto de monitorear niveles de proteína en tejido como parte de un procedimiento de prueba clínica, por ejemplo, para determinar la eficacia de un régimen de tratamiento dado. La detección puede ser facilitada mediante el acoplamiento (es decir, el enlace físico) del anticuerpo con una sustancia detectable. Ejemplos de sustancias detectables incluyen varias enzimas, grupos protéticos, materiales fluorescentes, materiales luminiscentes, materiales bioluminiscentes así como materiales radioactivos. Ejemplos de enzimas adecuadas incluyen peroxidasa de rábano agrio, fosfatasa alcalina, (-galactosidasa, o bien acetilcolinesterasa; ejemplos de complejos de grupos protéticos adecuados incluyen estreptavidina/biotina y abidina/biotina; ejemplos de materiales fluorescentes adecuados incluyen umbeliferona, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, diclorotriazinilamina fluoresceína, cloruro de dansilo o bien ficoeritrina; un ejemplo de un material luminiscente incluyen luminol; ejemplos de materiales bioluminiscentes incluyen luciferaza, luciferina y aecuorina, y ejemplos de material radioactivo adecuado incluyen 125I, 131I, 35S o bien 3H. III. MOLÉCULAS DE ÁCIDO NUCLEICO DE NT2LP AISLADAS tfeflMt^^^M La presente invención ofrece además moléculas de ácido nucleico aisladas que codifican una proteína NT2LP, a continuación el gen NT2LP o bien molécula de ácido nucleico de NT2LP, así co o fragmentos de un gen NT2LP. Como se emplea aquí, el término "molécula de ácido nucleico" incluye moléculas de ADN (por ejemplo, ADNc o bien ADN genómico) y moléculas de ARN (por ejemplo, ARNm) y análogos de ADN o ARN generado empleando análogos de nucleótidos. La molécula de ácido nucleico puede ser de cadena única o bien de cadena doble, pero de preferencia es ADN de cadena doble. Como se emplea aquí, una molécula de ácido nucleico "aislada" es una molécula de ácido nucleico separada de otras moléculas de ácido nucleico presentes en la fuente natural del ácido nucleico. De preferencia, un ácido nucleico "aislado" está libre de secuencias que flanquean naturalmente el ácido nucleico (es decir, las secuencias ubicadas en los extremos 5' y 3' del ácido nucleico) en el ADN genómico del organismo a partir del cual se deriva el ácido nucleico. Por ejemplo, en varias modalidades, la molécula de ácido nucleico de NT2LP aislada puede contener menos que aproximadamente 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0.5 kb o bien 0.1 kb de secuencias de nucleótidos que flanquean naturalmente la molécula de ácido nucleico en ADN genómico de la célula a partir de la cual se deriva el ácido nucleico (por ejemplo, una célula de MW|i_MariH_b_^_>Mk>i^*rtMttta^M.^^M^^^W*a sustancia negra) . Además, una molécula de ácido nucleico "aislada" como por ejemplo una molécula de ADNc, puede estar sustancialmente libre de otro material celular, o bien medio de cultivo cuando se produce por técnicas recombinantes, o bien precursores químicos o bien otros agentes químicos cuando se sintetiza químicamente. Sin embargo, la molécula de ácido nucleico de NT2LP puede ser fusionada sobre otras secuencias regulatorias o de codificación de proteína y seguir considerándose como aislada. Las moléculas de ácido nucleico aisladas de la presente invención codifican una proteína NT2LP. Como se describió arriba, una proteína NT2LP se define como una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos ilustrada en SEQ ID NO: 2 (proteína NT2LP de mono) o bien SEQ ID NO: 4 (proteína NT2LP de ser humano) , variantes alélicas de proteína NT2LP de ser humano o de mono, así como ortólogos de la proteína NT2LP de ser humano o de mono. Una molécula de ácido nucleico de NT2LP preferida comprende la secuencia de nucleótidos ilustrada en SEQ ID Nos:l o bien 3. La secuencia de SEQ ID NO:l corresponde al ADNc de NT2LP de mono. La secuencia de SEQ ID NO: 3 corresponde al ADNc de NT2LP de ser humano. Este ADNc comprende secuencias que codifican la proteína NT2LP de ser humano (es decir, la "región de codificación", codones de inicio y suspensión ilustrados en las figuras 1 y 2), así como las secuencias no trasladadas 5' y las secuencias no t*. trasladadas 3' (ver figuras 1 y 2) . Dos formas del ADNc de NT2LP humano han sido encontrados, aun cuando ambos tienen la misma región de codificación predicha. La diferencia entre las dos formas es el resultado de un empalme diferencial en la UTR de 5'. La secuencia de aminoácidos de NT2LP de ser humano aparece en la figura 2. La proteína NT2LP de ser humano es expresada primariamente en el cerebro y los ovarios. Una forma de ADNc de NT2LP de mono parcial se ha encontrado. La secuencia de aminoácidos de NT2LP de mono aparece en la figura 1. La proteína NT2LP de mono es expresada primariamente en el cerebro y en los ovarios. La invención abarca además moléculas de ácido nucleico que difieren de la secuencia de nucleótidos ilustrada en SEQ ID Nos: 1 y 3 (NT2LP) (y fragmentos de la misma) debido a la degeneración del código genético y por consiguiente codifican la misma proteína NT2LP que la proteína codificada por la secuencia de nucleótidos presentada en SEQ ID Nos: 1 y 3. En otra modalidad preferida, una molécula de ácido nucleico aislada de la presente invención comprende una molécula de ácido nucleico que es un complemento de la secuencia de nucleótidos ilustrada en SEQ ID Nos: 1 o 3 o un fragmento de cualesquiera de estas secuencias de nucleótidos. Una molécula de ácido nucleico complementaria de la secuencia de nucleótidos ilustrada en SEQ ID Nos: 1 o 3 es una molécula suficientemente complementaria de la secuencia de nucleótidos ilustrada en SEQ ID Nos: 1 o 3 de tal manera que! pueda hibridarse sobre la secuencia de nucleótidos ilustrada en SEQ ID Nos: 1 o bien 3; formando así un dúplex estable. Ortólogos y variantes alélicas del gen NT2LP de ser humano o mono pueden ser identificados fácilmente empleando métodos bien conocidos en la técnica. Variantes alélicas y ortólogos del gen NT2LP de ser humano o mono comprenden una secuencia de nucleótidos que es por lo menos aproximadamente 60-65%, típicamente por lo menos aproximadamente 70-75%, más típicamente por lo menos aproximadamente 80-85%, y especialmente por lo menos aproximadamente 90-95% o más homologa con la secuencia de nucleótidos mostrada en SEQ ID Nos: 1 o bien 3 o un fragmento de estas secuencias de nucleótidos. Tales moléculas de ácido nucleico pueden ser fácilmente identificadas como capaces de hibridarse, de preferencia en condiciones estrictas, con la secuencia de nucleótidos ilustrada en SEQ ID Nos: 1 o bien 3 o un fragmento de cualesquiera de estas secuencias de nucleótidos. Además, la molécula de ácido nucleico de la presente invención puede comprender solamente un fragmento de la región de codificación de un gen NT2LP, como por ejemplo un fragmento de SEQ ID Nos: 1 o 3. La secuencia de nucleótidos determinada a partir de la clonación del gen NT2LP de ser humano o de mono permite la generación de sondas e iniciadores diseñados para su uso en la identificación y/o clonación de homólogos de gen NT2LP a partir de otros tipos de células, por ejemplo, a partir de otros tejidos, así como ortólogos de gen NT2LP a partir de otros mamíferos. Una sonda/iniciador comprende típicamente oligonucleótido sustancialmente purificado. El oligonucleótido comprende típicamente una región de secuencia de nucleótido que se híbrida en condiciones estrictas con por lo menos aproximadamente 12, de preferencia aproximadamente 25, con mayor preferencia aproximadamente 40, 50 o 75 nucleótidos consecutivos de SEQ ID Nos: 1 o 3 de sentido, una seauencia de antisentido de SEQ ID Nos: 1 o 3, o bien mutantes que ocurren naturalmente de los mismos. Iniciadores basados en la secuencia de nucleótidos en SEQ ID Nos: 1 o bien 3 pueden emplearse en reacciones en cadena de polimerasa para clonar homólogos de gen NT2LP. Sondas basadas en la secuencia de nucleótidos de NT2LP pueden emplearse para detectar transcritos o secuencias genómicas que codifican las mismas proteínas o bien proteínas homologas. En modalidades preferidas, la sonda comprende además un grupo de marcador fijada ahí, por ejemplo, el grupo de marcador puede ser un radioisótopo, un compuesto fluorescente, una enzima o bien un co-factor de enzima. Tales sondas pueden emplearse como parte de un conjunto de elementos de prueba de diagnóstico para identificar células o tejidos que expresan erróneamente una proteína NT2LP, como por ejemplo mediante la medición de un nivel de ácido nucleico que codifica NT2LP en una muestra de células a partir de un sujeto, por ejemplo, detectando niveles de NT2LP o bien ARNm de NT2LP o bien determinando si un gen NT2LP genómico ha sido mutado o removido. Además de la secuencia de nucleótidos de NT2LP ilustrada en SEQ ID Nos: 1 o 3, se observará por parte de un experto en la materia que polimorfismos de secuencia de ADN que llevan a cambios en las secuencias de aminoácidos de una proteína NT2LP pueden existir dentro de una población (por ejemplo, la población de seres humanos o de monos) . Tal polimorfismo genético en el gen NT2LP puede existir entre individuos dentro de una población debido a variación alélica natural. Como se emplean aquí, los términos "gen" y "gen recombinante" se refieren a moléculas de ácido nucleico que comprenden un cuadro de lectura abierta que codifica una proteína NT2LP, de preferencia una proteína NT2LP de mamífero. Tales variaciones alélicas naturales pueden resultar típicamente en una variación de 1-5% en la secuencia de nucleótidos del gen NT2LP. Todas y cada una de estas variaciones de nucleótidos y polimorfismos de aminoácidos resultantes en un gen NT2LP que son el resultado de una variación alélica natural se encuentran dentro del alcance de la presente invención. Dicha variación alélica incluye tanto variantes alélicas activas como variantes alélicas no activas o bien con actividad reducida, los últimos dos tipos crean típicamente un trastorno patológico. Además, moléculas de ácido nucleico que codifican una proteína NT2LP a partir de otras especies, y que tienen una secuencia de nucleótidos que difiere de la 5 secuencia de ser humano o de mono de SEQ ID Nos: 1 o bien 3, se encuentran dentro del alcance de la presente invención. Moléculas de ácido nucleico que corresponden a variantes alélicas naturales y ortólogos no humanos o no de mono del ADNc de NT2LP de ser humano o de mono de la invención pueden aislarse con base en su homología con el ácido nucleico de NT2LP de ser humano o de mono divulgado aquí empleando ADNc de ser humano o de mono, o bien un fragmento del mismo, como sonda de hibridación de conformidad con técnicas estándares de hibridación bajo condiciones de hibridación estrictas. 15 Por consiguiente, en otra modalidad, una molécula de ácido nucleico aislada de la presente invención tiene por lo menos 15 nucleótidos de longitud y se híbrida bajo condiciones estrictas con la molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID Nos: 1 o bien 3. En otras modalidades, el ácido nucleico tiene por lo menos 30, 50, 100, 250 o 500 nucleótidos de longitud. En otra modalidad preferida, el fragmento de gen NT2LP codifica el dominio extracelular, uno o varios de los dominios de transmembrana o bien uno o varios de los dominios intracelulares de una proteína NT2LP. Como se emplea aquí, el término "se híbrida bajo condiciones estrictas" tiene el propósito de describir condiciones para hibridación y lavado en las cuales secuencias de nucleótidos por lo menos 60% idénticas entre ellas permanecen típicamente hibridadas entre ellas. De preferencia, las condiciones son tales que secuencias por lo menos aproximadamente 65%, de preferencia por lo menos aproximadamente 70%, y con preferencia aún mayor por lo menos aproximadamente 75% o más idénticas entre ellas permanecen típicamente hibridadas entre ellas. Tales condiciones estrictas son conocidas por parte de los expertos en la materia y pueden encontrarse en Current Protocols in Molecular Biology (Protocolos Actuales en Biología Molecular), John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. Un ejemplo preferido, no limitativo de condiciones estrictas de hibridación son hibridación en 6X cloruro de sodio/citrato de sodio (SSC) a una temperatura de aproximadamente 45°C, seguido por uno o varios lavados en 0.2 X SSC, 0.1% SDS a una temperatura de 50-65°C. De preferencia, una molécula de ácido nucleico aislada de la presente invención que se híbrida en condiciones estrictas con la secuencia de SEQ ID Nos: 1 o bien 3 corresponde a una molécula de ácido nucleico que ocurre naturalmente. Como se emplea aquí, una molécula de ácido nucleico "que ocurre naturalmente" se refiere a una molécula de ARN o ADN que tiene una secuencia de nucleótidos que ocurre en la naturaleza (por ejemplo, que codifica una proteína natural) . En una modalidad, el ácido nucleico codifica una proteína NT2LP de ser humano o de mono natural.

Además de variantes alélicas que ocurren naturalmente de la secuencia de ácido nucleico de NT2LP que pueden existir en la población, el experto en la materia observará además que cambios pueden ser introducidos por mutación en la secuencia de nucleótidos de SEQ ID Nos: 1 o 3, llevando así a cambios en la secuencia de aminoácidos de la proteína NT2LP codificada, sin alterar la capacidad funcional de la proteína NT2LP. Por ejemplo, sustituciones de nucleótidos que llevan a sustituciones de aminoácidos en residuos de aminoácidos "no esenciales" pueden efectuarse en la secuencia de SEQ ID No.: 2. Un residuo de aminoácido "no esencial" es un residuo que puede ser alterado a partir de la secuencia de tipo salvaje de una proteína NT2LP (por ejemplo, la secuencia de SEQ ID NO: 2) sin alterar la actividad de NT2LP, mientras que un residuo de aminoácido "esencial" se requiere para la actividad de proteína NT2LP. Por ejemplo, residuos de aminoácidos conservados, por ejemplo, aspartatos, prolinas, treoninas y tirosinas, en el dominio de transmembrana de la proteína NT2LP son más probablemente importantes para enlace con ligando y por consiguiente son residuos esenciales de la proteína NT2LP. Otros residuos de aminoácidos, sin embargo, (por ejemplo, los residuos no conservados o bien solamente semi-conservados en el dominio de transmembrana) pueden no ser esenciales para la actividad y por consiguiente es probable que puedan presentar alteraciones sin alterar la actividad de proteína NT2LP. Por consiguiente, otro aspecto de la invención se refiere a moléculas de ácido nucleico que codifican una proteína NT2LP que contiene cambios en residuos de aminoácidos que no son esenciales para la actividad NT2LP. Tal proteína NT2LP difiere en cuanto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID No: 2 o 4 y sin embargo conserva por lo menos una de las actividades NT2LP descritas aquí. En una modalidad, la molécula de ácido nucleico aislada comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína, donde la proteína comprende una secuencia de aminoácidos por lo menos aproximadamente 30-35%, de preferencia por lo menos aproximadamente 40-45%, con mayor preferencia aproximadamente 50-55%, con preferencia aún mayor por lo menos aproximadamente 60-65%, de preferencia todavía mayor aproximadamente 70-75%, de preferencia aún mayor por lo menos aproximadamente 80-85%, y especialmente por lo menos aproximadamente 90-95% o más homologa con la secuencia de aminoácidos SEQ ID Nos.: 2 o 4. Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica una proteína NT2LP homologa a la proteína de SEQ ID Nos.: 2 o 4 puede crearse mediante la introducción de una o varias sustituciones de nucleótidos, adiciones o remociones en la -»*-*««-secuencia de nucleótidos de SEQ ID Nos.: 1 o 3, de tal manera que una o varias sustituciones de aminoácidos, adiciones o remociones se introduzcan en la proteína codificada. Se pueden introducir mutaciones en SEQ ID Nos.: 1 o 3 por técnicas estándares tales como mutagénesis dirigida por sitio y mutagénesis mediada por reacción en cadena de polimerasa. De preferencia, sustituciones de aminoácidos conservadores se efectúan en uno o varios residuos de aminoácido no esenciales predichos. Una "sustitución de aminoácido conservadora" es una sustitución en la cuál el residuo de aminoácido es remplazado por un residuo de aminoácido que tiene una cadena lateral similar. Familias de residuos de aminoácidos que tienen cadenas laterales similares han sido definidas en la técnica. Estas familias incluyen aminoácidos con cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina) , cadenas laterales cidas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico) , cadenas laterales polares no cargadas (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteina) , cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano) , cadenas laterales ramificadas beta (por ejemplo, treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptófano, histidina) . Así, un residuo de aminoácido no esencial predicho en NT2LP es remplazado de preferencia por otro residuo de aminoácido de la misma familia de cadena lateral. Alternativamente, en otra modalidad, se pueden introducir mutaciones de manera aleatoria a lo largo de la totalidad o de una parte de una secuencia de codificación de NT2LP, como por ejemplo mediante mutagénesis de saturación, y los mutantes resultantes pueden ser tamizados para una actividad NT2LP descrita aquí para identificar mutantes que conservan la actividad NT2LP. Después de la mutagénesis de SEQ ID Nos.: 1 o 3, la proteína codificada puede ser expresada de manera recombinante (por ejemplo, de conformidad con lo descrito en los ejemplos 3 y 4) y la actividad de la proteína puede ser determinada empleando, por ejemplo, ensayos descritos aquí. Además de las moléculas de ácido nucleico que codifican proteína NT2LP descritas arriba, otro aspecto de la presente invención se refiere a moléculas de ácido nucleico aisladas que son de antisentido. Un ácido nucleico de "antisentido" comprende una secuencia de nucleótidos que es complementaria de un ácido nucleico de "sentido" que codifica una proteína, por ejemplo, complementaria a la cadena de codificación de una molécula de ADNc de doble cadena o bien complementaria de una secuencia de ARNm. Por consiguiente, una molécula de ácido nucleico de antisentido puede tener enlace de hidrógeno con un ácido nucleico de sentido. El ácido nucleico de antisentido puede ser complementario de una cadena de t?t ¿ ^a ¡?t¡i^ d^HMt^aiMME^Íál.MaÍlM^H codificación de NT2LP entera, o bien solamente de un fragmento de la misma. En una modalidad, una molécula de ácido nucleico de antisentido es de antisentido para una "región de codificación" de la cadena de codificación de una 5 secuencia de nucleótidos que codifica una proteína NT2LP. El término "región de codificación" se refiere a la región de la secuencia de nucleótidos que comprende codones que son trasladados en residuo de aminoácido, por ejemplo, la región de codificación entera de SEQ ID Nos.: 1 o 3 ilustrada en las figuras 1 y 2. En otra modalidad, la molécula de ácido nucleico es de antisentido para una "región no codificadora" de la cadena de codificación de una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína NT2LP. El término "región no codificadora" se refiere a las secuencias 5' y 3' que flanquean la región de codificación que no son trasladadas en aminoácidos (es decir, se conocen también como regiones no trasladadas 5' y 3') . Dada la secuencia de cadena de codificación que codifica la proteína NT2LP, ácidos nucleicos de antisentido de la presente invención pueden diseñarse de conformidad con las reglas de apareamiento de bases de Watson y Crick. La molécula de ácido nucleico de antisentido puede ser complementaria para toda la región de codificación de ARNm de NT2LP, pero se prefiere que sea un oligonucleótido que de antisentido solamente para un fragmento de la región de •auutdb aiud m^á? ?^ ^^^Um? codificación o no codificación de ARNm de NT2LP. Por ej,emplo, el oligonucleótido de antisentido puede ser complementario de una región que rodea el sitio de inicio de traslación de ARNm de NT2LP. Un oligonucleótido de antisentido puede tener, por ejemplo, aproximadamente 5,10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 o 50 nucleótidos de longitud. Un ácido nucleico de antisentido de la invención puede construirse empleando síntesis química así como reacciones de ligación enzimáticas empleando procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, un ácido nucleico de antisentido (por ejemplo, un oligonucleótido de antisentido) puede ser sintetizado químicamente empleando nucleótidos que ocurren naturalmente o bien nucleótidos modificados de manera variada diseñados para incrementar la estabilidad biológica de las moléculas o bien para incrementar la estabilidad física del dúplex formado entre los ácidos nucleicos de antisentido y sentido, por ejemplo, derivados de fosforotioato así como nucleótidos sustituidos por acridina pueden emplearse. Ejemplos de nucleótidos modificados que pueden emplearse para generar el ácido nucleico de antisentido incluyen 5-fluorouracilo, 5-bromouracilo, 5-clorouracilo, 5-yodouracilo, hipoxantina, xantina, 4-acetilcitosina, 5- (carboxihidroxilmetil) uracilo, 5-carboximetilaminometil-2-tiouridina, 5-carboximetilaminometiluracilo, dihidrouracilo, beta-D-galactosilqueosina, inosina, N6-isopenteniladenina, 1-metilguanina, 1-metilinosina, 2, 2-dimetilguanina, 2-metiladenina, 2-metilguanina, 3-metilcitosma, 5-metilcitosina, N6-adenina, 7-metilguanina, 5-metilaminómetiluracilo, 5-metoxiaminometil-2-tiouracilo, beta-D-manosilqueosina, 5' -metoxicarboximetiluracilo, 5-metoxiuracilo, 2-metiltio-N6-isopenteniladenina, ácido uracil-5-oxiacético (v) , vibutoxosina, pseudouracilo, queosina, 2-tiocitosina, 5-metil-2-tiouracilo, 2-tiouracilo, 4-tiouracilo, 5-metiluracilo, metiléster de ácido uracil-5-oxiacético, ácido uracil-5-oxiacético (v) , 5-metil-2-tiouracilo, 3- (3-amino-3-N-2-carboxipropil) uracilo, (acp3)w, y 2, 6-diaminopurina. Alternativamente, el ácido nucleico de antisentido puede ser producido de manera biológica empleando en un vector de expresión en el cual un ácido nucleico ha sido subclonado en una orientación de antisentido (es decir, ARN transcrito a partir del ácido nucleico insertado será de una orientación de antisentido para un ácido nucleico blanco de interés, lo que describe adicionalmente en la sub-sección siguiente) . Las moléculas de ácido nucleico de antisentido de la presente invención se administran típicamente a un sujeto o se generan in situ de tal manera que se hibriden con ARNm celular y/o ADN genómico que codifica una proteína NT2LP o bien que se unan con dicho ARNm celular y/o ADN genómico que codifica una proteína NT2LP con el objeto de inhibir de esta forma la expresión de la proteína, por ejemplo, mediante la inhibición de la transcripción y/o traslación. La hibridación puede efectuarse por complementariedad de nucleótidos convencional para formar un dúplex estable, o bien, por ejemplo, en el caso de una molécula de ácido nucleico de antisentido que se une con duplexes de ADN, mediante interacciones específicas en la ranura principal de la doble hélice. Un ejemplo de una vía de administración de una molécula de ácido nucleico de antisentido de la presente invención incluye una inyección directa en el sitio del tejido. Alternativamente, se puede modificar una molécula de ácido nucleico de antisentido para enfocar células seleccionadas y después se puede administrar de manera sistémica. Por ejemplo, para la administración sistémica, se puede modificar una molécula de antisentido de tal manera que se una específicamente a un receptor o un antígeno expresado en una superficie de célula seleccionada, por ejemplo, mediante enlace de la molécula de ácido nucleico de antisentido con un péptido o bien un anticuerpo que se une sobre un receptor e superficie celular o bien antígeno. La molécula de ácido nucleico de antisentido puede también ser administrada a células usando los vectores descritos aquí. Para lograr concentraciones intracelulares suficientes de las moléculas de antisentido, constructos de vectores en donde la molécula de ácido nucleico de antisentido se coloca bajo el control de un promotor pol II o pol III fuerte se prefieren.

En otra modalidad, la molécula de ácido nucleico de antisentido de la presente invención es una molécula de ácido nucleico anomérico forma híbridos de doble cadena específicos con ARN complementario en donde, a diferencia de las unidades habituales, las cadenas están paralelas entre ellas (Gaultier et al. (1987) Nucleic Acids. Res. 15:6625-6641). La molécula de ácido nucleico de antisentido puede comprender también un 2'-o-metilribonucleótido (Inoue et al. (1978) Nucleic Acids Res. 15:6131-6148) o bien un análogo quimérico de ARN-ADN (Inoue et al. (1987) FEBS Let. 215:327-330). En otra modalidad, un ácido nucleico de antisentido de la invención es una ribozima. Las ribozimas son moléculas de ARN catalíticas con actividad ribonucleasa que son capaces de disociar un ácido nucleico de cadena única, por ejemplo un ARNm, con el cuál tienen una región complementaria. Así, ribozimas (por ejemplo, ribozimas de cabeza de martillo (descritas en Haselhoff y Gerlach (1988) Nature 334:585-591)) pueden emplearse para disociar catalíticamente transcriptos de ARNm de NT2LP para inhibir de esta forma la traslación de ARNm de NT2LP. Una ribozima que tiene especificidad para un ácido nucleico que modifica a NT2LP puede ser diseñada con base en la secuencia de nucleótidos de un ADNc de NT2LP divulgado aquí (es decir, se SEQ ID Nos.: 1 o 3) . Por ejemplo, un derivado de ARN de Tetrahimena L-19 IVS puede ser construido en donde la secuencia de nucleótidos del sitio activo es complementario de la secuencia de nucleótidos a disociar en un ARNm que codifica a NT2LP. Véase, por ejemplo, Cech et al. Patente Norteamericana No. 4,987,071 y Cech et al. Patente Norteamérica No. 5,116,742. Alternativamente, ARNm de NT2LP puede emplearse para seleccionar un ARN catalítico que tiene una actividad ribonucleasa específica a partir de un conjunto de moléculas de ARN. Véase, por ejemplo, Bartel, D. y Szostak, J.W. (1993) Science 261:1411-1418. Alternativamente, la expresión de gen NT2LP puede ser inhibida mediante el enfoque de secuencias de nucleótidos complementarios de la región de regulación del gen NT2LP (por ejemplo, el promotor y/o realzadores de gen NT2LP) para formar estructuras helicoidales triples que evitan la transcripción del gen NT2LP en células blanco. Véanse, por ejemplo, Helen, C. (1991) Anticancer Drug Des. 6 ( 6) : 5'69-84; Helene, C. et al. (1992) Ann. N.Y. Acad. Sci. 660:27-36; y Maher, L.J (1992) Bioassays 14 (12) : 807-15. IV. VECTORES DE EXPRESIÓN RECOMBINANTE Y CÉLULAS HUÉSPEDES Otro aspecto de la presente invención se refiere a vectores, de preferencia a vectores de expresión, que contiene un ácido nucleico que codifica una proteína NT2LP (o un fragmento de la misma) . Como se empleó aquí, el término "vector" se refiere a una molécula de ácido nucleico capaz de transportar otro ácido nucleico al cual está enlazado. Un tipo de vectores es "plásmido", lo que se refiere a un bucle de ADN de doble cadena circular en el cual se pueden ligar segmentos de ADN adicionales. Otro tipo de vector es un vector viral, donde segmentos adicionales de ADN pueden ser ligados en el genoma viral. Algunos vectores son capaces de replicación autónoma en una célula huésped en la cuál son introducidos (por ejemplo, vectores bacterianos que tienen un origen bacteriano de replicación y vectores de mamífero episomales) . Otros vectores (por ejemplo, vectores de mamífero no episomales) están integrados en el genoma de una célula huésped al introducirse en la célula huésped, y por consiguiente se replican junto con el genoma huésped. Además ciertos vectores pueden dirigir la expresión de genes a los cuales están operativamente unidos. Tales vectores se conocen aquí como "vectores de expresión". En general, vectores de expresión útiles en técnicas de ADN recombinante se encuentran frecuentemente en forma de plásmidos. En la presente especificación, "plásmidos" y "vector" pueden emplearse de manera intercambiable puesto que el plásmido es la forma más comúnmente empleada de vector. Sin embargo, la invención incluye otra formas de vectores de expresión, tales como vectores virales (por ejemplo, retrovirus de replicación defectuosos, adenovirus y virus asociados con adeno) , que sirven funciones equivalentes. Los vectores de expresión recombinante de la presente invención comprenden un ácido nucleico de la invención en forma adecuada para expresión del ácido nucleico en la célula huésped, lo que significa que los vectores de expresión recombinante incluyen una o varias secuencias regulatorias seleccionadas con base en las células huéspedes a emplear para expresión que es unido operativamente con la sec encia de ácido nucleico a expresar. Dentro de un vector de expresión recombinante, la expresión "enlazado operativamente" significa que la secuencia de nucleótidos de interés se encuentra enlazada a la(s) secuencia (s) regulatoria (s) de tal manera que permite la expresión de la secuencia de nucleótidos (por ejemplo, en un sistema de transcripción/traslación in vitro o bien en una célula huésped cuando el vector es introducido en la célula huésped) . El término "secuencia regulatoria" tiene el propósito de incluir promotores, realzadores y otros elementos de control de expresión (por ejemplo, señales de poliadenilación) . Tales secuencias regulatorias se describen, por ejemplo, en Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology (Tecnología de Expresión de Genes: Métodos en Enzimología) 185, Academic Press, San Diego, CA (1990) . Secuencias regulatorias incluyen las secuencias que dirigen la expresión constitutiva de una secuencia de nucleótidos en muchos tipos de célula huésped y las que dirigen la expresión de la secuencia de nucleótidos solamente en ciertas células -> » huéspedes (por ejemplo, secuencias regulatorias específicas para tejido) . Se observará por parte de los expertos en la materia que el diseño del vector de expresión puede d pender de factores tales como la elección de la célula huésped a transformar, el nivel de expresión de proteína deseadaí, etc. Los vectores de expresión de la presente invención pueden ser introducidos en células huéspedes para producir de esta forma proteínas o péptidos, incluyendo proteínas de fusión o péptidos de fusión, codificados por ácidos nucleicos de conformidad con lo descrito aquí (por ejemplo, una pr'oteína NT2LP, formas alteradas de proteína NT2LP, proteínas de fusión y similares) . Los vectores de expresión recombinante de la presente invención pueden ser diseñados para la expresión de una proteína NT2LP, o fragmentos de la misma, en células procarióticas o eucarióticas. Por ejemplo, una proteína NT2LP puede ser expresado en células bacterianas tales como E. coli, células de insecto (por ejemplo, empleando vectores de expresión de baculovirus) , células de levadura o células de mamífero. Células huéspedes afectadas se comentan con mayores de talles en Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology (Tecnología de Expresión Genética: Métodos en Enzimología) 185, Academic Press, San Diego, CA (1990) . Alternativamente, el vector de expresión recombinante puede ser transcrito o trasladado in vitro, por ejemplo, empleando secuencias regulatorias de promotor T7 y T7 polimerasa. La expresión de proteínas en procariotas se efectúa más frecuentemente en E. coli con vectores que contienen promotores constitutivos o inducibles que dirigen la expresión de proteínas de fusión o bien de proteínas de no fusión. Vectores de fusión agregan un cierto número de aminoácidos a una proteína modificada ahí, habitualmente en la terminal amino de la proteína recombinante. Tales veótores de fusión sirven típicamente tres funciones: 1) incrementar la expresión de proteína recombinante; 2) incrementar la solubilidad de la proteína recombinante; y 3) ay dar a purificar la proteína recombinante actuando como ligando en purificación por afinidad. Frecuentemente, en vectores de expresión de fusión, se introduce un sitio de disociación proteolítica en la unión de la porción de fusión y de la proteína recombinante para permitir la separación de la proteína recombinante de la porción de fusión después de la purificación de la proteína de fusión. Tales enzimas y sus secuencias de reconocimiento cognadas, incluyen factor Xa, trombina y enteroquinasa. Vectores de expresión de fusión típicos incluyen pGEX (Pharmacia Biotech Inc; Smith, D.B. and Johnson; K.S. (1988) Gene 67:31-40=, pMAL (New England Biolabs, Beverly, MA) y pRIT5 (Pharmacia, Piscataway, NJ) que fusionan glutation S-transferasa (GST) , proteína de enlace de maltosa E, o bien proteína A, respectivamente, sobre la proteína recombinante blanco. En una modalidad, la secuencia de codificación del gen NT2LP es clonada en un vector de expresión pGEX para crear un vector que codifica una proteína de fusión que comprende, desde el extremo N hasta el extremo C, proteína NT2LP de sitio de disociación GST-trombina. La proteína de fusión puede ser purificada por cromatografía por afinidad empleando resina de glutation-agarosa. Próteína NT2LP recombinante no fusionada con GST puede ser recuperada por disociación de la proteína de fusión con trombina. Ejemplos de vectores de expresión de E. coli de no-fusión inducibles adecuados incluyen pTrc (Amann et al., (1988) Gene 69: 301-315) y pET lid (Studier et al., Gene Expression Technology: Methods in Enzimology 185, Academic Press, San Diego, California (1990) 60-89) . La expresión de gen blanco a partir del vector pTrc se basa en transcripción de ARN polimerasa de huésped a partir de un promotor de fusión híbrido trp-lac. La expresión de gen blanco a partir del vector pET lid se basa en la transcripción de un promotor de fusión T7 gnlO-lac mediada por una ARN polimerasa ' viral coexpresada (T7 gnl) . Esta polimerasa viral es suministrada por cepas huéspedes BL21 (DE3) o bien HMS174 (DE3) a partir de un prófrago residente que aloja un gen T7 gnl bajo el control de transcripción del promotor lacUV 5. Una estrategia para optimizar la expresión de proteína recombinante en E. coli es para expresar la proteína en una bacteria huésped con una capacidad afectada para disociar proteolíticamente la proteína recombinante (Gottes an, S., Gene Expression Technology: Methods in Enzimology 185, Academic Press, San Diego, California (1990) 119-128) . Otra estrategia es alterar la secuencia de ácido nucleico del ácido nucleico a insertar en un vector de expresión de tal manera que codones individuales para cada aminoácido se n los empleados de preferencia en E. coli (Wada et al. (1992) Nucleic Acids Res. 20: 2111-2118). Dicha alteración de las secuencias de ácido nucleico de la invención puede efectuarse por técnicas estándares de síntesis de ADN. En otra modalidad, el vector de expresión de gen NT2LP¡ es un vector de expresión de levadura. Ejemplos de vectores paira la expresión en levadura S. cerivisae incluye pYepSecl (Baldari, et al., (1987) Embo J. 6: 229-234), pMFa (Kurjah and Herskowitz, (1982) Cell 30: 933-943), pJRY88 (Schultz et al., (1987) Gene 54: 113-123), y pYES2 (Invitrogen Corporation, San Diego, CA) . Alternativamente, un gen NT2LP puede ser expresado en células de insecto empleando, por ejemplo, vectores de expresión de baculovirus. Los vectores de baculovirus disponibles para expresión de proteínas en células de insecto cultivadas (por ejemplo, células Sf 9) incluyen la serie pAc (Smith et al. (1983) Mol. Cell Biol. 3: 2156-2165) y la serie pVL (Lúcklow and Summers (1989) Virology 170: 31-39) .

En otra modalidad, un ácido nucleico de la invención se expresa en células de mamíferos empleando un vector de expresión de mamífero. Ejemplos de vectores de expresión de mamíferos incluyen pCDM8 (Seed, B, (1987) Nature 329: 840) y pMT2PC (Kaufman et al. (1987) EMBO J. 6:187-195). Cuando se emplean en células de mamífero, las funciones de control de vector de expresión se proporcionan frecuentemente por elementos de regulación viral. Por ejemplo, promotores frecuentemente empleados se derivan de polioma, adenovirus 2, citomegalovirus y virus de simio 40. Para otros sistemas de expresión adecuados tanto para células procarióticas como eucarióticas, verse los capítulos 16 y 17 de Sambrook, J., Fritsh, E.F., y Maniatis, T. Molecular Cloning; A Labo¡ratory Manual. Segunda edición, ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989. En otra modalidad, el vector de expresión de mamífero recombinante puede dirigir la expresión del ácido nucleico de preferencia en un tipo particular de células (por ejemplo, elementos regulatorios específicos para tejidos se emplean para expresan el ácido nucleico) . Elementos regulatorios específicos para tejido se conocen en la técnica. Ejemplos no limitativos de promotores específicos para tejido adecuado se incluye el promotor de albúmina (específico para hígado; Pinkert et al. (1987) Genes Dev. 1: 268-277), promotores específicos para linfoides (Caíame and Eaton (1988)1 Adv. Immunol. 43: 235-275), particularmente promotores de receptores de células T (Winoto and Baltimore (1989) EMBO J. 8: 729-733) y inmunoglobulinas (Banerji et al. (1983) Cell 33: 729-740; Queen and Baltimore (1983) Cell 33: 741-748), Promotores específicos para neuronas (por ejemplo, el promotor de neurofilamentos; Byrne and Ruddle (1989) PNAS 86: 5473-5477) , promotores específicos para el páncreas (Edlund et al. (1985) Science 230: 912-916), y promotores específicos para la glándula mamaria (por ejemplo, promotor de suero de leche; Patente Norteamericana No. 4,873,316 y Publicación de Solicitud Europea No. 264,166). Promotores regulados por desarrollo están también abarcados, por ejemplo, los promotores murinos (Kessel and Gruss (1990) Science 249: 374-379) y el promotor de a-fetoproteína (Campes and Tilghman (1989) Genes Dev. 3: 537-546) . La invención ofrece además un vector de expresión recombinante que comprende una molécula de ADN que codifica una proteína NT2LP clonada en el vector de expresión en una orientación de antisentido. Es decir, la molécula de ADN se encuentra unida operativamente a una secuencia regulatoria de una manera que permite la expresión (por transcripción i de la molécula de ADN) de una molécula de ARN que es de antisentido para el ARNm de NT2LP. Secuencias regulatorias enlazadas operativamente con un ácido nucleico clonado en la orientación de antisentido pueden seleccionarse, las 'cuales dirigen la expresión continua de la molécula de ARN de antisentido en varios tipos de células, por ejemplo, promotores virales y/o realzadores o bien secuencias regulatorias pueden seleccionarse las cuales dirigen la expresión constitutiva directa, específica para tejida o bien específica para tipos de células de ARN de antisentido. El vector de expresión de antisentido puede tener la forma de un plásmido recombinante, fagémido o bien virus atenuado en donde los ácidos nucleicos de antisentido se producen bajo el control de una región regulatoria de alta eficiencia, cuya actividad puede ser determinada por el tipo de célula en donde se introduce el vector. Para un comentario sobre la regulación de la expresión de genes empleando genes de antisentido, véase Weintraub, H. et al., Antisense RNA as a molecular tool for genetic analysis, Review (ARN de antisentido como herramienta molecular para análisis genético, reseñas) - Trends in Genetics, Vol. 1 (1) 1986. Otro aspecto de la invención se refiere a células huéspedes en las cuales se ha introducido un vector de expresión recombínate de la invención. Los términos "célula huésped" y "célula huésped recombinante" se emplean de manera intercambiable aquí. Se entiende que tales términps se refieren no solamente a la célula sujeto particular sino a la progenie o progenie potencial de dicha célula. Puesto que L .S. ciertas modificaciones pueden ocurrir en generaciones debido a mutación o bien debido a influencias ambientales, dicha progenie de hecho puede no ser idéntica a la célula precursora, pero se siguen incluyendo dentro del alcance del término según se emplea aquí. Una célula huésped puede ser cualquier célula procariótica o eucariótica. Por ejemplo, una proteína NT2LP puede ser expresada en células bacterianas tales como E coli. Células de insecto, levadura o bien células de mamíferos (como por ejemplo células de ovario de hámster chino (CHO) o bien células COS) . Otras células huéspedes adecuadas son conocidas de los expertos en la materia. El ADN de vector puede ser introducido en células procarióticas o eucarioticaza a través de técnicas convencionales de transformación o transfección. Como se emplea aquí, los términos "transformación" y "transfección" tienen el propósito de referirse a varias técnicas reconocidas para la introducción de ácido nucleico foráneo (por ejemplo, ADN) en una célula huésped, incluyendo co-precipitación de cloruro de calcio o fosfato de calcio, transfección medida por DEAD-dextrano, lipofección, o bien electroporación. Métodos adecuados para transformar o transfectar células huéspedes pueden encontrarse en Sambrook et al. (Molecular Cloning; A Laboratory Manual (Clonación Molecular: Un Manual de Laboratorio). Segunda edición, ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989) , y otros manuales de laboratorio. Para una transfección estable de células de mamífero, se sabe que, según el vector de expresión y la técnica de transfección empleada, solamente una pequeña fracción de las células pueden integrar el ADN foráneo en su genoma. Con el objeto de identificar y seleccionar un gen que codifica un marcador seleccionable (por ejemplo, resistencia a antibióticos) es introducido generalmente en las células huéspedes junto con el gen de interés. Marcadores seleccionables preferidos incluyen los que proporcionan resistencia a fármacos, por ejemplo G418, higromicina y metotrexato. Un ácido nucleico que codifica un marcador seleccionable puede ser introducido en una célula huésped en el mismo vector que el codifica la proteína NT2LP o bien se puede introducir en un vector separado. Las células transfectadas de manera estable con el ácido nucleico introducido pueden ser identificadas por selección farmacológica (por ejemplo, células que han incorporado el gen marcador seleccionable sobrevivirán, mientras que las demás células morirán) . Una célula huésped de la invención, como por ejemplo una célula huésped procariótica o eucariótica en cultivo puede emplearse para producir (es decir, expresar) proteína NT2LP.

Por consiguiente, la invención ofrece además métodos para la producción de proteína NT2LP empleando las células huéspedes de la invención. En una modalidad, el método comprende el cultivo de la célula huésped de la invención (en donde un vector de expresión recombinante que codifica una pr teína NT2LP ha sido introducido) en un medio adecuado hasta la producción de proteína NT2LP. En otra modalidad, el método comprende además el aislamiento de la proteína NT2LP a partir del medio o de la célula huésped. Las células huéspedes de la invención pueden también emplearse para producir animales transgénicos no humanos. Los animales transgénicos no humano pueden emplearse en ensayo de tamizado diseñados para identificar agentes o compuestos, por ejemplo, fármacos, agentes farmacéuticos, etc., capaces de mejorar síntomas negativos de trastornos seleccionados o bien procesos biológicos tales como trastornos del sistema nervioso, por ejemplo, trastornos psiquiátricos, trastornos que afectan los ritmos circadianos, y el ciclo de sueño-vigilia, o dolor. Por ejemplo, en una modalidad, una célula huésped de la invención es un oocito fertilizado o una célula precursora embriónica en la cual secuencias que codifican proteína NT2LP han sido introducidas. Tales células huéspedes pueden ser empleadas para crear animales transgénicos no humanos en donde secuencias de gen NT2LP exógenas han sido introducidas en su genoma o bien animales recombinantes homólogos en los cuales secuencias de gen NT2LP endógeno han sido alteradas. Tales animales son útiles para estudiar la función y/o actividad de una proteína NT2LP y para identificar y/o evaluar moduladores de la actividad de proteína NT2LP. Como se emplea aquí, un "animal transgénico" es un animal no humano, de preferencia un mamífero, con mayor preferencia un roedor como por ejemplo una rata o un ratón en donde una o varias células del animal incluyen un transgen. Otros ejemplos de animales transgénicos incluyen primates no humanos, ovejas, perros, vacas, cabras, pollos, anfibios, y similares. Un transgen en un ADN exógeno integrado en el genoma de una célula de la cual se desarrolla un animal transgénico y que permanece en el genoma del animal maduro, dirigiendo por consiguiente la expresión de un producto de gen codificado en uno o varios tipos de células o tejidos del animal transgénico. Como se emplea aquí, un "animal recombinante homólogo" es un animal no humano, de preferencia un mamífero, con mayor preferencia un ratón, en donde un gen NT2LP endógeno ha sido alterado por recombinación homologa entre el gen endógeno y una molécula de ADN exógeno introducida en una célula del animal, por ejemplo, una .célula embriónica del animal, antes del desarrollo de dicho animal. Un animal transgénico de la presente invención puede ser creado mediante la introducción de ácido nucleico que codifica una proteína NT2LP en los pronúcleos machos de un -*•*-* ** oocito fertilizado, por ejemplo mediante microinyección, infección retroviral, y permitiendo que el oocito se desarrolle en un animal receptor hembra pseudopreñada. La secuencia de ADNc de NT2LP de ser humano o de mono de SEQ ID Nos: 1 o 3 puede ser introducida como transgen en el genoma de un animal no humano. Además, un homólogo no humano o no de mono del gen NT2LP de ser humano o de mono, por ejemplo, un gen NT2LP de ratón, puede ser aislado con base en la hibridación sobre el ADNc de NT2LP de ser humano o de mono (descrito arriba) y puede emplearse como transgen. Secuencias intrónicas y señales de poliadenilación pueden también incluirse en el transgen para incrementar la eficiencia de expresión del transgen. Una(s) secuencia (s) regulatoria (s) específica (s) para tejido puede estar enlazada operativamente con el transgen de NT2LP para dirigir la expresión de una proteína NT2LP en células particulares. Métodos para generar animales transgénicos a través de manipulación de embriones y microinyección, particularmente animales tales como ratones, se han vuelto convencionales en la técnica y se describen, por ejemplo, en las Patentes Norteamericanas Nos. 4,736,866 y 4,870,009, ambas de Leder et al., en la Patente Norteamericana No. 4,873,191 de Wagner et al., y en Hogan, B., Manipulating the Mouse Embryo, (manipulación del embrión de ratón) (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold iSpring Harbor, N.Y., 1986) . Métodos similares se emplean para la producción de otros animales transgénicos. Un animal fundador transgénico puede ser identificado con base en la presencia del transgen NT2LP y su genoma y/o expresión de ARNm de NT2LP en tejidos o células de los animales. Un animal fundador transgénico puede después emplearse para criar animales adicionales que llevan el transgen. Además, animales transgénicos que llevan un transgen que codifica una proteína NT2LP pueden criarse adicionalmente en otros animales transgénicos que llevan otros transgenes. Para crear un animal recombinante homólogo, se prepara un vector que contiene por lo menos un fragmento de un gen, NT2LP en el cual se ha introducido una remoción, adición o sustitución para alterar de esta manera, por ejemplo, trastornar funcionalmente, el gen NT2LP. El gen NT2LP puede ser un gen humano (por ejemplo, de un clon genómico humano aislado a partir de una biblioteca genómica humana tamizada con el ADNc de SEQ ID Nos: 1 o 3) , pero de preferencia es un homólogo no humano de un gen NT2LP humano. Por ejemplo, un gen NT2LP de ratón puede ser aislados a partir de una biblioteca de ADN genómico de ratón empleando el ADNc de NT2LP de SEQ ID Nos: 1 o bien 3 como sonda. El gen NT2LP de ratón puede después emplearse para construir un vector de re combinación homólogo adecuado para alterar un gen NT2LP endógeno en el genoma de ratón. En una modalidad preferida, el vector es diseñado de tal manera que, al efectuarse una recombinación homologa, el gen NT2LP endógeno es funcionalmente trastornado (es decir, ya no codifica una proteína funcional; se conoce también como vector "noqueado") . Alternativamente, el vector puede ser diseñado de tal manera que, al efectuarse una recombinación homologa, el gen NT2LP endógeno sea mutado o bien alterado de otra forma pero siga codificando una proteína funcional (por ejemplo, la región regulatoria corriente arriba puede ser alterada con el objeto de alterar de esta forma la expresión de la proteína NT2LP endógena) . En el vector de recombinación homólogo, el fragmento alterado del gen NT2LP se encuentra flanqueado en sus extremos 5' y 3' por ácidos nucleicos adicionales del gen NT2LP para permitir la recombinación homologa entre el gen NT2LP exógeno llevado por el vector y un gen NT2LP endógeno en una célula precursora embriónica. El ácido nucleico de NT2LP de flanco adicional tiene una longitud suficiente para una recombinación homologa exitosa con el gen endógeno. Típicamente, varios kilobases de ADN de flanco (tanto en los extremos 5' como 3') están incluidos en el vector (ver, por ejemplo, Thomas y Capecchi (1987) Cell 51:503 para una descripción de los vectores de recombinación homólogos) . El vector es introducido en una línea de células precursora embriónica (por ejemplo, por electroporación) y las células en las cuales el gen NT2LP introducido ha sido recombinado de manera homologa con el gen NT2LP endógeno se seleccionan (ver, por ejemplo, Li et al., (1992) Cell 69:915). Las células seleccionadas son después inyectadas en un blastocito de un animal (por ejemplo, un ratón) para formar quimeras de agregación (por ejemplo, Bradley en Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: A Practical Approach, (teratocarcinomas y células precursoras embriónicas: un enfoque práctico), Robertson, ed. (IRL, Oxford, 1987) páginas 113-152) . Un embrión quimérico puede después ser implantado en un animal receptor hembra pseudopreñada adecuada y el embrión puede ser llevado a término. La progenia que aloja el ADN recombinante de manera homologa en sus células germinales puede emplearse paral criar animales en los cuales todas las células del animal contienen el ADN recombinado de manera homologa por transmisión de línea germinal del transgen. Métodos para la construcción de vectores de recombinación homólogos así como animales recombinantes homólogos se describen adicionalmente en Bradley, (1991) Current Opinión in Biotechnology 2:823-829 y en las Publicaciones Internacionales PCT Nos: WO 90/11354; WO 91/01140; WO 92/0968; y WO 93/04169. En otra modalidad, animales transgénicos no humanos pueden ser producidos los cuales contienen sistemas seleccionados que permiten la expresión regulada del transgen. Un ejemplo de un sistema de este tipo es el sistema de cre/loxP recombinasa de bacteriófago Pl . Para una descripción del sistema cre/loxP recombinasa, véase, por ejemplo, Lakso et al. (1992) PNAS 89:6232-6236. Otro ejemplo de sistema de recombinasa es el sistema de FLP recombinasa de Saccharomyces cerevisiae (O'Gorman et al. (1991) Science 251:1351-1355). Si se emplea un sistema de cre/loxP recombinasa para regular la expresión del transgen, animales que contienen los transgenes que codifican tanto Cre recombinasa como una proteína seleccionada se requieren. Tales animales pueden ser proporcionados a través de la construcción de animales transgénicos "doble" como por ejemplo, mediante el hecho de cruzar dos animales transgénicos, uno que contiene un transgen que codifica una proteína seleccionada y el otro que contiene un transgen que codifica una recombinasa. Clones de los animales transgénicos no humanos descritos aquí pueden también ser producidos de conformidad con métodos descritos en Wilmut, I. Et al. (1997) Nature 385:810-813 y en las Publicaciones Internacionales PCT Nos: WO 97/07668 y WO 97/07669. En resumen, una célula, por ejemplo, una célula somática, proveniente de un animal transgénico puede ser aislada e inducida a salir del ciclo de crecimiento y entrar en la fase Go. La célula quiescente puede después ser fusionada, por ejemplo, a través del uso de impulsos eléctricos, sobre un oocito enucleado proveniente de un animal de la misma especie a partir de la cual se aisla la célula quiascente el oocito reconstruido es después cultivado de tal manera que se desarrolle en mórula o blastocito y después es transferido a un animal receptor hembra pseudopreñada. La cría de este animal receptor hembra será un clon del animal a partir del cual se aisla la célula, por ejemplo, la célula somática. V. USOS Y MÉTODOS DE LA INVENCIÓN Moléculas de ácido nucleico, proteínas, homólogos de proteína, moduladores, y anticuerpos descritos aquí pueden emplearse en uno o varios de los siguientes métodos: a) ensayos de tamizado de fármaco; b) ensayos de diagnóstico particularmente para la identificación de enfermedad, tamizado alélico así como prueba farmacogenética; c) métodos de tratamiento; d) procedimientos para farmacogenómicos; y e) monitoreo de efectos durante ensayos clínicos. Una proteína NT2LP de la invención puede ser empleada como fármaco blanco para el desarrollo de agentes para modular la actividad de la proteína NT2LP (un receptor de NT) . Las moléculas de ácido nucleico aisladas de la invención pueden ser empleadas para expresar proteína NT2LP (por ejemplo, a través de un vector de expresión reco binante en una célula huésped o bien en aplicaciones de terapia genética) , para detectar ARNm de NT2LP (por ejemplo, en una muestra biológica) o bien una mutación genética generada de manera recombinante o que ocurre naturalmente en un gen NT2LP, y para modular la actividad de proteína NT2LP de conformidad con lo descrito abajo. Además, la proteína NT2LP puede ser empleada para tamizar fármacos o compuestos que modulan la actividad de proteína NT2LP. Además, los anticuerpos anti-NT2LP de la invención pueden emplearse para detectar y aislar una proteína NT2LP, particularmente fragmentos de una proteína NT2LP presente en una muestra biológica y para modular la actividad de proteína NT2LP. a. Ensayos de tamizado de fármaco La invención ofrece métodos para identificar compuestos o agentes que pueden emplearse para tratar trastornos caracterizados por una expresión de ácido nucleico NT2LP y/o actividad de proteína NT2LP aberrante o anormal o normal, por ejemplo, dolor, (o bien asociado con dicha expresión y/o actividad) . Tales métodos se conocen también como ensayos de tamizado de fármaco e incluyen típicamente el paso de tamizar un compuesto o agente candidato/de prueba para identificar compuestos que son agonistas o antagonistas de una proteína NT2LP o fragmento de la misma, y específicamente para determinar la capacidad de interactuar con una proteína NT2LP (por ejemplo, unirse con ella) para modular la interacción de una proteína NT2LP o una molécula blanco (como por ejemplo un ligando) , y/o para modular la expresión de ácido nucleico de NT2LP y/o actividad de proteína NT2LP. Compuestos o agentes candidatos/de prueba que tienen una o varias de ' estas habilidades pueden emplearse como fármacos para tratar ¿¿ trastornos caracterizados por una expresión de ácido nucleico NT2LP y/o una actividad de proteína NT2LP aberrante o anormal o normal, por ejemplo dolor. Compuestos candidatos/de prueba incluyen, por ejemplo, 1) péptidos tales como péptidos solubles, incluyendo péptidos de fusión con cola de Ig y miembros de bibliotecas de péptidos aleatorios (por ejemplo, Lam et al. (1991) Nature 354:82-84; Houghten et al. (1991) Nature 354:84-86) así como bibliotecas moleculares derivadas de química de combinación elaboradas a partir de aminoácidos de configuración D y/o configuración L; 2) fosfopéptidos (por ejemplo, miembros de bibliotecas de fosfopéptidos dirigidos, aleatorios y parcialmente degenerados, véase, por ejemplo, Songyang et al. (1993) Cell 72: 767-778); 3) anticuerpos (por ejemplo, anticuerpos policlonales, monoclonales, humanizados, anti-idiotípicos, quiméricos, y anticuerpos de cadena única así como Fab, F(ab')2, fragmentos de biblioteca de expresión de Fab, y fragmentos de enlace de epítopo de anticuerpo) ; y 4) pequeñas moléculas orgánicas e inorgánicas (por ejemplo, moléculas obtenidas a partir de bibliotecas de productos naturales y de combinación) . En una modalidad, la invención ofrece ensayos para tamizar compuestos candidatos/de prueba que interactúan con una proteína NT2LP (por ejemplo, se unen con dicha proteína), o fragmento de la misma. Típicamente, los ensayos son ensayos basados en células recombinantes o exentos de células que incluyen los pasos de combinar una célula que expresa una proteína NT2LP o un fragmento de la misma, o una proteína NT2LP aislada o fragmento de la misma, y un compuesto candidato/de prueba, por ejemplo, en condiciones que permiten la interacción del compuesto candidato/de prueba (por ejemplo, enlace) con la proteína NT2LP o fragmento de la misma para formar un complejo, y la detección de la formación de un complejo, en donde la capacidad de un compuesto candidato para interactuar con la proteína NT2LP (por ejemplo, unirse con ella) o fragmento de la misma se 'indica mediante la presencia del compuesto candidato en el complejo. La formación de complejos entre la proteína NT2LP y el compuesto candidato puede detectarse empleando ensayos de enlace de competición y puede ser cuantificada, por ejemplo, empleando inmunoensayos estándares. En otra modalidad, la invención ofrece ensayos de tamizado para identificar compuestos candidatos/de prueba que modulan (por ejemplo, estimulan o inhiben) la interacción y más probablemente la actividad de proteína NT2LP también) entre una proteína NT2LP y una molécula (molécula blanco) con la cual interactúa normalmente la proteína NT2LP. Ejemplos de tales moléculas blanco incluyen ligandos (como por ejemplo NT para receptores de NT) y proteína en la misma ruta de señalización que la proteína NT2LP, por ejemplo, proteínas que pueden funcionar corriente arriba (incluyendo tanto estimuladores como inhibidores de actividad) como corriente abajo de la proteína NT2LP por ejemplo en una ruta de señalización de función cognitiva o bien en una ruta que involucra la actividad de proteína NT2LP, por ejemplo, una proteína G o bien otro interactor involucrado en la rotación de cAMP o bien fosfatidilinositol, y/o la activación de adelinatciclasa o fosfolipasa C. Típicamente, los ensayos son ensayos basados en células recombinantes que incluyen los pasos de combinar una célula que expresa una proteína NT2LP, o un fragmento de la misma, una molécula blanco de proteína NT2LP (por ejemplo, ligando o socio de señalización de enlace de NT2LP) y un compuesto candidato/de prueba, por ejemplo, en condiciones en las cuales si no fuera por la presencia del compuesto candidato, la proteína NT2LP o el fragmento biológicamente activo de la misma interactuaría con la molécula blanco (por ejemplo, se uniría con ella) , y detectar la formación de un complejo que incluye una proteína NT2LP y la molécula blanco o la detección de la interacción/reacción de la proteína NT2LP y la molécula blanco. La detección de la formación de complejos puede incluir cuantificación directa del complejo, por ejemplo mediante la medición de efectos inductivos de la proteína NT2LP. Un cambio estadísticamente significativo como por ejemplo una disminución de la interacción de la proteína NT2LP y molécula blanco (por ejemplo, en la formación de un complejo entre la proteína NT2LP y la molécula blanco) en presencia de un compuesto candidato (con relación a lo que se detecta en ausencia del compuesto candidato) es una indicación de una modulación (por ejemplo, estimulación o inhibición) de la interacción entre la proteína NT2LP y la molécula blanco. La modulación de la formación de complejos entre la proteína NT2LP y la molécula blanco puede cuantificarse empleando, por ejemplo, un inmunoensayo . Para efectuar ensayos de tamizado de fármaco sin células, es deseable inmovilizar ya sea la proteína NT2LP, o un fragmento de la misma, o bien su molécula blanco para facilitar la separación de complejos de las formas que no formaron complejos de una o ambas proteínas, así como permitir la automatización del ensayo. La interacción (por ejemplo, la unión) de la proteína NT2LP sobre una molécula blanco, en presencia y ausencia de un compuesto candidato, puede lograrse en cualquier recipiente adecuado para contener los reactivos. Ejemplos de tales recipientes incluyen placas de microtitulación, probetas, tubos de microcentrifugadora. En una modalidad, se puede proporcionar una proteína de fusión que agrega un dominio que permite que la proteína se una sobre una matriz. Por ejemplo, se pueden adsorber proteínas de fusión glutation-S-transferasa/NT2LP en perlas de glutationa-sefarosa (Sigma Chemical, St.v Louis, MO) o bien placas de microtitulación derivadas de glutationa que son después combinadas con los usados celulares (por ejemplo, marcados con 35S) y el compuesto candidato, y la mezcla es incubada en condiciones que llevan a la formación de complejos (por ejemplo, en condiciones fisiológicas para la sal y el pH) . Después de la incubación, las perlas son lavadas para remover cualquier marcador no unido, y la matriz es inmovilizada y se determina directamente el radiomarcado, o bien en el sobrenadante después de la disociación de los complejos. Alternativamente, los complejos pueden ser disociados de la matriz, separados por SDS-PAGE, y el nivel de proteína de enlace con NT2LP encontrado en la fracción de perlas es cuantificado a partir del gel empleando técnicas electroforéticas estándares. Otras técnicas para inmovilizar proteínas en matrices pueden también emplearse en los ensayos de tamizado de fármaco de la invención. Por ejemplo, ya sea la proteína NT2LP o su molécula blanco pueden ser inmovilizadas empleando conjugación de biotina y estreptavidina. Las moléculas de proteína NT2LP biotiniladas pueden prepararse a partir de biotina-NHS (N-hidroxi-succinimida) empleando técnicas bien conocidas (por ejemplo, conjunto de elementos de biotinilación, Pierce Chemicals, Rockford, IL) , e inmovilizadas en los pozos de placas de 96 pozos revestidas con estreptavidina (Pierce Chemical) . Alternativamente, anticuerpos que reaccionan con una proteína NT2LP pero que no interfieren con la unión de la proteína sobre su molécula blanco pueden ser derivados hacia los pozos de la placa, y la proteína NT2LP atrapada en los pozos por conjugación de anticuerpos. Como se describe arriba, preparaciones de proteína de enlace de NT2LP y un compuesto candidato se incuban en los pozos que presentan proteína NT2LP de la placa, y la cantidad de complejo atrapada en el pozo puede ser cuantificada. Métodos para detectar tales complejos, además de los descritos arriba para los complejos inmovilizados por GST, incluyen la inmunodetección de los complejos empleando anticuerpos que reaccionan con la molécula blanco de proteína NT2LP, o bien que reaccionan con la proteína NT2LP y compiten con la molécula blanco; así como ensayos enlazados con enzimas que se basan en la detección de una actividad enzimática asociada con la molécula blanco. En otra modalidad, la invención proporciona un método para identificar un compuesto (por ejemplo, un ensayo de tamizado) capaz de usarse en el tratamiento de un trastorno caracterizado por una expresión de ácido nucleico de NT2LP o actividad de proteína NT2LP aberrante o anormal o normal, por ejemplo, dolor (o bien asociado con dicha expresión o actividad) . Este método incluye típicamente el paso de ensayar la capacidad del compuesto o agente para modular la expresión del ácido nucleico NT2LP o la actividad de la proteína NT2LP identificando así un compuesto para el -, , tratamiento de un trastorno caracterizado por una expresión de ácido nucleico NT2LP o actividad de proteína NT2LP aberrante o anormal o normal. Métodos para ensayar la capacidad del compuesto o agente para modular la expresión del ácido nucleico de NT2LP o actividad de la proteína NT2LP son típicamente ensayos basados en células. Por ejemplo, células que transducen señales a través de una ruta que involucra una proteína NT2LP pueden ser inducidas a la sobreexpresión de una proteína NT2LP en presencia y ausencia de un compuesto candidato. Los compuestos candidatos que producen un cambio estadísticamente significativo en cuanto a las respuestas dependientes de proteína NT2LP (ya sea estimulación o inhibición) pueden identificarse. En una modalidad, la expresión del ácido nucleico de NT2LP o actividad de una proteína NT2LP es modulada en células y los efectos de compuestos candidatos sobre las lecturas de interés se miden (como por ejemplo cAMP o bien rotación de fosfatidilinositol) . Por ejemplo, la expresión de genes que son regulados de manera ascendente o descedente en respuesta a una cascada de señales dependiente de proteína NT2LP puede ensayarse. En modalidades preferidas, las regiones regulatorias de tales genes, por ejemplo, el promotor de flanqueo 5' y regiones de realzador, están unidas de manera operativa a un marcador detectable (como por ejemplo luciferasa) que codifica un producto de gen que puede ser fácilmente detectado. La fosforilación de una proteína NT2LP o moléculas blanco de proteína NT2LP puede también medirse, por ejemplo, mediante inmunoabsorción. Alternativamente, moduladores de expresión de gen NT2LP (por ejemplo, compuestos que pueden emplearse para tratar un trastorno o proceso biológico caracterizado por una expresión aberrante o anormal o normal de ácido nucleico NT2LP o bien actividad de proteína NT2LP, por ejemplo dolor) pueden identificarse en un método en el cual una célula entra en contacto con un compuesto candidato y la expresión de ARNm de NT2LP o proteína en la célula se determina. El nivel de expresión de ARNm de NT2LP o proteína en presencia del compuesto candidato se compara con el nivel de expresión de ARNm de NT2LP o proteína en ausencia del compuesto candidato. El compuesto candidato puede después ser identificado como modulador de la expresión de ácido nucleico de NT2LP con base en esta comparación y emplearse para tratar un trastorno caracterizado por una expresión aberrante de ácido nucleico de NT2LP. Por ejemplo, cuando la expresión de ARNm de NT2LP o proteína es mayor (estadísticamente significativamente mayor) en presencia del compuesto candidato que en su ausencia, se identifica el compuesto candidato como un estimulador de la expresión de ácido nucleico de NT2LP. Alternativamente, cuando la expresión de ácido nucleico de NT2LP es menor (estadísticamente significativamente menor) en presencia del compuesto candidato que en su ausencia, el compuesto candidato se identifica como un inhibidor de expresión de ácido nucleico de NT2LP. El nivel de expresión de ácido nucleico de NT2LP en las células puede ser determinado por métodos descritos aquí para la detección de ARNm de NT2LP o proteína. En otro aspecto de la invención, la proteína de NT2LP, o fragmentos de la misma, puede emplearse como "proteínas carnada" en un ensayo de dos híbridos (ver, por ejemplo, Patente Norteamericana No. 5,283,317; Zervos et al. (1993) Cell 72:223-232; Madura et al. (1993) J. Biol. Chem. 268:12046-12054; Bartel et al. (1993) Biotechniques 14:920-924; Iwabuchi et al. (1993) Oncogene 8:1693-1696; y Brent WO 94/10300) , para identificar otras proteínas que se unen o interactúan con la proteína NT2LP ("proteínas de unión con NT2LP" o bien "NT2LP-bp") y modulan la actividad de proteína NT2LP. Tales proteínas de enlace con NT2LP estarán también probablemente involucradas en la propagación de señales por la proteína NT2LP como por ejemplo elementos corriente arriba y corriente abajo de la ruta de proteína NT2LP. El sistema de dos híbridos se basa en la naturaleza modular de la mayoría de los factores de transcripción, que consisten en dominios de enlace de ADN y activación separables. Bartel et al. "Using the Two-Hybrid System to Detect Protein-Protein Interactions" (empleando el sistema de dos híbridos para detectar interacciones proteína-proteína) en Cellular Interactions in Development: A Practical Approach, Hartley, D.A. ed. (Oxford University Press, Oxford, 1993) páginas 153-179. En resumen, el ensayo emplea dos constructos de ADN diferentes. En un constructo, el gen que codifica una proteína NT2LP se fusiona sobre un gen que codifica el dominio de enlace de ADN de un factor de transcripción conocida (por ejemplo, GAL-4) . En el otro constructo, una secuencia de ADN, proveniente de una biblioteca de secuencias de ADN que codifica una proteína no identificada ("presa" o bien "muestra") , se fusiona sobre un gen que codifica el dominio de activación del factor de transcripción conocido. Si las proteínas "carnada" y "presa" pueden interactuar, in vivo, formando un complejo dependiente de proteína NT2LP, los dominios de enlace de ADN y activación del factor de transcripción se acercan de manera estrecha. Esta cercanía permite la transcripción de un gen reportero (por ejemplo LacZ) que es unido de manera operativa sobre un sitio de regulación de transcripción en respuesta al factor de transcripción. La expresión del gen reportero puede ser detectada y se pueden aislar colonias de células que contienen el factor de transcripción funcional y se pueden emplear para obtener el gen clonado que codifica la proteína que interactúa con la proteína NT2LP. Moduladores de actividad de proteína NT2LP y/o expresión de ácido nucleico de NT2LP identificada de conformidad con estos ensayos de tamizado de fármaco pueden emplearse para tratar, por ejemplo, trastornos del sistema nervioso y procesos o dolor. Estos métodos de tratamiento incluyen los pasos de administrar los moduladores de actividad de proteína NT2LP y/o expresión de ácido nucleico, por ejemplo, en una composición farmacéutica de conformidad con lo descrito en la subsección IV arriba, a un paciente que requiere de dicho tratamiento como por ejemplo un paciente con un trastorno o un proceso biológico descrito aquí. b. Ensayos de diagnóstico La invención ofrece además un método para detectar la presencia de una proteína NT2LP o molécula de ácido nucleico de NT2LP, o fragmento de la misma, en una muestra biológica. El método incluye la puesta en contacto de la muestra biológica con un compuesto o un agente capaz de detectar una proteína NT2LP o ARNm de tal manera que se detecte la presencia de proteína de NT2LP/molécula de ácido nucleico que codifica una proteína NT2LP en la muestra biológica. Un agente preferido para la detección de ARNm de NT2LP es una sonda de ácido nucleico marcada o bien que puede ser marcada, capaz de hibridarse con el ARNm de NT2LP. La sonda de ácido nucleico puede ser, por ejemplo, el ADNc de NT2LP de longitud completa de SEQ ID Nos: 1 o 3, o un fragmento del mismo, como por ejemplo un oligonucleótido de por lo menos 15, 30, 50, 100, 250 o 500 nucleótidos de longitud y suficiente para hibridarse específicamente bajo condiciones estrictas sobre ARNm de NT2LP. Un agente preferido para detectar proteína NT2LP es un anticuerpo marcado o que puede marcarse capaz de unirse sobre la proteína NT2LP. Los anticuerpos pueden ser policlonales, o bien, con mayor preferencia monoclonales. Un anticuerpo intacto o fragmento del mismo (por ejemplo, Fab o bien F(ab')2) puede emplearse. El término "marcado o bien que puede marcarse" en cuanto a la sonda o anticuerpo, tiene el propósito de abarcar el marcado directo de la sonda o anticuerpo mediante acoplamiento (por ejemplo, enlace fijo) de una sustancia detectable sobre la sonda o anticuerpo, así como el marcado indirecto de la sonda o anticuerpo mediante radioactividad con otro reactivo marcado directamente. Ejemplos de marcado indirecto incluyen la detección de un anticuerpo primario empleando un anticuerpo secundario marcado de manera fluorescente y el marcado final de una sonda de ADN con biotina de tal manera que pueda ser detectada con estreptavidina marcada de manera fluorescente. El término "muestra biológica" tiene el propósito de incluir tejidos, células y fluidos biológicos aislados de un paciente, así como tejidos, células y fluidos presentes dentro de un sujeto. Es decir, el método de detección de la presente invención puede emplearse para detectar ARNm de NT2LP o proteína en una muestra biológica in 4>tefri. * t :í,- vitro así como in vivo. Por ejemplo, técnicas in vitro para la detección de ARNm de NT2LP incluyen hibridaciones Northern así como hibridaciones in situ. Técnicas in vitro para la detección de proteína NT2LP incluyen ensayos inmunoabsorbentes enlazados con enzima (ELISAs), Western blots, inmunoprecipitación e inmunofluorescencia. Alternativamente, una proteína NT2LP puede ser detectada in vivo en un sujeto mediante la introducción en el sujeto de un anticuerpo anti-NT2LP marcado. Por ejemplo, el anticuerpo puede ser marcado con un marcador radioactivo cuya presencia y ubicación en un sujeto puede ser detectada por técnicas estándares de formación de imagen. Son esencialmente útiles los métodos que detectan la variante alélica de una proteína NT2LP expresada en un sujeto y métodos que detectan fragmentos de una proteína NT2LP. La invención abarca también conjuntos de elementos para detectar la presencia de una proteína NT2LP en una muestra biológica. Por ejemplo, un conjunto de elementos puede comprender reactivos tales como un compuesto o agente marcado o que puede ser marcado capaz de detectar proteína NT2LP o bien ARNm en una muestra biológica; medios para determinar la cantidad de proteína NT2LP de la muestra; y medios para comparar la cantidad de proteína NT2LP en la muestra con un estándar. El compuesto agente puede ser empacado en un recipiente adecuado. El conjunto puede comprender además instrucciones para usar el conjunto de elementos para detectar ARNm o proteína NT2LP. Los métodos de la invención se emplean también para detectar mutaciones genéticas que ocurren naturalmente en un gen NT2LP, determinando así un sujeto con el gen mutado está en riesgo de un trastorno caracterizado por la expresión aberrante o anormal de ácido nucleico NT2LP o bien la actividad aberrante o anormal de proteína NT2LP, por ejemplo, dolor, de conformidad con lo descrito aquí. En modalidades preferidas, los métodos incluyen la detección, en una muestra de células a partir de un sujeto, la presencia o ausencia de una mutación genética caracterizada por lo menos una alteración que afecta la integridad de un gen que codifica una proteína NT2LP, o la expresión errónea del gen NT2LP. Por ejemplo, tales mutaciones genéticas pueden ser detectadas mediante la determinación de la existencia de por lo menos de 1) una remoción de uno o varios nucleótidos de un gen NT2LP; 2) la adición de uno o varios nucleótidos a un gen NT2LP; 3) una sustitución de unos o varios nucleótidos de un gen NT2LP; 4) un rearreglo cromosómico de un gen NT2LP; 5) una alteración de nivel de un transcripto de ARN mensajero de un gen NT2LP, 6) la modificación aberrante de un gen NT2LP, como por ejemplo del patrón de metilación del ADN genómico, 7) la presencia de un patrón de empalme de tipo no salvaje de un transcripto de ARN mensajero de un gen NT2LP, 8) un nivel de * » » «- -«». •- 1 *. . *** tipo no salvaje de una proteína NT2LP, 9) la pérdida alélica de un gen NT2LP y 10) modificación post-translacional inapropiada de una proteína NT2LP. De conformidad con lo descrito aquí, existe un gran número de técnicas de ensayo conocidas en la técnica que pueden emplearse para detectar mutaciones en un gen NT2LP. En ciertas modalidades, la detección de la mutación incluye el uso de una sonda/iniciador en una reacción en cadena de polimerasa (PCR) (Ver, por ejemplo, las Patentes Norteamericanas No. 4,683,195 y 4,683,202), así como PCR de ancla RACE PCT, o bien, alternativamente, una reacción en cadena de ligación (LCR) (ver, por ejemplo, Landegran et al. (1988) Science 241:1077-1080; y Nakazawa et al. (1994) PNAS 91:360-364), esta última es especialmente útil para detectar mutaciones de puntos en gen NT2LP (ver Abravaya et al. (1995) Nucleic Acids Res. 23:675-682). Este método puede incluir los pasos de recoger una muestra de células a partir de un paciente, aislar ácido nucleico (por ejemplo, ARNm, genómico o ambos) a partir de las células de la muestra, poner en contacto la muestra de ácido nucleico con uno o varios iniciadores que se hibridan específicamente con un gen NT2LP en condiciones tales que ocurre hibridación y amplificación del gen NT2LP (si está presente) , y detectar la presencia o ausencia de un producto de amplificación, o bien detectar el tamaño del producto de amplificación y comparar la longitud con una muestra de control. En una modalidad alternativa, mutaciones en un gen NT2LP a partir de una célula de muestra pueden identificarse mediante alteraciones en cuanto a patrones de disociación de enzima de restricción. Por ejemplo, ADN de muestra y de control es aislado, amplificado (opcionalmente) , digerido con una o varias endonucleasas de restricción, y se determinan los tamaños de longitudes de fragmentos mediante electroforesis en gel, y se comparan. Diferencias en cuanto a tamaños de longitudes de fragmentos entre ADN de muestra y de control indican mutaciones en el ADN de muestra. Además, el uso de ribozimas específicas para secuencias (ver, por ejemplo Patente Norteamericana No. 5,498,531) pueden emplearse para determinar la presencia de mutaciones específicas mediante el desarrollo o pérdida de un sitio de disociación de ribozima. En otra modalidad, se puede emplear cualesquiera de varias de reacciones de secuenciación conocidas en la técnica para secuenciar directamente el gen NT2LP y detectar mutaciones por medio de la comparación de la secuencia NT2LP de muestra con la secuencia de tipo salvaje correspondiente (control) . Ejemplos de reacciones de secuenciación incluyen las reacciones basadas en técnicas desarrolladas por Maxim y Gilbert ((1977) PNAS 74:560) o Sanger ((1977) PNAS 74:5463). Varios procedimientos de secuenciación automatizados pueden emplearse cuando se llevan a cabo los ensayos de diagnóstico ((1995) Biotechniques 19:448), incluyendo secuenciación por espectrometría de masa (ver, por ejemplo, Publicación Internacional No. WO 94/16101; Cohén et al. (1996) Adv. Chromatogr. 36:127-162; y Griffin et al. (1993) Appl. Biochem. Biotechnol. 38:147-159). Otros métodos para detectar mutaciones en el gen NT2LP incluyen métodos en los cuales se emplea protección contra agentes de disociación para detectar bases que no corresponden en duplexes ARN/ADN o bien ARN/ADN (Myers et al. (1985) Science 230:1242); Cotton et al. (1988) PNAS 85:4397; Saleeba et al. (1992) Meth. Enzymol, 217:286-295), se compara la movilidad electroforética de ácido nucleico mutante y de tipo salvaje (Orita et al. (1989) PNAS 86:2766; Cotton (1993) Mutat. Res. 285:125-144; y Hayashi (1992) Genet. Anal. Tech. Appl. 9:73-79), y el movimiento de fragmentos de tipo salvaje o mutante en geles de poliacrilamida que contienen un gradiente de agente desnaturalizante se ensayan empleando electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante (Myers et al. (1985) Nature 313:495). Ejemplos de otras técnicas para detectar mutaciones de puntos incluyen la hibridación selectiva de oligonucleótidos, la amplificación selectiva y la extensión selectiva de iniciadores. c. Métodos de tratamiento Otro aspecto de la presente invención se refiere a métodos para el tratamiento de un sujeto, por ejemplo, un ser humano, ^^^fcy^. que tiene una enfermedad, trastorno, o bien proceso biológico caracterizado por una expresión aberrante o anormal o normal de ácido nucleico de NT2LP y/o una actividad normal o anormal de proteína NT2LP (o bien asociado con dicha expresión o actividad), por ejemplo, dolor. Estos métodos incluyen el paso de administrar un modulador de proteína/gen NT2LP (agonista o antagonista) al sujeto de tal manera que ocurra un tratamiento. La expresión "expresión aberrante o anormal de proteína NT2LP" se refiere a la expresión de una proteína NT2LP de tipo no salvaje o bien a un nivel de expresión de tipo no salvaje de una proteína NT2LP. La actividad aberrante o anormal de proteína NT2LP se refiere a una actividad de proteína NT2LP de tipo no salvaje o bien a un nivel de tipo no salvaje de proteína NT2LP. Puesto que la proteína NT2LP está involucrada en una ruta que incluye la señalización dentro de células una actividad o expresión aberrante o anormal de proteína NT2LP interfiere con la regulación normal de funciones mediadas por señalización de proteína NT2LP, y particularmente células cerebrales. El término "tratando" o "tratamiento" como se emplea aquí, se refiere a la reducción o nitidación de por lo menos un efecto adverso o síntoma de un trastorno, enfermedad, o bien proceso biológico, por ejemplo, un trastorno, enfermedad o proceso biológico caracterizado por una actividad anormal o aberrante o normal de proteína NT2LP o una expresión anormal o aberrante o anormal de ácido nucleico de NT2LP o bien asociado con dicha actividad o dicha expresión. El tratamiento de trastornos mediado por interacción/señalización anormal o normal de receptor de NT2LP, por ejemplo dolor, es particularmente útil. Los términos "tratando" o "tratamiento" como se emplea aquí, se refieren también a la reducción o nitidación de por lo menos un efecto adverso o síntoma de un trastorno, enfermedad, o proceso biológico, caracterizado por su capacidad de ser nitidado por la modulación de la actividad o expresión de un ácido nucleico o proteína NT2LP normal. Como se empleas aquí, un modulador de proteína/gen NT2LP es una molécula que puede modular la expresión de ácido nucleico NT2LP y/o la actividad de proteína NT2LP. Por ejemplo, un modulador de gen o proteína NT2LP puede modular, por ejemplo, regular de manera ascendente (activar/agonizar) o bien regular de manera descendente (suprimir/antagonizar) , la expresión de ácido nucleico de NT2LP. En otro ejemplo, un modulador de proteína/gen NT2LP puede modular (por ejemplo, estimular/agonizar o bien inhibir/antagonizar) la actividad de proteína NT2LP. Si es deseable tratar un trastorno o enfermedad o proceso biológico caracterizado por la expresión aberrante o anormal (no de tipo salvaje) o normal de ácido nucleico NT2LP y/o la actividad aberrante o anormal (no de tipo salvaje) o normal de proteína NT2LP (o bien asociado con - ' - " "1 '--"'- — '—'- -- •""' .-r,,.„?* , ,..*-**. -,-.,- ,. ,.,.. , i ¿_ r . * A,«*.ife dicha expresión y/o actividad) mediante la inhibición de expresión de ácido nucleico de NT2LP, un modulador de NT2LP puede ser una molécula de antisentido, por ejemplo, una ribozima, según lo descrito aquí. Ejemplos de moléculas de antisentido que pueden emplearse para inhibir la expresión de ácido nucleico de NT2LP incluyen moléculas de antisentido complementaria de un fragmento de la región no trasladada 5' de SEQ ID NO: 1 o 3 que incluye también el codón de inicio y las moléculas de antisentido que son complementarias de un fragmento de la región no trasladada 3' de SEQ ID NO: 1 o 3. un ejemplo de una molécula de antisentido que es complementaria de un fragmento de la región no trasladada 5' de SEQ ID NO: 1 o 3 y que incluye también el codón de inicio es una molécula de ácido nucleico que incluye nucleótidos que son complementarios de los nucleótidos 1 a 616 de SEQ ID NO: 1 o 3. Un modulador de NT2LP que inhibe la expresión de ácido nucleico de NT2LP puede también ser una pequeña molécula o bien otro fármaco, por ejemplo, una pequeña molécula o fármaco identificado empleando los ensayos de tamizado descritos aquí, que inhibe la expresión de ácido nucleico de NT2LP. Si es deseable tratar una enfermedad, trastorno o proceso biológico caracterizado por la expresión aberrante o anormal (no de tipo salvaje) o normal de ácido nucleico de NT2LP y/o la actividad anormal o normal de proteína NT2LP (o bien asociado con dicha expresión o actividad) mediante la estimulación de expresión de ácido nucleico de NT2LP, por ejemplo, dolor, un modulador de NT2LP puede ser, por ejemplo, una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína NT2LP (por ejemplo, una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos homologa a la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1 o 3) o una pequeña molécula o bien otro fármaco, por ejemplo, una pequeña molécula (péptido) o fármaco identificado mediante el uso de ensayos de tamizado descritos aquí, que estimula la expresión de ácido nucleico de NT2LP. Alternativamente, si es deseable tratar una enfermedad, trastorno, o proceso biológico caracterizado por una expresión aberrante o anormal (no de tipo salvaje) o normal de ácido nucleico de NT2LP y/o la actividad anormal o normal de proteína NT2LP (o bien asociado con dicha expresión o actividad), por ejemplo, dolor, mediante la inhibición de actividad de proteína NT2LP, un modulador de NT2LP puede ser un anticuerpo anti-NT2LP, una pequeña molécula o bien otro fármaco, o bien un fragmento de una proteína NT2LP (por ejemplo, el dominio extracelular), por ejemplo, una pequeña molécula o fármaco identificado empleando los ensayos de tamizado descritos aquí, que inhibe la actividad de proteína NT2LP. Si es deseable tratar una enfermedad, trastorno o proceso biológico caracterizado por la expresión aberrante o anormal (no de tipo salvaje) o normal de ácido nucleico de NT2LP y/o la actividad anormal o normal de proteína NT2LP, por ejemplo dolor, (o bien asociado con dicha expresión o actividad) , mediante la estimulación de actividad de proteína NT2LP, un modulador de NT2LP puede ser un proteína NT2LP activa o fragmento de la misma (por ejemplo, una proteína NT2LP o fragmento de la misma que tienen una secuencia de aminoácidos que es homologa a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 o 4 o un fragmento de la misma) o una pequeña molécula u otro fármaco, por ejemplo, una pequeña molécula o fármaco identificado mediante el uso de ensayos de tamizado descritos aquí, que estimula la expresión la actividad de proteína NT2LP. Otros aspectos de la invención se refieren a métodos para la modulación de la actividad de célula mediada por proteína NT2LP. Estos métodos incluyen la puesta en contacto de la célula con un agente (o bien una composición que incluye una cantidad efectiva de un agente) que modula la actividad de proteína NT2LP o una expresión de ácido nucleico de NT2LP de tal manera que una actividad de célula mediada por proteína NT2LP sea alterada con relación a niveles normales (por ejemplo, metabolismo de cAMP o bien fosfatidilinositol) . Como se emplea aquí, "una actividad de célula mediada por proteína NT2LP" se refiere a una actividad normal o anormal o a una función normal o anormal de una célula. Ejemplos de actividades de célula mediada por proteína NT2LP incluyen rotación de fosfatidilinositol, producción o secreción de moléculas, como por ejemplo proteínas, contracción, proliferación, diferenciación, supervivencia celular y participación en una ruta del dolor. En una modalidad preferida, la célula es una célula del cerebro, por ejemplo, una célula del hipocampo. El término "alterado", como se emplea aquí con referencia a un cambio, por ejemplo un incremento o una disminución de una actividad asociada con célula particularmente rotación de fosfatidilinositol o cAMP y activación de fosfolipasa cAMP o adenilatciclasa. En una modalidad, el agente estimula la actividad de proteína NT2LP o bien la expresión de ácido nucleico de NT2LP. En otra modalidad, el agente inhibe la actividad de proteína NT2LP o la expresión de ácido nucleico de NT2LP. Estos métodos de modulación pueden ser efectuados in vitro (por ejemplo, mediante el cultivo de la célula con el agente) o bien alternativamente in vivo (por ejemplo, mediante la administración del agente a un sujeto) . En una modalidad preferida, los métodos de modulación se llevan a cabo in vivo, es decir, la célula esta presente dentro de un sujeto, por ejemplo, un mamífero, por ejemplo, un ser humano, y el sujeto tiene un trastorno o una enfermedad o un proceso biológico caracterizado por una actividad anormal o aberrante o normal de proteína NT2LP o bien una expresión anormal o aberrante o normal de ácido nucleico de NT2LP, o bien se asocia con dicha actividad o expresión. Una molécula de ácido nucleico, una proteína, un modulador de NT2LP, un compuesto, etc., empleado en los métodos de la presente invención puede incorporarse en una composición farmacéutica apropiada descrita a continuación y administrada al sujeto a través de una ruta que permite a la molécula, proteína, modulador, o compuesto, etc., efectuar su función prevista. d. Características farmacogenómicas compuestos de prueba/candidatos, o moduladores que tienen un efecto de estimulación o inhibición sobre la actividad de proteína NT2LP (por ejemplo, expresión de gen NT2LP) de conformidad con lo identificado con un ensayo de tamizado descrito aquí pueden administrase a individuos para tratar (de manera profiláctica o terapéutica) trastornos o procesos biológicos (por ejemplo, trastornos y dolores del sistema nervioso central) asociados con una actividad aberrante de proteína NT2LP. En combinación con un tratamiento de este tipo, las características farmacogenómicas (es decir, el estudio de la relación entre el genotipo de un individuo y la respuesta del individuo a un compuesto foráneo o fármaco) del individuo pueden considerarse. Diferencias de metabolismo o diferencias terapéuticas pueden provocar toxicidad severa o bien falla terapéutica mediante la alteración de la relación entre la dosis y la concentración sanguínea del fármaco activo. Así, las características farmacogenómicas del individuo permiten la selección de compuestos efectivos (por ejemplo, fármacos) para tratamientos profilácticos o 5 terapéuticos con base en la consideración del genotipo del individuo. Tales características farmacogénomicas pueden emplearse además para determinar dosificaciones apropiada así como regímenes terapéuticos apropiados. Por consiguiente, la actividad de proteína NT2LP, expresión de ácido nucleico de 10 NT2LP, o bien contenido de mutación de gen NT2LP en un individuo pueden ser determinados con el objeto de seleccionar de esta forma compuesto (s) apropiado (s) para el tratamiento terapéutico o profiláctico del individuo. Las características farmacogenómicas se refieren a las 15 variaciones heredadas clínicamente significativas en cuanto a la respuesta a los fármacos debido a disposición farmacológica alterada y acción anormal en personas afectadas. Véase, por ejemplo, Eichelbaum, M. (1996) Clin, Exp. Pharmacol. Physiol. 23: (10-11) : 983-985 and Linder, 20 M.W. (1997) Clin. Chem. 43(2): 254-266. En general, dos tipos de condiciones farmacogenéticas pueden ser diferenciadas. Las condiciones genéticas transmitidas como un factor individual que altera la forma cómo los fármacos actúan en el cuerpo (acción farmacológica alterada) o bien condiciones genéticas 25 transmitidas como factores individuales que afectan la forma HM^i^i^i^ ^i^i^t^^MMIi^^^^^^^^-^i^^^^^rflM^^MlH^II^— M-»-I . «I I ni ni ni BM cómo el cuerpo actúa sobre los fármacos (metabolismo alterado de los fármacos) . Estas condiciones farmacogenéticas pueden ocurrir ya sea como defectos poco frecuentes o bien como polimorfismos. Por ejemplo, la deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD) es una enzimopatía heredada común en donde la complicación clínica principal en la hemolisis después de la ingesta de fármacos oxidantes (fármacos antimalaria, sulfonamidas, analgésicos, nitrofuranos) y consumo de habas. Como modalidad ilustrativa, la actividad de las enzimas que metabolizan los fármacos es un factor determinante principal tanto de la intensidad como de la duración de la acción farmacológica. El descubrimiento de polimorfismos genéticos de enzimas que matabolizan los fármacos 8por ejemplo, enzimas de N-acetiltransferasa 2 (NAT 2) y citocroma P450 CYP2D6 y CYP2C19) a proporcionado una explicación en cuanto al porque algunos pacientes no obtienen los efectos farmacológicos esperados o bien presentan una respuesta exagerada al fármaco y una toxicidad seria después de tomar la dosis estándar y segura de un fármaco. Estos polimorfismo se expresan en dos fenotipos en la población, el metabolizador extensivo (EM) y el metabolizador limitado (PM) . La prevalencia de PM es diferente entre poblaciones diferentes. Por ejemplo, el gen que codifica para CYP2D6 es altamente polimórfico y se identificaron varias mutaciones en PM, todas llevando a la "*Mi"*-"- -— ausencia de CYP2D6 funcional. Metabolizadores limitados de CYP2D6 y CYP2C19 presentan frecuentemente una respuesta exagerada al fármaco y presentan efectos colaterales exagerados cuando reciben dosis estándares. Si un metabolito es la porción terapéutica activa, PM no muestra respuesta terapéutica de conformidad con lo demostrado por el efecto analgésico de la codeína mediada por su metabolito formado CYP2D6 morfina. El otro extremo es lo que se conoce como metabolizadores ultrarrápidos que no responden a dosis estándares. Recientemente, la base molecular del metabolismo ultrarrápido ha sido identificada como debida a la amplificación de gen CYP2D6. Así, la actividad de proteína NT2LP, expresión de ácido nucleico NT2LP, o contenido de mutación de gen NT2LP en un individuo pueden ser determinados para seleccionar de esta forma el (los) agente (s) apropiado (s) para el tratamiento terapéutico o profiláctico de un sujeto. Además, estudios farmacogenéticos pueden emplearse para aplicar el genotipificado de alelos polimórficos que codifican enzimas que metabolizan fármacos para la identificación del fenotipo de respuesta a los fármacos del sujeto. Este conocimiento, cuando se aplica a la dosificación o selección de fármaco, puede evitar reacciones adversas o bien fallas terapéuticas y por consiguiente mejorar la eficiencia terapéutica o profiláctica cuando se da un tratamiento a un sujeto con un -¿M^^^i^i^^^MiáilH modulador de NT2LP, como por ejemplo, un modulador identificado a través de uno de los ensayos de tamizado ejemplares descritos aquí. e. Monitoreo de los efectos durante ensayos clínicos El monitoreo de la influencia de compuestos (por ejemplo, fármacos) sobre la expresión o la actividad de proteína/gen NT2LP puede aplicarse no solamente en tamizado básico de fármacos, sino también en ensayos clínicos. Por ejemplo, la efectividad de un agente determinada por ensayo de tamizado de conformidad con lo descrito aquí, para incrementar la expresión de gen NT2LP, niveles de proteína, o bien actividad regulada hacia arriba de NT2LP, puede monitorearse en ensayos clínicos de sujetos que presentan una expresión disminuida de gen NT2LP, niveles de proteína disminuidos o bien una actividad de proteína NT2LP regulada hacia abajo. Alternativamente, la efectividad de un agente, determinada por ensayo de tamizado, para disminuir la expresión de gen NT2LP, niveles de proteína, o bien para regular de manera descendente la actividad de proteína NT2LP, puede monitorearse en ensayos de control de pacientes que presentan una expresión incrementada de gen NT2LP, niveles de proteína, o bien actividad de proteína NT2LP regulada hacia arriba. En tales ensayos clínicos, la expresión o actividad de una proteína NT2LP y, de preferencia otros genes que han sido implicados, por ejemplo, en un trastorno relacionado con el sistema nervioso, pueden emplearse como "lectura" o marcadores de la célula particular. Por ejemplo, y no de manera limitativa, genes incluyendo un gen NT2LP modulados en células por tratamiento con un compuesto (por ejemplo, fármaco o pequeña molécula) que modulan la actividad de proteína/gen NT2LP (por ejemplo, identificado en un ensayo de tamizado de conformidad con lo descrito aquí) pueden identificarse. Así, para estudiar el efecto de compuestos sobre trastornos del sistema nervioso central o procesos o dolor, por ejemplo, en un ensayo clínico, se pueden aislar células y se puede preparar y analizar ARN para determinar los niveles de expresión de un gen NT2LP y otros genes implicados en el trastorno o proceso biológico. Los niveles de expresión de gen (es decir, el patrón de expresión de gen) pueden ser cuantificados por análisis Northern blot o bien RT-PCR, de conformidad con lo descrito aquí, o bien alternativamente mediante la medición de la cantidad de proteína producida por uno de los métodos descritos aquí, o bien mediante la medición de los niveles de actividad de una proteína NT2LP o bien otros genes. De esta forma, el patrón de expresión de genes puede servir como marcador, indicando la respuesta fisiológica de las células al compuesto. Por consiguiente, este estado de respuesta puede ser determinado antes, y en varios puntos durante el tratamiento del individuo con el compuesto.

En una modalidad preferida, la presente invención ofrece un método para monitorear la efectividad del tratamiento de un sujeto con un compuesto (por ejemplo, un agonista, un antagonista, péptido mimético, proteína, péptido, ácido nucleico, pequeña molécula, o bien otro fármaco candidato identificado por los ensayos de tamizado descritos aquí) que comprende los pasos de (i) obtener una muestra previa a la administración de un sujeto antes de la administración del compuesto; (ii) detectar el nivel de expresión de una proteína NT2LP, ARNm, o ADN genómico en la muestra antes de la administración; (iii) obtener una o varias muestras del sujeto después de la administración; (iv) detectar el nivel de expresión o actividad de la proteína NT2LP, ARNm, o ADN genómico en las muestras después de la administración; (v) comparar el nivel de expresión o actividad de proteína NT2LP, ARNm, o ADN genómico en la muestra antes de la administración con la proteína NT2LP, ARNm, o ADN genómico en la muestra o muestran después de la administración; (vi) alterar la administración del compuesto al sujeto de manera correspondiente. Por ejemplo, una administración incrementada del compuesto puede ser deseable para incrementar la expresión o actividad de una proteína/gen NT2LP a niveles más altos que los detectados, es decir, incrementar la efectividad de un agente. Alternativamente, la administración disminuida del agente aUa|H ¡H | ^HMHtta| i||||| puede ser deseable para disminuir la expresión o actividad de NT2LP a niveles más bajos que los detectados, es decir, para disminuir la efectividad del compuesto. VI. COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS La moléculas de ácido nucleico de NT2LP, proteína NT2LP (particularmente fragmentos de NT2LP, por ejemplo el dominio extracelular) , moduladores de una proteína NT2LP y anticuerpos anti-NT2LP (que se conocen aquí también como "compuestos activos") de la invención pueden incorporarse en composiciones farmacéuticas adecuadas para su administración a un sujeto, por ejemplo, a un ser humano. Tales composiciones comprenden típicamente la molécula de ácido nucleico, proteína, modulador, o anticuerpo y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Como se emplea aquí, la expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" incluye todos y cada uno de los solventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes antibacteriales y antifungados, agentes de retardo de absorción e isotónicos, y similares, compatibles con la administración farmacéutica. El uso de tales medios y agentes para sustancias farmacéuticamente activas es bien conocido en la técnica. Excepto en la medida en que un medio o agente convencional es incompatible con el compuesto activo, estos medios pueden emplearse en las composiciones de la invención. Compuestos activos complementarios pueden también incorporarse en las • 1-1 1 I MÍ! flll ' _JMMt^M^M1MM|MM^_|^M^,i^Mit¿M,^ji<|a,tMMMM^^^,M^^-^^MM^i,^,M|.|1||,M^^,^tM composiciones . Una composición farmacéutica de la invención se formula para que sea compatible con su vía prevista de administración. Ejemplos de vías de administración incluyen la administración parenteral, por ejemplo, intravenosa, intradérmica, subcutánea, la administración oral (por ejemplo, inhalación), la administración transdér ica (tópica) , la administración transmucosal, y la administración rectal. Soluciones o suspensiones empleadas para aplicación parenteral, intradérmica, o subcutánea pueden incluir los siguientes componentes: un diluyente estéril como por ejemplo agua para inyección, solución salina, aceites fijos, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol, o bien otros solventes sintéticos; agentes antibacterianos tales como alcohol bencílico o metilparabenos; antioxidantes tales como ácido ascórbico o bien bisulfito de sodio; agentes de quelación tales como ácido etilendiamintetraacético; amortiguadores tales como acetatos, citratos de fosfatos y agentes para el ajuste de la tonicidad como por ejemplo cloruro de sodio o dextrosa. El pH puede ser ajustado con ácidos o bases, como por ejemplo ácido clorhídrico o hidróxido de sodio. La preparación parenteral puede ser encerrada en ampolletas, jeringas desechables o bien frascos para dosis múltiples fabricados de vidrio o de plástico. Composiciones farmacéuticas adecuadas para uso inyectable .M MüMaiflM it^M incluyen soluciones acuosas estériles (cuando son solubles en agua) o bien dispersiones y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones inyectables estériles o dispersiones inyectables estériles. Para la administración intravenosa, vehículos adecuados incluyen solución salina fisiológica, agua bacteriostática, Cremophor EL® (BASF, Parsippany, NJ) o bien solución salina amortiguada con fosfato (PBS) . En todos los casos, la composición debe ser estéril y debe encontrarse en estado fluido en la medida en que existe una factibilidad de administración con jeringa. Puede estar estable en las condiciones de manufactura y almacenamiento y debe conservarse contra la acción de contaminación de microorganismos tales como bacterias y hongos. El vehículo debe ser un solvente o un medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, y polietilenglicol líquido, y similares), y mezclas adecuadas de los mismos. Se puede mantener la característica fluida apropiada por ejemplo mediante el uso de un revestimiento, por ejemplo lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño requerido de partículas en el caso de dispersión y mediante el uso de surfactantes. La prevención de la acción de microorganismos puede lograrse a través de varios agentes antibacterianos y antifungales tales como, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal, y similares. En muchos casos, es preferible influir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol, cloruro de sodio en la composición. Una absorción prolongada de las composiciones inyectables puede ser provocada mediante la inclusión en la composición de un agente que retarda la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina. Soluciones inyectables estériles pueden ser preparadas mediante la incorporación del compuesto activo (por ejemplo, una proteína NT2LP o bien anticuerpo anti-NT2LP) en la cantidad requerida en un solvente apropiado con uno de los ingredientes mencionados arriba o bien con una combinación de los ingredientes mencionados arriba, según lo requerido, seguido por esterilización filtrada. Generalmente, se preparan dispersiones mediante la incorporación del compuesto activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos seleccionados entre los mencionados arriba. En el caso de hongos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son secados en vacío y liofilización que proporcionan un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional a partir de una solución filtrada previamente estéril. Las composiciones orales incluyen generalmente un diluyente inerte o un vehículo comestible. Pueden encontrarse en ^*¡^^^^^^^*¡^ cápsulas de gelatina o bien pueden comprimirse en tabletas. Para el propósito de la administración terapéutica oral, el compuesto activo puede estar incorporado con excipientes y utilizado en forma de tabletas, pastillas o cápsulas. Las composiciones orales pueden también prepararse empleando un vehículo fluido, por ejemplo un enjuague para la boca donde el compuesto en el vehículo fluido se aplica oralmente y es expectorado o tragado. Agentes aglomerantes farmacéuticamente compatibles y/o materiales adyuvantes pueden incluirse como parte de la composición. Las tabletas, pildoras, cápsulas, o bien pastillas y similares pueden contener cualesquiera de los siguientes ingredientes o compuestos de una naturaleza similar: un aglomerante como por ejemplo celulosa microcristalina, goma tragacanto o gelatina; un excipiente, por ejemplo almidón o lactosa, un agente de desintegración como por ejemplo ácido algínico, Primogel, o bien almidón de maíz; un lubricante, por ejemplo estearato de magnesio o Sterotes; un agente de deslizamiento, por ejemplo dióxido de silicio coloidal; un endulzante, por ejemplo sucrosa o sacarina; o un saborizante, sabor a menta, salicilato de metilo, o sabor a naranja. Para la administración por inhalación, los compuestos se administran en forma de un rocío de tipo aerosol a partir de un recipiente bajo presión o surtidor que contiene un agente impulsor adecuado, por ejemplo un gas, por ejemplo dióxido de carbono, o un ^¿^. . atomizador. La administración sistémica puede también efectuarse por medios transmucosales o transdérmicos . Para la administración transmucosal o transdérmica, se emplean agentes de penetración apropiados para la barrera a permear, en la formulación. Tales agentes de penetración son generalmente conocido en la técnica e incluyen, por ejemplo, para la administración transmucosal detergentes, sales biliares, y derivados de ácido fusídico. La administración transmucosal puede lograrse a través del uso de rocíos nasales o supositorios. Para la administración transdérmica, los compuestos activos se formulan en ungüentos, geles o cremas como se sabe generalmente en la técnica. Los compuestos pueden también prepararse en forma de supositorios (por ejemplo, con bases convencionales para supositorios tales como manteca de cocoa y otros glicéridos) o bien enemas de retención para administración rectal. En una modalidad, los compuestos activos se preparan con vehículos que protegen el compuesto contra la eliminación rápida del cuerpo, por ejemplo una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes y sistemas de administración microencapsulados . Se pueden emplear polímeros biocompatibles, biodegradables, tales como acetato de etileno vinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágena, poliortoésteres, y ácido poliláctico. Métodos para la ^¡^^^^^^^ MkAílÉÉMaÉMiilHÚ^IíallltfK preparación de tales formulaciones serán aparentes a los expertos en la materia. Los materiales pueden también obtenerse comercialmente en Alza Corporation y Nova Pharmaceuticals, Inc. Suspensiones liposomales (incluyendo liposomas enfocadas hacía células infectadas con anticuerpos monoclonales hacía antígenos virales) pueden también emplearse como vehículos farmacéuticamente aceptables. Se pueden preparar de conformidad con métodos conocidos por parte de los expertos en la materia, por ejemplo, de conformidad con lo descrito en la Patente Norteamericana No. 4,522,811. Es especialmente provecho formular composiciones orales o parenterales en forma unitaria de dosificación para facilitar la administración y para una mejor uniformidad de la dosificación. Una forma unitaria de dosificación como se emplea aquí se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para el sujeto a tratar; cada unidad contiene una cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el vehículo farmacéutico requerido. La especificación para las formas unitarias de dosificación de la invención depende directamente de las características únicas del compuesto activo y del efecto terapéutico particular a lograr, y las limitaciones inherentes en la técnica de la formación de «tMiüiüifeia compuestos tales como un compuesto activo para el tratamiento de individuos. Moléculas de ácido nucleico de la invención pueden insertarse en vectores y emplearse como vectores de terapia genética. Vectores de terapia genética pueden ser administrados a un sujeto, por ejemplo, mediante inyección intravenosa, administración local (ver patente Norteamericana No. 5,328,470) o bien mediante inyección estereotáctica (ver, por ejemplo, Chen et al. (1994) PNAS 91:3054-3057). La preparación farmacéutica del vector de terapia genética puede incluir el vector de terapia genética en un diluyente aceptable o bien puede comprender una matriz de liberación lenta en la cual se integra el vehículo de administración de gen. Alternativamente, cuando el vector de administración de gen completo puede ser producido intacto a partir de células recombinantes, por ejemplo, vectores retrovirales, la preparación farmacéutica puede incluir una o varias células que producen el sistema de administración de gen. Las composiciones farmacéuticas pueden estar incluidas en un recipiente, empaque, o surtidor junto con instrucciones para su administración. VII. USOS DE SECUENCIAS DE NT2LP PARCIALES Fragmentos o fragmentos de la secuencia de ADNc identificadas aquí (y las secuencias de gen completo correspondientes) pueden emplearse de varias maneras como reactivos de polinucleótidos. Por ejemplo, estas secuencias pueden emplearse para: (a) mapear sus genes respectivos en un cromosoma; y, por consiguiente, localizar regiones de gen asociados con una enfermedad genética; (b) identificar un individuo a partir de una muestra biológica diminuta (tipificado de tejido); y (c) ayudar a la identificación forense de una muestra biológica. Estas aplicaciones se describen en las subsecciones a continuación, a. Mapeo de Cromosoma Una vez aislada la secuencia (o un fragmento de la secuencia) de un gen, esta secuencia puede emplearse para mapear la localización del gen en un cromosoma. Este proceso se conoce como mapeo de cromosoma. Por consiguiente, fragmentos de secuencias de ácido nucleico de NT2LP pueden emplearse para mapear la localización del gen NT2LP, respectivamente, en un cromosoma. El mapeo de la secuencia de NT2LP sobre cromosomas es un primer paso importante para correlacionar estas secuencias con genes asociados con la enfermedad. En resumen, el gen NT2LP puede ser mapeado sobre un cromosoma mediante la preparación de iniciadores de reacción en cadena de polimerasa (de preferencia de 15 a 25 pares de bases de longitud) a partir de la secuencia de gen NT2LP. Un análisis por computadora de las secuencias de gen NT2LP puede emplearse para seleccionar rápidamente iniciadores que no abarcan más que un exón en el ADN genómico, complicando así ^MIÉI^I^MHllÉii el proceso de amplificación. Estos iniciadores pueden después emplearse para el tamizado por reacción en cadena de polimerasa de híbridos de células somáticas que contienen cromosomas humanos individuales. Solamente los híbridos que contienen el gen humano que corresponde a la secuencia de gen NT2LP proporcionarán un fragmento amplificado. Híbridos de células somáticas se preparan mediante la fusión de células somáticas provenientes de mamíferos diferentes (por ejemplo, células de seres humanos y ratones) . Conforme híbridos de células de ser humanos y ratones crecen y se dividen, pierden gradualmente cromosomas humanos en orden aleatorio pero conservan los cromosomas de ratón. Mediante el uso de medios en los cuales células de ratón no pueden crecer, porque no tienen una enzima particular, pero en las cuales las células humanas pueden crecer, el cromosoma humano que contiene el gen que codifica la enzima requerida será conservado. Mediante el uso de varios medios, se pueden establecer paneles de líneas de células híbridas. Cada línea de células en un panel contiene ya sea un cromosoma humano único o un pequeño número de cromosomas humanos, y un conjunto completo de cromosomas de ratón, permitiendo un mapeo fácil de genes individuales en cromosomas humanos específicos. (D'Eustachio et al. (1983) Science 220:919-924) . Híbridos de células somáticas que contienen solamente fragmentos de cromosomas de ser humano pueden también producirse mediante el uso de cromosomas humanos con translocalizaciones y remociones. El mapeo por reacción en cadena de polimerasa de híbridos de células somáticas es un procedimiento rápido para asignar una secuencia particular a un cromosoma particular. Tres o más secuencias pueden asignarse por día empleando un dispositivo ciclador térmico único. Usando la secuencia de gen NT2LP para diseñar iniciadores de oligonucleótidos, se puede lograr una sublocalización con paneles de fragmentos provenientes de cromosomas específicos. Otras estrategias de mapeo que pueden emplearse de manera similar para mapear una secuencia de gen NT2LP en su cromosoma incluyen la hibridación in situ (descrita en Fan et al. (1990) PNAS, 87:6223-27), el tamizado previo con cromosomas clasificados por flujos marcados, y la selección previa por hibridación con bibliotecas de ADNc específicas de cromosoma. La hibridación in situ por fluorescencia (FISH) de una secuencia de ADN sobre una extensión cromosómica metafásica puede emplearse además para proporcionar una localización cromosómica precisa en un paso. Se pueden efectuar extensiones de cromosoma empleando células cuya división ha sido bloqueada en metafase por una sustancia química como por ejemplo colcemida que trastorna el huso mitótico. Los cromosomas pueden ser tratados brevemente con tripsina, y después teñidos con Giemsa. Un patrón de bandas claras y oscuras se desarrolla en cada cromosoma, de tal manera que se pueden identificar individualmente los cromosomas. La técnica FISH pude emplearse con una secuencia de ADN desde 500 o 600 bases. Sin embargo, clones mayores que 1000 bases tienen una mayor probabilidad de enlace sobre una localización cromosómica única con una intensidad de señal suficiente para una detección sencilla. De preferencia 1000 bases, y con mayor preferencia 2000 bases serán suficientes para obtener buenos resultados en un tiempo razonable. Para una reseña de esa técnica, ver Verma et al., Human Chromosomes: A Manual of Basic Techniques (Cromosomas Humanos: Un Manual de Técnicas Básicas) (Pergamon Press, New York, 1988) . Reactivos para el mapeo de cromosomas pueden emplearse para marcar un cromosoma único o bien un sitio único en este cromosoma, o paneles de reactivos pueden emplearse para marcar sitios múltiples y/o cromosomas múltiples. Reactivos que corresponde a regiones no codificadoras de los genes se prefieren actualmente para propósitos de marcado. Secuencias de codificación serán conservadas con mayor probabilidad dentro de familias de genes, incrementando así la posibilidad de hibridaciones cruzadas durante el mapeo de cromosomas. Una vez mapeada una secuencia en una ubicación cromosómica precisa, la posición física de la secuencia en el cromosoma puede ser correlacionada con datos e mapa genético (tales datos se encuentran, por ejemplo, en V. McKusick, Mendelian -MI-HitiaUitfÉtfMMii Inheritance in Man (Herencia Mendeliana en el Ser Humano) , disponible en linea a través de Johns Hopkins University Wßlch Medical Library) . La relación entre genes y enfermedad, mapeada en la misma región c omotsó xca, puede después identificarse a través de análisis d? enlace (coherencia de genes físicamente adyacentes), co o se describe por ejemplo, en Egeland, J. et al. (1987) Nature, 325:783-787. Además , diferencias en la secuencia de ADN entre individuos afectados y no afectados por una enfermedad asociada con el gen NT2LP, pueden determinarse. Si se observa una mutación, algunos o la totalidad de los individuos afectados pero no en los individuos no afectados, entonces es probable que la mutación sea el agente causante de la enfermedad particular. La comparación de individuos afectados y no afectados involucra generalmente el hecho de detectar primero alteraciones estructurales en los cromosomas, como por ejemplo remociones o translocalizasiones que son visibles a partir de las extensiones de cromosoma o bien que pueden detectarse empleando reacción en cadena de polimerasa con base en esta secuencias de ADN. Finalmente, una eesuenciasión completa de genes provenientes de varios individuos puede efectuarse para confirmar la presencia de mutación y para distinguir mutaciones de polimorfismos. b. Tipi auión de tejido Las secuencias de gen NT2LP de la presente invención pueden también emplearse para identificar individuos a partir de muestras biológicas diminutas. El ejército de los Estados Unidos de América, por ejemplo, está considerando el uso de polimorfismo de longitud de fragmento de restricción (RFLP) para la identificación de su personal. En esa técnica el ADN genómico de un individuo es digerido con una o varias enzimas de restricción, y probado en un ensayo Southern blot para proporcionar bandas únicas para su identificación. Este método no adolece de las limitaciones actuales de lo que se conoce "marcadores de perro" (Dog Tags) que pueden pederse, conmutarse, o robarse, haciendo difícil una identificación positiva. Las secuencias de la presente invención son útiles como marcadores de ADN adicionales para RFLP (se describe en la Patente Norteamericana No. 5,272,057). Además, las secuencias de la presente invención pueden emplearse para proporcionar una técnica alternativa que determina la secuencia de ADN real base por base de fragmentos seleccionados del genoma de un individuo así, las secuencias de NT2LP descritas aquí pueden emplearse para preparar dos iniciadores de reacción en cadena de polimerasa para los extremos 5' y 3' de las secuencias. Estos iniciadores pueden después emplearse para amplificar el AND de un individuo y subsecuentemente secuenciarlo. Paneles de secuencia de ADN correspondientes proveniente de individuos preparados de esta forma pueden ofrecer identificaciones únicas de individuos, puesto que cada individuo tendrá un conjunto único de tales secuencias de ADN debido a diferencias alélicas. Las secuencias de la presente invención pueden emplearse para obtener tales secuencias de identificación a partir de individuos y a partir de tejido. Las secuencias de gen NT2LP de la invención representan de manera única fragmentos del genoma humano. Variaciones alélicas ocurren hasta cierto punto en las regiones de codificación de estas secuencias, y en mayor medida en las regiones no codificadoras. Se estima que la variación alélica entre seres humanos individuales ocurre con una frecuencia de aproximadamente una vez por 500 bases. Cada una de las secuencias descritas aquí puede, hasta cierto punto como estándar contra el cuál se puede comparar el ADN de un individuo para propósitos de identificación. Puesto que números mayores de polimorfismos ocurren en las regiones no codificadoras, un número menor de secuencias se requiere para diferenciar los individuos. La secuencia no codificadora de SEQ ID Nos: 1 o 3, puede proporcionar fácilmente una identificación individual positiva con un panel de tal vez 10 a 1000 iniciadores cada uno proporcionando una secuencia amplificada no codificadora de 100 bases. Si una secuencia codificadora predicha, por ejemplo la que se muestra en las figuras 1 y 2 de SEQ ID Nos: 1 o 3, se emplea, un número más apropiado de iniciadores para una identificación individual positiva sería de 500 a 2,000. Si se emplea un panel de reactivos provenientes de las secuencias de gen NT2LP descritas aquí para generar una base de datos de identificación única para un individuo, estos mismos reactivos pueden emplearse después para identificar tejido proveniente de este individuo. Mediante el uso de la base de datos de identificación única, se puede efectuar una identificación positiva del individuo, ya sea vivo o muerto, a partir de muestras de tejido extremadamente pequeñas. c. Uso de secuencias de gen NT2LP parciales en biología forense Se pueden también emplear técnicas de identificación basadas en ADN en biología forense. La biología forense en una ciencia que emplea la tipificación genética de evidencia biológica encontrada en la escena de un crimen como un medio para identificar positivamente, por ejemplo, la persona que perpetró un crimen. Para efectuar dicha identificación, se puede emplear una tecnología de reacción en cadena de polimerasa para amplificar secuencias de ADN tomadas de muestras biológicas muy pequeñas como por ejemplo tejidos, por ejemplo cabello o piel, o bien fluidos corporales, por ejemplo, sangre, saliva o semen encontrados en el escenario de un crimen. La secuencia amplificada puede después ser comparada con un estándar, permitiendo así la identificación del origen de la muestra biológica.

Las secuencias de la presente invención pueden emplearse para proporcionar reactivos de polinucleótidos, por ejemplo, iniciadores de reacción en cadena de polimerasa, enfocados hacia loci específicos en el genoma humano lo que puede mejorar la confiabilidad de identificaciones forenses basadas en ADN proporcionando por ejemplo otro "marcador de identificación" (es decir, otra secuencia de ADN que es única para un individuo particular) . Como se describió arriba, la información de secuencia de base real puede efectuarse para la identificación como una alternativa precisa a los patrones formados por fragmentos generados por enzima de restricción. Secuencias enfocadas hacia la región no codificadora de SEQ ID Nos: 1 o 3 son especialmente apropiadas para este propósito puesto que ocurre un número mayor de polimorfismos en las regiones no codificadoras, lo que hace más fácil diferenciar individuos empleando esta técnica. Ejemplos de reactivos de polinucleótidos incluyen las secuencias NT2LP o fragmentos de las mismas, por ejemplo, fragmentos derivados de la región no codificadora de SEQ ID Nos: 1 o 3, que tienen una longitud de por lo menos 20 bases, de preferencia por lo menos 30 bases. Las secuencias de NT2LP descritas aquí pueden emplearse además para proporcionar reactivos de polinucleótidos, por ejemplo, sondas marcadas o que pueden marcarse que pueden emplearse por ejemplo en una técnica de hibridación in situ -para identificar un tejido específico, por ejemplo, tejido de cerebro. Esto puede ser muy útil en casos en los cuales un patólogo forense recibe un tejido de origen desconocido. Paneles de sondas de NT2LP de este tipo pueden ser empleados para identificar tejido por especie y/o por tipo de órgano. De manera similar, estos reactivos, por ejemplo, iniciadores de NT2LP o sondas pueden emplearse para tamizar cultivos tisulares para contaminación (es decir, tamizar para determinar la presencia de una mezcla de tipos diferentes de células en un cultivo) . Esta invención se ilustra adicionalmente a través de los siguientes ejemplos que no deben considerarse como limitativos. El contenido de las referencias, solicitudes de patente, patentes, y solicitudes de patente publicadas mencionadas en esta solicitud se incorporan aquí por referencia . EJEMPLOS EJEMPLO 1: IDENTIFICACIÓN DE ADNc DE NT2LP DE SER HUMANO Y DE MONO En este ejemplo, se identificó la molécula de ácido nucleico de NT2LP de ser humano y de mono. Se identificó primero un EST no anotado (GenBank® No. de Acceso T00621) mediante análisis de una base de datos EST (una búsqueda de GenBank® de la base de datos dbEST) con base en una búsqueda diseñada para identificar la secuencia que mostró niveles bajos de M^káriaMÉlWMMHIÉI homología con GPCRs. Se diseñaron después iniciadores con base en la secuencia EST y se emplearon para tamizar una biblioteca de ADNc fetal de ser humano o mono. Se identificaron varios clones positivos, se secuenciaron y las secuencias fueron ensambladas (figura 1 y SEQ ID Nos: 1 y 2) . Un análisis BLAST de bases de datos de ácido nucleico del dominio público mostró homologías con miembros de la familia NT de receptores y receptores de glutamato. La secuencia de ADN de NT2LP de mono se empleó para sondear secuencias humanas obtenidas de varias fuentes de biblioteca. Se identificaron varios clones a partir de una biblioteca de ADNc de cerebro humano que contenían secuencias con alta homología con las secuencias de NT2LP de mono. Las secuencias fueron ensambladas en grupos contig, proporcionando la identificación de dos formas de empalme de NT2LP humano. Estas dos variantes de empalme (figura 2) tienen la misma región de codificación y difiere solamente en el UTR de 5'. EJEMPLO 2: ANÁLISIS NORTHERN BLOT DE EXPRESIÓN DEL GEN NT2LP EN TEJIDO Con sondas específicas para NT2LP de mono se sondearon absorciones Northern (MTN) de tejidos múltiples de cerebro humano, absorciones MTN I, II, e III humanas (Clontech, Palo Alto, CA) , que contenían 2 µg de ARN poli A+ por banda. Los filtros fueron prehibridados en 10 ml de solución de hibridación Express Hyb (Clontech; Palo Alto, CA) a una temperatura de 68 °C durante 1 hora, después de lo cual se agregaron 100 ng de sonda marcada con 32P. La sonda fue generada empleando el kit Stratagene Prime-It, No. de catálogo 300392 (Clontech, Palo Alto, CA) . Se permitió que prosiguiera la hibridación a una temperatura de 68°C durante aproximadamente 2 horas. Los filtros fueron lavados en una solución SDS/2X SSC al 0.05% durante 15 minutos a temperatura ambiente y después dos veces con una solución SDS/0.1X SSC al 0.1% durante 20 minutos a una temperatura de 50°C y después los filtros fueron expuestos a una película de autoradiografía durante la noche a una temperatura de -80°C con una pantalla. Los tejidos humanos probados incluyeron: corazón, cerebro, placenta, pulmón, hígado, músculo esqueletal, riñon, páncreas, bazo, timo, próstata, testículos, útero, intestino delgado , colon (forro mucosal), así como leucocito de sangre periférica. Se observó una fuerte hibridación con el cerebro entero humano y una señal más débil en los ovarios. No se observó ninguna señal en placenta, pulmón, hígado, músculo esqueletal, riñon, páncreas, bazo, timo, próstata, testículo, útero, intestino delgado, colon (forro mucosal) y leucocito de sangre periférica. Dentro del cerebro, la hibridación se observó en todas las subregiones. EJEMPLO 3 : EXPRESIÓN DE PROTEÍNA NT2LP RECOMBINANTE EN CÉLULAS BACTERIANAS *^? En este ejemplo, NT2LP es expresado como proteína de fusión glutation-S-transferasa (GST) recombinante en E. coli y la proteína de fusión es aislada y caracterizada. Específicamente, se fusiona NT2LP sobre GST y esta proteína de fusión es expresada en E. coli, por ejemplo, cepa PEB199. La expresión de la proteína de fusión GST-NT2LP en PEB199 es inducida por IPTG. La proteína de fusión recombinante es purificada a partir de usados bacterianos crudos de la cepa PEB199 inducida por cromatografía por afinidad en perlas de glutationa. El uso de análisis electroforético en gel de poli acrilamida de la proteína purificada a partir de los usados bacterianos permite la determinación del peso molecular de la proteína de fusión resultante. EJEMPLO 4 : EXPRESIÓN DE PROTEÍNA NT2LP RECOMBINANTE EN CÉLULAS COS Para expresar el gen NT2LP en células COS, el vector pcDNA/ Amp por Invitrogen Corporation (San Diego, CA) se emplea. Este vector contiene un origen SV40 de replicación, un gen de resistencia a la ampicilina, un origen de replicación de E. coli, un promotor de CMV seguido por una región de polienlazador y un intron SV40 y sitio de poliadenilación. Un fragmento de ADN que codifica toda la proteína NT2LP y un marcador HA ( ilson et al. (1984) Cell 37:767) fusionado en marco en su extremo 3' del fragmento es clonado en la región de polienlazador del vector, colocando así la expresión de la -¿^¿^^^^^^¡¡Hm ^m^^^^m ^mm^?^^? ^ mmi^i^im ^i ?^ ^ i iiai i proteína recombinante bajo el control del promotor de CMV. Para construir el plásmido, la secuencia de ADN de NT2LP es amplificada por reacción en cadena de polimerasa empleando dos iniciadores. El iniciador 5' contiene el sitio de restricción de interés seguido por aproximadamente 20 nucleótidos de la secuencia de codificación de NT2LP empezando a partir del codón de iniciación; la secuencia de extremo 3' contiene secuencias complementarias del otro sitio de restricción de interés, un codón de detención de translación, un marcador HA y los últimos 20 nucleótidos de la secuencia de codificación de NT2LP. El fragmento amplificado por reacción en cadena de polimerasa y el vector pCDNA/Amp se digieren con las enzimas de restricción apropiadas y el vector es desfosforilado empleando la enzima CIAP (New England Biolabs; Beverly, MA) . De preferencia, los dos sitios de restricciones seleccionados son diferentes de tal manera que el gen NT2LP sea insertado en la orientación correcta. La mezcla de ligación es transformada en células E. coli (cepas HB101, DH5a, SURE, disponibles en Stratagene Cloning Systems, La Jolla, CA, pueden emplearse) , el cultivo transformado es colocado en placas de medios de ampicilina, y se seleccionan colonias resistentes. El ADN de plásmido es aislado a partir de transformantes y examinado por análisis de restricción para determinar la presencia del fragmento correcto. _?^_^ ^¿ai ? l^__ _ ^1jmii tati^- ^ *íiit*?¡^^ ¿i * -? **¿ÍI?á*?? * * ^^-^ t^^^m?^?Mt?¿^l^ Células COS son subsecuentemente transfectadas con el ADN de plásmido NT2LP-pcDNA/Amp empleando los métodos de coprecipitación de fosfato de calcio o cloruro de calcio, transfección mediada por DEAE-dextrano, lipofección, o bien electroporación. Otros métodos adecuados para transfectar células huéspedes pueden encontrarse en Sambrook et al . , Molecular Cloning: A Laboratory Manual. (Clonación molecular: un manual de laboratorio) 2da. edición, Cold. Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989) . La expresión de la proteína NT2LP es detectada por radiomarcado (35S-metionina o bien 35S-cisteina disponible en NEN, Boston, MA, puede emplearse) e inmunoprecipitación (Harlow y Lañe, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1988) empleando un anticuerpo monoclonal específico para HA. En resumen, las células son marcadas durante 8 horas con 35S-metionina (o bien 35S-cisteina) . Los medios de cultivo son después recogidos y las células usadas empleando detergentes (amortiguador RIPA, 150 mM NaCl, 1% NP- 40, 0.1% SDS, 0.5% DOC, 50 mM Tris, pH 7.5). Tanto el lisado celular como los medios de cultivo se precipitan con un anticuerpo monoclonal específico para HA. Las proteínas precipitadas son después analizadas por SDS-PAGE. Alternativamente, un ADN que contiene la secuencia de codificación de NT2LP es clonado directamente en el polienlazador de vector pCDNA/Amp usando los sitios de restricción apropiados. El plásmido resultante es transfectado en células COS de la manera descrita arriba, y la expresión de la proteína NT2LP es detectada por radiomarcado e inmunoprecipitación empleando un anticuerpo monoclonal específico para NT2LP. EJEMPLO 5: CARACTERIZACIÓN DE LA PROTEÍNA NT2LP HUMANA En este ejemplo, la secuencia de ácidos nucleicos de proteína NT2LP se comparó con secuencias de aminoácidos de proteínas conocidas y se identificaron varios motivos. Un análisis de hidrofobicidad indicó que la proteína NT2LP humana contiene siete dominios de transmembrana (aminoácidos 34-58, 72-96, 113-131, 154-175, 212-236, 298-314 y 339-358; figura 4) . Como se muestra en la figura 5, NT2LP tiene una región (aminoácidos 49-358) que tiene una homología con una secuencia de consenso de familia de receptor de siete dominios de transmembrana derivada de un Markov Model escondida (PF0001) . Para información general en cuanto a identificadores de PFAM, véase Sonnhammer et al. (1997) Protein 28:405-420 y http: //www. psc.edu/general/software/pac ages/pfam/pfam.html . La secuencia de nucleótidos de NT2LP de ser humano y de mono se empleó como una investigación de base de datos empleando el programa BLASTN (BLASTN1.3MP, Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403). La figura 7 es un conjunto de alineaciones entre porciones de NT2LP (sujeto) y porciones de receptor de neurotensina de ratón de tipo 2 (P70310) . EJEMPLO 6: DISTRIBUCIÓN DE TEJIDO DE ARNm DE NT2LP Para un análisis de hibridación in situ, se fijaron posteriormente secciones de diez micrómetros de espesor de tejidos seleccionados con formaldehído al 4% en una solución salina amortiguada con IX fosfato tratado con DEPC a temperatura ambiente durante 10 minutos antes de enjuagarse dos veces en una solución salina amortiguada con IX fosfato tratada con DEPC y una vez en trietanolamina-HCl 0.1 M (pH 8.0). Después de incubación en anhídrido acético 0.25% -trietanolamina-HCl 0.1 M durante 10 minutos, las secciones fueron enjuagadas en DEPC 2X, PBS IX. Los tejidos fueron después deshidratados a través de una serie de lavados con etanol, incubados en cloroformo al 100% durante 5 minutos (dos veces) , y después enjuagados en etanol al 100% durante 1 minuto y etanol al 95% durante 1 minuto y se dejó secar al aire. Hibridaciones fueron efectuadas con sondas de ARNc radiomarcadas con 35S (5X1O7 cpm/ml) diseñadas para hibridarse específicamente con ARN mensajero de NT2LP. Las sondas fueron incubadas en presencia de una solución que contenía 600 mM de NaCl, 10 mM de Tris (pH 7.5), 1 mM de EDTA, ARNt de levadura al 0.01%, ARN total de tipo XI de levadura al 0.05%, IX solución de Denhardt, 50% de formamida, 10% sulfato de IttB^ÍH ^Oil^^llitlMriM lÉMk Éli^MaHiaalMlk dextrano, 100 mM de ditiotreitol, dodecilsulfato sódico al 0.25% (SDS), durante 18 horas a una temperatura de 55°C. Después de la hibridación, se lavaron las platinas con 2XSSC. Las secciones fueron después incubadas secuencialmente a temperatura ambiente en TNE (una solución que contenía 10 mM de Tris-HCl (pH 7.6), 500 mM de NaCl, y 1 mM de EDTA), durante 10 minutos, en TNE con 40 microgramos de Rnasa A por ml durante 30 minutos, y finalmente en TNE durante 10 minutos. Las platinas fueron después enjuagadas con 2 X SCC a temperatura ambiente, lavadas con 2 X SSC a una temperatura de 60°C durante 30 minutos, lavadas con 0.2 X SSC a una temperatura de 65°C durante 30 minutos, y 0.2 X SCC a una temperatura 65°C durante 30 minutos. Las secciones fueron después deshidratadas rápidamente a través de etanol en serie antes de ser secadas en el aire y expuesta a una película de formación de imagen científica Kodak Biomax MR durante 24 a 48 horas y subsecuentemente sumergidas en fotoemulsión NTB-2 y expuestas a temperatura ambiente durante 14 días antes de revelado y contra tinción. Este análisis reveló que NT2LP de ser humano se expresa en neuronas del sistema nervioso central y en el sistema nervioso periférico. Se detectó NT2LP en el ganglio de raíz dorsal, el ganglio trigeminal, y el ganglio cervical superior. EJEMPLO 7: MAPEO GENÓMICO DE NT2LP DE SER HUMANO '-** * Se empleó el Genebridge 4 Radiation Hybrid Panel (Panel híbrido de radiación 4) para mapear el gen NT2LP humano. NT2LP se mapea en el cromosoma 2, 19.5 cR3ooo telomérico con marcador WI-6565 de estructura del Instituto Whitehead y 90 CR3000 centromérico con el marcador D2S359 de estructura del Instituto Whitehead. NT2LP se localiza en la ubicación citogénica 2p24pTEL, en el extremo telomérico final del brazo P del cromosoma 2. Equivalentes Los expertos en la materia reconocerán o bien podrán determinar empleando solamente experimentos de rutina, muchos equivalentes a las modalidades específicas de la invención descritas aquí. Tales equivalentes se encuentran dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones.

Claims

REIVINDICACIONES Una molécula de ácido nucleico aislada seleccionada dentro del grupo que consiste de: a) una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4; b) una molécula de ácido nucleico que codifica un fragmento de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4, donde el fragmento comprende por lo menos 15 aminoácidos contiguos de SEQ ID Nos: 2 o 4; y c) una molécula de ácido nucleico que codifica una variante alélica que ocurre naturalmente de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4, donde la molécula de ácido nucleico se híbrida con una molécula de ácido nucleico que comprende SEQ ID Nos: 2 o 4 bajo condiciones estrictas. La molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1 que comprende además secuencias de ácido nucleico de vector. La molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1 que comprende además secuencias de ácido nucleico que codifican una proteína heteróloga. Una célula huésped que contiene la molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1. La célula huésped de conformidad con la reivindicación 4 que es una célula huésped de mamífero. Una célula huésped de mamífero no humano que contiene la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1. La molécula de ácido nucleico aislada de conformidad con la reivindicación 1, que se selecciona dentro del grupo que consiste de la región codificadora de SEQ ID Nos: 1 o 3 y el dominio extracelular codificado por SEQ ID Nos: 1 o 3. Una proteína aislada seleccionada dentro del grupo que consiste de: a) una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4; b) un fragmento de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4, donde el fragmento comprende por lo menos 15 aminoácidos contiguos de SEQ ID Nos: 2 o 4; y c) una variante alélica que ocurre naturalmente de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4 donde la proteína es codificada por una molécula de ácido nucleico que se híbrida con una molécula de ácido nucleico que comprende SEQ ID Nos: 1 o 3 bajo condiciones estrictas. 9. La proteína de conformidad con la reivindicación 8 que comprende además secuencias de aminoácidos heterólogas. 10. Un anticuerpo que se une selectivamente a una proteína de conformidad con la reivindicación 8. 11. Un método para producir una proteína seleccionada dentro del grupo que consiste de: a) una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4; b) un fragmento de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4, donde el fragmento comprende por lo menos 15 aminoácidos contiguos de SEQ ID Nos: 2 o 4; y c) una variante alélica que ocurre naturalmente de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4, donde la proteína es codificada por una molécula de ácido nucleico que se híbrida con una molécula de ácido nucleico que comprende SEQ ID Nos: 1 o 3 bajo condiciones estrictas; el método comprende el paso de cultivar la célula huésped de la reivindicación 4 en condiciones en las cuales se expresa la molécula de ácido nucleico. 12. Un método para detectar la presencia de una proteína seleccionada dentro del grupo que consiste de: a) una proteína que comprende la secuencia de ^^^ttta^ i tt it míi^i imi itm i ^u^ l ám aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4; b) un fragmento de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4, donde el fragmento comprende por lo menos 15 aminoácidos contiguos de SEQ ID Nos: 2 o 4; y c) una variante alélica que ocurre naturalmente de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4, donde la proteína se encuentra codificada por una molécula de ácido nucleico que se híbrida con una molécula de ácido nucleico que comprende SEQ ID Nos: 1 o 3 bajo condiciones estrictas; en una muestra, el método comprende los pasos de: i) poner en contacto la muestra con un compuesto que se une selectivamente con la proteína; y ii) determinar si el compuesto se une con la proteína en la muestra. . El método de conformidad con la reivindicación 12, donde el compuesto que se une con la proteína es un anticuerpo. . Un kit que comprende reactivos empleados para el método de conformidad con la reivindicación 12, donde los reactivos comprenden un compuesto que se une selectivamente a una proteína seleccionada dentro del grupo que consiste de: a) una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4; b) un péptido que comprende por lo menos 15 aminoácidos contiguos de SEQ ID Nos: 2 o 4; y c) una variante alélica que ocurre naturalmente de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4, donde la proteína es codificada por una molécula de ácido nucleico que se híbrida con una molécula de ácido nucleico que comprende SEQ ID Nos: 1 o 3 bajo condiciones estrictas. Un método para detectar la presencia de una molécula de ácido nucleico seleccionado dentro del grupo que consiste de: a) una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4; b) una molécula de ácido nucleico que codifica un fragmento de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4, donde el fragmento comprende por lo menos 15 aminoácidos contiguos de SEQ ID Nos: 2 o 4; y c) una molécula de ácido nucleico que codifica una variante alélica que ocurre naturalmente de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4, donde la molécula de ácido nucleico se híbrida sobre una molécula de ácido nucleico que comprende SEQ ID Nos: 1 o 3 bajo condiciones estrictas; en una muestra, el método comprende los pasos de: i) poner en contacto la muestra con una sonda de ácido nucleico o un iniciador que se híbrida selectivamente con la molécula de ácido nucleico; y ii) determinar si la sonda de ácido nucleico o iniciador se une sobre una molécula de ácido nucleico en la muestra. El método de conformidad con la reivindicación 15, donde la muestra comprende moléculas de ARNm y está en contacto con una sonda de ácido nucleico. Un kit que comprende reactivos empleados para el método de conformidad con la reivindicación 15, donde los reactivos comprenden un compuesto que híbrida selectivamente con una molécula de ácido nucleico seleccionada dentro del grupo que consiste de: a) una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4; b) una molécula de ácido nucleico que codifica un fragmento de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4, donde el fragmento comprende por lo menos 15 aminoácidos contiguos de SEQ ID Nos: 2 o 4; y c) una molécula de ácido nucleico que codifica una variante alélica que ocurre naturalmente de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4, donde la molécula de ácido nucleico se híbrida con una molécula de ácido nucleico que comprende SEQ ID Nos: 1 o 3 en condiciones estrictas. Un método para identificar un compuesto que se une con una proteína seleccionada dentro del grupo que consiste de: a) una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4; b) un fragmento de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4, donde el fragmento comprende por lo menos 15 aminoácidos contiguos de SEQ ID Nos: 2 o 4; y c) una variante alélica que ocurre naturalmente de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4, donde la proteína es codificada por una molécula de ácido nucleico que se híbrida con una molécula de ácido nucleico que comprende SEQ ID Nos: 1 o 3 en condiciones estrictas, el método comprende los pasos de: i) poner en contacto la proteína, o una célula que expresa la proteína con un compuesto de prueba; y ii) determinar si la proteína se une con el compuesto de prueba. El método de conformidad con la reivindicación 18, donde la unión del compuesto de prueba con la proteína es detectada a través de un método seleccionado dentro del grupo que consiste de: a) detección de unión por detección directa de unión compuesto de prueba/proteína; b) detección de unión empleando un ensayo de unión de competición; c) detección de unión empleando un ensayo para determinar la actividad NT2LP. Un método para la modulación de la actividad de una proteína seleccionada dentro del grupo que consiste de: a) una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4; y b) una variante alélica que ocurre naturalmente de una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nos: 2 o 4, donde la proteína es codificada por una molécula de ácido nucleico que se híbrida con una molécula de ácido nucleico que comprende SEQ ID Nos: 1 o 3 en condiciones estrictas, el método comprende los pasos de: i) poner en contacto una célula que expresa la proteína con un compuesto que se une con la proteína en una concentración suficiente para modular la actividad de la proteína. 21. El método de conformidad con la reivindicación 20, donde la actividad es una actividad fosfatidilinositol. 22. El método de conformidad con la reivindicación 20, donde la actividad es una actividad cAMP.