MX2013001099A - Crema o gel de aplicación tópica con neurotoxina botulinica encapsulada en nanoparticulas liposomales para el tratamiento de la hiperhidrosis. - Google Patents

Abstract

La presente invención trata de una formulación estable de crema o gel de neurotoxina botulínica tipo A acoplada a nanopartículas liposomales de tercera generación de aplicación tópica para el tratamiento de la hiperhidrosis. La formulación contiene un agente espesante, un agente emulsificante y un agente hidratante en un pH similar a la piel humana. Mediante esta formulación de aplicación tópica se puede disminuir la dosis de toxina aplicada por sesión, se evita el dolor asociado a las inyecciones y se logra un efecto clínico de inhibición de la sudoración.

Description

CREMA O GEL DE APLICACIÓN TÓPICA CON NEUROTOXINA BOTULINICA ENCAPSULADA EN NANOPARTÍCULAS LIPOSOMALES PARA EL TRATAMIENTO DE LA HIPERHIDROSIS.

DESCRIPCIÓN CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se encuentra en el campo de los desarrollos farmacéuticos enfocados al uso médico dermatológico. La invención está relacionada con la formulación y aplicación de una crema de toxina botulínica tipo A encapsulada en nanopartículas liposomales para el tratamiento de la hiperhidrosis axilar y palmo-plantar.

ANTECEDENTES La hiperhidrosis es una condición anormal en la cual se genera una producción excesiva de sudor que excede las necesidades requeridas para mantener la temperatura corporal que requieren las situaciones de calor ambiental o la ejecución de un ejercicio. Aproximadamente el 2.8% de la población padece hiperhidrosis. La hiperhidrosis puede presentarse en cualquier parte del cuerpo y ser focal o generalizada. La sudoración focal ocurre en palmas, plantas y axilas y es regulada por el sistema límbico y la corteza frontal. La hiperhidrosis focal es idiopática y puede presentarse en personas sanas.

Esta condición impacta en el ámbito psicológico y social de la persona y llega a interferir con sus actividades diarias; además de provocar maceración de la piel e infecciones secundarias. Afecta a hombres y mujeres por igual. El promedio de edad de inicio es a los 25 años; pero la hiperhidrosis palmar y axilar comienza más tempranamente entre los 13 y 19 años. Se considera que existe una predisposición genética del 30 al 50%.

El tratamiento de primera línea para la hiperhidrosis consiste en la aplicación de sales de aluminio, iontoforesis y fármacos anticolinérgicos; sin embargo son de corta acción y en ocasiones resultan ineficientes o no pueden utilizarse debido a los efectos adversos que producen. Además existen procedimientos quirúrgicos como liposucción, escisión de las glándulas y la simpatectomía que es una cirugía que conlleva riesgos.

Uno de los tratamientos con mayor satisfacción del paciente es la inyección de toxina botulínica tipo A; ésta mejora la condición hasta en un 95% de los afectados, el procedimiento implica la inyección intradérmica de 100 unidades de toxina por palma o axila y tiene un efecto que dura de cuatro a seis meses. Las principales limitantes de la inyección de toxina botulínica tipo A es el intenso dolor asociado con las inyecciones en palmas y plantas debido a la gran inervación que tienen estos tejidos y la disminución de la fuerza prensil debida a la parálisis de los músculos de la mano. Para disminuir el dolor se han establecido varias estrategias como la aplicación de anestesia de bloqueo, anestesia tópica y crioanalgesia.

La toxina botulínica es la más potente neurotoxina conocida, y puede ser empleada en el tratamiento de este padecimiento por su condición de agente paralizante del músculo de acción local que inyectado en la zona con hiperhidrosis logra disminución muy significativa en la producción de sudor del área donde se aplica, debido a que bloquean temporalmente los nervios que estimulan la sudoración.

Durante la última década, la utilización de la toxina botulínica tipo A se está convirtiendo en el tratamiento de elección ante una gran cantidad de patologías relacionadas con alteraciones en la bioquímica de la acetilcolina. Se ha avanzado considerablemente en la comprensión del mecanismo de acción del complejo de proteínas producidas por la bacteria anaeróbica y Gram positiva Clostridium botulinum. De forma rápida y específica la toxina se une al receptor presináptico mediante el extremo carboxilo terminal de su cadena pesada (peso molecular = 100 KDa), que puede mantenerse en la conformación correcta gracias a su asociación con la cadena ligera (peso molecular = 50 KDa). Posteriormente internalizada por endocitosis mediada por receptor hasta que queda completamente incluida en una vesícula, la fracción activa de la toxina logra atravesar la pared de la vesícula y la cadena ligera, mediante su actividad de proteasa, escinde una de las proteínas responsables de la fusión de vesículas y de la liberación de la acetilcolina bloqueando los receptores de acetilcolina.

En algunos pacientes las inyecciones repetidas en intervalos cortos y a grandes dosis de toxina y principalmente el complejo proteico que acompaña a la neurotoxina (hemaglutininas) pueden causar inmunoresistencia; a través de la generación de anticuerpos neutralizantes y en consecuencia una falla al tratamiento.

En la actualidad solo se utilizan complejos proteicos asociados a la toxina botulínica para proporcionarle estabilidad y ningún sistema de transporte; sin embargo existen investigaciones recientes en las cuales se emplean péptidos acarreadores para ingresar de manera tópica proteínas incluso de alto peso molecular como la insulina.

De acuerdo con la patente estadounidense US 2010/0076209 A1 el objetivo de los lípidos PEG (constituyentes de los liposomas de tercera generación, Qusomas) es unir y facilitar a los principios activos llegar a sus dianas terapéuticas. Además, especifica su uso para la encapsulacion de una gran variedad de agentes activos que pueden ser desde proteínas, ácidos nucleicos y otros agentes; éstos pueden ser almacenados en el espacio acuoso cuando se trata de sustancias hidrofílicas o en la región hidrofobica de la bicapa o mediante uniones covalentes; lo que reduce su exposición directa en el tejido y simula un depósito del fármaco para lograr una liberación prolongada.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con una novedosa formulación de aplicación tópica obtenida de la combinación de liposomas multilamilares de última generación (Qusome) (figura 1 ) y neurotoxina botulínica tipo A que ofrece una solución no invasiva para el tratamiento de la hiperhidrosis axilar y palmo plantar, la crema elaborada es químicamente estable, pues el liposoma ofrece una estructura de anclaje y protección que permite la liberación transdérmica de la molécula de interés.

La inclusión de la toxina botulínica tipo A dentro del liposoma (figura 2) permite su protección y asegura su estabilidad evitando la degradación de la proteína lo que permite que se pueda formular en la forma farmacéutica de crema o gel. Mediante esta presentación se pretende evitar la necesidad de la inyección de la toxina botulínica tipo A cuya principal molestia es el dolor generado.

La toxina botulínica tipo A se puede presentar en la forma farmaceútica de crema o gel y/o como polvo liofilizado estéril con liposomas para su reconstitución en una base de crema o gel y disponerse en envases individuales.

Para la formulación del vehículo de crema o gel puede añadirse un agente emulsificante del tipo monoesterato de glicerilo, span 60, polioxil 40 estearato o sepineo P 600, un agente espesante como el policarbofilo, vaselina y agentes humectantes como el propilenglicol; así como los liposomas en un rango de 1 a 2%. La formulación puede conservarse a través de agentes adecuados como metil y propilparabeno.

La formulación final de crema o gel con toxina botulínica tipo A liposomal tiene un pH óptimo similar a la piel humana entre 5 y 5.5 que se logra mediante la adición de trietanolamina.

La toxina botulínica tipo A encapsulada en Qusomas debe de prepararse en forma de unidosis; ya sea como polvo liofilizado para ser reconstituido en una base de crema o gel o como un sobre que contenga el vehículo de crema rodeando una cápsula rompible que mantenga aislada la toxina liofilizada con el liposoma hasta su incorporación y total integración con los excipientes mediante la presión ejercida sobre la cápsula.

Los Qusomes que encapsulan a la toxina botulínica tipo A forman nanopartículas; en donde la mayoría tienen un tamaño promedio de 50 a 500 nm (Figura 2 y 3).

Los Qusomas ayudan a la neurotoxina botulínica tipo A a penetrar las membranas celulares y atravesar las capas de la piel (epidermis y dermis) hasta alcanzar su sitio de acción ubicado en la hipodermis, en donde se localizan las glándulas sudoríparas.

El uso de Qusomes como agentes envolventes de la toxina representa ventajas dentro de las cuales se encuentran las siguientes: se logra la aplicación tópica de la toxina botulínica tipo A, se conserva la estabilidad de la proteína, se puede formular en la presentación farmacéutica de crema o gel, se puede disminuir la dosis necesaria y tener un efecto clínico y se reduce la toxicidad de la neurotoxina como la generación de inmunidad debido a que se disminuye su exposición directa en los tejidos en los que es aplicada.

La aplicación tópica de la crema de neurotoxina botulínica tipo A encapsulada en Qusomes mantiene un efecto sostenido de inhibición de la sudoración debido a que el liposoma tiene la función de proteger productos lábiles y biológicamente activos como son las proteínas y mejorar la farmacocinética de la toxina al retrasar su degradación y eliminación (mayor estabilidad), lo que permite una liberación continua de la misma durante un periodo prolongado; además se consigue manejar dosis eficaces a concentraciones más bajas.

Lo anterior se evidencia mediante un bioensayo de un modelo animal en rata Wistar; en el cual se aplicó crema de toxina botulínica encapsulada en Qusomes en dos presentaciones; a un grupo se le administró una formulación de 100 U de toxina botulínica por gramo de crema y a otro grupo una crema con 50 U/gramo. Después de 15 días de la aplicación se les indujo diferentes grados de sudoración mediante diferentes volúmenes (0.1 , 0.5 y 1.0 mL) de pilocarpina al 2%. Se valoró la respuesta fisiológica a la sudoración en los cojinetes plantares de las ratas con el método de yodo-almidón de Minor; se cuantificó el área teñida y se realizó un análisis morfométrico cuantitativo del área de sudoración de los cuatro cojinetes plantares. Se observó inhibición estadísticamente significativa de la sudoración en ambos grupos con respecto al grupo control no tratado (Figura 4 a 6).

Se obtiene una formulación con toxina botulínica tipo A estable, eficaz y segura; ya que no se observaron alteraciones histológicas en los tejidos de las ratas tratadas (figura 7).

La dosis de toxina efectiva aplicada en forma tópica para el control de la hiperhidrosis axilar y palmo-plantar puede ir desde 50 hasta 100 unidades. De acuerdo con las figuras 4 a 6 el efecto clínico de inhibición de la sudoración fue igual para ambas dosis en un modelo en ratas Wistar con lo que se observa que el empleo de liposomas permite disminuir la dosis de aplicación.

La disminución en la cantidad de toxina botulínica tipo A aplicada representa los siguientes beneficios potenciales: Disminución de la toxina en cada dosis con lo que se disminuye la cantidad de antígeno presente en el organismo; esto podría retrasar la formación de anticuerpos neutralizantes contra la toxina botulínica tipo A.

Además esta ventaja se ve potencializada por la incorporación de la toxina botulínica en las nanopartículas liposomales que le aportan estabilidad a la proteína, de esta manera se puede prescindir del uso de proteínas o complejos proteicos acompañantes como las hemaglutininas o albúmina que son las principales responsables de la producción de anticuerpos neutralizantes debido a su alta inmunogenicidad.

La aplicación tópica favorece el retraso en la generación de anticuerpos neutralizantes comparada con la inyección tanto subdérmica como intradérmica debido a que hay una menor estimulación del sistema inmune; ya que no existe una ruptura de tejidos y por ende no se requiere del sistema inmune para reparar el daño tisular; lo anterior se muestra en la figura 4 en la cual se observa que no hay daño estructural del tejido y ausencia de linfocitos y macrófagos en los tejidos de aplicación.

Además la aplicación tópica de la toxina botulínica tipo A para el tratamiento de la hiperhidrosis axilar y palmo-plantar tiene la ventaja de no interferir en la fuerza prensil de los sujetos en los que se aplica debido a que el efecto es localizado a diferencia de la inyección en donde se llega a afectar a los nervios motores.

Se logra un efecto clínico de inhibición de hiperhidrosis con una menor cantidad de toxina botulínica y una menor exposición al antígeno dentro del organismo sin el dolor asociado a la inyección debido a que se tiene una formulación de aplicación tópica.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1. Imagen de microscopía electrónica de transmisión de un liposoma multilamilar de tercera generación (Qusome) sin incorporación de ningún principio activo.

Figura 2. Se observa la imagen de microscopía electrónica de transmisión de un liposoma cargado con material electrón-denso central que evidencia el acoplamiento de la toxina botulínica tipo A con un liposoma de tercera generación.

Figura 3. Imagen de microscopía electrónica de barrido en la que se observa la uniformidad en el tamaño y distribución de los liposomas acoplados con la neurotoxina botulínica tipo A en un vehículo de crema.

Figura 4. Imagen de rata Wistar tratada con crema de toxina botulínica tipo A 50U/g, en el lado izquierdo se observa la pata tratada con la crema en donde hay inhibición de la sudoración y en el lado derecho la pata no tratada en la que se muestra una mayor sudoración.

Figura 5. Gráfico que representa el análisis comparativo de las áreas de sudoración entre el grupo tratado con 50 U/g de crema y el grupo control con una dosis de 0.1 mL de pilocarpina al 2%. Se presentaron diferencias estadísticamente significativas entre ambos grupos, en donde el grupo tratado presentó mayor inhibición de la sudoración.

Figura 6. Gráfico que representa el análisis comparativo de las áreas de sudoración entre el grupo tratado con 50 U/g de crema y el grupo control con una dosis de 0.5 mL de pilocarpina al 2%. Se presentaron diferencias estadísticamente significativas entre ambos grupos, en donde el grupo tratado presentó mayor inhibición de la sudoración.

Figura 7. Imagen histológica de la piel del cojinete plantar de una rata Wistar tratada con dosis de 100 U/g de crema de toxina botulínica tipo A, en la que se muestran las capas de la dermis así como la ausencia de alteraciones histológicas.

MODALIDAD PREFERIDA DE LA INVENCIÓN A continuación se describe un ejemplo de la modalidad preferida en la preparación de una formulación a base de neurotoxina botulínica tipo A encapsulada en nanopartículas liposomales de tercera generación, químicamente estable, que permite ofrecer eficacia, seguridad y rendimiento en el tratamiento de la hiperhidrosis. La composición comprende un agente emulsificante, un agente humectante y un agente espesante; además de la toxina botulínica tipo A y los liposomas.

La formulación consiste en toxina botulínica tipo A 50 -100 Unidades por gramo de crema, 2% de liposomas de tercera generación, 5% de Sepineo P 600 y trietanolamina.

El método de preparación de la crema consiste en los siguientes pasos: 1. Mezclar la toxina botulínica tipo A con los liposomas en agua hasta su homogenización. 2. Agregar el sepineo P 600 y agitar hasta obtener una crema espesa y libre de grumos. 3. Medir el pH y ajusfar con trietanolamina para tener un pH final de 5.

Claims (10)

REIVINDICACIONES Habiendo descrito suficiente la invención, considero como una novedad y por lo tanto reclamo como de nuestra exclusiva propiedad, lo contenido en las siguientes cláusulas:

1. Una formulación de toxina botulínica tipo A encapsulada en liposomas de tercera generación.

2. El uso de liposomas permite de acuerdo con la reivindicación 1 que la toxina botulínica tipo A pueda ser aplicada en forma tópica evitando la necesidad de la inyección.

3. La presentación farmacéutica de acuerdo con las dos cláusulas previas puede ser en crema o gel.

4. La composición de toxina botulínica tipo A de acuerdo con la reivindicación 3 puede contener un agente emulsificante del tipo sepineo P 600, monoesterato de glicerilo, span 60 o polioxil 40 estearato.

5. La formulación de crema o gel de toxina botulínica tipo A de acuerdo con la reivindicación 3 puede tener un agente espesante como el policarbofilo, vaselina o sepineo P 600.

6. La composición de acuerdo con la reivindicación 3 puede contener un agente humectante como el propilenglicol o sepineo P 600.

7. La composición de acuerdo con el punto 3 puede llevar agentes conservadores como los parabenos.

8. La formulación de acuerdo con las cláusulas anteriores puede presentarse en forma liofilizada la toxina botulínica tipo A incorporada dentro del liposoma para su posterior incorporación en un vehículo de crema o gel.

9. La formulación de acuerdo a las cláusulas previas es para el tratamiento de la hiperhidrosis axilar, palmo-plantar y para cualquier región anatómica que sufra de esta patología.

10. En la formulación de acuerdo con la reivindicación 1 la cantidad de toxina botulínica tipo A empleada para inhibir la sudoración puede reducirse hasta un 50 por ciento de la dosis usada con la inyección.