MX2013000350A - Formulacion que comprende lantibiotico tipo b. - Google Patents

Abstract

Se describe una formulación farmacéutica de una cápsula para suministro oral de un lantibiótico tipo B al estómago, que comprende una cápsula de gelatina dura, de HPMC o de almidón, y un lantibiótico tipo B de la fórmula (I): en donde X es NH (CH2)qNH2 y q es un número entero de 2 a 12.

Description

FORMULACION QUE COMPRENDE LANTIBIOTICO TIPO B Descripción de la Invención La presente descripción se refiere a una formulación para suministro oral de un lantibiótico tipo B de la fórmula (I) , en particular una cápsula rápidamente desintegrante que suministra el lantibiótico al estómago y el uso de la misma en terapia, en particular en el tratamiento de la infección por Clostridium difficile. La descripción también se extiende a métodos para preparar las formulaciones .

Los lantibióticos tipo B (péptidos globulares) son conocidos, por ejemplo del documento WO 2007/083112. Las formulaciones de lantibióticos, tal como nisina (una lantocina) , son conocidas de las patentes de los Estados Unidos Números 5,985,823 y 5,304,540. Estos casos describen una formulación que mantiene su integridad a través del tracto gastrointestinal y luego permite la liberación de una lantocina en el colon. Incluyen tabletas o gránulos apropiadamente recubiertos o cápsulas para administración oral, en donde el recubrimiento provee el mantenimiento de la integridad de la forma de dosificación durante el pasaje a través del estómago y el intestino delgado y permite la liberación del ingrediente activo en la región deseada del tracto gastrointestinal (intestino delgado inferior a Ref . : 238200 intestino grueso superior) .

La descripción en la presente provee una formulación farmacéutica de una cápsula para suministro oral de un lantibiótico tipo B al estómago, que comprende: una cápsula de gelatina, de HPMC o de almidón; un lantibiótico tipo B de la fórmula (I) : en donde : A junto con el carbono al cual está unido y el alfa-nitrógeno y alfa-carbonilo representa un residuo de aminoácido proteinogénico seleccionado de leucina, isoleucina y valina; B junto con el carbono al cual está unido y el alfa-nitrógeno y alfa-carbonilo representa un residuo de aminoácido proteinogénico seleccionado de leucina, isoleucina y valina; X es -NH(CH2)qNH2; q es un número entero 2 a 12 ; z es -NR1!*2; R1 es H o alquilo de Ci-4, R2 es H, un aminoácido o alquilo de Ci-4, y p es 0 o 1, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. en donde la cápsula libera el antibiótico tipo B en el estómago dentro de, por ejemplo, 30 minutos, 25 minutos, 20 minutos, 15 minutos, tal como 10 minutos del suministro oral .

La Figura 1 muestra una comparación en la estabilidad para el compuesto 1 (línea superior) y nisina (línea de fondo) en SIF a través del tiempo. Se puede observar que el compuesto 1 (compuesto etiquetado de la fórmula (II) ) es esencialmente estable en SIF; las Figuras 2a-2c muestran fotografías de una cápsula de la invención (que comprende el compuesto 1) que se disuelve a través del tiempo. Los frasquitos son muestras de prueba en 2 minutos y 3 minutos (Figura 2a) ; 5-6 min, 10 min, y 15 min (Figura 2b) . Una cápsula de prueba (sin el compuesto 1) en SGF se muestra después de 15 min (Figura 2c) ; la Figura 3 muestra la disolución del compuesto 1 (compuesto de la fórmula (II)) a través del tiempo. El compuesto 1 en SGF se presenta que ha alcanzado disolución de saturación después de 3 minutos; la Figura 4 muestra la estabilidad del compuesto 1 (referido como NVB 302) en SIF como el área pico expresada como un porcentaje con respecto al área pico de tiempo cero, graficada contra el tiempo de muestreo.

Los lantibióticos tipo B no se degradan sustancialmente mediante las condiciones encontradas en el estómago y los intestinos, y no requieren que sean suministrados en una formulación recubierta entérica para asegurar que el ingrediente activo se suministre de manera segura al colón. Sin embargo, de manera sorprendente los inventores han encontrado que los compuestos de la fórmula (i) son más solubles en el ácido estomacal que en el fluido gastrointestinal. Los presentes inventores creen que es ventajoso suministrar al lantibiótico al estómago, tal que pueda disolverse y/o dispersarse rápidamente y fluir a través de los intestinos en una forma diluida (forma disuelta y/o dispersada) .

En contraste, la liberación del lantibiótico en los intestinos o colon, que es un ambiente más seco, de hecho puede dar por resultado la distribución inferior del mismo. Además, el fluido intestinal tiene un pH más alto que el fluido gástrico. El pH más bajo del estómago puede ayudar a la dispersión del lantibiótico.

La presente descripción provee una formulación que permite al lantibiótico, en particular sustancialmente todo de la dosis en la cápsula, que sea liberado en el estómago y ciertamente ser liberado por el tiempo en que pasa en el duodeno .

Mientras que no se desea que sea limitado por la teoría, se plantea como hipótesis que la alta estabilidad de los lantibióticos tipo B a las condiciones del estómago y/o intestinos es debido en parte a la estructura globular. No obstante, el plegamiento del péptido y/o la formación de aglomeraciones pequeñas (o glóbulos) pueden contribuir a su estabilidad.

Sustancialmente todo en el contexto de la presente invención, significa una cantidad aproximadamente equivalente a la dosis propuesta en la cápsula, por ejemplo, por lo menos 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 o 100% p/p del lantibiótico contenido en la cápsula.

En una modalidad el lantibiótico se libera en 9 o menos minutos, por ejemplo 8, 7, 6, 5 o o menos minutos después de la administración.

Las cápsulas empleadas en la formulación en la presente no deben ser recubiertas para retardar la liberación del lantibiótico contenido en las mismas.

En una modalidad, el espesor o grosor de la cubierta de cápsula es aproximadamente 0.1 mm.

La gelatina se disuelve en las condiciones provistas en el estómago. Sin embargo, la gelatina es una de las proteínas derivadas de animales y no es adecuada para el uso con todas las poblaciones de pacientes. La consistencia de la cubierta de cápsula se puede modificar mediante la inclusión de excipientes tales como glicerol y/o sorbitol.

En una modalidad la cápsula de gelatina es gelatina dura.

En una modalidad la cápsula de gelatina es gelatina blanda.

En una modalidad la cápsula empleada es una cápsula dura de color naranja Sueca.

La cápsula de HPMC como se emplea en la presente se propone para referirse a una cápsula de hidroxipropil metil celulosa, por ejemplo como es preparada mediante los métodos de rutina o como es descrita en el documento US 2010/0168410.

Alternativamente, las cápsulas pueden ser de almidón, por ejemplo cápsulas preparadas de almidón de maíz.

En una modalidad, el tamaño de la cápsula se selecciona de 000, 00E, 00, 0E, 1, 2, 3 o 4, tal como 00.

El contenido de la cápsula puede ser un sólido, un líquido o una pasta.

En una modalidad la cápsula es una cápsula dura y, por ejemplo contiene un contenido sólido.

En una modalidad se puede emplear un conservador o conservante en la formulación.

En una modalidad cada cápsula de la formulación contiene entre 10 mg y 500 mg del lantibiótico, tal como 50 mg a 350 mg.

En una modalidad por lo menos dos cápsulas se emplean para administrar una "sola" dosis en el intervalo de 100 mg a 1000 mg, tal como 50 mg a 500 mg o 50mg a 300mg, en particular 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290 o 300mg. Una sola dosis como se utiliza en el último contexto se propone para referirse a una dosis dada en una ocasión, por ejemplo, cuando las cápsulas se administran concomitantemente o secuencialmente una inmediatamente después de la otra.

El lantibiótico se puede proveer como una sal, por ejemplo, una sal de adición formada de ácidos inorgánicos u orgánicos que forman sales no tóxicas, que incluyen lactobionato, mandelato (incluso (S) - (+) -mandelato, (R)-(-)-mandelato y (R, S) -mandelato) , clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, sulfato, bisulfato, nitrato, fosfato, hidrógeno fosfato, glutamato, acetato, trifluoroacetato, maleato, malato, fumarato, lactato, tartrato, citrato, formiato, gluconato, succinato, succinato de etilo (4 -etoxi-4 -oxo-butanoato) , piruvato, oxalato, oxaloacetato, sacarato, benzoato, glucolato, glucamato (incluso N-metil glucaraato y N-etil glucamato) glucurinato, sulfonatos de alquilo o de arilo (por ejemplo, metanosulfonato, etanosulfonato, bencensulfonato o p-toluensulfonato) e isotionato.

Otro ejemplo de sales de base farmacéuticamente aceptables incluyen sales de amonio, sales de metal alcalino tales como aquellas de sodio y de potasio, sales de metal alcalino térreo tales como aquellas de calcio y de magnesio y sales con bases orgánicas, incluso sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, tales como isopro ilamina, dietilamina, etanolamina, trimetilamina, diciclohexil amina, N-etil-D-glucamina y N-metil-D-glucamina .

Las sales se pueden emplear para optimizar la solubilidad de los compuestos de la presente descripción.

En una modalidad el compuesto lantibiótico se provee con una amina libre en el C-terminal (es decir, como la base libre) . Los compuestos empleados en la formulación de la presente invención son anfotéricos y pueden estar presentes como zwitteriones .

En una modalidad el lantibiótico está en la forma de un solvato, tal como un hidrato.

En una modalidad el material lantibiótico empleado en la formulación de la presente invención es amorfo.

En una modalidad el material lantibiótico empleado en la formulación se ha sometido a una etapa de pre-tratamiento de liofilización, por ejemplo, en la preparación de una sal .

En una modalidad el material lantibiótico empleado se ha secado con rocío, por ejemplo, para proveer un material con propiedades de flujo adecuadas. En una modalidad el lantibiótico se seca con rocío con uno o más excipientes para proveer partículas que son aglomeraciones o mezclas simples (mixturas) del lantibiótico y los excipientes.

En una modalidad la formulación llenada en la cápsula consiste o consiste esencialmente de lantibiótico de la fórmula (I) o una sal o solvato del mismo.

En una modalidad la formulación llenada en la cápsula comprende el lantibiótico de la fórmula (I) y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Los excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen celulosa microcristalina, lactosa, manitol, almidón, tal como almidón pre-gelatinizado, talco, lubricantes tales como estearato de magnesio, ácido esteárico, glicerol y polietilenglicol , agentes amortiguadores o reguladores tal como carbonato de sodio y los similares.

En una modalidad la formulación llenada en la cápsula comprende uno o más excipientes independientemente seleccionados de celulosa microcristalina, lactosa, citrato de sodio, carbonato de calcio, sulfato de calcio, fosfato de calcio dibásico y glicina, manitol, almidón pregelatinizado, almidón de maíz, almidón de papa, desintegrantes tales como almidón glicolato de sodio, croscarmelosa sódica y ciertos silicatos complejos, y aglutinantes de granulación tal como polivinilpirrolidona .

El alquilo en el contexto de la presente descripción se refiere a un alquilo de cadena lineal o cadena ramificada, por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo o t-butilo.

En una modalidad p es 1. En una modalidad p es 0. En un aspecto A junto con el carbono al cual está unido y el alfa-nitrógeno y alfa-carbonilo es leucina y B junto con el carbono al cual está unido y el alf -nitrógeno y alfa-carbonilo es valina.

En una modalidad A - junto con el carbono adecuado está unido y el alfa-nitrógeno y alfa-carbonilo es valina y B junto con el carbono al cual está unido y el alfa-nitrógeno y alfa-carbonilo es isoleucina.

En una modalidad A junto con el carbono al cual está unido y el alfa-nitrógeno y alfa-carbonilo es valina y B junto con el carbono al cual está unido y el alfa-nitrógeno y alfa-carbonilo es valina.

En una modalidad A junto con el carbono al cual está unido y el alfa-nitrógeno y alfa-carbonilo es leucina y B junto con el carbono al cual está unido y el alfa-nitrógeno y alfa-carbono es isoleucina.

En una modalidad R1 es H.

En una modalidad R2 es H.

En una modalidad R2 es la forma de isómero L o D de un residuo de aminoácido. En una modalidad R2 es la forma de isómero L o D de -C (O) CH (CH3) NH2.

En una modalidad R2 es un residuo de aminoácido seleccionado de alanina, cisteína, ácido aspártico, ácido glutámico, fenilalanina, glicina, histidina, isoleucina, lisina, leucina, metionina, asparagina, prolina, glutamina, arginina, serina, treonina, valina, triptófano y tirosina.

En una modalidad R2 es un residuo de aminoácido seleccionado de fenilalanina, tirosina y alanina (es decir, -C(0)CH(CH3)NH2) .

En una modalidad Z es -NH2.

En un aspecto A es -CH2CH(CH3)2 y B es -CH(CH3)2 y Z es -NH2.

En una modalidad q es 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12, tal como 2, 3, 7, 9 o 12, en particular 7, 9 o 12. En una modalidad q es 7. En otra modalidad q es 9 o 12.

En una modalidad q es 3 a l2 o 3 a 8.

Cada una y cada combinación compatible de las modalidades descritas en lo anterior se describe explícitamente en la presente, como si cada una y cada combinación se citaran de manera individual y explícitamente.

En un aspecto la descripción provee un compuesto de la fórmula (II) : o una sal, hidrato o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una modalidad el compuesto de la fórmula (I) o (II) comprende 5-10% p/p de agua.

En una modalidad la formulación de acuerdo con la presente invención comprende un compuesto de la fórmula (I) o (II) y un antioxidante, por ejemplo, hidroxitolueno butilado. Las cantidades adecuadas de antoxidante, tal como hidroxil tolueno butilado incluyen 10% p/p o menos, por ejemplo 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1% p/p de la formulación final.

En una modalidad la formulación de la presente descripción tiene un contenido de humedad de menor que 8%, tal como menor que 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1% p/p después del llenado de la cápsula.

En una modalidad las cápsulas de la invención se llenan bajo condiciones de humedad controladas. Así se provee un método para preparar una forma de dosis sólida de acuerdo con la invención que comprende la etapa de llenar un compuesto de la fórmula (I) o (II) o una composición que comprende el mismo en una cápsula bajo condiciones de humedad controladas.

En una modalidad la formulación de acuerdo con la descripción tiene una vida en anaquel de aproximadamente 2 años, cuando se almacena bajo condiciones apropiadas. En particular, la formulación es estable físicamente después del almacenamiento (por ejemplo, las propiedades de flujo de los contenidos de las cápsulas están sin cambio y no hay agregación en la formulación y/o el tiempo de desintegración de la cápsula permanece sustancialmente sin cambio y/o se minimiza el ingreso de agua) y el lantibiótico en la misma es estable químicamente durante el período.

En una modalidad al final de la vida en anaquel, después del almacenamiento bajo condiciones apropiadas por ejemplo como se define en la etiqueta, el contenido de humedad de la formulación es menor que 12% p/p o menor, tal como 10% p/p o menor.

En una modalidad, las cápsulas de la presente descripción se empaquetan en paquetes de lámina delgada con ampollas, por ejemplo, paquetes de lámina delgada/lámina delgada o paquetes laminados de lámina delgada. El paquete adecuado es conocido para aquellos que trabajan en el campo relevante .

Los compuestos empleados en las formulaciones de la presente descripción son ventajosos debido a que tienen actividad antibacteriana muy alta contra una o más cepas de C. difficile, por ejemplo cuando la actividad se mide mediante una prueba estándar tal como las concentraciones inhibidoras mínimas (MIC, por sus siglas en inglés) , generalmente los compuestos de la descripción tienen una MIC de 16 µg/mL o menor, tal como 4 g/mL o menor, en particular 2 µg/mL o menor contra una o más cepas de C. difficile . Además, ciertos compuestos en la presente tienen actividad muy alta contra un número de cepas comunes de C. difficile .

Adicionalmente, los compuestos de la fórmula (I) y (II) son particularmente adecuados para la administración a humanos y animales debido a que tienen baja actividad antibacteriana contra la flora intestinal saludable que se presenta naturalmente, encontrada en el cuerpo. En el caso del tratamiento de diarrea inducida por una infección microbiana tal como c. difficile se espera que una recurrencia reducida de síntomas se debe observar después del tratamiento con los presentes compuestos en comparación al tratamiento con los lantibióticos conocidos debido a la habilidad de la flora natural para sobrevivir al tratamiento con los presentes compuestos. En particular, los compuestos en la presente muestran muy baja actividad contra Bacteroides fragilis, Bacteroides thetaiotaomicron, Lactobacillus rhamnosus, y actividad moderadamente baja contra Peptostreptococcus anaerobius y Bifidobacterium adolescentis .

Lo que es más, cuando se suministran oralmente los compuestos de la descripción no se absorben sistémicamente, lo cual permite una concentración relativamente alta del ingrediente activo que es suministrado al objetivo en el colon/intestinos. Así debido a que no hay suministro sistémico de los compuestos cuando se administran oralmente, esto puede minimizar cualquiera de los efectos secundarios potenciales para los pacientes.

La infección y/o sobrecrecimiento de C. difficile es un problema común para pacientes durante la hospitalización. Esto presenta una carga genuina al sistema del cuidado de la salud y puede ser amenazante de la vida a los pacientes vulnerables tales como pacientes de edad avanzada .

Así, en un aspecto se provee el uso de una formulación de acuerdo con la presente descripción en el tratamiento, particularmente en el tratamiento de humanos y/o animales, tal como el tratamiento de infección microbiana, más específicamente infección por C. difficile.

Las formulaciones de la descripción son particularmente adecuadas para administración (por ejemplo en el tratamiento o profilaxis de la infección por C. dif icile) a pacientes sobre inhibidores de la bomba de protones o con hipoclorhidria . Estos pacientes son más susceptibles a la infección y reinfección por C. difficile por la vía de la ruta fecal-oral debido a que las bacterias pueden sobrevivir al pasaje a través de las condiciones más favorables en el estómago de estos pacientes y subsecuentemente colonizar el colon. La liberación de los compuestos de la fórmula (I) y (II) en el estómago es probable que eliminen las bacterias en el estómago para de esta manera prevenir la infección o re-infección del colon.

Así en una modalidad se provee un método para tratar una población de pacientes con una formulación de acuerdo con la presente invención, en donde la población de pacientes se caracteriza por tomar inhibidores de la bomba de protones o tener hipoclorhidria.

En un aspecto se provee una formulación como es descrito en la presente que comprende un compuesto de la fórmula (I) o (II) para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de infecciones microbianas tal como la infección por C. difficile, en particular diarrea o colitis asociada con la misma.

En un aspecto se provee un método de tratamiento que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula (I) , tal como un compuesto de la fórmula (II) , o una composición farmacéutica que contiene el mismo como es descrito en la presente a un paciente (humano o animal) en necesidad del mismo, por ejemplo para el tratamiento de infección/afección o enfermedad como es descrito en la presente.

En el contexto de esta invención, "que comprende" se debe interpretar como "que incluye" . Aspectos de la invención que comprenden ciertos elementos también se proponen para extenderse a las modalidades alternativas "que consiste" o "que consiste esencialmente" de los elementos relevantes.

Las modalidades de la invención se pueden combinar tan técnicamente como sea apropiado.

Ejemplos Compuesto 1: Deoxiactagardina B ( 1 , 7 -diamino-heptano) monocarboxamida Deoxiactagardina B (2.5 g) , 1, 7-diaminoheptano (0.51 g) y diisopropiletilamina (0.44 mL) se disolvieron en dimetilformamida seca (10 mL) . Una solución de hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio (PyBOP, por sus siglas en inglés) (1.04 g) en dimetilformamida seca (5 mL) se adicionó porción a porción durante 2 h. La reacción se siguió mediante la HPLC analítica (Ver la Tabla 1) y PyBOP se adicionó hasta que sea consumido el material de partida.

Tabla 1: Condiciones de la HPLC analítica para la separación del lantibiótico (por ejemplo, actagardina, actagardina B, o deoxi-actagardina B) y productos derivados de diaminoalcano . Columna: Zorbax 5µ C18(2) 150 x 4.6 mm Fase Móvil A: 30% de Acetonitrilo en amortiguador o solución reguladora de fosfato de potasio 20 mM pH 7.0 Fase Móvil B : 65% de Acetonitrilo en amortiguador o solución reguladora de fosfato de potasio 20 mM pH 7.0 Gasto de flujo: 1 ml/min Gradiente: Tiempo 0 min 100% A 0% B Tiempo 10 min 0% A 100% B Tiempo 11 min 0% A 100% B Tiempo 11.2 min 100% A 0% B Tiempo del ciclo: 15 min Volumen de inyección: 10 µ? Detección: 210 nm La mezcla de reacción cruda se vació en metanol acuoso al 30% y la solución resultante se cargó sobre una columna Varían Bond Elut C18 (30 g) . La columna luego se lavó secuencialmente con metanol acuoso al 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, con la mayoría del material deseado que eluye en la fracción de 70%. La cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente: diclorometano: etanol : amoníaco 10:8:1) dio el material de >90% de pureza mediante U.V. en 210 nm. Rendimiento 1.4 g. Masa calculada (M+2H) +2 993, encontrada 992.91.

El producto se analizó mediante la espectroscopia de 13C NMR a 500 MHz (solvente D3 acetonitrilo : agua en una relación 7:3) . Un listado de picos se provee en la Tabla 2.

Tabla 2. Listado de Picos del carbono 13 para el Compuesto 1 Compuesto 2: Preparación de la sal de metanosulfonato del compuesto de compuesto 1.

Para el propósito de obtener soluciones adecuadas para dosificación oral o intravenosa, la sal de metanosulfonato del compuesto de compuesto 1 se encontró que es adecuada.

El compuesto de compuesto 1 se suspendió en agua y un exceso de ácido metanosulfónico se adicionó para dar una solución clara. El ácido metanosulfónico en exceso se eliminó al cargar la solución sobre una columna Bond Elut C18 que se ha acondicionado de acuerdo con instrucciones del fabricante, al lavar la columna completamente con agua y al eluir la sal de metanosulfonato con metanol . El solvente se eliminó mediante evaporación dejando la sal de metanosulfonato como un polvo blanco.

La sal de metanosulfonato del compuesto de compuesto 1 fue soluble en aproximadamente 30 mg/mL en agua. Compuesto 3 (ruta alternativa para la preparación del compuesto de compuesto 1): Deoxiactagardina B [7- (t-butoxicarboni1amido) - 1-aminoheptano] monocarboxamida] Se preparó al emplear el proceso descrito para el compuesto 1 a partir de Deoxiactagardina B y 7-(t-butoxicarbonilamido) -1-aminoheptano. 75% (M+2H) +2 1043, encontrado 1044.11.

El compuesto 3 se trató con ácido clorhídrico acuoso 4N durante 3 h a temperatura ambiente, después de lo cual la mezcla se neutralizó a pH 7 y la purificación se llevó a cabo como es descrito para el Ejemplo 1 para proveer el Compuesto 1. Rendimiento: 65%.

Compuesto 4: Deoxiactagardina B (1, 2-etilendiamina) monocarboxamida Se preparó a partir de deoxiactagardina B y 1,2-etilendiamina al emplear el método descrito para el compuesto 1. Rendimiento: 96%. Masa calculada (M+2H) +2 958, encontrada 959.02.

Compuesto 5: Deoxiactagardina B (1, 3 -diaminopropano) monocarboxamida Se preparó a partir de deoxiactagardina B y 1,3-diaminopropano al emplear el método descrito para el Compuesto 1. Rendimiento: 87%. Masa calculada (M+2H) +2 965, encontrada 965.04.

Compuesto 6: Deoxiactagardina B (1, 5-diaminopentano) monocarboxamida Se preparó a partir de deoxiactagardina B y 1,5-diaminopentane al emplear el método descrito para el Compuesto 1. Rendimiento: 83%. Masa calculada (M+2H)+2 979, encontrada 980.06.

Compuesto 7: Deoxiactagardina B (1, 9 -diaminononane) monocarboxamida Se preparó a partir de deoxiactagardina B y 1,9-diaminononane al emplear el método descrito para el Compuesto 1. Rendimiento: 84%. Masa calculada (M+2H) +2 1007, encontrada 1007.51.

Compuesto 8: Deoxiactagardina B (1, 12 -diaminododecane) monocarboxamida) Se preparó a partir de deoxiactagardina B y 1, 12-diaminododecano al emplear el método descrito para el Compuesto 1. Rendimiento: 74%. Masa calculada (M+2H) +2 1028, encontrada 1027.51.

Compuesto 9: Actagardina (1, 7-diaminoheptano) monocarboxamida Se preparó a partir del acoplamiento de amida de Actagardina con 1, 7-diaminoheptano al emplear el método descrito para el Compuesto 1. Rendimiento: 59%. Masa calculada (M+2H)+2 1001.0, encontrada 1001.02.

Compuesto 10: Actagardina (1, 3-diaminopropano) monocarboxamida Se preparó a partir del acoplamiento de actagardina con 1.3-diaminopropano al emplear el método descrito para el Compuesto 1. Rendimiento: 47%. Masa calculada (M+H+Na)+2 973.0, encontrada 973.2.

Compuesto 11: Actagardina (1, -diaminobutane) monocarboxamida Se preparó a partir del acoplamiento de actagardina con 1.4-diaminobutane al emplear el método descrito para el Compuesto 1. Rendimiento: 50%. Masa calculada (M+H+Na) +2 990.5, encontrada 989.46.

Actividad antibacteriana de los lantibióticos tipo B Los compuestos empleados en la invención muestran actividad antimicrobiana in vitro e in vivo. Son activos contra Clostridium Difficile y pueden tener actividad mejorada, comparada con la deoxiactagardina B.

La prueba de susceptibilidad para las cepas de Clostridium difficile se realizó mediante diluciones de lantibiótico en serie de dos veces en el agar Anaerobio de Wilkind-Chalgren bajo condiciones anaeróbicas. Vancomicina se incluyó como un fármaco de comparación. Los cultivos de C. difficile se inocularon sobre placas de agar Braziers pre-reducido (C.C.E.Y.) y se cultivaron a 37°C durante 48 horas bajo condiciones anaeróbicas. Dos a tres colonias de los cultivos de 48 horas se inocularon en 5 mi del Caldo de Schaedlers pre-reducido y se cultivaron a 37°C durante 24 horas bajo condiciones anaeróbicas. Este cultivo se diluyó con NaCl al 0.9% pre-reducido para lograr la turbiedad del estándar de McFarland 0.5 y se aplicó a las placas que contienen fármacos en un inoculo final de 105 cfu/punto o mancha. Se incluyeron placas de control de crecimiento sin fármaco. Las placas se incubaron en la cámara anaeróbica a 37°C durante 48 horas y se examinaron para el crecimiento. La MIC fue la concentración más baja de fármaco que completamente inhibió el crecimiento u ocasionó reducción notable del crecimiento como es comparado con el crecimiento sobre las placas sin fármaco.

Tabla 3: Datos de MIC (µ?/?a?) para deoxiactagardina B (DAB) y derivados de la misma. (Entre más bajo es el valor del resultado, más grande es la actividad del compuesto de prueba) .

Estabilidad de los lantibióticos tipo B en el fluido intestinal Los compuestos a base de lantibiótico provistos en la presente pueden tener estabilidad incrementada en la degradación enzimática comparada con los lantibióticos tipo A, tal como nisina. Particularmente, los compuestos pueden tener estabilidad mejorada a los jugos intestinales, comparados con los lantibióticos tipo A.

Nisina y el compuesto de compuesto 1 se sometieron a prueba para su susceptibilidad hacia la digestión enzimática en el intestino al utilizar un fluido intestinal simulado (SIF, por sus siglas en inglés) . El SIF se basó en las soluciones de USP estándares para fluidos intestinales simulados y su actividad se confirmó contra la Albúmina de Suero Bovina (Hilger y colaboradores, Clin Exp. Inmunol . 2001, 123, 387-94). Los compuestos se incubaron en SIF a 37°C y sus concentraciones se cuantificaron mediante HPLC analítica (detección de UV a 210 nm utilizando las condiciones resumidas en la Tabla 1) .

La Figura 1 muestra que la nisina se degradó rápidamente en SIF con una vida media de aproximadamente 15 a 20 minutos. La degradación rápida de nisina en este medio apoya la observación de que la utilidad clínica de nisina para el tratamiento de infecciones colónicas es muy limitada a menos que el compuesto pueda ser protegido de las enzimas degradantes por medio de la formulación cuidadosa.

La Figura 1 también muestra que el compuesto 1 (compuesto etiquetado de la fórmula II) es esencialmente estable en SIF y probablemente tiene estabilidad adecuada para tratar infecciones por C. difficile colónicas .

Lo que es más, los lantibióticos de tipo B tal como un compuesto de la fórmula 1 son estables en SGF por hasta 20 horas .

Ejemplo 1 Una cápsula de gelatina dura (tamaño 00) se abrió en dos segmentos y el compuesto 1 (50 mg) se pesó en el segmento más grande. El segmento de cápsula que contiene el compuesto 1 se selló al insertar y cerrar el segmento más pequeño sobre la sección de cápsula más grande. Una cápsula de gelatina dura (tamaño 00) que contiene hasta 500 mg se puede preparar al emplear este método.

Prueba de disolución La cápsula del Ejemplo 1 se dejó caer en 10 mL de fluido gástrico simulado (SGF, por sus siglas en inglés) a 37°C. La mezcla resultante se agitó levemente con una barra de agitación magnética tal que la cápsula giró lentamente en la solución, tal que no tocó la barra de agitación. Muestras de la solución/suspensión (100 L) se retiraron en l, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30 y 70 minutos después de la adición de la cápsula a SGF.

Las muestras se clarificaron utilizando una centrífuga superior en banco para remover el sólido de la suspensión. Los sobrenadantes clarificados se diluyeron con etanol al 50% y luego se analizaron mediante HPLC.

Los resultados muestran que el compuesto 1 se liberó completamente de la cápsula en el SGF dentro de 4 minutos.

Ejemplo 2 La solubilidad y comportamiento de disolución del compuesto 1 contenido en una cápsula de gelatina dura cuando se suspendió en un fluido gástrico simulado (SGF) se ha inspeccionado a 37°C.

El compuesto 1 (50 mg) se transfirió en una cápsula de gelatina dura de tamaño 00. Esta cápsula representa la dosis más baja que es probable que sea administrada en experimentos clínicos. La cápsula se dejó caer en 10 mL de SGF a 37°C y la muestra se hizo girar intermitentemente mediante la mano. La disolución se inspeccionó visualmente y mediante HPLC durante un período de una hora. Para el experimento de disolución inspeccionado mediante HPLC, la muestra se agitó continuamente con un agitador magnético a 37°C. Muestras de 100 ul se retiraron del experimento de disolución y se diluyeron con 900 ul de agua. La muestra diluida luego se centrifugó para remover el material sólido (principalmente gelatina) .

Composición de SGF NaCl 2 g Pepsina 3.2 g HC1 7 raL Constituida a 1 L de agua Método de HPLC utilizado Columna: Phenomenex Hyperclone 5µ C18 150 x 4.6 Fase Móvil A: 10% de Acetonitrilo/90% de Agua/0.15% de TFA Fase Móvil B B: 90% de Acetonitrilo /10% de Agua/0.15% de TFA Gasto de flujo: 1 mL/min Gradiente: Tiempo 0 min 100% A 0% B Tiempo 10 min 0% A 100% B Tiempo 11 min 0% A 100% B Tiempo 11.2 min 100% A 0% B Tiempo del ciclo: 15 min Volumen de Inyección: 10 iL Detección: 210 nm La cápsula permanece intacta durante aproximadamente 1 minuto. Después de 1 minuto un agujero se forma en la cápsula y el fármaco comienza a dispersarse. Después de 4 minutos la cápsula forma un grumo de cápsula/ fármaco sobre el lado del recipiente de vidrio. Después de 10 minutos un depósito pequeño de cápsula permanece y el compuesto sólido no fue visible. La suspensión blanca se forma principalmente por la cápsula de gelatina (ver la cápsula de control enseguida, Figuras 2a-2c) .

El compuesto 1 aparece para tener disolución de saturación alcanzada después de 3 minutos (Figura 3) . La variación en la respuesta de área pico es parcialmente debido a la pobre cromatografía debido a la interacción con la gelatina sobre la columna. Sin embargo, los resultados indican que la disolución del compuesto 1 es rápida (dentro de 3 minutos) y que el volumen del compuesto 1 se disuelve en menos de 5 minutos. El estudio demuestra que el compuesto 1 se disuelve y se dispersa en SGF de una cápsula de gelatina dura.

El compuesto 1 y el compuesto de la fórmula (II) se utilizan intercambiablemente en la presente.

Ejemplo 3 10 mg del compuesto 1 se suspendió en 250 µg/mL de Fluido Intestinal Simulado (SIF) y se dejó en un agitador durante 10 minutos, después de lo cual se observó la suspensión en tiempo. Esto estuvo en contraste a una muestra idéntica suspendida en SGF que completamente se disolvió después del mismo período de tiempo. Esta muestra preparada en una concentración objetivo de 40 mg/ml se centrifugó para remover el sedimento. El sobrenadante luego se diluyó a un objetivo de 1 mg/ml con agua y el contenido del compuesto 1 se comparó contra un estándar de 1 mg/ml preparado en etanol al 50% (acuoso) utilizando un método de HPLC del ejemplo 2.

Composición de SIF Adicionar los siguientes artículos a un vaso de laboratorio en el orden listado enseguida KH2P04 6.8g Agua 250 mL NaOH 0.2 N 77 mL Agua 500 mL Pancreatina lOg HCI/NaOH para ajustar a pH 6.8 Constituido a 1 L de agua (pH final = 6.8) El compuesto 1 es soluble en SIF en menor que 0.8 mg/mL. Esto estuvo en contraste a la solubilidad del compuesto 1 en SGF que fue soluble en 40 mg/mL.

Ejemplo 4 El compuesto 1 se incubó en SIF a 37°C por hasta 240 minutos . Se retiraron alícuotas de la muestra de prueba y se diluyeron con agua antes del análisis mediante HPLC (como es descrito en el Ejemplo 2) . El área pico del compuesto 1 se registró y se expresó como un porcentaje con respecto a la muestra de tiempo cero. Durante 240 minutos no se observó reducción significante en el área pico del compuesto 1 lo que indica que el compuesto 1 es estable en SIF durante 240 minutos (Figura 4) .

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por el solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (36)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Una formulación farmacéutica de una cápsula para suministro oral de un lantibiótico tipo B al estómago, caracterizada porque comprende: una cápsula rápidamente desintegrante; un lantibiótico tipo B de la fórmula (I) : en donde X1-X2 representa Leu-Leu, Leu-Ile, Leu-Val, lie-Leu, Ile-Ile. Ile-Val, Val-Ile o Val-Leu; X es -NH(CH2)qNH2; q es un número entero 2 a 12 ; Z es -NRV; R1 es H o alquilo de Ci-4, R2 es H, un aminoácido o alquilo de Ci-4, y p es 0 o 1, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. en donde la cápsula libera el antibiótico tipo B en el estómago.

2. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la formulación permite al lantibiótico tipo B, en particular por lo menos 60% del lantibiótico tipo B contenido en la cápsula, que sea liberado en el estomago y ciertamente ser liberado en el tiempo de pasar en el duodeno.

3. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 o 2, caracterizada porque la cápsula libera el antibiótico tipo B en el estómago dentro de 15 minutos .

4. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el espesor de la cubierta de cápsula es aproximadamente 0.1 mm.

5. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la formulación no es recubierta.

6. Una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque la cápsula es una cápsula de gelatina, de HPMC o de almidón.

7. Una formulación farmacéutica de conformidad con las reivindicación 1, caracterizada porque X1-X2 representa Leu-Val.

8. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque X1-X2 representa Val-Ile.

9. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque R2 es la forma de isómero L o D de un residuo de aminoácido.

10. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque R2 es un residuo de aminoácido seleccionado de Phe, Tyr o Ala.

11. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque R2 es Ala.

12. Una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizada porque q es 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12.

13. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque q es 2, 3, 7, 9 o 12.

14. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada porque q es 7, 9 o 12.

15. Una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y 12 a 14, caracterizada porque Z es NH2.

16. Una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, caracterizada porque p es 1.

17. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el compuesto de la fórmula (II) es Deoxiactagardina B (1, 7-diaminoheptano) monocarboxamida, (li) o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo .

18. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque el lantibiótico se libera en 9, 8, 7, 6, 5 o menos minutos después de la administración oral.

19. Una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, caracterizada porque el material lantibiótico empleado en la formulación es amorfo.

20. Una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, caracterizada porque el material lantibiótico empleado en la formulación se ha sometido a una etapa de pre-tratamiento de liofilización.

21. Una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20, caracterizada porque el material lantibiótico empleado se ha secado con rocío .

22. Una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, y uno más excipientes farmacéuticamente aceptables.

23. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 21 o 22, caracterizada porque el lantibiótico se seca con rocío con uno o más excipientes para proveer partículas que son aglomeraciones o mezclas simples del lantibiótico y los excipientes.

24. Una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, caracterizada porque la formulación tiene un contenido de humedad de 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 % p/p después del llenado de la cápsula.

25. Una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24, caracterizada porque la formulación tiene una vida en anaquel de aproximadamente 2 años, cuando se almacena bajo condiciones apropiadas .

26. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 25, caracterizada porque la formulación es físicamente estable y el lantibiótico en la misma es estable • químicamente durante el período.

27. Una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 26, caracterizada porque al final de la vida en anaquel, después del almacenamiento bajo condiciones apropiadas, el contenido de humedad de la formulación es menor que 12% p/p.

28. Una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, caracterizada porque las cápsulas se empaquetan en paquetes de lámina delgada/lámina delgada con ampollas o lámina delgada/laminado o recipiente de polietileno de alta densidad, en particular equipado con un saquito higroscópico .

29. Una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 28, para usarse en el tratamiento.

30. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 29, para usarse en el tratamiento de humanos y/o animales con una infección microbiana.

31. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 30, caracterizada porque la infección microbiana es una infección por Clostridium difficile .

32. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 31, caracterizada porque la infección por c. difficile está en el colon y/o intestinos inferiores.

33. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 30, caracterizada porque la infección microbiana es el sobrecrecimiento bacteriano en el intestino delgado.

34. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 33, caracterizada porque es para el tratamiento de la colitis ulcerativa.

35. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación- 34, caracterizada porque es para el tratamiento del síndrome de intestino irritable.

36. Una formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 35, caracterizada porque es para usarse en la prevención de la infección y/o re- infección en donde el paciente está en riesgo debido a las condiciones alteradas del estómago.