MX2012008955A - Metodos y composiciones para diagnostico y pronostico de lesion renal y falla renal. - Google Patents

Metodos y composiciones para diagnostico y pronostico de lesion renal y falla renal.

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Abstract

La presente invención se relaciona a métodos y composiciones para supervisar, diagnosticar, pronosticar, y determinar regímenes de tratamiento en sujetos que sufren de o se sospecha tienen una lesión renal. Particularmente, la invención se refiere a usar uno o más ensayos configurados para detectar un marcador de lesión del riñón seleccionado del grupo que consiste delnterleucina-5, subunidad beta del receptor de Interleucina-6, factor de tejido, globulina que liga a hormona del sexo, Alfa-2-macroglobulina, Apolipoproteína A-I, Calcitonina, Trombopoyetina, proteína C-reactiva, molécula de adhesión intercelular 3, metalloelastasa de macrófago, Apolipoproteína B-100, y fibrinógeno como biomarcadores de diagnóstico y pronóstico en lesiones renales.

Description

MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA DIAGNÓSTICO Y PRONÓSTICO DE LESIÓN RENAL Y FALLA RENAL La presente solicitud reclama prioridad de la Solicitud de Patente Provisional de los E.U.A. Número de Serie 61/301,961 presentada en febrero 5, 2010; Solicitud de Patente . Provisional de los E.U .A. Número de Serie 61/301,970 presentada en febrero 5, 2010; Solicitud de Patente Provisional de los E. U.A. Número de Serie 61/301, 981 presentada en febrero 5, 2010; Solicitud de Patente Provisional de los E. U.A. Número de Serie 61/301, 985 presentada en febrero 5, 2010; Solicitud de Patente Provisional de los E . U.A. Número de Serie 61/301, 992 presentada en febrero 5, . 2010; Solicitud de Patente Provisional de los E. U.A. Número de Serie 61/302, 009 presentada en febrero 5, 2010; Solicitud de Patente Provisional de los E. U.A. Número de Serie 61/302, 012 presentada en febrero 5, 2010; Solicitud de Patente Provisional de los E . U.A. Número de Serie 61/302, 016 presentada en febrero 5, 2010; Solicitud de Patente Provisional de los E. U.A. Número de Serie 61/302, 032 presentada en febrero 5, 2010; Solicitud de Patente Provisional de los E. U.A. Número de Serie 61/302,039 presentada en febrero 5, 2010; Solicitud de Patente Provisional de los E. U.A. Número de Serie 61/302, 045 presentada en febrero 5, 2010; Solicitud de Patente Provisional de los E.U.Á. Número de Serie 61/302,047 presentada en febrero 5, 2010; Solicitud de Patente Provisional de los E.U.A. Número de Serie 61/302,048 presentada en febrero 5, 2010; cada una de las cuales aquí se incorpora en su totalidad incluyendo todas las tablas, figuras y reivindicaciones.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La siguiente discusión de los antecedentes de la invención solamente se proporciona para ayudar al lector en comprender la invención y no se admite que describa o constituya técnica previa de la presente invención.
El riñon es responsable por excreción de soluto y agua del cuerpo. Sus funciones incluyen mantenimiento del balance ácido-base, regulación de concentraciones de electrólitos, control del volumen de la sangre y regulación de la presión de la sangre. Como tal, la pérdida de la función del riñon a través de lesión y/o enfermedad resulta en sustanciales morbilidad y mortalidad. Una discusión detallada de lesiones renales se proporciona en Harrison' s Principies of Internal Medicine, 17th Ed. , McGraw Hill, New York, páginas 1741-1830, que aquí se incorpora por referencia en su totalidad. La enfermedad y/o lesión renal pueden ser agudas o* crónicas. Una enfermedad de riñon aguda y crónica se describe como sigue (de Current Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47th Ed, McGraw Hill, New York, páginas 785-815, que aquí se incorpora por referencia en su totalidad) : "La falla renal aguda es el empeoramiento de la función renal por horas a días, resultando en la retención de desechos nitrogenosos (tales como nitrógeno de urea) y creatinina en la sangre. La retención de estas sustancias se denomina azotemia. La falla renal crónica (enfermedad crónica de riñon) resulta de una pérdida anormal de función- renal durante meses a años". ¦ La falla renal aguda (ARF = Acute Renal Failure) , también conocida como lesión aguda de riñon o AKI = Acute Kidney Injury) es una reducción abrupta (detectada típicamente dentro de aproximadamente 48 horas a 1 semana) en la filtración glomerular. Esta pérdida de capacidad de filtración resulta en retención de productos de desecho nitrogenosos (urea y creatinina) y no nitrogenosos, que normalmente se excretan por el riñon, una reducción en la excreción de orina o ambos. Se reporta que ARF complica aproximadamente 5% de admisiones de hospital, 4-15% de cirugías de derivación cardiopulmonar , y hasta 30% de admisiones de cuidado intensivo. ARF puede ser categorizada como pre-renal, renal intrínseca o post-renal en etiología. La enfermedad renal intrínseca además puede dividirse en anormalidades glomerulares, tubulares, intersticiales y vasculares. Las causas mayores de ARF se describen en la siguiente tabla, que se adapta de Merck Manual, 17* edición, Capítulo 222, y que aquí se incorpora por referencia en su totalidad: En el caso de ARF isquémica, el curso de la enfermedad puede ser dividido en cuatro fases. Durante una fase inicial, que dura horas a días, la perfusión reducida del riñon tiene evolución en lesión. La ultrafiltración glomerular se reduce, el flujo de filtrado se reduce debido a desechos dentro de los túbulos, y ocurre retrofuga de filtrado a través de epitelio lesionado. Lesión renal puede estar mediada durante esta fase por reperfusión del riñon. El inicio es seguido por una fase de extensión que se caracteriza por lesión isquémica continúa e inflamación y puede involucrar daño endotelial y congestión vascular. Durante la fase de mantenimiento, que dura de 1 a 2 semanas, ocurre lesión de células renales, y filtración glomerular y la excreción de orina alcanza un mínimo. Una fase de recuperación puede seguir en donde el epitelio renal es reparado y se recupera gradualmente GFR. A pesar de esto, la tasa de supervivencia de los sujetos con ARF puede ser tan baja como aproximadamente 60%.
Lesión renal aguda provocada por agentes de radiocontraste (también denominados medios de contraste) y otras nefrotoxinas tales como ciclosporina, antibióticos incluyendo aminoglicósidos y fármacos anticáncer tales como cisplatina, se manifiestan sobre un periodo de días o hasta aproximadamente una semana. Nefropatia inducida por contraste (CIN = Contrast Induced Nephropathy, que es AKI provocada por agentes de radiocontraste) se considera causada por vasoconstricción intrarenal (lo que lleva a lesión isquémica) y de la generación de especies de oxigeno reactivas que son directamente tóxicas a células epiteliales tubulares renales. CIN clásicamente se presenta como un aumento agudo (de inicio en 24-48 h) pero reversible (pico 3-5 días, resolución en 1 semana) en nitrógeno de urea en la sangre y creatinina de suero.
Un criterio comúnmente reportado para definir y detectar AKI es una elevación abrupta (típicamente dentro de aproximadamente 2-7 días o dentro de un período de hospitalización) de creatinina en suero. Aunque el uso de elevación de creatinina en suero para definir y detectar AKI está bien establecido, la magnitud de la elevación de creatinina en suero y el tiempo sobre el cual se mide para definir AKI varían considerablemente entre publicaciones. Tradicionalmente, incrementos relativamente grandes en creatinina de suero tales como 100%, 200% un incremento de al menos 100% a un valor sobre 2 mg/dL y otras definiciones, se emplearon para definir AKI. Sin embargo, la reciente tendencia ha sido hacia utilizar menores aumentos de creatinina en suero para definir AKI . La relación entre el aumento de creatinina en suero, AKI y los riesgos de salud asociados se revisan por Praught and Shlipak, Curr Opin Nephrol Hypertens 14:265-270, 2005 y Chertow et al, J Am Soc Nephrol 16: 3365-3370, 2005, que, con las referencias ahí citadas, aquí se incorporan por referencia en su totalidad. Como se describe en estas publicaciones, la función renal de empeoramiento agudo (AKI) y riesgo incrementado de muerte y otros resultados nocivos ahora se saben asociados con muy pequeños incrementos de creatinina en suero. Estos aumentos pueden ser determinados como valor relativo (por ciento) o un valor nominal. Aumentos relativos de creatinina en suero tan pequeños como 20% del valor pre-lesión se han reportado que indican función renal de empeoramiento agudo (AKI) y riesgo de salud incrementado, pero el valor más comúnmente reportado para definir AKI y un riesgo de salud incrementado es un aumento relativo de al menos 25%. Aumentos nominales tan pequeños como 0.3 mg/dL, 0.2 mg/dL o incluso 0.1 mg/dL se han reportado que indican una . función renal empeorada e incrementado riesgo de muerte. Diversos periodos de tiempo para que la creatinina en suero aumente a estos valores Umbral se han empleado para definir AKI, por ejemplo en el intervalo de 2 días, 3 días, 7 dias o un periodo variable definido como el tiempo en que el paciente está en el hospital o en la unidad de cuidado intensivo. Estos estudios indican que no hay un. aumento de creatinina en suero umbral particular (o periodo de tiempo para el aumento) para empeorar la función renal o AKI, sino más bien un aumento continuo en riesgo con creciente magnitud de aumento de creatinina en suero.
Un estudio (Lassnigg et all, J Am Soc Nephrol 15:1597-1605, 2004, aquí incorporado por referencia en su totalidad) investigó tanto aumentos como disminuciones de creatinina en suero. Pacientes con una ligera caída de creatinina en suero de -0.1 a -0.3 mg/dL después de cirugía cardiaca, tuvieron la más baja proporción de mortalidad. Pacientes con una gran caída de creatinina en suero (más que o igual a -0.4 mg/dL) o cualquier incremento de creatinina en suero tuvieron una mayor proporción de mortalidad. Estos hallazgos provocaron que los autores sacaran por conclusión que incluso cambios muy sutiles en función renal (como se detecta por pequeños cambios en creatinina dentro de 48 horas de la cirugía) afectan seriamente los resultados en los pacientes. En un esfuerzo para alcanzar consenso en un sistema de clasificación unificado para utilizar creatinina en suero para definir AKI en pruebas clínicas y en la práctica clínica, Bellomo et al., Crit Care. 8 ( 4 ) : R204-12 , 2004, que aquí se incorpora por referencia en su totalidad, proponen las siguientes clasificaciones para estratificar pacientes AKI: "Riesgo": creatinina en suero aumenta 1.5 veces de referencia 0 producción de orina de <0.5 ml/kg peso corporal/hora por 6 horas; "Lesión": creatinina en suero aumentó 2.0 veces de referencia O producción de orina <0.5 ml/kg/hora por 12 horas; "Falla": creatinina en suero aumenta 3.0 veces de referencia O creatinina >355 µ????/? (con un aumento de >44) o excreción de orina inferior a 0.3 ml/kg/hora por 24 horas o anuria por al menos 12 horas; E incluidos dos resultados clínicos: "Pérdida": necesidad -persistente por terapia de reemplazo renal por más de cuatro semanas.
"ESRD": enfermedad renal de etapa final-necesidad por diálisis por más de 3 meses.
Estos criterios se denominan el criterio RIFLE, que proporciona una herramienta clínica útil para clasificar estado renal. Como se discute por Kellum, Crit. Care Med. 36: S141-45, 2008 y Ricci et al., Kidney Int. 73, 538-546, 2008, cada una aquí incorporado por referencia en su totalidad, los criterios RIFLE proporcionan una definición uniforme de AKI que se ha validado en numerosos estudios.
Más recientemente, Mehta et al., Crit. Care 11:R31 (doi : 10.1186. cc5713 ) , 2007, aquí incorporado por referencia en su totalidad, propone las siguientes clasificaciones similares para estratificar pacientes AKI, que se han modificado a partir de RIFLE: "Etapa I": aumento de creatinina en suero mayor que o igual a 0.3 mg/dL (= 26.4 µp???/L) o aumento más que o igual a 150% (1.5-veces) de referencia o excreción de orina menor a 0.5 mL/kg por hora por más de 6 horas; "Etapa II": aumento de creatinina en suero a más de 200% (> 2-veces) de referencia O excreción de orina menor a 0.5 mL/kg por hora por más de 12 horas; "Etapa III": aumento de creatinina en suero a más de 300% (> 3-veces) de referencia o creatinina en suero = 354 mol/L acompañado por un aumento agudo de al menos 44 µ????/L 0 de excreción de orina menor a 0.3 mL/kg por hora por 24 horas o anuria por 12 horas.
El Panel de Trabajo de Consenso (CIN = Consensus Working Panel) (McCollough et al, Rev Cardiovasc Med. 2006; 7 (4) : 177-197, aquí incorporado por referencia en su totalidad) utiliza un aumento de creatinina en suero de 25% para definir Nefropatia inducida por contraste (que es un tipo de AKI) . Aunque diversos grupos proponen criterios ligeramente diferentes para utilizar creatinina en suero para detectar AKI, el consenso es que pequeños cambios de creatinina en suero tales como 0.3 mg/dL o 25%, son suficientes para detectar AKI (función renal empeorada) y que la magnitud del cambio de creatinina en suero es un indicador de la severidad de AKI y el riesgo de mortalidad.
Aunque mediciones en serie de creatinina en suero sobre un periodo de días es un método aceptado para detectar y diagnosticar AKI y se considera una de las herramientas más importantes para evaluar pacientes AKI, la creatinina en suero generalmente se considera que tiene varias limitaciones en el diagnóstico, evaluación y supervisión de pacientes AKI. El periodo de tiempo para que la creatinina en suero aumente a valores (por ejemplo, un aumento de 0.3 mg/dL o 25%) considerado diagnóstico para AKI, puede ser 48 horas o más prolongado dependiendo de la definición empleada. Ya que la lesión celular en AKI puede ocurrir sobre un periodo de horas, elevaciones de creatinina en suero detectadas a 48 horas o más pueden ser un indicador tardío de lesión, y recurrir a creatinina en suero puede de esta manera retrasar el diagnóstico de AKI. Además, la creatinina en suero no es un buen indicador del estado exacto del riñon y necesidades de tratamiento durante las fases más agudas de AKI cuando la función . del riñon está cambiando rápidamente. Algunos pacientes, con AKI se recuperarán completamente, algunos requerirán diálisis (ya sea a corto plazo o largo plazo) y algunos tendrán otros resultados nocivos incluyendo muerte, eventos cardíacos adversos mayores y enfermedad renal crónica. Debido a que la creatinina en suero es un marcador de la velocidad de filtración, no diferencia entre las causas de AKI (pre-renal, renal intrínseca, obstrucción post-renal, ateroembólica, etc.) o la categoría o ubicación de lesión en enfermedad renal intrínseca (por ejemplo, de origen tubular, glomerular, o intersticial) . La excreción de orina es similarmente limitada, saber estas cosas puede ser de importancia vital para manejar y tratar pacientes con AKI.
Estas limitaciones resaltan la necesidad por mejores métodos para detectar y estimar AKI, particularmente en las etapas temprana y subclínica, pero también en etapas posteriores cuando pueden ocurrir recuperación y reparación del riñon. Aún más, hay necesidad por identificar mejor pacientes quienes están en riesgo de tener AKI.
BREVE COMPENDIO DE IA INVENCIÓN Un objeto de la invención es proporcionar métodos y composiciones para evaluar la función renal en un sujeto. Como se describe aquí, la medición de uno o más biomarcadores seleccionados del grupo que consiste de Interleucina-5, subunidad beta de receptor de Interleucina-ß, Factor de tejido, globulina que liga a Hormona de sexo, Alfa-2-macroglobulina, Apolipoproteína A-I, Calcitonina, Trombopoyetina, proteína C-reactiva, molécula de adhesión Intercelular 3, Macrófago metaloelastasa, Apolipoproteína B-100 y Fibrinógenoo (cada uno referido aquí como "marcador de lesión de riñon") pueden emplearse para diagnóstico, pronóstico, estratificación de riesgo, estratificación por etapas, supervisión, categorización y determinación de adicionales regímenes de diagnóstico y tratamiento en sujetos que sufren o tienen riesgo de sufrir una lesión a la función renal, reducida función renal y/o falla renal aguda (también denominada lesión aguda de riñon) .
Los marcadores de lesión de riñon de la presente invención pueden emplearse, en forma individual o en paneles, que comprende una pluralidad de marcadores de lesión de riñon, para estratificación de riesgo (es decir, para identificar sujetos en riesgo para una lesión futura de función renal, para progreso futuro a función renal reducida, para progreso futuro a ARF, para mejora futura en función renal, etc.); para diagnóstico de enfermedad existente (esto es, para identificar sujetos quienes han sufrido una lesión renal, quienes han progresado a función renal reducida, quienes han progresado a ARF, etc.); para supervisar deterioro o mejora de función renal; y para pronosticar un resultado médico futuro, tal como función renal mejorada o empeorada, un riesgo de mortalidad disminuido o incrementado, un riesgo disminuido o incrementado de que un sujeto requiera terapia de reemplazo renal (es decir, hemodiálisis, diálisis peritoneal, hemofiltración, y/o trasplante renal, un riesgo disminuido o incrementado de que un sujeto se recupere de una lesión de función renal, un riesgo disminuido o incrementado de que un sujeto se recupere de ARF, un riesgo disminuido o incrementado de que un sujeto progrese a una enfermedad renal de estadio terminal, un riesgo disminuido o incrementado de que un sujeto progrese a falla renal crónica, un riesgo disminuido o incrementado en que un sujeto sufra rechazo de riñon trasplantado, etc.
En un primer aspecto, la presente invención se refiere a métodos para evaluar estado renal en un sujeto. Estos métodos comprenden realizar un método de ensayo que se configura para detectar uno o más biomarcadores seleccionados del grupo que consiste de Interleucina-5 , subunidad beta receptor de Interleucina-6, Factor de tejido, Globulina que liga a hormona de sexo, Alfa-2-macroglobulina, Apolipoproteina A-I, Calcitonina, Trombopoyetina , proteina C-reactiva, molécula de adhesión Intercelular 3, Macrófago metaloelastasa, Apolipoproteina B-100 y Fibrinógeno después se correlacionan al estado renal del sujeto. Esta correlación al estado renal puede incluir correlacionar el resultado de ensayo (s) a uno o más de estratificación de riesgo, diagnóstico, pronóstico, clasificación por etapas, clasificación y supervisión del sujeto como se describe aquí. De esta manera, la presente invención utiliza uno o más marcadores de lesión de riñon de la presente invención para la evaluación de lesión renal.
En ciertas modalidades, los métodos para evaluar estado renal aquí descritos son métodos para estratificación de riesgo del sujeto; esto es, asignar una probabilidad de uno o más cambios futuros en estado renal del sujeto. En estas modalidades, el o los resultados de ensayo se correlacionan con¦ uno o más de estos cambios futuros. Las siguientes son modalidades de estratificación de riesgo preferidas .
En modalidades de estratificación de riesgos preferidas, . estos métodos comprenden determinar el riesgo de un sujeto para una lesión futura a función renal, y el o los resultados de ensayo, se correlacionan a una probabilidad de esta lesión futura a función renal. Por ejemplo, cada una de la o las concentraciones medidas pueden ser comparadas con un valor umbral. Para un marcador de lesión de riñon "que va a positivo", una probabilidad incrementada de sufrir una lesión futura a función renal, se asigna al sujeto cuando la concentración medida está sobre el umbral, respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral. Para un marcador de lesión de riñon "que va a negativo", una probabilidad incrementada de sufrir una lesión futura a la función renal se asigna al sujeto, cuando la concentración medida esta por debajo del umbral, respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está sobre el umbral.
En otras modalidades de estratificación de riesgo preferidas, estos métodos comprenden determinar el riesgo de un sujeto para función renal reducida futura, y el o los resultados de ensayo se correlacionan con una probabilidad de esta función renal reducida. Por ejemplo, cada una de las concentraciones puede compararse con valor umbral. Para un marcador de lesión de riñon "que va a positivo", una probabilidad incrementada de sufrir una función renal reducida futura se asigna al sujeto, cuando la concentración medida está sobre el umbral, respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral. Para un marcador de lesión de riñon "que va a negativo", una probabilidad de incrementada de función renal reducida futura se asigna al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral, respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral.
Todavía en otras modalidades de estratificación de riesgo preferidas, estos métodos comprenden determinar la probabilidad de un sujeto para una mejora futura en función renal, y el o los resultados de ensayo se correlacionan con una probabilidad de esta mejora futura en función renal. Por ejemplo, cada una de la o las concentraciones medidas puede ser comparada con un valor umbral. Para un marcador de lesión de riñon "que va a positivo", una probabilidad incrementada de una mejora futura en función renal se asigna al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral. Para un marcador de lesión de riñon "que va a negativo", una probabilidad incrementada de mejora futura en función renal se asigna al sujeto cuando la concentración medida está sobre el umbral, respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral.
Todavía en otras modalidades de estratificación de riesgo preferidas, estos métodos comprenden determinar el riesgo de progreso a ARF de un sujeto, y el o los resultados se correlacionan con una probabilidad de este progreso a ARF. Por ejemplo, cada una de la o las concentraciones medidas puede ser comparada con un valor umbral . Para un marcador de lesión de riñon "que va a positivo", una probabilidad incrementada de progreso a ARF se asigna al sujeto cuando la concentración medida está sobre el umbral, respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral. Para un marcador de lesión de riñon "que va a negativo", una probabilidad incrementada de progreso a ARF se asigna al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral, respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral.
Y en otras modalidades de estratificación de riesgo preferidas, estos métodos comprenden determinar el riesgo del resultado de un sujeto, y el o los resultados de ensayo se correlacionan con una probabilidad de la ocurrencia de un resultado clínico relacionada a lesión renal que sufre el sujeto. Por ejemplo, cada de la o las concentraciones medidas puede ser comparada con un valor umbral. Para un marcador de lesión de riñon "que va a positivo", una probabilidad incrementada de uno o más de: lesión renal aguda, progreso a una etapa empeorada de AKI, mortalidad, un requerimiento para terapia de reemplazo renal, un requerimiento para retirar toxinas renales, enfermedad renal de estadio terminal, falla cardiaca, derrame cerebral, infarto al miocardio, progreso a enfermedad renal crónica, etc., se asigna al sujeto cuando la concentración medida está sobre el umbral, respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral. Para un marcador de lesión de riñon "que va a negativo", una probabilidad incrementada de uno o más de: lesión de riñon aguda, progreso a una etapa de empeoramiento de AKI, mortalidad, un requerimiento para terapia de remplazo renal, un requerimiento para extracción de toxinas renales, enfermedad renal de etapa final, falla cardiaca, derrame cerebral, infarto al miocardio, progreso a enfermedad de riñon crónica, etc., se asigna al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral, respecto a una probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral.
En estas modalidades de estratificación de riesgo, de preferencia la probabilidad o riesgo asignada es que un evento de interés es más o menos probable que ocurra dentro de 180 días del tiempo en el cual la muestra de fluido corporal se obtiene del sujeto. En modalidades particularmente preferidas, la probabilidad o riesgo asignado se refiere a un evento de interés que ocurre dentro de un periodo de tiempo más corto tal como 18 meses, 120 días, 90 días, 60 días, 45 días, 30 días, 21 días, 14 días, 7 días, 5 días, 96 horas, 72 horas, 48 horas, 36 horas, 24 horas, 12 horas, o menos. Un riesgo a 0 horas del tiempo en el cual la muestra de fluido corporal se obtiene del sujeto, es equivalente a diagnóstico de una condición actual.
En modalidades de estratificación de riesgo preferidas, se elige el sujeto para estratificación de riesgo con base en la pre-existencia en el sujeto de uno o más factores de riesgo conocidos para ARF pre-renal, renal intrínseca, o post-renal. Por ejemplo, un sujeto que se somete o se ha sometido a cirugía vascular mayor, de derivación de arteria coronaria, u otra cirugía cardiaca; un sujeto que tiene falla cardiaca congestiva pre-existente, pre eclampsia, eclampsia, diabetes mellitus, hipertensión, enfermedad de arteria coronaria, proteinuria, insuficiencia renal, filtración glomerular por debajo del intervalo normal, cirrosis, creatinina en suero sobre el intervalo normal, o sepsis; o un sujeto expuesto a AINEs (NSAIDs), ciclosporinas , tacrolimus, aminoglicósidos, foscarnet, etilen glicol, hemoglobina, mioglobina, ifosfamida, metales pesados, metotrexato, agentes de contraste radiopacos, o estreptozotocina, todos son sujetos preferidos para supervisar riesgos de acuerdo con los métodos aquí descritos. Esta lista no se pretende limitante. Por "pre-existencia" en este contexto se entiende que existe el factor de riesgo al tiempo en que la muestra de fluido corporal se obtiene del sujeto. En modalidades particularmente preferidas, se elige un sujeto para estratificación de riesgo con base en un diagnóstico existente de lesión a función renal, función renal reducida, o ARF.
En otras modalidades, los métodos para evaluar estado renal aquí descritos son métodos para diagnosticar una lesión renal en el sujeto; esto es, estimar si un sujeto o no ha sufrido de una lesión o función renal, función renal reducida, o ARF. En estas modalidades, el o los resultados de ensayo por ejemplo la o las concentraciones medidas de uno o más biomarcadores seleccionados del grupo que consiste de Interleucina-5, subunidad beta receptor de Interleucina-6, Factor de tejido, Globulina que liga a hormona de sexo, Alfa-2-macroglobulina, Apolipoproteina A-I, Calcitonina, Trombopoyetina, proteina C-reactiva, molécula de adhesión Intercelular 3, Macrófago metaloelastasa, Apolipoproteina B-100 y Fibrinógeno se correlacionan con la ocurrencia o no ocurrencia de un cambio en estado renal. Las siguientes son modalidades de diagnóstico preferidas.
En modalidades de diagnóstico preferidas, estos métodos comprenden diagnosticar la ocurrencia o no ocurrencia de una lesión de función renal, y el o los resultados de ensayo se correlacionan con la ocurrencia o no ocurrencia de tal lesión. Por ejemplo, cada una de la o las concentraciones medidas puede compararse con un valor umbral. Para un marcador que va a positivo, una probabilidad incrementada de la ocurrencia de una lesión de función renal se asigna al sujeto cuando la concentración medida está sobre el umbral (respecto a la probabilidad asignada cuando la. concentración medida está por debajo del umbral) ; en forma alterna, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, una probabilidad incrementada de la no ocurrencia de una lesión a función renal puede ser asignada al sujeto (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está sobre el umbral) . Para un marcador que va a negativo, una probabilidad incrementada de la ocurrencia de una lesión de función renal se asigna al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral) ; en forma alterna, cuando la concentración medida está sobre el umbral, una probabilidad incrementada de la no ocurrencia de una lesión a función renal puede ser asignada al sujeto (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral) .
En otras modalidades de diagnóstico preferidas, estos métodos comprenden diagnosticar la ocurrencia o no ocurrencia de función renal reducida, y el o los resultados de ensayo se correlacionan con la ocurrencia o no ocurrencia de una lesión que provoca función renal reducida. Por ejemplo, cada una de la o las concentraciones medidas puede compararse con un valor umbral. Para un marcador que va a positivo, una probabilidad incrementada de la ocurrencia de una lesión de función renal reducida se asigna al sujeto cuando la concentración medida está sobre el umbral (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral); en forma alterna, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, una probabilidad incrementada de la no ocurrencia de una lesión que provoca función renal reducida puede ser asignada al sujeto (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está sobre el umbral) . Para un marcador que va a negativo, una probabilidad incrementada de la ocurrencia de una lesión que provoca función renal reducida se asigna al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral) ; en forma alterna, cuando la concentración medida está sobre el umbral, una probabilidad incrementada de la no ocurrencia de una lesión que provoca función renal reducida puede ser asignada al sujeto (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral) .
En todavía otras modalidades de diagnóstico preferidas, estos métodos comprenden diagnosticar la ocurrencia o no ocurrencia de ARF, y el o los resultado de ensayo se correlacionan con la ocurrencia o no ocurrencia de una lesión que provoca ARF. Por ejemplo, la concentración medida puede compararse con un valor umbral. Para un marcador que va a positivo, una probabilidad incrementada de la ocurrencia de ARF se asigna al sujeto cuando la concentración medida está sobre el umbral (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral) ; en forma alterna, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, una probabilidad incrementada de la no ocurrencia de ARF puede ser asignada al sujeto (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está sobre el umbral) . Para un marcador que va a negativo, una probabilidad incrementada de la ocurrencia de ARF se asigna al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está sobre el umbral) ; en forma alterna, cuando la concentración medida está sobre el umbral, una probabilidad incrementada de la no ocurrencia de ARF puede asignarse al sujeto (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral) .
Todavía en otras modalidades de diagnóstico preferidas, estos métodos comprenden diagnosticar a un sujeto que requiere terapia de reemplazo renal, y el o los resultados de ensayo se correlacionan con una necesidad para terapia de reemplazo renal. Por ejemplo, cada una de la o las concentraciones medidas puede ser comparada con un valor umbral. Para un marcador que va a positivo, una probabilidad incrementada de la ocurrencia de una lesión que crea una necesidad para terapia de remplazo renal, se asigna al sujeto cuando la concentración medida está sobre el umbral (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral) ; en forma alterna, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, una probabilidad incrementada de la no ocurrencia de una lesión que crea necesidad por terapia de remplazo renal puede ser asignada al sujeto (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está sobre el umbral) . Para un marcador que va a negativo, una probabilidad incrementada de la ocurrencia de una lesión que crea una necesidad para terapia de remplazo renal, se asigna al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral) ; en forma alterna, cuando la concentración medida está sobre el umbral, una probabilidad incrementada de la no ocurrencia de lesión que crea una necesidad para terapia de remplazo renal puede ser asignada al sujeto (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral) .
Todavía en otras modalidades de diagnóstico preferidas, estos métodos comprenden diagnosticar a un sujeto que requiere trasplante renal, y el o los resultados de ensayo, se correlacionan con una necesidad por trasplante renal. Por ejemplo, cada una de la o las concentraciones medidas puede compararse con un valor umbral. Para un marcador que va a positivo, una probabilidad incrementada de la ocurrencia de una lesión que crea una necesidad para trasplante renal, se asigna al sujeto cuando la concentración medida está sobre el umbral (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral) ; en forma alterna, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, una probabilidad incrementada de la no ocurrencia de una lesión que crea necesidad por trasplante renal puede ser asignada al sujeto (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está sobre el umbral) . Para un marcador que va a negativo, una probabilidad incrementada de la ocurrencia de una lesión que crea una necesidad para trasplante renal, se asigna al sujeto cuando la concentración medida está por debajo del umbral (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por encima del umbral) ; en forma alterna, cuando la concentración medida está sobre el umbral, una probabilidad incrementada de la no ocurrencia de lesión que crea una necesidad para trasplante renal puede ser asignada al sujeto (respecto a la probabilidad asignada cuando la concentración medida está por debajo del umbral) .
Todavía en otras, modalidades, los métodos para evaluar estado renal aquí descritos son métodos para supervisar una lesión renal en el sujeto; esto es, estimar si o no la función renal mejora o empeora en un sujeto que ha sufrido una lesión de la función renal, función renal reducida o ARF. En estas modalidades, el o los resultados de ensayo, por ejemplo concentraciones medidas de uno o más biomarcadores seleccionados del grupo que consiste de Interleucina-5 , subunidad beta receptor de Interleucina-6, Factor de tejido, Globulina que liga a hormona de sexo, Alfa-2-macroglobulina, Apolipoproteína A-I, Calcitonina, Trombopoyetina, proteína C-reactiva, molécula de adhesión Intercelular 3, Macrófago metaloelastasa, Apolipoproteína B-100 y Fibrinógeno se correlacionan con la ocurrencia o no ocurrencia de un cambio en estado renal. Las siguientes son modalidades de supervisión preferidas.
En modalidades de supervisión preferidas, estos métodos comprenden supervisar estado renal en un sujeto que sufr„e de una lesión de función renal, y el o los resultados de ensayo se correlacionan con la ocurrencia o no ocurrencia de un cambio en estado renal en el sujeto. Por ejemplo, la concentración medida puede compararse con un valor umbral, y cuando la concentración medida está sobre el umbral, puede asignarse un empeoramiento de la función renal al sujeto; en forma alterna, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, una mejora de la función renal puede asignarse al sujeto.
En otras modalidades de supervisión preferidas, estos métodos comprenden supervisar estado renal en un sujeto que sufre de función renal reducida, y el o los resultados de ensayo se correlacionan con la ocurrencia o no ocurrencia de un cambio en estado renal en el sujeto. Por ejemplo, la o las concentraciones medidas pueden ser comparadas con un valor umbral. Para un marcador que va a positivo, cuando la concentración medida está sobre el umbral, puede asignarse un empeoramiento de función renal al sujeto; en forma alterna, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, una mejora de función renal puede ser asignada al sujeto. Para un marcador que va a negativo, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, puede asignarse un empeoramiento de función renal al sujeto; en forma alterna, cuando la concentración medida está sobre el umbral, una mejora de función renal puede asignarse al sujeto.
Todavía en otras modalidades de supervisión preferidas, estos métodos comprenden supervisar estado renal en un sujeto que sufre de falla renal aguda, y el o los resultados de ensayo se correlacionan con la ocurrencia o no ocurrencia de un cambio en el estado renal en el sujeto. Por ejemplo, la concentración medida puede compararse con un valor umbral. Para un marcador que va a positivo, cuando la concentración medida está sobre el umbral, puede asignarse un empeoramiento de función renal al sujeto; en forma alterna, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, una mejora de función renal puede ser asignada al sujeto. Para un marcador que va a negativo, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, puede asignarse un empeoramiento de función renal al sujeto; en forma alterna, cuando la concentración medida está sobre el umbral, una mejora de función renal puede asignarse al sujeto.
En otras modalidades de supervisión preferidas adicionales, estos métodos comprenden supervisar estado renal en un sujeto en riesgo de una lesión de función renal debido a la prexistencia de uno o más factores de riesgo conocidos por ARF pre-renal, renal intrínseco o post-renal, y el o los resultados de ensayo se correlacionan con la ocurrencia o no ocurrencia de un cambio en estado renal en el sujeto. Por ejemplo, la concentración medida puede compararse con un valor umbral. Para un marcador que va a positivo, cuando la concentración medida está sobre el umbral, puede asignarse un empeoramiento de función renal al sujeto; en forma alterna, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, una mejora de función renal puede ser asignada al sujeto. Para un marcador que va a negativo, cuando la concentración medida está por debajo del umbral, puede asignarse un empeoramiento de función renal al sujeto; en forma alterna, cuando la concentración medida está sobre el umbral, una mejora de función renal puede asignarse al sujeto.
En todavía otras modalidades, los métodos para evaluar estado renal aquí descritos son métodos ara clasificar una lesión renal en un sujeto; esto es, determinar si una lesión renal en un sujeto es pre-renal, renal intrínseca o post-renal; y/o adicionalmente subdividir estas clases en subclases tales como lesión tubular aguda, glomerulonefritis aguda, nefritis túbulo intersticial aguda, nefropatía vascular aguda o enfermedad infiltrativa; y/o asignar una probabilidad de que un sujeto progrese a una etapa RIFLE particular. En estas modalidades, el o los resultados de ensayo, por ejemplo. concentración o concentraciones medidas de uno o más biomarcadores seleccionados del grupo que consiste de Interleucina-5 , subunidad beta receptor de Interleucina-6, Factor de tejido, Globulina que liga a hormona de sexo, Alfa-2-macroglobulina, Apolipoproteina A-I, Calcitonina, Trombopoyetina, proteina C-reactiva, molécula de adhesión Intercelular 3, Macrófago metaloelastasa, Apolipoproteina B-100 y Fibrinógeno se correlacionan con una clase y/o subclase particular. Las siguientes son modalidades de clasificación preferidas.
En modalidades de clasificación preferidas, estos métodos comprenden determinar si una lesión renal en un sujeto es pre-renal, renal intrínseca o post-renal; y/o además subdividir estas clases en subclases tales como lesión tubular aguda, glomerulonefritis aguda, nefritis túbulo intersticial aguda, nefropatía vascular aguda o enfermedad infiltrativa, y/o asignar una probabilidad de que el sujeto progrese a una etapa RIFLE particular y el o los resultados de ensayo se correlacionan con la clasificación de lesión para el sujeto. Por ejemplo, la concentración medida puede compararse con un valor umbral, y cuando la concentración medida está sobre el umbral, se asigna una clasificación particular; en forma alterna, cuando una concentración medida está por debajo del umbral, puede asignarse una clasificación diferente al sujeto.
Una variedad de métodos pueden emplearse por la persona con destreza para llegar a un valor umbral deseado. Por ejemplo, el valor umbral puede determinarse de una población de sujetos normales al seleccionar una concentración que representa el 75°, 85°, 90°, 95°, o 99° percentil de Beta-2-glicoproteína 1 medida en estos sujetos normales. En forma alterna, el valor umbral puede ser determinado a partir de una población de sujetos "enfermos" por ejemplo aquellos que sufren de una lesión o que tienen predisposición para una lesión (por ejemplo, progreso a ARF o algún otro resultado clínico tal como muerte, diálisis, trasplante renal, etc.), al seleccionar una concentración que representa el 75°, 85°, 90°, 95° o 99° percentil de un marcador de lesión de riñon medido en esos sujetos. En otra alternativa, el valor umbral puede determinarse a partir de una medición previa de un marcador de lesión de riñon en el mismo sujeto; esto es, un cambio temporal en el nivel de un marcador de lesión de riñon en el sujeto puede utilizarse para asignar un riesgo para el sujeto.
La discusión anterior no se pretende que implique, sin embargo que los marcadores de lesión de riñon de la presente invención deben ser comparados con umbrales individuales correspondientes. Métodos para combinar resultados de ensayo pueden comprender el uso de regresión logística multivariada, modelado log linear, análisis de red neural, análisis n-de-m, análisis de árbol de decisión, cálculo de proporciones de marcadores, etc. Esta lista no se pretende limitante. En esos métodos, un resultado compuesto que se determina al combinar marcadores individuales puede ser tratado como si el mismo fuera un marcador; esto es, un umbral puede ser determinado para el resultado compuesto como se describe aquí por marcadores individuales, y el resultado compuesto para un paciente individual comparado con este umbral.
La capacidad de una prueba particular para distinguir dos poblaciones puede establecerse utilizando análisis ROC. Por ejemplo, curvas ROC curves establecen desde una "primer" subpoblación que esté predispuesta a uno o más cambios futuros en estado renal, y una "segunda" subpoblación que no está asi predispuesta, puede utilizarse para calcular una curva ROC, y el área bajo la curva proporciona una medida de la calidad de la prueba. De preferencia, las pruebas descritas aquí proporcionan a un área de curva ROC mayor que 0.5, de preferencia al menos 0.6, más preferiblemente 0.7, todavía más preferiblemente al menos 0.8, aún más preferiblemente al menos 0.9, y más preferible al menos 0.95.
En ciertos aspectos, la concentración medida de uno o más marcadores de lesión de riñon, o un compuesto de estos marcadores, puede tratarse como una variable continua. Por ejemplo, cualquier concentración particular puede ser convertida en una probabilidad correspondiente de una reducción futura en función renal para el sujeto, la ocurrencia de una lesión, una clasificación, etc. Todavía en otra alternativa, un umbral puede proporcionar un nivel aceptable de especificidad y sensibilidad para separar una población de sujetos en "cajas" tales como una "primer" sub-población (por ejemplo, que está predispuesto a uno o más cambios futuros en estado renal, la ocurrencia de una lesión, una clasificación, etc.) y una "segunda" subpoblación que no está asi predispuesta. Un valor umbral se elige para separar esta primera y segunda poblaciones en uno o más de las siguientes medidas de precisión de prueba: una disparidad o razón de posibilidades mayor a 1 de preferencia al menos aproximadamente 2 o más o aproximadamente 0.5 o menos, más preferiblemente al menos aproximadamente 3 o más o aproximadamente 0.33 o menos, todavía más preferiblemente al menos aproximadamente 4 o más o aproximadamente 0.25 o menos, aún más preferible al menos aproximadamente 5 o más o aproximadamente 0.2 o menos, y más preferible al menos aproximadamente 10 o más o aproximadamente 0.1 o menos; una especificidad mayor a 0.5, de preferencia al menos aproximadamente 0.6, más preferiblemente al menos aproximadamente 0.7, todavía más preferiblemente al menos aproximadamente 0.8, aún más preferible al menos aproximadamente 0.9 y más preferible al menos aproximadamente 0.95, con una sensibilidad correspondiente mayor que 0.2, de preferencia mayor que aproximadamente 0.3, más preferible mayor que aproximadamente 0.4, todavía más preferible al menos aproximadamente 0.5, aún más preferible aproximadamente 0.6, todavía más preferible mayor que aproximadamente 0.7, todavía más preferiblemente mayor que aproximadamente 0.8, más preferiblemente mayor que aproximadamente 0.9, y más preferible mayor que aproximadamente 0.95; una sensibilidad mayor que 0.5, de preferencia al menos aproximadamente 0.6, más preferible al menos aproximadamente 0.7, todavía más preferible al menos aproximadamente 0.8, aún más preferible . al menos aproximadamente 0.9 y más preferible al menos aproximadamente 0.95, con una especificidad correspondiente mayor que 0.2, de preferencia mayor que aproximadamente 0.3, más preferible mayor que aproximadamente 0.4, todavía más preferible al menos aproximadamente 0.5, aún más preferible aproximadamente 0.6, aún más preferible mayor que aproximadamente 0.7, todavía más preferible mayor que aproximadamente 0.8, más preferible mayor que aproximadamente 0.9, y más preferible mayor que aproximadamente 0.95; al menos aproximadamente 75% de sensibilidad, en combinación con al menos aproximadamente 75% de especificidad; una proporción de posibilidad positiva (calculado como sensibilidad/ ( 1-especificidad) ) mayor que 1, al menos aproximadamente 2, más preferible al menos aproximadamente 3, todavía más preferible al menos aproximadamente 5, y más preferible al menos aproximadamente 10; o una proporción de posibilidad negativa (calculada como (1-sensibilidad) /especificidad) menor a 1, menor que o igual a aproximadamente 0.5, más preferible menor que o igual a aproximadamente 0.3, y más preferible menor que o igual a aproximadamente 0.1.
El término "aproximadamente" en el contexto se refiere a +/- 5% de una medida dada.
Múltiples umbrales también pueden emplearse para estimar estado renal en un sujeto. Por ejemplo, una "primer" subpoblación que está predispuesta a uno o más cambios futuros en estado renal, la ocurrencia de una lesión, una clasificación, etc., y una "segunda" subpoblación que no está siempre predispuesta puede combinarse en un solo grupo. Este grupo se subdivide entonces en tres o más partes iguales (conocidos como terciles, cuartiles, quintiles, etc., dependiendo del número de subdivisiones). Una disparidad o razón de posibilidades se asigna a sujetos con base en que subdivisiones caen. Si se considera un tercil, el tercil más bajo o más alto puede emplearse como una referencia para comparación de las otras subdivisiones. A esta subdivisión de referencia se le asigna una disparidad o razón de posibilidad de 1. Al segundo tercil se le asigna una disparidad que es respecto al primer tercil. Esto es, alguien en el segundo tercil puede ser 3 veces más probable que sufra uno o más cambios futuros en el estado renal, en comparación con alguien en el primer tercil. Al tercer tercil también se le asigna una disparidad que es relativa al primer tercil.
En ciertas modalidades, el método de ensayo es un inmunoensayo . Anticuerpos para utilizar en estos ensayos específicamente ligará a un marcador de lesión de riñon de longitud integra de interés, y también puede ligar uno o más polipéptidos gue están "relacionados" a él, ya gue como ese término se define a continuación. Numerosos formatos de inmunoensayo se conocen por aquellos con destreza en la técnica. Muestras de fluido corporal preferidas se eligen del grupo que consiste de orina, sangre, suero, saliva, lágrimas y plasma.
No se deberá interpretar que las etapas de método anteriores signifiquen que el o los resultados de ensayo de marcador de lesión de riñon se emplean en aislamiento en los métodos aquí descritos. Por el contrario, variables adicionales u otras señales clínicas pueden ser incluidas en los métodos aquí descritos. Por ejemplo, un método de estratificación de riesgo, diagnóstico, clasificación, supervisión, etc., pueden combinar el o los resultados de ensayos con una o más variables medidas para el sujeto seleccionadas del grupo que consiste de información demográfica (por ejemplo, peso, sexo, edad, razas), historia medica (por ejemplo, historia familiar, tipo de cirugía, enfermedad pre-existente tal como aneurisma, falla cardiaca congestiva, pre eclampsia, eclampsia, diabetes mellitus, hipertensión, enfermedad de arterias coronarias, proteinuria, insuficiencia renal o sepsis, tipo de exposición a toxina tales como AINEs = anti-inflamatorios no esferoidales (NSAIDs = Nonsteroidal ¦ antiinflammatory drugs) , ciclosporinas , tacrolimus, aminoglicosidos, foscarnet, etilen glicol, hemoglobina, mioglobina, ifosfamida, metales pesados, metotrexato, agentes de contraste radiopacos o estreptozotocina) , variables clínicas (por ejemplo, presión sanguínea, temperatura, frecuencia respiratoria) , calificaciones de riesgo (calificación APACHE, calificación PREDICT, Calificación de Riesgo TI I para UA/NSTE I, Calificación de Riesgo Framingham) , calificaciones de riesgo de Thakar et al. (J. Am. Soc. Nephrol. 16: 162-68, 2005), Mehran et al. (J. Am. Coll. Cardiol. 44: 1393-99, 2004), Wijeysundera et al. (JAMA 297: 1801-9, 2007), Goldstein y Chawla (Clin. J. Am. Soc. Nephrol. 5: 943-49, 2010), o Chawla et al. (Riñon Intl. 68: 2274-80, 2005)), una velocidad de filtración glomerular, una velocidad de filtración glomerular estimada, una velocidad de producción de orina, una concentración de creatinina en suero o plasma, una concentración de creatinina en orina, una excreción fraccional de sodio, una concentración de sodio en orina, una proporción de creatinina en plasma o suero a creatinina en orina, una gravedad especifica de orina, una osmolalidad de orina, una proporción de nitrógeno de urea en orina a nitrógeno de urea en plasma, una proporción de BUN en plasma a creatinina, un índice de falla renal calculado como sodio en orina / (creatinina en orina / creatinina en plasma) , una concentración de neutrófilo gelatinasa (NGAL) en suero o plasma, una concentración NGAL de orina, una concentración de cistatina C en suero o plasma, una concentración de troponina cardiaca, una concentración de BPN en plasma o suero, una concentración de NTproBNP en suero o plasma, y una concentración de proBNP en suero o plasma. Otras medidas de función renal que pueden combinarse con el o los resultados de ensayo de uno o más marcadores de lesión de riñon se describen a continuación y en Harrison's Principies of Internal Medicine, 17th Ed., McGra Hill, New York, páginas 1741-1830, y Current Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47th Ed, McGraw Hill, New York, páginas 785-815, cada una de las cuales aquí se incorpora por referencia en su totalidad.
Cuando más de un marcador se mide, los marcadores individuales pueden ser medidos en muestras que se obtienen al mismo tiempo, o pueden determinarse a partir de muestras que se obtienen a diferentes tiempos (por ejemplo, uno previo o posterior) . Los marcadores individuales también pueden medirse en las mismas o diferentes muestras de fluido corporal. Por ejemplo, un marcador de lesión de riñon puede medirse en una muestra de suero o plasma y otro marcador de lesión de riñon puede medirse en una muestra de orina. Además, asignar una probabilidad puede combinar el resultado de ensayo de marcador de lesión de riñon individual con cambios temporales en una o más de estas variables adicionales.
En diversos aspectos relacionados, la presente invención también se refiere a dispositivos y equipos para realizar los métodos aqui descritos. Equipos convenientes comprenden reactivos suficientes para realizar al menos un ensayo para al menos uno de los marcadores de lesión de riñon descritos, junto con instrucciones para realizar las comparaciones umbral descritas.
En ciertas modalidades, reactivos para realizar estos ensayos se proporcionan en un dispositivo de ensayo, y estos dispositivos de ensayo pueden incluirse en este equipo. Reactivos preferidos pueden comprender uno o más anticuerpos de fa.se sólida, el anticuerpo de fase sólida comprende anticuerpo que detecta el o los objetivos o blancos biomarcadores pretendidos ligados a un soporte sólido. En el caso de inmunoensayos emparedados, estos reactivos también pueden incluir uno o más anticuerpos etiquetados en forma detectable, el anticuerpo etiquetado detectable comprende anticuerpo que detecta el o los objetivos o blancos biomarcadores pretendidos que se ligan a una etiqueta detectable. Elementos opcionales adicionales que pueden proporcionarse como parte de un dispositivo de ensayo, se describen a continuación.
Etiquetas detectables pueden incluir moléculas que las mismas son detectables (por ejemplo, porciones fluorescentes, etiquetas electroquímicas, etiquetas de luminiscencia electroquímica (ecl = electrochemical luminescence ) , quelatos de metal, partículas de metal coloidal, etc. ) así como moléculas que pueden ser detectadas en forma indirecta por producción de un producto de reacción detectable (por ejemplo, enzimas tales como peroxidasa de rábano picante, fosfatasa alcalina, etc. ) o a través del uso de una molécula de enlace específica la cual puede ser detectable (por ejemplo, un anticuerpo etiquetado que liga al segundo anticuerpo, biotina, digoxigenina, maltosa, oligohistidina, 2, -dintrobenzeno, fenilarsenato, ssDNA, dsDNA, etc. ) .
La generación de una señal a partir del elemento de desarrollo de señal puede realizarse utilizando diversos métodos ópticos, acústicos, y electroquímicos bien conocidos en la especialidad. Ejemplos de modos de detección incluyen fluorescencia, detección radioquímica, reflectancia, absorbancia, amperometría, conductancia, impedancia, interferometría, elipsometría, etc. En ciertos de estos métodos, el anticuerpo de fase sólida se acopla a un transductor (por ejemplo, una rejilla de difracción, sensor electroquímico, etc.) para generación de una señal, mientras que en otros, se genera una señal por un transductor que se separa espacialmente del anticuerpo de fase sólida (por ejemplo, un fluorómetro que emplea una fuente de luz de excitación y un detector óptico) . Esta lista no se pretende que sea limitante. Biosensores basados en anticuerpo también pueden ser empleados para determinar la presencia o cantidad de analitos que eliminan en forma opcional la necesidad por una molécula etiquetada.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a métodos y composiciones para diagnóstico, diagnóstico diferencial, estratificación de riesgo, supervisión, clasificación y determinación de regímenes de tratamiento en. sujetos que sufren o tienen riesgo de sufrir lesión de función renal, función renal reducida y/o falla renal aguda a través de medición de uno o más marcadores de lesión de riñon. En diversas modalidades, una concentración medida de uno o más marcadores de lesión de riñon seleccionados del grupo que consiste de Interleucina-5 , subunidad beta receptor de Interleucina-6, Factor de tejido, Globulina que liga a hormona de sexo, Alfa-2-macroglobulina, Apolipoproteína A-I, Calcitonina, Trombopoyetina, proteína C-reactiva, molécula de adhesión Intercelular 3, acrófago metaloelastasa, Apolipoproteína B-100 y Fibrinógeno o uno o más marcadores relacionados, se correlacionan con el estado renal del suj eto .
Para propósitos de este documento, aplican las siguientes definiciones: Como se emplea aquí, una "lesión de función renal" es una reducción medible abrupta (dentro de 14 días, de preferencia dentro de 7 días, más preferible dentro de 72 horas, y todavía más preferible dentro de 48 horas) en una medida de función renal. Esta lesión puede ser identificada, por ejemplo por una disminución en velocidad de filtración glomerular o GFR estimada, una reducción en excreción de orina, un aumento de creatinina en suero, un aumento en cistatina C en suero, un requerimiento para . terapia de reemplazo renal, etc. "Mejora en Función Renal" es un aumento medible abrupto (dentro de 14 días, de preferencia dentro de 7 días, más preferible dentro de 72 horas, y todavía más preferible dentro de 48 horas) en una medida de función renal. Métodos preferidos para medir y/o estimar GFR se describen a continuación.
Como se emplea aquí, "reducida función renal" es una reducción abrupta (dentro de 14 días, de preferencia entre 7 días, más preferiblemente dentro de 72 horas y todavía más preferible dentro de 48 horas) en función renal identificada por un aumento absoluto de creatinina en suero mayor que o igual a 0.1 mg/dL (= 8.8 moles/L) , un incremento en por ciento de creatinina en suero mayor que o igual a 20% (1.2-veces de referencia) o una reducción en excreción de orina (oliguria documentada menor a 0.5 ml/kg por hora).
Como se emplea aquí "falla renal aguda" o "ARF" ("acute renal failure") es una reducción abrupta (dentro de 14 días, de preferencia dentro de 7 días, más preferible dentro de 72 horas, y aún más preferible dentro de 48 horas) en función renal identificada por un aumento absoluto de creatinina en suero mayor que o igual a 0.3 mg/dl (= 26.4 umoles/l) , un aumento en por ciento de creatinina en suero mayor que o igual a 50% (1.5-veces de referencia), o una reducción en excreción de orina (oliguria documentada menor que 0.5 ml/kg por hora por al menos 6 horas). Este término es sinónimo con "lesión renal aguda" o "AKI".
Como se emplea aquí, el término "Interleucina-5" se refiere a uno o polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de Interleucina-5 (precursor humano Swiss-Prot P05113 (SEQ ID NO: 1)) 10 20 30 40 50 60 MRMLLHLSLL ALGAAYVYAI PTEIPTSALV KETLALLSTH RTLLIANETL RIPVPVHKNH 70 80 90 100 110 120 QLCTEEIFQG IGTLESQTVQ GGTVERLFKN LSLIKKYIDG QKKKCGEERR RVNQFLDYLQ 130 EFLGVMNTEW IIES Los siguientes dominios se han identificado en Interleucina-5 : Residuo Longitud ID de Dominio 1-19 19 Péptido de señal 20-134 115 Interleucina-5 Como se emplea aquí, el término "subunidad beta de receptor de Interleucina-6" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de subunidad beta receptor de Interleucina-6 (precursor humano Swiss-Prot P40189 (SEQ ID NO: 2)) 10 20 30 40 50 60 MLTLQTWLVQ ALFIFLTTES TGELLDPCGY ISPESPVVQL HSNFTAVCVL KEKCMDYFHV 70 80 90 100 110 120 NCUALQUIERIVWKTN HFTIPKEQYT IINRTASSVT FTDIASLNIQ LTCNILTFGQ LEQNVYGITI 130 140 150 160 170 180 ISGLPPEKPK NLSCIVNEGK KMRCEWDGGR ETHLETNFTL KSEWATHKFA DCKAKRDTPT 190 200 210 220 230 240 SCTVDYSTVY FVNIEVWVEA ENALGKVTSD HINFDPVYKV KPNPPHNLSV INSEELSSIL • 250 260 270 280 290 300 KLTWTNPSIK SVIILKYNIQ YRTKDASTWS QIPPEDTAST RSSFTVQDLK PFTEYVFRIR 310 320 330 340 350 ' 360 CMKEDGKGYW SDWSEEASGI TYEDRPSKAP SFWYKIDPSH TQGYRTVQLV WKTLPPFEAN 370 380 390 400 410 420 GKILDYEVTL TRWKSHLQNY TVNATKLTVN LTNDRYLATL TVRNLVGKSD AAVLTIPACD 430 440 450 460 470 480 FQATHPVMDL KAFPKDNMLW VEWTTPRESV KKYILEWCVL SDKAPCITDW QQEDGTVHRT 490 500 510 520 530 540 YLRGNLAESK CYLITVTPVY ADGPGSPESI KAYLKQAPPS KGPTVRTKKV GKNEAVLEWD 550 560 570 580 590 600 QLPVDVQNGF IRNYTIFYRT IIGNETAVNV DSSHTEYTLS SLTSDTLYMV RMAAYTDEGG 610 620 630 640 650 660 KDGPEFTFTT PKFAQGEIEA IVVPVCLAFL LTTLLGVLFC FNKRDLIKKH IWPNVPDPSK 670 680 690 700 710 720 SHIAQWSPHT PPRHNFNSKD QMYSDGNFTD VSVVEIEAND KKPFPEDLKS LDLFKKEKIN 730 . 740 750 760 770 780 TEGHSSGIGG SSCMSSSRPS ISSSDENESS QNTSSTVQYS TVVHSGYRHQ VPSVQVFSRS 790 800 810 820 830 840 ESTQPLLDSE ERPEDLQLVD HVDGGDGILP RQQYFKQNCS QHESSPDISH FERSKQVSSV 850 860 870 880 890 900 NEEDFVRLKQ QISDHISQSC GSGQMKMFQE VSAADAFGPG TEGQVERFET VGMEAATDEG 910 MPKSYLPQTV RQGGYMPQ Más preferible, el ensayo de subunidad beta de receptor de Interleucina-6 detecta una o más formas solubles de la subunidad beta receptor de Interleucina-6. La subunidad beta receptor de Interleucina-6 es una proteína de membrana tipo I que tiene un gran dominio extracelular, la mayoría o todo el cual está presente en formas solubles de subunidad beta receptor de Interleucina-6 generadas ya sea a través de un evento de combinación alterna que elimina todo o una porción del dominio transmembrana, o por proteólisis de la forma ligada a membrana. En el caso de un inmunoensayo, uno o más anticuerpos que ligan a epitopos dentro de este dominio extracelular pueden ser empleados para detectar está o estas formas solubles. Los siguientes dominios se han identificado en subunidad beta receptor de Interleucina-6 : Como se emplea aquí, la expresión "Factor de tejido" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de Factor de tejido (precursor humano Swiss-Prot P13726 (SEQ ID NO: 5)) 10 20 30 40 50 60 ETPAWPRVP RPETAVARTL LLGWVFAQVA GASGTTNTVA AYNLTWKSTN FKTILEWEPK 70 80 90 100 110 120 PVNQVYTVQI STKSGDWKSK CFYTTDTECD LTDEIVKDVK QTYLARVFSY PAGNVESTGS 130 140 150 160 170 180 AGEPLYENSP EFTPYLETNL GQPTIQSFEQ VGTKVNVTVE DERTLVRRNN TFLSLRDVFG 190 200 210 220 230 240 KDLIYTLYYW KSSSSGKKTA KTNTNEFLID VDKGENYCFS VQAVIPSRTV NRKSTDSPVE 250 260 270 280 290 CMGQEKGEFR EIFYIIGAVV FVVIILVIIL AISLHKCRKA GVGQSWKENS PLNVS Más preferiblemente, el ensayo de Factor de tejido detecta una o más formas solubles de Factor de tejido. Factor de tejido es una proteína neural tipo I que tiene un dominio de factor extracelular grande, la mayoría o todo lo cual está presente en formas solubles de Factor de tejido generado ya sea a través de un evento de combinación alterna que elimina todo o una porción del dominio transmembrana, o por proteólisis de la forma ligada a membrana. En el caso de un inmunoensayo, uno o más anticuerpos que ligan a epítopos dentro de este dominio extracelular pueden emplearse para detectar está o estas formas solubles. Los siguientes dominios se han identificado en el Factor de tejido: Como se emplea aquí, el término "globulina de enlace a hormona de sexo" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan de precursor de globulina que enlaza a hormona de sexo (precursor humano Swiss-Prot P04278 (SEQ ID NO: 6) ) 10 20 30 40 50 60 ESRGPLATS RLLLLLLLLL LRHTRQGWAL RPVLPTQSAH DPPAVHLSNG PGQE IAV T 70 80 90 100 110 120 FDLTKITKTS SSFEVRTWDP EGVIFYGDTN PKDDWFMLGL RDGRPEIQLH NHWAQLTVGA 130 140 150 160 170 180 GPRLDDGRWH QVEVKMEGDS VLLEVDGEEV LRLRQVSGPL TSKRHPIMRI ALGGLLFPAS 190 200 210 220 230 240 NLRLPLVPAL DGCLRRDSWL DKQAEISASA PTSLRSCDVE SNPGIFLPPG TQAEFNLRDI 250 260 270 280 290 300 PQPHAEPWAF SLDLGLKQAA GSGHLLALGT PENPSWLSLH LQDQKVVLSS GSGPGLDLPL 310 320 330 340 350 360 VLGLPLQLKL SMSRVVLSQG SKMKALALPP LGLAPLLNLW AKPQGRLFLG ALPGEDSSTS 370 380 390 400 FCLNGLWAQG QRLDVDQALN RSHEIWTHSC PQSPGNGTDA SH Los siguientes dominios se han identificado en globulina de enlace a hormona de sexo: Residuos Longitud ID de Dominio Péptido de señal 1-29 29 Globulina de enlace a hormona de sexo 30-402 373 Como se emplea aqui, el término "Alfa-2-macroglobulina" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de Alfa-2-macroglobulina (precursor humano S iss-Prot P01023 (SEQ ID NO: 7) ) 10 20 30 40 50 60 MGKNKLLHPS LVLLLLVLLP TDASVSGKPQ YMVLVPSLLH TETTEKGCVL LSYLNETVTV 70 80 90 100 110 120 SASLESVRGN RSLFTDLEAE NDVLHCVAFA VPKSSSNEEV MFLTVQVKGP TQEFKKRTTV 130 140 150 160 170 180 MVKNEDSLVF VQTDKSIYKP GQTVKFRVVS MDENFHPLNE LIPLVYIQDP KGNRIAQWQS 190 200 210 220 230 240 FQLEGGLKQF SFPLSSEPFQ GSYKWVQKK SGGRTEHPFT VEEFVLPKFE VQVTVPKIIT 250 260 270 280 290 300 ILEEEMNVSV CGLYTYGKPV PGHVTVSICR KYSDASDCHG 'EDSQAFCEKF SGQLNSHGCF 310 320 330 340 350 360 YQQVKTKVFQ LKRKEYEMKL HTEAQIQEEG TVVELTGRQS SEITRTITKL SFVKVDSHFR 370 380 390 400 410 420 QGIPFFGQVR LVDGKGVPIP NKVIFIRGNE ANYYSNATTD EHGLVQFSIN TTNVMGTSLT 430 440 450 460 470 480 VRVNYKDRSP CYGYQWVSEE HEEAHHTAYL VFSPSKSFVH LEPMSHELPC GHTQTVQAHY 490 500 510 520 530 540 ILNGGTLLGL KKLSFYYLIM AKGGIVRTGT HGLLVKQEDM KGHFSISIPV KSDIAPVARL 550 560 570 580 590 600 LIYAVLPTGD VIGDSAKYDV ENCLANKVDL SFSPSQSLPA SHAHLRVTAA PQSVCALRAV 610 620 630 640 650 660 DQSVLLMKPD AELSASSVYN LLPEKDLTGF PGPLNDQDDE DCINRHNVYI NGITYTPVSS ' 670 680 690 700 710 720 TNEKDMYSFL EDMGLKAFTN SKIRKPKMCP QLQQYEMHGP EGLRVGFYES DVMGRGHARL 730 740 750 760 770 780 VHVEEPHTET VRKYFPETWI WDLVVVNSAG VAEVGVTVPD TITEWKAGAF CLSEDAGLGI 790 800 810 820 830 840 SSTASLRAFQ PFFVELTMPY SVIRGEAFTL KATVLNYLPK CIRVSVQLEA SPAFLAVPVE 850 860 870 880 890 900 KEQAPHCICA NGRQTVSWAV TPKSLGNVNF TVSAEALESQ ELCGTEVPSV PEHGRKDTVI 910 920 930 940 950 960 KPLLVEPEGL EKETTFNSLL CPSGGEVSEE LSLKLPPNVV EESARASVSV LGDILGSAMQ 970 980 990 1000 1010 1020 NTQNLLQMPY GCGEQNMVLF APNIYVLDYL NETQQLTPEI KSKAIGYLNT GYQRQLNYKH 1030 1040 1050 1060 1070 1080 YDGSYSTFGE RYGRNQGNTW LTAFVLKTFA QARAYIFIDE AHITQALIWL SQRQKDNGCF 1090 1100 1110 1120 1130 1140 RSSGSLLNNA IKGGVEDEVT LSAYITIALL EIPLTVTHPV VRNALFCLES AWKTAQEGDH 1150 1160 1170 1180 1190 1200 GSHVYTKALL AYAFALAGNQ DKRKEVLKSL NEEAVKKDNS VHWERPQKPK APVGHFYEPQ 1210 1220 1230 1240 1250 1260 APSAEVEMTS YVLLAYLTAQ PAPTSEDLTS ATNIVKWITK QQNAQGGFSS TQDTVVALHA 1270 1280 1290 1300 1310 1320 LSKYGAATFT RTGKAAQVTI QSSGTFSSKF QVDNNNRLLL QQVSLPELPG EYSMKVTGEG 1330 1340 1350 1360 1370 1380 CVYLQTSLKY NILPEKEEFP FALGVQTLPQ TCDEPKAHTS FQISLSVSYT GSRSASNMAI 1390 1400 1410 .1420 1430 1440 VDVKMVSGFI PLKPTVKMLE RSNHVSRTEV SSNHVLIYLD KVSNQTLSLF FTVLQDVPVR 1450 1460 1470 DLKPAIVKVY DYYETDEFAI AEYNAPCSK-D LGNA Los siguientes dominios se han identificado en Alfa-2-macroglobulina : Residuos Longitud ID de Dominio 23 1-23 Péptido de señal 24-1474 1451 Alfa-2-macroglobulina Como se emplea aquí, el término "Apolipoproteína A-I" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor Apolipoproteína A-I (precursor humano Swiss-Prot P02647 (SEQ ID NO: 8) ) 10 20 30 40 50 60 MKAAVLTLAV LFLTGSQARH FWQQDEPPQS PWDRVKDLAT VYVDVLKDSG RDYVSQFEGS 70 80 90 100 110 120 ALGKQLNLKL LDNWDSVTST FSKLREQLGP VTQEFWDNLE KETEGLRQEM SKDLEEVKAK 130 140 150 160 170 180 VQPYLDDFQK KWQEEMELYR QKVEPLRAEL QEGARQKLHE LQEKLSPLGE EMRDRARAHV 190 200 210 220 230 240 DALRTHLAPY SDELRQRLAA RLEALKENGG ARLAEYHAKA TEHLSTLSEK AKPALEDLRQ 250 260 GLLPVLESFK VSFLSALEEY TKKLNTQ Los siguientes dominios se han identificado en Apolipoproteina A-I: Residuos Longitud ID de Dominio 18 1-18 Péptido de señal 6 19-24 Propéptido 25-267 243 Apolipoproteina A-I 25-266 . 242 Apolipoproteina A-I (1-242) Como se emplea aquí, el término "Calcitonina" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de Calcitonina (precursor humano Swiss-Prot P01258 (SEQ ID NO: 9) ) 10 20 30 40 50 60 MGFQKFSPFL ALSILVLLQA GSLHAAPFRS ALESSPADPA TLSEDEARLL LAALVQDYVQ 70 80 90 100 110 120 MKASELEQEQ EREGSSLDSP RSKRCGNLST CMLGTYTQDF NKFHTFPQTA IGVGAPGKKR 130 140 D SSDLERDH RPHVSMPQNA N Los siguientes dominios se han identificado en Calcitonina : Residuos Longitud ID de Dominio 1-25 25 Péptido de señal 26-82 57 Propéptido 85-116 32 Calcitonina 21-141 21 Catacalcina 134-141 32 VSMPQNAN (SEQ ID NO: 10)? NHCPEESL (SEQ ID NO: 11) en isoforma 2 Como se emplea aquí, el término "Trombopoyetina" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de Trombopoyetina (precursor humano Swiss-Prot P40225 (SEQ ID NO: 12)) 10 20 30 40 50 60 MELTELLLVV LLLTARLTL SSPAPPACDL RVLSKLLRDS HVLHSRLSQC PEVHPLPTPV 70 80 90 100 110 120 LLPAVDFSLG EWKTQMEETK AQDILGAVTL LLEGVMAARG QLGPTCLSSL LGQLSGQVRL 130 140 150 160 170 180 LLGALQSLLG TQLPPQGRTT AHKDPNAIFL SFQHLLRGKV RFLMLVGGST LCVRRAPPTT 190 200 210 220 230 240 AVPSRTSLVL TLNELPNRTS GLLETNFTAS ARTTGSGLLK WQQGFRAKIP GLLNQTSRSL 250 260 270 280 290 300 DQIPGYLNRI HELLNGTRGL FPGPSRRTLG APDISSGTSD TGSLPPNLQP GYSPSPTHPP 310 320 330 340 350 TGQYTLFPLP PTLPTPVVQL HPLLPDPSAP TPTPTSPLLN TSYTHSQNLS QEG Los siguientes dominios se han . identificado en Trombopoyetina : Residuos Longitud ID de Dominio 1-21 21 Péptido de señal 22-353 332 Trombopoyetina 133-136 4 Faltante en Trombopoyetina, isoforma 2 160-198 39 Faltante en Trombopoyetina, isoforma 3 Como se emplea aquí, el término "proteina reactiva" se refiere a uno o más polipéptidos presentes una muestra biológica que se derivan del precursor proteina C-reactiva (precursor humano Swiss-Prot P02741 (SEQ ID NO: 13) ) 10 20 30 40 50 60 MEKLLCFLVL TSLSHAFGQT DMSRKAFVFP KESDTSYVSL KAPLTKPLKA FTVCLHFYTE 70 80 90 100 110 120 LSSTRGYSIF SYATKRQDNE ILIFWSKDIG YSFTVGGSEI LFEVPEVTVA PVHICTSWES 130 140 150 160 170 180 ASGIVEFWVD GKPRVRKSLK KGYTVGAEAS IILGQEQDSF GGNFEGSQSL VGDIGNVNMW 190 200 210 220 DFVLSPDEIN TIYLGGPFSP NVLNWRALKY EVQGEVFTKP QLWP Los siguientes dominios se han identificado en proteina C-reactiva: Residuos Longitud ID de Dominio 1-18 18 Péptido de señal 19-224 206 Proteina C-reactiva 19-223 205 Proteina C-reactiva ' (1-205) 67-199 133 Faltante en isoforma 2 Como se emplea aquí, el término "Molécula adhesión intercelular 3" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de Molécula de adhesión intercelular 3 (precursor humano Swiss-Prot P32942 (SEQ ID NO: 14)) 10 20 30 40 50 60 MATMVPSVLW PRACWTLLVC CLLTPGVQGQ EFLLRVEPQN PVLSAGGSLF VNCSTDCPSS 70 80 90 100 110 120 EKIALETSLS KELVASGMGW AAFNLSNVTG NSRILCSVYC NGSQITGSSN ITVYRLPERV 130 140 150 160 170 180 ELAPLPPWQP VGQNFTLRCQ VEDGSPRTSL TVVLLRWEEE LSRQPAVEEP AEVTATVLAS 190 200 210 220 230 240 RDDHGAPFSC RTELDMQPQG LGLFVNTSAP RQLRTFVLPV TPPRLVAPRF LEVETSWPVD 250 260 270 280 290 300 CTLDGLFPAS EAQVYLALGD QMLNATVMNH GDTLTATATA TARADQEGAR EIVCNVTLGG 310 320 330 340 350 360 ERREARENLT VFSFLGPIVN LSEPTAHEGS TVTVSCMAGA RVQVTLDGVP AAAPGQPAQL 370 380 390 400 410 420 QLNATESDDG RSFFCSATLE VDGEFLHRNS SVQLRVLYGP KIDRATCPQH LKWKDKTRHV 430 440 450 460 470 480 LQCQARGNPY PELRCLKEGS SREVPVGIPF FVNVTHNGTY QCQASSSRGK YTLVVVMDIE 490 500 510 520 530 540 AGSSHFVPVF VAVLLTLGVV TIVLALMYVF REHQRSGSYH VREESTYLPL TSMQPTEAMG EEPSRAE Más preferiblemente, el ensayo de molécula de adhesión intracelular 3 detecta una o más formas solubles de la molécula de adhesión Intercelular 3. La molécula de adhesión intercelular 3 es una proteina de membrana tipo I que tiene un gran dominio extracelular , la mayoría o todo el cual está presente en formas solubles de molécula de adhesión intercelular 3 generadas ya sea a través de un evento de combinación alterno que elimina todo o una porción del dominio de transmembrana, o por proteólisis de la forma ligada a membrana. En el caso de un inmunoensayo, uno o más anticuerpos que ligan a epítopos dentro de este dominio extracelular, pueden emplearse para detectar esta o estas formas solubles. Los siguientes dominios se han identificado en la molécula de adhesión intercelular 3: Residuos Longitud ID de Dominio 1-29 29 Péptido de señal 30-547 518 Molécula de adhesión intercelular 3 511-547 37 Dominio Citoplásmico 486-510 25 Dominio de transmembrana 30-485 456 Dominio Extracelular Como se emplea aquí, el término "Macrófago metaloelastasa" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en la muestra biológica que se derivan del precursor de Macrófago metaloelastasa (precursor humano Swiss-Prot P39900 (SEQ ID NO: 15) ) 10 20 30 40 50 60 MKFLLILLLQ ATASGALPLN SSTSLEKNNV LFGERYLEKF YGLEINKLPV TKMKYSGNLM 70 80 90 100 110 120 KEKIQEMQHF LGLKVTGQLD TSTLEMMHAP RCGVPDVHHF REMPGGPVWR KHYITYRIN ¦ 130 140 150 160 170 - 180 YTPDMNREDV DYAIRKAFQV WSNVTPLKFS KINTGMADIL VVFARGAHGD FHAFDGKGGI 190 200 210 220 230 240 LAHAFGPGSG IGGDAHFDED EFWTTHSGGT NLFLTAVHEI GHSLGLGHSS DPKAVMFPTY 250 260 270 280 290 300 KYVDINTFRL SADDIRGIQS LYGDPKENQR LPNPDNSEPA LCDPNLSFDA VTTVGNKIFF 310 320 330 340 350 360 FKDRFFWLKV SERPKTSVNL ISSLWPTLPS GIEAAYEIEA RNQVFLFKDD KYWLISNLRP 370 380 390 400 410 420 EPNYPKSIHS FGFPNFVKKI DAAVFNPRFY RTYFFVDNQY WRYDERRQMM DPGYPKLITK 430 440 450 46.0 470 NFQGIGPKID AVFYSKNKYY YFFQGSNQFE YDFLLQRITK TLKSNSWFGC Los siguientes dominios se han identificado en Macrófago metaloelastasa : Residuos Longitud ID de Dominio 1-16 16 Péptido de señal 17-105 89 Péptido de activación 106-470 365 Macrófago metaloelastasa Como se emplea aquí, el término "Apolipoproteina B- 100" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor de Apolipoproteina B-100 (precursor human Swiss-Prot P04114 (SEQ ID NO: 16) ) 10 20 30 40 50 60 MDPPRPALLA LLALPALLLL LLAGARAEEE MLENVSLVCP KDATRF HLR KYTYNYEAES 70 80 90 100 110 120 SSGVPGTADS RSATRINCKV ELEVPQLCSF ILKTSQCTLK EVYGFNPEGK ALLKKTKNSE 130 140 150 160 170 180 EFAAA SRYE LKLAIPEGKQ VFLYPEKDEP TYILNIKRGI ISALLVPPET EEAKQVLFLD 190 200 210 220 230 240 TVYGNCSTHF TVKTRKGNVA TEISTERDLG QCDRFKPIRT GISPLALIKG MTRPLSTLIS 250 260 270 280 290 300 SSQSCQYTLD AKR HVAEAI CKEQHLFLPF SYNNKYGMVA QVTQTLKLED TPKINSRFFG 310 320 330 340 350 360 EGTKKMGLAF ESTKSTSPPK QAEAVLKTLQ ELKKLTISEQ NIQRANLFNK LVTELRGLSD 370 380 390 400 410 420 EAVTSLLPQL lEVSSPITLQ ALVQCGQPQC STHILQWLKR VHANPLLIDV VTYLVALIPE 430 440 450 460 470 480 PSAQQLREIF NMARDQRSRA TLYALSHAVN NYHKTNPTGT QELLDIANYL MEQIQDDCTG 490 500 510 520 530 540 DEDYTYLILR VIGNMGQTME QLTPELKSSI LKCVQSTKPS LMIQKAAIQA LRKMEPKDKD 550 560 570 580 590 600 QEVLLQTFLD DASPGDKRLA AYLMLMRSPS QADINKIVQI LP EQNEQVK NFVASHIANI 610 620 630 640 650 660 LNSEELDIQD LKKLVKEALK ESQLPTVMDF RKFSRNYQLY KSVSLPSLDP ASAKIEGNLI 670 680 690 700 710 720 FDPNNYLPKE SMLKTTLTAF GFASADLIEI GLEGKGFEPT LEALFGKQGF FPDSVNKALY 730 740 750 760 770 780 WVNGQVPDGV SKVLVDHFGY TKDDKHEQDM VNGIMLSVEK LIKDLKSKEV PEARAYLRIL 790 800 810 820 830 840 GEELGFASLH DLQLLGKLLL GARTLQGIP QMIGEVIRKG SKNDFFLHYI FMENAFELPT 850 860 870 880 890 900 GAGLQLQISS SGVIAPGAKA GVKLEVANMQ AELVAKPSVS VEFVTNMGII IPDFARSGVQ 910 920 930 940 950 960 MNTNFFHESG LEAHVALKAG KLKFIIPSPK RPVKLLSGGN TLHLVSTTKT EVIPPLIENR 970 980 990 1000 1010 1020 QSWSVCKQVF PGLNYCTSGA YSNASSTDSA SYYPLTGDTR LELELRPTGE IEQYSVSATY 1030 1040 1050 1060 1070 1080 ELQREDRALV DTLKFVTQAE GAKQTEAT T FKYNRQSMTL SSEVQIPDFD VDLGTILRVN 1090 1100 1110 1120 1130 1140 DESTEG TSY RLTLDIQNKK ITEVALMGHL SCDTKEERKI KGVISIPRLQ AEARSEILAH 1150 1160 1170 1180 1190 1200 WSPAKLLLQM DSSATAYGST VSKRVAWHYD EEKIEFEWNT GTNVDTKKMT SNFPVDLSDY 1210 1220 1230 1240 1250 1260 PKSLHMYANR LLDHRVPETD MTFRHVGSKL IVAMSSWLQK ASGSLPYTQT LQDHLNSLKE 1270 1280 1290 1300 1310 1320 FNLQNMGLPD FHIPENLFLK SDGRVKYTLN KNSLKIEIPL PFGGKSSRDL KMLETVRTPA 1330 1340 1350 1360 . 1370 1380 LHFKSVGFHL PSREFQVPTF TIPKLYQLQV PLLGVLDLST NVYSNLYNWS ASYSGGNTST 1390 1400 1410 1420 1430 1440 DHFSLRARYH MKADSVVDLL SYNVQGSGET TYDHKNTFTL SCDGSLRHKF LDSNIKFSHV 1450 1460 1470 1480 1490 1500 EKLGNNPVSK GLLIFDASSS WGPQMSASVH LDSKKKQHLF VKEVKIDGQF RVSSFYAKGT 1510 1520 1530 1540 1550 1560 YGLSCQRDPN TGRLNGESNL RFNSSYLQGT NQITGRYEDG TLSLTSTSDL QSGIIKNTAS 1570 1580 1590 1600 1610 1620 LKYENYELTL KSDTNGKYKN FATSNKMDMT FSKQNALLRS EYQADYESLR FFSLLSGSLN 1630 1640 1650 1660 1670 1680 SHGLELNADI LGTDKINSGA HKATLRIGQD GISTSATTNL KCSLLVLENE LNAELGLSGA 1690 1700 1710 1720 1730 1740 SMKLTTNGRF REHNAKFSLD GKAALTELSL GSAYQAMILG VDSKNIFNFK VSQEGLKLSN 1750 1760 1770 1780 1790 1800 DMMGSYAEMK FDHTNSLNIA GLSLDFSSKL DNIYSSDKFY KQTVNLQLQP YSLVTTLNSD 1810 1820 1830 1840 1850 1860 LKYNALDLTN NGKLRLEPLK LHVAGNLKGA YQNNEIKHIY AISSAALSAS YKADTVAKVQ 1870 1880 1890 1900 1910 1920 GVEFSHRLNT DIAGLASAID MSTNYNSDSL HFSNVFRSVM APFTMTIDAH TNGNGKLALW 1930 1940 1950 1960 1970 1980 GEHTGQLYSK FLLKAEPLAF TFSHDYKGST SHHLVSRKSI SAALEHKVSA LLTPAEQTGT 1990 2000 2010 2020 2030 2040 WKLKTQFNNN EYSQDLDAYN TKDKIGVELT GRTLADLTLL DSPIKVPLLL SEPINIIDAL 2050 2060 2070 2080 2090 2100 EMRDAVEKPQ EFTIVAFVKY DKNQDVHSIN LPFFETLQEY FERNRQTIIV VVENVQRNLK 2110 2120 2130 2140 2150 2160 HINIDQFVRK YRAALGKLPQ QANDYLNSFN ERQVSHAKE KLTALT KYR ITENDIQIAL 2170 2180 2190 2200 2210 2220 DDAKINFNEK LSQLQTYMIQ FDQYIKDSYD LHDLKIAIAN IIDEIIEKLK SLDEHYHIRV 2230 2240 2250 2260 2270 2280 NLVKTIHDLH LFIENIDFNK SGSSTASWIQ NVDTKYQIRI QIQEKLQQLK RHIQNIDIQH 2290 2300 2310 2320 2330 2340 LAGKLKQHIE AIDVRVLLDQ LGTTISFERI NDVLEHVKHF VINLIGDFEV AEKINAFRAK 2350 2360 2370 2380 2390 2400 VHELIERYEV DQQIQVLMDK LVELTHQYKL KETIQKLSNV LQQVKIKDYF EKLVGFIDDA 2410 2420 2430 2440 2450 2460 VKKLNELSFK TFIEDVN FL DMLIKKLKSF DYHQFVDETN DKIREVTQRL NGEIQALELP 2470 2480 2490 2500 2510 2520 QKAEALKLFL EETKATVAVY LESLQDTKIT LIINWLQEAL SSASLAHMKA KFRETLEDTR 2530 2540 2550 2560 2570 2580 DRMYQMDIQQ ELQRYLSLVG QVYSTLVTYI SDWWTLAAKN LTDFAEQYSI QDWAKRMKAL 2590 2600 2610 2620 2630 2640 VEQGFTVPEI KTILGTMPAF EVSLQALQKA TFQTPDFIVP LTDLRI PSVQ INFKDLKNIK 2650 2660 2670 2680 2690 2700 IPSRFSTPEF TILNTFHIPS FTIDFVEMKV KIIRTIDQMQ NSELQWPVPD IYLRDLKVED 2710 2720 2730 2740 2750 2760 IPLARITLPD FRLPEIAIPE FIIPTLNLND FQVPDLHIPE FQLPHISHTI EVPTFGKLYS 2770 2780 2790 2800 2810 2820 ILKIQSPLFT LDANADIGNG TTSANEAGIA ASITAKGESK LEVLNFDFQA NAQLSNPKIN 2830 2840 2850 2860 2870 2880 PLALKESVKF SSKYLRTEHG SEMLFFGNAI EGKSNTVASL HTEKNTLELS NGVIVKINNQ 2890 2900 ' 2910 2920 2930 2940 LTLDSNTKYF HKLNIPKLDF SSQADLRNEI KTLLKAGHIA WTSSGKGSWK WACPRFSDEG 2950 2960 2970 2980 2990 3000 THESQISFTI EGPLTSFGLS NKINSKHLRV NQNLVYESGS LNFSKLEIQS QVDSQHVGHS 3010 3020 3030 · 3040 3050 3060 VLTAKGMALF GEGKAEFTGR HDAHLNGKVI GTLKNSLFFS AQPFEITAST NNEGNL VRF 3070 3080 3090 3100 3110' 3120 PLRLTGKIDF LNNYALFLSP SAQQASWQVS ARFNQYKYNQ NFSAGNNENI MEAHVGINGE 3130 3140 3150 3160 3170 3180 ANLDFLNIPL TIPEMRLPYT IITTPPLKDF SLWEKTGLKE FLKTTKQSFD LSVKAQYK N 3190 3200 3210 3220 3230 3240 KHRHSITNPL AVLCEFISQS IKSFDRHFEK NRNNALDFVT KSYNETKIKF DKYKAEKSHD 3250 3260 3270 3280 3290 3300 ELPRTFQIPG YTVPVVNVEV SPFTIEMSAF GYVFPKAVSM PSFSILGSDV RVPSYTLILP 3310 3320 3330 3340 3350 3360 SLELPVLHVP RNLKLSLPHF KELCTISHIF IPAMGNITYD FSFKSSVITL NTNAELFNQS 3370 3380 3390 3400 3410 3420 DIVAHLLSSS SSVIDALQYK LEGTTRLTRK RGLKLATALS LSNKFVEGSH NSTVSLTTKN 3430 3440 3450 3460 3470 3480 MEVSVAKTTK AEIPILRMNF KQELNGNTKS KPTVSSSMEF KYDFNSSMLY STAKGAVDHK 3490 3500 3510 3520 3530 3540 LSLESLTSYF SIESSTKGDV KGSVLSREYS GTIASEANTY LNSKSTRSSV KLQGTSKIDD 3550 3560 3570 3580 3590 3600 I NLEVKENF AGEATLQRIY SLWEHSTKNH LQLEGLFFTN GEHTSKATLE LSPWQMSALV 3610 3620 3630 3640 3650 3660 QVHASQPSSF HDFPDLGQEV ALNANTKNQK IRWKNEVRIH SGSFQSQVEL SNDQEKAHLD 3670 3680 3690 3700 3710 3720 IAGSLEGHLR FLKNI ILPVY DKSLWDFLKL DVTTSIGRRQ HLRVSTAFVY TKNPNGYSFS 3730 3740 3750 3760 3770 3780 IPVKVLADKF ITPGLKLNDL NSVLVMPTFH VPFTDLQVPS CKLDFREIQI YKKLRTSSFA 3790 3800 3810 3820 3830 3840 LNLPTLPEVK FPEVDVLTKY SQPEDSLIPF FEITVPESQL TVSQFTLPKS VSDGIAALDL 3850 3860 3870 3880 3890 3900 NAVANKIADF ELPTIIVPEQ TIEIPSIKFS VPAGIVIPSF QALTARFEVD SPVYNATWSA 3910 ¦ 3920 3930 3940 3950 3960 SLKNKADYVE TVLDSTCSST VQFLEYELNV LGTHKIEDGT LASKTKGTLA HRDFSAEYEE 3970 3980 3990 4000 4010 4020 DGKFEGLQEW EGKAHLNIKS PAFTDLHLRY QKDKKGISTS AASPAVGTVG MDMDEDDDFS 4030 4040 4050 4060 4070 4080 KWNFYYSPQS SPDKKLTIFK TELRVRESDE ETQIKVNWEE EAASGLLTSL KDNVPKATGV 4090 4100 4110 4120 4130 4140 LYDYVNKYHW EHTGLTLREV SSKLRRNLQN NAEWVYQGAI RQIDDIDVRF QKAASGTTGT 4150 4160 · 4170 4180 4190 4200 YQEWKDKAQN LYQELLTQEG QASFQGLKDN VFDGLVRVTQ KFH KVKHLI DSLIDFLNFP 4210 4220 4230 4240 4250 4260 RFQFPGKPGI YTREELCTMF IREVGTVLSQ VYSKVHNGSE ILFSYFQDLV ITLPFELRKH 4270 4280 4290 4300 4310 4320 KLIDVIS YR ELLKDLSKEA QEVFKAIQSL KTTEVLRNLQ DLLQFIFQLI EDNIKQLKEM 4330 4340 4350 4360 4370 4380 KFTYLINYIQ DEINTIFNDY IPYVFKLLKE NLCLNLHKFN EFIQNELQEA SQELQQIHQY 4390 4400 4410 4420 4430 4440 IMALREEYFD PSIVGWTVKY YELEEKIVSL IKNLLVALKD FHSEYIVSAS NFTSQLSSQV 4450 4460 4470 4480 ' 4490 4500 EQFLHRNIQE YLSILTDPDG KGKEKIAELS ATAQEIIKSQ AIATKKIISD YHQQFRYKLQ 4510 4520 4530 4540 4550 4560 DFSDQLSDYY EKFIAESKRL IDLSIQNYHT FLIYITELLK KLQSTTVMNP YMKLAPGELT IIL Los siguientes dominios se han identificado en Apolipoproteina B-100: Residuos Longitud ID de Dominio 1-27 27 Péptido de señal 28-4563 4536 Apolipoproteina B-100 28-2179 2152 Apolipoproteina B-48 Como se emplea aquí, el término "Fibrinógeno" se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan de uno o más precursores de Fibrinógeno. Fibrinógeno es un heterohexámero que contiene 2 juegos de 3 cadenas no-idénticas (alfa, beta y gamma) . Las secuencias de los precursores del fibrinógeno son: Precursor de cadena Alfa (precursor humano Swiss-Prot P02671 (SEQ ID NO: 17) ) 10 20 30 40 50 60 MFSMRIVCLV LSVVGTAWTA DSGEGDFLAE GGGVRGPRVV ERHQSACKDS DWPFCSDEDW 70 80 90 100 110 120 NYKCPSGCRM KGLIDEVNQD FTNRINKLKN SLFEYQKNNK DSHSLTTNIM EILRGDFSSA 130 140 150 160 170 180 NNRDNTYNRV SEDLRSRIEV LKRKVIEKVQ HIQLLQ NVR AQLVDMKRLE VDIDIKIRSC 190 200 210 220 230 240 , RGSCSRALAR EVDLKDYEDQ QKQLEQVIAK DLLPSRDRQH LPLIKMKPVP DLVPGNFKSQ 250 260 270 280 290 300 LQKVPPE KA LTDMPQMRME LERPGGNEIT RGGSTSYGTG SETESPRNPS SAGSWNSGSS 310 320 330 340 350 360 GPGSTGNRNP GSSGTGGTAT WKPGSSGPGS TGSWNSGSSG TGSTGNQNPG SPRPGSTGTW 370 380 390 400 410 420 NPGSSERGSA GHWTSESSVS GSTGQ HSES GSFRPDSPGS GNARPNNPDW GTFEEVSGNV 430 440 450 460 470 480 SPGTRREYHT EKLVTSKGDK ELRTGKEKVT SGSTTTTRRS CSKTVTKTVI GPDGHKEVTK 490 500 510 520 530 540 EVVTSEDGSD CPEAMDLGTL SGIGTLDGFR HRHPDEAAFF DTASTGKTFP GFFSPMLGEF 550 560 570 580 590 600 VSETESRGSE SGIFTNTKES SSHHPGIAEF PSRGKSSSYS KQFTSSTSYN RGDSTFESKS 610 620 630 640 650 660 YKMADEAGSE ADHEGTHSTK RGHAKSRPVR DCDDVLQTHP SGTQSGIFNI KLPGSSKIFS 670 680 690 700 710 720 VYCDQETSLG G LLIQQRMD GSLNFNRTWQ DYKRGFGSLN DEGEGEFWLG NDYLHLLTQR 730 740 750 760 770 780 GSVLRVELED WAGNEAYAEY HFRVGSEAEG YALQVSSYEG TAGDALIEGS VEEGAEYTSH 790 800 810 820 830 840 NN QFSTFDR DADQWEENCA EVYGGGWWYN NCQAANLNGI YYPGGSYDPR NNSPYEIENG 850 860 VVWVSFRGAD YSLRAVRMKI RPLVTQ Los siguientes dominios se han identificado en la cadena Fibrinógeno alfa: Residuos Longitud ID de Dominio 1-19 19 Péptido de señal 20-35 16 Fibrinopéptido A 36-866 831 Fibrinógeno de cadena Alfa Cadena Beta (precursor humano Swiss-Prot P02675 (SEQ ID NO: 18) ) 10 20 30 40 50 60 MKRMVSWSFH KLKTMKHLLL LLLCVFLVKS QGVNDNEEGF FSARGHRPLD KKREEAPSLR 70 80 90 100 110 120 PAPPPISGGG YRARPAKAAA TQKKVERKAP DAGGCLHADP DLGVLCPTGC QLQEALLQQE 130 140 150 160 170 180 RPIRNSVDEL NNNVEAVSQT SSSSFQYMYL LKDLWQKRQK QVKDNENVVN EYSSELEKHQ 190 200 210 220 230 240 LYIDETVNSN IPTNLRVLRS ILENLRSKIQ KLESDVSAQM EYCRTPCTVS CNIPVVSGKE 250 260 270 280 290 300 CEEI IRKGGE TSEMYLIQPD SSVKPYRVYC DMNTENGGWT VIQNRQDGSV DFGRKWDPYK 310 320 330 340 350 360 QGFGNVATNT DGKNYCGLPG EYWLGNDKIS QLTR GPTEL LIE EDWKGD KVKAHYGGFT 370 380 390 400 410 420 VQNEANKYQI SVNKYRGTAG NALMDGASQL MGENRTMTIH NGMFFSTYDR DNDGWLTSDP 430 440 450 460 470 480 RKQCSKEDGG GWWYNRCHAA NPNGRYYWGG QYTWDMAKHG TDDGVVWMÑW KGSWYSMRKM 490 SMKIRPFFPQ Q Los siguientes dominios se han identificado en cadena fibrinógeno beta: Residuos "Longitud ID de Dominio- 1-30 30 Péptido de señal 31-44 14 Fibrinopéptido B 45-491 447 Fibrinógeno cadena beta Cadena Gamma (precursor humano Swiss-Prot P02679 (SEQ ID NO: 19) ) 10 20 30 40 50 60 MSWSLHPRNL ILYFYALLFL SSTCVAYVAT RDNCCILDER FGSYCPTTCG lADFLSTYQT 70 80 90 100 110 120 KVDKDLQSLE DILHQVENKT SEVKQLIKAI QLTYNPDESS KPNMIDAATL KSRKMLEEIM 130 140 150 160 170 180 KYEASILTHD SSIRYLQEIY NSNNQKIVNL KEKVAQLEAQ CQEPCKDTVQ IHDITGKDCQ 190 200 210 220 230 240 D.IANKGAKQS GLYFIKPLKA NQQFLVYCEI DGSGNGWTVF QKRLDGSVDF KKNWIQYKEG 250 260 270 280 290 300 FGHLSPTGTT EFWLGNEKIH LISTQSAIPY ALRVELEDWN GRTSTADYAM FKVGPEADKY 310 320 330 340 350 360 RLTYAYFAGG DAGDAFDGFD FGDDPSDKFF. TSHNGMQFST WDNDNDKFEG NCAEQDGSGW 370 380 390 400 410 420 WMNKCHAGHL NGVYYQGGTY SKASTPNGYD NGIIWATWKT RWYSMKKTTM KIIPFNRLTI 430 440 450 GEGQQHHLGG AKQVRPEHPA ETEYDSLYPE DDL Los siguientes dominios se han identificado en cadena Fibrinógeno gamma: Residuos Longitud ID de Dominio 1-26 26 Péptido de señal 27-453 831 Fibrinógeno cadena gamma Como se emplea aquí, la expresión "referente a una señal a la presencia o cantidad" de un analito refleja lo que se entiende a continuación. Señales de ensayo típicamente se relacionan a la presencia o cantidad de un analito a través del uso de una curva estándar calculada utilizando concentraciones conocidas del analito de interés. Como se emplea aquí el término, un ensayo se "configura para detectar" un analito si un ensayo puede generar una señal detectable indicativa de la presencia o cantidad de una concentración fisiológica relevante del analito. Debido a que un epítopo de anticuerpo está en el orden de 8 amino ácidos, un inmuno ensayo configurado para detectar un marcador de interés también detectará polipéptidos relacionados al marcador de interés, siempre que esos polipéptidos contengan el o los epitopos necesarios para ligar al anticuerpo o anticuerpos empleados en el ensayo. La expresión "marcador relacionado" como se emplea aquí respecto a un biomarcador tal como uno de los marcadores de lesión de riñon aquí descritos se refiere a uno o más fragmentos, variantes, etc., de un marcador particular o su precursor biosintético que puede ser detectado como un sustituto por el propio marcador o como biomarcadores independientes. La expresión también se refiere a uno o más polipéptidos presentes en una muestra biológica que se derivan del precursor biomarcador en complejo con especies adicionales, tales como proteínas de enlace, receptores, heparina, lipidos, azúcares, etc.
En este aspecto, la persona con destreza en la especialidad, comprenderá que las señales que se obtienen de un inmunoensayo son un resultado directo de complejos formados entre uno ot más anticuerpos y la biomolécula objetivo (es decir, el analito) · y polipéptidos que contienen el o los epitopos necesarios a los cuales se ligan los anticuerpos. Mientras que estos ensayos pueden detectar el biomarcador de longitud integra y el resultado de ensayo se expresa como una concentración de un biomarcador de interés, la señal del ensayo actualmente es un resultado de todos estos polipéptidos "inmunoreactivos" presentes en la muestra. Expresión de biomarcadores también puede ser determinada por otros medios diferentes a inmunoensayos , incluyendo mediciones de proteina (tales como transferencias punto, transferencias western, métodos cromatográficos, espectrometría de masa, etc.) y mediciones de ácido nucleico (cuantificación de mRNA) . Esta lista no se pretende limitante .
El término marcador "que va a positivo" como se emplea a este término aquí se refiere a un marcador que se determina que está elevado en sujetos que sufre de una enfermedad o condición, respecto a sujetos que no sufren dicha enfermedad o condición. El término marcador "que va a negativo" es como el término se emplea aquí, se refiere a un marcador que se determina reducido en sujetos que sufren de una enfermedad o condición, respecto a sujetos que no sufren de dicha enfermedad o condición.
El término "sujeto" como se emplea aquí, se refiere a un humano u organismo no-humano. De esta manera, los métodos y composiciones aquí descritos aplican tanto a enfermedades de humanos como veterinarias. Además, mientras que un sujeto de preferencia es un organismo vivo, la invención aquí descrita puede utilizarse por igual en análisis post-mortem. Sujetos preferidos son humanos, y más preferiblemente "pacientes", que como se emplean aquí, se refieren a humanos vivos que reciben atención médica para una enfermedad o condición. Esto incluye personas sin enfermedad definida a quienes se les investigan signos de patología.
De preferencia, se mide un analito en una muestra. Esta muestra puede obtenerse de un sujeto, o puede obtenerse de materiales biológicos pretendidos para proporcionarse al sujeto. Por ejemplo, puede obtenerse una muestra de un riñon que se evalúa para trasplante posible en un sujeto, y una medición de analito emplearse para evaluar el riñon por daño pre-existente . Muestras preferidas son muestras de fluidos corporales.
La expresión "muestra de fluido corporal" como se emplea aquí se refiere a una muestra de fluido corporal que se obtiene para propósitos de diagnóstico, pronóstico, clasificación o evaluación de un sujeto de interés, tal como un paciente o donador de trasplante. En ciertas modalidades, esta muestra puede obtenerse con el propósito de determinar el resultado de una condición en curso, o el efecto de un régimen de tratamiento en una condición. Muestras de fluido corporal preferidas incluyen sangre, suero, plasma, fluido cerebroespinal, orina, saliva, esputo, y efusiones de pleura. Además, una persona con destreza en la técnica se dará cuenta de que ciertas muestras de fluidos corporales se analizan más fácilmente siguiendo un procedimiento de fraccionamiento o purificación, por ejemplo, separación de sangre entera en componentes de suero o plasma.
El término "diagnóstico" como se emplea aquí, se refiere a métodos por los cuales la persona con destreza puede estimar y/o determinar la probabilidad, ("una posibilidad") de si un paciente o no sufre una enfermedad o condición determinada. En el caso de la presente invención, "diagnóstico" incluye utilizar los resultados de un ensayo, más preferible un inmunoensayo para un marcador de lesión de riñon de la presente invención, opcionalmente junto con otras características clínicas, para llegar a un diagnóstico (esto es, la ocurrencia o no ocurrencia) de la lesión renal aguda o ARF para el sujeto del cual se obtuvo y ensayó una muestra. Que este diagnóstico se "determina" no se entiende que implica que el diagnóstico es 100% preciso. Muchos biomarcadores son indicativos de condiciones múltiples. El clínico con destreza no utiliza resultados de biomarcador en un vacío de información, sino más bien resultados de prueba se emplean en conjunto con otras señales clínicas para llegar a un diagnóstico. De esta manera, un nivel de biomarcador medido por una parte de un umbral de diagnóstico predeterminado indica una mayor posibilidad de la ocurrencia de la enfermedad en el sujeto respecto a un nivel medido por otra parte del umbral de diagnóstico predeterminado.
En forma similar, un riesgo de pronóstico señala una probabilidad ("una posibilidad") que ocurrirá un dado curso o resultado. Un nivel o un cambio en el nivel de un indicador de pronóstico, que a su vez se asocia con una probabilidad de morbilidad incrementada) (por ejemplo entrenamiento de función renal, futura ARF o muerte) se refiere como que es "indicativo de una probabilidad incrementada" de un resultado adverso de un paciente.
Ensayos de Marcador En general, inmunoensayos involucran poner en contacto una muestra que contiene o se sospecha que contiene un biomarcador de interés con al menos un anticuerpo que liga específicamente al biomarcador. Una señal entonces es generada indicativa de la presencia o cantidad de complejos formados por el enlace de polipéptido en la muestra al anticuerpo. La señal después se relaciona a la presencia o cantidad del biomarcador en la muestra. Numerosos métodos y dispositivos son bien conocidos por la persona con destreza para la detección y análisis de biomarcadores . Ver, por ejemplo, las Patentes de los E.U.A. Números 6, 143,576; 6,113,855; 6,019,944; 5,985,579; 5,947,124; 5,939,272; 5,922,615; 5,885,527; 5,851,776; 5,824,799; 5,679,526; 5,525,524; y 5,480,792, y The Immunoassay Handbook, David Wild, ed. Stockton Press, New York, 1994, cada uno de los cuales se incorpora aquí por referencia en su totalidad, incluyendo todas las tablas, figuras y reivindicaciones.
Los dispositivos y métodos de ensayo conocidos en la técnica pueden utilizar moléculas etiquetadas en diversos formatos de ensayo emparedado, competitivo o no competitivo, para generar una señal que se relaciona a la presencia o cantidad del biomarcador de interés. Formatos de ensayo convenientes también incluyen métodos cromatográficos, espectrográficos de masas y de "transferencia" de proteínas. Adicionalmente, ciertos métodos y dispositivos, tales como biosensores e inmunoensayos ópticos, pueden ser empleados para determinar la presencia o cantidad de analitos, sin necesidad por una molécula etiquetada. Ver, por ejemplo, las Patentes de los E.U.A. Números 5,631,171; y 5,955,377, cada una de las cuales aquí se incorpora por referencia en su totalidad, incluyendo todas las tablas, figuras y reivindicaciones. Una persona con destreza en la técnica también reconoce que instrumentación robótica incluyendo pero no limitada a los sistemas Beckman ACCESS®, Abbott AXSYM®, Roche ELECSYS®, Dade Behring STRATUS® están entre los analizadores de inmunoensayo que son capaces de realizar inmunoensayos. Pero cualquier inmunoensayo conveniente pude ser utilizado, por ejemplo, ensayos de inmunoabsorción ligados a una enzima (ELISA = Enzyme-LInked immunoasSAys) , radioinmunoensayos (RIAs) , ensayos de enlace competitivo y semej antes .
Anticuerpos u otros polipéptidos pueden ser inmovilizados en una variedad de soportes sólidos para utilizar en ensayos. Fases sólidas que pueden emplearse para inmovilizar miembros de enlace específicos incluyen aquellas reveladas y/o utilizadas como fases sólidas en ensayos de enlace de fase sólidas. Ejemplos de fases sólidas convenientes incluyen filtros de membrana, papeles basados en celulosa, perlas (incluyendo partículas poliméricas, látex y paramagnéticas ) , vidrio, obleas de silicio, micro partículas, nanopartículas , TentaGels, Geles Agro, geles PEGA, geles SPOCC y placas de múltiples pozos. Una tira de ensayo puede prepararse al revestir el anticuerpo o una pluralidad de anticuerpos en una estructura sobre soporte sólido. Está tira puede entonces sumergirse en la muestra de prueba y después procesarse rápidamente a través etapas de lavado y detección para generar una señal medible, tal como un punto de color. Anticuerpos u otros polipéptidos pueden ligarse a zonas específicas de dispositivos de ensayo ya sea al conjugar directamente a una superficie de dispositivo de ensayo o por enlace indirecto. En un ejemplo de último caso, anticuerpos u otros polipéptidos pueden ser inmovilizados en partículas u otros soportes sólidos, y ese soporte sólido inmovilizado en la superficie del dispositivo.
Ensayos biológicos requieren métodos para detección, y uno de los métodos más comunes para cuantificación de resultados es conjugar una etiqueta detectable a una proteína o ácido nucleico que tiene afinidad para uno de los componentes en el sistema biológico que se estudia. Etiquetas detectables pueden incluir moléculas que ellas mismas son detectables (por ejemplo, porciones fluorescentes), etiquetas electroquímicas, quelatos de metal, etc. ) asi como moléculas que pueden ser detectadas indirectamente por producción de un producto de reacción detectable (por ejemplo, enzimas tales como peroxidasa de rábano picante, fosfatasa alcalina, etc. ) o por una molécula de enlace específico que la misma puede ser detectable (por ejemplo, biotina, digoxigenina, maltosa, oligohistidina, 2,4-dintrobenceno, fenilarsenato, ssDNA, dsDNA, etc.).
La preparación de fases sólidas y conjugados de etiquetas detectables, a menudo comprende el uso de entrelazadores químicos. Reactivos de entrelazamiento contienen al menos dos grupos reactivos, y se dividen en general por entrelazadores homofuncionales (que contienen grupos reactivos idénticos) y entrelazadores heterofuncionales (que contienen grupos reactivos no idénticos) . Entrelazadores homobifuncionales que acoplan a través de aminas, sulfhidrilos o reaccionan en forma no específica, están disponibles de muchas fuentes comerciales. Maleimidas, alquil y aril haluros, alfa-haloacilos y piridil bisulfuros son grupos reactivos tiol. Maleimidas, alquil y aril haluros y alfa-haloacilos reaccionan con sulfhidrilos para formar enlaces tiol éter, mientras que piridil bisulfuros reaccionan con sulfhidrilos , para producir bisulfuros mixtos. El producto piridil bisulfuro es segmentable. Imidoésteres son también muy útiles para entrelazamientos proteina-a-proteina . . Una variedad de entrelazadores heterobifuncionales, cada uno que combina diferentes atributos para conjugación exitosa están comercialmente disponibles.
En ciertos aspectos, la presente invención proporciona equipos para el análisis de los marcadores de lesión de riñon descritos. El equipo comprende reactivos para el análisis de al menos una muestra de prueba que comprende cuando menos un anticuerpo que liga a un marcador de lesión de riñon. El equipo también puede incluir dispositivos e instrucciones para realizar una o más de las correlaciones de diagnóstico y/o pronóstico aqui descritas. Equipos preferidos comprenderán un par de anticuerpo para realizar un ensayo emparedado, o una especie etiquetada para realizar un ensayo competitivo, para el analito. De preferencia, un par de anticuerpos comprende un primer anticuerpo conjugado a una fase sólida y un segundo anticuerpo conjugado a una etiqueta detectable, en donde cada uno del primer y segundo anticuerpos ligan un marcador de lesión de riñon. Más preferiblemente cada uno de los anticuerpos son anticuerpos monoclonales . Las instrucciones para utilizar el equipo y realizar las correlaciones pueden estar en la forma de etiquetado, que se refiere a cualquier material escrito o registrado que se conecta a, o de otra forma acompaña a un equipo en cualquier tiempo durante su fabricación, transporte, venta o uso. Por ejemplo, el término etiquetado abarca folletos y panfletos de publicidad, materiales de empaque, instrucciones, casetes de audio o video, discos de computadora, asi como escritura impresa directamente en los equipos.
Anticuerpos El término "anticuerpo" como se emplea aqui se refiere a un péptido o polipéptido derivado de, modelado después o substancialmente codificado por un gen de inmunoglobulina o genes de inmunoglobulina o sus fragmentos, capaces de ligar específicamente un antígeno o epítopo. Ver, por ejemplo Fundamental Immunology, 3a Edición, W.E. Paul, ed., Raven Press, N.Y. (1993); Wilson (1994; J. Immunol . Methods 175:267-273; Yarmush (1992) J. Biochem. Biophys . Methods 25:85-97. El término anticuerpo incluye porciones de enlace de antígeno, es decir, "sitios de enlace de antígeno", (por ejemplo, fragmentos, subsecuencias , regiones de determinación de complementariedad (CDRs = Complementarity Determining Regions)) que retienen capacidad para ligar antígeno, incluyendo (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste de los dominios VL, VH, CL y CH1; (ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab ligados por un puente bisulfuro en la región bisagra; (iii) un fragmento Fd que consiste de los dominios VH y CH1; (iv) un fragmento Fv que consiste de los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo, (v) un fragmento dAb (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), que consiste de un dominio VH; y (vi) una región de determinación de complementariedad (CDR) aislada. Anticuerpos de cadena sencilla también se incluyen por referencia en el término "anticuerpo".
Anticuerpos empleados en los inmunoensayos aquí descritos de preferencia ligan específicamente a un marcador de lesión de riñon de la presente invención. La expresión "liga específicamente" no se pretende que indique que un anticuerpo liga exclusivamente a su objetivo pretendido ya que, como se anotó anteriormente, un anticuerpo liga a un polipéptido que exhibe el o los epítopos a los cuales liga el anticuerpo. Por el contrario, un anticuerpo "liga específicamente" si su afinidad para su objetivo o blanco pretendido es aproximadamente 5 veces mayor cuando se compara con su afinidad para una molécula no objetivo que no exhibe el o los epítopos apropiados. De preferencia la afinidad del anticuerpo será al menos aproximadamente 5 veces, de preferencia 10 veces, más de preferible 25 veces, aún más preferible 50 veces y más preferible 100 veces o más, mayor para una molécula objetivo que su afinidad para una molécula no objetivo. En modalidades preferidas, anticuerpos preferidos ligan con afinidades de al menos aproximadamente 107 _1, y de preferencia entre aproximadamente 108 M"1 a aproximadamente 109 M"1, aproximadamente 109 "1 a aproximadamente 1010 "1 o aproximadamente 1010 M"1 a aproximadamente 1012 M"1.
La afinidad se calcula como Kd = koff/k;on (k0ff es la constante de velocidad de disociación, Kon es la constante de velocidad de asociación y Kd es la constante de equilibrio) . La afinidad puede ser determinada en equilibrio al medir la fracción ligada (r) de ligando etiquetado a diversas concentraciones (c) . Los datos se grafican utilizando la ecuación Scatchard: r/c = K(n-r): en donde r = moles de ligando enlazado/mol de receptor en equilibrio; c = concentración de ligando libre al equilibrio; K = constante de asociación de equilibrio; y n = número de sitios de enlace de ligando por. molécula receptora. Por análisis gráfico, r/c se traza en el eje Y contra r en el eje X, produciendo de esta manera un trazo Scatchard. La medición de afinidad de anticuerpo por análisis Scatchard es bien conocida en la técnica. 1er, por ejemplo, van Erp et al., J. Immunoassay 12: 425-43, 1991; Nelson and Griswold, Comput . Methods Programs Biomed. 27: 65-8, 1988.
El término "epitopo" se refiere a un determinante antigénico capaz de enlace especifico a un anticuerpo.
Epítopos usualmente consiste de agrupamientos de moléculas de superficie químicamente activa tales como aminoácidos o cadenas secundarias azúcar y usualmente tienen características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específicas. Epítopos de conformación y sin conformación · se distinguen ya .que el enlace a los primeros pero no a los últimos se pierde en la presencia de solventes de desnaturalización.
Numerosas publicaciones discuten el uso de tecnología de expresión en fago para producir y cribar bibliotecas de polipéptidos para enlace a un analito selecto. Ver, e.g, Cwirla et al., Proc . Nati. Acad. Sci . USA 87, 6378-82, 1990; Devlin et al., Science 249, 404-6, 1990, Scott and Smith, Science 249, 386-88, 1990; y Ladner et al., Patente de los E.U.A. Número 5,571,698. Un concepto básico de métodos de expresión en fago es el establecimiento de una asociación física entre ADN que codifica un polipéptido para cribarse y el polipéptido. Esta asociación física se proporciona por la partícula fago, que exhibe un polipéptido como parte de una cápsida que circunscribe el genoma fago que codifica el polipéptido. El establecimiento de una asociación física entre polipéptidos y su material genético permite cribado en masa simultáneo de muy grandes cantidades de fago que contienen diferentes polipéptidos. La expresión en fago de un polipéptido con afinidad a un objetivo, liga al objetivo y este fago se enriquecen por criba de afinidad al objetivo. La identidad de polipéptidos expresados de estos fagos puede determinarse a partir de sus genomas respectivos. Utilizando estos métodos, un polipéptido identificado que tiene una afinidad de enlace para un objetivo deseado puede entonces sintetizarse en volumen por medios convencionales. Ver, por ejemplo, la Patente de los E.U.A. Número 6,057,098, que aquí se incorpora por referencia en su totalidad, incluyendo todas las tablas, figuras y reivindicaciones.
Los anticuerpos que se generan por estos métodos pueden entonces ser seleccionados al primero cribar por afinidad y especificidad con el polipéptido purificado de interés y si se requiere, comparar los resultados a la afinidad y especificidad de los anticuerpos con polipéptidos que se desean ser excluidos del enlace. El procedimiento de criba puede involucrar inmovilización de los polipéptidos purificados en pozos separados de placas de microtitulación . La solución que contiene un anticuerpo potencial o grupos de anticuerpos se coloca entonces en pozos de microtitulación efectivos e incuba por aproximadamente 30 min a 2 h. Los pozos de microtitulación se lavan entonces y un anticuerpo secundario etiquetado (por ejemplo, un anticuerpo anti-ratón conjugado con fosfatasa alcalina si los anticuerpos desarrollados son anticuerpos de ratón) se agrega a los pozos e incuba por aproximadamente 30 min y después lava. Sé agrega substrato a los pozos y una reacción de color aparecerá en donde el anticuerpo a él o los polipéptidos inmovilizados está presente.
Los anticuerpos asi identificados pueden entonces ser adicionalmente analizados por afinidad y especificidad en el diseño de ensayo selecto. En el desarrollo de inmuno ensayos para una proteina objetivo, la proteína objetivo purificada actúa como una norma con la cual se juzgan la sensibilidad y especificidad del inmuno ensayo, utilizando los anticuerpos que se han seleccionado. Debido a que la afinidad de enlace de diversos anticuerpos puede diferir; ciertos pares de anticuerpos (por ejemplo, en ensayos emparedados) pueden interferir entre sí estéricamente, etc., el desempeño de ensayo de un anticuerpo puede ser una medida más importante que las absolutas afinidad y especificidad de un anticuerpo.
Mientras que la presente solicitud describe en detalle ensayos de enlace basados en anticuerpos, en la técnica son bien conocidas alternativas a anticuerpos como especies de enlace en ensayos. Estos incluyen receptores para una diana particular, aptámeros, etc. Los aptámeros son moléculas de ácido oligonucleico o péptido que ligan a una molécula objetivo específica. Los aptámeros usualmente son creados al seleccionarlos de una reserva o acervo de secuencias aleatorio grande, pero también existen aptámeros naturales. Aptámeros de alta afinidad que contienen nucleótidos modificados que confieren características mejoradas al ligando, tales como mejorada estabilidad in vivo o mejoradas características de suministro. Ejemplos de estas modificaciones incluyen substituciones químicas en las posiciones ribosa y/o fosfato y/o base, y pueden incluir funcionalidades de cadena lateral amino ácido.
Correlaciones de Ensayo El término "correlación" como se emplea aquí con referencia al uso de biomarcadores se refiere a comparar la presencia o cantidad del o de los biomarcadores en un paciente con su presencia o cantidad en personas que se sabe sufren de, o que se sabe que están en riesgo de, una condición determinada; o personas que se sabe están libres de una condición determinada. A menudo, esto toma la forma de comparar un resultado de ensayo en la forma de una concentración de biomarcador a un umbral predeterminado seleccionado como indicativo de la ocurrencia o no ocurrencia de una enfermedad o la probabilidad de algún resultado futuro.
Seleccionar un umbral de diagnóstico involucra, entre otras cosas,, consideración de la probabilidad de la enfermedad, distribución de diagnósticos verdaderos y falsos a diferentes umbrales de prueba, y estimados de las consecuencias del tratamiento (o falla de tratamiento) con base en el diagnóstico. Por ejemplo, cuando se considera administrar una terapia especifica que es altamente eficaz y tiene un bajo nivel de riesgo, se requieren pocas pruebas debido a que los médicos clínicos pueden aceptar la substancial incertidumbre de diagnóstico. Por otra parte, en situaciones en donde opciones de tratamiento son menos efectivas y más riesgosas, los clínicos a menudo requieren un grado superior de certidumbre del diagnóstico. De esta manera, está involucrado el análisis de costo/beneficio para seleccionar un umbral de diagnóstico.
Umbrales adecuados pueden ser determinados en una variedad de formas. Por ejemplo, un umbral de diagnóstico recomendado para el diagnóstico de infarto al miocardio agudo utilizando troponina cardiaca es el 97.5° percentil de la concentración que se ve en una población normal. Otro método puede ser el observar muestras en serie del mismo paciente, en donde un resultado de "referencia" previo, se utiliza para supervisar cambios temporales en un nivel de biomarcador.
Estudios de población también pueden emplearse para seleccionar un umbral de decisión. Característica de Operación de Receptor ("ROC" = Receiver Operating Characteristic) surgen del campo de teoría de detección de señal desarrollado durante la II Guerra Mundial para el análisis de imágenes de radar, y en análisis ROC a menudo se emplean para seleccionar un umbral capaz de distinguir mejor una sub-población "enferma" de una sub-población "no enferma". Un falso positivo en este caso ocurre cuando la persona arroja resultados positivos de prueba, pero actualmente no tiene la enfermedad. Un falso negativo, por otra parte ocurre cuando la persona resulta negativa, sugiriendo que son sanos, cuando de hecho tienen la enfermedad. Para trazar una curva ROC, la proporción de verdadero positivo (TPR = True Positive Rate) y proporción de falso positivo (FPR = False Positive Rate) se determinan como el umbral de decisión se varia en forma continua. Ya que TPR es equivalente con sensibilidad y FPR es igual a 1 -especificidad, la gráfica ROC en ocasiones se denomina la gráfica de sensibilidad contra (1 - especificidad). Una prueba perfecta tendrá un área bajo la curva ROC de 1.0; una prueba aleatoria tendrá un área de 0.5. Un umbral se selecciona para proporcionar un nivel aceptable de especificidad y sensibilidad.
En este contexto, "enferma" se pretende que se refiera a una población que tiene una característica (la presencia de una condición o enfermedad o la ocurrencia de algún resultado) y "no enferma" se pretende que se refiera a una población que carece de la característica. Mientras que un solo umbral de decisión es la aplicación más simple de este método, pueden emplearse múltiples umbrales de decisión. Por ejemplo, por debajo de un primer umbral, la ausencia de enfermedad puede asignarse con relativamente alta confianza, y sobre un segundo umbral, la presencia de enfermedad también puede asignarse con confianza relativamente alta. Entre los dos umbrales puede considerarse indeterminado. Esto significa solo ejemplar en naturaleza.
Además de las comparaciones de umbral, otros métodos para correlacionar resultados de ensayo con una clasificación de pacientes (ocurrencia o no ocurrencia de enfermedad, probabilidad de un resultado, etc. ) incluyen árboles de decisión, juegos de reglas, métodos Bayesianos, y métodos de redes neurales. Estos métodos pueden producir valores de probabilidad que representan el grado al cual un sujeto pertenece a una clasificación de una pluralidad de clasificaciones.
Medidas de precisión de prueba pueden obtenerse como se describe en Fischer et al., Intensive Care Med. 29: 1043-51, 2003, y se utilizan para determinar la efectividad de un marcador determinado. Estas medidas incluyen sensibilidad y especificidad, valores predictivos, proporciones de probabilidad, proporciones de posibilidades de diagnóstico, y áreas de curva ROC. El área bajo la curva ("AUC" = Area Under the Curve) de un trazo ROC es igual a la probabilidad de que un clasificador asigne un rango a una instancia positiva seleccionada al azar, superior que una negativa seleccionada al azar. El área bajo la curva ROC puede considerarse como un equivalente a la prueba U Mann-Whitney, que prueba la diferencia mediana entre calificaciones que se obtienen entre los dos grupos considerados si los dos grupos son de datos continuos, o a la prueba de rango ilcoxon.
Como se discutió anteriormente, pruebas convenientes pueden exhibir . uno o más de los siguientes resultados en estas diversas medidas. Una especificidad mayor a 0.5, de preferencia al menos 0.6, más preferiblemente al menos 0.7, aún más preferible al menos 0.8, todavía más preferible al menos 0.9 y más preferible al menos 0.95, con una sensibilidad correspondiente mayor que 0.2, de preferencia mayor que 0.3, más preferiblemente mayor que 0.4, todavía más preferible menos que 0.5, aún más preferible 0.6, todavía más preferible mayor que 0.7, aún más preferible mayor que 0.8, más preferible mayor que 0.9, y más preferible mayor que 0.95; una sensibilidad mayor que 0.5, de preferencia al menos 0.6, más preferible al menos 0.7, todavía más preferible al menos 0.8, aún más preferible al menos 0.9 y más preferible al menos 0.95, con una especificidad correspondiente mayor que 0.2, de preferencia mayor que 0.3, más preferible mayor que 0.4, todavía más preferible al menos 0.5, aún más preferible 0.6, todavía más preferible mayor que 0.7, aún más preferible mayor que 0.8, más preferible mayor que 0.9, y más preferible mayor que 0.95; al menos 75% de sensibilidad, combinada con al menos 75% de especificidad; un área de curva ROC mayor a 0.5, de preferencia al menos 0.6, más preferible 0.7, todavía más preferible al menos 0.8, aún más preferible al menos 0.9, y más preferible al menos 0.95; una proporción de posibilidades diferentes de 1, de preferencia al menos aproximadamente 2 o más o aproximadamente 0.5 o menos, más preferiblemente al menos aproximadamente 3 o más o aproximadamente 0.33 o menos, todavía más preferible al menos aproximadamente 4 o más o aproximadamente 0.25 o menos, aún más preferible al menos aproximadamente 5 o más o aproximadamente 0.2 o menos, y más preferible al menos aproximadamente 10 o más o aproximadamente 0.1 o menos; una proporción de posibilidad positiva (calculada' como sensibilidad/ ( 1-especificidad) ) mayor que 1, al menos 2, más preferible al menos 3, todavía más preferible al menos 5, y más preferible al menos 10; y o una proporción de posibilidad negativa (calculada como (1-sensibilidad) /especificidad) menor a 1, menor que o igual a 0.5, más preferible menor que o igual a 0.3, y más preferible menor que o igual a 0.1.
Señales clínicas adicionales pueden combinarse con los resultados del ensayo de marcador de lesión de riñon de la presente invención. Estas incluyen otros biomarcadores relacionados a estado renal. Ejemplos incluyen los siguientes, que describen el nombre biomarcador común, seguido por el número de entrada Swiss-Prot para ese biomarcador o su precursor: Actina (P68133); proteina de enlace de Adenosina deaminasa (DPP4, P27487); glicoproteina Alfa-l-ácido 1 (P02763); Alfa-l-microglobulina (P02760) ; Albúmina (P02768); Angiotensinogenasa (Renina, P00797); Anexina A2 (P07355) ; Beta-glucuronidasa (P08236) ; B-2-microglobulina (P61679); Beta-galactosidasa (P16278); BMP-7 (P'18075); Péptido natriurético del cerebro (proBNP, BNP-32, NTproBNP; P16860) ; Proteina de enlace de calcio Beta (S100-beta, P04271) ; Anhidrasa carbónica (Q16790); Caseína Quinasa 2 (P68400) Ceruloplasmina (P00450) ; Clusterina (P10909) ; Complemento C3 (P01024); Proteina rica en cisteina (CYR61, 000622) ; Citócromo C (P99999) ; Factor de crecimiento epidérmico (EGF, P01133) ; Endotelina-1 (P05305) ; Fetuina Exosomal-A (P02765); Proteína de enlace de ácidos grasos, cardiaca (FABP3, P05413) ; Proteína de enlace de ácidos grasos hepática (P07148) ; Ferritina (cadena ligera, P02793; cadena pesada P02794); Fructosa-1, 6-bifosfatasa (P09467); GRO-alfa (CXCL1, (P09341); Hormona de Crecimiento (P01241);' Factor de crecimiento de hepatocitos (P14210); Factor de crecimiento tipo insulina I (P01343) ; Inmunoglobulina G; Cadenas Ligeras de Inmunoglobulina (Kappa y Lambda) ; Gamma interferona (P01308); Lisozima (P61626); Interleucina-lalfa (P01583); Interleucina-2 (P60568); Interleucina-4 (P60568); Interleucina-9 (P15248); Interleucina-12p40 (P29460); Interleucina-13 (P35225) ; Interleucina-16 (Q14005) ; Molécula de adhesión celular Ll (P32004); Lactato dehidrogenasa (P00338); Leucina Aminopeptidasa (P28838); Sub-unidad Meprin A-alfa (Q16819) ; . Sub-unidad Meprin A-beta (Q16820); Midkina (P21741); MIP2-alfa (CXCL2, P19875) ; MMP-2 (P08253) ; MMP-9 (P14780); Netrina-1 (095631); Endopeptidasa neutra (P08473); Osteopontina (P10451) ; Antigeno papilar renal 1 (RPA1) ; Antigeno papilar renal 2 (RPA2); Proteina de enlace de retinol (P09455) ; Ribonucleasa; Proteina de enlace de calcio A6 S100 (P06703); Componente Amiloide de Suero P (P02743); Isoforma intercambiadora de Hidrógeno/Sodio (NHE3, P48764); Espermidina/espermina Nl-acetiltransferasa (P21673); TGF-Betal (P01137); Transferina (P02787); Factor Trefoil 3 (TFF3 , Q07654); Proteina tipo Toll 4 (000206); Proteina total; Antigeno de nefritis Tubulointersticial (Q9UJW2); Uromodulina (proteina Tamm-Horsfall, P07911) .
Para propósitos de estratificación de riesgo, Adiponectina (Q15848); Fosfatasa alcalina (P05186) ; Aminopeptidasa N (P15144); CalbindinD28k (P05937); Cistatina C (P01034); Sub-unidad 8 de F1FO ATPasa (P03928); Gamma-glutamiltransferasa (P19440); GSTa (alfa-glutationa-S-transferasa, P08263) ; GSTpi (Glutationa-S-transferasa P; GST class-pi; P09211) ; IGFBP-1 (P08833) ; IGFBP-2 (P18065); IGFBP-6 (P24592); Proteina de membrana integral 1 (Itml, P46977); Interleucina-6 (P05231); Interleucina-8 (P10145); Interleucina-18 (Q14116) ; IP-10 (proteína inducida por gamma-interferona 10 kDa, P02778) ; IRPR (IFRD1, 000458); Isovaleryl-CoA dehidrogenasa (IVD, P26440); I-TAC/CXCL11 (014625); Queratina 19 (P08727); Kim-1 (Receptor celular de virus de Hepatitis A 1, 043656); L-arginina : glicina amidinotransferasa (P50440) ; Leptina (P41159) ; Lipocalina2 (NGAL, P80188); MCP-1 (P13500) ; MIG (Monocina inducida por Gamma-interferona Q07325) ; MIP-la (P10147); IP-3a (P78556); ???-lbeta (P13236); IP-ld (Q16663) ; NAG (N-acetil-beta-D-glucosaminidasa, P54802); Transportador de ion orgánico (OCT2, 015244); Osteoprotegerína (014788); proteína P8 (060356); Inhibidor de activador de plasminógeno 1 (PAI-1, P05121) ; ProANP(l-98) (P01160); Proteína fosfatasa 1-beta (PPI-beta, P62140); Rab GDI-beta (P50395); calicreína renal (Q86U61) ; cadena RT1.B-1 (alfa) de la proteína membrana integral (Q5Y7A8) ; Miembro de la superfamilia de receptor de factor de necrosis de tumor soluble 1A (sTNFR-I, P19438); Miembro de la. superfamilia de receptor de factor de necrosis de tumor soluble IB (sTNFR-II, P20333) ; Inhibidor de tejido de metaloproteinasas 3 (TIMP-3, P35625) ; uPAR (Q03405) puede combinarse con los resultados de ensayo de marcador de lesión de riñon de la presente invención.
Otras señales clínicas que pueden ser combinadas con los resultados de ensayo de marcador de lesión de riñon de la presente invención, incluyen información demográfica (por ejemplo, peso, sexo, edad, raza) , historia médica (por ejemplo, historia familiar, tipo de cirugía, enfermedad preexistente tal como aneurisma, falla cardiaca congestiva, pre eclampsia, eclampsia, diabetes mellitus, hipertensión, enfermedad de arterias coronarias, proteinuria, insuficiencia renal, o sepsis, tipo .de exposición a toxinas tales como AINEs (NSAIDs) , cicloesporinas, tacrolimus, aminoglicósidos, foscarnet, etilen glicol, hemoglobina, mioglobina, ifosfamida, metales pesados, metotrexato, agentes de contraste de radiopacos, o estreptozotocina) , variables clínicas (por ejemplo, presión sanguínea, temperatura, frecuencia respiratoria) , calificaciones de riesgo (calificación APACHE, calificación PREDICT, Calificación de Riesgo TIMI para UA/NSTE I, Calificación de Riesgo Framingham) , una medición de proteina de orina total, una velocidad de filtración glomerular, una velocidad de filtración glomerular estimada, una velocidad de producción de orina, una concentración de creatinina en suero o plasma, una medición de antígeno papilar renal 1 (RPA1) ; una medición de antígeno papilar renal 2 (RPA2) ; una concentración de creatinina en orina, una excreción fraccional de sodio, una concentración de sodio en orina, una proporción de creatinina en orina a creatinina en suero o plasma, una gravedad específica de orina, una osmolalidad de orina, una proporción de nitrógeno de urea en orina a nitrógeno de urea en plasma, una proporción de BUN en plasma a creatinina, y/o índice de falla renal calculado como sodio en orina / (creatinina en orina / creatinina en plasma) . Otras medidas de función renal que pueden combinarse con los resultados de ensayo de marcador de lesión de riñon se describen a continuación y en Harrison's Principies of Infernal Medicine, 17th Ed., McGraw Hill, New York, páginas 1741-1830, y Current Medical Diagnosis & Treatment 2008, 47th Ed, McGraw Hill, New York, páginas 785-815, cada una de las cuales se incorpora aquí por referencia en su totalidad.
De esta manera señales clínicas/resultados de ensayos de combinación pueden comprender el uso de regresión logística multivariada, modelado log linear, análisis de red neural, análisis n-de-m, análisis de árbol de decisiones, etc. Esta lista no se pretende limitante.
Diagnóstico de Falla Renal Aguda Como se anotó anteriormente, las expresiones "lesión renal (o de riñon) aguda" y "falla de riñon (o renal) aguda" como se emplean aquí, se definen en parte en términos de cambios en creatinina en suero de un valor de referencia. La mayoría de las definiciones de ARF tienen elementos comunes, incluyendo el uso de creatinina en suero y a menudo de excreción de orina. Pacientes pueden presentar disfunción renal sin una medida de referencia disponible de función renal para uso en esta comparación. En este evento, se puede estimar un valor de .creatinina en suero de referencia al considerar que el paciente inicialmente tenia un GFR normal. La velocidad de filtración glomerular (GFR) es el volumen de fluido filtrado de los capilares glomerulares renales (riñon) en la cápsula de Bo man por unidad de tiempo. La velocidad de filtración glomerular (GFR) puede calcularse al medir cualquier producto químico que tiene un nivel estable en la sangre, y se filtra libremente pero ni se reabsorbe ni secreta por los ríñones. GFR típicamente se expresa en unidades de ml/min: GFR = Concentración de Orina x Flujo de Orina Concentración en Plasma Al normalizar la GFR al área superficial del cuerpo, una GFR de aproximadamente 75-100 ml/min por 1.73 m2 puede considerarse. La velocidad por lo tanto medida es la cantidad de la sustancia en la orina que se origina de un volumen calculable de sangre.
Hay varias técnicas diferentes empleadas para calcular o estimar la velocidad de filtración glomerular (GFR o eGFR) . En la práctica clínica, sin embargo, la eliminación de creatinina se emplea para medir GFR. La creatinina se produce naturalmente por el cuerpo (creatinina es un metabolito de creatina, que se encuentra en músculos) . Se filtra libremente por los glomérulos, pero también es secretada activamente por los túbulos renales en muy pequeñas cantidades de manera tal que la eliminación de creatinina sobre estima GFR actual en 10-20%. Este margen de error es aceptable considerando la facilidad con la cual se mide la eliminación de creatinina.
La eliminación de creatinina (CCr) puede calcularse si se conocen los valores para concentración de creatinina en orina (UCr) , gasto.de flujo de orina (V), y concentración de creatinina en plasma (Per) · Y que el producto de la concentración de orina y el gasto de flujo de orina produce la velocidad de excreción de creatinina, la eliminación de creatinina también se dice que es su velocidad de excreción (UCr*V) dividida por su concentración en plasma. Esto comúnmente se representa en forma matemática como: Comúnmente, se lleva a cabo una recolección de orina por 24 horas, a partir de vejiga vacia una mañana a los contenidos de la vejiga la siguiente mañana, con una prueba de sangre comparativa que se toma: UT X Volumen de 2 r Ct Pr x 24 x 60rams Para permitir comparación de resultados entre personas de diferentes tamaños, la CCr a menudo se corrige por el área superficial del cuerpo (BSA = Body Surface Area) , y se expresa en comparación con el humano de tamaño promedio como ml/min/1.73 m2. Mientras que la mayoría de los adultos tienen un BSA que se aproxima a 1.7 (1.6-1.9), pacientes extremadamente obesos o delgados deberán tener su CCr corregida por su BSA actual: corregida La precisión de la medida de eliminación de creatinina (aun cuando la recolección es completa) es limitado debido a que conforme disminuye la velocidad de filtración glomerular (GFR) la secreción de creatinina aumenta, y de esta manera es menor el aumento en creatinina en suero. De esta manera, la excreción de creatinina es mucho mayor que la carga filtrada, resultando en una sobre estimación potencialmente grande de GFR (tanto como una diferencia del doble) . Sin embargo, para propósitos clínicos es importante determinar si la función renal es estable o empeora o mejora. Esto a menudo se determina al supervisar solo creatinina en suero. Como la eliminación de creatinina, la creatinina en suero no será un reflejo preciso de GFR en la condición de estado no estable de ARF. Sin embargo, el grado al cual cambia la creatinina en suero de referencia reflejará el cambio en GFR. Creatinina en suero se mide en forma fácil y rápida y es específica para función renal.
Con propósitos de determinar la excreción de orina en excreción de orina en una base mL/kg/hr, es adecuada una recolección y medición de orina por hora. En el caso en donde por ejemplo solo una excreción acumulativa de 24-horas está disponible y no se proporcionan pesos de paciente, se han descrito menores modificaciones de los criterios de excreción de orina RIFLE. Por ejemplo, Bagshaw et al., Nephrol. Dial. Transplant. 23: 1203-1210, 2008, considera un peso promedio de paciente de 70 kg, y a los pacientes se les asigna una clasificación RIFLE con base en lo siguiente: <35 mL/h (Riesgo), <21 mL/h (Lesión) o <4 mL/h (Falla).
Selección de un Régimen de Tratamiento Una vez que se obtiene un diagnóstico, el médico clínico puede seleccionar fácilmente un régimen de tratamiento que sea compatible con el diagnóstico, tal como iniciar terapia de remplazo renal, retirar el suministro de compuestos que se conoce dañan al riñon, trasplante de riñon, procedimientos de retraso o prevención que se conoce dañan al riñon, modificar la administración de diuréticos, iniciar la terapia dirigida a meta, etc. La persona con destreza está al tanto de tratamientos apropiados para numerosas enfermedades discutidas en relación con los métodos de diagnóstico descritos aquí. Ver, e.g., Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 17th Ed. Merck Research Laboratories, Whitehouse Station, NJ, 1999. Además, ya que los métodos y composiciones aquí descritos proporciona información de pronóstico, los marcadores de la presente invención pueden emplearse para supervisar un curso de tratamiento. Por ejemplo, un estado de pronóstico mejorado o empeorado puede indicar que un tratamiento particular es o no eficaz.
Una persona con destreza en la técnica fácilmente aprecia que la presente invención está bien adaptada para llevar a cabo los objetos y obtener los fines y ventajas mencionados, asi como aquellos ahí inherentes. Los ejemplos que aqui se proporcionan son representativos de modalidades preferidas, son ejemplares y no se pretenden como limitaciones en el alcance de la invención.
Ejemplo 1: Recolección de muestra para nefropatia inducida por contraste El objetivo de este estudio de recolección de muestra es obtener muestras de plasma y orina y datos clínicos de pacientes antes y después de recibir medios de contraste intravasculares . Aproximadamente, participan 250 adultos que se someten a procedimientos angiográficos/radiográficos que involucran administración intravascular de medio de contraste yodado. Para participar en el estudio, cada paciente debe cumplir con todos los criterios de inclusión siguientes y ninguno de los siguientes criterios de exclusión: Criterios de Inclusión Hombres y mujeres de 18 años de edad o mayores; que se someten a un procedimiento radiográfico / angiográfico (tal como una exploración CT o intervención coronaria) que involucra la administración intravascular de medios de contraste; que se espera se hospitalicen por al menos 48 horas después de administración del contraste. capaces y deseosos de proporcionar consentimiento informado descrito para la participación del estudio y cumplir con todos los procedimientos del estudio.
Criterio de Exclusión Recipientes de trasplanté renal; función renal que se empeora en forma aguda antes del procedimiento de contraste; que ya reciben diálisis (ya sea aguda o crónica) o con necesidad inminente por diálisis al participar; que se espera se sometan a un procedimiento quirúrgico mayor (tal como que involucra una derivación cardiopulmonar) o un procedimiento de formación de imagen adicional con medio de contraste con riesgo significante para adicional insulto renal dentro de las 48 horas después de la administración de contraste; participación en un estudio clínico de intervención con una terapia experimental dentro de los 30 días previos; que se conoce infección con virus de inmunodeficiencia humana, VIH (HIV = Human Immunodeficiency Virus) o un virus de hepatitis.
Inmediatamente antes de la primera administración de contraste (y después de cualquier procedimiento previo de hidratación) , se recolectan de cada paciente una muestra de sangre anti-coagulada con EDTA (10 mL) y una muestra de orina (10 mL) . Muestras de sangre y orina se recolectan entonces a 4 (±0.5), 8 (±1), 24 (±2) 48 (+2), y 72 (±2) horas después de la última administración de medios de contraste durante el procedimiento de índice de contraste. Se recolecta sangre mediante venipunctura directa o mediante otro acceso venoso disponible, tal como un revestimiento femoral existente, línea venosa central, línea intravenosa periférica o inyectable de heparina (hep-lock) . Estas muestras de sangre de estudio se procesan a plasma en el sitio clínico, congelan y embarcan a Astute Medical, Inc., San Diego, CA. Las muestras de estudio de orina se congelan y embarcan a Astute Medical, Inc.
Creatinina en suero se estima en el sitio inmediatamente antes de la primera administración de contraste (después de cualquier hidratación previa a procedimiento) y a 4 (±0.5), 8 (±1), 24 (±2) and 48 (±2)), y 72 (±2) horas siguiendo la última administración de contraste (en forma ideal al mismo tiempo que se obtienen las muestras de estudio) . Además, cada estado de paciente se evalúa hasta el día 30 respecto a mediciones de creatinina en suero y orina adicionales, una necesidad por diálisis, estado de hospitalización, y resultados clínicos adversos (incluyendo mortalidad) .
Antes de administración del medio de contraste, a cada paciente se le asigna un riesgo, con base en la siguiente evaluación: presión de sangre sistólica <80 mm de Hg = 5 puntos; bomba de globo intra-arterial = 5 puntos; falla cardiaca congestiva (Clase III-IV o historia de edema pulmonar) = 5 puntos; edad >75 años = 4 puntos; nivel de hematocrito <39% para hombres, <35% para mujeres = 3 puntos; diabetes = 3 puntos; volumen de medio de contraste = 1 punto por cada 100 mL; nivel de creatinina en suero >1.5 g/dL = 4 puntos O estimado GFR 40-60 mL/min/1.73 m2 = 2 puntos, 20-40 mL/min/1.73 m2 = 4 puntos, < 20 mL/min/1.73 m2 = 6 puntos. Los riesgos asignados son como sigue: riesgo para CIN y diálisis: 5 o menos total de puntos = riesgo de CIN - 7.5%, riesgo de diálisis - 0.04%; 6-10 total de puntos = riesgo de CIN - 14%, riesgo de diálisis - 0.12%; 11-16 total de puntos = riesgo de CIN - 26.1%, riesgo de diálisis - 1.09%; >16 total puntos = riesgo de CIN - 57.3%, riesgo de diálisis -12.8%.
Ejemplo 2: Recolección de muestra de cirugía cardiaca El objetivo de este estudio de recolección de muestra es recolectar muestras de plasma y orina y datos clínicos de pacientes antes y después de someterse a cirugía cardiovascular, un procedimiento que se conoce que es potencialmente dañino para la función del riñon. Aproximadamente 900 adultos que se someten a esta cirugía participan. Para participar en el estudio, cada paciente debe cumplir con todos los siguientes criterios de inclusión y ninguno de los siguientes criterios de exclusión: Criterios de Inclusión hombres y mujeres de 18 años de edad o mayores; que se someten a cirugía cardiovascular; índice de Riesgo Predictivo de Toronto/Ottawa para Calificación de Riesgo de Reemplazo Renal de al menos 2 (Wijeysundera et al., JAMA 297: 1801-9, 2007); y capaz y con voluntad de proporcionar consentimiento informado descrito para participación en el estudio y cumplir con todos los procedimientos del estudio.
Criterios de Exclusión conocido embarazo; trasplante renal previo; empeoramiento agudo de la función renal antes de participar (por ejemplo, cualquier categoría de los criterios RIFLE) ; que ya recibe diálisis (ya sea aguda o crónica) o con necesidad inminente de diálisis al participar; que participan actualmente en otro estudio clínico o que se espera participe en otro estudio clínico dentro de 7 días de cirugía cardiaca que involucra infusión de fármaco o una intervención terapéutica para AKI; infección conocida con virus de inmunodeficiencia humana VIH (HIV) o un virus de hepatitis.
Dentro de 3 horas antes de la primer incisión (y después de cualquier hidratación previa al procedimiento) , una muestra de sangre anticoagulada con EDTA (10 mL) , sangre entera (3 mL) , y muestra de orina (35 mL) se recolectan por cada paciente. Muestras de sangre y orina después se recolectan a 3 (±0.5), 6 ( +0.5), 12- (±1)', 24 (±2) y 48 (±2) horas después del procedimiento y después diariamente los días 3 a 7 si el sujeto permanece en el hospital. Se recolecta sangre por venopunción o punción venosa directa o mediante otros accesos venosos disponibles, tales como una vaina femoral existente, línea venosa central, línea intravenosa periférica o inyectable de heparina. Estas muestras de sangre de estudio son congeladas y embarcadas a Astute Medical, Inc., San Diego, CA. Las muestras de orina para estudio son congeladas y embarcadas a Astute Medical, Inc .
Ejemplo 3: Recolección de muestras de sujetos agudamente enfermos El objetivo de este estudio es recolectar muestras de pacientes agudamente enfermos. Aproximadamente participarán 900 adultos que se espera estén en la ICU por al menos 48 horas. Para participar en el estudio, cada paciente debe cumplir con todos los siguientes criterios de inclusión y ninguno de los siguientes criterios de exclusión: Criterios de Inclusión hombres y mujeres de 18 años de edad o mayores; Población de estudio 1: aproximadamente 300 pacientes que han tenido al menos uno de: choque (SBP < 90 mm de Hg y/o necesidad por soporte vasopresor para mantener MAP > 60 mm de Hg y/o caída documentada en SBP de al menos 40 mm de Hg) ; y sepsis; Población de estudio 2: aproximadamente 300 pacientes que tienen al menos uno de: antibióticos IV ordenados en sistema informático/informatizado de entrada de órdenes médicas (CPOE = Computerized Physician Order Entry) dentro de 24. horas de inscripción; exposición a medio de contraste dentro de 24 horas de inscripción; incrementada Presión Intra-Abdominal con falla cardiaca descompensada aguda; y severo trauma como la razón primaria para admisión a ICU y probablemente se hospitalice en la ICU por 48 horas después de inscripción; Población de estudio 3: aproximadamente 300 pacientes que se espera sean hospitalizados a través de un ambiente de atención agudo (ICU o ED) con un factor de riesgo conocido por lesión renal aguda (por ejemplo, sepsis, hipotensión/choque (Choque = BP sistólica < 90 mm de Hg y/o la necesidad por soporte vasopresor para mantener MAP > 60 mm de Hg y/o caída documentada en SBP > 40 mm de Hg) , trauma mayor, hemorragia o cirugía mayor) ; y/o que se espera sea hospitalizado en ICU por al menos 24 horas después de inscripción.
Criterios de Exclusión embarazo conocido; individuos institucionalizados; trasplante renal previo; conocido empeoramiento agudo de función renal antes de participar (por ejemplo, cualquier categoría de los criterios RIFLE) ; recibieron diálisis (ya sea aguda o crónica) dentro de 5 días antes de participar o con necesidad inminente de diálisis al tiempo de participar; infección conocida con virus de inmunodeficiencia humano, VIH (HIV) o un virus de hepatitis; cumple sólo el criterio de inclusión de SBP < 90 mm de Hg anteriormente establecido, y no tiene choque en la opinión del investigador principal o del médico que atiende.
Después de proporcionar consentimiento informado, una muestra de sangre anticoagulada con EDTA (10 mL) y una muestra de orina (25-30 mL) se recolectan de cada paciente. Muestras de sangre y orina son entonces recolectadas a 4 (± 0.5) y 8 (± 1) horas después de administración de contraste (si aplica); a 12 (± 1), 24 (± 2), y 48 (± 2) horas después de participar, y posteriormente en forma diaria hasta el día 7 al dia 14 mientras que el sujeto está hospitalizado. Se recolecta sangre por venipunctura directa o mediante cualquier otro acceso venoso disponible, tal como una vaina femoral existente, linea venosa central, linea intravenosa periférica o inyectable de heparina. Estas muestras de sangre para estudio se procesan a plasma en el sitio clínico, congelan y embarcan a Astute Medical, Inc., San Diego, CA. Las muestras de orina para estudio se congelan y embarcan a Astute Medical, Inc.
Ejemplo 4. Formato de inmunoensayo Los analitos se miden utilizando técnicas de inmunoensayo de enzima emparedado estándar. Un primer anticuerpo que liga al analito se inmoviliza en pozos de una microplaca dé poliestireno de 96 pozos. Muestras de prueba y estándares de analito se transfieren por pipeta a los pozos apropiados y cualesquiera analitos presentes, se ligan por el anticuerpo inmovilizado. Después de lavar por arrastre cualesquiera sustancias no ligadas, un segundo anticuerpo conjugado con peroxidasa de rábano picante gue liga al analito se agrega a los pozos, de esta manera formando complejos emparedados con el analito (de estar presentes) y el primer anticuerpo. Después de un lavado para retirar cualquier reactivo de enzima de anticuerpo no ligado, una solución de sustrato que comprende tetrametilbenzidina y peróxido de hidrógeno se agregan a los pozos. El color se desarrolla en proporción a la cantidad de analito presente en la muestra. El desarrollo de color se detiene y la intensidad del color se mide a 540 nm o 570 nm. Una concentración de analito se asigna a las muestras de prueba por comparación con una curva estándar determinada a partir de los estándares de analito. Concentraciones reportadas a continuación son como sigue: Interleucina-5 - ng/mL, subunidad de receptor de Interleucina-6- pg/mL, Factor de tejido - ng/mL, globulina de enlace a hormona de sexo - nmol-/L, Alfa-2-macroglobulina -ng/mL, Apolipoproteina A-I - ng/mL, Calcitonina - pg/mL, Trombopoyetina - pg/mL, proteina C-reactiva - ng/mL, Molécula de adhesión intercelular 3 - ng/mL, Macrófago metaloelastasa - pg/mL, Apolipoproteina B-100 - ng/mL, y Fibrinógeno -ng/mL .
Ejemplo 5. Muestras de Pacientes con Enfermedad Crónica y Donador Aparentemente Sano Muestras de orina humana de donadores sin enfermedad aguda o crónica conocida ("Donadores Aparentemente Sanos") se adquirieron de dos distribuidores (Golden West Biologicals, Inc., 27625 Commerce Center Dr., Temecula, CA 92590 and Virginia Medical Research, Inc., 915 First Colonial Rd., Virginia Beach, VA 23454) . Las muestras de orina se embarcaron y almacenaron congeladas al menos a -20 °C. Los distribuidores suministraron información demográfica para los donadores individuales incluyendo género, raza (Negro/Blanco), estado de fumador y edad.
Muestras de orina humana de donadores con diversas enfermedades crónicas ("Pacientes con Enfermedad Crónica") incluyendo falla cardiaca congestiva, enfermedad de arterias coronarias, enfermedad de riñon crónica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, diabetes mellitus e hipertensión, se adquirieron de Virginia Medical Research, Inc., 915 First Colonial Rd. , Virginia Beach, VA 23454. Las muestras de orina fueron embarcadas y almacenadas congeladas a menos de -20 °C. Los distribuidores proporcionaron un formulario de informe de caso por cada donador 'individual con edad, género, raza (Negro/Blanco) estado de fumador y uso de alcohol, altura, peso, diagnóstico de enfermedad ( es ) crónica(s), medicamentos actuales y cirugías previas.
Ejemplo 6. Uso de Marcadores de Lesión de Riñon para evaluar estado renal en pacientes Pacientes de la unidad de cuidados intensivos (ICU) fueron clasificados por estado de riñon como sin lesión (0), riesgo de lesión (R) , lesión (I), y falla (F) de acuerdo con la etapa máxima alcanzada dentro de 7 días de inscripción como se determina por los criterios RIFLE. Muestras de • sangre anti coaguladas con EDTA (10 mL) y muestras de orina (25-30 mL) se recolectaron de cada paciente al participar, 4 (± 0.5) y 8 (± 1) horas después de administración de contraste (si aplica); y a 12 (± 1), 24 (± 2), y 48 (± 2) horas después de participar, y posteriormente en forma diaria hasta el día 7 al día 14 mientras que el sujeto está hospitalizado. Se miden marcadores por métodos de inmunoensayo estándar utilizando reactivos de ensayo comercialmente disponibles en las muestras de orina y el componente de plasma de las muestras de sangre se recolectó.
Dos Cohortes se definieron que representan una población "enferma" y una "normal". Mientras que estos términos se emplean por conveniencia, "enfermo" y "normal" simplemente representan dos cohortes para comparación (digamos RIFLE 0 vs RIFLE R, I y F; RIFLE 0 vs RIFLE R; RIFLE 0 y R vs RIFLE I y F; etc.). El tiempo "etapa máx. previa" representa el tiempo en el cual se recolecta una muestra respecto al tiempo en que un paciente particular alcanza la etapa más baja de la enfermedad como se define para esta Cohorte, clasifican en tres grupos que son +/- 12 horas. Por ejemplo, "24 hr previas" que utiliza 0 contra R, I, F como las dos cohortes significará 24 hr ( +/- 12 horas) antes de alcanzar la etapa R (o I si no hay muestra a R, o F si no hay muestra a R o í).
Una curva característica de operación de receptor (ROC (receiver operating characteristic) se generó para cada biomarcador medido y se determinó el área bajo cada curva ROC (AUC) . Pacientes en la Cohorte 2 también se separaron de acuerdo con la razón para adjudicar a la Cohorte 2 como el enlace a mediciones de creatinina en suero (sCr) , con base en excreción de orina (UO) , o con base ya sea en mediciones de creatinina en suero o excreción de orina. Utilizando el mismo ejemplo anteriormente discutido (0 vs R, I, F) , para los pacientes adjudicados a la etapa R, I o F en base a mediciones de creatinina en suero solo, la cohorte de etapa 0 puede incluir pacientes adjudicados en la etapa R, I o F en base a excreción de orina; por aquellos pacientes adjudicados a la etapa R, I o F en base a la excreción de orina sola, la cohorte de etapa 0 puede tener incluidos pacientes adjudicados a la etapa R, I o F en base a mediciones de creatinina en suero; y para aquellos pacientes adjudicados en la etapa R, I o F en base a las mediciones de creatinina en suero o excreción de orina, la Cohorte de etapa 0 contiene solo pacientes en la etapa 0 tanto para mediciones de creatinina en suero como excreción de orina. También^ en los datos para pacientes adjudicados en base a mediciones de creatinina en suero o excreción de orina, se emplea el método de adjudicación que produce la etapa RIFLE más severa.
La capacidad para distinguir la Cohorte 1 de la Cohorte 2 se determina utilizando análisis ROC. SE es el error estándar de la AUC, n es el número de muestras o pacientes individuales ("pts", como se indica). Se calculan errores estándar como se describe en Hanley, J. A., and McNeil, . B.J., The meaning and use of the área under a receiver operating characteristic (ROC) curve. Radiology (1982) 143: 29-36; valores p se calculan con una prueba Z de dos colas. Una AUC < 0.5 es indicativa de un marcador que va a negativo para la comparación, y una AUC > 0.5 es indicativa de un marcador positivo para la comparación.
Se seleccionaron varias concentraciones de umbral (o "corte"), y se determinaron la sensibilidad y especificidad asociada para distinguir la cohorte 1 de la cohorte 2. OR es la proporción de posibilidades que se calcula para la concentración de corte particular, y 95% CI es el intervalo de confianza para la proporción de posibilidades .
La Tabla 1: Comparación de niveles de marcador en muestras de orina recolectadas de la Cohorte 1 (pacientes que no progresan más allá de la etapa 0 RIFLE) y en muestras de orina recolectadas de los sujetos a 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la etapa R, I o F en la Cohorte 2.
Alfa-2 macroglobulina Continúa Continúa Apolipoproteina Continúa Continúa Apolipoproteina Continúa Continúa Continúa Calcitonina Continúa Continúa Continúa Continúa Proteina C-reactiva Continúa Continúa Continúa Continúa Factor de tejido Continúa Continúa Continúa Continúa Interleucina Continúa Continúa Cont .
Interleucina-6 sub unidad beta receptora Continúa Cont .
Con .
Continúa Macrófago metaloelastasa Continúa Continúa Continúa Cont.
Globulina de enlace a hormona de sexo Continúa Continúa n (Paciente) 87 25 Trombopoyetina Cont .
Cont . 1 La Tabla 2 : Comparación de niveles de marcador en muestras de orina recolectadas de la Cohorte 1 (pacientes que no avanzan más allá de la etapa RIFLE 0 o R) y en muestras de orina recolectadas de los sujetos a 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la etapa I o F en la Cohorte 2.
Alfa-2-macrogobulina Con .
Con .
Cont .
Cont .
Apolipoproteina Continúa Continúa Continúa Continúa Apolipoproteina Continúa Continúa Continúa Continúa Calcitonina Continúa Continúa Continúa Continúa Proteina C-reactiva Continúa Continúa Continúa Continúa 15 Factor de tejido Continúa Continúa Continúa Continúa Fibrinogeno Continúa Continúa 4 Continúa Continúa Interleucina Continúa Continúa Continúa Continúa Interleucina-6 sub unidad beta receptora Continúa Continúa Continúa Continúa Macrófago metaloelastasa Continúa Continúa Continúa Cont.
Globulina de enlace a hormona de sexo 4 Continúa Continúa Continua Continúa Trombopoye ina Continúa Continúa Continúa Continúa La Tabla 3: Es una comparación de niveles de marcador en muestras de orina recolectadas dentro de 12 horas de alcanzar la etapa R de la Cohorte 1 (pacientes que alcanzan, pero no proqresan más allá de la etapa RIFLE R) y de la Cohorte 2 (pacientes que alcanzan las etapas RIFLE I o F) .
Alfa-2 macroglobulina Continúa Proteina C-reactiva Continúa Factor de tejido Continúa Fibrinógeno Continúa Molécula de adhesión intercelular 3 Continúa Interleucina-5 Continúa Trombopoyetina Continúa La Tabla 4: Comparación de los niveles máximos de marcador en muestras de orina recolectados de Cohorte 1 (pacientes que no progresan más allá de la etapa RIFLE 0) y los valores máximos en muestras de orina recolectadas de sujetos entre su participación o inscripción y 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la etapa F en la Cohorte 2.
Alfa-2 macroglobulina Continúa Continúa Continúa Apolipoproteina A-I Continúa Continúa "Continúa Continúa Apolipoproteina Continúa Continúa Continúa Calcitonina Continúa Continúa Continúa Continúa Proteina · C-reactiva Continúa Continúa Con .
Continúa Factor de tejido Continúa Continúa Continúa Continúa Fibrinogeno Continúa Continúa Continúa Continúa Continúa Continúa Continúa Continúa Interleucina-5 Continúa Continúa Continúa Continúa Interleucina-6 sub unidad beta de receptor Continúa Continúa Continúa Continúa Macrófago metaloelastasa Continúa Continúa Continúa Continúa Globulina que liga-hormona de sexo Continúa Continúa Continúa Continúa Trombopoyetina Continúa Continúa Continúa Continúa Tabla 5: Comparación de niveles de marcador en muestras de EDTA recolectadas de la Cohorte 1 (pacientes que no avanzan más allá de la etapa RIFLE 0) y en muestras EDTA recolectadas de sujetos a 0, 24 horas y 48 horas antes de alcanzar la etapa R, I o F en la Cohorte 2.
Alfa-2 macroglobulina Continúa Continúa Continúa Continúa Apolipoproteina Continúa Continúa Continúa Continúa Apolipoproteina B-100 Continúa Continúa Continúa Continúa Calcitonina Continúa Continúa Proteina C-reactiva Continúa Continúa Continúa Continúa Factor de tejido Continúa Continúa Continúa Continúa Interleucina-5 Continúa Continúa Continúa Continúa Interleucina-6 sub unidad beta de recepb Continúa Continúa Continúa Macrófago metaloelastasa Continúa Continúa Cont .
Globulina que liga-hormona de sexo Continúa Continúa Continúa Con .
Continúa Continúa Trombopoyetina Continúa Continúa Continúa Continúa La Tabla 6: Comparación de niveles de marcador en muestras de EDTA recolectadas de Cohorte 1 (pacientes que no avanzan más allá de la etapa RIFLE 0 o R) y en las muestras EDTA recolectadas de los sujetos a 0, 24 horas, y 48 horas antes de alcanzar la etapa I o F en la Cohorte 2.
Alfa-2 macroglobulina Continúa Continúa Con .
Apolipoproteina A-I Continúa Continúa Cont .
Apolipoproteina B-100 Continúa Continúa Continúa Calcitonina Continúa Continúa Continúa Cont .
Proteina C-reactiva Continúa Continúa Continúa Factor de tejido Con .
Continúa Continúa Cont .
Fibrinógeno Continúa Continúa Continua Interleucina-5 Continúa Continúa Continúa Interleucina-6 sub unidad beta de receptor Continúa Continúa Con .
Macrófago metaloelastasa Continúa Continúa Continúa Globulina que liga-hormona de sexo Continúa Continúa Continúa Continúa Trom opoyetina Continúa Continúa Continúa Continúa Tabla 7 : Comparación de niveles de marcador en muestras EDTA recolectadas dentro de 12 horas de alcanzar la etapa R de la Cohorte 1 (pacientes que alcanzan, pero no progresan más allá de la etapa RIFLE R) y de la Cohorte 2 (pacientes que alcanzan la etapa RIFLE I o F) .
Alfa-2 macroglobulina Continúa Froteina C-reactiva Continúa Factor de tejido Continúa Fibrinógeno Continúa Interleucina-5 Continúa Trombopoye ina Continúa Tabla 8 : Comparación de los niveles máximos de marcadores en muestras EDTA recolectadas de la Cohorte 1 (pacientes que no avanzan van más allá de la etapa RIFLE 0) y los valores máximos en muestras EDTA recolectadas de sujetos entre su inscripción y 0, 24 horas, y 48 horas antes de alcanzar la etapa F en la Cohorte 2.
Alfa-2 macroglobulina Continúa Continúa Continúa Apolipoproteina A-I Cont .
Continúa Continúa Apolipoproteina Continúa Continúa Continúa Calcitonina Continúa Continúa Continúa Continúa Proteína C-reactiva Continúa Continúa Continúa Factor de tejido Continúa Continúa Continúa Continúa Fibrinógeno Continúa Continúa Continúa Molécula de adhesión intercelular 3 Continúa Continúa Interleucina-5 Continúa Continúa Continúa Interleucina—6 sub unidad beta de receptor Continúa Continúa Continúa Continúa Macrófago metaloelastasa Continúa Con .
Globulina que liga-hormona de sexo Continúa Continúa Continúa Continúa Trombopoyetina Continúa Continúa Continúa Continúa Tabla , 9: Comparación de niveles de marcador en muestras de orina recolectadas de la Cohorte 1 (pacientes que no avanzan más allá de la etapa RIFLE 0, R, o í) y en muestras de orina recolectadas de la Cohorte 2 (sujetos no progresan a la etapa RIFLE F) a 0, 24 horas y 48 horas antes de que el sujeto alcance la etapa RIFLE I.
Alfa-2 macroglobulina Continúa Continúa Continúa Continúa Apolipoproteina Continúa Continúa Continúa Cont .
Calcitonina Continúa Continúa Cont .
Proteina C-reactiva Continúa Continúa Continúa Continúa Factor de tejido Continúa Continúa Continúa Fibrinogeno Continúa Continúa Continúa Continúa Molécula de adhesión intercelular 3 Continúa Continúa Continúa Interleucina-5 Continúa Continúa Continúa Continúa Trombopoyetina Continúa Continúa Continúa Tabla 10: Comparación de niveles de marcador de muestras EDTA recolectadas de Cohorte 1 (pacientes que no avanzan más allá de etapa RIFLE 0, R, o I) y muestras de EDTA recolectadas de la Cohorte 2 (sujetos quienes avanzan a la etapa RIFLE F) a 0, 24 horas, y 48 horas antes de que el sujeto alcance al etapa RIFLE I.
Alfa-2 macroglobulina Continúa Continúa Continúa Apolipoproteina Continúa Continúa Continúa Calci onina Continúa Continúa Continúa Proteína C-reactiva Continúa Continúa Continúa Factor de tejido Continúa Continúa Continúa Fibrinógeno Continúa Continúa Continúa Interleucina-5 Continúa Continúa Continúa Trombopoyetina Continúa Continúa Continúa Tabla 11: Comparación de niveles de marcador en muestras de orina de su inscripción recolectadas de la Cohorte 1 (pacientes que no avanzan más allá de la etapa RIFLE 0 o R dentro de 48 horas) y en muestras de orina de su inscripción recolectadas de la . Cohorte 2 (sujetos que alcanzan la etapa RIFLE I o F dentro de 48 horas) . Las muestras de participación de los pacientes que ya están en la etapa RIFLE I o F se incluyeron en la Cohorte 2.
Alfa-2 macroglobulina Continúa Apolipoproteina Continúa Apolipoproteina Continúa Calcitonina Continúa Proteina C-reactiva Continúa Factor de tejido Continúa Fibrinógeno Continúa Interleucina-5 Continúa Interleucina-6 sub unidad beta de receptor Continúa Macrófago me'baloelas'basa Continúa Globulina que liga-hormona de sexo Continúa Tabla 12 : Comparación de niveles de marcador en muestras de EDTA de su inscripción recolectadas de la Cohorte 1 (pacientes que no avanzan más allá de la etapa RIFLE 0 o R dentro de 48 horas) y en muestras de EDTA de su inscripción recolectadas de la Cohorte 2 (sujetos que alcanzan la etapa RIFLE I o F dentro de 48 horas) . Las muestras de participación de los pacientes que ya están en la etapa RIFLE I o F se incluyeron en la Cohorte 2.
Alfa-2 macroglobulina Continúa Apolipoproteina A-I Continúa Apolipoproteina Continúa Calci onina Continúa Proteina C-reactiva Continúa Factor de tejido Continúa Fibrinógeno Continúa Interleucina-5 Continúa Interleucina-6 sub unidad beta de receptor Continúa Macrófago metaloelastasa Continúa Globulina que liga-hormona de sexo Continúa Ejemplo 7. Marcadores de lesión de riñon para evaluar riesgo de mortalidad en pacientes Pacientes de la unidad de cuidados intensivos (ICU intensive care unit) se registraron en el siguiente estudio. Cada paciente se clasificó por su estado de riñon como sin lesión (0), riesgo de lesión (R) , lesión (I), y falla (F) de acuerdo con la etapa máxima alcanzada dentro de 48 horas de participación o inscripción como se determina por el criterio RIFLE. Muestras de sangre anti-coaguladas de EDTA (10 mL) y muestras de orina (25-30 mL) se recolectaron de cada paciente al tiempo de participar en el estudio. Marcadores cada uno se midieron por métodos de inmunoensayo estándar utilizando reactivos de ensayos comercialmente disponibles en las muestras de orina y el componente de plasma de las muestras de sangre recolectadas.
La población de pacientes fue segregada con base en las concentraciones de marcador utilizando valores umbral que divide la población en tercios ( "terciles" ) . Pacientes con concentraciones de marcador en el tercio inferior, medio superior comprenden el primero, segundo y tercer terciles, respectivamente. El riesgo relativo de mortalidad relacionada a AKI dentro de 7, 14 y 28 días, se calcula para el segundo y tercer terciles, respecto a un valor de 1 para el primer tercil, como se indica en la siguiente tabla. "Mortalidad relacionada a AKI" o "muerte relacionada a AKI" se define como muerte acompañada por una etapa RIFLE mínima de R.
La Tabla 13. Riesgo relativo de muerte relacionada con AKI dentro de 7, 14 y 28 días de participación para el tercer tercil en comparación con el primer tercil de concentraciones de marcador.
Continúa Número Número Total de Total de Muertes Relacio- P Pacientes nadas con AKI Muerte 0 .02 355 16 Relacionada con AKI dentro de 7 D as después de participar 0 .04 356 16 Muerte 0 .02 355 20 Relacionada con AKI dentro de 14 Dias después de participar 0 .03 356 20 Muerte 0 .02 355 22 Relacionada con AKI dentro de 28 Dias después de participar 0 .05 356 22 Mientras que la invención se ha descrito y ejemplificado con detalle suficiente para aquellos con destreza en esta especialidad, para hacer y utilizarla, deberán ser aparentes diversas alternativas, modificaciones y mejoras sin apartarse del espíritu y alcance de la invención. Los ejemplos que aquí se proporcionan son representativos de modalidades preferidas, son ejemplares y no se pretenden como limitaciones en el alcance de la invención. Las modificaciones aquí y otros usos se ocurrirán a aquellos con destreza en la técnica. Estas modificaciones son abarcadas dentro del espíritu de la invención y se definen por el alcance de las reivindicaciones.
Será fácilmente aparente para una persona con destreza en la técnica que variantes, substituciones y modificaciones pueden realizarse a la invención aquí descrita sin apartarse del alcance y espíritu de la invención.
Todas las patentes y publicaciones mencionadas en esta especificación son indicativas de los niveles de aquellos con destreza ordinaria en la especialidad a la cual pertenece la invención. Todas las patentes y publicaciones aquí se incorporan por referencia en la misma proporción como si cada publicación individual se indicara en forma específica e individual incorporada por referencia.
La invención en forma ilustrativa aquí descrita puede practicarse en forma conveniente en la ausencia de cualquier elemento o elementos, limitación o limitaciones que no se describen específicamente aquí. De esta manera, por ejemplo, en cada caso aquí cualquiera de los términos "comprende", "que consiste esencialmente de" y "consiste de" puede ser remplazado con cualquiera de los otros dos términos. Los términos y expresiones que se han empleado se utilizan como términos de descripción y no de limitación,- y no hay intención de que el uso de estos términos y expresiones de exclusión de cualesquiera equivalentes de las características mostradas y descritas o sus porciones, pero se reconoce que diversas modificaciones son posibles dentro del alcance de la invención reivindicada. De esta, manera, habrá de entenderse que aunque la presente invención se ha descrito específicamente por . modalidades preferidas y características opcionales, aquellos con destreza en la especialidad pueden recurrir a modificación y variación de los conceptos aquí descritos, y que dichas modificaciones y variaciones se consideran dentro del alcance de esta invención como se define por las reivindicaciones anexas.
Otras modalidades se establecen dentro de las siguientes reivindicaciones.

Claims (108)

REIVINDICACIONES
1. Un método para evaluar estado renal en un sujeto, caracterizado porque comprende: realizar uno o más ensayos configurados para detectar uno o más biomarcadores seleccionados del grupo que consiste de Interleucina-5, subunidad beta de receptor Interleucina-6, factor de Tejido, globulina de enlace a hormona de Sexo, Alfa-2-macroglobulina, Apolipoproteina A-I, Calcitonina, Trombopoyetina, proteina C-reactiva, molécula de adhesión Intercelular 3, Macrófago metaloelastasa, Apolipoproteina B-100, y Fibrinógeno en una muestra de fluido corporal que se obtiene del sujeto para proporcionar un resultado de ensayo; y correlacionar el o los resultados de ensayo con el estado renal del sujeto.
2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la etapa de correlación comprende correlacionar los resultados de ensayo con uno o más de estratificación de riesgo, diagnóstico, clasificación por etapas, pronóstico, clasificar y supervisar el estado renal del sujeto.
3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de uno o más cambios futuros en el estado renal al sujeto, con base en el resultado de los ensayos.
4. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque uno o más cambios futuros en el estado renal comprende una o más de una lesión futura a función renal, función renal reducida futura, mejora futura en función renal, y falla renal aguda futura (ARF) .
5. El método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque los resultados de ensayo comprenden al menos 2, 3, 4, ó 5 de: una concentración medida de Interleucina-5 , una concentración medida de subunidad beta de receptor Interleucina-6, una concentración medida de factor de Tejido, una concentración medida de globulina de enlace a hormona de Sexo, una concentración medida de Alfa-2-macroglobulina, una concentración medida de Apolipoproteina A-I, una concentración medida de Calcitonina, una concentración medida de Trombopoyetina, una concentración medida de proteína C-reactiva, una concentración medida de molécula de adhesión Intercelular 3, una concentración medida de Macrófago metaloelastasa, una concentración medida de Apolipoproteina B-100, una concentración medida de un Fibrinógeno.
6. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque una pluralidad de resultados de ensayo se combina utilizando la función que convierte la pluralidad de resultados de ensayo en un solo resultado compuesto.
7. Un método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el uno o más cambios futuros en estado renal comprenden un resultado clínico relacionado a una lesión renal que sufre el sujeto.
8. Un .método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la probabilidad de uno o más cambios futuros en el estado renal es que un evento de interés más o menos probablemente ocurra dentro de 30 dias del tiempo en el cual la muestra de fluido corporal se obtiene del sujeto.
9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la probabilidad de uno o más cambios futuros en estado renal es que un evento de interés sea más o menos probable que ocurra dentro de un periodo seleccionado del grupo que consiste de 21 dias, 14 dias, 7 dias, 5 dias, 96 horas, 72 horas, 48 horas, 36 horas, 24 horas, y 12 horas.
10. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto se elige para evaluación de estado renal con base en la pre-existencia en el sujeto de uno o más factores de riesgo conocidos para ARF pre-renal, renal intrínseca o post-renal.
11. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el sujeto se elige para evaluación de estado renal, con base en un diagnóstico existente de uno o más de falla cardiaca congestiva, preeclampsia, eclampsia, diabetes mellitus, hipertensión, enfermedad de arterias coronarias, proteinuria, insuficiencia renal, filtración glomerular por debajo de intervalo normal, cirrosis, creatinina en suero sobre el rango normal, sepsis, lesión a función renal, función renal reducida, o ARF, o con base en una cirugía vascular mayor en proceso o que se ha sometido, derivación de arterias coronarías u otra cirugía cardiaca, o basado en exposición a AINEs (NSAIDs) , ciclosporinas , tacrolimus, aminoglicósidos , foscarnet, etilen glicol, hemoglobina, mioglobina, ifosfamida, metales pesados, metotrexato, agentes de contraste radiopacos o estreptozotocina.
12. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar un diagnóstico de la ocurrencia o no ocurrencia de una o más de una lesión a función renal, función renal reducida o ARF al sujeto, con base en el o los resultados de ensayo.
13. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque la etapa de correlación comprende estimar si la función renal o no se mejora o empeora en un sujeto quien ha sufrido de una lesión o función renal, función renal reducida o ARF con base en el o los resultados de ensayo.
14. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el método es un método para diagnosticar la ocurrencia o. no ocurrencia de una lesión a función renal en el sujeto.
15. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el método es un método para diagnosticar . la ocurrencia . o no ocurrencia de función renal reducida en el sujeto.
16. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el método es un método para diagnosticar la ocurrencia o no ocurrencia de falla renal aguda en un sujeto.
17. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el método es un método para diagnosticar la ocurrencia o no ocurrencia de necesidad para terapia de remplazo renal en el sujeto.
18. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el método es un método para diagnosticar la ocurrencia o no ocurrencia de necesidad por transplante renal en el sujeto.
19. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el método es un método para asignar un riesgo de la ocurrencia o no ocurrencia futura de una lesión a la función renal en el sujeto.
20. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el método es un método para asignar un riesgo de la ocurrencia o no ocurrencia futura de función renal reducida en el sujeto.
21. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el método es un método para asignar un riesgo de la ocurrencia o no ocurrencia futura de falla renal aguda en el sujeto.
22. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el método es un método para asignar un riesgo de ocurrencia o no ocurrencia futura de necesidad por terapia de remplazo renal en el suj eto .
23. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el método es un método para asignar un riesgo de la ocurrencia o no ocurrencia futura de necesidad por transplante renal en el suj eto .
24. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque uno o más cambios futuros en estado renal comprenden uno o más de una lesión futura a función renal, función renal reducida futura, mejora en función renal futura y falla renal aguda futura (ARF = Acute Renal Failure) dentro de 72 horas del tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal.
25. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque uno o más cambios futuros en estado renal comprenden uno o más de una lesión a función renal futura, función renal reducida futura, mejora en función renal futura y falla renal aguda futura (ARF) dentro de 48 horas del tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal.
26. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque uno o más cambios futuros en estado renal comprenden uno o más de una lesión futura de función renal, función renal reducida futura, mejora futura en función renal y falla renal aguda futura (ARF) dentro de 24 horas de tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal.
27. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto está en. etapa RIFLE 0 o R.
28. Un método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el sujeto está en etapa RIFLE 0, y la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance etapa RIFLE R, I o F dentro de 72 horas .
29. Un método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el sujeto está en etapa RIFLE 0, y la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance etapa RIFLE I o F dentro de 72 horas.
30. Un método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el sujeto está en etapa RIFLE 0, y la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE F dentro de 72 horas.
31. Un método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el sujeto está en etapa RIFLE 0 o R, y la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance etapa RIFLE I o F dentro de 72 horas ..
32. Un método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el sujeto está en etapa RIFLE 0 o R, y la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE F dentro de 72 horas.
33. Método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el sujeto está en etapa RIFLE R, y la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE I o F dentro de 72 horas .
34. Método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque el sujeto está en etapa RIFLE R, y la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE F dentro de 72 horas.
35. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto está en etapa RIFLE 0, R, o í, y la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance etapa RIFLE F dentro de 72 horas.
36. Un método de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque el sujeto está en etapa RIFLE I, y la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance etapa RIFLE F dentro de 72 horas.
37. Un método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE R, I o F dentro de 48 horas.
38. Un método de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE I o F dentro de 48 horas.
39. Un método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcanza la etapa RIFLE F dentro de 48 horas.
40. Un método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcanza la etapa RIFLE I o F dentro de 48 horas.
41. Un método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE F dentro de 48 horas.
42. Un método de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque la etapa de correlacionar comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE I o F dentro de 48 horas.
43. Un método de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque la etapa de correlacionar comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE F dentro de 48 horas.
44. Un método de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque la etapa de correlacionar comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE F dentro de 48 horas.
45. Un método de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque la etapa de correlacionar comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE F dentro de 48 horas.
46. Un método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque la etapa de correlacionar comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE R, I o F dentro de 24 horas.
47. Un método de conformidad con la reivindicación 29, caracteriza porque la etapa de correlacionar comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance y la etapa RIFLE I o F dentro de 24 horas.
48. Un método de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque la etapa de correlacionar comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE F dentro de 24 horas.
49. Un método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque la etapa de correlacionar comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE I o F dentro de 24 horas.
50. Un método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la etapa de correlacionar comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance de la etapa RIFLE F dentro de 24 horas.
51. Un método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque la etapa de correlacionar comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE I o F dentro de 24 horas.
52. Un método de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque la etapa de correlacionar comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE F dentro de 24 horas.
53. Un método conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque la etapa de correlacionar comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE F dentro de 24 horas.
54. Un método de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque la etapa de correlacionar comprende asignar una probabilidad de que el sujeto alcance la etapa RIFLE F dentro de 24 horas.
55. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto no tiene falla renal aguda.
56. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto no ha experimentado un aumento, de 1.5 veces o mayor en creatinina en suero sobre un valor de referencia determinado antes del tiempo en el cual se obtuvo la muestra de fluido corporal.
57. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto tiene una producción de orina de al menos 0.5 ml/kg/hr sobre las 6 horas precedentes al tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal.
58. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto no ha experimentado un aumento de 0.3 mg/dL o mayor en creatinina en suero sobre un valor de referencia determinado antes del tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal.
59. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto (i) no ha experimentado un aumento de 1.5 veces o mayor en creatinina en suero sobre un valor de referencia determinado antes del tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal, (ii) tiene una producción de orina de al menos 0.5 ml/kg/hr durante las 6 horas que preceden al tiempo en el cual se obtiene de la muestra de fluido corporal y (iii) no ha experimentado un aumento de 0.3 mg/dL o mayor en creatinina en suero sobre un valor de referencia determinado antes del tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal.
60. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto no ha experimentado un aumento de 1.5 veces o mayor en creatinina en suero sobre un valor de referencia determinado antes del tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal.
61. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto tiene una producción de orina de al menos 0.5 ml/kg/hr sobre las 6 horas precedentes al tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal.
62. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto (i) no ha experimentado un aumento de 1.5 veces o mayor en creatinina en suero sobre un valor de referencia determinado antes del tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal, (ii) tiene una producción de orina de al menos 0.5 ml/kg/hr sobre las 12 horas precedentes al tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal, y (iii) no ha experimentado un aumento de 0.3 mg/dL o mayor en creatinina en suero sobre un valor de referencia determinado antes del tiempo en el cual la muestra de fluido corporal se obtiene.
63. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar uno o más de: una probabilidad que dentro de 72 horas el sujeto (i) experimentará un aumento de 1.5 veces o mayor en creatinina en suero (ii) que tiene una producción de orina menor que 0.5 ml/kg/hr sobre un periodo de 6 horas, o (iii) experimenta un aumento de 0.3 mg/dL o mayor en creatinina en suero.
64. Un método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar uno o más de: una probabilidad de que dentro de 48 horas el sujeto (i) experimentará un aumento de 1.5 veces o mayor en creatinina en suero, (ii) tiene una producción de orina menor a 0.5 ml/kg/hr durante un periodo de 6 horas, o (iii) experimenta un aumento de 0.3 mg/dL o mayor en creatinina en suero.
65. Un método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar uno o más de: una probabilidad de que dentro de 24 horas el sujeto (i) experimentará un aumento de 1.5 veces o mayor en creatinina en suero (ii) que tiene una producción de orina menor que 0.5 ml/kg/hr sobre un periodo de 6 horas, o (iii) experimenta un aumento de 0.3 mg/dL o mayor en creatinina en suero.
66. El método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 72 horas, el sujeto experimentara un aumento de 1.5 veces o mayor en creatinina en suero.
67. Un método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 72 horas el sujeto tendrá una producción de orina menor que 0.5 ml/kg/hr durante un periodo de 6 horas.
68. Un método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 72 horas, el sujeto experimentará un aumento de 0.3 mg/dL o mayor en creatinina en suero.
69. Un método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 48 horas el sujeto experimentara un aumento de 1.5 veces o mayor en creatinina en suero.
70. Un método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 48 horas, el sujeto tendrá una producción de orina menor que 0.5 ml/kg/hr durante un periodo de 6 horas.
71. Un método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 48 horas el sujeto experimentará un aumento de 0.3 mg/dL o mayor en creatinina en suero.
72. Un método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 24 horas el sujeto experimentara un aumento de 1.5 veces o mayor en creatinina en suero.
73. Un método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 24 horas, el sujeto tendrá una producción de orina menor que 0.5 ml/kg/hr durante un periodo de 6 horas.
74. Un método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 24 horas sujeto experimentará un aumento de 0.3 mg/dL o mayor en creatinina en suero.
75. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto no ha experimentado un aumento de 2 veces o mayor en creatinina en suero sobre un valor de referencia determinado antes del tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal.
76. Un método de conformidad con una de la reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto tiene una producción de orina de al menos 0.5 ml/kg/hr sobre las 12 horas precedentes al tiempo en el cual la muestra del fluido corporal se obtiene.
77. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto (i) no ha experimentado un aumento de 2 veces o mayor en creatinina en suero sobre un valor de referencia determinado antes del tiempo en el cual la muestra de fluido corporal se obtiene, (ii) tiene una producción de orina de al menos 0.5 ml/kg/hr durante las 2 horas precedentes al tiempo en el cual la muestra de fluido corporal se obtiene y (iii) no ha experimentado un aumento de 0.3 mg/dL o mayor en creatinina en suero sobre un valor de referencia determinado antes del tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal.
78. Método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto no ha experimentado un aumento de 3 veces o mayor en creatinina en suero sobre un valor de referencia determinado antes del tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal.
79. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto tiene una producción de orina de al menos 0.3 ml/kg/hr sobre las 24 horas precedentes al tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal, o anuria sobre las 12 horas precedentes al tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal.
80. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque el sujeto (i) no ha experimentado un aumento de 3 veces o mayor en creatinina en suero sobre un valor de referencia determinado antes del tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal, (ii) tiene una producción de orina de al menos 0.3 ml/kg/hr sobre las 24 horas precedentes al tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal, o anuria durante las 12 horas que preceden al tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal y (iii) no ha experimentado un aumento de 0.3 mg/dL o mayor en creatinina en suero sobre un valor de referencia determinado antes del tiempo en el cual se obtiene la muestra de fluido corporal.
81. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar uno o más de: una probabilidad de que dentro de 72 horas el sujeto (i) experimente un aumento de 2 veces o mayor en creatinina en suero (ii) que tiene una producción de orina menor que 0.5 ml/kg/hr sobre un periodo de 12 horas o (iii) experimente un aumento de 0.3 mg/dL o mayor en creatinina en suero.
82. Un método de conformidad con la reivindicación 81, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una o más de: una probabilidad de que dentro de 48 horas el sujeto (i) experimentará un aumento de 2 veces o mayor en creatinina en suero (ii) tendrá una producción de orina menor a 0.5 ml/kg/hr sobre un periodo de 6 horas, o (iii) experimenta un aumento de 0.3 mg/dL o mayor en creatinina en suero.
83. Un método de conformidad con la reivindicación 81, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una o más de: una probabilidad de que dentro de 24 horas, el sujeto (i) experimentará un aumento de 2 veces o mayor en creatinina en suero o (ii) tendrá una producción de orina menor que 0.5 ml/kg/hr durante un periodo de 6 horas.
84. Un método de conformidad con la reivindicación 81, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 72 horas el sujeto experimentará un aumento de 2 veces o mayor en creatinina en suero .
85. Un método de conformidad con la reivindicación 81, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 72 horas, el sujeto tendrá una producción de orina menor que 0.5 ml/kg/hr durante un periodo de 6 horas..
86. Un método de conformidad con la reivindicación 81, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 48 horas, el sujeto experimentará un aumento de 2 veces o mayor de creatinina en suero.
87. Un método de conformidad con la reivindicación 81, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 48 horas, el sujeto tendrá una producción de orina menor que 0.5 ml/kg/hr durante un periodo de 6 horas.
88. Un método de conformidad con la reivindicación 81, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 24 horas, el sujeto experimentará un aumento de 2 veces o mayor en creatinina en suero .
89. Un método de conformidad con la reivindicación 81, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 24 horas, el sujeto tendrá una producción de orina menor que 0.5 ml/kg/hr durante un periodo de 6 horas.
90. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-5, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una o más de: una probabilidad de que dentro de 72 horas, el sujeto (i) experimentará un aumento de 3 veces o mayor en creatinina en suero o (ii) tendrá una producción de orina menor que 0.3 ml/kg/hr durante un periodo de 24 horas o anuria durante un periodo de 12 horas .
91. Un método de conformidad con la reivindicación 90, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar uno o más de: una probabilidad de que dentro de 48 horas, el sujeto (i) experimentará un aumento de 3 veces o mayor en creatinina en suero o (ii) tendrá una producción de orina menor que 0.3 ml/kg/hr durante un periodo de 24 o anuria durante un periodo de 12 horas.
92. Un método de conformidad con la reivindicación 90, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar uno o más de: una probabilidad de que dentro de 24 horas, el sujeto (i) experimentará un aumento de 3 veces o mayor en creatinina en suero, o (ii) tendrá una producción de orina menor que 0.3 ml/kg/hr durante un periodo de 24 horas o anuria durante un periodo de 12 horas.
93. Un método de conformidad con la reivindicación 90, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 72 horas el sujeto experimentará un aumento de 3 veces o mayor en creatinina en suero .
94. Un método de conformidad con la reivindicación 90, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro 72 horas el sujeto tendrá una producción de orina menor que 0.3 ml/kg/hr sobre un período de 24 horas o anuria sobre un periodo de 12 horas.
95. Un método de conformidad con la reivindicación 90, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 48 horas el sujeto experimentará un aumento de 3 veces o mayor en creatinina en suero .
96. Un método de conformidad con la reivindicación 90, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 48 horas el sujeto tendrá una producción de orina menor que 0.3 ml/kg/hr durante un período de 24 horas o anuria durante un período de 12 horas .
97. Un método de conformidad con la reivindicación 90, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 24 horas el sujeto experimentará un aumento de 3 veces o mayor en creatinina en suero .
98. Un método de conformidad con la reivindicación 90, caracterizado porque la etapa de correlación comprende asignar una probabilidad de que dentro de 24 horas el sujeto tendrá una producción de orina menor que 0.3 ml/kg/hr durante un período de 24 horas o anuria durante un período de 12 horas .
99. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-98, caracterizado porque la muestra de fluido corporal es una muestra de orina.
100. Un método de conformidad con una de las reivindicaciones 1-99, caracterizado porque el método comprende realizar ensayos que detectan uno, dos, tres o más de Interleucina-5 , subunidad beta del receptor Interleucina-6, factor de Tejido, globulina de enlace a hormona de Sexo,' Alfa-2-macroglobulina, Apolipoproteina · A-I, Calcitonina, Trombopoyetina, proteina C-reactiva, molécula de adhesión Intercelular 3., Macrófago metaloelastasa, Apolipoproteina B-100, y Fibrinógeno.
101. Medición de uno o más biomarcadores seleccionados del grupo que consiste de Interleucina-5 , subunidad beta del receptor Interleucina-6, factor de Tejido, globulina de enlace a hormona de Sexo, Alfa-2-macroglobulina, Apolipoproteina A-I, Calcitonina, Trombopoyetina, proteina C-reactiva, molécula de adhesión Intercelular 3, Macrófago metaloelastasa, Apolipoproteina B-100, y Fibrinógeno para la evaluación de lesión renal.
102. Medición de uno o más biomarcadores seleccionados del grupo que consiste de Interleucina-5, subunidad beta del receptor Interleucina-6, factor de Tejido, globulina de enlace a hormona de Sexo, Alfa-2-macroglobulina, Apolipoproteina A-I, Calcitonina, Trombopoyetina, proteina C-reactiva, molécula de adhesión Intercelular 3, Macrófago metaloelastasa, Apolipoproteina B-100, y Fibrinógeno para la evaluación de lesión renal aguda.
103. Un equipo, caracterizado porque comprende: reactivos para realizar uno o más ensayos configurados para detectar uno o más marcadores de lesión de riñon seleccionados del grupo que consiste dé Interleucina-5 , subunidad beta del receptor Interleucina-6, factor de Tejido, globulina de enlace a hormona de Sexo, Alfa-2-macroglobulina, Apolipoproteína A-I, Calcitonina, Trombopoyetina, proteina C-reactiva, molécula de adhesión Intercelular 3, acrófago metaloelastasa, Apolipoproteína B-100, y Fibrinógeno.
104. Un equipo de conformidad con la reivindicación 103, caracterizado porque los reactivos comprenden uno o más reactivos de enlace, cada uno los cuales tiene específicamente uno de los marcadores de lesión de riñon.
105. Un equipo de conformidad con la reivindicación 104, caracterizado porque una pluralidad de reactivos de enlace están contenidos en un solo dispositivo de ensayo.
106. Un equipo de conformidad con la reivindicación 103, caracterizado porque al menos uno de los ensayos se configura como un ensayo de enlace emparedado.
107. Un equipo de conformidad con la reivindicación 103, caracterizado porque al menos uno de los ensayos se configuran como un ensayo de enlace competitivo.
108. Un equipo de conformidad con una de las reivindicaciones 103-107, caracterizado porque uno o más ensayos comprenden ensayos que detectan uno, dos o tres o más de Interleucina-5, subunidad beta del receptor Interleucina-6, factor de Tejido, globulina de enlace a hormona de Sexo, Alfa-2-macroglobulina, Apolipoproteina A-I, Calcitonina, Trombopoyetina, proteina C-reactiva, molécula de adhesión Intercelular 3, Macrófago metaloelastasa, Apolipoproteina B-100, y Fibrinógeno.
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