MX2012005002A - Arilindenopirimidinas sustituidas con arilo y su uso como antagonistas de receptores de adenosina a2a altamente selectivos. - Google Patents

Abstract

Esta invención se relaciona con una nueva arilindenopirimidina, A, y sus usos terapéuticos y profilácticos; los trastornos que se tratan y/o previenen incluyen la enfermedad de Parkinson. (Ver Formula). En donde X1 R2, R3, y R4 son como se definieron en la descripción.

Description

ARILINDENOPIRIMIDINAS SUSTITUIDAS CON ARILO Y SU USO COMO ANTAGONISTAS DE RECEPTORES DE ADENOSINA A2A ALTAMENTE SELECTIVOS REFERENCIA CRUZADA CON SOLICITUDES RELACIONADAS La presente solicitud reclama los beneficios de la presentación de la solicitud provisional de los EUA No. 61 /255,930 presentada el 29 de octubre del 2009. Las descripciones completas de las solicitudes de patente mencionadas antes se incorporan por la presente en este documente mediante referencia para todos los propósitos.

CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se relaciona con arilindenopirimidinas sustituidas con arilo y con sus usos terapéuticos y profilácticos. Los trastornos que se tratan y/o previenen incluyen los trastornos neurodegenerativos y motores que se mejoran por la antagonización de los receptores de adenosina A2A- La presente solicitud está dirigida a un subconjunto de un género de compuestos descrito en la patente de los Estados Unidos núm. 7,468,373 B2.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La adenosina es un nucleótido de purina producido por todas las células metabólicamente activas dentro del organismo. La adenosina ejerce sus efectos a través de cuatro subtipos de receptores de superficie celular (A1 , A2A, A2b y A3), que pertenecen a la superfamilia de receptores acoplados a la proteína G. Los subtipos A1 y A3 se acoplan a la proteína G inhibidora, mientras que A2A y A2b se acoplan a la proteína G estimuladora. Los receptores A2A se encuentran principalmente en el cerebro, tanto en las neuronas como en las células gliales (nivel más alto en el cuerpo estriado y núcleo accumbens, nivel moderado a alto en las regiones del tubérculo olfatorio, hipotálamo, hipocampo, etc.).

En los tejidos periféricos, los receptores A2A se encuentran en las plaquetas, neutrofilos, músculo liso vascular y endotelio. El cuerpo estriado es la región principal del cerebro para regular la actividad motora, especialmente a través de su inervación por parte de neuronas dopaminérgicas que se originan en la sustancia negra. El cuerpo estriado es el objetivo principal de degeneración de neuronas dopaminérgicas en pacientes con la enfermedad de Parkinson (PD, por sus siglas en inglés). Dentro del cuerpo estriado, los receptores A2A se localizan junto con los receptores de dopamina D2, lo que sugiere un sitio importante para la integración de la señalización de la adenosina y dopamina en el cerebro.

Los bloqueadores de los receptores de adenosina A2A pueden proporcionar una nueva clase de agentes antiparkinsonianos (Impagnatiello, F.; Bastía, E.; Ongini, E.¡ Monopoli, A. Emerging Therapeutic Targets, 2000, 4, 635).

Los antagonistas del receptor A2A constituyen terapias potencialmente útiles para el tratamiento de adicciones. Los principales fármacos de abuso (opiáceos, cocaína, etanol, y similares) modulan directa o indirectamente los mecanismos de señalización de la dopamina en las neuronas, especialmente las que se encuentran en el núcleo accumbens, que contienen altos niveles de receptores de adenosina A2A- Se demostró que la dependencia aumenta con la vía de señalización de la adenosina, y que la administración de un antagonista del receptor A2A reduce el deseo de consumir sustancias adíctívas ("The Critica! Role of Adenosíne A2A Receptors and Gi ß? Subunits in Alcoholism and Addiction: From Cell Biology to Behavior", de Ivan Diamond y Lina Yao, (The Cell Biology of Addiction, 2006, págs. 291 -316) y "Adaptations in Adenosine Sígnalíng in Drug Dependence: Therapeutic Implications", de Stefen P. Hack y Macdonald J. Christie, Critical Review in Neurobiology, Vol. 1 5, 235-274 (2003)). Véase también Alcoholism: Clinical and Experimental Research (2007), 31 (8), 1 302- 1307.

Se podría usar un antagonista del receptor A2A para tratar el trastorno de hiperactividad y déficit de atención (ADHD, por sus siglas en inglés), puesto que la cafeína (un antagonista no selectivo de la adenosina) puede ser útil para tratar el ADHD, y existen muchas interacciones entre la dopamina y la adenosina a nivel neuronal. "Clinical Genetics" (2000), 58(1 ), 31 -40 y las referencias incluidas allí.

Puede usarse un antagonista de A2A selectivo para tratar la migraña aguda y profilácticamente. Los antagonistas selectivos de adenosina mostraron actividad en los modelos animales agudos y profilácticos para la migraña ("Effects of K-056, a novel selective adenosine A2A antagonist in animal models of migraine," by Kurokawa M. y otros, Abstract from Neuroscience 2009).

Los antagonistas del receptor A2A constituyen terapias potencialmente útiles para el tratamiento de la depresión. Los antagonistas A2A se conocen por inducir actividad en diversos modelos de depresión, incluidas las pruebas de natación forzada y de suspensión por la cola. La respuesta positiva es mediada por la transmisión dopaminérgica y se causa por una prolongación de la conducta orientada al escape más que por un efecto estimulante motor. Neurology (2003), 61 (supl. 6) S82-S87.

Los antagonistas del receptor A2A constituyen terapias potencialmente útiles para el tratamiento de la ansiedad. Se ha demostrado que los antagonistas A2A previenen respuestas emocionales/ansiosas in vivo. Neurobiology of Disease (2007), 28(2) 197-205.

Los antagonistas A2A se describieron en la patente de Estados Unidos núm. US 7,468,373 B2, y la solicitud de patente de Estados Unidos núm. US 2009/0054429 A1 , y las referencias en ellas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN El género de compuestos descrito en la patente de los Estados Unidos núm. 7,468,373 B2 tiene actividad de antagonismo de los receptores A2A y A1 . Para muchos trastornos para los que el antagonismo del receptor A2A es terapéuticamente útil, la actividad del receptor A1 es indeseada y puede contribuir a los efectos secundarios o incluso oponerse al efecto beneficioso de la actividad primaria de A2A del compuesto. Esta invención proporciona un pequeño grupo de compuestos cubiertos por el género descrito en el caso original, pero que se ha descubierto que tienen una selectividad inesperada y sorprendente para el receptor A2A. El grupo seleccionado de compuestos de la presente invención tiene relaciones de actividad de A2A /A1 de al menos 50/1 , mientras que el miembro promedio del género tiene una relación de actividad de A2A /A1 de 1/1. Así, se espera que los compuestos de la presente invención tengan una eficacia terapéutica mucho mayor y/o menos efectos secundarios.

Las arilindenopirimidinas sustituidas con arilo seleccionadas de la Fórmula A muestran una selectividad inusualmente alta para 2A sobre el antagonismo del receptor A1 . en donde: X es C=0; R2 es fenilo; R4 es NH2; y R3 es arilo; las arilindenopirimidinas de la Fórmula A se seleccionan del grupo que consiste en: ? ? 10 y solvatos, hidratos, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables de estos; DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención proporciona arilindenopirimidinas de la Fórmula A JNJ-39928122. en donde: X es C=0; R2 es fenilo; R4 es NH2; y R3 es arilo; las arilindenopirimidinas de la Fórmula A se seleccionan del grupo que consiste en: ?? ?? ? ?? y solvatos, hidratos, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables de estos; Esta invención proporciona, además, un método para tratar un sujeto que tiene un trastorno que mejora por la antagonización de los receptores de adenosina A2A; el método comprende administrar al sujeto una dosis terapéuticamente eficaz de un compuesto de la reivindicación 1 .

Esta invención proporciona, además, un método para prevenir un trastorno que mejora por la antagonización de los receptores de adenosina A2A en un sujeto; el método comprende administrar al sujeto una dosis profilácticamente eficaz de un compuesto de la reivindicación 1 , ya sea antes o después de un evento que se piensa causará un trastorno que se mejora por la antagonización de los receptores de adenosina A2A en el sujeto.

Los compuestos de la presente pueden estar aislados y usarse como bases libres. También pueden estar aislados y usarse como sales farmacéuticamente aceptables.

Algunos ejemplos de estas sales incluyen sales de los ácidos hidrobrómico, hidroyódico, hidroclorhídrico, perclorhídrico, sulfúrico, maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, adípico, benzoico, mandélico, metanosulfónico, hidroetanosulfónico, bencenosulfónico, oxálico, palmoico, 2 naftalensulfónico, p-toluensulfónico, ciclohexanosulfámico y sacárico.

Esta invención proporciona, además, una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 1 y un portador farmacéuticamente aceptable.

Los portadores farmacéuticamente aceptables son del conocimiento de aquellos con experiencia en la materia e incluyen, pero no se limitan a, de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 0.1 M y, preferentemente, 0.05 M de fosfato o 0.8 % de suero salino. Estos portadores farmacéuticamente aceptables pueden ser soluciones acuosas o no acuosas, suspensiones y emulsiones. Algunos ejemplos de solventes no acuosos son propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales, tales como aceite de oliva y ésteres orgánicos inyectables, tales como oleato de etilo. Los portadores acuosos incluyen agua, etanol, soluciones alcohólicas/acuosas, glicerol, emulsiones o suspensiones, lo que incluye medios salinos y tampones. Los portadores por vía oral pueden ser elixires, jarabes, cápsulas, tabletas, y similares. El portador sólido típico es una sustancia inerte, tal como lactosa, almidón, glucosa, metilcelulosa, estearato de magnesio, fosfato dicalcio, manitol, y similares. Los portadores por vía parenteral incluyen solución de cloruro de sodio, dextrosa en solución de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio, lactato de Ringer y aceites fijos. Los portadores por vía intravenosa incluyen reabastecedores de nutrientes y fluidos, reabastecedores de electrolitos, tales como los basados en la dextrosa en solución de Ringer, y similares.

También pueden estar presentes conservantes y otros aditivos, tales como, por ejemplo, antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes, gases inertes, y similares. Todos los portadores se pueden mezclar según sea necesario con desintegrantes, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes, y similares por medio del uso de técnicas convencionales conocidas en la materia.

Esta invención proporciona, además, un método para tratar un sujeto que tiene una condición que mejora por la antagonización de los receptores de Adenosina A2A; el método comprende administrar al sujeto una dosis terapéuticamente eficaz de un compuesto de la reivindicación 1 .

En una modalidad el trastorno es un trastorno neurodegenerativo o motor. Algunos ejemplos de trastornos que se pueden tratar con la composición farmacéutica de la presente invención incluyen, sin limitarse a, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, atrofia sistémica múltiple, degeneración corticobasal, enfermedad de Alzheimer y demencia senil.

En una modalidad preferida el trastorno es la enfermedad de Parkinson.

Como se usa en la presente descripción, el término "sujeto" incluye, sin limitarse a, cualquier animal o animal modificado artificialmente que sufra un trastorno que se mejora por la antagonización de los receptores de adenosina A2A. En una modalidad preferida el sujeto es un ser humano.

La administración de un compuesto de la reivindicación 1 puede efectuarse o llevarse a cabo mediante el uso de cualquiera de los distintos métodos conocidos por aquellos con experiencia en la materia. Por ejemplo, los compuestos de la reivindicación 1 pueden administrarse por vía intravenosa, intramuscular, oral y subcutánea.

En la modalidad preferida, los compuestos de la reivindicación 1 se administran por vía oral. Además, la administración puede comprender suministrar al sujeto una pluralidad de dosis durante un período adecuado de tiempo. Estos regímenes de administración se pueden determinar de acuerdo con los métodos de rutina.

Como se usa en la presente descripción una "dosis terapéuticamente eficaz" de una composición farmacéutica es una cantidad suficiente para detener, revertir o reducir el avance de un trastorno. Una "dosis profilácticamente eficaz" de una composición farmacéutica es una cantidad suficiente para prevenir un trastorno, es decir, eliminar, mejorar o demorar el inicio del trastorno. En la materia se conocen métodos para determinar las dosis terapéutica y profilácticamente eficaces de los compuestos de la reivindicación 1. Por ejemplo, la dosis eficaz para administrar la composición farmacéutica a un ser humano se puede determinar matemáticamente a partir de los resultados de estudios practicados en animales.

En una modalidad la dosis terapéuticamente y/o profilácticamente eficaz es una dosis suficiente para suministrar de aproximadamente 0.001 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 200 mg/kg de peso corporal de un compuesto de la reivindicación 1. En otra modalidad la dosis terapéutica o profilácticamente eficaz es una dosis suficiente para suministrar de aproximadamente 0.05 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal. Más específicamente, en una modalidad, las dosis por vía oral varían de aproximadamente 0.05 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg por día. En otra modalidad las dosis por vía oral varían de aproximadamente 0.05 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg por día y, en otra modalidad, de aproximadamente 0.05 mg/kg a aproximadamente 20 mg/kg por día. En aun otra modalidad, las dosis en infusión se encuentran en el intervalo de aproximadamente 1.0 mg/kg/min a aproximadamente 10 mg/kg/min de inhibidor, en mezcla con un portador farmacéutico durante un período en el intervalo de aproximadamente varios minutos a aproximadamente varios días. En otra modalidad para administrarse tópicamente, el compuesto de la invención se puede combinar con un portador farmacéutico en una relación fármaco-portador de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 0.1.

La invención proporciona, además, un método para tratar la adicción en un mamífero; el método comprende administrar una dosis terapéuticamente eficaz de un compuesto de la reivindicación 1 .

La invención proporciona, además, un método para tratar el ADHD en un mamífero; el método comprende administrar una dosis terapéuticamente eficaz de un compuesto de la reivindicación 1 .

La invención proporciona, además, un método para tratar la depresión en un mamífero; el método comprende administrar una dosis terapéuticamente eficaz de un compuesto de la reivindicación 1 .

La invención proporciona, además, un método para tratar la ansiedad en un mamífero; el método comprende administrar una dosis terapéuticamente eficaz de un compuesto de la reivindicación 1 .

La invención proporciona, además, un método para tratar la migraña en un mamífero; el método comprende administrar una dosis terapéuticamente eficaz de un compuesto de la reivindicación 1 .

Definiciones y nomenclatura A menos que se indique de cualquier otra manera, bajo la nomenclatura estándar usada en esta descripción, la porción terminal de la cadena lateral designada se describe primero, seguida por la funcionalidad adyacente hacia el punto de unión.

Como se usa en la presente invención, los siguientes términos químicos deberán tener los significados expuestos en los siguientes párrafos: "independientemente", cuando hace referencia a sustituyentes químicos, significará que cuando existe más de un sustituyente, los sustituyentes podrían ser los mismos o diferentes.

"Alquilo" significará un alquilo de cadena lineal, cíclica o ramificada. A menos que se indique de cualquier otra manera, el grupo alquilo contendrá 1 -20 átomos de carbono. A menos que se indique de cualquier otra manera, el grupo alquilo podría sustituirse, opcionalmente, con uno o más grupos tales como halógeno, OH, CN, mercapto, nitro, amino, alquilo de C C8, alcoxilo de C C8, alquiltio de C^Cs, alquil-amino de CrCs, di(CrCs-alquil)amino, (mono-, di-, tri- y per-) halo-alquilo, formilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, alquil-CO— O— de CrC8-, alquil-CO— NH— de C C8, carboxamida, ácido hidroxámico, sulfonamida, sulfonilo, tiol, arilo, aril alquilo(ci-c8), heterociclilo y heteroarilo.

"Alcoxi" significará — O-alquilo y, a menos que se indique de cualquier otra manera, tendrá 1-8 átomos de carbono.

"Halógeno" significará flúor, cloro, bromo o yodo; "PH" o "Ph" sgnificará fenilo; "Ac" significará acilo; ;;Bn" significará bencilo.

El término "acilo", como se usa en la presente invención, tanto si se usa solo o como parte de un grupo sustituyente, significa un radical orgánico con 2 a 6 átomos de carbono (cadena lineal o ramificada) derivado de un ácido orgánico por eliminación del grupo hidroxilo. El término ;tAc", como se usa en la presente invención, tanto si se usa solo o como parte de un grupo sustituyente, significa acetilo.

"Arilo" o "Ar", tanto si se usa solo o como parte de un grupo sustituyente, es un radical aromático carbocíclico que incluye, pero no se limita a, fenilo, 1 -, 2-naftilo y similares. El radical aromático carbocíclico podría sustituirse mediante el reemplazo independiente de 1 a 5 de los átomos de hidrógeno en él con halógeno, OH, CN, mercapto, nitro, amino, alquilo de C C8, alcoxilo de Ci-C8, alquiltio de C-i-C8, alquil-amino de Ci-C8, di(d-C8-alquil)amino, (mono-, di-, tri- y per-) halo-alquilo, formilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, alquil-CO— O— de Ci-C8, alquil-CO— NH— de C C8 o carboxamida. Los radicales de arilo ilustrativos incluyen, por ejemplo, fenilo, naftilo, bifenilo, fluorofenilo, difluorofenilo, bencilo, benzoiloxifenilo, carboetoxifenilo, acetílfenilo, etoxifenilo, fenoxifenilo, hidroxifenilo, carboxifenilo, trifluorometilfenilo, metoxietilfenilo, acetamidofenilo, tolilo, xililo, dimetilcarbamilfenilo y similares. "Ph" o "PH" denota fenilo.

Tanto si se usa solo o como parte de un grupo sustituyente, "heteroarilo" se refiere a un radical completamente insaturado, cíclico con de cinco a diez átomos de anillo de los cuales un átomo de anillo se selecciona de S, O y N; 0-2 átomos de anillo son heteroatomos adicionales seleccionados independientemente de S, O y N; y los átomos de anillo restantes son carbono. El radical podría unirse al resto de la molécula a través de cualquiera de los átomos de anillo. Los ejemplos de los grupos de heteroarilo incluyen, por ejemplo, piridinilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, pirroilo, pirazolilo, imidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiadiazolilo, triazolilo, triazinilo, oxadiazolilo, tienilo, furanilo, quinolinilo, isoquinolinilo, indolilo, isotiazolilo, 2-oxazepinilo, azepinilo, N-oxo-piridilo, 1 -dioxotienilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, benzotienilo, quinolinilo-N-óxido, benzimidazolilo, benzopiranilo, benzisotiazolilo, benzisoxazolilo, benzodiazinilo, benzofurazanilo, benzotiopiranilo, indazolilo, indolizinilo, benzofurilo, cromonilo, coumarinilo, cinolinilo, quinoxalinilo, indazolilo, pirrolopiridinilo, furopiridinilo (tal como furo[2,3-c]piridinilo, furo[3,2-b]piridinilo o furo[2,3-b]piridinilo), imidazopiridinilo (tal como imidazo[4,5-b]piridinilo o imidazo[4,5-c]piridinilo), naftiridinilo, ftalazinilo, purinilo, piridopiridílo, quinazolinilo, tienofurilo, tienopiridilo, tienotienilo y furilo. El grupo heteroarilo podría sustituirse mediante el reemplazo independiente de 1 a 5 de los átomos de hidrógeno en él con halógeno, OH, CN, mercapto, nitro, amino, alquilo de Ci-C8, alcoxilo de C C8, alquiltio de Ci-C8, alquil-amino de CrC8, di(Ci-C8-alquil)amino, (mono-, di-, tri-y per-) halo-alquilo, formilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, alquil-CO— O— de C C8, alquil-CO— NH— de C C8 o carboxamida. El heteroarilo podría sustituirse con un mono-oxo para dar, por ejemplo, una 4-oxo-1 H-quinoleina.

Los términos "heterociclo" y "heterocíclico" se refieren a un grupo cíclico parcial o completamente saturado opcionalmente sustituido que es, por ejemplo, un sistema anular monocíclico de 4 a 7 miembros, bicíclico de 7 a V miembros o tricíclico de 10 a 15 miembros, el cual tiene al menos un heteroátomo en al menos un anillo que contiene un átomo de carbono. Cada anillo del grupo heterocíclico que contiene un heteroátomo podría tener 1 , 2 o 3 heteroátomos seleccionados de átomos de nitrógeno, átomos de oxígeno y átomos de azufre, en donde los heteroátomos de azufre y nitrógeno podrían, además, oxidarse opcionalmente. Los átomos de nitrógeno podrían estar, opcionalmente, cuaternizados. El grupo heterocíclico podría unirse a cualquier heteroátomo o átomo de carbono.

Los grupos heterociclicos monocíclícos ilustrativos incluyen pirrolidinilo; oxetanilo; pirazolinilo; imidazolinilo; ¡midazolidinilo; oxazolilo; oxazolidinilo; isoxazolinilo; tiazolidinilo; isotiazolidinilo; tetrahidrofurilo; piperídinilo; piperazinilo; 2-oxopiperazinilo; 2-oxopiperidinilo; 2-oxopírrolidinilo; 4-piperidonilo, tetrahidropiranilo; tetrahidrotiopiranilo; tetrahidrotiopiranil sulfona; morfolinilo; tiomorfolinilo; sulfóxido de tiomorfolinilo; tiomorfolinil sulfona; 1 ,3-dioxolano; dioxanilo; tietanilo; tiiranilo; y similares. Los grupos heterociclicos bicíclicos incluyen quinuclidínilo; tetrahidroisoquinolinilo; dihidroisoindolilo; dihidroquinazolinilo (tal como 3,4-dihidro-4-oxo-quinazolinilo); dihidrobenzofurilo; dihidrobenzotienilo; dihidrobenzotiopiranilo; dihidrobenzotiopiranil sulfona; dihidrobenzopíranilo; indolinilo; isocromanilo; isoindolinilo; piperonilo; tetrahidroquinolínilo; y similares.

El arilo sustituido, heteroarilo sustituido y heterociclo sustituido podría sustituirse, además, con un segundo arilo sustituido, un segundo heteroarilo sustituido o un segundo heterociclo sustituido para dar, por ejemplo, un 4-pirazol-1 -il-fenilo o 4-piridin-2-il-fenilo.

Los números designados de átomos de carbono (p. ej. , d.8) se refieren independientemente al número de átomos de carbono en una porción alquilo o cicloalquilo, o a la porción alquilo de un sustituyente más grande en el que aparece alquilo como su raíz de prefijo.

EJEMPLOS Los compuestos de Fórmula A pueden prepararse con métodos conocidos para los experimentados en la materia. El siguiente esquema de reacción se representa solamente como un ejemplo de la invención y de ningún modo significa limitar la invención.

Esquema 1 R3B(OR)2, dioxano, Pd(PPh3)4 tolueno, 180 °C, µ\?/ o R3B(OR)2, dioxano, Pd(dppf)CI2, agua, 85 CC El Esquema 1 ilustra la ruta sintética que conduce al compuesto A. Al comenzar con 7-metoxi indanona I y siguiendo la ruta indicada por las flechas, la condensación en condiciones básicas con arilaldehídos permite obtener el bencilideno II. El bencilideno II se hace reaccionar, después, con guanidina (base libre) que da la amino pirimidina III intermedia y se oxida directamente a la cetona IV correspondiente al pasar burbujas de aire a través de la solución de N-metilpirrolidinona (NMP) básica. La desmetilación puede lograrse al calentar IV en NMP en presencia de LiCI para dar el correspondiente fenol V. El fenol V puede convertirse al triflato VI correspondiente por tratamiento con N-feniltriflimida en condiciones básicas en dimetilformamida (DMF). Finalmente, el triflato VI se hace reaccionar con ésteres borónicos de la Fórmula R2B(OR)2 para dar compuestos de la fórmula A.

El Esquema 2 ilustra la vía sintética que lleva a compuestos de la fórmula A, donde R3 es un fenilo sustituido con alquilpiperazinilo. Se empieza a partir de piperazina I, preparada de conformidad con el Esquema 1 , y se alquila con haluros de alquilo en N-metilpirrolidinona (NMP) para dar compuestos de la fórmula A.

EJEMPLO 1 2-amino-4-(4-fluoro-fenil)-9-(4-f4-(3,3,3-trifluoro-propil)-piperazin-1-in- Ejemplo 1 : etapa a 2-(4-fluoro-bencilideno)-7-metoxi-indan-1 -ona Se adicionó una solución acuosa (2 mi) de NaOH (615 mg, 15.4 mmoles), por goteo, a una solución de etanol (EtOH) ( 3 mi) de 7-metoxi-indan-1 -ona (2.0 g, 12.3 mmoles) y 4-fluoro-benzaldehído (1.4 mi, 12.9 mmoles). Se formó inmediatamente un precipitado. Se agitó vigorosamente la suspensión acuosa obtenida durante 0.5 horas. Se enfrió la suspensión acuosa en un baño de hielo, se filtró y lavó con EtOH frío. El sólido recogido se secó al vacío para dar el compuesto del título que se usó sin purificación adicional.

Ejemplo 1 : etapa b 4-(4-fluorometoxi-benciloxi)-9-fenil-5H-indeno[1 ,2-d1pirimidin-2-ilam¡na Se añadió NaOH2. (5 g, 62.5 mmoles) en polvo a una solución de EtOH (50 mi) de clorhidrato de guanidina (5.9 g, 61.6 mmoles). Después de 30 min, el cloruro de sodio se filtró y el filtrado se añadió a una suspensión de EtOH (20 mi) de 2-bencilideno-fluoro7-(4-metoxi-benciloxi)-indan-3.1 -ona (3 g, 12.3 mmoles). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante la noche. La solución homogénea se enfrió en hielo por 30 minutos y se filtró para dar el compuesto del título el cual se usó sin purificación adicional.

Ejemplo 1 : etapa c 2-am¡no-4-(4-fluorometox¡-benciloxi)-9-fenil-indeno[1 ,2-dlpir¡midin-5-ona Se adicionó NaOH en polvo (96 mg, 2.4 mmoles) a una solución de NMP (10 mi) de 4-(4-fluoro-fenil)-9-metoxi-5H-indeno[1 ,2-d]pirimidin-2-¡lamina (740 mg, 2.4 mmoles). La mezcla obtenida se calentó a 80 °C y se burbujeó aire a través de la solución. Después de 16 horas, la mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente, se añadió agua y el precipitado resultante se filtró y se lavó con agua y EtOH frío. El sólido se secó al vacio para dar el compuesto del título que se usó sin purificación adicional.

Ejemplo 1 : etapa d 2-amino-4-(4-fluoro-fenil)-9-hidroxi-¡ndeno[1 ,2-d1pirimidin-5-ona Se adicionó LiCI sólido (384 mg, 9.1 mmoles) a una solución de NMP (2.5 mi) de 2-amino-4-(4-fluoro-feníl)-9-metoxi-indeno[1 ,2-d]pirimidin-5- ona (485 mg, 1 .5 mmoles) y agua (0.05 mi), y la mezcla se calentó a 180 °c en el microondas. Después de 2 horas, la mezcla se diluyó con THF y EtOAc, se lavó con agua y salmuera, se secó (Na2S04), y se envasó seca sobre gel de sílice. La cromatografía dio el compuesto del título.

Ejemplo 1 : etapa e Ester del ácido 2-amino-4-(4-fluoro-oxo-5-fenil)-5H-indeno[1 ,2-d1pirimidin-9-il trifluoro-metanosulfónico Se adicionó f-BuOK (potasio ferc-butóxido, 877 mg, 7.8 mmoles) sólido a una solución de DMF (30 mi) de 2-amino-4-(4-fluoro-fenilo)-9-hidroxi-indeno[1 ,2-d]pinmidin-5-ona (2.0 g, 6.5 mmoles). Después de 20 minutos, se adicionó PhN(Tf)2 (fenilo bis(trifluometano)sulfonamida, 2.5 g, 6.8 mmoles) sólida. Después de 3 horas se adicionó agua y el precipitado resultante se filtró y se lavó con agua. El sólido se disolvió en THF y se empacó en seco en gel de sílice. La cromatografía de columna dio el compuesto del título.

Ejemplo 1 : etapa f 2-amino-4-(4-fluoro-fenil)-9-(4-piperaz¡n-1 -il-fenil)-indeno[1 ,2-dlpirimidin-5-ona Se adicionó Pd(dppf)CI2 (dicloro[1 ,1 '-ferrocenilbis(difenil-fosfamina)]paladio(ll), 47 mg, 0.06 mmoles) sólido a una solución de dioxano/agua (4 ml/1 mi) de 1-[4-(4,4,5,5-tetrametil-[1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-piperazina (213 mg, 0.75 mmoles), éster del ácido trifluoro-metanosulfónico 2-amino-4-(4-fluoro-fenil)-5-oxo-5H-indeno[1 ,2-d]pirimidin-9-ilo (250 mg, 0.57 mmoles), y K2C03(158 mg, 1.14 mmoles) y la mezcla se calentó a 85 °C. Después de 5 horas, la mezcla se enfrió, se diluyó con agua y el precipitado resultante se filtró. El sólido recolectado se disolvió en THF y MeOH, después, se envasó seco sobre gel de sílice. La cromatografía de columna dio el compuesto del título.

Ejemplo 1 : etapa g 2-amino-4-(4-fluoro-fen¡l)-9-(4-f4-(3,3,3-trifluoro-propil)-píperaz¡n-1 -il1-fenil)- indenoM ,2-dlpirimidin-5-ona Se adicionó 1 , 1 , 1 -trifluoro-3-yodo-propano puro a una solución de NMP (10 mi) de 2-amino-4-(4-fluoro-fenil)-9-(4-piperazin-1-il-fenil)- indeno[1 ,2-d]pirimidin-5-ona (1 .4 g, 2.7 mmoles) y /-Pr2NEt (2.3 mL, 13.3 mmoles) y la mezcla se calentó a 70 °C. Después de 16 horas, la mezcla se enfrió, se diluyó con agua y el precipitado resultante se filtró. El sólido recolectado se disolvió en THF y se envasó seco sobre gel de sílice. La cromatografía en columna dio el compuesto del título.

H NMR (CLOROFORMO-d, 300MHz): d = 8.04 - 8.13 (m, 2 H), 7.70 (dd, J=6.8, 1.5 Hz, 1 H), 7.45 - 7.59 (m, 4 H), 7.12 - 7.22 (m, 2 H), 7.00 (d, J=8.7 Hz, 2 H), 5.47 (br. s., 2 H), 3.27 - 3.37 (m, 4 H), 2.62 - 2.75 (m, 6 H), 2.28 - 2.48 ppm (m, 2 H); MS m/e 548 (M+H).

EJEMPLO 2 2-amino-4-(4-fluoro-fenil)-9-r4-(4-isobutil-piperazin-1 -il)-fenin-indenori ,2- dlpirimidin-5-ona El compuesto del título se preparó mediante el uso de 1 -yodo-2-metil-propano en lugar de 1 ,1 ,1 -trifluoro-3-yodo-propano como se describió en el Ejemplo 1 . 1H NMR (CLOROFORMO-d, 300MHz): d = 8.01 - 8.16 (m, 2 H), 7.69 (dd, J=6.6, 1.7 Hz, 1 H), 7.46 - 7.60 (m, 4 H), 7.10 - 7.23 (m, 2 H), 7.00 (d, J=9.0 Hz, 2 H), 5.48 (br. s., 2 H), 3.22 - 3.41 (m, 4 H), 2.52 - 2.68 (m, 4 H), 2.16 (d, J=7.5 Hz, 2 H), 1.84 (dt, J=13.6, 6.8 Hz, 1 H), 0.94 ppm (d, J=6.4 Hz, 6 H); MS m/e 508 (M+H).

EJEMPLO 3 2-amino-4-(4-fluoro-fenil)-9-(3-fluoro-fenil)-indenof1,2-d1pirimidin-5-ona Una solución de ácido trifluoro-metanosulfónico 2-amino-4-(4-fluoro-fenil)-5-oxo-5H-indeno[1 ,2-d]pirimidin-9-il éster (preparada como se describió en el Ejemplo 1 ) (150 mg, 0.34 mmoles), ácido 3-fluoro-fenilborónico (70 mg, 0.51 mmoles), (PPh3)4Pd (tetrakis(trifenilfosfina)paladio(O), 20 mg, 0.02 mmoles) y K2C03 (99 mg, 0.72 mmoles) en dioxano(1 mi) y tolueno (1 mi) se calentó a 180 °C por irradiación de microondas. Después de 30 minutos, la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se purificó a través de cromatografía en columna para dar el compuesto del titulo. 1H NMR (DMSO-de, 400MHz): d = 8.00 - 8.07 (m, 2 H), 7.64 -7.73 (m, 2 H), 7.58 (dd, J=5.4, 3.4 Hz, 1 H), 7.40 - 7.53 (m, 3 H), 7.29 - 7.37 (m, 2 H), 7.26 ppm (d, J=1 .2 Hz, 1 H); MS m/e 386 (M+H).

EJEMPLO 4 2-amino-9-f4-(4-bencil-piperazin-1 -il)-fenin-4-(4-fluoro-fenil)-indenof1 ,2- dlpirimidin-5-ona El compuesto del título se preparó mediante el uso de bromometil-benceno en lugar de 1 , 1 , 1 -trifluoro-3-yodo-propano, como se describió en el Ejemplo 1. 1H NMR (CLOROFORMO-d, 300MHz): d = 8.04 - 8.13 (m, 2 H), 7.69 (dd, J=6.6, 1.7 Hz, 1 H), 7.46 - 7.58 (m, 4 H), 7.33 - 7.41 (m, 4 H), 7.17 (t, J=8.9 Hz, 3 H), 6.99 (d, J=8.7 Hz, 2 H), 5.42 (br. s., 2 H), 3.61 (s, 2 H), 3.33 (t, J=4.9 Hz, 4 H), 2.58 - 2.72 ppm (m, 4 H); S m/e 542 (M+H).

EJEMPLO 5 2-amino-9-(4-r4-(1 -etil-propil)-piperazin-1 -¡n-fenil)-4-(4-fluoro-fenil)- indenofl ,2-d1pirimidin-5-ona El compuesto del título se preparó mediante el uso de 3-bromo-pentano en lugar de 1 , 1 , 1 -trifluoro-3-yodo-propano, como se describió en el Ejemplo 1 .

NMR (CLOROFORMO-d, 300MHz): d = 8.05 - 8.14 (m, 2 H), 7.69 (dd, J=6.4, 1.9 Hz, 1 H), 7.47 - 7.57 (m, 4 H), 7.12 - 7.22 (m, 2 H), 7.00 (d, J=9.0 Hz, 2 H), 5.45 (br. s., 2 H), 3.22 - 3.35 (m, 4 H), 2.72 (br. s., 4 H), 2.24 (s, 1 H), 1 .38 (d, J=7.5 Hz, 2 H), 1 .20 - 1.30 (m, 2 H), 0.94 ppm (t, J=7.3 Hz, 6 H); MS m/e 522 (M+H).

EJEMPLO 6 2-amino-9-f4-(4-sec-butH-piperazin-1 -il)-fenill-4-(4-fluoro-fenil)-indenori ,2- dlpirimidin-5-ona El compuesto del título se preparó mediante el uso de 2-bromo-butano en lugar de 1 ,1 ,1-trifluoro-3-yodo-propano, como se describió en el Ejemplo 1. 1H NMR (CLOROFORMO-d, 300MHz): d = 8.01 - 8.14 (m, 2 H), 7.69 (dd, J=6.4, 1.9 Hz, 1 H), 7.45 - 7.60 (m, 4 H), 7.1 1 - 7.22 (m, 2 H), 7.00 (d, J=9.0 Hz, 2 H), 5.47 (br. s., 2 H), 3.30 (t, J=4.9 Hz, 4 H), 2.62 - 2.82 (m, 4 H), 2.52 (br. s., 1 H), 1.61 - 1.71 (m, 1 H), 1.28 - 1.43 (m, 1 H), 1.04 (d, J=6.8 Hz, 3 H), 0.94 ppm (t, J=7.5 Hz, 3 H); MS m/e 508 (M+H).

EJEMPLO 7 2-amino-9-f4-(4-ciclopropilmetil-piperazin-1 -il)-fenil1-4-(4-fluoro-fenil)- indenoH ,2-d1pirimidin-5-ona El compuesto del título se preparó mediante el uso de bromometil-ciclopropano en lugar de 1 , ,1 -trifluoro-3-yodo-propano, como se describió en el Ejemplo 1 . 1H NMR (CLOROFORMO-d, 300MHz): d = 8.02 - 8.14 (m, 2 H), 7.70 (dd, J=6.8, 1 .9 Hz, 1 H), 7.47 - 7.59 (m, 4 H), 7.12 - 7.22 (m, 2 H), 7.01 (d, J=8.7 Hz, 2 H), 5.44 (br. s., 2 H), 3.31 -3.43 (m, 4 H), 2.68 - 2.86 (m, 4 H), 2.38 (br. s., 2 H), 0.88 - 1.02 (m, 1 H), 0.51 - 0.65 (m, 2 H), 0.13 -.21 ppm (m, 2 H); MS m/e 506 (M+H).

EJEMPLO 8 2-amino-4-(4-fluoro-fenil)-9-(4-f4-(2-metoxi-etil)-piperazin-1 -in-fenil)- indenofl ,2-d1pirimidin-5-ona El compuesto del título se preparó mediante el uso de 1 -bromo-2-metoxi-etano en lugar de 1 , 1 ,1 -trifluoro-3-yodo-propano, como se describió en el Ejemplo 1 . 1H NMR (CLOROFORMO-d, 300MHz): d = 8.04 - 8.15 (m, 2 H), 7.70 (dd, J=6.8, 1 .9 Hz, 1 H), 7.47 - 7.59 (m, 4 H), 7.13 - 7.22 (m, 2 H), 7.00 (d, J=9.0 Hz, 2 H), 5.47 (br. s. , 2 H), 3.61 (t, J=5.5 Hz, 2 H), 3.39 (s, 3 H), 3.32 - 3.38 (m, 4 H), 2.65 - 2.86 ppm (m, 6 H); MS m/e 510 (M+H).

EJEMPLO 9 2-amino-4-(4-fluoro-fenil)-9-f4-(4-isopropil-piperazin-1 -il)-fenill- indenoM ^-dlpirimidin-S-ona El compuesto del título se preparó mediante el uso de 2-yodo-propano, en lugar de 1 , 1 , 1 -trifluoro-3-yodo-propano, como se describió en el Ejemplo 1. 1H NMR (CLOROFORMO-d, 300MHz): d = 8.03 - 8.14 (m, 2 H), 7.69 (dd, J=6.4, 1.9 Hz, 1 H), 7.47 - 7.59 (m, 4 H), 7.1 1 - 7.22 (m, 2 H), 7.01 (d, J=8.7 Hz, 2 H), 5.43 (br. s., 2 H), 3.28 - 3.39 (m, 4 H), 2.74 (br. s., 4 H), .52 - 1.65 (m, 1 H), 1.13 ppm (d, J=6.4 Hz, 6 H); MS m/e 494 (M+H).

EJEMPLO 10 4-r2-amino-4-(4-fluoro-fenil)-5-oxo-5H-indenori ,2-d1pirimidin-9-il1- benzonitrilo El compuesto del título se preparó mediante el uso de ácido 4-ciano-fenilborónico en lugar de ácido 3-fluoro-fenilborónico, como se describió en el Ejemplo 3. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz): d = 8.06 - 8.14 (m, 2 H), 7.96 (d, J=8.3 Hz, 2 H), 7.88 (d, J=8.3 Hz, 2 H), 7.76 - 7.82 (m, 2 H), 7.64 - 7.71 (m, 1 H), 7.40 ppm (t, J=8.9 Hz, 2 H); MS m/e 393 (M+H).

EJEMPLO 11 2-amino-4-(4-fiuoro-fenil)-9-{4-f4-(3-metil-butil)-piperazin-1 -ill-fenil>- indenoH ,2-d1pirim¡din-5-ona El compuesto del título se preparó mediante el uso de 1 -yodo-3-metil-butano en lugar de 1 , 1 , 1 -trifluoro-3-yodo-propano, como se describió en el Ejemplo 1 . 1H NMR (CLOROFORMO-d, 300MHz): d = 8.01 - 8.14 (m, 2 H), 7.69 (dd, =6.6, 1.7 Hz, 1 H), 7.44 - 7.59 (m, 4 H), 7.12 - 7.22 (m, 2 H), 7.01 (d, J=9.0 Hz, 2 H), 5.46 (br. s., 2 H), 3.29 - 3.36 (m, 4 H), 2.61 - 2.70 (m, 4 H), 2.40 - 2.48 (m, 2 H), 1 .41 - 1 .51 (m, 2 H), 1.21 - 1.30 (m, 1 H), 0.94 ppm (d, J=6.8 Hz, 6 H); MS m/e 522 (M+H).

EJEMPLO 12 2-amino-9-r4-(4-etil-piperazin-1 -il)-fenill-4-(4-fluoro-fenil)-indenof1 ,2- dlpirimidin-5-ona El compuesto del titulo se preparó mediante el uso de yodo-etano en lugar de 1 , 1 , 1 -trifluoro-3-yodo-propano, como se describió en el Ejemplo 1. 1H NMR (CLOROFORMO-d, 300MHz): d = 8.03 - 8.14 (m, 2 H), 7.69 (dd, =6.6, 1.7 Hz, 1 H), 7.52 (dt, J=8.9, 6.1 Hz, 4 H), 7.12 - 7.21 (m, 2 H), 7.01 (d, J=8.7 Hz, 2 H), 5.45 (br. s., 2 H), 3.27 - 3.40 (m, 4 H), 2.61 - 2.73 (m, 4 H), 2.44 - 2.58 (m, 2 H), 1.16 ppm (t, J=7.3 Hz, 3 H); MS m/e 480 (M+H).

EJEMPLO 13 2-amino-4-(4-fluoro-fenil)-9-f4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenil1-indenof1 ,2- dTpirimidin-5-ona El compuesto del título se preparó mediante el uso de ácido 4-(2-morfolinoetoxi)fenilborónico en lugar de 1 -[4-(4,4,5,5-tetrametil-[ 1 ,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-piperazina como se describió en el Ejemplo 1 . 1 H NMR (CLOROFORMO-d, 300MHz): d = 8.00 - 8.18 (m, 2 H), 7.72 (d, J=7 Hz, 1 H), 7.42 - 7.61 (m, 4 H), 7.10 - 7.23 (m, 2 H), 6.93 - 7.06 (m, 2 H), 5.43 (br. s., 2 H), 4.21 (t, J=5.7 Hz, 2 H), 3.73 - 3.82 (m, 4 H), 2.87 (t, J=5.7 Hz, 2 H), 2.57 - 2.68 ppm (m, 4 H); MS m/e 497 (M+H).

EJEMPLO 14 2-amino-4,9-difenil-indenof112-dlpirimid»n-5-ona El compuesto del título se preparó mediante el uso de ácido borónico en lugar de ácido 3-fluoro-fenilborónico, como se describió en el Ejemplo 3. 1H NMR (DMSO-d6l 400MHz): d = 7.88 - 7.96 (m, 2 H), 7.41 -7.73 ppm (m, 12 H); MS m/e 350 (M+H).

EJEMPLO 15 2-amino-4-(4-fluoro-fenil)-9-f4-(4-propil-piperazin-1-il)-fen¡n-indenof1 ,2- d1pirimidin-5-ona F El compuesto del título se preparó mediante el uso de 1 -yodo-propano, en lugar de 1 ,1 , 1 -trifluoro-3-yodo-propano, como se describió en el Ejemplo 1. 1H NMR (CLOROFORMO-d, 300MHz): d = 8.04 - 8.13 (m, 2 H), 7.69 (dd, J=6.8, 1.9 Hz, 1 H), 7.47 - 7.58 (m, 4 H), 7.12 - 7.22 (m, 2 H), 6.96 -7.04 (m, 2 H), 5.44 (br. s., 2 H), 3.28 - 3.38 (m, 4 H), 2.60 - 2.70 (m, 4 H), 2.34 -2.44 (m, 2 H), 1.51 - 1.64 (m, 2 H), 0.95 ppm (t, J=7.3 Hz, 3 H); MS m/e 494 (M+H).

EJEMPLO 16 2-amino-4-(4-fluoro-fenil)-9-m-tolil-indenof1 ,2-dTpirimidin-5-ona El compuesto del título se preparó mediante el uso de ácido 3-metil-fenilborónico en lugar de ácido 3-fluoro-fenilborónico, como se describió en el Ejemplo 3. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz): d = 7.99 - 8.08 (m, 2 H), 7.63 -7.71 (m, 2 H), 7.52 - 7.60 (m, 1 H), 7.38 - 7.46 (m, 2 H), 7.29 - 7.38 (m, 3 H), 7.24 (d, J=7.6 Hz, 1 H), 2.40 ppm (s, 3 H); MS m/e 382 (M+H).

EJEMPLO 17 2-amino-9-(4-metoxi-fenil)-4-fenil-indenof1 ,2-d1pirimidin-5-ona El compuesto del titulo se preparó mediante el uso de ácido 4-metoxi-fenilborónico en lugar de ácido 3-fluoro-fenilborónico, como se describió en el Ejemplo 3. 1H NMR (DMSO-d6, 400MHz): d = 7.93 (dd, J=B.3, 1 .5 Hz, 2 H), 7.46 - 7.69 (m, 9 H), 6.99 - 7.05 (m, 2 H), 3.84 ppm (s, 3 H); MS m/e 380 (M+H).

Ensayos y actividad biológica Ensayo de unión de liqandos para el receptor de adenosina A?A.

El ensayo de unión de ligandos del receptor de adenosina A2A se realizó por medio del uso de una membrana plasmática de células HEK293 que contenía el receptor de adenosina A2A (PerkinElmer, RB-HA2A) y el radioligando [3H]CGS21680 (PerkinElmer, NET1021 ). El ensayo se realizó en una placa de polipropileno de 96 pocilios en un volumen total de 200 µ? por la adición secuencial de 20 µ? de membrana diluida 1 :20, 130 µ? de amortiguador de ensayo (50 mM Tris HCI, pH 7.4, 10 mM MgCI2 1 mM, EDTA) que contenía [3H] CGS21680, 50 µ? del compuesto diluido (4X) o vehículo de control en el amortiguador de ensayo. Se determinó la unión no especifica con 80 mM de ÑECA. La reacción se realizó a temperatura ambiente por 2 horas antes del filtrado a través de una placa de filtro GF/C de 96 pocilios remojada previamente en Tris HCI 50 mM, pH 7.4 que contenía 0.3 % de polietilenimina. Después, las placas se lavaron 5 veces con Tris HCI 50 mM frío, pH 7.4, se secaron y sellaron en el fondo. Se añadió 30 pl de fluido de microcentelleo en cada pocilio y la parte superior se selló. Las placas se contaron en un contador Packard Topcount para [3H], La información se analizó en los programas Microsoft Excel y GraphPad Prism. (Varani, K.; Gessi, S.; Dalpiaz, A.; Borea, P.A. Britísh Journal of Pharmacology, 1996, 1 17, 1693) Ensayo funcional del receptor de adenosina A?A (A?AGAL2) Para comenzar el ensayo funcional se descongelaron células CHO-K1 criopreservadas que sobreexpresaban el receptor de adenosina A2A humana y contenían un gen reportero de la beta-galactosidasa inducible por cAMP, se centrifugaron, se eliminó el medio que contenía DMSO y, después, se sembraron con medio de cultivo fresco en placas tratadas con cultivo de tejido de 384 pocilios transparentes (BD núm. 353961 ) a una concentración de 10K células/pocilio. Antes del ensayo, estas placas se cultivaron por dos días a 37 °C, CO2 al 5 %, 90 % de humedad relativa. El día del ensayo funcional se eliminaron los medios de cultivo y se reemplazaron con 45 µ? del medio del ensayo (Ham/F-12 Modified (Mediatech, núm. 10-080CV) suplementado con BSA al 0.1 %). Los compuestos de prueba se diluyeron y se crearon curvas de 1 1 puntos a una concentración de 1000x en 100 % de DMSO. Inmediatamente después de la adición del medio de ensayo a las placas de células, se adicionaron a las placas de células 50 ni de las curvas de control del antagonista o agonista del compuesto de prueba adecuado por medio del uso de un Cartesian Hummingbird. Las curvas del compuesto se dejaron incubar a temperatura ambiente en las placas de célula por aproximadamente 15 minutos antes de la adición de un reto con agonista ÑECA 15 nM(S¡gma E2387) (volumen 5 µ?). Además, en cada placa se incluyó una curva de control de ÑECA, un control DMSO/medio y una sola dosis de Forskolin (Sigma F3917). Después de las adiciones, las placas de células se dejaron incubar a 37 °C, C02 al 5 %, 90 % de humedad relativa por 5.5 - 6 horas. Después de la incubación, el medio se eliminó, y las placas de células se lavaron 1 x 50 µ? con DPBS sin Ca & Mg (Mediatech 21 -031 -CV). En pocilios secos, se adicionó 20 µ? de amortiguador x Repórter Lysis (Promega E3971 (diluido en dH2O a partir de materia prima 5x)) a cada pocilio y las placas se congelaron a -20 °C durante la noche. Para el ensayo colorimétrico de la enzima ß-galactosidasa, las placas se descongelaron a temperatura ambiente y se adicionó a cada pocilio 20 µ? de amortiguador de ensayo 2X (Promega). El color se dejó desarrollar a 37 °c, 5 % de CÜ2, 90 % de Rh durante 1 - 1.5 horas o hasta que apareció una señal razonable. La reacción colorimétrica se detuvo con la adición de 60 pL µ?/pocíllo de carbonato sódico 1 M. Las placas se contaron a 405 nm en un Lector de microplaca SpectraMax (Molecular Devices). Los datos se analizaron en Microsoft Excel y las curvas de IC/EC50 se ajustaron con una macro estándar.

Ensayo funcional del receptor de adenosina A1 (A1 GAL2) Para comenzar el ensayo funcional se descongelaron células CHO-K1 criopreservadas que sobreexpresaban el receptor de adenosina A1 humana y contenían un gen reportero de la beta-galactosidasa inducíble por cAMP, se centrifugaron, se eliminó el medio que contenía DMSO y después se sembraron con medio de cultivo fresco en placas tratadas con cultivo de tejido de 384 pocilios transparentes (BD núm. 353961 ) a una concentración de 10K células/pocilio. Antes del ensayo, estas placas se cultivaron por dos días a 37 °C, C02 al 5 %, 90 % de humedad relativa. El día del ensayo funcional se eliminaron los medios de cultivo y se reemplazaron con 45 µ? del medio del ensayo (Ham/F-12 Modified (Mediatech, núm. 10-080CV) suplementado con BSA al 0.1 %). Los compuestos de prueba se diluyeron y se crearon curvas de 1 1 puntos a una concentración de 1000x en 100 % de DMSO. Inmediatamente después de la adición del medio de ensayo a las placas de células, se adicionaron a las placas de células 50 ni de las curvas de control del antagonista o agonista del compuesto de prueba adecuado por medio del uso de un Cartesian Hummingbird. Las curvas del compuesto se dejaron incubar a temperatura ambiente en las placas de células por aproximadamente 15 minutos antes de la adición del reto con agonista r-PIA 4 nM (Sigma P4532)/1 uM forescolina (Sigma F3917) (volumen 5 pl). Además, en cada placa se incluyó una curva de control de r-PIA en 1 uM Forskolin, un control DMSO/medio y una sola dosis de Forskolin. Después de las adiciones, las placas de células se dejaron incubar a 37 °C, C02 al 5 %, 90 % de humedad relativa por 5.5 - 6 horas. Después de la incubación, el medio se eliminó, y las placas de células se lavaron 1 50 pl con DPBS sin Ca & Mg (Mediatech 21 -031 -CV). En pocilios secos, se adicionó 20 µ? de amortiguador 1x Repórter Lysis (Promega E3971 (diluido en dH20 a partir de materia prima 5x)) a cada pocilio y las placas se congelaron a - 20 °C durante la noche. Para el ensayo colorimétrico de la enzima ß-galactosidasa, las placas se descongelaron a temperatura ambiente y se adicionó a cada pocilio 20 µ? de amortiguador de ensayo 2X (Promega). El color se dejó desarrollar a 37 °C, 5 % de C02l 90 % de Rh durante 1 - 1 .5 horas o hasta que apareció una señal razonable. La reacción colorimétrica se detuvo con la adición de 60 pL µ?/pocillo de carbonato sódico 1 M. Las placas se contaron a 405 nm en un Lector de microplaca SpectraMax (Molecular Devices). Los datos se analizaron en Microsoft Excel y las curvas de IC/EC50 se ajustaron con una macro estándar.

Datos del ensayo de A?A LOS compuestos de la Fórmula A mostraron selectividad sorprendente e inesperada para A2A sobre antagonismo del receptor A1.

Ejemplo A2AGal2( M) A1 Gal2( M) A1 /A2A 1 0.0018 5.5 3055.56 2 0.0071 4.2 591.549 3 0.026 8.9 342.308 4 0.01 3.1 310 5 0.023 4.2 182.609 6 0.0098 1.4 142.857 7 0.0083 1 .1 131 .69 8 0.0018 0.23 127.778 9 0.016 1 .8 1 12.5 10 0.0026 0.27 103.846 1 1 0.01 1 1 .1 100 12 0.01 0.76 76 13 0.0039 0.27 69.2308 14 0.0086 0.57 66.2791 15 0.0087 0.52 59.7701 16 0.031 1.8 58.0645 17 0.0063 0.33 52.381 Aunque la especificación anterior enseña los principios de la presente invención con ejemplos provistos para fines de ilustración, se entenderá que la práctica de la invención abarca todas las variaciones, adaptaciones o modificaciones usuales que entran dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones y sus equivalentes.

Todas las publicaciones descritas en la descripción anterior se incorporan en su totalidad como referencia en la presente descripción.

Claims (16)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES:

1.- Arilindenopirimidinas de la Fórmula A: en donde: X es C=0; R2 es fenilo; R4 es NH2; y R3 es arilo; las arilindenopirimidinas de la Fórmula A se seleccionan del grupo que consiste en: ?? ?? 60 62 y solvatos, hidratos, tautómeros y sales farmacéuticamente aceptables de estos;

2 - Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 1 y un portador farmacéuticamente aceptable.

3. - El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , para preparar un medicamento para tratar a un sujeto que tiene un trastorno que se mejora por la antagonización de los receptores de adenosina A2A en células adecuadas en el sujeto.

4. - El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , para preparar un medicamento para prevenir un trastorno que se mejora por la antagonización de los receptores de adenosina A2A en células adecuadas en un sujeto; en donde el medicamento es adaptado para ser administrare ya sea antes o después de un evento que se piensa causará un trastorno que se mejora por la antagonización de los receptores de adenosina A2A en las células adecuadas en el sujeto.

5. - El uso como se reclama en la reivindicación 3, en donde el medicamento comprende una dosis terapéutica o profilácticamente eficaz de la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 2.

6. - El uso como se reclama en la reivindicación 4, en donde el medicamento comprende una dosis terapéutica o profilácticamente eficaz de la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 2.

7. - El uso como se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno es un trastorno neurodegenerativo o un trastorno motor.

8. - El uso como se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno se selecciona del grupo que consiste en enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, atrofia sistémica múltiple, degeneración corticobasal, enfermedad de Alzheimer, o demencia senil.

9. - El uso como se reclama en la reivindicación 4, en donde el trastorno es un trastorno neurodegenerativo o un trastorno motor.

10. - El uso como se reclama en la reivindicación 4, en donde el trastorno se selecciona del grupo que consiste en enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, atrofia sistémica múltiple, degeneración corticobasal, enfermedad de Alzheimer, o demencia senil.

11 . - El uso como se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno es la enfermedad de Parkinson.

12. - El uso como se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno es la adicción.

13. - El uso como se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno es la hiperactividad y el déficit de atención (ADHD).

14. - El uso como se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno es la depresión.

15. - El uso como se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno es la ansiedad.

16. - El uso como se reclama en la reivindicación 3, en donde el trastorno es la migraña.