MX2010012931A - Metodos para tratar una enfermedad asociada con quinesina meiotica. - Google Patents

Metodos para tratar una enfermedad asociada con quinesina meiotica.

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Abstract

La invención provee métodos para tratar una enfermedad asociada con cinasa meiótica, preferiblemente HSET de cinasa meiótica, administrando un inhibidor de la cinasa meiótica. Preferiblemente, la enfermedad está asociada con la presencia de centrosomas supernumerarios, tales como cáncer. También se proveen métodos para inhibir el crecimiento de una célula tumoral poniendo en contacto a la célula con un inhibidor de una cinasa meiótica, preferiblemente HSET. También es proveen métodos para seleccionar sujetos para el tratamiento con un inhibidor de una cinasa meiótica, tal como HSET.

Description

le, W.L. et al. (1998) Proc Nati Acad Scí USA ; Pihan, G.A. efc al. (2003) Cáncer Res 63: 1398-ción o mala regulación de una variedad de supr r u oncogenes está relacionada con la amplifi rosomas (Fukasawa, K. (2007) Nat Rev Cáncer 7: mplificación de centrosomas puede, en principi varios tipos de errores de división eduplicación de centrosomas, síntesis de rosomas, fusión celular, o falla de citoquinesis 1929) The Origin of Malignant Tumors (Baltimore: Wilkins) ; Ganem, NJ. et al. (2007) Curr Opin 157-162; Nigg, E.A. (2002) Nat Rev Cáncer 2: 815-8 El papel de los centrosomas supernumerari ogia de tumor probablemente será multifacético . múltiples centrosomas pueden facilitar la tumo oviendo la aneuploidía y/o interrumpiendo la El agrupamiento de centrosomas en células ncompletamente entendido, sin embargo, se espera do a un grado significativo en las proteínas microtúbulos (MAPs) y motores que organizan los s (Karsenti, E. and Vernos, I. (2001) Science Nigg, E.A. (2002) Nat Rev Cáncer 2:815-8 plo, recientes trabajos no cubrieron un requeri ína citoplásmica, un motor de microtúbulo dir emo menos (MT) , y NuMA, una MAP asociada con hus pamiento de centrosomas (Quintyne, NJ. et al nee 307 : 127-129) . La existencia de mecani imen la mitosis multipolar aumenta la posibilid a. estrategia terapéutica para cáncer: los fár rfieren con los mecanismos de agrupamiento de ce án ser letales para células de tumor que iples centrosomas, pero potencialmente evitan BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención identifica un compone lucrado en el mecanismo de agrupamiento de centr las de tumor y demuestra que el desagrupam rosomas, por inhibición de este componente, pued muerte celular selectivamente en células con ce rnumerarios . Este componente clave, la tica HSET (un miembro de la familia de quinesin sencial para la mitosis en células normales estra en la presente que es esencial rvivencia de células de cáncer con centrosomas consiguiente, la presente invención propor tivo de aniquilación selectiva de células que rosomas extras, tales como células de cáncer, a la aniquilación de células normales .
Por consiguiente, en un aspecto, la rnumerarios) . En otra modalidad preferida, la e astorno es una enfermedad proloferativa celular, er o malignidad. Preferiblemente, la quinesina un miembro de la familia de quinesina-eriblemente HSET. Los ejemplos de agentes adecú bir la quinesina meiótica incluyen agentes d culas pequeñas. En una modalidad, el agente i vidad de ATPasa de la quinesina. En otra moda te inhibe la actividad de enlace de microtúbul esina. El agente se puede administrar, por mente o parenteralmente .
En otro aspecto, la invención pertenece a inhibir el crecimiento de una célula de tumor e roliferación celular está asociada con una tica, que comprende poner en contacto la célula un agente el cual inhibe una quinesina meiótica ia de tumor se puede poner en contacto con el ag pio, cultivando la célula de tumor con el etamente inyectando el agente en un tumor que co ia. de tumor o administrando el agente a un s a un tumor que contiene la célula de tumor.
En otro aspecto, la invención pertenece a inhibir la proliferación de una célula en la iferación celular está asociada con una tica, que comprende poner en contacto la célul te el cual inhibe una quinesina meiótica de mo bición de la proliferación celular se logra, lidad preferida, la célula contiene ce rnumerarios . Preferiblemente, la quinesina meiót bro de la familia de quinesina-14 , muy prefer . Los ejemplos de agentes adecuados para in esina meiótica incluyen agentes de AR i y i uesto de prueba; y determinar la actividad de la quinesina en la presencia del compuesto de prueba, en cción de la actividad de la quinesina meiótica H encia de un compuesto de prueba, en comparació vidad de la quinesina meiótica HSET en la aus uesto de prueba, identifica el compuesto de pr compuesto que inhibe la actividad de una tica HSE .
En una modalidad preferida, la cor cadora se pone en contacto con cada miembro ioteca de compuestos de prueba y uno o más comp ba dentro de la biblioteca se seleccionan de ben la actividad de la quinesina meiótica HSET.
En una modalidad, la actividad de la tica HSET se determina midiendo la actividad de método para seleccionar un sujeto con un tu amiento con un agente el cual inhibe una tica, el método comprende (i) obtener una mu la. de tumor del sujeto , y (ii) determinar el rosomas en la muestra de célula de tumor, en encia de centrosomas supernumerarios en la mu la de tumor selecciona al sujeto para tratamien te el cual inhibe una quinesina eriblemente , la quinesina meiótica es un miemb lia de quinesina-14 , muy probablemente eriblemente, al menos 50% de las células de tu tra contienen centrosomas supernumerario eriblemente al menos 75% de las células de turn tra contienen centrosomas supernumerarios y eriblemente al menos 90% de las células de turn tra contienen centrosomas supernumerarios. tica de ARNi de EFGP o Mad2 más tratamiento con M La Figura 3 es una gráfica de barras del p élulas S2 con husos anormales en el tratami uculina (LatA) , Citocalasina D o Concanavalina-A La Figura 4 es una gráfica de barras del p élulas con husos multipolares en células MCF-7, s 4N o N1E-115 en el tratamiento con DMS0, LatA o La Figura 5 es un análisis Western blot qu eplecion de HSET después de tres días de ARNsi e 231 y MCF-7.
La Figura 6 es un análisis Western blot qu epleción de MyolO después de tres días de ias MDA-231 y MCF-7.
La Figura 7 es una gráfica de barras que m entaje de células con husos multipolares en célu -231 en el tratamiento con ARNsi de HSET o MyolO uerte celular inducida por ARNi de HSET en vari lares de cáncer en proporción a la fracción d centrosomas extras .
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La presente invención identifica un c e. involucrado en el mecanismo de agrupam rosomas en células de tumor. La presente ionalmente demuestra que el desagrupami rosomas puede inducir la muerte celular selectiv ias con centrosomas supernumerarios . En al m lidad, la presente invención se basa, al menos i descubrimiento que la quinesina meiotica HSET, uinesina normalmente no esencial, es requerida ilidad de células que contienen centrosomas ex iples centrosomas en células de tumor crean el bición de HSET que conduce a la inhibició ilidad celular (ver en particular Ejemplos 6 y enté) . Por consiguiente, el hallazgo descrit enté que el motor dirigido al extremo menos cial para el agrupamiento de cromosomas orciona una nueva estrategia terapéutica: blo pamiento de centrosomas y promover la mitosis m inducir selectivamente la muerte en tumores con orción de células que contienen centrosomas múlt enté invención proporciona ensayos para identi tes que modulan la actividad de una quinesina t como HSET, así como también métodos par rmedades o trastornos asociados con la acti esina meiótica, y métodos para seleccionar suj amiento con un inhibidor de quinesina meiótica.
De modo que la invención puede ser más f esina-14, la familia comparte un dominio de inal común que difiere de otras proteínas de q amilia de quinesina-14 también es conocida en las quinesinas C-terminales . Los ejemplos no l los miembros de la familia de quinesina-14 eínas Homo sapiens HSET, CH02 , KIFC2 y KIFC3 , musculus HSET y KIFC2 , proteína Drosophila mel y proteína Saccharomyces cerevisiae Kar3.
El término "HSET" se refiere a un miemb lia quinesina-14 también conocido en el arte c mbro de la familia de quinesina Cl) . Las secu y proteína de HSET humano están disponibles e de Acceso. NM_002263 y NP_002254, respectivam encias de AR m y proteína de HSET de rat onibles en Genbank Nos. de Acceso. NM_053173 y N ectivamente. Una secuencia de HSET humano pued ompara con secuencias de aminoácido de HSET cie (por ejemplo, murino) . En ciertos casos, o puede ser al menos 95%, o aún al menos 96%, % idéntica en secuencia de aminoácido con HSE como Genbank Número de Acceso NP_002254. En lidades, una secuencia de HSET humano exhibirá iferencias de aminoácidos de la secuencia de HSE como Genbank Número de Acceso NP_002254. En lidades, el HSET humano puede exhibir no más de ás de 4, 3, 2, o 1 diferencia de aminoáci encia de HSET humano, tal como Genbank Número 02254.
El término "trastorno o enfermedad asoc esina meiótica" se propone que se refiera a un fermedad de la patogénesis la cual requiere la na quinesina conocida por funcionar en meiosis. rosomas en una célula, típicamente más del núm os centrosomas en una célula.
El término "trastorno o enfermedad prol lar" se propone que se refiera a un tra rmedad de la patogénesis la cual está asociad iferación celular alterada o aberrante.
Como se usa en la presente, un agente o "inhibe la actividad" de una quinesina meiótica, , se propone que se refiera a un agente o comp ce, o decrece, o disminuye la actividad de la tica, la inhibición puede ser parcial o comple e tal "actividad" puede ser, por ejemplo, expr que codifica la quinesina en una célula, expr l de proteínas de la quinesina en una célula, o tales actividades enzimáticas y otras b uyendo, pero no se limita a, actividad de tancia" , y "compuesto" se pueden cambiablemente .
Como se usa en la presente, un ácido isentido" comprende una secuencia de nucleótid lementaria con un ácido nucleico "sentido" que proteína, por ejemplo, complementaria a l ficante de una molécula de ADNc de doble lementaria a una secuencia de ARNm o complement na codificante de un gen. Por consiguiente, eico antisentido puede enlazar con hidrógeno a eico sentido.
Como se usa en la presente, un "agente de ere a un agente, tal como una molécula de ácido media la interferencia de ARN. La interferenci i) es una técnica de silenciamiento de gen -transcripcional que usa ARN de doble cadena (AR o 22-nucleótidos de largo, llamados AR s o rferencia pequeña. Los segmentos de ARN má ees median la degradación del ARNm objetivo, síntesis de ARNsi están comercialmente disponi io de New England Biolabs, Dharmacon o Amb iguiente, en una modalidad, un "agente de ARNi eula de ácido nucleico que es una molécula d S ejemplos de moléculas de ácido nucleico que para silenciar la expresión de genes vía inte RN incluyen ARN de horquilla corta (ARNsh) y mi) . Por consiguiente, el término "agente ién se propone que abarque moléculas tales co i y similares, que se pueden usar para sile esión de genes por interferencia de ARN.
Como se usa en la presente, el término uye cualquier animal humano o no humano . El torno asociado con quinesina meiótica. El rende administrar a un sujeto en necesidad de tr gente el cual inhibe una quinesina meiótica de ratamiento de la enfermedad o trastorno se logra.
Preferiblemente, la enfermedad o trastorn rmedad o trastorno autosomal . Más preferiblem rmedad o trastorno es una enfermedad o rosomal . Aún más preferiblemente, la enfe torno es una enfermedad o trastorno prol lar. Muy preferiblemente, la enfermedad o trasto er, tumor u otra malignidad. Preferiblemente, e r u otra malignidad es una en la cual el las c er, tumor o malignas comprenden ce rnumerarios . Más preferiblemente, al menos 50 las de cáncer, tumor o malignas comprenden ce rnumerarios , aún más preferiblemente al menos 7 Otras enfermedades o trastornos asociado ulación de centrosomas supernumerarios incluyen virus de papiloma humano (HPV) , incluyendo n icas asociadas con VIH (ver, por ejemplo, Due Munger, K. (2002) Oncogrene 21:6241-6248) .
Preferiblemente, la quinesina meiótica bro de la familia quinesina-14. Más preferiblen esina meiótica es HSET.
Cualquier agente que inhibe la activida esina meiótica, por ejemplo, HSET, y que es adec uso en el sujeto se puede usar en los mé amiento de la invención. En una modalidad pref te es un agente de ARNi, tal como un AR si. ribe en detalle en los Ejemplos 6 y 8, fue demos inhibidores ARNsi de HSET humano reducen la viab rsas lineas celulares de cáncer diferentes. Los ile en la presente. En una modalidad, el agente idad de ATPasa de la quinesina. En otra modal te inhibe la actividad de enlace de microtúbul sina .
Un agente de la invención típicamente se a ujeto en una composición farmacéutica. La admin or cualquier ruta adecuada para realizar el tr do . Por ejemplo, en una modalidad, el a istra oralmente. En otra modalidad, el a istra parenteralmente.
La composición farmacéutica típicamente in e formulado conjuntamente con un céuticamente aceptable. Las composiciones farm ueden administrar en terapia de combinación, e nadas con otros agentes . Como se usa en la ador farmacéuticamente aceptable" incluye todo s condiciones naturales que pueden inactivar el a La composición farmacéutica puede incluir s farmacéuticamente aceptables . Una acéuticamente aceptable" se refiere a una sal qu ctividad biológica deseada del compuesto progen rte algunos efectos toxicológicos no deseados ( pio, Berge, S.M., et al. (1977) J. Pharm. Sci . ejemplos de tales sales incluyen sales de ad o y sales de adición de base. Las sales de a o incluyen aquellas derivadas de ácidos inorg cos, tales como clorhídrico, nítrico, f úrico, bromhídrico, yodhídrico, fosforoso y s como también de ácidos orgánicos no tóxicos t os alifáticos mono- y dicarboxílieos , ácidos a ituidos con fenilo, ácidos hidroxi alcanoicos áticos, ácidos sulfónicos alifáticos y arom oxidantes solubles en agua, tales como ácido a hidrato de cisteína, bisulfato de sodio, metabis O, sulfito de sodio y similares; (2) anti bles en aceite, tales como palmitato de a oxianisol butilado (BHA) , hidroxitolueno butila tina, propil galato, alfa-tocoferol , y similare tes quelantes metálicos, tales como ácido cítri endiamin tetraacético (EDTA) , sorbitol, ácido t o fosfórico, y similares.
Los ejemplos de portadores acuosos y no uados que se pueden emplear en las comp acéuticas incluyen agua, etanol, polioles (ta erol, propilenglicol , polietilenglicol , y simil las adecuadas de los mismos, aceites vegetale aceite de oliva, y ásteres orgánicos inyectabl oleato de etilo. La fluidez apropiada se puede i usión de varios agentes antibacterianos y anti ejemplo, parabeno, clorobutanol , ácido fenol asc lares. También puede ser deseable incluir ónicos, tales como azúcares, cloruro de a lares en las composiciones. Además, la ongada de la forma farmacéutica inyectable ár por la inclusión de agentes que retardan la como monoestearato de aluminio y gelatina.
Los portadores farmacéuticamente a uyen soluciones o dispersiones acuosas estériles riles para la preparación extemporánea de sol ersiones inyectables estériles. El uso de tales tes para sustancias farmacéuticamente activas es l arte. Excepto hasta donde cualquier medio encional sea incompatible con el compuesto activ mismo en las composiciones farmacéuticas plo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, ilenglicol, y polietilenglicol líquido, y simi las adecuadas de los mismos. La fluidez apro e mantener, por ejemplo, por el uso de un revé como lecitina, por el mantenimiento del t ícula requerido en el caso de dispersión y por Íoactivos. En muchos casos, será preferible tes isotónicos, por ejemplo, azúcares, poli s como manitol, sorbitol, o cloruro de sodi osición. La absorción prolongada de las comp ctables se puede causar incluyendo en la compo te que retrasa la absorción, por ejemplo, estearato y gelatina.
Las soluciones inyectables estériles s arar incorporando el compuesto activo en la erida en un solvente apropiado con uno o una cor ingrediente activo más cualquier ingrediente ional de una solución previamente filtrada est 0.
La cantidad de ingrediente activo que inar con un material portador para producir una ficación única variará dependiendo del sujeto ado, y el modo de administración particular. La ngrediente activo que se puede combinar con un dor para producir una forma de dosificaci ralmente será aquella cantidad de la composi ce un efecto terapéutico. Generalmente, fuera d ciento, esta cantidad variará desde aproximadam ciento a aproximadamente noventa y nueve por c diente activo, preferiblemente desde aproximada ciento a aproximadamente 70 por cien riblemente desde aproximadamente 1 por c composiciones parenterales en forma unit ficación para la fácil administración y unifor ficación. La forma unitaria de dosificación com a presente se refiere a unidades físicamente uadas como dosificaciones unitarias para los su tratados; cada unidad contiene una eterminada de compuesto activo calculada para pr to terapéutico deseado en asociación con el acéutico requerido. La especificación de la arias de dosificación de esta descripción se di etamente dependiente de (a) las característica compuesto activo y el efecto terapéutico parti ogra, y (b) las limitaciones inherentes en el osición tal como un compuesto activo para el tr ensibilidad en individuos.
Los niveles de dosificación actuales de administración, el tiempo de administra eidad de excreción del compuesto particular ea, la duración del tratamiento, otros uestos y/o materiales usados en combinación osiciones particulares empleadas, la edad, sec ición, salud general e historial médico pr ente que es tratado, y factores similares bien as artes médicas.
Una composición farmacéutica se puede adt una o más rutas de administración usando uno o m edad de métodos conocidos en el arte. Como será el artesano experto, la ruta y/o modo de admin ar dependiendo de los resultados deseados. Las nistración preferidas incluyen oral, int amuscular, intradérmica, intraperitoneal , su nal u otras rutas de administración parentera Los compuestos activos se pueden prep adores que protegerán el compuesto contra l da, tal como una formulación de liberación co uyendo implantes, parches transdérmicos , y sis nistro microencapsulados . Se pueden usar ompatibles, biodegradables , tales como ace envinilo, polianhídridos , ácido poliglicólico, ortoésteres , y ácido poliláctico. Muchos método aración de tales formulaciones son paten ralmente conocidos por aquellos expertos en el a ejemplo, Sustained and Controlled Reléase Drug ems, J.R. Robinson, ed. , Marcel Dekker, Inc., Las composiciones terapéuticas se nistrar con dispositivos médicos conocidos en ejemplo, una composición terapéutica se puede ad ositivo terapéutico para administrar medican és de la piel; la Patente de Estados Un 7,233, la cual describe una bomba de inf camentos para suministrar medicamentos a una vel sión apropiada; la Patente de Estados Un 7,224, la cual describe un aparato de antable de flujo variable para suministro de inuo; la Patente de Estados Unidos No. 4,439,196 ribe un sistema osmótico de suministro de fá e compartimientos de cámaras múltiples; y la P dos Unidos No. 4,475,196, la cual describe un s nistro osmótico de fármaco. Estas patentes se i la presente para referencia. Muchos otros ii emas de suministro, y módulos se conocen por rtos en el arte .
En ciertas modalidades, las comp os o células específicas, mejorando así el sumi aco dirigido (ver, por ejemplo, V.V. Ranade ( . Pharmacol. 29:685). Las porciones de plares incluyen folato o biotina (ver, por nte de Estados Unidos 5,416,016 de Low et al); zawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. 1038); anticuerpos (P.G. Bloeman et al. (1995) F 140; M. Owais et al. (1995) AntimicroJ . Agents C 80) ; receptor de proteína A tensioactivo (Brisco 5) Am. J. Physiol. 1233:134) ; pl20 (Schreier 4) J. Biol. Chem. 269 : 090) ; ver también K. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123; J.J. Kill er (1994) Immunomethods 4:273. ición del Crecimiento o Proliferación Celular En otro aspecto, la invención pertenece a muy preferiblemente HSET. El agente puede plo, un agente de ANi, una molécula antisenti cula pequeña, como se describió en detalle adici riormente . En una modalidad, el agente i vidad de ATPasa de la quinesina. En otra moda te inhibe la actividad de enlace de microtúbul esina .
La célula de tumor se puede poner en con gente, por ejemplo, cultivando la célula de tum te. Adicionalmente o alternativamente, la célula puede poner en contacto con el agente i ctamente el agente en un tumor que contiene la r. Adicionalmente o alternativamente, la célula uede poner en contacto con el agente administ te a un sujeto que porta un tumor que contiene umor .
El agente puede ser, por ejemplo, un agente molécula antisentido o una molécula pequeña, ribió con detalle adicionalmente anteriormente lidad, el agente inhibe la actividad de ATPa esina. En otra modalidad, el agente inhibe la nlace de microtúbulos de la quinesina.
La célula se puede poner en contacto con e ejemplo, cultivando la célula con el ionalmente o alternativamente, la célula se pu ontacto con el agente inyectando directamente un tumor que contiene la célula. Adiciona rnativamente , la célula se puede poner en contac te administrando el agente a un sujeto que ios de Selección uesto de prueba; y determinar la actividad de la quinesina en la presencia del compuesto de prueba, en cción de la actividad de la quinesina meiótica H encia del compuesto de prueba, en comparació vidad de la quinesina meiótica HSET en la aus uesto de prueba, identifica el compuesto de pr compuesto que inhibe la actividad de una tica HSET.
La composición indicadora puede ser, por célula que contiene (es decir, expresa) HSE osición libre de células que contiene HSET osición indicadora es una célula que contiene ( esa) HSET, puede ser una célula que expresa nat o una célula que se ha modificado genéticam pio, por técnica de ADN recombinante estándar la huésped, usando técnicas de ADN rec ndares. Para obtener HSET en una composición las, HSET se puede purificar usando métodos con rte. Por ejemplo, DeLuca, J. G. et al. (2001) . 276 : 28014-28012 describen la purificación o de células HeLa. Los anticuerpos anti-HSE rito en el arte, los cuales se pueden usar para por técnicas de inmunoafinidad estándares.
La etapa de "puesta en contacto" del mét render, por ejemplo, incubación del compuesto una célula que contiene (es decir, expresa) bación del compuesto de prueba con una composic élulas que contiene HSET.
La etapa de "determinación de la activid esina meiótica HSET" se puede realizar usando u na variedad de posibles "lecturas". Por ejemplo endo los niveles de protelna de HSET en una cé esa HSET, en donde un compuesto de prueba es un a actividad de HSET si reduce el nivel de exp eína de HSET en comparación con el nivel en la os compuestos de prueba. Las metodologías para les de proteína de HSET están bien establecid , incluyendo pero no limitado a análisis ester dos de inmunoprecipitación.
En todavía otras modalidades, la actividad etermina midiendo una o más actividades enzim ógicas de HSET. Por ejemplo, el HSET purifica strado que produce deslizamiento de microtúbulo microtúbulos estabilizados por Taxol se ponen en HSET purificado (ver DeLuca, J.G. et al. (2001) . 276 : 28014-28021) . Por consiguiente, en una m fecto de un compuesto de prueba en el deslizam vada por microtúbulos usado para identifi bidores de la quinesina mitótica Eg5. De manera ensayo de ATPasa activada por microtúbulos se p HSET purificado para determinar el efecto de un prueba en la actividad de ATPasa de HS iguiente, en una modalidad, la actividad de la tica HSET se determina midiendo la actividad de uinesina .
Otras actividades biológicas de HSET que como "lecturas" en la determinación del efec iesto de prueba en la actividad de HSET incluyen, imitan a, actividad de enlace de microtúbulos y grupamiento de centrosomas. Por consiguiente, lidades, la actividad de la quinesina meiótica rmina midiendo la actividad de enlace de micro vidad de agrupamiento de centrosomas de la quines comprende un gen HSET operativamente enlaza otor, bajo condiciones por las cuales el gen esa en la célula indicadora; (b) poner en con ia indicadora con un compuesto de prueba; rminar el efecto del compuesto de prueba en 1 lar y detención del crecimiento inducida por e la atenuación de la muerte celular y dete imiento inducida por HSET en la presencia del rueba, en comparación con la muerte celular y crecimiento inducida por HSET en la ause uesto de prueba, identifica el compuesto de pr compuesto que inhibe la actividad de la tica, HSET. En una modalidad, el promotor es un cible. Cualquier sistema promotor inducible reco rte se considera, incluyendo pero no limita ema inducible de ecdisona (ver, por ejemplo, En una modalidad preferida, una bibli estos se selecciona en el ensayo de selecci ción para identificar los compuestos dentr ioteca que exhiben la actividad para inhibir la SET. Por consiguiente, en una modalidad prefe osición indicadora descrita anteriormente se acto con cada miembro de una biblioteca de comp ba y uno o más compuestos de prueba dentr ioteca que inhiben la actividad de la quinesina se seleccionan.
En todavía otro aspecto, la invención pe uestos aislados identificados por métodos de sel nvención . ios Para Seleccionar Sujetos En otro aspecto, la invención pertenece eto, la invención proporciona un método para se ujeto con un tumor para tratamiento con un agent be una quinesina meiótica, el método compr ner una muestra de célula de tumor del sujeto rminar el número de centrosomas en la muestra tumor, en donde la presencia de ce rnumerarios en la muestra de célula de tumor s ujeto para tratamiento con un agente que in esina meiótica. Los métodos para determinar lo entrosomas en células son bien conocidos en el en aplicar a este método de selección de suje pio, los centrosomas se pueden manchar fluoresc do un anticuerpo de anti-gamma tubulina y un a ndario fluorescentemente etiquetado, segui ación de imagen por fluorescencia para cuanti ro de centrosomas por célula (descrito adiciona contienen centrosomas supernumerarios .
La presente invención adicionalmente se il siguientes ejemplos, los cuales no se deberán limitantes adicionalmente. Los contenidos de t encias, entradas de Genbank, patentes y solici te publicadas citadas en toda esta solic poran expresamente en la presente para referenc lidad. lo 1 : Identificación de objetivos terapéuticos miento enfermedades o trastornos asociados con ica En este ejemplo, una selección de ARNi se definir comprehensivamente las trayectorias mo ridas para el agrupamiento de ce numerarios . De 8 líneas celulares D genes cuya interferencia genética conduce ipolares (desagrupamiento de centrosomas) en cé células S2 se expusieron a A ds por 4 días y la ticas fueron enriquecidas por tratamiento con proteasoma G132 durante las últimas 9 h amiento con AR i . Las células fueron manchadas túbulos (MTs) y centrosomas, y las imágene iridas con un objetivo 20X, usando un mi atizado de alto rendimiento.
Más específicamente, las células S2 cadas en placas a una densidad de 1 x 104 célula edio Schneider libre de suero en placas de 384 fueron pre-colocadas en placas con 0.25 g de A s están disponibles en el Centro de Selección ophila, DRSC, http: //flyrnai .org) . Las célula adas con ARNds por 40 minutos a temperatura evas placas de 384 cavidades que fueron pre-r Concanavalina A (Con-A, 0.25 mg/ml) , y las plac das a 1,000 rpm por 1 minuto. Las células fuero % paraformaldehído (PFA) en PBS (pH 7.2), permea PBS-Triton 0.01% (PBST), incubadas con 0.5% SDS ntenidas en PBST a 4°C hasta proceder al inmunoma Para la selección primaria, las células on manchadas para MTs y centrosomas con FITC-lina (DM1A, 1:300, Sigma) y anticuerpos a lina de ratón (GTU88, 1:500), respectivamente. n de mono Alexa Fluor 568 o 594 fue utiliz cuerpos secundarios (1:1000). Las células hadas para ADN con Hoechst 33342 (1:5000, Invit y almacenadas en la misma solución a 4°C.
Para la selección primaria, las célula adas en imagen usando un microscopio automatizad enes fueron adquiridas del plano focal único les (Hoechst, Cy3 , y FITC) .
La selección secundaria fue realizada en cavidades (1 de ARNds/cavidad para 5 las/cavidad) y siguió casi la misma metodología cción primaria. Al final de ARNi, las célula sferidas a placas de fondo de vidrio de 96 tman) para formación de imagen de alta resoluc ias fueron manchadas adicionalmente para identi las mitóticas con fosfo-histona H3 anti-conej -conejo de mono Alexa Fluor 660. Para ase ación de imagen de todos los centrosomas, imá on tomadas con un microscopio Zeiss Axiovert y ebrook (Intelligent Imaging Inovations, Den do un objetivo EL D aéreo 40X (Zeiss) con t emento de 1 m. La altura (punto inicial y f Tabla 1 : Resumen de Resultados de Selecció élulas S2¦ l Seleccionados 23, eterminado (# husos <10) Strado como acierto en la selección primaria 70 rtos probados de la selección primaria 29 rtos totales después de la selección secundaria 133 ( rtos con homólogos de mamífero 82 ( Usando un intervalo de confidencia de cción primaria identificó 701 candidatos asociad tipo de huso multipolar. 292 genes fueron sele cohorte inicial para estudio adicional con ba entración del fenotipo, la existencia de hom fero fácilmente identificables , y pocos o tos fuera de objetivo predichos . Adicionalm ría de los genes que fueron previamente determin genes) tienen homólogos de mamífero, mientras qu genes (44) no tienen una función conoc amiento de centrosomas puede ocurrir con e da. Las siguientes clases de defectos nguidas: husos bipolares con múltiples ce rsados alrededor del huso, husos multiastrales OS multipolares grandes.
La selección identificó genes involucrado so intervalo de procesos celulares, sugiri ejidad no apreciada en los mecanismos que cont ización de centrosomas supernumerarios, inclu o de genes que promueven el agrupamiento de MTs ejemplo, la quinesina dirigida al extremo menos o) . La selección también identificó genes en erados . El descubrimiento de genes requeridos a, polaridad celular y adhesión celular sugiri lo 2 : El punto de verificación del montaje de h iene la mitosis multipolar Los componentes de SAC Mad2 , BubRl (Bubl -Meta (CENP-E humano) son requeridos para agrupa osomas . La Figura 2 ilustra que Mad2 es reque amiento de centrosomas . Los defectos de agrupa rosomas fueron registrados en células S2 en AR i y EGFP o Mad2 más 7 horas de tratamiento con ica de la Figura 2 muestra el promedio rimentos independientes (media ± Sd, *p<0.05; ** a t de Student) .
Los resultados mostrados en la Figura 2 i i para el SAC en el proceso de agrupami rosomas . Este requerimiento fue aún más rele las que no fueron tratadas con MG132, indicand amiento corto con MG132 empleado en la etados con GFP-SAS-6 y mCherry a-tubulina, exi elación clara entre un número incrementado de ce tiempo prolongado se requirió para formar lar (2.7 veces). El intervalo entre NEBD y com se fue medido (visüalizado con GFP-Cid, Drosoph omparando las células con 2 o >2 centroso ción a las células con 2 centrosomas, las cél iples centrosomas exhibieron un retraso marca nzo de anafase (1.8 veces). Además, el retra enzo de anafase fue abolido por AR i de Mad2, ias entraron a anafase con centrosomas desagr etocoros mal alineados. Adicionalmente sugir aci n de SAC, los husos de preanafase mul ron un fuerte incremento en el número de focos ción a los husos de metafase bipolares. Finaln erimiento para que el SAC prevenga la mitosis m ?? 3 : Las fuerzas de agrupamiento de polo ínseco previenen la mitosis multipolar El trabajo previo en células S2 ha demos 1 crítico para motores MT y MAPs en el enfoque d (Goshima, G. et al. (2005) J Cell Biol 171 les-Mulia, S. and Scholey, J.M. (2005) Mol B 176-3186) . La selección descrita en el Ej tificó Ncd, un miembro de la familia de quin el acierto más fuerte en la selección primaria otor dirigido al extremo menos que agrupa MT s de huso (Karabay, A. and Walker, R.A. emistry 3_8: 1838-1849) . Mediante el etiquetado 6, fue demostrado que Ncd es requerido para iples centrosomas. Dineína Drosophila no fue ide a selección. Esto es esperado debido a que en c érdida de dineína no induce significativamente l de huso. Un requerimiento para Bjl/RCCl (RanGE amiento de centrosomas fue identificado, consis apel en la prevención de mitosis multipolar en c fero (Chen, T . et al. (2007) Nat Cell Biol 9: papeles para los factores de ribosilación irasa y CG15925, un homólogo PARP-16 humano ién fueron identificados (Schreiber, V. et al. ( Mol Cell Biol 7:517-528) . La ribosilación de irasa se piensa que contribuye a la bipolaridad rcionando una matriz estática que puede ancla otras proteínas de huso (Chang, P. et al. (2 Biol 7: 1133-1139) . Un papel de PARP-16 en la m descrito previamente. lo 4 : Las Fuerzas dependientes de Actina Re ipolaridad de Huso ulas pequeñas que interrumpen el citoesqueleto nera similar inducen la mitosis multipolar.
Más específicamente, las células fueron Latrunculina (40 µ? LatA) , Citocalasina D (20 µ y el porcentaje de defectos de agrupami osomas fue determinado. Los resultados se muestr a 3 , la cual demuestra el requerimiento squeleto de actina para agrupamiento de centro as S2. La gráfica muestra el promedio imentos independientes (media ± SD, *p<0.05; * a t de Student) .
Además, la formación de imagen de células as S2 reveló que la actina, en efecto, es reque agrupamiento inicial de centrosomas múltipl ión a los controles (14.7 + 6.4 min) , existió u .5 veces en el agrupamiento de centrosomas valente soluble (Con-A) , la cual retícula la men a y por consiguiente bloquea globalmente la co ical (Canman, J.C. and Bement, W.M. (1997) J Cel 16) : 1907-1917) . El porcentaje de defe amiento de centrosomas después del tratamiento determinado. Los resultados también se muestr a 3 , la cual demuestra que el tratamiento c e los defectos de agrupamiento de centrosomas.
Además, fue encontrado que el mejoramien actilidad con base en miosina puede supr ipolaridad del huso. Las bajas concentraci ulina A (CA) inhiben la fosfatasa de cadena 1 ina (MLCP) y promueven la activación de miosina ar su distribución (Gupton, S.M. and Waterma (2006) Cell 125: 1361-1374) . Las células stre tratadas con CA tuvieron una disminución m das de Ncd o Bjl/RCCl resultó en un i natorial en la multipolaridad de huso. Para onalmente esta idea, se utilizó microscopía orio a intervalo regular para definir la trayec iento de centrosomas en células S2 agotadas de aste a las células de control, los centro as agotadas de Ncd exhibieron un incremento de ovilidad; tanto la velocidad como el grado de ra n incrementados. Además, el volumen del movim osomas fue dirigido lejos del huso y hacia la ar. La movilidad de centrosomas en células ago fue severamente disminuida por exposición témpor as a LatA, demostrando un requerimiento de act fuerzas de empuje cortical. Por consiguie as corticales colaboran con las fuerzas de agr so intrínseco para organizar centrosomas múltipl ) Trends Cell Biol 15:533-539; Toyoshima, da, E. (2007) EMBO J 26: 1487-1498; Weber, K.L ) Nature 431 : 325-329) . ARNi de MyolOA pero no na yo7 que contiene MyTH4 -FERM Drosophila i mento de 2 veces en los defectos de agrupam osomas sin falla de citoquinesis (Eggert, U.S. ) PLoS Biol 2, e379) . Adem s, la interferencia olOA no tiene un efecto aditivo en la multipola si las células fueron concomitantemente trat Finalmente, el rastreo de centrosomas de das de MyolOA reveló un efecto similar en el m entrosomas como el tratamiento con L tA; en das de MyolO, solamente movimientos aléat emente reducidos de centrosomas fueron detec aste con el movimiento corticamente dirigido ado en células agotadas de Ncd. Conjuntamente, osornas : Turtle, Echinoid, Cad96Ca, CG33171, y ína Fitl que contiene dominio FERM Drosophil una función altamente conservada en la regulaci ión de matriz celular en eucariotas mayores ( et al. (2000) J Cell Biol 150:253-264; Tu, Y ) Cell 113:37-47). El homólogo Fitl de mamífe KHCI humano, localiza a adhesiones focales (F tante para la adhesión celular mediada por int ación de la forma celular enlazando las integ squeleto de actina (Tu, Y. et al. (2003) Cell La proteína CG33171 no caracterizada tiene homo A de mamífero, previamente implicado en la regu dhesión de matriz celular (Dixelius, J. et al r Res 62:1944-1947; ickstrom, S.A. et al., Chem 27 : 20178-20185) . Los dominios tipo nectina que contienen Turtle y Echinoi s, U. et al. (2001) Annu Rev Genet 35 : 747- o de estos genes previamente se ha identificado querimiento para mantenerla adhesión y forma ce fase normales. En efecto, el tratamiento con ción de MyolO no mostró mejoramiento polaridad del huso cuando se combina con la depl ínas CG33171, Fitl, Crumbs , Cornetto, o trando que estos genes influyen en el agrupam osomas via el citoesqueleto de actina. ío 6 ; Conservación de los mecanismos para is multipolar A continuación se determinó si las cél r de mamífero utilizan mecanismos similares para osomas múltiples como se observó en las células hecho para establecer la relevancia de la sel (5 µ?) o Dihidrocitocalasina B (DCB) (10 µ? . La línea celular MCF-7 contiene 2 centrosomas las otras líneas celulares contienen más osomas. Los resultados se muestran en la Figu ca muestra el promedio de tres exp endientes (media ± SD, *p<0.05; **p<0.005; ** a t de Student) . Como se ilustra en la Figu rupción de actina temporal condujo a un i ficativo en la frecuencia de los husos multipo s celulares que contienen centrosomas múltiples élulas con número de centrosomas normal. Est polares resultan del desagrupamiento de ce s y no fueron debido a la división/fragment ióles. La actina presumiblemente influye ionamiento de centrosomas vías las fuerzas les. Consistente con esta idea, el tratami e . Los grupos mezclados (grupos ON-TARGETPLUS y ferentes oligos de ARNsi contra HSET humano, Myo olO de ratón fueron comprados de Dharmacon. ra HSET de ratón fue comprado de Ambion. rdenado no específico fue utilizado como ion) . La secuencia oligo de los ARNsi se eriormente en la Tabla 2.
Tabla 2. Secuencia oligo de ARNsi Secuencia Oligo 5' -3' ARNsi ID# humano UAACUGACCCUUUAAGÜCCUU J-004958-06 AGUGUUGÜGCGCUCUGÜCCUU J-004958-07 GACACAAGCACGCAAGÜUCUU J-004958-08 ÜGGUCCAACGUUUGAGUCCUU J-004958-09 0 humano CAAGUUGAGAUUUAUGUCCUU J-007217-05 UAAGACAUCAGCUACGACGUU J-007217-06 UAAUCUACAAUUCUCCCGCUU J-007217-07 AUUCCCUGAAAUUUCCÜCCUU J-007217-08 de ratón GGCUAAUAAGAAGUGAAG 11 287750 GGAACUGAAGGGCAAUAUCtt 287751 GGCCAUUAACAGCAGUCUG 11 287752 0 n AG - 2 - rn blot que muestran la deplecion de HSET (Figu (Figura 6) después de tres días de AR si en 31 y MCF-7. La Figura 7 es una gráfica de ba ra el porcentaje de células con husos multipo as MCF-7 o MDA-231 en el tratamiento con ARNsi . Los resultados mostrados en la Figura 7 demues RNsi de MyolO y HSET de homólogo Ncd (un mi sina-14) incrementó la frecuencia de multip íficamente en células que albergan múltiples ce decir, células) MDA-231. Como en las células polaridad inducida por MyolO no es una consecu lia de citoquinesis .
Finalmente, se determinó si el citoesqu a cortical influye en la organización de centro elo con las fuerzas de agrupamiento de polo nseco, por tratamiento con ARNsi de HSET o ío 7 ; Adhesión, forma celular de ínterfase y polar Aunque las células se reúnen en la rvan una memoria de su forma de interfase reteñí s de retracción (RFs) que contienen actina enl s de fuerte adhesión de matriz celular (Mitchis ) Cell Motil Cytoskeleton 22:135-151; Thery, ns, M. (2006) Curr Opin Cell Biol 18:648-657). E dhesión de interfase y la distribución de enen actina se conoce que influyen fuertement tación del huso durante la mitosis (Thery, M. ) Nature 447:493-496; Thery, M. et al. (2005) 2:947-953). El hallazgo de la selección que is multipolar requiere tanto genes de adhesión ar como reguladores de actina, sugirió una hipó ción: estos productos de genes podrán sumió una forma alargada o polarizada en la in uniformemente sufrió divisiones bipolares. En co células MDA-231 que asumieron una forma redond fase tuvieron una frecuencia incrementada de ± polares. Segundo, en las células BSC-1 tetra RFs gruesas son fácilmente visualizadas por f agen de DIC, se señaló que una fuerte correlaci sicionamiento de las RFs y si las células sufri ión bipolar (distribución bipolar de RFs) o mu ribución isotrófica de RFs) . Tercero, las RFs ínas específicas, tal como la proteína ERM ez s son implicadas en la heterogeneidad cortica guiente la generación de fuerza local en MTs a terrupción de esta heterogeneidad cortical cort hibidor de cinasa src PP2 (Thery, M. et al. (2 Biol 7:947-953), también indujo husos multipo mentando la contractilidad cortical (Gupton, man-Storer, CM. (2006) Cell 125:1361-1374) .
Para probar directamente el papel del p ión celular y posicionamiento de RF en el agr entrosomas, la impresión de micro-contacto de zada para manipular los patrones de adhesión y, M. et al. (2005) Nat Cell Biol 7:947-9 as MDA-231 colocadas en placas sobre micropat de Y y en forma de O tuvieron un i ficativo (3-4 veces) de husos multipol ración con los controles. En contraste, la coloc s de células en micropatrones en forma de H sup encia de husos multipolares con relación a las ntrol (2%, la mitad del control) . Por consiguie los en O e Y de contactos adhesivos desvía las itosis multipolar mientras que los arreglos bipo ío 8 : Interrupción del agrupamiento de centroso selectivamente células de cáncer En principio, la interrupción del agrupam osomas podrá tener un efecto selectivo en la v élulas de cáncer que contienen múltiples ce o a que la mayoría de las células somáticas ti osomas durante la mitosis. Como una primera eta valuación de esta estrategia terapéutica poten minó la sensibilidad de diferentes líneas celu r a la interferencia genética de HSET.
HSET es un objetivo terapéutico partic esante debido a que es no esencial para la ar en células normales y las quinesinas son sen hibición de molécula pequeña (Mayer, T.U. et a ce Z86.971 -974; Mountain, V. et al. (1999) J 51-366) . La depleción de HSET por A si cond 100% de las células contienen centrosomas gelman, B.M. et al. (1979) Cell 16:253-2 tado similar fue obtenido con células MDA-231 d élulas contienen centrosomas extras {24% despu ción de HSET) y con células BJ y NIH-3T3 tet centrosomas extras. En contraste, la inte ica de HSET no tuvo efecto en la división célula dad de células de control diploides.
La Figura 9 ilustra la pérdida de v ar e inhibición de formación de colonias por 15 después de 6 días de ARNsi HSET. La Figura 9 mero de células relativas en control y células SET ( -HSET) de tres experimentos independientes is días post-transfección (panel izquierdo) y e lonias promedio de dos experimentos independien entes áreas (panel derecho; área = post- transíección con AR si. El porcentaje de más de 2 centrosomas se indica posteriorment ca. La gráfica muestra el promedio de tres expe endientes. Todas las gráficas representan med 0.005, ***p<0.001, prueba t de Student guiente, la muerte celular inducida por depl en varias líneas celulares de cáncer en p imada a la fracción de células que contienen ce s. En contraste, la viabilidad de células que m dos centrosomas fue solamente ligeramente red sencia de HSET. Por consiguiente, el desagrupam osomas puede inducir la muerte celular selectiva as con centrosomas supernumerarios .

Claims (1)

REIVINDICACIONES . Un método para tratar una enfermedad o t ado con quinesina meiótica, caracterizado ende administrar a un sujeto en necesi miento un agente el cual inhibe una quinesina do que el tratamiento de la enfermedad o tras . . Método de conformidad con la reivindica terizado porque la enfermedad o trastorno medad o trastorno autosomal . . El método de conformidad con la reivindic terizado porque la enfermedad o trastorno medad o trastorno centrosomal . . El método de conformidad con la reivindic terizado porque la enfermedad o trastorno medad o trastorno proliferativo celular. ~ . El método de conformidad con la reivindic terizado porque el agente es un agente de AR i. 0. El método de conformidad con la reivindic terizado porque el agente inhibe la actividad d quinesina. 1. El método de conformidad con la reivindic terizado porque el agente inhibe la actividad d crotúbulos de la quinesina. 2. El método de conformidad con la reivindic terizado porque el agente se administra oralment 3. El método de conformidad con la reivindic terizado porque el agente se administra parenter . Un método para inhibir el crecimiento de un umor en la cual la proliferación celular está una quinesina meiótica, caracterizado porque en contacto la célula de tumor con un agente - terizado porque la quinesina meiótica es HSET. 8. El método de conformidad con la reivindica terizado porque el agente es una molécula pequeñ 9. El método de conformidad con la reivindica terizado porque el agente es un agente de ARNi. 0. El método de conformidad con la reivindica terizado porque el agente inhibe la actividad d quinesina. 1. El método de conformidad con la reivindica terizado porque el agente inhibe la actividad crotúbulos de la quinesina. 2. El método de conformidad con la reivindica terizado porque la puesta en contacto ción directa del agente en el tumor. 3. Un método para inhibir la proliferación de u a cual la proliferación celular está asociada - ~ milia de quinesina-14. 6. El método de conformidad con la reivindica terizado porque la quinesina meiotica es HSET. 7. El método de conformidad con la reivindica terizado porque el agente es una molécula pequeñ 8. El método de conformidad con la reivindica terizado porque el agente es un agente de ARNi . 9. El método de conformidad con la reivindica terizado porque el agente inhibe la actividad d quinesina. 0. El método de conformidad con la reivindica terizado porque el agente inhibe la actividad crotúbulos de la quinesina. 1. Un método para identificar un compuesto que idad una quinesina meiotica HSET, caracterizad todo comprende : a, identifica el compuesto de prueba como un c nhibe la actividad de una quinesina meiótica HSE 2. El método de conformidad con la reivindica terizado porque la composición indicadora se cto con cada miembro de una biblioteca de compu a y uno o más compuestos de prueba dentro oteca se seleccionan de modo que inhiben la acti iinesina meiótica HSET. 3. El método de conformidad con la reivindica terizado porque la actividad de la quinesina se determina midiendo la actividad de ATPas sina . 4. El método de conformidad con la reivindica terizado porque la actividad de la quinesina se determina midiendo la actividad de en túbulos de la quinesina. - ier una muestra de células de tumor del sujeto, minar el número de centrosomas en la muestra d tumor, en donde la presencia de ce numerarios en la muestra de células de tumor se jeto para tratamiento con un agente el cual in sina meiótica. 8. El método de conformidad con la reivindica terizado porque la quinesina meiótica es un mi milia de quinesina-14. 9. El método de conformidad con la reivindica terizado porque la quinesina meiótica es HSET. 0. El método de conformidad con la reivindica terizado porque al menos 50% de las células de uestra de células de tumor contienen ce numerarios .
1. El método de conformidad con la reivindica
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Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9486449B2 (en) 2007-10-09 2016-11-08 Malka COHEN-ARMON Cancer therapy
EA201071422A1 (ru) * 2008-05-30 2011-08-30 Дана-Фарбер Кэнсер Инститьют Инк. Способы лечения заболеваний, связанных с мейотическим кинезином
AU2013234955A1 (en) 2012-03-23 2014-11-13 Dennis Brown Compositions and methods to improve the therapeutic benefit of indirubin and analogs thereof, including meisoindigo
US20150309031A2 (en) * 2013-12-05 2015-10-29 Novazoi Theranostics Compositions and methods for prognosis and treatment of cancer
US9589100B2 (en) * 2014-02-28 2017-03-07 Novazoi Theranostics Method for determining the risk profile of neoplastic tissue
CN113456633A (zh) * 2021-06-11 2021-10-01 广西医科大学 红海海绵素a在制备抗肺癌侵袭转移药物中的应用
IL314200A (en) 2022-01-10 2024-09-01 Merck Patent Gmbh Heterocycles are being converted as HSET inhibitors
CN115327125A (zh) * 2022-07-14 2022-11-11 宁波大学 一种蛋白质inf2在制备肝癌诊断标志物中的应用
WO2024099898A1 (en) 2022-11-07 2024-05-16 Merck Patent Gmbh Substituted bi-and tricyclic hset inhibitors

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4475196A (en) * 1981-03-06 1984-10-02 Zor Clair G Instrument for locating faults in aircraft passenger reading light and attendant call control system
US4447233A (en) * 1981-04-10 1984-05-08 Parker-Hannifin Corporation Medication infusion pump
US4439196A (en) * 1982-03-18 1984-03-27 Merck & Co., Inc. Osmotic drug delivery system
US4522811A (en) * 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4447224A (en) * 1982-09-20 1984-05-08 Infusaid Corporation Variable flow implantable infusion apparatus
US4487603A (en) * 1982-11-26 1984-12-11 Cordis Corporation Implantable microinfusion pump system
US4486194A (en) * 1983-06-08 1984-12-04 James Ferrara Therapeutic device for administering medicaments through the skin
US4596556A (en) * 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US5374548A (en) * 1986-05-02 1994-12-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor
MX9203291A (es) * 1985-06-26 1992-08-01 Liposome Co Inc Metodo para acoplamiento de liposomas.
US4790824A (en) * 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
US4941880A (en) * 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US5108921A (en) * 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
US5064413A (en) * 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US5312335A (en) * 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5383851A (en) * 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US6410254B1 (en) * 1999-05-18 2002-06-25 Cytokinetics Compositions and assays utilizing ADP or phosphate for detecting protein modulators
WO2000063353A1 (en) * 1999-04-20 2000-10-26 Cytokinetics Human kinesins and methods of producing and purifying human kinesins
US7202051B1 (en) * 1999-05-18 2007-04-10 Cytokinetics, Inc. Compositions and assays utilizing ADP or phosphate for detecting protein modulators
US7416856B2 (en) * 1999-05-18 2008-08-26 Cytokinetics, Inc. High sensitivity assay for detection of nucleoside diphosphate production
US6743599B1 (en) * 1999-05-18 2004-06-01 Cytokinetics, Inc. Compositions and assays utilizing ADP or phosphate for detecting protein modulators
WO2002078639A2 (en) * 2001-03-29 2002-10-10 Bristol-Myers Squibb Company A method of treating proliferative diseases using eg5 inhibitors
US20040009156A1 (en) 2001-10-12 2004-01-15 Christoph Reinhard Antisense therapy using oligonucleotides that target human kinesin genes for treatment of cancer
US7163927B2 (en) * 2002-05-23 2007-01-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of kinesin-like 1 expression
US20050100508A1 (en) * 2003-11-12 2005-05-12 Nichols M. J. Methods for identifying drug combinations for the treatment of proliferative diseases
US20070026424A1 (en) * 2005-04-15 2007-02-01 Powell Charles A Gene profiles correlating with histology and prognosis
US20080051463A1 (en) * 2006-08-04 2008-02-28 Aeterna Zentaris Gmbh Anthracene compounds and their use for treating benign and malignant tumor disorders
WO2008015265A1 (de) * 2006-08-04 2008-02-07 Æterna Zentaris Gmbh Anthracen-derivate und deren verwendung zur behandlung gutartiger und bösartiger tumorerkrankungen
US20100145131A1 (en) * 2007-05-01 2010-06-10 Helena Grinberg-Rashi Methods and kits for predicting cancer metastasis
EA201071422A1 (ru) 2008-05-30 2011-08-30 Дана-Фарбер Кэнсер Инститьют Инк. Способы лечения заболеваний, связанных с мейотическим кинезином

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