MX2008013592A - Induccion de perdida de peso e inhibicion selectiva de la proteina tirosina fosfatasa 1b. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere al uso del compuesto 1436 para la inducción de pérdida de peso en un mamífero obeso.

Description

INDUCCION DE PERDIDA DE PESO E INHIBICION SELECTIVA DE LA PROTEI A TIROSINA FOSFATASA 1B CAMPO DE LA INVENCION Esta solicitud se dirige al uso de un compuesto 1436 para la inducción de pérdida de peso en un mamífero obeso.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Varios compuestos de aminoesterol han sido aislados del hígado del tiburón cazón Squalus acanthias. Uno de estos compuestos ha sido designado como 1436, cuya estructura se muestra en la fórmula 1 . El compuesto 1436 se ha descrito previamente, por ejemplo, en las patentes de E.U.A. 5,763,430; 5,795,885; 5,847,172; 5,840,936 y 6,143,738, cada una de las cuales se incorpora en su totalidad, y ha demostrado inhibir la ganancia de peso y suprimir el apetito, lo cual lleva a la pérdida de peso, en modelos de animales. La obesidad es un problema médico importante en los Estados Unidos e incrementa en el resto de los países desarrollados. La causa es principalmente el efecto de un estilo de vida sedentario y una dieta rica en grasas. Los individuos obesos son susceptibles a problemas médicos relacionados directamente con su obesidad tal como diabetes tipo II, resistencia a la insulina, colesterol elevado en suero, alta presión arterial, síndrome de obesidad congénita (incluyendo leptina congénita, pro-opiomelanocortina (POMC) y deficiencias del receptor de melanocortina-4 (MC4R), y apnea del sueño, especialmente en síndrome de Pickwick. Además, la acumulación de grasa en el hígado puede progresar a esteatohepatitis no alcohólica y cirrosis. Otro problema para individuos obsesos es un riesgo incrementado en cualquier cirugía en donde se debe cortar a través de capas gruesas del tejido graso que son altamente vascularizadas y por lo tanto propensas a hemorragias. Una cirugía necesaria con frecuencia se pospone hasta que el paciente obeso pueda perder suficiente peso para hacer aceptable el riesgo de la operación. La insulina es un regulador importante de diferentes procedimientos metabólicos y juega un papel clave en el control de glucosa en sangre. Los defectos relacionados con la síntesis de insulina y señalización conducen a la diabetes mellitus. La unión de insulina al receptor de insulina (IR) provoca una autofosforilación rápida de varios residuos de tirosina en la parte intracelular de la subunidad beta. Tres residuos de tirosina colocados cercanamente (el dominio tirosina-1 50) deben ser fosforilados para obtener la actividad máxima de la tirosina cinasa del receptor de insulina (IRTK), que transmite señales adicionales por medio de la fosforilación de tirosina de otros substratos celulares, incluyendo el substrato-1 del receptor de insulina (IRS-1 ) y el substrato-2 del receptor de insulina (IRS-2).

La fosforilación de proteína es un mecanismo celular bien reconocido para traducir y regular las señales durante diferentes etapas de la función celular (véase, por ejemplo Hunter, Phil, Trans. R. Soc. Lond. B. 353: 583-608 (1998); Chan et al., Annu. Rev. Immunol. 12: 555-592 (1994); Zhang, Curr. Top. Cell. Req. 35: 21 -68 (1997); Matozaki and Kasuga, Cell. Siqnal. 8: 1 13-1 19 (1996)). Existen al menos dos clases reconocidas importantes de fosfatasas: (1 ) aquellas que desfosforilan las proteínas que contienen un grupo o grupos fosfato en una porción serina o treonina (denominadas fosfatasas Ser/Thr o fosfatasas de especificidad dual o DSP) y (2) aquellas que remueven un grupo o grupos fosfato del aminoácido tirosina (que se denomina proteína tirosina fosfatasas o PTPasas o PTP). Varios estudios claramente indican que la actividad de IRTK auto-fosforilada puede revertirse mediante la desfosforilación in vitro (revisado en Goldstein, Receptor 3: 1 -15 1993)) con el dominio tirosina-1 150 tri-fosforilado siendo el objetivo más sensible para PTPasas. El dominio tirosina 1 150 tri-fosforilado parece funcionar como un interruptor de control de la actividad IRTK y IRTK parece regularse estrechamente por la desfosforilación mediada por PTP in vivo (Faure et al., J. Biol. Chem. 267: 1 1215-1 1221 ( 992)). PTP1 B se ha identificado como por lo menos una de las fosfatasas principales implicadas en la regulación de IRTK a través de estudios realizados tanto in vitro (Seely et al., Diabetes 45: 1379-1385 (1996)) e in vivo utilizando anticuerpos neutralizadores de PTP1 B (Ahmad et al., J.

Biol. Chem. 270: 20503-20508 (1995)). Dos estudios independientes han indicado que los ratones knock-out PTP1 B han incrementado la tolerancia a la glucosa, tienen sensibilidad incrementada a la insulina y una ganancia de peso disminuida cuando se encuentran en una dieta alta en grasas (Elchebly et al., Science 283: 1544-1548 (1999) y Klaman et al., Mol. Cell. Biol. 20: 5479-5489 (2000)). La sobreexpresión o actividad alterada de la tirosina fosfatasa PTP1 B puede contribuir al progreso de varios trastornos, incluyendo resistencia a la insulina y diabetes (Ann. Rev. Brochem. 54: 897-930 (1985)). Además, existe evidencia que sugiere que la inhibición de la proteína tirosina fosfatasa PTP1 B, es terapéuticamente benéfica para el tratamiento de trastornos tal como diabetes tipo I y II, obesidad, trastornos autoinmunes, inflamación aguda y crónica, osteoporosis y varias formas de cáncer (Zhang ZY et al., Expert Opin. Investiq. Druqs 2: 223-33 (2003); Taylor SD et al., Expert Opin. Investía. Druqs 3: 199-214 (2004); J. Nati. Cáncer Inst. 86: 372-378 (1994); Mol. Cell. Biol. 14: 6674-6682 (1994); The EMBO J. 12: 1937-1946 (1993); J. Biol. Chem. 269; 30659-30667 (1994); and Biochemical Pharmacoloqy 54: 703-7 1 ( 997)). La familia PTPasa de enzimas puede clasificarse en dos subgrupos (1 ) PTPasas intracelulares o de no transmembrana y (2) PTPasas tipo receptor o transmembrana. Las PTPasas tipo intracelular más conocidas contienen un sólo dominio fosfatasa catalítica conservada que consiste en 220-240 residuos aminoácidos. Se cree que las regiones fuera de los dominios de PTPasa juegan papeles importantes en la localización de las PTPasas intracelulares subcelularmente (Mauro, L.J. and Dixon J.E., TIBS 19: 151 -155 (1994)). Las primeras PTPasas intracelulares a ser purificadas y caracterizadas fueron PTP1 B (Tonks et al., J. Biol. Chem. 263: 6722-6730 (1988)). Oros ejemplos de PTPasas intracelulares incluyen (1 ) PTPasa de célula T (TCPTP) (Cool et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 86: 5257-5261 (1989)), (2) fosfatasas neuronales STEP (Lombroso et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 88: 7242-7246 (1991 )), (3) PTP1C/SH-PTP1/SHP-1 (Plutzky et al., Proc. Nati. Acad Sci. USA 89: 1 123-1127 (1992)), (4) PTP1 D/Syp/SH-PPT2/SHP-2 (Vogel et al., Science 259: 1611 -1614 (1993)); Feng et al., Science 259: 1607-1611 (1993)). Las PTPasas tipo receptor consisten en (a) un dominio extracelular de unión a ligando putativo, (b) un segmento transmembrana, y (c) una región catalítica intracelular. La estructura y tamaños de dominios extracelulares de unión a ligando putativo de las PTPasas tipo receptor son muy diferentes. En contraste, las regiones catalíticas intracelulares de las PTPasas tipo receptor son muy homologas entre sí y a las PTPasas intracelulares. La mayoría de las PTPasas tipo receptor tienen dos dominios PTPasa catalíticos duplicados en tándem. Los primeros subtipos del receptor PTPasa identificados fueron (1 ) CD45 (Ralph, S.J., EMBO J. 6: 1251 -1257 (1987)) y (2) LAR (Streuli et al., J. Exp. Med. 168: 1523-1530 (1988)). Desde entonces, muchos más subtipos receptores han sido aislados y caracterizados incluyendo por ejemplo, PTPalfa, PTPbeta, PTPdelta, PTPepsilon y PTPxi.

(Krueger et al. EMBO J. 9:3241 -3252 (1990)). Aunque los agentes han sido identificados para usarse como inhibidores de PTP1 B, tal como los ácidos heteroaril- y a í amino acéticos descritos en WO 01/19831 , WO 01/19830, y WO 01/17516, estos agentes no presentan separación de la actividad inhibidora entre PTP1 B y TCPTP.

Además, debido a los efectos inmunosupresores potenciales que resultan de la inhibición de TCPTP, la inhibición selectiva de PTP1 B sobre TCPTP puede hacer a dichos agentes más adecuados para el desarrollo de fármaco ya que pueden disminuir o eliminar los efectos secundarios no deseados que resultan de dicha no selectividad. Los transportadores de dopamina y norepinefrina, DAT y NET respectivamente, se ubican en neuronas pre-sinápticas del hipotálamo y funcionan para disminuir los niveles de dopamina sináptica o norepinefrina después de que se han liberado en la sinapsa. Cuando DAT o NET se inhiben, sus niveles se elevan en la sinapsa, activando sus receptores. El trabajo realizado por Billes and Cowley (Neuropsvchopharmacoloqy 1 : 1 -13 (2006)), Gadde and Xiong (Expert Rev.

Neurother., 7: 17-24 (2007)) y Gehlert et al. (J. Pharmacol. Exp. Ther., 287: 122-7 (1998)) ha demostrado que los inhibidores de DAT y/o NET o agonistas de sus receptores pueden actuar como agentes efectivos para pérdida de peso. De este modo, la inhibición de DAT y NET observada in vitro en la presente invención con el compuesto 1436 apoya esto como parte del mecanismo responsable de la pérdida de peso. Por lo tanto, existe la necesidad de un fármaco que pueda inducir de manera segura la pérdida rápida de peso en individuos obesos en donde la obesidad es inducida por una dieta. Un fármaco de este tipo también puede ser útil para el tratamiento de complicaciones causadas por obesidad, obesidad en diabetes tipo II, colesterol elevado en suero, apnea del sueño (especialmente en un síndrome de Pickwick), esteatohepatitis no alcohólica y cirugía para pacientes obesos.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION Un aspecto de la invención es un método para la inducción rápida de pérdida de peso en un sujeto exógenamente obeso por medio de la administración de un compuesto 1436. Otro aspecto de la invención es un método para tratar, mediante administración del compuesto 1436, las complicaciones relacionadas con obesidad exógena incluyendo, más no limitándose a, diabetes tipo II, colesterol elevado en suero, la incidencia de un ataque al corazón y apoplejía, apnea del sueño (especialmente en síndrome de Pickwick), síndromes de obesidad congénita (incluyendo leptina congénita, deficiencias de POMC y MC4R), esteatohepatitis no alcohólica y complicaciones en cirugía debido a la obesidad.

Un aspecto adicional en el tratamiento de un mamífero exógenamente obeso con el compuesto 1436 para producir una reducción importante en el porcentaje de grasa corporal. En otro aspecto de la invención, se proporciona un inhibidor de PTP1 B en forma de un compuesto 1436, que demuestra actividad inhibidora selectiva para PTP1 B sobre otras fosfatasas. En una modalidad ejemplar, la presente invención se dirige al compuesto de la fórmula 1 (es decir, compuesto 1436) o una sal Otro aspecto de la invención es una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto 1436 en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable. Otro aspecto de la invención se refiere a un método para inhibir selectivamente la proteína tirosina fosfatasa 1 B sobre la proteína tirosina fosfatasa de la célula T que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto 1436.

Otro aspecto de la invención se refiere a un método para tratar trastornos provocados por la proteína tirosina fosfatasa 1 B sobreexpresada o actividad mejorada de la proteína tirosina fosfatasa 1 B, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto 1436 para un receptor en necesidad del mismo. Otro aspecto de la invención se refiere a un método para tratar diabetes mellitus tipo I y tipo II, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto 1436 a un receptor que padece estas enfermedades. Otro aspecto de la invención se refiere a un método para tratar obesidad, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto 1436 a un receptor que sufre de obesidad. Otro aspecto de la invención se refiere a un método para tratar trastornos al incrementar las cantidades de dopamina o norepinefrina en la cercanía de los transportadores de recaptación, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto 1436 a un receptor en necesidad del mismo.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS Las figuras 1 -12 a continuación son únicamente modalidades ilustrativas del alcance de la presente invención y no pretenden de otra manera limitar el alcance de la invención.

La figura 1 muestra el efecto de una dieta alta en grasas en peso corporal de murino y la reversión mediante el tratamiento con el compuesto 1436. La figura 2 muestra el % de cambio en el peso corporal para ratones en una dieta con 60% de grasa con varios tratamientos. La figura 3 muestra el % de cambio en peso corporal para ratones en una dieta con 45% de grasa con varios tratamientos. La figura 4 muestra el % de cambio en el peso corporal para ratones en una dieta con 10% de grasa para varios tratamientos. La figura 5 muestra la composición corporal de ratones en una dieta con 60% de grasa con varios tratamientos. La figura 6 muestra la composición corporal de ratones en una dieta con 45% de grasa con varios tratamientos. La figura 7 muestra la composición corporal de ratones en una dieta con 10% de grasa con varios tratamientos. La figura 8 muestra la histología de tejido adiposo café en ratones normales y ratones con una dieta con 60% de grasa con varios tratamientos. La figura 9 muestra las curvas de dosis-respuesta para la inhibición de captación celular de dopamina y norepinefrina por medio de MSI-1436 La figura 10 muestra análisis western blot del efecto de MSI-1436 en el grado de fosforilación del receptor ß de insulina.

La figura 11 muestra análisis western blot del efecto de MSI-1436 en el grado de fosforilación del substrato-1 del receptor de insulina. La figura 12 muestra la histología del tejido adiposo blanco en ratones normales y ratones en una dieta con 60% de grasa con varios tratamientos.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Definiciones Como se utiliza en la presente, "compuesto 1436" o "MSI-1436" o simplemente "1436" se refiere a aminoesterol representado estructuralmente en la fórmula- . El compuesto 1436 también pretende abarcar las sales farmacéuticamente aceptables del compuesto de base libre. Como se utiliza en la presente, el término "obeso" en lo que corresponde a humanos incluye, pero no se limita a, un humano con un Registro de Indice de Masa Corporal mayor a por lo menos aproximadamente 30. Como se utiliza en la presente, el término "obeso" en lo que corresponde a ratones incluye, pero no se limitan a, un ratón con un % de grasa corporal total mayor a por lo menos aproximadamente 25%. Como se utiliza en la presente, el término "exógenamente obeso" se refiere a la obesidad causada por sobrealimentación.

Como se utiliza en la presente, el término "síndrome de Pickwick" se refiere a un complejo de obesidad, somnolencia, hipoventilación y eritrocitosis. Como se utiliza en la presente, el término "esteatohepatitis no alcohólica" se refiere a una enfermedad inflamatoria del hígado más frecuentemente encontrada en mujeres obesas con diabetes tipo II. Como se utiliza en la presente, el término "osteoartritris" se refiere a una enfermedad de las articulaciones degenerativa inflamatoria que se agrava por la obesidad. Como se utiliza en la presente, el término "velocidad metabólica basal" o BMR se refiere al número de calorías que un mamífero, incluyendo un humano, quema en reposo para mantener las funciones corporales normales. Como se utiliza en la presente, el término "captación calórica reducida" se refiere a una disminución en la cantidad de calorías consumidas por un mamífero, incluyendo más no limitándose a, un humano. Como se utiliza en la presente, la frase "inhibición selectiva de la proteína tirosina fosfatasa- IB (PTPIB) sobre la proteína tirosina fosfatasa-1 B de célula T (TCPTP)" se refiere a la inhibición de la proteína tirosina fosfatasa-IB con un valor CI5o que es al menos aproximadamente 40 veces menor al valor Cl50 para la proteína tirosina fosfatasa-1 B de la célula T. En modalidades particulares, el valor Cl50 para la inhibición de PTP1 B es al menos aproximadamente 5 veces menor o al menos aproximadamente 60 veces menor o al menos aproximadamente 70 veces menor o al menos aproximadamente 80 veces menor o al menos aproximadamente 90 veces menor o al menos aproximadamente 100 veces menor o al menos aproximadamente 200 veces menor al valor Clso para la inhibición de TCPTP. Como se utiliza en la presente, el término "inhibidor" se refiere a un compuesto que evita la unión de PTP1 B a su substratos endógenos y/o evita la desfosforilación mediada por PTP1 B en su substrato endógeno, incluyendo más no limitándose a, tirosina cinasa del receptor de insulina (IRTK) y los fragmentos de IRTK y los substratos no naturales, tales como, por ejemplo, p-nitrofenil fosfatasa. Como se utiliza en la presente, el término "selectivo" se refiere a un compuesto que tiene al menos aproximadamente 3 veces más inhibición en términos de un valor Cl50 para la enzima PTP1 B en comparación con el valor Cl50 de otras enzimas, incluyendo más no limitándose a TC-PTP, SHP-2, LAR, CD45, PP2B y Cde25c. Como se utiliza en la presente, "la cantidad efectiva" es una cantidad suficiente para efectuar los resultados benéficos o deseados. Por ejemplo, una cantidad terapéutica es una que logra el efecto terapéutico deseado. Esta cantidad puede ser la misma o diferente a partir de una cantidad profilácticamente efectiva, que es una cantidad necesaria para evitar el inicio de la enfermedad o síntomas de la enfermedad. Una cantidad efectiva puede ser administrada en una o más administraciones, aplicaciones o dosis.

En una modalidad, una cantidad efectiva es una cantidad del compuesto 1436 que induce la pérdida de peso en individuos obesos.

Métodos de tratamiento El compuesto aminoesterol 1436 ha demostrado en la presente invención inducir una pérdida de peso rápida en dieta inducida en ratones obesos. Además, la pérdida de peso observada es mayor en la mayoría de los ratones obesos y se debe predominantemente a la pérdida de grasa pero muy poca si existe pérdida de proteína. También, se observó que la mayoría de los ratones tratados con 1436 obesos perdieron significativamente más peso que sus contrapartes con alimentación emparejada, indicando una inducción en la pérdida de peso que es provocada por más de una supresión del apetito. Sorprendentemente, se ha observado que después de un periodo de tratamiento, tal como por ejemplo de alrededor de 7 a aproximadamente 10 días de tratamiento, la velocidad de pérdida de peso pareció disminuir para los ratones con alimentación emparejada mientras que la disminución en la velocidad fue menor para los ratones tratados con 1436. La diferencia en el peso final entre los grupos con alimentación emparejada y los tratados con 1436 pareció ser al menos parcialmente causada por una pérdida relativamente mayor de grasa por el grupo tratado con 1436. El método más común para tratar obesidad exógena es restricción alimentaria. Este método tiene tres problemas principales: 1 ) cumplimiento del individuo; 2) la tendencia a perder cantidades importantes de masa muscular como también grasa; y 3) la restauración del metabolismo del individuo a un nivel más bajo. El tratamiento con el compuesto 1436 supera todos estos problemas. El tratamiento con fármaco controlado por el médico mejora en gran medida el cumplimiento del individuo. Como se muestra en las figuras 5-8 y 12 existe una pérdida importante de grasa después del tratamiento con el compuesto 1436 con poca pérdida concomitante de proteína. Como se muestra en las figuras 2-4, la restauración del metabolismo no parece ocurrir ya que los animales tratados con 1436 continúan perdiendo peso incluso cuando la pérdida de peso de los animales tratados con la dieta se ha nivelado. Las sales farmacéuticamente aceptables del compuesto 1436 incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario que se formaron de ácidos o bases inorgánicas u orgánicas. Ejemplos de dichas sales de adición ácidas incluyen acetato, adipato, benzoato, benzensulfonato, citrato, canforato, dodecilsfulfato, clorhidrato, bromhidrato, lactato, maleato, metansulfonato, nitrato, oxalato, pivalato, propionato, succinato, sulfato y tartrato. Las sales de base incluyen sales de amonio, sales de metal alcalino tal como sales de sodio y potasio, sales de metal alcalino térreo tal como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas, tales como sales de diciciohexilamina y sales con aminoácido tales como arginina. También, los grupos que contienen nitrógeno básico pueden cuaternizarse con, por ejemplo, haluros de alquilo.

Además de los portadores, las composiciones farmacéuticas de la invención pueden también incluir estabilizadores y conservadores. Por ejemplo de portadores típicos, estabilizadores y adyuvantes conocidos por los expertos en la técnica, véase Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21 st ed. (Lippincott, Williams & Wilkins, PA (2005)). El compuesto 1436 puede ser administrado sólo o preferiblemente como una función farmacéutica que comprende 1436 junto con por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable. Opcionalmente, otras terapias conocidas por los expertos en la técnica pueden ser combinadas con la administración de 1436. La administración in vivo del compuesto 1436 puede efectuarse en una dosis, múltiples dosis, continuamente o intermitentemente a través del transcurso del tratamiento. La dosis oscilaga de alrededor de 0.05 mg/kg a aproximadamente 5 mg/kg, tal como entre alrededor de 0.07 mg/kg a aproximadamente 3 mg/kg, tal como entre alrededor de 0.1 mg/kg a aproximadamente 2 mg/kg, tal como entre alrededor de 0.3 mg/kg a aproximadamente 1 .5 mg/kg, tal como entre alrededor de 0.5 mg/kg a aproximadamente 1 mg/kg, en una dosis diaria individual o dividida. Los métodos para determinar los medios más efectivos y dosis de administración son bien conocidos por los expertos en la técnica y variarán con la composición utilizada para la terapia, el propósito de la terapia, la célula objetivo que se trata y el sujeto que se trata. Las administraciones individuales o múltiples pueden llevarse a cabo con el nivel de dosis y patrón seleccionado por el doctor de tratamiento. Las formulaciones de liberación extendida, retardada y/o sostenida del compuesto 1436 también pueden administrarse. Las composiciones farmacéuticas que contiene el compuesto 1436 pueden administrarse mediante cualquier vía adecuada, incluyendo oral, rectal, intranasal, tópica (incluyendo trasdérmica, en aerosol, bucal y sublingual), parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa), intrapehtonial y pulmonar. Se apreciará que la vía preferida variará con la condición y edad del receptor, y la enfermedad a ser tratada.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Inducción de pérdida de peso en ratones con obesidad inducida por dieta Ratón y diseño de estudio En el destete, se colocaron ratones macho AKR/J de los laboratorios Jackson (Bar Harbor, Maine, USA) en una dieta con kcal con 10%, 45% o 60% de grasa (Research Diets, Inc., New Brunswick, NJ, USA). Los ratones fueron pesados semanalmente y el tratamiento inició después de 13-14 semanas de acceso a diferentes dietas con grasa. Inmediatamente antes del inicio del tratamiento, los ratones de las tres dietas fueron subdivididos aleatoriamente en tres grupos dentro de la misma dienta con la composición grasa con una distribución de peso homogénea. Todos los ratones fueron dosificados (por vía i.p.) en un programa q7dx4, en donde la primera dosis de 1436 fue 10 mg/kg y las dosis restantes fueron 5 mg/kg. A los animales tratados con solución salina se les administró 10 mUkg. Los animales con alimentación emparejada fueron dosificados con solución salina (10 mIJkg) en el mismo programa q7dx4 en un escalonado de 1 día de los otros grupos. Como una medida de consumo de alimento, el alimento restante se pesó diariamente. Los grupos con alimentación emparejada se les repartieron la cantidad exacta de alimento consumido por el grupo tratado con 1436 en las 24 horas anteriores. Todos los procedimientos que implicaron ratones fueron realizados de conformidad con los protocolos aprobados por el Institutional Animal Care and Use Committee. Como se observa en la figura 1 , el ratón con dietas con 45 y 60% de grasa se volvieron obesos mientras aquellos con una dieta de grasa al 10% (la dieta de ratón normal) ganaron peso normalmente. Los animales con una dieta con 60% de grasa fueron significativamente más pesados que los animales alimentados con una dieta al 45% y ambos fueron significativamente más pesados que aquellos alimentados con una dieta con 10% de grasa. Cuando los tres grupos fueron tratados con 1436 (iniciando en el día 0 en la figura 1 ) los tres grupos perdieron peso pero mientras más obeso el ratón más rápida la pérdida de peso y mientras mayor la pérdida de peso de los tres grupos que llegaron al mismo peso al final de las tres semanas (figura 1 ).

Las figuras 2-4 muestran que el efecto de 1436 en la pérdida de peso es mayor al efecto en una dieta sola (con base, por ejemplo, en una comparación de la pérdida de peso en el grupo tratado con 1436 con la pérdida de peso en grupo con alimentación emparejada). Este efecto fue mayor en el grupo con grasa al 60% en donde el valor p fue 0.013. Esta observación soporta la conclusión de que el compuesto 1436 también induce pérdida de peso al evitar la restauración de la velocidad metabólica basal que se observa normalmente en pérdida de peso inducida por la dieta.

Composición corporal La composición corporal (porcentaje de humedad, grasa, proteína y ceniza) se determinó de conformidad con los métodos descritos con las modificaciones (Official Methods of Analvsis of AOAC INTERNATIONAL, 2000). En resumen, las muestran fueron secadas a 125°C durante 4 horas para determinar la humedad. Después de secar, se sumergió el pentano a través de la muestra durante 5 horas para determinar la composición de grasa. Se determinó la proteína a través del método de combustión para detección de nitrógeno y un factor de 6.25 se utilizó para convertir el nitrógeno porcentual a proteína porcentual. Para determinar la ceniza, las muestras se quemaron a 550°C durante 5 horas y se cuantificaron gravimétricamente. Las figuras 5-7 muestran la composición corporal total al final del estudio para los grupos con dieta con 10%, 45% y 60% de grasa. Los efectos de la dieta de tratamiento previo muestran un % de grasa corporal de más de 30% para las dietas con alto contenido en grasas pero por debajo del 20% para la dieta normal. Los grupos tratados con 1436 y con alimentación emparejada perdieron % de grasa corporal importante en todas las dietas. Existe una tendencia para mayor pérdida de grasa corporal en el grupo tratado con 1436 en comparación con los grupos con alimentación emparejada.

Histología: El tejido adiposo café intracapsular se fija en formalina de zinc al 10% (Fisher Scientific, Kalamazoo, MI, E.U.A) durante 48 horas y se transfiere a EtOH al 70%. Los tejidos se fijaron en parafina y secciones de 5 µ? se aplicaron al portaobjetos del microscopio de vidrio. Las secciones se tiñeron con hematoxilina/eosina y las imágenes se capturaron con una cámara Insight 18.2 Color Mosaic (Diagnostic Instruments, Sterling Heights, MI, E.U.A) en un microscopio Olympus AX70 (Melville, NY, E.U.A). La figura 8 muestra la cantidad de grasa (glóbulos blancos) en tejido adiposo café (BAT) en un ratón normal (dieta con 10% de grasa tratada con solución salina, panel A), un ratón con dieta al 60% tratado con solución salina (panel B), un ratón con dieta al 60% tratado con 1436 (panel C) y el ratón con alimentación emparejada en una dieta al 60%. El ratón tratado con 1436- perdió toda la grasa ganada por la dieta al 60% y más que el ratón en una dieta restringida sola (con alimentación emparejada).

La figura 12 se muestra a la cantidad de grasa (glóbulos blancos) en tejido adiposo blanco (WAT) en un ratón normal (dieta con grasa al 10% tratado con solución salina, panel A), un ratón con dieta al 60% tratado con solución salina (panel B), un ratón con dieta al 60% tratado con el compuesto 1436 (panel C) y el ratón con alimentación emparejada en una dieta al 60%. El ratón tratado con 436 perdió toda la grasa ganada por la dieta al 60% y más que el ratón en una dieta restringida sola (con alimentación).

EJEMPLO 2 Inhibición selectiva de las enzimas tirosina fosfatasa La inhibición de PTP1 B y TCPTP mediante el compuesto 1436 se determinó bajo contrato con MDS Pharma en pruebas de enzima utilizando proteínas recombinantes de humano expresadas en E. coli y tirosina fosfopéptido (20 µg/mL) o DiFMUP (10 µ?) como los substratos, respectivamente. En la prueba PTP1 B, la actividad fosfatasa se cuantificó a través de un análisis ELISA de tirosina fosfopéptido restante después de incubaciones de 30 minutos a temperatura ambiente con varias concentraciones de 1436 (0.05 µ? a 500 µ?). El valor Cl50 (1 .14 µ?) se determinó utilizando análisis de datos Toolbox™ (Sistemas de Información MDL) mediante un análisis de regresión de últimos cuadrados, no lineal (véase cuadro 1 ). La prueba TCPTP requirió una preincubación de 15 minutos de la enzima y un substrato a 37°C seguido por incubaciones de 60 minutos a 37°C con varias concentraciones de 1436 (0.5 µ? a 50 µ?). La actividad de TCPTP se evaluó mediante cuantificación espectrofluorimétrica de DiFMU. Ya que no se demostró inhibición de ninguna de las concentraciones probadas de 1436, se estimó el CI50 a >50 µ? (Cuadro 1).

CUADRO 1 Valores CI50 para la inhibición de 1436 de las enzimas de tirosina fosfatasa EJEMPLO 3 Inhibición de la unión a transportadores de Dopamina (DAT) V Norepinefrina (NET) La inhibición de la unión al transportador de Dopamina (DAT) y transportador de Norepinefrina (NET) mediante MSI-1436 se determinó en pruebas de unión a radioligando utilizando proteínas recombinantes de humano expresadas en CHO-K1 o células MDCK, respectivamente. Las preparaciones de membrana se incubaron con [125l] RTI-55 (0.15 nM para DAT, 0.20 nM para NET) en presencia de 1436 (0.005 µ? a 50 µ?) durante 3 horas a 4°C. Los valores CI50 se determinaron como en las pruebas PTP1 B (véase cuadro 2).

CUADRO 2 Valores Clso para inhibición de 1436 de unión a DAT y NET EJEMPLO 4 Inhibición de captación celular de Dopamina y Norepinefrina mediante MSI-1436 La captación de Dopamina y Norepinefrina en presencia del compuesto 1436 (0.05 µ? a 5 µ?) se investigó utilizando células CHO-K1 que expresan los transportadores de dopamina y células MDCK que expresan transportadores de norepinefrina. Después de incubaciones de 10 minutos de las células con ligandos radioactivos en presencia de un compuesto a temperatura ambiente, la cuatificacion de [3H] Dopamina o [3H] Norepinefrina revelaron una acción antagonística de 1436. Los criterios de importancia para el antagonismo se cumplieron si la inhibición fue >50% de la captación en comparación con la respuesta inducida de nomifensina (DAT) o desipramina (NET). El cuadro 3 detalla el antagonismo medido y la figura 9 muestra las curvas de dosis-respuesta. Los valores CI50 se calcularon para estar en 422 nM para inhibición de la captación de Dopamina y 718 nM para la inhibición de captación de Norepinefrina.

CUADRO 3 Inhibición de la captación de Dopamina y Norepinefrina mediante 436 Concentración (µ??) % Inhibición Captación de Dopamina 5.0 94 2.5 81 0.5 57 0.25 39 0.05 Captación de 5.0 95 Norepinefrina 2.5 78 0.5 33 0.25 26 0.05 22 EJEMPLO 5 Inhibición in vitro e in vivo de la proteína tirosina fosfatasa 1 B Las células HepG2 (células inmortalizadas de hepatocitos) se trataron con insulina 10 nM, MSI-1436 10 µ?, ninguna o ambas durante 30 minutos o 3 horas in vitro. La figura 10 muestra los análisis Western blot de lisados celulares. No se notó diferencia alguna en las cantidades de receptor- beta de insulina (IR-beta) (panel A). La inmunoprecipitación del receptor beta de insulina seguido por los análisis Western blot de tirosina fosforilada, mostraron que la insulina sola indujo fosforilizacion de IR-beta y MSI-1436 no indujo la fosforilación (panel B). Las células tratadas con insulina y MSI-1436 durante 30 minutos demostraron fosforilación de IR-beta incrementada en comparación con la fosforilación inducida por insulina (Panel B). Este efecto disminuyó ligeramente a las 3 horas. Para examinar el efecto de MSI-1436 en PTP1 B ex vivo, ratones ob/ob se trataron con cualquier vehículo MSI-1436 (dosis individual, 0 mg/kg, i.p.) o ratones de control con alimentación emparejada (n=4 por grupo). Veinticuatro horas después del tratamiento individual, los ratones fueron anestesiados y se expuso la vena portal por medio de una incisión. La insulina o solución salina regulada en fosfato (PBS) se inyectó en la vena portal y se recolectaron los hígados 2 minutos después de la inyección. Los hígados fueron lisados y los lisados fueron inmunoprecipitados con substrato 1 - del receptor de anti-insulina (IRS-1 ) y posteriormente se transfirieron para fosfotirosina con los blots resultantes representando el substrato-1 del receptor de insulina fosforilada (P-IRS- ). Los blots fueron analizados utilizando un software de formación de imágenes. La figura 1 1 muestra que MSI-1436 in vivo mejoró la fosforilación inducida por insulina de IRS-1 y lo llevó a un mayor grado que el efecto con alimentación emparejada en la inducción de insulina (figura 1 1 ). A menos que se defina de otra forma, todos los términos técnicos y científicos en la presente tienen el mismo significado como se entiende comúnmente por un experto en la técnica al cual pertenece la invención. Aunque los métodos materiales similares o equivalentes a los descritos anteriormente pueden utilizarse en la práctica o prueba de la presente invención, los métodos preferidos y materiales se describen en la presente. Todas las patentes y publicaciones citadas en la presente se incorporan aquí por referencia en su totalidad.

Claims (37)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1.- El uso de una composición que comprende un portador farmacéuticamente aceptable o excipiente y un compuesto de aminoesterol de conformidad con la siguiente fórmula: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento útil para inducir pérdida de peso en un mamífero obeso.

2. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el mamífero también sufre de una condición seleccionada del grupo que consiste en: diabetes tipo II, colesterol elevado en suero, apnea del sueño, síndrome de Pickwick y esteatohepatitis no alcohólica.

3. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el mamífero es exógenamente obeso.

4. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 2, en donde la condición es diabetes tipo II.

5. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 2, en donde la condición es colesterol elevado en suero.

6.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 2, en donde la condición es apnea del sueño.

7. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 2, en donde la condición es síndrome de Pickwick.

8. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 2, en donde la condición es esteatohepatitis no alcohólica.

9. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el mamífero obeso se encuentra en necesidad de un procedimiento quirúrgico.

10. - El uso de una composición que comprende un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable y un compuesto de aminoesterol de conformidad con la siguiente fórmula: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento útil para inducir pérdida rápida de grasa corporal en un mamífero exógenamente obeso.

11.- El uso de un compuesto de aminoesterol de conformidad con la siguiente fórmula: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento útil para sensibilizar la insulina en un mamífero.

12.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 11 , en donde el mamífero es un humano.

13. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde la sensibilización de la insulina comprende el tratamiento de diabetes tipo I o tipo II.

14. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 11 , en donde la sensibilización de insulina comprende un tratamiento de obesidad.

15. - El uso de un compuesto de aminoesterol de conformidad con la siguiente fórmula: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento útil para inhibir selectivamente la enzima PTP1B sobre la enzima TCPTP en un mamífero.

16.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 15, en donde las enzimas PTP1 B y TCPTP son de humano.

17.- El uso como el que se reclama, en la reivindicación 15, en donde el mamífero es un humano.

18. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 15, en donde la inhibición selectiva de la enzima PTP1 B sobre la enzima TCPTP comprende un tratamiento mejorado para la diabetes tipo I o tipo II.

19. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 15, en donde la inhibición selectiva de la enzima PTP1 B sobre la enzima TCPTP comprende un tratamiento mejorado para la obesidad.

20. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 11 o reivindicación 15, en donde el medicamento además comprende un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

21.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 11 o reivindicación 15, en donde el medicamento es adaptado para ser administrable por vía subcutánea.

22. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 11 o reivindicación 15, en donde el medicamento es adaptado para ser administrable por inhalación.

23. - Una composición farmacéutica útil para la sensibilización de insulina en un mamífero que comprende un compuesto de la siguiente fórmula:

24.- El uso de una composición que comprende un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable y un compuesto de aminoesterol de en la fabricación de un medicamento útil para mantener la velocidad metabólica basal en un mamífero con una captación calórica reducida, en donde el compuesto de aminoesterol se adapta para ser administrable en una cantidad efectiva para mantener la velocidad metabólica de dicho mamífero.

25.- El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 11 a 24, en donde el mamífero es un humano.

26.- El uso de un compuesto de aminoesterol de conformidad con la siguiente fórmula: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento útil para inhibir la captación de dopamina en un mamífero.

27. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 26, en donde el mamífero es un humano.

28. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 26, en donde la inhibición de la captación de dopamina comprende un tratamiento mejorado para diabetes tipo I o tipo II.

29. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 26, en donde la inhibición de la captación de dopamina comprende un tratamiento mejorado para la obesidad.

30.- El uso de un compuesto de aminoesterol de conformidad con la siguiente fórmula: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento útil para inhibir la captación de norepinefrina en un mamífero.

31. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 30, en donde el mamífero es un humano.

32. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 30, en donde la inhibición de la captación de norepinefrina comprende un tratamiento mejorado para diabetes tipo I o tipo II.

33. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 30, en donde la inhibición de la captación de norepinefrina comprende un tratamiento mejorado para obesidad.

34. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 26 ó 30, en donde el medicamento además comprende un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

35. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 26 o reivindicación 30, en donde el medicamento es adaptado para ser administrable por vía subcutánea.

36. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 26 o reivindicación 30, en donde el medicamento es adaptado para ser administrable por inhalación.

37. - Una composición farmacéutica útil para la sensibilización de insulina en un mamífero que comprende un compuesto de la siguiente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.