CN101472596A - 体重减轻的诱导和ptp1b的选择性抑制 - Google Patents

Abstract

本发明针对化合物1436在诱导肥胖哺乳动物体重减轻中的应用。

Description

体重减轻的诱导和PTP1B的选择性抑制

技术领域

本发明针对化合物1436在诱导肥胖哺乳动物体重减轻中的应用。

背景技术

已经从角鲨鱼——白斑角鲨(Squalus acanthias)的肝脏分离出几种氨基甾醇化合物。这些化合物中的一种已被命名为1436，其结构示于图1中。先前已经在例如美国专利5,763,430、5,795,885、5,847,172、5,840,936和6,143,738中对化合物1436进行了描述，这些专利均被以全部内容并入，并且化合物1436已显示出在动物模型中抑制体重增加和抑制食欲，导致体重减轻。

肥胖症在美国是主要的医学问题，并且在其它发达社会也日渐如此。原因主要在于案牍生活方式和富含脂肪的饮食的影响。肥胖者易患与其肥胖症直接相关的医学问题，例如II型糖尿病、胰岛素抵抗、血清胆固醇升高、高血压、先天性肥胖综合征(包括先天性瘦蛋白、阿片黑皮质素前体(POMC)和黑皮质素-4受体(MC4R)缺乏)、以及睡眠性呼吸暂停，尤其皮克韦坎氏综合征中的睡眠性呼吸暂停。此外，肝脏中脂肪的累积可发展成非酒精性脂肪性肝炎和肝硬化。肥胖者的另一个问题是在任何必须切开厚脂肪组织层的手术中风险增加，其中这些脂肪组织层高度血管化，从而容易出血。必要的手术经常被推迟，直到肥胖患者能够减轻足够的体重，以使得手术风险可以接受。

胰岛素是不同代谢过程的重要调节剂，并在血糖的控制中发挥关键作用。胰岛素合成和信号传导相关的缺陷导致糖尿病。胰岛素与胰岛素受体(IR)的结合引起β-亚基胞内部分的酪氨酸残基迅速自磷酸化。三个位置接近的酪氨酸残基(酪氨酸-1150结构域)必须被磷酸化，以获得胰岛素受体酪氨酸激酶(IRTK)的最大活性，这通过其它细胞底物的酪氨酸磷酸化进一步传递信号，其中所述其它细胞底物包括胰岛素受体底物蛋白-1(IRS-1)和胰岛素受体底物蛋白-2(IRS-2)。

蛋白质磷酸化是在细胞功能的不同阶段传导和调节信号的公认细胞机制(参见，例如Hunter，Phil，Trans.R.Soc.Lond.B.353：583-605(1998)；Chan等人，Annu.Rev.Immunol.12：555-592(1994)；Zhang，Curr.Top.Cell.Reg.35：21-68(1997)；Matozaki和Kasuga，Cell.Signal.8：113-119(1996))。存在至少两种类主要的公认磷酸酶：(1)对丝氨酸或苏氨酸部分含有磷酸基团(一个或多个)的蛋白质进行去磷酸化的那些酶(称为Ser/Thr磷酸酶或双特异性磷酸酶或DSP)和(2)从酪氨酸除去磷酸基团(一个或多个)的酶(被称为蛋白酪氨酸磷酸酶或PTPase或PTP)。

若干研究清楚地表明，自磷酸化IRTK的活性可通过体外去磷酸化而被反转(在Goldstein，Receptor 3：1-15(1993)中综述)，其中三磷酸化酪氨酸-1150结构域是PTPase的最敏感靶标。该三磷酸化酪氨酸-1150结构域似乎作为IRTK活性的控制开关，而IRTK似乎通过PTP-介导的体内去磷酸化而被紧密调节(Faure等人，J.Biol.Chem.267：11215-11221(1992))。通过体外(Seely等人，Diabetes 45：1379-1385(1996))进行的研究和使用PTP1B中和抗体体内进行的研究(Ahmad等人，J.Biol.Chem.270：20503-20508(1995))，PTP1B已被鉴定为参与IRTK调节的主要磷酸酶的至少一种。两个独立的研究已经表明，PTPlB敲除小鼠具有增加的葡萄糖耐量、提高的胰岛素敏感度以及在高脂肪饮食下降低的体重增加(Elchebly等人，Science 283：1544-1548(1999)和Klaman等人，Mol.Cell.Biol.20：5479-5489(2000))。酪氨酸磷酸酶PTP1B的过表达或改变的活性可能促进各种疾病的进展，包括胰岛素抵抗和糖尿病(Ann.Rev.Biochem.54：897-930(1985))。而且，有证据表明蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B的抑制对于疾病诸如I型和II型糖尿病、肥胖症、自身免疫性疾病、急性和慢性炎症、骨质疏松和各种形式的癌症的治疗是治疗上有益的(Zhang ZY等人，Expert Opin.Investig.Drugs 2：223-33(2003)；Taylor SD等人，Expert Opin.Investig.Drugs 3：199-214(2004)；J.Natl.Cancer Inst.86：372-378(1994)；Mol.Cell.Biol.14：6674-6682(1994)；The EMBO J.12：1937-1946(1993)；J.Biol.Chem.269：30659-30667(1994)；和Biochemical Pharmacology 54：703-711(1997))。

PTPase酶家族可以被分成两个亚组：(1)胞内或非跨膜PTPase和(2)受体型或跨膜PTPase。最为人知的胞内型PTPase含有单个保守催化磷酸酶结构域，其由220-240个氨基酸残基组成。PTPase结构域外部的区域被认为在亚细胞定位胞内PTPase中起着重要的作用(Mauro，L.J.和Dixon J.E.，TIBS 19：151-155(1994))。第一个待纯化和鉴定的胞内PTPase是PTP1B(Tonks等人，J.Biol.Chem.263：6722-6730(1988))。胞内PTPase的其它例子包括(1)T-细胞PTPase(TCPTP)(Cool等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：5257-5261(1989))，(2)神经元磷酸酶STEP(Lombroso等人.Proc.Natl.Acad.Sci.USA88：7242-7246(1991))，(3)PTP1C/SH-PTP1/SHP-1(Plutzky等人，Proc.Natl. Acad.Sci.USA 89：1123-1127(1992))，(4)PTP1D/Syp/SH-PPT2/SHP-2(Vogel等人，Science 259：1611-1614(1993)；Feng等人.Science 259：1607-1611(1993))。

受体型PTPase由下列组成：(a)推定的配体结合胞外结构域、(b)跨膜段和(c)胞内催化区。受体型PTPase推定的配体结合胞外结构域的结构和大小是非常有差异的。相反，受体型PTPase的胞内催化区彼此非常同源，并同源于胞内PTPase。大多数受体型PTPase具有两个串联重复的催化PTPase结构域。所鉴定的第一个PTPase受体亚类是(1)CD45(Ralph，S.J.，EMBO J.6：1251-1257(1987))和(2)LAR(Streuli等人.J.Exp.Med.168：1523-1530(1988))。其后，又有许多受体亚类被分离和鉴定，包括例如PTPα、PTPβ、PTPδ、PTPε和PTPxi。(Krueger等人EMBO J.9：3241-3252(1990))。

[0010]尽管已经鉴定出多种试剂用作PTP1B抑制剂，例如在WO01/19831、WO 01/19830和WO 01/17516中描述的杂芳基-氨基乙酸和芳基-氨基乙酸，但这些试剂未表现出在PTPlB和TCPTP之间抑制活性的区别。而且，由于抑制TCPTP所导致的潜在免疫抑制效应，因此相对于TCPTP的选择性抑制，PTPlB将使得这类试剂更适合于药物开发，因为它们可减少或消除这类非选择性所带来的副作用。

多巴胺转运体和去甲肾上腺素转运体(分别为DAT和NET)位于下丘脑的突触前神经元中，并用于在多巴胺或去甲肾上腺素被释放入突触内之后降低它们的水平。当DAT或NET受到抑制时，它们的水平在突触中升高，并激活它们的受体。

Billes和Cowley(Neuropsychopharmacology 1：1-13(2006))，Gadde和Xiong(Expert Rev.Neurother.，7：17-24(2007))和Gehlert等人(J.Pharmacol. Exp.Ther.，287：122-7(1998))的工作已经证明，DAT和/或NET的抑制剂或它们的受体的拮抗剂可充当有效的体重减轻剂。因此，在本发明中，利用化合物1436，在体外观察到的DAT和NET的抑制，支持了这作为体重减轻机理的一部分。

因此，对于可安全快速诱导肥胖者体重减轻的药物存在需求，其中肥胖症是饮食诱导的。该类型的药物也可用于治疗由于肥胖症、II型糖尿病中的肥胖症、高血清胆固醇、睡眠性呼吸暂停(尤其在皮克韦坎氏综合征中)、非酒精性脂肪性肝炎和肥胖患者手术带来的并发症。

发明概述

本发明的一方面是通过给药化合物1436快速诱导外源性肥胖对象体重减轻的方法。

本发明的另一方面是通过给药1436治疗与外源性肥胖症有关并发症的方法，其中所述并发症包括但不限于II型糖尿病、高血清胆固醇、心脏病和中风发作、睡眠性呼吸暂停(尤其在皮克韦坎氏综合征中)、先天性肥胖综合征(包括先天性瘦蛋白、POMC和MC4R缺乏)、非酒精性脂肪性肝炎和由于肥胖而进行的手术。

进一步的方面是使用化合物1436治疗外源性肥胖哺乳动物，以产生体脂肪百分比的显著下降。

在本发明的另一方面，提供了化合物1436形式的PTP1B抑制剂，其表现出相对于其它磷酸酶，对PTP1B的选择性抑制活性。

在示例性实施方式中，本发明涉及图1的化合物(即，化合物1436)或其治疗上可接受的盐或前体药物。

本发明的另一方面是药物组合物，其包含治疗有效量的化合物1436以及药学上可接受的载体。

本发明的另一方面涉及相对于T细胞蛋白酪氨酸磷酸酶选择性抑制蛋白酪氨酸磷酸酶IB的方法，其包括给药治疗有效量的化合物1436。

本发明的另一方面涉及治疗由过表达的蛋白酪氨酸磷酸酶IB或增强的蛋白酪氨酸磷酸酶活性引起的疾病的方法，包括向需要的接受者给药治疗有效量的化合物1436。

本发明的另一方面涉及治疗I型和II型糖尿病的方法，包括为患有这些疾病之一的接受者给药治疗有效量的化合物1436。

本发明的另一方面涉及治疗肥胖症的方法，包括为患有肥胖症的接受者给药治疗有效量的化合物1436。

本发明的另一方面涉及通过增加在多巴胺或去甲肾上腺素再吸收转运体附近多巴胺或去甲肾上腺素的量治疗疾病的方法，该方法包括为需要的接受者给药治疗有效量的化合物1436。

附图说明

图1-12仅仅是本发明范围的阐述性实施方式并不旨在以其它方式限制本发明的范围。

图1示出了化合物1436的结构。

图2示出了高脂肪饮食对鼠体重的影响以及经化合物1436治疗得到的反转。

图3示出了在各种治疗下，进食60％脂肪饮食的小鼠的体重变化百分比(％)。

图4示出了在各种治疗下，进食45％脂肪饮食的小鼠的体重变化百分比(％)。

图5示出了在各种治疗下，进食10％脂肪饮食的小鼠的体重变化百分比(％)。

图6示出了在各种治疗下，进食60％脂肪饮食的小鼠的机体组成。

图7示出了在各种治疗下，进食45％脂肪饮食的小鼠的机体组成。

图8示出了在各种治疗下，进食10％脂肪饮食的小鼠的机体组成。

图9示出了在各种治疗下，在正常小鼠和进食60％脂肪饮食的小鼠中棕色脂肪组织的组织学。

图10示出了通过MSI-1436抑制多巴胺和去甲肾上腺素的细胞吸收的剂量-反应曲线。

图11示出了MSI-1436对胰岛素受体β的磷酸化程度影响的蛋白质印迹分析。

图12示出了MSI-1436对胰岛素受体底物蛋白-1的磷酸化程度影响的蛋白质印迹分析。

图13示出了在各种治疗下，在正常小鼠和进食60％脂肪饮食的小鼠中白色脂肪组织的组织学。

发明详述

定义

在本文中使用时，“化合物1436”或“MSI-1436”或只是“1436”，是指图1中在结构上进行描述的氨基甾醇。化合物1436还旨在包括该游离基础化合物的药学上可接受的盐。

在本文中使用时，当术语“肥胖的”涉及人类时，它包括但不限于体重指数值在大约30以上的人。

在本文中使用时，当术语“肥胖的”涉及小鼠时，它包括但不限于总体脂肪％在至少大约25以上的小鼠。

在本文中使用时，术语“外源性肥胖”是指由于暴食导致的肥胖症。

在本文中使用时，术语“皮克韦坎氏综合征”是指肥胖症、嗜眠、通气不足和红细胞增多的综合症状。

在本文中使用时，“非酒精性脂肪性肝炎”是指最频繁在患有II型糖尿病的女性中发现的炎性疾病。

在本文中使用时，术语“骨关节炎”是指受肥胖症加重的非炎性退行性关节病。

在本文中使用时，术语“基础代谢率”或BMR是指哺乳动物包括人类在安静状态下为维持正常的机体功能而燃烧的卡路里数。

在本文中使用时，术语“降低的热量摄入”是指哺乳动物包括但不限于人所消费的热量的下降。

在本文中使用时，术语“相对于T细胞蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(TCPTP)，选择性抑制蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP1B)”是指抑制蛋白酪氨酸磷酸酶-1B的IC₅₀值比T细胞蛋白酪氨酸磷酸酶-1B的IC₅₀值小至少约40倍。在具体实施方式中，抑制PTP1B的IC₅₀值比抑制TCPTP的IC₅₀值小至少约50倍，或小至少约60倍，或小至少约70倍，或小至少约80倍，或小至少约90倍，或小至少约100倍，或小至少约200倍。

在本文中使用时，术语“抑制剂”是指防止PTP1B结合其内源性底物和/或防止通过PTP1B介导的对其内源性底物(包括但不限于胰岛素受体酪氨酸激酶(IRTK)和IRTK的片段)和非天然底物诸如的去磷酸化的化合物对硝基苯基磷酸盐。

在本文中使用时，术语“选择性”是指在对于PTP1B酶的IC₅₀值方面，相比于其它酶的IC₅₀值，化合物具有高至少大约3倍的抑制，其它酶包括但不限于TC-PTP、SHP-2、LAR、CD45、PP2B和Cdc25c。

在本文中使用时，“有效量”是足以实现有益或期望结果的量。例如，治疗量是实现期望的治疗效果的量。该量可以与预防有效量相同或不同，预防有效量是防止疾病或疾病综合征起始所必需的量。有效量可以以一次或更多次给药、应用或剂量进行给药。在一个实施方式中，有效量是诱导肥胖者体重减轻的化合物1436的量。

治疗方法

氨基甾醇化合物1436在本发明中已经表现出快速诱导饮食诱发的肥胖小鼠的体重减轻。此外，所观察到的体重减轻在最肥胖的小鼠中是最高的，并且原因主要在于脂肪减少，但很少在于蛋白质减少(如果有的话)。同样，观察到最肥胖的1436-治疗的小鼠比起它们的成对饲养的对应体减少了显著更多的体重，这表明不仅仅是食欲抑制导致的体重减轻得到了诱导。令人惊奇地，在一段时间的治疗之后，例如大约7至大约10天的治疗，观察到对于成对饲养的小鼠，体重减轻的速率出现下降，而对于1436-治疗的小鼠，速率下降较小。1436-治疗组和对饲组之间的最终体重差异看来至少部分是由于1436-治疗组的相对跟多的脂肪减少。

治疗外源性肥胖症的最常见方法是饮食限制。该方法具有三个主要问题：(1)个体顺应性；(2)减少显著量的肌肉块以及脂肪的倾向；和(3)个体的代谢重调至较低的水平。

用化合物1436治疗克服了所有这些问题。医师控制的药物治疗将大大提高个体顺应性。如图6-9和13所示，在用化合物1436治疗后脂肪显著减少，伴随很少的蛋白质减少。如图3-5所示，当1436-治疗的动物体重持续减轻甚至当饮食-治疗的动物的体重减轻已经稳定时，代谢的重调似乎都不发生。

化合物1436的药学上可接受的盐包括非毒性盐或季铵盐，其从无机/有机酸或碱形成。这类酸加成盐的例子包括乙酸盐、己二酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、十二烷基硫酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐和酒石酸盐。碱式盐包括铵盐、碱金属盐例如钠盐和钾盐、碱土金属盐例如钙盐和镁盐、与有机碱的盐诸如二环己基胺盐以及与氨基酸诸如精氨酸的盐。同样，碱性含氮基团可以被诸如烷基卤季铵化。

除了载体之外，本发明的药物组合物还可以包括稳定剂和防腐剂。对于本领域普通技术人员已知的典型载体、稳定剂和佐剂的例子，参见Remington：TheScience and Practice of Pharmacy，21st ed.(Lippincott，Williams & Wilkins，PA(2005))。

化合物1436可单独给药，或优选以药物制剂给药，该药物制剂包含1436连同至少一种药学上可接受的载体。任选地，本领域普通技术人员已知的其它疗法可以与给药1436联合。

在整个疗程中，化合物1436的体内给药可以以一个剂量、多个剂量、连续或间歇实现。以单一剂量或分开的日剂量，剂量范围在约0.05mg/kg至约5mg/kg之间，例如在约0.07mg/kg至约3mg/kg之间，例如在约0.1mg/kg至约2mg/kg之间，例如在约0.3mg/kg至约1.5mg/kg之间，例如在约0.5mg/kg至约1mg/kg之间。最有效的给药方式和剂量的确定方法是本领域普通技术人员人员已知的，并且随着用于治疗的组合物、治疗目的、被处理的靶细胞和被治疗的对象而变化。对于主治医师所选择的给药水平和途径，可以进行单次或多次给药。也可以给药化合物1436的长效、延效和/或缓释制剂。

含有化合物1436的药物组合物可以通过任何合适的途径给药，包括经口、直肠、鼻内、局部(包括经皮、气溶胶、颊部和舌下)、肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内)、腹膜内和肺部给药。可以理解，优选的途径将随着接受者的状况和年龄以及所治疗的疾病而变化。

实施例

实施例1-饮食诱发的肥胖小鼠的体重减轻的诱导

小鼠和研究设计。在断奶时，来自Jackson Laboratories(Bar Harbor，Maine，USA)的雄性AKR/J小鼠被给药10％、45％或60％脂肪kcal饮食(Research Diets，Inc.，New Brunswick，NJ，USA)。小鼠每周称重，并且在进食不同方的脂肪饮食13-14周后开始治疗。紧在治疗开始之前，所有三种饮食的小鼠在同一脂肪组成饮食内被进一步随机再分成三组，具有一致的体重分布。以q7dx4方案，对AU小鼠给药(腹腔注射途径)，其中第一剂量的1436为10mg/kg，而所有剩余的剂量为5mg/kg。盐水治疗的动物以10mL/kg给药。以与其它组交错1天的、相同的q7dx4方案，给药成对饲养的动物盐水(10mL/kg)。作为食物消耗的量度，剩余的食物进行每日称重。提前24小时，对饲组被分配予1436-治疗组所消耗的精确量的食物。根据由Institutional Animal Care and UseCommittee批准的方案，进行涉及小鼠的AU步骤。

如图2所示，进食45％和60％脂肪饮食的小鼠变得肥胖，而进食10％脂肪饮食(正常小鼠饮食)的那些小鼠正常增加体重。进食60％脂肪饮食的动物比45％饮食饲养的动物显著更重，并且两者都显著更重于10％脂肪饮食饲养的那些动物。当用1436治疗这三个组时(在图2中的第0天开始)，所有三个组的体重都减轻，但小鼠越肥胖，体重减轻越快，体重减轻越多，因为在三周结束时所有三个组具有大致相同的体重(图2)。

图3-5表明，1436对体重减轻的影响大于饮食单独的影响(例如，基于1436-治疗组的体重减轻与对饲组的体重减轻的比较)。该影响在60％脂肪饮食组中最大，其中p值为0.013。该观察结果支持了这样的结论：化合物1436还通过防止基础代谢率的重调来诱导体重减轻，该重调通常见于饮食诱导的体重减轻中。

机体组成。机体组成(水分、脂肪、蛋白质和灰分百分比)根据所描述修改的方法进行测定(Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL.2000)。简言之，在125℃下干燥样品4小时，以测定水分。干燥后，将戊烷滴注入样品5小时，以测定脂肪组成。通过检测氮的燃烧法测定蛋白质，因数6.25被用于将氮百分比转换成蛋白质百分比。为测定灰分，在550℃下燃烧样品5小时，并通过重量分析进行定量。

图6-8示出了研究结束时10％、45％和60％脂肪饮食组的总机体组成。预处理饮食结果示出了一个比高脂肪饮食高30％但比正常饮食低20％的体脂肪％。1436-治疗组和对饲组对于所有饮食都显著降低体脂肪％。存在这样的趋势，相比于对饲组，在1436-治疗组中体脂肪减少更多。

组织学。在10％锌福尔马林(Fisher Scientific，Kalamazoo，MI，USA)中将肩胛内棕色脂肪组织固定48小时，并转移至70％EtOH。将包埋入组织石蜡中，并且将5μM切片应用于玻璃显微镜载玻片上。切片用苏木精/伊红染色，并在Olympus AX70显微镜(Melville，NY，USA)上用Insight 18.2 Color MosaicCamera(Diagnostic Instruments，Sterling Heights，MI，USA)捕获图像。

图9示出了在正常小鼠(10％脂肪饮食，用盐水治疗，A区)、用盐水治疗的进食60％饮食的小鼠(B区)、用1436治疗的进食60％饮食的小鼠(C区)和进食60％饮食的成对饲养的小鼠中棕色脂肪组织(BAT)的脂肪(白色小球)含量。1436-治疗的小鼠减去了通过进食60％饮食所增加的所有脂肪，并且比仅进食限制饮食的小鼠(成对饲养)减去的多。

图13示出了在正常小鼠(10％脂肪饮食，用盐水治疗，A区)、用盐水治疗的进食60％饮食的小鼠(B区)、用1436治疗的进食60％饮食的小鼠(C区)和进食60％饮食的成对饲养的小鼠中白色脂肪组织(WAT)的脂肪(白色小球)含量。1436-治疗的小鼠减去了通过进食60％饮食所增加的所有脂肪，并且比仅进食限制饮食的小鼠(成对饲养)减去的多。

实施例2-酪氨酸磷酸酶的选择性抑制

根据与MDS Pharma的合同，在分别使用大肠杆菌(E.coli)中表达人重组蛋白、以及酪氨酸磷酸肽(20μg/mL)或DiFMUP(10uM)作为底物的酶测定中，测定化合物1436对PTP1B和TCPTP的抑制。在PTP1B测定中，通过在室温下与各种浓度(0.05μM至500μM)的1436温育30分钟后，ELISA分析残余的酪氨酸磷酸肽，定量磷酸酶活性。使用Data Analysis Toolbox^TM(MDL Information Systems)，通过非线性最小二乘回归分析法，测定IC₅₀值(1.14μM)(见表1)。TCPTP测定要求酶与底物在37℃下预温育15分钟，随后在37℃下与各种浓度的1436(0.5μM至50μM)温育60分钟。通过DiFMU的荧光分光光度法定量，评估TCPTP活性。由于在所检测的1436的任何浓度下均未表现出抑制，IC₅₀被评定为>50μM(表1)。

表1：1436对酪氨酸磷酸酶的抑制的IC₅₀值

实施例3-与多巴胺转运体(DAT)和去甲肾上腺素转运体(NET)结合的抑制

使用CHO-Kl或MDCK细胞中表达的人重组蛋白，在放射性配体结合测定中分别测定MSI-1436对与多巴胺转运体(DAT)和去甲肾上腺素转运体(NET)结合的抑制。在存在1436(0.005μM至50μM)下，膜制备物与[¹²⁵I]RTI-55(对于DAT为0.15nM，对于NET为0.20nM)于4℃下温育3小时。如同在PTP1B测定中，测定IC₅₀值(见表2)。

表2：1436对结合DAT和NET的抑制的IC₅₀值

实施例4-MSI-1436对细胞摄入多巴胺和去甲肾上腺素的抑制

使用表达多巴胺转运体的CHO-K1细胞和表达去甲肾上腺素转运体的MDCK细胞，研究在化合物1436(0.005μM至50μM)存在下多巴胺和去甲肾上腺素的摄入。在所述细胞与放射性配体在化合物存在下于室温温育10分钟后，[³H]多巴胺或[³H]去甲肾上腺素的量化显示出1436的拮抗作用。如果相比于诺米芬辛(DAT)或地昔帕明(NET)的诱导反应，摄入抑制>50％，则拮抗作用符合显著性标准。表3给出了所测量的拮抗作用的详细情况，而图10示出了剂量-反应曲线。对于多巴胺摄入的抑制，IC₅₀值被计算为422nM，而对于去甲肾上腺素摄入的抑制，IC₅₀值被计算为718nM。

表3：1436对多巴胺和去甲肾上腺素摄入的抑制

实施例5-体外和体内抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B

使用10nM胰岛素、10μM MSI-1436、均不使用任意一种或用两者均使用对HepG2细胞(无限增殖化肝细胞)进行体外处理30分钟或3小时。图11示出了细胞裂解液的蛋白质印迹分析。未发现胰岛素受体-β(IR-β)的量的差异(A区)。随后进行磷酸化酪氨酸蛋白质印迹分析的胰岛素受体-β的免疫沉淀，表明单独的胰岛素诱导的IR-β磷酸化以及MSI-1436不诱导磷酸化(B区)。相比于胰岛素诱导的磷酸化，用胰岛素和MSI-1436两者处理30分钟的细胞显示出增加的IR-β磷酸化(B区)。该效应在3小时时稍微减弱。

为体外检测MSI-1436对PTP1B的效应，使用载体、MSI-1436(单剂量，10mg/kg，腹腔注射)对ob/ob小鼠或成对饲养的对照小鼠(n＝4/组)进行处理。在该单次处理之后24小时，对小鼠进行麻醉，并通过切口暴露出门静脉。胰岛素或磷酸缓冲盐溶液(PBS)被注射入门静脉，并在注射2分钟后收获肝脏。裂解肝脏，并用抗-胰岛素受体底物蛋白-1(IRS-1)抗体免疫沉淀裂解液，然后印迹分析磷酸酪氨酸，所得到的印迹代表磷酸化胰岛素受体底物蛋白-1(P-IRS-1)。使用成像软件，分析该印迹。图12表明，MSI-1436体内增强胰岛素诱导的IRS-1磷酸化，并且增强强度大于成对饲养对胰岛素诱导的影响(图12)。

除非以其他方式限定，本文所使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管与本文描述的那些类似或等价的方法和材料可用于本发明的实践或测试中，但本文仍描述了优选的方法和材料。本文引用的所有专利和出版物通过参照以其全部内容并入到本文中。

Claims (37)

1.一种诱导肥胖哺乳动物体重减轻的方法，包括：给药有效量的组合物，其中所述组合物包含药学上可接受的载体或赋形剂和根据下式的氨基甾醇化合物：

或其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物还患有选自下列所组成组的病症：II型糖尿病、高血清胆固醇、睡眠性呼吸暂停、皮克韦坎氏综合征和非酒精性脂肪性肝炎。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物是外源性肥胖。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述病症是II糖尿病。

5.根据权利要求2所述的方法，其中所述病症是高血清胆固醇。

6.根据权利要求2所述的方法，其中所述病症是睡眠性呼吸暂停。

7.根据权利要求2所述的方法，其中所述病症是皮克韦坎氏综合征。

8.根据权利要求2所述的方法，其中所述病症是非酒精性脂肪性肝炎。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述肥胖动物需要进行手术。

10.一种诱导外源性肥胖哺乳动物体脂肪快速减轻的方法，包括步骤：给药有效量的组合物，其中所述组合物包含药学上可接受的载体或赋形剂和根据下式的氨基甾醇化合物：

或其药学上可接受的盐。

11.一种在哺乳动物中致敏胰岛素的方法，包括：为需要的哺乳动物给药有效量的根据下式的氨基甾醇化合物：

或其药学上可接受的盐。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述哺乳动物是人。

13.根据权利要求11所述的方法，其中所述胰岛素的致敏包括I型或II型糖尿病的治疗。

14.根据权利要求11所述的方法，其中所述胰岛素的致敏包括肥胖症的治疗。

15.一种在哺乳动物中相对于酶TCPTP选择性抑制酶PTP1B的方法，包括：为需要的哺乳动物给药有效量的根据下式的氨基甾醇化合物：

或其药学上可接受的盐。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述酶PTP1B和TCPTP是人源的。

17.根据权利要求15所述的方法，其中所述哺乳动物是人。

18.根据权利要求15所述的方法，其中所述相对于酶TCPTP选择性抑制酶PTP1B包括I型或II糖尿病的改善治疗。

19.根据权利要求15所述的方法，其中所述相对于酶TCPTP选择性抑制酶PTP1B包括肥胖症的改善治疗。

20.根据权利要求11或15所述的方法，其中所述化合物还包含药学上可接受的载体或赋形剂。

21.根据权利要求11或15所述的方法，其中通过皮下注射给药所述化合物。

22.根据权利要求11或15所述的方法，其中通过吸入给药所述化合物。

23.用于在哺乳动物中致敏胰岛素的药物组合物，其包含具有下式的化合物：

24.一种在降低的热量摄入下维持哺乳动物的基础代谢率的方法，包括为所述哺乳动物给药有效量的组合物，其中所述组合物包含药学上可接受的载体或赋形剂和根据下式的氨基甾醇化合物：

其中所述氨基甾醇化合物以有效维持所述哺乳动物的代谢率的量进行给药。

25.根据权利要求11至24任一项所述的方法，其中所述哺乳动物是人。

26.一种在哺乳动物中抑制多巴胺摄入的方法，包括：向需要的哺乳动物给药有效量的根据下式的氨基甾醇化合物：

或其药学上可接受的盐。

27.根据权利要求26所述的方法，其中所述哺乳动物是人。

28.根据权利要求26所述的方法，其中所述抑制多巴胺摄入包括I型或II糖尿病的改善治疗。

29.根据权利要求26所述的方法，其中所述抑制多巴胺摄入包括肥胖症的改善治疗。

30.一种在哺乳动物中抑制去甲肾上腺素摄入的方法，包括：向需要的哺乳动物给药有效量的根据下式的氨基甾醇化合物：

或其药学上可接受的盐。

31.根据权利要求30所述的方法，其中所述哺乳动物是人。

32.根据权利要求30所述的方法，其中所述抑制去甲肾上腺素摄入包括I型或II糖尿病的改善治疗。

33.根据权利要求30所述的方法，其中所述抑制去甲肾上腺素摄入包括肥胖症的改善治疗。

34.根据权利要求26或30所述的方法，其中所述化合物进一步包含药学上可接受的载体或赋形剂。

35.根据权利要求26或30所述的方法，其中所述化合物经由皮下注射进行给药。

36.根据权利要求26或30所述的方法，其中所述化合物经由吸入进行给药。

37.一种用于在哺乳动物中致敏胰岛素的药物组合物，其包含具有下式的化合物：

或其药学上可接受的盐。

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