MX2008004030A - Compuestos de pirimidinil amida que inhiben la adhesion de eucocito mediada por vla-4 - Google Patents

Abstract

Se describen compuestos que se unen a VLA-4. Ciertos de estos compuestos también inhiben la adhesión de leucocito y, en particular, la adhesión de leucocito mediada por VLA-4. Tales compuestos sonútiles en el tratamiento de enfermedades inflamatorias en un sujeto humano o animal tal como asma, enfermedad de Alzheimer, ateroesclerosis, demencia por SIDA, diabetes, enfermedad inflamatoria del intestino, artritis reumatoide, transplante de tejido, metástasis de tumor e isquemia del miocardio. Estos compuestos también se pueden admii,istrar para el tratamiento de enfermedades inflamatorias del cerebro tales como esclerosis múltiple (Fórmula 1).

Description

COMPUESTOS DE PIRIMIDINIL AMIDA QUE INHIBEN LA ADHESIÓN DE LEUCOCITO MEDIADA POR VLA-4 CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se relaciona con compuestos que inhiben la adhesión de leucocito y, en particular, la adhesión de leucocito mediada por a4 integrinas, donde la a4 integrina es preferiblemente VLA-4. Esta invención también se relaciona con composiciones farmacéuticas que comprenden tales compuestos así como también métodos para tratar, por ejemplo, inflamación, utilizando los compuestos o las composiciones farmacéuticas de esta invención. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El VLA-4 (también denominado como integrina a4ßl y CD49d/CD29) , identificada primero por Hemler y Ta ada,l es un miembro de la familia de la integrina ßl de los receptores de superficie celular, cada una de las cuales comprende dos subunidades, una cadena a y una cadena ß. La VLA-4 contiene una cadena a4 y una cadena ßl . Existe por lo menos nueve integrinas ßl, todas compartiendo la misma cadena ßl y teniendo cada una, una cadena a distinta. Estos nueve receptores se unen todos a diferentes complementos de varias moléculas de matriz celular, tales como fibronectina, laminina, y colágeno. El VLA-4, por ejemplo, se une a la fibronectina. El VLA-4 también se une a moléculas sin matriz que se expresan mediante células endoteliales y otras. Estas moléculas diferentes a matriz incluyen VCAM-1, que se expresa sobre células endoteliales de la vena umbilical humana activada con citoquina en cultivo. Diferentes epítopos del VLA-4 son responsables por las actividades de unión de fibronectina y VCAM-1 y cada actividad ha mostrado que se inhibe independientemente .2 La adhesión intracelular mediada por VLA-4 y otros receptores de superficie celular se asocian con un número de respuestas inflamatorias. En el sitio del daño u otro estímulo inflamatorio, las células endoteliales vasculares activadas expresan moléculas que son adhesivas, para leucocitos. Las mecánicas de adhesión de leucocito a las células endotelialee involucran, en parte, el reconocimiento y la unión de los receptores de superficie celular sobre los leucocitos a las correspondientes moléculas de superficie celular sobre células endoteliales. Una vez unidos, los leucocitos migran a través de la pared del vaso sanguíneo para ingresar al sitio dañado y liberar mediadores químicos para combatir la infección. Para las revisiones de los receptores de adhesión del sistema inmune, ver, por ejemplo, Springer3 y Osborn4. Los trastornos inflamatorios del cerebro, tal como la encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) , esclerosis múltiple (MS) y meningitis, son ejemplos de trastornos del sistema nervioso central en el cual el mecanismo de adhesión del endotelio/leucocito da como resultado la destrucción de tejido del cerebro de otra manera saludable. Grandes números de leucocitos migran a través de la barrera sangre cerebro (BBB) en sujetos con estas enfermedades inflamatorias. Los leucocitos liberan mediadores tóxicos que originan un daño extensivo del tejido dando como resultado una conducción nerviosa afectada y parálisis. En otros sistemas de órgano, el daño del tejido también ocurre por vía de un mecanismo de adhesión que da como resultado la migración o activación de leucocitos. Por ejemplo, se ha mostrado que el traumatismo inicial luego de la isquemia de miocardio al tejido cardiaco puede además ser complicado por la entrada de leucocitos al tejido dañado originando un traumatismo aún adicional (Vedder, et al . ) 5. Otras condiciones inflamatorias o médicas mediadas por un mecanismo de adhesión incluyen, por vía de ejemplo, asma, 6-8 enfermedad de Alzheimer, ateroesclerosis , 9-10 demencia por SIDA, 11 diabetes , 12-14 (que incluye diabetes aguada de ataque juvenil) , enfermedad inflamatoria del intestino, 15 (que incluye colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn), esclerosis múltiple , 16-17 artritis reumatoide, 18-21 transplante de tej ido, 22 metástasis de tumor, 23-28 meningitis, encefalitis, ataque, y otros traumas del cerebro, nefritis, retinitis, dermatitis atópica, soriasis, isquemia del miocardio y daño agudo del pulmón mediado por leucocito tal como aquel que ocurre en el síndrome por malestar respiratorio en adulto. Las aminopirimidinas sustituidas, como una clase, se han descrito por inhibir la unión del VLA-4 al VCAM-1 y, de acuerdo con esto, exhiben propiedades anti-inflamatorias .29 Aunque estos compuestos poseen propiedades antagonistas a tal unión, la biodisponibilidad mejorada de estos compuestos aumentaría su eficacia. SUMARIO DE LA INVENCIÓN Esta invención suministra compuestos, sales farmacéuticamente aceptables de éstos, composiciones de éstos, síntesis de éstos, y métodos para tratar enfermedades mediadas por VLA-4. En una modalidad, la presente invención suministra compuestos de fórmula I: en donde : Rl se selecciona del grupo que consiste de alquilo Cl a C4 , haloalquilo Cl a C4 , heteroarilo y -N(R5) (R6) donde R5 y R6 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo Cl a C4 , o R5 y R6 junto con el nitrógeno colgante a éste se une para formar un anillo heterocíclico; R2 se selecciona del grupo que consiste de alquilo Cl a C4 , alquenilo C2 a C4 , y alquinílo C2 a C4 ; y R3 y R4 son independientemente alquilo Cl a C3 o R3 , R4 junto con el átomo de nitrógeno colgante a éste se une para formar un anillo heterocíclico; 0 una sal farmacéuticamente aceptable, éster, o prodroga de éste. En una modalidad, la presente invención suministra un compuesto de fórmula II: p en donde : R7 es alquilo Cl a C4 , haloalquilo Cl a C4 , o heteroarilo; R8 es alquilo Cl a C4 ; R9 y RIO son independientemente alquilo Cl a C3 o R9, RIO junto con el átomo de nitrógeno colgante a éste se une para formar un anillo heterocíclico; o una sal f rmacéuticamente aceptable, éster, o profármaco de éste. En otra modalidad, la presente invención suministra compuestos de fórmula III: III en donde: Rll y R12 son independientemente alquilo Cl a C4 o Rll y R12, junto con el átomo de nitrógeno colgante a éste, se unen para formar un anillo heterocíclico; R13 es alquilo Cl a C4 ; y R14 y R15 son independientemente alquilo Cl a C4 o R14 y R15 junto con el átomo de nitrógeno colgante a éstos se unen para formar un anillo heterocíclico; o una sal farmacéuticamente aceptable, éster, o prodroga de éste. La presente invención suministra los compuestos en la Tabla 4.

Tabla 4 DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Como arriba, esta invención se relaciona con compuestos que inhiben la adhesión de leucocitos y, en particular, la adhesión de leucocito mediada por lo menos en parte por tegrinas a4 , preferiblemente VLA-4. Sin embargo, antes de describir esta invención en detalle adicional, los siguientes términos se definieron primero. Definiciones A menos que se establezca otra cosa, los siguientes términos utilizados en la especificación y reivindicaciones tienen los significados dados adelante: Como se utiliza aquí y a menos que se defina de otra forma, "alquilo" se refiere a grupos alquilo rectos, ramificados y cíclicos que tienen preferiblemente de 1 a 4 átomos de carbono y más preferiblemente 1 a 3 átomos de carbono. Este término se ejemplifica por grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, íso-butilo, sec-butilo, t-butilo, ciclopropilo, ciclobutilo, y metileno-ciclopropilo. "alquenilo" se refiere a un grupo alquenilo recto y ramificado que tiene de 2 a 4 átomos de carbono y preferiblemente 2 a 3 átomos de carbono y que tiene por lo menos 1 y preferiblemente 1 sitio de msaturación alquenilo. Ejemplos de tales grupos alquenilo incluyen vinil (-CH=CH2), aillo ( -CH2CH=CH2 ) , n-propen-1-?l (- CH=CHCH3), n-buten-2-il ( -CH2CH=CHCH3 ) , y similares. Incluido dentro de este término están los isómeros cis y trans o mezclas de estos isómeros. "alquinilo" se refiere a un grupo alquinilo recto o ramificado que tiene de 2 a 4 átomos de carbono y preferiblemente 2 a 3 átomos de carbono y que tiene por lo menos 1 y preferiblemente 1 sitio de insaturación alquinilo. Ejemplos de tales grupos alquinilo incluyen acetilenilo (-C=CH), propargilo (-CH2C=CH), n-propin-1-il (-CH=CHCH3), y similares. "Arilo" o "Ar" se refiere a un grupo carbocíclico aromático monovalente desde 6 a 14 átomos de carbono que tiene un anillo único (por ejemplo, fenilo) o anillos condensados múltiples (por ejemplo, naftilo o antrilo) cuyos anillos condensados pueden o no ser aromáticos (por ejemplo, 2-benzoxazolinona, 2H-1 , 4 -benzoxazin-3 (4H) -ona-7-il, y similares) siempre y cuando el punto de unión esté en un átomo de carbono aromático. Los arilos preferidos incluyen fenilo y naftilo. "Arilo sustituido" se refiere a grupos arilo que se sustituyen con 1 a 3 sustituyentes, y preferiblemente 1 a 2 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste de hidroxilo, acilo, acilamino, aciloxi, alquilo, alquilo sustituido, alcoxi, alcoxi sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, amino, amino sustituido, ammoacilo, arilo, aplo sustituido, aploxi, aploxi sustituido, carboxilo, carboxil esteres, ciano, tiol, tioalquilo, tioalquilo sustituido, tioarilo, tioarilo sustituido, tioheteroaplo, tioheteroaplo sustituido, tiocicloalquilo, tiocicloalquilo sustituido, tioheterocíclico, tioheterocíclico sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halo, nitro, heteroaplo, heteroaplo sustituido, heterocíclico, heterocíclico sustituido, heteroaploxi , heteroaploxi sustituido, heterocicliloxi , heterocicliloxi sustituido, am o sulfonilo (NH2-S02-), y amino sulfo ilo sustituido. "Halo" o "halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo y yodo y preferiblemente es flúor o cloro. "Haloalquilo" se refiere a grupos alquilo de 1 a 5 grupos. Preferiblemente, tales grupos tienen de 1 a 3 grupos halo y de 1 a 2 átomos de carbono. Grupos haloalquilo particularmente preferidos incluyen tphalometilo (por ejemplo, tpfluorometilo) y tphaloetilo (por ejemplo, 2 , 2 , 2- trifluoroet-1- lio) . "Heteroaplo" se refiere a un grupo carbocíclico aromático desde 2 a 10 átomos de carbono y 1 a 4 heteroátomos seleccionados de oxígeno, nitrógeno y azufre dentro del anillo. Tales grupos heteroarilo pueden tener un anillo único (por ejemplo, piridilo o fuplo) o anillos condensados múltiples en donde el anillo condensado puede ser aplo o heteroaplo. Ejemplos de tales heteroaplos incluyen, por ejemplo, furan-2-?lo, furan-3-?lo, t?en-2-ilo, t?en-3-?lo, p?rrol-2-?lo, p?rrol-3-?lo, pipdil (2-, 3-, y 4-p?pd?los) y similares. En una modalidad, los átomos de azufre y/o nitrógeno del heteroaplo son opcionalmente oxidados (es decir, -S(0)- o -S(0)2-, y/o N-óxidos) "Heterociclo" o "heterocíclico" se refiere a un grupo no heteroaromático saturado o msaturado que tiene un anillo único o anillos múltiples condensados, de 1 a 10 átomos de carbono y desde 1 a 4 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, azufre u oxígeno dentro del anillo en donde, en sistemas de anillo fusionados, uno o más anillos pueden ser arilo o heteroarilo. En una modalidad, los átomos de azufre y/o nitrógeno del heterociclo son opcionalmente oxidados (es decir, -S(O)- o -S(0)2-, y/o N-óxidos) . "Portador farmacéuticamente aceptable" significa un portador que es útil para preparar una composición farmacéutica que es generalmente segura, no tóxica y ni biológica ni de otra manera indeseable, e incluye un portador que es aceptable para uso veterinario así como también uso farmacéutico humano. "Un portador farmacéuticamente aceptable" como se utiliza en la especificación y reivindicaciones incluye tanto uno como más de uno de tal portador.

"Pro- fármaco" se refiere a cualquier derivado farmacéuticamente aceptable de un compuesto de esta invención que es capaz de suministrar directa o indirectamente un compuesto de esta invención o un metabolito activo o residuo de éste cuando se administra a un sujeto. Los derivados y las prodrogas particularmente favorecidos son aquellos que incrementan la biodisponibilidad de los compuestos de esta invención cuando tales compuestos se administran a un sujeto (por ejemplo, al permitir que un compuesto oralmente administrado sea más fácilmente absorbido en la sangre) o que mejore el suministro del compuesto padre a un compartimiento biológico (por ejemplo, el sistema cerebral o linfático) con relación a sus especies padre. Los pro-fármacos incluyen formas de éster de los compuestos de la invención. Ejemplos de pro- fármacos de éster incluyen derivados de formato, acetato, propionato, butirato, acrilato, y etilsuccmato . Una revisión general de los profármacos se suministra en T. Higuchi y V. Stella, Pro-drogas como Sistemas de Suministro Novedosos, Vol. 14 de A C S Symposium Series, y en Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers m Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, ambas incorporadas aquí como referencia.

"Sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales que retienen la efectividad y las propiedades biológicas de los compuestos de esta invención y que no son biológicamente o de otra manera indeseable. En muchos casos, los compuestos de esta invención son capaces de formar sales acidas y/o básicas en virtud de la presencia de grupos amino y/o carboxilo o grupos similares a éstos. Las sales de adición básica farmacéuticamente aceptables se pueden preparar de bases inorgánicas y orgánicas. Las sales derivadas de bases inorgánicas, incluyen por vía de ejemplo solamente sales de sodio, potasio, litio, amonio, calcio y magnesio. Las sales derivadas de bases orgánicas incluyen, pero no están limitadas a, sales de aminas primarias, secundarias, y terciarias, tales como alquil aminas, dialquil aminas, trialquil aminas, alquil aminas sustituidas, di (alquil sustituido) aminas, tp (alquil sustituido) aminas, alquenil aminas, dialquenil aminas, tpalquenil aminas, alquenil aminas sustituidas, d?(alquen?l sustituido) aminas, tr?(alquen?l sustituido) aminas, cicloalquil aminas, di (cicloalquil) aminas, tp (cicloalquil) aminas, cicloalquil aminas sustituidas, cicloalquil amina disustituida, cicloalquil aminas trisustituidas, cicloalquenil aminas, di (cicloalquenil) aminas, tri (cicloalquenil) aminas, cicloalquenil aminas sustituidas, cicloalquenil amina disustituida, cicloalquenil aminas trisustituidas , aril aminas, diaril aminas, triapl aminas, heteroaril aminas, diheteroapl aminas, triheteroapl aminas, aminas heterocíclicas , aminas diheterocíclicas , aminas triheterocíclicas, di y tnammas mezcladas donde por lo menos dos de los sustituyentes en la amina son diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, cicolaquenilo, cicloalquenilo sustituido, aplo, heteroaplo, heterocíclico, y similares. También se incluyen aminas donde los dos o tres sustituyentes, junto con el nitrógeno arrimo, forman un grupo heterocíclico o heteroarilo . Ejemplos de aminas adecuadas incluyen, por vía de ejemplos solamente, ísopropilamma, tpmetilamma, dietilamma, tri (iso-propil) amina, tri (n-propil) amina, etanolam a, 2-d met?lammoetanol , tromotamma, lisma, argmma, histidma, cafeína, procaína, hidrabamma, colma, betaína, etilenodiamma, glucosamma, N-alquilglucammas , teobromma, purmas, piperazma, pipepdma, morfolmo, N-etilpiperidma, y similares. Se debe entender también que otros derivados de ácido carboxílico serían útiles en la práctica de esta invención, por ejemplo, amidas de ácido carboxílico, incluyendo carboxamidas, carboxamidas de alquilo inferior, dialquil carboxamidas , y similares. Las sales de adición acida farmacéuticamente aceptables se pueden preparar de ácidos inorgánicos y orgánicos. Las sales derivadas de ácidos inorgánicos incluyen ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, y similares. Las sales derivadas de ácidos orgánicos incluyen ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido malónico, ácido succínico, ácido maléico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-tolueno sulfónico, ácido salicílico, y similares. El término "catión farmacéuticamente aceptable" se refiere al catión de una sal farmacéuticamente aceptable. Se entiende que en todos los grupos sustituidos definidos aquí, los polímeros llegados por los sustituyentes de definición con sustituyentes adicionales a ellos mismos (por ejemplo, aplo sustituido que tiene un grupo aplo sustituido como un sustituyente que es en si mismo sustituido con un grupo aplo sustituido, etc ) no están destinados para la inclusión aquí. En tales casos, el número máximo de tales sustituyentes es tres. Es decir que cada uno de las definiciones anteriores está restringida por una limitación que, por ejemplo, los grupos arilo sustituidos son limitados a -arilo sustituido- (arilo sustituido) - (arilo sustituido) . "Tratar" o "tratamiento" de una enfermedad incluye: (1) evitar la enfermedad, es decir, hacer que los síntomas clínicos de la enfermedad no se desarrollen en un mamífero que se pueda exponer o esté predispuesto a la enfermedad pero que aún no experimente o despliegue los síntomas de la enfermedad, (2) inhibir la enfermedad, es decir, disminuir o reducir el desarrollo de la enfermedad o sus síntomas clínicos, o (3) aliviar la enfermedad, es decir, originar la regresión de la enfermedad o sus síntomas clínicos. Una "cantidad terapéuticamente efectiva" significa la cantidad de un compuesto que, cuando se administra a un mamífero para tratar la enfermedad, es suficiente para efectuar tal tratamiento para la enfermedad. La "cantidad terapéuticamente efectiva" variará dependiendo del compuesto, la enfermedad y su severidad y la edad, peso, etc., del mamífero a ser tratado. "Sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a las sales farmacéuticamente aceptables de un compuesto de fórmula I cuyas sales se derivan de una variedad de contra iones orgánicos e inorgánicos bien conocidos en la técnica e incluyen, por vía solo de ejemplo, sodio, potasio, calcio, magnesio, amonio, tetraalquilamonio, y similares; y cuando la molécula contiene una funcionalidad básica, las sales de los ácidos orgánicos o inorgánicos, tales como clorhidrato, bromhidrato, tartrato, mesilato, acetato, maleato, oxalato y similares. Las integrinas son una gran familia de proteínas ligadoras de transmembrana homologas que son los receptores principales de las células animales para unir la mayoría de las proteínas de matriz extracelular, tales como colágeno, fibronectina, y laminina. Las integrinas son heterodímeros comprendidos de una cadena a y una cadena ß . Hasta la fecha, se han identificado veinte diferentes heterodímeros de integrina, hechos de 9 diferentes subunidades c y 14 diferentes subunidades ß. El término "integrinas a4" se refiere a la clase de heterodímero, receptores de superficie celular ligados a enzima que contienen la subunidad a 4 pareada con cualquiera de las subunidades ß. El VLA-4 es un ejemplo de una integrina a 4, y es un heterodímero de las subunidades a 4 y ßl, y también se denomina como integrina ßl a 4. Esta invención suministra compuestos, sales farmacéuticamente aceptables de éstos, composiciones de éstos, síntesis de éstos, y métodos para tratar enfermedades mediadas por VLA-4. En una modalidad, la presente invención suministra compuestos de fórmula I: en donde : Rl se selecciona del grupo que consiste de alquilo Cl a C4 , haloalquilo Cl a C4 , heteroarilo y -N(R5) (R6) donde R5 y R6 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo Cl a C4 , o R5 y R6 junto con el nitrógeno colgante a éste se une para formar un anillo heterocíclico; R2 se selecciona del grupo que consiste de alquilo Cl a C4 , alquenilo C2 a C4 , y alquinilo C2 a C4 ; y R3 y R4 son independientemente alquilo Cl a C3 o R3 , R4 junto con el átomo de nitrógeno colgante a éste se unen para formar un anillo heterocíclico; o una sal farmacéuticamente aceptable, éster, o prodroga de éste.

En algunas modalidades, el grupo -OC(0)NR3R4 está en la posición para del anillo fenilo. En algunas modalidades, R3 y R4 están unidos para formar un anillo heterocíclico. En otras modalidades, R3 y R4 están unidos para formar un anillo pirrolidinilo. En algunas modalidades, R2 es alquilo Cl a C4. En otras modalidades, R2 es etilo. En aún otras modalidades, R3 y R4 están unidos para formar un anillo heterocíclíco y R2 es alquilo Cl a C4. En aún otras modalidades, R3 y R4 se unen para formar un anillo pirrolidinilo y R2 es etilo. Ejemplos de compuestos de esta invención incluyen aquellos que tienen los grupos Rl, R2 , R3 , y R4 citados en la Tabla 1. Tabla 1 En otra modalidad, la presente invención suministra un compuesto de fórmula II: u en donde : R7 es alquilo Cl a C , haloalquilo Cl a C4 , o heteroarilo; R8 es alquilo Cl a C4 ; R9 y RIO son independientemente alquilo Cl a C3 o R9 , RIO junto con el átomo de nitrógeno colgante a éste se unen para formar un anillo heterocíclico; o una sal farmacéuticamente aceptable, éster, o prodroga de éste. En algunas modalidades, el grupo -OC(O)NR9R10 está en la posición para del anillo de fenilo. En algunas modalidades, R9 y RIO están unidos para formar un anillo heterocíclico . En otras modalidades, R9 y RIO se unen para formar un anillo pirrolidmilo. En algunas modalidades, R8 es alquilo Cl a C4. En otras modalidades, R8 es etilo. En algunas modalidades, R7 es alquilo Cl a C4. En otras modalidades, R7 se selecciona del grupo que consiste de isopropilo y t-butilo. En algunas modalidades, R7 es haloalquilo Cl a C4. En otras modalidades, R7 es tpfluorometilo . En algunas modalidades, R7 es heteroaplo. En otras modalidades, R7 se selecciona del grupo que consiste de furan-2-?lo, furan-3-?lo, t?en-2-?lo, y t?en-3-?lo. En algunas modalidades, R9 y RIO se unen para formar un anillo heterocíclico, R8 es alquilo Cl a C4 , y R7 es heteroarilo. En otras modalidades, R9 y RIO junto con el nitrógeno colgante forman un anillo de pirrolidma, R8 es etilo, y R7 es heteroarilo. En algunas modalidades, R9 y RIO se unen para formar un anillo heterocíclico, R8 es alquilo Cl a C4 , y R7 es alquilo. En otras modalidades, R9 y RIO junto con nitrógeno colgante forman un anillo de pirrolidina, R8 es etilo, y R7 es alquilo. La presente invención suministra además los compuestos de Fórmula II que tienen los grupos R7 , R8 , R9, y RIO citados en la Tabla 2. Tabla 2 En otra modalidad, la presente invención suministra compuestos de fórmula 111 en donde : Rll y R12 son independientemente alquilo Cl a C4 o Rll y R12, junto con el átomo de nitrógeno colgante a éste, se unen para formar un anillo heterocíclico: R13 es alquilo Cl a C4 ; y R14 y R15 son independientemente alquilo Cl a C3 o R14 y R15 junto con el átomo de nitrógeno colgante a éste se unen para formar un anillo heterocíclico; o una sal farmacéuticamente aceptable, éster, o prodroga de éste. En algunas modalidades, el grupo -OC (O) NR14R15 está en la posición para del anillo de fenilo. En algunas modalidades, R14 y R15 se unen para formar un anillo heterocíclico. En otras modalidades, R14 y R15 se unen para formar un anillo pirrolidinilo. En algunas modalidades, R13 es alquilo Cl a C4. En otras modalidades, R13 es etilo. En algunas modalidades, Rll y R12 son independientemente alquilo Cl a C4. En otras modalidades Rll es etilo y R12 es isopropilo. En algunas modalidades, Rll y R12, junto con el átomo de nitrógeno colgante a éstos, se unen para formar un anillo heterocíclico. En otras modalidades, el anillo heterocíclico se selecciona del grupo que consiste de piperidin-1-ilo y 3 - tiapirrolidin-1-ilo .

En aún otras modalidades, R14 y R15 se unen para formar un anillo heterocíclico, R13 es alquilo Cl a C4 , y Rll y R12, junto con el átomo de nitrógeno colgante a éstos, se unen para formar un anillo heterocíclico. La presente invención suministra además compuestos de Fórmula III que tienen los grupos Rll, R12, R13 , y R15 citados en la Tabla 3. Tabla 3 En algunas modalidades, la presente invención suministra compuestos de fórmula I, II, y III que tienen los sustituyentes carbamilo: en sus respectivas fórmulas unidas al anillo de fenilo en la posición para. En aún otras modalidades, los compuestos en las Tablas 1, 2, y 3 tienen los sustituyentes carbamilo unidos en la posición para. En algunas modalidades, la presente invención también suministra compuestos de la fórmula I, II, y III que incluyen aquellos en las Tablas 1, 2, y 3, que tienen los sustituyentes carbamilo unidos en las posiciones orto o meta . La presente invención también suministra los compuestos en la Tabla 4. Tabla 4 En otro aspecto, esta invención suministra composiciones farmacéuticas que comprenden un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos definidos aquí. En uno de sus aspectos de método, esta invención está dirigida a un método para tratar una enfermedad mediada por lo menos en parte por la mtegrma a4 , preferiblemente VLA-4, en un paciente, cuyo método comprende administrar una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más de los compuestos de esta invención. En otro aspecto, esta invención está dirigida a un uso de una composición farmacéutica que comprende un compuesto de esta invención para la elaboración de un medicamento para tratar una enfermedad mediada por mtegrma a4. Los compuestos y las composiciones farmacéuticas de esta invención son útiles para tratar condiciones de enfermedad mediadas por lo menos en parte por mtegrmas a4 , donde la mtegrma a4 es preferiblemente VLA-4 o adhesión de leucocito. Tales condiciones de enfermedad incluyen, por vía de ejemplo, asma, enfermedad de Alzheimer, aterosclerosis , demencia por SIDA, diabetes (incluyendo diabetes aguda de ataque juvenil), enfermedad inflamatoria del intestino (incluyendo colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn), esclerosis múltiple, artritis reumatoide, transplante de tejido, metástasis de tumor, meningitis, encefalitis, ataques, y otros traumas cerebrales, nefritis, retinitis, dermatitis atópica, soriasis, isquemia del miocardio y daño agudo pulmonar mediado por leucocito tal como lo que ocurre en el síndrome de afección respiratoria en adulto. Otras condiciones de enfermedad incluyen, pero no están limitadas a, condiciones inflamatorias tales como eritema nodosum, conjuntivitis alérgica, neuritis óptica, uveitis, rinitis alérgica, espondilitis anquilosante, artritis soriásica, vasculitis, síndrome de Reiter, lupus eritematoso sistémico, esclerosis sistémica progresiva, polimiositis , dermatomiosistis , granulomatosis de egner, aortitis, sarcoidosis, lmfocitopenia, arteritis temporal, pericarditis, miocarditis, falla cardiaca congestiva, poliarteptis nodosa, síndromes de hipersensibilidad, alergia, síndromes hipereosmofílicos , síndrome de Churg-Strauss, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, neumonitis por hipersensibilidad, hepatitis activa crónica, cistitis intersticial, falla endocrina autoinmune, cirrosis biliar primaria, anemia aplásica autoinmune, hepatitis persistente crónica, y tiroiditis. En una modalidad preferida, la condición de enfermedad mediada por íntegr a a4 es una enfermedad inflamatoria. Los compuestos de esta invención incluyen, por vía de ejemplo, los siguientes- N- [2 -d?met?lam?no-5- {N-etil-N-(trifluoroacetil) arrimo }p?nm?dm-4 -íl] -L-4' -{ (p?rrol?d?n-1-íl) carboniloxi } fenilalanma; N- [2-d?met?lammo-5- {N-etil-N- (íso-propilcarbonil) arrimo}p?nm?dm-4 -ll] -L-4 ' - { (p?rrol?dm-1-íl) carboniloxi} fenila1aniña; N- [2-d?met?lammo-5-{N-et?l-N- (t-butilcarbonil) arrimo }p?pm?dm- 4 -íl] -L-4 ' - { (p?rrol?dm-1-íl) carbomloxi } f emlalanin ; N- [2-d?met?lammo-5- {N-etil-N- (furan-2-ílcarbonil) arrimo }p?r?m?dm-4-?l] -L-4' -{ (p?rrol?dm-1-íl) carboniloxi} f enilalanina; N- [2-d?met?lammo-5- {N-etil-N- (p?per?d -1-ílcarbonil) ammo}p?r?m?dm-4-?l] -L-4 ' - { (p?rrol?dm-1-il) carboniloxi } f enilalanma; N- [2-d?met?lammo-5- {N-etil-N- (N-etil-N- íso-propilammocarbonil) ammo}p?r?m?dm-4 -íl] -L-4' -{ (p rrol?dm-1-?l) carboniloxi } f enilalanina; N- [2-d?met?lammo-5- {N-etil-N- (t?en-3-ílcarbonil) ammo}p?pm?dm-4-?l] -L-4' -{ (p?rrol?dm-1-ll) carboniloxi} f enilalanma; N- [2-d?met?lammo-5- {N-etil-N- (t?en-2-ílcarbonil) am?no}p?r?m?dm-4-?l] -L-4 ' - { (p?rrol?d?n-1-íl) carbonilox } f enilalanma,- N- [2-d?met?lammo-5- {N-etil-N- (furan-3-ílcarbonil) ammo}p?r?m?dm-4 -íl] -L-4 ' - { (p?rrol?dm-1-íl) carboniloxi } f eni 1 al aniña; N- [2-d?met?lammo-5- {N-etil-N- (3 - t?ap?rrol?dm-1-ílcarbonil) am?no}p?r?m?dm-4 -íl] -L-4 ' - { (p?rrol?dm-1-?l ) carboniloxi } f enilalanma ; t-butil éster de N- [2-dimetilamino-5- {N-etil-N- (tien-2 -ilcarbonil) amino}pirimidin-4 -il]-L-4'-{ (pirrolidin- 1-il) carboniloxi} -fenilalanina; t-butil éster de N- [2-dimetilamino-5- {N-etil-N-trifluorometilcarbonil) amino}pirimidin-4 - il] -L-4 ' -{ (pirrolidin-1-il) carboniloxi} -fenilalanina; t-butil éster de N- [2-dimetilamino-5- {N-etil-N-t-butilcarbonil) amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' - { (pirrolidin-1-il) carboniloxi } -fenilalanina; y t-butil éster de N- [2-dimetilamino-5- {N-etil-N-furan-3 -ilcarbonil) amino}pirimidin-4 -il] -L-4 ' - { (pirrolidin- 1-íl) carboniloxi} -fenilalanina; o la sal, éster o pro- fármaco farmacéuticamente aceptable de éstos. Preparación del Compuesto Los compuestos de esta invención se pueden preparar de materiales de partida fácilmente disponibles utilizando los siguientes métodos y procedimientos generales. Se apreciará que donde se dan condiciones de proceso típicas o preferidas (es decir, temperaturas de reacción, tiempos, proporciones de mol de reactivos, disolventes, presiones, etc.), otras condiciones de proceso también se pueden utilizar a menos que se establezca otra cosa. Las condiciones de reacción óptima pueden variar con los reactivos o disolventes particulares utilizados, pero tales condiciones se pueden determinar por un experto en la técnica mediante procedimientos de optimización de rutina.

Adicionalmente, como será evidente por aquellos expertos en la técnica, grupos protectores convencionales se pueden necesitar para evitar que ciertos grupos funcionales sufran reacciones indeseadas. Los grupos protectores adecuados para varios grupos funcionales así como también las condiciones adecuadas para proteger y desproteger grupos funcionales particulares son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, se describen numerosos grupos protectores en T . W. Greene y G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Segunda Edición, Wiley, New York, 1991, y referencias citadas aquí. Adicionalmente, los compuestos de esta invención típicamente contendrán uno o más centros quirales. De acuerdo con esto, si se desea, tales compuestos se pueden preparar o aislar como estereoisómeros puros, es decir, como enantiómeros y diaestereómeros individuales, o como mezcla enriquecidas con estereoisómero . Todos los tales estereoisómeros (y mezclas enriquecidas) se incluyen dentro del alcance de esta invención, a menos que se indique otra cosa. Los estereoisómeros puros (o mezclas enriquecidas) se pueden preparar utilizando, por ejemplo, materiales de partida ópticamente activos o reactivos estereoselectivos bien conocidos en la técnica. Alternativamente, las mezclas racémicas de tales compuestos se pueden separar utilizando, por ejemplo, cromatografía de columna quiral, agentes de resolución quiral y similares . En una modalidad, los compuestos de esta invención se pueden preparar como se describe adelante en el Esquema 1: Esquema 1 Donde Rl, R2 , R3 , R4 , R5 y R6 son como se definió anteriormente y Pg es un grupo protector carboxilo tal como bencilo, t-butilo, y similares.

En el Esquema 1, los intermedios de 5-aminopirimidina de partida, el compuesto 1.1, se describen en detalle en la WO 03/099809 y, por motivos solo de ilustración, se muestran en este esquema como derivados de fenilalanina 4-sustituidos. Se entiende, por supuesto, que los derivados de fenilalanina 2- y 3- sustituidos seguirían una senda de reacción similar. Específicamente, en el Esquema 1, pirimidina 5-amino-2 -dietilamino-4 -sustituida, compuesto 1.1 (preparado por el correspondiente 5-nitro-pirimidina mediante reducción con Pd/C al 5%, Pt02 al 5% en peso) se convierte la correspondiente trifluoroacetamida, compuesto 1.2, mediante métodos convencionales. Por ejemplo, un exceso ligero de anhídrido trifluoroacético se combina con el compuesto 1.1 en un diluyente inerte adecuado tal como tetrahidrofurano, cloruro de metileno, piridina, y similares. La reacción se mantiene desde aproximadamente 0°C a aproximadamente 30 °C hasta que la reacción se completa sustancialmente lo cual ocurre típicamente en aproximadamente 0.5 a 24 horas. Luego de completar la reacción, el compuesto 1.2 se recupera mediante métodos convencionales que incluyen neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración, y similares o, alternativamente, se emplea en la siguiente etapa sin purificación y/o aislamiento . La conversión del compuesto 1.2 al correspondiente N (R2) , N-tpfluoroacetamidopipmidma, compuesto 1-3, procede de nuevo por vía de técnicas convencionales. Por ejemplo, un exceso del haluro, R2-I, se combina con el compuesto 1.2 en un diluyente inerte adecuado tal como DMF en la presencia de un exceso de base adecuada tal como carbonato de potasio. En una modalidad preferida, se emplean aproximadamente dos equivalentes de R2-I y carbonato de potasio. La reacción se mantiene bajo condiciones ambiente en un recipiente sellado y se continúa hasta que la reacción se completa sustancialmente lo que ocurre típicamente a las 20-72 horas. Luego de completar la reacción, el compuesto 1.3 se recupera mediante métodos convencionales que incluyen la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración, y similar o, alternativamente, se emplea en la siguiente etapa sin purificación y/o aislamiento. El grupo protector carboxilo del compuesto 1.3 se puede remover mediante condiciones convencionales para suministrar un compuesto de Fórmula I (no mostrado) . En una modalidad, un grupo protector t-butilo se puede remover mediante contacto con ácido fórmico. En otra modalidad, se puede remover un grupo protector bencilo mediante contacto con hidrógeno en la presencia de un catalizador de paladio/carbono típicamente en un disolvente prótico tal como metanol bajo presiones de hidrógeno elevadas. Alternativamente, el grupo trifluoroacetilo se puede remover para suministrar la correspondiente amina, compuesto 1.4. En esta modalidad, el grupo trifluoroacetilo actúa como un grupo protector amina. Como anteriormente, esta reacción procede de manera convencional, por ejemplo, al poner en contacto el compuesto 1.3 con un exceso grande de una base adecuada tal como carbonato de potasio en una mezcla de agua y un disolvente prótico tal como metanol. La reacción se conduce a temperaturas elevadas tal como 40° a 60 °C y se continúa hasta que la reacción se completa de manera sustancial. Luego de completar la reacción, el compuesto 1.4 se recupera mediante métodos convencionales incluyendo neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración, y similares o, alternativamente, se emplea en la siguiente etapa sin purificación y/o aislamiento. En el Esquema 1, el compuesto 1.4 se puede utilizar para preparar derivados de urea donde Rl = -NR5R6 o derivados de acilamino donde Rl es alquilo Cl a C4 , haloalquilo Cl a C4 o heteroarilo unido al grupo carbonilo diferente de a través de un átomos de nitrógeno. En la primera modalidad, los derivados de urea se preparan mediante métodos convencionales tales como al preparar primero el cloruro de amido, compuesto 1.7. Este compuesto se prepara al poner en contacto el compuesto 1.4 con un exceso de fosgeno en la presencia de una base adecuada tal como carbonato de potasio, bicarbonato de potasio, carbonato de sodio, y similares. Luego de completar la reacción, el compuesto 1.7 se puede recuperar mediante métodos convencionales que incluyen neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración, y similares pero se emplea preferiblemente en la siguiente etapa sin purificación y/o aislamiento. Cloruro de amido, compuesto 1.7, se convierte entonces al correspondiente derivado de urea, compuesto 1.8, mediante la reacción con una amina adecuada, R5R6NH, bajo condiciones convencionales. Preferiblemente, la reacción de una cantidad equimolar o exceso de amina es puesta en contacto con el compuesto 1.7 en un disolvente adecuado tal como tetrahidrofurano, dioxano, cloroformo y similar. Luego de completar la reacción, el compuesto 1.8 se puede recuperar mediante métodos convencionales que incluyen neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración, y similares o, alternativamente, se emplea en la siguiente etapa sin purificación y/o aislamiento .

El grupo protector carboxilo del compuesto 1.8 se puede remover mediante condiciones convencionales para suministrar el compuesto 1.9, un compuesto de Fórmula I. En una modalidad, el grupo protector t-butilo se puede remover mediante contacto con ácido fórmico. En otra modalidad, un grupo protector bencilo se puede remover mediante contacto con hidrógeno en la presencia de un catalizador de paladio/carbono típicamente en un disolvente prótico tal como metanol bajo presiones de hidrógeno elevadas. Luego de completar la reacción, el compuesto 1.9 se puede recuperar mediante métodos convencionales que incluyen neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración, y similares. En la segunda modalidad, los derivados de acilamino, compuesto 1.5 se preparan al poner en contacto el compuesto 1.4 con un exceso ligero de haluro de acilo en la presencia de una base adecuada tal como trietilamina, diisopropiletilamina y similares con el fin de absorber el ácido generado. La reacción se conduce preferiblemente en un disolvente inerte adecuado tal como tetrahidrofurano, dioxano, cloroformo y similar. La reacción se conduce preferiblemente a aproximadamente 0o a 30°C y se continúa hasta que se completa sustancialmente la reacción lo cual típicamente ocurre a las 2-48 horas. Luego de completar la reacción, el compuesto 1.5 se puede recuperar mediante métodos convencionales que incluyen la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración, y similares o, alternativamente, se emplea en la siguiente etapa sm purificación y/o aislamiento. El grupo protector carboxilo del compuesto 1.5 se puede remover mediante condiciones convencionales para suministrar el compuesto 1.6, un compuesto de Fórmula I. En una modalidad, un grupo protector t-butilo se puede remover al poner en contacto con ácido fórmico. En otra modalidad, se puede remover un grupo protector bencilo al poner en contacto con hidrógeno en la presencia de un catalizador de paladio/carbono típicamente en un disolvente prótico tal como metanol bajo presiones de hidrógeno elevadas. Luego de completar la reacción, el compuesto 1.6 se puede recuperar mediante métodos convencionales que incluyen la neutralización, evaporación, extracción, precipitación, cromatografía, filtración, y similares. Formulaciones Farmacéuticas Cuando se emplean como farmacéuticos, los compuestos de esta invención se administran usualmente en la forma de composiciones farmacéuticas. Estos compuestos se pueden administrar mediante una variedad de rutas que incluyen la oral, rectal, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular, e mtranasal . Estos compuestos son efectivos tanto en composiciones inyectables como orales. Tales composiciones se preparan de manera bien conocida en la técnica farmacéutica y comprenden por lo menos un compuesto activo . Esta invención también incluye composiciones farmacéuticas que contienen, como ingrediente activo, uno o más de los compuestos de Fórmula I-III anteriores asociados con los portadores farmacéuticamente aceptables. Para elaborar las composiciones de esta invención, el ingrediente activo se mezcla usualmente con un excipiente, se diluye mediante un excipiente o se incluye dentro de un portador que pueda estar en la forma de una cápsula, saco, papel u otro recipiente. El excipiente empleado es típicamente un excipiente adecuado para la administración a sujetos humanos u otros mamíferos. Cuando el excipiente sirve como un diluyente, éste puede ser un material sólido, semi-sólido, o líquido, el cual actúa como un vehículo, portador o medio para el ingrediente activo. Así, las composiciones pueden estar en la forma de tabletas, pildoras, polvos, pastillas, sacos, cápsulas, elíxires, suspensiones, emulsiones, soluciones, soluciones, jarabes, aerosoles (como en un medio sólido o líquido) , ungüentos que contienen, por ejemplo, hasta 10% en peso del compuesto activo, cápsulas de gelatina suave y dura, supositiorios, soluciones inyectables estériles, y polvos empacados estériles .

En la preparación de una formulación, puede ser necesario moler el compuesto activo para suministrar el tamaño de partícula apropiado antes de combinar con los otros ingredientes. Si el compuesto activo es sustancialmente insoluble, éste habitualmente se muele hasta un tamaño de partícula de menos de malla 200. Si el compuesto activo es sustancialmente soluble en agua, el tamaño de partícula se ajusta normalmente al moler para suministrar una distribución sustancialmente uniforme en la formulación, por ejemplo, aproximadamente malla 40. Algunos ejemplos de excipientes adecuados incluyen lactosa, dextrosa, sucrosa, sorbitol, manitol, almidones, goma acacia, fosfato de calcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de calcio, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, celulosa, agua, jarabe, y metil celulosa. Las formulaciones pueden adicionalmente incluir: agentes lubricantes tales como talco, estearato de magnesio, y aceite mineral; agentes humectantes; agentes emulsíficantes y de suspensión; agentes preservantes tales como benzoatos de metilo y propilhidroxi ; agentes endulzantes; y agentes saborizantes. Las composiciones de la invención se pueden formular con el fin de suministrar una liberación rápida, sostenida o retrasada al ingrediente activo después de la administración al paciente al emplear procedimientos conocidos en la técnica. La administración de agentes terapéuticos mediante formulación intravenosa es bien conocida en la industria farmacéutica. Una formulación intravenosa debe poseer ciertas calidades además de ser solo una composición en la cual el agente terapéutico sea soluble. Por ejemplo, la formulación debe promover la estabilidad total de el o los ingredientes activos, también, la elaboración de la formulación debe ser efectiva en costos. Todos estos factores finalmente determinan el éxito total y la utilidad de una formulación intravenosa. Otros aditivos accesorios se pueden incluir en las formulaciones farmacéuticas de los compuestos de la presente invención como sigue: disolventes: etanol, glicerol, propilenglicol ; estabilizadores: ácido etileno diamma tetraacético (EDTA) , ácido cítrico; preservantes antimicrobianos : bencil alcohol, metil parabeno, propil parabeno; agentes amortiguantes: ácido cítpco/citrato de sodio, tartrato de hidrógeno potasio, tartrato de hidrógeno sodio, ácido acético/acetato de sodio, ácido maléico/maleato de sodio, ftalato hidrogen sodio, ácido fosfórico/fosfato de dihidrógeno de potasio, ácido fosfórico/fosfato hidrógeno disodio: y modificadores de tonicidad: cloruro de sodio, manitol, dextrosa.

La presencia de un amortiguador puede ser necesaria para mantener el pH acuoso en el rango de desde aproximadamente 4 a aproximadamente 8 y más preferiblemente en un rango de aproximadamente 4 a aproximadamente 6. El sistema amortiguador es generalmente una mezcla de un ácido débil y una sal soluble de éste, por ejemplo, citrato de sodio/ácido cítrico; o el monocatión o la sal dicatión de un ácido dibásico, por ejemplo, tartrato de hidrogen potasio; tartrato de hidrógeno sodio, ácido fosfórico/fosfato de dihidrógeno potasio, y ácido fosfórico/fosfato de hidrógeno disodío. La cantidad del sistema amortiguador utilizado es dependiente de (1) el pH deseado,- y (2) la cantidad de fármaco. Generalmente, la cantidad de amortiguador utilizado está en una proporción en mol de 0.5:1 a 50:1 del amortiguador : fármaco (donde las moles del amortiguador se toman como moles combinadas de los ingredientes amortiguadores, por ejemplo, citrato de sodio y ácido cítrico) de la formulación para mantener un pH en el rango de 4 a 8 y generalmente, se utiliza una proporción en mol de 1:1 a 10:1 del amortiguador (combinado) al fármaco presente . Un amortiguador útil en la invención es citrato de sodio/ácido cítrico en el rango de 5 a 50 mg por mL de citrato de sodio a 1 a 15 mg por mL de ácido cítrico, suficiente para mantener un pH acuoso de 4-6 de la composición. El agente amortiguador también puede estar presente para evitar la precipitación del fármaco a través de una formación de complejo de metal soluble con iones de metal disueltos, por ejemplo, Ca, Mg, Fe, Al, Ba, que se puede lixiviar de recipientes de vidrio o tapones de caucho o estar presente en agua de tubería ordinaria. El agente puede actuar como un agente complejante competitivo con el fármaco y producir un complejo de metal soluble que conduce a la presencia de partículas indeseables. Además, la presencia de un agente, por ejemplo, cloruro de sodio en una cantidad de aproximadamente 1-8 mg/mL, para ajustar la tonicidad al mismo valor de la sangre humana se puede requerir para evitar el hmchamiento o encogimiento de eritrocitos luego de la administración de la formulación intravenosa que conduce a efectos colaterales indeseables tales como nausea o diarrea y posiblemente a trastornos de sangre asociados. En general, la tonicidad de la formulación coincide con aquella de la sangre humana que está en el rango de 282 a 288 mOsm/kg, y en general es 285 mOsm/kg, que es equivalente a la presión osmótica que corresponde a 0.9%, de solución de cloruro de sodio.

La formulación intravenosa se puede administrar mediante inyección intravenosa directa, bolo i.v., o se puede administrar mediante infusión mediante la adición a una solución de infusión apropiada tal como 0.9% de inyección de cloruro de sodio u otra solución de infusión compatible . Las composiciones se formulan preferiblemente en una forma de dosis unitaria, cada dosis contiene desde aproximadamente 5 a aproximadamente 100 mg, más usualmente aproximadamente 10 a aproximadamente 30 mg, del ingrediente activo. El término "formas de dosis unitarias" se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias para sujetos humanos y otros mamíferos, cada unidad contiene una cantidad predeterminada de material activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado, en asocio con un excipiente farmacéutico adecuado.

El compuesto activo es efectivo sobre un rango amplio de dosis y se administra generalmente en una cantidad farmacéuticamente efectiva. Se debe entender, sin embargo, que la cantidad del compuesto de hecho administrada se determinará por un médico, a la luz de las circunstancias relevantes, que incluyen la condición a ser tratada, la ruta de administración escogida, el compuesto presente administrado, la edad, el peso, y la respuesta del paciente individual, la severidad de los síntomas del paciente, y similares . Para preparar las composiciones sólidas tales como tabletas, el ingrediente principal activo se mezcla con un excipiente farmacéutico para formar una composición de preformulación sólida que contiene una mezcla homogénea de un compuesto de la presente invención. Cuando se refiere a estas composiciones de preformulación como homogéneas, se significa que el ingrediente activo se dispersa homogéneamente completamente en la composición de tal forma que la composición puede ser fácilmente subdividida en formas de dosis unitarias igualmente efectivas tales como tabletas, pildoras y cápsulas. Esta preformulación sólida se subdivide entonces en formas de dosis unitarias del tipo anteriormente descrito que contiene desde, por ejemplo, 0.1 a aproximadamente 500 mg del ingrediente activo de la presente invención. Las tabletas o pildoras de la presente invención se pueden recubrir o componer de otra forma para suministrar una forma de dosis que logre la ventaja de acción prolongada. Por ejemplo, la tableta o pildora puede comprender un componente de dosis interior y una dosis exterior, estando el último en la forma de un sobre sobre el anterior. Los dos componentes se pueden separar mediante una capa entérica que sirve para resistir la desintegración en el estómago y permitirle al componente interior pasar intacto al duodeno o ser retrasado en la liberación. Una variedad de materiales se puede utilizar para tales capas entéricas o recubrimientos, tales materiales incluyen un número de ácidos poliméncos y mezclas de ácidos poliméricos con tales materiales como shellac, cetil alcohol, y acetato de celulosa Las formas líquidas en las cuales las composiciones novedosas de la presente invención se pueden incorporar para administración oralmente o mediante inyección incluyen soluciones acuosas adecuadamente jarabes sabopzados, suspensiones acuosas o aceitosas, y emulsiones saborizadas con aceites comestibles tales como, aceite de algodón, aceite de sésamo, aceite de coco, o aceite de maní, así como también elíxires y vehículos farmacéuticos similares.

Las composiciones para inhalación o insuflamiento incluyen soluciones y suspensiones en disolventes acuosos u orgánicos farmacéuticamente aceptables, o mezclas de éstos, y polvos. Las composiciones líquidas o sólidas pueden contener excipientes farmacéuticamente aceptables adecuados como se describió supra Preferiblemente las composiciones se administran por rutas respiratorias oral o nasal para efecto local o sistémico. Las composiciones en preferiblemente los disolventes farmacéuticamente aceptables se pueden nebulizar mediante el uso de gases inertes Las soluciones nebulizadas se pueden respirar directamente del dispositivo o el dispositivo nebulizante se puede unir a un tapón de máscaras de cara, o una máquina respiradora de presión positiva intermitente. Las composiciones en solución, suspensión, o polvo se pueden administrar, preferiblemente oral o nasalmente, de dispositivos que suministran la formulación de una manera adecuada . Los siguientes ejemplos de formulación ilustran las composiciones farmacéuticas de la presente invención.

Ejemplo de Formulación 1 Se preparan cápsulas de gelatina dura que contienen los siguientes ingredientes: Ingrediente Cantidad (mg/cápsula) Ingrediente Activo 30.0 Almidón 305.0 Estearato de magnesio 5.0 Los ingredientes anteriores se mezclan y se rellenan en las cápsulas de gelatina dura en cantidades de 340 mg .

Ejemplo de Formulación 2 Se preparan una fórmula de tableta utilizando los ingredientes de adelante: Ingrediente Cantidad (mg/tableta) Ingrediente Activo 25.0 Celulosa, microcpstalma 200.0 Dióxido de silicio coloidal 10.0 Ácido esteárico 5.0 Los componentes se mezclan y se comprimen para formar tabletas, que pesa cada una 240 mg.

Ejemplo de Formulación 3 Se prepara una formulación inhaladora de polvo seco conteniendo los siguientes componentes: Ingrediente Peso % Ingrediente Activo 5 Lactosa 95 El ingrediente activo se mezcla con la lactosa y la mezcla se agrega a un dispositivo para inhalar polvo seco. Ejemplo de Formulación 4 Tabletas, que contienen cada una 30 mg del ingrediente activo, se preparan como sigue: Ingrediente Cantidad (mg/tableta) Ingrediente Activo 30.0 mg Almidón 45.0 mg Celulosa microcristalina 35.0 mg Polivinilpirrolidona 4.0 mg (como solución al 10% en agua estéril Almidón de carboximetil 4.5 mg sodio Estearato de magnesio 0.5 mg Talco 1.0 mg El ingrediente activo, almidón, y celulosa se pasan a través de un tamiz U.S. malla No. 20 y se mezclan completamente. La solución de polivinilpirrolidona se mezcla con los polvos resultantes, y luego se pasan a través de un tamiz U.S. malla 16. Los granulos así producidos se secan a 50°C a 60°C y se pasan a través de un tamiz U.S. malla 16. El carboximetil almidón de sodio, estearato de magnesio, y talco, previamente pasados a través de un tamiz U.S. malla No. 30, se agregan entonces a los granulos los cuales, después de mezclar, se comprimen sobre una máquina de tableta para producir tabletas que pesan cada una 120 mg.

Ejemplo de Formulación 5 Cápsulas, que contienen cada una 40 mg del medicamento se hacen como sigue: Ingrediente Cantidad (mg/cápsula) Ingrediente Activo 40.0 mg Almidón 109.0 mg Estearato de magnesio 1.0 mg Total 150.0 mg El ingrediente activo, almidón y estearato de magnesio se mezclan, se pasan a través de un tamiz U.S. malla No. 20, y se rellenan en cápsulas de gelatina dura en cantidades de 150 mg. Ejemplo de Formulación 6 Supositorios, que contienen cada uno 25 mg del ingrediente activo se hacen como sigue: Ingrediente Cantidad Ingrediente Activo 25 mg Glicéridos de ácido graso saturado a 2, 000 mg El ingrediente activo se pasa a través de un tamiz U.S. malla 60 y se suspende en los glicéridos de ácido graso saturados previamente mezclados utilizando el calor mínimo necesario. La mezcla luego se vierte en un molde de supositorio hasta una capacidad nominal de 2.0 g y se le permite enfirarse.

Ejemplo de Formulación 7 Suspensiones, que contienen cada una 50 mg del medicamento por 5.0 ml de dosis se hacen como sigue: Ingrediente Cantidad Ingrediente Activo 50.0 mg Goma xantano 4.0 mg Carboximetilcelulosa de sodio (11%) Celulosa microcristalina (89%) 50.0 mg Sucrosa 1.75 mg Benzoato de sodio 10.0 mg Sabor y Color q.v. Aqua purificada a 5.0 mL El ingrediente activo, sucrosa y xantano se mezclan, se pasan a través de un tamiz U.S. malla No. 10, y se mezclan entonces con una solución previamente hecha de celulosa microcristalina y carboximetilcelulosa de sodio en agua. El benzoato de sodio, sabor, y color se diluyen con algo de agua y se agregan con agitación. Se agrega suficiente agua para producir el volumen requerido. Ejemplo de Formulación 8 Ingrediente Cantidad (mg/cápsula) Ingrediente Activo 15.0 mg Almidón 407.0 mg Estearato de magnesio 3.0 mg Total 425.0 mg El ingrediente activo, almidón, y estearato de magnesio se mezclan, se pasan a través de un tamiz U.S. malla No. 20, y se rellenan en cápsulas de gelatina dura en cantidades de 425.0 mg .

Ejemplo de Formulación 9 Se prepara una formulación como sigue: Ingrediente Cantidad Ingrediente Activo 5.0 mg Aceite de Maíz 1.0 mg Ejemplo de Formulación 10 Se prepara una formulación tópica como sigue: Ingrediente Cantidad Ingrediente Activo 1-10 g Cera Emulsificante 30 g Parafma Líquida 20 g Parafma Suave Blanca a 100 g La parafma suave blanca se calienta hasta que se funde. La parafina líquida y la cera emulsificante se incorporan y se agitan hasta que se disuelven. El ingrediente activo se agrega y la agitación se continúa hasta que dispersa. La mezcla se enfría entonces hasta que se solidifica. Ejemplo de Formulación 11 Una formulación intravenosa se prepara como sigue: Ingrediente Cantidad Ingrediente Activo 250 mg Solución Salina Isotónica 1000 mL Otra formulación preferida empleada en los métodos de la presente invención emplea dispositivos de suministro transdérmico ("parches"). Tales parches transdérmicos se pueden utilizar para suministrar infusión continua o discontinua de los compuestos de la presente invención en cantidades controladas. La construcción y uso de los parches transdérmicos para el suministro de los agentes farmacéuticos es bien conocida en la técnica. Ver, por ejemplo, la Patente U S. 5,023,252, presentada en junio 11, 1991, incorporada aquí como referencia, tales parches se pueden construir para el suministro continuo, pulsátil, o por demanda de agentes farmacéuticos. Frecuentemente, será deseable o necesario introducir la composición farmacéutica al cerebro, sea directa o indirectamente. Las técnicas directas involucran usualmente la colocación de un catéter de suministro de fármaco en un sistema ventpcular del huésped mediante un puente a la barrera sangre-cerebro. Uno de tales sistemas de suministro implantables utilizados para el transporte de los factores biológicos a las regiones anatómicas específicas del cuerpo se describe en la Patente U.S. 5,011,472 que se incorpora aquí como referencia. Las técnicas indirectas, que se prefieren generalmente, usualmente involucran formular las composiciones para suministrar latenciación del fármaco mediante la conversión de fármacos hidrófilos en fármacos solubles en lípidos La latenciación se logra generalmente a través del bloqueo de grupos hidroxilo, carbonilo, sulfato y amina primarios presentes en el fármaco para hacer el fármaco más soluble en lípidos y adecuada al transporte a través de la barrera sangre-cerebro . Alternativamente, el suministro de los fármacos hidrófilos se puede mejorar mediante la infusión intra-arterial de soluciones hipertónicas que pueden abrir transitoriamente la barrera sangre-cerebro. Otras formulaciones adecuadas para uso en la presente invención se pueden encontrar en el Remington' s Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed. (1985) . Como se anotó anteriormente, los compuestos descritos aquí son adecuados para uso en una variedad de sistemas de suministro de fármaco descritos anteriormente. Adicionalmente, con el fin de mejorar la vida media del suero in vivo del compuesto administrado, los compuestos se pueden encapsular, introducir en el lumen de liposomas, preparar como coloides, o se pueden emplear otras técnicas convencionales que suministren una vida media de suero extendida de los compuestos . Una variedad de métodos están disponibles para preparar liposomas, como se describió en, por ejemplo, Szoka, et al., Patentes U.S. Nos. 4,235,871, 4,501,728 y 4,837,028 cada una de las cuales se incorporan aquí como referencia. Los conjugados de esta invención son antagonistas VLA-4 y se contemplan para suministrar la retención mejorada in vivo comparada con los compuestos no conjugados. Tal retención mejorada del conjugado dentro del cuerpo daría como resultado unas dosis requeridas más bajas del fármaco, lo cual, a su vez, daría como resultado en muy pocos efectos colaterales y una probabilidad reducida de toxicidad. Además, la formación del fármaco se puede administrar menos frecuentemente al paciente mientras se logra un efecto terapéutico similar o mejorado. Los conjugados de esta invención se anticipan para exhibir la inhibición, in vivo, de la adhesión de leucocitos a las células endoteliales mediadas por VLA-4 mediante unión competitiva al VLA-4. Preferiblemente, los compuestos de esta invención se pueden utilizar en formulaciones intravenosas para el tratamiento de enfermedades mediadas por VLA-4 o adhesión de leucocito. Tales enfermedades incluyen enfermedades inflamatorias en pacientes mamíferos tales como asma, enfermedad de Alzheimer, ateroesclerosis, demencia por SIDA, diabetes (incluyendo diabetes aguda de ataque juvenil), enfermedad inflamatoria del intestino (que incluye colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn), esclerosis múltiple, artritis reumatoide, transplante de tejido, metástasis tumoral, meningitis, encefalitis, ataque, y otros traumas cerebrales, nefritis, retinitis, dermatitis atópica, soriasis, isquemia del miocarido y daño agudo del pulmón mediado por leucocito tal como aquel que ocurre en el síndrome de afección respiratoria en adulto. Las formulaciones de la presente invención son especialmente útiles en el tratamiento de esclerosis múltiple y artritis reumatoide . Los modelos apropiados in vivo para demostrar la eficacia en tratar condiciones inflamatorias incluyen EAE (encefalomielitis autoinmune experimental) en ratones, ratas, conejillos de indias o primates, así como también otros modelos inflamatorios dependientes de las integrinas a4. La enfermedad inflamatoria del intestino es un término colectivo para dos enfermedades similares denominadas cono enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa. La enfermedad de Crohn es una enfermedad inflamatoria ulceroconstrictiva crónica idiopática caracterizada por un involucramiento fuertemente delimitado y típicamente transmural de todas las capas de la pared del intestino mediante una reacción inflamatoria granulomatosa . Cualquier segmento del tracto gastrointestinal, proveniente de la boca al ano, se puede involucrar, aunque la enfermedad más comúnmente afecta el ileo y/o colon terminal. La colitis ulcerativa es una respuesta inflamatoria limitada grandemente a la mucosa colónica y la submucosa. Los linfocitos y los macrófagos son numerosos en las lesiones de la enfermedad inflamatoria del intestino y puede contribuir al daño inflamatorio.

El asma es una enfermedad caracterizada por respuestas incrementadas del árbol traquiobronquial a varios estímulos que potencian la constricción paroximal de las vías aéreas bronquiales. Los estímulos originan la liberación de varios mediadores de inflamación proveniente de las células mástiles recubiertas con IgE incluyendo histamma, factores quimiotácticos, eosmofílicos y neutrofílicos, leucotr os, factor activante de prostagland a y plaqueta. La liberación de estos factores recluta basófilos, eosinófilos y neutrófilos, que originan el daño inflamatorio. La ateroesclerosis es una enfermedad de las arterias (por ejemplo, coronaria, carótida, aorta e iliaca). La lesión básica, el ateroma, consiste de una placa focal elevada dentro de la íntima, que tienen un núcleo de lípido y una tapa fibrosa de cubierta. Los ateromas comprometen el flujo de sangre arterial y debilita las arterias afectadas. Los infartos de miocardio y el cerebro son la consecuencia principal de esta enfermedad Los marcrófagos y los leucocitos se reclutan a los ateromas y contribuyen al daño inflamatorio. La artritis reumatoide es una enfermedad inflamatoria relapsante crónica, que origina principalmente el daño y la destrucción de las articulaciones La artritis reumatoide usualmente afecta primero las articulaciones pequeñas de las manos y los pies pero luego pueden involucrar las muñecas, codos, rodillas y tobillos. La artritis resulta de la interacción de las células sinoviales con los leucocitos que se infiltran de la circulación hacia los recubrimientos interiores sinoviales de las articulaciones. Ver, por ejemplo, Paul, Immunology (3d ed., Raven Press, 1993). Otra indicación para los compuestos de esta invención está en el tratamiento de rechazo de órgano o injerto mediado por VLA-4. Durante años recientes ha habido una mejora considerable en la eficiencia de las técnicas quirúrgicas para trasplantar tejidos y órganos tales como piel, riñon, hígado, corazón, pulmón, páncreas y médula ósea. Quizás el problema pendiente principal es la falta de agentes satisfactorios para inducir inmunotolerancia al receptor al injerto u órgano transplantado. Cuando las células o los órganos alogénicos se transplantan a un huésped (es decir, el donador y el donante son individuos diferentes de la misma especie) , el sistema inmune huésped es probable que monte una respuesta inmune a los antígenos extraños en el transplante (enfermedad de huésped versus injerto) que conduzca a la destrucción del tejido transplantado. Las células CD8+, las células CD4 y los monocitos están involucradas en los tejidos de rechazo del transplante. Los compuestos de esta invención que se unen a la integrina alfa-4 son útiles, inter alia, para bloquear las respuestas inmunes inducidas por aloantígeno en el donado evitando de esta manera que tales células participen en la destrucción del tejido u órgano transplantado. Ver, por ejemplo, Paul et al., Transplant Internacional 9, 420-425 (1996); Georczynski et al., Immunology 87, 573-580 (1996); Georcyznski et al., Transplant. Immunol . 3, 55-61 (1995); Yang et al., Transplantation 60, 71-76 (1995); Anderson et al., APMIS 102, 23-27 (1994). Un uso relacionado para los compuestos de esta invención que se une al VLA-4 está en modular la respuesta inmune involucrada en la enfermedad de "huésped versus injerto" (GVHD) . Ver, por ejemplo, Schlegel et al., J. Immunol. 155, 3856-3865 (1995). El GVHD es una enfermedad potencialmente fatal que ocurre cuando las células inmunológicamente competentes se transfieren a un receptor alogénico. En esta situación, las células inmunocompetentes del donador pueden atacar los tejidos en el receptor. Los tejidos de la piel, epitelio del intestino e hígado son objetivos frecuentes y se pueden destruir durante el curso del GVHD. La enfermedad presenta un problema especialmente severo cuando se transplanta tejido inmune, tal como en el transplante de médula ósea; pero también se ha reportado un GVHD menos severo en otros casos así como, incluyendo transplantes de corazón e hígado. Los agentes terapéuticos de la presente invención se utilizan, inter alia, para bloquear la activación de las células T donantes que interfieren de esta manera con su capacidad de lisar células objetivo en el huésped. Un uso adicional de los compuestos de esta invención es inhibir la metástasis tumoral. Varias células tumorales se han reportado por expresar VLA-4 y compuestos que se unen a la adhesión del bloque VLA-4 de tales células a célulae endoteliales. Steinback et al., Urol. Res. 23, 175-83 (1995); Orosz et al., Int. J. Cáncer 60, 867-71 (1995); Freedman et al., Leuk. Lymphoma 13, 47-52 (1994); Okahara et al., Cáncer Res. 54, 3233-6 (1994). Los compuestos que tienen la actividad biológica deseada se pueden modificar según sea necesario para suministrar las propiedades deseadas tales como propiedades farmacológicas mejoradas (por ejemplo, estabilidad in vivo, bio-disponibilidad) , o la capacidad para ser detectado en aplicaciones diagnósticas. La estabilidad se puede ensayar en una variedad de vías tales como al medir la vida media de las proteínas durante la incubación con peptidasas o plasma humano o suero. Un número de tales ensayos de estabilidad de proteína se han descrito (ver, por ejemplo, Verhoef et al., Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet . , 1990, 15 (2) :83-93) . Un uso adicional de los compuestos de esta invención está en tratar esclerosis múltiple. La esclerosis múltiple es una enfermedad autoinmune neurológica progresiva que afecta un estimado de 250,000 a 350,000 personas en los Estados Unidos. La esclerosis múltiple se cree que es el resultado de una reacción autoinmune específica en al cual ciertos leucocitos atacan e inician la destrucción de la mielma, la cubierta aislante que cubre las fibras nerviosas. En un modelo animal para esclerosis múltiple, anticuerpos monoclonales de mupno dirigidos contra VLA-4 han mostrado que bloquean la adhesión de los leucocitos al endotelio, y evitan así la inflamación del sistema nervioso central y la parálisis posterior en los animales.16 Las composiciones farmacéuticas de la invención son adecuadas para uso en una variedad de sistemas de suministro de fármaco. Las formulaciones adecuadas para uso en la presente invención se encuentran en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed. (1985) . La cantidad administrada al paciente variará dependiendo de que se administre, el propósito de la administración, tal como la profilaxis o terapia, el estado del paciente, la manera de administración, y similar. En aplicaciones terapéuticas, las composiciones se administran a un paciente que ya sufre de una enfermedad en una cantidad suficiente para curar o por lo menos disminuir parcialmente los síntomas de la enfermedad y sus complicaciones. Una cantidad adecuada para lograr esto se define como "dosis terapéuticamente efectiva" . Las cantidades efectivas para este uso dependerán de la condición de la enfermedad que se trata así como también del juicio del médico que atiende dependiendo de factores tales como la severidad de la inflamación, la edad, el peso y la condición general del paciente, y similar, con referencia a los datos de modelo animal apropiados, tales como se suministran aquí. Los métodos para estimar las dosis humanas apropiadas, con base en tales datos, son conocidos en la técnica, (ver, por ejemplo, Wagner, J.G. Pharmacok etics for the Pharmaceutical Scientist. Technomic. Inc., Lancaster, PA 1993) . Las composiciones administradas a un paciente están en la forma de las composiciones farmacéuticas anteriormente descritas. Estas composiciones se pueden esterilizar mediante técnicas de esterilización convencionales, o pueden ser filtradas estériles. Las soluciones acuosas resultantes se pueden empacar para uso como están, o liofílizadas , la preparación liofilizada se combina con un portador acuoso estéril antes de la administración. La dosis terapéutica de los compuestos de la presente invención variará de acuerdo con, por ejemplo, el uso particular para el cual se hizo el tratamiento, la manera de la administración del compuesto, la salud y la condición del paciente, y el juicio del médico que prescribe. Por ejemplo, para la administración intravenosa, la dosis típicamente estará en el rango de aproximadamente 20 µg a aproximadamente 2000 µg por kilogramo de peso corporal, preferiblemente aproximadamente 20 µg a aproximadamente 500 µg, más preferiblemente aproximadamente 100 µg a aproximadamente 300 µg por kilogramo de peso corporal. Los rangos de dosis adecuados para la administración intranasal son generalmente aproximadamente 0.1 pg a 1 mg por kilogramo de peso corporal. Las dosis efectivas se pueden extrapolar de las curvas de respuesta a dosis derivadas de sistemas de prueba con modelo in vitro o animal. Los compuestos de esta invención también son capaces de unirse o antagonizar las acciones de las integrinas aßßl, a9ßl, cc4ß7, adß2, aeß7 (aunque a4ßl y a9ßl se prefieren en esta invención) . De acuerdo con esto, los compuestos de esta invención también son útiles para evitar o reversar los síntomas, trastornos o enfermedad inducida por la unión de estas integrinas a sus ligandos respectivos . Por ejemplo, la Publicación Internacional Número WO 98/53817, publicada en diciembre 3, 1998 (cuya descripción se incorpora aquí como referencia en su totalidad) y las referencias citadas aquí describen trastornos mediados por a4ß7. Esta referencia también describe un ensayo para determinar la unión dependiente de a4ß7 a la proteína de fusión VCAM-Ig. Adicionalmente, los compuestos que unen a las integrinas adß2 y aeß7 son particularmente útiles para el tratamiento de asma y enfermedades relacionadas con el pulmón. Ver, por ejemplo, M.H. Grayson et al., J. Exp. Med. 1998, 188(11) 2187-2191. Los compuestos que unen la integrina aeß7 también son útiles para el tratamiento de lupus eritematosos sistémico (ver, por ejemplo, M. Pang et al., Arthritis Rheum. 1998, 41(8), 1456-1463); la enfermedad de Crohn, la colitis ulcerativa y la enfermedad inflamatoria del intestino (IBD) (ver, por ejemplo, D. Elewaut et al., Scand J. Gastroenterol 1998, 33(7) 743-748); el síndrome de Sjogren (ver, por ejemplo, U. Kroneld et al., Scand J. Gastroenterol 1998, 27(3), 215-218); y artritis reumatoide (ver, por ejemplo, Scand J.

Gastroenterol 1996, 44(3), 293-298). Y los compuestos que unen adßl pueden ser útiles para evitar la fertilización (ver, por ejemplo, H. Chen et al., Chem. Biol. 1999, 6, 1-10) . En otro aspecto de la invención, los compuestos y las composiciones descritas aquí se pueden utilizar para inhibir la migración celular inmune desde el torrente sanguíneo al sistema nervioso central en el caso de, por ejemplo, esclerosis múltiple, o en áreas que resultan en la destrucción inducida inflamatoria de la mielma. Preferiblemente, estos reactivos inhiben la migración celular inmune de una manera que inhibe la desmielmización y que además pueden promover la remiel ización. Los reactivos también pueden evitar la desmielmización y promover la remielinización del sistema nervioso central para trastornos metabólicos congénitos en las cuales infiltrar las células inmunes afecta el desarrollo de la cubierta de mielma, principalmente en el SNC. Los reactivos preferiblemente también inducen la parálisis cuando se administran a un sujeto con parálisis inducida por una enfermedad o condición desmielmizante . Las enfermedades inflamatorias que están incluidas para el tratamiento mediante las composiciones, los compuestos y los métodos descritos aquí incluyen generalmente condiciones que se relacionan con la desmielinización. Histológicamente, las anormalidades de la mielma son desmielmizantes o dismielmantes . La desmielmización implica la destrucción de mielma. La desmielmización se refiere a la formación o al mantenimiento defectuoso de la miel a resultante de la disfunción de los oligodendrocitos . Preferiblemente, las composiciones y los métodos descritos aquí se contemplan para tratar enfermedades y condiciones que se relacionan con la desmielmización y ayuda con la remielmización. Las enfermedades o condiciones adicionales contempladas para el tratamiento incluyen meningitis, encefalitis, y daños y condiciones de la columna vertebral que inducen generalmente la desmielmización como resultado de una respuesta inflamatoria. Las composiciones, compuestos y cócteles descritos aquí se contemplan para uso en tratar condiciones y enfermedades asociadas con desmielmización. Las enfermedades y condiciones que involucran la desmielmización incluyen, pero no están limitadas a, esclerosis múltiple, trastornos metabólicos congénitos (por ejemplo, fenilcetonupa, enfermedad de Tay-Sachs, enfermedad de Niemann-Pick, enfermedad de Gaucher, síndrome de Hurler, enfermedad de Krabbe y otras leucodistrofías) , neuropatías con mielmización anormal (por ejemplo, Guillen Barre, polmeuropatía desmielmizante inmune crónica (CIDP) , CIDP multifocal, síndrome anti-MAG, síndrome de GALOP, síndrome de anticuerpo anti-sulfatido, síndrome de anticuerpo ant?-GM2, síndrome de POEMS, permeuritis, síndrome de anticuerpo IgM anti-GDlb) , desmiel ización relacmada con fármaco (por ejemplo, causada por la administración de cloroquma, FK506, perhexilma, procamamida, y zimeldma) , otras condiciones desmielmizantes hereditarias (por ejemplo, glicoproteína deficiente en carbohidrato, síndrome de Cockayne, hipomielmizante congénito, distrofia muscular congénita, enfermedad de Farber, síndrome de Mar esco-Sjogren, leucodistrofía metacromática, enfermedad de Pelizaeus-Merzbacher, enfermedad Refsum, condiciones relacionadas con priones, y enfermedad de Salla) y otras condiciones o enfermedades desmielmizantes (por ejemplo, meningitis, encefalitis o daño de la columna) . Existen varios modelos de enfermedad que se pueden utilizar para estudiar estas enfermedades ín vivo. Por ejemplo, modelos de animal que incluyen pero no están limitados a: Tabla 4 Modelo de Enfermedad Especies EAE Ratón, rata, conejillo de indias EAE inducido por glicoproteína Rata de mielma-oligodendrocito (MOG) Modelo de desmielmización Ratón transgénico TNF-a Esclerosis Múltiple La enfermedad desmielmizante más común es la esclerosis múltiple, pero muchos otros trastornos metabólicos e inflamatorios dan como resultado una miel ización deficiente o anormal. La MS es una enfermedad neurológica crónica, que aparece en la temprana adultez y progresa hasta una discapacidad significativa en la mayoría de los casos. Existen aproximadamente 350,000 casos de MS en los Estados Unidos solamente. Además del trauma, el MS es la causa más frecuente de discapacidad neurológica en adultos jóvenes a medios. La causa de la MS está aún por determinar. La MS se caracteriza por la inflamación crónica, la desmielmización y la gliosis (cicatrización) . La desmielmización puede resultar en efectos negativos o positivos sobre conducción axonal . Las anormalidades de conducción positiva incluyen conducción axonal lenta, bloqueo de la conducción variable que ocurre en la presencia de trenes de impulso de alta pero no de baja frecuencia o el bloque de conducción completo. Las anormalidades de conducción positiva incluyen la generación de impulso ectópico, la tensión mecánica espontánea o siguiente y la "charla cruzada" anormal entre exones desmielmizados . Las células T reactivas contra las proteínas de mielma, sea proteína básica de mielma (MBP) o proteína de proteolípido de mielma (PLP) se han observado que median la inflamación del SNC en encefalomielitis alérgica expepmetal. Los pacientes también se han observado por tener niveles elevados de munoglobulina del SNC (Ig) . Es además posible que algunos de los daños de tejido observados en la MS se medien por productos de citoquma de células T activadas, macrófagos y astrocitos. Hoy, el 80% de los pacientes diagnosticados con MS viven 20 años después del inicio de la enfermedad. Las terapias para manejar la MS incluyen: (1) tratamiento destinado a la modificación del curso de la enfermedad, que incluye tratamiento de la exacerbación aguada y dirigida a la supresión a largo plazo de la enfermedad; (2) tratamiento de los síntomas de MS; (3) prevención y tratamiento de las complicaciones médicas; y (4) manejo de los problemas secundarios personales y sociales . El inicio de la MS puede ser dramático o medio para no originar que el paciente busque atención médica. La mayoría de los síntomas comunes incluyen debilidad en uno o más limbos, nublamiento visual debido a la neuritis óptica, afectaciones sensoriales, diplopia y ataxia. El curso de la enfermedad se puede estratificar en tres categorías generales: (1) MS relapsante, (2) MS progresiva crónica, y (3) mS inactiva. La MS relapsante se caracteriza por ataques recurrentes de la disfunción neurológica. Los ataques MS generalmente evolucionan durante días a semanas y se pueden seguir por una recuperación completa, parcial o ninguna. La recuperación de los ataques ocurre generalmente a las semanas o varios meses desde el pico de los síntomas, aunque raramente alguna recuperación puede continuar durante 2 o más años . La MS progresiva crónica da como resultado un empeoramiento gradualmente progresivo sin períodos de estabilización o remisión. Esta forma desarrollada en pacientes con una historia previa de MS relapsante, aunque en el 20% de los pacientes, no se pueden recordar relapsos. Los relapsos agudos también pueden ocurrir durante el curso progresivo. Una tercera forma es la MS inactiva. La MS inactiva se caracteriza por déficits neurológicos fijos de magnitud variable. La mayoría de los pacientes con MS inactiva tienen una historia anterior de MS relapsante. El curso de la enfermedad también es dependiente de la edad del paciente. Por ejemplo, los factores de pronóstico favorables incluyen un inicio temprano (excluyendo la niñez) , un curso relapsante y una discapacidad residual poca 5 años después del inicio. En contraste, el pobre pronóstico se asocia con una edad tardía de inicio (es decir, edades de 40 años o superiores) y un curso progresivo. Estas variables son interdependientes , en razón a que la MS progresiva crónica tiende a iniciar a una edad posterior que la MS relapsante. La discapacidad de la MS progresiva crónica se debe usualmente a la paraplejia o cuadraplej ia progresiva (parálisis) en pacientes. En un aspecto de la invención, los pacientes serán tratados preferiblemente cuando el paciente esté en remisión en lugar entonces de la etapa relapsante de la enfermedad.

El uso a corto plazo de la hormona adrenocorticotrópica o corticoesteroides orales (por ejemplo, prednisona oral o metilprednisolona intravenosa) es la única medida terapéutica específica para tratar pacientes con exacerbación aguada de MS . Las terapias más novedosas para MS incluyen tratar al paciente con interferón beta-Ib, interferón beta-la, y Copaxone® (anteriormente conocido como copolímero 1) . Estos tres fármacos han mostrado que reducen significativamente la tasa de relapso de la enfermedad. Estos fármacos son auto-administrados de manera intramuscular o subcutánea. Sin embargo, ningunas de las modalidades del tratamiento habitual inhiben la desmielinización, promueven solas o permiten la remielinización espontánea o reducen la parálisis. Un aspecto de la invención contempla tratar MS con agentes descritos aquí sean solos o en combinación con otras modalidades de tratamiento estándar. Trastornos Metabólicos Congénitos Los trastornos metabólicos congénitos incluyen fenilcetonuria (PKU) y otras aminoacidurias, enfermedad de Tay-Sachs, enfermedad de Niemann-Pick, enfermedad de Gaucher, síndrome de Hurler, enfermedad de Krabbe y otras leucodistrofias que impactan la cubierta en desarrollo como se describe más completamente adelante.

El PKU es un error heredado del metabolismo originado por una deficiencia en la enzima fenilalanina hidroxilasa. La pérdida de esta enzima da como resultado el retardo mental, el daño de órgano, la postura no usual y puede, en casos de PKU materno, comprometer severamente el embarazo. Un modelo para estudiar PKU se ha descubierto en ratones. Preferiblemente los infantes identificados con PKU se sostienen con una dieta libre o baja en fenilalanina. Un aspecto de la invención sería combinar tales dietas con los compuestos y composiciones descritos aquí para evitar la desmielinización y remielinizar las células dañadas debido al PKU. La enfermedad clásica de Tay-Sachs aparece en el sujeto a aproximadamente una edad de 6 meses y eventualmente dará como resultado la muerte del sujeto a al edad de 5 años. La enfermedad es debida a la falta de la enzima, hexoaminidasa A (hex A) , que es necesaria para degradar ciertas sustancia grasas en el cerebro y las células nerviosas. Las sustancias en la ausencia de la enzima se acumulan y conducen a la destrucción de las células nerviosas. Otra forma de la deficiencia de la enzima hex A ocurre posteriormente en la vida y se refiere a las formas de inicio juvenil, crónico y de adulto de la deficiencia de hex A. Los síntomas son similares a aquellos que caracterizan la enfermedad clásica de Tay-Sachs. Existe también una forma de inicio en adulto de la deficiencia de enzima. Habitualmente no existe cura o tratamiento para la enfermedad/deficiencia, solamenrte las medidas preventivas de las pruebas en útero del feto para la enfermedad. Así, los compuestos y las composiciones descritas aquí pueden ser útiles para mejorar o evitar la destrucción de las células nerviosas en tales pacientes La enfermedad de Niemann-Pick cae en tres categorías: la forma infantil aguada, el Tipo B es una forma menos común, crónica, no neurológica, y el Tipo C es una forma bioquímica y genéticamente distinta de la enfermedad. En un individuo normal, el colesterol celular se importa a los lisosomas para procesamiento, después de lo cual se libera. Las células tomadas de los sujetos con Niemann-Pick han mostrado ser defectuosas en la liberación del colesterol de los lisosomas. Esto conduce a una acumulación excesiva de colesterol dentro de los lisosomas, originando errores de procesamiento El NPC1 se encontró que tenía regiones con sensibilización al esterol conocidas similares a aquellas en otras proteínas, que sugieren que éste juega un papel para regular el tráfico de colesterol. Se han identificado terapias sin éxito para las formas Tipos A y C de Neumann-Pick. Para el Tipo C, a los pacientes se les recomienda seguir una dieta baja en colesterol. Así, los compuestos y las composiciones descritas aquí pueden ser útiles para mejorar o evitar la destrucción de las células. La enfermedad de Gaucher es una enfermedad heredada causada por la mutación del gen. Normalmente, este gen es responsable por una enzima denominada glucocerebrosidasa que el cuerpo necesita para descomponer la grasa, glucocerebrósido. En pacientes con enfermedad de Gaucher, el cuerpo no es capaz de producir adecuadamente esta enzima y la grasa no se puede descomponer. Como la enfermedad de Tay-Sachs, la enfermedad de Gaucher es considerablemente más común en los descendientes de personas judías provenientes del Este de Europa (Ashkenazi) , aunque individuos provenientes de cualquier grupo étnico se pueden afectar. Entre la población Judia Ashkenazi, la enfermedad de Gaucher es el trastorno genético más común, con una incidencia de aproximadamente 1 en 450 personas. En el público en general, la enfermedad de Gaucher afecta aproximadamente 1 en 100,000 personas. En 1991, estuvo disponible la terapia de reemplazo de enzima como el primer tratamiento efectivo para la enfermedad de Gaucher. El tratamiento consiste de una forma modificada de la enzima glucocerebrosidasa dada de manera intravenosa. Se contempla que las composiciones y los compuestos descritos aquí se pueden utilizar solo o más preferiblemente en combinación con la administración de glicocereborsidasa para tratar la enfermedad en un sujeto afligido . El síndrome de Hurler, también conocido como mucopolisacaridosis tipo I, es una clase de enfermedades traslapantes. Estas enfermedades genéticas comparten en común la acumulación celular de mucopolisacáridos en fibroblastos. Las enfermedades son genéticamente distinguibles. El fibroblasto y el transplante de médula ósea no parece ser de ayuda, así son necesarios los compuestos y las composiciones útiles para mejorar la severidad de la enfermedad y la progresión. Los compuestos y las composiciones descritos aquí se pueden administrar a un sujeto para mejorar la progresión y/o severidad de la enfermedad. La enfermedad de Krabbe (también conocida como leucodistrofia de célula Globoide) es una condición recesiva autosomal que resulta de la deficiencia de galactosilceramidasa (o galactocerebrosidasa) , una enzima lisosomal que catabolisa un componente principal del lípido de míelína. La incidencia en Francia se estima en 1:150,000 nacimientos. La enfermedad conduce a la desmielinización del sistema nervioso central y periférico. El inicio generalmente ocurre durante los primeros años de vida y la condición es rápidamente progresiva, pero las formas de inicio juvenil, adolescente o de adulto también se han reportado, con una tasa más variable de progresión. El diagnóstico se establece del ensayo de enzima (deficiencia de galactosilceramidasa) . Existen varios modelos animales naturales (ratón, perro, mono) . La enfermedad de Krabbe, como todas las leucodistrofias, no tiene curas conocidas o tratamientos efectivos. Una modalidad de la presente invención es utilizar las composiciones o compuestos descritos aquí para tratar y mejorar la enfermedad de Krabbe y otras leucodistrofias . Las leucodistrofias son un grupo de trastornos progresivos genéticamente determinados que afectan el cerebro, la columna y los nervios periféricos. Ellas incluyen adrenoleucodistrofia (ALD) , adrenomieloneuropatía (AMN), síndrome de Aicardi-Goutiers, enfermedad de Alexander, CACH (es decir, ataxia de la niñez con hipomielinización del sistema nervioso central o enfermedad de la materia blanca evanecente) , CADASIL (es decir, arteropatía dominante autosomal cerebral con infartos subcorticales y leucoencefalopatía) , enfermedad de Canavan (degeneración esponjosa), Xantomatosis Cerebrotendinosa (CTX) , enfermedad de Krabbe (anteriormente discutida) , leucodistrofia metacromática (MLD) , adrenoleucodistrofia neonatal, síndrome de ovarioleucodistrofia, enfermedad de Pelizaeus-Merzbacher (paraglegia espástica ligada a X) , enfermedad de Refsum, síndrome de van der Knaap (leucodistrofia vasculante con cistos subcorticales) y síndrome de Zellweger. Ninguna de las enfermedades tiene tratamientos efectivos que permita curaciones solas. Consecuentemente, se necesitan medios para tratar o mejorar los síntomas de la enfermedad, tal como utilizar las composiciones y los compuestos descritos aquí. Neuropatías con Mielinización Anormal Existe una variedad de polineuropatías inmunes crónicas que dan como resultado la desmielinización en el paciente. La edad de inicio de las condiciones varía por condición. Los tratamientos estándar para estas enfermedades existen y se podrían combinar con las composiciones y compuestos descritos aquí. Alternativamente, las composiciones y compuestos descritos se pueden utilizar solos. Las terapias estándares existentes incluyen lo siguiente: Desmielinización Inducida por Fármaco y Radiación Ciertos fármacos y radiación pueden inducir desmielinización en sujetos. Los fármacos que son responsables por la desmielinización incluyen pero no están limitadas a cloroquina, FK506, perhexilina, procainamida, y zimeldin . La radiación también puede inducir desmielinización. Toxicidad del sistema nervioso central (SNC) debido a la radiación se cree que es la causa (1) por el daño a las estructuras de vasos, (2) supresión de progenitores de oligodendrocito-2 astrocito y oligodendrocitos maduros, (3) supresión de las poblaciones de células madre neurales en el hipocampo, cerebelo y cortex, y alteraciones generalizadas de la expresión de citoquina. Los mayores daños por radiación resultan de radioterapias administradas durante el tratamiento de ciertos cánceres. Ver para revisión Belka et al., 2001 Br. J. Cáncer 85: 1233-9. Sin embargo, la exposición a radiación también puede ser un tema para astronautas (Hopewell, 1994 Adv. Space Res. 14: 433-42) así como también en el evento de exposición a sustancias radioactivas. Los pacientes que han recibido fármacos o se han expuesto accidental o intencionalmente a radiación pueden experimentar un beneficio al administrarse uno de los compuestos o composiciones descritas aquí para evitar la desmielinización o promover la remielinización. Condiciones que Involucran Desmielinización Los síndromes/enfermedades heredadas adicionales que resultan en la desmielinización incluyen síndrome de Cockayne, hipomielinización congénita, enfermedad de Farber, leucodistrofia metacromática, enfermedad de Peliszaeus-Merzbacher, Refsum, condiciones relacionadas con prion y enfermedad de Salla. El síndrome de Cockayne (CS) es un trastorno raro heredado en el cual la gente es sensible a la luz solar, tiene corta estatura y tiene una apariencia de envejecimiento prematura. En la forma clásica del síndrome de Cockayne (Tipo I) , los síntomas son progresivos y típicamente se vuelven evidentes después de la edad de un año. Una forma de inicio temprana o congénita del síndrome de Cockayne (Tipo II) es evidente al nacer. De manera interesante, a diferencia de otras enfermedades de reparación del ADN, el síndrome de Cockayne no está ligado a cáncer. El CS es un trastorno multi-sistémico que origina tanto falla de crecimiento profunda de la soma y el cerebro como caquexia progresiva, degeneración de la retina, coclear, y neurológica, con una leucodistrofia y neuropatía desmielinizante sin un incremento en cáncer. Después de la exposición a UV (por ejemplo, luz solar) , los sujetos con síndrome de Cockayne ya no pueden desarrollar la reparación acoplada a trascripción. Se han identificado hasta ahora dos genes defectuosos en el síndrome de Cockayne, CSA y CSB. El gen CSA se encuentra en el cromosoma 5. Ambos genes codifican para proteínas que interactúan con componentes de la maquinaria trascripcional y con proteínas de reparación del ADN. Hasta la fecha, ninguna cura o tratamientos efectivos para pacientes con esta enfermedad se ha identificado. Así, un aspecto de la invención es el tratamiento de esta enfermedad con los compuestos y composiciones descritos aquí . La hipomielinización congénita tiene varios nombres que incluyen neuropatía desmielinizante congénita, polineuropatía hipomielinizante congénita, polineuropatía de hipomielinización congénita (Bulbo de Cebolla) , neuropatía de hipomielinización congénita, neuropatía congénita originada por hipomielinización, neuropatía por hipomielinización y CHN. Las neuropatías periféricas hereditarias, entre los trastornos genéticos más comunes en humanos, son un grupo complejo, clínica y genéticamente heterogéneo de trastornos que producen el deterioro progresivo de los nervios periféricos. La hipomielinización congénita es un grupo de trastornos. Este grupo incluye la neuropatía hereditaria con responsabilidad de parálisis de presión, enfermedad de Charcot-Marie-Tooth, síndrome de Dejerine-Sottas, y neuropatía hipomielinizante congénita. No existen curas conocidas o tratamientos efectivos para cualquiera de estos trastornos. La enfermedad de Farber tiene varios nombres que incluyen: lipogranulomatosis de Farber, deficiencia de ceremidasa, deficiencia de ceramidasa acida, deficiencia de AC, deficiencia de N-laurilesfingosina desacilasa, y N-acilesfingosina amidohidrolasa . Como ciertos nombres lo revelan, la enfermedad ocurre debido a una deficiencia de ceramídasa acida (también conocida como N-acilesfingosina amidohidrolasa, ASAH) . La falta de la enzima da como resultado una acumulación de mucopolisacárido ácido no sulfonatado en neuronas y células gliales. Los pacientes con la enfermedad usualmente mueren antes de la edad de 2 años . La leucodistrofia metacromática (MLD) es un trastorno genético causado por una deficiencia de la artilsulfatasa A de enzima. Este es un grupo de trastornos genéticos denominado leucodistrofías que afectan el crecimiento de la cubierta de mielma. Existen tres formas de MLD: la infantil tardía, la juvenil y la adulta. En la forma infantil tardía, que es la más común, el inicio de los síntomas comienza entre las edades de 6 meses y 2 años. El niño es usualmente normal al nacer, pero eventualmente pierden capacidades ganadas previamente. Los síntomas incluyen hipotonía (bajo tono muscular) , anormalidades del habla, pérdida de capacidades mentales, ceguera, rigidez (es decir opresiones musculares no controladas) , convulsiones, tragado afectado, parálisis, y demencia. Los síntomas de la forma juvenil inician entre las edades de 4 y 14 , e incluyen un desempeño en la escuela afectado, deterioro mental, ataxia, convulsiones y demencia. En la forma adulta, los síntomas, que inician después de los 16 años, pueden incluir concentración afectada, depresión, alteraciones psiquiátricas, ataxia, tremor, y demencia. Las convulsiones pueden ocurrir en la forma adulta, pero son menos comunes que en otras formas . En todas las tres formas el deterioro mental es usualmente el primer signo. La enfermedad de Peliszaeus-Merzbacher (también conocida como leucodistrofía sudanofílica permatal) es un trastorno genético ligado a X que origina una anormalidad de la proteína proteolípido . La anormalidad da como resultado la muerte del infante típicamente antes de un año de edad. No existen tratamientos o curas conocidos para la enfermedad. La enfermedad de Refsum (también denominada como deficiencia de la oxidasa acida fitánica, heredopatía atáctica polmeuptiformis o neuropatía motora y sensorial hereditaria IV, HMSN IV) es causada por mutaciones en el gen, que codifica la fitanoil-CoA hiroxilasa (PAHX o PHYH) . Las características clínicas principales son la retinitis pigmentosa, la polmeuropatía crónica y los signos cerebelares. El ácido fitánico, un ácido graso de cadena ramificada inusual (ácido 3 , 7 , 11 , 15- tetrametil-hexadecanóico) se acumula en los tejidos y los fluidos del cuerpo de pacientes con la enfermedad y es incapaz de ser metabolizado debido a la falta de PAHX La plasmaferesis desarrollada una vez o dos veces al mes remueve efectivamente el ácido del cuerpo y permite la liberalización de las restricciones de dieta limitando la toma de ácido fitánico Las condiciones relacionadas con prión incluyen la enfermedad de Gerstmann-Straussler (GSD) , la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (CJD) , el insomnio fatal familiar y las isoformas aberrantes de la proteína del prión pueden actuar como agentes infecciosos en estos trastornos así como también en kuru y tembladera (una enfermedad encontrada en las ovejas) El término prión se deriva de "agente infeccioso de proteína" (Prusmer, Science 216: 136-44, 1982) . Existe una división proteolítica de la proteína relacionada con prión (PRP) que da como resultado en un péptido amiloidogénico que se polimeriza en fibrilas msolubles . La enfermedad de Salla y otros tipos de sialurias son enfermedades que involucran problemas con el almacenamiento de ácido siálico Ellos son trastornos neurodegenerativos recesivos autosomales que se pueden presentar como una forma infantil severa (es decir, ISSD) o como una forma adulta lentamente progresiva que es prevalente en Finlandia (es decir, enfermedad de Salla) . Los síntomas principales son hipotonia, ataxia cerebelar y retardo mental. Estas condiciones y enfermedades también se contemplan para paliar o mejorar los tratamientos. Otras condiciones que resultan en la desmielmización incluyen encefalitis post-mfecciosa (también conocida como encefalomielitis diseminada aguada, ADEM) , meningitis y daños de la columna vertebral. Las composiciones y compuestos descritos aquí también se contemplan para uso en el tratamiento de estas otras condiciones desmielmizantes .

Los siguientes ejemplos sintéticos y biológicos se ofrecen para ilustrar esta invención y no se deben considerar de ninguna manera como limitantes del alcance de esta invención. A menos que se establezca otra cosa, todas las temperaturas están en grados Celsius. EJEMPLOS En los ejemplos de adelante, las siguientes abreviaturas tienen los siguientes significados. Si no se define una abreviatura, ésta tiene su significado generalmente aceptado.

A Angtroms br s singlete amplio BSA sero albúmina bovina d doblete dd doblete de dobletes dq doblete de cuartetos dsexteto doblete de sextetos DMF dimeetilformamida EDTA ácido etilenodiamino tetraacético EtOAc etil acetato EM longitud de onda de emisión (en mm) EX longitud de onda de exitación (en mm) g gramo HBSS solución de sal balanceada de Hank HEPES 4- (2-hidroxietil) -1- piperazinoetanosulfónico ácido HPLC cromatografía líquida de alto desempeño hrs o h horas in. pulgada í-PrOH Iso-propanol kg kilogramo L litros LC/MS Cromatografía líquida/espectroscopia de masa m multiplete rmd metros cuadrados M molar mbar milibar mg miligramo MHz megahertz min. minutos mL mililitros mm milímetros mM milimolar mmol milimoles mOsm miliosmol m/z masa a proporción de carga N normal ng nanogramos nm nanometros RMN resonancia magnética nuclear PBS solución salina amortiguada de fosfato PBS++ PBS con calcio y magnesio ppm partes por millón psi libras por pulgada cuadrada q cuarteto Rf factor de retención (proporción de la distancia viajada por la sustancia/distancia viajada por el frente del disolvente) rpm rotaciones por minuto ta temperatura ambiente s singlete t triplete TFA ácido trifluoroacético THF tetrahidrofurano TLC cromatografía de capa delgada UV ultravioleta p/p peso a proporción en peso p/v peso a proporción en volumen µg microgramos µm micrómetros LlM micromolar Métodos Generales. La cromatografía flash se desarrolló utilizando un Biotage Flash 75L, que utiliza cartuchos de silica de 800 g KP-Sil (32-63 µM, 60 Á, 500- 550 m2/g) . Los Rf se reportan para TLC analítico, utilizando Gel de sílice 60 F EM Sciences (254), placas de 250 µM de grueso para fase normal. Se obtuvieron los espectros RMN sobre un espectómetro Varian Gemini de 300 MHz (300 MHz para los espectros 1H y 75 MHz para los espectros 13C) . El HPLC analítico se desarrolló sobre un HPLC Agilent 1100 Series con un Phenomenex Luna, 3 µm, C-18, columna de 30 x 4.6 mm. El detector fue de UV a 210 nm. Los disolventes fueron 0.1% TFA en agua y 0.1% TFA en acetonitrilo. La tasa de flujo estándar fue de 1.5 mL/min., y en el método estándar el gradiente de disolvente cambió de 20% CH3CN a 70% CH3CN durante 2.33 minutos. Un segundo método alternativo tiene una tasa de flujo de 2 mL/min. , y un gradiente cambiando de 20% CH3CN a 70% CH3CN durante 1.75 minutos. Un tercer método tiene una tasa de flujo de 1.5 ml/min., con la composición de disolvente cambiando del 20% CH3CN a 70% CH3CN durante 10 min., sosteniendo un 70% durante 2 min., luego elevándose al 95% durante 1 min., y manteniéndose a 95% durante 2 minutos. Se desarrolló el LC/MS sobre un HPLC Agilent 1100 Series con un Series MSD 1100 con ionización de electropulverizado (a menos que se indique otra cosa o ionización química) . La columna y las condiciones fueron coincidentes con el HPLC de permanencia libre . El 1H RMN de las amidas típicamente muestra rotámeros e integración de algunos picos que se reportan en valores de protón fraccional. Ejemplo 1 Preparación de N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (furan-3 -ilcarbonil) amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' - { (pirrolidin- 1-il) carboniloxi } fenilalanina .

Etapa 1: Preparación de terc-butil éster de N- [2-dietilamino-5- {N-amino}pirimidin-4-il] -L-4' -{ (pirrolidin-1-il) carboniloxi} fenilalanina 2.

Una mezcla de nitropirimidina-carbamato 1 (160.25 g, 0.3035 mol; preparada como en la WO 03/099809) y 5% de Pd/C (15 g, 50/50 p/p con H20, Degussa E 101 R/W) en una solución de THF-agua (ÍL de THF y 50 mL de H20) se agitó bajo 60 psi de hirdrógeno a temperatura ambiente. Después de 22 hrs, el TLC (50% EtOAc/hexanos sobre gel de sílice) mostró 100% de conversión del producto. La mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de Celita (200 mL) . El recipiente de hidrogenación y la almohadilla de celita se enjuagaron con THF fresco, anhidro (500 mL) para dar una solución de filtrado verde. El filtrado se concentró in vacuo para dar el producto crudo como un aceite gomoso verdoso-negro. El evaporador rotatorio se ventiló bajo N2 y se agregó THF anhidro, fresco (600 mL) . La solución se concentró in vacuo y se ventiló bajo nitrógeno. (El proceso de disolver en THF anhidro fresco y concentrar repitió dos veces más hasta remover azeotrópicamente el agua residual) . Este material se utilizó inmediatamente en la Etapa 2 debido a la sensibilidad aparente al aire, m/z = 499.5 para [M+l] + para el producto deseado. Etapa 2: Preparación de terc-butil éster de N- [2-dietilamino-5- {N-trifluoroacetilamino}pirimidin-4-il] -L-4' -{ (pirrolidin- l-il) carboniloxi } fenilalanina 3.

El carbamato de aminopirimidina crudo 2 de la Etapa 1 se disolvió en 600 mL de THF anhidro. La solución se enfrió a 0°C bajo nitrógeno. Se agregó lentamente anhídrido trifluoroacético (45.5 mL, 1.51 g/mL, 327.3 mmol) a la solución de amina fría por vía de una bomba de jeringa durante 45 minutos. A la solución se le permitió calentarse a temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche. El TLC (40% de EtOAc en Hexanos, gel de sílice) indició que la reacción estuvo esencialmente completa. El análisis LC/MS confirmó la reacción y no mostró ningún material de partida. La reacción se diluyó con etil acetato (1.4 L) y se lavó con una mezcla de agua (400 mL) y NaHC03 acuoso saturado (700 mL, 0°C) . La solución orgánica se lavó con solución salina (700 mL) y se secó sobre MgS04 (105 g) para dar una solución tostada-café. La solución seca se filtró a través de una almohadilla de gel de sílice (400 mL) para dar una solución verdosa-gris . (La impureza de color tostado se retuvo sobre gel de sílice) . La gel de sílice se enjuagó con EtOAc (400 mL) . La solución de filtrado se concentró in vacuo y el recipiente se ventiló bajo nitrógeno para minimizar la exposición al oxígeno. Se agrego tolueno anhidro (600 mL) . La solución se concentró in vacuo y se azeotropizó una segunda vez del tolueno anhidro (400 mL) para dar un aceite gomoso verde-negro. El recipiente se ventiló bajo N2. Este producto crudo m/z= 595.5 para [M+l] + se llevó hacia la Etapa 3. Etapa 3: Preparación de terc-butil éster de N-[2-dietilamino- 5- {N-etil-N- trifluoroacetilamino }pirimidin-4 -il] -L-4' -{ (pirrolidin-1-il) carboniloxi } fenilalanina 4.

Trifluoroacetamidopirimidina Carbamato curda 3 de la Etapa 2 se disolvió en DMF (350 mL) . Se agregó carbonato de potasio anhidro sólido (79.6 g, 575.7 mmol; se molió hasta polvo fino con un mortero y moledor y luego se colocó en un horno de vacío a 110°C bajo un vacío de 28 pulgadas de Hg durante la noche) . Se agregó etil yoduro (46.5 mL, 89.9 g, 575.7 mmol) rápidamente a temperatura ambiente. El recipiente de reacción se taponó herméticamente y la suspensión se agitó vigorosamente. Después de agitar a temperatura ambiente durante 20 horas, la reacción se muestreó (TLC, LC/MS) . La reacción se agitó durante 18 horas adicionales para asegurar la reacción completa. De nuevo, la reacción se muestreó y se desarrolló un mini-trabajo por medio del análisis TLC que indicó el consumo del material de partida. La reacción se diluyó con 2.7 L de etil acetato y se agitó vigorosamente. La suspensión se filtró a través de un papel de filtro Whatman #1 para remover el K2C03 sólido. La solución orgánica se colocó en un embudo de separación de 6L. Se agregó agua (2.5L) y se mezcló vigorosamente. Las capas se separaron lentamente, se agregó entonces solución salina (200 mL) para romper la emulsión. La capa orgánica se lavó con otro 1 L de agua y luego 2 L de solución salina. La capa orgánica se secó sobre MgS04 (50 g) y Na2S04 (200 g) . La solución orgánica seca se filtró a través de un tarugo de gel de sílice (700 mL) para obtener una solución coloreada humeante verde tostado oliva-parduzca . (Se removió la impureza de línea base púrpura/roja) . Se enjuagó el gel de sílice con EtOAc (800 mL) . La solución orgánica se concentró para dar un sólido verde oliva pardo (194.3 g, 103% crudo) . Se agregó hexano (300 mL) . Los lados del recipiente se pelaron con una espátula de metal para liberar el producto sólido y se agregó una barra de agitación magnética al recipiente. La mezcla se rotó lentamente durante 30 minutos para romper los pedazos sólidos y luego rápidamente durante 30 minutos hasta que dio como resultado una suspensión fina. La suspensión se filtró a través de un papel de filtro Whatman #1 y el precipitado se enjuagó con hexano (1.2 L) para dar un sólido blanco (141 g, 74% de rendimiento, 92% puro mediante LC/MS) . El filtrado se concentró para dar una goma verde-tostado (33.3 g) , la cual mediante análisis TLC contiene algo del producto deseado. 1H RMN (CDC13, 300 MHz) d, ppm: 7.80 (aparente d, 1H) , 7.18 (aparente d, AA'XX', 2H) , 7.03 (aparente dd, AA'XX', 2H) , 5.00 (aparente d, 1H) , 4.80 (aparente dq, 1H) , 3.95 (aparente dsexteto, 1H) , 3.4-3.7 (m, 8.5H), 3.0-3.3 (m, 3H) , 2.78 (sexteto, 0.7H) , 1.93 (AA'BB', 4H) , 1.38 (aparente d, 9H) , 1.24-1.05 (m, 9H) . El 1H RMN muestra rotámeros como se evidencia por el doblamiento de la mayoría de los picos. 13C RMN (CDC13, 75 MHz)d, ppm: 166.5, 166.3, 155.6, 152.7, 150.9, 146.0, 145.9, 128.7, 128.3, 125.44, 125.39, 117.18, 77.66, (72.82, 72.28, 71.97 - CDC13), 50.23, 49.74, 41.72, 41.64, 40.16, 39.90, 37.28, 32.60, 32.44, 23.24, 23.17, 21.05, 20.23, 8.50, 8.47, 7.32. Etapa 4: Preparación de terc-butil éster de N-[2-dietilamino- 5- {N-etilamino }pirimidin- 4 -il] -L-4' -{ (pirrolidin-1-il) carboniloxi} fenilalanina 5.

La trifluoroacetamida 4 (140 g) se suspendió/disolvió en metanol (1.6 L) . Se agregó una solución acuosa de carbonato de potasio (7% de K2C03) (480 mL) . (La trifluoroacetamida se precipitó parcialmente y se formó un gel) . El recipiente de reacción fue inmerso en un baño de agua a 55 °C. La solución se mezcló a 55 °C, con monitoreo mediante TLC, durante 9 horas. La reacción se concentró in vacuo muy cuidadosamente hasta que se había recolectado 1.2 L de metanol. La solución se diluyó con agua (200 mL) y solución salina (600 mL) y se extrajo con EtOAc (2 L) para dar una solución naranja. La capa de EtOAc se lavó con agua (1 L) y luego solución salina (400 mL) . Cada una de las tres capas/lavados acuosos se retroextrajo en orden secuencial con 1 L único de EtOAc para obtener una solución amarillo brillante. Los extractos orgánicos se combinaron y se secaron sobre MgS04 (126 g) . La solución orgánica seca se filtró a través de una almohadilla de alúmina básica (300 mL) y se concentró in vacuo para dar una goma café. Después de azeotropizar de 600 mL de tolueno, se obtuvo un sólido rojizo (117.1 g) . Etapa 5: Preparación de terc-butil éster de N- [2-dietilamino- 5- {N-etil-N- (furan- 3-ílcarbonil) amino}pírimidin-4 -il] -L-4' -{ (pirrolidin- 1-il) carboniloxi } fenilalanina 6. 6 La amino-pirimidina 5 (117.1 g, 222.2 mmol) se disolvió en THF anhidro (1.5 L) . Se agregó base de Hunig, diisopropíletil amina, (115 mL, 3 eq., 666.6 mmol) . La solución se enfrió a 0°C bajo N2. El recipiente de reacción se ajustó con un embudo de adición de presión igualante y se cargó el embudo de adición con una solución de 3-furoil cloruro (32 g; Yamamoto & Maruoka; J. Am. Chem. Soc., 1981, 103, 6133-6136) en THF (90 mL) . La solución de furoil cloruro se agregó lentamente a la solución de amina fría durante dos horas. A la reacción se le permitió llegar lentamente a la temperatura ambiente y se agitó durante 36 horas. La reacción se diluyó con EtOAc (2 L) y se lavó dos veces con ácido cítrico 0.2 N (1.2 L y 1.0 L), una vez con solución salina (1.8 L) y una vez cn NaHC03 acuoso saturado (1.3 L) . La solución orgánica naranja-rosa brillante se secó sobre Na2S04 (250 g) y MgS04 (51 g) . La solución seca se filtró a través de una almohadilla de gel de sílice (1 L) y el recipiente y el sílice se ejuagaron con EtOAc (ÍL) . La solución se concentró in vacuo. Durante el proceso de evaporación, un sólido blanco cristalizó. Una vez que la solución estuvo completamente concentrada, se obtuvo un sólido naranja, rosado, & blanco. Se agregaron éter (400 mL) y hexanos (500 mL) . La suspensión se mezcló completamente y se filtró a través de un papel de filtro Whatman #1 para obtener un sólido durazno-rosa y un filtrado rojo brillante. El precipitado se enjuagó con hexanos (500 mL) , éter (800 mL) , y de nuevo hexanos (400 mL) para conseguir un sólido durazno claro-naranja. El filtrado y los ejuagues se combinaron, concentraron, y se dejaron a un lado para uso posterior. El sólido se secó en un horno de vacío a 60 °C durante dos días bajo un vacío de 28 pulgadas de Hg (49 Torr) para producir 100.0 g. El LC/MS mostró que el sólido era 92% puro. El éster crudo 6 se cromatografió sobre 2L (1 kg) de gel de sílice que había sido empacado en suspensión con 3 L de CH2C12. El producto éster de color durazno se disolvió en CH2C12 (200 mL) y se aplicó a la columna de silica de 2L. La columna se eluyó con CH2C12 (3 L) , 50% de EtOAc en hexanos (4 L) , y 75% de EtOAc en hexanos (4L) . A los pocos minutos, el producto éster deseado inició la cristalización de vanas fracciones de EtOAc-hexano. Las fracciones que mostraron ser puras mediante TLC se concentraron para dar un sólido blanco (82.5 g, pureza >99% mediante LC/MS) . Este material puro fue llevado hacia delante hasta la etapa de desprotección final. Las fracciones que se mostraron mediante TLC por estar contaminadas se combinaron con el residuo del filtrado original/enjuagues de hexano & éter. Este material se cromatografió flash de manera similar a aquella descrita anteriormente para dar un sólido de color durazno ligero (13.2 g; m/z = 621.5 para [M+l] +) . 1H RMN (CDC13, 300 MHz) d, ppm: 7.58 (aparente d, 1H) , 7.35-6.90 (aparente AB traslapado con ABX, 6H) , 6.45 (aparente d, 1H) , 5.25 (aparente d, 1H) , 4.85 (aparente dq, 1H) , 4.05 (aparente octeto, 1H) , 3.7-3.4 (m, 8H) , 3.0-3.3 (m, 2.5H), 2.90 (sexteto, 0.5H), 1.93 (AA'BB', 4H) , 1.38 (aparente d, 9H) , 1.24-1.05 (m, 9H) . El 1H RMN muestra rotámeros como se evidencia por el doblamiento de la mayoría de los picos . Etapa 6: Preparación de N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (furan- 3 -ilcarbonil) amíno}pirimidin-4-il] -L-4 ' -{ (pirrolidin-1-il) carboniloxi} fenilalanina . Al t-butil éster 6 de la Etapa 5 (82.5 g, 132.7 mmol) se agregó ácido fórmico (2 L) . La solución resultante se calentó a 50 °C durante toda la noche. El análisis mediante TLC verifcó la reacción completa y la solución se concentró in vacuo. Se agregó agua (-200 mL) al producto crudo y la mezcla se concentró hasta sequedad. Otros 150 mL de agua se agregaron y el producto crudo se concentró de nuevo in vacuo. El producto sólido blanco crudo se concentró de iPrOH, y dos veces de THF anhidro, luego se secó sobre un evaporador rotatorio a 45 °C y 35-40 mbar (26-30 Torr) durante toda la noche para obtener 90 g del sólido blanco. El LC/MS mostró que el producto crudo era 97.7% puro. 1H RMN (CD30D, 300 MHz) d, ppm: 7.65 (s, 0.55H), 7.45 (s, 0.45H), 7.38 (m, 2H) , 7.25 (d, 1.3H), 7.18 (d, 1H) , 7.05 (d, 1.2H), 6.90 (d, 1H) , 6.55 (s, 0.55H), 6.22 (amplio s, 0.45H), 4.9-4.8 el pico disolvente residual traslapado con el pico de muestra, 4.10 (aparente septeto, 1.1H), 3.7 (m, 3.3H), 3.58 (m, 7H) , 3.45-2.9 (m, 6H) , 2.78 (aparente sexteto, 0.7H), 1.90 (AA'BB', 4.5H) , 1.85 (m, 3.16H) , 1.23-1.0 (m, 10.3H) . 13C RMN (CD30D, 75 MHz)d, ppm: 169.6, 169.2, 160.8, 153.9, 153.6, 148.8, 145.8, 145.2, 145.1, 140.7, 140.5, 138.0, 137.9, 130.3, 130.2, 124.7, 124.6, 116.5, 116.4, 116.2, 116.1, 106.9, 106.6, 105.1, 105.0, 62.4, 50.7, 50.1, 41.0, 37.9, 37.2, 30.5, 20.2, 20.0, 19.4, 6.9, 6.8, 6.1, 5.9. Los Ejemplos 2-7 de adelante se prepararon de manera similar al ejemplo 1. Ejemplo 2 Preparación de ácido (S) -2- (dietilamino) -5- (N-etil-2,2, 2-trifluoroacetamido) pirimidin-4 -ilamino) -3- (4-(pirrolidina- 1-carboxiloiloxi) fenil) propanóico 1H RMN (300 MHz, CD30D) dl.03 (1.5 H, t, J = 7.2 Hz) 1.10-1.28 (7.5H, m) , 1.98 (4H, m) , 2.67-2.85 (0.5H, m) , 2.90-3.05 (0.5H, m) , 3.05-3.38 (2H, m, traslapado con CD30D) , 3.41 (2H, m) , 3.41 (2H, m) , 3.58 (6H, m) , 3.90-4.11 (1H, m) , 4.85-4.90 (1H, traslapado con CD30D) , 7.02 (2H, m) , 7.26 (2H, m) , 7.66 (1H, d, J = 8.7 Hz) HPLC/MS: MH+ = 567.1 Ejemplo 3 Preparación de N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (tien-2-ilcarbonil) amino }pirimidin-4-il] -L-4'-{ (pirrolidin- 1-il) carboniloxi} fenilalanina. Etapa 1 : ?N R (300MHZ, CDC13) d 1.09-1.17 (3H, m), 1.23-1.26 (3H, m).1.47 (12H, m), 1,87-1.99 (4H, m), 2.80 (0.4H. brs), 3.10 (1.6H, m), 3.20 (1H, ), 3.44 (2H, t, .7=6.0 Hz), 3.54 (2H, t, = 6.0 Hz), 3.88-4,15 (3H, m), 4.80-4.85 (1H, ), 6.48 (0.6H, br s), 6.75 (0.4H, s), 6.69-7.08 (5H, m), 7.41 (1H, a), 7.50 (1H, s), 7.78 (0.4 H, br s), 7.85 (0.6H, br s) l!PLC/MS: H+= 617.2 Etapa 2 : 'H NMR (300MHz, CDCl3) d 0.90 (3H. l, ./= 6.9 Hz), 1 ,10-1,30 (6R m), 1.85-1.94 (4H, m), 2.S5-3.24 (2.4H, m)> 3.35 (8.6H, m), 4.00-4.15 (111. m), 4.55 (0.4H. br s). 4.73 (0.6H, br s), 5.85 (0.6H, d, J = 5.7 Hz), 5.87 (0.4H, br s), 6.60-7. J 2 (5.4H, m), 7.39 (1H, m), 7.60-7.68 ( 1.6H, m) HPLC/ S: MH+ = 581.2 Ejemplo 4 Preparación de N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (tien-3-ilcarbonil) amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' - { (pirrolidin- 1-il) carboniloxi } fenilalanina . Etapa 1 : ? NMR (300MHz, CDC13) d 1.07-1.27 (9H, ), 1.40 (9H, s), 1.90 (4H, m), 3.05-3.24 (3H. m), 3,43-3.64 (8H, m), 4.73-4.95 (1H, m), 5.22 (1H, m), 6.95-7.14 (7H, m), 7.41 (0.4H, s), 7.50 (0.6H, s) HPLC/ MS: MH* = 637.2 Etapa 2 : ? NMR (300MHz, CDC1 ), 6 0.70-1,4 (9H, m), 1.81 -2.08 (4H, m), 2.62-4.10 (I2H, m), 4.95 (1H, br s), 6.90-8,07 (8H, ra) HPLC/ MS: MHf~581.2 Ej emplo 5 Preparación de N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (furan-2-ilcarbonil) amino}pirimidin-4-il] -L-4' -{ (pirrolidin- 1-il) carboniloxi } fenilalanina .

Etapa 1 : EH XMR (300 H7„ CDCl3) d 1.15-1.28 (9H, m). 1.37 (3.6H, s). 1.42 (5.4H, s), 1.93- 2.05 (4H, ), 2.85-3.15 (2 H, m). 3.19-3.35 (1 H, m), 3.45-3.75 (8H, m), 3.90-4.15 (1H, m), 4.76-4.85 (0.4H, m), 4,90-5.00 (0.6H. m), 5.15-5.22 (1 H, m), 6.20-6.40 (2H, m), 6.91-7.18 (4H. m), 7.39 (1 H, s), 7.58 (0.4H, s), 7.65 (0.6H, s) HPI.C/ MS: MH4 = 621.3 Etapa 2 : 1H RMN (300 MHz, CD30D) d 0.84-1.25 (9H, m, ) , 1.85-1.92 (4H, m) , 2.70-2.81 (0.5H, m) , 2.92-3.30 (2.5H, m traslapante con CD30D) , 3.30-3.38 (2H, m) , 3.45-3.59 (6H, m) , 4.04-4.12 (1H, m) , 4.80-4.89 (1H, traslapante con CD30D) , 6.18 (1H, m) , 6.58 (0.5H, br s) , 6.78 (0.5H, br s) , 6.83 (1H, d, J = 8.1 Hz) , 6.92 (1H, d, J = 8.1 Hz) , 7.06 (1H, d, J = 8.1 Hz) , 7.19 (1H, d, J = 8.1 Hz) , 7.38 (0.5H, br s) , 7.44 (0.5H, s) , 7.47 (0.5H, br s) , 7.48 (0.5H, s) HPLC/MS: MH+ = 565.2 Ejemplo 6 Preparación de N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (t-butilcarbonil) amino }pirimidin-4 -il] -L-4 ' - { (pirrolidin- 1-il) carboniloxi } fenilalanina . Etapa 1 : ? NMR (300 MHz, CDCl3) d 1.04-1.11 (18H, m), 1.40 (4.5H, s), 1.42 (4.5H, s), 1.96 (4H, ), 2,46-2.59 (0.5H, m), 2.72-2.85 (0.5H, m). 3.00-3.32 (2H, m), 3.45-3.62 (8R ra). 3.S2-4.15 (1 H, m), 4.82-4.93 (1H, m), 5.05 (0.5H, ../= 7.2Hz), 5.15 (0.5H, d, J = 7.2Hz), 7.08-7, 18 (4H, m), 7.67 (IR s) HPL MS: MH1' = 611.3 Etapa 2 : 1H RMN (300 MHz, CD30D) d 0.86-1.20 (18H, m, ) , 1.87 (4H, m) , 2.32-2.45 (0.5H, m) , 2.56-2.68 (0.6H, m) , 3.05-3.20 (2H, m) , 3.29-3.38 (2H, m) , 3.43-3.52 (6H, m) , 3.8-3.99 (1H, m) , 4.75-4.82 (1H, traslapante con CD30D) , 6.90 (2H, d, J = 9.0 Hz) , 7.15 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.43 (1H, s) HPLC/MS: MH+ = 555.2 Ejemplo 7 Preparación de N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (isopropilcarbonil) amino}pirimidin-4 -il] -L-4' -{ (pirrolidin- 1-il) carboniloxi} fenilalanina. Etapa 1: ? NMR (300MHz, CDCb) d 0.90-1,21 (15H, m), 1.38 (9H, s), 1.92 (4R m)}2.28- 2.50 (1H, m), 2.80-3.16 (3H5 m)} 3.41-3.70 (8H, m), 3.80-3.95 (1H, ), 4.71-4.85 (1H, m), 5.05-5.11 (1H, m), 7.00-7.08 (2H, m), 7.08-7.16 (2H, m), 7.65 (1H, d,J= 5.0 Hz) HPLC/MS:MH =5973 Etapa 2 1H RMN (300 MHz, CD30D) d 0.80-0.98 (9H, m,), 1.15-1.19 (6H, m) , 1.88 (4H, m) , 2.20-2.42 (1H, m) , 2.65-2.83 (1H, m) , 3.08-3.25 (2H, m) , 3.26-3.59 (8H, m) , 3.88-3.97 (1H, m) , 4.70-5.05 (1H, traslapante con CD30D) , 6.92 (2H, d, J = 7.8 Hz) , 7.17 (2H, m) , 7.63 (1H, d, J = 5.0 Hz) HPLC/MS: MH+ = 541.3 Ejemplo 8 Método general para la preparación de pirimidinil ureas.

Etapa 1 Terc-butil éster de N- [2 -dietilamino-5- {N-etilamino}pirimidin-4-il] -L-4 ' - { (pirrolidin-1-íl) carboniloxi } fenilalanina (0.436 g, 0.83 mmol) se disolvió en CH2C12 (0.35 mL) y NaHC03 sat. (0.7 mL) . La solución se enfrió hasta cero grados y se agitó vigorosamente durante 10 minutos. Después de 10 minutos la agitación se detuvo y a las capas no miscibles se les permitió separarse. Se agregó fosfeno (0.52 mL, 4.97 mmol) a la capa inferior por vía de jeringa. La mezcla de reacción se agitó bajo N2 durante tres horas. Luego de completar, la capa orgánica se separó y ésta se concentró ín vacuo a ta. Éste se redisolvió en EtOAc y se lavó con agua desionizada y se retro extrajo dos veces. La capa orgánica se secó sobre Na2S04 y se concentró in vacuo. El aceite crudo se llevó adelante a la siguiente etapa sin purificación. Etapa 2 : Cloruro de carbamilo crudo (1 eq.) y amina (5 eq.) se disolvieron en THF (0.2M) y se agitaron durante toda la noche bajo N2. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se redisolvió en acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre Na2S04 y se concentró in vacuo. Los productos se purificaron mediante HPLC. Los productos se trataron con HCOOH como disolvente a 40 °C durante toda la noche. El disolvente se removió bajo presión reducida y se obtuvieron los productos. Los Ejemplos 9-11 se prepararon de acuerdo al ejemplo 8. Ejemplo 9 Preparación de N- [2-díetilamino-5- {N-etil-N- (piperidin-1- ilcarbonil) amíno } pirimidin-4 -il] -L-4 ' - { (pirrol idin- 1-il) carboniloxi} fenilalanina .

? NMR (300 MHz, CDC13) d 1.01 (3 H, t, J= 7 Hz), 1.22 (6 H, t, J= 7 Hz), 1.36 (4 l-i m), 1.49 (2 H, m)? 1.95 (4 H, m), 3.10-3.66 (16 H, m), 4.86-4.92 (1 H, m), 6.75 (1 H, ó,J= 7.2 Hz), 7.25 (2 H, d, J= 8.4 Hz), 7.14(2 H, d, ./= 8.4 Hz), 7.64 (1 H, s). HP LC/MS: MH* = 582.3 Ejemplo 10 Preparación de N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (N-etil-N- iso-propilaminocarbonil) amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' - { (pirrolidin-1-il) carboniloxi} fenilalanina.

? NMR (300 MHz, CDCI3) 5 l .01 (9 H, br s), 1.21 (9 H, m), 1.90-1.99 (4 H, ra), 2.98 (21-1, ni), 3.15 (3 H, m).3.33 (1 H, m), 3.45 (2 H, m), 3.52-3.60 (6 H. m), 3.76 (1 H, ni), 4.91-4.97 (1 H, br s), 6.64 (1 H, br s), 7.04 (2 H, d, J- 8 Hz), 7.14 (2 H, d, ./ = 8 Hz), 7.66(1 H, s).

Ejemplo 11 Preparación de N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (3-tiapirrolidin-1-ilcarbonil) amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' -{ (pirrolidin-1-il) carboniloxi } fenilalanina .

? NMR (300 MHz, CDC13) d 1.03 (3 H, t, J - 6.6 Hz), 1.21 (6 H, t, ./= 6.6 Hz), 1.90- 1.99 (4 H, m), 2.S4 (2 H, t, J - 6 Hz), 3.09-3.63 (14 H, m). 4.06-4,14 (2 H, q, ./= 7.8 Hz^ '91 ~4'97 (! H' m)< 6-64 í1 H> d. •' = 7 Hz), 7 04 (2 H, d, J = S.4 H2), 7.13 (2 H, d. 7= 8.4 Hz), 7.75 (1 H, s). HPLC/MS.-MH"- 586.2 Ejemplo A Ensayo de Adhesión de a4ßl Integrina: Adhesión de Célula Jur atTM a Fibronectina de Plasma Humano Procedimiento Placas de 96 pozos (placas Costar 3590 EIA) se recubrieron con fibronectina humana (Gibco/BRL, cat #33016- 023) a una concentración de 10 µg/mL durante toda la noche a 4°C. Las palcas se bloquearon entonces con una solución de sero albúmina bovina (BSA; 0.3%) en solución salina. Las células JurkatTM (manteniéndolas con un crecimiento de fase log) se marcaron con Calceina AM de acuerdo a las instrucciones del fabricante, y se suspendieron a una concentración de 2 x 106 células/mL en Hepes/Solución Salina/BSA. Las células se expusieron entonces a prueba y compuestos de control durante 30 minutos a temperatura ambiente antes de la transferencia a pozos individuales de una placa recubierta con fibronectma. La adhesión se permitió que ocurriera durante 35 minutos a 37 °C. Los pozos se lavaron entonces con una aspiración suave y pipeteo con solución salina fresca. La fluorescencia asociada con el resto de las células adherentes se cuantificó utilizando un lector de placa fluorescente a EX 485/EM 530. Los cultivos de célula se prepararon al dividir primero las células JurkatTM en fase estacionaria a 1:10 el día uno, y 1:2 el día dos para desarrollar el ensayo en el día 3. La división de las células 1:10 en el día uno se dividieron 1:4 en el día 3 para un ensayo del día 4. Las placas de ensayo se prepararon al hacer primero una solución de trabajo de la Fibronectma Humana Gibco/BRL (cat #33016-023) en PBS++, a 10 µg/mL. Una placa Costar 3590 EIA se recubrió entonces con 50 µL/pozo durante 2 horas a temperatura ambiente (aunque éste también se puede dejar durante toda la noche a 4°C) . Finalmente la placa se aspiró y se bloqueó con Hepes/ Amortiguador de Solución Salina, 100 µL/pozo, durante 1 hora a ta seguido por lavado de tres veces con 150 µL de PBS++.

Las disoluciones del compuesto se lograron al preparar disoluciones en serie 1:3 de los compuestos como sigue. Para cada placa (4 compuestos/placa) 600 µL se agregaron a tubos de titulación 4 Bio-Rad en un soporte de tubos de titulación. Se agregó suficiente compuesto a cada tubo apropiado para dar una concentración 2X utilizando los métodos bien conocidos en la técnica. Utilizando Felxiplacas Falcon, 100 µL de Hepes/Amortiguador de Solución Salina o suero humano se agregaron a las hileras B hasta G. Un conjunto de piepeteador multi-canal a 180 µL se utilizó con cuatro puntas espaciadas homogéneamente sobre el pipeteador. Cada grupo de cuatro tubos se mezcló 5 veces y 180 µL del compuesto 2X se transfirió a la primera columna de cada disolución de compuesto en la Hilera B, dejando la Hilera A vacía. Se agregaron 180 µL a los otros pozos en la Hilera A. Las disoluciones en serie se desarrollaron por debajo de la placa al transferir 50 µL a la siguiente disolución y mezclar 5 veces, cambiando puntas cada vez después de mezclar. Las disoluciones se detuvieron en la Hilera F. La Hilera G no tenía compuesto presente. Una solución de 20 µg/ml en Hepes/Amortiguador Salino o suero humano, de anticuerpo 21/6 fue el control positivo y se dejó a un lado en un reactivo a través de agregar una placa de suspensión de célula.

El teñido celular se logró al cosechar primero las células JurkatTM log-phase mediante centrifugación en tubos de 50 mL (1100 rpm durante 5 minutos) . Las células se resuspendieron en 50 mL PBS++, giradas, y resuspendidas en 20 mL PBS++. Las células se tiñeron al agregar 20 µL de Calceina AM durante 30 minutos a TA. El volumen se llevó a 50 mL con Hepes/Amortiguador Salino y las células se contaron, giraron, y resuspendieron en 2 x 106 células/mL en Hepes/Amortiguador Solución Salina o suero humano. Los compuestos se incubaron utilizando el siguiente procedimiento. En una nueva flexiplaca, se agregó 65 µL de células teñidas a las Hileras B hasta H. Luego 65 µL de compuestos 2X se agregaron a las hileras apropiadas luego de la configuración de la placa y se mezclaron 3X. Se agregaron 65 µL de anticuerpo 2X-21/6 a la Hilera H y se mezcló 3X. Finalmente la placa se incubó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La adhesión de fibronectina se midió utilizando un lector de placa fluorescente a un EX 485/EM 530 después de seguir el procedimiento de trabajo. Después de la incubación, las células se mezclaron 3X y 100 µL se transfirieron a las placas recubiertas con Fibronectina e incubadas a 37°C durante aproximadamente 35 minutos. Cada placa se lavó, hilera por hilera, al pipetear suavemente 100 µL de PBS++ a TA por debajo de los lados de los pozos y se cambió la placa a 90 grados para aspirar. Este procedimiento se repitió durante un total de 3 lavados . Cada pozo se llenó con 100 µL después de lavado al pipetear el lado del pozo. Se calculó un valor IC50 para cada compuesto, ambos en la presencia de suero humano y en la ausencia de suero humano. IC50 es la concentración a la cual el crecimiento o la actividad se inhiben en un 50%. Se encontró que todos los compuestos descritos aquí tenían un IC50 de menos de 10 µM cuando se probaron de acuerdo con el ensayo de fibronectina . Ejemplo B Adhesión Celular a Fibronectina de Plasma Humano. Ensayo de Saturación In vitro para Determinar la Unión de los Compuestos Candidatos al a4ßl Lo siguiente describe un ensayo in vitro para determinar los niveles de plasma necesarios para que se active un compuesto en el Modelo de Encefalomielitis Autoinmune Experimental ("EAE"), descrito en el siguiente ejemplo, o en otros modelo in vivo. Las células JurkatTM de crecimiento log se lavaron y se resuspendieron en plasma animal normal que contiene 20 µg/mL del anticuerpo 15/7 (Yednock, et al., J. Biol. Chem., (1995) 270 (48) :28740) .

Las células JurkatTM se diluyeron dos veces en muestras de plasma normal que contienen cantidades de compuesto candidato conocido en varias concentraciones que varían desde 66 µM a 0.01 µM, utilizando una disolución en serie de 12 puntos estándar para una curva estándar, o en muestras de plasma obtenidas de la sangre periférica de los animales tratados con el compuesto candidato. Las células se incubaron entonces durante 30 minutos a temperatura ambiente, lavadas dos veces con solución salina amortiguada de fosfato ("PBS") que contienen 2% de suero bovino fetal y 1 mN cada una de cloruro de calcio y cloruro de magnesio (medio de ensayo) para remover un anticuerpo 15/7 no unido. Las céluls se expusieron entonces a IgG Fc anti-ratón F(ab')2 de cabra conjugado con ficoeritrina (Immunotech, estbrook, ME) , que ha sido absorbido por cualquier reactividad cruzada no específica mediante co-incubación con 5% de suero de las especies animales que están siendo estudiadas, a 1:200 e incubadas en la oscuridad a 4°C durante 30 minutos. Las células se lavaron dos veces con un medio de ensayo y se resuspendieron en el mismo. Ellas se analizaron entonces con un análisis en grupos de célula activada fluorescente estándar ("FACS") como se describe en Yednock, et al., J. Biol. Chem., 1995 270:28740.

Los datos se graficaron entonces como fluorescencia versus dosis, por ejemplo, en una forma de respuesta de dosis normal. Los niveles de dosis que resultan en la llanura superior de la curva representan los niveles necesarios para obtener la eficacia en un modelo in vivo. Este ensayo también se puede utilizar para determinar los niveles de plasma necesarios para saturar los sitios de unión de otras integrinas, tal como la integrina a9ßl, que es la integrina más cercanamente relacionada a a4ßl (Palmer et al., 1993, J. Cell Bio., 123:1289). Tal unión es predictiva de la utilidad in vivo para las condiciones inflamatorias mediadas por la integrina a9ßl, que incluyen por vía de ejemplo, hiper-respuesta aérea y la oclusión que ocurre con asma crónico, proliferación de célula de músculo liso en aterosclerosis, oclusión vascular seguida por angioplastia, fibrosis y cicatrización glomerular como resultado de enfermedad renal, estenosis aórtica, hipertrofia de membranas sinoviales en artritis reumatoide, e inflamación y cicatrización que ocurre con la progresión de colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn. De acuerdo con esto, el ensayo anteriormente descrito se puede desarrollar con una línea celular de carcinoma de colon humano, SW 480 (ATTC #CCL228) transfectada con cADN que codifica integrina a9 (Yokosaki et al., 1994, J. Biol. Chem. 269:26691), en lugar de las células Jurkat, para medir la unión de la mtegrma a9ßl. Como un control, las células SW 480 que expresan otras subunidades a y ßl se pueden utilizar. De acuerdo con esto, otro aspecto de esta invención está dirigido a un método para tratar una enfermedad en un paciente mamífero, cuya enfermedad es mediada por a9ßl, y cuyo método comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de esta invención Tales compuestos se administran preferiblemente en una composición farmacéutica descrita aquí anteriormente. La dosificación efectiva diaria dependerá de la edad, peso, condición del paciente cuyos factores se pueden averiguar fácilmente por el clínico que atiende. Sin embargo, en una modalidad preferida, los compuestos se administran desde aproximadamente 20 a 500 µg/kg por día. Ejemplo C Análisis de Dosificación de Cassette y Suero para Determinación la Biodisponibilidad La biodisponibilidad oral se selecciona al dosificar ratas con un cassette, es decir, mezcla de 6 compuestos por solución de dosis. El cassette incluye 5 artículos de prueba y un compuesto estándar, para una dosis total de 10 mg/kg. Cada compuesto/artículo de prueba se convierte a la sal de sodio con NaOH 1 N de equimolar y se disuelve en agua a 2 mg/mL El cassette se prepara al mezclar volúmenes iguales de cada una de las seis soluciones . La solución de dosificación del cassette se mezcla bien y luego se ajusta el pH a 7.5-9. La solución de dosificación se prepara el día antes del estudio y se agita durante toda la noche a temperatura ambiente. Ratas Macho Sprague Dawley (SD) de Charles River Laboratories, de 6-8 semanas de edad, se utilizan en esta selección. Las ratas se sometieron a cuarentena durante por lo menos un día y tuvieron acceso continuo a alimento y agua. Una noche antes de la administración del cassette, las ratas se mantuvieron en ayunas durante aproximadamente 16 h. Cuatro ratas SD se asignaron a cada cassette. Una dosis única de la solución de dosificación se administra oralmente a cada rata. El volumen de dosificación (5 mL/kg) y el tiempo se registraron y las ratas se alimentaron 2 h después de la dosificación. Se recolectaron muestras de sangre por vía de punción cardiaca en los siguientes puntos de tiempo: 4 h, 8 h y 12 h. Inmediatamente antes de la recolección de sangre, las ratas se anestesiaron con gas C02 en 10-20 segundos. Después de 12 horas las muestras se recolectan, y las ratas se someten a eutanasia por vía de asfixia con C02 seguido por dislocación cervical.

Las muestras de sangre se mantienen en tubos microtenedor heparinizados bajo temperatura sub-ambiente (4°C) antes de que ellas sean procesadas. Las muestras de sangre se centrifugaron (10000 rpm durante 5 minutos) y las muestras de plasma se removieron y se almacenaron en un congelador a -20 °C hasta que se analizan para niveles de droga. Se analizan los niveles de droga en el plasma utilizando el siguiente protocolo para precipitación de plasma directo. Las muestras de plasma in vivo se preparan en una placa de 96 pozos de 1.5 mL, al agregar, en orden, 100 µL del plasma de prueba, 150 µl de metanol, seguido por vorticeado durante 10-20 segundos. 150 µL de 0.05 ng/µL de un Estándar Interno en acetonitrilo se agregaron y vorticearon durante 30 segundos. Las muestras con curva estándar se prepararon en una placa de 96 pozos de 1.5 mL, al agregar, en orden, 100 µL del plasma de ratón de control, seguido por 150 µL de metanol y vorticeando durante 10-20 segundos. 150 µL de 0.05 ng/µL de un Estándar Interno en acetonitrilo se agregaron y vorticearon durante 30 segundos. Las muestras se resacaron con 0-200 ng (10 concentraciones) del compuesto de interés en 50% de metanol para obtener un rango de curva estándar de 0.5 ng/mL a 2,000 ng/mL. De nuevo, la muestra se vorticeó durante 30 segundos. Las muestras son entonces giradas durante 20-30 minutos a 3000 rpm en un microfugo Eppendorf antes de que 80-90% del sobrenadante se transfiera a una placa de 96 pozos limpia. Los disolventes orgánicos se evaporan entonces hasta que las muestras se secan (bajo N2 a 40 °C /30-60 min. (ZymarkTurbovap) ) . El residuo se disuelve entonces en 200-600 L de fase móvil (50% CH3OH/0.1% TFA). LC/MS/MS es corrido luego utilizando un espectómetro de masa quadrupolo triple PE-Sciex API-3000 (SN0749707) , auto-muestreador Perkin-Elmer, Series 200, y una bomba Shimadsu 10A. La adquisición se hace con un analizador PE-Sciex (v 1.1) y los análisis y cuantificación de datos se logran utilizando un Analizador PE-Sciex (v 1.1) . Un volumen de muestra de 5-50 µl se inyectó sobre una fase inversa columna ThermoHypersil DASH-18 (Keystone 2.0 x 20 mm, 5 µm, PN: 8823025-701) utilizando una fase móvil de 25% CH30H, 0.1% TFA-100% CH30H, 0.1% TFA. El tiempo de corrido es de aproximadamente 8 minutos a una tasa de flujo de aproximadamente 300 µL/minutos . El Área Bajo la Curva (AUC) se calcula utilizando la regla trapezoidal lineal de t=0 al último tiempo de muestreo tx (ver Handbook of Basic Pharmacokinetics , Wolfgang A. Ritschel y Gregory L. Kearns, 5th ed, 1999) .

AUC O ? tx = ?((Cn + Cn+l)/2)) ? (tn+1 - tn) [ (µg/mL) h] En el caso del paradigma de la dosificación de cassette, las muestras a 4, 8 y 12 h post dosificación extravascular, el AUC se calcula de t = 0 a t = 12 h. Ejemplo D Modelos de Asma Las condiciones inflamatorias mediadas por integrina a4ßl incluyen, por ejemplo, influjo eosinófilo, hiper-respuesta de las vías aéreas y oclusión que ocurre con asma crónico. Lo siguiente describe modelos animales de asma que se utilizan para estudiar los efectos in vivo de los compuestos de esta invención para uso en el tratamiento de asma . Modelo de Asma de Rata Luego de los procedimientos descritos por Chapman, et al., Am J. Resp. Crit. Care Med., 153-4, A219 (1996) y Chapman, et al., Am J. Resp. Crit. Care Med., 155:4, A881 (1997), ambos incorporados aquí como referencia en su totalidad. La ovalbúmina (OA; 10 µg/mL) se mezcla con hidróxido de aluminio (10 mg/mL) y se inyecta (i.p.) en ratas Brown Norway en el día 0. Las inyecciones de OA, junto con adyuvante, se repiten en los días 7 y 14. En el día 21, los animales sensibilizados se restringen en tubos plásticos y se exponen (60 minutos) a un aerosol de OA (10 mg/kg) en un sistema de exposición de solo nariz. Los animales se sacrifican 72 horas más tarde con pentobarbital (250 mg/kg, i.p.) . Los pulmones se lavan por vía de cánula traqueal utilizando 3 alícuotas (4 mL) de solución de Hank (HBSS x 100 ml; EDTA 100 mM, 100 mL; HEPES 1 M, 25 mL; hecha hasta de 1 L con H20) ; las células recubiertas son agrupadas y el volumen total de fluido recuperado se ajusta a 12 mL mediante la adición de solución de Hank. Las células totales se cuentan (contador de microcelda Sysmex F-500, TOA Medical Electronics Otd., Japón) y las manchas se hacen al diluir fluido recuperado (a aproximadamente 106 células/mL) y pipetear una alícuota (100 µl) en una centrífuga (Cytosp , Shandon, U.K.) . Las manchas se secan al aire, fijadas utilizando una solución de verde rápido en metanol (2 mg/ml) durante 5 segundos y teñidas con eosin G (5 segundos) y tiazina (5 segundos) (Diff-Quick, Browne Ltd. U.K.) con el fin de diferenciar los eosinófilos, neutrófilos, macrófagos y linfocitos. Un total de 500 células por mancha se cuentan mediante microscopía ligera bajo inmersión de aceite (x 100) . Los compuestos de esta invención se pueden formular en una carboximetilcelulosa al 0.5% y una suspensión de Tween 80 al 2% y se administra oralmente a las ratas que han sido sensibilizadas con el alérgeno, ovalbúmina. Los compuestos que inhibieron la acumulación de leucocitos inducidos por el alérgeno en las vías aéreas de las ratas Brown Norway activamente sensibilizadas se consideran que son activas en este modelo . Modelo de Asma de Ratón Los compuestos también se evaluaron en un modelo de ratón de inflamación pulmonar aguada luego de los procedimientos descritos por, Kung et al., Am J. Respir. Cell Mol. Biol., 13:360-365, (1995) y Schneider, et al., (1999). Am J. Respir. Cell Mol. Biol. 20:448-457, (1990), que se incorporan aquí como referencia en su totalidad. 6 Ratones Negros Hembras (8-12 semanas de edad) se sensibilizaron en el día 1 mediante una inyección intraperitoneal (i.p.) de 0.2 mL de una mezcla de ova/alumbre que contiene 20 µg de ova (Grado 4, Sigma) y 2 mg de Alumbre inyección (Pierce) . Una inyección de refuerzo se administra en el día 14. Los ratones se exponen en el día 28 y 29 con ova aerosolizada al 1% (en 0.9% en solución salina) durante 20 minutos. Los ratones se someten a eutanasia y se recolectan muestras de lavado broncoalveolar (3 mL) en el día 30, 48 horas después de la primera exposición. Los eosinófilos se cuantifican mediante un método de teñido FACs/FIAC. Los compuestos de esta invención se formulan en carboximetilcelulosa al 0.5% y una suspensión de Tween 80 al 2% se administra oralmente a ratones que han sido ssensibilizados con el alérgeno, ovalbúmina. Los compuestos que inhibieron la acumulación de leucocito inducida por alérgeno en las vías aéreas de los ratones C57BL/6 activamente sensibilizados se consideran por ser activos en este modelo. Modelo de Asma de Oveja Este modelo emplea los procedimientos descritos por Abraham, et al., J. Clin, Invest, 93:776-787 (1994) y Abraham, et al., Am J. Respir. Crit. Care Med., 156:696-703 (1997), ambas se incorporan aquí como referencia en su totalidad. Los compuestos de esta invención se evaluaron mediante administración intravenosa (solución acuosa salina), oral (2% Tween 80, 0.5% de carboximetilcelulosa), y aerosol a ovejas que son hipersensibles al antígeno de Ascaris suum. Los compuestos que disminuyen la respuesta temprana bronquial inducida por antígeno y/o bloquean la respuesta de las vías aéreas en fase tardía, por ejemplo, tienen un efecto protector contra las respuestas tardías inducidas por antígeno y la hiper-respuesta de vías aéreas ( "AHR" ) , se consideran como activos en este modelo. Las ovejas alérgicas que se muestran por desarrollar tanto lae respuestas bronquiales tempranas como tardías al antígeno de Ascaris suum inhalado se utilizan para estudiar los efectos en las vías aéreas de los compuestos candidato. Luego de la anestesia tópica de los pasajes nasales con 2% de lidocaína, un catéter de globo se introduce a través de un nostrilo en el esófago inferior. Los animales se incuban entonces con un tubo endotraqueal con boca manga a través del otro nostrilo con un broncoscopio fiberóptico flexible como guía. La presión pleural se estima de acuerdo a Abraham (1994). Los aerosoles (ver formulación de adelante) se generan utilizando un nebulizador médico desechable que suministra un aerosol con un diámetro aerodinámico medio de masa de 3.2 µm determinado con el impactador de cascada Andersen. El nebulizador se conecta a un sistema de dosímetro que consiste de una válvula solenoide y una fuente de aire comprimido (20 psi) . La salida del nebulizador está dirigida a la pieza T de plástico, un extremo de los cuales está conectado al puerto inspiratorio de un respirador de pistón. La válvula solenoide se activa durante 1 segundo al inicio del ciclo inspiratorio del respirador. Los aerosoles se suministran a VT de 500 mL y a una tasa de 20 respiraciones/minuto. Una solución de bicarbonato de sodio 0.5% solo se utiliza como control. Para evaluar la respuesta bronquial, las curvas de respuesta de concentración acumuladas a carbacol se generan de acuerdo a Abraham (1994). Las biopsias bronquiales se toman antes de y luego de la iniciación del tratamiento y 24 horas después de la exposición al antígeno. Las biopsias bronquiales se desarrollan de acuerdo a Abraham (1994) .

Un estudio de adhesión in vitro de macrófagos alveolares también se desarrolla de acuerdo a Abraham (1994), y se puede calcular un porcentaje de células adherentes . Formulación de Aerosol Una solución del compuesto candidato en 0.5% de bicarbonato de sodio/solución salina (p/v) a una concentración de 30.0 mg/mL se prepara utilizando el siguiente procedimiento: Preparación de Bicarbonato de Sodio 0.5% / Solución Madre Salina: 100.0 mL Procedimiento : Agregar 0.5 g de bicarbonato de sodio en un recipiente volumétrico de 100 mL. Agregar aproximadamente 90.0 mL de solución salina y sonicar hasta que se disuelva. Q.S. a 100.0 mL con solución salina y mezclar completamente . Preparación de 30.0 mg/mL del Compuesto Candidato: 10.0 mL Procedimiento : Agregar 0.300 g del compuesto candidato en un recipiente volumétrico de 10.0 mL . Agregar aproximadamente 9.7 mL de bicarbonato de sodio al 0.5% /solución salina madre. Sonicar hasta que el compuesto candidato está completamente disuelto. Q.S. a 10.0 mL con bicarbonato de sodio al 0.5% /solución salina madre y mezclar completamente. Ejemplo E Estudio de Toxicidad de 10 Días sobre Ratones C57B6 Se condujo un estudio de 10 días para evaluar la toxicidad de los compuestos de la presente invención a ratones C57B6 hembra. El compuesto se administra mediante alimentación con sonda a cinco niveles de dosis, 0 (control de vehículo) 10, 30, 100, 300 y 1000 mg/kg (mpk) , con cinco ratones en cada nivel de dosis. El volumen de dosis para todos los niveles fue de 10 mL/kg. Las soluciones o suspensiones de dosis se preparan en 2% de Tween 80 en 0.5% de carboximetilcelulosa (CMC) y nuevas soluciones o suspensiones de dosis se preparan cada dos - tres días. Las observaciones en vida incluyen pesos de cuerpo (estudio día 1, 2, 3, 5, 7, 8 y 11), observaciones clínicas diarias al lado de la jaula (1-2/día) y batería de observación funcional periódica (estudio día 1, 2 y 9) . A la terminación, se recolectan muestras de sangre mediante punción cardiaca para patología clínica (hematología y química clínica) y niveles de droga. Las muestras de sangre con EDTA se analizan para el conteo de células sanguíneas blancas totales, conteo de células sanguíneas rojas, hemoglobina, hematocrito, índices de eritrocito (MCV, MCH, MCHC) , plaquetas y diferencial de cinco partes WBC (neutrófilo, linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos) . Las muestras de plasma heparinizadas se analizan para alanina transaminasa, aspartato transaminasa, alcalino fosfatasa, bilirrubina total, albúmina, proteína, calcio, glucosa, nitrógeno de urea, creatinina, colesterol y triglicéridos. Después de la recolección de sangre, la carcasa se somete a necropsia y los órganos (hígado, vaso, ríñones, corazón y timo) se pesan. Las muestras de tejido; cerebro, glándulas salivares, timo, corazón, pulmón, hígado, riñon, vaso adrenal, estómago, duodeno, íleo, colon y útero/ovario, se recolectan y se le fija formalina. Los tejidos provenientes del control de vehículo y los grupos de animales de 300 y 1000 mpk se procesan y las placas teñidas H & E y evaluadas para lesiones histopatológicas .

Los cambios del peso corporal, pesos de órgano absoluto y relativo y los resultados de patología clínica se analizan para diferencias estadísticas significativas comparadas con los controles del vehículo mediante la prueba de comparación múltiple de Dunnet utilizando un software Prísm. Los resultados de la batería de observación funcional se analizan para diferencias utilizando unas pruebas exactas de Dunnet, de Fisher y los efectos de la tendencia de la dosis mediante la prueba de correlación Cochran-Mantel-Haenszel utilizando un software SAS. Utilizando formulaciones, compuestos orales convencionales de esta invención sería activo en este modelo. Ejemplo F Artritis Inducida con Adyuvante en Ratas La artritis inducida con adyuvante ( "AIA" ) es un modelo de animal útil en el estudio de artritis reumatoide (RA) , que se induce al inyectar M. tuberculosis en la base de la cola de ratas Lewis. Entre 10 y 15 días luego de la inyección, los animales desarrollan una artritis progresiva severa . En general, los compuestos se prueban por su capacidad para alterar mediante hinchamiento de los extremos traseros y daño óseo que resulta del edema inducido con adyuvante en ratas. Para cuantificar la inhibición del hinchamiento de los cuartos traseros que resultan del AIA, se han definido dos fases de inflamación: (1) el cuarto trasero primario y secundario inyectado, y (2) el cuarto trasero secundario no inyectado, que generalmente inicia desarrollándose aproximadamente once días desde la inducción de la inflamación en el cuarto trasero. La reducción del tipo posterior de inflamación es una indicación de actividad inmunosupresora. Cf . Chang, Arth. Rheum., 20, 1135 1141 (1977) . Utilizando un modelo animal de RA, tal como AIA, se posibilita un estudio de los eventos celulares involucrados en las etapas tempranas de la enfermedad. La expresión CD44 sobre los macrófagos y los linfocitos se regula positivamente durante el desarrollo temprano de la artritis adyuvante, mientras que la expresión de LFA 1 se regula positivamente posteriormente en el desarrollo de la enfermedad. Entendiendo las interacciones entre las moléculas de adhesión y el endotelio en las etapas tempranas de la artritis adyuvante se podría conducir a avances significativos en los métodos utilizados en el tratamiento de RA. Los siguientes compuestos se encontraron que tienen un IC50 de menos de aproximadamente 10 µM cuando se prueban de acuerdo al Ensayo de fibronectina Ejemplo A: N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N- ( trifluoroacetil) amino}pirimidin-4 -il] -L-4 ' - { (pirrolidin- 1-il) carboniloxi} fenilalanina; N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (iso-propilcarbonil) amino }pirimidin-4-il] -L-4' -{ (pirrolidin- 1-il) carboniloxi } enilalanina; N- [2-dietilamino-5-{N-etil-N- (t-butilcarbonil) amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' - { (pirrolidin- 1- 11) carboniloxi } fenilalanina; N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (furan-2-ilcarbonil) amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' - { (pirrolidin- 1-il) carboniloxi} fenilalanina; N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (piperidin-1-ilcarbonil) amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' - { (pirrolidin-1-il) carboniloxi } fenilalanina ,- N- [2 -dietilamino- 5- {N-etil-N- (N-etil-N- iso-propilaminocarbonil) amino}pirimidin-4 -il] -L-4' - { (pirrolidin-1-il) carboniloxi } fenilalanina; N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (tien-3-i1carbón!1) amino }pirimídin-4-il] -L-4' -{ (pirrolidin-1-il) carboniloxi } fenilalanina; N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (tien-2-ilcarbonil) amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' - { (pirrolidin- 1-il) carboniloxi } fenilalanina; N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (furan- 3-ilcarbonil) amino}pirimidin-4-il] -L-4 ' - { (pirrolidin- 1-il) carboniloxi} fenilalanina; N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (3 - tiapirrolidin-1-ilcarbonil) amino}pirimidin-4 -il] -L-4' -{ (pirrolidin-1-il) carboniloxi} fenilalanina; t-butil éster de N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- (tien-2-ilcarbonil) amino}pirimidin-4 -il] -L-4' -{ (pirrolidin- 1-il) carboniloxi } fenilalanina ; t-butil éster de N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N- ( trifluorometilcarbonil) amino}pirimidin- -il] -L-4 ' - { (pirrolidin-1-il) carboniloxi } fenilalanina; t-butil éster de N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N-t-butilcarbonil) amino}pirimidin-4 -il] -L-4' -{ (pirrolidin- 1-il) carboniloxi}fenilalanina; t-butil éster de N- [2-dietilamino-5- {N-etil-N-furan- 3 -ilcarbonil) amino}pirimidin-4 -il] -L- 4 ' - { (pirrolidin-1-il) carboniloxi } fenilalanina; Aunque las modalidades preferidas de la invención se han ilustrado y descrito, se apreciará que varios cambios se pueden hacer allí sin apartarse del espíritu y alcance de la invención. Referencias Las siguientes publicaciones se citan en esta solicitud como números de superíndice : Hemler y Takada, European Patent Application Publication No. 330,506, publicada en agosto 30, 1989 Elices, et al., Cell, 60:577 584 (1990) Springer, Nature, 346:425 434 (1990) Osborn, Cell, 62:3 6 (1990) Vedder, et al., Surgery, 106:509 (1989) Pretolani, et al., J. Exp. Med., 180:795 (1994) Abraham, et al., J. Clin. Invest., 93:776 (1994) Mulligan, et al., J. Immunology, 150:2407 (1993) Cybulsky, et al., Science, 251:788 (1991) Li, et al., Arterioscler. Thromb . 13:197 (1993) Sasseville, et al., Am. J. Path., 144:27 (1994) Yang, et al., Proc. Nat. Acad. Science (USA), 90:10494 (1993) Burkly, et al., Diabetes, 43:529 (1994) Barón, et al., J. Clin. Invest., 93:1700 (1994) Hamann, et al . , J. Immunology, 152:3238 (1994) Yednock, et al., Nature, 356:63 (1992) Barón, et al., J. Exp. Med., 177:57 (1993) van Dinther-Janssen, et al., J. 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Claims (40)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito el presente invento, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes REIVINDICACIONES : 1. Un compuesto de fórmula I: en donde : Rl se selecciona del grupo que consiste de alquilo Cl a C4 , haloalquilo Cl a C4 , heteroarilo y -NR5R6 donde R5 y R6 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo Cl a C4 , o R5 y R6 junto con el átomo de nitrógeno colgante a éste forman un anillo heterocíclico; R2 se selecciona del grupo que consiste de alquilo Cl a C4 , alquenilo C2 a C4 , y alquinilo C2 a C4 ; y R3 y R4 son independientemente alquilo Cl a C3 o R3 y R4 junto con el átomo de nitrógeno colgante a éste se une para formar un anillo heterocíclico; O una sal, éster, o profármaco de éstos farmacéuticamente aceptable.
2. 2. Un compuesto de la reivindicación 1, en donde el grupo -OC(0)NR3R4 está en la posición para del anillo de fenilo.
3. 3. Un compuesto de la reivindicación 2, en donde R3 y R4 junto con el átomo de nitrógeno colgante a éste forman un anillo heterocíclico.
4. 4. Un compuesto de la reivindicación 3, en donde el anillo heterocíclico es pirrolidinilo.
5. 5. Un compuesto de la reivindicación 4, en donde R2 es alquilo Cl a C4.
6. 6. Un compuesto de la reivindicación 5, en donde R2 es etilo.
7. 7. Un compuesto de fórmula II: II en donde : R7 es alquilo Cl a C4 , haloalquilo Cl a C4 , o heteroarilo; R8 es alquilo Cl a C4 ; R9 y RIO son independientemente alquilo Cl a C3 o R9 y RIO junto con el átomo de nitrógeno colgante a éste forman un anillo heterocíclico; o una sal farmacéuticamente aceptable, éster, o prodroga de éstos.
8. 8. Un compuesto de la reivindicación 7, en donde el grupo -OC(O)NR9R10 está en la posición para del anillo de fenilo.
9. 9. Un compuesto de la reivindicación 8, en donde R9 y RIO junto con el átomo de nitrógeno colgante a éste forman un anillo heterocíclico.
10. 10. Un compuesto de la reivindicación 9, en donde el anillo heterocíclico es pirrolidinilo.
11. 11. Un compuesto de la reivindicación 10, en donde R8 es alquilo Cl a C4.
12. 12. Un compuesto de la reivindicación 11, en donde R8 es etilo.
13. 13. Un compuesto de la reivindicación 12, en donde R7 es alquilo Cl a C4.
14. 14. Un compuesto de la reivindicación 13, en donde R7 se selecciona del grupo que consiste de isopropilo y t-butílo.
15. 15. Un compuesto de la reivindicación 12, en donde R7 es haloalquilo Cl a C4.
16. 16. Un compuesto de la reivindicación 15, en donde R7 es trifluorometilo.
17. 17. Un compuesto de la reivindicación 12, en donde R7 es heteroarilo.
18. 18. Un compuesto de la reivindicación 17, en donde R7 se selecciona del grupo que consiste de furan-2-ilo, furan-3-ilo, tien-2-ilo, tien-3-ilo.
19. 19. Un compuesto de fórmula III: III en donde : Rll y R12 son independientemente alquilo Cl a C4 , o Rll y R12, junto con el átomo de nitrógeno colgante a éste, forman un anillo heterocíclico; R13 es alquilo Cl a C4; y R14 y R15 son independientemente alquilo Cl a C3 o R14 y R15 junto con el átomo de nitrógeno colgante a éstos forman un anillo heterocíclico; o una sal, éster, o profármaco de éstos farmacéuticamente aceptable.
20. 20. Un compuesto de la reivindicación 19, en donde el grupo -OC (0) NR14R15 está en la posición para del anillo de fenilo.
21. 21. Un compuesto de la reivindicación 20, en donde R14 y R15 junto con el átomo de nitrógeno colgante a éste forman un anillo heterocíclico.
22. 22. Un compuesto de la reivindicación 21, en donde el anillo heterocíclico es pirrolidinilo.
23. 23. Un compuesto de la reivindicación 22, en donde R13 es alquilo Cl a C4.
24. 24. Un compuesto de la reivindicación 23, en donde R13 es etilo.
25. 25. Un compuesto de la reivindicación 24, en donde Rll y R12 son independientemente alquilo Cl a C4.
26. 26. Un compuesto de la reivindicación 25, en donde Rll es etilo y R12 es isopropilo.
27. 27. Un compuesto de la reivindicación 24, en donde Rll y R12 junto con el átomo de nitrógeno colgante a éste forman un anillo heterocíclico.
28. 28. Un compuesto de la reivindicación 27, en donde dicho anillo heterocíclico se selecciona del grupo que consiste de piperidin-1-ilo y 3 - tiapirrolidin-1-ilo .
29. 29. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste de: N- [2-d?et?lammo-5-{N-et?l-N-(trif luoroace til) ammo}p?r?m?dm-4-?l] -L-4 ' - { (p?rrol?dm-1-il) carboniloxi} f enilalan a; N- [2-d?et?lammo-5-{N-et?l-N- (íso-propilcarbonil) ammo}p?r?m?dm-4 -íl] -L-4' -{ (p?rrol?dm-1-íl) carboniloxi } f enilalanma; N- [2-d?et?lammo-5-{N-et?l-N- (t-butilcarbonil) ammo}p?r?m?dm-4-?l] -L-4 ' - { (p?rrol?dm-1-íl) carboniloxi} f enilalamna; N- [2-d?et?lammo-5-{N-et?l-N- (f uran- 2-ílcarbonil) am?no}p?pm?dm-4-?l] -L-4 ' - { (p?rrol?dm-1-íl) carboniloxi } f enilalanina; N- [2-d?et?lammo-5- {N-etil-N- (p?per?dm-1-ílcarbonil) ammo}p?r?m?dm-4 -íl] -L-4 ' - { (p?rrol?dm-1-íl) carboniloxi} f enilalanma; N- [2-d?et?lammo-5- {N-etil-N- (N-etil-N-iso- propilammocarbonil) arrimo }p?r?m?dm- 4 -íl] -L-4 ' -{ (p?rrol?dm-1-?l) carboniloxi } f enilalan a; N- [2-d?et?lammo-5- {N-etil-N- (t?en-3-ílcarbonil) am?no}p?r?m?d?n-4 -íl] -L-4' -{ (p?rrol?dm-1-íl) carboniloxi} f enilalanma; N- [2-d?et?lammo-5- {N-etil-N- (t?en-2-ílcarbonil) arrimo }p?r?m?dm-4-?l] -L-4' -{ (p?rrol?d?n-1-íl) carboniloxi } f enilalan a; N- [2-d?et?lammo-5- {N-etil-N- (f uran- 3-ílcarbonil) ammo}p?r?m?dm-4 -íl] -L-4' -{ (p?rrol?dm-1-íl) carboniloxi } f enilalamna ; N- [2-d?et?lammo-5- {N-etil-N- (3- t?ap?rrol?d -1- ílcarbonil) ammo}p?r?m?dm-4 -íl] -L-4' -{ (pirrol dm-l-il) carboniloxi} f enilalanma; t-butil éster de N- [2-d?et?lammo-5- {N-etil-N- ( t?en-2-?lcarbon?l) am?no}p?r?m?dm-4-?l] -L-4 ' - { (pirrolidm-1- íl) carboniloxi } f eni 1 al aniña; t-butil éster de N- [2-d?et?lammo-5- {N-etil-N- (trif luorometilcarbonil) ammo}p?r?m?dm-4-?l] -L-4 ' -{ (p?rrol?d?n-1-?l) carbon?lox?}f enilalanma; t-butil éster de N- [2-d?et?lammo-5- {N-etil-N- 1- butilcarbonil) ammo}p?r?m?dm-4-?l] -L-4 ' -{ (p?rrol?dm-1-?l) carboniloxi } f enilalanina; t-butil éster de N- [2-d?et?lammo-5- {N-etil-N-furan- 3-?lcarbon?l) ammo}p?r?m?dm-4 -íl] -L- 4 ' - { (p?rrol?dm-1-?l) carboniloxi } f eni la 1 aniña; o una sal, éster o profármaco de éstos farmacéuticamente aceptable
30. 30 Una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29.
31. 31. Un método para tratar una enfermedad mediada por integrina a4 en un sujeto humano o animal que comprende administrar al sujeto humano o animal una composición farmacéutica de la reivindicación 30.
32. 32. Un método de la reivindicación 31 en donde la integrína 4 es VLA-4.
33. 33. Un método de la reivindicación 31 en donde dicha enfermedad se selecciona del grupo que consiste de asma, enfermedad de Alzheimer, aterosclerosis, demencia por SIDA, diabetes, diabetes de inicio juvenil agudo, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, esclerosis múltiple, artritis, artritis reumatoide, transplante de tejido, metástasis tumoral, meningitis, encefalitis, ataques, traumas cerebrales, nefritis, retinitis, dermatitis atópica, soriasis, isquemia del miocardio, daño agudo del pulmón mediado por leucocito, y síndrome de afección respiratoria en adulto.
34. 34. Un método de la reivindicación 31 en donde dicha enfermedad es una enfermedad inflamatoria.
35. 35. Un método de la reivindicación 34 en donde la enfermedad inflamatoria se selecciona del grupo que consiste de eritema nodosum, conjuntivitis alérgica, neuritis óptica, uveitis, rinitis alérgica, espondilitis anquilosante, artritis soriásica, vasculitis, síndrome de Reiter, lupus sistémico eptematoso, esclerosis sistémica progresiva, polimiositis, dermatomiosistis, granulomatosis de Wegner, aortitis, sarcoidosis, lmfocitopenia, arteptis temporal, pericarditis, miocarditis, falla cardiaca congestiva, poliarteptis nodosa, síndromes de hipersensibilidad, alergia, síndromes hipereosmofílicos, síndrome de Churg-Strauss, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, neumon tis por hipersensibilidad, hepatitis activa crónica, cistitis intersticial, falla endocrina autoinmune, cirrosis biliar primaria, anemia aplásica autoinmune, hepatitis persistente crónica, y tiroiditis .
36. 36 Un uso de una composición farmacéutica de acuerdo a las reivindicaciones 32 para la elaboración de un medicamento para tratar una enfermedad mediada por mtegrina a4.
37. 37. Un uso de la reivindicación 38 en donde la mtegrma a4 es VLA-4
38. 38. Un uso de la reivindicación 38 en donde dicha enfermedad se selecciona del grupo que consiste de asma, enfermedad de Alzheimer, aterosclerosis, demencia por SIDA, diabetes, diabetes aguda de inicio juvenil, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, esclerosis múltiple, artritis, artritis reumatoide, transplante de tejido, metástasis tumoral, meningitis, encefalitis, ataques, traumas cerebrales, nefritis, retinitis, dermatitis atópica, soriasis, isquemia del miocardio, daño pulmonar agudo mediado por leucocito, y síndrome de afección respiratoria en adulto.
39. 39. Un uso de la reivindicación 38 en donde dicha enfermedad es una enfermedad inflamatoria.
40. 40. Un uso de la reivindicación 40 en donde la enfermedad inflamatoria se selecciona del grupo que consiste de eritema nodoso, conjuntivitis alérgica, neuritis óptica, uveitis, rinitis alérgica, espondilitis anquilosante, artritis sopásica, vasculitis, síndrome de Reiter, lupus sistémico eritematoso, esclerosis sistémica progresiva, polimiositis, dermatomiosistis, granulomatosis de Wegner, aortitis, sarcoidosis, lmfocitopenia, arteritis temporal, pericarditis, miocarditis, falla cardiaca congestiva, poliarteptis nodosa, síndromes de hipersensibilidad, alergia, síndromes hipereosmofílicos , síndrome de Churg-Strauss, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, neumonitis por hipersensibilidad, hepatitis activa crónica, cistitis intersticial, falla endocrina autoinmune, cirrosis biliar primaria, anemia aplásica autoinmune, hepatitis persistente crónica, y tiroiditis .