MX2008000129A - Uso de anticuerpos anti-madcam para el tratamiento de enfermedad celiaca y esprue tropical. - Google Patents

Abstract

Uso de anticuerpos anti-MAdCAM para el tratamiento de enfermedad celiaca y esprue tropical. La invencion se refiere al uso de un anticuerpo anti-MAdCAM para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedad celiaca y /o esprue tropical. Tambien se incluyen procedimientos de tratamiento de enfermedad celiaca y/o esprue tropical usando una cantidad terapeuticamente eficaz de un anticuerpo anti-MAdCAM.

Description

USO DE ANTICUERPOS ANTi-MADCAM PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDAD CEL1ACA Y ESPRUE TROPICAL La invención se refiere al uso de anticuerpos anti-MAdCAM para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedad celíaca y /o esprúe tropical. La molécula de adhesión celular adresina mucosal (MAdCAM) es un miembro de la superfamilia de las inmunoglobulinas de los receptores de adhesión a las células. Es una de las moléculas de adhesión implicadas en el reclutamiento de linfocitos a los tejidos cuando se requiere, por medio de interactuación con una molécula de integrina sobre la superficie de los linfocitos. Se ha mostrado que los anticuerpos que inhiben la unión de MAdCAM a su pareja de unión integrina a4ß7, por ejemplo anticuerpos anti-MAdCAM (por ejemplo, MECA-367; documento de Estados Unidos N° 5,403,919, documento de Estados Unidos N° 5,538,724) a anticuerpos anti-a ß (por ejemplo, Act-1 ; documento de Estados Unidos N° 6,551 ,593), pueden inhibir la extravasación de leucocitos en el intestino inflamado, y por lo tanto pueden ser beneficiosos en el tratamiento de la enfermedad inflamatoria del intestino (IBD). Sin embargo, los anticuerpos anti-MAdCAM tales como MECA-367, no son terapéuticamente útiles en pacientes humanos; MECA-367 se une a MAdCAM de ratón, y no muestra mucha afinidad para la molécula de MAdCAM humana. Además, siendo un anticuerpo de rata, conducirá a una respuesta inmune en pacientes humanos y por lo tanto no es adecuado para uso terapéutico. Se han descrito anticuerpos monoclonales de ratón, dirigidos contra MAdCAM humana (documento WO 96/24673), pero éstos son también probablemente inmunogénicos en seres humanos. Recientemente, se han desarrollado anticuerpos anti-MAdCAM humano completamente humanos, terapéuticamente útiles con una especificidad y afinidad exquisitas para MAdCAM humana y de primate y se describen en el documento WO 2005/067620. Un inhibidor de la interacción entre MAdCAM y la integrina a4ß7. tal como un anticuerpo anti-MAdCAM bloqueador, o un anticuerpo para la integrina a4ß7 (tal como MLN02, que es Act-1 humanizado, descrito en el documento WO 01/078779) se ha postulado que es útil en el tratamiento de la enfermedad inflamatoria del intestino (IBD). Sin embargo, se ha encontrado que los inhibidores de esta interacción incluyendo anticuerpos bloqueadores para MAdCAM, son también útiles en el tratamiento de enfermedad celíaca y esprúe tropical. La enfermedad celíaca (también conocida como enteropatía sensible al gluten o esprúe celíaco) es una afección del intestino delgado. La afección afecta hasta a 1 por 300 personas en el reino Unido, Europa y los Estados Unidos. La enfermedad celíaca es una afección común y puede afectar a cualquiera a cualquier edad. Se ha pensado que era más común en hombres, pero probablemente se produce igualmente en hombres y mujeres.

El gluten, una mezcla de dos proteínas, gliadina y glutenina, se encuentra en el trigo, cebada y centeno. Reacciona con el intestino delgado, produciendo daño por la activación del sistema inmune que ataca al revestimiento delicado del intestino, que es responsable de la absorción de nutrientes y vitaminas. La afección se diagnostica a menudo en la infancia después del destete cuando se introducen cereales en la dieta, aunque se puede diagnosticar en cualquier edad. Los síntomas pueden ser tenues, y el paciente se puede sentir indispuesto por ninguna razón durante algún tiempo antes de que se haga la diagnosis. Los primeros síntomas usualmente incluyen volverse irritable y miserable, con escaso apetito y sin ganancia de peso. Las evacuaciones (movimientos del intestino) pueden llegar a ser pálidas, voluminosas y de olor repugnante. Algunos niños comienzan con vómitos y diarrea, así que a menudo reciben un diagnóstico erróneo de 'gastroenteritis'. El estómago puede llegar a hincharse, y los músculos de los brazos y piernas llegan a estar consumidos y delgados. En adultos los síntomas pueden ser similares, incluyendo pérdida de peso con diarrea pálida, ofensiva, o estreñimiento e hinchamiento abdominal con 'ventosidad'. La mitad de los adultos con enfermedad celíaca no tienen ningún síntoma en el intestino. Se acercan a su doctor a causa de su extremo cansancio, problemas psicológicos de tipo depresión, dolor óseo y algunas veces incluso fracturas (debido al adelgazamiento de huesos), úlceras en la boca o ampollas, erupción en piel irritada mayoritariamente en los codos y rodillas (llamada dermatitis herpetiforme). Algunas mujeres con enfermedad celíaca tienen dificultad en quedarse embarazadas, y se pueden diagnosticar debido a esto. El aborto repetido (pérdida espontánea de un embarazo) está asociado algunas veces a la enfermedad celíaca. Algunas mujeres se diagnostican durante el embarazo debido a que su intestino no puede absorber suficiente hierro y vitaminas para mantener la demanda de estar embarazada, haciéndolas gravemente anémicas. Los niños que son pequeños para su edad en la matriz (retraso en el crecimiento intrauterino) nacen frecuentemente de madres con enfermedad celíaca. Si se deja sin tratar, la enfermedad celíaca puede conducir a anemia, enfermedad ósea, y de manera rara, algunas formas de cáncer. El tratamiento más importante actualmente es evitar todo alimento que contenga gluten. Esto usualmente da como resultado la mejora, o incluso la desaparición, del daño en el revestimiento del intestino. Sin embargo, el daño se repetirá si se vuelve a introducir el gluten en la dieta. Aunque la enfermedad celíaca no se puede prevenir, el adherirse a una dieta libre de gluten puede invertir el daño al intestino delgado. Esto requiere una disciplina considerable. Existe necesidad de encontrar un medicamento con un bajo riesgo de efectos adversos que permitirá a los pacientes comer una dieta normal, y evitará deficiencias de minerales y vitaminas y otras afecciones asociadas a la enfermedad celíaca. El esprúe tropical es un problema digestivo que se produce en los trópicos y subtrópicos. Las personas con esprúe tropical no absorben los nutrientes adecuadamente, especialmente la vitamina B12 y ácido fólico. La diarrea es el principal síntoma de esprúe tropical; las personas que comen muchos alimentos grasos pueden experimentar diarrea más grave que los que tienen dietas bajas en grasa. Otros síntomas incluyen, calambres, nauseas, pérdida de peso, gases e indigestión. El esprúe tropical afecta a aproximadamente uno de cada millón de personas y se produce desde aproximadamente 30 grados al norte del ecuador hasta 30 grados al sur de él. Es más común en ciertos países, incluyendo India, Haití, Cuba, Puerto Rico y República Dominicana. Es raro o está ausente en África, las Bahamas y Jamaica. La afección aqueja a residentes de los países afectados así como a los viajantes, aunque usualmente afecta solamente a los viajantes que se quedan durante seis meses o más. La causa de esprúe tropical no se ha identificado, pero probablemente se debe a una combinación de factores, incluyendo infección y pobre nutrición, que actúan juntos para dañar el revestimiento del intestino delgado, haciéndolo menos capaz de absorber nutrientes. La diagnosis de esprúe tropical se puede complicar, debido a que muchas afecciones tienen síntomas similares. Los análisis de las evacuaciones de vientre y de la sangre se realizan para descartar otras causas de diarrea. Si éstos son negativos y el paciente ha vivido en los trópicos durante un período amplio de tiempo, entonces el esprúe tropical es una causa potencial de la enfermedad. Se puede realizar una biopsia para examinar el vello con respecto al aplastamiento típico del vello en el intestino delgado. Ciertos análisis de sangre también pueden ayudar en la diagnosis de esprúe tropical. Debido a que la enfermedad bloquea la absorción de ciertas vitaminas y minerales, se pueden observar bajos niveles de albúmina, calcio o vitaminas D, A, K y E. El paciente también puede tener anemia debido a las deficiencias en vitamina B12 y en folato. Además, muestras de evacuaciones pueden demostrar una cantidad en exceso de grasa. El tratamiento es usualmente tres a seis meses de antibióticos y suplemento de ácido fólico (también llamado folato). Las personas con deficiencia en vitamina B12 recibirán suplemento de vitaminas también.

Aspectos de la invención Un aspecto de la invención es el uso de un anticuerpo que se une específicamente a MAdCAM para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedad celíaca y/o esprúe tropical. Otro aspecto de la invención es un procedimiento de tratamiento de enfermedad celíaca y/o esprúe tropical, preferiblemente enfermedad celíaca, usando una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-MAdCAM. Otro aspecto de la invención es el uso de un anticuerpo antiintegrina a ß para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedad celíaca y/o esprúe tropical, preferiblemente enfermedad celíaca. Preferiblemente, el anticuerpo anti-integrina a4ß7 es Act-1 humanizado, también llamado MLN02. Otro aspecto de la invención es un procedimiento de tratamiento de enfermedad celíaca y/o esprúe tropical, preferiblemente enfermedad celíaca, usando una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-a4ß7, preferiblemente MLN02. Otro aspecto de la invención es el uso de un inhibidor de la adhesión mediada por MAdCAM-integrina a4ß7 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedad celíaca y/o esprúe tropical. Todavía otro aspecto de la invención es un procedimiento de tratamiento de enfermedad celíaca y/o esprúe tropical, usando una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la adhesión mediada por MAdCAM-integrina a4ß7- Preferiblemente el anticuerpo anti-MAdCAM o parte de unión a antígeno del mismo usado en la invención específicamente se une a MAdCAM. Incluso más preferiblemente, al menos las secuencias de CDR de dicho anticuerpo son secuencias de CDR humanas, o una parte de unión a antígeno de un anticuerpo humano. Preferiblemente el anticuerpo es un anticuerpo humano, más preferiblemente un anticuerpo monoclonal humano o parte de unión a antígeno del mismo, incluso más preferiblemente un anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo que actúa como un antagonista de MAdCAM. Preferiblemente, el anticuerpo o parte posee al menos una de las siguientes propiedades: a) se une a células humanas; b) tiene una selectividad para MAdCAM sobre VCAM o fibronectina de al menos 100 veces; c) se une a MAdCAM humana con una Kd de 3 x 10~10 M o menos; o d) inhibe la unión de células que expresan a4ß7 a MAdCAM humana; e) inhibe el reclutamiento de linfocitos al tejido linfoide gastrointestinal. Preferiblemente, el anticuerpo o parte de unión a antígeno inhibe la unión de MAdCAM humana a a4ß , y tiene al menos una de las siguientes propiedades: a) compite de manera cruzada con un anticuerpo de referencia por la unión a MAdCAM b) compite con un anticuerpo de referencia por la unión a MAdCAM; c) se une al mismo epítope de MAdCAM que un anticuerpo de referencia; d) se une a MAdCAM con sustancialmente la misma K que un anticuerpo de referencia; e) se une a MAdCAM con sustancialmente la misma velocidad de disociación que un anticuerpo de referencia.

En el que el anticuerpo de referencia se selecciona entre el grupo constituido por anticuerpo monoclonal 1.7.2, anticuerpo monoclonal 1.8.2, anticuerpo monoclonal 6.14.2, anticuerpo monoclonal 6.22.2, anticuerpo monoclonal 6.34.2, anticuerpo monoclonal 6.67.1 , anticuerpo monoclonal 6.73.2, anticuerpo monoclonal 6.77.1 , anticuerpo monoclonal 7.16.6, anticuerpo monoclonal 7.20.5, anticuerpo monoclonal 7.26.4, anticuerpo monoclonal 9.8.2, anticuerpo monoclonal 6.22.2-mod, anticuerpo monoclonal 6.34.2-mod, anticuerpo monoclonal 6.67.1 -mod, anticuerpo monoclonal 6.77.1 -mod y anticuerpo monoclonal 7.26.4-mod. En otro aspecto de la invención la región variable de cadena pesada, la región variable de cadena ligera, o ambas del anticuerpo anti-MAdCAM son al menos 90% idénticas en la secuencia de aminoácidos a la región o regiones correspondientes de un anticuerpo monoclonal seleccionado entre el grupo constituido por: anticuerpo monoclonal 1.7.2, anticuerpo monoclonal 1.8.2, anticuerpo monoclonal 6.14.2, anticuerpo monoclonal 6.22.2, anticuerpo monoclonal 6.34.2, anticuerpo monoclonal 6.67.1 , anticuerpo monoclonal 6.73.2, anticuerpo monoclonal 6.77.1 , anticuerpo monoclonal 7.16.6, anticuerpo monoclonal 7.20.5, anticuerpo monoclonal 7.26.4, anticuerpo monoclonal 9.8.2, anticuerpo monoclonal 6.22.2-mod, anticuerpo monoclonal 6.34.2-mod, anticuerpo monoclonal 6.67. -mod, anticuerpo monoclonal 6.77.1-mod y anticuerpo monoclonal 7.26.4-mod. Preferiblemente el anticuerpo se selecciona entre el grupo constituido por: a) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 2 y la SEC ID N° 4, sin las secuencias señal; b) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 6 y la SEC ID N° 8, sin las secuencias señal; c) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 10 y la SEC ID N° 12, sin las secuencias señal; d) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 14 y la SEC ID N° 16, sin las secuencias señal; e) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 18 y la SEC ID N° 20, sin las secuencias señal; f f) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 22 y la SEC ID N° 24, sin las secuencias señal; g) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 26 y la SEC ID N° 28, sin las secuencias señal; h) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 30 y la SEC ID N° 32, sin las secuencias señal; i) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 34 y la SEC ID N° 36, sin las secuencias señal; j) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 38 y la SEC ID N° 40, sin las secuencias señal; k) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 42 y la SEC ID N° 44, sin las secuencias señal; I) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 46 y la SEC ID N° 48, sin las secuencias señal; m) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 52 y la SEC ID N° 54, sin las secuencias señal; n) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 56 y la SEC ID N° 58, sin las secuencias señal; o) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 60 y la SEC ID N° 62, sin las secuencias señal; p) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 64 y la SEC ID N° 66, sin las secuencias señal; y q) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 42 y la SEC ID N° 68, sin las secuencias señal. En otro aspecto de la invención, el anticuerpo monoclonal o una parte de unión a antígeno del mismo se selecciona entre los siguientes anticuerpos: a) la cadena pesada comprende las secuencias de aminoácidos de CDR1 , CDR2 y CDR3 de la cadena pesada de un anticuerpo de referencia seleccionado entre el grupo constituido por: 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1 -mod, 6.77.1 -mod y 7.26.4-mod.; b) la cadena ligera comprende las secuencias de aminoácidos de CDR1 , CDR2 y CDR3 de la cadena ligera de un anticuerpo de referencia seleccionado entre el grupo constituido por: 1.7.2, 1.8.2, 6J4.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1 -mod, 6.77.1 -mod y 7.26.4-mod.; c) el anticuerpo comprende una cadena pesada de (a) y una cadena ligera de (b); y d) el anticuerpo de (c) en el que las secuencias de aminoácidos de CDR de cadena pesada y cadena ligera se seleccionan del mismo anticuerpo de referencia. En otro aspecto de la invención, el anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno comprende: a) una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada de un anticuerpo seleccionado entre el grupo constituido por: 1.7.2 (SEQ ID N° 2); 1.8.2 (SEQ ID N° 6); 6.14.2 (SEQ ID N° 10); 6.22.2 (SEQ ID N° 14); 6.34.2 (SEQ ID N° 18); 6.67.1 (SEQ ID N° 22); 6.73.2 (SEQ ID N° 26); 6.77.1 (SEQ ID N° 30); 7.16.6 (SEQ ID N° 34); 7.20.5 (SEQ ID N° 38); 7.26.4 (SEQ ID N° 42); y 9.8.2 (SEQ ID N° 46); 6.22.2-mod (SEQ ID N° 52); 6.34.2-mod (SEQ ID N° 56); 6.67.1 -mod (SEQ ID N° 60); 6.77.1-mod (SEQ ID N° 64);y 7.26.4-mod (SEQ ID N° 42); b) una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera de un anticuerpo seleccionado entre el grupo constituido por: 1.7.2 (SEQ ID N° 4); 1.8.2 (SEQ ID N° 8); 6.14.2 (SEQ ID N° 12); 6.22.2 (SEQ ID N° 16); 6.34.2 (SEQ ID N° 20); 6.67.1 (SEQ ID N° 24); 6.73.2 (SEQ ID N° 28); 6.77.1 (SEQ ID N° 32); 7.16.6 (SEQ ID N° 36); 7.20.5 (SEQ ID N° 40); 7.26.4 (SEQ ID N° 44); y 9.8.2 (SEQ ID N° 48); 6.22.2-mod (SEQ ID N° 54); 6.34.2- mod (SEQ ID N° 58); 6.67.1 -mod (SEQ ID N° 62); 6.77.1 -mod (SEQ ID N° 66);y 7.26.4-mod (SEQ ID N° 68); o c) la cadena pesada de (a) y la cadena ligera de (b). Otro aspecto de la invención es el uso de la cadena pesada y/o ligera de dicho anticuerpo anti-MAdCAM o la región variable u otra parte de unión a antígeno del mismo, o moléculas de ácido nucleico que codifican cualquiera de los anteriores y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Este aspecto de la invención incluye el uso de fragmentos de cualquiera de los anticuerpos anteriores, incluyendo pero sin limitación fragmentos Fab, fragmentos F(ab')2, fragmentos Fv de una sola cadena (scFv). Preferiblemente, el anticuerpo anti-MAdCAM es un anticuerpo inhibidor humano anti-MAdCAM seleccionado entre 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod o 7.26.4-mod como se describe en el documento WO 2005/067620. Preferiblemente, el anticuerpo anti-MAdCAM comprende una cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre la SEQ ID N° 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 66 ó 68 como se muestra en el documento WO 2005/067620 (con o sin la secuencia señal) o la región variable de una cualquiera de dichas secuencias de aminoácidos, o una o más CDR de estas secuencias de aminoácidos. El anticuerpo anti- MAdCAM preferiblemente comprende una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre la SEQ ID N° 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 56, 60 ó 64 como se muestra en el documento WO 2005/067620 (con o sin. la secuencia señal) o la secuencia de aminoácidos de la región variable, o de una o más CDR de dichas secuencias de aminoácidos. El anticuerpo anti-MAdCAM preferiblemente es un anticuerpo anti-MAdCAM humano que comprende la secuencia de aminoácidos desde el comienzo de la CDR1 al fin de la CDR3 de una cualquiera de las secuencias anteriormente mencionadas. El anticuerpo anti-MAdCAM usado en la invención también puede ser un anticuerpo anti-MAdCAM que comprende una o más regiones FR de cualquiera de las secuencias mencionadas anteriormente. El anticuerpo anti-MAdCAM usado en la invención también puede incluir un anticuerpo anti-MAdCAM que comprende una de las secuencias de aminoácidos mencionadas anteriormente en las que se han hecho una o más modificaciones. Por ejemplo, cisteínas en el anticuerpo, que pueden ser químicamente reactivas, se sustituyen con otro resto, tal como, sin limitación, alanina o serina. La sustitución puede ser en una cisteína no canónica o en una cisteína canónica. La sustitución se puede hacer en una región CDR o de marco conservado de un dominio variable o en el dominio constante de un anticuerpo. Una sustitución de aminoácidos también se puede hacer para eliminar sitios proteolíticos potenciales en el anticuerpo. Tales sitios se pueden encontrar en una región CDR o de marco conservado de un dominio variable o en el dominio constante de un anticuerpo. La sustitución de restos de cisteína y retirada de sitios proteolíticos pueden disminuir la heterogeneidad en el producto anticuerpo. Los pares asparagina-glicina, que forman sitios de desamidación potencial, se pueden eliminar alterando uno o ambos de los restos. Una sustitución de aminoácidos se puede hacer para añadir o para eliminar sitios de glicosilación potencial en la región variable de un anticuerpo usado en la invención. La lisina C terminal de la cadena pesada del anticuerpo anti-MAdCAM usado en la invención se puede escindir. Las cadenas pesadas y ligeras de los anticuerpos anti-MAdCAM pueden opcionalmente incluir una secuencia señal. Doce anticuerpos monoclonales anti-MAdCAM humanos inhibidores preferidos para uso en la invención (1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 y 9.8.2) se describen en detalle en el documento WO 2005/067620, incorporado en esta memoria descriptiva en su totalidad por referencia.

Clase y Subclase de anticuerpos anti-MadCAM El anticuerpo puede ser una molécula de IgG, de IgM, de IgE, de IgA o de IgD. Preferiblemente el anticuerpo es de clase IgG y es de subclase Igd, lgG2, lgG3 o lgG4. Más preferiblemente, el anticuerpo anti-MAdCAM es de subclase lgG2 o lgG4. Más preferiblemente, al anticuerpo anti-MAdCAM es de la misma clase y subclase que el anticuerpo 1.7.2, 1.8.2, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67J-mod, 6.77.1-mod o 7.26.4-mod que es lgG2, o 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1 o 9.8.2, que es lgG4 como se describe en el documento WO 2005/067620. La clase y subclase de anticuerpos anti-MAdCAM se puede determinar mediante cualquier procedimiento conocido en la técnica. En general, la clase y subclase de un anticuerpo se puede determinar usando anticuerpos que son específicos para una clase y subclase particular de anticuerpo. Tales anticuerpos están disponibles comercialmente. ELISA, transferencia de Western así como otras técnicas pueden determinar la clase y subclase. Como alternativa, la clase y subclase se pueden determinar secuenciando todos o una parte de los dominios constantes de las cadenas pesadas y/o ligeras de los anticuerpos, comparando sus secuencias de aminoácidos con las secuencias de aminoácidos conocidas de diversas clases y subclases de inmunoglobulinas, y determinando la clase y subclase de los anticuerpos como la clase que muestra la mayor identidad de secuencia.

Selectividad de especie y molécula El anticuerpo anti-MAdCAM usado en la invención demuestra la selectividad tanto de la especie como de la molécula. El anticuerpo anti-MAdCAM se puede unir a un MAdCAM humana, de mono cinomolgus o de perro. Otros anticuerpos anti-MAdCAM usados en la invención no se unen a una especie de mono del Nuevo Mundo tal como un tití. Se puede determinar la selectividad de la especie para el anticuerpo anti-MAdCAM usando procedimientos bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, uno puede determinar la selectividad de la especie usando transferencia de Western. FACS, ELISA o ¡nmunohistoquímica. En una modalidad preferida, se puede determinar la selectividad de la especie usando inmunohistoquímica. Un anticuerpo anti-MAdCAM usado en la invención que se une específicamente a MAdCAM tiene selectividad para MAdCAM sobre VCAM, fibronectina o cualquier otro antígeno que es al menos 10 veces, preferiblemente al menos 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ó 90 veces, lo más preferiblemente al menos 100 veces. Preferiblemente el anticuerpo anti-MAdCAM no muestra ninguna unión apreciable a VCAM, fibronectina o cualquier otro antígeno distinto de MAdCAM. Se puede determinar la selectividad del anticuerpo anti-MAdCAM por MAdCAM usando procedimientos bien conocidos es la técnica siguiendo las enseñanzas de la memoria descriptiva. Por ejemplo, se puede determinar la selectividad usando transferencia de Western, FACS, ELISA o inmunohistoquímica.

Afinidad de unión de anticuerpos anti-MAdCAM a MAdCAM Los anticuerpos anti-MAdCAM usados en la invención preferiblemente se unen específicamente a MAdCAM con alta afinidad. Un anticuerpo anti- MAdCAM usado en la invención se une específicamente a MAdCAM con una kd de 3 x 10"8 M o menos, medida por resonancia por plasmón de superficie, tal como BIAcore. Preferiblemente, el anticuerpo específicamente se une a MAdCAM con una Kd de 1 x 10"8 M o menos o 1 x 10"9 M o menos. Más preferiblemente, el anticuerpo se une específicamente a MAdCAM con una Kd de 1 x 10"10 M o menos. Un anticuerpo usado en la invención específicamente se une a MAdCAM con una Kd de 2.66 x 10"10 M o menos, 2.35 x 10"11 M o menos, o 9 x 10"12 M o menos. Preferiblemente, el anticuerpo se une específicamente a MAdCAM con una K de 1 x 10~11 M o menos. Preferiblemente, el anticuerpo se une específicamente a MAdCAM sustancialmente con la misma Kd que un anticuerpo seleccionado entre 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod o 7.26.4-mod como se describe en el documento WO 2005/067620. Un anticuerpo con "sustancialmente la misma Kd" que un anticuerpo de referencia tiene una Kd que es ± 100 pM, preferiblemente ± 50 pM, más preferiblemente ± 20 pM, todavía más preferiblemente ± 10 pM, ± 5 pM o ± 2 pM, comparado con la K del anticuerpo de referencia en el mismo experimento. Preferiblemente, el anticuerpo se une a MAdCAM con sustancialmente la misma Kd que un anticuerpo que comprende uno o más dominios variables o una o más CDR de un anticuerpo seleccionado entre 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod o 7.26.4-mod como se describe en el documento WO 2005/067620. Preferiblemente, el anticuerpo se une a MAdCAM sustancialmente con la misma K que un anticuerpo que comprende una de las secuencias de aminoácidos seleccionada entre las SEQ ID números 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 ó 68 como se describe en el documento WO 2005/067620 (con o sin la secuencia señal), o el dominio variable del mismo. Preferiblemente, el anticuerpo se une a MAdCAM sustancialmente con la misma Kd que un anticuerpo que comprende una o más CDR de un anticuerpo que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre las SEQ ID números 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 ó 68 como se describe en el documento WO 2005/067620. La afinidad de unión de un anticuerpo anti-MAdCAM a MAdCAM se puede determinar mediante cualquier procedimiento conocido en la técnica. En una modalidad, la afinidad de unión se puede medir mediante ELISA, RÍA o resonancia por plasmón de superficie competitivos, tal como BIAcore. En una modalidad más preferida, la afinidad de unión se mide por resonancia por plasmón de superficie. Incluso en una modalidad más preferida, la afinidad de unión y velocidad de disociación se mide usando un BIAcore. Un ejemplo de la determinación de la afinidad de unión se puede encontrar en el documento WO 2005/067620.

Semivida de anticuerpos anti-MAdCAM El anticuerpo anti-MAdCAM usado en la invención tiene una semivida de al menos un día in vitro o in vivo. Preferiblemente, el anticuerpo o parte del mismo tiene una semivida de al menos tres días. Más preferiblemente, el anticuerpo o parte del mismo tiene una semivida de cuatro días o más. Incluso más preferiblemente, el anticuerpo o parte del mismo tiene una semivida de ocho días o más. El anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo usado en la invención también se puede derivatizar o modificar de manera que tenga una semivida más larga, como se describe más adelante. En otra modalidad preferida, el anticuerpo puede contener mutaciones puntuales para incrementar la semivida en suero, tal como se describe en el documento WO 00/09560. La semivida del anticuerpo se puede medir mediante cualquier medio conocido por los expertos en la técnica. Por ejemplo, la semivida del anticuerpo se puede medir mediante transferencia de Western, ELISA o RÍA durante un período de tiempo apropiado. La semivida del anticuerpo se puede medir en cualquier animal apropiado, tal como un primate, por ejemplo, mono cinomolgus, o un ser humano.

Identificación de epítopes de MAdCAM reconocidos por anticuerpo Anti- MAdCAM La invención también proporciona el uso de un anticuerpo anti-MAdCAM humano que se une al mismo antígeno o epítope que un anticuerpo anti- MAdCAM humano proporcionado en esta memoria descriptiva. Además, la invención proporciona, el uso de un anticuerpo anti-MAdCAM humano que compite o compite de manera cruzada con un anticuerpo anti- MAdCAM humano. Preferiblemente, el anticuerpo anti-MAdCAM humano es 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod o 7.26.4-mod como se describe en el documento WO 2005/067620. Preferiblemente el anticuerpo anti-MAdCAM humano comprende uno o más dominios variables o una o más CDR de un anticuerpo seleccionado entre 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1 -mod, 6.77.1-mod o 7.26.4-mod. Preferiblemente el anticuerpo anti-MAdCAM humano comprende una de las secuencias de aminoácidos seleccionadas entre las SEQ ID N° 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 ó 68 en el documento WO 2005/067620 (con o sin la secuencia señal), o un dominio variable de las mismas. Preferiblemente, el anticuerpo anti-MAdCAM humano comprende una o más CDR de un anticuerpo que comprende una de las secuencias de aminoácidos seleccionada entre las SEQ ID N° 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 52, 54, 56, 58, 62, 64, 66 ó 68 del documento WO 2005/067620. Se puede determinar si el anticuerpo anti-MAdCAM se une al mismo antígeno que otro anticuerpo anti-MAdCAM usando una diversidad de los procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, se puede usar un anticuerpo anti-MAdCAM conocido para capturar el antígeno, eluir el antígeno del anticuerpo anti-MAdCAM, y después determinar si el anticuerpo de ensayo se unirá al antígeno eluído. Se puede determinar si un anticuerpo compite con un anticuerpo anti-MAdCAM mediante la unión del anticuerpo anti-MAdCAM a MAdCAM en condiciones de saturación, y después se mide la capacidad que tiene el anticuerpo de ensayo para unirse a MAdCAM. Si el anticuerpo de ensayo es capaz de unirse a MAdCAM al mismo tiempo que el anticuerpo anti-MAdCAM, entonces el anticuerpo de ensayo se une a un epítope diferente que el anticuerpo anti-MAdCAM. Sin embargo, si el anticuerpo de ensayo no es capaz de unirse a MAdCAM al mismo tiempo, entonces el anticuerpo de ensayo compite con el anticuerpo anti-MAdCAM humano. Este experimento se puede realizar usando ELISA, o resonancia por plasmón de superficie o, preferiblemente BIAcore. Para ensayar si un anticuerpo anti-MAdCAM compite de manera cruzada con otro anticuerpo anti-MAdCAM, se puede usar el procedimiento de competición descrito anteriormente en dos direcciones, es decir, determinando si el anticuerpo conocido bloquea el anticuerpo de ensayo y viceversa.

Uso del gen de cadena ligera y pesada La invención también proporciona el uso de un anticuerpo anti-MAdCAM que comprende una región variable de cadena ligera codificada por un gen K humano. Preferiblemente, la región variable de cadena ligera está codificada por una familia de genes humana V? A2, A3, A26, B3, 012 u 018. Preferiblemente, la cadena ligera comprende no más de once, no más de seis o no más de tres sustituciones de aminoácidos a partir de la secuencia de la línea germinal humana VK A2, A3, A26, B3, 012 u 018. Preferiblemente, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones conservadoras.

Preferiblemente, la VL del anticuerpo anti-MAdCAM contiene las mismas mutaciones, con relación a la secuencia de aminoácidos de la línea germinal, que una cualquiera o más de las VL de los anticuerpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1 -mod, 6.77.1 -mod o 7.26.4-mod descritos en el documento WO 2005/067620. La invención incluye el uso de un anticuerpo anti-MAdCAM que utiliza los mismos genes V? humano y J? humano que un anticuerpo ejemplificado. El anticuerpo puede comprender una o más de las mismas mutaciones a partir de la línea germinal que uno o más de los anticuerpos ejemplificados, o el anticuerpo puede comprender diferentes sustituciones en una o más de las mismas posiciones que uno o más de los anticuerpos ejemplificados. Por ejemplo, la VL del anticuerpo anti-MAdCAM puede contener una o más sustituciones de aminoácidos que son las mismas que las presentes en el anticuerpo 7.16.6, y otra sustitución de aminoácidos que es la misma que en el anticuerpo 7.26.4. De esta manera, se pueden mezclar y comparar diferentes características de la unión de anticuerpos con el fin de alterar, por ejemplo, la afinidad del anticuerpo por MAdCAM o su velocidad de disociación del antígeno. Las mutaciones se pueden hacer en la misma posición que las encontradas en una cualquiera o más de las VL de los anticuerpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod o 7.26.4-mod, pero se hacen sustituciones de aminoácidos conservadoras en lugar de usar el mismo aminoácido. Por ejemplo, si la sustitución de aminoácido comparada con la línea germinal en uno de los anticuerpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1, 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod o 7.26.4-mod es glutamato, se puede sustituir de manera conservadora por aspartato. De manera similar, si la sustitución de aminoácido es serina, se puede sustituir de manera conservadora por treonina. La cadena ligera del anticuerpo anti-MAdCAM puede comprender una secuencia de aminoácidos que es la misma que la secuencia de aminoácidos de la VL de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1 -mod, 6.77.1 -mod o 7.26.4-mod. La cadena ligera preferiblemente comprende secuencias de aminoácidos que son las mismas que las regiones CDR de la cadena ligera de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1 -mod o 7.26.4-mod. La cadena ligera puede comprender una secuencia de aminoácidos con al menos una región CDR de la cadena ligera de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod o 7.26.4-mod. La cadena ligera puede comprender las secuencias de aminoácidos con CDR de diferentes cadenas ligeras que usan los mismos genes V? y J?-Preferiblemente las CDR de cadenas ligeras diferentes se obtienen a partir de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod o 7.26.4-mod.

Preferiblemente la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre las SEQ ID N° 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 54, 58, 62, 64, 66 ó 68 del documento WO 2005/067620 con o sin la secuencia señal. Preferiblemente la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótidos seleccionada entre las SEQ ID N° 3, 7, 11 , 15, 19, 23, 27, 31 , 35, 39, 43, 47, 53, 57, 61 , 65 o 67 del documento WO 2005/067620 (con o sin la secuencia señal), o una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que tiene 1 - 11 inserciones, supresiones o sustituciones de aminoácidos a partir de la misma. Preferiblemente, las sustituciones de aminoácidos son sustituciones de aminoácidos conservadoras. El anticuerpo o parte del mismo puede comprender una cadena ligera lambda. La presente invención también proporciona el uso de un anticuerpo anti-MAdCAM o porción del mismo que comprende una secuencia de un gen VH humano o una secuencia derivada de un gen VH humano. La secuencia de aminoácidos de la cadena pesada se puede derivar de una familia de genes humanos VH 1-18, 3-15, 3-21 , 3-23, 3-30, 3-33 ó 4-4. Preferiblemente, la cadena pesada comprende no más de quince, no más de seis o no más de tres cambios de aminoácidos a partir de la secuencia de genes de la línea germinal humana VH 1- 18, 3-15, 3-21 , 3-23, 3-30, 3-33 ó 4-4. Las SEQ ID N° 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, y 46 descritas en el documento WO 2005/067620 proporcionan las secuencias de aminoácidos de las cadenas pesadas de longitud completa de doce anticuerpos anti-MAdCAM para uso en la invención. Todas las SEQ ID números mencionadas en esta memoria descriptiva se refieren a las secuencias realmente descritas en el documento WO 2005/067620. Preferiblemente, la VH del anticuerpo anti-MAdCAM contiene las mismas mutaciones, con relación a la secuencia de aminoácidos de la línea germinal, que una cualquiera o más de las VH de los anticuerpos 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1 -mod, 6.77.1 -mod o 7.26.4-mod. De manera similar a la descrita anteriormente, el anticuerpo comprende una o más de las mismas mutaciones de la línea germinal que uno o más anticuerpos ejemplificados. El anticuerpo también puede comprender diferentes sustituciones en una o más de las mismas posiciones que uno o más de los anticuerpos ejemplificados. Por ejemplo, la VH del anticuerpo anti-MAdCAM puede contener una o más sustituciones de aminoácidos que son las mismas que las presentes en el anticuerpo 7.16.6, y otra sustitución de aminoácidos que es la misma que el anticuerpo 7.26.4. De esta manera, se puede mezclar y comparar diferentes características de la unión de anticuerpos con el fin de alterar, por ejemplo, la afinidad del anticuerpo por MAdCAM o su velocidad de disociación del antígeno. Una sustitución de aminoácidos comparada con la línea germinal se puede realizar en la misma posición que una sustitución de la línea germinal como la encontrada en una cualquiera o más de las VH del anticuerpo de referencia 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77J-mod o 7.26.4-mod, pero la posición está sustituida con un resto diferente, que es una sustitución conservadora comparada con el anticuerpo de referencia. Preferiblemente la cadena pesada del anticuerpo anti-MAdCAM usado en la invención comprende una secuencia de aminoácidos que es la misma que la secuencia de aminoácidos de la VH de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1 -mod, 6.77.1 -mod o 7.26.4-mod. Más preferiblemente, la cadena pesada comprende las secuencias de aminoácidos que son las mismas que las regiones CDR de la cadena pesada de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1 -mod, 6.77.1 -mod o 7.26.4-mod. Preferiblemente, la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos de al menos una región CDR de la cadena pesada de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.4, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1 -mod, 6.77.1 -mod o 7.26.4-mod, o la cadena pesada puede comprender las secuencias de aminoácidos con CDR de cadenas pesadas diferentes . Preferiblemente, las CDR de las cadenas pesadas diferentes se obtienen de 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod o 7.26.4-mod. Preferiblemente, la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos selecciona entre las SEQ ID N° 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 52, 56, 60 ó 64 del documento WO 2005/067620 con o sin la secuencia señal. La cadena pesada puede también comprender una secuencia de aminoácidos codificada por una secuencia de nucleótidos seleccionada entre las SEQ ID N° 1 , 5, 9, 13, 17, 21 , 25, 29, 33, 37, 41 , 45, 51 , 55, 59 ó 63 del documento WO 2005/067620, o una secuencia de nucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos que tiene 1 - 15 inserciones, supresiones o sustituciones de aminoácidos a partir de la misma. Las sustituciones son preferiblemente sustituciones de aminoácidos conservadoras. Ácidos nucleicos, Vectores, Células huéspedes v procedimientos recombinantes de preparación de anticuerpos Los ácidos nucleicos, vectores, células huéspedes y procedimientos recombinantes de preparación de estos anticuerpos se describen en el documento WO 2005/067620.

Anticuerpos derivatizados y marcados Un anticuerpo o parte de anticuerpo de la invención se puede derivatizar o unir a otra molécula (por ejemplo, otro péptido o proteína). En general, los anticuerpos o partes de los mismos se derivatizan de tal manera que la unión a MAdCAM no se vea afectada de manera adversa por la derivatización o mareaje. De acuerdo con lo anterior, los anticuerpos y porciones de anticuerpo usados en la invención se pretende que incluyan formas tanto intactas como modificadas de los anticuerpos humanos anti- MAdCAM descritos en esta memoria descriptiva. Por ejemplo, un anticuerpo o parte de anticuerpo usados en la invención se pueden unir funcionalmente (mediante acoplamiento químico, fusión genética, asociación no covalente o de otra manera) a una o más entidades moleculares diferentes, tales como otro anticuerpo (por ejemplo, anticuerpo biespecífico o diacuerpo), un agente de detección, un agente citotóxico, un agente farmacéutico, y/o una proteína o péptido que puede mediar la asociación del anticuerpo o parte de anticuerpo con otra molécula (tal como una región del núcleo de estreptavidina o una etiqueta de polihistidina). Un tipo de anticuerpo derivatizado se produce mediante reticulación de dos o más anticuerpos (del mismo tipo o tipos diferentes, por ejemplo, para crear anticuerpos biespecíficos). Los reticuladores adecuados incluyen aquellos que son heterobifuncionales, que tienen dos grupos reactivos distintos separados mediante un espaciador apropiado (por ejemplo, m-maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimida éster) u homobifuncional (por ejemplo, disuccinimidil suberato). Tales engarces están disponibles de Pierce Chemical Company, Rockford, lll. Otro tipo de anticuerpo derivatizado es un anticuerpo marcado. Los agentes de detección útiles con los que un anticuerpo o parte de anticuerpo de la invención se pueden derivatizar incluyen compuestos fluorescentes, que incluyen fluoresceína, fluoresceína isotiocianato, rodamina, cloruro de 5-dimetilamina-1- naftalensulfonilo, ficoeritrina, agente fosforescente de lantánido y similares. Un anticuerpo puede también estar marcado con enzimas que son útiles para la detección, tal como peroxidasa de rábano picante, ß-galactosidasa, luciferasa, fosfatasa alcalina, glucosa oxidasa y similares. Cuando un anticuerpo está marcado con una enzima detectable, se detecta mediante la adición de reactivos adicionales que usa la enzima para producir un producto de reacción que se puede detectar. Por ejemplo, cuando el agente peroxidasa de rábano picante está presente, la adición de peróxido de hidrógeno y diaminobencidina conduce a un producto de reacción coloreado, que es detectable. Un anticuerpo también se puede marcar con biotina, y detectarse mediante la medición indirecta de unión a avidina o estreptavidina. Un anticuerpo se puede marcar con un agente magnético, tal como gadolinio. Un anticuerpo se puede marcar también con un epítope polipeptídico predeterminado reconocido por un indicador secundario (por ejemplo, secuencias de pares de cremallera de leucina, sitios de unión para anticuerpos secundarios, dominios de unión de metal, etiquetas de epítopes). En algunas realizaciones, las marcas están unidas mediante brazos espaciadores de diversas longitudes para reducir los impedimentos estéricos potenciales. Un anticuerpo anti-MAdCAM también puede estar marcado con un aminoácido marcado radiactivamente. La marca radiactiva se puede usar tanto para propósitos diagnósticos como terapéuticos. Por ejemplo, la marca radiactiva se puede usar para detectar tejidos que expresan MAdCAM mediante rayos X u otras técnicas de diagnóstico. Adicionalmente, la marca radiactiva se puede usar terapéuticamente como una toxina para un tejido enfermo o tumores que expresan MAdCAM. Los ejemplos de marcas para polipéptidos incluyen, pero no se limitan a, los siguientes radioisótopos o radionúclidos - 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, "Te, 111ln, 125l, 131l. Un anticuerpo anti-MAdCAM también se puede derivatizar con un grupo químico tal como polietilenglicol (PEG), un grupo metilo o etilo, o un grupo carbohidrato. Estos grupos pueden ser útiles para mejorar las características biológicas del anticuerpo, por ejemplo, para incrementar la semivida en suero o para incrementar la unión a tejido. Esta metodología también se aplicaría a cualesquiera fragmentos de unión a antígeno o versiones de un anticuerpo anti-MAdCAM.

Composiciones farmacéuticas y kits En un aspecto adicional, la invención proporciona composiciones que comprenden un anticuerpo anti-MAdCAM humano inhibidor y procedimientos para tratar sujetos con tales composiciones. En algunas realizaciones, el sujeto de tratamiento es un ser humano. En otras realizaciones, el sujeto es un sujeto veterinario. En algunas realizaciones, el sujeto veterinario es un perro o un primate no humano. El tratamiento puede implicar la administración de uno o más anticuerpos monoclonales inhibidores anti-MAdCAM, o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, solos o con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Los anticuerpos anti-MAdCAM inhibidores y las composiciones que los comprenden, se pueden administrar en combinación con uno o más agentes terapéuticos, de diagnóstico o profilácticos diferentes. Los agentes terapéuticos adicionales incluyen agentes antiinflamatorios o inmunomoduladores. Estos agentes incluyen, pero no se limitan a, los corticosteroides tópicos y orales tales como prednisolona, metilprednisolona, NCX-1015 o budesonida; los aminosalicilatos tales como mesalazina, olsalazina, balsalazida o NCX-456; la clase de inmunomoduladores tales como azatioprina, 6-mercaptopurina, metotrexato, ciclosporina, FK506, IL-10 (ilodecakin), IL-11 (Oprelevkin), IL-12, antagonistas de MIF/CD74, antagonistas de CD40, tales como TNX-100/5-D12, antagonistas de OX40L, GM-CSF, pimecrolimus o rapamicina; la clase de agentes anti-TNFa tales como infliximab, adalimumab, CDP-870, onercept, etanercept; la clase de agentes antiinflamatorios, tales como inhibidores de la PDE-4 (roflumilast, etc), inhibidores de TACE (DPC-333, RDP-58, etc) e inhibidores de ICE (VX-740, etc) así como antagonistas del receptor IL-2, tal como daclizumab, la clase de antagonistas de la molécula de adhesión selectiva, tal como natalizumab, MLN- 02, o alicaforsen, las clases de agentes analgésicos tales como, pero sin limitación a, inhibidores de la COX-2, tales como rofecoxib, valdecoxib, ceiecoxib, moduladores de los canales sensibles al voltaje de tipo P/Q (a2d), tales como gabapentina y pregabalina, los antagonistas del receptor NK-1 , moduladores del receptor cannabinoide, y los agonistas del receptor opioide delta, así como agentes antineoplásicos, antitumorales, antiangiogénicos o quimioterapéuticos. Dichos agentes adicionales pueden estar incluidos en la misma composición o administrarse separadamente.

Como se usa en esta memoria descriptiva, "vehículo farmacéuticamente aceptable" significa cualquiera y todos los disolventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes potenciadores o retardadores de la absorción e isotónicos, y similares que sean fisiológicamente compatibles. Algunos ejemplos de vehículos farmacéuticamente aceptables son agua, solución salina, solución salina tamponada con fosfato, regulador de acetato con cloruro sódico, dextrosa, glicerol, polietilenglicol, etanol y similares, así como las combinaciones de los mismos. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol, o cloruro sódico en la composición. Los ejemplos adicionales de sustancias farmacéuticamente aceptables son tensioactivos, agentes humectantes o cantidades menores de sustancias auxiliares tales como agentes humectantes o emulsionantes, conservantes o tampones, que potencian la vida útil o eficacia del anticuerpo. Las composiciones usadas en esta invención pueden estar en una diversidad de formas, por ejemplo, formas de dosificación líquidas, semisólidas y sólidas, tales como soluciones líquidas (por ejemplo, soluciones inyectables e infusibles), dispersiones, o suspensiones, comprimidos, pildoras, torta liofilizada, polvos secos, liposomas y supositorios. La forma preferida depende del modo propuesto de administración y aplicación terapéutica. Las composiciones típicas preferidas están en la forma de soluciones inyectables o infusibles, tales como composiciones similares a las usadas para inmunización pasiva de seres humanos. El modo preferido de administración es parenteral (por ejemplo, intravenosa, subcutánea, intraperitoneal, intramuscular, intradérmica). En una modalidad preferida, el anticuerpo se administra por infusión o inyección intravenosa. En otra modalidad preferida, el anticuerpo se administra mediante inyección intramuscular, intradérmica o subcutánea. Si se desea, el anticuerpo se puede administrar usando una bomba, enema, supositorio, o reservorio interno o similares. Las composiciones terapéuticas típicamente deben de ser estériles y estables en condiciones de fabricación y almacenamiento. La composición se puede formular como una solución, torta liofilizada, polvo seco, microemulsión, dispersión, liposoma, u otra estructura ordenada adecuada para la alta concentración de fármaco. Las soluciones inyectables estériles se pueden preparar incorporando el anticuerpo anti-MAdCAM en la cantidad requerida en un disolvente apropiado con uno o una combinación de ingredientes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido de esterilización. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los procedimientos de preparación preferidos son secados al vacío y secado por congelación que produce un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado a partir de una solución previamente estéril del mismo. En general, las dispersiones se preparan incorporando el compuesto activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de los enumerados anteriormente. Las características deseadas de una solución se pueden mantener, por ejemplo, mediante el uso de tensioactivos y el tamaño de partícula deseado en el caso de dispersión mediante el uso de tensioactivos, fosfolípidos y polímeros. La absorción prolongada de las composiciones inyectables se pueden producir incluyendo en la composición un agente que retrasa la absorción, por ejemplo, sales monoestearato, materiales poliméricos, aceites y gelatina. Los anticuerpos de la presente invención se pueden administrar mediante una diversidad de procedimientos conocidos en la técnica, aunque para muchas aplicaciones terapéuticas, la vía/modo de administración preferida es la infusión subcutánea, intramuscular, intradérmica o intravenosa. Como apreciarán los expertos en la técnica, la vía y/o modo de administración variará dependiendo de los resultados deseados. En ciertas realizaciones, las composiciones de anticuerpo se pueden preparar con un vehículo que protegerá al anticuerpo contra la liberación rápida, tal como una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes, parches transdérmicos, y sistemas de liberación microencapsulados. Se pueden usar polímeros biodegradables, biocompatibles, tales como etilen vinil acetato, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, y ácido poliláctico. Muchos procedimientos para la preparación de tales formulaciones están patentados o son conocidos generalmente por los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo Sustained and Controlled Reléase Drug Delivery Systems (J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc. Nueva York (1978)). En ciertas realizaciones, un anticuerpo anti-MAdCAM de la invención se puede administrar por vía oral, por ejemplo, con un diluyente inerte o un vehículo comestible asimilable. El compuesto (y otros ingredientes, si se desea) también puede estar contenido en una cápsula de gelatina de cubierta dura o blanda, comprimido en comprimidos, o incorporado directamente en la dieta del sujeto. Para la administración terapéutica oral, los anticuerpos anti-MAdCAM se pueden incorporar con excipientes y usarse en la forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, trociscos, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas, y similares. Para administrar un compuesto de la invención mediante una administración distinta de la parenteral, puede ser necesario revestir el compuesto con, o coadministrar el compuesto con un material para prevenir su inactivación. Las composiciones de la invención pueden incluir una "cantidad terapéuticamente eficaz" o una "cantidad profilácticamente eficaz" de un anticuerpo o parte de unión a antígeno de la invención. Una "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, a dosificaciones y durante períodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado terapéutico deseado. Una cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo o parte de anticuerpo puede variar de acuerdo con factores tales como el estado patológico, edad, sexo, y peso del individuo, y la capacidad del anticuerpo o parte de anticuerpo para provocar una respuesta deseada en el individuo. Una cantidad terapéuticamente eficaz es también una en la que cualesquiera efectos tóxicos o perjudiciales del anticuerpo o parte de anticuerpo se compensan por los efectos terapéuticos beneficiosos. Una "cantidad profilácticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, a dosificaciones y durante períodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado profiláctico deseado. Típicamente, ya que una dosis profiláctica se usa en sujetos antes de o en una fase más temprana de enfermedad, la cantidad profilácticamente eficaz puede ser menos que la cantidad terapéuticamente eficaz. Los regímenes de dosificación se pueden ajustar para proporcionar la respuesta óptima deseada (por ejemplo, una respuesta terapéutica o profiláctica). Por ejemplo, se puede administrar un solo bolo, se pueden administrar con el tiempo varias dosis divididas o la dosis se puede reducir o incrementar proporcionalmente según esté indicado por las exigencias de la situación terapéutica. Es especialmente ventajoso formular las composiciones parenterales en la forma de dosificación unitaria por su fácil administración y uniformidad de dosificación. Las formas de dosificación unitaria usadas en esta memoria descriptiva se refieren a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para los sujetos mamíferos a tratar; cada unidad contiene una cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el vehículo farmacéutico requerido. La especificación para las formas de unidad de dosificación de la invención están dictadas por y dependen directamente de (a) las características excepcionales del anticuerpo anti-MAdCAM o parte del mismo y el efecto terapéutico o profiláctico particular a lograr, y (b) las limitaciones inherentes en la técnica de formación de tal anticuerpo para el tratamiento de sensibilidad en individuos.

Un intervalo ejemplar, no limitante para una cantidad terapéuticamente o profilácticamente eficaz de un anticuerpo o parte de anticuerpo de la invención es 0.025 a 50 mg/kg, más preferiblemente 0.1 a 50 mg/kg, más preferiblemente 0J - 25, 0J a 10 ó 0J a 3 mg/kg. En algunas realizaciones, una formulación contiene 5 mg/ml de anticuerpo en un regulador de acetato sódico 20 mM, pH 5.5, NaCI 140 mM, y 0.2 mg/ml de polisorbato 80. En otras realizaciones, una formulación contiene 10 mg/ml de anticuerpo en 2.73 mg/ml de acetato sódico trihidrato, 45 mg/ml de manítol, 0.02 mg/ml de EDTA disódico dihidrato, 0.2 mg/ml de polisorbato 80, ajustado hasta pH 5.5 con ácido acético glacial, por ejemplo, para uso intravenoso. En otras realizaciones, un formulación contiene 50 mg/ml de anticuerpo, 2.73 mg/ml de acetato sódico trihidrato, 45 mg/ml de manitol, 0.02 mg/ml de EDTA disódico dihidrato, 0.4 mg/ml de polisorbato 80, ajustado hasta pH 5.5 con ácido acético glacial, por ejemplo, para uso subcutáneo o intradérmico. Se ha de indicar que los valores de dosificación pueden variar con el tipo y gravedad de la afección a aliviar. Adicionalmente se ha de entender que para cualquier sujeto particular, los regímenes de dosificación específicos se deben ajustar con el tiempo de acuerdo con la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y esos intervalos de dosificación establecidos en esta memoria descriptiva son ejemplares solamente y no pretenden limitar el alcance o práctica de la composición reivindicada. En una modalidad, el anticuerpo se administra en una formulación como una solución acuosa estéril que tiene un pH que varía entre aproximadamente 5.0 y aproximadamente 6.5 y que comprende entre aproximadamente 1 mg/ml y aproximadamente 200 mg/ml de anticuerpo, entre aproximadamente 1 milimolar y aproximadamente 100 milimolar de regulador de histidina, entre aproximadamente 0.01 mg/ml y aproximadamente 10 mg/ml de polisorbato 80, entre aproximadamente 100 milimolar y aproximadamente 400 milimolar de trehalosa, y entre aproximadamente 0.01 milimolar y aproximadamente 1.0 milimolar de EDTA disódico dihidrato. Otro aspecto de la presente invención proporciona kits que comprenden un anticuerpo anti-MAdCAM o parte de anticuerpo de la invención o una composición que comprende tal anticuerpo. Un kit, puede incluir, además del anticuerpo o composición, agentes de diagnóstico o terapéuticos. Un kit también puede incluir instrucciones para uso en un procedimiento de diagnóstico o terapéutico. En una modalidad preferida, el kit ¡ncluye el anticuerpo o una composición que lo comprende y un agente de diagnóstico que se puede usar en un procedimiento descrito más adelante. En otra modalidad preferida, el kit incluye el anticuerpo o una composición que lo comprende y uno o más agentes terapéuticos que se pueden usar en un procedimiento descrito más adelante.

Terapia génica Los anticuerpos usados en la invención se pueden administrar a un paciente que lo necesite mediante terapia génica. La terapia puede ser o bien in vivo o ex vivo. En una modalidad preferida, moléculas de ácido nucleico que codifican tanto una cadena pesada como una cadena ligera se administran a un paciente. En una modalidad más preferida, las moléculas de ácido nucleico se administran de tal manera que se integran de manera estable en los cromosomas de las células B debido a que estas células están especializadas para producir anticuerpos. En una modalidad preferida, las células B precursoras se transfectan o se infectan ex vivo y se vuelven a transplantar en un paciente que lo necesite. En otra modalidad, las células B precursoras u otras células se infectan in vivo usando un virus recombinante conocido por infectar el tipo de célula de interés. Los vectores típicos usados para terapia génica incluyen liposomas, plásmidos y vectores virales. Los vectores virales ejemplares son retrovirus, adenovirus y virus adeno-asociados. Después de la infección o bien in vivo o ex vivo, los niveles de expresión de anticuerpo se pueden controlar tomando una muestra del paciente tratado y usando un inmunoensayo conocido en la técnica o descrito en esta memoria descriptiva. En una modalidad preferida, el procedimiento de terapia génica comprende las etapas de administración de una molécula de ácido nucleico aislada que codifica la cadena pesada o una parte de unión a antígeno de la misma de un anticuerpo anti-MAdCAM y expresión de la molécula de ácido nucleico. En otra modalidad, el procedimiento de terapia génica comprende las etapas de administrar una molécula de ácido nucleico aislada que codifica la cadena ligera o una parte de unión a antígeno de la misma de un anticuerpo anti-MAdCAM y expresar la molécula de ácido nucleico. En una modalidad más preferida, el procedimiento de terapia génica comprende las etapas de administración de una molécula de ácido nucleico aislada que codifica la cadena pesada o una parte de unión a antígeno de la misma y una molécula de ácido nucleico aislada que codifica la cadena ligera o la parte de unión a antígeno de la misma de un anticuerpo anti-MAdCAM de la invención y expresión de las moléculas de ácido nucleico. El procedimiento de terapia géníca también puede comprender la etapa de administrar otro agente antiinflamatorio o ¡nmunomodulador.

Inhibición de la adhesión dependiente de c ßz/MAdCAM por el anticuerpo anti-MAdCAM: La invención también proporciona el uso de un anticuerpo anti-MAdCAM que se une a MAdCAM e inhibe la unión y adhesión de las células que llevan la ¡ntegrina a4ß7 a MAdCAM u otros ligandos afines, tales como L-selectina, a MAdCAM. En una modalidad preferida, la MAdCAM es humana y está en una forma soluble, o se expresa sobre la superficie de una célula. En otra modalidad preferida, el anticuerpo anti-MAdCAM es un anticuerpo humano. En otra modalidad, el anticuerpo o parte del mismo inhibe la unión entre a4ß7 y MAdCAM con un valor de Cl50 de no más de 50 nM. En una modalidad preferida, el valor de CI50 no es más de 5 nM. En una modalidad más preferida, el valor de CI50 es menos que 5 nM. En una modalidad más preferida, el valor de Cl50 es menos que 0.05 µg/ml, 0.04 µg/ml, o 0.03 µg/ml. En otra modalidad preferida el valor de CI50 es menos que 0.5 µg/ml, 0.4 µg/ml, o 0.3 µg/ml. El valor de Cl50 se puede medir mediante cualquier procedimiento conocido en la técnica. Típicamente, el valor de Cl50 se puede medir mediante ELISA o ensayo de adhesión. En una modalidad preferida, el valor de Cl50 se mide mediante ensayo de adhesión usando o bien células o tejido que expresan de forma nativa MAdCAM o células o tejido que se han modificado por ingeniería genética para expresar MAdCAM. Salvo que se defina de otra manera en esta memoria descriptiva, los términos científicos y técnicos usados en relación con la presente invención tendrán los significados que entienden comúnmente los expertos en la técnica. Adicionalmente, salvo que el contexto lo requiera de otra manera, los términos singulares incluirán pluralidades y los términos plurales incluirán el singular. Generalmente, las nomenclaturas usadas en relación con, y las técnicas de, cultivo de células y tejido, biología molecular, inmunología, microbiología, genética, química de proteínas y de ácidos nucleicos e hibridación descritas en esta memoria descriptiva son las bien conocidas y usadas comúnmente en la técnica. Los procedimientos y técnicas de la presente invención se realizan generalmente de acuerdo con procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica y como se describen en diversas referencias generales y más específicas que se citan y se describen a lo largo de la presente memoria descriptiva salvo que se indique otra cosa. Véase, por ejemplo, Sambrook y col., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1989) y Ausubel y col., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992), y Harlow y Lañe, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1990) que se incorporan en esta memoria descriptiva por referencia. Las reacciones enzimáticas y técnicas de purificación se realizan de acuerdo con las especificaciones del fabricante, como se llevan a cabo comúnmente en la técnica o como se describen en esta memoria descriptiva. Se usan las técnicas convencionales para síntesis química, análisis químico, preparación farmacéutica, formulación, y administración y tratamiento de pacientes. El término "polipéptido" abarca proteínas nativas o artificiales, fragmentos de proteínas y análogos de polipéptido de una secuencia de proteína. Un polipéptido puede ser monomérico o polimérico. El término "proteína aislada" o "polipéptido aislado" es una proteína o polipéptido que en virtud de su origen o fuente de derivación (1) no está asociada (o) con componentes asociados de manera natural que le acompañan en su estado nativo, (2) está libre de otras proteínas de las mismas especies (3) está expresada por una célula de una especie diferente, o (4) no se encuentra en la naturaleza. De este modo, un polipéptido que está sintetizado químicamente o sintetizado en un sistema celular diferente de la célula de la que se origina de manera natural se "aislará" a partir de sus componentes asociados de manera natural. Una proteína también se puede conseguir sustancialmente libre de componentes asociados de manera natural mediante aislamiento, usando técnicas de purificación de proteínas bien conocidas en la técnica. Una proteína o polipéptido es "sustancialmente pura (o)", "sustancialmente homogénea (o)" o "sustancialmente purificada (o)" cuando al menos aproximadamente 60 a 75% de una muestra exhibe una especie única de polipéptido. El polipéptido o proteína puede ser monomérico o multimérico. Un polipéptido o proteína sustancialmente puro (a) típicamente comprenderá aproximadamente 50%, 60%, 70%, 80% o 90% p/p de una muestra de proteína, más usualmente aproximadamente 95%, y preferiblemente estará por encima del 99% de pureza. La pureza u homogeneidad de proteína se puede indicar mediante un número de medios bien conocidos en la técnica, tales como electroforesis en gel de poliacrilamida de una muestra de proteína, seguido de la visualización de una sola banda de polipéptido tras la tinción del gel con un tinte bien conocido en la técnica. Para ciertos propósitos, se puede proporcionar una mayor resolución usando HPLC u otro medio bien conocido en la técnica para purificación. El término "fragmento de polipéptido" como se usa en esta memoria descriptiva se refiere a un polipéptido que tiene una supresión amino terminal y/o carboxi terminal, pero donde la secuencia de aminoácidos restante es idéntica a las posiciones correspondientes en la secuencia de origen natural. En algunas realizaciones, los fragmentos son de al menos 5, 6, 8 ó 10 aminoácidos de longitud. En otras realizaciones, los fragmentos son de al menos 14 aminoácidos de longitud, más preferiblemente de al menos 20 aminoácidos de longitud, usualmente de al menos 50 aminoácidos de longitud, incluso más preferiblemente de al menos 70, 80, 90, 100, 150 ó 200 aminoácidos de longitud. El término "análogo de polipéptido" como se usa en esta memoria descriptiva se refiere a un polipéptido que comprende un segmento de al menos 25 aminoácidos que es sustancialmente idéntico a una parte de una secuencia de aminoácidos y que tiene al menos una de las siguientes propiedades: (1) unión específica a MAdCAM en condiciones de unión adecuadas, (2) capacidad de inhibir la unión de la integrina a4ß7 y/o de la L selectina a MAdCAM, o (3) capacidad para reducir la expresión en la superficie celular de MAdCAM in vitro o in vivo. Típicamente, los análogos de polipéptidos comprenden una sustitución (o inserción o supresión) de aminoácidos conservadora con respecto a la secuencia de origen natural. Los análogos son típicamente de al menos 20 aminoácidos de longitud, preferiblemente de al menos 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150 ó 200 aminoácidos de longitud o más largos, y a menudo pueden ser tan largos como un polipéptido de origen natural de longitud completa. Una "inmunoglobulina" es una molécula tetramérica. En una inmunoglobulina de origen natural, cada tetrámero se compone de dos pares idénticos de cadenas de polipéptidos, teniendo cada par una cadena "ligera" (aproximadamente 25 kDa) y una "pesada" (aproximadamente 50 - 70 kDa).

La parte amino terminal de cada cadena ¡ncluye una región variable de aproximadamente 100 a 110 o más aminoácidos principalmente responsable del reconocimiento del antígeno. La parte carboxi terminal de cada cadena define una región constante principalmente responsable de la función efectora. Las cadenas humanas ligeras se clasifican como cadenas ligeras K y ?. Las cadenas pesadas se clasifican como µ, d, y, a o e, y definen el isótopo del anticuerpo como IgM, IgD, IgG, IgA, e IgE, respectivamente. Dentro de las cadenas ligera y pesada, las regiones variables y constantes se unen por una región "J" de aproximadamente 12 o más aminoácidos, incluyendo también la cadena pesada una región "D" de aproximadamente 10 o más aminoácidos. Véase, generalmente, Fundamental Immunology, Capítulo 7 (Paul, W., ed., 2a ed. Raven Press, N. Y. (1989)) (incorporada en su totalidad por referencia para todos los propósitos). Las regiones variables de cada par de cadenas ligera/pesada forman el sitio de unión del anticuerpo de manera que una inmunoglobulina intacta tiene dos sitios de unión. Las cadenas de inmunoglobulina muestran la misma estructura general de regiones marco conservadas relativamente conservadas (FR) unidas por tres regiones hipervariables, también llamadas regiones determinantes de complementariedad o CDR. Las CDR de las dos cadenas de cada par se alinean por las regiones marco conservadas para formar un sitio de unión específico de epítope. Desde el extremo N al extremo C, las cadenas tanto ligera como pesada comprenden los dominios FR1 , CDR1 , FR2, CDR2, FR3, CDR3 y FR4. La asignación de aminoácidos a cada dominio está de acuerdo con las definiciones de Kabat: Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 y 1991)), o Chothia y Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901 - 917 (1987); Chothia y col., nature, 342: 878 - 883 (1989), cada una de las cuales se incorpora en esta memoria descriptiva por referencia en su totalidad. Un "anticuerpo" se refiere a una inmunoglobulina intacta o a una parte de unión a antígeno de la misma que compite con el anticuerpo intacto para la unión específica. En algunas realizaciones, un anticuerpo es una parte de unión a antígeno del mismo. Las partes de unión a antígeno se pueden producir mediante técnicas de ADN recombinante o mediante escisión enzimática o química de anticuerpos intactos. Las partes de unión a antígeno incluyen, entre otros, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, dAb, y los fragmentos de la región determinante de complementariedad (CDR), anticuerpos de una sola cadena (scFv), anticuerpos quiméricos, diacuerpos y polipéptidos que contienen al menos una parte de una inmunoglobulina que es suficiente para conferir al polipéptido una unión específica a antígeno. Un fragmento Fab es un fragmento monovalente que consta de los dominios VL, VH, CL y CH1 ; un fragmento F(ab)2 es un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos por un puente disulfuro en la región bisagra; un fragmento Fd consta de los dominios VH y CH1 ; un fragmento Fv consta de los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo; y un fragmento dAb (Ward y col., Nature, 341 : 544 - 546 (1989)) consta de un dominio VH. Como se usa en esta memoria descriptiva, un anticuerpo que se denomina, por ejemplo, 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.77.2, 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4 ó 9.8.2, es un anticuerpo monoclonal que está producido por el hibridoma del mismo nombre. Por ejemplo, el anticuerpo 1.7.2 está producido por el hibridoma 1.7.2. Un anticuerpo que se denomina 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1 -mod, 6.77J-mod o 7.26.4-mod es un anticuerpo monoclonal cuya secuencia se ha modificado a partir de su precursor correspondiente mediante mutagénesis dirigida al sitio. Un anticuerpo de una sola cadena (scFv) es un anticuerpo en el que las regiones VL y VH se aparean para formar una molécula monovalente mediante un engarce sintético que les permite que se preparen como una única cadena proteica (Bird y col., Science, 242: 423 - 426 (1988) y Huston y col., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 85: 5879 - 5883 (1988)). Los diacuerpos son anticuerpos bivalentes, biespecíficos en los que los dominios VH y VL se expresan en una única cadena de polipéptido, pero usando un engarce que es demasiado corto para permitir el apareamiento entre los dos dominios en la misma cadena, por lo tanto forzando a los dominios a aparearse con dominios complementarios de otra cadena y creando dos sitios de unión a antígeno (véase, por ejemplo, Holliger, P., y col., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 90: 6444 -6448 (1993) y Poljak, R. J., y col., Structure, 2:1121 - 1123 (1994)). Una o más CDR de un anticuerpo de la invención se pueden incorporar en una molécula o bien covalentemente o no covalentemente para convertirse en una inmunoadhesina que se une específicamente a MAdCAM. Una inmunoadhesina puede incorporar la (s) CDR como parte de una mayor cadena de polipéptido, puede unir de manera covalente la (s) CDR a otra cadena de polipéptido, o puede incorporar la (s) CDR no covalentemente. Las CDR permiten que la inmunoadhesina se una específicamente a un antígeno particular de interés. Un anticuerpo puede tener uno o más sitios de unión. Si existe más de un sitio de unión, los sitios de unión pueden ser idénticos entre sí o pueden ser diferentes. Por ejemplo, una inmunoglobulina de origen natural tiene dos sitios de unión idénticos, un anticuerpo de una sola cadena o fragmento Fab tiene un sitio de unión, mientras que un anticuerpo "biespecífico" o "bifuncional" (diacuerpo) tiene dos sitios de unión diferentes. Un "anticuerpo aislado" es un anticuerpo que (1 ) no está asociado con componentes asociados de manera natural, incluyendo otros anticuerpos asociados de manera natural, que lo acompañan en su estado nativo, (2), está libre de otras proteínas de la misma especie, (3) está expresado por una célula de una especie diferente, o (4) no se encuentra en la naturaleza. Los ejemplos de anticuerpos aislados incluyen un anticuerpo anti-MAdCAM que se ha purificado por afinidad usando MAdCAM, un anticuerpo anti-MAdCAM que se ha producido por un hibridoma u otra línea celular in vitro, y un anticuerpo anti- MAdCAM humano derivado de un mamífero o planta transgénico. Como se usa en esta memoria descriptiva, el término "anticuerpo humano" significa un anticuerpo en el que las secuencias de la región variable y constante son secuencias humanas. El término abarca anticuerpos con secuencias derivadas de genes humanos, pero que se han cambiado, por ejemplo, para disminuir la inmunogenicidad posible, incrementar afinidad, eliminar cisteínas o sitios de glicosilación que podrían provocar plegamiento indeseable, etc. El término abarca tales anficuerpos producidos de manera recombinante en células no humanas que podrían impartir glicosilación no típica de células humanas. El término también abarca anticuerpos que se han inducido en ratón transgénico que comprende alguno o todos los loci de la cadena pesada y ligera de inmunoglobulina humana. En un aspecto, la invención proporciona un anficuerpo humanizado. En algunas realizaciones, el anticuerpo humanizado es un anticuerpo que se deriva de una especie no humana, en el que ciertos aminoácidos en la región marco conservada y los dominios constantes de las cadenas pesada y ligera se han mutado de manera que se evite o revoque una respuesta inmune en seres humanos. En algunas realizaciones, un anticuerpo humanizado se puede producir fusionando los dominios constantes de un anticuerpo humano a los dominios variables de una especie no humana. Los ejemplos de cómo preparar anticuerpos humanizados se pueden encontrar en las patentes de Estados Unidos números 6,054,297, 5,886,152 y 5,877,293. En algunas realizaciones, un anticuerpo anti-MAdCAM humanizado de la invención comprende la secuencia de aminoácidos de una o más regiones marco conservadas de uno o más anticuerpos anti-MAdCAM humanos de la invención.

En otro aspecto, la invención ¡ncluye el uso de un "anticuerpo quimérico". En algunas realizaciones el anticuerpo quimérico se refiere a un anticuerpo que contiene una o más regiones de un anficuerpo y una o más regiones de uno o más anticuerpos distintos. En una modalidad preferida, una o más de las CDR se derivan de un anficuerpo anti-MAdCAM humano de la invención. En una modalidad más preferida, todas las CDR se derivan de un anticuerpo anti-MAdCAM humano de la invención. En otra modalidad preferida, las CDR de más de un anticuerpo anti- MAdCAM humano de la invención se mezclan y se emparejan en un anticuerpo quimérico. Por ejemplo, un anticuerpo quimérico puede comprender una CDR1 de la cadena ligera de un primer anticuerpo anti-MAdCAM humano que se puede combinar con CDR2 y CDR3 de la cadena ligera de un segundo anticuerpo anti-MAdCAM humano, y las CDR de la cadena pesada se pueden derivar de un tercer anticuerpo anti-MAdCAM. Adicionalmente, las regiones de marco conservado se pueden derivar de uno de los mismos anticuerpos anti-MAdCAM, de uno o más anticuerpos diferentes, tal como un anticuerpo humano, o de un anticuerpo humanizado. Un "anticuerpo neutralizante", "un anticuerpo ¡nhibidor" o anticuerpo antagonista es un anticuerpo que inhibe la unión de a4ß7, o células que expresan a4ß7, o cualquier otro ligando afín, o células que expresan el ligando afín, a MAdCAM en al menos aproximadamente un 20%. En una modalidad preferida, el anticuerpo reduce o inhibe la unión de la integrina a4ß7, o células que expresan a4ß7 a MAdCAM en al menos un 40%, más preferiblemente en un 60%, incluso más preferiblemente en un 80%, 85%, 90%, 95% ó 100%. La reducción de unión se puede medir mediante cualquier medio conocido por los expertos en la técnica, por ejemplo, como se mide en un ensayo de unión competitiva in vitro. Un ejemplo de medición de la reducción en la unión de las células que expresan a4ß a MAdCAM se presenta en el ejemplo I. Los fragmentos o análogos de anticuerpos se pueden preparar fácilmente por los expertos en la técnica siguiendo las enseñanzas de esta memoria descriptiva. Los extremos preferidos amino- y carboxi - terminales de los fragmentos o análogos se encuentran cerca de los límites de dominios funcionales. Los dominios estructurales y funcionales se pueden identificar mediante comparación de los datos de secuencias de nucleótidos y/o aminoácidos con las bases de datos de las secuencias públicas o patentadas. Preferiblemente, los procedimientos de comparación computarizados se usan para idenfificar motivos de secuencia o dominios de conformación de proteínas predichos que se producen en otras proteínas de estructura y/o función conocidas. Se conocen procedimientos de identificación de secuencias de proteínas que se pliegan en una estructura tridimensional conocida (Bowie y col., Science, 253: 164 (1991 )). El término "Koff" se refiere a la constante de velocidad de disociación de un anficuerpo del complejo antígeno/anticuerpo. El término "Kd" se refiere a la constante de disociación de una interacción anticuerpo - antígeno particular. Un anticuerpo se dice que se une a un antígeno cuando la constante de disociación es = 1 µM, preferiblemente = 100 nM y de forma más preferible < 10 nM. El término "epítope" incluye cualquier determinante proteico capaz de unión específica a una inmunoglobulina o receptor de células T o que de otra manera interactúa con una molécula. Los determinante epitópicos usualmente constan de agrupamientos de superficie activos químicamente de moléculas tales como las cadenas laterales de aminoácidos o carbohidratos y usualmente tienen características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específicas. Un epítope puede ser "lineal" o "conformacional". En un epítope lineal, todos los puntos de interacción entre la proteína y la molécula de interacción (tal como un anticuerpo) se encuentran linealmente a lo largo de la secuencia de aminoácidos primaria de la proteína. En un epítope conformacional, los puntos de interacción se encuentran a través de restos de aminoácidos en la proteína que están separados entre sí. Como se usa en esta memoria descriptiva, los veinte aminoácidos convencionales y sus abreviaturas siguen el uso convencional. Véase, Immunology - A Synthesis (2a edición, E. S. Golub y D. R. Gren, Eds. Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991)), que se incorpora en esta memoria descriptiva por referencia. Los estereoisómeros (por ejemplo, aminoácidos D) de los veinte aminoácidos convencionales, aminoácidos no naturales tales como aminoácidos a.a-disustituidos, N-alquil aminoácidos, ácido láctico, y otros aminoácidos no convencionales pueden también ser componentes adecuados para los polipéptidos de la presente invención. Los ejemplos de aminoácidos no convencionales incluyen: 4-hidroxiprolina, v-carboxiglutamato, e-N,N,N-trimetil lisina, e-N-acetil lisina, O-fosfoserina, N-acetilserina, N-formilmetionina, 3-metilhistidina, 5-hidroxilisina, s-N-metilarginina, y otros aminoácidos e iminoácidos similares (por ejemplo, 4-hidroxiprolina). En la anotación de polipéptido usada en esta memoria descriptiva, la dirección hacia la izquierda es la dirección amino terminal y la dirección hacia la derecha es la dirección carboxi terminal, de acuerdo con el uso y convención habituales. El término "polinucleótido" como se menciona en esta memoria descriptiva se refiere a una forma polimérica de nucleófidos de al menos 10 bases de longitud, o bien ribonucleótidos o desoxirribonucleótidos o una forma modificada de cualquier tipo de nucleótido. El término incluye formas de ADN de cadena única o doble. El término "polinucleótido aislado" como se usa en esta memoria descriptiva significa un polinucleótido de ADNc genómico, o de origen sintético o alguna combinación de los mismos, que en virtud de su origen el "polinucleótido aislado" (1) no está asociado con todo o parte de un polinucleótido en el que el "polinucleótido aislado" se encuentra en la naturaleza (2) está operativamente unido a un polinucleótido al que no está unido en la naturaleza, o (3) no se encuentra en la naturaleza como parte de una secuencia mayor. El término "oligonucleótido" mencionado en esta memoria descriptiva incluye nucleótidos de origen natural y modificados unidos entre sí mediante enlaces de oligonucleótidos de origen natural, y de origen no natural. Los oligonucleótidos son un subconjunto de polinucleótidos que generalmente comprenden una longitud de 200 bases o menos. Preferiblemente los oligonucleótidos son de 10 a 60 bases de longitud y más preferiblemente 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ó 20 a 40 bases de longitud. Los oligonucleótidos son usualmente de cadena única, por ejemplo, para sondas; aunque los oligonucleótidos pueden ser de cadena doble, por ejemplo, para uso en la construcción de un mutante génico. Los oligonucleótidos de la invención pueden ser oligonucleótidos o bien de polaridad positiva o de polaridad negativa. El término "nucléotidos de origen natural" mencionado en esta memoria descriptiva incluye desoxirribonucleótidos y ribonucleótidos. El término "nucleótidos modificados" mencionados en esta memoria descriptiva ¡ncluye nucleótidos con grupos de azúcar modificados o sustituidos y similares. El término "enlaces de oligonucleótidos" mencionados en esta memoria descriptiva incluye enlaces de oligonucleótidos tales como fosforotioato, fosforoditioato, fosforoselenoato, fosforodiselenoato, fosforoanilotioato, fosforoaniladato, fosforoamidato, y similares. Véase, por ejemplo, LaPlanche y col., Nucí. Acids. Res. 14:9081 (1986); Stec y col., J. Am. Chem. Soc. 106: 6077 (1984); Stein y col., Nucí. Acids. Res., 16: 3209 (1988); Zon y col., Anti-Cancer Drug Design 6: 539 (1991 ); Zon y col., Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, p. 87 - 108 (F. Eckstein, Ed., Oxford University Press, Oxford Inglaterra (1991 )); Stec y col., Patente de Estados Unidos N° 5,151 ,510; Uhlmann y Peyman, Chemical Reviews, 90: 543 (1990), cuyas descripciones se incorporan en este documento por referencia. Un oligonucleótido puede incluir una etiqueta para detección, si se desea. Secuencias "unidas operativamente" incluyen tanto secuencias de control de expresión que son contiguas con el gen de interés como secuencias de control de expresión que actúan en posición relativa trans o a una distancia para controlar el gen de interés. El término "secuencia de control de expresión" como se usa en esta memoria descriptiva se refiere a secuencias de polinucleótidos que son necesarias para efectuar la expresión y procesamiento de secuencias de codificación a las que están ligadas. Las secuencias de control de expresión incluyen secuencias de inicio, terminación, promotoras y potenciadoras de la transcripción apropiadas; señales de procesamiento de ARN eficaz tales como señales de ayuste y poliadenilación; las secuencias que estabilizan ARNm citoplásmico; secuencias que potencian la eficacia de traducción (es decir, secuencia de consenso Kozak); secuencias que potencian la estabilidad de proteína; y cuando se desee, secuencias que potencian la secreción de proteína. La naturaleza de tales secuencias de control difiere dependiendo del organismo huésped; en procariotas, tales secuencias de control generalmente incluyen promotor, sitio de unión a ribosoma, y secuencia de terminación de la transcripción; en eucariotas, generalmente, tales secuencias de control incluyen promotores y secuencias de terminación de la transcripción. El término "secuencias de control" se pretende que incluya, como mínimo, todos los componentes cuya presencia es esencial para la expresión y procesamiento, y también puede incluir componentes adicionales cuya presencia es ventajosa, por ejemplo, secuencias guía y secuencias de pareja de fusión. El término "vector", como se usa en esta memoria descriptiva se refiere a una molécula de ácido nucleico capaz de transportar otro ácido nucleico al que se ha unido. Un tipo de vector es un "plásmido", que se refiere a un bucle de ADN de cadena doble circular en el que pueden estar ligados segmentos de ADN adicionales. Otro tipo de vector es un vector viral, en el que pueden estar ligados segmentos de ADN adicionales en el genoma viral. Ciertos vectores son capaces de replicación autónoma en una célula huésped en la que se introducen (por ejemplo, vectores bacterianos que fienen un origen bacteriano de replicación y vectores de mamíferos episomales). Otros vectores (por ejemplo, vectores de mamíferos no episomales) se pueden integrar en el genoma de una célula huésped tras la introducción en la célula huésped, y por lo tanto se replican junto con el genoma huésped. Además, ciertos vectores son capaces de dirigir la expresión de genes a los que están unidos operativamente. Tales vectores se denominan en esta memoria descriptiva "vectores de expresión recombinantes" (o simplemente, "vectores de expresión"). En general, los vectores de expresión de utilidad en técnicas de ADN recombinante están a menudo en la forma de plásmidos. En la presente memoria descriptiva, "plásmido" y "vector" se pueden usar indistintamente ya que el plásmido es la forma de vector más comúnmente usada. Sin embargo, la invención pretende incluir otras formas de vectores de expresión, tales como vectores virales (por ejemplo, retrovirus, adenovirus y virus adeno-asociados defectuosos en su replicación), que sirven funciones equivalentes. El término "célula huésped recombinante" (o simplemente "célula huésped"), como se usa en esta memoria descriptiva, pretende referirse a una célula en la que se ha introducido un vector de expresión recombinante. Se debe entender que tales términos pretenden referirse no solamente a la célula objeto particular sino a la progenie de tal célula. Debido a que ciertas modificaciones se pueden producir en las generaciones siguientes debido a o bien mutación o influencias ambientales, tal progenie puede, de hecho, no ser idéntica a la célula precursora, pero aún así está incluida dentro del alcance del término "célula huésped" como se usa ene esta memoria descriptiva. El término "se hibrida de manera selectiva" mencionado en esta memoria descriptiva significa que se une de manera detectable y específica. Los polinucleótidos, oligonucleótidos y fragmentos de los mismos de acuerdo con la presente invención se hibridan selectivamente a hebras de ácido nucleico bajo condiciones de hibridación y de lavado que minimizan las cantidades apreciables de unión detectable a ácidos nucleicos no específicos. Condiciones de "alta rigurosidad" o "altamente rigurosas" se pueden usar para lograr condiciones de hibridación selectivas como se conocen en la técnica y se describen en esta memoria descriptiva., Un ejemplo de condiciones de "alta rigurosidad" o "altamente rigurosas" es un procedimiento de incubación de un polinucleótido con otro polinucleótldo, en el que un polinucleótido puede estar fijado a una superficie sólida tal como una membrana, en un regulador de hibridación de 6 X SSPE o SSC, formamida al 50%, 5 X reactivo de Denhardt, SDS al 0.5%, 100 µg/ml de ADN de esperma de salmón desnaturalizado, fragmentado a una temperatura de hibridación de 42°C durante 12 - 16 horas, seguido de lavado dos veces a 55°C usando regulador de lavado de 1 X SSC, SDS al 0.5%. Véase también Sambrook y col., supra, p. 9.50 - 9.55. El término "porcentaje de identidad de secuencia" en el contexto de secuencias de nucleótidos se refiere a los restos en dos secuencias que son iguales cuando se alinean para máxima correspondencia. La longitud de la comparación de identidad de secuencia puede ser sobre un tramo de al menos aproximadamente nueve nucleótidos, usualmente al menos aproximadamente 18 nucleótidos, más usualmente al menos aproximadamente 24 nucleótidos, típicamente al menos aproximadamente 28 nucleótidos, más típicamente al menos aproximadamente 32 nucleótidos, y preferiblemente al menos aproximadamente 36, 48 o más nucleófidos. Existe un número de algoritmos diferentes conocidos en la técnica que se pueden usar para medir la identidad de secuencia de nucleótidos. Por ejemplo, las secuencias de polinucleótidos se pueden comparar usando FASTA, Gap o Bestfit, que son programas en el paquete Wisconsin Versión 10.3, Accelrys, San Diego, CA. FASTA, que incluye, por ejemplo, los programas FASTA2 y FASTA 3, proporciona alineaciones y porcentaje de identidad de secuencia de las regiones de mejor superposición entre las secuencias de consulta y de búsqueda (Pearson, Methods Enzymol., 183: 63 - 98 (1990)); Pearson, Methods Mol. Biol., 132: 185 - 219 (2000); Pearson, Methods Enzymol., 266: 227 - 258 (1996); Pearson, J. Mol. Biol., 276: 71 - 84 (1998); incorporadas en esta memoria descriptiva por referencia). Salvo que se especifique de otra manera, se usan los parámetros por defecto para un programa o algoritmo particular. Por ejemplo, el porcentaje de identidad de secuencia entre secuencias de nucleótidos se puede determinar usando FASTA con sus parámetros por defecto (un tamaño de palabra de 6 y el factor NOPAM para la matriz de puntuación) o usando Gap con sus parámetros por defecto como se proporciona en el paquete Wisconsin Versión 10.3, incorporado en esta memoria descriptiva por referencia. Una referencia a una secuencia de nucleótidos abarca su complementaria salvo que se especifique de otra manera. De este modo, una referencia a una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia particular se debe entender que abarca su hebra complementaria, con su secuencia complementaria. En la técnica de biología molecular, los investigadores usan los términos "porcentaje de identidad de secuencia", "porcentaje de similitud de secuencia" y "porcentaje de homología de secuencia" indistintamente. En esta solicitud, estos términos deben tener el mismo significado con respecto a secuencias de nucleófidos solamente. El término "similitud sustancial" o "similitud de secuencia sustancial" cuando se refiere a un ácido nucleico o fragmento del mismo, indica que, cuando se alinea óptimamente con inserciones o supresiones de nucleótidos apropiadas con otro ácido nucleico (o su hebra complementaria), existe una identidad de secuencia de nucleótidos en al menos aproximadamente 85%, preferiblemente al menos aproximadamente 90%, y más preferiblemente al menos aproximadamente 95%, 96%, 97%, 98% ó 99% de las bases de nucleótidos, medida por cualquier algoritmo bien conocido de identidad de secuencia, tales como FASTA, BLAST o Gap, como se ha descrito anteriormente. Cuando se aplica a polipéptidos, el término "identidad sustancial" significa que dos secuencias de péptidos, cuando se alinean de manera óptima, tal como mediante los programas GAP o BESTFIT usando pesos de huecos por defecto, comparten al menos 75% u 80% de identidad de secuencia, preferiblemente al menos 90% o 95% de identidad de secuencia, incluso más preferiblemente al menos 98% ó 99% de identidad de secuencia. Preferiblemente, las posiciones de los restos que no son idénticas difieren en sustituciones de aminoácidos conservadoras. Una "sustitución de aminoácidos conservadora" es una en la que un resto de aminoácido esta sustituido por otro resto de aminoácido que tiene una cadena lateral (grupo R) con propiedades químicas similares (por ejemplo, carga o hidrofobia). En general, una sustitución de aminoácidos conservadora no cambiará sustancialmente las propiedades funcionales de una proteína. En los casos en los que dos o más secuencias de aminoácidos difieren entre sí por sustituciones conservadoras, el porcentaje de identidad de secuencia o grado de similitud se puede ajustar hacia arriba para corregir para la naturaleza conservadora de la sustitución. Los medios para realizar este ajuste son bien conocidos por los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Pearson, Methods Mol. Biol., 24: 307 - 31 (1994), incorporada en esta memoria descriptiva por referencia. Los ejemplos de grupos de aminoácidos que tienen cadenas laterales con propiedades químicas similares incluyen 1 ) cadenas laterales alifáticas: glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina; 2) cadenas laterales hidroxil-alifáticas: serina y treonina; 3) cadenas laterales que contienen amida: asparagina y glutamina; 4) cadenas laterales aromáticas: fenilalanina, tirosina, y triptófano; 5) cadenas laterales básicas: lisina, arginina, e histidina; y 6) cadenas laterales que confienen azufre son cisteína y metionina. Los grupos preferidos de sustitución conservadora de aminoácidos son: valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina, lisina-arginina, alanina-valina, glutamato-aspartato, y asparagina-glutamina. Como alternativa, un reemplazo conservador es cualquier cambio que tiene un valor positivo en la matriz de logaritmos de probabilidades PAM250 descrita en Gonnet y col., Science, 256: 1443 - 45 (1992), incorporada en esta memoria descriptiva por referencia. Un reemplazo "moderadamente conservador" es cualquier cambio que tiene un valor no negativo en la matriz de logaritmos de probabilidades PAM250. La similitud de secuencia para polipéptidos se mide típicamente usando el software de análisis de secuencia. El software de análisis de proteínas empareja secuencias similares usando mediciones de similitud asignadas a diversas sustituciones, supresiones y otras modificaciones, que incluyen sustituciones de aminoácidos conservadoras. Por ejemplo, GCG contiene programas tales como "Gap" y "Bestfit" que se pueden usar con parámetros por defecto para determinar la homología de secuencia o identidad de secuencia entre polipéptidos estrechamente relacionados, tales como polipéptidos homólogos de diferentes especies de organismos o entre una proteína de tipo salvaje y una muteína de la misma. Véase, por ejemplo, el paquete Wisconsin Versión 10.3. Las secuencias de polipéptidos también se pueden comparar usando FASTA que usa parámetros por defecto o recomendados, un programa en el paquete Wisconsin Versión 10.3. FASTA (por ejemplo, FASTA2 y FASTA 3) proporciona alineaciones y porcentaje de identidad de secuencia de las regiones de la mejor superposición entre las secuencias de consulta y de búsqueda (Pearson (1990); Pearson (2000)). Otro algoritmo preferido cuando se compara una secuencia de la invención a una base de datos que contiene un gran número de secuencias de diferentes organismos es el programa de ordenador BLAST, especialmente blastp o tblastn, usando parámetros por defecto. Véase, por ejemplo, Altschul y col., J. Mol. Biol. 215: 403 - 410 (1990); Altschul y col., Nucleic Acids Res. 25: 3389 -402 (1997); incorporadas en esta memoria descriptiva por referencia. La longitud de las secuencias de polipéptidos comparadas con respecto a la homología será generalmente de al menos aproximadamente 16 restos de aminoácidos, usualmente de al menos aproximadamente 20 restos, más usualmente de al menos aproximadamente 24 restos, típicamente de al menos aproximadamente 28 restos, y preferiblemente más de aproximadamente 35 restos. Cuando se investiga una base de datos que contiene secuencias de un gran número de diferentes organismos, es preferible comparar las secuencias de aminoácidos. Como se usa en esta memoria descriptiva, los términos "marca" o "marcado" se refiere a la incorporación de otra molécula en el anticuerpo. En una modalidad, la marca es un marcador detectable, por ejemplo, incorporación de un aminoácido marcado radiactivamente o unión a un polipéptido de restos biotinilados que se pueden detectar mediante avidina marcada (por ejemplo, estreptavidina que contiene un marcador fluorescente o actividad enzimática que se puede detectar por procedimientos ópticos o colorimétricos). En otra modalidad, la marca o marcador puede ser terapéutica, por ejemplo, un conjugado de fármaco o toxina. Se conocen en la técnica diversos procedimientos de mareaje de polipéptidos y glicoproteínas y se pueden usar. Los ejemplos de marcas para polipéptidos incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: radioisótopos o radionúclidos (por ejemplo, 3H, C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111ln, 125l, 131l), marcas fluorescentes (por ejemplo, FITC, rodamina, agente fosforescente de lantánido), marcas enzimáticas (por ejemplo, peroxidasa de rábano picante, ß-galactosidasa, luciferasa, fosfatasa alcalina), marcadores quimioluminiscentes, grupos de biotinilo, epítopes de polipéptidos predeterminados reconocidos por un reportero secundario (por ejemplo, secuencias de pares de cremalleras de leucina, sitios de unión para anticuerpos secundarios, dominios de unión de metal, etiquetas de epítopes), agentes magnéticos, tales como quelatos de gadolinio, toxinas tales como toxina de tos ferina, taxol, citocalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina, mitomicina, etopósido, tenopósido, vincristina, vinblastina, colchicina, doxorrubicina, daunorrubicina, dihidroxi antracin diona, mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D, 1-deshidrotestosterona, glucocorticoides, procaína, tetracaína, lidocaína, propranolol, y puromicina y análogos u homólogos de los mismos. En algunas realizaciones las marcas están unidas mediante brazos espaciadores de diversas longitudes para reducir los impedimentos estéricos potenciales. Habiendo descrito la invención como antecede, se declara como propiedad lo contenido en las siguientes

Claims (4)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES 1.- Uso de un anticuerpo anti-MAdCAM o parte de unión a antígeno del mismo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedad celíaca y/o esprúe tropical. 2.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el medicamento es para el tratamiento de enfermedad celíaca. 3.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 ó reivindicación 2, en donde el anticuerpo anti-MAdCAM es un anticuerpo monoclonal humano. 4.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 3, en donde el anticuerpo o parte posee al menos una de las siguientes propiedades: a) se une a células humanas; b) tiene una selectividad para MAdCAM sobre VCAM o fibronectina de al menos 100 veces; c) se une a MAdCAM humana con una Kd de 3 x 10"10 M o menos; o d) inhibe la unión de células que expresan a4ß a MAdCAM humana e) inhibe el reclutamiento de linfocitos al tejido linfoide gastrointestinal. 5.- El uso como el que se reclama en las reivindicaciones 1 a 4, en donde dicho anticuerpo o parte de unión a antígeno inhibe la unión de MAdCAM humana a a4ß , y en el que el anticuerpo o parte del mismo tiene al menos una de las siguientes propiedades a) compite de manera cruzada con un anticuerpo de referencia por la unión a MAdCAM b) compite con un anticuerpo de referencia por la unión a MAdCAM; c)se une al mismo epítope de MAdCAM como un anticuerpo de referencia; d) se une a MAdCAM con sustancialmente la misma Kd que un anticuerpo de referencia; e) se une a MAdCAM con sustancialmente la misma velocidad de disociación que un anticuerpo de referencia; en el que el anticuerpo de referencia se selecciona entre el grupo constituido por anticuerpo monoclonal 1.7.2, anticuerpo monoclonal 1.8.2, anticuerpo monoclonal 6.14.2, anticuerpo monoclonal 6.22.2, anticuerpo monoclonal 6.34.2, anticuerpo monoclonal 6.67.1 , anticuerpo monoclonal 6.73.2, anticuerpo monoclonal 6.77.1 , anticuerpo monoclonal 7.16.6, anticuerpo monoclonal 7.20.5, anticuerpo monoclonal 7.26.4, anficuerpo monoclonal 9.8.2, anticuerpo monoclonal 6.22.2-mod, anticuerpo monoclonal 6.34.2-mod, anticuerpo monoclonal 6.67.1 -mod, anticuerpo monoclonal 6.77.1 -mod y anticuerpo monoclonal 7.26.4-mod. 6.- El uso como el que se reclama en las reivindicaciones 1 a 5, en donde la región variable de cadena pesada, la región variable de cadena ligera, o ambas del anticuerpo anti-MAdCAM son al menos 90% idénticas en la secuencia de de aminoácidos a la región o regiones correspondientes de un anticuerpo monoclonal seleccionado entre el grupo constituido por: anticuerpo monoclonal 1.7.2, anticuerpo monoclonal 1.8.2, anticuerpo monoclonal 6.14.2, anticuerpo monoclonal 6.22.2, anticuerpo monoclonal 6.34.2, anticuerpo monoclonal 6.67.1 , anficuerpo monoclonal 6.73.2, anticuerpo monoclonal 6.77.1 , anticuerpo monoclonal 7.16.6, anticuerpo monoclonal 7.20.5, anticuerpo monoclonal 7.26.4, anticuerpo monoclonal 9.8.2, anticuerpo monoclonal 6.22.2-mod, anticuerpo monoclonal 6.34.2-mod, anticuerpo monoclonal 6.67.1 -mod, anticuerpo monoclonal 6.77.1 -mod y anticuerpo monoclonal 7.26.4-mod. 7.- El uso como el que se reclama en las reivindicaciones 1 a 6, en donde el anticuerpo se selecciona entre el grupo constituido por: a) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 2 y la SEC ID N° 4, sin las secuencias señal; b) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 6 y la SEC ID N° 8, sin las secuencias señal; c) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 10 y la SEC ID N° 12, sin las secuencias señal; d) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 14 y la SEC ID N° 16, sin las secuencias señal; e) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 18 y la SEC ID N° 20, sin las secuencias señal; f) un anficuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 22 y la SEC ID N° 24, sin las secuencias señal; g) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 26 y la SEC ID N° 28, sin las secuencias señal; h) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 30 y la SEC ID N° 32, sin las secuencias señal; i) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 34 y la SEC ID N° 36, sin las secuencias señal; j) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 38 y la SEC ID N° 40, sin las secuencias señal; k) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 42 y la SEC ID N° 44, sin las secuencias señal; I) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 46 y la SEC ID N° 48, sin las secuencias señal; m) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 52 y la SEC ID N° 54, sin las secuencias señal; n) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 56 y la SEC ID N° 58, sin las secuencias señal; o) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 60 y la SEC ID N° 62, sin las secuencias señal; p) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 64 y la SEC ID N° 66, sin las secuencias señal; q) un anticuerpo que comprende las secuencias de aminoácidos establecidas en la SEC ID N° 42 y la SEC ID N° 68, sin las secuencias señal. 8.- El uso como el que se reclama en las reivindicaciones 1 a 7, en donde la lisina C-terminal de la cadena pesada se escinde del anticuerpo anti-MAdCAM. 9.- El uso como el que se reclama en las reivindicaciones 1 a 8, en donde el anticuerpo monoclonal o una parte de unión a antígeno del mismo se selecciona entre los siguientes anticuerpos a) la cadena pesada comprende las secuencias de aminoácidos de CDR1, CDR2 y CDR3 de la cadena pesada de un anticuerpo de referencia seleccionado entre el grupo constituido por: 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1-mod, 6.77.1-mod y 7.26.4-mod (b) la cadena ligera comprende las secuencias de aminoácidos de CDR1 , CDR2 y CDR3 de la cadena ligera de un anticuerpo de referencia seleccionado entre el grupo constituido por: 1.7.2, 1.8.2, 6.14.2, 6.22.2, 6.34.2, 6.67.1 , 6.73.2, 6.77.1 , 7.16.6, 7.20.5, 7.26.4, 9.8.2, 6.22.2-mod, 6.34.2-mod, 6.67.1 -mod, 6.77.1 -mod y 7.26.4-mod. a) el anticuerpo comprende una cadena pesada de (a) y una cadena ligera de b); y b) el anticuerpo de c) en el que las secuencias de aminoácidos de CDR de cadena pesada y cadena ligera se seleccionan del mismo anticuerpo de referencia. 10.- El uso como el que se reclama en las reivindicaciones 1 a 9, en donde el anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno comprende: a) una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada de un anticuerpo seleccionado entre el grupo constituido por: 1.7.2 (SEQ ID N° 2); 1.8.2 (SEQ ID N° 6); 6.14.2 (SEQ ID N° 10); 6.22.2 (SEQ ID N° 14); 6.34.2 (SEQ ID N° 18); 6.67.1 (SEQ ID N° 22); 6.73.2 (SEQ ID N° 26); 6.77.1 (SEQ ID N° 30); 7.16.6 (SEQ ID N° 34); 7.20.5 (SEQ ID N° 38); 7.26.4 (SEQ ID N° 42); y 9.8.2 (SEQ ID N° 46); 6.22.2-mod (SEQ ID N° 52); 6.34.2-mod (SEQ ID N° 56); 6.67.1-mod (SEQ ID N° 60); 6.77.1-mod (SEQ ID N° 64);y 7.26.4-mod (SEQ ID N° 42).b) una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera de un anticuerpo seleccionado entre el grupo constituido por:

1.7.2 (SEQ ID N° 4); 1.8.2 (SEQ ID N° 8); 6.14.2 (SEQ ID N° 12); 6.2

2.2 (SEQ ID N° 16); 6.34.2 (SEQ ID N° 20); 6.67.1 (SEQ ID N° 24); 6.7

3.2 (SEQ ID N° 28); 6.77.1 (SEQ ID N° 32); 7.16.6 (SEQ ID N° 36); 7.20.5 (SEQ ID N° 40); 7.26.4 (SEQ ID N° 44); y 9.8.2 (SEQ ID N° 48); 6.22.2-mod (SEQ ID N° 54); 6.3

4.2- mod (SEQ ID N° 58); 6.67.1-mod (SEQ ID N° 62); 6.77.1-mod (SEQ ID N° 66);y 7.26.4-mod (SEQ ID N° 68); o c) ia cadena pesada de (a) y la cadena ligera de (b). 11.- Uso de un anticuerpo anti-integrina cuß?, o parte de unión a antígeno del mismo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedad celíaca y/o esprúe tropical.