MX2007010917A - Metodos y composiciones para modular la actividad de tweak y fn14 - Google Patents

Abstract

Se proporcionan agonistas y antagonistas que modula la actividad de TWEAK y receptor de TWEAK. Los métodos, composiciones y equipos de la invención pueden ser usados en el tratamiento de alteraciones tales como cáncer y enfermedades inmune-relacionadas.

Description

MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA MODULAR LA ACTIVIDAD DE TWEAK Y FN14 CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona agonistas y antagonistas que modulan la actividad de TWEAK y receptor de TWEAK. Más en particular, la invención proporciona métodos, composiciones y equipos que pueden ser usados para modular la actividad de TWEAK y/o receptor de TWEAK sobre células inmunes y para el tratamiento de alteraciones tales como cáncer y enfermedades inmune-relacionadas .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Varios ligandos y receptores pertenecientes a la superfamilia de factor de necrosis de tumor (TNF) han sido identificados en el arte. Incluidos entre tales ligandos están factor alfa de necrosis de tumor ( "TNF-alfa") , factor beta de necrosis de tumor ("TNF-beta" o "linfotoxina-alfa") , linfotoxina-beta ("LT-beta"), ligando CD30, ligando CD27, ligando CD40, ligando OX-40, ligando 4-1BB, LIGHT, ligando Apo-1 (también denominado como ligando Fas o ligando CD95), ligando Apo-2 (también denominado como Apo2L o TRAIL) , TWEAK (también denominado como ligando Apo-3), APRIL, ligando OPG (también denominado como ligando RANK, ODF, o TRANCE), y TALL-1 (también denominado como BlyS, BAFF o THANK) (Véase, por ejemplo, Ashkenazi, Nature Review, 2:420-430 (2002); Ashkenazi y Dixit, Science, 281: 1305-1308 (1998); Ashkenazi y Dixit, Curr. Opin. Célula Biol., 11:255-260 (2000); Golstein, Curr. 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Biol., 7:750-753 (1997) Wallach, Cytokine Reference, Academic Press, 2000, páginas 377-411; Locksley et al., Cell, 104:487-501 (2001); Gruss y Dower, Blood, 85:3378-3404 (1995); Hohman et al., J. Biol. Chem. , 264:14927-14934 (1989); Brockhaus et al., Proc. Nati. Acad. Sci . , 87:3127-3131 (1990); EP 417,563, publicado el 20 de marzo de 1991; Loetscher et al., Cell, 61:351 (1990); Schall et al., Cell, 61:361 (1990); Smith et al., Science, 248 : 1019-1023 (1990) ; Lewis et al., Proc. Nati. Acad. Sci., 88:2830-2834 (1991) ; Goodwin et al., Mol. Cell. Biol., 11:3020-3026 (1991); Stamenkovic et al., EMBO J., 8:1403-1410 (1989); Mallett et al., EMBO J., 9:1063-1068 (1990); Anderson et al., Nature, 390:175-179 (1997); Chicheportiche et al., J. Biol. Chem., 272:32401-32410 (1997); Pan et al., Science, 276:111-113 (1997); Pan et al., Science, 277:815-818 (1997); Sheridan et al., Science, 277:818-821 (1997); Degli-Esposti et al., J. Exp. Med. , 186:1165-1170 (1997); Marsters et al., Curr. 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Ejemplos de tales interacciones de ligando/receptor incluyen el ligando CD40 que se enlaza al receptor CD40 para por ejemplo, promover la diferenciación de células B a células que producen anticuerpo (Grewal et al., Immunol . Res . , 16:59-70 (1997)), ligando de linfotoxina-beta que se enlaza al receptor de linfotoxina-beta para, por ejemplo, influenciar respuestas inmunes humorales al regular el estado de diferenciación de células dendríticas foliculares (Mackay y Browning, Nature, 395:26-27 (1998)), y el ligando OX40 que enlaza el receptor OX40 para, por ejemplo, regular la respuesta de células B a señales de célula T (Flynn et al., J. Exp. Med., 188:297-304 (1998)). Otros pares de ligando/receptor que se han reportado que desempeñan funciones en el sistema inmune incluyen TNF-alfa/TNFR-1 y ligando Fas/Fas. El ligando de familia de TNF denominado como "TWEAK" o "ligando Apo-3" ha sido descrito en la literatura (véase, por ejemplo, WO98/05783; WO98/35061 WO99/19490; US2002/0015703 ) . El ligando TWEAK fue reportado en la literatura como un inductor relativamente débil de apóptosis en lineas celulares transformadas (Chicheportiche et al., J. Biol. Chem. , 272:32401-32410 (1997); Marsters et al., Curr. Biol., 8:525-528 (1998)). La proteina de TWEAK soluble purificada fue usada para inducir la diferenciación y/o muerte de algunas lineas de célula de tumor, en las que se incluyen células de adenocarcinoma HT29, células de carcinoma cervical HeLa, y células de melanoma A375. TWEAK también induce las lineas de células HT29 y A375 para secretar la quimiocina IL-8 y tiene el mismo efecto sobre una linea de célula de fibroblasto, WI-38 (Chicheportiche et al., J. Biol. Chem., 272:32401-32410 (1997)). Además, TWEAK ha estado implicado en regulación angiogénica al inducir la proliferación de una variedad de lineas de célula endoteliales normales y angiogénesis en corneas de rata (Lynch et al., J. Interferon Cytokine Res. 18: A-46 (1998)); Jakubowski et al., J. Cell. Sci . , 115:267-274 (2002); Lynch et al., J. Biol. Chem., 274:8455-8459 (1999)). La expresión de mARN de TWEAK en tejidos de ratón y humanos tales como corazón, cerebro, pulmón, hígado, entre otros tejidos, y órganos linfoides secundarios tales como bazo, y nodos linfáticos ha sido descrita. TWEAK es también expresado sobre monocitos de sangre periférica humana y su expresión se incrementa enseguida de la estimulación de IFN-gamma (Nakayama et al., J. Exp. Med., 192:1373-1380 (2000)) . Un receptor supuesto para TWEAK fue descrito previamente en la literatura (Marsters et al., Curr. Biol. 8: 525-528 (1998)) . Este receptor, denominado como TRAMP, Apo-3, WSL-1, DR3, o LARD, es un miembro de la familia de TNFR. La se reportó que la activación de TRAMP induce apóptosis al relacionarse ya sea con la ruta de señalización de muerte celular dependiente de caspasa o activación celular vía rutas de señalización de NF-kB (Ashkenazi y Dixit, Science, 281:1305-1308 (1998)) . En el presente, se cree que TRAMP/Apo-3/DR3 puede ciertamente no ser un receptor fisiológica de alta afinidad por TWEAK. Otro receptor que se enlaza a TWEAK, llamado Fn-14, también ha sido identificado. Fn-14 es una proteína de 14-kDa inducible de factor de crecimiento de fibroblasto (Wiley et al., Immunity, 15:837-846 (2001)), y es un miembro de la familia de TNFR relacionado distantemente que contiene solo un dominio rico en cisteína en dominio extracelular junto con una porción de enlace de TRAF en el dominio intracelular . TWEAK, que actúa por medio de este receptor, induce el procesamiento de NF-KB2 plOO y la activación de NF-KB de larga duración (Saitoh et al., J. Biol. Chem., 278:36005-36012 (2003)).

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Se cree que el miembro de la familia de ligando de TNF, TWEAK, actúa como una citocina proinflamatoria . Como se muestra en los ejemplos posteriormente en la presente, se encontró que TWEAK desempeña una función importante en cortar la respuesta infamatoria innata también como la transición de inmunidad innata a THi adaptable. Asi, al modular tal (es) actividad (es ) ya sea de manera agonista o antagonista, varias alteraciones tales como cáncer o condiciones inmune relacionadas pueden ser tratadas. La presente invención proporciona composiciones que enlazan TWEAK y/o receptor de TWEAK y modulan la actividad de TWEAK y/o receptor de TWEAK en, por ejemplo, una manera agonista o antagonista. Un antagonista de TWEAK o receptor de TWEAK puede ser empleado, por ejemplo, para bloquear o neutralizar la actividad de TWEAK y/o receptor de TWEAK. Tales composiciones, y métodos que usan las composiciones, pueden ser empleados para tratar una variedad de alteraciones, en los que se incluyen cáncer y enfermedades autoinmunes. A manera de ejemplo, los anticuerpos antagonistas que se enlazan a TWEAK y neutralizan o bloquean la actividad de TWEAK sobre células inmunes, pueden ser usadas para mejorar los efectos y números de células exterminadores naturales (NK) en un mamífero para inhibir patologías asociadas con alteraciones del sistema inmune innatas excesivas y/o adaptables. Las composiciones de la invención incluyen anticuerpos monoclonales que se enlazan a TWEAK y/o receptor de TWEAK, proteínas de fusión TWEAK-receptor-Ig solubles, u otras moléculas que pueden antagonizar la actividad de TWEAK y/o receptor de TWEAK. La invención proporciona métodos para el tratamiento de una alteración, tal como cáncer o infección, que comprende administración de una composición que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un antagonista de TWEAK y un portador aceptable. El antagonista de TWEAK puede ser un anticuerpo dirigido contra un ligando de TWEAK; un anticuerpo dirigido contra un receptor de TWEAK; un agente que modifica el enlace del ligando de TWEAK a un receptor de TWEAK; y un agente que puede interrumpir la señalización intracelular de un receptor de TWEAK. En una modalidad preferida, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. En una modalidad más preferida el anticuerpo monoclonal es dirigido contra el ligando de TWEAK. El antagonista de TWEAK puede ser un receptor de TWEAK soluble que tiene un dominio de enlace de ligando que se puede enlazar selectivamente a un ligando de TWEAK. En una modalidad el receptor de TWEAK soluble puede incluir un dominio de IgG de inmunoglobulina humano. La invención incluye además métodos para mejorar las respuestas o actividad de TH1 innatas en un mamífero, que incluyen administración de una composición que comprende una cantidad efectiva de un antagonista de TWEAK y opcionalmente un portador farmacéuticamente efectivo. La invención incluye además métodos para mejorar la actividad de célula NK en un mamífero, que incluyen administrar una composición que comprende una cantidad efectiva de un antagonista de TWEAK y opcionalmente un portador farmacéuticamente efectivo. En modalidades adicionales, un agonista de TWEAK o receptor de TWEAK puede ser usado, por ejemplo, para estimular o mejorar la actividad de TWEAK y/o receptor de TWEAK. La presente invención proporciona composiciones que se enlazan a TWEAK y/o receptor de TWEAK y estimulan o mejoran la actividad de TWEAK y/o receptor de TWEAK. Tales composiciones y métodos que usan las composiciones, pueden ser usadas para tratar una variedad de alteraciones, en las que se incluyen enfermedades inmune-relacionadas tales como enfermedades autoinmunes. A manera de ejemplo, los anticuerpos agonistas que se enlazan al receptor de TWEAK y estimulan o mejoran la actividad de receptor de TWEAK pueden ser usados para mejorar enfermedades autoinmunes THl-impulsadas , tales como Enfermedad de Crohn, enfermedad de intestino inflamatorio, esclerosis múltiple y artritis . La invención proporciona métodos para tratamiento de una condición inmune-relacionada, que comprende administrar una composición que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un agonista de TWEAK o receptor de TWEAK y un portador aceptable. El agonista de TWEAK puede ser un anticuerpo dirigido contra un receptor de TWEAK. En una modalidad preferida, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. En una modalidad más preferida, el anticuerpo monoclonal es dirigido contra el receptor de TWEAK. Modalidades adicionales son ilustradas, pero no se proponen estar limitadas por las siguientes reivindicaciones ej emplares : 1. Un método para el tratamiento de cáncer, que comprende exponer células de cáncer de mamífero a una cantidad efectiva de una molécula antagonista, en donde el antagonista es seleccionado del grupo que consiste de: (a) anticuerpo anti-TWEAK; (b) anticuerpo de receptor de anti-TWEAK; (c) inmunoadhesina de receptor de TWEAK; y (d) un agente o molécula que bloquea o interrumpe la señalización intracelular del receptor de TWEAK. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la inmunoadhesina de receptor de TWEAK comprende una secuencia de receptor de TWEAK fusionada a una región de Fe de una inmunoglobulina . 3. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la secuencia de receptor de TWEAK comprende una secuencia de dominio extracelular del receptor de FN14. 4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo anti-TWEAK se enlaza al polipéptido de TWEAK humano que comprende los aminoácidos 94-249 de la figura 11. 5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el anticuerpo anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano. 6. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo de receptor anti-TWEAK se enlaza al polipéptido del receptor de FN14 humano que comprende la secuencia de aminoácidos de la figura 12. 7. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el anticuerpo de receptor de anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano. 8. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células de cáncer de mamífero son también respuestas a quimioterapia, radiación, profármaco, agente citotóxico o agente inhibidor de crecimiento. 9. Un método para mejorar la actividad de célula NK en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de una molécula antagonista, en donde el antagonista es seleccionado del grupo que consiste de: (e) anticuerpo anti-TWEAK; (f) anticuerpo de receptor anti-TWEAK; (g) inmunoadhesina del receptor de TWEAK; y (h) un agente o molécula que bloquea o interrumpe la señalización intracelular del receptor de TWEAK. 10. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la inmunoadhesina del receptor de TWEAK comprende una secuencia de receptor de TWEAK fusionada a una región de Fe de una inmunoglobulina . 11. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la secuencia del receptor de TWEAK comprende una secuencia de dominio extracelular del receptor de FN14. 12. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el anticuerpo anti-TWEAK se enlaza al polipéptido de TWEAK humano que comprende los aminoácidos 94-249 de la figura 11. 13. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el anticuerpo anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano. 14. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el anticuerpo del receptor anti-TWEAK se enlaza al polipéptido del receptor de FN14 humano que comprende la secuencia de aminoácidos de la figura 12. 15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el anticuerpo de receptor anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano. 16. Un método para mejorar respuestas o actividad de TH1 innatas en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de una molécula antagonista, en donde el antagonista es seleccionado del grupo que consiste de: (i) anticuerpo anti-TWEAK; (j) anticuerpo de receptor anti-TWEAK; (k) inmunoadhesina del receptor de TWEAK; y (1) agente o molécula que bloquea o interrumpe la señalización intracelular de receptor de TWEAK. 17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracteri ado porque la inmunoadhesina del receptor de TWEAK comprende una secuencia del receptor de TWEAK fusionada a una región de Fe de una inmunoglobulina . 18. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la secuencia del receptor de TWEAK comprende una secuencia de dominio extracelular del receptor de FN14. 19. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el anticuerpo de anti-TWEAK se enlaza al polipéptido de TWEAK humano que comprende los aminoácidos 94-249 de la figura 11. 20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el anticuerpo anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano. 21. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el anticuerpo del receptor de anti-TWEAK se enlaza al polipéptido del receptor de FN14 humano que comprende la secuencia de aminoácidos de la figura 12. 22. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el anticuerpo del receptor de anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano. 23. Un método para el tratamiento de una alteración TH2 moderada en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de una molécula antagonista, en donde el antagonista es seleccionado del grupo que consiste de: (m) anticuerpo anti-TWEAK; (n) anticuerpo de receptor anti-TWEAK; (o) inmunoadhesina del receptor de TWEAK; y (p) un agente o molécula que bloquea o interrumpe la señalización intracelular del receptor de TWEAK. 24. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la inmunoadhesina del receptor de TWEAK comprende una secuencia de receptor de TWEAK fusionada a una región de Fe de una inmunoglobulina . 25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la secuencia del receptor de TWEAK comprende una secuencia de dominio extracelular del receptor de FN14. 26. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque el anticuerpo anti-T EAK se enlaza al polipéptido de TWEAK humano que comprende los aminoácidos 94-249 de la figura 11. 27. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el anticuerpo anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano. 28. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque el anticuerpo de receptor de anti-TWEAK se enlaza al polipéptido del receptor de FN14 humano que comprende la secuencia de aminoácidos de la figura 12. 29. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el anticuerpo del receptor de anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano. 30. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la alteración TH2 moderada es alergia o asma. 31. Un método para el tratamiento de una alteración inmune-relacionada , caracterizado porque comprende administrar a un mamífero una cantidad efectiva de una molécula agonista, en donde el agonista es seleccionado del grupo que consiste de: (a) anticuerpo de receptor de anti-TWEAK; (b) polipéptido de TWEAK; y (c) una variante del polipéptido de TWEAK. 32. El método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el anticuerpo de receptor de anti-TWEAK se enlaza al polipéptido del receptor de FN14 humano que comprende la secuencia de aminoácidos de la figura 12. 33. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el anticuerpo de receptor de anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano. 3 . El método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque la alteración inmune-relacionada es una enfermedad autoinmune. 35. El método de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque la enfermedad autoinmune e s Enfermedad de Crohn, enfermedad del intestino inflamatorio, esclerosis múltiple o artritis.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figuras 1A-1B. TWEAK y su receptor FN14, son expresados sobre células del sistema inmune innato. (1A) PBMC humanos, ambos que reposan ("sin estimulo") y activados por 12 horas ya sea con IFN-gamma o PMA, fueron teñidos en la superficie con anticuerpos a marcadores de linaje de linfocito, permeabilizados, teñidos con anticuerpo de TWEAK y analizados mediante FACS . (Macrófagos ("raac") , células dendriticas ( " DC" ) , células NK y células NKT) . (IB) PBMC humano, tanto en reposo como activados, fueron teñidos en la superficie para el receptor T EAK, FN14. Figuras 2A-2D. Ratones KO por TWEAK tienen números mayores de células NK en tejidos hematopoyéticos secundarios. (2A, 2B) El bazo, sangre periférica, parches de Peyer y nodos linfáticos fueron aislados de ratones TWEAK+/+ de dos meses (barras negras) o ratones TWEAK'/' (barras blancas) (n = 6/grupo) , células NK disociadas, (a) o células NKT, (b) fueron cuantificadas mediante análisis de FACS . (Gráficas superiores: machos; gráficas inferiores: hembras). (2C) La médula ósea (0.5 mL) fue aspirada de los fémures derechos de ratones TWEAK*/+ (barras negras) o ratones TWEAK'/' (barras blancas) (n = 6/grupo) (gráfica izquierda: machos; gráfica derecha: hembras) y las células NK fueron cuantificadas . (2D) PBMC humanos fueron aislados de sangre entera y sometidos a muerte celular inducida por activación mediante estimulación con TNF-alfa, LPS o IFN-gamma, en presencia de varias concentraciones de FN14 Fe (cuadrados cerrados), mAb anti-TWEAK (cuadrados abiertos), EDAR Fe (circuios cerrados) o mAB anti-CD4 (circuios abiertos) . Luego las células NK fueron aisladas y teñidas en cuanto a su contenido de sub-Gl . Figuras 3A-3C. La ablación de TWEAK o inhibición aumenta la respuesta inflamatoria innata a endotoxina. (3A) Ratones TWEAK*/+ y TWEAK' ' (n = 10 por grupo) fueron inyectadas i.p. con las dosis indicadas de LPS y la viabilidad fue monitoreada en un período de 5 días. (3B) células NK y macrófagos fueron aislados de la sangre periférica y el bazo de ratones TWEAí /+ y TWEAK~/~ 24 horas después tratamiento in vivo con LPS (30 mg/kg) y teñidos en cuanto a niveles intracelulares de IFN-gamma, IL-12 y IL-10. (3C) PBMC de cuatro donadores humanos fueron estimulados por 24 horas con LPS. Subsecuentemente, las células NK o macrófagos (identificados por marcadores de linaje) fueron teñidos a cuanto a niveles intracelulares de IFN-gamma e IL-12, respectivamente. Figuras 4A-4C. Implicación de TWEAK en modulación de STAT-1 y NF-???. (4A) Análisis de activación de STAT-1. Células NK humanas y macrófagos fueron estimulados por 12 horas in vitro con LPS (1 yg/mL) , teñidos en la superficie en cuanto a marcadores de linaje, permeabili ados y teñidos en cuanto a niveles intracelulares de STAT-1 fosforilado. Los paneles superiores ilustran células NK y los paneles inferiores ilustran macrófagos (con los histogramas de FACS resumidos con gráficas de barras a la derecha). (4B) Análisis de fosforilación de NF-???. Células NK humanas esplénicas y macrófagos fueron estimulados con TWEAK o TNF-alfa (100 ng/mL) durante 24 horas. Lisados celulares fueron preparados a los puntos en el tiempo indicados y analizados en cuanto a NF-??? p65 fosforilado mediante inmunoabsorción . (4C) Análisis de interacciones de NF-???. NF-KB1 fue inmunoprecipitado por medio de p65 de lisados de células estimuladas con TWEAK- o TNF-alfa y los inmunoprecipitados fueron analizados mediante inmunoabsorción en cuanto a la presencia de p300 y HDAC-1. Figuras 5A-5E. ratones TWEAK'/' envejecidos tienen bazos más grandes con memoria expandida y compartimientos de célula TH1. Compañeros de cama de ratón machos TWEAK+/+ y TWEAFC /_ fueron criados a 3, 6 o 12 meses de edad y sus bazos y nodos linfáticos fueron examinados. (5A) Imágenes representativas de un bazo de un ratón TWEAK+/+ y TWEAK~/~ . (5B) Pesos de bazo promedio como función de la edad (n = 6 por grupo) . (5C) Imágenes representativas de secciones de bazo de ratones TWEAK*/+ y TWEAK' ~ de 12 meses de edad teñidos con anticuerpo CD3. (5D,5E) Esplenocitos de ratones tipo de 12 meses de edad y compañeros de cama TWEAK KO fueron analizados mediante FACS para determinar los números de células T CD3+, CD4+ y CD8+ (5D) y de memoria y células T TH1 (5E) . Figuras 6A-6C. La cancelación de TWEAK inhibe el establecimiento y crecimiento de melanomas B16.F10 y promueve la expansión de células T CD8+ adaptables. Ratones TWEAK+/+ y TWEAK'''' fueron inyectados s.c. con 100,000 células B16.F10 y el crecimiento de tumor (A) o incidencia (B) fueron monitoreados durante 6 semanas (6A, 6B) . En la terminación célula estudio, los bazos fueron cosechados de los ratones inyectados y analizados en cuanto a los subconjuntos de linfocito indicados (6C) . Figuras 7A-7E. La cancelación de TWEAK inhibe el crecimiento de tumor B16.BL6 y promueve el cebado innato a adaptable de una respuesta inmune anti-tumor. Ratones TWEAK*/+ y TWEAK~/~ fueron inyectados s.c. con 500,000 células B16.BL6 y los pesos de tumor (7A) o pesos de bazo (7B) fueron determinados a un mes. (7C) Esplenocitos de ratones que llevan tumor fueron teñidos por varias poblaciones de linaje y analizados mediante FACS. (7D) células NK y macrófagos aislados de ratones que llevan tumor fueron analizados en cuanto a producción de citocina mediante teñido intracelular y FACS. (7E) Células T CD4+ y CD8+ de ratones que llevan tumor fueron analizadas similarmente en cuanto a producción de IFN-gamma. (*) denota significado estadístico de citocina basal (p<0.01); (**) denota significado estadístico de citocina inducida por tumor (p<0.01) . Figuras 8A-8G. Caracterización de ratones TWEAK_/~ . (8A) Estructura del sitio genómico de TWEAK de ratón. Los bloques corresponden a las regiones genómicas que contienen los genes TWEAK (barras blancas), APRIL (barras negras) y SMT3IP1 (barras grises) . Las orientaciones de los tres genes son marcadas por flechas. (8B) representación esquemática del constructo de apuntamiento designado para reemplazar la secuencia de codificación de exones seis y siete del gen TWEAK con un neocaset. (8C) Estructura de la región mutada en el gen TWEAK. Las posiciones de las sondas externas 5' y 3' usadas para análisis de Southern blot de células ES son indicadas por barras. Las posiciones de los conjuntos de cebador usados para análisis de genotipo de ADN de cola de ratón son indicadas cabezas de flecha negras (externas) y grises (interna). (8D) análisis de Southern blot de recombinación del gen TWEAK. Análisis de ADN Bsml (DI) y NarI (DII) digerido derivado de varios clones de células ES. ADN fue digerido y fraccionado sobre un gel de agarosa al 0.7%, inmunoabsorbido sobre una membrana de nylon e hibridizado con sondas 5' (DI) y 3' (DII) . (8E) Genotipo de ratones TWEAK_ ~mediante PCR. ADN genómico derivado de cola fue sometido a amplificación de PCR con conjuntos externos e internos empalmados de cebadores para visualizar genes TWEAK tipo silvestre o genes TWEAK mutantes de cancelación como fragmentos de 4.3 kB o 5.3 kB, respectivamente. (8F) Expresión de TWEAK en esplenocitos totales derivados de ratones TWEAK+/+ y TWEAK_ " tal como se determina mediante FACS utilizando anticuerpo monoclonal de TWEAK anti-ratón (negro) o sobre un control de isotipo (linea gris y área rellena) . (8G) Análisis de PCR en tiempo real cuantitativo de expresión de mARN de TWEAK (barras blancas), APRIL (barras negras) y SMT3IP1 (barras grises) en bazos de ratones TWEAK+/+, TWEAK+ " y TWEAK"7'. Todos los valores fueron normalizados a un control interno de ARN RPL19. Las desviaciones estándar fueron calculadas de reacciones por triplicado . Figura 9. Ratones TWEAK _/~ que tienen mayor infiltrado linfocitico de tumor. Tumores B16.BL6 fueron recolectados de ratones TWEAK+/+ y TWEAK"7" a 1 mes, disociados y RBC fueron sometidos a lisis. Después de bloqueo de Fe, células de tumor disociadas fueron tañidas en cuanto a marcadores de linaje de linfocito y analizadas mediante FACS . Las barras negras representan el infiltrado de linfocito de tumor designado de ratones TWEAK+ +; las barras blancas representan el infiltrado de linfocito de tumor designado de ratones TWEAK" ". Figura 10. La Tabla muestra pesos de cuerpo/órgano de 2 meses de edad (g) de ratones TWEAK +/+ y TWEAK -/-. Figura 11. Secuencia de aminoácidos de ligando TWEAK humano (SEQ ID NO: 1) . Figura 12. Secuencia de aminoácidos de receptor FN14 humano (SEQ ID NO: 2) .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Las técnicas y procedimientos descritos o a los que se hace referencia en la presente son en general bien entendidos y usados comúnmente empleando metodología convencional por aquellos experimentados en el arte, tal como por ejemplo, las metodologías de clonación molecular ampliamente utilizadas descritas en Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2nd. Edition (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. como se apropiado, los procedimientos que involucran el uso de equipos y reactivos disponibles comercialmente se llevan a cabo en general de acuerdo con los protocolos definidos por el fabricante y/o parámetros a no ser que se indique de otra manera . Antes de que los métodos y análisis presentes sean descritos, se comprenderá que esta invención no está limitada a la metodología, protocolos, líneas celulares, especies o géneros animales, constructos y reactivos particulares descritos ya que por supuesto pueden variar. También se comprenderá que la terminología usada en la presente es por el propósito de describir modalidades particulares solamente y no pretende limitar el alcance de la invención que será limitado solamente por las reivindicaciones adjuntas. Se debe notar que como se usa en la presente y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "uno", "una" y "el" incluyen referencias plurales, a no ser que el contexto lo determine claramente de otra manera. Así, por ejemplo la referencia a "una alteración genética" incluye una pluralidad de tales alteraciones y la referencia a "una sonda" incluye referencia a una o más sondas y equivalentes de las mismas conocidos para aquellos experimentados en el arte y así sucesivamente . Todas las publicaciones mencionadas en la presente son incorporadas en la presente por referencia para revelar y describir los métodos y/o materiales en relación con las cuales las publicaciones son citadas. Las publicaciones citadas en la presente son citadas en cuanto a su revelación antes de la fecha de presentación de la presente solicitud, nada en la presente se interpretará como admisión de que los inventores no tienen derecho para anticiparse a las publicaciones en virtud de una fecha de prioridad anterior o fecha de invención previa. Además, las fechas de publicación reales pueden ser diferentes de aquellas mostradas y requieren verificación independiente.

I . DEFINICIONES Los términos "TWEAK" o "ligando de TWEAK" son usados en la presente para referirse a una secuencia de polipéptidos que incluye residuos de aminoácidos 1-249 de la figura 11, 47-249 de la figura 11 o 94-249 de la figura 11, inclusive, también como fragmentos biológicamente activos, variantes de cancelación, inserción o sustitución de las secuencias anteriores. En una modalidad, la secuencia de polipéptidos comprende residuos 47-249 de la figura 11 y opcionalmente, consiste de los residuos 94-249 de la figura 11. En otras modalidades, los fragmentos o variantes son biológicamente activos y tienen por lo menos aproximadamente 80% de identidad de secuencia de aminoácidos, más preferiblemente al menos por lo menos aproximadamente 90% de identidad de secuencia y aún más preferiblemente, por lo menos 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad de secuencia con cualquiera de las secuencias citadas anteriormente. Opcionalmente, el polipéptido de TWEAK es codificado por una secuencia de nucleótidos que hibridiza bajo condiciones severas con la secuencia de polinucleótidos que codifica TWEAK. La definición también abarca un TWEAK de secuencia natural aislado de una fuente de TWEAK fuente o preparado mediante métodos recombinantes o sintéticos. Toda la numeración de residuos de aminoácidos a los que se hace referencia en la secuencia TWEAK utiliza la numeración de acuerdo con la figura 11, a no ser que se afirme específicamente de otra manera. El término "dominio extracelular" o "ECD" se refiere a una forma de una proteína, tal como TWEAK, que está esencialmente libre de dominios de transmembrana y citoplásmicos . Ordinariamente, el ECD tendrá menos de 1% de tales dominios de transmembrana y citoplásmicos y preferiblemente, tendrá menos de 0.5% de tales dominios. Se comprenderá que cualesquier dominios de transmembrana identificados para los polipéptidos de la presente invención son identificados de acuerdo con criterios empleados sistemáticamente en el arte para identificar aquel tipo de dominio hidrofóbico. Las fronteras exactas de un dominio de transmembrana pueden variar pero más probablemente por no más de aproximadamente 5 aminoácidos ya sea en un extremo u otro del dominio como se identifica inicialmente . En modalidades preferidas, el ECD consistirá de una secuencia de dominio extracelular soluble del polipéptido que está libre de los dominios de transmembrana y citoplásmico o intracelular (y no es limitado por membrana) . Secuencias de dominio extracelulares particulares de TWEAK son descritas en Marsters et. al., Curr. Biol., 8:525-528 (1998), Chicheportiche et al., JBC, 272:32401-32410 (1997) . Los términos "ligando de TWEAK" o "TWEAK" se refieren a cualquier complejo monomérico de TWEAK, polimérico o heteromérico o derivado de los mismos. "Receptor de TWEAK" se refiere a uno o más receptores que son capaces de enlazarse al ligando de TWEAK descrito anteriormente. "Receptor de TWEAK" en la presente incluye el receptor al que se hace referencia en el arte como "Fn-14" o "FN14" y su secuencia de polipéptidos que comprende aminoácidos 1-129 mostrados en la figura 12. El receptor Fnl4 receptor es también descrito en Wiley et al., Immunity, 15:837-846 (2001). El término "receptor de TWEAK" cuando se usa en la presente abarca receptor de secuencia natural y variantes de receptor. Estos términos abarcan receptor de TWEAK expresado en una variedad de mamíferos, en los que se incluyen humanos. El receptor TWEAK puede ser expresado endógenamente como ocurre naturalmente en una variedad de linajes de tejido humano o puede ser expresado mediante métodos recombinante o sintéticos. Un "receptor de TWEAK de secuencia natural" comprende un polipéptido que tiene la misma secuencia de aminoácidos como un receptor TWEAK derivado de la naturaleza. Así, un receptor de TWEAK de secuencia natural puede tener la secuencia de aminoácidos de del receptor de TWEAK que se presenta de manera estable en la naturaleza de cualquier mamífero. Tal receptor de TWEAK de secuencia natural puede ser aislado de la naturaleza o puede ser producido mediante medios recombinantes o sintéticos . El término "receptor de TWEAK de secuencia natural" abarca específicamente formas truncadas o secretadas que se presentan de manera estable en la naturaleza del receptor (por ejemplo, un forma soluble que contiene, por ejemplo, una secuencia de dominio extracelular ) , formas variantes que se presentan de manera estable en la naturaleza (por ejemplo, formas empalmadas alternativamente) y variantes alélicas que se presentan de manera estable en la naturaleza. Variantes de receptor pueden incluir fragmentos o mutantes de cancelación del receptor de TWEAK de secuencia natural. El término "anticuerpo anti-TWEAK" se refiere a cualquier anticuerpo que se enlaza a por lo menos un epítopo del ligando de TWEAK. Opcionalmente el anticuerpo TWEAK es fusionado o enlazado a una secuencia o molécula heteróloga. Preferiblemente la secuencia heteróloga permite o ayuda al anticuerpo a formar complejos de orden superior o complejos oligoméricos . Opcionalmente, el anticuerpo TWEAK se enlaza a TWEAK pero no se enlaza a reacciona de manera cruzada con cualesquier ligando de la familia de TNF adicionales (por ejemplo, ligando Fas, Apo2L/TRAIL, TNF-alfa, etc.). Opcionalmente el anticuerpo es una agonista o antagonista de TWEAK y/o actividad de receptor de TWEAK. Opcionalmente, el anticuerpo TWEAK de la invención se enlaza a un ligando TWEAK a un intervalo de concentración de aproximadamente 0.1 nM a aproximadamente 20 mM tal como se mide en un análisis de enlace BIAcore. Opcionalmente, los anticuerpos TWEAK de la invención exhiben un valor Ic 50 de aproximadamente 0.6 nM a aproximadamente 18 mM como se mide en un análisis de enlace BIAcore. El término "anticuerpo de receptor anti-TWEAK" se refiere a cualquier anticuerpo que se enlaza a por lo menos un epitopo de un receptor de TWEAK. Opcionalmente el anticuerpo de receptor de TWEAK es fusionado o enlazado a una secuencia o molécula heteróloga. Preferiblemente la secuencia heteróloga permite o ayuda al anticuerpo a formar complejos de orden superior o complejos oligoméricos . Opcionalmente, el anticuerpo de receptor de TWEAK se enlaza a un receptor de TWEAK pero no se enlaza o reacciona de manera cruzada con cualesquier receptores de la familia de TNF adicionales (por ejemplo, FAS, DR4, DR5, TNFRI, TNFRII, etc.). Opcionalmente el anticuerpo es una agonista o antagonista de actividad de receptor de TWEAK. Opcionalmente, el anticuerpo de receptor de TWEAK de la invención se enlaza a un receptor de TWEAK a un intervalo de concentración de aproximadamente 0.1 nM a aproximadamente 20 mM tal como se mide en un análisis de enlace de BIAcore. Opcionalmente, los anticuerpos de receptor de TWEAK de la invención exhiben un valor de Ic 50 de aproximadamente 0.6 nM a aproximadamente 18 mM tal como se mide en un análisis de enlace de BIAcore. El término "antagonista" es usado en el sentido más amplio e incluye cualquier molécula que bloquea, inhibe o neutraliza parcial o una o más actividades biológicas de TWEAK o receptor de TWEAK, in vitro, in situ o in vivo. Ejemplos de tales actividades biológicas de TWEAK o receptor de TWEAK incluyen enlace de TWEAK a receptor de TWEAK, activación de fosforilación de NF-kB o inhibición de fosforilación de STAT-1, producción de IL-8, inhibición de IFN-? y secreción de IL-12, promoción de AICD de célula NK, promoción de angiogénesis o promoción de crecimiento del tumor. Un antagonista puede funcionar de manera directa o indirecta. Por ejemplo, el antagonista puede funcionar para bloquear, inhibir o neutralizar parcial o plenamente una o más actividades biológicas de TWEAK o receptor de TWEAK, in vitro, in situ, o in vivo como resultado del enlace directo de TWEAK al receptor de TWEAK. El antagonista puede también funcionar indirectamente para bloquear, inhibir o neutralizar parcial o plenamente una o más actividades biológicas de TWEAK o receptor de TWEAK, in vitro, in situ o in vivo como resultado de, por ejemplo, bloqueo o inhibición de otra molécula efectora. La molécula antagonista puede comprender una actividad antagonista "doble" en donde la molécula es capaz de bloquear, inhibir o neutralizar parcial o plenamente una actividad biológica tanto de TWEAK como de receptor de TWEAK. El término "antagonista de TWEAK" se refiere a cualquier molécula que bloquea, inhibe o neutraliza parcial o plenamente una actividad biológica de TWEAK o receptor de TWEAK, respectivamente, o tanto de TWEAK como receptor de TWEAK, e incluyen, pero no están limitados a, formas solubles de receptor de TWEAK tal como una secuencia de dominio extracelular de receptor de TWEAK, inmunoadhesina del receptor de TWEAK, proteínas de fusión de receptor de TWEAK, formas modificadas covalentemente del receptor de TWEAK, anticuerpos de receptor de TWEAK, y anticuerpos de TWEAK. Para determinar si una molécula antagonista de TWEAK bloquea, inhibe o neutraliza parcial o plenamente una actividad biológica de TWEAK o receptor de TWEAK, se puede llevar a cabo análisis para determinar el (los) efecto (s) de la molécula antagonista sobre, por ejemplo, el enlace de TWEAK al receptor de TWEAK o activación de fosforilación de NF-kB o inhibición de fosforilación de STAT-1, o inhibición de producción de IFN-? o IL-12, o activación de muerte celular. Tales análisis pueden ser llevados a cabo en formatos de análisis in vitro o in vivo conocidos, por ejemplo, en células NK, macrófagos y células dendríticas. En una modalidad, el antagonista de TWEAK comprenderá un anticuerpo monoclonal o una proteína de fusión de ECD-Fc de receptor de TWEAK soluble. El término "agonista" es usado en el sentido más amplio e incluye cualquier molécula que estimula, mejora o induce parcial o plenamente una o más actividades biológicas de TWEAK o receptor de TWEAK, in vitro, in situ o in vivo. Ejemplos de tales actividades biológicas de TWEAK o receptor de TWEAK incluyen enlace de TWEAK a receptor de TWEAK, o activación de fosforilación de NF-kB o inhibición de fosforilación de STAT-1, o inhibición de producción de IFN-? o IL-12 o activación de muerte celular. Un agonista puede funcionar de manera directa o indirecta. La molécula agonista puede comprender una actividad agonista "doble" en donde la molécula es capaz de estimular, mejorar o inducir parcial o plenamente una actividad biológica tanto de TWEAK como de receptor de TWEAK. El término "agonista de TWEAK" se refiere a cualquier molécula que estimula, mejora o induce parcial o plenamente una actividad biológica de TWEAK o receptor de TWEAK, respectivamente, o tanto TWEAK como receptor de TWEAK, e incluyen, pero no están limitados a, polipéptidos de TWEAK y variantes del mismo y anticuerpos de receptor de TWEAK. Para determinar si una molécula agonista de TWEAK estimula, mejora o induce parcial o plenamente una actividad biológica de TWEAK o receptor de TWEAK, se pueden llevar a cabo análisis para determinar el (los) efecto (s) de la molécula agonista sobre, por ejemplo, la producción de IL-8, fosforilación de NF-kB, o inhibición de producción de IFN-gamma o IL-12. Tales análisis pueden ser llevados a cabo en formatos de análisis in vitro o in vivo conocidos, por ejemplo ELISA, producción de citocina intracelular o análisis de reportero. En una modalidad, el agonista de TWEAK comprenderá proteina recombinante . El término "mamífero" como se usa en la presente se refiere a cualquier mamífero clasificado como mamífero, en los que se incluyen humanos, vacas, caballos, perros y gatos. En una modalidad preferida de la invención, el mamífero es un humano . "Ácido nucleico" incluirá ya sea cualquier ADN o AR . Por ejemplo, ácido nucleico cromosomal, mitocondrial, viral y/o bacteriano presente en muestra de tejido. El término "ácido nucleico" abarca ya sea una u otra o ambas hebras de una molécula de ácido nucleico de doble hebra e incluye cualquier fragmento o porción de una molécula de ácido nucleico intacta. "Gen" significa cualquier secuencia de ácido nucleico o porción de la misma con un papel funcional en la codificación o transcripción de una proteína o regulación de otra expresión genética. El gen puede consistir de todos los ácidos nucleicos responsables por la codificación de una proteína funcional o solamente una porción de los ácidos nucleicos responsables por la codificación o expresión de una proteína. La secuencia de ácido nucleico porque contener una anormalidad genética dentro de exones, intrones, regiones de inicio o terminación, secuencias de promotor, otras secuencias regulatorias o regiones adyacentes únicas al gen. La palabra "marcador" cuando se usa en la presente se refiere a un compuesto o composición que es conjugado o fusionado directa o indirectamente a un reactivo tal como una sonda de ácido nucleico o un anticuerpo y facilita la detección de reactivo al cual es conjugado o fusionado. El marcador puede por si mismo detectable (por ejemplo, marcadores de radioisótopo o marcadores fluorescentes) o en el caso de un marcador enzimático, puede catalizar la alteración química de un compuesto sustrato o composición que es detectable. El término "anticuerpo" se usa en la presente en el sentido más amplio y cubre específicamente anticuerpos monoclonales intactos, anticuerpos policlonales, anticuerpos multiespecífieos (por ejemplo, anticuerpos bisespecífieos ) formados de por lo menos dos anticuerpos intactos y fragmentos de anticuerpo en tanto que exhiban la actividad biológica deseada . "Fragmentos de anticuerpo" comprenden una porción de un anticuerpo intacto, que comprende preferiblemente la región de enlace de antígeno o región variable del mismo. Ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen fragmentos de Fab, Fab ' , F(ab')2, y Fv; diacuerpos; anticuerpos lineales; moléculas de anticuerpo de una sola cadena; y anticuerpos multiespecificos formados a partir de fragmentos de anticuerpo. "Anticuerpos naturales" son usualmente glicoproteinas heterotetraméricas de aproximadamente 150,000 daltons, compuestas de dos cadenas ligeras (L) idénticas y dos cadenas pesadas (H) idénticas. Cada cadena ligera está enlazada a una cadena pesada mediante un enlace de disulfuro covalente, en tanto que el número de enlaces de disulfuros varia entre las cadenas pesadas de diferentes isotipos de inmunoglobulina . Cada cadena pesada y ligera también tiene puentes de disulfuro de intracadena espaciados regularmente. Cada cadena pesada tiene en un extremo un dominio variable (VH) seguido por un número de dominios constantes. Cada cadena ligera tiene un dominio variable en un extremo (VL) y un dominio constante en su otro extremo; el dominio constante de la cadena ligera es alineado con el primer dominio constante de la cadena pesada, y el dominio variable de cadena ligera es alineado con el variable dominio de la cadena pesada. Se cree que residuos de aminoácido particulares forman una inferíase entre los dominios variables de cadena ligera y cadena pesada. El término "variable" se refiere al hecho que ciertas porciones de los dominios variables difieren extensamente en secuencia entre anticuerpos y son usados en el enlace y especificidad de cada anticuerpo particular por su antígeno particular. Sin embargo, la variabilidad no está distribuida igualmente en todos los dominios variables de anticuerpos. Está concentrada en tres segmentos llamados regiones hipervariables o regiones que determinan la complementareidad tanto en los dominios variables de cadena ligera y cadena pesada. Las porciones más altamente conservadas de dominios variables son llamadas regiones de estructura (FR) . Cada uno de los dominios variables de cadenas pesadas y ligera naturales comprenden cuatro FR, que adoptan extensamente una configuración ß-hoja conectada mediante tres regiones hipervariables, que forman bucles que conectan y en algunos casos forman parte de la estructura ß-hoja. Las regiones hipervariables en cada cadena son retenidas conjuntamente en proximidad estrecha mediante las FR y, con las regiones hipervariables de la otra cadena, contribuyen a la formación del sitio de enlace de antigeno de anticuerpos (véase Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) . Los dominios constantes no están involucrados directamente en el enlace de un anticuerpo a un antigeno, pero exhiben varias funciones efectoras, tales como participación del anticuerpo en citotoxicidad moderada por la célula dependiente de anticuerpo (ADCC) . La digestión de papaína de anticuerpos produce dos fragmentos de enlace de antigeno idénticos, llamados fragmentos "Fab", cada uno con un solo sitio de enlace de antigeno y un fragmento "Fe" residual, cuyo nombre refleja su habilidad para cristalizar fácilmente. El tratamiento de pepsina produce un fragmento de F(ab' )2 que tiene dos sitios de enlace de antigeno y es todavía apto de reticulación de antígeno. "Fv" es el fragmento de anticuerpo mínimo que contiene un sitio de reconocimiento de antígeno completo y de enlace de antígeno. Esta región consiste de un dímero de una cadena pesada y un dominio variable de cadena ligera en asociación no covalente hermética. Es en esta configuración que las tres regiones hipervariables de cada dominio variable interactúan para definir un sitio de enlace de antígeno sobre la superficie del dímero VH-VL. Colectivamente, las seis regiones hipervariables confieren especificidad de enlace de antígeno al anticuerpo. Sin embargo, aún un solo dominio variable (o la mitad de un Fv comprende solamente tres regiones hipervariables específicas para un antígeno) tiene la habilidad para reconocer y enlazar antígeno, aunque a una afinidad más baja que todo el sitio de enlace. El fragmento de Fab también contiene el dominio constante de la cadena ligera y el primer dominio constante (CH1) de la cadena pesada. Los fragmentos Fab' difieren de los fragmentos de Fab por la adición de pocos residuos en el término carboxi del dominio CH1 de cadena pesada que incluyen una o más cisteínas de la región de engozne de anticuerpo. Fab'-SH es la designación en la presente para Fab' en el cual el (los) residuo (s) de cisteina de los dominios constantes llevan por lo menos un grupo tiol libre. Fragmentos de anticuerpo F(ab' )2 originalmente fueron producidos como pares de fragmentos de Fab ' que tienen cistina de engozne entre ellos. Otros acoplamientos químicos de fragmentos de anticuerpo son también conocidos. Las "cadenas ligeras" de anticuerpos ( inmunoglobulinas ) de cualquier especie de vertebrados pueden ser asignadas a uno de dos tipos claramente distintos, llamados kappa (?) y lambda (?) , en base a las secuencias de aminoácidos de sus dominios constantes. Dependiendo de la secuencia de aminoácidos de dominio constante de sus cadenas pesadas, los anticuerpos pueden ser asignados a clases diferentes. Hay cinco clases mayores de anticuerpos intactos: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, y varios de estos pueden ser divididos adicionalmente en subclases (isotipos), por ejemplo, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA e IgA2. Los dominios constantes de cadena pesada que corresponden a las diferentes clases de anticuerpos son llamados a, d, e, ? y µ, respectivamente. Las estructuras de subunidad y configuraciones tridimensionales de diferentes clases de inmunoglobulinas son bien conocidas . "Fv de una sola cadena" o fragmentos de anticuerpo de "scFv" comprenden los dominios de VH y VL de anticuerpo, en donde estos dominios están presentes en una sola cadena de polipéptido. Preferiblemente, el polipéptido de Fv comprende además un enlazador de polipéptido entre los dominios VH y VL que permiten que el scFv forme la estructura deseada para el enlace de antigeno. Para una revisión de scFv véase Plückthun en The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds . , Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994) . El término "diacuerpos" se refiere a fragmentos de anticuerpo pequeños con dos sitios de enlace de antigeno, tales fragmentos comprenden un dominio variable de cadena pesada (VH) conectado a un dominio variable de cadena ligera (VL) en la misma cadena de polipéptido (VH - VL) . Al usar un enlazador que es demasiado corto para permitir el apareamiento entre los dos dominios en la misma cadena, los dominios son forzados a aparearse con los dominios complementarios de otra cadena y crear dos sitios de enlace de antigeno, los diacuerpos son descritos más plenamente por ejemplo en EP 404,097; WO 93/11161; y Hollinger et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993) . El término "anticuerpo monoclonal" como se usa en la presente se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, esto es, los anticuerpos individuales que comprende la población son idénticos excepto por posibles mutaciones que se presentan de manera estable en la naturaleza que pueden estar presentes en cantidades menores. Los anticuerpos monoclonales son altamente específicos, siendo dirigidos contra un solo sitio antigénico. Además, en contraste con las preparaciones de anticuerpo convencionales (policlonales ) que incluyen comúnmente diferentes anticuerpos dirigido contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticuerpo monoclonal es dirigido contra un solo determinante sobre el antígeno. Además de su especificidad, los anticuerpos monoclonales son ventajosos en que son sintetizados por el cultivo de hibridoma, sin contaminar por otras inmunoglobulinas . El modificador "monoclonal" indica el carácter del anticuerpo por ser obtenido de una población sustancialmente homogénea de anticuerpos y no sea interpretado que requiere la producción del anticuerpo por algún método particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales a ser usados de acuerdo con la presente invención pueden ser fabricados por el método de hibridoma descrito por primer vez por Kohler et al., Nature, 256:495 (1975), o puede ser fabricado mediante métodos de ADN recombinantes (véase, por ejemplo, patente estadounidense No. 4,816,567). Los "anticuerpos monoclonales" pueden también ser aislados de bibliotecas de anticuerpo de fago utilizando las técnicas descritas en Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) y Marks et al., J. Mol. Biol . , 222:581-597 (1991), por ejemplo. Los anticuerpos monoclonales en la presente incluyen específicamente anticuerpos "quiméricos" (inmunoglobulinas) en los cuales una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica con u homologa a secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de una especie particular o perteneciente a una clase o subclase de anticuerpo particular, en tanto que el resto de la(s) cadena (s) es idéntico con u homologa a secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de otra especie o pertenecientes a otra clase o subclase de anticuerpo, también como fragmentos de tales anticuerpos, en tanto que exhiban la actividad biológica deseada (patente estadounidense No. 4, 816, 567; Morrison et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). Anticuerpos quiméricos de interés en la presente incluyen anticuerpos "primatizados" que comprenden secuencias de enlace de antigeno de dominio variable derivado de un primate no humano (por ejemplo, chango del viejo mundo, tal como babuino, rhesus o chango cynomolgus) y secuencias de región constante humanas (patente estadounidense No. 5, 693, 780) . Forma "humanizadas" de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murino) son anticuerpos quiméricos que contienen secuencia mínima derivada de inmunoglobulina no humana. Por la mayor parte, los anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo receptor) en las cuales los residuos de una región hipervariable del receptor son reemplazados por residuos de una región hipervariable de una especie no humana (anticuerpo donador) tal como ratón, rata, conejo o primate no humano que tiene la especificidad, afinidad y capacidad deseadas. En algunas instancias, los residuos de región de estructura (FR) de la inmunoglobulina humana son reemplazados por residuos no humanos correspondientes. Además, los anticuerpos humanizados pueden comprender residuos que no son encontrados en el anticuerpo receptor o en el anticuerpo donador. Estas modificaciones se hacen para refinar adicionalmente el desempeño de anticuerpo. En general, el anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente todos de por lo menos uno, y comúnmente dos, dominios variables, en los cuales todos o sustancialmente todos los bucles hipervariables corresponden a aquellos de un inmunoglobulina no humana y todos o sustancialmente todas las FR son aquellas de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado también comprenderá opcionalmente por lo menos una porción de una región constante de inmunoglobulina (Fe), comúnmente aquella de una inmunoglobulina humana. Para detalles adicionales, véase Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); y Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992) . El término "región hipervariable" cuando se usa en la presente se refiere a los residuos de aminoácido de un anticuerpo que son responsables por el enlace de antigeno. La región hipervariable comprende residuos de aminoácido de una "región que determina la complementareidad" o "CDR" (por ejemplo, residuos 24-34 (Ll), 50-56 (L2) y 89-97 (L3) en el dominio variable de cadena ligera y 31-35 (Hl), 50-65 (H2) y 95- 102 (H3) en el dominio variable de cadena pesada; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interést, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes de Health, Bethesda, MD. (1991)) y/o aquellos residuos de un "bucle hipervariable" (por ejemplo, residuos 26-32 (Ll), 50-52 (L2) y 91-96 (L3) en el dominio variable de cadena ligera y 26-32 (Hl), 53-55 (H2) y 96- 101 (H3) en el dominio variable de cadena pesada; Chothia y Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)) . Residuos de "Estructura" o residuos de "FR" son aquellos residuos de dominio variable diferentes a los residuos de región hipervariable como se definen en la presente. Como se usa en la presente, el término "inmunoadhesina" designa moléculas semejantes a anticuerpo que combinan la especificidad de enlace de una proteina heteróloga (una "adhesina") con las funciones efectoras de dominios constantes de inmunoglobulina . Estructuralmente, las inmunoadhesinas comprenden una fusión de una secuencia de aminoácidos con la especificidad de enlace deseada que es diferente del sitio de reconocimiento de antigeno y enlace de un anticuerpo (esto es, es "heteróloga"), y una secuencia de dominio constante de inmunoglobulina. La parte de adhesina de una molécula de inmunoadhesina es comúnmente una secuencia de aminoácidos contigua que comprende por lo menos el enlace sitio de un receptor o un ligando. La secuencia de dominio constante de inmunoglobulina en la inmunoadhesina puede ser obtenida de cualquier inmunoglobulina, tal como IgG-1, IgG-2, IgG-3, o subtipos IgG-4, IgA (en los que se incluyen IgA-1 y IgA-2), IgE, IgD o IgM. El término "dominio de Fe" de un anticuerpo se refiere a una parte de la molécula que comprende el engozne, dominios CH2 y CH3 , pero que carece los sitios de enlace de antigeno. El término también se propone incluir las regiones equivalentes de un IgM u otro isotipo de anticuerpo. Un anticuerpo "que se enlaza" a un antigeno de interés es uno apto de enlace a aquel antigeno con suficiente afinidad y/o avidez de tal manera que el anticuerpo es útil como agente terapéutico o de diagnóstico para apuntamiento de una célula expresa el antigeno. Para los propósitos de la presente, "inmunoterapia" se referirá a un método de tratamiento de un mamífero (preferiblemente un paciente humano) con un anticuerpo, en donde el anticuerpo puede ser un anticuerpo sin conjugar o "desnudo", o el anticuerpo puede ser conjugado o fusionado con molécula (s) heterólogas o agente (s), tal como uno o más agente (s) citotóxico ( s ) , generando mediante esto un "inmunoconj ugado" . Un anticuerpo "aislado" es uno que ha sido identificado y separado y/o recuperado de un componente de su ambiente natural. Los componentes contaminantes de su ambiente natural son materiales que interferirían con los usos de diagnóstico o terapéuticos para el anticuerpo, y pueden incluir enzimas, hormonas y otros solutos proteináceos o no proteináceos . En modalidades preferidas, el anticuerpo será purificado (1) a mayor de 95% en peso de anticuerpo tal como se determina por el método de Lowry, y más preferiblemente más de 99% en peso, (2) a un grado suficiente para obtener por lo menos 15 residuos de secuencia de aminoácido N-terminal o interna mediante el uso de un secuenciador de copa de centrifugación, o (3) a homogeneidad mediante SDS-PAGE bajo condiciones reductoras o no reductoras utilizando azul de Coomassie o preferiblemente, teñido de plata. El anticuerpo aislado incluye el anticuerpo in situ dentro de células recombinantes puesto que por lo menos un componente del ambiente natural del anticuerpo no estará presente. Ordinariamente, sin embargo, el anticuerpo aislado será preparado mediante por lo menos una etapa de purificación. La expresión "cantidad efectiva" se refiere a una cantidad de un agente (por ejemplo, anticuerpo TWEAK etc.). Que es efectiva para prevenir, mejorar o tratar la enfermedad o condición en cuestión. Los términos "tratar", "tratamiento" y "terapia" como se usa en la presente se refieren a la terapia curativa, terapia profiláctica y terapia preventiva. El tratamiento o administración consecutivo se refiere al tratamiento sobre por lo menos una base diaria sin interrupción en el tratamiento por uno o más días. El tratamiento o administración intermitente o tratamiento o administración de manera intermitente, se refiere a tratamiento que no es consecutivo, sino más bien cíclico por naturaleza . El término "citocina" es un término genérico para proteínas liberadas por una población de células que actúa sobre otra célula como mediadores intercelulares. Ejemplos de tales citocinas son linfocinas, monocinas y hormonas de polipéptido tradicionales. Incluidas entre las citocinas están la hormona de crecimiento tal como hormona de crecimiento humana, hormona de crecimiento humana de N-metionilo y hormona de crecimiento bovino; hormona paratiroides ; tiroxina; insulina; proinsulina; relaxina; prorelaxina; hormonas de glicoproteína tales como hormona estimuladora de folículo (FSH) , hormona estimuladora de tiroides (TSH) y hormona leutinizante (LH) ; factor de crecimiento hepático; factor de crecimiento de fibroblasto; prolactina; lactógeno placental; factor -a y -ß de necrosis de tumor; substancia inhibidora muleriana; péptido gonadotropina-asociado de ratón; inhibina; activina; factor de crecimiento endotelial vascular; integrina; trombopoyetina (TPO) ; factores de crecimiento de nervio; factor de crecimiento de plaquetas; factores de crecimiento transformantes (TGF) tal como TGF-a y TGF-ß; factor-I y II de crecimiento semejante a insulina; eritropoyetina (EPO) ; factores osteoinductivos ; interferones tales como interferón-a, -ß y -gamma; factores estimuladores de colonia (CSF) tal como macrófago-CSF (M-CSF) ; granulocito-macrófago-CSF (GM-CSF) ; y granulocito-CSF (G-CSF) ; interleucinas (IL) tales como IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-17; y otros factores de polipéptidos en los que se incluyen LIF y ligando de kit (KL) . Como se usa en la presente, el término citocina incluye proteínas de fuentes naturales o de cultivo celular recombinante y equivalentes biológicamente activos de las citocinas de secuencia natural. El término "agente citotóxico" como se usa en la presente se refiere a una substancia que inhibe o impide la función de células y/o provoca destrucción de células. El término se propone incluir isótopos radioactivos (por ejemplo, I131, I125, Y90 y Re186) , agentes quimioterapéuticos y toxinas tales como toxinas enzimáticamente activas de origen bacteriano, fungal, de planta o animales o fragmentos de los mismos. Un "agente quimioterapéutico" es un compuesto químico útil en el tratamiento de cáncer. Ejemplos de agentes quimioterapéuticos incluyen agentes alquilantes tales como tiotepa y ciclofosfamida (CYTOXAN ) ; sulfonatos de alquilo tal como busulfan, improsulfan y piposulfan; aziridinas tales como benzodopa, carboquona, meturedopa y uredopa; etileniminas y metilmelaminas en las que se incluyen altretamina, trietilenmelamina, trietilenfosforamida, trietilentiofosforamida y trimetilolmelamina; acetogeninas (especialmente bulatacina y bulatacinona ) ; una camptotecina (en las que se incluyen el análogo sintético topotecan) ; briostatina ; calistatina; CC-1065 (en los que se incluyen sus análogos de adozelesina, carzelesina y bizelesina sintéticos) ; criptoficinas (particularmente criptoficina 1 y criptoficina 8); dolastatina ; duocarmicina (en los que se incluyen los análogos sintéticos, K -2189 y CBI-TMI); eleuterobina; pancratistatina; una sarcodictina; espongistatina; mostazas de nitrógeno tales como clorambucilo, clornafazina, colofosfamida , estramustina , ifosfamida, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, melfalán, novembichina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostaza de uracilo; nitrosureas tales como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina; antibióticos tales como los antibióticos de enedina (por ejemplo, calicheamicina, especialmente calicheamicina gammall y calicheamicina phill, véase, por ejemplo, Agnew, Chem Intl. Ed. Engl . , 33:183-186 (1994); dinemicina, en las que se incluyen dinemicina A; bisfosfonatos tales como clodronato; una esperamicina ; también como neocarzinostatina cromóforo y cromóforos de antibióticos de enedina cromoproteina relacionados) , aclacinomisinas , actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina , carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinas , dactinomicina, daunorubicina, detorubicina, 6- diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorubicina (Adriamycin ) (en los que se incluyen morfolino-doxorubicina, cianomorfolino-doxorubicina, 2-pirrolino-doxorubicina y desoxidoxorubicina) , epirubicina, esorubicina, idarubicina, marcelomicina, mitomicinas tales como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas , peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina; anti-metabolitos tales como metotrexate y 5-fluorouracilo (5-FU) ; análogos de ácido fólico tales como denopterina, metotrexate, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina tales como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina tales como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina , doxifluridina, enocitabina, floxuridina ; andrógenos tales como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol , mepitiostano, testolactona ; anti-adrenales tales como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; reabastecedor de ácido fólico tales como ácido frolinico; aceglatona; aldofosfamida glucósido; ácido aminolevulinico; eniluracilo; amsacrina; bestrabucilo; bisantreno; edatraxate; defofamina; demecolcina; diaziquona; elfornitina ; acetato de eliptinio; una epotilona; etoglúcido; nitrato de galio; hidroxiurea; lentinana; lonidamina; maitansinoides tales como maitansina y ansamitocinas ; mitoguazona; mitoxantrona; mopidamol; nitracrina; pentostatina ; fenamet; pirarubicina; losoxantrona ; ácido podofilinico 2-etilhidrazida procarbazina ; PSK®; razoxano; rizoxina; sizofirano; espirogermanio; ácido tenuazónico; triaziquona; 2, 2 ' , 2"-triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A y anguidina) ; uretan; vindesina; dacarbazina; manomustina ; mitobronitol ; mitolactol; pipobroman; gacitosina; arabinósido ("Ara-C") ; ciclofosfamida; tiotepa; taxoides por ejemplo paclitaxel (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ) y doxetaxel (TAXOTERE®, Rhóne-Poulenc Rorer, Antony, Francia) ; clorambucilo; gemcitabina (Gemzar™) ; 6-tioguanina; mercaptopurina ; metotrexate; análogos de platino tales como cisplatina y carboplatina; vinblastina; platino; etopósido (VP-16) ; ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; vinorelbina (Navelbine™) ; novantrona; teniposide; edatrexato; daunomicina; aminopterina; xeloda; ibandronato; CPT-11; inhibidor de topoisomerasa RFS 2000; difluoromettilornitina (DMFO) ; retinoides tales como ácido retinoico; capecitabina ; y sales, ácidos o derivados aceptables farmacéuticamente cualquiera de los anteriores. También incluidos en esta definición están agentes anti-hormonales que actúan para regular o inhibir la acción de hormona sobre tumores tales como anti-estrógenos y moduladores de receptor de estrógeno selectivos (SERM) , en los que se incluyen, por ejemplo, tamoxifeno (en los que se incluyen Nolvadex™) , raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona y toremifeno ( Fareston™) ; inhibidores de aromatasa que inhiben la enzima aromatasa, que regula la producción de estrógeno en las glándulas adrenales, tales como por ejemplo, (5) -imidazoles, aminoglutetimida , acetato de megestrol (Megace™) , exemestano, formestano, fadrozol, vorozol (Rivisor™) , letrozol (Femara™) y anastrozol (Arimidex™) ; y anti-andrógenos tales como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolide y goserelina; y sales, ácidos o derivados aceptables farmacéuticamente de cualquiera de los anteriores . Un "agente inhibidor de crecimiento" cuando se usa en la presente se refiere a un compuesto o composición que inhibe el crecimiento de una célula, especialmente célula de cáncer que expresa cualquiera de los genes identificados anteriormente, ya sea in vitro o in vivo. Asi, el agente inhibidor de crecimiento es uno que reduce significativamente el porcentaje de células que sobreexpresan tales en fase S. Ejemplos de agentes inhibidores de crecimiento incluyen agentes que bloquean el avance del ciclo celular (a un lugar diferente a fase S), tales como agentes que inducen la detención de Gl y detención de fase M. Bloqueadores de fase M clásicos incluyen las vincas (vincristina y vinblastina) , taxol e inhibidores topo II tales como doxorubicina, epirubicina, daunorubicina , etopósido y bleomicina. Aquellos agentes que detienen Gl también se derraman sobre la detención de fase S, por ejemplo, agentes alquilantes de ADN tales como tamoxifeno, prednisona, dacarbazina, mecloretamina, cisplatina, metotrexate, 5-fluorouracilo y ara-C. Información adicional se puede encontrar en The Molecular Basis of Cáncer, Mendelsohn y Israel, eds . , Capitulo 1, intitulada "Cell cycle regulation, oncogens, and antineoplastic drugs" por Murakami et al. (WB Saunders : Filadelfia, 1995), especialmente p. 13. Los términos "apóptosis" y "actividad apoptótica" son usados en un sentido amplio y se refieren a la forma ordenada o controlada de muerte celular en mamífero que es acompañada comúnmente por uno o más cambios celulares característicos en los que se incluyen incluye condensación de citoplasma, pérdida de microvilli de membrana de plasma; segmentación del núcleo, degradación de ADN cromosomal o pérdida de función mitocondrial . Esta actividad puede ser determinada y medida, por ejemplo, mediante análisis de viabilidad celular (tales como análisis de azul de Alamar o análisis de MTT) , análisis de FACS, activación de caspasa, fragmentación de ADN (véase, por ejemplo, Nicoletti et al., J. Immunol . Methods, 139 : 271-279 (1991), y poli-ADP ribosa polimerasa, "PARP", análisis de escisión conocidos en el arte. Como se usa en la presente, el término "alteración" se refiere en general a cualquier condición que se beneficiaría del tratamiento con las composiciones descritas en la presente. Estas incluyen alteraciones crónicas y agudas, también como aquellas condiciones patológicas que predisponen el mamífero a la alteración en cuestión. Ejemplos no limitantes de alteraciones a ser tratadas en la presente incluyen cánceres benignos y malignos; alteraciones inflamatorias, infección, angiogénicas y alteraciones inmunológicas, alteración autoinmunes, artritis (en las que se incluyen artritis reumatoide), esclerosis múltiple, y HIV/SIDA. Los términos "cáncer", "canceroso", o "maligno" se refieren a o describen la condición fisiológica en mamíferos que es caracterizada comúnmente por el crecimiento celular sin regular. Ejemplos de cáncer incluyen pero no están limitados a, carcinoma, linfoma, leucemia, blastoma, y sarcoma. Ejemplos más particulares de tales cánceres incluyen carcinoma de célula escamosa, mieloma, cáncer de pulmón de célula pequeña, cáncer de pulmón de célula no pequeña, glioma, cáncer gastrointestinal (sistema), cáncer renal, cáncer de ovarios, cáncer de hígado, leucemia linfoblástica , leucemia linfocítica, cáncer colorrectal, cáncer endometrial, cáncer de riñon, cáncer de próstata, cáncer de tiroides, neuroblastoma, cáncer pancreático, glioblastoma multiforme, cáncer cervical, cáncer de cerebro, cáncer de estómago, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer de pecho, carcinoma de colon y cáncer de cabeza y cuello . Los términos "respuesta humoral" y "respuesta celular" como se usa en la presente se refieren a la respuesta inmunológica de un mamífero a un antígeno mediante lo cual el mamífero produce anticuerpos a un antígeno o produce una respuesta citotóxica al antígeno, o ambos. La clase Thl de células auxiliares T desempeña una función para la inducción de la respuesta celular, y la clase Th2 de células auxiliares T desempeña una función para la producción eficiente de anticuerpos de alta afinidad. El término "células (Th) auxiliares T" como se usa en la presente, se refiere a una subclase funcional de células T que ayudan a generar células T citotóxicas y que cooperan con células B para estimular la producción de anticuerpo. Células T auxiliares reconocen el antígeno en asociación con moléculas de MHC de clase II y proporciona señales dependientes del contacto e independientes del contacto (citocina y quimiocina) a células efectoras . El término "Thl" se refiere a una subclase de células T auxiliar que producen TNF, interferón-gamma y IL-2 (y otras citocinas) y que producen reacciones inflamatorias asociadas con una respuesta celular, esto es, sin inmunoglobulina, a un desafío . El término "Th2" se refiere a una subclase de células auxiliares T que producen IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 y otras citocinas, que están asociadas con una respuesta de inmunoglobulina (humoral) a un desafío inmune. El término "enfermedad inmune-relacionada" significa una enfermedad en la cual un componente del sistema inmune de un mamífero provoca, modera o contribuye de otra manera a la morbidez en el mamífero. También incluidas están enfermedades en las cuales la estimulación o intervención de la respuesta inmune tiene un efecto de mejora sobre el avance de la enfermedad. Incluidas dentro de este término están las enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias inmune-moderadas, enfermedades inflamatorias no inmune-moderadas , enfermedades infecciosas y enfermedades de inmunodeficiencia . Ejemplos de enfermedades inmune-relacionadas e inflamatorias, algunas de las cuales son inmunes o moderadas por célula T, que pueden ser tratadas de acuerdo con la invención incluyen lupus erimatosis sistémico, artritis reumatoide, artritis crónica juvenil, espondiloartropatías , esclerosis sistémica (escleroderma) , miopatías inflamatorias idiopáticas (dermatomiositis , polimiositis ) , síndrome de Sjógren, vasculitis sistémica, sarcoidosis, anemia hemolítica autoinmune (pancitopenia inmune, hemoglobinuria nocturna paroxismal), trombocitopenia autoinmune (púrpura trombocitopénica idiopática, trombocitopenia inmune-moderada ) , tiroiditis (enfermedad de Grave, tiroiditis de Hashimoto, tiroiditis linfocítica juvenil, tiroiditis atrófica) , diabetes mellitus, enfermedad renal inmune-moderada ( glomerulonefritis , nefritis tubulointersticial ) , enfermedades desmielinantes de los sistemas nervioso central y periférico tales como esclerosis múltiple, polineuropatía desmielinizante idiopática o síndrome de Guillain-Barré y polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica, enfermedades hepatobiliares tales como hepatitis infecciosa (hepatitis A, B, C, D, E y otros virus no hepatotrópicos ) , hepatitis activa crónica autoinmune, cirrosis biliar primaria, hepatitis granulomatosa y colangitis esclerosante, enfermedades de pulmón inflamatoria y fibróticas tales como enfermedad de intestino inflamatorio (colitis ulcerativa: enfermedad de Crohn) , enteropatía gluten-sensible, y enfermedad de hipple, enfermedades de la piel autoinmunes o inmune-moderadas en los que se incluyen enfermedades de la piel bullosa, eritema multiforme y dermatitis de contacto, psoriasis, enfermedades alérgicas tales como asma, rinitis alérgica, dermatitis atópica, hipersensibilidad a alimentos y urticaria, enfermedades inmunológicas del pulmón tales como neumonías eosinofílicas, fibrosis pulmonar idiopática y neumonitis de hipersensibilidad, enfermedades asociadas con transplante en las que se incluyen rechazo de injerto y enfermedad de injerto contra huésped. Enfermedades infecciosas en las que se incluyen SIDA (infección de HIV) , hepatitis A, B, C, D y E, infecciones bacterianas, infecciones fúngales, infecciones protozooarias e infecciones de parásitos. "Enfermedad autoinmune" se usa en la presente en un sentido general amplio para referirse a alteraciones o condiciones en mamíferos en las cuales la destrucción de tejido normal o saludable surge de respuestas inmunes humorales o celulares del mamífero individual a sus propios constituyentes de tejido. Ejemplos incluyen, pero no están limitados a, lupus eritematoso, tiroiditis, artritis reumatoide, psoriasis, esclerosis múltiple, diabetes autoinmune y enfermedad de intestino inflamatorio (IBD). El término "marcado" cuando se usa en la presente se refiere a una molécula quimérica que comprende un anticuerpo o polipéptido fusionado a un "polipéptido marcador". El polipéptido marcador tiene suficientes residuos para proporcionar un epítopo contra el cual un anticuerpo se puede hacer o proporcionar alguna otra función, tal como la habilidad de oligomerizar (por ejemplo, como ocurre con péptidos que tienen dominios de cremallera de leucina), y todavía es lo suficientemente corto que en general no interfiere con la actividad del anticuerpo o polipéptido. El polipéptido marcador también preferiblemente es bastante único de tal manera que un anticuerpo marcador-específico no reacciona sustancialmente de manera cruzada con otros epítopos . Polipéptidos marcadores apropiados en general tienen por lo menos seis residuos de aminoácido y usualmente entre alrededor de 8 a aproximadamente 50 residuos de aminoácido (preferiblemente, entre alrededor de 10 a aproximadamente 20 residuos) . "Aislado", cuando se usa para describir los varios péptidos o proteínas revelados en la presente, significa péptido o proteina que ha sido identificado y separado y/o recuperado de un componente de su ambiente natural. Componentes contaminantes de su ambiente natural son materiales que interferirían comúnmente con los usos de diagnóstico o terapéuticos para el péptido o proteina, y pueden incluir enzimas, hormonas y otros solutos proteináceos o no proteináceos . En modalidades preferidas, el péptido o proteína será purificado (1) a un grado suficiente para obtener por lo menos 15 residuos de secuencia de aminoácido N-terminal o interna mediante el uso de un secuenciador de copa de centrifugación o (2) a homogeneidad mediante SDS-PAGE bajo condiciones no reductoras o reductoras utilizando azul de Coomassie o preferiblemente, teñido de plata o (3) a homogeneidad mediante técnicas de mapeo de péptidos o espectroscópicas de masas. El material aislado incluye péptido o proteína in situ dentro de células recombinantes , puesto que por lo menos un componente de su ambiente natural no estará presente. Ordinariamente, sin embargo, el péptido o proteína aislado será preparado mediante por lo menos una etapa de purificación. "Por ciento (%) de identidad de secuencia de aminoácidos" con respecto a las secuencias identificadas en la presente se define como el porcentaje de residuos de aminoácidos en una secuencia candidata que son idénticos con los residuos de aminoácidos en la secuencia de referencia, después de alinear las secuencias e introducir espacios, si es necesario, para obtener el máximo por ciento de identidad de secuencia, y no considerando ninguna sustitución conservadora como parte de la identidad de secuencia. La alineación por propósitos de determinar el por ciento de identidad de secuencia de aminoácidos se puede obtener de varias maneras que están dentro de la habilidad del arte para determinar parámetros apropiados para medir la alineación, en los que se incluyen asignar algoritmos para obtener alineación máxima sobre las secuencias de plena longitud que son comparadas. Para los propósitos de la presente, los valores de por ciento de identidad de aminoácido puede ser obtenidos utilizando el programa de computadora de comparación de secuencia, ALIGN-2, cuyo autor es Genentech, Inc. y el código fuente del cual ha sido presentado con documentación del usuario en la Oficina de Derechos Reservados de Estados Unidos de América, Washington, DC, 20559, registrado bajo el No. de Registro de Derechos Reservados de los Estados Unidos de América TXU510087. El programa ALIGN-2 está disponible públicamente de Genentech, Inc., Sur de San Francisco, CA. Todos los parámetros de comparación de secuencias son resumidos por el programa ALIGN-2 y no varían. "Severidad" de reacciones de hibridización son determinables fácilmente por aquel de habilidad ordinaria en el arte, y en general es un cálculo empírico dependiente de la longitud de sonda, temperatura de lavado y concentración de sal. En general, las sondas más largas requieren temperaturas más altas para el recocido apropiado, en tanto que las sondas más cortas necesitan temperaturas más bajas. La hibridización depende en general de la habilidad de ADN desnaturalizado para recocerse cuando hebras complementarias están presentes en un ambiente debajo de su temperatura de fusión. Mientras más alto es del grado de identidad deseado entre la sonda la secuencia hibridizable , más alta la temperatura relativa que puede ser usada. Como resultado, se sigue que las temperaturas relativas más altas tenderían a hacer las condiciones de reacción más severas, en tanto que las temperaturas más bajas menos. Para detalles adicionales y explicación de la severidad de las reacciones de hibridización, véase Ausubel et al., Current Protocols In Molecular Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers, (1995) . "Condición de Alta Severidad", como se define en la presente, son identificadas por aquellas que: (1) emplean baja fuerza iónica y alta temperatura para el lavado; cloruro de sodio 0.015 M/citrato de sodio 0.0015 M /dodecil sulfato de sodio 0.1% a 50°C; (2) emplean durante la hibridización un agente desnaturalizante; 50% (volumen/volumen) formamida con 0.1% de albúmina de suero bovino/Ficoll al 0.1%/polivinilpirrolidona 0.1% /solución reguladora del pH de fosfato de sodio 50 mM a pH 6.5 con cloruro de sodio 750 mM, citrato de sodio 75 mM a 42°C; o (3) emplean formamida a 50%, 5 x SSC (0.75 M NaCl, 0.075 M citrato de sodio), fosfato de sodio a 50 mM (pH 6.8), pirofosfato de sodio 0.1%, solución de Denhardt 5x, ADN de esperma de salmón sonificado (50 pg/ml) , SDS al 0.1% y sulfato de dextrana 10% a 42°C, con lavados a 42°C en 0.2 x SSC (cloruro de sodio/citrato de sodio) y formamida al 50% a 55°C, seguido por un lavado de alta severidad que consiste de 0.1 x SSC que contiene EDTA a 55°C. "Condiciones moderadamente severas" pueden ser identificadas como se describe por Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1989, e incluyen incubación durante toda la noche incubación a 37°C en una solución que comprende: formamida al 20%, 5 x SSC (150 mM NaCl, citrato de trisodio 15 mM) , fosfato de sodio 50 mM (pH 7.6), solución de Denhardt 5 x, sulfato de dextrana al 10% y 20 mg/ml de ADN de esperma de salmón sometido a esfuerzo cortante desnaturalizado, seguido por lavado de los filtros en 1 x SSC a aproximadamente 37-50°C. El técnico experimentado reconocerá como ajusfar la temperatura, fuerza iónica, etc. como sea necesario para acomodar factores tales como longitud de sonda y los semejantes. El término "cebador" o "cebadores" se refiere a secuencias de oligonucleótidos que hibridizan a un polinucleótido objetivo de ARN o ADN complementario y sirve como los puntos de partida para la síntesis gradual de un polinucleótido a partir de mononucleótidos mediante la acción de una nucleotidiltransferasa, como ocurre por ejemplo en una reacción en cadena de polimerasa. El término "secuencias de control" se refieren a secuencias de ADN necesarias para la expresión de una secuencia de codificación enlazada operativamente en un organismo huésped particular. Las secuencias de control que son apropiadas para procariontes , por ejemplo, incluyen un promotor, opcionalmente una secuencia de operador y un sitio de enlace de ribosoma. Se sabe que las células eucariónticas utilizan promotores, señales de poliadenilación y mejoradores. Ácido nucleico está "enlazado operativamente" cuando está colocado en relación funcional con otra secuencia de ácido nucleico. Por ejemplo, ADN para una presecuencia o líder secretorio está enlazado operativamente a ADN para un polipéptido si es expresado como preproteína que participa en la secreción del polipéptido; un promotor o mejorador está enlazado operativamente a una secuencia de codificación si afecta la transcripción de la secuencia o una sitio de enlace de ribosoma está enlazado operativamente a una secuencia de codificación si está colocado para facilitar la traducción. En general, "enlazado operativamente" significa que las secuencias de ADN que son enlazadas están contiguas, y en el caso de un líder secretorio, contiguas y en fase de lectura. Sin embargo, los mejoradores no tienen que ser contiguos. El enlace se lleva a cabo mediante ligación en sitios de restricción convenientes. Si tales sitios no existen, los adaptadores de oligonucleótidos sintéticos o enlazadores son usados de acuerdo con la práctica convencional . "Citotoxicidad moderada por la célula dependiente de anticuerpo" y "ADCC" se refiere a una reacción moderada por la célula en la cual células citotóxicas no especificas que expresan receptores de Fe (FcR) (por ejemplo, células exterminadoras naturales (NK) , neutrófilos y macrófagos) reconocen el antigeno enlazado sobre una célula objetivo y subsecuentemente causan lisis de la el objetivo. Las células primarias para moderar ADCC, células NK, expresan FCYRIII solamente, mientras que los monocitos expresan FcyRI, FcyRII y FcyRIII. La expresión de FcR sobre células hematopoyéticas es resumida en la Tabla 3 en la página 464 de Ravetch y Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991) . Para determinar la actividad de ADCC de una molécula de interés, un análisis de ADCC in vitro, tal como aquel descrito en la patente estadounidense No. 5,500,362 o 5,821,337 puede ser efectuado. Células efectoras útiles para tales análisis incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y células exterminadoras naturales (NK) . Alternativa o adicionalmente, la actividad de ADCC de la molécula de interés puede ser determinada in vivo, por ejemplo, en un modelo de animal tal como aquel revelado en Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998) . "Células efectoras humanas" son leucocitos que expresan uno o más FcR y efectúan funciones efectoras. Preferiblemente, las células expresan por lo menos un FCYRIII y llevan a cabo la función efectora de ADCC. Ejemplos de leucocitos humanos que moderan ADCC incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC), células exterminadoras naturales (NK) , monocitos, células T citotóxicas y neutrófilos; las células PBMC y NK son preferidas. Los términos "receptor de Fe" o "FcR" son usados para describir un receptor que se enlaza a la región de Fe de un anticuerpo. Los FcR preferidos es un Fcr humano de secuencia natural. Además, un FcR preferido es uno que se enlaza a un anticuerpo de IgG (un receptor gamma) e incluye receptores de las subclases FcyRI, FcyRII y Fcy RUI, en las que se incluyen variantes alélicas y alternativamente formas empalmadas de estos receptores. Los receptores FcyRII incluyen FcyRIIA (un "receptor de activación") y FcyRIIB (un "receptor inhibidor") , que tienen secuencias de aminoácidos similares que difieren principalmente en los dominios citoplásmicos de los mismos. El receptor activador FcyRIIA contiene una porción de activación a base de tirosina inmunoreceptora (ITAM) en su dominio citoplásmico . El receptor inhibidor FcyRIIB contiene una porción de inhibición a base de tirosina de inmunoreceptor (ITIM) en su dominio citoplásmico. (Véase Daéron, Annu. Rev.

Inmuno1. 15:203-234 (1997)). Los FcR son revisados en Ravetch y Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); y de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995). Otros FcR, incluyen aquellos a ser identificados en el futuro, son abarcados por el término "FcR" en la presente. El término también incluye el receptor neonatal, FcRn, que es responsable para la transferencia de IgGs maternal al feto (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) y Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)). Los FcR en la presente incluyen polimorfismos tales como el dimorfismo genético en el gen que codifica FcyRIIIa resultante ya sea en una fenilalanina (F) o una valina (V) en posición de aminoácido 158, ubicada en la región del receptor que se enlaza a IgGl. La valina homóciga FcyRIIIa (FcYRIIIa-158V) ha mostrado tener una afinidad más alta por IgGl humano y moderar ADCC incrementada in vitro en relación con la fenilalanina homóciga FcyRIIIa (FcyRIIIa-158F) o receptores (FcyRIIIa-158F/V) heterócigos. "Citotoxicidad dependiente de complemento" o "CDC" se refiere a la habilidad de una molécula para someter a lisis un objetivo en presencia de complemento. La ruta de activación de complemento es iniciada por el enlace de primer componente del sistema de complemento (Clq) a una molécula (por ejemplo, un anticuerpo) acomplejada con un antigeno cognato. Para determinar la activación de complemento, se puede efectuar un análisis de CDC, por ejemplo como se describe en Gazzano- Santoro et al., J. Immunol . Methods 202:163 (1996) .

II. VARIOS MÉTODOS Y MATERIALES DE LA INVENCIÓN La defensa del huésped contra la infección involucra la función coordinada de los sistemas innato y adaptables en mamíferos. El sistema inmune innato, que incluye células NK, células dendríticas, macrófagos y neutrófilos, juega un papel crucial no solamente en la respuesta prematura a la infección, sino también en la guía de la transición a una inmunidad adaptable a base de célula T y B (Diefenbach y Raulet, Immunol . Rev., 188:9-21 (2002)) . Las células inmunes innatas moderan el exterminio y eliminación directa de células infectadas; subsecuentemente soportan activamente el desarrollo de funciones adaptables por medio de interacción físicas con células dendríticas y secreción consecuente de citocinas específicas (Diefenbach and Raulet, Immunol. Rev., 181:170-184 (2001); Fernandez et al., Eur. Cytokine Netw., 13:17-27 (2002); Ikeda et al., Cytokine Growth Factor Rev., 13:95-109 (2002)) . INF-gamma e IL-12 polarizan el desarrollo de células T CD4+ auxiliares hacia el subtipo TH1, que activa respuestas de células T efectoras CD8+ , en tanto que IL-4 induce la clase TH2, que estimula respuestas de anticuerpo moderadas por célula B (Diefenbach y Raulet, 2002, supra; Fernandez et al., 2002, supra; Ikeda et al., 2002, supra) . La inmunidad innata es importante no solamente como la primera linea de defensa contra infección sino también para proteger el huésped durante el periodo de tiempo que es requerido para el desarrollo de inmunidad adaptable. Además, la respuesta innata influencia criticamente la naturaleza de organismos adaptables que se desarrollan en respuesta a un desafio infeccioso (Castriconi et al., C R Biol., 327:533-537 (2004); Lo et al., Immunol. Rev., 169:225-239 (1999); Palucka y Banchereau, J. Clin. Immunol., 19:12-25 (1999); Palucka y Banchereau, Nat. Med., 5:868-870 (1999)). Interacciones de células NK con macrófagos y células dendriticas estimulan la secreción de citocinas especificas que soportan el desarrollo de respuestas de células T y/o B particulares (Palucka y Banchereau, J. Clin. Immunol., 19:12-25 (1999); Palucka y Banchereau, Nat. Med., 5:868-870 (1999); Trinchieri, Semin. Immunol., 7:83-88 (1995)). La secreción de IFN-gamma mediante células NK y producción de IL-12 por macrófagos y células dendriticas promueven el desarrollo de una respuesta TH1 adaptable, conduciendo a una función efectora de célula T citotóxica (Coudert et al., J. Immunol., 169:2979-2987 (2002); Fujii et al., J. Exp . Med., 198:267-279 (2003); Gerosa et al., J. Exp. Med., 195:327-333 (2002); Pan et al., Immunol. Letters, 94:141-151 (2004); Varma et al., Clin. Diag. Lab Immunol., 9:530-543 (2002)). En contraste, la producción de IL-4 por células NKT promueve la diferenciación de TH2 adaptable y activación de célula B (Araujo et al., Int. Immunol., 12:1613- 1622 (2000); Kaneko et al., J. Exp. Med., 191:105-114 (2000); Leite-De-Moraes et al., J. Immunol . , 166:945-951 (2001)). Los experimentos revelados en la presente solicitud indican que TWEAK es un regulador importante del sistema innato y su interconexión o interfase con inmunidad adaptable. Células inmunes innatas, es decir, células NK, macrófagos y células dendriticas, expresa TWEAK y su receptor FN14 y regulado ascendentemente ambas moléculas después de la estimulación. En contraste, las células del sistema adaptable, en las que se incluyen células T y B, no expresaron niveles significativos de TWEAK o FN14. Este patrón de expresión sugiere que la señalización de TWEAK en células inmunes innatas pueden modular la función inmune innata y pueden influenciar indirectamente respuestas inmunes adaptables por su regulación de la actividad innata . Como se describe en la sección de ejemplos a continuación, los ratones noqueados por TWEAK generados fueron viables y saludables, demostrando que TWEAK no es crucial para el desarrollo normal. Sin embargo, los ratones TWEAK"/_ mostraron una acumulación significativa de células NK en comparación con compañeros de cama tipo silvestre de edad correspondiente, que implica TWEAK en el control de generación y/o muerte de células NK. La ablación del gen TWEAK no alteró la cantidad de células NK en la médula ósea, sugiriendo la formación de célula NK sin ablación en ausencia de TWEAK.

Inversamente, la neutralización de células NK humanos protegidas por TWEAK de inducción de apóptosis mediante TNF-alfa, LPS o IFN-gamma. Estos hallazgos sugieren que AICD sin aparear en lugar de la generación incrementada provoca la acumulación de célula NK en ratones TWEAK_/~. Asi, una función inmunomoduladora de < TWEAK puede ser ayudar a impedir el desarrollo potencialmente peligroso de una respuesta innata excesiva, al soportar la cancelación de células NK activadas sobre la resoluciones inmunológica . En los experimentos de la solicitante, la deficiencia de TWEAK en ratones incrementó sustancialmente la sensibilidad de ratones a inyección de LPS sistémico, implicando además a TWEAK en la curva de la respuesta innata. Dado que la actividad de célula NK es un componente importante en la reacción inflamatoria sistémica a LPS (Emoto et al., J. Immunol . , 169:1426-1432 (2002); Heremans et al., Eur. J. Immunol., 24:1155-1160 (1994)), una explicación por la hipersensibilidad de ratones TWEAK~ _ podría ser sus números de célula NK elevados. Sin embargo, se encontró además que las células NK deficientes de TWEAK producen más IFN-gamma mientras que los macrófagos TWEAK_ " generaron más IL-12 y menos IL-10 después de exposición a LPS in vivo. Además, la neutralización de TWEAK mejoró la producción de IFN-gamma e IL-12 mediante células NK LPS estimuladas y macrófagos. Estos resultados sugieren que la sensibilidad incrementada de ratones TWEAK- ~ a LPS surgen no solamente de sus números de células NK elevados sino también de la mayor producción de célula inmune innata de IFN-gamma e IL-12. Asi, además de soportar NK AICD, T EAK puede cortar la respuesta innata al reprimir la secreción de citocinas pro proinflamatorias clave. A este respecto, TWEAK difiere fuertemente de su TNF-alfa relativo, que estimula la secreción de IL-12 e IFN-gamma, aumentando asi la respuesta inflamatoria innata (D'Andrea et al., J. Exp. Med., 178:1041-1048 (1993); Os ald et al., Eur. Citocina Netw., 10:533-540 (1999); Wilhelm et al., J. Immunol., 166:4012-4019 (2001); Zhan y Cheers, J. Immunol., 161:1447-1453 (1998)). Por supuesto, contrario a la hipersensibilidad de LPS de los noqueos de TWEAK, TNF-alfa o ratones noqueados por TNFR1 son resistentes a mortandad inducida por LPS (Pasparakis et al., J. Exp. Med., 184:1397-1411 (1996); Rothe et al., Circ. Shock, 44:51-56 (1994)). STAT-1 es un transductor de señal clave involucrado en la producción de IFN-gamma e IL-12 en respuesta a infección (Dupuis et al., Immunol. Rev., 178:129-137 (2000); Feinberg et al., Eur. J. Immunol., 34:3276-3284 (2004)). La comparación de fosfo-STAT-1 en células NK y macrófagos de ratones TWEAK_ " y tipo libre reveló actividad basal elevada y estimulación mejorada en respuesta a LPS. Este resultado sugiere que TWEAK inhibe la actividad de STAT-1, en contraste con TNF-alfa, que mejora esta función (Chen et al., Immunology, 107:199-208 (2002)). Asi, un mecanismo que puede contribuir a la supresión de TWEAK de la producción de IFN-gamma e IL-12 es la inhibición de STAT-1. Como STAT-1, NF-??? también juega un papel importante en controlar la transcripción genética de citocina (Feinberg et al., Eur. J. Immunol . , 34:3276-3284 (2004); Zhan y Cheers, J. Immunol., 161:1447-1453 (1998)) . En células NK humanas y macrófagos, TWEAK estimuló la fosforilación prolongada de NF-???, induciendo la asociación de este factor con el represor transcripcional HDAC-1. En contraste, TNF-alfa indujo fosforilación de NF-??? transitoria y enlace al co-activador transcripcional p300. Asi, un segundo mecanismo que contribuye a la represión de TWEAK de la síntesis de IFN-gamma e IL-12 puede ser la inducción de una asociación entre NF-??? y HDAC-1. La diferencia entre TWEAK y TNF-alfa con respecto a la modulación de NF-??? puede ser debida a la cinética de fosforilación de NF-??? que influencia la asociación de este factor con otros reguladores transcripcionales , de tal manera que la fosforilación transitoria favorece la interacción con p300 en tanto que la modificación sostenida promueve el enlace a HDAC-1. Parece haber un paralelo entre esta observación y el control de la ruta de cinasa N-terminal c-Jun (JNK) mediante TNF-alfa, en donde la fosforilación de JNK transitoria contra sostenida se correlaciona con la promoción de sobrevivencia de la célula contra muerte de la célula (Varfolomeev y Ashkenazi, Mol. Cell Biol., 24:997-1006 (2004)) . Los hallazgos de la solicitante sugieren que la expresión de TWEAK por células NK y macrofagos en respuesta a la infección ayuda a cortar la respuesta inflamatoria innata al promover NK AICD también como reprimir la producción de IFN-gamma e IL-12 por células NK y macrofagos. IFN-gamma e IL-12 no solamente mejora la respuesta inflamatoria innata; también promueven la transición a inmunidad adaptable en favor de una respuesta tipo TH1 celular. Se observó que en ausencia de TWEAK, los ratones envejecidos desarrollaron bazos grandes con números incrementados no solamente de células NK (que constituyen una fracción muy pequeña de esplenocitos ) sino también de células T del fenotipo TH1. Evidencia experimental adicional soporta la regulación de TWEAK de la transición adaptable. En el modelo de melanoma B16 de ratón, los ratones, TWEAK"7" rechazaron el crecimiento del subclon B16.F10 moderadamente agresivo, en tanto que los compañeros de cama tipo silvestre fallaron en combatir el crecimiento de tumor. En tanto que los números elevados de células NK en ratones TWEAK" " podría explicar su habilidad para rechazar los tumores, la respuesta anti-tumor en estos ratones fue asociada también con una expansión de células T CD8+, consistente con una respuesta TH1 aumentada. Los ratones TWEAK"7" también resistieron el crecimiento del subclon B16.BL6 más agresivo mejor que los controles tipo silvestre y después del re-desafío con células de tumor ex vivo, sus células T CD8+ y células NK produjeron significativamente más IFN-gamma en tanto que sus macrofagos generaron más IL-12 que los controles correspondientes. Así, los hallazgos sugieren que TWEAK modula la interfase inmune innata a adaptable al suprimir la producción de IFN-gamma e IL-12 y de aquí mantener en verificación el consecuente desarrollo de una respuesta celular moderada por THi se ha encontrado un papel importante para TWEAK en la modulación inmune, que difiere marcadamente de la función de su pariente estructural, TNF-alfa. TNF-alfa juega un papel clave en soportar la respuesta inflamatoria innata al promover la estimulación de célula innata y secreción de citocina pro-inflamatoria. En contraste, TWEAK parece ser crucial para cortar la respuesta innata, por medio de la moderación de NK AICD también como reprimir la producción de IFN-gamma e IL-12 por células NK y macrófagos. Mientras que TNF-alfa activa la transcripción de genes inmunomoduladores al promover la activación de STAT-1 y asociación de NF-??? con p300, TWEAK reprime la actividad de STAT-1 e induce el enlace de NF-??? a HDAC-1, que inhibe la transcripción genética. Importantemente, TWEAK también tiene un papel crítico en atenuar la transición de una respuesta inmune innata a adaptable TH1. Así, la función de TWEAK puede ayudar en reducir las respuestas innatas y adaptables del mamífero huésped, asegurando contra el desarrollo de inflamación excesiva y autoinmunidad . Este hallazgo sugiere que la inhibición de TWEAK puede ser útil clínicamente para aumentar la inmunidad anti-infectiva y anti- tumor, en tanto que la actividad de receptor de TWEAK podría ser útil para controlar enfermedad autoinmunes agudas y crónicas . De acuerdo con los métodos de la presente invención, composiciones que comprende una o más moléculas que modulan TWEAK o actividad de receptor de TWEAK pueden ser empleadas para tratamiento de varias alteraciones. Por ejemplo, antagonistas de TWEAK pueden ser usados en el tratamiento de cáncer. Tales antagonistas de TWEAK incluyen anticuerpos TWEAK, variantes de TWEAK, inmunoadhesinas del receptor de TWEAK y anticuerpos de receptor de TWEAK. Los antagonistas de TWEAK pueden ser usados in vivo también como ex vivo. Opcionalmente, los antagonistas de TWEAK son usados en forma de composiciones farmacéuticas, descritas en detalle adicional posteriormente en la presente. En modalidades adicionales, agonistas de TWEAK pueden ser empleados en el tratamiento de varias condiciones inmune-relacionadas . Tales agonistas de TWEAK incluyen anticuerpos de receptor de TWEAK y polipéptidos de TWEAK. Los agonistas de TWEAK pueden ser usados in vivo también como ex vivo. Opcionalmente, los agonistas de TWEAK son usados en forma de composiciones farmacéuticas, descritas en detalle adicional posteriormente en la presente. En la descripción a continuación, varios métodos y técnicas son descritos. Se contempla que estos métodos y técnicas pueden ser usados similarmente para preparar una variedad de agonistas y antagonistas de TWEAK. A manera de ejemplo, se contempla que polipéptidos de TWEAK y variantes de polipéptido de TWEAK pueden ser preparados. Variantes de TWEAK pueden ser preparados al introducir cambios de nucleótido apropiados al ADN de codificación y/o mediante síntesis del polipéptido deseado. Aquellos experimentados en el arte apreciarán que cambios de aminoácido pueden alterar procesos post-traducción y polipéptido de TWEAK, tal como cambiar el número o posición de sitios de glicosilación o alterar las características de afianzamiento de membrana. Variaciones en los polipéptidos de TWEAK descritos en la presente, se pueden efectuar, por ejemplo, utilizando cualquiera de las técnicas y principios para mutaciones conservativas y no conservativas recibidas por ejemplo en la patente estadounidense No. 5,364,934. Las variaciones pueden ser una sustitución, cancelación o inserción de uno o más codones que codifican el polipéptido que da como resultado un cambio en la secuencia de aminoácidos en comparación con el polipéptido de secuencia natural. Opcionalmente la variación es mediante sustitución de por lo menos un aminoácido con cualquier otro aminoácido en uno o más de los dominios del polipéptido de TWEAK. Guías para determinar cual residuo de aminoácido puede ser insertado, sustituido o cancelado sin afectar adversamente la actividad deseada se puede encontrar al comparar la secuencia del polipéptido de TWEAK con aquella de moléculas de proteina conocidas homologas y minimizar el número de cambios de secuencia de aminoácidos efectuados en regiones de alta homología. Las sustituciones de aminoácido pueden ser el resultado de reemplazar un aminoácido con otro aminoácido que tiene propiedades estructurales y/o químicas similares, tal como el reemplazo de una leucina con una serina, esto es, reemplazo de aminoácidos conservadores. Las inserciones o cancelaciones pueden opcionalmente estar en el intervalo de aproximadamente 1 a 5 aminoácidos. La variación permitida puede ser determinada al efectuar sistemáticamente inserciones, cancelaciones o sustituciones de aminoácido en la secuencia y pruebas de las variantes resultantes en cuanto a actividad exhibida por la secuencia natural de plena longitud o madura. Fragmentos de polipéptido de TWEAK son provistos en la presente. Tales fragmentos pueden ser truncados en el término N o término C, o pueden carecer de residuos internos, por ejemplo, cuando se compara con una proteína natural de plena longitud. Ciertos fragmentos carecen residuos de aminoácidos que no son esenciales para una actividad biológica deseada del polipéptido de TWEAK. Fragmentos de polipéptidos de TWEAK pueden ser preparados por cualquiera de una diversidad de técnicas convencionales. Fragmentos de péptidos deseados pueden ser sintetizados químicamente. Un procedimiento alternativo involucra generación de fragmentos de polipéptido mediante digestión enzimática, por ejemplo, mediante tratamiento de la proteína con una enzima que se sabe que escinde proteínas en sitios definidos por residuos de aminoácido particulares o al someter a digestión el ADN con enzimas de restricción apropiadas y aislamiento del fragmento deseado. Todavía otra implementación apropiada involucra aislamiento y amplificación de un fragmento de ADN que codifica un fragmento de polipéptido deseado, mediante reacción en cadena de polimerasa (PCR) . Oligonucleótidos que definen los términos deseados del fragmento de ADN son empleados en los cebadores 5' y 3' en la PCR. En modalidades particulares, sustituciones conservadoras de interés son mostradas en la tabla a continuación bajo el encabezado de sustituciones preferidas. Si tales sustituciones dan como resultado un cambio en actividad biológica, entonces cambios más sustanciales, denominados sustituciones ejemplares en la tabla o como se describe posteriormente en la presente con referencia a clases de aminoácidos, son introducidos y los productos seleccionados.

Tabla Modificaciones sustanciales en función o identidad inmunológica del polipéptido de TWEAK se llevan a cabo al seleccionar sustituciones que difieren significativamente en su efecto al mantener (a) la estructura de la cadena fundamental del polipéptido en el área de la sustitución, por ejemplo como una hoja o conformación helicoidal, (b) la carga o hidrofobicidad de la molécula en el sitio objetivo o (c) el volumen de la cadena lateral. Residuos que se presentan de manera estable en la naturaleza son divididos en grupos en base a propiedades de cadena lateral comunes: (1) hidrofóbicos : norleucina, met, ala, val, leu, ile; (2) hidrofilicos neutros: cys, ser, thr; (3) ácidos: asp, glu; (4) básicos: asn, gln, his, lys, arg; (5) residuos que influencian la orientación de cadena: gly, pro; y (6) aromático: trp, tyr, phe . Las sustituciones no conservadoras abarcarán intercambiar un miembro de una de estas clases por otra clase. Tales residuos sustituidos también pueden ser introducidos a los sitios de sustitución conservadores o más preferiblemente, a los sitios restantes (no conservados). Las variaciones pueden ser efectuadas utilizando métodos conocidos en el arte tales como mutagénesis moderada por oligonucleótido (dirigida al sitio) , barrido de alanina, y mutagénesis de PCR. Mutagénesis dirigida al sitio [Cárter et al., Nucí. Acids Res., 13:4331 (1986); Zoller et al., Nucí . Acids Res . , 1_0:6487 (1987)], mutagénesis de caset [Wells et al., Gene, 3_4:315 (1985)], mutagénesis de restricción de selección [Wells et al., Philos. Trans. R. Soc. London SerA, 317:415 (1986)] u otras técnicas conocidas pueden ser efectuadas sobre el ADN clonado para producir el ADN variante de polipéptido de TWEAK. El análisis de aminoácido de borrado puede también ser usado para identificar uno o más aminoácidos a lo largo de una secuencia contigua. Entre los aminoácidos de barrido preferidos están aminoácidos relativamente pequeños, neutros. Tales aminoácidos incluyen alanina, glicina, serina y cisteina. La alanina es comúnmente un aminoácido de borrado preferido entre este grupo debido a que elimina la cadena lateral más allá del carbono beta y es menos probable que altere la conformación de cadena principal de la variante [Cunningham y Wells, Science, 244:1081-1085 (1989)]. La alanina es también comúnmente preferida debido a que es el aminoácido más común. Además, es frecuentemente encontrado tanto en posiciones enterradas como expuestas [Creighton, The Proteins, (W.H. Freeman & Co., N . Y . ) ; Chothia, J. Mol. Biol . , 150:1 (1976)]. Si la sustitución de alanina no produce cantidades apropiadas de variante, se puede usar un aminoácido isotérico. Cualquier residuo de cisteina no involucrado en mantener la conformación apropiada de polipéptido de TWEAK también puede ser sustituido, en general con serina, para mejorar la estabilidad oxidante de la molécula e impedir la reticulación aberrante. Inversamente, enlace (s) de cisteina puede (n) ser agregado (s) al polipéptido de TWEAK para mejorar su estabilidad. La descripción a continuación es concerniente principalmente con la producción de polipéptido de TWEAK al cultivar células transformadas o transíectadas con un vector que contiene ácido nucleico que codifica polipéptido de TWEAK. Por supuesto se contempla que métodos alternativos que son bien conocidos en el arte, pueden ser usados para preparar varios agonistas de TWEAK y antagonistas de TWEAK contemplados en la presente. Por ejemplo, la secuencia de aminoácidos apropiada o porciones de la misma, puede ser producida mediante síntesis de péptidos directa utilizando técnicas de fase sólida [véase, por ejemplo, Stewart et al., Solid-Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, CA (1969); Merrifield, J. Am. Chem. Soc . , 8^3:2149-2154 (1963)] . Síntesis de proteína in vitro puede ser efectuada utilizando técnicas manuales o mediante automatización. La síntesis automatizada puede ser llevada a cabo, por ejemplo, utilizando un sintetizador de péptido de Applied Biosystems (Foster City, CA) utilizando las instrucciones del fabricante. Varias porciones del polipéptido de TWEAK pueden ser sintetizadas químicamente de manera separada y combinadas utilizando métodos químicos o enziméticos para producir el polipéptido de TWEAK deseado. Los métodos y técnicas descritos son similarmente aplicables a la producción de variantes de TWEAK, formas modificadas de TWEAK y anticuerpos de TWEAK. 1. Aislamiento de ADN que codifica polipéptido de TWEAK ADN que codifica polipéptido de TWEAK puede ser obtenido de una biblioteca de cADN preparada a partir de tejido que se cree que posee el mARN de polipéptido de TWEAK y para expresarlo a un nivel detectable. Asi, ADN de polipéptido de TWEAK humano puede ser obtenido convenientemente de una biblioteca de cADN preparada de tejido humano. El gen que codifica polipéptido de TWEAK puede también ser obtenido de una biblioteca genómica o mediante procedimientos sintéticos conocidos (por ejemplo, síntesis de ácido nucleico automatizada) . Las bibliotecas pueden ser seleccionadas con sondas (tales como oligonucleótidos de por lo menos aproximadamente 20-80 bases) designadas para identificar el gen de interés o la proteína codificada por el mismo. La selección de cADN o biblioteca genómica con las sondas seleccionadas se pueden llevar a cabo utilizando procedimientos estándar, tal como se describe en Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989). Un medio alternativo para aislar el gen que codifica el polipéptido de TWEAK es usar metodología de PCR [Sambrook et al., supra; Dieffenbach et al., PCR Cebador: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1995)]. Técnicas para seleccionar una biblioteca de cADN son bien conocidas en el arte. Las secuencias de oligonucleótidos seleccionadas como sondas deben ser de suficiente longitud y suficientemente no ambiguas que falsos positivos sean minimizados. El oligonucleótido es preferiblemente marcado de tal manera que pueda ser detectado después de la hibridización a ADN en la biblioteca que es seleccionada. Métodos de marcación son bien conocidos en el arte e incluyen el uso de radiomarcadores como ADP 32P-marcado, biotinilación o marcación de enzima. Condiciones de hibridización, que incluyen severidad moderada y alta severidad, son provistas en Sambrook et al., supra . Las secuencias identificadas en tales métodos de selección de biblioteca pueden ser comparadas y alineadas con otras secuencias conocidas depositadas y disponibles en bases de datos públicas tales como GenBank u otras bases de datos de secuencias privadas. La identidad de secuencia (ya sea a nivel de aminoácido o nucleótido) dentro de regiones definidas de la molécula o a través de la secuencia de plena longitud puede ser determina utilizando métodos conocidos en el arte y descritos en la presente. El ácido nucleico que tiene secuencia de codificación de proteina, puede ser obtenido mediante selección de cADN seleccionado o bibliotecas genómicas utilizando la secuencia de aminoácidos deducida revelada en la presente or primera vez y si es necesario, utilizando procedimientos de extensión de cebador convencionales como se describe en Sambrook et al., supra, para detectar precursores y el procesamiento de intermediarios de mARN que pueden no haber sido transcritos inversamente a cADN . 2. Selección y Transformación de Células Huésped Las células huésped son transíectadas o transformadas con vectores de expresión o clonación descritos en la presente para la producción de polipéptido de TWEAK y cultivadas en medios nutrientes convencionales modificados como sea apropiado para inducir promotores, seleccionar transformantes o amplificar los genes que codifican secuencias deseadas. Las condiciones de cultivo, tales como medios, temperatura, pH y los semejantes, pueden ser seleccionados por el experimentado en el arte sin experimentación indebida. En general, principios, protocolos y técnicas prácticas para maximizar la productividad de cultivos celulares se puede encontrar en ammalian Cell Biotechnology : a Practical Approach, M. Butler, ed. (IRL Press, 1991) y Sambrook et al., supra . Métodos de transfección de célula eucarióntica y transformación de célula procarióntica son conocidos para el técnico experimentado ordinariamente en el are, por ejemplo CaCl2, CaP04, 1 iposoma-moderado y electroporación . Dependiendo de la célula huésped usada, la transformación es efectuada utilizando técnicas estándar apropiadas para tales células. El tratamiento con calcio que emplea cloruro de calcio, como se describe en Sambrook et al., supra , o electroporación es en general usado para procariontes . La infección con Agrobacterium tumefaciens es usado para transformación de ciertas células de planta células, como se describe por Shaw et al., Gene , 23:315 (1983) y WO 89/05859 publicado el 29 de junio de 1989. Para células mamiferas sin tales paredes celulares, el método de precipitación de fosfato de calcio de Graham y van der Eb, Virology, _52: 456-457 (1978) puede ser usado. Aspectos generales de transfecciones de sistema huésped de célula mamifera han sido descritos en patente estadounidense No. 4,399,216. las transformaciones a levadura se llevan a cabo comúnmente de acuerdo con el método de Van Solingen et al., J . Bact . , 130:946 (1977) y Hsiao et al., Proc. Nati. Acad. Sci. (USA) , 76: 3829 (1979) . Sin embargo, otros métodos para introducir ADN a células, tal como mediante microinyección nuclear, electroporación, fusión de protoplasto bacteriano con células intactas, o policationes , por ejemplo, polibreno, poliornitina, pueden también ser usados. Para varias técnicas para transformar células mamiferas, véase Keo n et al., Methods in Enzymology, 185:527-537 (1990) y Mansour et al., Nature, 336:348-352 (1988) . Células huésped apropiadas para clonar o expresar el ADN en los vectores en la presente incluyen células procariónticas , de levadura o células eucariónticas superiores. Procariontes apropiados incluyen pero no están limitados a eubacteria, tales como organismos gram-negativo o gram-positivo, por ejemplo, Enterobacteriaceae tal como E. coli. Varias cepas de E. coli están disponibles públicamente, tales como la cepa MM294 de E . coli K12 (ATCC 31,446); E. coli X1776 (ATCC 31,537); cepa de E. coli W3110 (ATCC 27,325) y K5 772 (ATCC 53,635). Otras células huéspedes procariónticas apropiadas incluyen Enterobacteriaceae tal como Escheríchía , por ejemplo, E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella , Proteus, Salmonella , por ejemplo, Salmonella typhimurium, Serratia , por ejemplo, Serratia marcescans, y Shigella , también como Bacilli tales como B. subtilis y B. licheniformis (por ejemplo, B. licheniformis 41P revelada en DD 266,710 publicado el 12 abril de 1989) , Pseudomonas tales como P. aeruginosa y Streptomyces . Estos ejemplos son ilustrativos en lugar de limitantes. La cepa 3110 es un huésped o huésped original particularmente preferido debido a que es una cepa huésped común para fermentaciones de producto de ADN recombinante . Preferiblemente, la célula huésped segrega cantidades mínimas de enzimas proteolíticas . Por ejemplo, la cepa 3110 puede ser modificada para efectuar una mutación genética en los genes que codifican proteínas endógenas al huésped, ejemplos de tales huéspedes incluyen la cepa 1A2 de E. coli W3110, que tiene el genotipo completo tonA ; cepa 9E4 de E. coli 3110, que tiene el genotipo completo tonA ptr3; cepa 27C7 de E. coli 3110 (ATCC 55, 244), que tiene el genotipo completo tonA ptr3 phoA £25 (argF-lac) 169 degP ompT kanr; cepa 37D6 de E. coli W3110, que tiene el genotipo completo tonA ptr3 phoA E15 (argF-lac) 169 degP ompT rbs7 ilvG kanr; cepa 40B4 de E. coli W3110, que es la cepa 37D6 con una mutación de cancelación de degP no resistente a canamicina y una cepa de E. coli que tiene proteasa periplásmica mutante revelada en la patente estadounidense No. 4,946,783 expedida el 7 agosto de 1990. Alternativamente, métodos de clonación in vitro, por ejemplo, PCR u otras reacciones de polimerasa de ácido nucleico son apropiados. Además de procariontes , microbios eucariónticos tales como hongos filamentosos o levadura son huéspedes de clonación o expresión apropiados para vectores que codifican polipéptido de TWEAK. Saccharomyces cerevisiae es un organismo huésped eucarióntico inferior usado comúnmente. Otros incluyen Schizosaccharomyces pombe (Beach y Nurse, Nature, 290: 140 [1981]; EP 139,383 publicado el 2 mayo de 1985); huéspedes de Kluyveromyces (patente estadounidense No. 4,943,529; Fleer et al., Bio/Technology, 9:968-975 (1991)) tal como, por ejemplo, K. lactis (MW98-8C, CBS683, CBS4574; Louvencourt et al., Bacteriol . , 154 (2 ) : 737-742 [1983]), K. fragilis (ATCC 12,424) , K. bulgaricus (ATCC 16,045), K. wickeramii (ATCC 24,178), K. waltii (ATCC 56,500), K. drosophilarum (ATCC 36,906; Van den Berg et al., Bio/Technology, 8:135 (1990)), K. thermotolerans, y K. marxianus; yarrowia (EP 402,226); Pichia pastoris (EP 183,070; Sreekrishna et al., J. Basic Microbiol., 28:265-278

[1988]); Candida; Trichoderma reesia (EP 244,234); Neurospora crassa (Case et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 76:5259-5263 [1979]); Schwanniomyces tal como Schwanniomyces occidentalis (EP 394,538 publicado el 31 de octubre de 1990); y hongos filamentosos tal como, por ejemplo, Neurospora , Penicillium, Tolypocladium (WO 91/00357 publicado el 10 de enero de 1991), y Aspergillus huéspedes tal como A. nidulans (Ballance et al., Biochem. Biophys. Res. Commun . , 112:284-289 [1983]; Tilburn et al., Gene, 26:205-221 [1983]; Yelton et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 81: 1470-1474 [1984]) y A. niger (Kelly y Hynes, EMBO J . , 4:475-479 [1985]) . Levaduras metilotrópicas son apropiadas en la presente e incluyen, pero no están limitados a, levadura capaz de crecimiento sobre metanol seleccionado de los géneros que consisten de Hansenula, Candida, Kloeckera, Pichia, Saccharomyces , Torulopsis y Rhodotorula. Una lista de especies especificas que son ejemplares de esta clase de levaduras se puede encontrar en C. Anthony, The Biochemistry of Methylotrophs, 269 (1982) . Células huésped apropiadas para la expresión de polipéptido de TWEAK glicosilado son derivadas de organismos multicelulares. Ejemplos de células de invertebrados incluyen células de insecto tales como Drosophila S2 y Spodoptera Sf9, también como células de planta, tales como cultivos celulares de algodón, maíz, patata, soya, petunia, tomate y tabaco. Numerosas cepas baculovirales y variantes y células huésped de insectos permisivas correspondientes de huéspedes tales como Spodoptera frugiperda (oruga) , Aedes aegypti (mosquito) , Aedes albopictus (mosquito) , Drosophila melanogaster (mosca de fruta) y Bombyx morí han sido identificados. Una variedad de cepas virales para transfección están disponibles públicamente, por ejemplo, la variante L-l de Autographa californica NPV y la cepa Bm-5 de Bombyx mori NPV, y tales virus pueden ser usados como el virus en la presente de acuerdo con la presente invención, particularmente para transfección de células Spodoptera frugiperda . Sin embargo, el interés ha sido mayor en células de vertebrados y la propagación de células de vertebrados en cultivo (cultivo de tejido) se ha convertido en un procedimiento de rutina. Ejemplos de lineas de células huésped mamiferas útiles son linea de CV1 de riñon de chango transformada por SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); linea de riñon embriónico humano (células 293 o 293 subclonadas para crecimiento en cultivo de suspensión, Graham et al., J . Gen Virol . 36:59 (1977)); células de riñon de hámster bebé (BHK, ATCC CCL 10); células de ovario de hámster chino/-DHFR (CHO, Urlaub et al., Proc. Nati. Acad. Sci . USA 77:4216 (1980)); células sertoli de ratón (TM4, Mather, Biol . Reprod. 23:243-251 (1980)); células de riñon de chango (CV1 ATCC CCL 70); células de riñon de chango verde africano (VERO-76, ATCC CRL-1587); células de carcinoma cervical humano (HELA, ATCC CCL 2); células de riñon caninas (MDCK, ATCC CCL 34); células de hígado de rata de búfalo (BRL 3A, ATCC CRL 1442); células de pulmón humanas (W138, ATCC CCL 75); células de hígado humano (Hep G2, HB 8065); tumor mamario de ratón (MMT 060562, ATCC CCL51); células TRI (Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci . 383:44-68 (1982)); células MRC 5; células FS4; y una línea de hepatoma humano (Hep G2 ) . Las células huésped son transformadas con los vectores de expresión o clonación descritos anteriormente para la producción de polipéptidos de TWEA y cultivadas en medios nutrientes convencionales modificados como se apropiado para inducir promotores, seleccionar transformantes o amplificar los genes que codifican las secuencias deseadas. 3. Selección y Uso de un Vector Replicable El ácido nucleico (por ejemplo, cADN o ADN genómico) que codifica el polipéptido de TWEAK puede ser insertado a un vector replicable para clonación (amplificación del ADN) o para expresión. Varios vectores están disponibles públicamente. El vector puede estar, por ejemplo, en forma de un plásmido, cósmido, partícula viral o fago. La secuencia de ácido nucleico apropiada puede ser insertada al vector mediante una variedad de procedimientos. En general, el ADN es insertado a un (os) sitio (s) de endonucleasa de restricción apropiado (s) utilizando técnicas conocidas en el arte. Los componentes de vector incluyen en general, pero no están limitados a, uno o más de una secuencia de señal, un origen de replicación, uno o más genes marcadores, un elemento mejorador, un promotor y una secuencia de terminación de transcripción. La construcción de vectores apropiados que contienen uno o más de estos componentes emplea técnicas de ligación estándar que son conocidas para el técnico experimentado en el arte. El polipéptido de TWEAK puede ser producido recombinantemente no solo directamente, sino también como un polipéptido de fusión con un polipéptido heterólogo, que puede ser una secuencia de señal u otro polipéptido que tiene un sitio de escisión especifico en el término N de la proteina o polipéptido maduro. En general, la secuencia de señal puede ser un componente del vector o puede ser parte del ADN que codifica el polipéptido de TWEAK que es insertado al vector. La secuencia de señal puede ser una secuencia de señal procarióntica seleccionada por ejemplo del grupo de fosfatasa alcalina, penicilinasa , lpp o líderes de enterotoxina II estables térmicamente. Para la secreción de levadura, la secuencia de señal puede ser, por ejemplo, el líder de invertasa de levadura, el líder de factor alfa (en los que se incluyen líderes de factor a de Saccharomyces y Kluyveromyces, los últimos descritos en la patente estadounidense No. 5,010,182) o líder de fosfatasa ácido, el líder de glucoamilasa de C. albicans (EP 362,179 publicado el 4 de abril de 1990), o la señal descrita en O 90/13646 publicada el 15 noviembre de 1990. En la expresión de células mamíferas, la secuencia de señal mamifera pueden ser usadas para la secreción directa de la proteina, tales como secuencias de señal de polipéptidos secretados de la misma especie o especies relacionadas, también como líder secretorios virales. Tanto los vectores de expresión como de clonación que contiene una secuencia de ácido nucleico que permite que el vector se replique en una o más células huésped seleccionadas. Tales secuencias son bien conocidas para una variedad de bacterias, levaduras y virus. El origen de replicación del plásmido pBR322 es apropiado para la mayoría de bacterias gram-negativas, el origen de plásmido 2µ es apropiado para levadura y varios orígenes virales (SV40, polioma, adenovirus, VSV o BPV) son útiles para clonar vectores en células mamíferas. Los vectores de expresión y clonación contendrán comúnmente un gen de selección, también denominado un marcador seleccionable . Genes de selección típicos codifican proteínas que (a) confieren resistencia a antibióticos u otras toxinas, por ejemplo, ampicilina, neomicina, metotrexate o tetraciclina, (b) complementan deficiencias auxotrópicas o (c) suministran nutrientes críticos no disponibles de medios complejos, por ejemplo, el gen que codifica D-alanina racemasa para Bacilli. Un ejemplo de marcadores seleccionables apropiados para células mamíferas son aquellos que permiten la identificación de células competentes para absorber el ácido nucleico que codifica el polipéptido de TWEAK, tal como DHFR o timidina cinasa. Una célula huésped apropiada cuando se emplea DHFR tipo silvestre es la linea de célula CHO deficiente en actividad DHFR, preparada y propagada como se describe por Urlaub et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 77:4216 (1980). Un gen de selección apropiado para uso en levadura es el gen trpl presente en el plásmido de levadura YRp7 [Stinchcomb et al., Nature, 282:39 (1979); Kingsman et al., Gene, 7:141 (1979); Tschemper et al., Gene, 10:157 (1980)]. El gen trpl proporciona un marcador de selección para una cepa mutante de levadura que carece de la habilidad para crecer en triptófano, por ejemplo, ATCC No. 44076 o PEP4-1 [Jones, Genetics, 85:12 (1977)]. Los vectores de expresión y clonación contienen usualmente un promotor enlazado operativamente a la secuencia de ácido nucleico que codifica el polipéptido de TWEAK para dirigir la síntesis de mARN . Promotores reconocidos por una variedad de células huésped potenciales son bien conocidos. Promotores apropiados para uso con huéspedes procariónticos incluyen los sistemas de promotor de ß-lactamasa y lactosa [Chang et al., Nature, 275:615 (1978); Goeddel et al., Nature, 281:544 (1979)], fosfatasa alcalina, un sistema de promotor de triptófano (trp) system [Goeddel, Nucleic Acids Res., 8:4057 (1980); EP 36,776], y promotores híbridos tales como el promotor tac [deBoer et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 80:21- (1983)]. Promotores para uso en sistemas bacterianos también contendrán una secuencia de Shine-Dalgarno (S.D) enlazada operativamente al ADN que codifica el polipéptido de TWEAK. Ejemplos de secuencia de promoción apropiadas para uso con huéspedes de levadura incluyen los promotores para 3-fosfoglicerato cinasa [Hitzeman et al., J. Biol . Chem. , 255:2073 (1980)] u otras enzimas glicoliticas [Hess et al., J . Adv. Enzyme Reg., 7:149 (1968); Holland, Biochemistry, 17:4900 (1978)], tales como enolasa, gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa, hexocinasa, piruvato decarboxilasa, fosfofructocinasa, glucosa-6-fosfato isomerasa, 3-fosfoglicerato mutasa, piruvato cinasa, triosefosfato isomerasa, fosfoglucosa isomerasa y glucocinasa. Otros promotores de levadura, que son promotores inducibles que tienen la ventaja adicional de transcripción controlada por condiciones de crecimiento, son las regiones promotoras para alcohol deshidrogenasa 2, isocitocromo C, fosfatasa ácida, enzimas degradantes asociadas con metabolismo de nitrógeno, metalotioneina, gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa y enzimas responsables por la utilización de maltosa y galactosa. Vectores y promotores apropiados para uso en la expresión de levadura son descritos adicionalmente en EP 73, 657. La transcripción de polipéptido de TWEAK de vectores en células huésped mamiferas es controlada por ejemplo por promotores obtenidos de los genomas de virus tales como virus de polioma, virus de viruela (UK 2,211,504 publicada el 5 de julio de 1989), adenovirus (tal como Adenovirus 2), virus de papiloma bovino, virus de sarcoma aviar, citomegalovirus , un retrovirus, virus de hepatitis B y virus de simio 40 (SV40), de promotores mamíferos heterólogos, por ejemplo, el promotor de actin promotor o una promotor de inmunoglobulina y de promotores de choque térmico, a condición de que tales promotores sean compatibles con los sistemas de célula huésped. La transcripción de un ADN que codifica el polipéptido de TWEAK por eucariontes superiores puede ser incrementada al insertar una secuencia mejoradora al vector. Los mejoradores son elementos de ADN de acción cis, usualmente de alrededor de 10 a 300 bp, que actúan sobre un promotor para incrementar su transcripción. Muchas secuencias de mejorador son ahora conocidas de genes de mamíferos, (globina, elastasa, albúmina, -fetoproteí a e insulina) . Comúnmente, sin embargo, se usará un mejorador de un virus de célula eucarióntica . Ejemplos incluyen el mejorador SV40 en el lado posterior del origen de replicación (bp 100-270) , el mejorador de prematuro de citomegalovirus, el mejorador de polioma en el lado posterior del origen de replicación, y mejoradores de adenovirus. The mejorador puede ser empalmado al vector en una posición 5 ' o 3 ' a la secuencia de codificación del polipéptido de TWEAK, pero está preferiblemente localizado en el sitio 5' del promotor. Vectores de expresión usados en células huésped eucariónticas (levadura, hongos, insectos, plantas, animales, humanos, o células nucleadas de otros organismos multicelulares) también contendrán secuencias necesarias para la terminación de transcripción y para estabilizar el mARN. Tales secuencias están disponibles comúnmente las regiones 5' y ocasionalmente 3', sin traducir de ADN o cADN eucariónticos o virales. Estas regiones contienen segmentos de nucleótido transcritos como fragmentos poliadenilados en la porción sin traducir del mARN que codifica el polipéptido de TWEAK. Todavía otros métodos, vectores y células huésped apropiadas para adaptación a la síntesis de polipéptido de TWEAK en cultivo celular de vertebrado recombinantes son descritos en Gething et al., Nature, 293:620-625 (1981); Mantei et al., Nature, 281:40-46 (1979); EP 117,060; y EP 117,058. 4. Cultivos de las células huésped Las células huésped usadas para producir el polipéptido de TWEAK de esta invención pueden ser cultivadas en una variedad de medios. Medios disponibles comercialmente tales como FIO de Ham (Sigma), Medio esencial mínimo ( (MEM) , (Sigma) , RPMI-1640 (Sigma), y Medio de Eagle modificado por Dulbecco ((DMEM), Sigma) son apropiados para cultivar las células huésped. Además, cualquiera de los medios descritos en Ham et al., Meth. Enz. 58:44 (1979), Barnes et al., Anal. Biochem. 102:255 (1980), patentes estadounidenses Nos. 4,767,704; 4,657,866; 4,927,762; 4,560,655; o 5,122,469; O 90/03430; WO 87/00195; o patente estadounidense Reexpedición 30,985 pueden ser usados como medios de cultivo para las células huésped. Cualquiera de estos medios puede ser complementado como sea necesario con hormonas y/u otros factores de crecimiento (tales como insulina, transferrina o factor de crecimiento epidérmico) , sales (tales como cloruro de sodio, calcio, magnesio y fosfato) , soluciones reguladoras del pH (tales como HEPES) , nucleótidos (tales como adenosina y timidina) , antibióticos (tales como fármaco GENTAMICINA™) , elementos en trazas (definidos como compuestos inorgánicos usualmente presentes a concentración finales en el intervalo micromolar) , y glucosa o una fuente de energía equivalente. Cualesquier otros complemento necesarios pueden también ser incluidos a concentraciones apropiadas como serían conocidas para aquellos experimentados en el arte. Las condiciones de cultivo, tales como temperatura, pH y los semejantes, son aquellos previamente usados con la célula huésped seleccionada para expresión y serán evidentes para el técnico ordinariamente experimentado.

. Detección de Amplificación/Expresión Genética La amplificación y/o la expresión genética puede ser medida en una muestra directamente, por ejemplo mediante Southern blotting convencional, Northern blotting para cuantificar la transcripción de mARN [Thomas, Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 77:5201-5205 (1980)], inmunoabsorción de puntos blotting (análisis de DNA) , PCR semi-cuantitativa, análisis de expresión genética de arreglo de ADN o hibridización in situ, utilizando una sonda marcada apropiadamente, en base a las secuencias proporcionadas en la presente. Alternativamente, se pueden emplear anticuerpos que pueden reconocer dúplex especifico, en los que se incluyen dúplex de ADN, dúplex de ARN y dúplex híbridos de ADN-ARN o dúplex de ADN-proteína . Los anticuerpos a su vez pueden ser marcados y el análisis puede ser llevado a cabo en donde el dúplex es enlazado a una superficie, de tal manera que en la formación del dúplex sobre la superficie, la presencia de anticuerpo enlazado al dúplex puede ser detectada. La expresión genética, alternativamente, puede ser medida mediante métodos inmunológicos , tales como teñido inmunohistoquímico de células o secciones de tejido y análisis de cultivo celular o fluidos corporales, para cuantificar directamente la expresión del producto genético. Anticuerpos útiles para teñido inmunohistoquímico y/o análisis de fluidos de muestra pueden ser ya sea monoclonales o policlonales y pueden ser preparados en cualquier mamífero. Convenientemente, los anticuerpos pueden ser preparados contra un polipéptido de T EAK de secuencia natural o contra un péptido sintético en base a las secuencias de ADN provistas en la presente o contra secuencia exógena fusionada a ADN de TWEAK y codificación de un epitopo de anticuerpo especifico. 6. Purificación de polipéptido de TWEAK Formas de polipéptido de TWEAK pueden ser recuperadas del medio de cultivo o de lisados de célula huésped. Si están enlazados a la membrana, pueden ser liberados de la membrana utilizando una solución detergente apropiada (por ejemplo, Triton-X 100) o mediante escisión enzimática. Las células usadas en la expresión de polipéptido de TWEAK puede ser rotas mediante varios medios físicos o químicos, tales como ciclos de congelación-deshielo, sonicación, rompimiento mecánico o agentes de lisis celular. Puede ser deseable purificar el polipéptido de TWEAK a partir de proteínas de células recombinantes o polipéptidos . Los siguientes procedimientos son ejemplares de procedimientos de purificación apropiados: mediante fraccionamiento sobre una columna de intercambio iónico; precipitación de etanol; HPLC de fase inversa; cromatografía sobre sílice o sobre una resina de intercambio catiónico tal como DEAE; cromatoenfoque ; SDS-PAGE; precipitación de sulfato de amonio; filtración de gel utilizando por ejemplo, Sephadex G-75; columnas de proteína A Sepharose para remover contaminantes tales como IgG; y columnas de quelación de metal para enlazar formas epítopo-marcadas del polinucleótido de TWEAK. Varios métodos de purificación de proteina pueden ser empleados y tales métodos son conocidos en el arte y descritos or ejemplo en Deutscher, Methods in Enzymology, 182 (1990); Scopes, Protein Purification : Principies and Practice, Springer-Verlag, New York (1982). La(s) etapa (s) de purificación seleccionada ( s ) dependerá (n) , por ejemplo, de la naturaleza del proceso de producción usado y el polipéptido de TWEAK particular producido. Formas solubles de TWEAK pueden ser empleadas en los métodos de la invención. Tales formas solubles de TWEAK pueden comprender modificaciones, como se describe posteriormente en la presente (tal como mediante fusión a una inmunoglobulina , etiqueta de epitopo o cremallera de leucina) . Las moléculas de inmunoadhesina son contempladas adicionalmente para uso en los métodos en la presente. Las inmunoadhesinas de receptor de TWEAKs pueden comprender varias formas de receptor de TWEAK, tal como el polipéptido de plena longitud también como formas soluble del receptor de TWEAK o un fragmento de los mismos. En modalidades particulares, la molécula puede comprender una fusión del receptor de polipéptido de TWEAK con una inmunoglobulina o una región particular de una inmunoglobulina. Para una forma bivalente de la inmunoadhesina, tal fusión podría ser a la región de Fe de una molécula de IgG. Las fusiones de Ig incluyen preferiblemente la sustitución de una forma soluble (dominio de transmembrana cancelado o inactivado) del polipéptido en lugar de por lo menos una región variable dentro de una molécula de Ig. En una modalidad particularmente preferida, la fusión de inmunoglobulina incluye las regiones de engozne, CH2 y CH3 o el las cadenas de engozne, CH1, CH2 y CH3 de una molécula de IgGl. Para la producción de fusiones de inmunoglobulina, véase también patente estadounidense No. 5,428, 130 expedida el 27 de junio de 1995 y Chamo et al., TIBTECH, 14.:52-60 (1996). El diseño de inmunoadhesina más simple y más directo combina el (los) dominio (s) de enlace de la adhesina, por ejemplo, el TWEAK o receptor de T EAK) con la región Fe de una cadena pesada de inmunoglobulina. Ordinariamente, cuando se preparan las inmunoadhesinas de la presente invención, ácido nucleico que codifica el dominio de enlace de la adhesina será fusionado C-terminalmente a ácido nucleico que codifica el término N de una secuencia de dominio constante de inmunoglobulina, sin embargo fusiones N-terminal son también posibles . Comúnmente, en tales fusiones el polipéptido quimérico codificado retendrá por lo menos engozne funcionalmente activo, dominios CH2 y CH3 de la región constante de una cadena pesada de inmunoglobulina. Las fusiones también se hacen al término C de la porción Fe de un dominio constante, o inmediatamente N-terminal al CH1 de la cadena pesada o la región correspondiente de la cadena ligera. El sitio preciso en el cual la fusión se hace no es critical; sitios particulares son bien conocidos y pueden ser seleccionados con el fin de optimizar la actividad biológica, secreción o características de enlace de la inmunoadhesina . En una modalidad preferida, la secuencia de adhesina es fusionada al término N de la región de Fe de inmunoglobulina Gi (IgGi) . Es posible fusionar toda la región constante de cadena pesada a la secuencia de adhesina. Sin embargo, más preferiblemente, una secuencia que comienza en la región de engozne justo corriente arriba del sitio de escisión de papaína que define IgG Fe químicamente (esto es, residuo 216, tomando el primer residuo de la región constante de cadena pesada como 114), o sitios análogos de otras inmunoglobulinas es usado en la fusión. En una modalidad particularmente preferida, la secuencia de aminoácidos de adhesina es fusionada a (a) la región de engozne y CH2 y CH3 o (b) los dominios CH1, engozne CH2 y dominio CH3, de una cadena pesada de IgG. Para inmunoadhesinas bisespecí icas , las inmunoadhesinas son ensambladas como multímeros, y particularmente como heterodímeros o heterotetrámeros . En general, estas inmunoglobulinas ensambladas tendrán estructuras unitarias conocidas. Una unidad estructural de cuatro cadenas básicas está en forma en la cual IgG, IgD, e IgE existen. Una unidad de cuatro cadenas es repetida en las inmunoglobulinas de peso molecular más alto; Ig existe en general como pentámero de cuatro unidades básicas retenidas conjuntamente mediante enlaces de disulfuro. Globulina IgA y ocasionalmente globulina IgG, pueden también existir en forma multimérica en el suero. En el caso de multímeros, cada una de las cuatro unidades pueden ser las mismas o diferentes. Varias inmunoadhesinas ensambladas ejemplares dentro del alcance de la presente son mostradas esquemáticamente a continuación : (a) ACL-ACL; (b) ACH-(ACH, ACL-ACH , ACL-VHCH , O VLCL-ACH ) ; (c) ACL-ACH- (ACL-ACH , ACL-VHCH , VLCL-ACH, O VLCL-VHCH ) (d) ACL-VHCH- ( ACH, O ACL-VHCH , O VLCL-ACH ) ; (e) VLCL-ACH- (ACL-VHCH , O VLCL-ACH ) ; y (f) (A-Y)n- (VLCL-VHCH)2, en donde cada A representa secuencias de aminoácido de adhesina idénticas o diferentes; VL es un dominio variable de cadena ligera de inmunoglobulina ; VH es un dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina ; CL es un dominio constante de cadena ligera de inmunoglobulina ; CH es un dominio constante de cadena pesada de inmunoglobulina; n es un número entero mayor de 1; Y designa el residuo de un agente de reticulación covalente . Por propósitos de brevedad, las estructuras anteriores solamente muestran elementos clave; no indican unión (J) u otros dominios de las inmunoglobulinas , ni son enlaces de disulfuro mostrados. Sin embargo, en donde tales dominios son requeridos por actividad de enlace, deben ser construidos para estar presentes en los sitios ordinarios que ocupan en las moléculas de inmunoglobulina . Alternativamente, las secuencias de adhesina pueden ser insertadas entre secuencias de cadena pesada y cadena ligera de inmunoglobulina, de tal manera que una inmunoglobulina que comprende una cadena pesada quimérica es obtenida. En esta modalidad, las secuencias de adhesina son fusionadas al extremo 3' de una cadena pesada de inmunoglobulina en cada brazo de una inmunoglobulina, ya sea entre el engozne y el dominio CH2, o entre los dominios CH2 y CH3. Constructos similares han sido reportados por Hoogenboom et al., Mol. Immunol., 28:1027-1037 (1991). Aunque la presencia de una cadena ligera de inmunoglobulina no es requerida en las inmunoadhesinas de la presente invención, una cadena ligera de inmunoglobulina podría estar presente ya sea asociada covalentemente a un polipéptido de fusión de cadena pesada de adhesina-inmunoglobulina o fusionada directamente a la adhesina. En el primer caso, ADN que codifica una cadena ligera de inmunoglobulina es coexpresada comúnmente con el ADN que codifica la proteina de fusión de cadena pesada de adhesina-inmunoglobulina . Después de la secreción, la cadena pesada híbrida y la cadena ligera serán enlazadas covalentemente para proporcionar una estructura semejante a inmunoglobulina que comprende dos pares de cadena pesada-cadena ligera de inmunoglobulina enlazadas por disulfuro. Métodos apropiados para la proporción de tales estructuras se revela por ejemplo en la patente estadounidense No. 4,816,567, expedida el 28 de marzo de 1989. Las inmunoadhesinas son construidas más convenientemente mediante fusión de la secuencia de cADN que codifica la porción de adhesina en cuadro a una secuencia de cADN de inmunoglobulina. Sin embargo, la fusión a fragmentos de inmunoglobulina genómicos puede también ser usada (véase, por ejemplo Aruffo et al., Cell, ^1:1303-1313 (1990); y Stamenkovic et al., Cell, 66:1133-1144 (1991)). El último tipo de fusión requerimiento la presencia de secuencias reguladoras de Ig para expresión. cADN que codifican regiones constantes de cadena pesada de IgG pueden ser aislados en base a secuencias publicadas de bibliotecas de cADN derivadas de bazo o linfocitos de sangre periférica, mediante hibridización o mediante técnicas de reacción en cadena de polimerasa (PCR) . Los cADN que codifican la "adhesina" y las partes de inmunoglobulina de la inmunoadhesina son insertados en tándem a un vector de plásmido que dirige la expresión eficiente en las células huésped escogidas. En otras modalidades, el agonista de T EAK o antagonista de TWEAK puede ser modificado covalentemente al enlazar la molécula a uno de una variedad de polímeros no proteináceos , por ejemplo polietilenglicol (PEG), propilenglicol o polioxialquilenos , a la manera resumida en las patentes estadounidenses Nos. 4,640,835; 4,496,689; 4,301,144; 4,670,417; 4,791,192 o 4,179,337, u otras moléculas semejantes tales como poliglutamato . Tales formas pegiladas pueden ser preparadas utilizando técnicas conocidas en el arte. Formas de cremallera de leucina de estas moléculas son también contempladas por la invención. "Cremallera de leucina" es un término en el arte usado para referirse a una secuencia rica en leucina que mejora, promueve o impulsa la dimerización o trimerización de su socio de fusión (por ejemplo, la secuencia o molécula a la cual la cremallera de leucina es fusionada o enlazada) . Varios polipéptidos de cremallera de leucina han sido descritos en el arte. Véase, por ejemplo, Landschulz et al., Science, 240 : 1759 (1988); patente estadounidense 5,716,805; WO 94/10308; Hoppe et al., FEBS Letters, 344 : 1991 (1994); aniatis et al., Nature, 341 : 24 (1989) . Aquellos experimentados en el arte apreciarán que una secuencia de cremallera de leucina puede ser fusionada ya sea en el extremo 5' o 3' de la molécula.

Los agonistas de TWEAK y antagonistas de T EAK de la presente invención pueden también ser modificados de una manera para formar moléculas quiméricas mediante fusión del polipéptido a otro polipéptido heterólogo o secuencia de aminoácidos. Preferiblemente, tal polipéptido heterólogo o secuencia de aminoácidos es uno que actúa para oligomerizar la molécula quimérica. En una modalidad, tal molécula quimérica comprende una fusión del polipéptido con una etiqueta que proporciona un epitopo al cual un anticuerpo anti-etiqueta se puede enlazar selectivamente. La etiqueta de epitopo es colocada en general en el término amino- o carboxilo del polipéptido. La presencia de tales formas epitopo-marcada del polipéptido puede ser detectada utilizando un anticuerpo contra el polipéptido de etiqueta. También, la provisión de la etiqueta de epitopo permite que el polipéptido sea purificado fácilmente mediante purificación de afinidad utilizando un anticuerpo anti-etiqueta u otro tipo de matriz de afinidad que se enlaza a la etiqueta de epitopo. Varios polipéptidos de etiqueta y sus respectivos anticuerpos son bien conocidos en el arte. Ejemplos incluyen etiquetas de poli-histidina (poli-his) o poli-histidina-glicina (poli-his-gly ) ; el polipéptido de etiqueta flu HA y su anticuerpo 12CA5 [Field et al., Mol. Cell. Biol . , 8^:2159-2165 (1988)]; la etiqueta c-myc y los anticuerpos 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 y 9E10 del mismo [Evan et al., Molecular and Cellular Biology, 5:3610-3616 (1985)]; y la etiqueta de glicoproteina de virus de Herpes Simplex (gD) y su anticuerpo [Paborsky et al., Protein Engineering, 3(6) :547-553 (1990)] . Otros polipéptidos de etiqueta incluyen el bandera-péptido [Hopp et al., BioTechnology , 6:1204-1210 (1988)]; el péptido de epitopo KT3 [Martin et al., Science, 255 : 192-194 (1992)]; un péptido de epitopo de a-tubulina [Skinner et al., J. Biol . Chem. , 266 : 15163-15166 (1991)]; y la etiqueta de péptido de proteina del gen 10 T7 [Lutz-Freyermuth et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 82:6393-6397 (1990)] . Se contempla que anticuerpos anti-TWEAK o anticuerpos de receptor anti-TWEAK pueden también ser usados en los métodos revelados actualmente. Estos anticuerpos pueden ser anticuerpos monoclonales . El experimentado en el arte puede utilizar métodos conocidos en el arte y descritos en la presente, para identificar anticuerpos TWEAK o anticuerpos de receptor de TWEAK que actúan como agonistas o antagonistas de TWEAK o actividad (es ) de receptor de TWEAK. Anticuerpos monoclonales pueden ser preparados utilizando métodos de hibridoma, tales como aquellos descritos or Kohler y Milstein, Nature, 256 : 95 (1975) . En un método de hibridoma, un ratón, hámster u otro animal huésped apropiado, es inmunizado comúnmente con un agente inmunizante para producir linfocitos que producen o son capaces de producir anticuerpos que se enlazarán específicamente al agente inmunizante. Alternativamente, los linfocitos pueden ser inmunizados in vitro . El agente inmunizante incluirá comúnmente un polipéptido de T EAK o receptor de TWEAK o una proteína de fusión del mismo, tal como una proteína de fusión de TWEAK-IgG. En general, se usan ya sea linfocitos de sangre periférica ("PBL") si se desean células de origen humano o se usan células de bazo o células de nodo linfático si se desean fuentes mamíferas no humanas. Los linfocitos son luego fusionados con una línea de célula inmortalizada utilizando un agente de fusión apropiado, tal como polietilenglicol, para formar una célula de hibridoma [Goding, onoclonal Antibodies : Principies and Practice, Academic Press, (1986) pp. 59-103] . Líneas de células inmortalizadas son usualmente células mamíferas transformadas, particularmente células de mieloma de origen de roedor, bovino y humano. Usualmente, se usan líneas de célula de mieloma de rata o ratón. Las células de hibridoma pueden ser cultivadas en un medio de cultivo apropiado que contiene preferiblemente una o más sustancias que inhiben el crecimiento o sobrevivencia de las clase inmortalizadas sin fusionar. Por ejemplo, si las células parenterales carecen de la enzima hipoxantina guanina fosforibosil transferasa (HGPRT o HPRT) , el medio de cultivo para los hibridomas incluirá comúnmente hipoxantina, aminopterina y timidina ("medio de HAT"), que impide sustancialmente el crecimiento de células HGPRT-deficientes . Las líneas celulares inmortalizadas preferidas son aquellas que se fusionan eficientemente, soportan la expresión de altos nivel estable de anticuerpo mediante las células que producen anticuerpo seleccionadas y son sensibles a un medio tal como medio de HAT. Las lineas de células inmortalizadas más preferidas son lineas de mieloma murinas, que pueden ser obtenidas, por ejemplo del Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California y la American Type Culture Collection, Manassas, Virginia. Lineas celulares de mieloma humano y de heteromieloma de ratón-humano también han sido descritas para la producción de anticuerpos monoclonales humanos [Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, (1987) pp. 51-63]. El medio de cultivo en el cual las células de hibridoma son cultivadas pueden luego ser analizado en cuanto a la presencia de anticuerpos monoclonales dirigidos contra TWEAK o receptor de TWEAK. Opcionalmente, la especificidad de enlace de anticuerpos monoclonales producidos por las células de hibridoma es determinada mediante inmunoprecipitación o mediante un análisis de enlace in vitro, tal como radioinmunoanálisis (RIA) o análisis inmunoabsorbente enlazado a enzima (ELISA) y preferiblemente por medio de un análisis de BIAcore. Tales técnicas y análisis son conocidos en el arte. La afinidad de enlace del anticuerpo monoclonal se puede determinar por ejemplo, mediante el análisis de Scatchard de Munson y Pollard, Anal. Biochem., 107:220 (1980). Después que las células de hibridoma deseadas con identificadas, los clones pueden ser subclonados mediante procedimientos de dilución limitantes y cultivo mediante métodos estándar [Goding, supra] . Medios de cultivo apropiados para este propósito incluyen, por ejemplo Medio de Eagle modificado por Dulbecco o medio RPMI-1640. Alternativamente, las células de hibridoma pueden ser cultivadas in vivo como ascites en un mamífero . Los anticuerpos monoclonales secretados por los subclones pueden ser aislados o purificados del medio de cultivo o fluido de ascites mediante procedimientos de purificación de inmunoglobulina convencionales, tales como por ejemplo, proteína A-Sepharose, cromatografía de hidroxilapatita, electroforesis de gel, diálisis o cromatografía de afinidad. Los anticuerpos monoclonales también pueden ser fabricados mediante métodos de ADN recombinantes, tales como aquellos descritos en la patente estadounidense No. 4,816,567. ADN que codifica los anticuerpos monoclonales es aislado fácilmente y sometido a secuencia utilizando procedimientos convencionales (por ejemplo, al utilizar sondas de oligonucleótidos que son capaces de enlazarse específicamente a genes que codifican las cadenas pesada y ligera de los anticuerpos monoclonales). Las células de hibridoma sirven como una fuente preferida de tal ADN. Una vez aislado, el ADN puede ser colocado en vectores de expresión, que son luego transfectados a células huésped tales como células de E. coli, células COS de simio, células de ovario de hámster chino (CHO) o células de mieloma que no producen de otra manera proteína de inmunoglobulina , para obtener la síntesis de anticuerpos monoclonales en las células huésped recombinantes . El ADN puede también ser modificado, por ejemplo, al sustituir la secuencia de codificación por dominios constantes de cadena pesada y ligera humanos en lugar de las secuencias murinas homologas, Morrison, et al., Proc. Nat. Acad . Sci . 81, 6851 (1984), o mediante unión covalentemente de la secuencia de codificación de inmunoglobulina todo o parte de la secuencia de codificación para un polipéptido sin inmunoglobulina. Comúnmente tales polipéptidos sin inmunoglobulina son sustituidos por los dominios constantes de un anticuerpo de la invención o son sustituidos por los dominios variables de un sitio de combinación de antígeno de un anticuerpo de la invención para crear un anticuerpo bivalente quimérico que comprende un sitio de combinación de antígeno que tiene especificidad por T EAK o receptor de TWEAK y otro sitio de combinación de antígeno que tiene especificidad por un antígeno diferente . Anticuerpos quiméricos o híbridos también pueden ser preparados in vitro utilizando métodos conocidos en química de proteína sintética, en los que se incluyen aquellos que involucran agentes de reticulación. Por ejemplo, inmunotoxinas pueden ser construidas utilizando una reacción de intercambio de disulfuro o mediante formación de un enlace de tioéter. Ejemplos de reactivos apropiados para este propósito incluyen iminotiolato y metil-4-mercaptobutirimidato . Fragmentos de Fv de una sola cadena pueden también ser producidos, tal como se describe en Iliades et al., FEBS Letters, 409 : 437-441 (1997). El acoplamiento de tales fragmentos de una sola cadena utilizando varios enlazadores es descrito en Kortt et al., Protein Engineering, 10:423-433 (1997). Una variedad de técnicas para la producción recombinante y manipulación de anticuerpos son bien conocidos en el arte. Ejemplos ilustrativos de tales técnicas que son utilizados comúnmente por técnicos experimentados son descritos en mayor detalle posteriormente en la presente. (i) Anticuerpos humanizados En general, un anticuerpo humanizado tiene uno o más residuos de aminoácido introducido al mismo de una fuente no humana. Estos residuos de aminoácido no humanos son denominados frecuentemente como residuos de "importación", que son tomados comúnmente de un dominio variable de "importación". La humanización puede ser llevada a cabo esencialmente siguiendo el método de Winter y colaboradores [Jones et al., Nature, 321 : 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332 : 323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)], al sustituir CDR de roedor o secuencias de CDR para las secuencias correspondientes de un anticuerpo humano. Asi, tales anticuerpos "humanizados" son anticuerpos quiméricos en donde sustancialmente menos que un dominio variable humano intacto ha sido sustituido por la secuencia correspondiente de una especie no humana. En la práctica, los anticuerpos humanizados son comúnmente anticuerpo humanos en los cuales algunos residuos de CDR y posiblemente algunos residuos de FR son sustituidos por residuos de sitios ángulos en los anticuerpos de roedor. Es importante que los anticuerpos sean humanizados con retención de alta afinidad por el antigeno y otras propiedades biológicas favorables. Para obtener este objetivo, de acuerdo con un método preferido, anticuerpos humanizados son preparados mediante un proceso de análisis de las secuencias originales y varios productos humanizados conceptuales utilizando modelos tridimensionales de las secuencias originales y humanizadas. Modelos de inmunoglobulina tridimensionales están disponibles comúnmente y son familiares para aquellos experimentados en el arte. Programas de computadora están disponibles que ilustran y despliegan estructuras conformacionales tridimensionales probables de secuencias de inmunoglobulina candidatas seleccionadas. La inspección de estos despliegues permite el análisis del papel probable de residuos en el funcionamiento de la secuencia de inmunoglobulina candidata, esto es, el análisis de residuos que influencia la habilidad de la inmunoglobulina candidata para enlazarse a su antigeno. De esta manera, residuos de FR pueden ser seleccionados y combinados de la secuencia de consenso y de importación, de tal manera que la característica de anticuerpo deseada, tal como afinidad incrementada por el (los) antígeno(s) objetivo es obtenida. En general, los residuos de CDR están directamente y más sustancialmente involucrados en influenciar el enlace de antígeno. (11) Anticuerpos humanos Anticuerpos monoclonales humanos pueden ser elaborados mediante el método de hibridoma. Líneas celulares de mieloma humana de heteromieloma de ratón-humano para la producción de anticuerpos monoclonales humanos han sido descritos, por ejemplo por Kozbor, J. Immunol . 133 , 3001 (1984), y Brodeur, et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp.51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987) . Es ahora posible producir animales transgénicos (por ejemplo, ratones) que son capaces, después de la inmunización, de producir un repertorio de anticuerpos humanos en ausencia de producción de inmunoglobulina endógena. Por ejemplo, se ha descrito que la cancelación homociga del gen de región de unión de cadena pesada del anticuerpo (JH) en ratones mutantes quiméricos y de linea de germinación da como resultado la inhibición completa de producción de anticuerpo endógena. La transferencia del arreglo genético de inmunoglobulina de linea de germinación humana en tales ratones mutantes de linea de germinación dará como resultado la producción de anticuerpos humanos después del desafio de antigeno, véase por ejemplo Jakobovits et al., Proc. Nati. Acad . Sci . USA 90, 2551-255 (1993); Jakobovits et al., Nature 362, 255-258 (1993) . Méndez et al. {Nature Genetics 15: 146-156 [1997]) han mejorado adicionalmente la tecnología y han generado una línea de ratones transgénicos designados como "Xenoratón II" que, cuando son tratados con un antígeno, generan anticuerpos plenamente humanos de alta afinidad. Esto fue obtenido mediante integración de línea de germinación de sitios de cadena pesada y cadena ligera humanas de megabase a ratones con cancelación al segmento de JH endógeno como se describe anteriormente. El Xenoratón II alberga 1,020 kb de sitios de cadena pesada humanos que contienen aproximadamente 66 genes VH, regiones DH y JH completas y tres regiones constantes diferentes (µ, d y ?) y también alberga 800 kb de sitio humano que contienen 32 genes VK, segmentos de J y genes C . Los anticuerpos producidos en estos ratones se asemejan estrechamente a aquellos vistos en humanos en todos los aspectos, en los que se incluyen rearreglo genético, montaje y repertorio. Los anticuerpos humanos son expresados preferiblemente sobre anticuerpos endógenos debido a la cancelación en el segmento de JH endógeno que impide el rearreglo genético en el sitio murino . Alternativamente, la tecnología de despliegue de fago (McCafferty et al., Nature 348, 552-553 [1990]) puede ser usada para producir anticuerpos humanos y fragmentos de anticuerpo in vitro, a partir de repertorios de gen de dominio variable (V) de inmunoglobulina a partir de donadores no inmunizados. De acuerdo con esta técnica, los genes de dominio de anticuerpo V son clonados en cuadro ya sea a un gen de proteína de recubrimiento mayor o menor de un bacteriófago filamentoso, tal como M13 o fd, y desplegados como fragmentos de anticuerpo funcionales sobre la superficie de la partícula de fago. Debido a que la partícula filamentosa contiene una copia de ADN de una sola hebra del genoma de fago, las selecciones en base a las propiedades funcionales del anticuerpo también dan como resultado la selección del gen que codifica el anticuerpo que exhibe aquellas propiedades. Así, el fago imita algunas de las propiedades de la célula B. El despliegue de fago puede ser efectuado en una variedad de formatos; para su revisión, véase por ejemplo Johnson, Kevin S. y Chiswell, David J., Current Opinión in Structural Biology _3, 564-571 (1993). Varias fuentes de segmentos de gen V pueden ser usados para el despliegue de fago. Clackson et al., Nature 352, 624-628 (1991) aislaron un arreglo diverso de anticuerpos anti-oxazolona a partir de una biblioteca de combinación aleatoria pequeña de genes V derivados de los bazos de ratones inmunizados. Un repertorio de genes V de donadores humanos sin inmunizar puede ser construido y anticuerpos a un diverso arreglo del antigeno (en los que se incluyen auto-antigenos) pueden ser aislados esencialmente siguiendo las técnicas descritas por Marks et al., J. Mol. Biol. 222, 581-597 (1991), o Griffith et al., EMBO J. 12, 725-734 (1993) . En una respuesta inmune natural, los genes de anticuerpo acumulan mutaciones a una alta velocidad (hipermutación somática) . Algunos de los cambios introducidos conferirán más alta afinidad y células B que despliegan inmunoglobulina de superficie de alta afinidad son replicadas preferiblemente y diferenciadas durante el tratamiento de antigeno subsecuente. Este proceso natural puede ser imitado al emplear la técnica conocida como "entremezcla de cadena" (Marks et al., Bio/Technol . 10, 779-783 [1992]) . En este método, la afinidad de anticuerpos humanos "primarios" obtenidos mediante despliegue de fago puede ser mejorada al reemplazar secuencialmente los genes de región de V de cadena pesada y ligera con repertorios de variantes que se presentan de manera estable en la naturaleza (repertorio) de genes de dominio V obtenidos de donadores sin inmunizar. Esta técnica permite la producción de anticuerpos y fragmentos de anticuerpo con afinidades en el intervalo nanomolar. Una estrategia para fabricar repertorios de anticuerpo de fago muy grandes (también conocidos como "la madre de todas las bibliotecas") se ha descrito por Waterhouse et al., Nucí. Acids Res. 21 , 2265-2266 (1993). La entremezcla de gen puede también ser usada para derivar anticuerpos humanos de anticuerpos de roedor, en donde el anticuerpo humano tiene afinidades y especificidades similares al anticuerpo de roedor de partida. De acuerdo con este método que también es denominado como "impresión de epítopo", el gen de dominio V de cadena pesada o ligera de anticuerpos de roedor obtenidos mediante técnica de despliegue de fago es reemplazado con un repertorio de genes de dominio V humanos, creando quimeras de roedor-humano . La selección del antigeno da como resultado el aislamiento de variable humano capaz de restaurar un sitio de enlace de antigeno funcional, esto es, el epitopo gobierna (imprime) la elección del socio. Cuando el proceso es repetido con el fin de reemplazar el dominio V de roedor restante, se obtiene un anticuerpo humano (véase solicitud de patente PCT WO 93/06213, publicada el 1 de abril de 1993). A diferencia de la inmunización tradicional de anticuerpos de roedor mediante injertación de CDR, esta técnica proporciona anticuerpos completamente humanos, que no tienen estructura o residuos de CDR de origen de roedor. Como se discute posteriormente en la presente, los anticuerpos de la invención pueden comprender opcionalmente anticuerpos monoméricos, anticuerpos diméricos, también como formas multivalentes de anticuerpos. Aquellos experimentados en el arte pueden construir tales dimeros o formas multivalentes mediante técnicas conocidas en el arte. Métodos para preparar anticuerpos monovalentes son también bien conocidos en el arte. Por ejemplo, un método involucra la expresión recombinante de cadena ligera de inmunoglobulina y cadena pesada modificada. La cadena pesada es truncada en general en cualquier punto en la región Fe para impedir la reticulación de cadena pesada. Alternativamente, los residuos de cisteina relevantes son sustituidos con otro residuo de aminoácido o son cancelados para impedir la reticulación. (iii) Anticuerpos bisespecíficos Los anticuerpos bisespecíficos son anticuerpos monoclonales , preferiblemente humanos o humanizados, que tienen especificidades de enlace para por lo menos dos antígenos diferentes. En el caso presente, una de las especificidades de enlace es por TWEAK o receptor de TWEAK. Métodos para fabricar anticuerpos bisespecíficos son conocidos en el arte. Tradicionalmente , la producción recombinante de anticuerpos bisespecíficos está basada en la co-expresión de dos pares de cadenas pesadas-ligeras de inmunoglobulina, en donde las dos cadenas pesadas tienen diferentes especificidades (Millstein y Cuello, Nature 305 , 537-539 (1983)). Debido al surtido o clasificación aleatoria de cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulina, estos hibridomas (cuadromas) producen una mezcla potencial de 10 moléculas de anticuerpo diferentes, de las cuales solamente una tiene una estructura bisespecifica correcta. La purificación de la molécula correcta, que se hace usualmente mediante etapas de cromatografía de afinidad, es más bien molesta y los rendimientos de producto son bajos. Procedimientos semejantes son revelados en la publicación de solicitud de PCT O 93/08829 (publicado el 13 de mayo de 1993), y en Traunecker et al., E BO 10, 3655-3659 (1991) . De acuerdo con un procedimiento diferente y más preferido, los dominios variables de anticuerpo con las especificidades de enlace deseadas (sitios de combinación de anticuerpo-antígeno) son fusionados a secuencia de dominio constante de inmunoglobulina. La fusión es preferiblemente con una dominio constante de cadena pesada de inmunoglobulina, que comprende por lo menos parte de las regiones de engozne, CH2 y CH3. Es preferido que la primera región constante de cadena pesada (CH1) contenga el sitio necesario para el enlace de cadena ligera, presente en por lo menos una de las fusiones. ADN que codifican las fusiones de cadena pesada de inmunoglobulina y si se desea, la cadena ligera de inmunoglobulina, son insertados a vectores de expresión separados y son co-transfectados a un organismo huésped apropiado. Esto proporciona mayor flexibilidad en el ajuste de las proporciones mutuas de los tres fragmentos de polipéptido en modalidades cuando proporciones desiguales de las tres cadenas de polipéptido usadas en la construcción proporcionan los rendimientos óptimos. Sin embargo, es posible insertar las secuencias de codificación para dos o todas las tres cadenas de polipéptido en un vector de expresión cuando la expresión de por lo menos dos cadenas de polipéptidos en proporciones iguales da como resultado altos rendimientos o cuando las proporciones no son de significado particular. En una modalidad preferida de este procedimiento, los anticuerpos bisespecificos están compuestos de una cadena pesada de inmunoglobulina híbrida con una primera especificidad de enlace en un brazo y un par de cadena pesada-cadena ligera de inmunoglobulina híbrida (que proporciona una segunda especificidad de enlace) en el otro brazo. Se encontró que esta estructura simétrica facilita la separación del compuesto bisespecifico deseado a partir de combinaciones de cadena de inmunoglobulina indeseable, ya que la presencia de una cadena ligera de inmunoglobulina es solamente la mitad de la molécula bisespecifica proporciona una manera de separación fácil. Este procedimiento es revelado en la publicación de PCT No. WO 94/04690, publicado el 3 de marzo de 1994. Para detalles adicionales de generación de anticuerpos bisespecificos , véase, por ejemplo, Suresh et al., Methods in Enzymology 121, 210 (1986) . (iv) Anticuerpos heteroconjugados Los anticuerpos heteroconjugados también están dentro del alcance de la presente invención. Los anticuerpos heterocon ugados están compuestos de dos anticuerpos unidos covalentemente . Tales anticuerpos han sido propuestos para apuntar células del sistema inmune a células indeseables (patente estadounidense No. 4,676,980) y para el tratamiento de infección por HIV (publicaciones de solicitudes de PCT Nos. WO 91/00360 y WO 92/200373; EP 03089) . Los anticuerpos heteroconjugados pueden ser elaborados utilizando cualquier métodos de reticulación convenientes. Agentes de reticulación apropiados son bien conocidos en el arte y son revelados en la patente estadounidense No. 4,676,980, junto con un número de técnicas de reticulación. (v) Fragmentos de anticuerpo En ciertas modalidades, el anticuerpo de anti-TWEAK o anticuerpo de anti-TWEAK (en los que se incluyen anticuerpos murinos, humanos y humanizados y variantes de anticuerpo) es una fragmento de anticuerpo. Varias técnicas han sido desarrolladas para la producción de fragmentos de anticuerpo. Tradicionalmente , estos fragmentos eran derivados vía digestión proteolitica de anticuerpos intactos (véase, por ejemplo, Morimoto et al., J. Biochem. Biophys. Methods 24:107-117 (1992) y Brennan et al., Science 229:81 (1985)). Sin embargo, estos fragmentos pueden ahora ser producidos directamente mediante células huésped recombinantes . Por ejemplo, fragmentos de Fab ' -SH pueden ser recuperados directamente de E. coli y acoplados químicamente para formar fragmentos F(ab' )2 (Cárter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)). En otra modalidad, el F(ab' ) 2 es formado utilizando la cremallera de leucina GCN4 para promover el ensamble de la molécula de F(ab' )2- De acuerdo con otro procedimiento, fragmentos de Fv, Fab o F(ab' ) 2 pueden ser aislados directamente del cultivo de célula huésped recombinante . Una variedad de técnicas para la producción de fragmentos de anticuerpo serán evidentes para el técnico experimentado. Por ejemplo, se puede efectuar digestión utilizando papaína. Ejemplos de digestión de papaína son descritos en WO 94/29348 publicado el 12/22/94 y patente estadounidense No. 4,342,566. La digestión de papaína de anticuerpos produce comúnmente dos fragmentos de enlace de antígeno idénticos llamados fragmentos Fab, cada con un solo sitio de enlace de antígeno y un fragmento de Fe residual. El tratamiento con pepsina produce un fragmento de F(ab' )2 que tiene dos sitios de combinación de antígeno y' es todavía capaz de reticulación de antígeno. Los fragmentos de Fab producidos en la digestión de anticuerpo también contienen los dominios constantes de la cadena ligera y el primer dominio constante (CHi) de la cadena pesada. Los fragmentos de Fab' difieren de los fragmentos de Fab por la adición de unos pocos residuos en el término carboxi del dominio de CHi de cadena pesada que incluye una o más cisteinas de la región de engozne de anticuerpo. Fab'-SH es la designación en la presente para Fab' en el cual el (los) residuo (s) de cisteina de los dominios constantes llevan un grupo tiol libre. Los fragmentos de anticuerpo F(ab' )2 originalmente eran producidos como pares de fragmentos de Fab' que tienen cisteina de engozne entre ellos. Otros acoplamientos químicos de fragmentos de anticuerpo son también conocidos. Los anticuerpos son glicosilados en posiciones conservadas en sus regiones constantes (Jefferis y Lund, Chem. Immunol . 65:111-128 [1997]; Wright y Morrison, TibTECH 15:26-32 [1997]) . Las cadenas laterales de oligosacárido de las inmunoglobulinas afectan la función de la proteína (Boyd et al., Mol. Immunol. 32.:1311_1318 [1996]; ittwe y Howard, Biochem. 29:4175-4180 [1990]), y la interacción intramolecular entre porciones de la glicoproteína que puede afectar la conformación y superficie tridimensional presentada sobre la glicoproteína (Hefferis y Lund, supra; Wyss y agner, Current Opin. Biotech. 7:409-416 [1996]) . Los oligosacáridos pueden también servir para apuntar una glicoproteína dada a ciertas moléculas en base a estructuras de reconocimiento específicas. Por ejemplo, se ha propuesto que en un IgG glicosilado, la porción de oligosacárido 'basculea' fuera del espacio inter-CH2 y los residuos de N-acetilglucosamina terminales se vuelven disponibles para enlazarse a la proteina de enlace de mañosa (Malhotra et al., Nature Med . 1:237-243 [1995]). La remoción mediante glicopeptidasa de los oligosacáridos de CAMPATH-1H (un anticuerpo IgGl monoclonal murino humanizado recombinante que reconoce el antigeno CDw52 de linfocitos humanos) producido en células de ovario de hámster chino (CHO) da como resultado una reducción completa en lisis moderada por complemento (CMCL) (Boyd et al., Mol. Immunol . 32:1311-1318 [1996]), en tanto que la remoción selectiva de residuos de ácido siálico utilizando neuraminidasa no da como resultado ninguna pérdida de DMCL . También se ha reportado que la glicosilación de anticuerpos afecta la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC) . En particular, las células de CHO con expresión tetraciclina-regulada de ß ( 1 , 4 ) -N-acetilglucosaminiltransferasa III (GnTIII), una glicosiltransferasa que cataliza la formación de GlcNAc de bisección, fue reportada que tiene actividad de ADCC mejorada (Umana et al., Mature Biotech. 17 : 176-180

[1999] ) . Las variantes de glicosilación de anticuerpos son variantes en las cuales el patrón de glicosilación de un anticuerpo es alterado. Alteración significa cancelar una o más porciones de carbohidrato encontradas en el anticuerpo, adición de una o más porciones de carbohidrato al anticuerpo, cambio de la composición de glicosilación (patrón de glicosilación) , la extensión de glicosilación, etc. Variantes de glicosilación pueden ser preparadas por ejemplo, al remover, cambiar y/o agregar uno o más sitios de glicosilación en la secuencia de ácido nucleico que codifica el anticuerpo. La glicosilación de anticuerpos es comúnmente ya sea N-enlazada u O-enlazada. N-enlazada se refiere a la anexión de la porción de carbohidrato a la cadena lateral de un residuo de asparagina. Las secuencias de tripéptido asparagina-X-serina y asparagina-X-treonina, en donde X es cualquier aminoácido excepto prolina, son las secuencias de reconocimiento para anexión enzimática de la porción de carbohidrato a la cadena lateral de asparagina. Asi, la presencia ya sea de una u otra de estas secuencias de tripéptido en un polipéptido crea un sitio de glicosilación potencial. La glicosilación O-enlazada se refiere a la anexión de uno de los azúcares N-aceilgalactosamina , galactosa, o xilosa a un hidroxiaminoácido, más comúnmente serina o treonina, aunque 5-hidroxiprolina o 5-hidroxilisina pueden también ser usadas. La adición de sitios de glicosilación al anticuerpo se lleva a cabo convenientemente al alterar la secuencia de aminoácido de tal manera que contiene una o más de las secuencias de tripéptido descritas anteriormente (para sitios de glicosilación N-enlazados ) . La alteración puede también ser realizada mediante la adición de, o sustitución mediante, uno o más residuos de serina o treonina a la secuencia del anticuerpo original (para sitios de glicosilación O-enlazado) .

La glicosilación (que incluye el patrón de glicosilación) de anticuerpos puede también ser alterada sin alterar la secuencia de nucleótidos fundamental. La glicosilación depende grandemente de la célula huésped usada para expresar el anticuerpo. Puesto que el tipo de célula usada para la expresión de glicoproteinas recombinantes , por ejemplo anticuerpos, como terapéuticos potenciales es raramente la célula natural, variaciones significativas en el patrón de glicosilación de los anticuerpos pueden ser esperadas (véase, por ejemplo Hse et al., J. Biol. Chem. 272 : 9062-9070 [1997]) . Además de la elección de las células huésped, factores que afectan la glicosilación durante la producción recombinante de anticuerpos incluyen modo de cultivo, formulación de medio, densidad de cultivo, oxigenación, pH, esquemas de purificación y los semejantes. Varios métodos han sido propuestos para alterar el patrón de glicosilación obtenido en un organismo huésped particular en los que se incluyen introducción o sobreexpresion de ciertas enzimas involucradas en la producción de oligosacáridos (patentes estadounidenses Nos. 5,047,335; 5,510,261 y 5.278,299) . La glicosilación o ciertos tipos de glicosilación, puede ser removida enzimáticamente de la glicoproteina , por ejemplo utilizando endoglicosidasa H (Endo H) . Además, la célula huésped recombinante puede ser diseñada genéticamente, por ejemplo hacerla defectuosa en el procesamiento de ciertos tipos de polisacáridos . Estas y técnicas similares son bien conocidas en el arte. La estructura de glicosilación de anticuerpos puede ser analizada fácilmente mediante técnicas convencionales de análisis de carbohidrato, en los que se incluyen cromatografía de lectina, RMN, espectrometría de masas, HPLC, GPC, análisis de composición de monosacárido, digestión enzimática secuencial y HPAEC-PAD, que usa cromatografía de intercambio aniónico a alto pH para separar oligosacáridos en base a la carga. Métodos para liberar oligosacáridos por propósitos analíticos son también conocidos e incluyen, sin limitación, tratamiento enzimático (efectuado comúnmente utilizando péptido-N-glicosidasa F/endo-p-galactosidasa), eliminación utilizando ambiente alcalino duro para liberar principalmente estructuras O-enlazadas y métodos químicos utilizando hidrazina anhidra para liberar tanto oligosacáridos N- como O-enlazados. Los triacuerpos también están dentro del alcance de la invención. Tales anticuerpos son descritos por ejemplo en Iliades et al., supra y Kortt et al., supra . Los anticuerpos de la presente invención pueden ser modificados al conjugar el anticuerpo a un agente citotóxico (como una molécula de toxina) o una enzima activadora de profármaco que convierte un profármaco (por ejemplo, un agente peptidil quimioterapéutico, véase WO81/01145) a un fármaco anti-cáncer activo. Véase, por ejemplo, WO 88/07378 y patente estadounidense No. 4,975,278. Esta tecnología es también denominada como "Terapia de Profármaco Moderada por Enzima Dependiente de Anticuerpo" (ADEPT) . El componente de enzima del inmunoconj ugado útil para ADEPT incluye cualquier enzima capaz de actuar sobre un profármaco de tal manera para convertirlo a su forma citotóxica más activa. Enzimas que son útiles en el método de esta invención incluyen, pero no están limitadas a, fosfatasa alcalina útil para convertir profármacos que contienen fosfato a fármacos libres; arilsulfatasa útil para convertir profármacos que contienen sulfato a fármacos libres; citocina desaminasa útil para convertir 5-fluorocitosina no tóxica al fármaco anti-cáncer, 5-fluorouracilo; proteasas, tales como proteasa serratia, termolisina, subtilisina, carboxipeptidasas y catepsinas (tales como catepsinas B y L) , que son útiles para convertir profármaco que contiene péptido a fármacos libres; caspasas tales como caspasa-3; D-alanilcarboxipeptidasas, útil para convertir profármacos que contienen sustituyentes de D-aminoácido; enzimas de escisión de carbohidrato tales como beta-galactosidasa y neuraminidasa útil para convertir profármacos glicosilados a fármacos libres; beta-lactamasa útil para convertir fármacos derivados con beta-lactamas a fármacos libres; y penicilina amidasas, tales como penicilina V amidasa o penicilina G amidasa, útiles para convertir fármacos derivados en sus nitrógenos de amina con grupos fenoxiacetilo o fenilacetilo, respectivamente, a fármacos libres.

Alternativamente, anticuerpos con actividad enzimática, también conocidos en el arte como "abzimas", pueden ser usados para convertir los profármacos de la invención a fármacos activos libres (véase, por ejemplo, assey, Nature 328: 457-458 (1987)). Conjugados de anticuerpo-abzima pueden ser preparados como se describe en la presente para la administración de la abzima a una población de células de tumor. Las enzimas pueden ser enlazadas covalentemente a los anticuerpos mediante técnicas bien conocidas en el arte tal como el uso de reactivos de reticulación heterobifuncionales . Alternativamente, proteínas de fusión que comprenden por lo menos la región de enlace de antígeno de un anticuerpo de la invención enlazada a por lo menos una porción funcionalmente activa de una enzima de la invención puede ser construidos utilizando técnicas de ADN recombinantes bien conocidas en el arte (véase, por ejemplo, Neuberger et al., Nature, 312: 604-608 (1984 ) . Modificaciones de anticuerpo adicionales son contempladas. Por ejemplo, el anticuerpo puede ser enlazado a uno de una variedad de polímeros no proteináceos , por ejemplo, polietilenglicol, propilenglicol , polioxialquilenos o copolímeros de polietilenglicol y propilenglicol, u otras moléculas tales como poliglutamato . El anticuerpo también puede ser atrapado en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización interfacial (por ejemplo, microcápsulas de hidroximetilcelulosa o gelatina y microcápsulas de poli- (metilmetacrilato) , respectivamente), en sistemas de administración de fármaco coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones , nanoparticulas y nanocápsulas ) , o en macroemulsiones . Tales técnicas son reveladas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A., Ed., (1980). Para incrementar la vida media en el suero del anticuerpo, se puede incorporar un epitopo de enlace del receptor de salvamento al anticuerpo (especialmente un fragmento de anticuerpo) como se describe en patente estadounidense 5,739,277, por ejemplo. Como se usa en la presente, el término "epitopo de enlace del receptor de salvamento" se refiere a un epitopo de la región de Fe de una molécula de IgG (por ejemplo, IgGi, IgG2, IgG3 o IgG4) que es responsable por incrementar la vida media en el suero in vivo de la molécula de IgG. Alternativa o adicionalmente, se puede incrementar o disminuir la vida media en el suero al alterar la secuencia de aminoácido de la región Fe de un anticuerpo para generar variantes con enlaces de FcRn alterado. Anticuerpos con enlace de FcRn alterado y/o vida media en el suero alterada, son descritos en WO00/42072 (Presta, L.). Los anticuerpos de la invención pueden ser estabilizados mediante polimerización. Esto se puede llevar a cabo mediante reticulación de cadenas de monómero con agentes de reticulación polifuncionales , ya sea directa o indirectamente, por medio de polímeros multi-funcionales . Ordinariamente, dos polipéptidos sustancialmente idénticos son reticulados en sus términos C- o N- utilizando un agente de reticulación bifuncional. El agente es usado para reticular los grupos amino y/o carboxilo terminales. En general, ambos grupos carboxilo terminales o ambos grupos amino terminales son reticulados entre sí, aunque mediante la selección del agente de reticulación apropiado el alfa amino de un polipéptido es reticulado al grupo carboxilo terminal del otro polipéptido. Preferiblemente, los polipéptidos son sustituidos en sus términos C con cisteína. Bajo condiciones bien conocidas en el arte un enlace de disulfuro puede ser formado entre las cisteínas terminales, reticulación mediante esto las cadenas de polipéptido. Por ejemplo, puentes de disulfuro son formados convenientemente mediante oxidación catalizada por metal de las cisteínas libres o mediante sustitución nucleofílica de un residuo de cisteína modificado apropiadamente. La selección del agente de reticulación dependerá de las identidades de las cadenas laterales reactivas de los aminoácidos presentes en los polipéptidos. Por ejemplo, la reticulación de disulfuro no sería preferida si cisteína está presente en el polipéptido en sitios adicionales diferentes del término C. También dentro del alcance de los mismos están péptidos reticulados con puentes de metileno.

Sitios de reticulación apropiados sobre los anticuerpos, además de los grupos amino N-terminales y grupos carboxilo C-terminales , incluyen grupos epsilón amino encontrados sobre residuos de lisina, también como grupos amino, imino, carboxilo, sulfhidrilo e hidroxilo localizados sobre las cadenas laterales de residuos internos de los péptidos o residuos introducido a secuencias de flanqueo. La reticulación por medio de agentes de reticulación agregados externamente se obtienen convenientemente, por ejemplo, utilizando cualquiera de un número de reactivos familiares para aquellos experimentados en el arte, por ejemplo, vía tratamiento de carbodiimida del polipéptido. Otros ejemplos de agentes de reticulación multifuncionales (ordinariamente bifuncionales ) apropiados son encontrados en la literatura. En la preparación de formulaciones típicas en la presente, se notará que la calidad o "grado" recomendado de los componentes usados dependerá del uso final de la formulación. Para usos terapéuticos, es preferido que el (los) componente ( s ) sean de un grado permisible (tal como "GRAS") como un aditivo a productos farmacéuticos. En ciertas modalidades, se proporcionan composiciones que comprenden antagonistas o agonistas y uno o más excipientes que proporcionan suficiente fuerza iónica para mejorar la solubilidad y/o estabilidad, en donde la composición tiene un pH de 6 (o aproximadamente 6) a 9 (o aproximadamente 9) . El antagonista o agonista puede ser preparado por mediante cualquier método apropiado para obtener la pureza deseada, por ejemplo, de acuerdo con los métodos anteriores. En ciertas modalidades, el antagonista o agonista es expresado recombinantemente en células huésped o preparado mediante síntesis química. La concentración del antagonista o agonista en la formulación puede variar dependiendo, por ejemplo, del uso propuesto de la formulación. Aquellos experimentados en el arte pueden determinar sin la experimentación indebida la concentración deseada del antagonista o agonista. El uno o más excipientes en las formulaciones que proporcionan suficiente fuerza iónica para mejorar la solubilidad y/o estabilidad del antagonista o agonista es opcionalmente un ácido orgánico o inorgánico poliiónico, aspartato, sulfato de sodio, succinato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio, Captisol™, Tris, sal de arginina u otros aminoácidos, azúcares y polioles tales como trehalosa y sacarosa. Preferiblemente el uno o más excipientes en la formulación que proporcionan suficiente fuerza iónica es una sal. Sales que pueden ser usadas incluyen pero no están limitadas a sales de sodio y sales de arginina. El tipo de sal empleada y la concentración de la sal son preferiblemente de tal manera que la formulación tiene una fuerza iónica relativamente alta que permite que el antagonista o agonista en la formulación sea estable. Opcionalmente, la sal está presente en la formulación a una concentración de aproximadamente 20 mM a aproximadamente 0.5 M. La composición tiene preferiblemente un pH de 6 (o aproximadamente 6) a 9 (o aproximadamente 9) , más preferiblemente alrededor de 6.5 a alrededor de 8.5, y aún más preferiblemente alrededor de 7 a aproximadamente 7.5. En un aspecto preferido de esta modalidad, la composición comprenderá además una solución reguladora del pH para mantener el pH de la composición por lo menos aproximadamente 6 a aproximadamente 8. Ejemplos de soluciones reguladoras del pH que pueden ser usadas incluyen pero no están limitadas a Tris, HEPES, e histidina. Cuando se usa Tris, el pH puede opcionalmente ser ajustado a aproximadamente 7 a 8.5. Cuando se emplea Hepes o histidina, el pH puede opcionalmente ser ajustado a aproximadamente 6.5 a 7. Opcionalmente, la solución reguladora del pH es usada a una concentración de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 50 mM en la formulación. Particularmente para formulaciones liquidas (o formulaciones liofilizadas reconstituidas), puede ser deseable incluir uno o más surfactantes en la composición. Tales surfactantes pueden comprender por ejemplo un surfactante no iónico como T EEN™ o PLURONICS™ (por ejemplo, polisorbato o poloxámero) . Preferiblemente, el surfactante comprende polysorbate 20 ("Tween 20"). El surfactante será usado opcionalmente a una concentración de aproximadamente 0.005% a aproximadamente 0.2%. Las formulaciones de la presente invención pueden incluir, además de antagonista o agonista y aquellos componentes descritos anteriormente, varios otros excipientes o componentes adicionales. Opcionalmente, la formulación puede contener, para administración parenteral, un portador aceptable farmacéutica o parenteralmente, esto es, uno que es no tóxico a los receptores a las dosificaciones y concentraciones usadas y es compatible con otros ingredientes de la formulación. Opcionalmente, el portador es un portador parenteral, tal como una solución que es isotónica con la sangre del receptor. Ejemplos de tales vehículos portadores incluyen agua, solución salina o una solución de pH regulado tal como solución salina de pH regulado con fosfato (PBS), solución de Ringer, y solución de dextrosa. Varios portadores, excipientes o estabilizadores aceptable farmacéuticamente opcionales son descritos adicionalmente en Remington ' s Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. ed. (1980) . Las formulaciones de la presente también pueden contener uno o más conservadores. Ejemplos incluyen cloruro de octadecildimetilbencil amonio, cloruro de hexametonio, cloruro de benzalconio (una mezcla de cloruros de alquilbencildimetilamonio en la cual los grupos alquilo son compuestos de cadena larga) y cloruro de bencetonio. Otros tipos de conservadores incluyen alcoholes aromáticos, alquil parabenes tales como metil o propil paraben y m-cresol. Los antioxidantes incluyen ácido ascórbico y metionina; conservadores (tales como cloruro de octadecildimetilbencil amonio; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio; alcohol butilico; alquil parabenes tales como metil o propil paraben; catecol; resorcinol; ciclohexanol ; 3-pentanol; y m-cresol); polipéptidos de bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 residuos) ; proteínas, tales como albúmina de suero, gelatina o inmunoglobulinas ; polímeros hidrofílicos tales como polivinilpirrolidona ; aminoácidos tales como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina o lisina; monosacáridos , disacáridos, y otros carbohidratos en los que se incluyen glucosa, mañosa o dextrinas; azúcares tales como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; o polietilenglicol (PEG) . Ejemplos adicionales de tales portadores incluyen lecitina, proteínas de suero, tales como albúmina de suero humano, sustancias reguladoras del pH tales como glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales, o electrolitos tales como sulfato de protamina sulfato, cloruro de sodio, polivinilpirrolidona y sustancias a base de celulosa. Portadores para formas a base de gel y incluyen polisacáridos tales como carboximetilcelulosa de sodio o metilcelulosa, polivinilpirrolidona, poliacrilatos , polímeros en bloque de polioxietileno-polioxipropileno, polietilenglicol , y alcoholes de cera de madera. Formas de depósito convencionales, por ejemplo microcápsulas , nanocápsulas , liposomas, yesos, formas de inhalación, atomizaciones para la nariz y preparaciones de liberación sostenida. Las composiciones de la invención pueden comprender formulaciones liquidas (soluciones liquidas o suspensión liquidas) y formulaciones liofilizadas, también como formulaciones en suspensión en las cuales el antagonista de TWEAK o agonista de TWEAK está en forma de cristales o precipitado amorfo. La formulación final, si es un liquido, es preferiblemente almacenada congelado a < 20°C. Alternativamente, la formulación puede ser liofilizada y proporcionada como un polvo para reconstitución con agua para inyección que opcionalmente puede ser almacenada a 2-30°C. La formulación a ser usada para administración terapéutica debe ser estéril. La esterilidad se lleva a cabo fácilmente mediante filtración a través de membranas de filtración estériles (por ejemplo, membranas de 0.2 miera). Las composiciones terapéuticas en general son colocadas en un recipiente que tiene a orificio de acceso estéril, por ejemplo, una bolsa de solución intravenosa o frasco que tiene un tapón perforable por una aguja de inyección hipodérmica. La composición ordinariamente será almacenada en una sola unidad o recipientes de múltiples dosis, por ejemplo, ampolletas selladas o frascos, como una solución acuosa o como una formulación liofilizada para reconstitución. Los recipientes pueden ser cualesquier recipientes disponibles en el arte y llenados utilizando métodos convencionales. Opcionalmente, la formulación puede ser incluida en un dispositivo de pluma de inyección (o un cartucho que encaja a un dispositivo de pluma), tal como aquellos disponibles en el arte (véase, por ejemplo, patente estadounidense 5,370,629), que son apropiados para administración terapéutica de la formulación. Una solución de inyección puede ser preparada mediante reconstitución de la formulación de antagonista o agonista liofilizada utilizando, por ejemplo, agua para inyección . Las composiciones descritas en la presente que modulan actividad (es ) de TWEAK o receptor de TWEAK pueden ser usadas en una variedad de aplicaciones terapéuticas. Los antagonistas de TWEAK pueden por ejemplo, ser usados en el tratamiento de cáncer en tanto que los agonistas de TWEAK encuentran utilidad en el tratamiento de una variedad de condiciones inmune-relacionadas . En los métodos de la invención para el tratamiento de tal alteración, una formulación de antagonista o agonista puede ser administrada directamente al mamífero mediante cualquiera técnica apropiada, en las que se incluyen infusión o inyección.

La ruta de administración especifica dependerá, por ejemplo, de la historia médica del paciente, en las que se incluyen cualesquier efectos secundarios percibidos o anticipados utilizando antagonista o agonista y la alteración particular a ser corregida. Ejemplos de administración parenteral incluyen administración subcutánea, intramuscular, intravenosa, intraarterial e intraperitoneal de la composición. Las formulaciones son administradas preferiblemente como inyecciones o infusiones intravenosas (i.v.), subcutáneas (s.c), intramusculares (i.m.), repetidas o infusiones intracraneales o como formulaciones en aerosol apropiadas para administración intranasal o intrapulmonar (para administración intrapulmonar véase, por ejemplo, EP 257,956). Se notará que la presente osmótica de las inyecciones puede ser importante en la inyección subcutánea e intramuscular. Las soluciones inyectables, cuando son hipotónicas, o hipertónicas, pueden provocar dolor a un paciente después de la infusión. Usualmente, para las formulaciones inyecciones inyectables terapéuticas en la presente, es preferido que la osmolaridad relativa de la solución inyectable sea de aproximadamente 300 mosm a aproximadamente 600 mosm. Las formulaciones pueden también ser administradas en forma de preparaciones orales o proporciones de liberación sostenida. Ejemplos apropiados de preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que contienen la proteína, tales matrices están en forma de artículos formados por ejemplo películas o microcápsulas . Ejemplos de matrices de liberación sostenida incluyen derivados de celulosa (por ejemplo, carboximetilcelulosa) , sacarosa-acetato isobutirato (SABER™) en medios no acuosos, poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, poli (2-hidroxietilo-metacrilato) (Langer et al., J. Biomed. Mater. Res. 1981, 15: 167-277; Langer, Chem. Tech. 1982, 12: 98-105 o poli (alcohol vinílico) ) , polilacturos (patente estadounidense No. 3,773,919, EP 58,481), copolímeros de ácido L-glutámico y gamma etil-L-glutamato (Sidman et al., Biopolymers 1983, 22: 547-556), etileno-acetato de vinilo no degradable (Langer et al., supra) , copolímeros de ácido láctico-ácido glicólico degradables tales como el depósito de Lupron (microesferas inyectables compuestas de copolímero de ácido láctico-ácido glicólico y acetato de leuprolide) y ácido poli-D- ( - ) -3-hidroxibutírico (EP 133,988). Un método opcional de administración para fármacos de acción sistémica involucran la administración mediante infusión continua (utilizando, por ejemplo, dispositivos de liberación lenta o minibombas tales como bombas osmóticas o parches de la piel) o mediante inyección (utilizando, por ejemplo, medios intravenosos o subcutáneos, en los que se incluyen administración de un solo bolo) .

La composición a ser usada en el terapia será formulada y dosificada en de manera consistente con la buena práctica médica, tomando en cuenta la condición clínica del paciente individual, el sitio de administración de la composición, el método de administración, el horario de administración y otros factores conocidos para los médicos. Se contempla que todavía terapias adicionales pueden ser usadas en los métodos. La una o más de otras terapias pueden incluir pero no están limitada a, administración de terapia de radiación, citocina(s), agente (s) inhibidor de crecimiento, agente (s) quimioterapéutico ( s ) , agente (s) citotóxico ( s ) , inhibidores de tirosina cinasa, inhibidores de ras farnesil transferasa, inhibidores de angiogénesis , inhibidores de cinasa dependientes de ciclina y agentes de remodelado de cromatina tales como inhibidores de histona acetilasa y/o inhibidores de metilación que son conocidos en el arte y definidos adicionalmente con particularidad anteriormente, y pueden ser administrados en combinación (por ejemplo, concurrentemente o secuencialmente) con antagonista de T EAK o agonista de TWEAK. Además, terapias basadas en anticuerpos terapéuticos que apuntan a tumor u otros antígenos de célula tales como anticuerpos CD20 (en los que se incluyen Rituxan™' o anticuerpos de receptor de Her (en los que se incluyen Herceptin™) también como anticuerpos anti-angiogénicos tales como anti-VEGF o anticuerpos que apuntan otros receptores, tales como EGFR (tal como Tarceva ) , o ser usados en conjunción con vacunación de tumor. En los para el tratamiento de condiciones tales como cáncer, la preparación y horarios de dosificación para agentes quimioterapéuticos pueden ser usados de acuerdo con las instrucciones del fabricante o tal como se determina empíricamente por el médico experimentado. La preparación y horarios de dosificación para tal quimioterapia son también descritos en Chemotherapy Service Ed., M.C. Perry, Williams & Wilkins, Baltimore, MD (1992) . En algunas instancias, puede ser benéfico exponer a las células a uno o más agentes quimioterapéuticos antes de la administración, por ejemplo del antagonista de TWEAK. Puede ser deseable también administrar anticuerpos contra otros antígenos, tales como anticuerpos que se enlazan a CD20, CDlla, CD18, CD40, ErbB2, EGFR, ErbB3, ErbB4, factor endotelial vascular (VEGF) , u otros miembros de la familia de TNFR (tales como OPG, DR4, DR5, TNFR1, TNFR2) . Alternativamente, o además, dos o más anticuerpos que se enlazan a los mismos o dos o más antígenos diferentes revelados en la presente pueden ser co-administrados al paciente. Algunas veces, puede ser benéfico también administrar una o más citocinas al paciente. La formulación de antagonista o agonista puede ser administrada en cualquiera de los métodos terapéuticos descritos en esta solicitud en combinación con, por ejemplo, concurrente o secuencialmente, con otros agentes, citocinas, quimioterapias, anticuerpos, etc. que son por ejemplo, provistos específicamente en la sección de definición de la solicitud anterior. Por ejemplo, la formulación de antagonista de TWEAK puede ser administrada como un pre-tratamiento (antes de la administración de cualesquiera de tales otros agentes), tales como un pre-tratamiento de células de cáncer que pueden de otra manera ser resistentes a los efectos apoptóticos de otros agentes terapéuticos. Como se indica anteriormente, los antagonistas y agonistas de la invención tienen varias utilidades. Por ejemplo, los antagonistas de TWEAK pueden ser usados en métodos para el tratamiento de condiciones patológicas en mamíferos tales como cáncer. Los agonistas de TWEAK pueden ser usados para tratar enfermedades inmune-relacionadas en mamíferos. La diagnosis en mamíferos de las varias condiciones patológicas descritas en la presente se puede hacer por el técnico experimentado. Técnicas de diagnóstico están disponibles en el arte que permite, por ejemplo, la diagnosis o detección de cáncer o enfermedad inmune-relacionada en un mamífero. Por ejemplo, los cánceres pueden ser identificados por medio de técnicas, en las que se incluye pero no limitados a, palpación, análisis de sangre, rayos X, RMN y los semejantes. Las enfermedades inmune-relacionadas pueden también ser fácilmente identificadas. En lupus erimatoso sistémico, el mediador de la enfermedad es la producción de anticuerpos auto-reactivos a auto-proteinas/tej idos y la generación subsecuente de inflamación inmune-moderada . Múltiples órganos y sistemas son afectados clínicamente en los que se incluyen riñon, pulmón, sistema musculoesqueletal , mucocutáneo, ojo, sistema nervioso central, sistema cardiovascular, sistema gastrointestinal, médula ósea y sangre. Los practicantes médicos están familiarizados con una diversidad de enfermedades en las cuales la intervención de la respuesta inmune y/o inflamatoria tiene beneficio. Por ejemplo, artritis reumatoide (RA) es una enfermedad inflamatoria autoinmune sistémica crónica que involucra principalmente la membrana sinovial de múltiples articulaciones con lesión resultante al cartílago articular. La patogénesis es dependiente de linfocito T y está asociada con la producción de factores reumatoides, auto-anticuerpos dirigidos contra auto-IgG, con la formación resultante de complejos inmunes que alcanzan altos niveles en el fluido de articulación y sangre. Estos complejos en la articulación pueden inducir la infiltración marcada de linfocitos y monocitos al sinovio y cambios sinoviales marcados subsecuentes; el espacio de articulación/fluido es infiltrado por células similares con la adición de numerosos neutrófilos. Los tejidos afectados son principalmente las articulaciones, frecuentemente en patrón simétrico. Sin embargo, la enfermedad extra-articular también ocurre en dos formas principales. Una forma es el desarrollo de lesiones extra-articulares con en enfermedad de articulación progresiva en marcha y lesiones típicas de fibrosis pulmonar, vasculitis y úlceras cutáneas. La segunda forma de enfermedad extra-articular es el llamado síndrome de Felty que ocurre tarde en el curso de la enfermedad de RA, algunas veces después que la enfermedad de articulación s ha vuelto pasiva e involucra la presencia de neutropenia, trombocitopenia y esplenomegalia . Esta puede estar acompañada por vasculitis en múltiples con formaciones de infartos, úlceras de piel y gangrena. Los pacientes frecuentemente también desarrollan nodulos reumatoides en el tejido de subcutis superpuesto a las articulaciones afectadas; la etapa posterior de nodulos tiene centros neuróticos rodeados por un infiltrado celular inflamatorio mezclado. Otras manifestaciones que pueden ocurrir en RA incluyen: pericarditis, pleuritis, arteritis coronaria, pneumonitis interstitial con fibrosis pulmonar, keratocon unctivitis sicca y nodulos reumatoides. La artritis crónica juvenil es una enfermedad inflamatoria idiopática crónica que comienza frecuentemente a menos de 16 años de edad. Su fenotipo tiene algunas similaridades a RA; algunos pacientes que son positivos al factor reumatoide son clasificados como artritis reumatoide juvenil. La enfermedad es sub-clasificada en tres categorías principales: pauciarticular, poliarticular y sistémica. La artritis puede ser severa y es comúnmente destructiva y conduce a ankylosis de articulación y crecimiento retardado. Otras manifestaciones pueden incluir uveitis anterior crónica y amiloidosis sistémica. Las espondiloartropatias son un grupo de alteraciones con algunos elementos clínicos comunes y la asociación común con la expresión del producto genético HLA-B27. Las alteraciones incluyen: espondilitis anquilosante, síndrome de Reiter (artritis reactiva) , artritis asociada con enfermedad de intestino inflamatorio, espondilitis asociada con espondiloartropatía de inicio juvenil y espondiloartropatía sin diferenciar. Los elementos distintivos incluyen sacroileitis con o sin espondilitis; artritis asimétrica inflamatoria; asociación con HLA-B27 (un alelo definido serológicamente del sitio HLA-B de MHC de clase I); inflamación ocular y ausencia de autoanticuerpos asociados con otra enfermedad reumatoide. La célula más implicada como clave a la inducción de la enfermedad es el linfocito T CD8+, una célula que apunta al antígeno presentado por moléculas de MHC de clase I . Las células T de CD8+ pueden reaccionar contra el alelo de MHC de clase I MHC HLA-B27 como si fuera un péptido extraño expresado por moléculas MHC de clase I. Se ha tenido la hipótesis que un epítopo de HLA-B27 puede imitar un epítopo antigénico bacteriano u otro epítopo antigénico microbiano y así inducir una respuesta de células T CD8+. La esclerosis sistémica ( escleroderma ) tiene una etiología desconocida. Un sello o distintivo de la enfermedad es el endurecimiento de la piel; probablemente este es inducido por un proceso inflamatorio activo. La escleroderma puede ser localizada o sistémica; las lesiones vasculares son comunes y la lesión de célula endotelial en la microvasculatura es un evento prematuro e importante en el desarrollo de esclerosis sistémica; la lesión vascular puede ser inmune moderada. Una base inmunológica es implicada por la presencia de infiltrados de célula mononuclear en las lesiones cutáneas y la presencia de anticuerpos anti-nucleares en muchos pacientes. ICAM-1 es frecuentemente regulada ascendentemente sobre la superficie celular de fibroblastos en lesiones de la piel sugiriendo que la interacción de célula T con estas células puede tener un papel en la patogénesis de la enfermedad. Otros órganos involucrados incluyen: el sistema gastrointestinal: atrofia de músculo liso y fibrosis resultante en peristalisis/motilidad anormal; riñon: proliferación íntima sub-endotelial concéntrica que afecta las arterias arqueadas e interlobulares pequeñas con flujo sanguíneo cortical renal reducido resultante, da como resultado en proteinuria, azotemia e hipertensión; músculo esqueletal: atrofia, fibrosis intersticial; inflamación; pulmón: pneumonitis intersticial y fibrosis intersticial; y corazón: necrosis de banda de contracción, cicatrización/fibrosis. Las miopatias inflamatorias idiopáticas incluyen dermatomiositis, polimiositis y otros son alteraciones de inflamación de músculo crónica de etiología desconocida resultante en debilidad muscular. La lesión/inflamación de músculo es frecuentemente simétrica y progresiva. Los autoanticuerpos son asociados con la mayoría de las formas. Estos autoanticuerpos miositis-específieos son dirigidos contra e inhiben la función de componentes, proteínas y ARNA involucrados en la síntesis de proteína. El síndrome de Sjógren es debido a la inflamación inmune-moderada y destrucción funcional subsecuente de las glándulas lagrimales y glándulas salivales. La enfermedad puede estar asociada con o acompañada de enfermedades de tejido conectivo e inflamatorios. La enfermedad está asociada con producción de autoanticuerpo contra antígenos Ro y La, ambos de los cuales son complejos de ARN-proteína pequeños. Las lesiones dan como resultado keratoconjunctivitis sicca, xerostomia, con otras manifestaciones o asociaciones que incluyen cirrosis biliar, neuropatía periférica o sensorial y púrpura palpable. La vasculitis sistémica son enfermedades en las cuales la lesión primaria es inflamación y daños subsecuentes a vasos sanguíneos que da como resultado isquemia/necrosis/degeneración a tejidos suministrados por los vasos afectado y eventual disfunción del órgano final en algunos casos. Las vasculitides pueden también ocurrir como lesión secundaria o secuelas a otras enfermedades inmune-inflamatoria moderadas tales como artritis reumatoide, esclerosis sistémica, etc., particularmente en enfermedades también asociadas con la formación de complejos inmunes. Enfermedades en el grupo de vasculitis sistémica primaria incluyen: vasculitis necrosante sistémica: poliartritis nodosa, angiitis alérgica y granulomatosis , poliangiitis ; granulomatosis de egener; granulomatosis linfomatoide; y arteritis de célula gigante. Las vasculitides misceláneas incluyen: síndrome de nodo linfático mucocutáneo (MLNS o enfermedad de Ka asaki), vasculitis de CNS aislada, enfermedad de Behet, tromboangiitis obliterante (enfermedad de Buerger) y venulitis necrozante cutánea. El mecanismo patogénico de la mayoría de los tipos de vasculitis enlistadas se cree que es principalmente debido a la deposición de complejo de inmunoglobulina en la pared del vaso e inducción subsecuente de una respuesta inflamatoria ya sea vía ADCC, actividad de complemento o ambos . La sarcoidosis es una condición de etiología desconocida que está caracterizada por la presencia de granulomas epitelioides en casi cualquier tejido en el cuerpo; la implicación del pulmón es más común. La patogénesis involucra la persistencia de macrófagos activaos y células linfoides en sitios de la enfermedad con subsecuentes secuelas crónicas resultantes de la liberación de productos local y sistémicamente activos liberados por estos tipos de células. La anemia hemolitica autoinmune que incluye anemia hemolitica autoinmune, pancitopenia inmune y hemoglubinuria nocturna proxismal es el resultado de la producción de anticuerpos que reaccionan con antígenos expresados sobre la superficie de células de sangre roja (y en algunos casos otras células de sangre en las que se incluyen plaquetas también) y es el reflejo de la remoción de estas células recubiertas con anticuerpo vía lisis moderada por complemento y/o mecanismos moderados por ADCC/Fc-receptor . En la trombocitopenia autoinmune que incluye púrpura trombocitopénica y trombocitopenia inmune-moderada en otras instalaciones clínicas, la destrucción/remoción de plaquetas ocurre como resultado ya sea de anexión de anticuerpo o complemento a plaquetas y remoción subsecuente mediante lisis complemento, ADCC o mecanismos moderados por receptor Fe. La tiroiditis que incluye enfermedad de Grave, tiroiditis de Hashimoto, tiroiditis linfocítica juvenil y tiroiditis atrófica, son el resultado de una respuesta inmune contra antígenos de tiroides antígenos con producción de anticuerpos que reaccionen con proteínas presentes en y frecuentemente específicas para la glándula tiroides. Existen modelos experimentales que incluyen modelos espontáneos: ratas (ratas BUF y BB) y pollos (cepa de pollo obeso); modelos inducibles: inmunización de animales ya sea con tiroglobulina , antigeno microsomal de tiroides (peroxidasa tiroides) . Diabetes mellitus Tipo I o diabetes dependiente de insulina es la destrucción autoinmune de células ß de isleta pancreáticas; esta destrucción es moderada por auto-anticuerpos y células T auto-reactivas. Los anticuerpos a insulina o el receptor de insulina pueden también producir el fenotipo de insensibilidad a insulina. Las enfermedades renales inmune-moderadas , en las que se incluyen glomerulonefritis y nefritis tubulointersticial , son el resultado de lesión moderada por anticuerpo o linfocito T al tejido renal ya sea directamente como resultado de la producción de anticuerpos autoreactivos o células T contra antigenos renales o indirectamente como resultado de la deposición de anticuerpos y/o complejos inmunes en el riñon que son reactivos entre si, antigenos no renales. non-renal antigenos. Asi otras enfermedades inmune-moderadas que resultan en la formación de complejos inmune pueden también inducir enfermedad renal inmune-moderada como secuela indirecta. Tanto los mecanismos inmunes directos como indirectos dan como resultado respuesta inflamatoria que produce/induce desarrollo en lesión en tejidos renales con deterioro de función de órgano resultante y en algunos casos avance a insuficiencia renal. Mecanismos tanto inmune humorales como celulares pueden estar involucrados en la patogénesis de lesiones.

Las enfermedades de desmielinación de los sistemas nervioso central y periférico, en los que se incluyen esclerosis múltiple; polineuropatia de desmielinación crónica o síndrome de Guillain-Barr ; y polineuropatia de desmielinación inflamatoria crónica, se cree que tienen una base autoinmune y dan como resultado desmielinación de nervios como resultado de daños provocados a oligodendrocitos o a mielina directamente. En MS hay evidencia para sugerir que la inducción y avance de enfermedad es dependiente de linfocitos T. La esclerosis múltiple es una enfermedad de desmielinación que es dependiente de linfocito T y tiene ya sea un curso de recurrencia-remisión o un curso de avance crónico. La etiology es desconocida; sin embargo, infecciones virales, predisposición genética, el medio ambiente y autoinmunidad todos contribuyen. Las lesiones contienen infiltrados de predominantemente células microgliales T linfocito-moderadas y macrófagos de infiltración; linfocitos CD4+T son el tipo de célula predominante en lesiones. El mecanismo de la muerte de célula de oligodendrocito y subsecuente desmielinación no es conocido pero es probable que sea impulsado por linfocito T. Enfermedad de pulmón inflamatorio y necrótica, en las que se incluyen neumonías eosinofilicas ; fibrosis pulmonar idiopática y neumonitis de hipersensibilidad pueden involucrar una respuesta inmune-inflamatoria desregulada. La inhibición de aquella respuesta sería de beneficio terapéutico.

La enfermedad de la piel autoinmune o inmune-moderada en las que se incluyen enfermedades de la piel bullosa, eritema multiforme y dermatitis de contacto son moderadas por auto-anticuerpos, la génesis de la cual es dependiente de linfocito T. La psoriasis es una enfermedad inflamatoria, moderada por linfocito T. Las lesiones contienen infiltrados de linfocitos T, macrofagos y células de procesamiento de antigeno y algunos neutrófilos. Enfermedades alérgicas, que incluyen asma; rinitis alérgica; dermatitis atópica; hipersensibilidad a alimentos; y urticaria son dependientes de linfocito T. Estas enfermedades son moderadas predominantemente por inflamación inducida por linfocito T, inflamación moderada por IgE o una combinación de ambos . Enfermedades asociadas a transplante, en las que se incluyen rechazo de injerto y enfermedad de injerto contra huésped (GVHD) son dependientes de linfocito T; la inhibición de la función de linfocito T es mejorante. Otras enfermedades en las cuales la intervención de la respuesta inmune y/o inflamatoria tiene beneficio son enfermedad infecciosa en las que se incluyen pero no limitadas a infección viral (en las que se incluyen pero no limitados a SIDA, hepatitis A, B, C, D, E) , infección bacteriana, infecciones fúngales e infecciones de protozoarios y de parásitos (moléculas (o derivados/agonistas) que estimulan el MLR puede ser utilizadas terapéuticamente para mejorar la respuesta inmune a agentes infecciosos) , enfermedades de inmunodeficiencia (moléculas/derivados/agonistas) que estimulan el MLR pueden ser utilizados terapéuticamente para mejorar la respuesta inmune por condiciones de infecciones heredadas, adquiridas, inducidas (como en infección de HIV) , o iatrogénicas (esto es, de quimioterapia) inmunodeficiencia ) , y neoplasia . La invención también proporciona equipos que incluyen antagonistas o agonistas descritos en la presente. Un equipo típico comprenderá un recipiente, preferiblemente un frasco, para antagonista o agonista en uno o más excipientes como se describe anteriormente; e instrucciones, tal como un inserto de producto o etiqueta, que instruye al usuario en cuanto a cómo emplear la formulación de antagonista o agonista. Este proporcionaría preferiblemente una formulación farmacéutica. Preferiblemente, la formulación farmacéutica es para tratamiento de cáncer o una condición immune-relacionada . Recipientes apropiados incluyen, por ejemplo, botellas, frascos, jeringas y tubos de ensayo. Los recipientes pueden ser formados de una variedad de materiales tales como vidrio o plástico. El recipiente retiene una formulación de antagonista o agonista que es efectiva para diagnosticar o tratar la enfermedad y puede tener un orificio de acceso estéril (por ejemplo, el recipiente puede ser una bolsa de solución intravenosa o un frasco que tiene un tapón perforable por una aguja de inyección hipodérmica ) . La etiqueta sobre o asociada con el recipiente indica que la formulación es usada para diagnosticar o tratar la alteración de elección. El articulo de manufactura puede comprende además un segundo recipiente que comprende agua para inyección, una solución farmacéuticamente aceptable, solución salina, solución de Ringer o solución de dextrosa . Puede incluir además otros materiales deseables desde un punto de vista comercial y del usuario, en los que se incluyen soluciones reguladoras del pH, diluyentes, filtros, agujas, jeringas e insertos de paquetes con instrucciones para uso . Todas las patentes, solicitudes de patente, publicaciones, descripciones de producto, y protocolos son citados en toda esta solicitud, las revelaciones de los cuales son incorporados en la presente por referencia en su totalidad. Los encabezados de sección usados en la presente son por propósitos de organización solamente y no son para ser interpretados como limitantes de la materia descrita.

EJEMPLOS Varios aspectos de la invención son descritos e ilustrados adicionalmente por medio de los ejemplos que siguen, ninguno de los cuales pretende limitar el alcance de la invención . Reactivos disponibles comercialmente a los que se hace referencia en los ejemplos fueron usados de acuerdo con las instrucciones del fabricante a no ser que se indique de otra manera. La fuente de aquellas células identificadas en los siguientes ejemplos y en toda la especificación, mediante números de acceso de ATCC es la American Type Culture Collection, Manassas, VA. A no ser que se indique de otra manera, la presente invención utiliza procedimientos estándar de tecnología de ADN recombinante, tales como aquellos descritos anteriormente en la presente y en los siguientes libros de texto: Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press N.Y., 1989; Ausubel et al., Current Protocole in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y., 1989; Innis et al., PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Academic Press, Inc., N.Y., 1990; Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, 1988; Gait, M.J., Oligonucleotide Synthesis, IRL Press, Oxford, 1984; R.I. Freshney, Animal Cell Culture, 1987; Coligan et al., Current Protocols in Immunology, 1991.

MATERIALES Y TÉCNICAS : Análisis de expresión de T EAK y Fnl4 en PBMC humanas. Células mononucleares de sangre periférica (PBMC) fueron aisladas de 50 mi de sangre entera de donador humano con medio de separación de linfocito (ICN) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las células fueron resuspendidas en medio de Iscoves completo en presencia de Brefeldin A (5 yg/mL) durante 24 horas en presencia y ausencia de estímulos inflamatorios. Enseguida de la estimulación, los receptores Fe fueron bloqueados con 2 g/mL Fe (Miltenyi Biotec, Auburn, CA) durante 20 minutos a temperatura ambiente. Luego las células fueron teñidas en la superficie con anticuerpos monoclonales fluorescencia-conjugados a CD3, CD4 , CD8, CDllb, CDllc, CD14, CD20, CD45, CD56, HLA-DR, Linl FITC ( BD Biosciences, San José, CA) y FN14 ( e-Biosciences ) durante 30 minutos a temperatura ambiente y luego tratados con solución de BD FACS Lyse de acuerdo con las instrucciones del fabricante y almacenadas a -70°C durante toda la noche. Las células fueron permeabilizadas y luego teñidas en cuanto a T EAK (e-Biosciences) durante 30 minutos a temperatura ambiente. Enseguida de lavado, las células fueron analizadas sobre FACS Calibur (BD Biosciences). Generación de ratones TWEAK-deficientes . Un vector de apuntamiento de TWEAK fue construido en base al vector TNLOX1-3 (Gerber et al., Development, 126:1149-1159(1999)) al reemplazar 2.5 kb del gen TWEAK, que abarca los primeros y todos los cinco exones corriente abajo, con un caset PGK-neo. El constructo contenía dos estiramientos de ADN derivados del genoma de ratón: un fragmento de 3.1-kb que abarca el sexto y el séptimo exones de TWEAK y parte de exon uno de TWEAK, colocado 5' del neo caset, y un fragmento de 4.1-kb que abarca los primeros y segundos exones SMT3IP1 colocado 3' del caset PGK-neo. Células de tallo embriónicos Rl (Nagy et al., Gene Targeting:A Practical Approach, A.L. Joyner, ed., Oxford University Press, Oxford, England, pp. 147-179 (1993)) fueron transíectadas con el vector linealizado mediante electroporación, y clones resistentes a G418 fueron seleccionados en cuanto a la presencia del evento de recombinación esperado mediante análisis de Southern blot con sondas de ADN 5'- y 3 ' -especificas (como se muestra en la figura 8). Dos lineas celulares de TWEAK-/- independientes fueron microinyectadas a blastocitos C57BL/6. La transmisión de linea de germinación en ratones generada al cruzar machos quiméricos con hembras C57BL/6 fue detectada mediante color de recubrimiento y confirmada mediante PCR genómica de dos etapas (figura 8) con los siguientes conjuntos de cebador externos (E) e internos (I): E hacia delante, TGCCCTAAGCCAGTCTACACCCAGTATTCCTTC (SEQ ID NO: 3) ; E inversa, TGGCCTGAAAGAAATGCTCACACTATCACCAAC (SEQ ID NO: 4); I hacia delante, CTTAGAACCAGCCGTAGGAAGGATT (SEQ ID NO: 5); e l inversa, GTGCCAGGGCGTCCAGTACATACAA (SEQ ID NO: 6) . Los animales de expresión de TWEAK fueron cruzados otra vez con un mínimo de seis veces sobre el fondo de C57BL/6.

Examen de APRIL, TWEAK y expresión de mABN de SMT3IP1. El análisis de varios tejidos mediante RT-PCR cualitativa demostró que los ratones TWEAK -/- ratones no expresan transcriptos de TWEAK, en tanto que la expresión de mARN de dos genes cercanos, APRIL y SMT31P1, estuvo sin alterar en las expulsiones. (Varfolomeev et al., Mol. Cell. Biol., 24:997-1006 (2004)); figura 9. Análisis de citometria de flujo. Suspensiones de una sola célula de órganos hematopoyéticos fueron obtenidas de ratones de ocho semanas de edad mediante disociación de los tejidos aislados con tamices de malla de alambre y tapones de hule de jeringas. Suspensiones de una sola célula fueron incubadas con anticuerpos de bloqueo Fe (2 ug/mL, BD Biosciences) y teñido subsecuentemente con anticuerpos monoclonales conjugados específicos de linaje a B220, CD3, CD4, CD8, CDllb, CDllc, CD19, CD45, DX5, Linl FITC ( BD Biosciences, San José, CA) , CD161, y F4/80 (e-Biosciences ) durante 30 minutos a temperatura ambiente. Enseguida del teñido superficial, los RBC fueron sometidos a lisis con solución reguladora del pH ACK (Biosource International) de acuerdo con las instrucciones del fabricante y las células restantes fueron fijadas. Perlas de TRUCount (BD Biosciences) fueron agregadas a los tubos para la cuantificación . La fluorescencia célula-asociada fue analizada con un instrumento FACS Calibur y elementos de programación Cell Quest asociado (BD Biosciences) .

Análisis de AICD de célula NK. PBMC humanas fueron aisladas de 100 mL de sangre entera de donador humano y estimuladas durante 24 horas con TNF-OÍ (500 ng/mL) , LPS (5 g/L) , o IFN-gamma (500 ng/mL) en ausencia o presencia de mAb anti-T EAK (CARL-1, e-Biosciences ) o FN14-Fc (proteina de fusión que comprende aminoácidos 1-129 de la figura 12) (Genentech) . Enseguida de la estimulación, las células NK fueron aisladas utilizando perlas Miltenyi CD56+ y teñidas en cuanto a contenido de ADN sub-Gl como se describe en Maecker et al., Cáncer Cell, 2:139-148(2002) . Experimentos de LPS. Diez ratones TWEAFC ' y TWEAK*/+ por grupo fueron inyectados intraperitonealmente (i.p) . con LPS {Escherichia coli 055:B5; Sigma) . Las dosis de LPS fluctuaron de 100 mg/kg a 10 mg/kg fueron disueltas en solución salina estéril. Los ratones fueron monitoreados en cuanto a viabilidad cada hora en un periodo de 5 días. El análisis de citocina murina fue llevado a cabo al inyectar diez ratones por grupo i.p. con 30 mg/kg de LPS y aislamiento de sangre y bazos 24 horas más tarde. Suspensiones de una sola célula fueron incubadas durante 6 horas en presencia de Brefeldin A (5 g/mL) . Las células fueron bloqueadas de Fe (2 µg/mL, BD Biosciences) por los últimos 20 minutos de esta incubación y subsecuentemente teñidas con anticuerpos monoclonales conjugados lina e-específicos, DX5 (para identificar células NK) , CDllb y F4/80 (para identificar macrófagos) también como CD45 (antígeno de leucocito común) durante 30 minutos a temperatura ambiente. Enseguida del teñido de superficie, las RBC fueron sometidas a lisis como se describe anteriormente. Las células fueron permeabilizadas y luego teñidas con anticuerpo a IFN-gamma, IL-12 o IL-10 y analizadas en un dispositivo FACS Calibur (BD Biosciences ) . El análisis de citocina humana fue llevado a cabo al aislar las PBMC de cuatro donadores humanos separados. Las PBMC de donador fueron incubadas in vitro en presencia o ausencia de 1 pg/mL de LPS durante 16 horas. Durante las últimas 6 horas de estimulación, se agregó Brefeldin A a las células a una concentración final de 5 pg/mL. Las PBMC humanas fueron bloqueadas por Fe (Miltneyi) durante 20 minutos a temperatura ambiente y luego teñidas en la superficie (CD3, CD56, CD14, CD45; BD Biosciences) durante 30 minutos a temperatura ambiente. Enseguida del teñido de superficie, las RBC fueron sometidas a lisis de acuerdo con las instrucciones del fabricante en cuanto a teñido intracellular . Las células fueron fijadas y permeabilizadas, teñidas con anticuerpo IFN-gamma o IL-12 y analizadas sobre un dispositivo FACS Calibur. Análisis de actividad de STAT-1. Células NK y macrófagos fueron aislados de un bazo de donador humano utilizando perlas CD56+ y CDllb+ de Miltenyi, respectivamente. 1.0 x 106 células NK/0.5 mL fueron co-incubadas con 1.0 x 106 macrófagos/0.5 mL de medio de Macrófago-SFM ( Invitrogen ) . Se hizo reposar a las células en medio libre de suero durante 12 horas y luego estimuladas con 1 yg/mL de LPS . Doce horas más tarde, las células fueron teñidas en la superficie en cuanto a CD56 y CDllb seguido por teñido intracelular en cuanto a fosfo-STAT-1 como se resume por Pérez y Nolan (Krutzik et al., Clin. Immunol., 110:206-221 (2004); Pérez et al., Meth. Mol. Biol., 263:67-94 (2004); Pérez y Nolan, Nat . Biotechnol., 20:155-162 (2002) ) . Análisis de NF-??. Células NK y macrófagos fueron aislados del bazo de un donador humano utilizando perlas CD56+ y CDllb+ de Miltenyi, respectivamente. 5.0 x 106 células NK fueron co-incubadas con 5.0 x 106 macrófagos en 5 mL de medio de Macrófago-SFM por punto en el tiempo. Se hizo reposar a las células durante 12 horas, antes de la estimulación con T EAK (100 ng/mL) o TNF-alfa (100 ng/mL) . Los lisados (20 pg de proteina total) e inmunoprecipitados (50 yg de proteina total) fueron preparados de acuerdo con las instrucciones del fabricantes (Cell Signaling, Beverly, MA) . Todos los anticuerpos en cuanto a inmunoabsorciones e inmunoprecipitaciones subsecuentes fueron comprados de Cell Signaling y los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con sus protocolos. Histología e inmunohistoquímica . Los tejidos de ratones TWEAK -/- y TWEAK +/+ machos de 3, 6, y 12 meses de edad fueron pesados, fijados, seccionados y analizados en cuanto a estatus patológico. Las secciones teñidas con hematoxilina y eosina fueron analizadas en cuanto a anormalidades histológicas gruesas. Las secciones congeladas teñidas con aglutinina de maní (Vector Research, Burlingame, CA) fueron analizadas en cuanto a la estructura de centros germinales. Cinco bazos TWEAK -/- y TWEAK +/+ de ratones macho de 12 meses de edad fueron disociados, teñidos y cuantificados en cuanto a celularidad de linfocito utilizando perlas TruCount (BD Biosciences) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Experimentos de melanoma B16. Diez ratones TWEAK -/-y TWEAK +/+ fueron inyectadas ya sea con 0.1-0.5 X 106 células/0.1 mL de solución salina estéril subcutáneamente (s.c.) en el flaco posterior derecho. Los ratones fueron monitoreados diariamente y las mediciones de tumor tomadas un día si y un día no durante 4 semanas (estudio B16.BL6) o 6 semanas (estudio B16.F10) . En la terminación del estudio, los tumores fueron removidos, pesados y disociados primero a través de tamices de malla de alambre seguido por tratamiento con solución reguladora del pH de disociación celular no enzimática (Sigma) durante 5 minutos para crear suspensiones de una sola célula. Los esplenocitos generados a partir de ratones inyectados con tumor y fueron co-incubados ya sea con solución salina estéril o suspensiones de célula de tumor en presencia de Brefeldin A durante 12 horas para medir la producción de citocina intracelular .

RESULTADOS EXPERIMENTALES: La expresión de TWEAK en varios tejidos hematopoyéticos fue reportada previamente (Chicheportiche et al., supra; Marsters et al., supra) , pero las únicas células linfoides previamente reportadas que expresan TWEAK son monocitos (Nakayama et al., J. Exp. Med., 192:1373-1380 (2000)). Con el fin de elucidar adicionalmente objetivos inmunológicos de TWEAK, numerosas poblaciones linfoides fueron analizadas en cuanto a expresión de TWEAK y su receptor, FN14, enseguida de varios estímulos inflamatorios (figuras 1A y IB). Se demostró que TWEAK y su receptor, FN14, son expresados por células del sistema inmune innato (véase figura 1) . Se encontró que solamente las células NK, macrófagos y células dendríticas expresan TWEAK (figura 1A) y su receptor, FN14 (figura IB). Además, la expresión superficial tanto de receptor como ligando fue regulada ascendentemente enseguida de la estimulación con IFN-gamma o PMA. Las células NKT expresaron TWEAK pero no FN14 y ni una ni otra fue regulada ascendentemente por IFN-gamma o PMA. Otros tipos de células linfoides, en las que se incluyen células T y B no expresa niveles significativos de TWEAK o FN14 (datos no mostrados). Para examinar el papel biológico de TWEAK in vivo, ratones de expulsión de gen de TWEAK fueron generados (figura 8) . El análisis anatómico e histológico detallado no sugirió ninguna anormalidad significativa en los tejidos no linfoides de ratones TWEAK"''". (figura 10) . Sin embargo, el análisis de tejidos hematopoyéticos reveló que los ratones TWEAK_ ~ tuvieron significativamente más células NK en comparación con los compañeros de cama de edad correspondiente tipo silvestre (figura 2A) . Este incremento fue evidente en órganos linfoides secundarios, en los que se incluyen bazo, parches de Peyer, nodos linfáticos y sangre periférica (figura 2A) y fue mayor en machos (figura 2A, superior) que hembras (figura 2A, inferior) . En contraste con sus números NK elevados, los ratones TWEAK- ~ desplegaron niveles normales de células NKT (figura 2B) , también como células T CD4+ o CD8+, células B, macrófagos, células dendriticas, granulocitos y plaquetas (datos no mostrados) . La cantidad de células NK en la 1 médula ósea de TWEAK_ " y ratones tipo silvestre fue similar (figura 2C) , sugiriendo que la elevación en conteos de NK puede no ser provocada por cambios en desarrollo de célula NK (Kim et al., Nat. Immunol., 3:523-528 (2002)) . Alternativamente, la eliminación deteriorada de células NK mediante muerte celular inducida por activación (AICD) puede conducir a acumulación de NK en ausencia de TWEAK. Células NK de sangre periférica humana fueron aisladas y el efecto de la neutralización de TWEAK sobre su sensibilidad a AICD fue examinado (figura 2D) . La inhibición de TWEAK mediante un receptor de decoy FN14-FC soluble o un anotación TWEAK-neutralizante protegió marcadamente las células NK de estimulación de AICD mediante TNF-alfa, LPS o IFN-gamma, sugiriendo que las células NK pueden acumularse en ratones TWEAK"7" debido a la cancelación de NK insuficiente por medio de AICD. Para determinar la importancia de TWEAK para respuestas inmunes innatas in vivo, un modelo establecido de desafio sistémico fue examinado con dosis normales del lipopolisacárido de endotoxina bacteriana gram-negativo (LPS) (figura 3A) . Los ratones TWEAK"7" fueron más susceptibles a muerte inducida por LPS que los controles tipo silvestre en un amplio intervalo de dosis de LPS, sugiriendo que una respuesta inflamatoria innata más fuerte se desarrolla en ausencia de TWEAK. Las células NK de TWEAK"7" y macrófagos, aislados de sangre periférica y bazos de ratones LPS-inyectados , produjeron más INF-gamma e IL-12 y menos IL-10 en comparación con células tipo silvestre (figura 3B) . Similarmente, la neutralización de anticuerpo de TWEAK aumentó la producción de IFN-gamma e IL-12 por células NK de sangre periférica humana y macrófagos enseguida de la estimulación con LPS (figura 3C) . Asi, se cree que los ratones TWEAK"7" son hipersensibles a LPS no solamente debido a que tienen números de células NK elevadas sino también debido a sus células NK y macrófagos producen más IFN-gamma e IL-12, que promueve adicionalmente la respuesta inflamatoria (D'Andrea et al., J. Exp. Med., 178:10 1-1048 (1993); Emoto et al., J. Immunol., 169:1426-1432 (2002); Heremans et al., Eur . J. Immunol., 24:1155-1160 (1994)). Estos resultados sugieren que TWEAK funciona para atenuar la respuesta inflamatoria innata . Para investigar como la ausencia de TWEAK podría promover la producción de IFN-gamma e IL-12 por células inmune innatas, la actividad del transductor de señal y activador de transcripción (STAT-1), que es clave para inducir la expresión de IFN-gamma en células NK y de I L-12 en macrófagos en respuesta a patógenos, fue examinada (Marodi et al., Clin. Exp. Immunol., 126:456-460 (2001); Morrison et al., J. Immunol. , 172 : 1825-1832 (2004); Nelson et al., J. Immunol., 156:3711-3720 (1996); Varma et al., Clin. Diag. Lab Immunol., 9:530-543 (2002)). La neutralización de TWEAK incrementó la fosforilación STAT-1 basal en células NK y macrófagos y mejoró adicionalmente la estimulación de STAT-1 mediante LPS en estas células (figura 4A) . Así, un mecanismo que contribuye a la represión de TWEAK de la producción de IFN-gamma e I L-12 puede ser la atenuación de la activación de STAT-1. TN F-alfa, una citocina que juega un papel crucial en aumentar la respuesta inflamatoria innata, induce la expresión de I FN-gamma e IL-12 (también como de otros genes inmunomoduladores ) por medio de la activación de la ruta N F- KB1 canónica (Bonizzi y Karin, Trends Immunol., 25:280-288 (2004); Chen y Greene, Nat . Rev. Mol. Cell Biol . , 5:392-401 (2004); Chen et al., J. Immunol . , 166:270-276 (2001); D'Andrea et al., J. Exp. Med., 178:1041-1048 (1993); Zhong et al., Mol. Cell, 9:625-636 (2002)). TNF-alfa induce la fosforilación transitoria de la subunidad p65/RelA NF-???, conduciendo a su asociación con la subunidad p50 y a la translocación nuclear del complejo heteromérico resultante. En el núcleo, el heterodímero p65/p50 transactiva genes objetivo corriente abajo, tales como el IFN-gamma e IL-12, por medio de asociación con el co-activador transcripcional p300/CBP (Chen y Greene, supra; Chen et al., J. Immunol., 166:270-276 (2001); Chen et al., Immunology, 107:199-208 (2002); Kiernan et al., J. Biol . Chem., 278:2758-2766 (2003); Zhong et al., supra). Alternativamente, NF-??? puede interactuar con histona desacetilasa (HDAC) -1, -2 o -3, que provoca represión transcripcional de genes objetivo (Ashburner et al., Mol. Cell Biol., 21:7065-7077 (2001); Kiernan et al., J. Biol. Chem., 278:2758-2766 (2003); Quivy y Van Lint, Biochem. Pharmacol., 68:2507-2515 (2004); Rahman et al., Biochem. Pharmacol., 68:1255-1267 (2004); Zhong et al., supra). Mientras que TNF-alfa activa selectivamente la ruta NF- B1 canónica, TWEAK parece capaz de promover la translocación nuclear tanto de las subunidades NF-??? canónicas (Chicheportiche et al., supra; Marsters et al., supra; Saitoh et al., supra) y subunidades NF-KB2 no canónicas (Saitoh et al . , supra ) . Para examinar si TWEAK también podría afectar la expresión genética mediante modulación de las interacciones transcripcionales de NF-???, los efectos de TWEAK y TNF-alfa sobre la fosforilación de p65 NF-??? en células NK esplénicas humanas y macrófagos fueron comparados (figura 4B) . A diferencia de TNF-alfa, que provocó modificación de p65 transitoria detectable a 0.5 horas, TWEAK indujo fosforilación de p65 prolongada, empezando a 0.25 horas y durando hasta 8 horas. Enseguida, p65 NF-??? de células estimuladas fue inmunoprecipitado y probado en cuanto a asociación con p300 o HDAC-1 mediante análisis de inmunoabsorción (figura 4C) . Mientras que TNF-alfa indujo fuerte interacción de p65 con p300 pero no con HDAC-1, TWEAK indujo asociación robusta de p65 con HDAC-1 pero no con p300. Asi, además de inhibir la activación de STAT-1, TWEAK parece reprimir la transcripción de IFN-gamma e IL-12 al promover la interacción de NF-??? con HDAC-1. El efecto inhibitorio de TWEAK sobre la producción de IFN-gamma mediante células NK y producción de IL-12 mediante macrófagos fue invertido por el inhibidor de HDAC Trichostatin A (datos no mostrados ) . Para investigar si la deficiencia de TWEAK altera el desarrollo del sistema inmune, los tejidos linfoides de ratones TWEAK_/~ y compañeros de cama tipo silvestre a 3, 6, y 12 meses de edad fueron comparados (figura 5) . Por 6 meses, los ratones TWEAK"7" mostraron agrandamiento de bazo y nodo linfático notable en comparación con los controles (figuras 5A, 5B) , en tanto que el timo e hígado no difirieron (datos no mostrado) . La evaluación histológica indicó que los bazos de TWEAK" " tenían formación de centro germinal normal y estuvieron libres de malignidad, como los nodos linfáticos (figura 5C) . Sin embargo, el teñido inmunohistoquímico de los bazos mostró una señal más fuente con anticuerpo anti-CD3 en los ratones TWEAK"7" de 12 meses de edad en comparación con los compañeros de cama de edad correspondiente (figura 5C) , sugiriendo una expansión del compartimiento de célula T. El análisis de FACS confirmó que tanto las células T CD4+ y CD8+ fueron significativamente más abundantes en los ratones de TWEAK"7" de edad (figura 5D) . los números de célula NK esplénicas también fueron incrementados, en tanto que la cantidad de células B, macrófagos, granulocitos o plaquetas fue similar (datos no mostrados). Dado que las células NK comprende solamente un porcentaje pequeño de células de bazo, es probablemente que el tamaño de bazo incrementado sea provocado principalmente por una expansión del compartimiento de célula T en ausencia de TWEAK. El análisis adicional demostró un incremento marcado en células T de memoria y en células T positivas en cuanto a expresión del factor de transcripción THl-específico T-bet en ratones TWEAK"7" (figura 5E) . Estos resultados sugieren que TWEAK funciona para inhibir el desarrollo de un perfil inmune TH1 adaptable. Para determinar además la implicación de TWEAK en la modulación de la transición a inmunidad adaptable, se examinó un modelo establecido de inmunidad anti-tumór, en base a células de melanoma B16 C57 Black 6 de ratones singénicos (Yang et al., Int. J. Cáncer, 105:512-519 (2003); Yang et al., Cell. Immunology, 179:84-95 (1997); Yei et al., Gene Ther., 9:1302-1311 (2002)) . En este modelo, tanto células NK como células T efectoras son importantes para el rechazo de tumor (Prevost-Blondel et al., Eur . J. Immunol., 30:2507-2515 (2000); Turk et al., J. Exp. Med., 200:771-782 (2004); Yang et al., Int. J. Cáncer, 105:512-519 (2003); Yang et al., Cell. Immunol., 179:84-95 (1997); Yei et al., Gene Ther., 9:1302-1311 (2002)) . En primer lugar, los ratones fueron tratados con el subclon B16.F10 moderadamente agresivo de la linea celular B16 (figura 6) . Los ratones TWEAK"7" resistieron completamente el establecimiento y crecimiento de tumores B16.F10, en tanto que la los animales tipo silvestre sucumbieron al crecimiento del tumor a una velocidad comparable a los datos previamente reportados (figuras 6? y 6B) (Yei et al., supra) . Para definir cuales diferencias inmunológicas podrían haber provocado esta disparidad marcada en rechazo de tumor, las poblaciones de linfocito esplénicas de los ratones B16. F10-inyectados fueron analizadas (figura 6C) . Consistente con los otros hallazgos, los animales T EAK-deficientes tuvieron más células NK esplénicas que los controles tipo silvestre. Sorprendentemente, a pesar de su carencia de tumores detectables y de aquí ausencia de antígenos tumor-asociados abundantes, los ratones TWEAK~ - exhibieron una expansión significativa de células T CD8+ relación con los controles. Tomando este hallazgo junto con la observación de los números de célula T de memoria incrementados en ratones TWEAPT7" de edad, se cree que la ausencia de TWEAK puede facilitar una respuesta de memoria tumor-inducida mejorada, posiblemente por medio de cebado de célula T más fuerte facilitado por la presencia de niveles más altos de IFN-gamma e IL-12. Los ratones fueron también tratados con un subclon de melanoma B16 más agresivo, B16.BL6; esto aseguró el implante de tumor, aunque el crecimiento del tumor fue significativamente atenuado en ratones TWEAK~ _ en comparación con los controles tipo silvestre, como se indica por los pesos de tumor promedio a l mes (figura 7A) . Los tumores aislados de ratones T EAK_ " exhibieron infiltración linfocitica grandemente incrementada con 2-8 veces más células T y NK que los controles (figura 9) . Los ratones T EAK_ " que llevan tumor también tuvieron bazos más grandes que los controles (figura 7B) , con poblaciones de célula NK y T expandidas (figura 7C) . Para verificar si las poblaciones linfociticas expandidas albergaban actividad antitumor especifica, los esplenocitos de ratones que llevan tumor fueron aislados, re-tratados ex vivo con células de tumor B16.BL6, y su capacidad para producir citocinas especificas fue determinada. Las células T CD8+ deficientes de TWEAK y células NK produjeron significativamente que más IFN-gamma en tanto que los macrófagos de TWEAK_ ~ generaron más IL-12 en el retratamiento de tumor que los controles tipo silvestre correspondientes (figuras 7D, 7E) . Conjuntamente, estos estudios demuestran que la ausencia de TWEAK aumenta la inmunidad anti-innata también como la adaptable, sugiriendo que TWEAK actúa fisiológicamente para reprimir ambas respuestas. Además, la evidencia de expansión de célula T y producción de citocina anti-tumor mejorada en ratones TWEAK~ _ sugiere que TWEAK modula la interfase inmune innata adaptable.

Claims (35)

1. REIVINDICACIONES 1. Un método para el tratamiento de cáncer, caracterizado porque comprende exponer las células de cáncer de mamífero a una cantidad efectiva de una molécula antagonista, en donde el antagonista es seleccionado del grupo que consiste de: (q) anticuerpo anti-TWEAK; (r) anticuerpo de receptor anti-TWEAK; (s) inmunoadhesina del receptor de TWEAK; y (t) un agente o molécula que bloquea o interrumpe la señalización intracelular del receptor de TWEAK.
2. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la inmunoadhesina del receptor de TWEAK comprende una secuencia de receptor de TWEAK fusionada a una región de Fe de una inmunoglobulina .
3. 3. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la secuencia del receptor de TWEAK comprende una secuencia de dominio extracelular del receptor de FN14.
4. 4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo anti-TWEAK se enlaza al polipéptido de TWEAK humano que comprende los aminoácidos 94-249 de la figura 11 (SEQ ID NO: 1) .
5. 5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el anticuerpo anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano.
6. 6. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo de receptor de anti-TWEAK se enlaza al polipéptido del receptor de FN14 humano que comprende la secuencia de aminoácidos de la figura 12 (SEQ ID NO: 2) .
7. 7. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el anticuerpo de receptor de anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano.
8. 8. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células de cáncer de mamífero son también expuestas a quimioterapia, radiación, profármaco, agente citotóxico o agente inhibidor de crecimiento.
9. 9. Un método para mejorar la actividad de célula NK en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de una molécula antagonista, en donde el antagonista es seleccionado del grupo que consiste de: (u) anticuerpo anti-TWEAK; (v) anticuerpo de receptor de anti-TWEAK; (w) inmunoadhesina del receptor de TWEAK; y (x) un agente o molécula que bloquea o interrumpe la señalización intracelular del receptor de TWEAK.
10. 10. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la inmunoadhesina de receptor de TWEAK comprende una secuencia del receptor de TWEAK fusionada a una región Fe de una inmunoglobulina .
11. 11. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la secuencia del receptor de TWEAK comprende una secuencia de dominio extracelular del receptor de FN14.
12. 12. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el anticuerpo anti-TWEAK se enlaza al polipéptido de TWEAK humano que comprende los aminoácidos 94-249 de la figura 11 (SEQ ID NO: 1) .
13. 13. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el anticuerpo anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano.
14. 14. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el anticuerpo del receptor de anti-TWEAK se enlaza al polipéptido del receptor de FN14 humano que comprende la secuencia de aminoácidos de la figura 12 (SEQ ID NO: 2) .
15. 15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el anticuerpo de receptor de anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano.
16. 16. Un método para mejorar respuestas o actividad de TH1 innatas en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de una molécula antagonista, en donde el antagonista es seleccionado del grupo que consiste de: (y) anticuerpo anti-TWEAK; (z) anticuerpo de receptor de anti-TWEAK; (aa) inmunoadhesina del receptor de TWEAK; y (ab) un agente o molécula que bloquea o interrumpe la señalización intracelular de receptor de TWEAK.
17. 17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la inmunoadhesina del receptor de TWEAK comprende una secuencia de receptor de TWEAK fusionada a una región de Fe de una inmunoglobulina .
18. 18. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la secuencia de receptor de TWEAK comprende una secuencia de dominio extracelular del receptor de FN14.
19. 19. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el anticuerpo anti-TWEAK se enlaza al polipéptido de TWEAK humano que comprende los aminoácidos 94-249 de la figura 11 (SEQ ID NO: 1) .
20. 20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el anticuerpo anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano.
21. 21. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el anticuerpo de receptor de anti-TWEAK se enlaza al polipéptido del receptor de FN14 humano que comprende la secuencia de aminoácidos de la figura 12 (SEQ ID NO: 2) .
22. 22. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque el anticuerpo de receptor de anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano.
23. 23. Un método para el tratamiento de una alteración TH2 moderada en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar al mamífero una cantidad efectiva de una molécula antagonista, en donde el antagonista es seleccionado del grupo que consiste de: (ce) anticuerpo anti-TWEAK; (dd) anticuerpo de receptor de anti-TWEAK; (ee) inmunoadhesina del receptor de TWEAK; y (ff) un agente o molécula que bloquea o interrumpe la señalización intracelular del receptor de TWEAK.
24. 24. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la inmunoadhesina del receptor de TWEAK comprende una secuencia de receptor de TWEAK fusionada a una región de Fe de una inmunoglobulina .
25. 25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la secuencia del receptor de TWEAK comprende una secuencia de dominio extracelular del receptor de FN14.
26. 26. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque el anticuerpo anti-TWEAK se enlaza al polipéptido de TWEAK humano que comprende los aminoácidos 94-249 de la figura 11 (SEQ ID NO: 1) .
27. 27. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el anticuerpo anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano.
28. 28. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque el anticuerpo de receptor de anti-TWEAK se enlaza al polipéptido del receptor de FN14 humano que comprende la secuencia de aminoácidos de la figura 12 (SEQ ID NO: 2) .
29. 29. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el anticuerpo de receptor de anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano.
30. 30. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la alteración TH2 moderada es alergia o asma.
31. 31. Un método para el tratamiento de una alteración inmune-relacionada , caracterizado porque comprende administrar a un mamífero una cantidad efectiva de una molécula agonista, en donde el agonista es seleccionado del grupo que consiste de: (a) anticuerpo de receptor de anti-TWEAK; (b) polipéptido de TWEAK; y (c) una variante del polipéptido de TWEAK.
32. 32. El método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el anticuerpo de receptor de anti-TWEAK se enlaza al polipéptido del receptor de FN14 humano que comprende la secuencia de aminoácidos de la figura 12 (SEQ ID NO: 2) .
33. 33. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el anticuerpo de receptor de anti-TWEAK es un anticuerpo quimérico, humanizado o humano.
34. 34. El método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque la alteración inmune-relacionada es una enfermedad autoinmune.
35. 35. El método de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque la enfermedad autoinmune es enfermedad de Crohn, enfermedad del intestino inflamatorio, esclerosis múltiple o artritis.