MX2007003215A - Cromaderivados, medicamentos y su uso en terapias. - Google Patents

Abstract

Se describen derivados y compuestos novedosos de cromanos, composiciones que los contienen, metodos para su preparacion y sus usos como agentes terapeuticos, particularmente como agentes anticancer y quimioterapeuticos selectivos.

Description

CROMANODERIVADOS, MEDICAMENTOS Y SU USO EN TERAPIAS Campo de la Invención La invención presente se refiere a ciertos derivados del cromo, a compuestos que lo contienen, a métodos para su preparación y a los usos de éstos como agentes terapéuticos particularmente como agentes selectivos anti-cancerosos y quimioterapéuticos.

Antecedentes de la Invención Se conocen más de 700 isoflavonas de ocurrencia natural, algunas de las cuales tienen propiedades biológicas con un beneficio terapéutico potencial.

La Patente de los EE.UU: 5726 202 presenta genéricamente ciertos compuestos isoflavonoides, particularmente el 3,4-diarilcromano y centrocromano para el tratamiento de la hipertrofia prostática benigna.

La WO 01/17 986 también presenta ciertos compuestos isoflavonoides.

Sumario de la Invención Sorprendentemente, los inventores de la presente han encontrado un grupo novedoso de compuestos de la fórmula general (1) que exhiben actividades terapéuticas importantes que incluyen una fuerte actividad anticancerosa, selectividad quimio-terapéutica y radiosensibilización ante cánceres.

Por tanto, de acuerdo a un aspecto de la invención presente se ofrece un compuesto de la fórmula general (I). en la que: Ri es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o C(O)R7, R2 y R3 son independientemente hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alquilo, cicloalquilo, halo o OC(O)R7, siempre que ambos R2 y R3 no sean hidrógeno, R4. 5 y ß son independientemente hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alquilo, cicloalquilo, acilo, amino, C^-alquilamino o di(C?-4-alquilo)amino, OC(O)R7 o OR8. R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, arilalquilo o amino, y R8 es arilo tal como fenilo o arilalquilo tal como bencilo, y R9 es hidrógeno, hidroxi, alquilo, alcoxi, cicloalquilo o halo, o una sal aceptable en términos farmacéuticos o derivado de la misma.

En una realización preferente de la invención* presente R9 es hidrógeno. En correspondencia, en otro aspecto de la invención se brinda un compuesto de la fórmula (I-a): en la que Ri es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o C(O)R7, R2 y R3 son independientemente hidrógeno, hidroxi, alcoxi, halo o OC(O)R7, siempre que ambos R2 y R3 no sean hidrógeno, Rt, R5 y R6 son independientemente hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alquilo, cicloalquilo, acilo, OC(O)R7, amino, y R7 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, arilalquilo o amino.

De acuerdo con otro aspecto de la invención presente se brinda un proceso para la preparación de un compuesto de la fórmula (I) que comprende el paso de hacer reaccionar el grupo keto de un compuesto de la fórmula (II). o el análogo del mismo que ¡ncluye un sustituto que corresponda a R9 en la fórmula (I) En la que RL es alquilo o un grupo protector tal como el Si(R10)3, R2 y R3 son independientemente hidrógeno, alcoxi o OSi(R10)3, siempre que ambos R2 y R3 no sean hidrógeno, y R10 es independientemente alquilo o arilo, con un agente arilante W"M+, en el que W" es un radical arilo sustituido opcionalmente, y M+ es uno o más contra iones, preferiblemente [MgBr]+, Para formar el alcohol terciario intermedio de la fórmula (lll): (ip) o un derivado protegido de éste o una sal de éste (o un análogo de éste que incluye un sustituto que se corresponde con R9 en compuestos de la fórmula (I)) y el cual se deshidrata para formar un compuesto de la fórmula (IV): (o un análogo de éste que incluye un sustituto que se corresponde con R9 en compuestos de la fórmula (I)) cuyo doble enlace se reduce de manera subsiguiente, por ejemplo, mediante hidrogenación y opcionalmente se desprotege para formar un compuesto de la fórmula (l) De acuerdo con otro aspecto de la invención presente se brinda un compuesto de la fórmula general (lll), las composiciones que lo contienen y sus usos.

En otro aspecto, se brinda un compuesto de la fórmula general (IV), las composiciones que lo contienen y sus usos.

Por tanto, de acuerdo con otro aspecto de la invención presente se brinda el uso de un compuesto de la fórmula (I) en terapia, particularmente en quimioterapia y/o como agente radiosensitivo o quimio-sensitivo.

De acuerdo con otro aspecto de la invención presente se brinda un método para el tratamiento, prevención o mejoramiento de una enfermedad o padecimiento, que incluye la administración a un sujeto de uno o más compuestos de la fórmula (1) o de una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de ésta opcionalmente en asociación con un portador y/o excipiente.

De acuerdo con otro aspecto de la invención presente se brinda el uso de uno o más compuestos de la fórmula (I) o de una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de ésta en la producción de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o padecimiento.

De acuerdo con otro aspecto de la invención presente se brinda un agente para el tratamiento, profilaxis o mejoramiento de una enfermedad o padecimiento, cuyo agente comprende uno o más compuestos de la fórmula (I) o de una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de ésta.

De acuerdo con otro aspecto de la invención presente se brinda una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de la fórmula (I) o de una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de ésta en asociación con uno o más portadores farmacéuticos, excipientes, auxiliares y/o diluentes.

De acuerdo con otro aspecto de la invención presente se brinda una bebida o alimento que contiene uno o más compuestos de la fórmula (I) o de una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de ésta.

Estos y otros aspectos de la invención se harán evidentes a partir de la descripción y reivindicaciones que siguen, conjuntamente con los diagramas acompañantes.

Breve descripción de las figuras La Fig. 1 representa una comparación del dehidroecuol (DHE gráfico A), del 3-(4-hidroxifenil)-4-(4-metoxifenil)cromano-7-ol (compuesto 1 HMC de acuerdo con el gráfico B de la invención) y de la toxicidad del cisplatino (gráfico C) en fibroblastos de prepucio neonato.

La Fig. 2 representa la eficacia del HMC en células de melanoma en comparación con la del cisplatino.

La Fig. 3 representa un perfil farmacocinético de formas libres y totales de HMC (A) y DHE (B) después de administración p.o. (peri oral) a ratones BALB/c (50 mg/kg).

La Fig. 4 representa una comparación del perfil farmacocinético de la concentración de HMC en suero después de la administración i.v. (intravenosa) e i.p. (intraperitoneal) de HMC formulado en 20% hidroxipropil-beta-ciclodextrina en una dosis de 50 mg/kg.

La Fig. 5 representa los datos comparativos de tumor de volumen medio tomados de ratones portadores de tumores cancerosos de páncreas HPAC tratados con i.p. dosificada a 20% HPBCD (control de vehículo, qdx15) o HMC (100 mg/k, qdx15). Los datos representados como la media + SEM*, experimento-T de estudiante, p < 0.01.

La Fig. 6 representa los datos comparativos de la masa de tumor terminal tomados de ratones portadores de tumores cancerosos de páncreas HPAC tratados con i.p. dosificada a 20% HPBCD (control de vehículo, qdx15) o HMC (100 mg/k, qdx15). Los datos representados como la medía ± SEM*, experimento-T de estudiante, p < 0.01 La Fig. 7 representa los datos comparativos de la masa de tumor terminal tomados de ratones portadores de tumores cancerosos de páncreas HPAC tratados con i.p. dosificada a 20% HPBCD (control de vehículo, qdx15) o HMC (100 mg/k, qdx15). Los datos representados como la media ± SEM*, experimento-T de estudiante, p < 0.01 La Fig. 8 representa un sumario de la incidencia de la apoptosis en células de melanoma tratadas mediante DHE y HMC en un período de más de 24 y 48 horas.

La Fig. 9 representa la iniciación selectiva de la muerte programada de células en las células malignas de melanoma tratadas con HMC y DHE (Mel-RM y Me4405). La misma concentración de DHE y de HMC y de tiempos de exposición no inducen apoptosis en fibroblastos normales (MRC-5).

La Fig. 10 representa un análisis en 3D de los datos de la citotoxicidad de la sinergia del cisplatino en la línea de células de melanoma MM200. Las combinaciones de cisplatino- HMC fueron evaluadas utilizando un protocolo de una combinación de 5 días (Fig 10A) o una secuencia anti-cancerosa HMC de 24 horas (Fig. 10 B). Para el experimento de cada combinación el HMC se evaluó a10, 5, 2 y µM. Ver lá Tabla 8 para los datos básicos.

La Fig. 11 representa el porcentaje de inhibición de TNFa en macrófagos múridos por parte de los compuestos 6 y 7 de la invención.

La Fig. 12 representa el espectro 1H n.m.r. del 3-(4-hidroxifenil)-4-(4-hidroxifenil)cromano- Descripción detallada de la invención. Los inventores de la presente han descubierto que na clase de derivados de isoflavonas de la fórmula general (I) muestran propiedades biológicas y farmacéuticas sorprendentes e inesperadas.

Se cree que los compuestos de la fórmula I (I) de la invención tienen perfiles favorables de toxicidad con respecto a las células normales y buena bio-disposición. De manera sorprendente los compuestos de la invención exhiben una actividad anti-cancerosa, significativamente mejor que o al menos comparable con la de los tratamientos conocidos para el cáncer.

Los compuestos de la fórmula (I) son citostáticos y citotóxicos contra una amplia gama de células cancerosas de origen humano y animal. Mediante células cancerosas, se entiende el despliegue de características malignas que se distinguen de las células no-cancerosas debido a su crecimiento y comportamiento no-regulados y que usual y finalmente constituyen una amenaza para la vida a menos que sean tratadas exitosamente.

Se ha descubierto que las células cancerosas que responden a los compuestos de la fórmula (I) son de origen epitelial (por ejemplo, de próstata, ováricas, cervicales, de mamas, de vejiga, pancreáticas, colorectales, renales y células no-pequeñas de cáncer de pulmón); de origen mesenquimal (por ejemplo, células cancerosas de melanoma, mesotelioma y sarcoma) y de origen neural (por ejemplo células cancerosas de glioma).

Es poco usual y sorprendente encontrar un grupo relacionado de compuestos que desplieguen una citotoxicidad tan potente contra células cancerosas, pero con baja toxicidad con respecto a células ño-cancerosas taleá como los keratinocitos derivados del prepucio humano. Tal selectividad de las células cancerosas es muy inusual e inesperada.

De manera ventajosa los compuestos de la fórmula (I) muestran citotoxicidad contra células cancerosas que son bien reconocidas por su baja sensibilidad a los medicamentos anticancerosos estándar. Es poco usual e inesperado encontrar actividad de tal potencia contra cánceres, como por ejemplo, el colangiocarcinoma, el adenocarcinoma pancreático y el melanoma De manera ventajosa los compuestos de la fórmula (I) también parecen desplegar una capacidad para radio-sensibilizar células cancerosas, con lo que se quiere decir que estos compuestos o disminuyen la cantidad de radiación gamma requerida para matar las células o convierten las células cancerosas de un estado de radio-resistencia a radio-sensibilidad.

Adicionalmente se piensa que los compuestos de la fórmula (I) poseen actividad quimio-sensitiva, esto es, que aumentan la citotoxicidad de los agentes quimioterapéuticos, especialmente en las células cancerosas y/o convierten las células cancerosas de un estado de quimio-resistencia a un estado de quimio-sensibibilidad.

Los compuestos de la invención también aportan propiedades quimio y/o radio-protectoras a las células no cancerosas. Esto tiene implicaciones terapéuticas significativas debido a que los efectos colaterales 'traumáticos de la quimioterapia y la radioterapia son provocados por la toxicidad de los tratamientos tradicionales a las células no cancerosas.

Las propiedades antes descritas ofrecen ventajas clínicas significativas. L Las propiedades radio y/o quimio-protectoras de los compuestos de la invención pueden ser empleados para proteger a individuos sanos de los efectos de la radiación y /o de las toxinas químicas o a reducir los efectos de éstas.

Por tanto, la invención brinda también el uso de compuestos de la fórmula (I) para tratar a pacientes con cáncer, reduciendo el ritmo de crecimiento de tales tumores o reduciendo el tamaño de tales tumores a través de la terapia con tales compuestos solamente, y/o en combinación entre sí, y/o en combinación con otros agentes anti-cancerosos y/o en combinación con radioterapia.

El uso de los compuestos de la invención presente ya sea por sí solos o en terapia combinada tal como se describió anteriormente, pueden reducir los efectos colaterales adversos experimentados con frecuencia por parte de los pacientes al ser tratados con tratamientos anticancerosos estándar. El uso de los compuestos de la invención puede implicar el empleo de dosis menores en tales terapias, lo que representa un avance importante para los que padecen de cáncer.

Preferiblemente R3 está en la posición 3 en los compuestos de la fórmula (I) En otro aspecto de la invención Rg es alquilo C^, tal" como metilo.

Preferiblemente en los compuestos de la fórmula (l-a): RT es hidrógeno, alquilo C^- o C(O)R7, r R2 y R3 son independientemeníe hidrógeno, hidroxi, alcoxi C^, halo o OC(O)R7, siempre que ambos R2 y R3 no sean hidrógeno, R4, R5 y R6 sean independieníemeníe hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alquilo, cicloalquilo, acilo, OC(O)R7, y R7 es alquilo C^, fenilo o bencilo, o una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de ésta.

Más preferiblemente en los compuestos de la fórmula (l-a): RT- . es hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo o acetilo, R2 y R3 son independientemente hidrógeno, hidroxi, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, bromo, cloro, flúor o acetiloxi, siempre que ambos R2 y R3 no sean hidrógeno. R es hidrógeno, hidroxi, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi o acetiloxi, y R5 y R6 sean independientemente hidrógeno, hidroxi, metoxi, etoxi, propoxi, o una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de ésta.

Los compuestos particularmente preferidos de la fórmula (l-a) tienen los siguientes sustitutos, en los que: Rt es hidrógeno, metilo o acetilo, R2 y R3 son independientemente hidrógeno, hidroxi, metoxi, bromo o acetiloxi con la excepción de que ambos R2 y R3 no sean hidrógeno.' Rt y R6 sean independientemente hidrógeno, hidroxi, metoxi o acetiloxi y R5 es hidrógeno, o una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de ésta La invención también se extiende a compuestos de la fórmula (l-b): En la que: Rt representa hidrógeno o alquiloC?-6, de mayor preferencia hidrógeno o metilo, especialmente hidrógeno. R2 representa hidrógeno, hidroxi o alcoxiC^ tal como metoxi, etoxi, propoxi, de mayor preferencia hidroxi o metoxi, especialmente hidroxi. R3 representa hidrógeno, hidroxi o alcoxiCi-ß tal como metoxi, etoxi, propoxi, de mayor preferencia hidroxi o metoxi, especialmente hidrógeno, con el proviso de que ambos R2 y R3 no representen hidrógeno, Rt representa hidrógeno, hidroxi, alcox¡C?-6 tal como metoxi, etoxi, propoxi, d-6-alquilo tal como metilo, etilo, propilo, ¡sopropilo, especialmente hidrógeno, hidroxí, metoxí o metilo, particularmente metoxi o hidroxi. R5 representa hidrógeno, alcoxiCi-e, alquiloCi-ß, especialmente hidrógeno, metoxi, hidroxi, particularmente hidrógeno. o una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de ésta.

Los compuestos preferidos de la invención incluyen los de la fórmula general (l-c): en la que: Ri es hidrógeno o C C6 alquilo C-?-C6 tal como metilo, etilo, propilo, ¡sopropilo, butilo, isobutilo, secbutilo, butilo terciario, R2 es hidrógeno o alcoxi C C6 tal como metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, secbufoxi, butoxi terciario y Rt es hidroxi o alcoxi C^ tal como metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, secbutoxi, butoxi terciario o una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de ésta.

De mayor preferencia en los compuestos de la fórmula (l-c) Ri está el hidrógeno o el metilo, especialmente hidrógeno.

De mayor preferencia en los compuestos de la fórmula (l-c) R2 es hidroxi o metoxi, especialmente hidroxi.

De mayor preferencia en los compuestos de la fórmula (l-c) R es hidroxi o metoxi, especialmente metoxi.

En un aspecto alternativo la invención brinda compuestos de la fórmula (l-d): En la que: Ri es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o C(O)R7, y R3 es hidroxi, alcoxí, alquilo, cícloalquilo, halo o OC(O)R7, con la excepción de que ambos R2 y R3 no son hidrógeno, t es hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alquilo, cicloalquilo, acilo, amino, alquilamino C?-4 o di(alquilo o OC(O)R7,y R7 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, arilalquilo o amino.

En un aspecto alternativo adicional la invención brinda compuestos de la fórmula (I-e): En la que Ri es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o C(O)R7, y R2 y R3 son independientemente hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alquilo, cicloalquilo, halo o OC(O)R7, con la excepción de que ambos R2 y R3 no sean hidrógeno.

Preferiblemente en los compuestos de la fórmula (I-e) Ri representa hidrógeno o metilo, especialmente hidrógeno.

Preferiblemente en ios compuestos de la fórmula (I-e) R2 representa hidroxi o alcoxi C C6 tal como metoxi.

En los compuestos de la fórmula (I-e) R3 representa preferiblemente hidrógeno, hidroxi o metoxi, especialmente hidrógeno.

En un aspecto alternativo adicional la invención brinda compuestos de la fórmula (l-f): En la que Ri es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o C(O)R7, y R3 es hidroxi, alcoxi, alquilo, cicloalquilo, halo o OC(O)R7, con la excepción de que ambos R2 y R3 no son hidrógeno, R4 es hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alquilo, cicloalquilo, acilo, amino, alquilamino C^ o di(alquil C^amino o OC(O)R7, o OR8y R7 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, arilalquilo o amino y R8 es arilo tal como fenilo o arilalquilo, tal como bencilo.

Preferiblemente en los compuestos de la fórmula (l-f) Rn representa hidrógeno o metilo, especialmente hidrógeno.

Preferiblemente en los compuestos de la fórmula (l-f) R2 representa hidroxi o alcoxi C?-6-tal como metoxi, especialmente hidroxi.

Preferiblemente en los compuestos de la fórmula (l-f) R3 representa hidrógeno o alcoxi Ci-6- tal como metoxi, especialmente hidrógeno.

Preferiblemente en los compuestos de la fórmula (l-f) R3 está en la posición 3.

Preferiblemente en los compuestos de la fórmula (l f). R^ representa amino, -alquilamino C?- o di(alquil C?-4)amino, especialmente amino.

Los compuestos especialmente preferidos de la fórmula (I) incluyen: 3-(4-hidroxifenil)-4-(4-metoxifenil)cromano-7-ol (HMC; Cpd. 1); 3-(4-hydroxifenil)-4-fenilcromano-7-ol (Cpd. 2); 3-(4-hidroxifenil)-4-(3-metoxifenil)cromano-7-ol (Cpd. 3); 3-(3,4-dimetoxifenil) 4-(4-metoxifenil)cromano-7-ol (Cpd. 4); 3-(4-hidroxifenil)-4-(4-metilfenil)cromano-7-ol (Cpd. 5); 3-(4-metoxyfenil)-4-(4-metoxifenil)-7-metoxicromano (Cpd. 6); 3-(4-h¡drox¡fenil)-4-(2,6-dimetoxi-4-hidroxifenil)cromano-7-ol (Cpd. 7); 3-(4-hydroxifenil)-4-(2-hidroxifenil)cromano-7-ol (Cpd. 8); 3-(4-hidroxifenil)-4-(3-acil-2-hidroxi-4-metoxifenil)cromano-7-ol (Cpd. 9); 3-(3-hidroxifenil)-4-(3-metoxifenil)cromano-7-ol (Cpd. 10); 3-(4-hydroxifenil)-4-(4-hidroxifenil)cromano-7-ol (HHC; Cpd. 11); 3-(4-bromofeniI)-4-(4-metoxifenil)cromano-7-ol (Cpd. 12); 3-(4-hidroxifenil)-4-(3-metoxifenil)cromano-7-ol (Cpd. 13); 3-(4-hidroxifenil)-4-(3-aminofenil)cromano-7-ol (Cpd. 14); 3-(4-hidroxifenil)-4-(4-fenoxifenil)cromano-7-ol (Cpd 15); 3-(3,4-dimetoxifenil)-4-(4-metoxifenil)-8-metilcromano-7-ol (Cpd 16). o una sal de la misma aceptable en términos farmacéuticos.

Los compuestos de la fórmula (I) de acuerdo con la invención, incluyen dos centros quirales. La invención presente incluye todos los enantiómeros y diastereoisómeros así como las mezclas de estos en cualquier proporción. La invención también se extiende a enantiómeros aislados o a pares de enantiómeros. Los métodos de separación de enantiómeros y diastereoisómeros son bien conocidos para las personas expertas en la técnica.

Queda claro a las personas expertas en al técnica que en los compuestos de la fórmula (I) los sustitutos arilo en el anillo heterocíclico pueden ser cis o trans en su relación entre sí. Preferiblemente en los compuestos de la fórmula (I), estos sustitutos serán cis.

El isómero cis del compuesto No. (1), HMC es particularmente preferido en la invención presente o una sal del mismo aceptable en términos farmacéuticos.

Igualmente, son particularmente preferidos los compuestos No. .(2) al (16) en la formación cis.

Los compuestos de las fórmulas (lll) y (IV) son intermediarios tal como aquí se establece. Cada isoflavona-4-ol e isoflavona-3-ene intermedia de los compuestos (1) al (16) también son compuestos preferidos con respecto a la invención presente.

En los compuestos de la fórmula (lll) y (IV) puede por ejemplo, representar los radicales siguientes: o un derivado protegido de éstos en la que R4, R y R6 son tal como se definió anteriormente para los compuestos de la fórmula (I).

El término "isoflavona" tal como se utiliza aquí debe asumirse ampliamente para incluir isoflavonas, isoflavenos, isoflavanas, isoflavononas, isoflavonoles y similares.

El término "alquilo" se entiende ¡ncluye grupos alquilos saturados de cadena lineal y ramificadas de 1 a 6 átomos, tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, secbutilo, butilo terciario, pentilo y similares. El grupo alquilo de mayor preferencia contiene de 1 a 4 átomos de carbono, especialmente metilo, etilo, propilo o isopropilo.

El cicloalquilo ¡ncluye cicloalquilo C3-6 tal como un ciclopropilo, ciclobutilo, cicloplentilo y ciciohexilo.

El grupo alquilo o cicloalquilo puede ser sustituido de manera opcional por uno o más de fluór, cloro, bromo, yodo, carboxilo, alcoxicarbonilo C?-C4, -alquilamino-carbonilo C?-C4, di- (alquil C C4)-amino-carbon¡lo, hidroxilo, alcoxi C?-C4, formiloxi, -alquil-carboniloxi CrC , alquiltio C1-C4, cicloalquilo C3-C6 o fenilo.

Preferiblemente, el grupo alquilo no porta ningún sustituto.

El termino "arilo" se entiende incluye fenilo, bencilo, bifenilo y naftiio y puede opcionalmente ser sustituido por uno o más alquilo d-C-t, hidroxi, alcoxi C?-C4, carbonilo, alcoxicarbonilo C?-C4, alquilcarboniloxi C?-C , nitro o halo.

El término "halo" se entiende incluye flúor, cloro, bromo y yodo, preferiblemente flúor y cloro, de mayor preferencia flúor. La referencia a por ejemplo "haloalquilo" incluirá grupos alquilo monohalogenados, dihalogenados y hasta perhalogenados. Los grupos haloalquilos preferibles son el trifluorometilo y el pentafluoroetilo.

Los compuestos de la invención incluyen sales, tales como sales de adición a ácidos, sales aniónicas y sales zwitteriónicas, y en particular incluyen sales aceptables en términos farmacéuticos tales como las que conocen los expertos en la técnica. El término "sal aceptable en términos farmacéuticos" se refiere a una porción orgánica o inorgánica que porta una carga y que puede ser administrada en asociación con un agente farmacéutico, por ejemplo como un contra-catión o contra-anión en una sal. Los cationes aceptables en términos farmacéuticos son conocidos por los expertos en la técnica e incluyen pero no se limitan al sodio, potasio, calcio, zinc y las aminas cuaternarias. Los aniones aceptables en términos farmacéuticos son conocidos por los expertos en la técnica e incluyen pero no se limitan al cloruro, acétalo, tosilaío, citrato, bicarbonato y carbonato.

Las sales aceptables en términos farmacéuticos incluyen las que se forman a partir del ácido acético, ascórbico, aspártico, benzoico, bencenosulfónico, cítrico, cinámico, etanosulfónico, fumárico, glutámico, glutámico, glucónico, hidroclórico, hidrobrómico, láctico, maléico, málico, metanosulfónico, naftoico, hidroxinaftóico, oléico, oxálico, oxaloacético, fosfórico, piruvico, p-toluenosulfónico, tartárico, trifluoroacético, trifenilacético, tricarbálilico, salicílico, sulfúrico, sulfámico y succínico.

El término "derivado aceptable en términos farmacéuticos" o "pro-medicamento" se refiere a un derivado del compuesto activo que al ser administrado al receptor, es capaz de brindar directa o indirectamente, el compuesto matriz o metabolito, o que exhibe actividad por sí mismo e incluye por ejemplos a derivados del fosfato y del sulfonato. Por tanto, los derivados incluyen solvatos, esteres aceptables en términos farmacéuticos, promedicamentos y medicamentos o similares. Esto también incluye derivados con grupos salientes fisiológicamente escindióles que pueden dividirse in vivo para brindar los compuestos de la invención o su porción activa. Los grupos salientes pueden incluir acilo, fosfato, sulfato, sulfonato y preferiblemente son compuestos oxi-sustituidos mono-, di- y per-acilo en los que uno o más de los grupos hidroxi colgantes" están protegidos por un grupo acilo, preferiblemente un grupo acetilo. Típicamente, los compuestos sustituidos aciloxi de la invención se adhieren fácilmente a los compuestos sustituidos hidroxi correspondientes.

La protección, desprotección, sintonización grupal química funcional y otras técnicas conocidas por los expertos en la técnica pueden utilizarse donde sea apropiados para ayudar en la síntesis de los compuestos de la invención presente y de sus materiales iniciadores.

La protección de grupos funcionales con respecto a los compuestos y derivados de la invención presente puede realizarse mediante métodos bien establecidos por la técnica, por ejemplo tal como se describe en T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1981 Los grupos protectores hidroxilo incluye pero no se limitan a esteres de ácido carboxílico, ejemplo esteres de acetato, esteres de arilo tales como el benzoato, acetales/quetales tales como la acetoriída y el benciüdeno, éíeres íales como el o-bencilo y el éter p-metoxi bencilo, el éter tetrahidropiranilo y éteres de sililo tales como el éter f-butildimetilo sililo Los grupos protectores pueden ser retirados mediante, por ejemplo, hidrólisis catalizada acida o básica o reducción por ejemplo, hidrogenación. Los éteres de sililo pueden requerir fluoruro de hidrógeno o floruro tetrabutilamonio para su división.

Queda claro a las personas expertas en la técnica de la química médica que los compuestos de la fórmula (l) pueden convertirse en otros compuestos de la fórmula (I), por ejemplo, donde un compuesto de la fórmula (I) porta uno o más sustitutos hidroxilo, entonces uno o más de esos sustituios puede convertirse en un sustituto halo tal como el bromo, el cloro o el yodo, mediante tratamiento del alcohol con un agente halogenante. Los agentes halogenantes incluyen compuestos como el NBS, el ácido hidrobrómico, el gas de cloro, etc. Durante procesos tales como la halogenación puede ser necesario el uso de grupos protectores para proteger otra funcionalidad en la molécula.

Los hidroxilos de tipo fenólico puede que no se conviertan con rapidez en el compuesto halógeno correspondiente mediante tratamiento con un agente halogenante. Sin embargo, el compuesto halógeno deseado puede prepararse por ejemplo, mediante tratamiento de un material iniciador aril amino con NaNO2 en la presencia de HCl bajo condiciones de temperatura reducida tal como 0°C, para formar la sal azida correspondiente. El tratamiento subsiguiente con CuCI, CuBr, Kl o HBF4 puede utilizarse para convertir la azida en el halo-compuesto requerido.

Un proceso general para la preparación de compuestos de la fórmula (I) comprende el paso de tratar un compuesto de la fórmula (IV): en la que Rt, R2, R3 y W son tal como se define más arriba en relación con los compuestos de la fórmula (II) con un agente reductor para brindar compuestos de la fórmula (I) o un derivado protegido de éstos.

Los agentes reductores son bien conocidos de los expertos en la técnica y pueden incluir fuentes hídridas como borohidridos y borohidridos de metales álcali, pero incluirían hidrógeno en la hidrogenación catalítica en Ja que puede utilizarse un catalizador apropiado tal como paladio sobre carbono. Otras fuentes hídridas incluyen al sodio triacetoxiborohidrido tetrabutil amonio y al cianoborohidrido de sodio.

Preferiblemente el doble enlace en los compuestos de la fórmula (IV) es reducido mediante hidrogenación.

Los compuestos de la fórmula (IV) son preparados mediante deshidratación de un compuesto de la fórmula (lll): en la que Ri, R2, R3 y W son tal como se define más arriba, en relación con los compuestos de la fórmula (II) o un derivado protegido de éstos.

La deshidratación puede, por ejemplo, ser catalizada mediante ácido, por base o facilitada mediante conversión del alcohol terciario en un grupo saliente mejor como debe ser de conocimiento de los expertos en la técnica.

Preferiblemente los compuestos de la fórmula (lll) son deshidratados, por ejemplo, mediante tratamiento con ácido sulfónico para-tolueno.

Los compuestos de la fórmula (lll) pueden prepararse mediante tratamiento de los compuestos de la fórmula (II). en la que Ri, R2, R3 son tal como se define más arriba para los compuestos de la fórmula (II) o de un derivado protegido de éstos con un agente arilante, por ejemplo, un compuesto de la fórmula W"M+ en la que W" es un radical arilo opcionalmente sustituido y M+ es uno o más contra iones, preferiblemente [MgBr]*.

El agente arilante W"M+ puede prepararse mediante química Grignard en la que el compuesto haloarilo (V): o un derivado protegido de ésta en la que: Rt, R5 y Re son independientemente hidrógeno, alcoxi, alquilo, acilo, OC(O)R7, un hidroxi protegido tal como OSi(R?0)3 o un amino protegido tal como el trimetilsililamino fenil halido, y R10 es independientemente alquilo o arilo, y X es halo, preferiblemente bromo, que se reacciona con un metal tal como magnesio para formar el agente arilante.

Preferiblemente el compuesto haloarilo (V) se elige a partir de: en la que t, R5, R6 y X son tal como se define arriba para los compuestos de la fórmula (V): La reacción del agente arilante con la quetona de la fórmula (l I) brinda acceso a ias ¡soflavon-4-oles (lll), isoflav-3-enos (IV) e isoflavonas (I) correspondientes de la invención presente.

De manera alternativa, los compuestos de la fórmula (III) puede prepararse mediante la reacción de compuestos de la fórmula (11) con un compuesto análogo a los compuestos de la fórmula (V), en la que X representa un grupo saliente apropiado L, que se pierde en la formación del producto por adición nucleofílica de la porción arilo a una quetona mediante reacciones bien conocidos para los expertos en la técnica.

Preferiblemente serán protegidos cualquiera alcoholes libres, esteres u otros grupos reactivos tales en los queto compuestos de la fórmula (II), por ejemplo, como esteres, como esteres f-butildimetilsilil durante la reacción de adición nucleofílíca.

Los compuestos de la fórmula (II) pueden prepararse mediante la reducción de los enlaces dobles eneone en los compuestos de la fórmula (VI): o un derivado protegido de ésta, en la que Ri, R2 y R3 son tal como se define arriba, para los compuestos de la fórmula (II).

Arriba se describen los agentes reductores apropiados. La reducción del doble enlace carbono-carbono se efectúa preferiblemente por ejemplo, mediante hidrogenación.

El acceso a los compuestos de la fórmula general (VI) se lleva a cabo por métodos sintéticos generales tal como se establece en el Esquema 1 más adelante y tal como se describe en la solicitud internacional publicada No. WO 01/17 986, cuya exposición se incorpora aquí como referencia. En el Esquema 1 se representa una síntesis típica.

Esquema 1 El acceso a las variaciones de los cromos 3-fenil sustituidos se logra variando el patrón de sustitución en el grupo derivado del ácido fenilacético El acceso a los cromos 4-fenil sustituidos se logra variando el patrón de sustiíución del agente arilante (V).

Pueden utilizarse los análogos de los compuestos empleados en los procesos que incluyan un sustituto que corresponda al R9 tal como se define en el caso de los compuestos de la fórmula (I).

Los términos "tratamiento", "profilaxis" o "prevención", "mejoramiento" y similares, tal como se utilizan aquí deben considerarse en su contexto más amplio. En particular, el término "tratamiento" no implica necesariamente que un animal se trate hasta su recuperación total. En correspondencia, "tratamiento" incluye el mejoramiento de los síntomas o la severidad de una condición en particular, o la prevención o la reducción de un riesgo que de otra forma desarrollaría una condición en particular.

La cantidad de uno o más compuestos de la fórmula (I) que se requiere en un tratamiento terapéutico de acuerdo con la invención dependerá de un número de factores, que incluyen la aplicación específica, la naturaleza del compuesto utilizado en particular, la condición tratada, el modo de administración y la condición del paciente.

Los compuestos de la fórmula (I) pueden administrarse en manera y cantidad según la práctica convencional. Ver por ejemplo, Goodman and Gilman, "The pharmacological basis of therapeutics", 7th Edition, (1985). La dosis específica utilizada dependerá de la condición tratada, el estado del sujeto, la ruta de administración y otros factores bien conocidos, tal como se indica más arriba. En general, una dosis diaria por paciente puede estar en el rango de OJ mg a 5 g; típicamente de 0,5 mg. a 1 g; preferiblemente de 50 mg a 200 mg. La extensión de la dosificación puede fluctuar de una dosis única administrada diariamente o cada dos días, hasta dos o tres veces diarias en el curso de una semana, hasta muchos meses o años, tal como se requiera, en dependencia de la severidad de la condición a ser tratada o aliviada.

Se entenderá adicionalmente que para un sujeto en particular, los regímenes específicos deberán ajustarse en función del tiempo de acuerdo a la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que administra o áupervisa la administración de las composiciones.

Los tratamientos a corto plazo relativamente con los compuestos activos, pueden utilizarse para lograr la estabilización o reducción, o remisión de cánceres. Los tratamientos a mayor plazo pueden emplearse para prevenir el desarrollo de cánceres en pacientes de alto riesgo.

La producción de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de las indicaciones terapéuticas descritas aquí, se preparan típicamente mediante mezcla de los compuestos de la invención (por conveniencia referidos en lo adelante como "compuestos activos") con uno o más portadores y/o excipientes aceptables desde el punto de vista farmacéutico o veterinario, tal como es bien conocido en la técnica.

El portador debe, por supuesto, ser aceptable en el sentido de ser compatible con cualquier otro ingrediente en la formulación y no debe ser agresivo para el sujeto. El portador o excipiente puede ser un sólido o un líquido o ambos, y es formulado preferiblemente con el compuesto como una dosis unitaria, por ejemplo, una tableta, que puede contener hasta el 100% por peso del compuesto activo, preferiblemente de un 0,5% a un 59% por peso del compuesto activo.

Pueden incorporarse uno o más compuestos activos en las formulaciones de la invención, que pueden prepararse mediante cualquiera de las técnicas de farmacia bien conocidas, que consisten esencialmente en la mezcla de los componentes, incluyendo opcionalmente uno o más ingredientes accesorios. La concentración preferida del compuesto activo en la composición del medicamento dependerá de las tasas de absorción, distribución, desactivación y excreción del medicamento, así como de otros factores conocidos para los expertos en la técnica.

Las formulaciones de la invención incluyen aquellas apropiadas para su administración oral, rectal, ocular, bucal (por ejemplo sublingual), parenteral (por ejemplo, subcutánea, intramuscular, intradermal o intravenosa), transdermal, incluyendo la administración a través de las mucosas vía la nariz, boca, vagina o recto y como inhalaciones, aunque la ruta más apropiada en cualquier caso dependerá de la naturaleza y severidad de la condición tratada y de la naturaleza del compuesto activo en particular que se utilice.

La formulación apropiada para la administración oral puede presentarse en unidades discretas, tales como cápsulas, sachets, trociscos o tabletas, conteniendo cada una de ellas una cantidad predeterminada del compuesto activo; como un polvo o granulado; como una solución o una suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o como una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite. Tales formulaciones pueden prepararse mediante cualquier método farmacéutico apropiado que incluya el paso de asociar el compuesto activo y un portador apropiado (que puede contener uno o más ingredientes accesorios tal como se señaló anteriormente) En general las formulaciones de la invención se preparan mediante el mezclado uniforme e íntimo del compuesto activo con un líquido o un portador sólido finamente dividido, o ambos, y entonces de ser necesario, se le da forma a la mezcla resultante como para formar una unidad de dosis. Por ejemplo puede prepararse una tableta mediante compresión o moldeo de un polvo o granulos que contengan el compuesto activo, opcionalmente con uno o más ingredientes.

Las tabletas comprimidas pueden prepararse mediante la compresión en una máquina apropiada, mezclando el compuesto de flujo libre, tal como un polvo o granulos opcionalmente mezclados con un lubricante, aglutinante, diluente inerte y/o agente(es) superficiales activos/dispersores. Las tabletas moldeadas pueden producirse por moldeo en una máquina apropiada, humedeciendo el compuesto en forma de polvo con un aglutinante consistente en un líquido inerte.

Las formulaciones apropiadas para administración bucal (sublingual), incluyen trociscos que incorporan el compuesto activo en una basé saborizada, usualmente sacarosa y acacia o tragacanto; y pastillas que incorporan el compuesto en una base inerte tal como gelatina y glicerina o sacarosa y acacia.

Las formulaciones apropiadas para la administración ocular incluyen líquidos, gels y cremas que incluyen el compuesto activo en un portador o diluente ocularmente aceptable.

Las composiciones de la presente invención apropiadas para su administración parenteral incorporan convenientemente preparaciones acuosas estériles de los compuestos activos, cuyas preparaciones son preferiblemente ¡sotónicas con la sangre del receptor propuesto. Estos preparados se administran preferiblemente en forma intravenosa, aunque la administración también puede efectuarse por medio de inyección subcutánea, intramuscular o intradermal. Tales preparados pueden ser preparados convenientemente mezclando el compuesto con agua o un búfer de glicerina para aportar la solución estéril resultante isotónica con la sangre. Las formulaciones inyectables de acuerdo a la invención, generalmente contienen entre 0,1% y 60% p/v del compuesto activo y pueden administrarse a una tasa de OJ ml/minuto/kg.

Las formulaciones por infusión, por ejemplo, pueden prepararse mediante el empleo de un portador salino y un agente solubilizante tal como una ciclodextrina o un derivado de ésta. Las ciclodextrinas apropiadas incluyen la a-ciclodextrina, la ß-ciclodextrina, la v-ciclodextrina, la dimetil-ß-ciclodextrina, la 2-hidroxietil-ß-ciclodextrina, la 2-hidroxipropil-ciclodextrina, la 3-hidroxipropil-ß-ciclodextrina y la tri-metil-ß-ciclodextrina. De mayor preferencia la ciclodextrina es la hidroxipropil-ß-ciclodextrina. Los derivados apropiados de las ciclodextrinas incluyen el Captisol®, un sulfobutil éter derivado de la ciclodextrina y otros análogos de ésta, tal como se describe en la Patente de los EE. UU. 5 134 127.

Las formulaciones apropiadas para la administración rectal se presentan preferiblemente como dosis unitarias de supositorios. Las formulaciones apropiadas para administración vaginal se presentan preferiblemente como dosis unitarias de pesarios. Estas pueden prepararse mezclando el compuesto activo con uno o más portadores sólidos convencionales, por ejemplo la mantequilla de cacao, para luego darle forma a la mezcla resultante.

Las formulaciones de las composiciones apropiadas para administración tópica a la piel, tienen forma de ungüentos, cremas, lociones, pastas, gel, aerosoles o aceites. Los portadores que pueden utilizarse incluyen vaselina, lanolina, glicoles de polietileno, alcoholes y una combinación de dos o más de éstos. El compuesto activo está presente generalmente en una concentración de desde 0,1% a 5% p/v, más particularmente de 0,5% a 2% p/v. Los ejemplos de tales composiciones incluyen cremas cosméticas para la piel.

Las formulaciones apropiadas para la administración transdermal pueden presentarse como parches discretos adaptados para mantenerse en contacto íntimo con la epidermis del receptor durante un período de tiempo prolongado. Tales parches contienen de manera apropiada, el compuesto activo como una solución acuosa opcionalmente amortiguada de, por ejemplo una concentración de OJ M a 0,2 M cpm respecto a dicho compuesto activo. Ver por ejemplo Brown, L., ef al. (1998).

Las formulaciones apropiadas para administración transdermal pueden también administrarse mediante iontoforesis (ver por ejemplo, Panchagnula R, eí al., 2000) y típicamente tienen la forma de una solución acuosa del compuesto activo opcionalmente amortiguada. Las formulaciones apropiadas comprenden el citrato o el Bis/Tris buffer (pH 6) o agua/etanol y contienen de 0J Ma 0,2 M del ingrediente activo.

Las formulaciones apropiadas para su inhalación pueden administrarse como una composición en spray en la forma de una solución, suspensión o emulsión. La composición del spray de inhalación puede también incluir un propulsor aceptable en términos farmacéuticos tal como el dióxido de carbono o el óxido nitroso o un hidrógeno que contengan fluorocarbono tal como un 1 ,1 ,1 ,2-tetrafluoroetano, 1 ,1,1,2,3,3,3-heptafluoro-n-propano o mixturas de éstos.

Los compuestos activos pueden presentarse en forma de alimentos, tales como los que se añaden, mezclan, recubren o se combinan de alguna manera con un alimento. El término alimento se utiliza en su sentido más amplio e incluye formulaciones líquidas tales como bebidas, incluyendo productos lácteos y otros alimentos, tales como postres y barras, etc. Las formulaciones alimenticias que contienen los compuestos de la invención pueden prepararse fácilmente de acuerdo con prácticas estándar.

Los métodos terapéuticos, usos y composiciones pueden ser utilizados en humanos o en otros animales, incluyendo mamíferos tales como animales de compañía y animales domésticos (tales como perros y gatos) y animales de corral (pavos, patos y otras aves), animales marinos que incluyen los de medios acuáticos (tales como peces, crustáceos y mariscos), y similares.

El compuesto activo o los medicamentos derivados aceptables en términos farmacéuticos o sus sales también pueden co-administrarse con otros materiales activos que no afectan la acción deseada, o con materials que suplementan la acción deseada, tales como antibióticos, o compuestos fungicidas, anti-inflamatorios o anti-virales. El agente activo puede incluir dos o más isoflavonas o derivados de éstas en combinación o mezcla sinérgica. Los compuestos activos pueden también ser administrados con agentes reductores de lípidos tales como el probucol y él ácido nicotínico; inhibidores de la agregación plaquetaria tales como la aspirina; agentes anti-trombóticos tales como el coumadin; bloqueadores de los canales de calcio tales como el verapamil, el dialetizem y la nifedipina; inhibidores de la enzima de conversión angiotensora (ACE) tales como el captopril y el enalapril y los ß-bloqueadores tales como el propanolol, terbutalol, y labetalol. Los compuestos pueden también administrarse en combinación con antiinflamatorios no-esteroidales tales como el ibuprofeno, indometacina, aspirina, fenoprofeno, ácido mefenámico, ácido flufenámico y sulindac. Los compuestos también pueden administrarse con corticosteroides o un anti-emético tal como el zofran®.

Los TAXO-compuestos de la fórmula (I) parecen ser particularmente apropiados paras u co-administración con uno o más medicamentos anti-cancerosos tales como el cisplatino, dehidroequol (dhe), taxol (paclitaxel), gemcitabina, doxorubicin, topotecan y/o camptotecin, especialmente el cisplatino, dehidroequol (DHE) y taxol. Esto puede traer como resultado el mejoramiento de los efectos en el tratamiento, por ejemplo en forma de efectos sinérgicos, en comparación a los casos en que solo se emplea uno de los medicamentos. Particularmente los compuestos de la invención reivindicada presente, especialmente el HMC (esto es el compuesto 1), parecen ser quimio-sensibilizadores que aumentan la citotoxicidad de uno o más de los medicamentos anti-cancerosos así administrados. Este parece ser el caso aún cuando dichos medicamentos anticancerosos trabajen a través de una variedad de diversos mecanismos, por ejemplo el cisplatino se piensa trabaja interactuando con el ADN nuclear, el taxol se piensa que trabaja bloqueando las células en la fase G2/M del ciclo celular evitando que ellas formen aparatos mitóticos normales, la gemcitabina se piensa que trabaja incorporándose al ADN de la célula, previniendo en última instancia la mitssis, el doxorubicin se piensa que sea un inhibidor de la topoisomerasa II evitando por tanto la replicación del ADN y su transcripción y el topotecan se piensa que es un inhibidor de la topoisomerasa I.

De manera interesante, en algunas situaciones esta citotoxícidad incrementada de las células cancerosas no se asocia con un incremento correspondiente en la toxicidad de las células no-cancerosas.

Aun cuando esta observación tiene implicaciones importantes para el tratamiento de muchos cánceres, es especialmente importante en el tratamiento de cánceres tales como el melanoma, que es muy difícil de tratar.

La co-administración puede ser simultánea o secuencíal. La administración simultánea puede efectuarse estando los compuestos en la misma dosis unitaria o en dosis individuales y discretas administradas al mismo tiempo o en un tiempo similar. La administración secuencial puede hacerse en cualquier orden tal como se requiera y típicamente requerirá que se haya hecho presente un efecto fisiológico continuado del primer agente activo o agente inicial cuando se administre el segundo o agente activo posterior, especialmente en los casos que se desee un efecto acumulativo o sinérgico.

La invención también abarca un paquete que comprende la terapia de combinación.

Los compuestos a ser usados en los métodos sintéticos preferidos de la invención presente pueden derivarse de cualquier número de fuentes fácilmente identificables para una persona experta en la técnica. Por ejemplo, la daidzeina está disponible fácilmente o puede ser sintetizada mediante métodos estándar conocidos por la técnica. Los métodos apropiados pueden encontrarse por ejemplo, publicados en las solicitudes internacionales de patentes WO 98/08 503 y WO 00/49 009 y en las referencias aquí citadas, que se incorporan aquí en su totalidad para referencia.

Los compuestos de las fórmulas generales (II), (lll) y (IV) antes descritos son intermediarios en la producción de los compuestos activos isoflavónicos de la fórmula (I). Estos intermediarios representan también aspectos adicionales de la invención presente.

Aún cuando no se desee limitarse a la teoría, se piensa que los compuestos de la invención presente regulan una amplia variedad de procesos de transducción de señales dentro de las células animales y que estos procesos de transducción de señales están involucrados en un amplio rango de funciones que son vitales para la supervivencia y funcionamiento de todas las células animales. Por tanto, estos compuestos tienen un amplio rango de beneficios importantes para la salud en animales incluyendo a los humanos, y en particular tienen el potencial para prevenir y tratar enfermedades humanas importantes y comunes, así como padecimientos y funciones, lo que representa un beneficio sustancial e inesperado.

Por tanto parece que los compuestos de la invención presente tienen actividad como inhibidores TNFa. Existe la hipótesis de que el TNFa es parte de una red estrechamente regulada de citoquinas, que activa rutas múltiples de transducción de señales y que induce y suprime una gran variedad de genes. TNFa puede brindar una señal de supervivencia para las células cancerosas y por tanto se le refiere como un factor promotor de tumores. Como un mediador central de inflamación, TNFa brinda un vínculo molecular entre el estímulo inflamatorio crónico y el desarrollo subsiguiente de la enfermedad maligna. Consecuentemente, su inhibición mediante los compuestos de la invención puede brindar un mecanismo mediante el cual éstos puedan ejercer actividad anti-cancerosa y/o anti-inflamatoria. De manera alternativa, estos compuestos puede utilizarse como agentes quimio-preventivos.

Los beneficios particulares de esta invención radican en (a) el amplio rango de procesos de transducción de señales en los que se enfocan los compuestos, (b) el hecho de que la regulación de estos diversos procesos incluye tanto la regulación de algunos procesos y la de-regulación de otros y, (c) que tal efecto amplio y variado sobre los procesos de transducción de señales está también acompañado por un efecto independiente en un rango de enzimas importantes que son fundamentales parea el metabolismo y la estereoideogénesis.

Los compuestos de isoflavonas de la presente invención exhiben Buenos perfiles de toxicidad in vitro contra células normales. Las isoflavonas tienen actividad amplia, marcadamente mejor o al menos comparable al dehidroequol. Las isoflavonas son muy activas contra las células cancerosas representativas de la leucemia, gliomas y los cánceres de próstata, ovarios, mamas y pulmones. Los compuestos de isoflavonas muestran una actividad potente contra líneas de células de melanoma y colangiocarcinoma (cáncer de vejiga). Se observó buena actividad contra células cancerosas colorectales.

La radio-sensibilización in vivo puede ser experimentada por ejemplo, empleando tumores epidermoides de carcinoma vulvar A431 establecidos en la parte superior de la paía y sujetos a varias dosis de radiación local (solamente a la pata portadora del tumor). Un régimen de tratamiento mediante radiación de 2,5Gy/dia durante 4 días demorará el crecimiento tumoral y puede evaluarse el efecto de la dosis de radiación en combinación con el compuesto del experimento monitoreando la demora en el crecimiento del tumor. Puede esperarse una demora en el crecimiento del tumor de ~6 utilizando solo radiación. La demora en el crecimiento del tumor utilizando el compuesto puesto a prueba dosificado oralmente puede determinarse por separado. La evidencia de radio-sensibilización en tumores A431 mediada por el compuesto puesto a prueba se determina entonces midiendo la demora en el crecimiento tumoral utilizando un régimen de animales pre-tratados con dosis orales del compuesto puesto a prueba, seguido del régimen estándar de terapia medíante radiación antes descrito. Una demora media en el crecimiento de hasta 30 días utilizando el tratamiento combinado en comparación con hasta 10 días utilizando o la radiación o regímenes de monoterapia del compuesto puesto a prueba, evidencia las propiedades de radio-sensibilización de los compuestos de la invención.

La radio-sensibilización in vitro puede probarse, por ejemplo, empleando ensayos clonogénicos utilizando la línea de células A431 de carcinoma epidermoide humano de vulva para medir la respuesta a la radiación por si sola o en combinación con los compuestos a prueba. Puede utilizarse una dosis del medicamento que cause un 10% de toxicidad a las células en combinación con dosis graduadas de radiación. La dosis apropiada del compuesto se determinaría mediante ensayo clonogénico. La evidencia de la radio-sensibilización mediada por el compuesto a 'prueba se muestra por ejemplo en un >20% de toxicidad en las células utilizando la terapia de quimio-radiación en comparación con la toxicidad del 10% utilizando los regímenes de monoterapia correspondientes.

Los compuestos de la invención son útiles en el tratamiento, prevención o mejoramiento de enfermedades asociadas con la supervivencia celular aberrante, la proliferación celular aberrante, la migración celular anormal, la angiogénesis anormal, el balance anormal estrógeno/andrógeno, la génesis disfuncional o anormal de esteroides, la degeneración incluyendo los cambios degenerativos dentro de las paredes de los vasos sanguíneos, inflamación y desequilibrio inmunológico.

La invención se ilustra aún más mediante los siguientes ejemplos no limitantes y los diagramas acompañantes.

Ejemplos En los ejemplos y diagramas acompañantes que siguen, la abreviatura "DHE" se utiliza para el dehidroequol, la "HMC" se utiliza para el compuesto No. 1 , que es 3-(4-hjdroxifenil)-4-(4-metoxifenil)-cromano-7-oI y "HHC" se utiliza para el compuesto No. 11 , que es 3-(4-hídroxifen?O-4-(4-hidroxifenil)-cro?t?ano-7-ol. 1.0. Síntesis Ejemplo 1: 4',7-Diacetoxidaidzeina Se calentó una mezcla de daidzeina (2.0 g), anhídrido acético (10 ml) y piridina (2 ml) a 105-110 C durante 1h. Después de enfriar la mezcla a temperatura ambiente, se revolvió durante 30 min adicionales, durante cuyo lapso de tiempo el diacetato se cristalizó de la solución. El producto se filtró, se enjuagó exhaustivamente con agua y se re-cristalizó a partir de metanol para arrojar 4',7-diacetoxidaidzeina en forma de prismas incoloros (2.4 g, 90%).

Ejemplo 2: 7-Acetoxi-3-(4-acetoxifenil)cromano-4-ona Se añadió paladio sobre carbón (5%, 0.02g) a una solución de 4',7-diacetoxidaidzeina (0.50g, 1.5 mmol) en acetato de etilo (80 ml) y la mezcla se revolvió a temperatura ambiente bajo una atmósfera de hidrógeno durante 72h. Se retiró el catalizador mediante filtración a través de Celita y el filtrado resultante se evaporó in vacuo. El residuo se re-cristalizó a partir de etanol para arrojar 7-acetoxi-3-(4-aceíoxifenil)cromano-4-ona (0.40g, 80%) en forma de placas incoloras.

Ejemplo 3: 7-Hidroxi-3-(4-hidroxifenil)cromano-4-ona Se añadió imidazol (0.63g) a una suspensión de 4',7-diacetoxidihidrodaidzeina (0.26g, 0.08 mmol) en etanol absoluto (5.0 ml) y la mezcla se sometió a reflujo durante 45 min. bajo argón. Se concentró la solución bajo presión reducida y se añadió agua destilada (10 ml) al residuo. La mezcla se dejó en refrigeración durante la noche y se filtró el precipitado resultante. El producto crudo se re-cristalizó a partir del etil acetato/diclorometano para arrojar 7-hidroxi-3-(4-hidroxifenil)cromano-4-ona (0.14g, 71%) en forma de un polvo blanco.

Ejemplo 4: 7-(terc-Butildimeti(sililox.)-3-(4-(terc-butildimetilsililoxi) fenil)cromano-4-ona Se combinaron 7-Hidroxi-3-(4-hidroxifenil)cromano-4-ona 42g, imidazol 130g, terc-butildimetilsilil cloruro 127g, y N,N-dimeíilformamida (500ml) en un frasco de fondo Redondo de 2L y se revolvieron bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se extinguió con la adición de H2O helada (200ml) enfriando la mezcla de la reacción en un baño helado. El sólido blanco resultante se filtró y enjuagó con agua. La re-cristalización con etanol arrojó el producto como cristales blancos sedosos (35,7g).

Ejemplo 5: 7-(terc-Butildimetilsililoxi)-3-(4-(terc-butildimetilsililoxi)fenii)-4-(4-metoxifenil)cromano-4-ol Se pesó el 7-(ferc-Butildimetillsililoxi)-3-(4-(íerc-butildimetilsililoxi)fenil)-4-(4-metoxifenil)cromano-4-ol 25g en un frasco de dos bocas de fondo redondo y se revolvió a presión bajo nitrógeno. Se añadieron 80 ml de THF anhidro al recipiente de la reacción para aportar una solución clara ligeramente amarilla. Se adosó un condensador y el recipiente con la reacción se colocó en un baño helado. Se añadieron por goteo 225 ml de 4-metoxifenilmagnesio bromuro comercial (0,5M de la solución en THF) a la mezcla de la reacción durante 10 minutos. La reacción se extinguió mediante la adición por goteo de éter húmedo (50:50 H2O: éter dietilo) aún bajo nitrógeno, formándose un precipitado blanco a medida que se añadían mayores cantidades de H2O. Se añadió una cantidad adicional de H2O a la mezcla de la reacción antes de su extracción con éter dietilo.

Las capas orgánicas se combinaron y lavaron con agua, salmuera y se secaron sobre MgSO4 anhidro y se retiraron mediante solvente sobre rotovap (rotación a vapor) para arrojar un aceite de color amarillo claro que se solidificó durante la noche para arrojar un sólido blanquecino. El producto crudo se utilizó sin purificación en el próximo paso.

Ejemplo 6: 3-(4-Hidroxifenil)-4-(4-metoxifenil)-2H-cromano-7-ol Se combinaron 7-(ferc-Butilldimetillsililoxi)-3-(4-(íerc-butildimetillsililoxi)fenil)-4-(4-metoxifenil)cromano-4-ol (42g) , pTsOH (435g), astillas hirvientes y 2,5L de etanol en un frasco de dos bocas de fondo redondo de 5L con Un condensador adosado. La reacción se calentó a reflujo durante 3 horas. El solvente se concentró in vacuo a -1 OOml antes de ser vertido en agua removida, helada (700ml). La mezcla se extrajo entonces con acetato de etilo, se lavaron con agua las capas orgánicas combinadas (3 x 2L), salmuera (1 x 500ml), se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se filtraron y se retiraron mediante solvente in vacuo para arrojar aceite rojo/carmelita. El aceite se disolvió en metanol (~100ml) y se colocó en congelación durante la noche. Se formó un precipitado blanco durante la noche, que se filtró y aclaró con metanol. El filtrado se concentró in vacuo para arrojar un aceite carmelita.

Ejemplo 7: 3-(4-HidroxifeniI)-4-(4-metoxifenil)-cromano-7-ol Se combinaron 3-(4-hidroxifenil)-4-(4-metoxifenil)-2H-cromano-7-ol 25,5g (70mmoles), 10% Pd/AI2O3 3.95g y 200ml de etanol en un frasco de dos bocas de fondo redondo de 500 ml. La reacción se hidrogenó a baja presión durante 3 horas utilizando condiciones estándar La reacción se filtró a través de Celita para retirar el catalizador, se enjuagó con etanol (300ml). El filtrado se concentró a ~50ml antes de ser vertido en agua removida, helada (1 ,4L). Se formó un precipitado de color naranja pálido que entonces formó un aceite carmelita. La mezcla se extrajo entonces con éter dietilo, se lavaron las capas orgánicas combinadas con agua (3 x 1 L), salmuera' (1 x 500ml), se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se filtraron. El solvente se retiró in vacuo para arrojar aceite rojo/Carmelita. El producto se re-cristalizó a partir de éter dietilo (~1 OOml), para aportar un sólido carmelita que se enjuagó con éter dietilo helado para arrojar cristales blanquecinos., 11 , 3g. El espectro 1H NMR y el esquema de numeración se muestran a continuación.

En los métodos generales anteriores, las estructuras pueden ser sustituidas opcionalmente o protegidas con sustitutos apropiados o sintónicos o derivados de éstos. Los compuestos pueden estar presentes como por ejemplo, sus sales, acetatos, derivados bencilo o siloxi como puede ser determinado por químico experto en la técnica sintética. Los grupos hidroxi pueden ser fácilmente alquilados (Mel/base), acilados (Ac2O/Py) o silados (CI-S¡R3/base) e igualmente desprotegidos mediante métodos estándar conocidos por la técnica.

Ejemplo 8: 3-(4-Hidroxifenil)-4-(4-h¡droxifenil)-cromano-7-ol Se transfirió 3-(4-hidroxifenil)-4-(4-metoxifenil) cromano-7-o! (3J7g) a un frasco de fondo redondo (probeía de base ancha) y la probeía se purgó con nitrógeno. Se añadió al frasco mediante goteo bromuro de hidrógeno 33 peso% en ácido acético (13ml) y el contenido se calentó a reflujo a 130° durante 7 horas. La mezcla de la reacción se colocó en un baño helado y se ajustó a pH 6 utilizando una solución de hidróxido de sodio (40%p/v). La mezcla se extrajo con acetato de etilo y la capa de acetato de etilo se aclaró aún más con agua y salmuera antes de secarla sobre sulfato de magnesio.La mezcla se filtró y el solvente se retiró in vacuo para aportar un sólido carmelita (2,89g). El sólido fue disuelto en un mínimo de acetato de etilo y purificado mediante cromatografía de columna (Sílice 60H, tamiz200-400 uíilizando acéfalo de efilo:cloroformo (40:60) eluente). Se obtuvo 3-(4-hidroxifenil)-4-(4-hidroxifenil)cromano-7-ol en ~80% de pureza y se purificó aún más mediante cromatografía líquida semi-preparativa de alto rendimiento (HPLC). La Fig 12 muestra el n.m.r. de 1 H. 2.0. Materiales y Métodos 2.1. Cultivo de tejidos La línea de células de cáncer humano de páncreas, HPAC (CRL-2119) se cultivó de manera rutinaria en una mezcla 1 :1 de DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Médium Sigma) más medio F12 (Sigma) de Ham contentivo de HEPES (15 mM), insulina (0.002 mg/ml), transferina (0.005 mg/ml), hidrocortisona, (40 ng/ml), factor de crecimiento epidérmico (10 ng/ml). La línea de células de cáncer de ovarios; CP70 se obtuvo como regalo del Dr. Gil Mor (Universidad de Yale) y se cultivó en una mezcla 1:1 de DMEM más medio Hams F12, y SKOV-3 (línea de células de cáncer de ovarios) comprada a ATCC y cultivada en medio McCoys 5a. La línea de células de cáncer de mamas MDA-MB-468 cultivada en medio Leibovitz's L-15. La línea de células de melanoma MM200 se obtuvo como un regalo de Peter Hersey (Universidad de Newcastle) y el A2058 que se e obtuvo como regalo del Dr Peter Parsons (QIMR). Ambos fueron cultivados en medio DMEM.

Todos los cultivos se suplementaron con 10% FCS (suero fetal de becerro CSL, Australia), penicilina (100U/ml), estreptomicina (100mg/ml), glutamina-L (2mM) y bicarbonato de sodio (1.2 g/L), y se cultivó a 37°C en una atmósfera humidifícada de 5% de CO2. Todas las líneas se células se compraron a ATCC (Maryland, EE.UUU.) excepto en los casos señalados.

La línea normal de células NFF (fibroblastos de prepucio neonato) fue un regalo del Dr. Peter Parsons (Instituto de Investigaciones Médicas de Queensland). Las células de riñon de conejo RK, se obtuvieron de Miller Whalley (Universidad Macquarie). Ambas líneas de células se cultivaron en RPMI suplementadas con 10% FCS (CSL, Australia), penicilina (100U/ml), estreptomicina (100mg/ml), glutamina-L (2mM) y bicarbonato de sodio (1.2 g/L), y se cultivaron a 37°C en una atmósfera humidificada de 5% de CO2. 2.2. Ensayos de proliferación Se determinaron los valores IC50 para cada línea de células. Las células se sembraron en placas de 96 pozos en una densidad celular apropiada determinada mediante análisis de la cinética del crecimiento y cultivadas durante 5 días en ausencia y presencia de los compuestos experimentales. La proliferación celular se evaluó después de la adición de 20 µl de 3-4,5 dimetiltiazol-2,5-dipfenil teírazolio bromuro (MTT, 2.5mg/ml en PBS, Sigma) duraníe 3-4hrs a 37°C de acuerdo con las instrucciones del productor. Los valores IC50 se calcularon a partir de ploteo semi-log del % del control de la proliferación en el eje y contra dosis log en el eje x. 2.3. Farmacocinética del DHE y HMC - Oral Se prepararon el HMC y el DHE como suspensiones homogéneas en 1% CMC (m:v, agua). Ambas se administraron oralmente mediante alimentación forzada a ratones hembra BALB/c en dosis de 50 mg/kg. Se asignaron tres animales a cada marco de tiempo (15 min, 30 min, 1hr, 4hr y 24 hr). En cada marco respectivo de tiempo, los animales fueron sacrificados mediante dislocación cervical y su sangre se recolectó. El HMC libre se analizó mediante espectroscopia de masas. 2.4. Farmacocinética del HMC - i.v. e i.p. Se preparó el HMC como una solución en 20% hidroxipropil-beta-ciclodextrina (m:v, agua). La solución se administró oralmente o mediante alimentación forzada o por inyección a ratones hembra BALB/c en dosis de 50 mg/kg. Se asignaron tres animales a cada marco de tiempo ( 5 min, 30 min, hr, 4hr y 24 hr). En cada marco respectivo de tiempo, los animales fueron sacrificados mediante dislocación cervical y su sangre se recolectó. También se recolectó la orina y se analizó el HMC. También se recolectó la orina y se analizó para HMC. 2.5 Estudio piloto de eficacia in vivo - Ratones portadores de tumor HPAC Las probetas subconfluentes (80%) de células de HPAC fueron tripsinizadas lavadas, en una solución salina Hanks balanceada (Sigma), re-suspendidas en un medio mínimo esencial dubellco (Sigma) y un volumen igual de matrigel™ (Becton Dickson) a una densidad de 3,7 x 107 células por mi. Los ratones Atímicos nu/nu BALB/c fueron inoculados s.c. con 3,7x106 de células HPAC bi-laterlamente a medio camino a lo largo de la superficie dorsal. Para los grupos HMC (n=3 por régimen de dosificación) y de control (n=2), el tratamiento comenzó cinco días después de la inoculación para permitir la formación del tumor. El HMC se formuló a 20% HPBCD y se administró i.p. diariamente durante 15 días. El grupo de control recibió dosis i.p. equivalentes (peso:peso) de 20% HPBDC. Las mediciones de los tumores comenzaron 5 días después de la inoculación (10x10 mm2) y fueron medidos en dos dimensiones, largo (a) y ancho (b), utilizando calibradores. El peso del tumor (W) se calculó a partir de la fórmula W=ab2/2, en la que a, es la mayor de las dos mediciones (Odwyer et al., 1994). Las curvas de proliferación tumoral se analizaron con respecto a la máxima inhibición del tumor (tratado/control, T/C). Luego del sacrificio se fijaron tejidos de hígado, riñones, fémur, estómago y colon en formalina amortiguada, revestidas en parafina, las secciones se cortaron y colorearon con H&E. Las secciones coloreadas se sometieron entonces al asesoramiento Rothwell para análisis histopatológico. Se realizó bioquímica sérica en la sangre extraída de los grupos de control, control del vehículo y de tratamiento con HMC. La patología de veterinaria clínica realizó el análisis del suero (U.Syd). 2.6 Análisis de sinergia en modelo de tres dimensiones El análisis del modelo en 3D de la interacción citotóxica entre el medicamento A y el B permite la representación del efecto inhibitorio pronosticado de dos medicamentos en combinación en 3 dimensiones, para revelar las regiones reales de sinergia o antagonismo. Los ploteos de sinergia 3-D se basan en la teoría de "Aditividad Teórica" (TA) tal como la reseña Kanzawa et al (Int. J. Cáncer 71, 311-319 (1997)). La aditividad teórica se calculó a partir de las ciíotoxicidades del medicamento A y el B como monoterapias utilizando la siguiente fórmula que asume que los medicamentos son inhibidores mutualmente exclusivos: TAC1) = I - CQACÜB En la que: (fa)A = fracción de células afectadas por el medicamento A (fa)ß = fracción de células afectadas por el medicamento B La TA se calcula para cada combinación de concentración de los medicamentos y se sustrae del efecto experimental observado para cada combinación para brindar una medición de la acción sinérgica. Una diferencia positiva indica que más células son afectadas por la combinación de medicamentos que lo esperado en teoría si los dos medicamentos fueran administrados de conjunto - de ahí la sinergia. Una diferencia negativa indica que menos células fueron afectadas de acuerdo a lo esperado teóricamente - de ahí el antagonismo. 3.0. Resultados 3.1. Toxicidad en células normales El dehidroequol (DHE) fue menos tóxico a ambas, los NFF y las células de riñon de conejo con valores IC50 superiores a 150 µM cuando se comparan con el HMC (86 y 61 µM respectivamente) (Tabla 1 y Figura 1). En un estudio separado, el HHC se mostró como no-tóxico tanto a los NFF como a las células RK (ver Tabla 1 nuevamente). Al compararlo con el cisplatino, un agente quimioterapéutico de referencia, el grado de toxicidad exhibido por el HMC y HHC es leve.

Tabla 1. Toxicidad relativa de DHE, HMC, HHC y el cisplatino contra fibroblastos de prepucio neonato (NFF) y células de riñon de conejo. 3.2. Eficacia in vitro contra células cancerosas Al compararlo con los valores DHE IC50, el HMC demostró actividad marcadamente superior (-5-10 veces mayor) contra el resisteníe' al multi-medicamento, la línea de células de cáncer de ovarios p53 (SKOV-3), el AR negativo, la línea de cáncer de próstata p53 MT (PC3)^ ambas líneas de células de cáncer de mamas ER positivo (p53wt) y negativo (p53 mt) (MCF-7 y MDA-MB-468 respectivamente), Glioma p53 Mt (HTB-138), cáncer de páncreas p53 Mt (HPAC) y cáncer de células grandes de pulmón p53 Mt (Tabla 2). El HMC exhibió actividad anti-cancerosa comparable a la de DHE contra todas las otras líneas de células experimentadas (Tabla 1). Se notó eficacia particular del HMC contra células de melanoma. (Tabla 2.1 y Fig 2). Esto representa una ventaja sustancial sobre la técnica anterior.

El HMC fue activo diferencialmente contra dos líneas independientes de líneas de células colo-rectales, con actividad marcada observada contra las células HT-29 y una actividad algo menor contra HCT-15. Es de notar que el HT-29 y el HCT-15 son COX-2 positivos y deficientes respectivamente. Cuando se examinaron microscópicamente y compararon con células tratadas solamente con vehículo, las células SKOV-3 tratadas con HMC exhibieron cambios morfológicos consistentes con los de células que sufrían apoptosis (agrandamiento celular, aparición de granulos en citosol y ampollamiento de la membrana de plasma). En contraste las células SKOV-3 expuestas a 100µM de Dehidroequol luego de 18 horas, retenían una morfología relativamente normal, comparable con las células tratadas solo con vehículo.

Tabla 2.1. Comparación de la citotoxicidad de Dehidroequol y el HMC contra líneas de células representativas de diferentes malignidades En estudios posteriores se deíerminó la citotoxicidad de varios compuestos aquí descritos contra diversas líneas de células. El compuesto14-eno es el cromeno 3-eno precursor del cromano reducido correspondiente, el compuesto 14. Se observó que los compuestos 1 , 2 y 11 muestran su mejor eficacia contra la mayoría de las líneas de células de cáncer. El compuesto 14 muestra una eficacia ligeramente mejor en general, en comparación con su 14-eno correspondiente y con el compuesto 6 (Tabla 2.2).

Tabla 2.2. Citotoxicidad de los compuestos crómanos 1, 2, 6, 11 y 14 y del crom-3-eno, compuesto 14-ene, contra líneas de células representativas de diferentes malignidades. 3.3.1. Farmacocinética del HMC - oral Al compararlo con el perfil farmacocinética del HE dosificado oralmente, el HMC administrado por igual ruta y dosis (50 tng/kg)' exhibiió una Cmax de 141141 µM (alcanzado después de 1 hr) comparado con 511 µM para el DHE (alcanzado después de 15 min) (Tabla 3 y Figura 3). Al igual que el DHE, el HMC también está sujeto a conjugación con bajas concentraciones de plasma de la forma libre de la molécula observada (1.3 µM después de 30 min) (Tabla 3 y Figura 3). Esto es menos de la mifad de la concentración máxima de dehidroequol libre alcanzada utilizando el mismo régimen de dosis (3.3 µM después de 15 min) (Figura 3). La tasa libre:total es mayor para el HMC cuando se compara a la del DHE (0,92 vs 0,64 respectivamente).

Tabla 3.1. Comparación de concentraciones libre y total de plasma alcanzadas en ratones dosificado con 50 mg/kg de HMC o DHE p.o. 3.3.2. Farmacocinética del HMC y HHC - oral Los pacientes humanos se dosificaron oralmente con 200mg de HMC o de HHC. Para cada paciente examinado, se extrajo sangre durante un período de 6 horas y los resultados se promediaron para caracterizar la farmacocinética del plasma. Los resultados iniciales arrojan una vida media oral de 3,99 horas para el HMC y 3,26 horas para el HHC (Tabla 3.2).

Tabla 3.2. Comparación de concentraciones alcanzadas de vida media de plasma en humanos dosificados con 200 mg de HMC o HHC. 3.4. Farmacocinética del HMC - i.v. e i.p. Cuando se formuló en HPBCD y se administró i.v., se observaron niveles extremadamente altos de HMC en la sangre equivalentes a 1 mM del medicamento, 15 minutos posteriores a la administración (Figura 4). La cinética de eliminación de HMC administrado i.v. fue bifásica siendo excretado el HMC rápidamente de la sangre a una tasa de ~1000 uM/hr en la primera hora post administración. Asumiendo una excreción lineal, esta tasa disminuyó a 0,97 uM/hr de 1-4 horas post administración. Cuando la misma formulación se administró i.p., se observó en plasma 1 log menos de HMC (131 µM mediante administración i.p. vs 1069 µM mediante administración i.v.) hasta 1 hr post administración (Fig 4). La cinética de eliminación mediante i.p. sin embargo, fue mucho menor durante este período (112 µM/hr), resultando por tanto en una concentración de suero unas 4,5 veces mayor una hora después de la adminisíración (18,7 por i.p. vs 3,98 po i.v.). Inversamente, en las horas 1-4 post administración, la cinética de eliminación fue más rápida después de la administración i.p. en comparación a i.v. (4.6 µM/hr por i.p. vs 0.97 µM/hr por i.v.). Estos datos confirman que el HMC es altamente biodisponible en su estado libre cuando se administra a través de rutas i.p. o i.v. De conjunto con datos de PK oral, estos datos también sugieren que el HMC es susceptible de ser eliminado rápidamente mediante enzimas desintoxicaníes Gl. Se observaron grandes concentraciones de HMC libre en orina sobre 0,5, en 1 y 4 horas donde se recolectaron, (3.3 mM, 3.9 mM y 0.093 mM).

Tabla 4. Comparación del perfil farmacocinético de HMC en suero luego de administración i.v. e i.p.formulado en 20% hidroxipropilo beta ciclodextrina en una dosis de 50 mg/kg. El recuadro muestra las concentraciones de HMC en suero. 3.5. Estudio piloto in vivo de eficacia - Ratones portadores de tumor HPAC En dosis diarias, eí HMC i.p. a razón de 100 mg/kg retrasó significativamente la proliferación de tumores HPAC durante el tiempo de tratamiento cuando se compara con el control del vehículo (Figura 5). Cuando se evaluó la masa media del tumor Terminal, también se notó una reducción significativa de la carga del tumor final (%T/C=62), (Figura 6). De manera importante, no se notaron signos de toxicidad en los animales dosificados con HMC a razón de 100 mg/kg diarios durante 15 días, determinado mediante pérdida de peso. Es más, los animales tratados con HMC parecían prosperar en comparación con los de control (Figura 7). Se recolectaron los órganos (hígado, riñones, bazo, fémur, estómago y colon) y se sometieron a evaluación histopatológica a la consultora Rothweil. También se llevó a cabo un análisis bioquímico limitado del suero. Estos datos confirman que ei HMC demuestra actividad antitumorigénica contra los tumores HPAC in vivo. 3.5.1. Examen histopatológico de grupos tratados con HMC Se realizó el examen histopatológico de las secciones coloreadas con hematoxilina y eosina, cortadas a partir de los tejidos, fijados con formalina, de dos series de ratones experimentales. Se examinaron el hígado, riñones, estómago y colon buscando evidencia de daño tóxico y el bazo y tuéíano óseo en busca de evidencia de mieolo-supresión, así como el lumor respecto al grado de necrosis. Se asignó una calificación de 0-5 a cada espécimen de tumor respecto al grado de necrosis presente. Las secciones se calificaron como "ciegas" en dos ocasiones independientes y la calificación final otorgada en los resultados representa la media de estas dos calificaciones.

Tabla 5. Toxicología HMC 3.5.1.1. Resumen de los resultados No se detectó evidencia de toxicidad o mieolo-supresión en las secciones tomadas de los tejidos de los ratones tratados con medicamentos. Sin embargo, en todos los ratones tratados con medicamento se produjeron cambios en forma de parches inflamatorios crónicos ligero/moderados que afectaban la serosa y el mesenterio asociado, así como cambios reactivos de las células mesoteliales en algunos de los tejidos examinados. Estos cambios son consistentes con la inyección intra-peritoneal de un maíerial ligeramente irrifante.

No se detectó necrosis significativa del tejido tumoral en los especimenes de control 1/8 y 1/11. Sin embargo, había necrosis considerable en las secciones tumorales de los ratones traíados con medicación. 3.5.1.2. Bioquímica del suero de ratones tratados con HMC en comparación con los de control La fosfatasa alcalina (ALP), la transferasa alanita (ALT) y la creatina (Cre) fueron evaluadas en animales tratados con HMC vs. animales de control. Los niveles de ALP y Cre fueron similares á los de control y cayeron dentro de rangos normales (para ratas), sin embargo los niveles de ALT en control de vehículo y grupos tratados con HMC fueron mucho más bajos que los niveles de control sin tratamiento.

Tabla 6. Bioquímica del suero de ratones tratados con HMC en comparación con los de control *para ratas ALP: Fosfatasa alacalina ALT: Aminotransferasa alanina Cre: Creatinina 3.6. Apoptosis inducida por HMC en células de melanoma y fibroblastos normales. 3.6.1. Melanoma La apoptosis inducida por HMC en todos las células de melanoma TRAIL-sensitivas y TRAIL-resisíeníes en conceníraciones tan bajas como 2µM (-7-10% apoptosis) durante 24 y 48 horas de exposición (Tabla 7 y Figura 8A). A una concentración clínicamente significativa del medicamento de 4 µM, la incidencia de células apoptópicas luego de 24 hr de exposición a HMC se elevó a 25% y 39% en líneas de células TRAIL-sensitivas (MEL-RM) y TRAIL-negativas (IGR3) respectivamente (Tabla 7 y Figura 8A).La incidencia de apoptosis inducida por JMC de 4 µM después de 24 hr de exposición en otras líneas de células fue de -9%. En comparación, la incidencia de apoptosis en células tratadas con DHE en una concentración de 4 µM después de 24 hr de exposición fue de 0-1%. En 48 horas, en la misma concentración de HMC (4µM), la incidencia de apoptosis se elevó a 21-42 % en todas las líneas de células examinadas (Tabla 7 y Figura 8B). El DHE fue el único otro agente que indujo niveles moderados de apoptosis después de 48 hr de exposición en una concentración de 4µM, pero solo en líneas de células ME4405 (14%) y Mel-AT (15%) (Tabla 7 y Figura 8B).

Tabla 7. Sumario de la incidencia de apoptosis de DHE en células de melanoma tratadas con HMC después de 24 y 48 hr. 3.6.2. Fibroblastos normales Se condujeron estudios en fibroblastos normales (MRC-5) y células de melanoma TRAIL-sensitivas (ME4405 y MEL-RM) utilizando 8µM de DHE o de HMC en 24 y 48 hr de exposición (Figura 9). Estos datos demuestran que el HMC y en menor medida el DHE, indujeron niveles marcados de apoptosis en ambas líneas de células de melanoma en 24 y 48hr. Importante, al promover la muerte programada de la célula en células malignas, se mostraron fibroblastos normales tanto en apoptósis inducida por HMC como por DHE en 8 µM del medicamento en exposición de 24 y. Estos datos confirman que el HMC es citotóxico selectivamente a las células cancerosas.

Los compuestos de isoflavonas de la invención exhiben un perfil de eficacia superior contra todos los cánceres examinados cuando se compara con el DHE. Mientras el HMC es marginalmente más tóxico que el DHE en células NFF y RK, el HMC es marcadamente menos tóxico que el cisplatino. El HMC administrado oralmente a ratones está menos biodisponible cuando se compara con el DHE, pero la tasa de libre:total es mayor. El HMC HPBCD-formulado estaba marcadamente disponible en su forma ibre cuando se administraba i.v. e i.p. Las concentraciones significativas de suero de HMC libre post administración i.p. eran 18 veces superiores a las del HMC administrado oralmente. Se ha demostrado que el HMC, formulado en 20% HPBCD y administrado i.p. ejerce una actividad antitumorigénica moderada contra tumores HPAC in vivo. El HMC cuando se administra a 100 mg/kg a ratones no resulta tóxico para los órganos principales tal como se determina mediante histopatología, sin embargo en todos los ratones tratados con medicamento había cambios inflamatorios crónicos en forma de parches ligero/moderados que afectaban la serosa y el mesenterio asociado, así como cambios reactivos de las células mesoteliales que son consistentes con la inyección intraperitoneal de un material ligeramente irritante.

El HMC indujo niveles de apoptosis moderado-fuertes en células de melanoma TRAIL-resistentes y TRAIL-sensitivas luego de 24 y 48 hrs de exposición. Las células normales de fibroblastos fueron resistentes a la apoptosis luego de 48 hrs de exposición. El DHE induce niveles de apoptosis ligero-moderados en células de melanoma TRAIL-resistentes y TRAIL-sensitivas después de 48 horas de exposición. Las células normales de fibroblastos fueron resistenfes a la apoptosis después de 48 horas de exposición. La capacidad tanto del HMC como del DHE de inducir apoptosis en células negativas al caspase sugiere que para la apoptosis mediada por HMC y DHE no es esencial un camino operacional extrínseco programado para la muerte celular. 3.7 Toxicidad sinérgica ip vitro del HMC en células cancerosas cuando se combina con cisplatino, paclitaxel y gemcitabina, camptotecina, topotecan y doxorubicina. 3.7.1. Combinación de HMC con cisplatino contra la línea de células de melanoma MM200. La sinergia del HMC con cisplatino fue evaluada tanto en combinación en 5 días de exposición o en secuencia (HMC ? cisplatino) contra la línea de células de melanoma MM200. Fue difícil evaluar la toxicidad sinérgica uíilizando un cambio en IC50 como una medida de sinergia debido a la toxicidad del HMC como monoterapia (Tabla 8). El análisis en 3D de los datos revela que solo la toxicidad aditiva fue aparente mediante el uso del protocolo de combinación de 5 días (Fig. 11). La evidencia de sinergia mediante el uso de la combinación HMC-cisplatino se evaluó aún más utilizando la secuencia HMC-» cisplatino (24hr de exposición a cada compuesto en secuencia) contra la línea de células de melanoma MM200. Utilizando el cambio en IC50 para evaluar la sinergia, se notó que el HMC en concentraciones de 2 µM quimiosensitizaba las células MM200 al cisplatino en >1000 veces (Tabla 8). La quimiosensitización inducida por HMC de las células MM200 al cisplatino fue confirmada utilizando análisis en 3D'de los datos (Fig. 11B). Estos datos demuestran que el HMC es capaz de quimiosensitizar las células de cáncer, en este caso melanoma, al cisplatino.

Tabla 8. La evaluación comparativa de la sinergia entre el HMC y el císplatino contra la línea de células de melanoma Mel-RM. Se muestran los datos promedio IC50 para cada agente al ser evaluados como una monoterapia o en combinación 3.7.2 El HMC en combinación con gemcitabina contra las células de melanoma Mel-RM. Se evaluó la sinergia del HMC con gemcitabina en combinación durante 5 días de exposición o en secuencia (HMC ? gemcitabina) contra la línea de células de melanoma Mel-RM. Resultó difícil evaluar la toxicidad sinérgica utilizando un cambio en el IC50 como medida de sinergia, debido a la toxicidad del HMC como monoterapia (Tabla 9). El análisis en 3D de los datos revela que el protocolo de combinación de 5 días no edujo toxicidad sinérgica contra la línea de células Mel-RM. La evidencia de sinergia utilizando la combinación HMC-gemcitabina fue evaluada aún más utilizando la secuencia HMC-?-gemcitabina (24hr de exposición a cada compuesto en secuencia) contra la línea de células de melanoma Mel-RM. Se notó utilizando el cambio en IC50 para evaluar la sinergia, que el HMC en concentraciones de 2 y 1 µM quimiosensitizaba marcadamente las células Mel-RM a la gemcitabina en >1000 veces. La quimiosensitización inducida por HMC de las células Mel-RM a gemcitabina se confirmó utilizando análisis de los datos en 3D. Estos datos demuestran que el HMC es capaz de quimiosensitizar las células cancerosas a la gemcitabina.

Tabla 9. Evaluación comparativa de la sinergia entre el HMC y la gemcitabina contra la línea de células de melanoma Mel-RM. Se muestran los datos promedio de 1C50 para cada agente al ser evaluados como una monoterapia o en combinación. 3.7.3. Combinación de HMC con paclitaxel contra la línea de células de melanoma 4405. La sinergia del HMC con paclitaxel fue evaluada en combinación durante exposición de 5 días o en secuencia (HMC ?- paclitaxel) contra la línea de células de melanoma 4405. Resultó difícil evaluar la toxicidad sinérgica utilizando un cambio en el IC50 como una medida de sinergia debido a la toxicidad del HMC como monoterapia (Tabla 10). Se notó una reducción en 30 veces en el IC50 en el experimento de combinación cuando se comparó con la monoterapia de paclitaxel. Sin embargo, el análisis en 3D de los datos reveló que el protocolo para la combinación de 5 días no edujo una toxicidad sinérgica contra la línea de células 4405. La evidencia de sinergia utilizando la combinación HMC-paclitaxel se evaluó aún más utilizando la secuencia HMC-» paclitaxel (24hr de exposición para cada compuesto en secuencia contra la línea de células de melanoma 4405. Utilizando cambio en el IC50 para evaluar la sinergia, se notó que el HMC en concentraciones de 2 µM quimiosensitizaba marcadamente las células 4405 al paclitaxel en >1000 veces (Tabla 10). La quimiosensitización inducida del HMC de las células de MM200 al paclitaxel fue confirmada utilizando análisis en 3D de los datos. Estos datos demuestran que el HMC es capaz de quimiosensitizar las células de cáncer a paclitaxel.

Tabla 10. Evaluación comparativa de la sinergia entre el HMC y el paclitaxel contra la línea de células de melanoma 4405. Se muestran los datos promedio 1C50 para cada agente al ser evaluado como una monoterapia o en combinación. 3.7.4. Combinación de HMC con topotecan contra la línea de células de melanoma MM200. La sinergia del HMC con el topotecan se evaluó en combinación durante 5 días de exposición o en secuencia (HMC —>• topotecan) contra la línea de células de melanoma MM200. Resultó difícil evaluar la toxicidad sinérgica utilizando un cambio en el IC50 como una medida de la sinergia debido a la toxicidad del HMC como monoterapia (Tabla 8). El análisis en 3D de los datos confirmó que el protocolo de combinación de 5 días no edujo toxicidad sinérgica contra la línea de células MM200. La evidencia de sinergia utilizando la combinación de HMC-topotecan se evaluó aún más utilizando la secuencia HMC- topotecan (24hr de exposición a cada compuesto en secuencia) contra la línea de células de melanoma. Al utilizar cambio en el IC50 para evaluar la sinergia, se notó que el HMC en una concentración de 2 µM quimiosensitizaba marcadamente las células MM200 al topotecan en >1000 veces. (Tabla 11)." La quimiosensitización inducida del HMC de las células de MM200 al topotecan se confirmó utilizando el análisis en 3D de los datos. Estos datos demuestran que el HMC es capaz de quimiosensitizar las células de cáncer al topotecan- Del análisis en 3D la combinación óptima de HMC y topotecan contra la línea de células de melanoma MM200 parecería ser 2 µM HMC y entre 1 y OJ µM topotecan.

Tabla 11. Evaluación comparativa de la sinergia entre el HMC y el topotecan contra la línea de células de melanoma 4405. Se muestran los datos promedio IC50 para cada agente al ser evaluado como una monoterapia o en combinación. 3.7.5. Combinación de HMC con camptotecina contra la línea de células de melanoma Mel-RM. La sinergia del HMC con la doxorubicina se evaluó en combinación durante 5 días de exposición o en secuencia (HMC ?- doxorubicina) contra la línea de células de melanoma Mel-RM. Resultó difícil evaluar la toxicidad sinérgica utilizando un cambio en el IC50 como una medida de la sinergia debido a la toxicidad del HMC como monoterapia (Tabla 12). El análisis en 3D de los datos confirmó que el protocolo de combinación de 5 días no edujo toxicidad sinérgica contra la línea de células Mel-RM, aunque sí se notó antagonismo. La evidencia de sinergia utilizando la combinación HMC-doxorubicina fue evaluada aún más utilizando el protocolo de la secuencia HMC? doxorubicin (24hr de exposición a cada compuesto en secuencia) contra la línea de células de melanoma Mel-RM. Utilizando cambio en el IC50 para evaluar la sinergia, se notó que el HMC en una concentración de 2 µM quimiosensitizaba las células Mel-RM a camptotecina en -12 veces (Tabla 13). El análisis en 3D de los datos, sin embargo, revela un marcado grado de sinergia entre el HMC y la doxorubicina contra las células Mel-RM. Estos datos demuestran que el HMC es capaz de quimiosensitizar las células de cáncer al paclitaxel. Del análisis en 3D la combinación óptima de- HMC y camptotecina contra la línea de células del melanoma MM200 parecería ser 2 µM HMC y entre 1 y 0.1 µM doxorubicina.

Tabla 12. Evaluación comparativa de la sinergia entre el HMC y la doxorubicina contra la línea de células de melanoma Mel-RM. Se muestran los datos promedio IC50 para cada agente al ser evaluado como una monoterapia o en bombinación. 3.8 Inhibición del TNFa en macrófagos múridos (RAW 264.7) mediante los compuestos 4, 6 & 7 La línea de células de macrófagos de ratón RAW 264.7 se cultivó en DMEM suplementado con FCS, 2mM de glutamina y 50U/mI penicilina/estreptomicina. Las células subconfluentes fueron separadas de la probeta mediante raspado suave y placas de 24 pozos sembrados con 5 x 105 células por pozo, permitiendo que se adhirieran durante un hora. Las células fueron tratadas con un agente de examen (en 0.025% DMSO) o en vehículo solo, 1hr antes de la adición de 50ng/ml LPS. Después de incubación durante 16 hrs, se recolectó el medio de cultivo y se almacenó a -80°C para medición TNFa utilizando un ensayo inmunométrico de enzimas (Becton Dickinson).

El compuesto 6 y el compuesto 7 de la invención presente fueron examinados y los resultados se muestran en la Figura 12, que indicaban que los compuestos examinados inhiben el TNFa en macrófagos múridos en una manera dependiente de la dosis respecto a los rangos de concentración examinados.

Los datos básicos para los compuestos 6, 7 y adicionalmente el compuesto 4 se muestran en la Tabla 13 a continuación.

Tabla 13. Inhibición de TNFa en macrófagos múridos mediante los compuestos 4, 6 y 7 3.9 Evaluación del HHC como un quimiosensitizador El HHC fue probado como quimiosensitizador contra un representante de un panel de línea de células de un rango de ¡ndicaciones de cáncer utilizando un panel de citotóxicos comúnmente utilizado en el traíamiento del cáncer. Se ha planteado que el HHC tiene una capacidad para quimiosensitizar fuertemente a la gemcitabina, las líneas de células de cáncer a partir de diferentes patologías gemcitabina (ovárico, de próstata, mamas y cánceres pancreáticos, y glioma) (Tabla 14). Se ha notado una fuerte sinergia utilizando el HHC:cisplatino contra cáncer ovárico y de próstata, una sinergia ligera contra líneas de células de cáncer colorectal en cáncer pancreático y glioma. Se ha notado una sinergia moderada utilizando lal combinación del HHC:paclitaxel coníra cáncer de mamas y colorecíal y líneas de células de melanoma. Se han noíado datos equívocos de sinergia utilizando la combinación HHC:paclitaxel contra cáncer ovárico y líneas de células de glioma y no había evidencia de sinergia contra líneas de células de cáncer pancreático y de próstata. Los datos han revelado que el HHC es capaz de quimiosensitizar fuertemente la línea de células de melanoma MM96L al cisplatino, carboplatino y decarbazina (Tabla 7). Tabla 14. Evaluación de HHC como un quimiosensiíizador utilizando un panel de líneas de células de cáncer y citotóxicos estándar Clave: SSSSS = Sinergia MS = sinergia moderada n.o. = no observado = no examinado 3.10. Eficacia del DHE, HMC y HHC contra lineas de células de melanoma seleccionadas En comparación con el DHE, ambos el HMC y el HHC mostraron una excelente actividad anti-cancerosa contra un rango de líneas de células de melanoma- El HHC fue el agente más eficaz contra las líneas de células de melanoma examinadas hasta la fecha, teniendo valores sub 1 µM IC50 (Tabla 15).

Tabla 15. Comparación de la eficacia del DHE, HMC y HHC efficacy contra monoterapia de melanoma 4.0 Efecto en macrófagos múridos (RAW 264.7) estimulados con LPS La línea de células de macrófagos de ratón RAW 264.7 fue cultivada en DMEM suplementada con suero fetal de becerro (FCS), 2mM de glutamina y 50U/ml penicilina/estreptomicina. Las células subconflueníes fueron separadas de la probeía medianíe raspado suave en placas de 24 pozos sembradas en 5 x 105 células por pozo y se le permitió que se adhirieran durante 1 hr. Las células fueron tratadas entonces con un compuesto de examen en una concentración de 10µM (en 0.025% DMSO) o en vehículo solo, e incubadas durante 1hr. Entonces se añadió LPS 50ng/ml (LPS -Sigma-Aldrich). Después de incubación durante 16 horas, el medio de cultivo se recolectó y almacenó a -80°C para mediciones eicosanoides utilizando ensayos de inmunométricos de enzimas (PGE2 y TXB2 - Cayman Chemical).

Tabla 16: Porceníaje de cambio en síntesis eicosanoide después de incubar el compuesto de examen a 10µM en comparación con incubación con vehículo solo. Los valores positivos indican una síntesis mejorada; los valores negativos indican inhibición de síntesis y consecuentemente sugieren actividad anti-inflamatoria.

La invención ha sido descrita aquí con referencia a ciertas realizaciones preferentes, para poder capacitar al lector a practicar la invención sin la experimentación apropiada. Sin embargo, una persona que tenga habilidades ordinarias en la técnica reconocerá fácilmente que muchos de los componentes y parámetros pueden variarse o modificarse en cierto grado sin apartarse del alcance de la invención. Es más, los tííulos, encabezamientos, o similares se brindan para enriquecer la comprensión del lector respecto a este documento y no deben leerse con un enfoque limitante de la presente invención La totalidad de las presentaciones de todas las aplicaciones, patentes y publicaciones, citadas aquí, si hubiese alguna, se incorporan aquí por referencia.

A lo largo de la especificación y de las reivindicaciones que siguen, a menos que el contexto requiera otra cosa, la palabra "comprende" y las variaciones tales como "comprenden" o "comprendiendo" serán entendidas como que implican la inclusión de un todo (integrado) declarado o paso, o grupo de integrados o pasos, pero no la exclusión de cualquier otro integrado o paso o grupo de integrados o pasos.

Los expertos en la técnica apreciarán que la invención aquí descrita es susceptible de otras variaciones y modificaciones adicionales a las aquí descritas específicamente. Debe entenderse.que la invención incluye todas tales variaciones y modificaciones. La invención también ¡ncluye todos los pasos, caracteristicas, composiciones y compuestos a los que se hace referencia o que se indican en esta especificación de de manera individual o colectiva y cualquiera y todas las combinaciones de cualquiera dos o más de dichos pasos o características.

La referencia a cualquier técnica anterior en esta especificación, no es y no debe tomarse como, un reconocimiento o cualquier forma de sugerencia con respecto a que esa técnica anterior forme parte del conocimiento común general en el campo del empeño.

Artículos de referencia seleccionados Constantinou Al, Mehta R, Husband A. 2003 Phenbxodiol, a novel isoflavone derivative, inhibits dimethylbenz[a]anthracene (DMBA)-induced mammary carcinogenesis in female Sprague-Dawley rats. Eur J Cáncer. 39, 1012-8.

Constaníinou Al, Husband A. 2002 Phenoxodiol (2H-1-benzopyran-7-0,1,3-(4-hydroxyphenyl)), a novel isoflavone derivative, inhibits DNA topoisomerase II by stabilizing the cleavable complex. Anticancer Res. 22, 2581-5.

Gamble, JR., Xia, P., Hahn, O, Drew, J., Drogemuller, C, Cárter, C, Waiker, C, Brown, DM., Vadas, MA. 2003 Phenoxodiol, a derivative of plant flavanoids, shows potent anti-tumour and anti-angiogenic properties. Nature Medicine. Submitted.

Hersey, P and Zhang, X. D. 2001 How melanoma cells evade Trail-induced apoptosis. Nature reviews, Cáncer, 1 , 142-150.

Kamsteeg, M., Rutherford, T., Sapi, E., Hanczaruk, B., Shahabi, S., Flick, M., Brown, D.M and Mor, G. 2003 Phenoxodiol-an isoflvone analogue- induces apoptosis in chemo-resistant ovarian cáncer cells. Oncogene, ;22, 2611-20.

O'Dwyer PJ, Moyer JD, Suffness M, Harrison SD Jr, Cysyk R, Hamilton TC, Plowman J. 1994 Antitumor activity and biochemical effects of aphidicolin glycinate (NSC 303812) alone and in combination with cisplatin ¡n vivo. Cáncer Res. 54, 724-9 Todorov PT, Field WN, Tisdale MJ 1999 Role of a proteolysis-inducing factor (PIF) in cachexia induced by a human melanoma (G361). Br'J Cáncer. 80,1734-7.

Bellisarii, F. L., S. Gallina, et al. (2001). "Tumor necrosis factor-alpha and cardiovascular diseases." Italian Heart Journal: Official Journal of the Italian Federation of Cardiology. 2(6): 408-17.

Szlosarek, P. W. and F. R. Balkwill (2003). "Tumour necrosis factor alpha: a potential target for the therapy of solid tumours." Lancet Oncol 4(9): 565-73.

Nakaía E, Hunter N, Masón K, Fan Z, Ang KK, Milas L. 2004 C225 antiepidermal growth factor receptor antibody enhances the efficacy of docetaxel chemoradioíherapy. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 59(4): 1163-73.

Claims (19)

Reivindicaciones

1. Un compuesto de la fórmula general (I): en la que: Rt es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o C(O)R7, R2 y R3 son independientemente hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alquilo, cicloalquilo, halo o OC(O)R7, siempre que ambos R2 y R3 no sean hidrógeno, R4, R5 y R6 sean independientemente hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alquilo, cicloalquilo, acilo, amino, alquilamino Cµ o di C^-alqui amino, OC(O)R7 o OR8, R7 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, arilalquilo o amino, y R8 es arilo tal como fenilo o arilalquilo tal como bencilo, y R9 es hidrógeno, hidroxi, alquilo, alcoxi, cicloalquilo o halo, o una sal aceptable en términos farrhacéuticos o un derivado de éste

2. Un compuesto de la fórmula (l-a): en la que: Ri es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o C(O)R7, R2 y R3 sean independientemente hidrógeno, hidroxi, alcoxi, halo o OC(O)R7, siempre que ambos R2 y R3 no sean hidrógeno, R , R5 y Re sean independientemente hidrógeno, hidroxi, alcoxi, alquilo, cicloalquilo, acilo, OC(O)R7, amino, y R7 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, arilalquilo o amino.

3. Un compuesto de la reivindicación 2, en la que Ri es hidrógeno, alquilo C-M o C(O)R7, R2 y R3 sean independientemente hidrógeno, hidroxi, alcoxi C?-4, halo o OC(O)R7, siempre y cuando R2 y R3 no sean ambos hidrógeno, R4, R5 sean R6 independientemente hidrógeno hydrogen, hidroxi, alcoxi, alquilo, cicloalquilo, acilo, OC(O)R7, y R7 es alquilo C^, fenilo o bencilo, o una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de éste

4. Un compuesto de la reivindicación 3, en la que R1 es hidrógeno, metilo, etilo, propilo, isopropilo o acetilo, R2 y R3 sean independientemente hidrógeno, hidroxi, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, bromo, cloro, flúor o acetiloxi, siempre que R2 y R3 no sean ambos hidrógeno, R4 es hidrógeno, hidroxi, metoxi, etoxi, propoxi, ísopropoxi o acetiloxi, y R5 R6 sean independientemeníe hidrógeno, hidroxi, meíoxi, etoxí, propoxi, isopropoxi, acetilo, o acetiloxi, o una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de éste.

5. Un compuesto de la reivindicación 4, én la que Ri es hidrógeno, metilo o acetilo, R2 y R3 sean independientemente hidrógeno, hidroxi, metoxi, bromo o acetiloxi, siempre y cuando R2 y R3 no sean ambos hidrógeno, R4 y R6 sean independieníemente hidrógeno, hidroxi, metoxi o acetiloxi, y R5 es hidrógeno, o una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de éste.

6. Un compuesto de la reivindicación 1 elegido entre 3-(4-hidroxifenil)-4-(4-metoxfenil)cromano-7-ol; 3-(4-hidroxifenil)-4-fenilcromano-7-ol; 3-(4-hidroxfenil)-4-(3-metoxifenil)cromano-7-ol; 3-(3,4-dimetoxifenil)-4-(4-metoxifenil)cromano-7-ol; 3-(4-hidroxifenil)-4-(4-meíilfenil)cromano-7-ol; 3-(4-metoxifenil)-4-(4-metoxifenil)-7-metoxicromano; 3-(4-hidroxifenil)-4-(2,6-dimetoxi-4-hidroxifenil)cromano-7-ol; 3-(4-hidroxifenil)-4-(2-hidroxifenil)cromano-7-ol; 3-(4-hidroxifenil)-4-(3-acil-2-hidroxi-4-metoxifenil)cromano-7-ol; 3-(3-hidroxifenil)-4-(3-metoxifenil)cromano-7-ol; 3-(4-hidroxifenil)-4-(4-hidroxifenil)cromano-7-ol; 3-(4-bromofenil)-4-(4-metpxifenil)cromano-7-ol; 3-(4-hidroxifeniI)-4-(3-metoxifenil)cromano-7-ol; 3-(4-hidroxifenil)-4-(3-aminofenil)cromano-7-oI; y 3-(4-hidroxifenil)-4-(4-fenoxifenil)cromano-7-oI.

7. Un compuesto de acuerdo a la reivindicación 6 elegido entre: 3-(4-hidroxifenil)-4-(4-metoxifeniI)cromano-7-ol; y 3-(4-hidroxifenil)-4-(4-hidroxifenil)cromano-7-ol.

8. Un proceso para la preparación de un compuesto de la fórmula (l-a) de acuerdo a la reivindicación 2 que comprende el paso de reaccionar el grupo keto-4 de un compuesto de la fórmula (II): en el que R1 t es alquilo o Si(R10)3, R2 y R3 sean independientemente hidrógeno, alcoxi, halo o OSi(R 0)3, siempre y cuando R2 y R3 no sean ambos hidrógeno, y R10 sea independientemente alquilo o arilo, con un agente arilante W"M+, en el que W" sea opcionalmente arilo sustituido, y M+ sea uno o más contra iones, preferiblemente [MgBr]+, para formar el alcohol terciario intermedio (lll): o una sal de éste y que sea deshidratada para formar un compuesto de la fórmula (IV): Que sea subsiguientemeníe hidrogenado y opcionalmeníe desprotegido para formar un compuesto de la fórmula (I).

9. El uso de uno o más compuestos de la fórmula (I) o (1-a) en quimioterapia o como un agente radiosensitivo o quimiosensitivo.

10. Un método para el tratamiento, prevención o mejoramiento de la enfermedad, que comprende la administración a un sujeto de uno o más compuestos de la fórmula (I) o (I-a) o una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de éstos opcionalmente en asociación con un portador y/o excipiente.

11. Un método de la reivindicación 10, en el que la enfermedad sea cáncer o una masa tumoral.

12. Un método de la reivindicación 11, en el que el cáncer o la masa tumoral sea de origen epitelial (incluyendo próstata, ovarios, cervical, mamas, vejiga, páncreas, colorectal, renal y células no-pequeñas de cáncer de pulmón) de origen mesenquimal (incluyendo células de cáncer de melanoma, mesotelioma y sarcoma) o de origen neural (incluyendo células de cáncer de glioma)

13. El uso de uno o más compuestos de la fórmula (I) o (I-a) o una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de éstos en la producción de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o padecimiento.

14. Un agente para el tratamiento, profilaxis o mejoramiento de una enfermedad o padecimiento, cuyo agente comprende uno o más compuestos de la fórmula (I) o (l-a) o una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de éstos

15. Una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de la fórmula (I) o (l-a) o una sal aceptable en términos farmacéuticos o un derivado de éstos en asociación con uno o más portadores farmacéuticos, excipientes, auxiliares y/o diluentes.

16. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15 que además -( comprende un agente quimioterapéutico adicional.

17. Una bebida o alimento, que contiene uno o más compuestos de la fórmula (I) o (I-a) o una sal acepíable en términos farmacéuticos o un derivado de éstos.

18. Un compuesto de la fórmula (I) o (l-a) o una sal de éste aceptable en términos farmacéuticos tal como aquí se describe con referencia a los Ejemplos y/o diagramas acompañantes-

19. Un compuesto de las fórmulas (II), (lll) o (IV), sales de éstos aceptables en términos farmacéuticos y/o usos de éstos tal como aquí se describe.