MX2007001133A - Uso de activadores de receptor de vitamina d o analogos de vitamina d para tratar enfermedades cardiovasculares. - Google Patents

Abstract

Se describen composiciones farmaceuticas que contienen activadores de receptor de Vitamina D o analogos de Vitamina D para tratar, prevenir o inhibir enfermedades vasculares, entre otras condiciones. Las composiciones farmaceuticas tambien pueden incluir inhibidores de ACE u otros agentes. Tambien se describen metodos para reducir la expresion de PAI-1 administrando cantidades efectivas de activadores de receptor de Vitamina D o analogos de Vitamina D a un mamifero con la necesidad del mismo. Ademas se describen metodos para prevenir, inhibir o tratar trombosis en un mamifero con la necesidad de dicha prevencion, inhibicion o tratamiento que comprende administrar cantidades efectivas de activadores de receptor de Vitamina D o analogos de Vitamina D al mamifero.

Description

USO DE ACTIVADORES DE RECEPTOR DE VITAMINA D O ANÁLOGOS DE VITAMINA D PARA TRATAR ENFERMEDADES CARDIOVASCULARES Campo de la Invención La presente invención se refiere al uso de un activador de receptor de vitamina D (VDRA), preferiblemente paricalcitol, o un análogo de vitamina D, para tratar y prevenir enfermedades cardiovasculares, incluyendo enfermedades cerebrovasculares y vasculares periféricas, especialmente fallas del corazón, cardiomiopatía, ateroesclerosis, infarto al miocardio, y accidentes cerebrovasculares.

Antecedentes de la Invención Las complicaciones de enfermedades cardiovasculares (CVD) debido a aterosclerosis y cardiomiopatía son la causa más común de muerte en las sociedades Occidentales. La hipertensión y la hiperlipidemia en particular son factores de riesgo cardiacos principales. Ciertos medicamentos que tratan hipertensión (por ejemplo, inhibidores de enzima de conversión de angiotensina (ACEIs)) y niveles anormales de lípidos han probado reducir la mortalidad cardiovascular significativamente en poblaciones con un alto riesgo, tales como pacientes con hemodiálisis. Sin embargo, varios factores, que incluyen efectos laterales adversos, limitan la utilidad de medicamentos existentes para prevenir la progresión de la enfermedad cardiovascular o de otra manera hacer que estos medicamentos sean inadecuados para el tratamiento de CVD, particularmente críticos para poblaciones de alto riesgo. Los efectos biológicos de VDRAs son mediados a través del receptor de vitamina D (VDR), un miembro de la superfamilia de receptores de hormona nuclear. Un mecanismo a través del cual se cree que el VDR media los efectos biológicos es a través de la activación de un factor de transcripción que se une a elementos específicos de secuencia de ADN en genes sensibles a vitamina D y finalmente tiene influencia en la velocidad de transcripción mediada por polimerasa II de ARN. Los VDRs están presentes en la mayoría de los tipos de célula humana, especialmente en el sistema cardiovascular y sistema inmune. Varias líneas de evidencia apoyan la idea de que la vitamina D juega un papel importante en la regulación de la fisiología cardiovascular como se describe en la Figura 1. La vitamina D tiene el potencial de prevenir arteriosclerosis y calcificación vascular a través de sus efectos en el sistema inmune para regular de manera descendente las trayectorias inflamatorias y para restaurar la expresión normal en medidores de calcificación vascular. La vitamina D también afecta la proliferación de células. Los bajos niveles de vitamina D fueron asociados como falla cardiaca congestiva. La vitamina D tiene efectos directos para antagonizar hipertrofia de cardiomiocito inducida por endotelina-1. Finalmente, los VDRAs regulan de manera descendente RAAS inhibiendo la síntesis de renina. De esta manera, el tratamiento con VDRAs/análogos de vitamina D puede evitar o tratar enfermedad cardiovascular afectando una o todas las trayectorias en la Figura 1. Sin embargo, los datos in vitro y en animales han sugerido que VDRAs y/o análogos de vitamina D pueden dañar el corazón en pacientes urémicos, por ejemplo, ocasionando calcificación vascular, infarto al miocardio, falla cardiaca, cardiomiopatía y accidentes cerebrovasculares. Por lo tanto, la comunidad médica no apoya el uso de estos compuestos como una terapia para enfermedad cardiovascular y recomienda la limitación de su uso.

Breve Descripción de la Invención La presente invención está dirigida a métodos para prevenir, tratar y retrasar la progresión de enfermedades vasculares, incluyendo enfermedades cardiovasculares, cerebrovasculares y vasculares periféricas, especialmente falla del corazón, cardiomiopatía, arterieesclerosis, infarto al miocardio, y accidentes cerebrovasculares, y composiciones farmacéuticas útiles para esto. De acuerdo con una modalidad, la presente invención se refiere a VDRAs o análogos de vitamina D, (denominados de aquí en adelante como "VDRA/análogo de vitamina D"), conteniendo composiciones para prevenir, tratar y retrasar la progresión de enfermedades vasculares. De acuerdo con algunos aspectos de la presente invención, se pueden utilizar compuestos activadores de receptor de vitamina D (VDRA). Los VDRAs incluyen paricalcitol, calcitriol, 22-oxa-1-alfa,25-dihidroxivitamina D2, MC-903 (calcipotriol), 16-en-23-in-1alfa, 25-dihidroxivitamina D3, y 24-difluoro-26,27-dimetil-16-en-1alfa, 25-díhidroxivitamina D3 (descritos con mayor detalle por DeLuca, et al., en PNAS, 2004, vol. 101, No.18, p. 6900-6904, incorporada aquí por referencia), los compuestos listados en el Cuadro 1 de Physiol. Rev. October 1998, Vol. 78, No. 4, p 193-1231 , incorporada aquí por referencia, y los así llamados compuestos de Gemini (descritos con mayor detalle por Maehr, et al. en J. Steroid Biochem. Mole. Biol. 89-90, 2004, 35-38, incorporada aquí por referencia), EB-1089 (un compuesto farmacéutico de LEO), y ED-71 (un compuesto de Roche). El paricalcitol es especialmente preferido ya que es un VDRA selectivo. El paricalcitol esta comercialmente disponible de Abbott Laboratories (North Chicago, IL, bajo el nombre comercial de ZEMPLAR). De acuerdo con otros aspectos de la presente invención, el análogo de vitamina D puede ser doxercalciferol o alfacalcidol. De acuerdo con algunas modalidades, las composiciones especialmente preferidas de la presente invención también incluyen uno o más de los siguientes agentes: inhibidor de enzima de conversión de angiotensina (ACEl) o un bloqueador de receptor de angiotensina 11-1 (AT1) o un bloqueador de aldosterona (ARB). Las composiciones de acuerdo con la presente invención también pueden incluir otros agentes utilizados para tratar o prevenir enfermedades cardiovasculares, tales como bloqueadores beta, bloqueadores del canal de calcio, agentes antilipémicos, agentes antihipertensivos y agentes anti-inflamatorios, incluyendo aspirina. De acuerdo con algunos aspectos de la ¡nvención, se pueden administrar composiciones farmacéuticas a través de un sistema de suministro sostenido (o continuo). La presente invención también contempla otros modos de administración, incluyendo, pero no limitándose a, oral, inyectable y transdérmico. La presente invención también incluye un método para tratar, inhibir o prevenir trombosis en un mamífero con la necesidad de dicho tratamiento, inhibición o prevención, que comprende el paso de administrar al mamífero una cantidad efectiva de un activador de receptor de vitamina D o un análogo de vitamina D. El activador de receptor de vitamina D puede ser, por ejemplo paricalcitol o calcitriol, y el análogo de vitamina D puede ser, por ejemplo, doxercalciferol o alfacalcidol. Todas las patentes y publicaciones denominadas aquí se incorporan aquí por referencia en su totalidad.

Breve Descripción de los Dibujos La Figura 1 representa esquemáticamente el papel dé la vitamina D en la des-regulación de varios factores inflamatorios asociados con ateroesclerosis y su asociación con remodelación de cardiomiocito. La Figura 2 representa gráficas en forma de barra comparando hospitalizaciones medias por año y días en el hospital por año para paricalcitol, calcitriol y sin terapia con D.

La Figura 3 presenta gráficas en forma de barras que comparan los resultados de análisis de regresión mostrando el tratamiento con paricalcitol asociado con muy pocas hospitalizaciones y días en el hospital comparado con nada de vitamina D. La Figura 4 ¡lustra una gráfica Northern, la cual evidencia que el tratamiento con paricalcitol de células As4.1-hVDR dependientemente de dosis inhibe la expresión de ARNm de renina. La Figura 5 ¡lustra los resultados de un ensayo de promotor de renina-luciferasa utilizado para examinar la actividad de paricalcitol para suprimir la transcripción del gen de renina. La Figura 6 ilustra el efecto de paricalcitol y calcitriol en PAI-1 en un cultivo primario de células de músculo liso de arteria coronaria humanas. La Figura 7 ilustra el efecto de análogos de vitamina D en la expresión del promotor de gen NPR-A. VD3 representa 1,25 de dihidroxivitamina D (todos los resultados son normalizados para la expresión de luciferasa de CMV Renilla co-transfectada). La Figura 8 muestra el efecto de análogos de vitamina D en acumulación de GMP cíclica estimulada por ANP, en donde se utilizo la generación de cGMP dependiente de ANP como un sustituto para la actividad de ANP. La Figura 9 muestra de efecto de análogos de vitamina D en un promotor de gen NPR-A mutante (VDRE-eliminado) en células de músculo liso aórticas de rata neonatal; los resultados son normalizados para la expresión de luciferasa de Renilla. Los resultados sugieren que todos estos compuestos probados inducen a ANP a través de! elemento de respuesta de vitamina D. La Figura 10 muestra el efecto de análogos de vitamina D en basal contra la actividad promotora del gen hBNP estimulada por endotelina (10"7 M) utilizando miocitos cardiacos transfectados que fueron cultivados en un medio libre de suero. La Figura 11 muestra el efecto de análogos de vitamina D en basal y actividad promotora del gen hBNP estimulada (10"7 M) por endotelina utilizando miocitos cardiacos transfectados cultivados en suero de bovino fetal al 0.2%. Todas las células fueron co-transfectadas con vectores de expresión dirigiendo la expresión de hVDR y hRXR. La Figura 12 muestra el efecto de análogos de vitamina D en basal y actividad de Cdk2 estimulada por endotelina (10"7 M) en células de músculo liso aórticas de rata neonatal.

Descripción de las Modalidades de la Invención La presente invención generalmente está dirigida a composiciones que contienen VDRA/análogo de vitamina D, para tratar o prevenir enfermedades cardiovasculares (CVD), incluyendo cardiomiopatía, enfermedades arteriales coronarias, cerebrovasculares y vasculares periféricas. La presente invención también se refiere a métodos para tratar CVD administrando a un paciente una composición farmacéutica, la, cual puede ser una formulación de liberación sostenida, conteniendo una cantidad terapéuticamente efectiva de un VDRA/análogo de vitamina D. El tratamiento de pacientes con CVD a través de la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que contiene VDRA/análogo de vitamina D se espera que sea ventajoso para una reducción efectiva de expresión de renina, inflamación reducida y función cardiaca mejorada directamente a través de la acción terapéutica de VDRA/análogo de vitamina D en el tejido cardiaco. En contraste, los tratamientos convencionales que se basan en la administración de un ACEl (es decir, sin un VDRA/análogo de vitamina D) por ejemplo, solamente reducen angiotensina (II), pero no reducen los niveles de renina o actúan sobre los receptores de vitamina D en el corazón, vasculatura y el mismo sistema inmune. La administración de ACEl puede no ser un tratamiento atractivo a largo plazo debido a consecuencias adversas. De acuerdo con algunos aspectos de la presente invención, las composiciones de la ¡nvención contienen un VDRA/análogo de vitamina D y por lo menos uno de los siguientes agentes: un inhibidor de ACE, un bloqueador de receptor de angiotensina (II) (ARB) y un bloqueador de aldosterona en cantidades terapéuticamente efectivas para inhibir la producción de renina o para inhibir la activación del sistema de renina-angiotensina-aldosterona. Las composiciones preferidas contienen paricalcitol con al menos uno de estos otros agentes. Dichas combinaciones pueden evitar el escape de inhibición ACE y escape de aldosterona con incremento subsecuente en generación de angiotensina (II) y aldosterona. Los inhibidores de ACE adecuados, bloqueadores de ARB y aldosterona están comercialmente disponibles. Los inhibidores de ACE incluyen, pero no se limitan a: captopril (comercialmente disponible bajo el nombre comercial de CAPOTEN de Mylan), enalapril (comercialmente disponible bajo el nombre comercial de VASOTEC de Merck), fosinapril (comercialmente disponible bajo el nombre comercial de MONOPRIL de Bristol Myers Squibb), benzapril (comercialmente disponible bajo el nombre comercial de LOTENSIN de Novartis Pharmaceuticals), moexipril (comercialmente disponible bajo el nombre comercial de UNIVASC de Schwarz Pharma), perindopril (comercialmente disponible bajo el nombre comercial de ACEON de Solvay), quinapril (comercialmente disponible bajo el nombre comercial de ACCUPRIL de Parke-Davis), ramipril (comercialmente disponible bajo el nombre comercial de ALTACE de Monarch), trandolapril (comercialmente disponible bajo el nombre comercial de MAVIK de Abbott Laboratories of North Chicago, IL), lisinopril (comercialmente disponible bajo los nombres comerciales de PRINIVIL de y ZESTRIL de Astra Zeneca). Los agentes de bloqueo de receptor de angiotensina adecuados, incluyen, pero no se limitan a: losartan (comercialmente disponible como COZAAR de Merck), irbesartan (comercialmente disponible como AVAPRO de Bristol Myers Squibb y Sanofi), candesartan (comercíalmente disponible como ATACAND de Astra Zeneca), eprosartan (comerciaimente disponible como TEVETEN de Biovail Corporation of Canadá), telmisartan (comercialmente disponible como MICARDIS de Boehringer Ingelheim) y valsarían (comercialmente disponible como DIOVAN de Novartis). Los bloqueadores de aldosterona adecuados incluyen, pero no se limitan a: eplerenona (comercialmente disponible bajo el nombre comercial de INSPRA de Pharmacia), espironolactona (comercialmente disponible bajo los nombres comerciales de Aldactone, Adultmin, Aldopur, Aldospirone, Almatol, Berlactone, Diatensec, Diram, Esekon, Hypazon, Idrolattone, Merabis, Novospiroton, Osiren, Osyrol, Pirolacton, Resacton, Sincomen, Spiractin, Spiroctan, Spirolacton, Spirolang, Spironex, Spirotone, Tevaspirone, Verospíron, Xenalon Lactabs, Youlactone). Los componentes adicionales, por ejemplo, vehículos fisiológicamente aceptables, solventes, aglutinantes, antioxidantes, colorantes, y sustratos, pueden .ser utilizados en forma necesaria o deseada. El tratamiento o regímenes preventivos preferidos para pacientes con CVD de acuerdo con la presente invención podría administrar composiciones terapéuticamente efectivas que contienen VDRA/análogo de vitamina D de acuerdo con la ¡nvención durante un período suficiente para efectuar un suministro sostenido continuo. Como se utiliza aquí, una "dosis terapéuticamente efectiva" es una dosis en donde en sujetos susceptibles es suficiente para prevenir la progresión o causar la regresión de la CVD o que es capaz de aliviar los síntomas causados por CVD. Un régimen de dosificación ilustrativo podría proporcionar el equivalente de aproximadamente 0.5 microgramos de calcitriol por día o por lo menos de aproximadamente 1 microgramo de calcitriol a través de inyección tres veces por semana. Para paricalcitol, un régimen de dosificación adecuado podría proporcionar el equivalente de aproximadamente 2 microgramos de paricalcitol diariamente o al menos alrededor de 4 microgramos de paricalcitol tres veces a la semana administrado como un bolo. Los regímenes de dosificación adecuados para VDRA/análogos de vitamina D, por ejemplo, doxercalciferol, pueden ser determinados directamente por aquellos expertos en la técnica basándose en la eficacia terapéutica del VDRA/análogo de vitamina D que será administrado. Ya que los inhibidores de ACEl, ARB y aldosterona tienen diferentes eficacias y afectan al cuerpo a través de diferentes trayectorias distintas a como lo hace la vitamina D, las composiciones de acuerdo de acuerdo con la presente invención pueden incorporar un inhibidor de ACEl, ARB o aldosterona que se administrará de acuerdo con regímenes de dosificación convencionales, los cuales son bien conocidos y están fácilmente disponibles para aquellos expertos en la técnica. La invención contempla formas de suministro de fármaco continuas o sostenidas, conteniendo el VDRA/anáiogo de vitamina D seleccionado, y un bloqueador de ACEl y/o ARB y/o aldosterona. Las formas de suministro adecuadas incluyen, pero no se limitan a, tabletas o cápsulas para administración oral, inyecciones, parches transdérmicos para administración tópica (por ejemplo el fármaco que será administrado se mezcla con una matriz de polímero adherida a o absorbida en un soporte o sustrato de respaldo, por ejemplo, etilcelulosa), depósitos (por ejemplo, microesferas inyectables que contienen los compuestos y activos deseados) e implantes. Las técnicas para hacer estas formas de suministro de fármaco son bien conocidas por aquellos expertos en la técnica. Además, también se debe observar que los pacientes con CKD que experimentan hemodiálisis por lo regular requieren de la formación de una fístula arteriovenosa (A-V) para hemodiálisis (HD). La fístula A-V autógena ha sido probada como la de acceso más duradero para HD. La falla principal del acceso vascular principalmente se refiere a trombosis. La patofisioiogía subyacente a la formación de estenosis es turbulencia del flujo sanguíneo que active plaquetas y células endoteliales. La activación final que ocasiona trombosis es una reducción crítica del flujo de sangre de la fístula. En este contexto, se ha postulado un papel particular para el factor de crecimiento derivado de plaqueta (PDGF). Basándose en ios datos presentados en el Ejemplo 5 más adelante, se puede concluir se puede concluir que existe una asociación estadísticamente importante con terapia de Zemplar y menos cambios de acceso vascular. De esta manera, Zemplar puede tener un efecto benéfico a través de su acción sobre células endoteliales, plaquetas y PDGF que son responsables de trombosis.

Estudios futuros deben aclarar el mecanismo del efecto propuesto, entendido si se extiende más allá de fístulas AV a injertos, dependencia de dosis-tiempo y asociación con el producto CaxP. La presente invención se ¡lustra además a través del uso de los siguientes ejemplos no limitantes: Ejemplo 1 Morbidez y mortalidad reducidas asociadas con terapia de vitamina D La causa principal de mortalidad y morbidez en pacientes que reciben hemodiálisis crónica con relación a enfermedad cardiovascular. La prevalencia de CVD puede encontrarse en al menos un 75% de los pacientes que inician terapia de hemodiálisis. Un estudio de inicio de observación que examina pacientes con hemodiálisis quienes iniciaron terapias con vitamina D con paricalcitol experimentaron menos hospitalizaciones con relación a eventos cardiovasculares y no hubieron inflamaciones infecciosas, con pacientes tratados con calcitriol (Paricalcitol-treated patients experience improved hospitalization outcomes compared with calcitriol-treated patients in real-world clinical settings, D. G. Dobrez, et al. Nephrol Dialysis Transplant 2004 19:1174). Este estudio se expandió para incluir pacientes que no recibieron ningún tratamiento activador de vitamina D. ["improved hospitalization outcomes in hemodialysis patients treated with paricalcitol." J. Melnick, et al., abstract book from World Conqress of Nephroloqy, June 8-12, 2003, Berlín. Page 148] revelaron que el tratamiento con paricalcitol se asoció con hospitalizaciones resultantes mejoradas en pacientes con hemodiálisis (HD) quienes fueron tratados con paricalcitol o con calcitriol comparado con pacientes quienes no recibieron ningún tratamiento con vitamina D. Como se muestra en la Figura 2, la evaluación de puntos finales de hospitalización revele el número medio de hospitalizaciones en un año para pacientes que recibieron VDRA (ya sea paricalcitol ("Par") o calcitriol ("Cal")) fue menor que para pacientes que no recibieron nada de vitamina D ("Sin vitamina D"). Notablemente, las hospitalizaciones fueron menores para pacientes tratados con paricalcitol (1.5) que para aquellos tratados con calcitriol (2.2). Además, el número medio de días que se están en el hospital fue menor para pacientes que recibieron VDRA (en especial paricalcitol) comparado con pacientes quienes no recibieron nada de vitamina D (2.6). El número de días en el hospital fue otra vez menor para paricalcitol (5.2) comparo con calcitriol (10.6) y sin vitamina D (14.7). La Figura 3 presenta resultados multivariables par alas hospitalizaciones y días en el hospital por año. El análisis de regresión de estos datos reveló que quienes recibieron calcitriol se asoció con 7.7 menos días de hospitalización comparado con el grupo que no recibió la vitamina D, aunque no se presentó una diferencia estadística en el número de hospitalizaciones. Sin embargo, el tratamiento con paricalcitol se asoció con 1.2 menos hospitalizaciones y 17.5 menos días en el hospital comparado con el grupo que no tomó vitamina D.

Ejemplo 2 Actividad de Paricalcitol para Suprimir la Expresión de Renina Recientemente, se ha encontrado que 1 ,25-dihidroxivitamina D funciona como un regulador negativo de la biosíntesis de renina en estudios in vitro e in vivo. El calcitriol es capaz de inhibir la expresión de gen de renina, lo cual proporciona una base molecular para explorar el uso de vitamina D y análogos de vitamina D como un nuevo inhibidor de renina para regular el sistema de renina-angiotensina-aldosterona (RAAS). Al utilizar un sistema de cultivo de célula in vitro, se examinó la actividad de paricalcitol para suprimir la expresión de gen de renina utilizando técnicas previamente publicadas (1,25-Dihydroxyvitamin D3 is a negative endocrine regulator of the renin-angiotensin system, J. Clin. Invest., July 2002). Como se muestra en la Figura 4, a través del análisis de tinción Northern, el tratamiento con paricalcitol de células As4.1-hVDR dependientemente de la dosis inhibe la expresión de ARNm de renina. En realidad, su actividad inhibidora de renina parece un punto más potente que calcitriol (Figuras. 4A y B). Este efecto inhibidor se confirma a través de ensayos de reporte de promotor-luciferasa, que examina la actividad de paricalcitol para suprimir la transcripción de gen de renina. En estos ensayos, el paricalcitol parece ser por lo menos tan potente como el calcitriol para suprimir la actividad del promotor de gen de renina (Figura 6). Estos datos soportan la utilidad de un VDRA/análogo de vitamina D para regular el sistema de renina-angiotensina-aldosterona y su crítica en el desarrollo de CVD y retraso en la progresión de enfermedades cardiovasculares.

Ejemplo 3 Efecto de Activadores de VDR sobre PAI-1 Se investigó el efecto de paricalcitol y calcitriol en PA1-1 en un cultivo primario de células de músculo liso de arteria coronaria humana (Ver Figura 6). Ei PAI-1 (inhibidor del activador de plasminógeno de tipo 1) es uno de los marcadores de riesgo para enfermedad cardiaca coronaria, y se mejora en plaga ateroesclerótica y se co-localiza con macrófagos. Se incubaron células de músculo liso de arteria coronaria humanas con paricalcitol o calcitriol a la concentración indicada durante 24 horas a 37°C. Las muestras se solubilizaron en regulador de pH de muestra de SDS-PAGE, y se determinó el contenido de proteína en cada muestra a través del ensayo de proteína de unión de colorante Bio-Rad. Las células fueron resueltas a través de SDS-PAGE utilizando un gel al 4-12%, y las proteínas se transfirieron electroforéticamente a una membrana de PVDF para tinción Western. La membrana se tino durante 1 hora a 25°C con leche seca sin grasa al 5% en PBS-T y después se incubó con un anticuerpo monoclonal de anti-PAl-1 de ratón en PBS-T durante la noche a 4°C. La membrana se lavó con PBS-T y se incubó con un anticuerpo de antiratón marcado con peroxidasa de rábano durante 1 hora a 25°C. La membrana después se incubó con un reactivo de detección (SuperSignal WestPico). Las bandas específicas fueron visualizadas exponiendo el papel a películas Kodak BioMax. La Figura 6 muestra los resultados de la tinción Western utilizando un anticuerpo anti-PAI-1. En estos estudios se pueden observar dos observaciones: (1) el 100% de inhibición de crecimiento nunca se logró a una concentración de 1 µM de cualquier compuesto de prueba. Los estudios de microscopio con focales confirman que, aunque estos fármacos son potentes para inducir la translocación de VDR del citoplasma al núcleo, no todas las células responden a VDRAs aún después de una exposición de 2 horas, lo cual puede explicar la inhibición de <100%. (2) Aunque se sabe que el paricalcitol es menos potente que el calcitriol en estudios clínicos, este exhibe una potencia similar a calcltriol en este ensayo. Al verificar e efecto de fármacos en la expresión de 24(OH)ase, se encontró que paricalcitol es menos potente que el calcitriol al estimular la expresión de 24(OH)ase, lo cual parcialmente puede explicar la potencia superior del paricalcitol en este ensayo. Estos resultados muestran que el paricalcitol y calcitriol son igualmente potentes para reducir el nivel de PAI en células de músculo liso de arteria coronaria humana. El paricalcitol usualmente se dosifica aproximadamente 4 veces más que el calcitriol en la situación clínica, lo cual se puede traducir a una potencia de 4 veces más para regular la función de las células de músculo liso.

Ejemplo 4 Efecto de Paricalcitol en Modelos In vitro Utilizando Células de Músculo Liso del Miocardio o Vasculares, en Cultivo La deficiencia de vitamina D experimentalmente inducida se asoció con hipertrofia cardiaca e hipertensión en ratas Sprague-Dawley adultas de otra manera normales (Weishaar et al., Am, J. Phvsiol. 1990 Jan; 258 (1 Pt 1):E134-42). La hipertrofia cardiaca también se puede ver en el ratón VDR -/- (Li et al., J. Clin. Invest. 2002 Jul; 110 (2):229-38), aunque esto ocurre en la determinación de una elevación de 10-15 mm Hg en la presión sanguínea sistólica implicando que la hipertrofia puede, por lo menos en parte reflejar una sobrecarga ventricular incrementada. La vitamina D ha mostrado inhibir hipertrofia inducida por endotelina (ET) de miocitos cardiacos de rata neonatal en cultivo (Wu et al., J. Clin. Invest. 1996 Apr 1; 97(7):1577-88 y Li et al., J. Biol. Chem. 1994 Feb 18; 269(7):4934-9). Esto se asocial con una reducción en la expresión de ANP, BNP y genes de actina esqueléticos a y supresión de los promotores de gen ANP y BNP humanos (Wu et al., Am. J. Phvsiol. 1995 Jun; 268 (6 Pt 1 ):E1108-13. En este estudio, se hizo un examen de si el paricalcitol posee efectos similares (contra la hormona nativa) en varios modelos in vitro utilizando células de músculo liso de miocardio o vasculares, en cultivo.

Efecto de VDRA/análogos de vitamina D sobre la actividad del promotor del gen NPR-A. Se transfectaron células RASM neonatales con 1575 NPR-A LUC (0.5 µg) a través de electroporación. Las células fueron co-transfectadas con un reporte de luciferasa CMV-Renilla constitutivamente activo (0.25 µg) para controlar las diferencias en la eficiencia de transfección. Después de 24 horas de transfección, las células fueron tratadas con análogos de vitamina D, o con vehículo, según se indica. La incubación se continuo durante 48 horas en ese punto las células se cosecharon, los lisatos fueron generados y se hicieron mediciones de luciferasa (luciérnaga y Renilla).

Efecto de VDRA/análoaos de vitamina D en la actividad de NPR-A Se pre-incubaron células durante 48 horas en 1,25 dihidroxivitamina D (VD), paricalcitol, HECTEROL® (calcitriol) o la forma activada del HECTEROL (calcitriol). En ese punto, el medio se cambio, el inhibidor de fosfodiesterasa no selectivo IBMX (10"4 M) fue agregado, y la incubación se continuó durante 10 minutos a 37°C. Después se agregó ANP (10"7 M) a cada cultivo y la incubación se extendió durante 10 minutos más. Después, el medio fue aspirado, las células se alisaron con TCA y extractos solubles sometidos a extracción con éter, neutralización y radioinmunoensayo para los niveles de cGMP. Todos los niveles de cGMP presentados aquí son normalizados por µg de proteina soluble presente en el extracto. Los resultados se muestran en las Figuras 7, 8 y 9.

Efecto de análogos de vitamina D en la actividad del promotor del gen hBNP. Se transfectaron miocitos ventriculares de rata neonatal con -1595 hBNP LUC (0.25 µg) a través de electroporación como se describió previamente. Se utilizó CMV-Renilla luciferasa (0.25 µg) co-transfectada para normalizar las muestras para diferencias en eficiencia de transfección, como se describe anteriormente. En los casos seleccionados, los vectores de expresión tanto para el receptor de vitamina D humano (hVDR) (0.3 µg) y receptor retinoide X humano (hRXR) (0.3 µg) fueron co-transfectados con el reporte de BNP-luclferasa. Cuando las muestras fueron idénticas, éstas se trataron con endotelina (10~7 M) o uno de los análogos de vitamina D. Los resultados se muestran en las Figuras 10 y 11.

Medición de la actividad de Cdk2. Se trataron células con el vehículo o los análogos de vitamina D en los intervalos indicados. Las células fueron Usadas con regulador de pH de lisis y se incubaron 100 µg de proteína sobrenadante con 1 µg de anticuerpo anti-Cdk2 y 10 µl de proteína G-Sepharose durante 1-2 horas a 4°C. Se realizaron ensayos de cinasa de complejo inmune como se describió previamente utilizando los inmunoprecipitados generados anteriormente junto con 2 µg de histona 1 y ?"32P-ATP en regulador de pH de cinasa. Los productos de reacción se separaron en geles de desnaturalización de SDS-poliacrilamida que después se secaron y se expusieron a una película de rayos X. Los resultados se muestran en la Figura 12. Este estudio indica que VDRAs poseen actividad funcional en el sistema cardiovascular que es similar, tanto cualitativa como cuantitativamente, a aquella previamente demostrada para a hormona nativa, 1,25 dihidroxivitamina D. específicamente, los hallazgos principales de este estudio indican que VDRAs: 1) incrementa la actividad del receptor de péptido natriurético de tipo A (NPR-A) en células de músculo liso aórticas de rata neonatal, 2) incrementa la actividad promotora del gen NPR-A gene en las mismas células a través de un elemento de respuesta de vitamina D, 3) suprime la estimulación dependiente de ET del promotor de gen BNP en miocitos ventriculares de rata neonatal cultivados, 4) inhiben la estimulación dependiente de endotelina de la incorporación de 3H-timid¡na en el ADN y la actividad de Cdk2 en células de músculo liso aórticas de rata adulta. Colectivamente, estos datos sugieren que paricalcitol, así como 1,25 dihidroxivitamina D, puede poseer efectos cardio-protectores que controlan la hipertrofia de miocitos cardíacos en la pared del miocardio y efectos vásculo-protectores que tanto limitan la proliferación de células en ia pared vascular de remodelación como incrementan la expresión/actividad del sistema de péptido/NPR anti-proliferativo, vasorelajante-natriurético en la vasculatura.

Ejemplo 5 Cambios de Acceso Vascular en Sujetos Tratados con Zemplar Métodos: Un grupo histórico de 2112 pacientes adultos nuevos para HD, con una fístula de AV como el acceso vascular primario inicial, fueron seguidos durante un período de 35 meses (Enero 1999 a Noviembre 2001) utilizando una base de datos de proveedor de diálisis. Los pacientes fueron tratados con Zemplar o con una terapia sin vitamina D; los pacientes que recibieron terapia de Zemplar recibieron por lo menos 10 dosis y permanecieron en la misma terapia. Se utilizaron estadísticas de resumen descriptivas para resumir las características de línea de base y el número total de cambios de acceso vascular por año entre modalidades de tratamiento. Además, se utilizaron modelos de regresión para evaluar la asociación entre la terapia con Zemplar y sin vitamina D, y el número total de cambios de acceso vascular por año. Resultados: Los datos establecidos contuvieron 577 pacientes tratados con Zemplar y 1535 pacientes quienes no recibieron ninguna terapia de vitamina D. El número total de cambios de acceso vascular promedio 0.6 cambios por año en pacientes con el tratamiento de Zemplar y 0.9 cambios por año en los pacientes que no tomaron tratamiento de vitamina D (p = 0.0034). Se realizó una regresión binominal negativa para controlar las co-variantes de línea de base; esto reveló que el grupo sin vitamina D estuvo asociado con un 28% mas de cambios de acceso vascular que los pacientes tratados con la terapia de Zemplar (p = 0.038).

Ejemplo 6 Efectos de Deficiencia 1a.25-(OH)7Da Genética en Presión Sanguínea y Fenotipo Cardiovascular en Ratones Atacados CYP27B1 M-a-Hidroxilasa) Se ha demostrado que 1a, 25-(OH)2D3 (calcitriol) es un regulador negativo del sistema de renina-angiotensina. De esta manera, se creía que tal vez los ratones que carecen de CYP27B1 (1-alfa-hidroxilasa), una enzima clave en la síntesis de la forma activa de vitamina D3 (1a, 25-(OH)2D3), podría presentar una presión sanguínea incrementada con relación a carnadas de tipo silvestre (WT). Se instrumentaron ratones atacados (KO) y WT con transmisores de telemetría; continuamente se registraron la presión sanguínea de línea de base y el ritmo cardiaco y se reportaron como una media de 24 horas durante 7 días. En un subgrupo de animales (n = 4/grupo), se aislaron el corazón y los ríñones para cuantificación de ARNm para el receptor de vitamina D (VDR), 25-hidroxivitamina D-24-hidroxilasa (CYP24A1), renina, y precursor de péptido natriurético A (NPPA) a través de RT-PCR de tiempo real. A través de los 7 de registros de telemetría, la presión arterial media (MAP) se elevó significativamente en ratones KO (grupo de 24 horas significa de entre 112 + 2 y 116 + 4 mmHg; n=7) con relación a camadas WT (entre 106 +.2 y 108 ± 2 mmHg; n = 10). Además, los ratones KO presentaron taquicardia a través del mismo período (grupo de 24 horas significa de entre 601 +_ 6 y 610 + 7 latidos/minutos) con relación a ios controles WT (de entre 544 ± 6 y 566 +.4 latidos/minuto). Las relaciones de peso de corazón a cuerpo y de peso LV a cuerpo también tendieron a elevarse para ratones KO contra los ratones WT reflejando una carga incrementada en el músculo cardiaco. De acuerdo con el incremento en la presión sanguínea en ratones KO, la expresión de ARNm de renina renal se incrementó (n=4) con relación a las camadas WT mientras que la expresión de ARNm de VDR se redujo. NPPA modestamente se elevó en los corazones de los animales KO probablemente reflejando un efecto de compensación en respuesta a la hipertensión e hipertrofia.

Los resultados anteriores demuestran que la interrupción del producto de gen CYP27B1 efectivamente conduciendo a una deficiencia de 1 a,25-(OH)2D3, produce una elevación sostenida en la presión sanguínea y el ritmo cardiaco con relación a animales llenos de 1-alfa-hidrox¡lasa. Estos resultados también sugieren que los incrementos en MAP pueden ser mediados a través de la des-regulación del sistema de renina-angiotensina.

Ejemplo 7 Efectos Diferenciales de Análogos de Vitamina D sobre Calcificación Vascular en Ratas Urémicas Comúnmente se utilizaron activadores de receptor de vitamina D (VDRAs) para manejar hiperparatiroidismo secundario asociado con enfermedad crónica de riñones (CKD). Datos clínicos recientes muestran que VDRAs proporciona un beneficio de supervivencia para CKD en etapa 5. En pacientes con CKD, la calcificación vascular por lo regular está enlazada a una prognosis no favorable. En este estudio, el contenido de calcio y de fósforo en una aorta aislada de ratas urémicas, fue medido. También se examinó el consume de 45Ca en anillos de aorta cultivados. Las 5/6 nefrectomizadas se obtuvieron de los laboratorios Charles River Labs. (Wilmington, MA). Dos semanas después de la nefrectomia, las ratas se pusieron a dieta conteniendo 0.9% del fósforo y 0.6% de calcio durante 4 semanas, seguido por un tratamiento con vehículo (5% de etanoi + 95% de glicol propilénlco, 0.4 ml/kg), paricalcitol o doxercalciferol a 0.67 µg/kg, i.p., 3 veces/semana, durante 2 semanas. Después de veinticuatro horas de la última dosificación, se tomaron muestras de sangre a través de la vena de la cola bajo anestesia con cetamina (50 mg/kg) y la aorta se recogió para estudios de calcificación. La combinación de 5/6 nefrectomia y una dieta con alto contenido de fósforo dio como resultado hipocalcemia (calcio en el suero: 1.06 contra 1.28 mmol/L en animales naturales), hiperfosfatemia (11.6 contra 7.5 mg/dL) y una elevación de PTH en el suero (17.3 veces), creatinina (2.9 veces) y BUN (3.8 veces). Después de que se removieron las aortas en una forma estéril de las ratas, se removió cuidadosamente la adventicia y cada ahora se lavó tres veces con el medio. Un segmento de cada aorta fue procesado para determinación de calcio y fósforo. Una porción separada de cada aorta se pelo, se cortó en anillos de 2-3-mm y se colocó en DMEM conteniendo 0.2 µCi/ml 45Ca durante 3 días a 37°C. Después, los anillos aórticos se lavaron, se secaron, se pesaron y después se disolvieron para determinar radioactividad. Los resultados muestran que: (1) existe una correlación lineal entre ei contenido de calcio y fósforo y el consume de 45Ca en la aorta, (2) existe un incremento modesto (1.6 veces) en el contenido de Ca, pero ninguna diferencia importante en el consumo de 45Ca o contenido de fósforo en el grupo tratado con paricalcitol cuando se comparó con el vehículo, y (3) el consumo de 45Ca fue 40 veces mayor, el contenido de Ca 10 veces mayor y el contenido de fósforo 17 veces mayor en el grupo tratado con doxercalciferol cuando se comparó con el grupo de vehículo. Tanto el paricalcitol y doxercalciferol a 0.67 µg/kg elevó iCa (-25%) y suprimió PTH (>90%). Estos resultados sugieren que doxercalciferol y paricalcitol exhiben diferentes efectos en la calcificación de aorta en ratas urémicas.

Ejemplo 8 Efecto de Análogos de Vitamina D en la Calcificación en Células de Músculo Liso Vasculares Humanas Pacientes con enfermedad crónica de riñon (CKD) experimentan una alta tasa de mortalidad de las enfermedades cardiovasculares. Comúnmente se utilizaron activadores del receptor de vitamina D (VDRAs) tales como paricalcitol, doxercalciferol y calcitriol para manejar hiperparatiroidismo secundario asociado con CKD. Datos clínicos recientes muestran que VDRAs proporciona un beneficio de supervivencia para pacientes con CKD en Etapa 5. En pacientes con CKD, la calcificación vascular por lo regular está unida a una prognosis no .favorable. Estudios previos han mostrado que 1,25(OH)2D3 (calcitriol) 10"7 a 10"9 M indujo un incremento dependiente de dosis en la calcificación de células de músculo liso vasculares de bovino (SMC) in vitro (Joño et al, 2000). En este estudio, se examinó el efecto de análogos de vitamina D sobre el consumo de 45Ca en un cultivo primario de células de músculo liso de arteria coronaria humanas (CASMC). Se desarrollaron CASMC humanas cultivadas primarias a una confluencia de >80% y se utilizaron dentro de cinco pasajes. Las células se trataron con fármacos durante 5 días en el medio apropiado, y después se cambiaron de regreso al medio base (N1: DMEM conteniendo 1.8 mM Ca+2 y 0.9 mM PO-4) conteniendo 0.2 µCi/ml 45Ca durante 24 horas. Después, las células se lavaron con PBS tres veces y se midió la radioactividad a través de cintilación de líquido. Las células cultivadas en el medio N1 exhibieron una absorción mínima de 45Ca (98 ± 14, n=5). Las células tratadas con un medio de inducción (P1-alto contenido de fósforo: DMEM conteniendo 1.8 mM Ca+2, 3.8 mM PO-4 y 7.5 U/ml de fosfatasa alcalina) exhibieron un incremento dramático en la absorción de 45Ca. El efecto del medio de inducción fue dependiente de dosis; una mezcla de 90% N1/10% P1 o 60% N1/40% P1 incrementó la absorción de 45Ca en 7.4 y 34.4 veces, respectivamente. El paricalcitol a 100 nM no mostró un efecto importante sobre la absorción de 45Ca en células tratadas con el medio N1 o diferentes dosis del medio P1 (20-60%). Como un control, paricalcitol estimuló CYP24A1 y suprimió la expresión de ARNm de PA1-1 en una forma dependiente de dosis. Cuando las células están en los medios N1 o 60% N1/40% P1, se trataron con concentraciones elevadas de paricalcitol, calcitriol o doxercalciferol activado (1-100 nM), sin observarse efectos importantes en la absorción de 45Ca a partir de los fármacos. Estos resultados sugieren que CASMC humanas cultivadas en medio conteniendo un alto contenido de fósforo más fosfatasa alcalina, exhiben una absorción incrementada de calcio, y los análogos de vitamina D no tienen ningún efecto importante.

Ejemplo 9 Efectos Diferenciales de Paricalcitol y Doxercalciferol en PTH en Suero y Calcio Ionizado en Ratas Urémica con Hiperparatiroidismo Secundario Establecido Es clínicamente importante suprimir los niveles elevados de PTH en el suero en pacientes con ESRD con hiperparatiroidismo secundario establecido (SHPT) independiente de hipercalcemia.

Además, el modelo de 5/6 ratas urémicas ha pronosticado efectivamente el perfil clínico de análogos de vitamina D con respecto a PTH e hipercalcemia. De esta manera, se condujo una comparación directa de paricalcitol (PARÍ) y doxercalciferol (DOX) en ratas macho Sprague Dawley sometidas a 5/6 nefrectomias (ablación quirúrgica) colocadas a una dieta de alto contenido de fósforo durante 4 semanas (0.9% fos., 0.6% Ca) para establecer SHPT. En el Día 0, las ratas recibieron vehículo (VEH; 5% de etanol, 95% de glicol propilénico; 0.4 ml/kg; IP) o fármaco (0.083, 0.17, 0.33, 0.66 mcg/kg; n = 7-10/grupo) 3 veces/semana durante 12 días. Se tomaron muestras de sangre 24 horas después de la dosis (Día 13). Valores del Día 0 (media±SEM) para: creatinina (VEH contra falso) fueron de 1.02±0.05 vs 0.48 + 0.01 mg/dL; PTH, 1320 + 185 vs 178±11pg/ml; calcio ionizado en sangre (iCa; 1.26 + 0.01 vs 1.30 + 0.01 mmol/L); fósforo (8.70 ± 0.34 vs 7.36±0.09 mg/dL). En VEH, la relación de valores de iCa del Día 13/Día 0 declinaron a 0.93 + 0.02 vs 1.02 + 0.01 para falso; PTH y el fósforo tienden a incrementarse. En contraste, la dosis dependiente DOX se incrementó en relaciones de Ca + + Día 13/Día 0 a 1.09 + 0.03* y 1.17±0.04* a 0.33 y 0.66 mcg/kg dosis. PARÍ no tubo ningún efecto sobre iCa a 0.33 mcg/kg, mientras que la relación de ¡Ca se incrementó modestamente a 1.05 + 0.02*# a 0.66 mcg/kg, menos que aquella de DOX. Las relaciones de PTH Día 13/Día 0 para DOX cayeron a 0.43±0.12, 0.26 + 0.06*, y 0.22 + 0.11* en respuesta a 0.18, 0.33, 0.66 mcg/kg, respectivamente, mientras PARÍ incremento las relaciones de PTH a 0.37±0.07*, 0.33 + 0.06*. 0.13 + 0.02*. El nivel de fósforo en el suero no se afecto en ningún grupo de tratamiento. DOX produjo un incremento dependiente de dosis en el transporte de calcio activo en el duodeno ex vivo; PARÍ no tuvo ningún efecto. De esta manera, en la rata urémica con SHPT, establecido, DOX suprimió ios niveles de PTH en suero de acuerdo con evaluaciones dependientes de dosis en calcio ionizado mayores que aquellos causados por dosis iguales de PARÍ. Estas dosis, PARÍ efectivamente reduce PTH sin producir cambios dependientes de dosis en el calcio en sangre ionizado. *=p<0.05 vs. VEH ANOVA; # p<0.05 prueba t impar DOX vs PARÍ.

Ejemplo 10 Inhibición de Biosíntesis de Renina a Través del Análogo de Vitamina D Paricalcitol El sistema de renina-angiotensina (RAS) juega un papel esencial en la regulación de electrolito y homeostasis de volumen. La sobre-activación de RAS está asociada con alta presión sanguínea y otras enfermedades cardiovasculares y renales tales como hipertrofia cardiaca y nefropatía diabética. La renina es la primera enzima de velocidad limitante de la cascada de renina-angiotensina y de esta manera representa un objetivo terapéutico importante; sin embargo, los inhibidores de renina actualmente no están disponibles. Se ha mostrado que 1 ,25-dihidroxivitamina D3 [1 ,25(OH)2D3], la forma hormonal de vitamina D, es un supresor endocrino de la biosíntesis de renina, que proporciona una base molecular para explorar el potencial de análogos de vitamina D como inhibidores de renina para controlar RAS.

En el presente estudio, se hizo una investigación de la actividad in vitro e in vivo de paricalcitol, un análogo de vitamina D calcémico inferior aprobado por la FDA, para inhibir la biosíntesis de renina. Hasta este punto, se trataron células As4.1-hVDR, una línea de célula de tipo de célula JG establemente transfectada con VDR humano, con paricalcitol o 1,25(OH)2D3 a dosis que varían de 10"10 a 10~7 M durante 24 horas, y se determinó su actividad inhibidora de renina a través de análisis de tinción Northern; las células también se transfectaron con un plásmido de reporte de promotor de gen de renina-luciferasa, y la actividad de luciferasa se determinó en presencia y ausencia de paricalcitol o 1,25(OH)2D3. Estos estudios in vitro demuestran que paricalcitol suprime la expresión ARNm de renina y la transcripción del gen renina en una forma dependiente de dosis, con una potencia comparable a aquella de 1,25(OH)2D3. Para determinar la actividad in vivo de este compuesto, se trataron ratones macho CD-1 (n = 7) con paricalcitol a través de inyección intraperitoneal y a las dosis de 1.5 y 3.0 µg/kg del peso del cuerpo, 3 veces a la semana durante 3 semanas, y los cambios en el peso del cuerpo, calcio ionizado en sangre, ARNm de renina renal y actividad de renina en plasma (PRA) se analizaron al final del tratamiento. Estos datos mostraron que paricaicitol a estas dos dosis no tuvo ningún efecto sobre el peso del cuerpo y solamente incremento ligeramente los niveles de calcio ionizado en sangre; sin embargo, el paricalcitol a estas dos dosis significativamente redujo los niveles tanto de ARNm de renina renal (de 23% a 45%) como PRA (de 20% a 70%) en los ratones tratados. Estos datos establecen, en principio, que el paricalcitol en realidad puede inhibir la biosíntesis de renina y sugieren que el paricalcitol potencialmente puede ser utilizado para controlar la producción de renina.

Ejemplo 11 Efecto de Paricalcitol sobre la expresión de ARNm de Renina en Ratas Deficientes de Vitamina D Los pacientes con enfermedad crónica de riñon (CKD) encuentran un riesgo mucho mayor de enfermedad cardiovascular que el público en general. Varios activadores de receptor de vitamina D, incluyendo paricalcitol, están actualmente disponibles para el tratamiento de hiperparatiroidismo secundario a CKD. Datos clínicos recientes demuestran que paricalcitol proporciona un beneficio de supervivencia para pacientes con CKD. Previamente, se ha mostrado que los activadores de receptor de vitamina D suprimen la expresión de renina en células AS4.1. Para investigar si el paricalcitol, a dosis no calcémicas, puede regular renina in vivo, se examinó la expresión de ARNm de renina en el riñon de ratas deficientes de vitamina D tratadas con paricalcitol. Se alimentaron ratas macho Sprague-Dawley alojadas en un ambiente libre de luz ultravioleta, con una dieta de 0.4% de Ca, 0.3% de P, deficiente de vitamina D, durante 5 días, después se cambio a una dieta de 0.02% de Ca, 0.5% de P, deficiente de vitamina D durante 21 días. Las ratas fueron dosificadas con 0.003, 0.01, 0.03, y 0.3 µg/kg de paricalcitol, i.p., tres veces a la semana durante 2 semanas. A un grupo de control de animales se le proporcionó solamente vehículo (5% etanol / 95% glicol propilénico), y los animales sin tratamiento, de edad coincidente en una dieta normal (0.5% de Ca, 0.4% de P) sirvieron como normales por control. Después de veinticuatro horas de la última dosis, las ratas fueron anestesiadas con cetamina (100 mg/kg), se les realizó un sangrado cardiaco, se sacrificaron a través de CO2, los tejidos se recogieron para extracción de ARN, y análisis de RT-PCR en tiempo real, y se tomó suero para la determinación de contenido de calcio, fósforo y PTH. El tratamiento con la dieta dio como resultado hlpocalcemla (calcio ionizado 0.70 ± 0.02 vs. 1.34 ± 0.01 mmol/L en control normal), PTH elevado en suero (29 veces) y fósforo (9.3 ± 0.3 vs. 8.1 ± 0.2 mg/dl), y un incremento en el ARNm de renina renal (+20%). El paricalcitol a dosis probadas no dio como resultado un cambio importante en el calcio, pero redujo el PTH en el suero dependientemente de dosis. El tratamiento con paricalcitol normaliza la expresión de ARNm de renina renal a niveles encontrados en animales con suficiente vitamina D normales. Los datos anteriores muestran que, en ratas deficientes de vitamina D con PTH elevado e hipocalcemia, paricalcitol a dosis que no afectan el nivel de calcio en suero, significativamente suprimir la expresión de ARNm de renina renal. El efecto de paricalcitol en la supresión de expresión de renina puede ser un factor que contribuye a mortalidad y riesgo de morbidez reducida en pacientes con CKD tratados con paricalcltol.

Claims (29)

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica de liberación sostenida para prevenir, tratar y retrasar la progresión de enfermedades cardiovasculares, cerebrovasculares y vasculares periféricas, especialmente falla cardiaca, cardiomiopatía, ateroesclerosis, infarto a miocardio y accidente cerebrovascular, que comprende: una cantidad terapéuticamente efectiva de un VDRA o análogo de vitamina D; y opcionalmente una cantidad terapéuticamente efectiva de por lo menos un miembro del grupo que consiste de un inhibidor de enzima de conversión de angiotensina, un bloqueador de receptor (I) de angiotensina (II), y un bloqueador de aldosterona.

2. Una composición farmacéutica de liberación sostenida de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho VDRA o análogo de vitamina D se selecciona del grupo que consiste de paricalcitol, calcitriol y doxercalciferol.

3. Una composición farmacéutica de liberación sostenida de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicha composición está en la forma de un parche transdérmico.

4. Una composición farmacéutica de liberación sostenida de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicha composición está en la forma de dosis oral.

5. Una composición farmacéutica de liberación sostenida de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicha composición está en la forma de dosis subcutánea.

6. Una composición farmacéutica de liberación sostenida de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicha composición está en una forma de dosis inyectable.

7. Una composición farmacéutica de liberación sostenida de acuerdo con la reivindicación 6, en donde dicha forma de dosis inyectable es un miembro del grupo que consiste de una forma de dosis subcutánea y una forma de dosis de depósito.

8. Una composición farmacéutica de liberación sostenida de acuerdo con la reivindicación 5, en donde en donde dicha composición está en la forma de implante.

9. Una composición farmacéutica para el tratamiento, prevención o retraso de la progresión de una enfermedad cardiovascular en un mamífero, que comprende: una cantidad terapéuticamente efectiva de un activador de receptor de vitamina D o un análogo de vitamina D; y opcionalmente una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un miembro del grupo que consiste de un inhibidor de enzima de conversión de angiotensina, un bloqueador (I) del receptor de angiotensina (II), y un bloqueador de aldosterona.

10. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9, en donde dicha enfermedad cardiovascular se selecciona del grupo que consiste de falla cardiaca, cardiomiopatía, ateroesclerosis, infarto al miocardio, accidente cerebrovascular y enfermedad vascular periférica.

11. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9, en donde dicho activador de receptor de vitamina D o análogo de vitamina D se selecciona del grupo que consiste de paricalcitol, calcitriol y doxercalciferol.

12. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9, en donde dicha composición está en la forma de un parche transdérmico.

13. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9, en donde dicha composición está en forma de dosis oral.

14. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9, en donde dicha composición está en una forma de dosis subcutánea.

15. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9, en donde dicha composición está en una forma de dosis inyectable.

16. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15, en donde la forma de dosis inyectable es un miembro seleccionado del grupo que consiste de una forma de dosis subcutánea y una forma de dosis de depósito.

17. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 14, en donde en donde dicha composición está en una forma de implante.

18. Un método para prevenir, tratar y retrasar la progresión de una enfermedad vascular en un mamífero, que comprende el paso de administrar a dicho mamífero una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 9.

19. El método de acuerdo con la reivindicación 18, en donde el paso de administrar es continuo.

20. El método de acuerdo con la reivindicación 18, en donde el paso de administrar se realiza utilizando un parche transdérmico.

21. El método de acuerdo con la reivindicación 18, en donde el paso de administrar se realiza utilizando una forma de dosis oral.

22. El método de acuerdo con la reivindicación 18, en donde el paso de administrar se realiza utilizando una forma de dosis inyectable.

23. El método de acuerdo con la reivindicación 18, en donde el paso de administrar se realiza utilizando una forma de dosis subcutánea.

24. Un método para tratar, inhibir o prevenir una enfermedad vascular en un mamífero reduciendo la expresión de PAI-1 en dicho mamífero, que comprende el paso de administrar a dicho mamífero una cantidad efectiva de un activador de receptor de vitamina D o análogo de vitamina D.

25. El método de acuerdo con la reivindicación 24, en donde el activador de receptor de vitamina D es paricalcitol o calcitriol.

26. El método de acuerdo con la reivindicación 24, en donde el análogo de vitamina D es doxercalciferol o alfacalcidol.

27. Un método para tratar, inhibir o prevenir trombosis en un mamífero con la necesidad de dicho tratamiento, inhibición o prevención, que comprende el paso de administrar a dicho mamífero una cantidad efectiva de un activador de receptor de vitamina D o una análogo de vitamina D.

28. El método de acuerdo con la reivindicación 27, en donde el activador de receptor de vitamina D es paricalcitol o calcitriol.

29. El método de acuerdo con la reivindicación 27, en donde dicho análogo de vitamina D es doxercalciferol o alfacalcidol.