MD963Z - Metodă de determinare a gradului de intoxicaţie endogenă la copiii cu amigdalită cronică - Google Patents
Metodă de determinare a gradului de intoxicaţie endogenă la copiii cu amigdalită cronică Download PDFInfo
- Publication number
- MD963Z MD963Z MDS20150021A MDS20150021A MD963Z MD 963 Z MD963 Z MD 963Z MD S20150021 A MDS20150021 A MD S20150021A MD S20150021 A MDS20150021 A MD S20150021A MD 963 Z MD963 Z MD 963Z
- Authority
- MD
- Moldova
- Prior art keywords
- cic
- peg
- concentration
- children
- content
- Prior art date
Links
- 206010044008 tonsillitis Diseases 0.000 title claims abstract description 47
- 206010009152 Chronic tonsillitis Diseases 0.000 title claims abstract description 43
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 title claims abstract description 31
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 title claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims abstract description 92
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 92
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 34
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 abstract description 9
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 19
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 14
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 14
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 13
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 10
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 2
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- XDVOLDOITVSJGL-UHFFFAOYSA-N 3,7-dihydroxy-2,4,6,8,9-pentaoxa-1,3,5,7-tetraborabicyclo[3.3.1]nonane Chemical compound O1B(O)OB2OB(O)OB1O2 XDVOLDOITVSJGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003267 Arthritis reactive Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 208000002574 reactive arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la medicină, şi anume la imunologie şi poate fi utilizată pentru determinarea gradului de intoxicaţie endogenă la copiii cu amigdalită cronică.Conform invenţiei, metoda constă în aceea că se colectează sânge, se separă serul sangvin şi se introduc câte 50 µl de ser în trei eprubete, la care se adaugă câte 100 µl de soluţie tampon boric şi soluţie de polietilenglicol (PEG) de 2,5%, 4,2% şi 8,0%, iar în a patra eprubetă de control se introduc 50 µl de ser şi 100 µl de soluţie tampon boric, apoi eprubetele se incubează pentru 15 min la temperatura camerei, după care se determină densitatea optică la lungimea de undă de 340 nm, iar concentraţia complexelor imune circulante (CIC) în fiecare eprubetă se determină conform formulei:CIC = (DOEDS-DOEDC)× 1000,unde:DOEDS - densitatea optică în eprubeta de studiu, în UC;DOEDC - densitatea optică în eprubeta de control, în UC,în cazul în care în eprubeta cu concentraţia PEG 2,5% CIC este mai mare de 10 UC, cu concentraţia PEG 4,2% CIC este mai mare de 40 UC şi cu concentraţia PEG 8,0% CIC este mai mare de 240 UC se diagnostichează un grad înalt de intoxicaţie endogenă, în cazul în care în eprubeta cu concentraţia PEG 2,5% CIC este mai mic de 10 UC, cu concentraţia PEG 4,2% CIC este mai mic de 40 UC şi cu concentraţia PEG 8,0% CIC este mai mic de 240 UC - un grad mediu de intoxicaţie endogenă, iar în cazul în care în eprubeta cu concentraţia PEG 2,5% CIC este mai mare de 10 UC, cu concentraţia PEG 4,2%, CIC este mai mic de 40 UC şi cu concentraţia PEG 8,0% CIC este mai mic de 240 UC - un grad minim de intoxicaţie endogenă.
Description
Invenţia se referă la medicină, şi anume la imunologie şi poate fi utilizată pentru determinarea gradului de intoxicaţie endogenă la copiii cu amigdalită cronică.
Este cunoscută o metodă de determinare a complexelor imune circulante (CIC) prin precipitarea lor din serul sangvin. Metoda este bazată pe precipitarea selectivă a complexelor antigen-anticorpi cu polietilenglicol (PEG) 3,75% cu determinarea spectrofotometrică consecutivă a precipitatului. Pentru realizarea reacţiei sunt preparate soluţia nr. 1 (0,1 M de tampon borat pH 8,4) şi soluţia nr. 2 (polietilenglicol în concentraţie de 3,75% în soluţia nr. 1). Într-o eprubetă se introduc 0,3 ml ser sangvin, se adaugă 0,6 ml de soluţie nr. 1 şi se amestecă minuţios, după care se transferă câte 0,3 ml soluţie în două eprubete. În una dintre acestea se adaugă 2,7 ml de soluţie nr. 1 (soluţia control), iar în cealaltă 2,7 ml soluţie nr. 2 (soluţia de cercetare). Conţinutul eprubetelor se amestecă minuţios şi se lasă pentru 60 min la temperatura camerei, după care se determină spectrofotometric densitatea optică a specimenelor la lungimea de undă de 450 nm, utilizând cuve cu dimensiunile de 1x1 cm. Se calculează diferenţa indicatorilor de densitate optică, rezultatul se multiplică cu 1000 şi se obţine cantitatea complexelor imune circulante în unităţi de densitate optică (UDO) [1].
Dezavantajul acestei metode constă în determinarea doar a CIC cu masă moleculară mică care sunt mai puţin toxice, ceea ce poate duce la interpretarea greşită a rezultatelor investigaţionale şi, drept urmare, la un diagnostic şi un tratament incorecte, totodată pentru investigare este necesar un volum mare de ser, acesta fiind important în investigarea copiilor.
În calitate de cea mai apropiată soluţie serveşte metoda de determinare a CIC de autorii Nemov V. şi Popcova M. Esenţa acestei metode constă în faptul că suplimentar în serul sangvin în urma centrifugării scurte se diminuează turbiditatea. Pentru determinarea creşterii turbidităţii specifice în prezenţa PEG cu concentraţia finală de 4% şi pentru determinarea CIC mari şi mici se utilizează spectrofotometrul cu microplanşetă în regim bifazic (biundă) de bază 340 nm şi filtrul de referinţă 620 nm. Pentru realizarea reacţiei se prepară:
- soluţia 1 - soluţie fiziologică tampon (pH 7,4); soluţia 2 - soluţie PEG de 8% (8,0 g PEG-6000 + 100,0 ml soluţie 1); soluţia 3 - soluţie PEG de 12% (12,0 g PEG-6000 + 100,0 ml soluţie 1);
- în godeurile unei plăci standard (cu 96 godeuri) pentru investigaţii imunologice se pipetează câte 100 µl soluţii de lucru: în toate godeurile stripului 1 - soluţia 1; în toate godeurile stripului 2 - soluţia 2; în toate godeurile stripului 3 - soluţia 3; la necesitate se completează şi celelalte stripuri, urmând aceeaşi consecutivitate a operaţiunii de pipetare;
- utilizând un dozator cu 8 canale, în fiecare strip (1, 2 şi 3 corespunzător) se pipetează câte 100 µl din serurile sangvine diluate în prealabil. Pipetarea se repetă de 3-4 ori, respectând direcţia: de la soluţia 1 spre soluţia 3 evitând formarea bulelor de aer. Imediat se fixează timpul de incubare, durata căruia trebuie să fie de 45 min, placa acoperindu-se şi expunându-se pe durata acestui interval de timp la temperatura de 18…25°С;
- se înregistrează datele cu ajutorul unui spectrofotometru (cu dispozitiv microplăci) măsurând densitatea optică în regimul a două lungimi de undă: de bază - 340 nm, filtru de referinţă - 620 nm.
În baza datelor obţinute se calculează nivelul CIC cu masă moleculară mare şi a celor cu masă moleculară mică conform formulei:
Mari [CIC]=(DO medie Sol. 2 - DO medie Sol.1)×1000;
Mici [CIC]=(DO medie Sol. 3 - ОП medie Sol. 1)×1000,
Unde DO medie - valoarea aritmetică medie a densităţii optice a probei [2].
Dezavantajul acestei metode constă în determinarea doar a CIC mari şi mici, pe lângă aceasta valorile absolute şi medii ale datelor obţinute sunt utilizate fără a ţine cont de CIC cu greutate moleculară medie şi nu se face o corelaţie dintre cantitatea CIC şi gravitatea intoxicaţiei endogene, la fel pentru interpretarea corectă a rezultatelor investigaţiilor imune este necesar de apreciat normele fiziologice pentru CIC cu greutate moleculară mică, medie şi mare. Totodată, printre dezavantajele metodei menţionate este şi faptul că se dublează investigaţia, ceea ce duce la majorarea cheltuielilor de material supus testării (serul sangvin), precum şi de reactivi.
Problema pe care o rezolvă invenţia propusă constă în determinarea CIC cu greutatea moleculară mare, medie şi mică, pe baza cărora să se determine gravitatea intoxicaţiei endogene la copiii cu amigdalită cronică printr-o metodă simplă şi precisă în realizare.
Esenţa invenţiei constă în aceea că se colectează sânge, se separă serul sangvin şi se introduc câte 50 µl de ser în trei eprubete, la care se adaugă câte 100 µl de soluţie tampon boric şi soluţie de polietilenglicol (PEG) de 2,5%, 4,2% şi 8,0%, iar în a patra eprubetă de control se introduc 50 µl de ser şi 100 µl de soluţie tampon boric, apoi eprubetele se incubează pentru 15 min la temperatura camerei, după care se determină densitatea optică la lungimea de undă de 340 nm, iar concentraţia CIC în fiecare eprubetă se determină conform formulei:
CIC = (DOEDS-DOEDC) × 1000,
unde:
DOEDS - densitatea optică în eprubeta de studiu, în UC;
DOEDC - densitatea optică în eprubeta de control, în UC,
în cazul în care în eprubeta cu concentraţia PEG 2,5% CIC este mai mare de 10 UC, cu concentraţia PEG 4,2% CIC este mai mare de 40 UC şi cu concentraţia PEG 8,0% CIC este mai mare de 240 UC se diagnostichează un grad înalt de intoxicaţie endogenă, în cazul în care în eprubeta cu concentraţia PEG 2,5% CIC este mai mic de 10 UC, cu concentraţia PEG 4,2% CIC este mai mic de 40 UC şi cu concentraţia PEG 8,0% CIC este mai mic de 240 UC - un grad mediu de intoxicaţie endogenă, iar în cazul în care în eprubeta cu concentraţia PEG 2,5% CIC este mai mare de 10 UC, cu concentraţia PEG 4,2% CIC este mai mic de 40 UC şi cu concentraţia PEG 8,0% CIC este mai mic de 240 UC - un grad minim de intoxicaţie endogenă.
Rezultatul tehnic constă în determinarea complexelor imune circulante cu greutatea moleculară mare, medie şi mică, pe baza cărora se determină gravitatea intoxicaţiei endogene la copiii cu amigdalită cronică.
Metoda se realizează în felul următor.
Pregătirea soluţiei tampon boric 0,1M pH 8,4: pentru 250 ml se foloseste acid boric 0,8525 g şi Na tetraboric 1,07 g. Componentele se cântăresc, se adaugă în retorta chimică, se dizolvă în apă distilată, apoi se aduc la marcarea fixă.
Se prepară concentraţiile necesare ale PEG 2,5%, 4,2% şi 8,0%. Deoarece soluţia PEG pe tamponul borat nu este stabilă, acesta se pregăteşte ex tempore. Conform calculului, pentru o investigaţie cu concentraţia 2,5% PEG se dizolvă 5 mg în 200 µl tampon boric, pentru o investigaţie cu concentraţia 4,5% PEG se dizolvă 8,33 mg în 200 µl tampon boric, pentru o investigaţie cu concentraţia 8% PEG se dizolvă 16 mg în 200 µl tampon boric. Pentru determinarea finală a soluţiilor necesare se înmulţesc volumele estimate cu numărul de investigaţii.
Drept material pentru investigare servesc eşantioanele de ser sangvin uman obţinute prin metode standard din sângele venos sau capilar. În acest scop din venă (sânge venos) sau deget (sânge capilar) se prelevă 0,3 ml sânge şi se separă serul.
Eşantioanele de ser prelevate de la bolnavi se dizolvă în planşete cu fund rotund calculând 100 µl tampon boric şi 50 µl ser investigat, obţinându-se diluţia de 3 ori a serului dizolvat.
În godeurile stripului 1 se plasează specimenele de control, în godeurile stripului 2 specimenele de studiu cu PEG-2,5%, în godeurile stripului 3 specimenele de studiu cu PEG-4,2%, în godeurile stripului 4 specimenele de studiu cu PEG-8,0%(vezi tab. 1).
Tabelul 1
Schema plasării ingredientelor necesare în planşete cu fund plat
1 (control) 2 (PEG-2,5%) 3 (PEG-4,2%) 4 (PEG-8,0%) Bolnav A 200 µl TB 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 Bolnav B 200 µl TB 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 Bolnav C 200 µl TB 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3
Notă: TB - tampon boric; SD3 - serul în 3 diluţii
Se incubează 15 min la temperatura camerei.
Citirea rezultatelor.
Pe reader se citesc indicatorii din fiecare godeu, notificându-se în unităţi de densitate optică, şi se determină concentraţia CIC conform formulei:
Concentraţia CIC = (UDO (godeu de studiu) - UDO (godeu de control)) х 1000
Notă: UDO - unitate de densitate optică
Tabelul 2
Schema distribuţiei rezultatelor investigării concentraţiei CIC
1 (Control) 2 (PEG-2,5%) 3 (PEG-4,2%) 4 (PEG-8,0%) Rezultatul bolnavului A 0,060 0,070 0,100 0,300 Rezultatul bolnavului B 0,050 0,055 0,090 0,120 Rezultatul bolnavului C 0,040 0,090 0,140 0,560
Exemplu de calcul al concentraţiei CIC la bolnavul А:
CIC 2,5% = (0,070 - 0,060) х 1000 = 10 UC;
CIC 4,2% = (0,100 - 0,060) х 1000 = 40 UC;
CIC 8,0% = (0,300 - 0,060) х 1000 = 240 UC.
Notă: UC - unităţi convenţionale
Conform metodei revendicate mai sus, în vederea determinării gradului de intoxicaţie endogenă la copiii cu amigdalită cronică au fost investigate 198 de persoane de diferit gen şi vârstă:
Copii 1…5 ani - 31;
Copii 6…10 ani - 37;
Copii 11…14 ani - 21;
Copii 15…18 ani - 19;
Adulţi - 90.
La toate persoanele sănătoase s-a determinat concentraţia CIC cu masă moleculară mică, medie şi mare, de asemenea a fost realizată prelucrarea statistică a materialului obţinut pentru determinarea indicatorilor medii pentru fiecare fracţie CIC (tab. 3).
Tabelul 3
Rezultatele prelucrării statistice a materialului obţinut
Vârsta CIC cu PEG 2,5% CIC cu PEG 4,2% CIC cu PEG 8,0% CTT M δ M+2δ CT1 M δ M+2δ CT2 M δ M+2δ CT3 1…5 3,5 1,46 6,4 1,83 18,7 3,65 26,0 1,39 86 13,7 114 1,33 4,55 6…10 5,3 2,72 10,7 2,01 23,9 5,38 34,7 1,45 118 25,0 168 1,42 4,88 11…14 7,0 3,31 13,7 1,96 27,1 6,54 40,2 1,48 134 37,0 208 1,55 4,96 15…18 8,3 4,87 18,3 2,20 32,5 6,86 45,6 1,43 161 45,4 255 1,56 5,19 adulţi 10,9 6,61 24,2 2,70 29,2 13,4 55,9 1,91 282 101,3 485 1,72 6,33
Notă: CT1 - coeficientul de toxicitate pentru CIC cu PEG 2,5%; CT2 - coeficientul de toxicitate pentru CIC cu PEG 4,2%, CT3 - coeficientul de toxicitate pentru CIC cu PEG 8,0%, CTT - coeficientul total al toxicitгюii, М - media aritmetică a câtorva măsurări, δ - eroarea standard (eroarea pătratică medie) a unei singure măsurări, M+2δ - intervalul care include 95,5% din totatalitatea grupului de vвrstг.
De asemenea, pentru fiecare grupă de vârstă s-a determinat coeficientul de toxicitate (CT), care reprezintă o valoare relativă, pentru fiecare fracţie PEG, CT1 pentru 2,5%, CT2 pentru PEG 4,2% єi CT3 pentru PEG 8,0%, dar єi pentru fiecare grupг de vвrstг conform formulei:
CT = M+2δ (grupului de vârstă) / M (grupului de vвrstг), unde
M+2δ - intervalul care include 95,5% din totatalitatea grupului de vвrstг;
М - media aritmeticг a cвtorva mгsurгri.
De asemenea, pentru fiecare grup de vвrstг s-a determinat coeficientul total al toxicitгюii (CTT), care reprezintг suma celor 3 coeficienюi, obюinuюi la determinarea celor 3 fracюii CIC (CT1+CT2+CT3), expus оn tab. 3.
Avantajele invenţiei revendicate constau:
- în reducerea timpului de incubare la 15 min faţă de 45 min şi a volumului de ser pentru testare la 25 µl faţă de 100 µl în soluţia cea mai apropiată.
- la utilizarea metodei propuse, în cadrul căreia se utilizează trei concentraţii ale PEG (2,5%, 4,2% şi 8,0%), numărul total al indicatorilor cu valoare de diagnostic a crescut la 31,0% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, la 84,6% din copiii bolnavi de amigdalită cronică decompensată şi 100,0% din copiii cu patologii asociate (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă), fapt ce demonstează că utilizarea mai multor concentraţii optimizate ale PEG permite identificarea unui număr mai mare de indicatori cu valoare de diagnostic în stadiul precoce al bolii şi, respectiv, face posibilă iniţierea oportună a unui tratament adecvat. Important este faptul că utilizând metoda propusă este posibilă identificarea bolnavilor cu intoxicaţie endogenă foarte înaltă: 13,8% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, 46,2% din copiii bolnavi de amigdalită cronică decompensată şi 69,3% din copiii cu patologii asociate (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă), ceea ce nu a fost posibil la aplicarea soluţiei apropiate (tab. 4);
Tabelul 4
Eficacitatea comparativă a diferitor metode de determinare a intoxicaţiilor endogene la copiii cu
cu diferite forme ale amigdalitei cronice
Forma amigdalitei n CIC pozitiv pentru MM mare (abs/%) CIC pozitiv pentru MM medie (abs/%) CIC pozitiv pentru MM mică (abs/%) IE cu expresivitate foarte mare (abs/%) Total Soluţia apropiată ACC 29 3 / 10,3 3 / 10,3 ACD 39 4 / 10,3 4 / 10,3 ACD+PR 39 17 / 43,6 17 / 43,6 Cea mai apropiată soluţie ACC 29 3 / 10,3 4 / 13,8 5 / 17,2 ACD 39 4 / 10,3 22 / 56,4 23 / 58,9 ACD+PR 39 17 / 43,6 31 / 79,5 35 / 89,7 Metoda revendicată ACC 29 3 / 10,3 3 / 10,3 7 / 24,1 4 / 13,8 9 / 31,0 ACD 39 10 / 25,6 4 / 10,3 31 / 79,5 18 / 46,2 33 / 84,6 ACD+PR 39 13 / 33,3 17 / 43,6 39 / 100,0 27 / 69,3 39 / 100,0
Notă: ACC - amigdalită cronică compensată; ACD - amigdalită cronică decompensată; ACD+PR - amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă, IE - intoxicaţie endogenă, MM - masa moleculară.
Analiza comparativă a eficacităţii diferitor metode de determinare a intoxicaţiei endogene la copiii cu diferite forme de amigdalită cronică arată că aplicarea soluţiei apropiate [Гриневич Ю.А., Алферов А.Н. Определение иммунных комплексов в крови онкологических больных. // Лабораторное дело, 1981, №8, p. 493-496] a permis la utilizarea concentraţiei PEG 3,75% determinarea indicatorilor cu valoare de diagnostic la 10,3% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, la un număr identic de copii bolnavi de amigdalită cronică decompensată şi la 43,6% din copiii cu patologii asociate (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă).
La realizarea celei mai apropiate soluţii [Немов В. В., Попкова М. И. Способ определения циркулирующих иммунных комплексов - RU 2415430], în cadrul căreia se utilizează două concentraţii PEG (4,0% şi 6,0%) numărul bolnavilor, având rezultatele indicatorilor cu valoare de diagnostic la PEG 4,0%, a fost identic cu cel de la folosirea metodei 1, deoarece concentraţiile PEG 4,0% şi 3,75% sunt practic similare. Însă la utilizarea concentraţiei PEG 6,0%, a fost posibilă identificarea suplimentară a indicatorilor cu valoare de diagnostic la 13,8% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, la 56,4% din copiii bolnavi cu amigdalită cronică decompensată şi la 79,5% din copiii cu patologii asociate (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă). La calculul concomitent al celor două concentraţii de PEG (4,0% şi 6,0%), numărul total al indicatorilor cu valoare de diagnostic s-a majorat până la 17,2% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, până la 58,9% din copiii cu amigdalită cronică decompensată şi până la 89,7% din copiii cu patologii asociate (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă).
La aplicarea metodei revendicate, în cadrul căreia s-a utilizat PEG 4,2%, a fost identificat aproape acelaşi număr de indicatori cu valoare de diagnostic în toate grupurile de bolnavi analizaţi comparativ cu concentraţiile PEG 3,75%, 4,0% şi 4,2%. Însă, concentraţia PEG 8,0% a permis identificarea unui număr mai mare de indicatori cu valoare de diagnostic, comparativ cu concentraţia PEG de 6,0% (corespunzător grupurilor de bolnavi analizaţi 24,1%, 79,5%, 100,0% şi 13,8%, 56,4% 79,5%). Totodată, la aplicarea metodei propuse au fost identificaţi indicatori cu valoare de diagnostic la utilizarea concentraţiei PEG de 2,5% la 10,3% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, la 25,6% din copiii bolnavi de amigdalită cronică decompensată şi la 33,3% din copiii cu patologie asociată (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă).
La aplicarea metodei revendicate, în cadrul căreia se utilizează trei concentraţii ale PEG (2,5%, 4,2% şi 8,0%), numărul total al indicatorilor cu valoare de diagnostic a crescut la 31,0% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, la 84,6% din copiii bolnavi de amigdalită cronică decompensată şi la 100,0% din copiii cu patologii asociate (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă), fapt ce demonstează că utilizarea mai multor concentraţii optimizate ale PEG permite identificarea unui număr mai mare de indicatori cu valoare de diagnostic în stadiul precoce al bolii, respectiv asigură iniţierea oportună a unui tratament adecvat. Important este faptul că utilizând metoda propusă este posibilă identificarea bolnavilor cu intoxicaţie endogenă foarte înaltă: 13,8% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, 46,2% din copiii bolnavi de amigdalită cronică decompensată şi 69,3% din copiii cu patologii asociate (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă), ceea ce nu a fost posibil la aplicarea soluţiei apropiate şi a celei mai apropiate soluţii.
Au fost investigaţi 198 donatori de diferite vвrste şi gen (grupul 1) şi 107 copii de diferite vвrste şi gen, dintre care 29 cu amigdalită cronică compensată (grupul 2), 39 cu amigdalită cronică decompensată (grupul 3) şi 39 cu amigdalită cronică decompensată complicată cu patologie reumatoidă (grupul 4).
Concentraţia CIC (tab. 3) cu masă moleculară mare (PEG 2,5%), care manifestă toxicitate mică, a fost la acelaşi nivel ca şi la cei sănătoşi la bolnavii din grupul 2, iar la bolnavii din grupul 3 şi 4 a fost semnificativ mai mare comparativ cu cei sănătoşi (р<0,001 în ambele cazuri).
Concentraţia CIC cu masă moleculară medie (PEG 4,2%), care manifestă toxicitate medie, a fost la acelaşi nivel ca şi la cei sănătoşi la bolnavii grupului 2, iar la bolnavii grupului 3 şi 4 a fost semnificativ mai mare comparativ cu cei sănătoşi (р<0,05 şi corespunzător р<0,001). Cea mai mică concentraţie a CIC a fost la bolnavii din grupul 2, mai mare, însă nesemnificativ comparativ cu grupul 2, a fost la bolnavii din grupul 3 şi semnificativ mai mare comparativ cu grupul 2 şi 3 s-a constatat la grupul 4 (р<0,001 în ambele cazuri).
Concentraţia complexelor imune circulante cu masă moleculară mică (PEG 8%), care manifestă toxicitate înaltă, a fost semnficativ mai înaltă decât la cei sănătoşi la toţi bolnavii grupurilor 2, 3 şi 4 (р<0,001 corespunzător). Cea mai mică concentraţie a CIC a fost la bolnavii din grupul 2, mai mare statistic comparativ cu grupul 2 a fost la bolnavii din grupul 3 (р<0,001) şi semnificativ mai înalt la bolnavii din grupul 4 comparativ cu bolnavii grupurilor 2 şi 3 (р<0,001 în ambele cazuri).
Astfel, s-a demonstrat că la bolnavii mai severi (grupurile 3 şi 4) s-a apreciat majorarea concentraţiei complexelor imune circulante în cele 3 fracţii, fapt ce mărturiseşte o intoxicaţie mai severă la aceşti bolnavi.
Concentraţia CIC cu masă moleculară medie (PEG 4,2%) şi valorile CTT (coeficientul total de toxicitate) s-au modificat în paralel, adică s-au apreciat diferenţe semnificative între grupurile 2 şi 4 (р<0,001) şi grupurile 3 şi 4 (р<0,001).
Tabelul 5
Indicatorii (M±m) investigaţiilor copiilor cu diferite forme de amigdalită cronică
Indicatori Sănătoşi Amigdalită cronică compensată Amigdalită cronică decompensată Amigdalită cronică decompensată cu reumopatologie 1 2 3 4 CIC-2,5% UC 6,3±0,33 8,0±1,08◊○ 18,3±1,42□ 27,4±1,03□● CIC-4,2% UC 27,3±2,69 31,6±3,13◊ 36,0±2,43□ 58,4±1,61□● CIC-8,0% UC 121±3,2 190±17,8□◊○ 408±25,2□ 559±16,3□● CTT UC 2,82±0,276◊○ 5,04±0,298 5,77±0,153●
□ - diferenţă semnificativă între sănătoşi şi bolnavi
○ - diferenţă semnificativă între grupurile de bolnavi 2 şi 3
◊ - diferenţă semnificativă între grupurile de bolnavi 2 şi 4
● - diferenţă semnificativă între grupurile de bolnavi 3 şi 4
Dacă concentraţia CIC cu masă moleculară mică (PEG 8%) şi masă moleculară mare (PEG 2,5%) în toate cele trei grupe se diferenţiau statistic, atunci conform coeficientului de toxicitate, diferenţe semnificative s-au determinat între grupurile 2 şi 3 (р<0,001), de asemenea 2 şi 4 (р<0,001). Între grupurile 3 şi 4 modificări semnificative nu s-au depistat.
Coeficientul total al toxicităţii a fost diferit semnificativ între grupurile 2 şi 3 (р<0,001), 2 şi 4 (р<0,001), de asemenea între grupurile 3 şi 4 (р<0,05).
Astfel, a fost demonstrat că la bolnavii mai severi (din grupurile 3 şi 4) conform coeficientului de toxicitate se apreciază o creştere semnificativă a concentraţiei CIC cu toate masele moleculare, ceea ce indică o intoxicaţie endogenă mai severă la aceşti bolnavi.
Exemple concrete de realizare
Exemplul 1
Bolnavul TV, 14 ani. Diagnostic: amigdalită cronică decompensată complicată cu artrită de reacţie pe fond de derivaţi intestinali.
Concentraţia CIC cu masă moleculară mică, medie şi mare (PEG 2,5% - 28; PEG 4,2% - 60; PEG 8,0% - 499) a fost cu mult mai mare ca la cei sănătoşi din acelaşi grup de vârstă (7,0; 27,1; 134). Coeficientul total de toxicitate (CTT) a fost de asemenea mai mare la bolnavi 5,49 în comparaţie cu subiecţii sănătoşi - 4,96 din aceeaşi grupă de vârstă.
Indicatori Sănătoşi Indicatorii bolnavului Raportul: bolnav/subiect sănătos CIC-2,5% UC 7,0±0,74 28 4 CIC-4,2% UC 27,1±1,46 60 2,2 CIC-8,0% UC 134±8,3 499 3,72 CTT UC 4,96 5,94 1,20 Leucocite 109/I 7,4 12,9 1,74 N.segmentate % 55 63 1,15 N.nesegmentate % 1 5 5 Limfocite % 35 18 0,51
Analiza leucoformulei la bolnavul dat, în comparaţie cu norma vârstnică a lui, a arătat prezenţa unui nivel înalt de leucocite (de 1,74 ori mai mare ca norma), nivel înalt al neutrofilelor segmentate (de 1,15 ori mai mare ca norma), nivel înalt al neutrofilelor nesegmentate (de 5 ori mai mare ca norma) şi o scădere pronunţată a nivelului de limfocite (aproximativ de 2 ori), ce demonstrează o deviere pronunţată a formulei leucocitare spre stânga sau o intoxicaţie pronunţată a organismului. Rezultatele obţinute confirmă nivelul înalt de intoxicaţie, care se depistează cu ajutorul metodei revendicate.
Exemplul 2
Bolnavul ŞA, 5 ani. Diagnostic: amigdalită cronică decompensată.
Indicii Sănătoşi Indicatorii bolnavului Raportul: bolnav/subiect sănătos CIC-2,5% UC 3,5±0,27 8 2,29 CIC-4,2% UC 18,7±0,68 39 2,09 CIC-8,0% UC 86±2,55 145 1,69 CTT UC 4,55 4,02 0,88 Leucocite 109/I 9,2 10,9 1,18 N.segmentate % 36 40 1,11 N.nesegmentate % 2,8 6 2,14 Limfocite % 51 46 0,90
Concentraţia CIC cu masă moleculară mică, medie şi mare (PEG 2,5% - 8; PEG 4,2% - 39; PEG 8,0% - 145) a fost cu mult mai mare ca la subiecţii sănătoşi din acelaşi grup de vâstă (3,5; 18,7; 86). Coeficientul total de toxicitate (CTT) de asemenea nu a fost mărit (la bolnav 4,02, la subiecţii sănătoşi 4,55) comparativ cu copiii sănătoşi din aceeaşi grupă de vârstă. Astfel, la bolnavul dat s-a apreciat o intoxicaţie endogenă medie.
Analiza leucoformulei la bolnavul dat, în comparaţie cu norma vârstnică a lui, a arătat prezenţa unui nivel mai scăzut de leucocite (de 1,18 ori mai mare ca norma), de neutrofile segmentate (de 1,11 ori mai mare ca norma) şi de neutrofile nesegmentate (de 2,14 ori mai mare ca norma), precum şi o scădere nepronunţată a nivelului de limfocite, în comparaţie cu primul exemplu, ce demonstrează o deviere nepronunţată a formulei leucocitare spre stânga sau o intoxicaţie a organismului de nivel mediu. Rezultatele obţinute confirmă nivelul mediu de intoxicaţie, care se depistează cu ajutorul metodei revendicate.
Exemplul 3
Bolnavul ZN, 10 ani. Diagnostic: amigdalită cronică decompensată.
Indici Sănătoşi Indicatorii bolnavului Raportul: bolnav/subiect sănătos CIC-2,5% UC 5,3±0,46 24 4,5 CIC-4,2% UC 23,9±0,91 21 0,9 CIC-8,0% UC 118±4,2 149 1,26 CTT UC 4,88 3,74 0,77 Leucocite 109/I 8,4 8,8 1,04 N.segmentate % 43,8 44 1,00 N.nesegmentate % 1,78 3 1,68 Limfocite % 45 43 0,95
Concentraţia CIC cu masă moleculară mică, medie şi mare (PEG 2,5% - 24; PEG 4,2% - 38; PEG 8,0% - 234) a fost cu mult mai mare ca la subiecţii sănătoşi din acelaşi grup de vâstă. Dar, analizând bolnavul conform coeficienţilor de toxicitate, CTT de asemenea nu a fost mărit (la bolnav 3,74, la subiecţii sănătoşi 4,88) comparativ cu copiii sănătoşi din aceeaşi grupă de vârstă. Astfel, la bolnavul dat s-a apreciat o intoxicaţie endogenă mică.
Analiza leucoformulei la bolnavul dat, în comparaţie cu norma vârstnică a lui, a arătat prezenţa nivelului de leucocite aproape de normă (de 1,04 ori mai mare ca norma), nivelul neutrofilelor segmentate fiind acelaşi ca la persoanele sănătoase, un nivel mai scăzut al neutrofilelor nesegmentate (de 1,68 ori mai mare ca norma) şi acelaşi nivel de limfocite, ca la persoanele sănătoase, în comparaţie cu exemplul doi, ce demonstrează o deviere minimală a formulei leucocitare spre stânga sau o intoxicaţie de nivel minim a organismului.
1. Гриневич Ю. А., Алферов А. Н. Определение иммунных комплексов в крови онкологических больных. Лабораторное дело, 1981, №8, р.493-494
2. RU 2415430 C1 2011.03.27
Claims (1)
- Metodă de determinare a gradului de intoxicaţie endogenă la copiii cu amigdalită cronică, care constă în aceea că se colectează sânge, se separă serul sangvin şi se introduc câte 50 µl de ser în trei eprubete, la care se adaugă câte 100 µl de soluţie tampon boric şi soluţie de polietilenglicol (PEG) de 2,5%, 4,2% şi 8,0%, iar în a patra eprubetă de control se introduc 50 µl de ser şi 100 µl de soluţie tampon boric, apoi eprubetele se incubează pentru 15 min la temperatura camerei, după care se determină densitatea optică la lungimea de undă de 340 nm, iar concentraţia complexelor imune circulante (CIC) în fiecare eprubetă se determină conform formulei:CIC = DOEDS-DOEDC × 1000,unde:DOEDS - densitatea optică în eprubeta de studiu, în UC;DOEDC - densitatea optică în eprubeta de control, în UC,în cazul în care în eprubeta cu concentraţia PEG 2,5% CIC este mai mare de 10 UC, cu concentraţia PEG 4,2% CIC este mai mare de 40 UC şi cu concentraţia PEG 8,0% CIC este mai mare de 240 UC se diagnostichează un grad înalt de intoxicaţie endogenă, în cazul în care în eprubeta cu concentraţia PEG 2,5% CIC este mai mic de 10 UC, cu concentraţia PEG 4,2% CIC este mai mic de 40 UC şi cu concentraţia PEG 8,0% CIC este mai mic de 240 UC - un grad mediu de intoxicaţie endogenă, iar în cazul în care în eprubeta cu concentraţia PEG 2,5% CIC este mai mare de 10 UC, cu concentraţia PEG 4,2% CIC este mai mic de 40 UC şi cu concentraţia PEG 8,0% CIC este mai mic de 240 UC - un grad minim de intoxicaţie endogenă.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20150021A MD963Z (ro) | 2015-03-19 | 2015-03-19 | Metodă de determinare a gradului de intoxicaţie endogenă la copiii cu amigdalită cronică |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20150021A MD963Z (ro) | 2015-03-19 | 2015-03-19 | Metodă de determinare a gradului de intoxicaţie endogenă la copiii cu amigdalită cronică |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MD963Y MD963Y (ro) | 2015-10-31 |
| MD963Z true MD963Z (ro) | 2016-05-31 |
Family
ID=54357243
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MDS20150021A MD963Z (ro) | 2015-03-19 | 2015-03-19 | Metodă de determinare a gradului de intoxicaţie endogenă la copiii cu amigdalită cronică |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| MD (1) | MD963Z (ro) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2415430C1 (ru) * | 2009-10-09 | 2011-03-27 | Федеральное государственное учреждение науки "Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени академика И.Н. Блохиной" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ определения циркулирующих иммунных комплексов |
| MD805Y (ro) * | 2014-04-03 | 2014-08-31 | Universitatea De Stat De Medicină Şi Farmacie "Nicolae Testemiţanu" Din Republica Moldova | Metodă de diagnostic diferenţial al formelor de amigdalită cronică de etiologie streptococică la copii |
-
2015
- 2015-03-19 MD MDS20150021A patent/MD963Z/ro not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2415430C1 (ru) * | 2009-10-09 | 2011-03-27 | Федеральное государственное учреждение науки "Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени академика И.Н. Блохиной" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ определения циркулирующих иммунных комплексов |
| MD805Y (ro) * | 2014-04-03 | 2014-08-31 | Universitatea De Stat De Medicină Şi Farmacie "Nicolae Testemiţanu" Din Republica Moldova | Metodă de diagnostic diferenţial al formelor de amigdalită cronică de etiologie streptococică la copii |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Danilov Lucian, Ghinda Serghei, Ababii Ion, Revenco Ninel, Chiroşca Valentina. Caracteristica Reactivităţii imune la bolnavii cu diverse forme de amigdalită cronică asociată cu patologie reumatică. Arta Medica Nr.2, 2014, p19-24 * |
| Гриневич Ю. А., Алферов А. Н. Определение иммунных комплексов в крови онкологических больных. Лабораторное дело, 1981, №8, р.493-494 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MD963Y (ro) | 2015-10-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Barron et al. | A bone marrow report of absent stainable iron is not diagnostic of iron deficiency | |
| Briggs et al. | Where are we at with point‐of‐care testing in haematology? | |
| Holyoake et al. | Use of plasma ferritin concentration to diagnose iron deficiency in elderly patients. | |
| Kwiecień et al. | Neutrophil maturation, reactivity and granularity research parameters to characterize and differentiate convalescent patients from active SARS-CoV-2 infection | |
| Lewis et al. | Treatable factors associated with severe anaemia in adults admitted to medical wards in Blantyre, Malawi, an area of high HIV seroprevalence | |
| Feng et al. | Analysis of the diagnostic efficiency of serum oxidative stress parameters in patients with breast cancer at various clinical stages | |
| Aryana et al. | Association of Helicobacter pylori infection with the Lewis and ABO blood groups in dyspeptic patients | |
| Oxendine Harp et al. | MicroRNAs miR-451a and let-7i-5p profiles in circulating exosomes vary among individuals with different sickle hemoglobin genotypes and malaria | |
| Ifeanyichukwu et al. | Effect of HIV infection on some haematological parameters and immunoglobulin levels in HIV patients in Benin City, southern Nigeria | |
| Nowaczyk et al. | Platelets in fetal growth restriction: role of reactive oxygen species, oxygen metabolism, and aggregation | |
| Kontovazainitis et al. | Hemostasis in pre-eclamptic women and their offspring: current knowledge and hemostasis assessment with viscoelastic tests | |
| Hudzik et al. | Discordance between body-mass index and body adiposity index in the classification of weight status of elderly patients with stable coronary artery disease | |
| Mohammed Mujib et al. | Study of Hematological Parameters in Children Suffering from Iron Deficiency Anaemia in Chattagram Maa‐o‐Shishu General Hospital, Chittagong, Bangladesh | |
| Poenariu et al. | Interrelation of hypoxia-inducible factor-1 alpha (HIF-1 α) and the ratio between the mean corpuscular volume/lymphocytes (MCVL) and the cumulative inflammatory index (IIC) in ulcerative colitis | |
| Palmer et al. | A simple flow cytometric method to measure glucose uptake and glucose transporter expression for monocyte subpopulations in whole blood | |
| Kazatsker et al. | Augmented placental protein 13 in placental-associated extracellular vesicles in term and preterm preeclampsia is further elevated by corticosteroids | |
| Anderson et al. | Absence of acanthocytosis in Huntington’s disease-like 2: a prospective comparison with Huntington’s disease | |
| Fabretti et al. | Laboratory profile of malnutrition in hospitalized dogs. | |
| Akinbo et al. | Haematological indices and absolute CD4 counts of apparently healthy population in Ondo State, Nigeria. | |
| MD963Z (ro) | Metodă de determinare a gradului de intoxicaţie endogenă la copiii cu amigdalită cronică | |
| RU2618447C2 (ru) | Способ оценки степени тяжести интоксикации | |
| Hussen et al. | The impact of anticoagulation agent on the composition and phenotype of blood leukocytes in dromedary camels | |
| Zhang et al. | Measurement of the phagocytic activity of human peripheral blood using a highly sensitive fluorometric detection device without hemolysis | |
| Miah et al. | Reticulocyte Hemoglobin Equivalent (Ret-He) as a Potential Diagnostic Marker of Iron Deficiency Anemia among Bangladeshi Adults | |
| Kuang et al. | Exploring the Association Between Immune Cell Phenotypes and Osteoporosis Mediated by Inflammatory Cytokines: Insights from GWAS and Single-Cell Transcriptomics |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG9Y | Short term patent issued | ||
| KA4Y | Short-term patent lapsed due to non-payment of fees (with right of restoration) |