MD963Z

MD963Z - Method for determining the degree of endogenous intoxication in children with chronic tonsillitis

Info

Publication number: MD963Z
Application number: MDS20150021A
Authority: MD
Inventors: Сергей ГИНДА; Ион АБАБИЙ; Лучиан ДАНИЛОВ; Валентина КИРОШКА; Эвелина ЛЕСНИК; Ольга КАРАЯНИ; Анжела ГУИЛА
Original assignee: Мспу Институт Фтизиопульмонологии "Chiril Draganiuc"
Priority date: 2015-03-19
Filing date: 2015-03-19
Publication date: 2016-05-31
Also published as: MD963Y

Abstract

The invention relates to medicine, particularly to immunology and can be used to determine the degree of endogenous intoxication in children with chronic tonsillitis.According to the invention, the method consists in that blood is taken, serum is separated and are introduced 50 µl of serum into three tubes, to which are added 100 µl of borate buffer and 2.5%, 4.2% and 8.0% polyethylene glycol (PEG) solution, and into the fourth control tube are introduced 50 µl of serum and 100 µl of borate buffer, then the tubes are incubated for 15 min at room temperature, after which is determined the optical density at the wavelength of 340 nm, and the concentration of circulating immune complexes (CIC) in each tube is determined according to the formula:CIC = (ODTT - ODCT) x 1000,where:ODTT - optical density of the test tube, in CU;ODCT - optical density of the control tube, in CU,if in the tube with the PEG concentration of 2.5% the content of CIC is more than 10 CU, with the PEG concentration of 4.2% the content of CIC is more than 40 CU and with the PEG concentration of 8.0% the content of CIC is more than 240 CU is diagnosed a high degree of endogenous intoxication, if in the tube with the PEG concentration of 2.5% the content of CIC is less than 10 CU, with the PEG concentration of 4.2% the content of CIC is less than 40 CU, with the PEG concentration of 8.0% the content of CIC is less than 240 CU - an average degree of endogenous intoxication, and if in the tube with the PEG concentration of 2.5% the content of CIC is more than 10 CU, with the PEG concentration of 4.2% the content of CIC is less than 40 CU and with the PEG concentration of 8.0% the content of CIC is less than 240 CU - a minimum degree of endogenous intoxication.

Description

Invenţia se referă la medicină, şi anume la imunologie şi poate fi utilizată pentru determinarea gradului de intoxicaţie endogenă la copiii cu amigdalită cronică. The invention relates to medicine, namely to immunology and can be used to determine the degree of endogenous intoxication in children with chronic tonsillitis.

Este cunoscută o metodă de determinare a complexelor imune circulante (CIC) prin precipitarea lor din serul sangvin. Metoda este bazată pe precipitarea selectivă a complexelor antigen-anticorpi cu polietilenglicol (PEG) 3,75% cu determinarea spectrofotometrică consecutivă a precipitatului. Pentru realizarea reacţiei sunt preparate soluţia nr. 1 (0,1 M de tampon borat pH 8,4) şi soluţia nr. 2 (polietilenglicol în concentraţie de 3,75% în soluţia nr. 1). Într-o eprubetă se introduc 0,3 ml ser sangvin, se adaugă 0,6 ml de soluţie nr. 1 şi se amestecă minuţios, după care se transferă câte 0,3 ml soluţie în două eprubete. În una dintre acestea se adaugă 2,7 ml de soluţie nr. 1 (soluţia control), iar în cealaltă 2,7 ml soluţie nr. 2 (soluţia de cercetare). Conţinutul eprubetelor se amestecă minuţios şi se lasă pentru 60 min la temperatura camerei, după care se determină spectrofotometric densitatea optică a specimenelor la lungimea de undă de 450 nm, utilizând cuve cu dimensiunile de 1x1 cm. Se calculează diferenţa indicatorilor de densitate optică, rezultatul se multiplică cu 1000 şi se obţine cantitatea complexelor imune circulante în unităţi de densitate optică (UDO) [1]. A method for determining circulating immune complexes (CIC) by their precipitation from blood serum is known. The method is based on the selective precipitation of antigen-antibody complexes with 3.75% polyethylene glycol (PEG) with subsequent spectrophotometric determination of the precipitate. To carry out the reaction, solution no. 1 (0.1 M borate buffer pH 8.4) and solution no. 2 (polyethylene glycol at a concentration of 3.75% in solution no. 1) are prepared. 0.3 ml of blood serum is introduced into a test tube, 0.6 ml of solution no. 1 is added and mixed thoroughly, after which 0.3 ml of solution is transferred into two test tubes. 2.7 ml of solution no. 1 (control solution) is added to one of them, and 2.7 ml of solution no. 2 (research solution) is added to the other. The contents of the tubes are mixed thoroughly and left for 60 min at room temperature, after which the optical density of the specimens is determined spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm, using cuvettes with dimensions of 1x1 cm. The difference in optical density indicators is calculated, the result is multiplied by 1000 and the amount of circulating immune complexes in optical density units (UDU) is obtained [1].

Dezavantajul acestei metode constă în determinarea doar a CIC cu masă moleculară mică care sunt mai puţin toxice, ceea ce poate duce la interpretarea greşită a rezultatelor investigaţionale şi, drept urmare, la un diagnostic şi un tratament incorecte, totodată pentru investigare este necesar un volum mare de ser, acesta fiind important în investigarea copiilor. The disadvantage of this method is that it only determines low molecular weight CICs that are less toxic, which can lead to misinterpretation of the investigation results and, as a result, to incorrect diagnosis and treatment. At the same time, a large volume of serum is required for the investigation, which is important in the investigation of children.

În calitate de cea mai apropiată soluţie serveşte metoda de determinare a CIC de autorii Nemov V. şi Popcova M. Esenţa acestei metode constă în faptul că suplimentar în serul sangvin în urma centrifugării scurte se diminuează turbiditatea. Pentru determinarea creşterii turbidităţii specifice în prezenţa PEG cu concentraţia finală de 4% şi pentru determinarea CIC mari şi mici se utilizează spectrofotometrul cu microplanşetă în regim bifazic (biundă) de bază 340 nm şi filtrul de referinţă 620 nm. Pentru realizarea reacţiei se prepară: The closest solution is the method for determining CIC by Nemov V. and Popcova M. The essence of this method is that in addition to the blood serum, turbidity decreases after short centrifugation. To determine the increase in specific turbidity in the presence of PEG with a final concentration of 4% and to determine high and low CIC, a microplate spectrophotometer in a biphasic (biwave) mode with a base wavelength of 340 nm and a reference filter of 620 nm is used. To carry out the reaction, prepare:

- soluţia 1 - soluţie fiziologică tampon (pH 7,4); soluţia 2 - soluţie PEG de 8% (8,0 g PEG-6000 + 100,0 ml soluţie 1); soluţia 3 - soluţie PEG de 12% (12,0 g PEG-6000 + 100,0 ml soluţie 1); - solution 1 - physiological buffer solution (pH 7.4); solution 2 - 8% PEG solution (8.0 g PEG-6000 + 100.0 ml solution 1); solution 3 - 12% PEG solution (12.0 g PEG-6000 + 100.0 ml solution 1);

- în godeurile unei plăci standard (cu 96 godeuri) pentru investigaţii imunologice se pipetează câte 100 µl soluţii de lucru: în toate godeurile stripului 1 - soluţia 1; în toate godeurile stripului 2 - soluţia 2; în toate godeurile stripului 3 - soluţia 3; la necesitate se completează şi celelalte stripuri, urmând aceeaşi consecutivitate a operaţiunii de pipetare; - in the wells of a standard plate (with 96 wells) for immunological investigations, pipette 100 µl of working solutions: in all wells of strip 1 - solution 1; in all wells of strip 2 - solution 2; in all wells of strip 3 - solution 3; if necessary, complete the other strips, following the same sequence of the pipetting operation;

- utilizând un dozator cu 8 canale, în fiecare strip (1, 2 şi 3 corespunzător) se pipetează câte 100 µl din serurile sangvine diluate în prealabil. Pipetarea se repetă de 3-4 ori, respectând direcţia: de la soluţia 1 spre soluţia 3 evitând formarea bulelor de aer. Imediat se fixează timpul de incubare, durata căruia trebuie să fie de 45 min, placa acoperindu-se şi expunându-se pe durata acestui interval de timp la temperatura de 18…25°С; - using an 8-channel dispenser, in each strip (1, 2 and 3 respectively) pipette 100 µl of the previously diluted blood sera. Pipetting is repeated 3-4 times, respecting the direction: from solution 1 to solution 3, avoiding the formation of air bubbles. Immediately set the incubation time, which should be 45 min, covering the plate and exposing it during this time to a temperature of 18…25°С;

- se înregistrează datele cu ajutorul unui spectrofotometru (cu dispozitiv microplăci) măsurând densitatea optică în regimul a două lungimi de undă: de bază - 340 nm, filtru de referinţă - 620 nm. - the data is recorded using a spectrophotometer (with microplate device) measuring the optical density in the regime of two wavelengths: basic - 340 nm, reference filter - 620 nm.

În baza datelor obţinute se calculează nivelul CIC cu masă moleculară mare şi a celor cu masă moleculară mică conform formulei: Based on the data obtained, the CIC level of high molecular weight and low molecular weight is calculated according to the formula:

Mari [CIC]=(DO medie Sol. 2 - DO medie Sol.1)×1000; Large [CIC]=(average DO Sol. 2 - average DO Sol.1)×1000;

Mici [CIC]=(DO medie Sol. 3 - ОП medie Sol. 1)×1000, Small [CIC]=(average DO Sol. 3 - average OP Sol. 1)×1000,

Unde DO medie - valoarea aritmetică medie a densităţii optice a probei [2]. Where mean OD - the arithmetic mean value of the optical density of the sample [2].

Dezavantajul acestei metode constă în determinarea doar a CIC mari şi mici, pe lângă aceasta valorile absolute şi medii ale datelor obţinute sunt utilizate fără a ţine cont de CIC cu greutate moleculară medie şi nu se face o corelaţie dintre cantitatea CIC şi gravitatea intoxicaţiei endogene, la fel pentru interpretarea corectă a rezultatelor investigaţiilor imune este necesar de apreciat normele fiziologice pentru CIC cu greutate moleculară mică, medie şi mare. Totodată, printre dezavantajele metodei menţionate este şi faptul că se dublează investigaţia, ceea ce duce la majorarea cheltuielilor de material supus testării (serul sangvin), precum şi de reactivi. The disadvantage of this method is that it determines only large and small CICs, in addition, the absolute and average values of the obtained data are used without taking into account the CIC with medium molecular weight and there is no correlation between the amount of CIC and the severity of endogenous intoxication, also for the correct interpretation of the results of immune investigations it is necessary to appreciate the physiological norms for CIC with low, medium and high molecular weight. At the same time, among the disadvantages of the mentioned method is the fact that the investigation is duplicated, which leads to an increase in the costs of the material subjected to testing (blood serum), as well as reagents.

Problema pe care o rezolvă invenţia propusă constă în determinarea CIC cu greutatea moleculară mare, medie şi mică, pe baza cărora să se determine gravitatea intoxicaţiei endogene la copiii cu amigdalită cronică printr-o metodă simplă şi precisă în realizare. The problem solved by the proposed invention consists in determining CIC with high, medium and low molecular weight, based on which to determine the severity of endogenous intoxication in children with chronic tonsillitis by a simple and precise method.

Esenţa invenţiei constă în aceea că se colectează sânge, se separă serul sangvin şi se introduc câte 50 µl de ser în trei eprubete, la care se adaugă câte 100 µl de soluţie tampon boric şi soluţie de polietilenglicol (PEG) de 2,5%, 4,2% şi 8,0%, iar în a patra eprubetă de control se introduc 50 µl de ser şi 100 µl de soluţie tampon boric, apoi eprubetele se incubează pentru 15 min la temperatura camerei, după care se determină densitatea optică la lungimea de undă de 340 nm, iar concentraţia CIC în fiecare eprubetă se determină conform formulei: The essence of the invention consists in collecting blood, separating the blood serum and introducing 50 µl of serum into three test tubes, to which 100 µl of boric buffer solution and 2.5%, 4.2% and 8.0% polyethylene glycol (PEG) solution are added, and in the fourth control test tube 50 µl of serum and 100 µl of boric buffer solution are introduced, then the test tubes are incubated for 15 min at room temperature, after which the optical density is determined at a wavelength of 340 nm, and the CIC concentration in each test tube is determined according to the formula:

CIC = (DOEDS-DOEDC) × 1000, CIC = (DOEDS-DOEDC) × 1000,

unde: where:

DOEDS - densitatea optică în eprubeta de studiu, în UC; DOEDS - optical density in the study tube, in UC;

DOEDC - densitatea optică în eprubeta de control, în UC, DOEDC - optical density in the control tube, in UC,

în cazul în care în eprubeta cu concentraţia PEG 2,5% CIC este mai mare de 10 UC, cu concentraţia PEG 4,2% CIC este mai mare de 40 UC şi cu concentraţia PEG 8,0% CIC este mai mare de 240 UC se diagnostichează un grad înalt de intoxicaţie endogenă, în cazul în care în eprubeta cu concentraţia PEG 2,5% CIC este mai mic de 10 UC, cu concentraţia PEG 4,2% CIC este mai mic de 40 UC şi cu concentraţia PEG 8,0% CIC este mai mic de 240 UC - un grad mediu de intoxicaţie endogenă, iar în cazul în care în eprubeta cu concentraţia PEG 2,5% CIC este mai mare de 10 UC, cu concentraţia PEG 4,2% CIC este mai mic de 40 UC şi cu concentraţia PEG 8,0% CIC este mai mic de 240 UC - un grad minim de intoxicaţie endogenă. if in the test tube with the PEG 2.5% CIC concentration is greater than 10 CU, with the PEG 4.2% CIC concentration is greater than 40 CU and with the PEG 8.0% CIC concentration is greater than 240 CU, a high degree of endogenous intoxication is diagnosed, if in the test tube with the PEG 2.5% CIC concentration is less than 10 CU, with the PEG 4.2% CIC concentration is less than 40 CU and with the PEG 8.0% CIC concentration is less than 240 CU - an average degree of endogenous intoxication, and if in the test tube with the PEG 2.5% CIC concentration is greater than 10 CU, with the PEG 4.2% CIC concentration is less than 40 CU and with the PEG 8.0% CIC concentration is less than 240 CU - a minimum degree of endogenous intoxication.

Rezultatul tehnic constă în determinarea complexelor imune circulante cu greutatea moleculară mare, medie şi mică, pe baza cărora se determină gravitatea intoxicaţiei endogene la copiii cu amigdalită cronică. The technical result consists in determining circulating immune complexes with high, medium and low molecular weight, based on which the severity of endogenous intoxication in children with chronic tonsillitis is determined.

Metoda se realizează în felul următor. The method is carried out in the following way.

Pregătirea soluţiei tampon boric 0,1M pH 8,4: pentru 250 ml se foloseste acid boric 0,8525 g şi Na tetraboric 1,07 g. Componentele se cântăresc, se adaugă în retorta chimică, se dizolvă în apă distilată, apoi se aduc la marcarea fixă. Preparation of 0.1M boric buffer solution pH 8.4: for 250 ml, use 0.8525 g boric acid and 1.07 g Na tetraboric acid. The components are weighed, added to the chemical retort, dissolved in distilled water, then brought to the fixed mark.

Se prepară concentraţiile necesare ale PEG 2,5%, 4,2% şi 8,0%. Deoarece soluţia PEG pe tamponul borat nu este stabilă, acesta se pregăteşte ex tempore. Conform calculului, pentru o investigaţie cu concentraţia 2,5% PEG se dizolvă 5 mg în 200 µl tampon boric, pentru o investigaţie cu concentraţia 4,5% PEG se dizolvă 8,33 mg în 200 µl tampon boric, pentru o investigaţie cu concentraţia 8% PEG se dizolvă 16 mg în 200 µl tampon boric. Pentru determinarea finală a soluţiilor necesare se înmulţesc volumele estimate cu numărul de investigaţii. The required concentrations of PEG 2.5%, 4.2% and 8.0% are prepared. Since the PEG solution in borate buffer is not stable, it is prepared ex tempore. According to the calculation, for an investigation with a 2.5% PEG concentration, 5 mg is dissolved in 200 µl boric buffer, for an investigation with a 4.5% PEG concentration, 8.33 mg is dissolved in 200 µl boric buffer, for an investigation with an 8% PEG concentration, 16 mg is dissolved in 200 µl boric buffer. For the final determination of the required solutions, the estimated volumes are multiplied by the number of investigations.

Drept material pentru investigare servesc eşantioanele de ser sangvin uman obţinute prin metode standard din sângele venos sau capilar. În acest scop din venă (sânge venos) sau deget (sânge capilar) se prelevă 0,3 ml sânge şi se separă serul. The material for the investigation is human blood serum samples obtained by standard methods from venous or capillary blood. For this purpose, 0.3 ml of blood is taken from a vein (venous blood) or finger (capillary blood) and the serum is separated.

Eşantioanele de ser prelevate de la bolnavi se dizolvă în planşete cu fund rotund calculând 100 µl tampon boric şi 50 µl ser investigat, obţinându-se diluţia de 3 ori a serului dizolvat. Serum samples taken from patients are dissolved in round-bottom plates by calculating 100 µl of boric buffer and 50 µl of investigated serum, obtaining a 3-fold dilution of the dissolved serum.

În godeurile stripului 1 se plasează specimenele de control, în godeurile stripului 2 specimenele de studiu cu PEG-2,5%, în godeurile stripului 3 specimenele de studiu cu PEG-4,2%, în godeurile stripului 4 specimenele de studiu cu PEG-8,0%(vezi tab. 1). In the wells of strip 1, the control specimens are placed, in the wells of strip 2, the study specimens with PEG-2.5%, in the wells of strip 3, the study specimens with PEG-4.2%, in the wells of strip 4, the study specimens with PEG-8.0% (see tab. 1).

Tabelul 1 Table 1

Schema plasării ingredientelor necesare în planşete cu fund plat Diagram of placing the necessary ingredients in flat-bottomed pans

1 (control) 2 (PEG-2,5%) 3 (PEG-4,2%) 4 (PEG-8,0%) Bolnav A 200 µl TB 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 Bolnav B 200 µl TB 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 Bolnav C 200 µl TB 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 1 (control) 2 (PEG-2.5%) 3 (PEG-4.2%) 4 (PEG-8.0%) Patient A 200 µl TB 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 Patient B 200 µl TB 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 Patient C 200 µl TB 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3 200 µl PEG 25 µl SD3

Notă: TB - tampon boric; SD3 - serul în 3 diluţii Note: TB - boric buffer; SD3 - serum in 3 dilutions

Se incubează 15 min la temperatura camerei. Incubate for 15 min at room temperature.

Citirea rezultatelor. Reading the results.

Pe reader se citesc indicatorii din fiecare godeu, notificându-se în unităţi de densitate optică, şi se determină concentraţia CIC conform formulei: The indicators in each well are read on the reader, reporting in optical density units, and the CIC concentration is determined according to the formula:

Concentraţia CIC = (UDO (godeu de studiu) - UDO (godeu de control)) х 1000 CIC concentration = (UDO (study well) - UDO (control well)) x 1000

Notă: UDO - unitate de densitate optică Note: UDO - optical density unit

Tabelul 2 Table 2

Schema distribuţiei rezultatelor investigării concentraţiei CIC Distribution scheme of CIC concentration investigation results

1 (Control) 2 (PEG-2,5%) 3 (PEG-4,2%) 4 (PEG-8,0%) Rezultatul bolnavului A 0,060 0,070 0,100 0,300 Rezultatul bolnavului B 0,050 0,055 0,090 0,120 Rezultatul bolnavului C 0,040 0,090 0,140 0,5601 (Control) 2 (PEG-2.5%) 3 (PEG-4.2%) 4 (PEG-8.0%) Patient A result 0.060 0.070 0.100 0.300 Patient B result 0.050 0.055 0.090 0.120 Patient C result 0.040 0.090 0.140 0.560

Exemplu de calcul al concentraţiei CIC la bolnavul А: Example of calculation of CIC concentration in patient A:

CIC 2,5% = (0,070 - 0,060) х 1000 = 10 UC; CIC 2.5% = (0.070 - 0.060) х 1000 = 10 UC;

CIC 4,2% = (0,100 - 0,060) х 1000 = 40 UC; CIC 4.2% = (0.100 - 0.060) х 1000 = 40 UC;

CIC 8,0% = (0,300 - 0,060) х 1000 = 240 UC. CIC 8.0% = (0.300 - 0.060) x 1000 = 240 UC.

Notă: UC - unităţi convenţionale Note: CU - conventional units

Conform metodei revendicate mai sus, în vederea determinării gradului de intoxicaţie endogenă la copiii cu amigdalită cronică au fost investigate 198 de persoane de diferit gen şi vârstă: According to the method claimed above, in order to determine the degree of endogenous intoxication in children with chronic tonsillitis, 198 people of different gender and age were investigated:

Copii 1…5 ani - 31; Children 1…5 years old - 31;

Copii 6…10 ani - 37; Children 6…10 years old - 37;

Copii 11…14 ani - 21; Children 11…14 years old - 21;

Copii 15…18 ani - 19; Children 15…18 years old - 19;

Adulţi - 90. Adults - 90.

La toate persoanele sănătoase s-a determinat concentraţia CIC cu masă moleculară mică, medie şi mare, de asemenea a fost realizată prelucrarea statistică a materialului obţinut pentru determinarea indicatorilor medii pentru fiecare fracţie CIC (tab. 3). In all healthy individuals, the concentration of CIC with low, medium and high molecular weight was determined, and statistical processing of the obtained material was also performed to determine the average indicators for each CIC fraction (tab. 3).

Tabelul 3 Table 3

Rezultatele prelucrării statistice a materialului obţinut Results of statistical processing of the obtained material

Vârsta CIC cu PEG 2,5% CIC cu PEG 4,2% CIC cu PEG 8,0% CTT M δ M+2δ CT1 M δ M+2δ CT2 M δ M+2δ CT3 1…5 3,5 1,46 6,4 1,83 18,7 3,65 26,0 1,39 86 13,7 114 1,33 4,55 6…10 5,3 2,72 10,7 2,01 23,9 5,38 34,7 1,45 118 25,0 168 1,42 4,88 11…14 7,0 3,31 13,7 1,96 27,1 6,54 40,2 1,48 134 37,0 208 1,55 4,96 15…18 8,3 4,87 18,3 2,20 32,5 6,86 45,6 1,43 161 45,4 255 1,56 5,19 adulţi 10,9 6,61 24,2 2,70 29,2 13,4 55,9 1,91 282 101,3 485 1,72 6,33Age CIC with PEG 2.5% CIC with PEG 4.2% CIC with PEG 8.0% CTT M δ M+2δ CT1 M δ M+2δ CT2 M δ M+2δ CT3 1…5 3.5 1.46 6.4 1.83 18.7 3.65 26.0 1.39 86 13.7 114 1.33 4.55 6…10 5.3 2.72 10.7 2.01 23.9 5.38 34.7 1.45 118 25.0 168 1.42 4.88 11…14 7.0 3.31 13.7 1.96 27.1 6.54 40.2 1.48 134 37.0 208 1.55 4.96 15…18 8.3 4.87 18.3 2.20 32.5 6.86 45.6 1.43 161 45.4 255 1.56 5.19 adults 10.9 6.61 24.2 2.70 29.2 13.4 55.9 1.91 282 101.3 485 1.72 6.33

Notă: CT1 - coeficientul de toxicitate pentru CIC cu PEG 2,5%; CT2 - coeficientul de toxicitate pentru CIC cu PEG 4,2%, CT3 - coeficientul de toxicitate pentru CIC cu PEG 8,0%, CTT - coeficientul total al toxicitгюii, М - media aritmetică a câtorva măsurări, δ - eroarea standard (eroarea pătratică medie) a unei singure măsurări, M+2δ - intervalul care include 95,5% din totatalitatea grupului de vвrstг. Note: CT1 - toxicity coefficient for CIC with PEG 2.5%; CT2 - toxicity coefficient for CIC with PEG 4.2%, CT3 - toxicity coefficient for CIC with PEG 8.0%, CTT - total toxicity coefficient, М - arithmetic mean of several measurements, δ - standard error (root mean square error) of a single measurement, M+2δ - interval that includes 95.5% of the totality of the age group.

De asemenea, pentru fiecare grupă de vârstă s-a determinat coeficientul de toxicitate (CT), care reprezintă o valoare relativă, pentru fiecare fracţie PEG, CT1 pentru 2,5%, CT2 pentru PEG 4,2% єi CT3 pentru PEG 8,0%, dar єi pentru fiecare grupг de vвrstг conform formulei: Also, for each age group, the toxicity coefficient (CT) was determined, which represents a relative value, for each PEG fraction, CT1 for 2.5%, CT2 for PEG 4.2% and CT3 for PEG 8.0%, but also for each age group according to the formula:

CT = M+2δ (grupului de vârstă) / M (grupului de vвrstг), unde CT = M+2δ (age group) / M (age group), where

M+2δ - intervalul care include 95,5% din totatalitatea grupului de vвrstг; M+2δ - the interval that includes 95.5% of the totality of the age group;

М - media aritmeticг a cвtorva mгsurгri. M - arithmetic mean of several measurements.

De asemenea, pentru fiecare grup de vвrstг s-a determinat coeficientul total al toxicitгюii (CTT), care reprezintг suma celor 3 coeficienюi, obюinuюi la determinarea celor 3 fracюii CIC (CT1+CT2+CT3), expus оn tab. 3. Also, for each age group, the total toxicity coefficient (TTC) was determined, which represents the sum of the 3 coefficients obtained when determining the 3 CIC fractions (T1+T2+T3), shown in Table 3.

Avantajele invenţiei revendicate constau: The advantages of the claimed invention consist of:

- în reducerea timpului de incubare la 15 min faţă de 45 min şi a volumului de ser pentru testare la 25 µl faţă de 100 µl în soluţia cea mai apropiată. - in reducing the incubation time to 15 min compared to 45 min and the volume of serum for testing to 25 µl compared to 100 µl in the closest solution.

- la utilizarea metodei propuse, în cadrul căreia se utilizează trei concentraţii ale PEG (2,5%, 4,2% şi 8,0%), numărul total al indicatorilor cu valoare de diagnostic a crescut la 31,0% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, la 84,6% din copiii bolnavi de amigdalită cronică decompensată şi 100,0% din copiii cu patologii asociate (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă), fapt ce demonstează că utilizarea mai multor concentraţii optimizate ale PEG permite identificarea unui număr mai mare de indicatori cu valoare de diagnostic în stadiul precoce al bolii şi, respectiv, face posibilă iniţierea oportună a unui tratament adecvat. Important este faptul că utilizând metoda propusă este posibilă identificarea bolnavilor cu intoxicaţie endogenă foarte înaltă: 13,8% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, 46,2% din copiii bolnavi de amigdalită cronică decompensată şi 69,3% din copiii cu patologii asociate (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă), ceea ce nu a fost posibil la aplicarea soluţiei apropiate (tab. 4); - when using the proposed method, which uses three concentrations of PEG (2.5%, 4.2% and 8.0%), the total number of indicators with diagnostic value increased to 31.0% of children with compensated chronic tonsillitis, to 84.6% of children with decompensated chronic tonsillitis and 100.0% of children with associated pathologies (decompensated chronic tonsillitis with rheumatoid pathology), which demonstrates that the use of several optimized concentrations of PEG allows the identification of a larger number of indicators with diagnostic value in the early stage of the disease and, respectively, makes it possible to initiate appropriate treatment in a timely manner. Importantly, using the proposed method, it is possible to identify patients with very high endogenous intoxication: 13.8% of children with compensated chronic tonsillitis, 46.2% of children with decompensated chronic tonsillitis and 69.3% of children with associated pathologies (decompensated chronic tonsillitis with rheumatoid pathology), which was not possible when applying the closest solution (tab. 4);

Tabelul 4 Table 4

Eficacitatea comparativă a diferitor metode de determinare a intoxicaţiilor endogene la copiii cu Comparative effectiveness of different methods for determining endogenous intoxications in children with

cu diferite forme ale amigdalitei cronice with various forms of chronic tonsillitis

Forma amigdalitei n CIC pozitiv pentru MM mare (abs/%) CIC pozitiv pentru MM medie (abs/%) CIC pozitiv pentru MM mică (abs/%) IE cu expresivitate foarte mare (abs/%) Total Soluţia apropiată ACC 29 3 / 10,3 3 / 10,3 ACD 39 4 / 10,3 4 / 10,3 ACD+PR 39 17 / 43,6 17 / 43,6 Cea mai apropiată soluţie ACC 29 3 / 10,3 4 / 13,8 5 / 17,2 ACD 39 4 / 10,3 22 / 56,4 23 / 58,9 ACD+PR 39 17 / 43,6 31 / 79,5 35 / 89,7 Metoda revendicată ACC 29 3 / 10,3 3 / 10,3 7 / 24,1 4 / 13,8 9 / 31,0 ACD 39 10 / 25,6 4 / 10,3 31 / 79,5 18 / 46,2 33 / 84,6 ACD+PR 39 13 / 33,3 17 / 43,6 39 / 100,0 27 / 69,3 39 / 100,0Tonsillitis form n CIC positive for large MM (abs/%) CIC positive for medium MM (abs/%) CIC positive for small MM (abs/%) IE with very high expressivity (abs/%) Total Closest solution ACC 29 3 / 10.3 3 / 10.3 ACD 39 4 / 10.3 4 / 10.3 ACD+PR 39 17 / 43.6 17 / 43.6 Closest solution ACC 29 3 / 10.3 4 / 13.8 5 / 17.2 ACD 39 4 / 10.3 22 / 56.4 23 / 58.9 ACD+PR 39 17 / 43.6 31 / 79.5 35 / 89.7 Claimed method ACC 29 3 / 10.3 3 / 10.3 7 / 24.1 4 / 13.8 9 / 31.0 ACD 39 10 / 25.6 4 / 10.3 31 / 79.5 18 / 46.2 33 / 84.6 ACD+PR 39 13 / 33.3 17 / 43.6 39 / 100.0 27 / 69.3 39 / 100.0

Notă: ACC - amigdalită cronică compensată; ACD - amigdalită cronică decompensată; ACD+PR - amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă, IE - intoxicaţie endogenă, MM - masa moleculară. Note: ACC - compensated chronic tonsillitis; ACD - decompensated chronic tonsillitis; ACD+PR - decompensated chronic tonsillitis with rheumatoid pathology, IE - endogenous intoxication, MM - molecular mass.

Analiza comparativă a eficacităţii diferitor metode de determinare a intoxicaţiei endogene la copiii cu diferite forme de amigdalită cronică arată că aplicarea soluţiei apropiate [Гриневич Ю.А., Алферов А.Н. Определение иммунных комплексов в крови онкологических больных. // Лабораторное дело, 1981, №8, p. 493-496] a permis la utilizarea concentraţiei PEG 3,75% determinarea indicatorilor cu valoare de diagnostic la 10,3% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, la un număr identic de copii bolnavi de amigdalită cronică decompensată şi la 43,6% din copiii cu patologii asociate (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă). Comparative analysis of the effectiveness of different methods for determining endogenous intoxication in children with different forms of chronic tonsillitis shows that the application of the closest solution [Grinevitch Yu.A., Alferov A.N. Determination of immune complexes in the blood of cancer patients. // Laboratory work, 1981, No. 8, p. 493-496] allowed using a PEG concentration of 3.75% to determine indicators with diagnostic value in 10.3% of children with compensated chronic tonsillitis, in an identical number of children with decompensated chronic tonsillitis and in 43.6% of children with associated pathologies (decompensated chronic tonsillitis with rheumatoid pathology).

La realizarea celei mai apropiate soluţii [Немов В. В., Попкова М. И. Способ определения циркулирующих иммунных комплексов - RU 2415430], în cadrul căreia se utilizează două concentraţii PEG (4,0% şi 6,0%) numărul bolnavilor, având rezultatele indicatorilor cu valoare de diagnostic la PEG 4,0%, a fost identic cu cel de la folosirea metodei 1, deoarece concentraţiile PEG 4,0% şi 3,75% sunt practic similare. Însă la utilizarea concentraţiei PEG 6,0%, a fost posibilă identificarea suplimentară a indicatorilor cu valoare de diagnostic la 13,8% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, la 56,4% din copiii bolnavi cu amigdalită cronică decompensată şi la 79,5% din copiii cu patologii asociate (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă). La calculul concomitent al celor două concentraţii de PEG (4,0% şi 6,0%), numărul total al indicatorilor cu valoare de diagnostic s-a majorat până la 17,2% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, până la 58,9% din copiii cu amigdalită cronică decompensată şi până la 89,7% din copiii cu patologii asociate (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă). When implementing the closest solution [Nemov V. V., Popkova M. I. Method for determining circulating immune complexes - RU 2415430], in which two PEG concentrations (4.0% and 6.0%) are used, the number of patients with diagnostically significant indicators at PEG 4.0% was identical to that when using method 1, since PEG concentrations 4.0% and 3.75% are practically similar. However, when using PEG concentration 6.0%, it was possible to additionally identify diagnostically significant indicators in 13.8% of children with compensated chronic tonsillitis, in 56.4% of children with decompensated chronic tonsillitis and in 79.5% of children with associated pathologies (decompensated chronic tonsillitis with rheumatoid pathology). When calculating the two PEG concentrations (4.0% and 6.0%), the total number of indicators with diagnostic value increased to 17.2% of children with compensated chronic tonsillitis, to 58.9% of children with decompensated chronic tonsillitis and to 89.7% of children with associated pathologies (decompensated chronic tonsillitis with rheumatoid pathology).

La aplicarea metodei revendicate, în cadrul căreia s-a utilizat PEG 4,2%, a fost identificat aproape acelaşi număr de indicatori cu valoare de diagnostic în toate grupurile de bolnavi analizaţi comparativ cu concentraţiile PEG 3,75%, 4,0% şi 4,2%. Însă, concentraţia PEG 8,0% a permis identificarea unui număr mai mare de indicatori cu valoare de diagnostic, comparativ cu concentraţia PEG de 6,0% (corespunzător grupurilor de bolnavi analizaţi 24,1%, 79,5%, 100,0% şi 13,8%, 56,4% 79,5%). Totodată, la aplicarea metodei propuse au fost identificaţi indicatori cu valoare de diagnostic la utilizarea concentraţiei PEG de 2,5% la 10,3% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, la 25,6% din copiii bolnavi de amigdalită cronică decompensată şi la 33,3% din copiii cu patologie asociată (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă). When applying the claimed method, in which PEG 4.2% was used, almost the same number of indicators with diagnostic value was identified in all groups of patients analyzed compared to PEG concentrations 3.75%, 4.0% and 4.2%. However, PEG concentration 8.0% allowed the identification of a larger number of indicators with diagnostic value, compared to PEG concentration 6.0% (corresponding to the analyzed groups of patients 24.1%, 79.5%, 100.0% and 13.8%, 56.4% 79.5%). At the same time, when applying the proposed method, indicators with diagnostic value were identified when using the PEG concentration of 2.5% in 10.3% of children with compensated chronic tonsillitis, in 25.6% of children with decompensated chronic tonsillitis and in 33.3% of children with associated pathology (decompensated chronic tonsillitis with rheumatoid pathology).

La aplicarea metodei revendicate, în cadrul căreia se utilizează trei concentraţii ale PEG (2,5%, 4,2% şi 8,0%), numărul total al indicatorilor cu valoare de diagnostic a crescut la 31,0% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, la 84,6% din copiii bolnavi de amigdalită cronică decompensată şi la 100,0% din copiii cu patologii asociate (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă), fapt ce demonstează că utilizarea mai multor concentraţii optimizate ale PEG permite identificarea unui număr mai mare de indicatori cu valoare de diagnostic în stadiul precoce al bolii, respectiv asigură iniţierea oportună a unui tratament adecvat. Important este faptul că utilizând metoda propusă este posibilă identificarea bolnavilor cu intoxicaţie endogenă foarte înaltă: 13,8% din copiii bolnavi de amigdalită cronică compensată, 46,2% din copiii bolnavi de amigdalită cronică decompensată şi 69,3% din copiii cu patologii asociate (amigdalită cronică decompensată cu patologie reumatoidă), ceea ce nu a fost posibil la aplicarea soluţiei apropiate şi a celei mai apropiate soluţii. When applying the claimed method, which uses three concentrations of PEG (2.5%, 4.2% and 8.0%), the total number of indicators with diagnostic value increased to 31.0% of children with compensated chronic tonsillitis, to 84.6% of children with decompensated chronic tonsillitis and to 100.0% of children with associated pathologies (decompensated chronic tonsillitis with rheumatoid pathology), which demonstrates that the use of several optimized concentrations of PEG allows the identification of a larger number of indicators with diagnostic value in the early stage of the disease, respectively ensures the timely initiation of adequate treatment. Importantly, using the proposed method, it is possible to identify patients with very high endogenous intoxication: 13.8% of children with compensated chronic tonsillitis, 46.2% of children with decompensated chronic tonsillitis and 69.3% of children with associated pathologies (decompensated chronic tonsillitis with rheumatoid pathology), which was not possible when applying the close solution and the closest solution.

Au fost investigaţi 198 donatori de diferite vвrste şi gen (grupul 1) şi 107 copii de diferite vвrste şi gen, dintre care 29 cu amigdalită cronică compensată (grupul 2), 39 cu amigdalită cronică decompensată (grupul 3) şi 39 cu amigdalită cronică decompensată complicată cu patologie reumatoidă (grupul 4). 198 donors of different ages and gender (group 1) and 107 children of different ages and gender were investigated, of which 29 with compensated chronic tonsillitis (group 2), 39 with decompensated chronic tonsillitis (group 3) and 39 with decompensated chronic tonsillitis complicated with rheumatoid pathology (group 4).

Concentraţia CIC (tab. 3) cu masă moleculară mare (PEG 2,5%), care manifestă toxicitate mică, a fost la acelaşi nivel ca şi la cei sănătoşi la bolnavii din grupul 2, iar la bolnavii din grupul 3 şi 4 a fost semnificativ mai mare comparativ cu cei sănătoşi (р<0,001 în ambele cazuri). The concentration of CIC (tab. 3) with high molecular weight (PEG 2.5%), which exhibits low toxicity, was at the same level as in healthy subjects in patients in group 2, and in patients in groups 3 and 4 it was significantly higher compared to healthy subjects (р<0.001 in both cases).

Concentraţia CIC cu masă moleculară medie (PEG 4,2%), care manifestă toxicitate medie, a fost la acelaşi nivel ca şi la cei sănătoşi la bolnavii grupului 2, iar la bolnavii grupului 3 şi 4 a fost semnificativ mai mare comparativ cu cei sănătoşi (р<0,05 şi corespunzător р<0,001). Cea mai mică concentraţie a CIC a fost la bolnavii din grupul 2, mai mare, însă nesemnificativ comparativ cu grupul 2, a fost la bolnavii din grupul 3 şi semnificativ mai mare comparativ cu grupul 2 şi 3 s-a constatat la grupul 4 (р<0,001 în ambele cazuri). The concentration of CIC with medium molecular weight (PEG 4.2%), which manifests medium toxicity, was at the same level as in healthy subjects in patients of group 2, and in patients of groups 3 and 4 it was significantly higher compared to healthy subjects (р<0.05 and correspondingly р<0.001). The lowest concentration of CIC was in patients of group 2, higher, but insignificantly compared to group 2, was in patients of group 3 and significantly higher compared to groups 2 and 3 was found in group 4 (р<0.001 in both cases).

Concentraţia complexelor imune circulante cu masă moleculară mică (PEG 8%), care manifestă toxicitate înaltă, a fost semnficativ mai înaltă decât la cei sănătoşi la toţi bolnavii grupurilor 2, 3 şi 4 (р<0,001 corespunzător). Cea mai mică concentraţie a CIC a fost la bolnavii din grupul 2, mai mare statistic comparativ cu grupul 2 a fost la bolnavii din grupul 3 (р<0,001) şi semnificativ mai înalt la bolnavii din grupul 4 comparativ cu bolnavii grupurilor 2 şi 3 (р<0,001 în ambele cazuri). The concentration of circulating low molecular weight immune complexes (PEG 8%), which manifest high toxicity, was significantly higher than in healthy subjects in all patients of groups 2, 3 and 4 (р<0.001 correspondingly). The lowest concentration of CIC was in patients of group 2, statistically higher compared to group 2 was in patients of group 3 (р<0.001) and significantly higher in patients of group 4 compared to patients of groups 2 and 3 (р<0.001 in both cases).

Astfel, s-a demonstrat că la bolnavii mai severi (grupurile 3 şi 4) s-a apreciat majorarea concentraţiei complexelor imune circulante în cele 3 fracţii, fapt ce mărturiseşte o intoxicaţie mai severă la aceşti bolnavi. Thus, it was demonstrated that in more severe patients (groups 3 and 4) an increase in the concentration of circulating immune complexes was observed in the 3 fractions, which indicates a more severe intoxication in these patients.

Concentraţia CIC cu masă moleculară medie (PEG 4,2%) şi valorile CTT (coeficientul total de toxicitate) s-au modificat în paralel, adică s-au apreciat diferenţe semnificative între grupurile 2 şi 4 (р<0,001) şi grupurile 3 şi 4 (р<0,001). The concentration of CIC with average molecular weight (PEG 4.2%) and the CTT values (total toxicity coefficient) changed in parallel, i.e. significant differences were observed between groups 2 and 4 (р<0.001) and groups 3 and 4 (р<0.001).

Tabelul 5 Table 5

Indicatorii (M±m) investigaţiilor copiilor cu diferite forme de amigdalită cronică Indicators (M±m) of investigations of children with different forms of chronic tonsillitis

Indicatori Sănătoşi Amigdalită cronică compensată Amigdalită cronică decompensată Amigdalită cronică decompensată cu reumopatologie 1 2 3 4 CIC-2,5% UC 6,3±0,33 8,0±1,08◊○ 18,3±1,42□ 27,4±1,03□● CIC-4,2% UC 27,3±2,69 31,6±3,13◊ 36,0±2,43□ 58,4±1,61□● CIC-8,0% UC 121±3,2 190±17,8□◊○ 408±25,2□ 559±16,3□● CTT UC 2,82±0,276◊○ 5,04±0,298 5,77±0,153●Healthy Indicators Compensated chronic tonsillitis Decompensated chronic tonsillitis Decompensated chronic tonsillitis with rheumatic pathology 1 2 3 4 CIC-2.5% UC 6.3±0.33 8.0±1.08◊○ 18.3±1.42□ 27.4±1.03□● CIC-4.2% UC 27.3±2.69 31.6±3.13◊ 36.0±2.43□ 58.4±1.61□● CIC-8.0% UC 121±3.2 190±17.8□◊○ 408±25.2□ 559±16.3□● CTT UC 2.82±0.276◊○ 5.04±0.298 5.77±0.153●

□ - diferenţă semnificativă între sănătoşi şi bolnavi □ - significant difference between healthy and sick people

○ - diferenţă semnificativă între grupurile de bolnavi 2 şi 3 ○ - significant difference between patient groups 2 and 3

◊ - diferenţă semnificativă între grupurile de bolnavi 2 şi 4 ◊ - significant difference between patient groups 2 and 4

● - diferenţă semnificativă între grupurile de bolnavi 3 şi 4 ● - significant difference between patient groups 3 and 4

Dacă concentraţia CIC cu masă moleculară mică (PEG 8%) şi masă moleculară mare (PEG 2,5%) în toate cele trei grupe se diferenţiau statistic, atunci conform coeficientului de toxicitate, diferenţe semnificative s-au determinat între grupurile 2 şi 3 (р<0,001), de asemenea 2 şi 4 (р<0,001). Între grupurile 3 şi 4 modificări semnificative nu s-au depistat. If the concentration of low molecular weight CIC (PEG 8%) and high molecular weight (PEG 2.5%) in all three groups differed statistically, then according to the toxicity coefficient, significant differences were determined between groups 2 and 3 (р<0.001), as well as 2 and 4 (р<0.001). Between groups 3 and 4, significant changes were not detected.

Coeficientul total al toxicităţii a fost diferit semnificativ între grupurile 2 şi 3 (р<0,001), 2 şi 4 (р<0,001), de asemenea între grupurile 3 şi 4 (р<0,05). The total toxicity coefficient was significantly different between groups 2 and 3 (р<0.001), 2 and 4 (р<0.001), also between groups 3 and 4 (р<0.05).

Astfel, a fost demonstrat că la bolnavii mai severi (din grupurile 3 şi 4) conform coeficientului de toxicitate se apreciază o creştere semnificativă a concentraţiei CIC cu toate masele moleculare, ceea ce indică o intoxicaţie endogenă mai severă la aceşti bolnavi. Thus, it was demonstrated that in more severe patients (groups 3 and 4) according to the toxicity coefficient, a significant increase in the CIC concentration with all molecular masses is observed, which indicates a more severe endogenous intoxication in these patients.

Exemple concrete de realizare Concrete examples of implementation

Exemplul 1 Example 1

Bolnavul TV, 14 ani. Diagnostic: amigdalită cronică decompensată complicată cu artrită de reacţie pe fond de derivaţi intestinali. Patient TV, 14 years old. Diagnosis: chronic decompensated tonsillitis complicated by reactive arthritis due to intestinal derivatives.

Concentraţia CIC cu masă moleculară mică, medie şi mare (PEG 2,5% - 28; PEG 4,2% - 60; PEG 8,0% - 499) a fost cu mult mai mare ca la cei sănătoşi din acelaşi grup de vârstă (7,0; 27,1; 134). Coeficientul total de toxicitate (CTT) a fost de asemenea mai mare la bolnavi 5,49 în comparaţie cu subiecţii sănătoşi - 4,96 din aceeaşi grupă de vârstă. The concentration of low, medium and high molecular weight CIC (PEG 2.5% - 28; PEG 4.2% - 60; PEG 8.0% - 499) was much higher than in healthy subjects of the same age group (7.0; 27.1; 134). The total toxicity coefficient (TTC) was also higher in patients 5.49 compared to healthy subjects - 4.96 of the same age group.

Indicatori Sănătoşi Indicatorii bolnavului Raportul: bolnav/subiect sănătos CIC-2,5% UC 7,0±0,74 28 4 CIC-4,2% UC 27,1±1,46 60 2,2 CIC-8,0% UC 134±8,3 499 3,72 CTT UC 4,96 5,94 1,20 Leucocite 109/I 7,4 12,9 1,74 N.segmentate % 55 63 1,15 N.nesegmentate % 1 5 5 Limfocite % 35 18 0,51Healthy Indicators Patient Indicators Ratio: patient/healthy subject CIC-2.5% UC 7.0±0.74 28 4 CIC-4.2% UC 27.1±1.46 60 2.2 CIC-8.0% UC 134±8.3 499 3.72 CTT UC 4.96 5.94 1.20 Leukocytes 109/I 7.4 12.9 1.74 N.segmented % 55 63 1.15 N.unsegmented % 1 5 5 Lymphocytes % 35 18 0.51

Analiza leucoformulei la bolnavul dat, în comparaţie cu norma vârstnică a lui, a arătat prezenţa unui nivel înalt de leucocite (de 1,74 ori mai mare ca norma), nivel înalt al neutrofilelor segmentate (de 1,15 ori mai mare ca norma), nivel înalt al neutrofilelor nesegmentate (de 5 ori mai mare ca norma) şi o scădere pronunţată a nivelului de limfocite (aproximativ de 2 ori), ce demonstrează o deviere pronunţată a formulei leucocitare spre stânga sau o intoxicaţie pronunţată a organismului. Rezultatele obţinute confirmă nivelul înalt de intoxicaţie, care se depistează cu ajutorul metodei revendicate. The analysis of the leukoformula in this patient, compared to the age norm, showed the presence of a high level of leukocytes (1.74 times higher than the norm), a high level of segmented neutrophils (1.15 times higher than the norm), a high level of unsegmented neutrophils (5 times higher than the norm) and a pronounced decrease in the level of lymphocytes (approximately 2 times), which demonstrates a pronounced deviation of the leukocyte formula to the left or a pronounced intoxication of the body. The results obtained confirm the high level of intoxication, which is detected using the claimed method.

Exemplul 2 Example 2

Bolnavul ŞA, 5 ani. Diagnostic: amigdalită cronică decompensată. Patient SA, 5 years old. Diagnosis: chronic decompensated tonsillitis.

Indicii Sănătoşi Indicatorii bolnavului Raportul: bolnav/subiect sănătos CIC-2,5% UC 3,5±0,27 8 2,29 CIC-4,2% UC 18,7±0,68 39 2,09 CIC-8,0% UC 86±2,55 145 1,69 CTT UC 4,55 4,02 0,88 Leucocite 109/I 9,2 10,9 1,18 N.segmentate % 36 40 1,11 N.nesegmentate % 2,8 6 2,14 Limfocite % 51 46 0,90Healthy Indices Patient indicators Ratio: sick/healthy subject CIC-2.5% UC 3.5±0.27 8 2.29 CIC-4.2% UC 18.7±0.68 39 2.09 CIC-8.0% UC 86±2.55 145 1.69 CTT UC 4.55 4.02 0.88 Leukocytes 109/I 9.2 10.9 1.18 N.segmented % 36 40 1.11 N.unsegmented % 2.8 6 2.14 Lymphocytes % 51 46 0.90

Concentraţia CIC cu masă moleculară mică, medie şi mare (PEG 2,5% - 8; PEG 4,2% - 39; PEG 8,0% - 145) a fost cu mult mai mare ca la subiecţii sănătoşi din acelaşi grup de vâstă (3,5; 18,7; 86). Coeficientul total de toxicitate (CTT) de asemenea nu a fost mărit (la bolnav 4,02, la subiecţii sănătoşi 4,55) comparativ cu copiii sănătoşi din aceeaşi grupă de vârstă. Astfel, la bolnavul dat s-a apreciat o intoxicaţie endogenă medie. The concentration of CIC with low, medium and high molecular weight (PEG 2.5% - 8; PEG 4.2% - 39; PEG 8.0% - 145) was much higher than in healthy subjects of the same age group (3.5; 18.7; 86). The total toxicity coefficient (TTC) was also not increased (in the patient 4.02, in healthy subjects 4.55) compared to healthy children of the same age group. Thus, in this patient an average endogenous intoxication was assessed.

Analiza leucoformulei la bolnavul dat, în comparaţie cu norma vârstnică a lui, a arătat prezenţa unui nivel mai scăzut de leucocite (de 1,18 ori mai mare ca norma), de neutrofile segmentate (de 1,11 ori mai mare ca norma) şi de neutrofile nesegmentate (de 2,14 ori mai mare ca norma), precum şi o scădere nepronunţată a nivelului de limfocite, în comparaţie cu primul exemplu, ce demonstrează o deviere nepronunţată a formulei leucocitare spre stânga sau o intoxicaţie a organismului de nivel mediu. Rezultatele obţinute confirmă nivelul mediu de intoxicaţie, care se depistează cu ajutorul metodei revendicate. The analysis of the leukoformula in this patient, in comparison with the age norm, showed the presence of a lower level of leukocytes (1.18 times higher than the norm), segmented neutrophils (1.11 times higher than the norm) and unsegmented neutrophils (2.14 times higher than the norm), as well as a mild decrease in the level of lymphocytes, in comparison with the first example, which demonstrates a mild deviation of the leukocyte formula to the left or a moderate intoxication of the body. The results obtained confirm the moderate level of intoxication, which is detected using the claimed method.

Exemplul 3 Example 3

Bolnavul ZN, 10 ani. Diagnostic: amigdalită cronică decompensată. Patient ZN, 10 years old. Diagnosis: chronic decompensated tonsillitis.

Indici Sănătoşi Indicatorii bolnavului Raportul: bolnav/subiect sănătos CIC-2,5% UC 5,3±0,46 24 4,5 CIC-4,2% UC 23,9±0,91 21 0,9 CIC-8,0% UC 118±4,2 149 1,26 CTT UC 4,88 3,74 0,77 Leucocite 109/I 8,4 8,8 1,04 N.segmentate % 43,8 44 1,00 N.nesegmentate % 1,78 3 1,68 Limfocite % 45 43 0,95Healthy Indices Patient indicators Ratio: sick/healthy subject CIC-2.5% UC 5.3±0.46 24 4.5 CIC-4.2% UC 23.9±0.91 21 0.9 CIC-8.0% UC 118±4.2 149 1.26 CTT UC 4.88 3.74 0.77 Leukocytes 109/I 8.4 8.8 1.04 N.segmented % 43.8 44 1.00 N.unsegmented % 1.78 3 1.68 Lymphocytes % 45 43 0.95

Concentraţia CIC cu masă moleculară mică, medie şi mare (PEG 2,5% - 24; PEG 4,2% - 38; PEG 8,0% - 234) a fost cu mult mai mare ca la subiecţii sănătoşi din acelaşi grup de vâstă. Dar, analizând bolnavul conform coeficienţilor de toxicitate, CTT de asemenea nu a fost mărit (la bolnav 3,74, la subiecţii sănătoşi 4,88) comparativ cu copiii sănătoşi din aceeaşi grupă de vârstă. Astfel, la bolnavul dat s-a apreciat o intoxicaţie endogenă mică. The concentration of CIC with low, medium and high molecular weight (PEG 2.5% - 24; PEG 4.2% - 38; PEG 8.0% - 234) was much higher than in healthy subjects of the same age group. However, analyzing the patient according to the toxicity coefficients, CTT was also not increased (in the patient 3.74, in healthy subjects 4.88) compared to healthy children of the same age group. Thus, a low endogenous intoxication was assessed in this patient.

Analiza leucoformulei la bolnavul dat, în comparaţie cu norma vârstnică a lui, a arătat prezenţa nivelului de leucocite aproape de normă (de 1,04 ori mai mare ca norma), nivelul neutrofilelor segmentate fiind acelaşi ca la persoanele sănătoase, un nivel mai scăzut al neutrofilelor nesegmentate (de 1,68 ori mai mare ca norma) şi acelaşi nivel de limfocite, ca la persoanele sănătoase, în comparaţie cu exemplul doi, ce demonstrează o deviere minimală a formulei leucocitare spre stânga sau o intoxicaţie de nivel minim a organismului. The analysis of the leukocyte formula in this patient, compared to the norm for his age, showed the presence of leukocyte levels close to normal (1.04 times higher than normal), the level of segmented neutrophils being the same as in healthy people, a lower level of unsegmented neutrophils (1.68 times higher than normal) and the same level of lymphocytes, as in healthy people, compared to the second example, which demonstrates a minimal deviation of the leukocyte formula to the left or a minimal level of intoxication of the body.

1. Гриневич Ю. А., Алферов А. Н. Определение иммунных комплексов в крови онкологических больных. Лабораторное дело, 1981, №8, р.493-494 1. Гриневич Ю. A., Alferov A. N. Determination of immune complexes in the blood of oncological patients. Laboratory work, 1981, №8, p.493-494

2. RU 2415430 C1 2011.03.27 2. RU 2415430 C1 2011.03.27

Claims

Method for determining the degree of endogenous intoxication in children with chronic tonsillitis, which consists of collecting blood, separating the blood serum and introducing 50 µl of serum into three test tubes, to which 100 µl of boric buffer solution and 2.5%, 4.2% and 8.0% polyethylene glycol (PEG) solution are added, and in the fourth control test tube 50 µl of serum and 100 µl of boric buffer solution are introduced, then the test tubes are incubated for 15 min at room temperature, after which the optical density is determined at a wavelength of 340 nm, and the concentration of circulating immune complexes (CIC) in each test tube is determined according to the formula:

CIC = DOEDS-DOEDC × 1000,

where:

DOEDS - optical density in the study tube, in UC;

DOEDC - optical density in the control tube, in UC,

if in the test tube with the PEG 2.5% CIC concentration is greater than 10 CU, with the PEG 4.2% CIC concentration is greater than 40 CU and with the PEG 8.0% CIC concentration is greater than 240 CU, a high degree of endogenous intoxication is diagnosed, if in the test tube with the PEG 2.5% CIC concentration is less than 10 CU, with the PEG 4.2% CIC concentration is less than 40 CU and with the PEG 8.0% CIC concentration is less than 240 CU - an average degree of endogenous intoxication, and if in the test tube with the PEG 2.5% CIC concentration is greater than 10 CU, with the PEG 4.2% CIC concentration is less than 40 CU and with the PEG 8.0% CIC concentration is less than 240 CU - a minimum degree of endogenous intoxication.