MD1055Z - Procedeu de determinare a sexului la plantele de Actinidia arguta cultivate in vitro - Google Patents
Procedeu de determinare a sexului la plantele de Actinidia arguta cultivate in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- MD1055Z MD1055Z MDS20160017A MDS20160017A MD1055Z MD 1055 Z MD1055 Z MD 1055Z MD S20160017 A MDS20160017 A MD S20160017A MD S20160017 A MDS20160017 A MD S20160017A MD 1055 Z MD1055 Z MD 1055Z
- Authority
- MD
- Moldova
- Prior art keywords
- peroxidases
- spectrum
- vitro
- determining
- plant
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 244000298800 Actinidia arguta Species 0.000 title claims abstract description 11
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims abstract description 17
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 15
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims abstract description 7
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000002803 maceration Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 5
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N benzidine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000013019 agitation Methods 0.000 claims description 2
- 230000020509 sex determination Effects 0.000 claims 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 abstract 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 abstract 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 abstract 1
- 241000219068 Actinidia Species 0.000 description 5
- 235000009434 Actinidia chinensis Nutrition 0.000 description 5
- 235000009436 Actinidia deliciosa Nutrition 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 5
- 235000016416 Actinidia arguta Nutrition 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 3
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 2
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 2
- WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N hypochlorite Chemical compound Cl[O-] WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000005337 ground glass Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la biotehnologie, în special la un procedeu de determinare a sexului la plantele de Actinidia arguta cultivate in vitro.Procedeul, conform invenţiei, constă în determinarea spectrului electroforetic al peroxidazelor în frunzele plantei, obţinute la inocularea mugurilor laterali ai minibutaşilor şi cultivarea lăstarilor obţinuţi cu inducerea rizogenezei pe un mediu nutritiv, prin maceraţia frunzelor plantei în soluţie tampon 0,05 M Tris-HCl, agitarea ulterioară şi separarea extractului prin centrifugare, disc-electroforeza extractului în tuburi cu gel de poliacrilamidă cu obţinerea spectrului electroforetic al peroxidazelor şi developarea benzilor, totodată dacă spectrul obţinut conţine 8 peroxidaze, planta este de gen feminin, iar dacă conţine 4 peroxidaze - de gen masculin.
Description
Invenţia se referă la biotehnologie, în special la un procedeu de determinare a sexului la plantele de Actinidia arguta cultivate in vitro.
În literatura de specialitate sexul plantelor la Actinidia arguta poate fi identificat numai după morfologia florilor, adică la momentul primului an de înflorire, care are loc la 4…6 ani.
Este cunoscut procedeul de determinare a sexului în baza spectrului electroforetic al peroxidazelor (PO) în ţesuturile calusului, lăstarilor şi rădăcinilor de Actinidia deliciosa in vitro feminine şi masculine. Pentru obţinerea extractelor enzimatice s-a folosit soluţia tampon de 0,15 M Tris-HCl, suplimentată cu 6 mM acid ascorbic, 6 mM hipoclorit de cisteină şi 0,5 M zaharoză, pH=8,3. Extractele omogenizate au fost centrifugate timp de 5 min la 12 000 g şi temperatura de -4°C. Supernatantul a fost folosit în analizele enzimatice. Spectrele PO au fost obţinute prin efectuarea electroforezei în tuburi cu gel de poliacrilamidă 7%, pH=8,9. Vizualizarea benzilor corespunzătoare ale PO s-a efectuat cu utilizarea 0,1% benzidină în 0,1 M acetat de sodiu, pH=5,5, cu adaos de 0,1% de H2O2. Însă metoda menţionată, comparativ cu metoda propusă, are unele deosebiri şi neajunsuri.
Deosebirea dintre specii. În procedeul cunoscut s-a studiat Actinidia deliciosa, iar în procedeul propus s-a studiat Actinidia arguta. Speciile respective se deosebesc după mai multe caractere morfo-fiziologice.
Fazele de dezvoltare a inoculilor cultivaţi in vitro, precum şi conţinutul mediilor de cultivare. Pentru activarea şi obţinerea ţesuturilor feminine şi masculine de Actinidia deliciosa s-a aplicat procedeul de cultivare constituit din două etape, cu o perioadă lungă de propagare, fiind folosite două tipuri de medii de cultivare. În procedeul propus, obţinerea minibutaşilor feminini şi masculini in vitro este posibilă într-o singură etapă, cu utilizarea unui singur mediu de cultivare (Brevet MD 605 Z 2013.10.31).
Spre deosebire de spectrele electroforetice ale PO studiate la Actinidia deliciosa din celulele calusului nediferenţiat, lăstarilor (2,5…3 cm) şi rădăcinilor la etapele incipiente de dezvoltare, în procedeul propus, pentru obţinerea spectrelor electroforetice ale PO s-au folosit frunze de Actinidia arguta ale minibutaşilor feminini şi masculini, cultivaţi in vitro, cu toate organele vegetative dezvoltate. Fiecare minibutaş de Actinidia arguta avea înălţimea de aproximativ 10 cm şi 7…8 perechi de frunze, fiind la etapa finală de dezvoltare in vitro, cu transferul ulterior în condiţii ex vitro.
Spre deosebire de componenţa soluţiei tampon folosită în cea mai apropiată soluţie pentru obţinerea extractelor enzimatice, în procedeul propus a fost utilizată soluţia tampon de 0,05 M Tris HCl, fără adaosuri, cu pH=6,8. Acesta este un efort mai puţin costisitor faţă de cea mai apropiată soluţie.
Neajunsurile procedeului cunoscut menţionat diminuează exactitatea şi productivitatea, sporesc eforturile financiare şi cele umane, depuse pentru obţinerea rezultatelor.
Problema pe care o rezolvă invenţia constă în determinarea sexului la plante de Actinidia arguta la etapa de dezvoltare completă a organogenezei in vitro, ce permite de a identifica plantele feminine cu 4…5 ani înaintea înfloririi lor, ceea ce asigură accelerarea procesului de selecţie la această specie cu cel puţin 4 ani.
Invenţia soluţionează problema prin aceea că se propune un procedeu de determinare a sexului la plantele de Actinidia arguta cultivate in vitro, care constă în determinarea spectrului electroforetic al peroxidazelor în frunzele plantei, obţinute la inocularea mugurilor laterali ai minibutaşilor şi cultivarea lăstarilor obţinuţi cu inducerea rizogenezei pe un mediu nutritiv, prin maceraţia frunzelor plantei în soluţie tampon 0,05 M Tris-HCl, în raport de 1:2 respectiv, la un pH=6,8, agitarea ulterioară în decurs de 20 min şi separarea extractului prin centrifugare la 15000 g timp de 15 min la temperatura de -4°C, disc-electroforeza extractului în tuburi cu gel de poliacrilamidă de 7,5%, în decurs de 3 ore la 2,5 mA/tub şi 300 V cu obţinerea spectrului electroforetic al peroxidazelor, developarea benzilor cu soluţie de 0,1% de benzidină în 0,2 M acetat de sodiu, la un pH=4,8, suplimentată cu 0,1% H2O2, totodată dacă spectrul obţinut conţine 8 peroxidaze, planta este de gen feminin, iar dacă conţine 4 peroxidaze - de gen masculin.
Rezultatul invenţiei constă în posibilitatea de a determina sexul minibutaşilor de Actinidia arguta la etapa completă de dezvoltare a organogenezei in vitro, cu transferul ulterior în condiţii ex vitro, identificarea plantelor feminine cu 4…5 ani înaintea înfloririi lor, ceea ce asigură accelerarea procesului de selecţie la această specie cu cel puţin 4 ani.
Exemplu de realizare a invenţiei
Pentru obţinerea extractelor enzimatice s-au utilizat frunze de plantule masculine şi feminine, obţinute la inocularea mugurilor laterali ai minibutaşilor şi cultivarea lăstarilor obţinuţi cu inducerea rizogenezei pe un mediu nutritiv. Materialul vegetal a fost macerat cu sticlă pisată în prezenţa soluţiei tampon 0,05 M Tris HCl, pH=6,8, în raport 1:2. Apoi extractele omogenizate au fost agitate 20 min şi centrifugate 15 min la 15000 g, la temperatura de -4°C. Supernatantul a servit drept extract enzimatic pentru etapele ulterioare ale experienţelor.
Studiul spectrului electroforetic al PO s-a realizat prin utilizarea disc-electroforezei în tuburi cu gel de poliacrilamidă de 7,5%, în condiţii native, în conformitate cu metoda (Davis B.J.: Disc electrophoresis. II. Method and application to human serum proteins. - Ann. New York Aead. Sei., 1964, vol. 121, p. 404-427). În fiecare tub s-au introdus câte 0,1 ml extract enzimatic. Electroforeza a fost efectuată în frigider la temperatura +6°C pe parcursul a 3 ore, la 300 V şi 2,5 mA/tub. Developarea benzilor s-a realizat cu soluţie de 0,1% benzidină în 0,2 M acetat de sodiu, pH= 4,8, cu adaos de 0,1% H2O2. Fotografierea s-a realizat cu utilizarea sistemului de documentare - Vilber Lourmat. Rezultatele obţinute sunt prezentate în figură. Pe spectrul electroforetic al PO din figură sunt identificate nouă peroxidaze (PO1, PO2, PO3, PO4, PO5, PO6, PO7, PO8, PO9), dintre care cinci sunt specifice numai plantelor feminine, una este specifică plantelor masculine, iar trei sunt comune, ce ne permite să tragem concluzia că dacă spectrul obţinut conţine 8 peroxidaze, planta este de gen feminin, iar dacă conţine 4 peroxidaze - de gen masculin.
1. Auxtova O., Samaj J., Cholvadova B., Khandlova E. Isoperoxidase and isopolyphenol oxidase spectra in male and female tissues of Actinidia deliciosa in vitro. Biologia Plantarum, 1994, vol. 94(4), p. 535-541
Claims (1)
- Procedeu de determinare a sexului la plantele de Actinidia arguta cultivate in vitro, care constă în determinarea spectrului electroforetic al peroxidazelor în frunzele plantei, obţinute la inocularea mugurilor laterali ai minibutaşilor şi cultivarea lăstarilor obţinuţi cu inducerea rizogenezei pe un mediu nutritiv, prin maceraţia frunzelor plantei în soluţie tampon 0,05 M Tris-HCl, în raport de 1:2 respectiv, la un pH=6,8, agitarea ulterioară în decurs de 20 min şi separarea extractului prin centrifugare la 15000 g timp de 15 min la temperatura de -4°C, disc-electroforeza extractului în tuburi cu gel de poliacrilamidă de 7,5%, în decurs de 3 ore la 2,5 mA/tub şi 300 V cu obţinerea spectrului electroforetic al peroxidazelor, developarea benzilor cu soluţie de 0,1% de benzidină în 0,2 M acetat de sodiu, la un pH=4,8, suplimentată cu 0,1% H2O2, totodată dacă spectrul obţinut conţine 8 peroxidaze, planta este de gen feminin, iar dacă conţine 4 peroxidaze - de gen masculin.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20160017A MD1055Z (ro) | 2016-02-12 | 2016-02-12 | Procedeu de determinare a sexului la plantele de Actinidia arguta cultivate in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20160017A MD1055Z (ro) | 2016-02-12 | 2016-02-12 | Procedeu de determinare a sexului la plantele de Actinidia arguta cultivate in vitro |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MD1055Y MD1055Y (ro) | 2016-07-31 |
| MD1055Z true MD1055Z (ro) | 2017-02-28 |
Family
ID=56549960
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MDS20160017A MD1055Z (ro) | 2016-02-12 | 2016-02-12 | Procedeu de determinare a sexului la plantele de Actinidia arguta cultivate in vitro |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| MD (1) | MD1055Z (ro) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111394495B (zh) * | 2020-03-02 | 2021-06-18 | 中国科学院武汉植物园 | 用于猕猴桃商业品种的性别鉴定的通用分子标记引物及应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD605Y (ro) * | 2012-07-09 | 2013-03-31 | Inst De Genetica Si Fiziol A Plantelor Al Academiei De Stiinte A Moldovei | Procedeu de micropropagare a plantelor de Actinidia arguta in vitro |
-
2016
- 2016-02-12 MD MDS20160017A patent/MD1055Z/ro not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD605Y (ro) * | 2012-07-09 | 2013-03-31 | Inst De Genetica Si Fiziol A Plantelor Al Academiei De Stiinte A Moldovei | Procedeu de micropropagare a plantelor de Actinidia arguta in vitro |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Auxtova O., Samaj J., Cholvadova B., Khandlova E. Isoperoxidase and isopolyphenol oxidase spectra in male and female tissues of Actinidia deliciosa in vitro. Biologia Plantarum, 1994, vol. 94(4), p. 535-541 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MD1055Y (ro) | 2016-07-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Winkelmann | Somatic versus zygotic embryogenesis: learning from seeds | |
| Keck et al. | The widespread occurrence of polyphosphate in lower plants | |
| Reis et al. | Pretreatment free of 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid improves the differentiation of sugarcane somatic embryos by affecting the hormonal balance and the accumulation of reserves | |
| Souza et al. | Optimization of germination and initial quality of seedlings of Prunus persica tree rootstocks | |
| Vilanova Neta et al. | Bromelain enzyme from pineapple: In vitro activity study under different micropropagation conditions | |
| Aragón et al. | The physiology of ex vitro pineapple (Ananas comosus L. Merr. var MD-2) as CAM or C3 is regulated by the environmental conditions: proteomic and transcriptomic profiles | |
| Salazar-González et al. | In-planta transient transformation of avocado (Persea americana) by vacuum agroinfiltration of aerial plant parts | |
| Majourhat et al. | Diversity of leaf peroxidases in date palm (Phoenix dactylifera L.) as revealed in an example of marginal (seedling derived) palm groves | |
| MD1055Z (ro) | Procedeu de determinare a sexului la plantele de Actinidia arguta cultivate in vitro | |
| Jin et al. | Budding mutation reprogrammed flavonoid biosynthesis in jujube by deploying MYB41 and bHLH93 | |
| CN104694532A (zh) | 一种橡胶树白粉病菌rna的提取方法 | |
| Betekhtin et al. | Stability and instability processes in the calli of Fagopyrum tataricum that have different morphogenic potentials | |
| CN107828912A (zh) | 一种黄瓜黑星病菌lamp检测引物及检测方法 | |
| Krsnik Rasol et al. | Isoperoxidases-early indicators of somatic embryoid differentiation in pumpkin tissue | |
| CN104611404B (zh) | 鉴定甘蓝型冬油菜和芥菜型冬油菜杂交种的方法 | |
| CN114246081A (zh) | 一种单倍体诱导剂及其使用方法 | |
| Imamura et al. | High concentrations of sucrose induce overwintering bud formation in gentian plantlets cultured in vitro | |
| Haghighi et al. | Expression of flowering repressor gene CsSVP, carbohydrates, and antioxidants affected by plant growth regulators in saffron | |
| CN108165652A (zh) | 用于香榧苗期性别鉴定的特异性分子标记tgmi001 | |
| Samatova et al. | Phenological and morphological adaptations of Japanese quince (Chaenomeles japonica—(Thunb.) Lindl. ex Spach.)[Rosaceae]: insights from palynology and leaf histology | |
| Hussien et al. | Synthesis and characterization of artificial seeds plantlets of in vitro male Populus alba | |
| Kumari | A Simple Procedure for Isolation, Culture of Protoplast and Plant Regeneration | |
| CN112410473A (zh) | 一种柑桔黄龙病和黄化脉明病病原物的pcr引物组合及检测方法 | |
| GRZYBOWSKI et al. | Physiological potential and conservation of muruci (Byrsonima crassifolia) seeds | |
| Sarkar | Biochemical Changes in Embryogenic and Nonembryonic Callus of Glycyrrhiza glabra L. during Somatic Embryogenesis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG9Y | Short term patent issued | ||
| KA4Y | Short-term patent lapsed due to non-payment of fees (with right of restoration) |