MD1014Z - Metodă de diagnostic diferenţiat al intoxicaţiei endogene, cauzată de streptococul b-hemolitic sau de micobacteria tuberculozei la diferite grupuri de vârstă - Google Patents

Metodă de diagnostic diferenţiat al intoxicaţiei endogene, cauzată de streptococul b-hemolitic sau de micobacteria tuberculozei la diferite grupuri de vârstă Download PDF

Info

Publication number
MD1014Z
MD1014Z MDS20150071A MDS20150071A MD1014Z MD 1014 Z MD1014 Z MD 1014Z MD S20150071 A MDS20150071 A MD S20150071A MD S20150071 A MDS20150071 A MD S20150071A MD 1014 Z MD1014 Z MD 1014Z
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
endogenous intoxication
tnf
diagnosed
intoxication caused
hemolytic streptococcus
Prior art date
Application number
MDS20150071A
Other languages
English (en)
Russian (ru)
Inventor
Сергей ГИНДА
Ион АБАБИЙ
Лучиан ДАНИЛОВ
Стела КУЛЬЧИЦКИЙ
Эвелина ЛЕСНИК
Анжела ГУИЛА
Original Assignee
Мспу Институт Фтизиопульмонологии "Chiril Draganiuc"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Мспу Институт Фтизиопульмонологии "Chiril Draganiuc" filed Critical Мспу Институт Фтизиопульмонологии "Chiril Draganiuc"
Priority to MDS20150071A priority Critical patent/MD1014Z/ro
Publication of MD1014Y publication Critical patent/MD1014Y/ro
Publication of MD1014Z publication Critical patent/MD1014Z/ro

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

Invenţia se referă la medicină, în special la imunologie şi poate fi utilizată pentru diagnosticul diferenţiat al intoxicaţiei endogene, cauzată de streptococul β-hemolitic sau de micobacteria tuberculozei la diferite grupuri de vârstă.Conform invenţiei, metoda constă în aceea că se prepară o suspensie de leucocite prelevate de la pacient, se determină cantitatea finală a biomarkerului TNF-α conform formulei revendicate şi în cazul în care la copii de până la 18 ani pentru TNF-α final se determină valori cuprinse în intervalul 2,0…2,07 se diagnostichează o intoxicaţie endogenă cauzată de streptococul β-hemolitic, iar în cazul în care valorile sunt mai mari de 2,08 se diagnostichează o intoxicaţie endogenă cauzată de micobacteria tuberculozei, în cazul când la maturi de peste 18 ani pentru TNF-α final se determină valori cuprinse în intervalul 6,55…6,87 se diagnostichează o intoxicaţie endogenă cauzată de streptococul β-hemolitic, iar când se obţin valori mai mari de 6,88 se diagnostichează o intoxicaţie endogenă cauzată de micobacteria tuberculozei.

Description

Invenţia se referă la medicină, în special la imunologie şi poate fi utilizată pentru diagnosticul diferenţiat al intoxicaţiei endogene cauzate de streptococul β-hemolitic sau de micobacteria tuberculozei la diferite grupuri de vârstă.
În calitate de cea mai apropiată soluţie este cunoscută metoda de determinare a intoxicaţiei endogene, care constă în determinarea indicelui leucocitar al intoxicaţiei (ILI), propusă de [Kalf-Khalif, 1941]. Metoda este bazată pe cuantificarea diferitor grupări celulare din şirul leucocitar sangvin, iar ILI se determină în baza relaţiei:
,
unde: MIE - mielocite, T - tinere, N - neutrofile nesegmentate, S - neutrofile segmentate, CP - celule plasmatice, М - monocite, L - limfocite, E - eozinofile.
În normă acest indice constituie 0,3…1,5 unităţi.
În procesele inflamatorii, indicele leucocitar al intoxicaţiei este crescut. Creşterea nivelului ILI până la 4…9 indică asupra componentei bacteriene ponderabile a intoxicaţiei endogene. Creşterea ILI este determinată de dispariţia eozinofilelor, mărirea conţinutului de componente leucocitare segmentate, celule plasmatice şi micşorarea numărului de limfocite. Indicele leucocitar al intoxicaţiei Kalf-Khalif ia în calcul un şir de caracteristici bazate pe apartenenţa funcţională a diferitor grupuri celulare incluse în formula leucocitară. ILI este un indice simplu, accesibil şi destul de informativ cu privire la gravitatea intoxicaţiei endogene, utilizat în practica clinică.
Dezavantajul metodei descrise constă în aceea că exactitatea ei scade semnificativ odată cu progresarea intoxicaţiei endogene care este însoţită de suprimarea mecanismelor de protecţie imună şi formarea semnelor de insuficienţă organică. De asemenea, drept neajuns al metodei poate fi considerat şi faptul că odată cu apariţia la bolnavi a semnelor de alergizare (conţinut înalt de eozinofile), formula de calcul al ILI nu funcţionează, deci nu poate fi aplicată, totodată nu se determină specificul intoxicaţiei endogene şi nu poate fi făcut un diagnostic diferenţiat.
Problema pe care o rezolvă invenţia propusă constă în elaborarea unei metode de determinare a specificităţii intoxicaţiei endogene care ar fi eficientă la pacienţii cu niveluri înalte ale eozinofilelor la diferite grupuri de vârstă şi ar putea fi utilizată pe larg în practica de laborator.
Metoda, conform invenţiei, înlătură dezavantajele menţionate mai sus prin aceea că se prepară o suspensie de leucocite prelevate de la pacient, se determină cantitatea finală a biomarkerului TNF-α conform formulei:
x10000,
în cazul în care la copii de până la 18 ani pentru TNF-α final se determină valori cuprinse în intervalul 2,0…2,07 se diagnostichează o intoxicaţie endogenă cauzată de streptococul β-hemolitic, iar în cazul în care valorile sunt mai mari de 2,08 se diagnostichează o intoxicaţie endogenă cauzată de micobacteria tuberculozei, în cazul când la maturi de peste 18 ani pentru TNF-α final se determină valori cuprinse în intervalul 6,55…6,87 se diagnostichează o intoxicaţie endogenă cauzată de streptococul β-hemolitic, iar când se obţin valori mai mari de 6,88 se diagnostichează o intoxicaţie endogenă cauzată de micobacteria tuberculozei.
Rezultatul invenţiei constă în crearea unei metode de determinare a specificităţii intoxicaţiei endogene eficiente la pacienţii cu niveluri înalte ale eozinofilelor la diferite grupuri de vârstă care ar putea fi utilizată pe larg în practica de laborator.
Intoxicaţia endogenă este un sindrom polietiologic şi polipatogen caracterizat prin acumularea în ţesuturi şi lichidele biologice a substanţelor endogene toxice.
Printre sursele de endotoxine pot fi nominalizate:
- produsele dezintegrării celulare, improprii sistemului imunitar, antigenii şi complexele agresoare imune;
- toxinele microbiene (exo- şi endotoxinele) şi alţi factori ai patogenităţii microorganismelor (patogene, condiţionat patogene, nepatogene);
- mediatorii inflamaţiei, citokinele, prostaglandinele, leucotrienele, proteinele fazei acute ş.a. compuşi biologic activi.
Unul dintre mediatorii endogeni de bază ai inflamaţiei şi posibil unul dintre agenţii universali implicaţi în realizarea sindromului intoxicaţiei endogene este factorul de necroză tumorală, exprimat prin cele două forme ale sale - TNF-α şi TNF-β. Este capabil să inducă in vivo necroza hemoragică a unor celule tumorale, fără a afecta celulele normale. Pe lângă aceasta, induce şocul dacă elaborarea lui este condiţionată de endotoxinele bacteriene.
În condiţii normale factorul de necroză tumorală este elaborat de către multe tipuri de celule (fagocitele mononucleare, limfocitele B, limfocitele T, celulele NK (natural killer), leucocitele polimorfonucleare, mastocite şi bazofile, celulele endoteliului vaselor).
Titrurile sale cresc la infectare, când în organism pătrund endotoxinele bacteriene. Concentraţiile înalte, determinate în caz de sepsis gram-negativ, reprezintă cauza principală a instalării şocului septic.
Din aceste considerente, TNF-α a fost selectat în calitate de marker biologic al intoxicaţiei endogene.
Avantajele metodei revendicate constau în:
- determinarea specificităţii intoxicaţiei endogene, care este imposibilă în cazul aplicării celei mai apropiate metode;
- aplicarea metodei revendicate permite a efectua analiza diferenţiată între etiologia streptococică şi cea tuberculoasă a intoxicaţiei endogene;
- metoda propusă a identificat intoxicaţia endogenă specifică de 22 ori mai frecvent la copiii cu tuberculoză şi de 2 ori mai frecvent la maturii cu tuberculoză la antigenii micobacteriei tuberculoase, comparativ cu aplicarea indicelui leucocitar al intoxicaţiei Kalf-Khalif;
- exprimarea producţiei induse de TNF-α în pg/ml/10000 celule permite obţinerea unor rezultate precise indiferent de cantitatea de celule izolate la un bolnav sau altul, sau de pierderile de celule la procedura de spălare.
Exemplu concret de realizare a invenţiei
Metoda revendicată constă din următoarele etape: izolarea celulelor, cultivarea şi determinarea cantităţii biomarkerului TNF-α.
Etapa 1. Într-o eprubetă sterilă se prelevă sânge din vena cubitală în volum de 3,0 ml. În prealabil, în eprubetă se toarnă soluţie de heparină pe mediul 199, reieşind din calculul 25 UN la 1,0 ml sânge. Se prepară amestecul pentru sedimentarea sângelui (3 părţi mediu 199 şi 1 parte gelatină 10%) în volum de 3,0 ml. Sângele şi amestecul pentru sedimentare se amestecă şi se plasează într-un termostat pentru 30 min la 37°С în poziţie verticală pentru sedimentarea eritrocitelor. După care, suprenatantul ce conţine suspensia celulară leucocitară se colectează într-o eprubetă curată şi se centrifughează timp de 10 min la o forţă relativă de centrifugare (RCF) de 175 RCF. După aceasta supernatantul se aruncă, iar celulele rămase se resuspendă în 3,0 ml mediu 199. Într-o eprubetă curată se toarnă câte 1,0 ml suspensie celulară şi se adaugă câte 2,0 ml mediu 199. În eprubetă se numără celulele după metoda standard utilizând camera Goreaev. În acest timp are loc o producere spontană de TNF-α.
Etapa 2. Cultura obţinută în etapa 1 se plasează în termostat la o temperatură de 35°…37°С şi se incubează timp de 48 ore.
Etapa 3. Cultura de celule se resuspendă în mediul pentru creştere şi se centrifughează timp de 10 min la 175 RCF. După care, se prelevă supernatantul şi prin metoda de analiză imunoenzimatică standard se determină titrul TNF-α. Pentru determinarea TNF-α în metoda propusă s-a utilizat kit-ul de reactivi ai firmei "Вектор-БЕСТ" (Federaţia Rusă).
Dat fiind că la fiecare dintre bolnavi se izolează o cantitate diferită de celule producătoare de TNF-α, pentru alinierea datelor obţinute rezultatul final al producţiei de TNF-α final se calculează în baza formulei:
x10000,
şi se exprimă în pg/ml/10000 celule.
Exemplul 1
Bolnavul A., 4 ani, diagnosticul - tonsilită cronică decompensată.
În eprubeta după incubare s-a determinat cantitatea TNF-α care a constituit 9,9 pg/ml, iar cantitatea totală a celulelor în eprubetă a constituit 48231 unităţi, respectiv rezultatul final al producţiei de TNF-α calculat este:
În cazul dat se diagnostichează o intoxicaţie endogenă cauzată de streptococul β-hemolitic.
Exemplul 2
Bolnavul B., 7 ani, diagnosticul - tonsilită cronică compensată.
În eprubeta după incubare s-a determinat cantitatea TNF-α care a constituit 15,6 pg/ml, iar cantitatea totală a celulelor în eprubetă a constituit 56486 unităţi, respectiv rezultatul final al producţiei de TNF-α calculat este:
În cazul dat se diagnostichează o intoxicaţie endogenă cauzată de micobacteria tuberculozei.
Exemplul 3
Bolnavul B., 19 ani, diagnosticul - tonsilită cronică compensată.
În eprubeta după incubare s-a determinat cantitatea TNF-α care a constituit 39,2 pg/ml, iar cantitatea totală a celulelor în eprubetă a constituit 54682 unităţi, respectiv rezultatul final al producţiei de TNF-α calculat este:
În cazul dat se diagnostichează o intoxicaţie endogenă cauzată de micobacteria tuberculozei.
1. Кальф-Калиф Я.Я. О лейкоцитарном индексе интоксикации и его практическом значении. Врачебное дело, 1941, N. 1, c. 31-35

Claims (1)

  1. Metodă de diagnostic diferenţiat al intoxicaţiei endogene, cauzată de streptococul β-hemolitic sau de micobacteria tuberculozei la diferite grupuri de vârstă care constă în aceea că se prepară o suspensie de leucocite prelevate de la pacient, se determină cantitatea finală a biomarkerului TNF-α conform formulei:
    x10000, în cazul în care la copii de până la 18 ani pentru TNF-α final se determină valori cuprinse în intervalul 2,0…2,07 se diagnostichează o intoxicaţie endogenă cauzată de streptococul β-hemolitic, iar în cazul în care valorile sunt mai mari de 2,08 se diagnostichează o intoxicaţie endogenă cauzată de micobacteria tuberculozei, în cazul când la maturi de peste 18 ani pentru TNF-α final se determină valori cuprinse în intervalul 6,55…6,87 se diagnostichează o intoxicaţie endogenă cauzată de streptococul β-hemolitic, iar când se obţin valori mai mari de 6,88 se diagnostichează o intoxicaţie endogenă cauzată de micobacteria tuberculozei.
MDS20150071A 2015-05-28 2015-05-28 Metodă de diagnostic diferenţiat al intoxicaţiei endogene, cauzată de streptococul b-hemolitic sau de micobacteria tuberculozei la diferite grupuri de vârstă MD1014Z (ro)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDS20150071A MD1014Z (ro) 2015-05-28 2015-05-28 Metodă de diagnostic diferenţiat al intoxicaţiei endogene, cauzată de streptococul b-hemolitic sau de micobacteria tuberculozei la diferite grupuri de vârstă

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDS20150071A MD1014Z (ro) 2015-05-28 2015-05-28 Metodă de diagnostic diferenţiat al intoxicaţiei endogene, cauzată de streptococul b-hemolitic sau de micobacteria tuberculozei la diferite grupuri de vârstă

Publications (2)

Publication Number Publication Date
MD1014Y MD1014Y (ro) 2016-03-31
MD1014Z true MD1014Z (ro) 2016-10-31

Family

ID=55646053

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDS20150071A MD1014Z (ro) 2015-05-28 2015-05-28 Metodă de diagnostic diferenţiat al intoxicaţiei endogene, cauzată de streptococul b-hemolitic sau de micobacteria tuberculozei la diferite grupuri de vârstă

Country Status (1)

Country Link
MD (1) MD1014Z (ro)

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MD667F1 (ro) * 1996-02-05 1997-01-31 Asociatia De Productie Aroma Rachiu (variante) Vodka (variants)
MD805F1 (ro) * 1997-03-31 1997-08-31 Inst Genetica Rep Moldova Amestec pentru tratarea semintelor de porumb inainte de semanat
RU2122739C1 (ru) * 1996-02-02 1998-11-27 Миронов Петр Иванович Способ диагностики тяжести эндогенной интоксикации при острых гнойно-септических заболеваниях у детей
MD963G2 (ro) * 1997-06-20 1999-05-31 Государственный Медицинский И Фармацевтический Университет "Nicolae Testemitanu" Республики Молдова Flosă
RU2193780C1 (ru) * 2001-04-26 2002-11-27 Саратовский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии Способ определения эндогенной интоксикации
UA52475A (uk) * 2002-06-12 2002-12-16 Інститут Хірургії Та Трансплантології Академії Медичних Наук України Спосіб діагностики ендогенної інтоксикації
MD20010417A (ro) * 2001-12-19 2003-09-30 Univ Nicolae Testemitanu Metoda de tratament antirecidivant a polipozei rinosinuzale asociata cu astmul bronsic
MD3770F1 (ro) * 2008-08-22 2008-12-31 Centrul National Stiintifico-Practic De Medicina Preventiva Metoda de profilaxie a infectiilor respiratorii virale acute nongripale
UA46403U (ru) * 2009-05-25 2009-12-25 Андрей Анатольевич Воронко Способ диагностики тяжести эндогенной интоксикации при метаболическом синдроме
RU2395087C2 (ru) * 2008-06-23 2010-07-20 Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Саровский государственный физико-технический институт" (ФГОУ ВПО"СарФТИ") Способ диагностики эндогенной интоксикации
UA53882U (ru) * 2010-03-26 2010-10-25 Винницкий Национальный Медицинский Университет Им. Н.И. Пирогова Способ определения эндогенной интоксикации организма при нарушениях толстокишечного транзита
UA61220U (ru) * 2010-12-29 2011-07-11 Украинский Научно-Исследовательский Институт Медицинской Реабилитации И Курортологии Способ определения эндогенной интоксикации

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2122739C1 (ru) * 1996-02-02 1998-11-27 Миронов Петр Иванович Способ диагностики тяжести эндогенной интоксикации при острых гнойно-септических заболеваниях у детей
MD667F1 (ro) * 1996-02-05 1997-01-31 Asociatia De Productie Aroma Rachiu (variante) Vodka (variants)
MD805F1 (ro) * 1997-03-31 1997-08-31 Inst Genetica Rep Moldova Amestec pentru tratarea semintelor de porumb inainte de semanat
MD963G2 (ro) * 1997-06-20 1999-05-31 Государственный Медицинский И Фармацевтический Университет "Nicolae Testemitanu" Республики Молдова Flosă
RU2193780C1 (ru) * 2001-04-26 2002-11-27 Саратовский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии Способ определения эндогенной интоксикации
MD20010417A (ro) * 2001-12-19 2003-09-30 Univ Nicolae Testemitanu Metoda de tratament antirecidivant a polipozei rinosinuzale asociata cu astmul bronsic
UA52475A (uk) * 2002-06-12 2002-12-16 Інститут Хірургії Та Трансплантології Академії Медичних Наук України Спосіб діагностики ендогенної інтоксикації
RU2395087C2 (ru) * 2008-06-23 2010-07-20 Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Саровский государственный физико-технический институт" (ФГОУ ВПО"СарФТИ") Способ диагностики эндогенной интоксикации
MD3770F1 (ro) * 2008-08-22 2008-12-31 Centrul National Stiintifico-Practic De Medicina Preventiva Metoda de profilaxie a infectiilor respiratorii virale acute nongripale
UA46403U (ru) * 2009-05-25 2009-12-25 Андрей Анатольевич Воронко Способ диагностики тяжести эндогенной интоксикации при метаболическом синдроме
UA53882U (ru) * 2010-03-26 2010-10-25 Винницкий Национальный Медицинский Университет Им. Н.И. Пирогова Способ определения эндогенной интоксикации организма при нарушениях толстокишечного транзита
UA61220U (ru) * 2010-12-29 2011-07-11 Украинский Научно-Исследовательский Институт Медицинской Реабилитации И Курортологии Способ определения эндогенной интоксикации

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Кальф-Калиф Я.Я. О лейкоцитарном индексе интоксикации и его практическом значении. Врачебное дело, 1941, N. 1, c. 31-35 *

Also Published As

Publication number Publication date
MD1014Y (ro) 2016-03-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Binsfeld et al. Granulocytic myeloid-derived suppressor cells promote angiogenesis in the context of multiple myeloma
Cambier et al. Atypical response to bacterial coinfection and persistent neutrophilic bronchoalveolar inflammation distinguish critical COVID-19 from influenza
Zhou et al. Platelet HMGB1 is required for efficient bacterial clearance in intra-abdominal bacterial sepsis in mice
Keller et al. Studies on the regulation of the neutrophil chemotactic response using a rapid and reliable method for measuring random migration and chemotaxis of neutrophil granulocytes
Viau et al. A highly standardized and characterized human platelet lysate for efficient and reproducible expansion of human bone marrow mesenchymal stromal cells
Léopold et al. Platelets are hyperactivated but show reduced glycoprotein VI reactivity in COVID-19 patients
Friberg et al. Measurements of natural killer (NK) activity and NK-cell quantification
US20090253134A1 (en) Cellular Pyrogen Test
Shaim et al. The cXcr4–sTaT3–il-10 Pathway controls the immunoregulatory Function of chronic lymphocytic leukemia and is Modulated by lenalidomide
Xing et al. The protective role of YTHDF1-knock down macrophages on the immune paralysis of severe sepsis rats with ECMO
Fisch et al. A photometric and plaque assay for macrophage mediated tumor cell cytotoxicity
JP6108409B2 (ja) 播種性血管内凝固症候群または感染性播種性血管内凝固症候群を検出する方法
Anselmi et al. Analysis of neutrophil responses to biological exposures
Eichelberger et al. Human neutrophil isolation and degranulation responses to Yersinia pestis infection
Otnaess et al. Plasma Lactoferrin Measured by an Enzyme‐Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Measurements on Adult and Infant Plasma
CN102735841B (zh) 一种测定Graves病患者血液中可溶性CD28含量的方法
Sakalauskiene et al. Peripheral blood leukocytes interleukin-1 beta (IL-1β) cytokine hyper-reactivity in chronic periodontitis
Glasser et al. Neutrophil migration under agarose: quantitation and variables
MD1014Z (ro) Metodă de diagnostic diferenţiat al intoxicaţiei endogene, cauzată de streptococul b-hemolitic sau de micobacteria tuberculozei la diferite grupuri de vârstă
Rake et al. A rapid method for estimation of penicillin
Tosato et al. Use of in vitro assays in selection of compatible platelet donors
JP2017108660A (ja) 末梢血好中球アポトーシス測定方法
CN112300992B (zh) 一种nk细胞培养液及多级激活nk细胞的培养方法
JP6206953B2 (ja) 成人t細胞白血病の発症し易さを試験する方法
NIELSEN Influence of five different anticoagulants on human blood monocyte isolation and functional activities

Legal Events

Date Code Title Description
FG9Y Short term patent issued
KA4Y Short-term patent lapsed due to non-payment of fees (with right of restoration)