LV15270B - Pēkšņas nāves riska prognozēšanas paņēmiens slimniekiem ar HIV un tuberkulozes (HIV/TB) duālo koinfekciju, tai skaitā IRIS sindroma gadījumā - Google Patents

Pēkšņas nāves riska prognozēšanas paņēmiens slimniekiem ar HIV un tuberkulozes (HIV/TB) duālo koinfekciju, tai skaitā IRIS sindroma gadījumā Download PDF

Info

Publication number
LV15270B
LV15270B LVP-17-46A LV170046A LV15270B LV 15270 B LV15270 B LV 15270B LV 170046 A LV170046 A LV 170046A LV 15270 B LV15270 B LV 15270B
Authority
LV
Latvia
Prior art keywords
hiv
patients
tuberculosis
infection
risk
Prior art date
Application number
LVP-17-46A
Other languages
English (en)
Other versions
LV15270A (lv
Inventor
Jeļena EGLĪTE
Oksana KOĻESOVA
Aleksandrs KOĻESOVS
Vladislavs JASINSKIS
Elvīra HAGINA
Inga JANUŠKEVIČA
Gunta STŪRE
Ksenija KRAMIČA
Baiba ROZENTĀLE
Jeļena STOROŽENKO
Ludmila VĪKSNA
Original Assignee
Rīgas Stradiņa Universitāte
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rīgas Stradiņa Universitāte filed Critical Rīgas Stradiņa Universitāte
Priority to LVP-17-46A priority Critical patent/LV15270B/lv
Publication of LV15270A publication Critical patent/LV15270A/lv
Publication of LV15270B publication Critical patent/LV15270B/lv

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G01N33/6869—Interleukin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

[001] Izgudrojums attiecas uz medicīnu, proti, uz molekulāro ģenētiku, ftiziatriju, infekcijas slimībām un var tikt izmantots pēkšņas nāves riska prognozēšanai slimniekiem ar tuberkulozes un HIV duālo infekciju (koinfekcija).
TEHNIKAS LĪMENIS [002] Pēc Pasaules Veselības Organizācijas (PVO, World Health Organization, angl.) datiem viena trešdaļa cilvēku pasaulē ir inficēta ar tuberkulozes mikrobaktērijām (Mycobacterium tuberculosis), katram no desmit inficētajiem attīstās tuberkulozes (ТВ) aktīvā forma, no tiem 14,8% pacientu ar tuberkulozi saslimst ar HIV infekciju, bet dažos reģionos saslimstība ar HIV/ТВ koinfekciju sasniedz 50-80% [1,2]. Zināms imūnās rekonstitūcijas iekaisuma sindroms IRIS (immune reconstitution inflammatory syndrome, angl.), kad slimniekiem ar HIV un tuberkulozes duālo koinfekciju, tai skaitā uz antiretrovirālās terapijas (ART - antiretroviral therapy, angl.) pielietošanas fona, atjaunojoties imunitātei un uzlabojoties vispārējam stāvoklim, pēkšņi iestājās nāve. PVO kopsavilkumā par 2014. gada rezultātiem, izpētot saslimšanu ar ТВ/HIV koinfekcijām, Indijā tika reģistrēti 38 tūkstoši pēkšņās nāves gadījumi uz 1,2 miljonu HIV/ТВ saslimušo [3].
[003] Saskaņā ar hipotēzi par imūnās atbildes reakcijas diviem galvenajiem variantiem, šūnu imūno atbildi nodrošina T-limfocītu subpopulācijas Thl šūnas (T helper cells,angl.), kas producē iekaisuma mediatorus - pro-iekaisuma citokīnus. bet humorālo imūno atbildi nodrošina T-limfocītu subpopulācija Th2 šūnas, kas lielā mērā producē pretiekaisuma citokīnus. Starpšūnu mijiedarbībā piedalās abu imūno reakciju tipu citokīnu dzimtas, piemēram IL6, TGFP, IL1, IL2, IL4, IL15, IL12p, IL10, INFy, FNOa [4ļ. Citokīnu produkcijas līdzsvara traucējumi veicina imūnsupresijas rašanos.
[004] Inficējoties ar HIV, tuberkuloze ir oportūnistiska infekcija, kas bieži attīstās cilvēkiem, inficētiem ar HIV. Tuberkuloze ir nāves iemesls katram trešajam cilvēkam ar HIV infekciju un iegūto imūndeficīta sindromu jeb AIDS (acquired immunodeficiency sindrome, angl.) [2J. HIV infekcija būtiski iespaido imūnsistēmas aktivitāti tuberkulozes gadījumā, tiek traucētas šūnu imunitātes reakcijas, makrofagu diferenciācija un aktivitāte, tiek traucēta granulācijas audu veidošanās [1].
[005] Zināmi tuberkulozes prognozēšanas un diagnostikas paņēmieni cilvēkiem bez HIV infekcijas. Tuberkulozes diagnostikai pielieto seroloģiskās imūnfermentu analīzes (IFA), nosakot antivielas pret mikobakteriālo antigēnu [5-8]. Tuberkulozes infiltratīvās formas diferenciālai diagnostikai pēta saistaudu metabolisma rādītājus: oksiprolīna (OP) un glikozamīnoglikānu (GAG) saturu [9].
[006] Zināmie prognozēšanas un diagnostikas paņēmieni, nosakot antivielas pret mikobakterilo antigēnu, un, nosakot saistaudu rādītājus slimniekiem, neļauj noteikt pēkšņas nāves riska prognozēšanu slimniekiem ar HIV un tuberkulozes duālo koinfekciju, tai skaitā IRIS sindroma gadījumā.
[007] Aizsardzība pret tuberkulozes infekciju ir saistīta ar T-limfocītu subpopulācijas Thl šūnām (T helper cells, angl.), kas producē iekaisuma mediatorus - pro-iekaisuma citokīnus. Sekrēciju līmeņa, pro-iekaisuma citokīnu interleikīna IL-4 un interleikīna IL-8 līmeņa palielināšanos asins serumā raksturo imūnās aktivācijas pakāpi tuberkulozes gadījumā. Zināms ТВ/HIV koinfekcijas diagnostikas paņēmiens [10], nosakot citokīnu TNFa, IL6 un IL10 līmeni asins sērumā. Četrdesmit slimniekiem ar HIV/ТВ koinfekciju veica norādīto seruma imūno marķieru monitoringu periferajās asinīs, pielietojot imūnfermentu analīzi (IFA). Noteica pro-iekaisuma citokīnu TNFa un IL6 hiperprodukciju, pretiekaisuma citokīna IL10 saturs mainījās nedaudz [10].
[008] Zināmais seruma imūno marķieru TNFa, IL6 un IL10 monitoringa paņēmiens, neļauj noteikt pēkšņas nāves riska prognozēšanu slimniekiem ar HIV un tuberkulozes duālo koinfekciju, tai skaitā IRIS sindroma gadījumā.
[009] Zināms imūnās rekonstrukcijas iekaisuma sindroma IRIS (immune reconstitution inflammatory syndrome, angl.) diagnostikas paņēmiens slimniekiem ar AIDS, pēc kura nosaka imūnos marķierus no deviņām gēnu kompozīcijām [11]. Zināmais imūnās rekonstitūcijas iekaisuma sindroma IRIS (immune reconstitution inflammatory syndrome, angl.) diagnostikas paņēmiens, kurā lieto imūnos marķierus no deviņām gēnu kompozīcijām, neļauj noteikt pēkšņas nāves riska prognozēšanu slimniekiem ar HIV un tuberkulozes duālo koinfekciju, tai skaitā IRIS sindroma gadījumā.
[010] HIV/ТВ duālās koinfekcijas ārstēšanai, lieto medikamentus sekojošā kombinācijā: tuberkulozes ārstēšanai - etambutols, izoniazīds, pirazīnamīds un rifampicins. Vienlaikus pielieto antiretrovirālo terapiju (ART). Antiretrovirālo terapiju nozīmē HIV vīrusa daudzuma mazināšanai asinīs un CD4+ T-limfocītu imūno šūnu skaita samazināšanās ierobežošanai. Antiretrovirālās terapijas (ART) procesā pārbauda rādītājus: 1) HIV vīrusa daudzums ne vairāk kā 30 tūkstoši HIV kopiju 1 ml asins plazmā; 2) CD4+ T-limfocītu šūnu skaits ne mazāk kā 200 vienā mm3 asinīs. Regulāri lietojot norādītos ārstnieciskos līdzekļus, ja pacientam nenotiek izteiktas imūndeficīta stadijas attīstība, tiek novērota imunitātes atjaunošanās.
[011] Dažiem slimniekiem ar HIV un tuberkulozes duālo koinfekciju novēro tuberkulozes rezistenci pret zālēm un CD4+ T-limfocītu daudzuma samazināšanos, kam ir nozīmīga loma imunitātei pret tuberkulozi. Samazinoties CD4+ T-limfocītu šūnām, plaušās pastiprinās tuberkulozes mikobaktēriju vairošanās un to diseminācija [10,12]. Slimnieku ārstēšanai ar rezistenci pret prettuberkulozes zālēm un HIV infekciju uz antiretrovirālās terapijas (ART) fona, pasliktinoties vispārējam stāvoklim, slimniekam 2-3 nedēļas perorāli nozīmē prednizolonu (kortikosteroīds) [12,13]. Pēc ārstnieciskā kursa beigšanas novērtē klīniskos rādītājus. Slimnieka vispārējam stāvoklim normalizējoties, nosaka imūnās rekonstitūcijas iekaisuma sindroma (IRIS) (immune reconstitution inflammatory syndrome) klātbūtni, proti, nosaka slimnieka kopējo imunitātes atjaunošanos un vispārējo stāvokļa normalizāciju. Tomēr, dažiem slimniekiem ar koinfekciju, pielietojot antiretrovirālo terapiju (ART), parādoties imūnās rekonstitūcijas iekaisuma sindromam (IRIS) un, slimnieka stāvoklim normalizējoties, pēkšņi iestājas nāve [3ļ.
[012] Nav zināms pēkšņas nāves riska prognozēšanas paņēmiens slimniekiem ar HIV un tuberkulozes duālo koinfekciju, tai skaitā IRIS sindroma gadījumā.
[013] Atklājumi molekulārajā ģenētikā ļauj precizēt gēnu un to mutāciju, citokīnu un to mutāciju izmantošanu kā biomarķierus, prognozējot dažādas slimības, tai skaitā infekcijas slimības, un to attīstību.
[014] Zināms cilvēka BRCA2 (molekulāri-ģenētiskais marķieris) gēna mutācijas, kuras ir atbildīgas par krūts vēža attīstības risku [14]. Ģenētiskā konsorcija pētnieki, pētot miokarda infarktu (Mycardial Infarction Genetics Consortium, angl.), atklāja, ka pastāv deviņi molekulāri-ģenētisko marķieru gēni, kuri saistīti ar paaugstinātu miokarda infarkta risku. Pētījumā piedalījās 26 000 cilvēku no 9 pasaules valstīm [15,16]. Zināms cilvēka molekulāri-ģenētiskais marķieris (402>G) A FOLX2, kas prognozē asins audzēja granulveida šūnu attīstību [17,18]. Zināms paņēmiens olnīcu vēža riska noteikšanai sievietēm ar veidojumu dzemdes piedēkļu rajonā, kurā par molekulāriģenētisko marķieri tiek izmantots epidydimis sekretorais proteīns-4 [19]. Zināms cilvēka vairogdziedzera papillārā vēža attīstības riska noteikšanas paņēmiens, kurā par molekulāriģenētisko marķieri tiek izmantots Hector Battifora mezotēlija antigēns-1 (HBME-1) [20].
[015] Galvenā loma infekcijas procesu prognozēšanā un attīstībā ir cilvēku audu saderības kompleksa HLA (Human Leucocyte Antigens, angl.) gēniem, t.i., audu saderības antigēnu grupa. Lokuss, kas atrodas uz 6. hromosomas, satur lielu skaitu gēnu, kas saistīti ar cilvēka imūno sistēmu: HLA kompleksa histosaderibas II klases molekulas pārstāv T-limfocītu antigēnus, un atrodas uz makrofagu, limfocītu un dendritu šūnu virsmas. HLA II klases molekula sastāv no gēniem, kuri satur eksonus, t.i., nukleotīdu grupām, kas atrodas gēnu lokusā, kura atbild par noteiktu molekulu apgabalu kodēšanu un par to funkciju kodēšanas laikā.
[016] Lai atklātu mutācijas cilvēka DNS genomā, ir nepieciešams veikt polimerāzes ķēdes reakciju (PĶR) un DNS sekvenēšanu. Gēnu mutācijas nosaka ar noteikta lokusā gēnu molekulāro tipēšanu, izmantojot polimerāzes ķēdes reakcijas (PĶR) metodi, praimeru paneļus un automātisko sekvenēšanu.
[017] Polimerāzes ķēdes reakcija (PĶR) ir molekulārās bioloģijas eksperimentālā metode, kas ļauj iegūt ievērojami lielākas DNS fragmentu koncentrācijas (amplifikācija) bioloģiskajā materiālā (provē). DNS amplifikāciju veic sākotnējās DNS molekulas vairākkārtējas divkāršošanas procesā, ar DNS-polimerāzes fermenta palīdzību. PĶR specifiskums pamatojas uz komplementāru kompleksu izveidi starp matricu un praimeriem - īsi sintētiski oiigonukleīdi, kuru garums ir 18-30 bp. Katrs no praimeriem ir komplementārs vienai no DNS divķēžu matricas ķēdēm, kā arī norobežo amplificētā rajona sākumu un galu. PĶR izmantošana ir svarīga, lai DNS sekvenēšanas procesa laikā noteiktu DNS struktūru. Polimerāzes ķēdes reakcijas (PĶR) gaitā DNS ķēdē iekļūst iezīmētie specifiskie nukleotīdi, kas izraisa sintēzes pārrāvumu, pēc tam, pēc DNS ķēdes sadalīšanas, gelā tiek noteikts specifisko nukleotīdu stāvoklis.
[018] Sekvenēšana (sequencing, angl.) ir metode, ar kuru tiek noteikts nukleīnskābju saturs un tajās atšifrēta nukleotīdu secība, tādējādi ģenētiskais materiāls tiek “pārtulkots” automātiskā elektroniskā formā. Automātiskajā sekvenēšanā izmanto fermentatīvās sekvenēšanas metodi: veic terminējošas reakcijas un atdala iezīmētos DNS fragmentus ar elektroforēzi, 0,4 mm biezā poliakrilamīda gelā (Polyacrylamide Gel Electrophoresis, angl.). Sekvenatoros ABI 373, TAMRA u.c. tiek noteikta fluoroforu emisijas spektra sadalījuma uzskaite, ko ierosina argona lāzera starojums, iezīmētajiem DNS fragmentiem izejot caur skenēšanas zonām. Pēc iezīmēto DNS fragmentu skenēšanas, rezultāti tiek parādīti elektroniskā formā, datorā, tiek sastādītas programmas un ģenētiskās kontroles paneļi, kurus izmanto slimību attīstības riska prognozēšanā [21].
[019] Gēnu molekulārā tipēšana notiek, izmantojot praimeru paneli, ar tās starpniecību iespējams noskaidrot alēļu grupas. Alēles ir viena gēna dažādas formas, kas izvietotas vienādos hromosomas rajonos (lokusos). Alēles nosaka vienas un tās pašās pazīmes variantu attīstību. Lai veiktu sērijveida dažādu gēnu rajonu alēļu ampliAkācijas, izmanto PCR-MSSP metodi (polimerase-chain reaction sequence specific primers mixed, angl.) [22]. Statistisko analīzi veica, izmantojot Microsoft Excel un DOS StatCalc programmu. Rādītāju atšķirības nozīmi izvērtēja pie ticamības p< 0,05. Izredžu attiecība (OR) tika aprēķināta pēc Volfa metodes.
[020] Lai noteiktu citokīnu kā biomarķieru saturu asins serumā, ir izstrādāts divkāršu antivielu paņēmiens pēc xMAP tehnoloģijas “sendvič”-varianta cietās fāzes imūnfermentā multikompleksā analīze LUMINEX. Biomarķieru imūnfermentās multikompleksās analīzes veikšanā izmanto mikrosferas un reaģentus Multiplex MAP Human Cytokine - LUMINEX CORPORATION, ASV [23-25]. Veicot biomarķieru imūnfermento multiplekso reakciju, veic magnētisku mikrosferu 45 minūšu inkubāciju ar pētāmo asins serumu, mazgā ar magnētiskās separācijas palīdzību, atdalot ar mikrosferām nesavienotos komponentus. Iegūto ''analits-mikrosfēras kompleksu inkubē 15 minūtes ar detektoru antivielām, no jauna mazgā. Iegūtajām “sendvičam” pievieno fluorescento krāsvielu - konjugātu “ biotīns-slreptavidīns '. Kā standartu katras reakcijas salīdzināšanai izmanto rekombinantos citokīnus, kas ietverti testa kompleksos. Citokīnu detekciju veic, izmantojot imūnfermentu analizatoru LUMINEX-200. Citokīnu satura ciparu apstrādei izmanto LUMINEX200 v2.3. programmnodrošinājumu, saskaņā ar ražotāja LUMINEX CORPORATIONS, ASV rekomendācijām [23-25].
[021] Neraugoties uz lielu pētījumu skaitu, nav zināms pēkšņas nāves riska prognozēšanas paņēmiens slimniekiem ar HIV un tuberkulozes duālo koinfekciju, tai skaitā IRIS sindroma gadījumā.
[022] Izgudrojuma mērķis ir izstrādāt paņēmienu pēkšņas nāves riska prognozēšanai slimniekiem ar HIV un tuberkulozes duālo koinfekciju, tai skaitā IRIS sindroma gadījumā.
[023] Mērķis tiek sasniegts tādējādi, ka par molekulāri-ģenētisko marķieri izmanto interleikīnu IL18 un genotipa HLA II klases lokusu HLA-DQB1. Interleikīna daudzumam asins serumā jābūt 599 pg/ml un vairāk, turklāt genotips ir HLA-DQB1 *06:01/*06:01. Interleikīna IL-18 saturu asins serumā nosaka ar divkāršo antivielas palīdzību pēc xMAP tehnoloģijas ,,sendvič”-varianta cietās fazes imūnfermentu multipleksās analīzes LUMINEX, un asins leikocītos nosaka genotipu HLADQBl*06:01/*06:01, veicot molekulāro tipēšanu ar polimerāzes ķedes reakciju (PCR-MSSP), izmantojot praimeru paneļus un sekojošu automātisku sekvenēšanu.
[024] Pētījumi tika veikti no 2012. līdz 2016. gadam Rīgas Stradiņa universitātes Klīniskās imunoloģijas un imunoģenētikas starpkatedru laboratorijā (RSU KIIS), klīnisko materiālu nodrošināja SIA Rīgas Austrumu klīniskās universitātes slimnīcas stacionārs Latvijas Infektoloģijas Centrs (RAKUS LIC).
[025] Pētījumā piedalījās 258 pacienti. Pētījuma brīdī visiem pacientiem tika apstiprināta HIV diagnoze, turklāt 158 pacientiem tika atklāta ТВ/HIV duālā infekcija. HIV infekcija tika apstiprināta ar HIV-1 antigēna atklāšanu (4. paaudzes ELISA), specifiskām antivielām pret HIV-1 un HIV-2 (Immunoblot un Western blot), HIV-1 p24 antigēna noteikšanu (neitralizācijas reakcija), polimerāzes ķēdes reakciju reālā laika režīmā. Pacientiem HIV-1 tika konstatēta С II - С III stadijā [Revised Classification System for HIV Infection and Expanded Surveillance Case Definition for AIDS Among Adolescents and Adults, 1993]. Tuberkulozes diagnozes uzstādīšanai tika veikta acidorezistento baktēriju identifikācija bioloģiskā materiālā ar mikroskopiju, uzsējumu un M. tuberculosis DNS noteikšanu ar polimerāzes ķēdes reakciju reālā laika režīmā (GeneXpert MTB/RIF). Tika pārbaudīta M. tuberculosis jutība pret zālēm. Papildu tika veikta krūškurvja un citu orgānu datortomogrāfija. 48% pacientu tika diagnosticēti augšējo vai apakšējo daivu bojājumi, abu plaušu infiltratīvā plaušu tuberkuloze bez intratorakālo limfmezglu bojājumiem un pleirīta. Plaušu tuberkuloze ar pleiritu un/vai intratorakālo limfmezglu bojājumu, ārpusplaušu un ģeneralizētās tuberkulozes formas sastādīja 52% bojājumu [26,27,28,29].
[026] Pētījumu veica divos etapos. Pirmajā etapā no 2012. līdz 2014. gadam izmeklēja divas pacientu grupas: pacientus ar HIV infekciju (n=100) un pacientus ar ТВ/HIV duālo infekciju (n=158). Otrās grupas pacienti bija vecumā no 23 līdz 59 gadiem(vidējais vecums bija 36 gadi ± 7), no tiem - 46 sievietes vecumā no 25 līdz 54 gadiem (vidējais vecums 35 gadi ± 7) un 112 vīrieši vecumā no 23 līdz 59 gadiem (vidējais vecums 36 gadi ± 7). Starp sieviešu un vīriešu vecumu statistiski nozīmīgu atšķirību nebija (t = 1,34; p = 0,18).
[027] Stājoties uzskaitē un pirms terapijas nozīmēšanas, visiem pacientiem asins serumā noteica četru citokīnu IFNy, ILlb, IL10, IL18 daudzumu. Citokīnu IFNy, ILlb, IL10, IL18 daudzumu noteica ar divkāršo antivielas palīdzību pēc xMAP tehnoloģijas ,,sendvič”-varianta cietās fazes imūnfermentu multipleksās analīzes LUMINEX CORPORATION, ASV [23,24,25]. Veicot pētījumus, pacientiem ņēma venozās asinis un ievietoja tās vakutaimerā, centrifugējot atdalīja no asinīm serumu. Asins serumā noteica četru citokīnu daudzumu. Citokīnu daudzuma statistisko apstrādi veica, izmantojot lietojumprogrammu “Statgraphics 2.1”, aprēķinot vidējo (M) un standarta novirzi (SD). Divu paraugu ņemšanas atšķirību ticamību novērtēja, izmantojot C2 kritēriju. Kā statistiski ticamas uzskatīja atšķirības starp grupām, ja nozīmīguma līmenis p<0,05 [30].
[028] Pētot asins serumā citokīnu daudzumu pacientiem ar HIV infekciju un ТВ/HIV duālo infekciju, noteica likumsakarību: pirmās grupas pacientiem (100 pacienti) ar HIV monoinfekciju citokīnu līmenis nepārsniedza normu (0-289 pg/ml), otrās grupas pacientiem (158 pacienti) ar ТВ/HIV duālo infekciju citokīnu IL18 līmenis sasniedza 599 pg/ml un augstāks. Pēc diviem gadiem 125 pacienti (no 158) ar normālo citokīnu daudzumu bija dzīvi. Bet 33 pacienti (no 158, jeb 21%), kuriem citokīnu IL18 daudzums bija 599 pg/ml un vairāk bija miruši. Citu citokīnu IFNy, ILlb, IL 10 rādītāji šiem 33 pacientiem nepārsniedza normu. Citokīnu IFNy, ILlb, IL 10, IL 18 daudzuma pētījuma rezultāti uz 01.01.2016 ir parādīti 1. tabulā.
.tabula
Mērījumi Pacienti (n= 158) Manna-Vitnija U vērtība
Dzīvs (n= 125) Miris (n = 33)
M SD M SD
HIV RNS, kopijas/ml 7,39-105 1,14-106 7,62-105 1,03-103 1846,50
CD4+, šūnas/μΐ 184,05 149,58 124,88 142,51 1454,00*
IL-Ιβ, pg/ml 2,02 4,88 L14 2,51 2040,00
IL-10, pg/ml 11,82 8,90 15,14 11,54 1700,50
IL-18, pg/ml 289,86 266,58 667,99 1566,50*
(599,0 un vairāk) 279,94
IFN-γ, pg/ml 9,30 28,50 13,66 31,19 2002,50
[029] Kā redzams no 1. tabulas, pēc divu gadu pētījumiem no 158 pacientiem ar HIV un tuberkulozes duālo koinfekciju nomira 33 pacienti (21% no 158). Nomira tie 33 pacienti, kuriem citokīna IL18 minimālais saturs asins serumā bija 599,0 pg/ml, pie vidējā M satura - 667,99 pg/ml.
[030] Vienlaikus ar citokīnu pētījumu, visiem pirmās (n=100) un otrās (n=100 no 158) grupas pacientiem no asins leikocītiem izdalīja DNS, izmantojot QIAamp DNA\ 1,5 ml mēģenē ar vāciņu ar stobriņu pārnesa 20 μΐ proteāzes. Mēģenē ar proteāzi pievienoja 200 μΐ asiņu, pēc tam samaisīja ar stobriņu. Pievienoja 200 μΐ bufera AL, maisīja centrifūgā 15 sekundes un pēc tam inkubēja 10 minūtes termostatā 56 °C temperatūrā. Pēc izņemšanas no termostata centrifūgēja 3-5 sekundes, lai noņemtu pilienus no mēģenes vāciņa. Pievienoja 200 μΐ 96-100 % etanola, aizvēra vāciņu, ar rokas kustību, lēnām, maisīja mēģenes saturu, un pēc tam ievietoja centrifūgā, kur to maisīja 15 sekundes, lai noņemtu pilienus no mēģenes vāciņa. Uzmanīgi, nepieskaroties QIAamp micro spin riņķim, ar stobriņu pārnesa mēģenes saturu. QIAamp micro spin bija jābūt ievietotai 2 ml mēģenē. Inkubēja 1 minūti istabas temperatūrā. Ar vāciņu noslēgtu mēģeni centrifūgēja 1 minūti ar 6 000 - 8 000 apgr./min. Pēc izņemšanas no centrifūgas mēģeni ar virsnogulšņu šķidrumu (atrodas apakšā) nomainīja pret jaunu. QIAamp micro spin atstāja, tajā atradās nepieciešamās nogulsnes (DNS). Uzmanīgi, nepieskaroties QIAamp micro spin riņķim, pievienoja 500 μΐ bufera AW1, inkubēja 1 minūti istabas temperatūrā, pēc tam centrifūgēja 1 minūti ar 6 000 - 8 000 apgr./min. Mēģeni ar virsnogulšņu šķidrumu (atrodas apakšā) nomainīja pret jaunu. QIAamp micro spin mēģenē uzmanīgi, nepieskaroties riņķim, pievienoja 500 μΐ bufera AW2, inkubēja 1 minūti istabas temperatūrā, pēc tam centrifūgēja 3 minūti ar 14 000 - 20 000 apgr./min. Nomainīja jaunu 1,5 ml mēģeni (QIAamp micro spin mēģene visu laiku saglabājās tā pati, tajā atradās nepieciešamās DNS nogulsnes). Uzmanīgi, nepieskaroties QIAamp micro spin riņķim, pievienoja 200 μΐ bufera AE vai destilētu ūdeni, inkubēja 5 minūtes 15-20 °C temperatūrā, pēc tam centrifūgēja 1 minūti ar 6000 8000 apgr./min. [31]. DNS kvalitāte un kvantitāte tika pārbaudīta, izmantojot Qubit ® fluorometer (Invitrogen ASV) [32]. Pēc tam ar kvalitātes multiplekso genotipēšanas palīdzību pēc polimerāzes ķēdes reakcijas metodes (RT-PCR-SSP, DNA Technoligy, Russia), izmantojot amplifikāciju ar sekvences specifiskiem praimeriem HLA -DRB1; DQA1; DQB1, noteica gēnu HLA-DRB1 * 01:01 līdz 18:01, DQA1 * 01: 01-01: 03, 04:01, 06:01, DQB1 * 02: 01-02: 02, * 03: 01-03: 05, * 04: 01
04: 02, * 05: 01-05: 04 un * 06; 01-06: 08 polimorfismu [33].
[031] Vienlaicīgai PĶR maisījums (35 mkl) gēnu HLA-DR; DQA1; DQB1 genotipēšanai ietvēra DNS 5 mkl, PĶR bufera 10 mkl. PĶR-Mix satur iekšējo kontroli (Internal Control, DNA-IC, angl.). Iekšējā kontrole paredzēta PĶR kvalitātes un DNS pietiekamības nodrošināšanai. Veikto automātiskā režīmā PĶR rezultātu reģistrāciju un interpretāciju noteica termociklerī DTlite (DNATechnology, Russia). Iegūto rezultātu analīzei pielietoja programmnodrošinājumu 7.3.5.84, ņemot vērā kopējo rezultātu no visām mēģenēm katram paraugam [34,35,36].
[032] Noteikto genotipu frekvenču atbilstības Hārdija-Veinberga likumam novērtēšanu veica, izmantojot χ2 kritēriju, salīdzinājumā ar gaidāmajām genotipu līdzsvarotā sadalījuma frekvencēm. Alēļu frekvenču sadalījuma statistisko kļūdu rēķināja pēc formulas sp = sqrt(p(l -p)/2N), kur p alēles frekvence, N - indivīdu skaits izlasē. Iegūto rezultātu apstrādi veica, izmantojot programmatūras paketi StatSoft Statistica 6.0 [37ļ.
[033] Pēc HLA II klases gēnu tipēšanas rezultātiem tika veikti atsevišķo gēnu sastopamības biežumu salīdzinājumi divās pētījuma grupās (pacienti ar HIV/ТВ un pacienti ar HIV) un noteica tuberkulozes attīstības riska un protektīvās alēles.
[034] Pēc iegūtajiem rezultātiem konstatēja, ka otrās grupas pacientiem (n=100) ar ТВ/HIV duālo koinfekciju riska gēns HLA-DQB1 *06:01 (R), (OR =7,12, /?<0,001), bija 16% salīdzinājumā ar pirmo pacientu grupu (n=100) bez ТВ infekcijas (tikai 3%).
[035] Otrajā etapā no 2014. līdz 2016. gadam pētījumā piedalījās 20 pacienti ar apstiprinātu HIV diagnozi, un kuriem ar imūnfermentu multipleksās analīzes LUMINEX CORPORATION, ASV palīdzību bija noteikts IL18 līmenis (599 pg/ml un vairāk) asins serumā. Vienlaikus visiem pacientiem no asins leikocītiem izdalīja DNS, izmantojot QIAampkits (Qiagen, Assay Technologies) un pēc polimerāzes ķēdes reakcijas metodes (RT-PCR-SSP, DNA Technoligy. Russia), genotipēja gēnus HLA DQB1* 02: 01-02: 02, * 03: 01-03: 05, * 04: 01-04: 02, * 05: 0105: 04 un * 06: 01-06: 08. 18 pacientiem no 20 bija genotips *06:01/*06:01. Diviem citiem pacientiem bija genotips, sastāvošs no dažādiem gēniem - *02:01/*03:01; *02:01/*04:01. Turpmākajos trīs mēnešos šiem 18 pacientiem, kuriem tika noteikts genotips*06:01/*06:01 un interleikīna IL18 saturs bija 599,00 pg/ml un vairāk, noteica plaušu tuberkulozi, un divas nedēļas pēc terapijas sākuma konstatēja nāvi.
Klīniskie piemēri.
[036] Paciente S., 26 gadi. HIV infekcija diagnosticēta 2014.gada janvārī ar CD4+ šūnu līmeni 129 šūnas/μΐ. IL18 līmenis bija 599 pg/ml (nelabvēlīga prognoze pēc IL18 satura) un HLA DQBl*06:01/*06:01 genotips (nelabvēlīga prognoze pēc genotipa). Pēc diviem mēnešiem, veicot antiretrovirālo terapiju (ART), atzīts T-limfocītu CD4+ šūnu līmeņa pieaugums no 146 līdz 480 šūnas/μΙ. Paciente ievēroja terapijas nozīmēto shēmu, slimniecei nebija veselību negatīvi ietekmējošo faktoru (alkohola, narkotiku lietošana, slikts uzturs). Sešus mēnešus pēc HAART uzsākšanas 2014. gada jūnija sākumā pievienojās ТВ infekcija un neinfekciozais hepatīts. Pēc prettuberkulozes ārstēšanas nozīmēšanas veselības stāvoklis ievērojami uzlabojās. Stāvoklis tika konstatēts kā imūnsistēmas rekonstrukcijas IRIS sindroms uz prettuberkulozes terapijas un HAART fona. Bet, neraugoties uz uzlabojumu, pēc desmit dienām paciente smagā stāvoklī tika hospitalizēta. Pacientes nāve konstatēta 2014. gada jūnija beigās.
[037] Pacients B., 41 gads. HIV infekcija diagnosticēta 2014. gada maijā ar CD4+ šūnu līmeni 29 šūnas/μΙ. IL18 līmenis bija 689 pg/ml (prognoze nelabvēlīga pēc interleikīna IL18 daudzuma) un HLA DQBl*06:01/*06:01 genotips (nelabvēlīga prognoze pēc genotipa). Tika nozīmēta antiretrovirālā terapija (ART) pēc shēmas EFv+ABC/3TC) [38]. Nozīmējot ART, pacienta stāvoklis bija smags, bet stabils. Slimniekam bija HIV kaheksija, perifēriskā polineiropātija, hronisks nepaasināts bronhīts. Pielietojot ART četrus mēnešus, slimnieka stāvoklis pakāpeniski uzlabojās: palielinājās ķermeņa masa, uzlabojās vispārējā pašsajūta. CD4+ šūnu līmenis palielinājās no 29 līdz 89 šūnas/μΙ, kas norādīja uz veiktās terapijas efektivitāti. Slimnieks ievēroja nozīmētās terapijas shēmu, slimniekam nebija veselību negatīvi ietekmējošo faktoru (alkohola, narkotiku lietošana, slikts uzturs). Neraugoties uz terapijas imunoloģisko efektu, 2014. gada oktobrī slimnieka stāvoklis pasliktinājās. Slimnieks tika hospitalizēts. Pacientam diagnosticēja infiltratīvo labās plaušas tuberkulozi, tāpēc tika nozīmēta prettuberkulozes terapija. Slimnieks turpināja saņemt ART uz prettuberkulozes ārstēšanas fona, limfocītu CD4+ šūnu līmenis palielinājās līdz 270 šūnas/μΙ, pašsajūta ievērojami uzlabojās. Pacientam konstatēja imūnsistēmas rekonstrukcijas sindromu IRIS uz prettuberkulozes terapijas un ART fona. Neraugoties uz uzlabojumu, pēc divu nedēļu terapijas, slimnieka stāvoklis krasi pasliktinājās: ķermeņa temperatūra paaugstinājās līdz 39 °C un augstāk, pievienojās neproduktīvais klepus, sāpes krūškurvī, vispārējs nespēks, ķermeņa masas samazinājums. Pacienta nāve konstatēta 2014. gada novembra sākumā.
[038] Kā parādīja pētījumi četru gadu laikā, molekulāro biomarķieru noteikšana, proti citokīna IL18 saturs asins serumā un genotipa HLA DQBl*06:01/*06:01 genotips ļauj savlaicīgi noteikt pēkšņas nāves riska prognozēšanu slimniekiem ar HIV un tuberkulozes duālo koinfekciju sekojošu rādītāju gadījumā: 1.) palielinoties citokīnu IL18 saturam asins serumā līdz 599 pg/ml un vairāk un
2.) ja slimniekam ir genotips HLA DQBl*06:01/*06:01 asins leikocītos. Pēkšņas nāves risks var būt arī šiem slimniekiem, ja rodas imūnās rekonstitūcijas iekaisuma sindroms (IRIS). Ja slimniekam ar HIV/ТВ koinfekciju nosaka genotipu HLA DQBl*06:01/*06:01, tad ir nepieciešams: regulāri kontrolēt IL18 saturu asins serumā, tai skaitā IRIS sindroma gadījumā, regulāri veikt HAART terapiju, regulāri kontrolēt iespēju samazināt limfocītu CD4+ šūnu līmeni, nepieciešamības gadījumā papildus nozīmēt terapiju ar kortikosteroīdiem.
[039] Molekulāri-ģenētisko marķieru noteikšana kā interleikīnu IL-18 un genotipa HLA II klases lokusu HLA-DQB1 ļauj savlaicīgi noteikt pēkšņas nāves risku slimniekiem ar HIV un tuberkulozes (HIV/ТВ) duālo koinfekciju un savlaicīgi nozīmēt antivīrusu terapiju pirms tuberkulozes duālās infekcijas attīstības HIV inficētiem pacientiem.
RŪPNIECISKA IZMANTOŠANA [040] Pētījumus veica laikā no 2014. gada līdz 2016. gadam RSU Klīniskās imunoloģijas un imunoģenētikas starpkatedru laboratorijā (RSU KIIS), klīnisko materiālu nodrošināja SIA Rīgas Austrumu klīniskās universitātes slimnīcas stacionāra Latvijas Infektoloģijas Centrs (RAKUS LIC). Pētījumā piedalījās 20 pacienti ar HIV infekciju.
[041] Saskaņā ar piedāvāto izgudrojumu visiem 20 pacientiem noteica genotipu asins leikocītos. Astoņpadsmit pacientiem tika noteikts nelabvēlīgs genotips HLA DQBl*06:01/*06:01. Diviem pacientiem (no 20) bija cits genotips - HLA DQA1*O1:O3/*O1:O3. Tiem astoņpadsmit pacientiem, kuriem tika noteikts nelabvēlīgs genotips HLA DQB1 *06:01/*06:01 turpmāk bija noteikta diagnoze tuberkuloze (ТВ). Tuberkulozes diagnozes noteikšanai tika veikta baktēriju identifikācija no bioloģiskā materiāla ar mikroskopiju uzsējumu un M.tuberculosis DNS noteikšanu ar polimerāzes ķēdes reakciju reālā laika režīmā (GeneXpert MTB/RIF). Tika pārbaudīta M.tuberculosis jūtība pret zālēm. Papildu tika veikta krūškurvja un citu orgānu datortomogrāfija. Duālā infekcija HIV/ТВ tika noteikta 18 pacientiem no 20 ar nelabvēlīgu genotips HLA DQBl*06:01/*06:01.
[042] Visiem divdesmit HIV inficētiem tika noteikts interleikīnu saturs asins serumā pg/ml: IFNy, ILlb, IL10, IL18. Saturs IFNy, ILlb, IL10 bija normas robežās (0-289 pg/ml). Astoņpadsmit pacientiem ar HIV/ТВ koinfekciju IL 18 saturs bija 599,0 pg/ml un vairāk (nelabvēlīgs daudzums). Šie 18 pacienti ar HIV/ТВ saņēma ART terapiju un prettuberkulozes ārstēšanu. Aktīvās terapijas pret abām koinfekcijām 3-4 mēnešu laikā pacientu stāvoklis pakāpeniski uzlabojās. Viņiem tika konstatēts imūnās sistēmas rekonstrukcijas sindroms (IRIS). Neraugoties uz aktīvu terapiju un vispārējā stāvokļa uzlabošanos, šiem 18 pacientiem ar HIV/ТВ koinfekciju IL18 līmenis nesamazinājās un palika 599,0 pg/ml un vairāk. Negaidīti šo 18 pacientu stāvoklis sāka pasliktināties. Ķermeņa temperatūra pacēlās līdz 39 °C un augstāk, pievienojās pneimonija un citas komplikācijas, parādījās vājums, attīstījās kaheksija, un 2-3 nedēļu laikā tiem 18 pacientiem, kuriem IL18 asins serumā bija 599,0 pg/ml un vairāk, pēkšņi iestājās nāve.
[043] Kā parādīja pētījumi, saskaņā ar piedāvāto paņēmienu pacientiem ar HIV infekciju nepieciešams noteikt genotipu, lai novērstu tuberkulozes infekcijas pievienošanās. Ja pacientiem ar HIV infekciju noteica genotipu HLA DQBl*06:01/*06:01, tad nepieciešams uzreiz uzsākt ART terapijas pielietošanu tuberkulozes infekcijas pievienošanās novēršanai. Ja, neraugoties uz ART terapiju, pievienojās tuberkulozes infekcija, tad šiem pacientiem nepieciešams nozīmēt aktīvu prettuberkulozes terapiju un kontrolēt asinīs CD4+ T-limfocītu saturu (ne mazāk 200 1 mm3 asiņu), jo šiem limfocītiem ir liela loma prettuberkulozes imunitātē. Bez kontroles CD4+ T-limfocītu pacientiem ar HIV/ТВ koinfekciju nepieciešams regulāri pārbaudīt IL18 asins serumā, jo, ja ĪLI8 saturs asins serumā ir 599,0 pg/ml un vairāk, ir pēkšņas nāves riska attīstības varbūtība, tai skaitā imūnās sistēmas rekonstrukcijas sindroma (IRIS sindroms) gadījumā.
[044] Molekulāri-ģenētisko marķieru noteikšana kā interleikīnu IL-18 un genotipa HLA II klases lokusu HLA-DQB1 ļauj savlaicīgi noteikt pēkšņas nāves risku slimniekiem ar HIV un tuberkulozes (HIV/ТВ) duālo koinfekciju un savlaicīgi nozīmēt antivīrusu terapiju HIV inficētiem pacientiem pirms tuberkulozes duālās koinfekcijas attīstības.
Informācijas avoti:
1. http://www.womenhealthnet.ru/infections/16904.html 25.05.2017.
2. https://ftiza.su/tuberkuloz-i-vich-infektsiya/ 25.05.2017.
3. G Narendran, S Swaminathan; ТВ-HIV co-infection: a catastrophic comradeship, National Institute for Research in Tuberculosis, Chennai, India; ORAL DISEASES (2016) 22 (Suppl.), 46-52, Published by John Wiley & Sons Ltd.
4. Simbirtsev A.S. Achievements and perspectives of the recombinant cytokine therapy in clinical practice. Medical academic journal, 2013, Vol. 13, Number 1.
5. Pat. RU 2133965, Cl, 1999, G01N33/569.
6. Pat. GB 2239246, A, 1991, C07K14/35, G01N33/53.
7. Pat. CA 50747/07, Al, 1991, C07K14/35, G01N33/53.
8. Pat.WO 9414069, Al, 1994, G01N33/543, 569.
9. Pat. RU 2265225, C2, 2005, G01N33/68.
10. Pat. RU 2416801, Cl, 2011, G01N33/53.
11. Pat.CN 105177130, A, 2015, C12N15/11; C12Q1/68.
12. Pat. RU 2468801, Cl, 2012, A61K3/56, A61P37/00
13. Pat. RU 2482848, Cl, 2013, A61K.31/536, A61P3/18.
14. Международная база данных Brest Cancer Information Care BIC date online, http://uhgri.nih.gov.
15. Myocardial Infarction genetics Consortium. Genome - wide association of early - onset myocardial infarction with single nucleotide polymorphisms and copy number variants. Nature genetics, 2009; D01:10.1038/ng/327.
16. Pat.US 2010/0062427, Al, 2010, C12Q1/68, C07H21/00.
17. Pat. US 20080104168, P, C12Q/|68.
18. Pat. WO 201040204, Al, 2010, C12Q1/68.
19. Pat. LV 14703, B, 2013, CO1N33/53.
20. Pat.LV 14878, B, 2014, G01N33/53, C12Q1/68.
21. http:/niib _old.sfedu.ru/old/textbook.php?cm=rus/uchebnaya?literatura/genetika_che 11.03.2017
22. Bebgtsson M., Jansson IE., Danielsson F., Henrysson H., Kausten K. Identification of a novel HLA DRBI1 exon 2 sequence, DRB1*1345. Tissue Antigens, 2002, Feb; 59(2):15961.
23. https://www.mdsystems.com/products/luminex-immunoglobulin-iso..., 08.03.2017
24. https://www.mdsystems.com/products/luminex-screening-and-perf....... 08.03.2017
25. https://www.luminexcorp.com/research/reagents-and-accessories/antibody-coupling- kit/product-detail s/. ..,08.03.2017
26. Tests ELISA testi HIV Ά antivielu noteikšanai, GENSCREEN HIV 1/2 version Bio-Rad, Francija un Axym system HIV1/2 0.ABBOTT, ASV.
27. Tests - ELISA testi HIV A antigēna/antivielu noteikšanai, screening kit for the detection of antibodies to HIV I and HIV 2 inserum/plazma by enzyme immunoassay, SANOFI Diagnostics PASTEUR, Francija.
28. Tests HIV подтверждающий тест - Western blot tests HIV 1 vai HIV 2 antivielu noteikšanai SANOFI Diagnostics PASTEUR, Francija.
29. Tests noteikt HIV I антигена - ELISA tests HIV antigēna noteikšanai, ELISA/INNOTEST HIV Antigen Mab, INNOGENETICA, Beļģija.
30. http.7/www.statgraphics.com/
31. QIAamp DNA Mini and Blood Mini Handbook - 372 EN. Avalaible at http://www.qiagen.com/
32. https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/migration/en/filelibrary/cell-tissue- analysis/qubit-all-file-types.par.0519.file.dat/qubit-2-fluorometer-user-manual.pdf, 15.09.2015.
33. Handbook - HLA -DRB1; DQA1;DQB1 kits EN. Avalaible at http://www.dna-technology.ru/
34. The current version of the software is available for download at http://www.dna- technology.ru/eng/support/.
35. DNA-Technology, Russia. [Handbook- HLA -DRB1; DQA1;DQB1 kits EN].
36. http://www.dna-technology.ru/
37. StatSoft Statistica
38. HIV ārstēšanas vadlīnijas. - Valsts aģentūra “Latvijas infektoloģijas centrs”, 2006. - 1 -
18.lpp.

Claims (2)

1. Pēkšņas nāves riska prognozēšanas paņēmiens slimniekiem ar HIV un tuberkulozes (HIV/ТВ) duālo koinfekciju, tai skaitā IRIS sindroma gadījumā, kas raksturīgs ar to, ka par molekulāri-ģenētisko marķieri izmanto interleikīnu IL-18 un genotipa HLA II klases lokusu HLA-DQB1.
2. Paņēmiens saskaņā ar 1. pretenziju, kas raksturīgs ar to, ka, ja interleikīna daudzums asins serumā ir 599 pg/ml un vairāk, bet genotips ir HLA-DQBl*06:01/*06:01, tad pastāv pēkšņas nāves risks.
LVP-17-46A 2017-07-05 2017-07-05 Pēkšņas nāves riska prognozēšanas paņēmiens slimniekiem ar HIV un tuberkulozes (HIV/TB) duālo koinfekciju, tai skaitā IRIS sindroma gadījumā LV15270B (lv)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
LVP-17-46A LV15270B (lv) 2017-07-05 2017-07-05 Pēkšņas nāves riska prognozēšanas paņēmiens slimniekiem ar HIV un tuberkulozes (HIV/TB) duālo koinfekciju, tai skaitā IRIS sindroma gadījumā

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
LVP-17-46A LV15270B (lv) 2017-07-05 2017-07-05 Pēkšņas nāves riska prognozēšanas paņēmiens slimniekiem ar HIV un tuberkulozes (HIV/TB) duālo koinfekciju, tai skaitā IRIS sindroma gadījumā

Publications (2)

Publication Number Publication Date
LV15270A LV15270A (lv) 2017-10-20
LV15270B true LV15270B (lv) 2018-05-20

Family

ID=60117725

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
LVP-17-46A LV15270B (lv) 2017-07-05 2017-07-05 Pēkšņas nāves riska prognozēšanas paņēmiens slimniekiem ar HIV un tuberkulozes (HIV/TB) duālo koinfekciju, tai skaitā IRIS sindroma gadījumā

Country Status (1)

Country Link
LV (1) LV15270B (lv)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012079003A2 (en) * 2010-12-09 2012-06-14 Adrie Jc Steyn Biomarkers for Tuberculosis and HIV/AIDS

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012079003A2 (en) * 2010-12-09 2012-06-14 Adrie Jc Steyn Biomarkers for Tuberculosis and HIV/AIDS

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANALI CONESA-BOTELLA ET AL: "Corticosteroid Therapy, Vitamin D Status, and Inflammatory Cytokine Profile in the HIV-Tuberculosis Immune Reconstitution Inflammatory Syndrome", CLINICAL INFECTIOUS DISEASES, vol. 55, no. 7, 19 June 2012 (2012-06-19), US, pages 1004 - 1011, XP055438320, ISSN: 1058-4838, DOI: 10.1093/cid/cis577 *
BENJAMIN G. OLIVER ET AL: "Mediators of Innate and Adaptive Immune Responses Differentially Affect Immune Restoration Disease Associated with Mycobacterium tuberculosis in HIV Patients Beginning Antiretroviral Therapy", JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES. JID, vol. 202, no. 11, 1 December 2010 (2010-12-01), CHICAGO, IL., pages 1728 - 1737, XP055438439, ISSN: 0022-1899, DOI: 10.1086/657082 *
HONG YIEN TAN ET AL: "Aberrant Inflammasome Activation Characterizes Tuberculosis-Associated Immune Reconstitution Inflammatory Syndrome", THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY, vol. 196, no. 10, 13 April 2016 (2016-04-13), US, pages 4052 - 4063, XP055438310, ISSN: 0022-1767, DOI: 10.4049/jimmunol.1502203 *
HONG YIEN TAN ET AL: "Plasma interleukin-18 levels are a biomarker of innate immune responses that predict and characterize tuberculosis-associated immune reconstitution inflammatory syndrome :", AIDS, vol. 29, no. 4, 1 February 2015 (2015-02-01), GB, pages 421 - 431, XP055438308, ISSN: 0269-9370, DOI: 10.1097/QAD.0000000000000557 *
MARTINETTI M ET AL: "The HLA Alleles DRB1*13 and DQB1*06 Are Associated to Whipple's Disease", GASTROENTEROLOGY, W.B. SAUNDERS CO, US, vol. 136, no. 7, 1 June 2009 (2009-06-01), pages 2289 - 2294, XP026168946, ISSN: 0016-5085, [retrieved on 20090127], DOI: 10.1053/J.GASTRO.2009.01.051 *
VIRAGA HARIDAS ET AL: "TB-IRIS, T-cell activation, and remodeling of the T-cell compartment in highly immunosuppressed HIV-infected patients with TB :", AIDS, vol. 29, no. 3, 1 January 2015 (2015-01-01), GB, pages 263 - 273, XP055438412, ISSN: 0269-9370, DOI: 10.1097/QAD.0000000000000546 *

Also Published As

Publication number Publication date
LV15270A (lv) 2017-10-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Guérin et al. IRF4 haploinsufficiency in a family with Whipple’s disease
Jawaheer et al. Dissecting the genetic complexity of the association between human leukocyte antigens and rheumatoid arthritis
Kothari et al. Tumor necrosis factor gene polymorphism results in high TNF level in sepsis and septic shock
US20230265519A1 (en) Methods for assessing risk of developing a viral disease using a genetic test
AU731856B2 (en) Methods of screening for ulcerative colitis by detecting an interleukin-1 receptor antagonist polymorphism
Pissetti et al. Genetic and functional role of TNF-alpha in the development Trypanosoma cruzi infection
Stikker et al. Decoding the genetic and epigenetic basis of asthma
El-Hefnawy et al. COVID-19 susceptibility, severity, clinical outcome and Toll-like receptor (7) mRNA expression driven by TLR7 gene polymorphism (rs3853839) in middle-aged individuals without previous comorbidities
Pan et al. Genome-wide transcriptional profiling identifies potential signatures in discriminating active tuberculosis from latent infection
Erre et al. Global microRNA profiling of peripheral blood mononuclear cells in patients with Behcet’s disease
Albosale et al. Association Between Promoter Polymorphisms of IL-1B, IL-4 and IL-6 Genes and a Viral Load Infected Women with Human Papillomavirus
Agung Prasetyo et al. The-1082 A allele of the interleukin-10 single nucleotide polymorphism-1082 G/A is associated with hepatitis virus co-infection in Indonesian Javanese HIV patients
Queiroz et al. The SAMHD1 rs6029941 (A/G) polymorphism seems to Influence the HTLV-1 proviral load and IFN-Alpha levels
Ahir et al. Genetic variation in the promoter region of pro-inflammatory cytokine TNF-α in perinatal HIV transmission from Mumbai, India
RU2504784C1 (ru) Способ диагностики вторичной иммунологической недостаточности при туберкулезе легких
LV15270B (lv) Pēkšņas nāves riska prognozēšanas paņēmiens slimniekiem ar HIV un tuberkulozes (HIV/TB) duālo koinfekciju, tai skaitā IRIS sindroma gadījumā
Tsai et al. Lack of association of mannose-binding lectin gene polymorphisms with development and clinical manifestations of systemic lupus erythematosus in Chinese children
CN109609616B (zh) Hla-a*02:01和hla-c*01:02在丹参酮所致药疹中的用途
JP5565784B2 (ja) 関節リウマチの新規遺伝因子としてのミエリン塩基性蛋白の利用
AU2018205377B2 (en) Compositions and methods targeting the Th2 pathway for the treatment of asthma
Ha et al. Detecting Donor-Derived DNA by Real-Time PCR in Recipients Suspected of Graft-Versus-Host-Diseases After Liver Transplantation: A Case Series and Literature Review
RU2779085C1 (ru) Способ выявления предрасположенности к развитию метаболического синдрома в виде ожирения у школьников 7-10 лет
CN115961019B (zh) 一种用于检测扩张型心肌病新致病基因ttn的试剂及其应用
CN110272992B (zh) 基于GLCCI1基因rs37972位点用于儿童哮喘病检测的试剂、试剂盒及应用
JP7411988B2 (ja) Ｈａｍ／ｔｓｐ発症リスク判定方法