LV15133B - Ar HIV inficētas mātes intrauterīnas augļa HIV inficēšanās prognozēšanas paņēmiens pirmajos sešos grūtniecības mēnešos - Google Patents

Ar HIV inficētas mātes intrauterīnas augļa HIV inficēšanās prognozēšanas paņēmiens pirmajos sešos grūtniecības mēnešos Download PDF

Info

Publication number
LV15133B
LV15133B LVP-16-14A LV160014A LV15133B LV 15133 B LV15133 B LV 15133B LV 160014 A LV160014 A LV 160014A LV 15133 B LV15133 B LV 15133B
Authority
LV
Latvia
Prior art keywords
hiv
cytokine
pregnancy
gene
risk
Prior art date
Application number
LVP-16-14A
Other languages
English (en)
Other versions
LV15133A (lv
Inventor
Jeļena Eglīte
Diāna KASJKO
Vladislavs JASINSKIS
Elvīra HAGINA
Inga Januškeviča
Gunta Stūre
Baiba ROZENTĀLE
Jeļena STOROŽENKO
Ludmila VĪKSNA
Original Assignee
Rīgas Stradiņa Universitāte
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rīgas Stradiņa Universitāte filed Critical Rīgas Stradiņa Universitāte
Priority to LVP-16-14A priority Critical patent/LV15133B/lv
Publication of LV15133A publication Critical patent/LV15133A/lv
Priority to PCT/LV2016/000003 priority patent/WO2017155375A2/en
Publication of LV15133B publication Critical patent/LV15133B/lv

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G01N33/6869—Interleukin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C12Q1/702—Specific hybridization probes for retroviruses
    • C12Q1/703—Viruses associated with AIDS
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/118—Prognosis of disease development
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus, feline leukaemia virus, human T-cell leukaemia-lymphoma virus
    • G01N2333/155—Lentiviridae, e.g. visna-maedi virus, equine infectious virus, FIV, SIV
    • G01N2333/16—HIV-1, HIV-2
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G01N2333/5434—IL-12
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G01N2333/55—IL-2
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Izgudrojums attiecas uz medicīnu, konkrēti uz infekcijas slimībām un molekulāri-ģenētiskiem pētījumiem, un ir izmantojams, lai prognozētu ar HIV inficētas mātes intrauterīnu augļa HIV inficēšanos pirmajos sešos grūtniecības mēnešos.
TEHNIKAS LĪMENIS
Saskaņā ar Pasaules Veselības organizācijas (PVO) datiem pasaulē reģistrēti 40 miljoni ar HIV inficētu cilvēku, puse no šī kopējā skaita ir sievietes reproduktīvā vecumā. Ir zināms vertikālais ceļš HIV infekcijas pārnešanai no grūtnieces auglim. Ar HIV inficētai grūtniecei, neveicot profilaktiskas darbības un atbilstošu ārstēšanu, bērns 30 % gadījumos var būt inficēts ar HIV. HIV infekcija bērnības periodā raksturīga ar nelabvēlīgu norisi, ātru iegūtā imūndeficīta (AIDS) klīnisko sindromu un augstu letalitāti. Bērniem HIV infekcija, kas iegūta no HIV inficētas mātes, 30 % gadījumos noris ātrā gaitā, pēc kuras AIDS attīstās līdz divu gadu vecumam ar letālu iznākumu dzīves pirmajos piecos gados [1].
Pētot predispozīciju (noslieci) un risku saslimt ar dažādām slimībām, konkrēti, ar infekcijas slimībām, īpaša uzmanība tiek veltīta ģenētiskā līmeņa mehānismiem. Atsevišķu nukleotīdu (single-nukleotide, angl.) polimorfu struktūras izmaiņu ģenētiskā testēšana - predispozīcijas (noslieces) gēnu mutāciju testēšana ļauj noteikt riska grupas, kurām ir nosliece uz slimībām. Molekulārā testēšana atklāj izmaiņas gēnu lokusā, atsevišķu nukleotīdu polimorfisms struktūrā nosaka konkrētas gēna daļas mutāciju, kura nosaka konkrētās funkcijas kodēšanu. Lai noteiktu gēna lokusa mutāciju, izmanto polimerāzes ķēdes reakciju PĶR (PCR, angl.), praimeru paneļus un automātisko sekvenēšanu. PĶR molekulārās bioloģijas eksperimentālā metode ļauj panākt ievērojamu DNS mazu fragmentu pieaugumu (amplifikācija) bioloģiskajā materiālā. PĶR specifiskums pamatojas uz DNS matricas un praimeru komplementāro kompleksu veidošanos - īsu sintētisku oligonukleotīdu veidošanos, kuru garums ir 18-30 nukleotīdi. Katrs praimeris norobežo amplificētās DNS daļas sākumu un beigas. Mutāciju atklāšana notiek DNS sekvenēšanas procesā, kurā izmanto specifiskus nukleotīdus, kuri iezīmēti ar fluorescentu atzīmi vai ar radioaktīvo izotopu. PĶR (PCR) gaitā DNS ķēdē iekļaujas iezīmētie specifiskie nukleotīdi, kas izraisa sintēzes pārrāvumu, pēc tam poliakrilamīda gelā tiek sadalītas DNS ķēdes un tiek noteikts specifisko nukleotīdu stāvoklis, to mutācija. Sekvenēšana (seņi/e/ice-secība, angl.) - nukleotīdu secības atšifrēšanas metode, kur notiek ģenētiskā materiāla pārnese uz automātisko elektronisko fāzi, aprēķinot fluoroforu emisijas spektru sekvenatorā. Rezultāti tiek atspoguļoti datorā, tiek sastādītas ģenētiskās kontroles programmas un paneļi, kurus izmanto saslimšanas attīstības riska prognozēšanai. Mērot nelielu daudzumu DNS, reālā laika PĶR (PCR) - kPĶ (qPCR) kombinē kopā ar apgrieztās transkripcijas reakciju AT-kPĶR (PT- qPCR, reverse transcription PCR, PT- qPCR).
Ir zināms, ka sistēmisku saslimšanu patoloģijas pazīmēm piemīt noteiktas etniskas īpatnības. Dažādām etniskām populācijām ir dažādas gēna alēles, t.i., dažādas viena gēna formas. Turklāt dažādās alēles nosaka dažādus attīstības variantus viena un tā paša gēna pazīmei, kas kodē konkrētu funkciju. Dažādās alēles dažādās etniskās populācijās asociējas ar patoloģijas attīstības risku, zināmas dažādas riska alēles jeb riska marķieri. PĶR specifiskums atkarīgs no izmantojamo gēnu specifisko praimeru izvēles, kuri imitē infekcijas ierosinātāja dažādo alēļu sekvences dažādās etniskās populācijās [2-10]. Lai pētītu noteikta gēna (DNS mutācijas daļu izpēte) DNS ekspresiju, izmanto gēnu specifiskos praimerus. K-DNS kvantitatīvai mērīšanai izmanto divus paņēmienus: fluoriscentos krāsotājus, kuri ieslēdzas divķēžu DNS molekulā, un modificētus oligonukleotīdus (DNS zondes), kuri fluoriscē pēc hibridizācijas ar DNS komplementārajiem iecirkņiem [10-12].
Mehānismi ģenētiskajā līmenī ir tieši saistīti ar imunitātes šūnu reakcijām. Saskaņā ar hipotēzi par divu tipu imūnas atbildes esamību, šūnu imūno atbildi nodrošina helperu T-limfocītu Thl apakšklase, kas producē proiekaisuma citokīnus iekaisuma mediatorus. Humorālo imūno atbildi nodrošina Th2 - pretiekaisuma citokīni. Abi imūnās atbildes tipi nosaka dažādus imunitātes šūnu reakcijas tipus. Starpšūnu mijiedarbībā piedalās vairākas citokīnu saimes. Citokīnu disbalanss sekmē T-limfocītu CD4+šūnu infekciozo bojājumu, ko izraisa HIV, un imūnsupresijas rašanos. HIV vīruss iekļūst T-limfocītu CD4+šūnās, integrējas to ģenētiskajā aparātā un var saglabāties neaktīvā stāvoklī visas dzīves laikā. Vīrusam aktivizējoties, inficētajā šūnā sākas vīrusa jauno daļiņu strauja veidošanās, šūna izjūk, notiek jaunu T-šūnu inficēšana. Tomēr, regulāri lietojot medikamentus, cilvēks praktiski ir vesels. Citokīnu disbalansam ir svarīga nozīme, tas var veicināt imūnsupresijas rašanos.
Citokīnu gēniem piemīt augsta polimorfisma pakāpe. Citokīnu kā biomarķieru, ģenētiskā testēšana ļauj atklāt uzņēmību pret slimību un prognozēt patoloģijas attīstības risku. Svarīgākie ir IL6, TGFB, IL1, IL2, IL4, IL15, IL12B, IL10, INFy saimes citokīni [13-15].
Fizioloģiskas grūtniecības etapos olšūnas nobriešanu (placentas adhēzija, implantācija, formēšana un augšana) regulē endokrīnā un imūnā sistēma. Šie procesi paredz aktīvu šūnu mijiedarbību ar proiekaisuma un pretiekaisuma citokīnu piedalīšanos.
Lai noteiktu citokīnu kā biomarķieru satum asins serumā, ir izstrādāts divkāršu antivielu paņēmiens pēc xMAP tehnoloģijas ”sendvič”-varianta cietās fazes imūnfermentā multikompleksā analīze LUMINEX. Biomarķieru imūnfermentās multikompleksās analīzes veikšanā izmanto mikrosferas un reaģentus Multiplex MAP Human Cytokine - LUMINEX CORPORATION, ASV [16-18]. Veicot biomarķieru imūnfermento multiplekso reakciju, veic magnētisku mikrosferu 45 minūšu inkubāciju ar pētāmo asins serumu, mazgā ar magnētiskās separācijas palīdzību, atdalot ar mikrosferām nesavienotos komponentus. Iegūto ”analīts-mikrosferas” kompleksu inkubē 15 minūtes ar detektoru antivielām, no jauna mazgā. Iegūtam ’’sendvičam” pievieno fluorescento krāsvielu - konjugātu „biotīns-streptavidīns”. Kā standartu katras reakcijas salīdzināšanai izmanto rekombinantos citokīnus, kas ietverti testa komplektos. Citokīnu detekciju veic, izmantojot imūnfermentu analizatora LUMINEX-200. Citokīnu satura ciparu apstrādei izmanto LUMINEX-200 v2.3. programmnodrošinājumu, saskaņā ar ražotāja LUMINEX CORPORATION, ASV rekomendācij ām [ 16-18].
Zināms divpadsmitpirkstu zarnas čūlas attīstības riska prognozēšanas paņēmiens Hakasijas eiropiešiem, kas pamatojas uz citokīnu gēnu polimorfisma molekulāri-ģenētisko testēšanu: 1) C+3953 gēna IL-β; 2) IL-IRa VNTR [8].
Zināma citokīna TNFa-308 gēna polimorfisma izpēte pacientiem ar C hepatītu. Atklāts, ka citokīna TNFa-308 gēna polimorfisms šiem slimniekiem saistīts ar noslieci uz aknu cirozes rašanās risku [9].
Izpētīta divu citokīnu gēnu polimorfismu asociācija: 1) audzēja nekrozes faktors FNOa-308 (TNFa- 308);2) interleikīns IL-6-174 (IL-6-174). Atklāts, ka citokīnu TNFa-308 un IL-6-174 gēnu polimorfisms saistīts ar noslieci uz vidusauss iekaisumu [10].
Ir zināms augļa intrauterīnās attīstības traucējumu noteikšanas paņēmiens, atklājot defektus citokīnu gēnu polimorfismā, kas var novest pie augļa letalitātes [15].
Ir zināms sievietes HIV inficēšanas iespējas prognozēšanas paņēmiens, kas balstās uz citokīnu gēnu molekulāri-ģenētisko testēšanu [11].
Nav zināms ar HIV inficētas sievietes intrauterinas augļa inficēšanās iespējas prognozēšanas paņēmiens pirmajos sešos grūtniecības mēnešos.
Izgudrojuma mērķis ir ar HIV inficētas mātes intrauterinas augļa inficēšanās prognozēšanas paņēmiena pirmajos sešos grūtniecības mēnešos izstrāde.
Mērķis tiek sasniegts tādējādi, ka mātes asins leikocītos nosaka citokīnu TNFa, IL2, IL4, IL12B, IL10, INFy mutācijas, mātes asins serumā nosaka interleikīnu IL2, IL12 daudzumu un, ja citokīnos konstatē 12 mutācijas TNFa-238, TNFa-308, IL2-330, IL2+166, IL4-33, IL4-1098, IL4-590, IL12B-1188, IL10-592, IL10-819, IL10-1082, INFy+874, turklāt IL2 saturs asins serumā ir 14 pg/ml un mazāk, bet IL12 saturs ir 74 pg/ml un mazāks, tad prognozē intrautermu augļa inficēšanos ar HIV. Turklāt no leikocītiem izdala DNS, veic tās pilna genoma sekvenēšanu, ar apgriestās transkripcijas metodi (RT PCR) veic DNS amplifikāciju, nosaka atsevišķu nukleotīdu izmaiņas citokīnu gēnu struktūrā (polimorfisms), un kā gēnu specifiskus praimerus izmanto Oligo: IL2F60, 9/263(110-300); IL2R44/260(110-300); IL4F60.9/176(-301200); IL4R80/255(-30-1200); IL12BF32.1/251(-990-1208); IL12BR52.4/151(-9901208); TNFaF50.0/238(234-450); TNFaR52.6/237(234-450); IL10F65.0/269(-5201210); IL10R68.7/290(-520-1210); INFyF65.0/262(-790-910); IFNyR66.0270(-790910). Interleikīnu IL2 un IL12 saturu asins serumā nosaka ar divkāršu antivielu palīdzību pēc xMAP tehnoloģijas ’’sendvič”-varianta cietās fazes imūnfermentu multikompleksās analīzes LUMINEX.
grūtniecēm, kurām bija HIV inficēšanās risks, tika veikts pētījums Latvijas Infektoloģijas centrā laikā no 2012. gada līdz 2015. gadam. Sieviešu vidējais vecums bija 26+4 gadi. Visām 22 grūtniecēm veica izmeklēšanu saskaņā ar HIV inficēšanās riska iespējas noteikšanas paņēmienu sievietēm, proti, pētīja 12 mutāciju TNFa-238, TNFa-308, IL2-330, IL2+166, IL4-33, IL4-1098, IL4-590, IL12B-1188, IL10-592, IL10-819, IL10-1082, INFy+874 klātbūtni citokīnu TNFa, IL2, IL4, IL12B, IL10, INFy gēnos [11].
Visām 22 grūtniecēm no asins leikocītiem izdalīja DNS, izmantojot QIAamp DNA'. 1,5 ml mēģenē ar vāciņu ar stobriņu pārnesa 20 μΐ proteāzes. Mēģenē ar proteāzi pievienoja 200 μΐ asiņu, ko pēc tam ar stobriņu samaisīja. Pievienoja 200 μΐ bufera AL, maisīja centrifūgā 15 sekundes un pēc tam inkubēja 10 minūtes termostatā 56 °C temperatūrā. Pēc izņemšanas no termostata centrifugēja 3-5 sekundes ar 3000 apgr./min., lai noņemtu pilienus no mēģenes vāciņa. Pievienoja 200 μΐ 96-100 % metanola, aizvēra vāciņu, ar rokas kustību, lēnām, maisīja mēģenes saturu, un pēc tam ievietoja centrifūgā, kur to maisīja 15 sekundes, lai noņemtu pilienus no mēģenes vāciņa. Uzmanīgi, nepieskaroties QIAamp micro spin riņķim, ar stobriņu pārnesa mēģenes saturu. QIAamp micro spin bija jābūt ievietotai 2 ml mēģenē. Inkubēja 1 minūti istabas temperatūrā. Ar vāciņu noslēgtu mēģeni centrifugēja 1 minūti ar 6 0008 000 apgr./min. Pēc izņemšanas no centrifūgas mēģeni ar virsnogulšņu šķidrumu (atrodas apakšā) nomainīja pret jaunu. QIAamp micro spin atstāja, tajā atradās nepieciešamās nogulsnes (DNS). Uzmanīgi, nepieskaroties QIAamp micro spin riņķim, pievienoja 500 μΐ bufera AW1, inkubēja 1 minūti istabas temperatūrā, pēc tam centrifugēja 1 minūti ar 6 000-8 000 apgr./min. Mēģeni ar virsnogulšņu šķidrumu (atrodas apakšā) nomainīja pret jaunu. QIAamp micro spin mēģenē uzmanīgi, nepieskaroties riņķim, pievienoja 500 μΐ bufera AW2, inkubēja 1 minūti istabas temperatūrā, centrifugēja 3 minūtes ar 14 000-20 000 apgr./min. Nomainīja jaunu 1,5 ml mēģeni (QIAamp micro spin mēģene visu laiku saglabājās tā pati, tajā atradās nepieciešamās DNS nogulsnes).Uzmanīgi, nepieskaroties QIAamp micro spin riņķim, pievienoja 200 μΐ bufera AE vai destilētu ūdeni, inkubēja 5 minūtes 15-20 °C temperatūrā, pēc tam centrifugēja 1 minūti ar 6 000-8 000 apgr./min. DNS kvalitāte un kvantitāte tika pārbaudīta, izmantojot Qubit ® fluorometer (Invitrogen ASV) [1921].
Lai izmērītu nelielu daudzumu DNS, kombinēja polimerāzes ķēdes reakciju (PĶR, PCR - angl.) kopā ar apgrieztās transkripcijas reakciju (AT-kPĶR, reverse transcription PCR, RT-PCR, angl.). Apgrieztās transkripcijas reakcijas veikšanai bija nepieciešams izmantot gēnu specifiskos praimerus, kas ekspresēja konkrētu gēnu.
Lai identificētu gēnu - specifisko praimeru sastāvu, veicot apgrieztās transkripcijas AT-kPĶR reakcijas monitoringu (reverse transcription PCR, RT-PCR, angl.), tika veikta 12 iegūto mutāciju ģenētisko sekvenču salīdzināšana ar ASV Nacionālā Biotehnoloģijas Informācijas Centra (NCBI) ģenētisko sekvenču datu bāzi [28,29]. Salīdzināšanas procesā tika noteikts šāds 24 gēnu specifisko praimeru sastāvs: OligoIL2F60.9/263(-330); OligoIL2R44/260(-330);
OligoIL2F61.9/260(+166); OligoIL2R47/251(+166); OIigoIL4F60.9/176(-33); OligoIL4R80/255(-33); OligoIL4F60.8/256(-1098); OligoIL4R66/255(-1098);
01igoIL4F60.0/256(-590); OligoIL4R66.2/250(-590); OligoIL12BF32.1/251(-1208); OligoIL12BR52.4/l 51(4208); OligoTNFaF50.0/238(-238); OligoTNFaR52.6/237(238); 01igoTNFaF60.0/248(-308); OligoTNFaR66.7/239(-308);
OligoIL10F65.0/269(-592); OligoIL10R68.7/290(-592); OligoIL10F65.2/239(-819); 01igoIL10R68.0/260(-819); OIigoIL10F65.0/269(-1082); 01igoIL10R68.7/290(1082); OligoIFN-yF65.0/262(-874); OligoIFNyR66.0/270(-874), kas saīsinātā veidā uzrādīti kā 12 gēnu specifiskie praimeri Oligo: IL2F60.9/263(l 10-300); IL2R44/260(l 10-300); IL4F60.9/176(-30-1200); IL4R80/255(-30-1200);
IL12BF32.1/251(-990-1208); IL12BR52.4/151(-990-1208); INFaF50.0/238(234450); TNFaR52.6/237(234-450); IL10F65.0/269(-520-1210); IL10R68.7/290(-5201210); IFN-γ F65.0/262(-790-910); IFN-γ R66.0/270(-790-910).
Ar sekvenēšanas palīdzību noteica nukleotīdu sekvences katram no 6 citokīnu gēniem: IL-12p, IL-10, IL-2, IL-4, IFN-γ un TNF [22]. Citokīnu gēnu DNS struktūras ģenētisko analīzi noteica ar automātiskās sekvenēšanas metodi, izmantojot ģenētisko analizatoru ABI PRISM 310 (firma “Applied Biosystems”, ASV) [23]. Pētījuma gaitā tika izmantots reakcijas maisījums BigDye® Terminator v.3.1 Cycle Sequencing Kit [24]. Iegūto rezultātu analīze tika veikta, izmantojot programmnodrošinājumu ABI PRISM® Sequencing Analysis Software or ABI PRISM® GeneScan® [23,24]. Amplikonu attīrīšanai un sagatavošanai turpmākiem pētījumiem izmantoja GeneJet PCR Purification Kit (Fermentas, Lietuva) kopumu [25].
Iegūto paraugu identifikācija tika veikta ar programmas BLAST palīdzību, izmantojot ASV Nacionālā Biotehnoloģijas Informācijas Centra (National Center for Biotechnological Information, NCBI) datu bāzi, pamatojoties uz iegūto nukleotīdu sekvenču analīzi, kura tika veikta katram paraugam [26,27].
Identificēto genotipu biežuma novērtēšanu veica pēc kritērija - x2-kvadrāts, salīdzinot ar paredzamo genotipu biežuma sadalījumu. Statistisko kļūdu alēļu biežuma sadalījumā aprēķināja pēc formulas sp = sqrt(p(l -p)/2N), kur p - alēles biežums; N - indivīdu skaits paraugā.
Divu grupu salīdzināšanai pēc skaitliskām pazīmēm izmantoja Manna-Vitnija U-kritēriju. Pieņēma, ka dažādas grupas ir statistiski ticamas, ja p<0,05. Iegūto rezultātu apstrāde tika veikta, izmantojot programmatūras paketi StatSoft Statistica 6.0 [28,29].
Tika izdalīti 6 citokīnu gēnu polimorfi, kas saistīti ar atsevišķa nukleotīda aizstāšanu, kas asociējas ar abu grupu sievietēm. Tika iegūtas apmēram 306 citokīnu gēnu mutācijas. 11 no 22 grūtniecēm tika atklātas 12 mutācijas 6 citokīnu gēnos, kuru polimorfu sastopamība bija 5 reizes un vairāk, konkrēti: TNFa -238; TNF-a -308; IL2 -330; IL2 +166; IL4 -33; IL4-1098; IL4 -590; IL12B -1188; IL10 -592; IL10 -819; IL10 -1082; IFN-γ + 874 (12 mutācijas).
Citām 11 no 22 grūtniecēm nebija atklātas 6 citokīnu gēnu 12 mutācijas. Šīm 11 sievietēm grūtniecība noritēja normāli, un jaundzimušajiem nebija HIV patoloģisko izmaiņu. Tām 11 no 22 sievietēm, kurām tika atklātas citokīnu gēnu 12 mutācijas leikocītos, tika noteikta HIV pirmā stadija. Diagnozes apstiprināšanai izmantoja Eiropas Savienībā pielietojamas standarta metodes [19-21]. Minētās grūtnieces tika brīdinātas par gēnu izmaiņām leikocītos, kas var veicināt iespējamu inficēšanu ar HIV. Šīm 11 grūtniecēm tika veikta savlaicīga profilakse un antivīrusu terapija AVT, lai novērstu HIV vīrusa reakciju ar augstu vīrusu slodzi asinīs (VSA HIV), un lai novērstu imūno CD4+šūnu limfocītu aktivitātes samazināšanos asinīs. Antivīrusu terapija tika nozīmēta grūtniecības laikā, dzemdību laikā un pēc dzemdībām. Specifisko HIV infekcijas ķīmisko profilaksi veica trīs etapos, saskaņā ar protokolu. Ķīmiskās terapijas efektivitāti raksturoja vīrusa koncentrācijas maksimālā nomākšana asinīs.
Citokīnu daudzuma disbalanss var izraisīt imūnsupresiju [13-15]. Lai izpētītu imūnsupresijas stāvokli tām 11 HIV inficētajām sievietēm, kurām tika atklātas citokīnu gēnu 12 mutācijās leikocītos, veica 9 asins seruma citokīnu satura izpēti. 9 citokīnu saturu salīdzināja grūtniecības pirmajos sešos mēnešos (4., 12. un 24. nedēļā). 9 citokīnu IFNy, TGFP, IL1, IL2, IL4, IL6, IL10, IL12, IL15 daudzuma noteikšanai sieviešu asins serumā tika izmantots divkāršu antivielu paņēmiens pēc xMAP tehnoloģijas ’’sendvič”-varianta cietās fāzes imūnfermentu multikompleksās analīzes LUMINEX [16-18]. Veicot pētījumus, sievietēm ņēma venozās asinis un ievietoja tās centrifūgā, centrifugējot atdalīja no asinīm serumu. Asins serumā noteica 9 citokīnu daudzumu. Citokīnu daudzuma statistisko apstrādi veica, izmantojot lietojumprogrammu “Stat,graphics 2.1”, aprēķinot vidējo (M) un standarta novirzi (S).
'У
Divu paraugu ņemšanas atšķirību ticamību novērtēja, izmantojot C kritēriju. Kā statistiski ticamas uzskatīja atšķirības starp grupām, ja nozīmīguma līmenisp<0,05.
Veicot citokīnu daudzuma izpēti asins serumā 11 HIV inficētām grūtniecēm, noteica divas likumsakarības: pirmajai sieviešu grupai (5 grūtniecēm) tika konstatēta interleikīnu IL2 (14pg/ml un mazāk) un IL12 (74 pg/ml un mazāk) daudzuma samazināšanās, un jaundzimušajiem parādījās dažādi ar HIV vīrusu inficēšanos saistīti klīniskie simptomi. Otrai sieviešu grupai (6 grūtniecēm) interleikīnu IL2 (15 pg/ml un vairāk) un IL12 (75 pg/ml un vairāk) daudzums bija normāls. Sešām grūtniecēm ar normālu interleikīnu daudzumu jaundzimušajiem nebija klīnisko simptomu, kas raksturīgi HIV infekcijai.
Izpētes rezultāti par interleikīnu IL2 un IL12 daudzumu asins serumā 11 HIV inficētām grūtniecēm, kurām tika konstatētas 12 mutācijas citokīnu gēnos, ir atspoguļoti divās tabulās.
1. tabula
Pacienta Nr.p.k. 4. nedeļa 12. nedeļa 24. nedēļa
IL2, pg/ml IL12, pg/ml IL2, pg/ml IL12, pg/ml IL2, pg/ml IL12, pg/ml
1. 4.76 54.8 5.66 58.7 4.10 52.50
2. 8.29 61.2 7.08 65.8 6.11 53.4
3. 8.22 55.3 6.11 74.0 6.10 52.9
4. 9.14 59.1 5.18 61.0 5.16 42.6
5. 14.01 42.3 7.05 40.4 7.05 51.9
Pirmajā tabulā attēloti rezultāti par interleikīnu IL2 un IL12 daudzumu asins serumā tām 5 HIV inficētajām grūtniecēm (pirmā grupa), kuru jaundzimušajiem daļēji parādījās ar HIV saistīti klīniskie simptomi. Katru interleikīnu izpēti veica 3-7 reizes.
Kā var secināt no izpētes rezultātiem 1. tabulā, IL2 daudzums asins serumā pirmās grupas sievietēm pirmajos sešos grūtniecības mēnešos ir 14 pg/ml un mazāk, p<0,001, kas ir 2,9 reizes mazāk par normu (15 pg/ml un vairāk). IL12 daudzums asins serumā pirmās grupas sievietēm pirmajos sešos grūtniecības mēnešos ir 74 pg/ml un mazāk, p<0,001, kas ir 1,3 reizes mazāk par normu (75 pg/ml un vairāk).
2. tabula
Pacienta Nr.p.k. 4. nedēļa 12, nedēļa 24. nedēļa
IL2, pg/ml IL12, pg/ml IL2, pg/ml IL12, pg/ml IL2, pg/ml IL12, pg/ml
6. 66.2 81.8 47.1 80.3 57.3 115.0
7. 61.2 82.5 49.9 75.5 58.0 86.6
8. 55.2 76.1 15.5 81.5 57.1 84.9
9. 63.4 85.1 45.6 80.4 56.1 84.9
10. 53.2 84.6 47.5 80.9 57.1 84.8
11. 68.3 88.2 48.1 80.9 58.1 85.6
Otrajā tabulā attēloti rezultāti par interleikīnu IL2 un IL12 daudzumu asins serumā tām 6 HIV inficētām grūtniecēm (otrā grupa), kuru jaundzimušajiem nebija HIV infekcijas klīnisko izpausmju. Katru interleikīnu izpēti veica 4-8 reizes.
Kā var secināt no izpētes rezultātiem 2. tabulā, IL2 daudzums asins serumā sešām HIV inficētām grūtniecēm no otrās grupas ir 15 pg/ml un vairāk, p<0,001. IL12 daudzums asins serumā sešām HIV inficētām grūtniecēm no otrās grupas ir 75 pg/ml un vairāk, p< 0,001.
Izpētes procesā piecām no vienpadsmit ar HIV inficētām grūtniecēm tika iegūti statistiski ticami dati par ievērojamu divu no deviņiem citokīnu daudzuma samazināšanos asins serumā, proti interleikīns IL2 bija 14 pg/ml un mazāk, bet interleikīns IL12 bija 74 pg/ml un mazāk. Šīm piecām grūtniecēm, kurām bija noteikta IL2 un IL12 daudzuma samazināšanās, jaundzimušajiem vēlāk daļēji parādījās ar HIV vīrusu inficēšanos saistīti klīniskie simptomi. Sešām no vienpadsmit HIV inficētām grūtniecēm interleikīnu IL2 un IL12 daudzums bija normāls, proti IL2 bija 15 pg/ml un vairāk, IL12 bija 75 pg/ml un vairāk. Šīm sešām HIV inficētām grūtniecēm jaundzimušajiem nebija ar HIV inficēšanos saistīto klīnisko simptomu. Tādējādi, pēc konkrētās interleikīnu IL2 un IL12 daudzuma samazināšanās ar HIV inficēto grūtnieču asins serumā var prognozēt intrauterīnu augļa HIV inficēšanos pirmajos sešos grūtniecības mēnešos. No HIV inficētās mātes intrauterīnu augļa inficēšanās prognozēšana kļuva iespējama tām HIV inficētām grūtniecēm, kurām HIV inficēšanās diagnoze bija noteikta, nosakot divpadsmit mutācijas sešos citokīnu gēnos leikocītos.
Veiktie interleikīnu līmeņa izmaiņu pētījumi ar HIV vīrusu apgrūtinātas grūtniecības laikā parādīja, ka interleikīni IL2 un IL12 var kalpot kā marķieri HIV inficētās mātes intrauterīnas augļa HIV inficēšanās riska atklāšanai. Interleikīna IL2 saturs intrauterīnas augļa inficēšanās draudu gadījumā ticami samazinājās 2,9 reizes salīdzinājumā ar analoģiskiem rādītājiem, ja grūtniecība norit bez sarežģījumiem (ρ<0,00Γ). IL12 līmenis samazinājās 1,3 reizes salīdzinājumā ar grūtniecību bez sarežģījumiem.
Visām vienpadsmit HIV inficētām grūtniecēm, kurām tika konstatētas 12 mutācijas citokīnu gēnos leikocītos, tika nozīmēta antiretrovīrusu (ARV) terapija no
12. grūtniecības nedēļas. Aktīvā ķīmijas terapija tika uzsākta, lai samazinātu vīrusu daudzumu asinīs (VNR) un lai novērstu imūno T-limfocītu CD4+šūnu aktīvu samazināšanos. VNR kontrolrādītāji ir ne vairāk kā 30 000 HIV kopiju vienā ml plazmas, T-limfocītu CD4+šūnu - ne mazāk kā 200 vienā mm3.
Piecām HIV inficētām grūtniecēm tika veikts plānots ķeizargrieziens 38.-39. grūtniecības nedēļā. Neraugoties uz ARV terapiju, četriem no pieciem jaundzimušajiem daļēji tika novēroti ar HIV inficēšanos saistītas klīniskie simptomi: mazs ķermeņa svars 2,800 - 3,200 kg, pazemināts muskuļu tonuss, diviem jaundzimušajiem tika konstatēta dzelte. Tomēr, nosakot jaundzimušo asinīs HIV1 vīrusu pēc polimerāzes ķēdes reakcijas (PĶR) paņēmiena, šiem četriem jaundzimušajiem reakcija bija negatīva. Viens no pieciem jaundzimušajiem piedzima priekšlaicīgi 38. grūtniecības nedēļā ar ķermeņa svaru 1,890 kg un garumu 48 cm, elpošana palēnināta, atzīmēta vidēji smaga asfiksija. Bērnam tika nozīmēta ARV terapija. Jaundzimušā asinīs pēc PĶR paņēmiena tika atklāts HIV1 vīruss.
Ar HIV inficētas mātes intrauterīnas augļa HIV inficēšanās iespējas savlaicīga prognozēšana pirmajos sešos grūtniecības mēnešos ļāva mātei nozīmēt no 12. grūtniecības nedēļas antiretrovīrusu terapiju, nodrošināt sekmīgas dzemdības (ķeizargrieziens), uzsākt jaundzimušam ARV terapiju tūlīt pēc dzimšanas un brīdināt māti par liegumu barot jaundzimušo ar krūti. Nozīmētā terapija ļāva samazināt ar HIV inficētas mātes augļa inficēšanās risku četriem no pieciem jaundzimušajiem.
Informācijas avoti:
1. Белоусов E.C., Змушко Е.И., ВИЧ инфекция. 2 изд., СПб.: Питер, 2003, с.157-158.
2. Ethnic difference of Helicobacter pylori gastritis: Korean and Japanese gastritis is characterized by male- and antrum-predominant acute foveolitis in comparison with American gastritis TText] /1/ Lee, M. Kim let al.1 / World Journal of Gastroenterology. - 2005. - Vol.l 1 (1). — P.94-98.
3. Mody G.M., Hammond M.G. Differences in HLA-DR association with rheumatoid arthritis among migrant Indian communities in South Africa. Br.J. Rheumatol., 1994, 33, 425-427.
4. Nelson J.L., Boyer G., Templin D. et.al. HLA antigens and Tlingit Indians with rheumatoid arthritis. Tissue Antigens, 1992, 40, 57-63.
И
5. Salvarini C., Macchioni P., Mantovani W. et. al. Extraarticular manifestations of rheumatoid arthritis and HLA antigens in northern Italy. J. Rheumatol, 1992, 19,242-246.
6. Sattar M.A., Al-Saffar M., Guindi RT. et. al. Association between HLAJDR antigens and rheumatoid arthritis in Arabs. Ann. Rheum. Dis., 1990, 49, 147149.
7. Seglias J., Li E.K., Cohen M.G. et.al. Linkage between rheumatoid arthritis susceptibility and the presence of HLA-DR4 and DR beta allelic third hypervariable region sequences in southern Chinese persons. Arthr. Rheum., 1992, 35, 163.
8. Pat. RU 2542459, Cl, 2015, G01N33/53.
9. Yee L.J., tang J., Herrera J., Kaslow R.A., van Leeuwen D.J. Tumor necrosis factor gene polymorphisms in patients with cirrhosis from chronic hepatitis C virus infection. Genes Immun. 2000 Aug; 1 (6): 386-90.
10. http://pmarchive.ru/geneticheskava-diagnostika-polimorfizm-genov- citokinov/, 02.10.2015.
11. Pat. LV P-15-118,2015, G01N33/53.
12. Nolan T. Hands RE, Bustin SA (2006). „Quantification of mRNA using realtime RT-PCR”. Nat.Protoc. 1: 155901582. D01:10.1038/nprot.2006.236 (http://dx.doi.Org/l0.1038%2Fnprot.2006.236), PMID: 7406449.
13. Dimitriadis E, White CA, Jones RL, et al. Cytokines, chemokines and growth factors in endometrium related to implantation. Hum Reprod Update. 2005; 11:61330.
14. Dimitriadis E., Menkhorst E., New generation contraceptives: interleukin 11 family citokines as nonsteroidal contraceptive targets. Journal of Reproductive Immunology 88 (2011) 233-239.
15. Simbirtsev A.S. Achievements and perspectives of the recombinant cytokine therapy in clinical practice. Medical academic journal, 2013, Volume 13, number 1.
16. https://www.mdsystems.com/products/luminex-immunoglobulin-iso..· 08.02.2016
17- https://www.mdsystems.com/products/luminex-screening-and-perf··.. 08.02.2016
18. https://www.luminexcorp.com/research/reagents-and-accessories/antibody- coupling-kit/product-details/.... 08.02.2016
19. http7/www/mdr7.opeca.ru/Publications/Publication 2.html, 15.09.2015.
20. http://www.eurolab.ua/aids/2878/2888/35438,15.09.2015.
21. https://www.thermofisher.com//content/dam/LifeTech/migration//en/filelibrary/ cell-tissue-analysis/qubit-all-file-types.par.0519.file.dat/qubit-2-fluorometeruser-manual .pdf, 15.09.2015.
22. http://www.tiensmed.ru/news/citokiny-ab 1 .html, 15.09.2015.
23. ABI PRISM 310 фирмы «Applied Biosystems» (USA), http://tools.thermofisher.com/content/ sfs/manuals/cms_041857.pdf.
24. BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit, catalog number: 4337455..
25. Thermo Scientific GeneJET PCR Purification Kit, Catalog number: K0701, https 7/www.thermofisher. com, Fermentas Lietuva.
26. NCBI (National Center for Biotechnology Information) (http://www.ncbi.nlm.nih.gov).
27. Human Genome Project Information (2013). SNP Fact Sheet.
http 7/www. oml. gov/sci/techresources/ Human Genome/faq/snps.shtml.
28. National Human Genome Research Institute (2013). Genome-Wide Association Studies, http7/www.genome.gov/20019523.
29. Armonk, NY. IBM Corp.Reased 2013IBM SPSS Statistics for Windows, version 22.ibm corp. http://www:-01.ibm.com/support/, 02.10.2015.

Claims (3)

1. Ar HIV inficētas mātes intrauterinas augļa HIV inficēšanās prognozēšanas paņēmiens pirmajos sešos grūtniecības mēnešos, kas raksturīgs ar to, ka mātes asins leikocītos nosaka citokīnu TNFa, IL2, IL4, IL12B, IL10, ΙΝΡγ mutācijas, mātes asins serumā nosaka interleikīnu IL2, IL12 daudzumu un, ja citokīnos konstatē 12 mutācijas TNFa-238, TNFa-308, IL2-330, IL2+166, IL4-33, IL4-1098, IL4-590, IL12B-1188, IL10-592, IL10-819, IL10-1082, INFy+874, turklāt IL2 saturs asins serumā ir 14 pg/ml un mazāk, bet IL12 saturs ir 74 pg/ml un mazāk, tad prognozē intrauterīnu augļa HIV inficēšanos.
2. Paņēmiens saskaņā ar 1. pretenziju, kas raksturīgs ar to, ka no leikocītiem izdala DNS, veic tās pilna genoma sekvenēšanu, ar apgrieztās transkripcijas metodi (RT PCR) veic DNS amplifikāciju, nosaka atsevišķu nukleotīdu izmaiņas citokīnu gēnu struktūrā, un kā gēnu specifiskus praimerus izmanto Oligo: IL2F60, 9/263(110300); IL2R44/260(l 10-300); IL4F60.9/176(-30-1200); IL4R80/255(-30-1200);
IL12BF32.1/251(-990-1208); IL12BR52.4/151(-990-1208); TNFaF50.0/238(234450); TNFaR52.6/237(234-450); IL10F65.0/269(-520-1210); IL10R68.7/290(-5201210); INFyF65.0/262(-790-910); IFNyR66.0270(-790-910).
3. Paņēmiens saskaņā ar 1. vai 2. pretenziju, kas raksturīgs ar to, ka interleikīnu IL2 un ĪLI2 saturu asins serumā nosaka ar divkāršo antivielu palīdzību pēc xMAP tehnoloģijas ’’sendvič”-varianta cietās fāzes imūnfermentu multikompleksās analīzes LUMINEX.
LVP-16-14A 2016-03-09 2016-03-09 Ar HIV inficētas mātes intrauterīnas augļa HIV inficēšanās prognozēšanas paņēmiens pirmajos sešos grūtniecības mēnešos LV15133B (lv)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
LVP-16-14A LV15133B (lv) 2016-03-09 2016-03-09 Ar HIV inficētas mātes intrauterīnas augļa HIV inficēšanās prognozēšanas paņēmiens pirmajos sešos grūtniecības mēnešos
PCT/LV2016/000003 WO2017155375A2 (en) 2016-03-09 2016-07-19 Method for predicting the possible risk of hiv intrauterine fetus infection from hiv infected pregnant mother in the first six months of pregnancy

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
LVP-16-14A LV15133B (lv) 2016-03-09 2016-03-09 Ar HIV inficētas mātes intrauterīnas augļa HIV inficēšanās prognozēšanas paņēmiens pirmajos sešos grūtniecības mēnešos

Publications (2)

Publication Number Publication Date
LV15133A LV15133A (lv) 2016-06-20
LV15133B true LV15133B (lv) 2017-01-20

Family

ID=57136079

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
LVP-16-14A LV15133B (lv) 2016-03-09 2016-03-09 Ar HIV inficētas mātes intrauterīnas augļa HIV inficēšanās prognozēšanas paņēmiens pirmajos sešos grūtniecības mēnešos

Country Status (2)

Country Link
LV (1) LV15133B (lv)
WO (1) WO2017155375A2 (lv)

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090307179A1 (en) * 2008-03-19 2009-12-10 Brandon Colby Genetic analysis
BY18123C1 (lv) * 2011-04-25 2014-04-30

Also Published As

Publication number Publication date
LV15133A (lv) 2016-06-20
WO2017155375A2 (en) 2017-09-14
WO2017155375A3 (en) 2018-03-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Just et al. Influence of host genotype on progression to acquired immunodeficiency syndrome among children infected with human immunodeficiency virus type 1
Winchester et al. Major histocompatibility complex class II DR alleles DRB1* 1501 and those encoding HLA-DR13 are preferentially associated with a diminution in maternally transmitted human immunodeficiency virus 1 infection in different ethnic groups: determination by an automated sequence-based typing method.
AU1357697A (en) Methods of screening for ulcerative colitis by detecting an interleukin-1 receptor antagonist polymorphism
Johnsen et al. The combination of maternal KIR-B and fetal HLA-C2 is associated with decidua basalis acute atherosis in pregnancies with preeclampsia
Kim et al. Interleukin-1beta-511T> C genetic variant contributes to recurrent pregnancy loss risk and peripheral natural killer cell proportion
Thomsen et al. HLA-DRB1 polymorphism in recurrent pregnancy loss: New evidence for an association to HLA-DRB1* 07
Tozetto-Mendoza et al. Torquetenovirus titer in vaginal secretions from pregnant and postpartum women: Association with absence of Lactobacillus crispatus and levels of lactic acid and matrix metalloproteinase-8
Azab et al. Interferon gamma and interleukin 8 gene polymorphisms in patients with hepatitis C virus related oral lichen planus
Chen et al. Association of Foxp3 and TGF-β1 polymorphisms with pre-eclampsia risk in Chinese women
Zhao et al. A functional promoter polymorphism in interleukin 12B gene is associated with an increased risk of ovarian endometriosis
Kang et al. Novel interleukin-10 gene polymorphism is linked to gestational diabetes in Taiwanese population
Jaspan et al. The interaction of a type A retroviral particle and class II human leukocyte antigen susceptibility genes in the pathogenesis of Graves' disease
Yu et al. Cytokines interleukin 4 (IL-4) and interleukin 10 (IL-10) gene polymorphisms as potential host susceptibility factors in virus-induced encephalitis
Sun et al. Study on the relationship between CXCR3 and its ligands and tubal tuberculosis
WO2013163935A1 (zh) 一种纯净的胎儿完整基因组dna的分离获取方法
Queiroz et al. The SAMHD1 rs6029941 (A/G) polymorphism seems to Influence the HTLV-1 proviral load and IFN-Alpha levels
Hoshida et al. Regulation of gene expression in mouse trophoblast cells by interferon-gamma
Sayaril et al. Polymorphisms in proinflammatory cytokine genes, effect on gene expression and association with preterm delivery in Saudi females
LV15133B (lv) Ar HIV inficētas mātes intrauterīnas augļa HIV inficēšanās prognozēšanas paņēmiens pirmajos sešos grūtniecības mēnešos
Ioannidis et al. Human leukocyte antigen associations of epidemic Kaposi's sarcoma
Boldeanu et al. Determination of VEGFR-2 (KDR)-604A> G polymorphism in recurrent pregnancy loss
Repo et al. CD14 and TNFα promoter polymorphisms in patients with acute arthritis
RU2779085C1 (ru) Способ выявления предрасположенности к развитию метаболического синдрома в виде ожирения у школьников 7-10 лет
RU2808924C1 (ru) Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у беременных с задержкой роста плода
RU2786211C1 (ru) Способ лабораторной персонифицированной диагностики состояния иммунитета пациентов и набор олигодезоксирибонуклеотидных праймеров, и флуоресцентно меченых зондов, и стандартных образцов