LV14468B - Antiinflammatory agent - Google Patents

Antiinflammatory agent Download PDF

Info

Publication number
LV14468B
LV14468B LVP-10-95A LV100095A LV14468B LV 14468 B LV14468 B LV 14468B LV 100095 A LV100095 A LV 100095A LV 14468 B LV14468 B LV 14468B
Authority
LV
Latvia
Prior art keywords
mdas
versus
ass
control
group
Prior art date
Application number
LVP-10-95A
Other languages
Latvian (lv)
Other versions
LV14468A (en
Inventor
Ivars KALVIŅŠ
Anatolijs Birmans
Māris VĒVERIS
Antons ĻEBEDEVS
Anatolijs MIŠŅOVS
Original Assignee
Tetra, Sia
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to KR1020127001929A priority Critical patent/KR20120050437A/en
Priority to EP10735094.4A priority patent/EP2445861B1/en
Application filed by Tetra, Sia filed Critical Tetra, Sia
Priority to PCT/LV2010/000007 priority patent/WO2010151095A1/en
Priority to JP2012517421A priority patent/JP5706409B2/en
Priority to GEAP201012546A priority patent/GEP20146015B/en
Priority to US13/377,926 priority patent/US8889902B2/en
Priority to CN201080028833.9A priority patent/CN102803199B/en
Priority to CA2766048A priority patent/CA2766048A1/en
Priority to BRPI1009600A priority patent/BRPI1009600A2/pt
Priority to LVP-10-95A priority patent/LV14468B/en
Priority to EA201200038A priority patent/EA021588B1/en
Priority to NZ597510A priority patent/NZ597510A/en
Priority to IL217036A priority patent/IL217036A/en
Publication of LV14468A publication Critical patent/LV14468A/en
Publication of LV14468B publication Critical patent/LV14468B/en
Priority to HK12110406.3A priority patent/HK1169648A1/en

Links

Landscapes

  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Meldonium acetylsalicylate salt, its solvates or polymorphs for use as medicament. Combination medicinal products comprising meldonium acetylsalicylate and another active agent selected from the group of niacin, statins, clopidogrel and dipyridamole.

Description

IZGUDROJUMA APRAKSTSDESCRIPTION OF THE INVENTION

IZGUDROJUMA NOZAREFIELD OF THE INVENTION

Aprakstītais izgudrojums attiecas uz jaunu medicīnisko produktu ar pretiekaisuma, sāpes remdinošām, pretdrudža, antireimātiskām, antihiperlipidēmiskām, antiaterosklerotiskām, trombocītu pretsalipšanas un prettrombu īpašībām.The present invention relates to a novel medical product having anti-inflammatory, analgesic, antipyretic, antirheumatic, antihyperlipidemic, anti-atherosclerotic, anti-platelet and anti-thrombotic properties.

Precīzāk, izgudrojums attiecas uz jaunu medicīnisko produktu, kas satur meldonija acetilsalicilātu. Izgudrojums attiecas arī uz farmaceitisko kompozīciju, kas satur meldonija acetilsalicilātu.More particularly, the invention relates to a novel medical product containing meldonium acetylsalicylate. The invention also relates to a pharmaceutical composition comprising meldonium acetylsalicylate.

Meldonija acetilsalicilāts tika aprakstīts mūsu patenta pieteikumā P-09-117. kas attiecas uz jaunām acetilsalicilskābes sālīm. Ir paredzēts, ka jaunajai vielai, kas aprakstīta minētajā pieteikumā, var būt dažādi polimorfi kristālu veidi un solvāti, vislabāk hidrāti, kuriem ir līdzīgas bioloģiskās īpašības un tāpēc tie tiek iekļauti šajā pieteikumā kā aprakstītā savienojuma varianti.Meldonium acetylsalicylate was described in our patent application P-09-117. relating to new salts of acetylsalicylic acid. It is intended that the novel substance described in that application may have different polymorphic crystal types and solvates, preferably hydrates, which have similar biological properties and are therefore included in this application as variants of the compound described.

Tā kā betaīna tipa savienojumiem, kas ir iekļauti jaunajās acetilsalicilskābes sālīs, pašiem piemīt dažādas farmakoloģiskās aktivitātes, jaunajām acetilsalicilskābes sālīm var būt labvēlīgas aktivitātes papildu tām, kas piemīt acetilsalicilskābei vai betaīniem, tostarp jaunas farmakoloģiskas aktivitātes. Mēs jau konstatējām, ka meldonija acetilsalicilāts palēnina un nozīmīgi samazina nikotīnskābes izsaukto ādas asinsvadu paplašināšanos. Papildu eksperimenti parādīja meldonija acetilsalicilāta pārsteidzoši izteiktas farmakoloģiskās aktivitātes.Because betaine-type compounds included in the new acetylsalicylic acid salts themselves have different pharmacological activities, the new acetylsalicylic acid salts may have beneficial activities in addition to those of the acetylsalicylic acid or betaines, including new pharmacological activities. We have already found that Meldonium acetylsalicylate slows down and significantly reduces nicotinic acid-induced dilation of skin blood vessels. Further experiments showed surprisingly pronounced pharmacological activities of meldonium acetylsalicylate.

LIETOTIE SAĪSINĀJUMIABBREVIATIONS USED

Aprakstā īsuma dēļ turpmāk tiks lietoti šādi saīsinājumi:For the sake of brevity, the following abbreviations will be used in the description below:

AdA - adjuvanta artrītsAdA - Adjuvant Arthritis

ASS - acetilsalicilskābeASS - acetylsalicylic acid

H - holesterinsH - cholesterol

KSS - koronārā sirds slimībaCHD - Coronary heart disease

CIK - cirkulējošie imūnkompleksiCIK - circulating immune complexes

KL - klopidogrelsKL - Clopidogrel

CRP - C-reaktīvais proteīnsCRP - C-reactive protein

Dī - dipiridamolsDi - dipyridamole

ABL - augsta blīvuma lipoproteīniHDL - high density lipoproteins

LA - laropiprantsLA - Laropiprant

ZBL - zema blīvuma lipoproteīniLDL - Low-density lipoproteins

MDAS - meldonija acetilsalicilāts (ķīmiski: 3-(trimetilamonioamino)propanoāta acetilsalicilātsMDAS - Meldonium Acetyl Salicylate (Chemically: 3- (trimethylammonioamino) propanoate acetyl salicylate)

MD - meldonijs (SNN)MD - Meldonium (SNN)

NS - nikotīnskābe RA - reimatoīdais artrīts TG - trigliceridi TR - Triton WR1339 SI - simvastatīnsNS - Nicotinic acid RA - Rheumatoid arthritis TG - Triglycerides TR - Triton WR1339 SI - Simvastatin

TEHNIKAS LĪMENISTECHNICAL LEVEL

Trombocītiem ir būtiska loma aterosklerozes attīstībā un fatālu trombu veidošanā koronārās sirds slimības norisē. Līdzekļi, kas novērš trombocītu salipšanu, ir kļuvuši par ļoti būtiskiem dažādu slimību profilaksē un ārstēšanā, ieskaitot dažādas kardiovaskulāras, cerebrovaskulāras un perifero artēriju sistēmas saslimšanas (Meadows TA et al, Circ Res 2007;100(9):1261-75). Acetilsalicilskābe ir ļoti plaši lietotas zāles, kas pazīstama galvenokārt ar tās pretiekaisuma, pretsāpju, pretdrudža un pretreimatisma īpašībām. Tā tiek arī lietota nelielās ikdienas devās kā trombocītu pretsalipšanas līdzeklis kardiovaskulāra riska pacientiem (Eidelman RS et al, Arch Intern Med. 2003;163:2006-2010). Kaut arī kā trombocītu pretsalipšanas līdzeklis ASS ir pazīstama daudzus gadus, tikai nesen sākts pievērst lielāku uzmanību ASS pretiekaisuma īpašībām kardioloģijā (Ridker PM et al, N Engl J Med 1997;336:973979). Līdz ar to tādu iekaisuma marķieru kā C-reaktīvā proteīna (CRP) mērījumi klīnikā var daļēji atspoguļot aterosklerozes rādītājus (Buckley DI et al, Ann Intern Med 2009;151:483-495). Pašreizējā pieredze norāda, ka CRP līmeņa pazemināšana novērš KSS notikumus (Ridker PM et al, Lancet 2009;373:1175-82). Ross ierosināja uzskatīt aterosklerozi par iekaisuma slimību (Ross R, N Engl J Med 1999;340:115-126). Aspirīns var ne tikai ietekmēt aterosklerozes iekaisuma aspektu, bet arī iedarboties tieši, izsaucot hipolipidēmiju (Kourounakis AP et al, Experimental and Molecular Pathology 2002, 73:135-138).Platelets play an important role in the development of atherosclerosis and the formation of fatal thrombi in coronary heart disease. Antiplatelet agents have become very important in the prevention and treatment of various diseases, including various cardiovascular, cerebrovascular and peripheral arterial diseases (Meadows TA et al, Circ Res 2007; 100 (9): 1261-75). Acetylsalicylic acid is a very widely used drug known mainly for its anti-inflammatory, analgesic, antipyretic and anti-rheumatic properties. It is also used in low daily doses as an antiplatelet agent in cardiovascular patients (Eidelman RS et al., Arch Intern Med. 2003; 163: 2006-2010). Although antiplatelet agents have been known for many years, anti-inflammatory properties of ASA in cardiology have only recently begun to be more focused (Ridker PM et al, N Engl J Med 1997; 336: 973979). Consequently, clinical measurements of inflammatory markers such as C-reactive protein (CRP) may partially reflect atherosclerosis rates (Buckley DI et al, Ann Intern Med 2009; 151: 483-495). Current experience suggests that lowering CRP levels prevents CHD events (Ridker PM et al, Lancet 2009; 373: 1175-82). Ross suggested treating atherosclerosis as an inflammatory disease (Ross R, N Engl J Med 1999; 340: 115-126). Aspirin may not only affect the inflammatory aspect of atherosclerosis but also act directly to induce hypolipidemia (Kourounakis AP et al., Experimental and Molecular Pathology 2002, 73: 135-138).

NS ir efektīvs lipīdus ietekmējošs līdzeklis, kas novērš aterosklerozi un samazina kardiovaskulāro notikumu iespējamību. NS ir daudzveidīga ietekme uz lipoproteīniem un artēriju trombozi, uzlabojot endotēlija funkciju, samazinot iekaisumu, palielinot pangu stabilitāti un samazinot trombu veidošanos (Rosenson RS, Atherosclerosis 2003; 171:87-96).NS is an effective lipid-sparing agent that prevents atherosclerosis and reduces the likelihood of cardiovascular events. NS has diverse effects on lipoproteins and arterial thrombosis, improving endothelial function, reducing inflammation, increasing plaque stability, and reducing thrombus formation (Rosenson RS, Atherosclerosis 2003; 171: 87-96).

NS gandrīz pilnībā novērš recekļu veidošanos asinsvados, ko izraisa tromboplastīns un pituitrins, kas liecina par tās trombolītisko aktivitāti (Baluda VP, Kardiologija 1974; 14(11):105-7 (Rus). NS prettrombu īpašības ir aprakstījuši vairāki autori (Shestakov VA, Probl Gematol Pereliv Krovi, 1977;22(8):29-35. Chekalina SI, Sov Med 1982(5):105-8). NS samazina asins recekļu veidošanos (Chesney CM et al, Am Heart J, 2000;140:631-36).NS almost completely prevents the formation of clots in the blood vessels caused by thromboplastin and pituitrin, suggesting its thrombolytic activity (Baluda VP, Cardiology 1974; 14 (11): 105-7 (Rus). The properties of NS anticoagulants have been described by several authors (Shestakov VA, Probl Gematol Pereliv Krovi, 1977; 22 (8): 29-35. Chekalina SI, Sov Med 1982 (5): 105-8. NS reduces blood clot formation (Chesney CM et al., Am Heart J, 2000; 140: 631-36).

NS kavē trombocītu salipšanu (Lakin KM, Farmakol Toksikol, 1980; 43(5):581-5). NS in vitro ietekmē trombocītu aktivitāti, nedaudz kavējot salipšanu un veicinot nozīmīgu prostaglandīnu atbrīvošanu, pamatā neietekmējot galveno trombocītu receptoru ekspresiju. NS ietekme ir unikāla, tā atšķiras no citiem pretsalipšanas līdzekļiem, kas norāda un potenciālām iespējām to izmantot kombinētā terapijā (Serebruany VL et al, Thrombosis and Haemostasis, 2010 (in press).NS inhibits platelet adhesion (Lakin KM, Farmakol Toksikol, 1980; 43 (5): 581-5). NS affects platelet activity in vitro, slightly inhibiting adhesion and promoting the release of significant prostaglandins, essentially without affecting the expression of major platelet receptors. The effect of NS is unique, unlike other anti-caking agents, indicating and potential use in combination therapy (Serebruany VL et al., Thrombosis and Haemostasis, 2010 (in press).

NS ir efektīvs lipīdus ietekmējošs līdzeklis, kas novērš aterosklerozi un samazina kardiovaskulāro notikumu varbūtību (Drexel H, European Heart Journal Supplements 2006;Vol 8, Suppl F: F23-F29. Savel’ev AA, Shershevskii MG, Klin Med (Rus) 1996;74:48-52).NS is an effective lipid-mediating agent that prevents atherosclerosis and reduces the likelihood of cardiovascular events (Drexel H, European Heart Journal Supplements 2006; Vol 8, Suppl F: F23-F29. Savel'ev AA, Shershevskii MG, Klin Med (Rus) 1996; 74: 48-52).

NS ir pieejama 3 ārstnieciskās formās (ātras atbrīvošanas, palēninātas atbrīvošanas un ilgstošas darbības). Ātrās atbrīvošanas NS ir saistīta ar sasarkuma blakusparādību un glikozes līmeņa paaugstināšanos asinīs. Palēninātas atbrīvošanas NS ir saistīta ar samazinātu sasarkumu, bet ar iespējamu hepatotoksisku efektu risku. Ilgstošas darbības NS ir saistīta ar samazinātu sasarkumu un zemu hepatotoksicitātes risku (McKenney J, Arch Intern Med 2004; 164(7):697-705).NS is available in 3 forms (fast release, sustained release and sustained release). Rapid release NS is associated with redness and increased blood glucose. Slow-release NS is associated with reduced redness but with the potential risk of hepatotoxic effects. Prolonged-acting NS is associated with reduced redness and a low risk of hepatotoxicity (McKenney J, Arch Intern Med 2004; 164 (7): 697-705).

NS klīnisko pielietojumu ierobežoja ādas sasarkums. Palēninātas atbrīvošanas nikotīnskābe var palīdzēt sasarkuma ierobežošanā (Guyton JR et al, J Clin Lipidol, 2009;3:101-108).The clinical application of NS was limited by skin redness. Slow-release nicotinic acid may help in the control of redness (Guyton JR et al., J Clin Lipidol, 2009; 3: 101-108).

ASS un citi NSPL ir piedāvāti ādas sasarkuma ierobežošanai dažādās farmaceitiskās kompozīcijās, kas nodrošina NSPL ievadīšanu pirms NS devas (WO9632942, W09906052, W02009142731).ASA and other NSPLs have been proposed for the control of dermal redness in various pharmaceutical compositions providing NSPL administration prior to the NS dose (WO9632942, WO9906052, WO2009142731).

Nesen NS izraisītā sasarkuma ierobežošanai (Lai E et al, Clin Pharm Ther 2007;81:849-857. Davidson MH, AmJCardiol 2008;101 [suppl]: 14B-19B) ir piedāvāts specifisks prostaglandīna D2 receptora I subtipa antagonists laropiprants (Parhofer KG, Vascular Health and Risk Management 2009;5:901-908). Kaut ari laropipranta pielietošana samazina sasarkuma biežumu, tā nespēj pilnībā novērst šo blakusparādību. Laropiprants nemaina nikotīnskābes ietekmi uz lipīdiem, nedz ari citas nikotīnskābes blakusparādības. Tāpēc nikotīnskābes kombinācija ar laropiprantu var ļaut pielietot nikotīnskābi augstākās devās un pilnībā izmantot šī līdzekļa potenciālu (Parhofer KG, Vascular Health and Risk Management 2009;5:901-908, Olsson AG, Expert Opinion on Pharmacotherapy 2010; 11(10):1715-1726).Recently, a specific prostaglandin D2 receptor subtype I antagonist laropiprant (Parhofer KG) has been proposed to limit NS-induced redness (Lai E et al, Clin Pharm Ther 2007; 81: 849-857. Davidson MH, AmJCardiol 2008; 101 [suppl]: 14B-19B). , Vascular Health and Risk Management 2009; 5: 901-908). Although the use of laropiprant reduces the incidence of redness, it cannot completely eliminate this side effect. Laropiprant does not alter the effects of nicotinic acid on lipids, nor does it alter the other side effects of nicotinic acid. Therefore, the combination of nicotinic acid and laropiprant may allow the use of higher doses of nicotinic acid and the full potential of this agent (Parhofer KG, Vascular Health and Risk Management 2009; 5: 901-908, Olsson AG, Expert Opinion on Pharmacotherapy 2010; 11 (10): 1715- 1726).

MD ir zāles ar zināmiem labvēlīgiem efektiem uz sirdi un asinsvadiem. Zināma derīga MD aktivitāte tika konstatēta dzīvnieku aterosklerozes modeļos (Veveris M, Smilsaraja B, Baltie JLabAnimSci 2000;10:194-199. Veveris M et al, Baltie JLabAnimSci 2002;12:116-122. Okunevich IV, Ryzhenkov VE, Patol Fiziol Eksp Ter (Rus) 2002;(2)24-7). Ir novērots arī, ka MD kavē trombocītu salipšanu (TsirkinVI, Ros Kardiol Zh 2002;1:45-52). Divas nedēļas ilga MD perorāla izmantošana eksperimentālas artēriju trombozes terapijā trušiem un suņiem parādīja trombolītisku iedarbību (Logunova L et al, Experim Clin Pharmacoter 1991;19:91-98 (Rus). Nav zināmi dati par MD profilaktisko iedarbību trombozes ierobežošanā vai novēršanā.MD is a medicine with known beneficial effects on the heart and blood vessels. Some valid MD activity has been found in animal models of atherosclerosis (Veveris M, Smilsaraja B, White JLabAnimSci 2000; 10: 194-199. Veveris M et al, White JLabAnimSci 2002; 12: 116-122. Okunevich IV, Ryzhenkov VE, Patol Fiziol Eksp Ter (Rus) 2002; (2) 24-7). MD has also been reported to inhibit platelet aggregation (TsirkinVI, Ros Kardiol Zh 2002; 1: 45-52). Oral use of MD for two weeks in experimental arterial thrombosis therapy in rabbits and dogs has shown thrombolytic effects (Logunova L et al., Experim Clin Pharmacoter 1991; 19: 91-98 (Rus). No data are available on the prophylactic effect of MD on thrombosis control or prevention.

PROTOTIPIPROTOTYPES

ASS pielietošanas diapazonu lielā mērā ierobežo zemā šķīdība ūdenī (aptuveni 0,3%). Bez Li, Na, Mg un Ca sālīm ir aprakstītas ari vairākas salis ar bāziskām aminoskābēm [US -4,625,888]. Neviena no šīm sālīm nav atradusi plašu pielietojumu medicīnas praksē. Tāpēc ir nepieciešami jaunu ASS sāļu ar uzlabotu šķīdību, zemāku toksicitāti un jaunu farmakoloģisko profilu pētījumi.The range of application of ASS is largely limited by the low water solubility (about 0.3%). In addition to the Li, Na, Mg and Ca salts, several islands with basic amino acids have been described [US-4,625,888]. None of these salts has found widespread use in medical practice. Therefore, studies of novel salts of ASS with improved solubility, lower toxicity and new pharmacological profiles are required.

IZGUDROJUMA PRIEKŠMETIOBJECTS OF THE INVENTION

Šī izgudrojuma priekšmets ir medicīnisks produkts, proti, MDAS ar pretiekaisuma, pretsāpju, pretdrudža, pretreimatisma, antihiperlipidēmisku, antiaterosklerotisku, trombocītu pretsalipšanas un prettrombu īpašībām. Cits šī izgudrojuma priekšmets ir paņēmiens personas ārstēšanai, kurai vajadzīga pretiekaisuma, pretsāpju, pretdrudža, pretreimatisma, antihiperlipidēmiska, antiaterosklerotiska, trombocītu pretsalipšanas un prettrombu terapija. Šī izgudrojuma papildu priekšmets ir farmaceitiskā kompozīcija, kas ietver MDAS augstāk minētajam nolūkam. Vēlāk kļūs redzami arī citi šī izgudrojuma mērķi un vēl citi būs, acīmredzami speciālistam.This invention relates to a medical product, namely MDAS with anti-inflammatory, analgesic, antipyretic, anti-rheumatic, antihyperlipidemic, anti-atherosclerotic, anti-platelet and anti-thrombotic properties. Another subject of the present invention is a method of treating a subject in need of anti-inflammatory, analgesic, antipyretic, anti-rheumatic, antihyperlipidemic, anti-atherosclerotic, anti-platelet and anti-thrombotic therapy. A further subject of the present invention is a pharmaceutical composition comprising MDAS for the above purpose. Other objects of this invention will become apparent later, and others will be apparent to the skilled artisan.

IZGUDROJUMA APRAKSTSDESCRIPTION OF THE INVENTION

Izgudrojums ietver medicīnisku produktu, kas satur MDAS, vēlams vienas devas zāļu formā. Konkrētā forma, kādā aktīvā sastāvdaļa tiek ievadīta nav svarīga, ja vien tiek panākts vēlamais izgudrojuma efekts. Aktīvā sastāvdaļa var būt kapsulu, suspensiju, dispersiju, eliksīru, sīrupu un līdzīgās formās.The invention encompasses a medical product containing MDAS, preferably in a single dose dosage form. The particular form in which the active ingredient is administered is not important, as long as the desired effect of the invention is achieved. The active ingredient may be in the form of capsules, suspensions, dispersions, elixirs, syrups and the like.

Mēs negaidīti atradām, ka MDAS piemīt izcilas pretiekaisuma, pretsāpju, pretdrudža, pretreimatisma, antihiperlipidēmiskas, antiaterosklerotiskas, trombocītu pretsalipšanas un prettrombu īpašības.We have unexpectedly found that MDAS has excellent anti-inflammatory, analgesic, antipyretic, anti-rheumatic, antihyperlipidemic, anti-atherosclerotic, anti-platelet and anti-thrombotic properties.

Tāpēc var paredzēt, ka minētā viela būs vēlams līdzeklis, lai ārstētu iekaisumu, sāpes, drudzi, reimatisku stāvokli, hiperlipidēmijas un aterosklerozes stāvokļus, novērstu trombocītu salipšanu un trombu veidošanos riska grupas pacientiem.Therefore, this substance may be expected to be a desirable agent for the treatment of inflammation, pain, fever, rheumatic conditions, hyperlipidemia and atherosclerosis, to prevent platelet aggregation and thrombus formation in patients at risk.

Šī izgudrojuma medicīniskā produkta forma var būt iekšķīgai lietošanai piemērotā, piemēram, tabletes vai kapsulas.The pharmaceutical product of the present invention may be in the form of an oral dosage form such as tablets or capsules.

Tiek paredzēts, ka šī izgudrojuma medicīniskais produkts var ietvert arī dažādus MDAS polimorfus un solvātus ar tādu pašu rezultātu.It is contemplated that the medical product of the present invention may also contain various MDAS polymorphs and solvates with the same result.

Ir paredzēts, ka šī izgudrojuma medicīniskais produkts ietver ari palēninātas izdalīšanas un ilgstošas darbības zāļu formas.The medical product of the present invention is also intended to include sustained release and sustained release dosage forms.

Izgudrojuma farmaceitisko kompozīciju var pagatavot ar parastajām procedūrām, izmantojot parastās fannaceitiski pieņemamās palīgvielas vai nesējus un tehnoloģijas.The pharmaceutical composition of the invention may be prepared by conventional procedures employing conventional pharmaceutically acceptable excipients or carriers and technologies.

Turpmākie piemēri ilustrē, bet neierobežo izgudrojumu.The following examples illustrate but do not limit the invention.

PIEMĒRIEXAMPLES

Vielas. NS (Acros Chemicals), MD (Grindex), ASS (Acros Chemicals), LA (MK 0524, Cayman Chemicals), KL bisulfats in vitro testiem (Molcan Corporation), KL in vivo testiem kā Plavix™ (Sanofī-Aventis), DI (Sigma-Aldrich).Substances. NS (Acros Chemicals), MD (Grindex), ASS (Acros Chemicals), LA (MK 0524, Cayman Chemicals), KL bisulfate for in vitro assays (Molcan Corporation), KL for in vivo assays as Plavix ™ (Sanofi-Aventis), DI (Sigma-Aldrich).

1. piemērs. MDAS akūtās toksicitātes noteikšanaExample 1: Determination of acute toxicity of MDAS

MDAS akūtā toksicitāte tika noteikta Wistar žurkām un ICR pelēm, ievadotAcute toxicity of MDAS was determined in Wistar rats and ICR mice by administration

p.o.p.o.

Metodes. Tika izmantoti IRC peļu tēviņi ar ķermeņa masu 20-22 g un Wistar žurkas ar ķermeņa masu 200-230 g. Akūtās toksicitātes noteikšanai katra deva tika ievadīta 6 dzīvniekiem, palielinot katru nākamo devu par 500 mg/kg. LD50 tika aprēķināta pēc Karber, izmantojot Akhila JS et al, Current Sci 2007;93:917-920 metodes aprakstu, kas modificēta devu ticamības intervāla noteikšanai (Tumer R In Screening Methods in Pharmacology, Acad. Press, New York, 1965, 61-63).Methods. IRC male mice weighing 20-22 g and Wistar rats 200-230 g were used. For acute toxicity, each dose was administered to 6 animals, increasing each subsequent dose by 500 mg / kg. LD50 was calculated from Karber using the method described by Akhila JS et al, Current Sci 2007; 93: 917-920, modified for Dose Confidence Interval (Tumer R In Screening Methods in Pharmacology, Acad. Press, New York, 1965, 61-9). 63).

LD5o tika aprēķināta šādi:LD 5 o was calculated as follows:

LD5o=Mazākā deva, kas letāla visai grupai - £(a x b)/N N - dzīvnieku skaits katrā grupā a - devu atšķirība b - vidējā mortalitāte (letalitāte 2 blakus grupās/2)LD 5 o = Lowest lethal dose in the whole group - £ (axb) / NN - Number of animals in each group a - Dose difference b - Mean mortality (2 lethal groups / 2)

MDAS tika šķīdināts ex tempore 0,2% agara šķīdumā un ievadīts per os pa katetru kuņģī. Tādā veidā ievadītā šķidruma daudzums nepārsniedza 0,5 ml pelēm un 2 ml žurkām. Dzīvnieki tika novēroti līdz 10. dienai pēc ievadīšanas.MDAS was diluted ex tempore in 0.2% agar solution and administered orally via a catheter in the stomach. The volume of liquid administered in this manner did not exceed 0.5 ml in mice and 2 ml in rats. Animals were observed until day 10 after administration.

Rezultāti. MDAS akūtās toksicitātes noteikšanas rezultāti parādīti 1.-3. tabulā.Results. The results of the MDAS acute toxicity assay are shown in Figures 1-3. in the table.

1.tabulaTable 1

MDAS akūta toksicitāte pelēm p.o.Acute toxicity of MDAS in mice p.o.

Grupa Group Deva mg/kg p.o. Dose mg / kg p.o. Dzīvnieku skaits grupā (N) Number of animals per group (N) Letalitate (n) Letalitate (n) Vidējā mortalitāte (b) Average mortality (b) Probiti (a x b) Probiti (a x b) 1 1 1000 1000 6 6th 0 0 2 2 1500 1500 6 6th 1 1 0.5 0.5 250 250 3 3 2000 2000 6 6th 2 2 1.5 1.5 750 750 4 4 2500 2500 6 6th 4 4 3 3 1500 1500 5 5 3000 3000 6 6th 6 6th 5 5 2500 2500

LD50 = 3000 - (5000/6) = 2167LD 50 = 3000 - (5000/6) = 2167

Koeficients f pie P=0,05 šim eksperimentam ir 1,32, tāpēc LD5o ticamības intervāls ir 1642 - 2860 (mg/kg).The coefficient f at P = 0.05 for this experiment is 1.32, so the LD 5 o confidence interval is 1642-2860 (mg / kg).

Pēc MDAS ievadīšanas toksiskie efekti parādījās dažu pirmo stundu laikā un daļa dzīvnieku nobeidzās pirmo 2 dienu laikā. Izdzīvojušajiem dzīvniekiem toksicitātes simptomi pakāpeniski izzuda un pēc 5-8 dienām šie dzīvnieki neatšķīrās no tāda paša vecuma kontroles grupas dzīvniekiem. Tātad atrastā MDSA LD50 pelēm p.o. ir 2167 (1642-2860) mg/kg.Toxic effects occurred within the first few hours after administration of MDAS and some animals died within the first 2 days. In the surviving animals, the symptoms of toxicity gradually disappeared and after 5 to 8 days these animals did not differ from the same age control group. So the MDSA LD50 mice found p.o. and 2167 (1642-2860) mg / kg.

MDAS akūtas toksicitātes noteikšanas rezultāti žurkāmp.o. ir paradīti 2. tabula.Results of the MDAS Acute Toxicity Test in the rat p.o. Table 2 is shown.

2. tabulaTable 2

MDAS akūtā toksicitāte žurkām p.o.Acute toxicity of MDAS in rats p.o.

Grupa Group Deva mg/kg Deva mg / kg Dzīvnieku skaits grupā(N) Number of animals per group (N) Letalitāte (n) Fatalities (n) Vidēja mortalitāte (b) Medium mortality (b) Probiti (axb) Probiti (axb) 1 1 1500 1500 6 6th 0 0 2 2 2000 2000 6 6th 2 2 1 1 500 500 3 3 2500 2500 6 6th 4 4 3 3 1500 1500 4 4 3000 3000 6 6th 6 6th 5 5 2500 2500

LD50 = 3000 - (4500/6) = 2250LD 50 = 3000 - (4500/6) = 2250

Koeficients f pie P=0,05 šim eksperimentam ir 1,308, tāpēc LD50 ticamības intervāls ir 1720-^ 2944 (mg/kg).The coefficient f at P = 0.05 for this experiment is 1.308, so the LD 50 confidence interval is 1720- ^ 2944 (mg / kg).

MDAS ievadīšana žurkām p.o. devā 1500 mg/kg izsauca pārejošus barības uzņemšanas paradumu un kustību traucējumus, bet visi dzīvnieki izdzīvoja. Toksiskie simptomi sāka izzust 3. dienā pēc ievadīšanas. Tātad atrastā MDSA LD50 žurkām p.o. ir 2250 (1720-2944) mg/kg.Administration of MDAS in rats p.o. at a dose of 1500 mg / kg induced transient feeding and movement disorders, but all animals survived. Toxic symptoms began to disappear on day 3 after administration. Thus, the MDSA LD50 found in rats p.o. and 2250 (1720-2944) mg / kg.

Kopsavilkums. Akūtās toksicitātes pētījumi parādīja, ka MDAS ir viela ar zemu toksicitāti (LD50 > 2000 mg/kg p.o. pelēm un žurkām). ASS akūtā toksicitāte pēc Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc., Acros Chemicals un Sigma-Aldrich datiem ir 250 mg/kg pelēm un 200 mg/kg žurkām p.o., kamēr Bayer AG dod LD50 žurkām p.o. kā >1100 mg/kg, tādējādi MDAS ir mazāk toksisks nekā ASS.Summary. Acute toxicity studies showed that MDAS is a low toxicity substance (LD50> 2000 mg / kg p.o. in mice and rats). The acute toxicity of ASA according to Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc., Acros Chemicals and Sigma-Aldrich is 250 mg / kg in mice and 200 mg / kg in rats p.o., while Bayer AG gives LD50 in rats p.o. as> 1100 mg / kg, thus MDAS is less toxic than ASA.

3. tabulaTable 3

MDAS akūta toksicitāte pelem un žurkām; N=6.Acute toxicity of MDAS in mice and rats; N = 6.

Dzīvnieki Animals LD50 mg/kg p.o.(ticamības intervāls)LD 50 mg / kg po (confidence interval) Peles Mice 2167(1642-2860) 2167 (1642-2860) Žurkas The Rat 2250 (1720-2944) 2250 (1720-2944)

2. piemērs. MDAS, ASS un MD pretsāpju, pretdrudža un pretiekaisuma aktivitāšu salīdzinājums eksperimentosExample 2: Comparison of MDAS, ASS, and MD analgesic, antipyretic, and anti-inflammatory activities in experiments

MDAS pretsāpju, pretiekaisuma un pretdrudža efektu pētījumos tika izmantotas metodes, kuras plaši lieto NSPL novērtēšanā. Eksperimentos tika izmantotas bezšķimes laboratorijas peles un Wistar žurkas. Dzīvnieki tika turēti grupās pa 7-8 piemērotos būros klimatizētās telpās pie 22±1 °C, relatīvā mitruma 60±5% un 12/12 stundu gaismas/tumsas cikla ar brīvu pieeju barībai un ūdenim.The analgesic, anti-inflammatory, and antipyretic effects of MDAS have been investigated using methods commonly used in the evaluation of NSAIDs. Insensitive laboratory mice and Wistar rats were used in the experiments. The animals were housed in groups of 7 to 8 in appropriate cages at 22 ± 1 ° C, 60 ± 5% relative humidity, and a 12/12 hour light / dark cycle with free access to food and water.

MDAS, ASS un MD efektu salīdzināšanai, ievadot perorāli, tika veidotas šādas grupas:For comparing the effects of MDAS, ASS, and MD by oral administration, the following groups were formed:

GRUPA PROCEDŪRAGROUP PROCEDURE

ASS50 saņēma ASS 50 mg/kgThe ASS50 received the ASS 50 mg / kg

ASS 100 saņēma ASS 100 mg/kgASS 100 received ASS 100 mg / kg

MD 100 saņēma MD 100 mg/kgMD 100 received MD 100 mg / kg

MDAS75 saņēma MDAS 75 mg/kgMDAS75 received MDAS 75 mg / kg

MDAS 15 0 saņēma MDAS 150 mg/kgMDAS 15 0 received MDAS 150 mg / kg

MDAS300 saņēma MDAS 300 mg/kgMDAS300 received MDAS 300 mg / kg

Pārbaudāmo vielu ūdens šķīdumi tika gatavoti ex tempore. Katrā eksperimentu sērijā tika izmantota kontroles grupa, kura saņēma identisku tilpumu ūdens p.o.Aqueous solutions of the test substances were prepared ex tempore. In each series of experiments, a control group was used that received an identical volume of water p.o.

Statistika. Dati tika analizēti ar Microsoft Excel 2007 programmatūru un rezultāti izteikti kā Vidējais±Standarta vidējā kļūda (Mean±SEM). Dažādu grupu vidējie rezultāti tika salīdzināti, izmantojot vienfaktora analīzi pēc ANOVA ar atkārtotu salīdzināšanu (Tukeja tests). Par nozīmīgu tika uzskatīts P<0,05.Statistics. Data were analyzed with Microsoft Excel 2007 software and expressed as Mean ± Standard Mean Error (SEM). The mean scores of the different groups were compared using one-way ANOVA with repeated comparison (Tukey's test). P <0.05 was considered significant.

2.1. Pretsāpju aktivitātes pētīšana2.1. Investigation of analgesic activity

2.1.1. Pretsāpju aktivitātes novērtēšana ar peļu ..locīšanās” testu2.1.1. Evaluation of analgesic activity using the mouse ..bend ”test

Metode, Sāpju reakcija tika novērtēta ar ķīmiskā kairinājuma metodi - ..locīšanās” testu (Charaborty A et al, Indian J of Pharmacology 2004;36(3): 148-150). Dzīvnieki saņēma i.p. 0,25 ml 0,75% etiķskābes ūdens šķīduma. Pēc injekcijas dzīvnieki tika ievietoti atsevišķi īpašos boksos un novēroti 10 minūtes. Tika reģistrēts vēdera saraušanās gadījumu skaits. Pretsāpju aktivitāte izpaudās kā vēdera saraušanās gadījumu skaita samazināšanās 10 minūšu periodā. Pētāmās vielas tika ievadītas 30 min. pirms kairinošā līdzekļa. Pretsāpju iedarbība tika izteikta kā pretsāpju indekss, kuru aprēķināja šādi:Method, The pain response was assessed by the chemical-irritation-bending assay (Charaborty A et al, Indian J of Pharmacology 2004; 36 (3): 148-150). Animals received i.p. 0.25 ml of 0.75% aqueous acetic acid solution. After injection, the animals were housed separately in specific boxes and observed for 10 minutes. Abdominal contractions were recorded. The analgesic activity consisted of a reduction in the number of cases of abdominal contraction over a 10-minute period. Test substances were administered for 30 min. before the irritant. The analgesic effect was expressed as the analgesic index calculated as follows:

A = (Cc-Ct)/Cc · 100%, kurA = (Cc-Ct) / Cc · 100% where

A - analgēzijas indekssA - index of analgesia

Cc - saraušanās gadījumu skaits kontroles grupā,Cc - number of contractions in the control group,

Ct - saraušanās gadījumu skaits testa grupā.Ct - number of contractions in the test group.

Rezultāti doti 4. tabulā.The results are given in Table 4.

4. tabulaTable 4

Pētāmo vielu pretsāpju efekts „locišanās” testa modelī; N=8; Mean+SEMThe analgesic effect of the test substances in the "flexion" test model; N = 8; Mean + SEM

Grupa Group Dzīvnieki ar pozitīvu reakciju/kopskaits Animals with positive reactions / total Saraušanas skaits Number of breaks Analgēzijas indekss Analgesia index Kontrole Control 8/8 8/8 22.00+ 1.60 22.00+ 1.60 - - MD100 MD100 8/8 8/8 22,10+1,47 22.10 + 1.47 -0,4 -0.4 ASS50 ASS50 6/8 6/8 5,75 + 1,32***“ 5.75 + 1.32 *** " 7,1 7.1 MDAS75 MDAS75 8/8 8/8 12,13 + 0,61**“ 12.13 + 0.61 ** " 4,5 4.5 MDAS 150 MDAS 150 7/8 7/8 10,63 ± 1,10**“ 10.63 ± 1.10 ** " 5,2 5.2 MDAS300 MDAS300 5/8 5/8 6,00+ 1,39***“ 6.00+ 1.39 *** " 7,3 7.3

**P<0,005 pret kontroli ***P<0,0005 pret kontroli ”P<0,005 pret MD I$SP<0,0005 pret MD** P <0.005 vs. Control *** P <0.0005 vs. Control ”P <0.005 vs. MD I $ S P <0.0005 vs. MD

MDAS uzrādīja no devas atkarīgu pozitīvu efektu. Vislabākie rezultāti tika novēroti ASS50 un MDAS300 (P<0,0005) grupās, kamēr MD bija neaktīvs. Analgēzijas indekss MDAS300 grupā bija 7,3 (tikai 5 dzīvniekiem no 8 bija sāpju reakcija).MDAS showed a dose-dependent positive effect. The best results were observed in the ASS50 and MDAS300 (P <0.0005) groups while the MD was inactive. The analgesia index in the MDAS300 group was 7.3 (only 5 of 8 animals had a pain response).

2.1.2. Pretsāpju aktivitātes novērtēšana pelēm ar karstās plāksnītes testu2.1.2. Evaluation of analgesic activity in hot plate test mice

Metode. Karstās plāksnītes tests tika veikts ar 52 pelēm, kuru ķermeņa masa bija 1726 g, atbilstoši literatūrai (Belyakov VA, Solov’ev IK. Narcotic analgesics, Nizhny Novgorod, 2001 (in Russian). Karstās plāksnītes testu lieto centrālās darbības pretsāpju līdzekļu skriningam (Osterberg A et al, J Pharmacol Exper Ther 1958;122:59). Pētāmo vielu ūdens šķīdumi tika ievadīti p.o. 30 vai 60 min. pirms testēšanas. Tika reģistrēts laiks līdz ķepu aplaizīšanai. Pretsāpju aktivitātes rādītājs bija reakcijas aizkavēšanās uz termisko kairinātāju.The method. The hot plate test was performed on 52 mice weighing 1726 g, according to the literature (Belyakov VA, Solov'ev IK. Narcotic analgesics, Nizhny Novgorod, 2001 (in Russian). The hot plate test is used for screening of central analgesics (Osterberg A et al, J Pharmacol Exper Ther 1958; 122: 59) Test solutions of aqueous solutions were administered 30 or 60 min prior to testing Time to paw bite was recorded The analgesic activity measure was the delay in response to the thermal irritant.

Rezultāti doti 5. tabulā.The results are given in Table 5.

5. tabulaTable 5

Reakcijas laiks pelēm karstas plāksnītes testa; N = 8-10; Mean+SEMResponse time of mice hot plate test; N = 8-10; Mean + SEM

Grupa Group Latentais periods, s Latent period, s 30 min pēc pētāmās vielas ievadīšanas 30 min after administration of the test substance 60 min pēc pētāmās vielas ievadīšanas 60 min after administration of the test substance Kontrole Control 4,5±0,42 4.5 ± 0.42 5,0±0,27 5.0 ± 0.27 MD100 MD100 9,5±0,68***&& 9.5 ± 0.68 *** && 8,3±0,53*** 8.3 ± 0.53 *** ASS50 ASS50 5,4±0,46 5.4 ± 0.46 9,7±l,05** 9.7 ± 1.05 ** MDAS75 MDAS75 5,4±0,38 5.4 ± 0.38 4,6±0,26 4.6 ± 0.26 MDAS150 MDAS150 9,5±0,53***&ti 9.5 ± 0.53 *** & ti 7,l±0,55** 7, l ± 0.55 ** MDAS300 MDAS300 9,6±l,12**i 9.6 ± l, 12 ** i 8,6±0,60*** 8.6 ± 0.60 ***

**P<0,005 pret kontroli ***P<0,0005 pret kontroli &P<0,05 pret ASS (30 min) “P<0,005 pret ASS (30 min) &&&P<0,0005 pret ASS (30 min)** P <0.005 vs. Control *** P <0.0005 vs. Control & P <0.05 vs. ASS (30 min) “P <0.005 vs. ASS (30 min) &&& P <0.0005 vs. ASS (30 min) )

Eksperimenta dati liecina, ka MDAS150 un MDAS300, kā arī MD grupai novēro nozīmīgu pretsāpju efektu pēc 30 un 60 minūtēm. ASS nozīmīgi paaugstināja sāpju slieksni tikai pēc 60 minūtēm, kas norāda uz lēnāku efekta iestāšanos (5. tabula).Experimental data show that the MDAS150 and MDAS300 as well as the MD group show significant analgesic effect at 30 and 60 minutes. ASA significantly increased the pain threshold only after 60 minutes, indicating a slower onset of action (Table 5).

3. Pētāmo vielu salīdzinoša novērtēšana pretdrudža testā3. Comparative evaluation of test substances in fever test

3.1. Preventīvās pretdrudža aktivitātes novērtēšana žurkām ar pirogenāla injekciju3.1. Evaluation of Preventive Fever Activity in Pyrogenically Injected Rats

Metode. Eksperimenti tika veikti ar 48 Wistar žurkām, kuru ķermeņa masa bija 165182 g, ievadot muskulī pirogenālu (Gamalei State Research Institūtiem, Moscow, Russia) devā 100 pg (Shwarz GY, Syubaev RD, Vedomosti NCEG lekarstvennyh sredstv MZ RF 2000;1:44-50 (Rus). Pētāmās vielas tika ievadītas p.o. vienu stundu pirms pirogenāla injekcijas. Rektālā temperatūra tika mērita ar elektrisko termometru TERMO pirms pirogenāla injekcijas (bāzlīnija) un 3 stundas pēc injekcijas. Pretdrudža aktivitāte tika novērtēta pēc hipertermiskās reakcijas vājināšanas 2 stundas pēc pirogenāla injekcijas, kas labi korelē ar publicētajiem datiem par reakcijas pīķi (6. tabula). Telpas temperatūra tika uzturēta 20-21 °C robežās.The method. Experiments were performed on 48 Wistar rats weighing 165182 g by intramuscular injection of 100 pg (Shwarz GY, Syubaev RD, Vedomosti NCEG lekarstvennyh sredstv MZ RF 2000; 1: 44-) into the muscle (Gamalei State Research Institutes, Moscow, Russia); 50 (Rus) Test substances were administered one hour before pyrogen injection, rectal temperature was measured with an electric thermometer TERMO before pyrogen injection (baseline) and 3 hours after injection, and the antipyretic activity was evaluated after 2 hours after pyrogen injection, which correlates well with published reaction peak data (Table 6) Room temperature was maintained at 20-21 ° C.

Kā izriet no datiem, kontroles grupas dzīvnieku ķermeņa temperatūra pakāpeniski paaugstinājās, sasniedzot maksimumu pēc 2 stundām un pārsniedzot normālo vēl 1 stundu.As shown by the data, the body temperature of the control animals gradually increased, reaching a peak after 2 hours and above the normal for another 1 hour.

6. tabulaTable 6

Kontroles grupas rektālās temperatūras izmaiņas pirogenāla ietekmē; N=8; Mean±SEMChanges in rectal temperature of the control group under the influence of pyrogen; N = 8; Mean ± SEM

Grupa Group Bazhnija (°C) Bazhnaya (° C) Rektala temperatūra (°C) Rectal temperature (° C) pēc 30 min. after 30 min pēc 60 min. after 60 min pec 120 min. pec 120 min pec 180 min. in 180 min Kontrole M-zv - Control M-zv - 36,16±0,16 36.16 ± 0.16 36,25±0,21 36.25 ± 0.21 36,75±0,12** 36.75 ± 0.12 ** 36,90±0,10#*# 36.90 ± 0.10 # * # 36,70±0,17# 36.70 ± 0.17 #

*P<0,05 pret bāzlīniju ##P<0,005 pret bāzlīniju WP<0,0005 pret bāzlīniju* P <0.05 versus baseline ## P <0.005 versus baseline W P <0.0005 versus baseline

Petamas vielas būtiski neietekmeja dzīvnieku normālo ķermeņa temperatūru, bet būtiski samazināja pirogenāla izraisīto hipertermiju (7. tabula).Petamates did not significantly affect the normal body temperature of the animals, but significantly reduced the hyperthermia induced by pyrogen (Table 7).

7. tabulaTable 7

Pētāmo savienojumu ietekme uz hipertermiju, kas ierosinātā ar intramuskulāru pirogenāla injekciju, N=8; Mean+SEMEffect of investigated compounds on hyperthermia induced by intramuscular pyrogen injection, N = 8; Mean + SEM

Grupa Group Bazlinijas rektālā temperatūra (°C) Baselines rectal temperature (° C) Rektala temperatūra (°C) 120 minūtes pēc injekcijas Rectal temperature (° C) 120 minutes after injection Kontrole Control 36,2+0,12 36.2 + 0.12 36,9+0,16^ 36.9 + 0.16 MD100 MD100 35,9+0,18 35.9 + 0.18 36,2+0,16* 36.2 + 0.16 * ASS50 ASS50 35,8+0,17 35.8 + 0.17 35,6+0,19***s 35.6 + 0.19 *** s MDAS75 MDAS75 36,1+0,18 36.1 + 0.18 36,3+0,20* 36.3 + 0.20 * MDAS150 MDAS150 35,8+0,15 35.8 + 0.15 36+0,21** 36 + 0.21 ** MDAS300 MDAS300 35,9+0,14 35.9 + 0.14 35,8+0,16***’ 35.8 + 0.16 *** '

*P<0,05 pret kontroli **P<0,005 pret kontroli ***p<0,0005 pret kontroli **P<0,005 pret bāzlīniju sP<0,05 pret MD* P <0.05 versus control ** P <0.005 versus control *** p <0.0005 versus control ** P <0.005 versus baseline s P <0.05 versus MD

Hipertermijas modelī ķermeņa temperatūras paaugstināšanās, kuru ierosināja pirogenāla injekcija, tika pilnībā novērsta ASS50 un MDAS300 grupās (7. tabula). MD100, MDAS75 un MDAS150 grupās antipirētiskais efekts bija mazāk izteikts.In the hyperthermic model, the increase in body temperature induced by pyrogenic injection was completely reversed in the ASS50 and MDAS300 groups (Table 7). The anti-pyretic effect was less pronounced in MD100, MDAS75 and MDAS150 groups.

3.2. Preventīvās pretdrudža aktivitātes novērtēšana žurkām ar pirogenāla injekciju (ārstēšanas režīms)3.2. Evaluation of Preventive Fever Activity in Pyrogenically Injected Rats (Treatment Regimen)

Metode. Pētāmo vielu pretdrudža efekts terapeitiskajā (ārstēšanas) režīmā tika pētīts ar 48 žurkām, kuru ķermeņa masa bija 182-205 g, ierosinot hipertermiju ar pirogenāla injekciju 100 pg devā (Shwarz GY, Syubaev RD, Vedomosti NCEG lekarstvennyh sredstv MZ RF 2000;1:44-50 (Rus). Pētāmās vielas tika ievadītas p.o. 2 stundas pēc pirogenāla ievadīšanas, tūlīt pēc paaugstinātās ķermeņa temperatūras izmērīšanas. Rektālā temperatūra tika mērīta ar elektrisko termometru TERMO pirms pirogenālaThe method. The anti-fever effect of the test substances in the therapeutic (treatment) regimen was investigated in 48 rats weighing 182-205 g by inducing hyperthermia with a pyrogenic injection at 100 pg (Shwarz GY, Syubaev RD, Vedomosti NCEG lekarstvennyh sredstv MZ RF 2000; 1: 44 -50 (Rus) The test substances were administered 2 hours after pyrogen administration, immediately after the elevated body temperature was measured Rectal temperature was measured with an electric thermometer TERMO before pyrogen

i.m. injekcijas (bāzlīnijas temperatūra), hipertermijas pīķī (pirogenāla kontrole) un 30 min. pēc pētāmās vielas ievadīšanas, t.i., 2½ stundas pēc pirogenāla ievadīšanas. Temperatūra laboratorijā tika uzturēta 20-22 °C robežās.i.m. injections (baseline temperature), peak of hyperthermia (pyrogenic control), and 30 min. after test substance administration, i.e. 2½ hours after pyrogen administration. The temperature in the laboratory was maintained at 20-22 ° C.

Rezultāti doti 8. tabulā.The results are given in Table 8.

8. tabulaTable 8

Pētāmo vielu ietekme uz hipertermiju, kas ierosinātā ar intramuskulāru pirogenāla injekciju (ārstēšanas režīms); N=8; Mean+SEMEffects of test substances on hyperthermia induced by intramuscular pyrogen injection (treatment regimen); N = 8; Mean + SEM

Grupa Group Bāzlīnijas rektālā temperatūra (°C) Basal Rectal Temperature (° C) Rektālā temperatūra (°C) pēc pirogenāla injekcijas (pirogenāla kontrole) Rectal temperature (° C) after pyrogen injection (pyrogenic control) Rektālā temperatūra (°C) 30 minūtes pēc procedūras Rectal temperature (° C) 30 minutes after the procedure Kontrole Control 36,10+0,15 36.10 + 0.15 36,90+0,20** 36.90 + 0.20 ** 37,00+0,18** 37.00 + 0.18 ** MD100 MD100 36,41+0,14 36.41 + 0.14 37,06+0,13** 37.06 + 0.13 ** 37,10+0,14** 37.10 + 0.14 ** ASS50 ASS50 36,39+0,13 36.39 + 0.13 37,04+0,25* 37.04 + 0.25 * 36,51±0,15*s 36.51 ± 0.15 * s MDAS75 MDAS75 36,23+0,12 36.23 + 0.12 37,01+0,11** 37.01 + 0.11 ** 36,90+0,07^ 36.90 + 0.07 ^ MDAS150 MDAS150 36,25+0,20 36.25 + 0.20 36,96+0,15* 36.96 + 0.15 * 36,75+0(09^ 36.75 + 0 {09 ^ MDAS300 MDAS300 36,11+0,14 36.11 + 0.14 36,76+0,11** 36.76 + 0.11 ** 36,40+0,11 *“% 36.40 + 0.11 * " %

*P<0,05 pret kontroli *P<0,05 pret bāzlīniju wP<0,005 pret bāzlīniju %P<0,05 pret pirogenāla kontroli sP<0,05 pret MD KP<0,005 pret MD* P <0.05 versus control * P <0.05 versus baseline w P <0.005 versus baseline % P <0.05 versus pyrogenic control s P <0.05 versus MD K P <0.005 versus MD

Pirogenāls izraisīja nozīmīgu un līdzīgu ķermeņa temperatūras paaugstināšanos visiem eksperimentā izmantotajiem dzīvniekiem (salīdz, pirogenāla kontroli pret bāzlīniju, 8. tabula). Pētāmo vielu, izņemot MD, ievadīšana izsauca ķermeņa temperatūras pazemināšanos pret bāzlīniju un pirogenāla kontroli. Salīdzinoši augstāka hipotermija tika novērota MDAS300 un ASS50 grupās, kur ķermeņa temperatūras pazemināšanās bija nozīmīga pret kontroli un MD100. Jāatzīmē, ka MDAS300 grupā, pretstatā ASS50, ķermeņa temperatūras pazemināšanas bija nozīmīga ari pret pirogenāla kontroli. Tas norada uz ievērojamu un strauju MDSA antipirētisko efektu, kas var būt vērtīgs klīnikā.Pyrogenic caused a significant and similar increase in body temperature in all the animals used in the experiment (cf. Pyrogenic control against the baseline, Table 8). The administration of test substances other than MD resulted in a decrease in body temperature against baseline and pyrogen control. Relatively higher hypothermia was observed in the MDAS300 and ASS50 groups, where body temperature reduction was significant compared to control and MD100. It should be noted that in the MDAS300 group, as opposed to ASS50, body temperature reductions were also significant against pyrogenic control. This points to the remarkable and rapid anti-pyretic effect of MDSA, which can be valuable in the clinic.

4. Pētāmo vielu salīdzinošā pretiekaisuma aktivitāte4. Comparative anti-inflammatory activity of test substances

4.1. Akūtas iekaisuma tūskas modelis4.1. Model of acute inflammatory edema

Metode. Eksperimenti tika veikti, izmantojot karagenīna testu (Winter C et al, Proc Soc Exptl Biol and Med 1962;IIĪ(3):544-547. Wei Jia et al, Journal of Ethnopharmacology 2003(89): 139-141; Sutharson Lingadurai et al, African Journal of traditional, complementary and alternative medicines, 2007, 4(4):411-416) ar 42 žurkām, kuru ķermeņa masa bija 226-274 g robežās. Tika izdarīta viena (1%) karagenīna (Sigma) šķīduma fizioloģiskā šķīdumā (0,1 ml) injekcija pakaļkājas ķepā. Pētāmās vielas tika ievadītas p.o. (pa katetru žurkas kuņģī) 30 min. pēc karagenīna injekcijas. Ķepas tilpums tika mērīts ar onkometru bāzlīnijā un 4 stundas pēc karagenīna injekcijas.The method. Experiments were performed using the carrageenan assay (Winter C et al, Proc Soc Exptl Biol and Med 1962; III (3): 544-547. Wei Jia et al., Journal of Ethnopharmacology 2003 (89): 139-141; Sutharson Lingadurai et al. al, African Journal of Traditional, Complementary and Alternative Medicine, 2007, 4 (4): 411-416) with 42 rats weighing between 226 and 274 g. One (1%) solution of carrageenan (Sigma) in saline (0.1 ml) was injected into the hind paw. Test substances were administered p.o. (via catheter in rat's stomach) 30 min. after injection of carrageenan. Paw volume was measured with an oncometer at baseline and 4 hours after carrageenan injection.

Aizsardzības indekss procentos (tūskas nomākšana) tika aprēķināts pēc formulas:The percent protection index (suppression of edema) was calculated using the formula:

Aizsardzības indekss (%) = (1 - Vo/Vc ) x 100, kurProtection index (%) = (1 - Vo / Vc) x 100 where

I - Aizsardzības indekss % (tūskas nomākšana)I - Protection Index% (suppression of edema)

Vo - starpība starp ķepas tilpumu bāzlīnijā un eksperimenta apstākļos;Vo - difference between paw volume at baseline and experimental conditions;

Vc - analoģiska starpība kontroles grupā.Vc - analogous difference in control group.

Rezultāti doti 9. tabulā.The results are given in Table 9.

9. tabulaTable 9

Pētāmo vielu prettuskas aktivitāte karagenīna iekaisuma modelī; N=7, Mean±SEMAntiinflammatory activity of test substances in carrageenan inflammatory model; N = 7, Mean ± SEM

Grupa Group Ķepas tilpums (ml) bāzlīnijā Volume of paw (ml) at baseline Ķepas tilpums (ml) pec karagenīna injekcijas Paw volume (ml) after carrageenan injection ml ml Indekss, % Index,% Kontrole Control l,6±0,30 1.6 ± 0.30 2,70±0,13 2.70 ± 0.13 0 0 MD100 MD100 l,5±0,34 1.5 ± 0.34 2,13±0,12* 2.13 ± 0.12 * 43 43 ASAI 00 ASAI 00 l,6±0,32 l, 6 ± 0.32 l,97±0,10** l, 97 ± 0.10 ** 66 66 MDAS75 MDAS75 l,6±0,44 1.6 ± 0.44 2,51±0,l 1 2.51 ± 0.1 l 18 18th MDAS150 MDAS150 l,6±0,31 1.6 ± 0.31 l,54±0,15***s& l, 54 ± 0.15 *** s & 93 93 MDAS300 MDAS300 l,7±0,25 1.7 ± 0.25 l,79±0,15** l, 79 ± 0.15 ** 91 91

*P<0,05 pret kontroli **P<0,005 pret kontroli ***P<0,0005 pret kontroli &P<0,05 pret ASS 100 sP<0,05 pret MD* P <0.05 versus control ** P <0.005 versus control *** P <0.0005 versus control & P <0.05 versus ASS 100 s P <0.05 versus MD

Akūtās iekaisuma tūskas modelī skartās ekstremitātes tilpums pieaug apmēramIn the model of acute inflammatory edema, the volume of the affected limb increases approximately

1,6 reizes. Visizteiktākais iekaisuma procesa efekts tika novērsts MDAS150 grupā, kur profilakses indekss bija 93% pret kontroles grupu. MDAS300 grupā aktivitāte bija nedaudz zemāka - tūska tika samazināta par 91%. Tūskas samazināšanās tika novērota ari MD100 un ASS50 grupās.1.6 times. The most pronounced effect of the inflammatory process was prevented in the MDAS150 group, where the prevention index was 93% versus the control group. In the MDAS300 group, activity was slightly lower - swelling was reduced by 91%. Decreased edema was also observed in the MD100 and ASS50 groups.

4.2. Pētāmo vielu pretiekaisuma aktivitāte pret karagenīna tūsku profilakses režīmā4.2. The anti-inflammatory activity of the test substances against carrageenan edema in the prophylactic regimen

Metode. Karegenīna tūska tika pētīta, izmantojot zināmu metodi (Okunevich IV, Ryzhenkov VE, Patol Fiziol Eksp Ter, 2002(2):24-7 (Rus) ar 42 žurkām, kuru ķermeņa masa bija 178-220 g robežās. Pētāmās vielas tika ievadītas p.o. 5 dienu laikā. Tūlīt pēc pētāmo vielu ievadīšanas 6. dienā žurkām pakaļkājas ķepā tika ievadīts 0,1 ml 1% karagenīna šķīduma. Ķepas tilpums tika mērīts ar onkometru bāzlīnijā un 4 stundas pēc karagenīna injekcijas. Aizsardzības indekss tika aprēķināts kā norādīts iepriekšēja sadaļa. Pētāmo vielu profilaktiska ievadīšana 6 reizes izraisīja tūskas samazināšanos, salīdzinot ar neārstētiem dzīvniekiem (10. tabula).The method. Caregenin edema was studied by a known method (Okunevich IV, Ryzhenkov VE, Patol Fiziol Eksp Ter, 2002 (2): 24-7 (Rus) in 42 rats weighing 178-220 g. Within 5 days: Immediately after administration of the test substances on day 6, rats were injected with 0.1 ml of 1% carrageenan solution in the hind paw The volume of the paw was measured with an oncometer at baseline and 4 hours after injection of carrageenan. the prophylactic administration of 6-fold agents resulted in a reduction in edema compared to untreated animals (Table 10).

10. tabulaTable 10

Pētāmo vielu profilaktiskā prettūskas iedarbība pret karagenīna tusku; N=7, Mean±SEMPreventive anti-edema effect of test substances on carrageenan; N = 7, Mean ± SEM

Grupa Group Ķepas tilpums (ml) bāzlīnijā Volume of paw (ml) at baseline Ķepas tilpums (ml) pēc karagenīna injekcijas Volume of paw (ml) after carrageenan injection ml ml Samazināšanas % % Reduction Kontrole Control l,43±0,12 1.43 ± 0.12 l,93±0,l 1 l, 93 ± 0, l 1 0 0 MD100 MD100 l,33±0,09 1.33 ± 0.09 l,66±0,10 1.66 ± 0.10 34 34 ASS50 ASS50 l,40±0,06 1.40 ± 0.06 l,55±0,04* 1.55 ± 0.04 * 70 70 MDAS 150 MDAS 150 l,37±0,ll l, 37 ± 0, ll l,40±0,09**J l, 40 ± 0.09 ** J 94 94 MDAS300 MDAS300 l,34±0,07 1.34 ± 0.07 l,41±0,04**s l, 41 ± 0.04 ** s 86 86

*P<0,05 pret kontroli **P<0,005 pret kontroli 5Ρ<0,05 pret MD* P <0.05 versus control ** P <0.005 versus control 5 Ρ <0.05 versus MD

Šajā iekaisuma modelī MDAS 150 un MDAS300 grupās tika novērota nozīmīga aizsargājoša aktivitāte (94%), kas bija augstāka nekā MD100 (34%) un ASS50 (70%) grupās (10. tabula).In this inflammatory model, significant protective activity was observed in the MDAS 150 and MDAS300 groups (94%), which was higher than in the MD100 (34%) and ASS50 (70%) groups (Table 10).

Lai novērtētu iekaisuma procesa intensitāti, ar standarta metodi uz analizatora «INTEGRA 400+” eksperimenta beigās (5 stundas pēc karagenīna injekcijas) tika noteikts CRP līmenis.To measure the intensity of the inflammatory process, a CRP level was determined on the INTEGRA 400+ analyzer at the end of the experiment (5 hours after carrageenan injection) using a standard method.

CRP noteikšanas rezultāti asinīs doti 11. tabulā.Table 11 shows the results of blood CRP determination.

11. tabulaTable 11

CRP līmenis žurku asinīs karagenīna iekaisuma modelī žurkām; N=7, Mean±SEMCRP levels in rat blood in a carrageenan model of inflammation in rats; N = 7, Mean ± SEM

Grupa Group CRP mg/l CRP mg / L CRP pieaugums % CRP increase% Kontrole Control 0,17±0,015 0.17 ± 0.015 0 0 Karagenīna kontrole Carrageenan control 0,23±0,016** 0.23 ± 0.016 ** 100 100 MD100 MD100 0,22±0,014* 0.22 ± 0.014 * 83 83 ASS100 ASS100 0,20±0,018 0.20 ± 0.018 50 50 MDAS 150 MDAS 150 0,19±0,009#$ 0.19 ± 0.009 # $ 33 33 MDAS300 MDAS300 0,21±0,014* 0.21 ± 0.014 * 67 67

*P<0,05 pret kontroli **P<0,005 pret kontroli *P<0,05 pret karagenīna kontroli sP<0,05 pret MD* P <0.05 versus control ** P <0.005 versus control * P <0.05 versus carrageenan control s P <0.05 versus MD

Kā izriet no šiem datiem, karagenīns izraisa CRP līmeņa pieaugumu asinīs. ASS 100 grupā CRP līmeņa pieaugums tika samazināts par 50% (11. tabula). Negaidīti MDAS150 grupā CRC līmeņa pieaugums bija nozīmīgi mazāk izteikts (tikai 33% pret kontroli). Tas atbalsta slēdzienu, ka MDAS var būt ar pozitīvu efektu uz iekaisuma procesu klīnikā.As can be seen from these data, carrageenan causes an increase in CRP levels in the blood. In the ASS 100 group, the increase in CRP level was reduced by 50% (Table 11). Unexpectedly, in the MDAS150 group, CRC elevation was significantly less pronounced (only 33% versus control). This supports the conclusion that MDAS may have a positive effect on the inflammatory process in the clinic.

5. piemērs. MDAS pretreimatiskās aktivitātes pētījums salīdzinājumā ar ASS un MDExample 5. Study of MDAS anti-rheumatic activity versus ASA and MD

Klīniskā pieredze rāda, ka reimatoīdā artrīta (RA) pacienti ir predisponēti aterosklerozei un kardiovaskulārai slimībai (Nasonov EL, Vestn Ross Akad Nauk 2003(7):6-10). Pacientiem ar ilgstošu RA ateroskleroze ir biežāk nekā tāda paša vecuma pacientiem ar nesenāku slimības sākumu. Sistēmisks iekaisums var pastiprināt ar vecumu saistīto kardiovaskulārās slimības risku (Del Rincon I et al, Atherosclerosis 2007; 196(2):3 54-360).Clinical experience has shown that rheumatoid arthritis (RA) patients are predisposed to atherosclerosis and cardiovascular disease (Nasonov EL, West Ross Akad Nauk 2003 (7): 6-10). Patients with long-term RA have atherosclerosis more often than patients of the same age with a more recent onset. Systemic inflammation may increase the age-related risk of cardiovascular disease (Del Rincon I et al., Atherosclerosis 2007; 196 (2): 3 54-360).

Reimatoīdam artrītam ir pirmā vieta starp reimatoīdajiem veselības traucējumiem. Visadekvātākais cilvēka reimatoīdā artrīta eksperimentālais dzīvnieku modelis ir adjuvanta artrīta modelis, kuru izsauc ar Freinda adjuvanta injekcija žurkas pakaļkājas pēdā. Tas tiek plaši izmantots pretartrīta vielu atlasē (Wei Jia et al, Journal of Ethnopharmacology 2003(89): 139-141; Sutharson Lingadurai et al, African Journal of traditiona.1, complementary and alternative medicines, 2007;, 4(4):411416).Rheumatoid arthritis has the first place among rheumatoid disorders. The most appropriate experimental animal model of human rheumatoid arthritis is the adjuvant arthritis model induced by Freind's adjuvant injection in the hind foot of a rat. It is widely used in the selection of anti-arthritis agents (Wei Jia et al., Journal of Ethnopharmacology 2003 (89): 139-141; Sutharson Lingadurai et al., African Journal of Tradition.1, 2007 ;, 4 (4): 411416).

Metodes. Mūsu eksperimenti tika plānoti, lai pārbaudītu MDAS ietekmi uz adjuvanta artrita attīstību salīdzinājumā ar MD un ASS. Eksperimenti tika veikti ar Wistar žurkām, kuru sākotnējā ķermeņa masa bija 153-185 g. Žurkas tika turētas klimatizētās telpās 22±1 °C temperatūrā, ar relatīvo mitrumu 60 ±5% un 12/12 gaismas/tumsas ciklu. Katrā standarta būri tika turētas 7 žurkas ar neierobežotu piekļuvi dzeramajam ūdenim un granulētai standarta barībai. Visi eksperimenti tika veikti saskaņā ar Eiropas Kopienas Padomes 1986. gada 24. novembra direktīvu (86/609/EK) par dzīvnieku izmantošanu zinātniskiem mērķiem. Tika pieliktas visas pūles, lai līdz minimumam samazinātu dzīvnieku ciešanas un samazinātu izmantoto dzīvnieku skaitu.Methods. Our experiments were designed to test the effect of MDAS on the development of adjuvant arthritis relative to MD and ASS. Experiments were performed on Wistar rats with an initial body weight of 153-185 g. Rats were housed in air-conditioned rooms at 22 ± 1 ° C, 60 ± 5% relative humidity, and 12/12 light / dark cycles. Each standard cage housed 7 rats with unrestricted access to drinking water and pelleted standard food. All experiments were carried out in accordance with Council Directive 86/609 / EEC of 24 November 1986 on the use of animals for scientific purposes. Every effort was made to minimize animal suffering and reduce the number of animals used.

Tika izmantota modificēta standarta procedūra hroniskā adjuvanta artrita izraisīšanai un tā progresa novērtēšanai (Bellavite P, Ortolani R, Conforti A, Immunology and Homeopaty. 3. Experimental Studies on Animal Modeh, Advance Access Publication 2.05,2006, 171-186). Žurkām tika injicēts pilnais Freinda adjuvants pakaļkājas pēdā 0,1 ml un intraperitoneāli 0,05 ml.A modified standard procedure for the induction and progression of chronic adjuvant arthritis was used (Bellavite P, Ortolani R, Conforti A, Immunology and Homeopathy. 3. Experimental Studies on Animal Modeh, Advance Access Publication 2.05, 2006, 171-186). Rats were injected with complete Freind's adjuvant in the hind foot 0.1 ml and intraperitoneally 0.05 ml.

Pārbaudāmo vielu šķīdumi tika gatavoti ex tempore. ASS lietoja kā 0,1% un 1%, MD kā 1% un MDAS kā 0,25%, 1% un 2% ūdens šķīdumu. Pētāmos šķīdumus dzīvniekiem ievadījap.o. ar katetru kuņģī.Test substance solutions were prepared ex tempore. AS was used as 0.1% and 1%, MD as 1% and MDAS as 0.25%, 1% and 2% aqueous solution. The test solutions in the animals were administered p.o. with a catheter in the stomach.

Tika izveidotas šādas dzīvnieku grupas (N=7):The following groups of animals were created (N = 7):

-GRUPA PROCEDŪRA-GROUP PROCEDURE

1. grupa intakti dzīvnieki, izmantoti kā kontrole (Kontrole);Group 1 intact animals used as controls (Control);

2. grupa dzīvnieki ar ierosinātu adjuvanta artrītu (AdA);Group 2 animals with induced adjuvant arthritis (AdA);

3. grupa dzīvnieki, kas saņēma ASS devā 10 mg/kg dienā 28 dienas pēc adjuvanta artrita ierosināšanas (ASS 10);Group 3 animals receiving ASA at a dose of 10 mg / kg / day for 28 days following initiation of adjuvant arthritis (ASA 10);

4. grupa dzīvnieki, kas saņēma ASS devā 100 mg/kg dienā 28 dienas pēc adjuvanta artrita ierosināšanas (ASS 100);Group 4 animals receiving ASA at a dose of 100 mg / kg / day for 28 days following initiation of adjuvant arthritis (ASA 100);

5. grupa dzīvnieki, kas saņēma MD devā 100 mg/kg dienā 28 dienas pēc adjuvanta artrita ierosināšanas (MD100);Group 5 animals receiving MD at a dose of 100 mg / kg / day for 28 days following the initiation of adjuvant arthritis (MD100);

6. grupa dzīvnieki, kas saņēma MDAS devā 25 mg/kg dienā 28 dienas pēc adjuvanta artrita ierosināšanas (MDAS25);Group 6 animals receiving MDAS at a dose of 25 mg / kg / day for 28 days following the initiation of adjuvant arthritis (MDAS25);

7. grupa dzīvnieki, kas saņēma MDAS devā 100 mg/kg dienā 28 dienas pēc adjuvanta artrita ierosināšanas (MDAS 100);Group 7 animals receiving MDAS at a dose of 100 mg / kg / day for 28 days following the initiation of adjuvant arthritis (MDAS 100);

8. grupa dzīvnieki, kas saņēma MDAS devā 200 mg/kg dienā 28 dienas pēc adjuvanta artrita ierosināšanas (MDAS200);Group 8 animals receiving MDAS at a dose of 200 mg / kg / day for 28 days following the initiation of adjuvant arthritis (MDAS200);

Dzīvnieki Kontroles grupā un AdA grupā pētāmo vielu vietā saņēma ūdeni p.o. pēc tāda paša plāna kā pētījuma grupas.Animals in the control group and the AdA group received water p.o. instead of test substances. following the same plan as the study group.

Statistika. Dati tika analizēti ar Microsoft Excel 2007 programmatūru un rezultāti izteikti kā Vidējais±Standarta vidējā kļūda (Mean±SEM). Dažādu grupu vidējie rezultāti tika salīdzināti, izmantojot vienfaktora analīzi pēc ANOVA ar atkārtotu salīdzināšanu (Tukeja tests). Par nozīmīgu tika uzskatīts P<0,05.Statistics. Data were analyzed with Microsoft Excel 2007 software and expressed as Mean ± Standard Mean Error (SEM). The mean scores of the different groups were compared using one-way ANOVA with repeated comparison (Tukey's test). P <0.05 was considered significant.

Rezultāti. Artrīta klīnisko izpausmju dinamiku pētīja 14. dienā un 28. dienā. Pētāmo vielu efektus novērtēja, izmantojot šādus kritērijus:Results. The dynamics of clinical manifestations of arthritis were investigated on day 14 and day 28. The effects of the test substances were assessed using the following criteria:

1. Artrita lokālo izpausmju novērtējums - ķepas un potītes locītavas apjoms.1. Evaluation of local manifestations of arthritis - volume of paw and ankle joint.

2. Asins ainas novērtējums (WBC).2. Blood Score Assessment (WBC).

3. Bioķīmisko testu novērtējums (CRP).3. Biochemical Assay Evaluation (CRP).

4. Imunoloģisko rādītāju novērtējums (CIC līmenis).4. Evaluation of immunological parameters (CIC level).

Tūsku, t.i., pakaļkājas ķepas apjomu, mērija ar onkometru. Aizsardzības procents (tūskas nomākšana) tika aprēķināts pēc formulas:Edema, i.e., the volume of the hind paw, was measured with an oncometer. The protection percentage (suppression of edema) was calculated using the formula:

A (%) = (Vc - Vt)/Vc x 100, kurA (%) = (Vc - Vt) / Vc x 100 where

Vc - ķepas apjoms kontroles grupā.Vc - paw volume in the control group.

Vt - ķepas apjoms testa grupāVt - volume of paw in test group

A - Aizsardzības % (tūskas nomākšana).A -% Protection (suppression of edema).

Hematoloģiskos rādītājus noteica ar standarta metodēm, izmantojot hematoloģisko analizatoru «PENTRA 120», CRP noteica ar «INTEGRA 400+».Hematology was determined by standard methods using the PENTRA 120 hematology analyzer, CRP was determined by INTEGRA 400+.

CIC līmeni asins serumā noteica spektrometriski, izmantojot etilēnglikolu.Serum CIC was determined spectrometically using ethylene glycol.

Pēc Freinda adjuvanta injekcijas visiem testa grupu dzīvniekiem izveidojās lokāls iekaisums, žurkas kļuva sagurušas, agresīvas pret aizskaršanu, izspūrušas. Tomēr barības uzņemšanas paradumi visās grupās neatšķīrās no kontroles. Ķermeņa masas pieaugums visās grupās būtiski neatšķīrās no kontroles grupas.After injection of Freind's adjuvant, all animals in the test groups developed local inflammation, rats became fatigued, aggressive to insult, and swollen. However, dietary habits did not differ from control in all groups. The body weight gain in all groups did not differ significantly from the control group.

Dati par artrīta lokālajām izpausmēm parādīti 12. un 13. tabulā: ķepas apjoms (raksturo mīksto audu tūsku) un potītes locītavas apjoms/izmērs (raksturo artrīta tipa organiskos bojājumus saistaudos) 14. dienā un 28. dienā.Localized manifestations of arthritis are shown in Tables 12 and 13: paw volume (representing soft tissue edema) and ankle joint volume / size (representing arthritis-like organic lesions in connective tissue) at day 14 and day 28.

12. tabulaTable 12

Pētāmo vielu ietekme uz ķepas apjomu (ml) 14. un 28. diena pēc Freinda adjuvanta injekcijas; N~7; Mean±SEMEffect of test substances on paw volume (ml) 14 and 28 days after Freind's adjuvant injection; N ~ 7; Mean ± SEM

Grupa Group Ķepas apjoms 14. diena Volume of paw Day 14 Ķepas apjoms 28. diena Volume of paw Day 28 ml ml Aizsardzība % Protection% ml ml Aizsardzība % Protection% Kontrole Control 1,03±0,Ι2** 1.03 ± 0, Ι2 ** - - l,08±0,17*” 1.08 ± 0.17 * " - - AdA AdA 2,42±0,17 2.42 ± 0.17 0 0 2,23±0,24 2.23 ± 0.24 0 0 ASS10 ASS10 2,53±0,10 2.53 ± 0.10 -7 -7 2,08±0,12 2.08 ± 0.12 7 7th ASS100 ASS100 2,35±0,14 2.35 ± 0.14 3 3 l,52±0,07* l, 52 ± 0.07 * 32 32 MD100 MD100 2,60±0,21 2.60 ± 0.21 -7 -7 l,93±0,13 1.93 ± 0.13 13 13th MDAS25 MDAS25 2,20±0,21 2.20 ± 0.21 9 9th l,32±0,12 l, 32 ± 0.12 41 41 MDAS 100 MDAS 100 2,07±0,17& 2.07 ± 0.17 & 15 15th 1,22±0;08&&&<s!I 1.22 ± 0 ; 08 &&&<s! I 45 45 MDAS200 MDAS200 2,13±0,ll& 2.13 ± 0.1, & 12 12th l,7±0,09#&®l, 7 ± 0.09 # & ® 24 24th

eP<0,05 pret AdA ***P<0,0005 pret AdA &P<0.05 pret ASS 10 ^<0,005 pret ASS 10 &&ΛΡ<0,0005 pret ASS 10 @P<0,05 pret ASS 100 JP<0,05 pret MD e P <0.05 vs. AdA *** P <0.0005 versus AdA & P <0.05 versus ASS 10 ^ <0.005 versus ASS 10 && Λ Ρ <0.0005 versus ASS 10 @P <0.05 versus ASS 100 J P <0.05 vs. MD

Kā izriet no 12. tabulas datiem, 14. dienā visiem pētījuma grupas dzīvniekiem bija izveidojusies izteikta mīksto audu tūska. Ārstēšana 14. dienu garumā relatīvi maz ietekmēja tūskas attīstību. Tomēr dzīvniekiem grupās MDAS100 un MDAS200 bija nozīmīgi mazāk izteikta tūska nekā dzīvniekiem grupā ASS 10 grupā. MD un ASS 10 uz 14. dienu nenovērsa tūskas attīstību, bet pat palielināja apjomu, salīdzinot ar AdA grupu (negatīva aizsardzība -7%). MDAS visās devās un ASS 100 pēc 28. dienām nozīmīgi aizsargāja pret tūskas attīstību (aizsardzība %, attiecīgi, 41, 45, 24 un 32 %). Jāatzīmē, ka MDAS 100 parādīja nozīmīgi labāku aizsardzību nekā ASS 10, ASS 100 un MD.As shown in Table 12, on day 14 all animals in the study group developed pronounced soft tissue edema. Treatment for 14 days had relatively little effect on the development of edema. However, animals in the MDAS100 and MDAS200 groups had significantly less pronounced edema than the animals in the AS10 group. MD and ASS 10 at Day 14 did not prevent the development of edema but even increased volume compared to the AdA group (negative protection -7%). MDAS significantly protected against edema development at all doses and ASS 100 after 28 days (% protection, 41, 45, 24 and 32%, respectively). It should be noted that the MDAS 100 showed significantly better protection than the ASS 10, ASS 100 and MD.

13. tabulaTable 13

Pētāmo vielu efekts uz izmaiņām potītes locītava 14. un 28. dienā pēc Freinda adjuvanta injekcijas. N=7; Mean*SEMEffect of test substances on ankle joint changes on days 14 and 28 following Freind's adjuvant injection. N = 7; Mean * SEM

Grupa Group Potītes locītavas izmēri 14. dienā, mm Dimensions of ankle joint Day 14 mm Potītes locītavas izmēri 28. dienā, mm Dimensions of ankle joint Day 28 mm Kontrole Control 5,6*0,09** 5.6 * 0.09 ** 5,8±0,12** 5.8 ± 0.12 ** AdA AdA 7,2*0,14 7.2 * 0.14 7,3±0,16 7.3 ± 0.16 ASS 10 ASS 10 7,2±0,12 7.2 ± 0.12 6,8*0,14* 6.8 * 0.14 * ASS 100 ASS 100 6,9*0,15 6.9 * 0.15 7,I±0,16 7, I ± 0.16 MD100 MD100 7,0±0,13 7.0 ± 0.13 7,0*0,13 7.0 * 0.13 MDAS25 MDAS25 7,0±0,14 7.0 ± 0.14 6,7*0,15* 6.7 * 0.15 * MDAS100 MDAS100 7,0±0,13 7.0 ± 0.13 6,6*0,16*®* 6.6 * 0.16 * ® * MDAS200 MDAS200 6,8*0,10 6.8 * 0.10 6,9*0,11 6.9 * 0.11

*P<0,05 pret AdA **P<0,005 pret AdA &P<0,05 pret ASS 10 ®P<0,05 pret ASS 100 sP<0,05 pret MD* P <0.05 versus AdA ** P <0.005 versus AdA & P <0.05 versus ASS 10 ®P <0.05 versus ASS 100 s P <0.05 versus MD

Potītes locītavas datu analīze (13. tabula) rāda, ka 14. dienā tikai MDAS200 nozīmīgi aizsargāja pret artrīta bojājumiem. 28. dienā nozīmīgu aizsardzību uzrādīja MDAS25, MDAS100 un ASS 100. Salīdzinoši labāku aizsardzību šajā eksperimentā parādīja MDAS100. Mēs konstatējām, ka 28. dienā tūskas līmenis (12. tabula) un artrīta izmaiņas potītes locītavā (13. tabula) bija samazinājušās. MDAS100 bija nozīmīgi lielāks efekts nekā ASS vai MD.Analysis of ankle joint data (Table 13) shows that on day 14 only MDAS200 significantly protected against arthritis damage. On day 28, significant protection was demonstrated by MDAS25, MDAS100, and ASS 100. Comparatively better protection was demonstrated by MDAS100 in this experiment. We found that at day 28 the level of edema (Table 12) and arthritic changes in the ankle joint (Table 13) were reduced. MDAS100 had a significantly greater effect than ASS or MD.

Asins ainas (WBC) novērtējums parādīja leikocītu skaita pieaugumu Freinda adjuvanta ietekmē (14. tabula). Leikocitoze ir raksturīga iekaisuma procesa pazīme.Blood Scene (WBC) assessment showed an increase in leukocyte counts under Freind's adjuvant (Table 14). Leukocytosis is a characteristic feature of the inflammatory process.

14. tabulaTable 14

Pētāmo vielu izraisītās izmaiņas asins ainā 14. un 28. dienā pēc Freinda adjuvanta injekcijas. N=7; Mean±SEMChanges in blood levels caused by test substances on days 14 and 28 following Freind's adjuvant injection. N = 7; Mean ± SEM

Grupa Group Leikocīti 103/mm3 Leukocytes 10 3 / mm 3 14. diena Day 14 28. diena Day 28 Kontrole Control 15,17*0,76** 15.17 * 0.76 ** 16,50*0,52** 16.50 * 0.52 ** AdA AdA 21,48*1,47** 21.48 * 1.47 ** 20,32*0,90** 20.32 * 0.90 ** ASS10 ASS10 15,83*1,23* 15.83 * 1.23 * 16,68*1,22* 16.68 * 1.22 * ASS10 ASS10 17,07*1,43 17.07 * 1.43 16,91*1,17* 16.91 * 1.17 * MD100 MD100 14,42*1,41 * 14.42 * 1.41 * 15,55*1,26* 15.55 * 1.26 * MDAS25 , MDAS25, 14,72*1,63* 14.72 * 1.63 * 16,77*1,78 16.77 * 1.78 MDAS100 MDAS100 14,13*0,53** 14.13 * 0.53 ** 15,52*0,57** 15.52 * 0.57 ** MDAS200 MDAS200 15,42*1,40* 15.42 * 1.40 * 14,35*0,84** 14.35 * 0.84 **

**P<0,005 pret Kontroli *P<0,05 pret AdA *P<0,005 pret AdA** P <0.005 versus Control * P <0.05 versus AdA * P <0.005 versus AdA

Pētāmo vielu izmantošana izsauca leikocītu skaita samazināšanos, salīdzinot ar AdA grupu, kas norāda uz pretiekaisuma aktivitāti. Lai gan starp pētāmajām vielām nebija statistiski nozīmīga atšķirība ietekmē uz leikocītu skaita palielināšanos, 14. dienā salīdzinoši augstāka aktivitāte bija novērojama MDAS100, bet 28. dienā MDAS200 grupā (14. tabula).The use of test substances resulted in a decrease in white blood cell counts compared to the AdA group, which indicates anti-inflammatory activity. Although there was no statistically significant difference in the effect of the test substances on the increase in white blood cell count, on day 14 comparatively higher activity was observed in MDAS100 and on day 28 in the MDAS200 group (Table 14).

Lai novērtētu iekaisuma procesa attīstību, tika noteikts CRP līmenis 14. un 28. dienā. Ir zināms, ka iekaisuma procesa laikā paaugstinās CRP līmenis.CRP levels at days 14 and 28 were determined to assess the development of the inflammatory process. CRP levels are known to increase during the inflammatory process.

15. tabulaTable 15

CRP līmeņa izmaiņas žurku asinīs pētāmo vielu ietekmē 14 un 28. dienāChanges in CRP levels in rats at 14 and 28 days after exposure to test substances

pēc Freinda ad after Freind ad uvanta injekcijas. N=7, MeaniSEM uvanta injections. N = 7, MeaniSEM Grupa Group CRP, mg/I CRP, mg / l 14. diena Day 14 28. diena Day 28 Kontrole Control 0,19±0,01e“”0.19 ± 0.01 e "" 0,16±0,02## 0,16 ± 0,02 ## AdA AdA 0,30±0,02*** 0.30 ± 0.02 *** 0,24±0,02** 0.24 ± 0.02 ** ASS 10 ASS 10 0,26±0,01** 0.26 ± 0.01 ** 0,19±0,01# 0.19 ± 0.01 # ASS 100 ASS 100 0,29±0,01*** 0.29 ± 0.01 *** 0,18±0,02# 0.18 ± 0.02 # MD100 MD100 0,26±0,02** 0.26 ± 0.02 ** 0,17±0,02* 0.17 ± 0.02 * MDAS25 MDAS25 0,29±0,02** 0.29 ± 0.02 ** 0,15±0,02 0.15 ± 0.02 MDAS100 MDAS100 0,29±0,02** 0.29 ± 0.02 ** 0,I6±0,01 0, I6 ± 0.01 MDAS200 MDAS200 0,25±0,01*#fe 0.25 ± 0.01 * # fe 0,19±0,0l“ 0.19 ± 0.0l "

*P<0,05 pret Kontroli **P<0,005 pret Kontroli ***p<0,0005 pret Kontroli *P<0,05 pret AdA **P<0,005 pret AdA **P<0,0005 pret AdA &P<0,05 pret ASS 10 @P<0,05 pret ASS 100* P <0.05 vs. Control ** P <0.005 vs. Control *** p <0.0005 vs. Control * P <0.05 vs. AdA ** P <0.005 vs. AdA ** P <0.0005 vs. AdA & P <0.05 versus ASS 10 @P <0.05 versus ASS 100

Kā izriet no 15. tabulas datiem, 14. dienā visās pētījuma grupās bija novērojams CRP līmeņa pieaugums, kas liecina par iekaisuma procesu. Mūsu eksperimentā tikai MDAS200 uzrādīja nozīmīgu aizsardzību pret CRP pieaugumu 14. dienā. Jāatzīmē, ka 14. dienā MDAS200 uzrādīja būtiski labāku rezultātu nekā ASS 100. 28. dienā nozīmīgi labāku aizsardzību uzrādīja MDAS25 un MDAS100, kas bija labāki nekā ASS 10 (15. tabula).As shown in Table 15, an increase in CRP levels was observed on day 14 in all study groups, suggesting an inflammatory process. In our experiment, only MDAS200 showed significant protection against CRP increase on day 14. It should be noted that on day 14, MDAS200 showed significantly better results than ASS 100. On day 28, MDAS25 and MDAS100 showed significantly better protection than ASA 10 (Table 15).

CIC līmenis tika noteikts ar standarta spektrofotometrisku metodi (Baranovskii PV, Rudyk Bl, Laboratornoe delo 1982;12:35-39 (Rus). Imunoloģisko faktoru dinamiku novērtēja 14. un 28. dienā. Izmaiņas CIC līmenī ir parādītas 16. tabulā.CIC levels were determined by a standard spectrophotometric method (Baranovskii PV, Rudyk Bl, Laboratornoe delo 1982; 12: 35-39 (Rus). The dynamics of immunological factors were assessed on days 14 and 28. The changes in CIC level are shown in Table 16.

16. tabulaTable 16

CIC daudzums (vienībās) 14. un 28. diena pēc Freinda adjuvanta injekcijas. N=7; Mean±SEMAmount of CIC (in units) 14 and 28 days after injection of Freind's adjuvant. N = 7; Mean ± SEM

Grupa Group CIC vienības, 14. diena CIC units, Day 14 CIC vienības, 28. diena CIC units, Day 28 Kontrole Control 9,4±l,05* 9.4 ± 1.05 * 7,8±0,49## 7.8 ± 0.49 ## AdA AdA 17,4±1,29** 17.4 ± 1.29 ** 13,4±1,25** 13.4 ± 1.25 ** ASS 10 ASS 10 10,8±0,74## 10.8 ± 0.74 ## 8,2±0,53* 8.2 ± 0.53 * ASS 100 ASS 100 15,0±l,23* 15.0 ± 1.23 * 14,4±1,66* 14.4 ± 1.66 * MD100 MD100 11,8±2,22 11.8 ± 2.22 8,6±0,93# 8.6 ± 0.93 # MDAS25 MDAS25 12,6±0,68* 12.6 ± 0.68 * 11,8±1,53 11.8 ± 1.53 MDAS100 MDAS100 20,8±2,99* 20.8 ± 2.99 * 5,8±0,74^®'5'5 5.8 ± 0.74 ^ ® ' 5 ' 5 MDAS200 MDAS200 21,6±3,26* 21.6 ± 3.26 * 6,2±l,02**® 6.2 ± l, 02 ** ®

*P<0,05 pret Kontroli **P<0,005 pret Kontroli *P<0,05 pret AdA *#P<0,005 pret AdA sP<0,05 pret MD &P<0,05 pret ASS 10 @P<0,05 pret ASS 100 @@P<0,005 pret ASS 100* P <0.05 versus Control ** P <0.005 versus Control * P <0.05 versus AdA * # P <0.005 versus AdA s P <0.05 versus MD & P <0.05 versus ASS 10 @P < 0.05 vs. ASS 100 @@ P <0.005 vs. ASS 100

14. un 28. dienā CIC līmenis pētījuma grupās bija augstāks nekā Kontroles grupā. 14. dienā tikai ASS10 un MDAS25 grupās CIC līmenis bija zemāks nekā AdA grupā. 28. dienā grupās, kas saņēma pētāmās vielas, izņemot ASS 100 grupu, CIC līmenis bija tuvu Kontrolei.On days 14 and 28, CIC levels were higher in the study groups than in the control group. At day 14, only the ASS10 and MDAS25 groups had lower CIC levels than the AdA group. At day 28, the CIC levels in the groups receiving test substances, except for the ASS 100 group, were close to Control.

Eksperimenta laikā CIC līmeņa pieaugums 14. dienā tika novērots ASS 100, MDAS100 un MDAS200 grupās. 28. dienā CIC līmenis MDAS100 un MDAS200 grupās bija normalizējies. CIC līmeņa paaugstināšanos asins serumā var novērot dažādos patoloģiskas imunitātes stāvokļos. Būtisks CIC pieaugums ir novērojams iekaisuma procesos, ieskaitot sistēmiskus stāvokļus, kad CIC līmenis raksturo patoloģiskā procesa intensitāti (Bier 0 et al, Fundamentāls of immunology, New York, Heidelberg, Berlin, p. 442). Ilgāka ārstēšana ar MDAS dažādās devās pazemināja CIC līmeni līdz normai. Pietiekami augstas imunitātes gadījumā galveno CIC daļu aizvāc Kupfera šūnas un CIC līmeņa pazemināšanos uztver kā pozitīvu efektu. Fakts, ka MDAS lietošana MDAS 100 un MDAS200 grupās uzrādīja normalizējošu efektu uz CIC līmeni 28. dienā, norāda, ka artrīta ārstēšanā ilgāka MDAS lietošana dažādās devās var būt klīniski perspektīvāka nekā paaugstinātas ASS devas.During the experiment, an increase in CIC on day 14 was observed in the ASS 100, MDAS100 and MDAS200 groups. At day 28, CIC levels in the MDAS100 and MDAS200 groups had normalized. Elevated serum CIC levels may be observed in a variety of abnormal immune conditions. Significant increases in CIC are observed in inflammatory processes, including systemic states, where CIC levels characterize the intensity of the pathological process (Bier 0 et al., New York, Heidelberg, Berlin, p. 442). Prolonged treatment with MDAS at various doses lowered CIC levels to normal. In the case of sufficiently high immunity, the major part of the CIC is removed by Kupfer cells and the decrease in CIC is seen as a positive effect. The fact that administration of MDAS in the MDAS 100 and MDAS200 groups showed a normalizing effect on CIC level at day 28 suggests that prolonged administration of multiple doses of MDAS in the treatment of arthritis may be more clinically viable than elevated doses of ASA.

6. piemērs. Antihiperlipidēmisko īpašību izpēteExample 6. Investigation of antihyperlipidemic properties

Ateroskleroze ir multifunkcionāls process (Berliner JA et al, Circulation 1995;91: 2488-2495), kuras klīniskā ietekme pieaug līdz ar pieaugošiem sirds koronārās slimības simptomiem. Būtiska loma aterosklerozes procesos ir iekaisumam un organisma atbildei uz to (Ross R, Am Heart J 1999;138:S419-S420). Klīniskie novērojumi norāda, ka pretiekaisuma terapija mazina aterosklerozes izpausmes (Stoller DK et al, J Surg Res 1993;54:7-11). Eksperimentālie dati vismaz COX-1 inhibitoriem apstiprina ievērojamu korelāciju starp pretiekaisuma aktivitāti un hipolipidēmisko aktivitāti (Kourounakis AP et al, Exper Mol Pathol 2002;73:135138). Mēs salīdzinājām ASS un MDAS hipolipidēmisko aktivitāti ekvivalentās devās.Atherosclerosis is a multifunctional process (Berliner JA et al, Circulation 1995; 91: 2488-2495) whose clinical effects increase with increasing symptoms of coronary heart disease. Inflammation and the body's response to it play an important role in atherosclerosis (Ross R, Am Heart J 1999; 138: S419-S420). Clinical observations indicate that anti-inflammatory therapy reduces the manifestations of atherosclerosis (Stoller DK et al, J Surg Res 1993; 54: 7-11). Experimental data for at least COX-1 inhibitors confirm a significant correlation between anti-inflammatory activity and hypolipidemic activity (Kourounakis AP et al., Exper Mol Pathol 2002; 73: 135138). We compared the hypolipidemic activity of ASS and MDAS at equivalent doses.

6.1. Pētāmo vielu salīdzinošā aktivitāte uz lipīdu līmeni žurku akūtās hiperlipidēmiias modelī6.1. Comparative activity of test substances on lipid levels in a rat model of acute hyperlipidemia

Metodes. Tika izmantoti Wistar žurku tēviņi ar ķermeņa masu 250-270 g. Dzīvnieki tika turēti grupās pa 6-8 piemērotos būros klimatizētās telpās pie 22±1 °C, relatīvā mitruma 60±5% un 12/12 stundu gaismas/tumsas cikla ar brīvu pieeju barībai un ūdenim. Akūta eksperimentāla hiperlipidēmija/hiperholesterinēmija tika inducēta ar Triton WR1339, kā aprakstīts darbā: Kourounakis AP et al, Exper Mol Pathol 2002;73:135-138). Žurkām pēc nakts bez barības tika i.p. ievadīts Triton WR1339 (TR), izšķīdināts izotoniskā fizioloģiskā šķīdumā devā 250 mg/kg. Pētāmo vielu šķīdums vai ūdens tika ievadīts TR un kontroles grupas dzīvniekiemp.o. vienu stundu pirms un 20 stundas pēc TR ievadīšanas, kā aprakstīts tālāk.Methods. Wistar male males weighing 250-270 g were used. Animals were housed in groups of 6-8 in appropriate cages at 22 ± 1 ° C, 60 ± 5% relative humidity, and a 12/12 hour light / dark cycle with free access to food and water. Acute experimental hyperlipidemia / hypercholesterolemia was induced by Triton WR1339 as described in Kourounakis AP et al, Exper Mol Pathol 2002; 73: 135-138). Rats were given i.p. administered Triton WR1339 (TR), dissolved in isotonic saline at a dose of 250 mg / kg. The test substance solution or water was administered to TR and control animals p.o. one hour before and 20 hours after administration of TR as described below.

Asinis bioķīmiskām analīzēm tika paņemtas nākamajā dienā (24 stundas pēc TR injekcijas) ar sirds punkciju ētera narkozē. Serumu atdalīja centrifugējot un noteica kopējā H, ABL, ZBL un TG līmeni ar komerciāliem analīžu komplektiem.Blood for biochemical analysis was collected the next day (24 hours after TR injection) by cardiac puncture under ether narcosis. Serum was removed by centrifugation and total H, HDL, LDL and TG levels were determined with commercial assay kits.

Tika veiktas trīs eksperimentu sērijas.Three series of experiments were performed.

Statistika. Dati tika analizēti ar Microsoft Excel programmatūru un rezultāti izteikti kā vidējais +/- vidējā standarta kļūda (Mean±SEM ). Dažādu grupu vidējie rezultāti tika salīdzināti, izmantojot vienfaktora analīzi pēc ANOVA un t-Stjūdenta testiem. Par nozīmīgu tika uzskatīts P<0,05.Statistics. Data were analyzed with Microsoft Excel software and expressed as mean +/- Mean ± SEM. The mean scores of the different groups were compared using one-way analysis by ANOVA and t-Student tests. P <0.05 was considered significant.

I sērija - ASS, MD un MDAS salīdzinājumsSeries I - Comparison of ASS, MD and MDAS

GRUPA PROCEDŪRA Dzīvnieku skaitsGROUP PROCEDURE Number of animals

Kontrole 6Controls 6

TR TR 250 mg/kg 8TR TR 250 mg / kg 8

ASS45 TR 250 mg/kg+ASS 45 mg/mg 6ASS45 TR 250 mg / kg + ASS 45 mg / mg 6

ASS90 TR 250 mg/kg+ASS 90 mg/mg 8ASS90 TR 250 mg / kg + ASS 90 mg / mg 8

MD150 TR 250 mg/kg+MD 150 mg/kg 8MD150 TR 250 mg / kg + MD 150 mg / kg 8

MDAS75 TR 250 mg/kg+MDAS 75 mg/kg 6MDAS75 TR 250 mg / kg + MDAS 75 mg / kg 6

MDAS 150 TR 250 mg/kg+MDAS 150 mg/kg 8MDAS 150 TR 250 mg / kg + MDAS 150 mg / kg 8

MDAS300 TR 250 mg/kg+MDAS 300 mg/kg 8MDAS300 TR 250 mg / kg + MDAS 300 mg / kg 8

Rezultāti. Žurkām, kuras saņēma TR, veidojās izteikta hiperholesteiīnēmija un hiperlipidēmija ar kopējā holesterīna, ZBL un TG līmeņiem nozīmīgi atšķirīgiem no kontroles grupas (kopējā H pieaugums 6-7 reizes, TG 30 reizes un vairāk, skat. 17. tabulu). ASS terapija, īpaši devā 90 mg/kg, ierobežoja kopējā H, ZBL un TG pieaugumu, bet nozīmīgi nemainīja ABL līmeni. MD mūsu eksperimentā nozīmīgi neaizsargāja no TR izraisītajām izmaiņām lipīdu līmeņos. Terapija ar MDAS nodrošināja no devas atkarīgu aizsardzību no TR inducētas hiperlipidēmijas/hiperholesterinēmijas. MDAS devā 75 mg/kg neatšķiras no ASS45, bet MDAS150 ir ievērojami efektīvāks nekā ASS45 un MD150 aizsargājot no TR efektiem. MDAS300 ievērojami labāk nekā ASS45 un ASS90 pazemināja kopējā H, ZBL un TG līmeņus. Tas norāda, ka MDAS var būt noderīgs hiperholesterēmisku un hiperlipidēmisku stāvokļu profilaksei un/vai ārstēšanai, un, ievērojot tā pretiekaisuma aktivitāti, var būt noderīgs, lai novērstu un/vai ārstētu aterosklerozi un citus veselības stāvokļus, kurus veicina traucējumi lipīdu metabolismā un iekaisums.Results. Rats receiving TR exhibited marked hypercholesterolemia and hyperlipidemia with levels of total cholesterol, LDL, and TG significantly different from the control group (6-7 fold increase in total H, 30 fold greater in TG, see Table 17). ASA therapy, particularly at 90 mg / kg, limited total H, LDL and TG but did not significantly alter HDL levels. MD in our experiment did not significantly protect against TR-induced changes in lipid levels. Treatment with MDAS provided dose-dependent protection against TR-induced hyperlipidemia / hypercholesterolemia. MDAS at 75 mg / kg is no different from ASS45, but MDAS150 is significantly more effective than ASS45 and MD150 at protecting against TR effects. The MDAS300 significantly lowered total H, LDL and TG levels than the ASS45 and ASS90. This indicates that MDAS may be useful in the prevention and / or treatment of hypercholesterolemic and hyperlipidemic states and, in view of its anti-inflammatory activity, may be useful in the prevention and / or treatment of atherosclerosis and other medical conditions mediated by disorders of lipid metabolism and inflammation.

17. tabulaTable 17

MD, ASS un MDAS salīdzinošā ietekme uz lipīdu līmeni žurku hiperlipidēmijas modelī; n=6-8; Mean±SEMComparative effects of MD, ASA and MDAS on lipid levels in a rat hyperlipidemia model; n = 6-8; Mean ± SEM

Grupa Group Hmg/dl Hmg / dl ABL mg/dl HDL mg / dL ZBL mg/dl LDL mg / dL TG mg/dl TG mg / dl Kontrole Control 80.7±4.7*** 80.7 ± 4.7 *** 56.5±2.8 56.5 ± 2.8 21.1±2.6*** 21.1 ± 2.6 *** 44.0±6.9*** 44.0 ± 6.9 *** TR TR 453.6±40.0 453.6 ± 40.0 60.3±9.6 60.3 ± 9.6 386.0±36.5 386.0 ± 36.5 1399±129.7 1399 ± 129.7 ASS45 ASS45 381.0±30.3 381.0 ± 30.3 62.8±10.9 62.8 ± 10.9 307.4±37.8 307.4 ± 37.8 973±82.7* 973 ± 82.7 * ASS90 ASS90 288.1±23.5* 288.1 ± 23.5 * 60.0±7.4 60.0 ± 7.4 219.1±23.9* 219.1 ± 23.9 * 791±73.9** 791 ± 73.9 ** MD150 MD150 345.6±34.1 345.6 ± 34.1 63.8±9.3 63.8 ± 9.3 273.9±31.6* 273.9 ± 31.6 * 1022±80.7* 1022 ± 80.7 * MDAS75 MDAS75 341.9±16.3* 341.9 ± 16.3 * 68.1±8.7 68.1 ± 8.7 270.1±12.8* 270.1 ± 12.8 * 861±105.7* 861 ± 105.7 * MDAS 150 MDAS 150 249.6±22.2**'a 249.6 ± 22.2 ** ' a 58.2±8.1 58.2 ± 8.1 182.4±19.6**14·182.4 ± 19.6 ** 14 · “668ĪĪ04Ā**5®"668I004A ** 5 ® MDAS300 MDAS300 219.0±16.7**Wi 219.0 ± 16.7 ** Wi 56.3±8.6 56.3 ± 8.6 158.6±19.4**lsi 158.6 ± 19.4 ** lsi 548±73.2***&w 548 ± 73.2 *** & w

*P<0,05 pret TR **P<0,005 pret TR ***P<0,0005 pret TR sP<0,05 pret ASS45 *P<0,05 pret ASS90 &P<0,05 pret MD150* P <0.05 versus TR ** P <0.005 versus TR *** P <0.0005 versus TR s P <0.05 versus ASS45 * P <0.05 versus ASS90 & P <0.05 versus MD150

ĪT sērija - ASS. MDAS. NS un kombināciju ASS+NS, MDAS+NS salīdzinājumsHT Series - ASS. MDAS. Comparison of NS and ASS + NS, MDAS + NS

GRUPA GROUP PROCEDŪRA PROCEDURE Dzīvnieku skaits Number of animals Kontrole Control 6 6th TR TR TR 250 mg/kg TR 250 mg / kg 8 8th ASS45 ASS45 TR 250 mg/kg+ASS 45 mg/mg TR 250 mg / kg + ASS 45 mg / mg 6 6th MDAS MDAS TR 250 mg/kg+MDAS 150 mg/kg TR 250 mg / kg + MDAS 150 mg / kg 6 6th

NS TR 250 mg/kg+NS 50 mg/kg 7NS TR 250 mg / kg + NS 50 mg / kg 7

ASS+NS TR 250 mg/kg+ASS 45 mg/mg+NS 50 mg/kg 7ASS + NS TR 250 mg / kg + ASS 45 mg / mg + NS 50 mg / kg 7

MDAS+NS TR 250 mg/kg+MDAS 150 mg/mg+NS 50 mg/kg 7MDAS + NS TR 250 mg / kg + MDAS 150 mg / mg + NS 50 mg / kg 7

Rezultāti. Mūsu eksperimentā NS nodrošināja nozīmīgu aizsardzību pret izmaiņām lipīdu (H, ZBL un TG) līmenī, kuru inducēja TR (skat. 18. tabulu). ASS kombinācija ar NS nozīmīgi nemainīja NS ietekmi uz lipīdu līmeni. Pārsteidzoši MDAS un NS ievērojami pastiprināja NA50 efektu un pārsniedza MDAS aizsargājošo efektu uz TG līmeņa paaugstināšanos, kuru izraisīja TR (18. tabula). Kombinēta MDAS un NS lietošana bija ari nozīmīgi efektīvāka nekā ASS45+NS50, normalizējot ZBL un TG līmeņus.Results. In our experiment, NS provided significant protection against changes in lipid (H, LDL and TG) levels induced by TR (see Table 18). The combination of ASA with NS did not significantly alter the effect of NS on lipid levels. Surprisingly, MDAS and NS significantly potentiated the NA50 effect and exceeded the protective effect of MDAS on TG elevation induced by TR (Table 18). Combined use of MDAS and NS was also significantly more effective than ASS45 + NS50 in normalizing LDL and TG levels.

18. tabulaTable 18

MD, ASS un MDAS, atsevišķi un kombinācijā, ietekme uz lipīdu līmeni žurku hiperlipidēmijas modelī; n=6-8; Mean+SEM_Effects of MD, ASS, and MDAS, alone and in combination, on lipid levels in a rat hyperlipidemia model; n = 6-8; Mean + SEM_

Grupa Group H mg/dl H mg / dl ABL mg/dl HDL mg / dL ZBL mg/dl LDL mg / dL TG mg/dl TG mg / dl Kontrole Control 80,7+4,7*** 80.7 + 4.7 *** 56,5+2,8 56.5 + 2.8 21,1+2,6*** 21.1 + 2.6 *** 44+6,9*** 44 + 6.9 *** TR TR 453,6+40,0 453.6 + 40.0 60,3+9,6 60.3 + 9.6 386,0+36,5 386.0 + 36.5 1399+129.7 1399 + 129.7 ASS45 ASS45 381,0+30,3 381.0 + 30.3 62,8+10,9 62.8 + 10.9 307,4+37,8 307.4 + 37.8 973+82.7* 973 + 82.7 * MDAS 150 MDAS 150 249,6+22,2**$ 249.6 + $ 22.2 ** $ 58,2+8,1 58.2 + 8.1 182,4+19,6**$ 182.4 + $ 19.6 ** 668+70,9**$ 668 + 70.9 ** $ NS50 NS50 327,5+38,4* 327.5 + 38.4 * 66,5+14,6 66.5 + 14.6 246,3+32,5* 246.3 + 32.5 * 591+43,3** 591 + 43.3 ** ASS45+NS50 ASS45 + NS50 316,0+43,1* 316.0 + 43.1 * 57,9+14,3 57.9 + 14.3 251,2+33,8* 251.2 + 33.8 * 618+42,8** 618 + 42.8 ** MDAS150+NS50 MDAS150 + NS50 226,3+24,9***$ 226.3 + 24.9 *** $ 63,1+10,2 63.1 + 10.2 163,2+19,3** m 163.2 + 19.3 ** m 468+34,7* *$#%®468 + 34.7 * * $ #% ®

*P<0,05 pret TR **P<0,005 pret TR ***P<0,0005 pret TR $P<0,05 pretASS45 ®P<0,05 pret MDAS 150 P<0,05 pretNS50 %P<0,05 pret ASS45+NS50* P <0.05 versus TR ** P <0.005 versus TR *** P <0.0005 versus TR $ P <0.05 versusASS45 ®P <0.05 versus MDAS 150 P <0.05 versus NS50 % P < 0.05 vs. ASS45 + NS50

III sērija - ST MD, MDAS un kombināciju SI+MD. SI+MDAS salīdzinājumsSeries III - ST MD, MDAS and SI + MD combination. Comparison of SI + MDAS

GRUPA PROCEDŪRA Dzīvnieku skaitsGROUP PROCEDURE Number of animals

Kontrole 6Controls 6

TR TR 250 mg/kg 8TR TR 250 mg / kg 8

Sl TR 250 mg/kg+SI 5 mg/kg 7Sl TR 250 mg / kg + SI 5 mg / kg 7

MD TR 250 mg/kg+MD 150 mg/kg 6MD TR 250 mg / kg + MD 150 mg / kg 6

MDAS TR 250 mg/kg+MDAS 150 mg/kg 6MDAS TR 250 mg / kg + MDAS 150 mg / kg 6

SI+MD TR 250 mg/kg+SI 5 mg/kg+MD 150 mg/kg 7SI + MD TR 250 mg / kg + SI 5 mg / kg + MD 150 mg / kg 7

SI+MDAS TR 250 mg/kg+SI 5 mg/kg+MDAS 150 mg/kg 7SI + MDAS TR 250 mg / kg + SI 5 mg / kg + MDAS 150 mg / kg 7

Rezultāti, Mūsu eksperimentā Sl devā 5 mg/kg nodrošināja nozīmīgu aizsardzību pret izmaiņām lipīdu (H, ZBL un TG) līmenī, kuru inducēja TR (skat. 19. tabulu). Sl kombinācija ar pētāmajām vielām palielināja normalizējošo efektu uz lipīdu līmeni. MDAS kombinācijā ar Sl bija nozīmīgi efektīvāks nekā MD+SI, novēršot TR izraisīto ZBL un TG līmeņu palielināšanos (19. tabula). MD kombinācija ar statiņiem ir aprakstīta W02006099244 bez konkrētiem datiem. Statīnu kombinētai lietošanai ar ASS nepieciešama īpaša farmaceitiskā kompozīcija, jo šīs vielas ir farmakoloģiski un ķīmiski nesaderīgas (ASV pat. 6,235,311), tāpēc sinerģija nav iespējama.Results, In our experiment, Sl at 5 mg / kg provided significant protection against changes in lipid (H, LDL and TG) levels induced by TR (see Table 19). The combination of SL with test substances increased the normalizing effect on lipid levels. MDAS in combination with Sl was significantly more effective than MD + SI in preventing TR-induced increases in LDL and TG (Table 19). The MD combination with strut is described in WO2006099244 without specific data. Combination of statins with ASA requires a special pharmaceutical composition as these substances are pharmacologically and chemically incompatible (US Pat. No. 6,235,311), so synergy is not possible.

19. tabulaTable 19

MD. MDAS un SI, atsevišķi un kombinācijā, efekti uz lipīdu līmeni žurku hiperlipidēmijas modelī, n=6-8, Mean±SEMMD. Effects of MDAS and SI, individually and in combination, on lipid levels in a rat hyperlipidemia model, n = 6-8, Mean ± SEM

Grupa Group H mg/dl H mg / dl ABL mg/dl HDL mg / dL ZBL mg/dl LDL mg / dL TG mg/dl TG mg / dl Kontrole Control 80,7±4,7*** 80.7 ± 4.7 *** 56,5±2,8 56.5 ± 2.8 21,1+2,6*** 21.1 + 2.6 *** 44+6,9*** 44 + 6.9 *** TR TR 453,6±40,0 453.6 ± 40.0 60,3±9,6 60.3 ± 9.6 386,0+36,5 386.0 + 36.5 1399+129,7 1399 + 129.7 SI THIS 321,3±32,3* 321.3 ± 32.3 * 53,7±12,4 53.7 ± 12.4 259,3+30,1* 259.3 + 30.1 * 826+44,1** 826 + 44.1 ** MD MD 345,6±34,1 345.6 ± 34.1 63,8+9,3 63.8 + 9.3 273,9+31,6* 273.9 + 31.6 * 1022+80,7* 1022 + 80.7 * MDAS MDAS 249,6±22,2**& 249.6 ± 22.2 ** & 58,2+8,1 58.2 + 8.1 182,4+19,6*** 182.4 + 19.6 *** 668+70,9*** 668 + 70.9 *** SI+MD SI + MD 281,5±31,2**& 281.5 ± 31.2 ** & 59,5+14,9 59.5 + 14.9 217,1 ±26,2* 217.1 ± 26.2 * 690+32,6**&l 690 + 32.6 ** & l SI+MDAS SI + MDAS 230,7±28,6** 230.7 ± 28.6 ** & i 62,8+14,6 62.8 + 14.6 153,4+28,0***1# 153.4 + 28.0 *** 1 # 512+40,2** 512 + 40.2 **

*P<0,05 pret TR * *P<0,005 pret TR ***P<0,0005 pret TR &P<0,05 pret MD sP<0,05 pret SI #P<0,05 pret MD+SI* P <0.05 versus TR * * P <0.005 versus TR *** P <0.0005 versus TR & P <0.05 versus MD s P <0.05 versus SI #P <0.05 versus MD + THIS

Kopsavilkums. Šie rezultāti norāda uz MDAS potenciālu hiperholesterinēmijas un hiperlipidēmijas profilaksē un/vai ārstēšanā. Ņemot vērā MDAS pretiekaisuma aktivitāti, tas var būt efektīvāks nekā ASS vai MD aterosklerozes un citu stāvokļu, kursus veicina iekaisums, profilaksē un/vai ārstēšanā. Kombinēta MDAS un NS lietošana pastiprina atsevišķo vielu pozitīvos efektus uz eksperimentāli paaugstinātu lipīdu līmeni vairāk nekā ASS+NS. MDAS kombinācijā ar SI bija ne tikai efektīvāks kā SI atsevišķi, bet bija ari nozīmīgi efektīvāks nekā MD+SI, novēršot TR izraisīto ZBL un TG līmeņa paaugstināšanos.Summary. These results indicate the potential of MDAS for the prevention and / or treatment of hypercholesterolemia and hyperlipidemia. Given the anti-inflammatory activity of MDAS, it may be more effective than AS or MD in preventing and / or treating atherosclerosis and other conditions contributing to inflammation. Combined use of MDAS and NS enhances the positive effects of the individual substances on experimentally elevated lipid levels more than ASS + NS. Not only was MDAS in combination with SI more effective than SI alone, it was also significantly more effective than MD + SI in preventing TRL elevated LDL and TG.

6.2. NS un MDAS. atsevišķi un kombinācijā, ietekme uz lipīdu līmeni žurku hroniskā hiperlipidēmijas modelī6.2. NS and MDAS. alone and in combination, effects on lipid levels in a rat model of chronic hyperlipidemia

Metodes. Tika lietoti Wistar žurku tēviņi. Dzīvnieki tika turēti klimatizētās telpās pie 22±1 °C, relatīvā mitruma 60±5% un 12/12 stundu gaismas/tumsas cikla ar brivu pieeju ūdenim un barībai. Sākotnējā dzīvnieku masa bija 220-240 g. Eksperimentālā hroniskā (subhroniskā) hiperlipidēmija/hiperholesterinēmija tika inducēta ar TR, izmantojot Levine un Saltzman aprakstīto metodi (Levine S. Saltzman A. J Pharmacol ToxicolMeth 2007;55:224-226). Dzīvnieki saņēma 250 mg/kg TR šķīdumu astes vēnā trīs reizes nedēļā 3 nedēļas. Pētāmo vielu šķīdumus eksperimentālajām grupām vai ūdeni Kontroles un TR grupai ievadīja p.o. vienreiz dienā vienu stundu pirms TR šķīduma injekcijas vai asins parauga ņemšanas saskaņā ar turpmāko shēmu:Methods. Wistar male rats were used. Animals were housed in air-conditioned rooms at 22 ± 1 ° C, 60 ± 5% relative humidity, and a 12/12 hour light / dark cycle with free access to water and food. The initial weight of the animals was 220-240 g. Experimental chronic (subchronic) hyperlipidemia / hypercholesterolemia was induced by TR using the method described by Levine and Saltzman (Levine S. Saltzman A.J. Pharmacol ToxicolMeth 2007; 55: 224-226). The animals received 250 mg / kg TR solution in the tail vein three times a week for 3 weeks. Test substance solutions in experimental groups or water were administered p.o. to the Control and TR groups. once daily for one hour prior to injection of TR solution or blood sampling according to the following scheme:

GRUPA PROCEDŪRA Dzīvnieku skaitsGROUP PROCEDURE Number of animals

Kontrole Control 10 10th TR TR TR 250 mg/kg TR 250 mg / kg 14 14th TR+NS TR + NS TR 250 mg/kg+NS 50 mg/kg/d TR 250 mg / kg + NS 50 mg / kg / d 14 14th TR+MDAS TR + MDAS TR 250 mg/kg+MDAS 150 mg/kg/d TR 250 mg / kg + MDAS 150 mg / kg / d 14 14th TR+NS+MDAS TR + NS + MDAS TR 250 mg/kg+NS 50 mg/kg+MDAS 150 mg/kg/d TR 250 mg / kg + NS 50 mg / kg + MDAS 150 mg / kg / d 14 14th

Asinis bioķīmiskām analīzēm tika ņemtas pēc 1, 2 un 3 nedēļām (nākošajā dienā pēc TR injekcijas) ar sirds punkciju ētera narkozē. Serumu atdalīja centrifugējot un noteica kopējā H, ABL, ZBL un TG līmeni ar komerciāliem analīžu komplektiem.Blood for biochemical analyzes was taken at 1, 2 and 3 weeks (the day after TR injection) with cardiac puncture under ether narcosis. Serum was removed by centrifugation and total H, HDL, LDL and TG levels were determined with commercial assay kits.

Statistika. Dati tika analizēti ar Microsoft Excel programmatūru un rezultāti izteikti kā vidējais +/- vidējā standarta kļūda (Mean±SEM). Dažādu grupu vidējie rezultāti tika salīdzināti, izmantojot vienfaktora analīzi pēc ANOVA un t-Stjūdenta testiem. Par nozīmīgu tika uzskatīts P<0,05.Statistics. Data were analyzed with Microsoft Excel software and expressed as mean +/- Mean ± SEM. The mean scores of the different groups were compared using one-way analysis by ANOVA and t-Student tests. P <0.05 was considered significant.

Rezultāti. Atkārtotas TR injekcijas izraisīja izteiktu un stabilu hiperholesterinēmiju un hiperlipidēmiju, ko raksturoja nozīmīgs kopējā H, ZBL un TG līmeņa pieaugums, salīdzinot ar Kontroli (kopējais H pieauga 6-7 reizes, TG 30 un vairāk reizes, skat. 20. tabulu). NS terapija, nozīmīgāk pirmajā nedēļā, ierobežoja kopējā H, ZBL un TG pieaugumu, bet nozīmīgi paaugstināja ABL līmeni tikai 2. un 3. nedēļā. MDAS gandriz tikpat kā NS pazemināja kopējā H un ZBL līmeni un paaugstināja ABL līmeni, bet mazāk nekā NS novērsa TR izraisīto TG pieaugumu (skat. 20. tabulu).Results. Repeated TR injections resulted in pronounced and stable hypercholesterolemia and hyperlipidemia characterized by significant increases in total H, LDL and TG compared to Control (total H increased 6-7 fold, TG 30 fold and greater, see Table 20). NS treatment, more significantly in the first week, limited the increase in total H, LDL and TG but significantly increased HDL levels at weeks 2 and 3 only. MDAS almost completely reduced NS and HL and elevated HDL levels, but less than NS prevented TR-induced TG increase (see Table 20).

Negaidīti izrādījās, ka kombinēta NS+MDAS lietošana pēc 3 nedēļām būtiski labāk nekā NS vai MDAS atsevišķi pazemināja kopējā H, ZBL un TG līmeni un paaugstināja ABL līmeni. Tādā veidā var sagaidīt, ka kombinācija NS+MDAS būs noderīga hiprholesterīnēmijas un hiperlipidēmijas profilaksei un/vai ārstēšanai.Unexpectedly, the combined administration of NS + MDAS after 3 weeks significantly lowered total H, LDL and TG levels and increased HDL levels than NS or MDAS alone. In this way, the combination NS + MDAS can be expected to be useful in the prevention and / or treatment of hypercholesterolemia and hyperlipidemia.

20. tabulaTable 20

NS un MDAS, atsevišķi un kombinācijā, ietekme uz lipīdu līmeni žurku hroniskas hiperlipidēmijas modelī; n=9-14; Mean+SEMEffects of NS and MDAS, alone and in combination, on lipid levels in a rat model of chronic hyperlipidemia; n = 9-14; Mean + SEM

Grupa Group Kopējais H pec 1, 2 un 3 nedeļam, mg/dl Total H pec for weeks 1, 2 and 3, mg / dl Cl Cl C2 C2 C3 C3 Kontrole Control 77,6+4,9* 77.6 + 4.9 * 75,1+5,1* 75.1 + 5.1 * 72,7+2,5* 72.7 + 2.5 * TR TR 487,6+25,4 487.6 + 25.4 501+16,7 501 + 16.7 513+41,1 513 + 41.1 TR+NS TR + NS 345+15,7* 345 + 15.7 * 401,1+25,1** 401.1 + 25.1 ** 405,5+25,9* 405.5 + 25.9 * TR+MDAS TR + MDAS 375,9+25,8* 375.9 + 25.8 * 406,7+19,8** 406.7 + 19.8 ** 409+39,4 409 + 39.4 TR+NS+MDAS TR + NS + MDAS 331,7+28,4** 331.7 + 28.4 ** 379,1+24,7** 379.1 + 24.7 ** 375,8+31* 375.8 + 31 *

20. tabula (turp.)Table 20 (cont'd)

Grupa Group ABL pec 1,2 un 3 nedejām, mg/dl HDL after 1.2 and 3 dances, mg / dl ABL1 ABL1 ABL2 ABL2 ABL3 ABL3 Kontrole Control 54,6+1,9* 54.6 + 1.9 * 54,1+1,3 54.1 + 1.3 53,7+1,0* 53.7 + 1.0 * TR TR 76,3+6,9 76.3 + 6.9 76,2+11,4 76.2 + 11.4 77+10,2 77 + 10.2 TR+NS TR + NS 111,3+9,1* 111.3 + 9.1 * 144,7+13,5* 144.7 + 13.5 * 127,3+10,9* 127.3 + 10.9 * TR+MDAS TR + MDAS 100,1+9,4 100.1 + 9.4 113,8+13,1 113.8 + 13.1 128,3+18,5* 128.3 + 18.5 * TR+NS+MDAS TR + NS + MDAS 112,3+10,9* 112.3 + 10.9 * 129,2+13,1* 129.2 + 13.1 * 154,1+19* 154.1 + 19 *

20. tabula (turp.)Table 20 (cont'd)

Grupa Group ZBL pec 1, 2 un 3 nedēļām, mg/dl LDL at 1, 2 and 3 weeks, mg / dl ZBL1 ZBL1 ZBL2 ZBL2 ZBL3 ZBL3 Kontrole Control 18,7+3,8* 18.7 + 3.8 * 19,7+4,4* 19.7 + 4.4 * 16,3+2,0* 16.3 + 2.0 * TR TR 388,7+26,7 388.7 + 26.7 402,1+19,2 402.1 + 19.2 405,1+41,7 405.1 + 41.7 TR+NS TR + NS 216,3+14,0 216.3 + 14.0 250,3+20,6* 250.3 + 20.6 * 265,1+18,4* 265.1 + 18.4 * TR+MDAS TR + MDAS 263,3+19,4 263.3 + 19.4 287,6+18,5* 287.6 + 18.5 * 261,9+12,6** 261.9 + 12.6 ** TR+NS+MDAS TR + NS + MDAS 205,7+18,5** 205.7 + 18.5 ** 222,4+16,5** 222.4 + 16.5 ** 214,4+15,1“* 214.4 + 15.1 "*

Grupa Group TG pēc 1, 2 un 3 nedēļām, m TG at 1, 2, and 3 weeks, m g/dl g / dl TG1 TG1 TG2 TG2 TG3 TG3 Kontrole Control 38+2,9* 38 + 2.9 * 37+3,2* 37 + 3.2 * 38+4,4* 38 + 4.4 * TR TR 1240+80,1 1240 + 80.1 1297+78,3 1297 + 78.3 1234+114,1 1234 + 114.1 TR+NS TR + NS 734+81,6* 734 + 81.6 * 860+73,8** 860 + 73.8 ** 828+44.7* 828 + 44.7 * TR+MDAS TR + MDAS 964+94,9* 964 + 94.9 * 1079+84 1079 + 84 982+72,7 982 + 72.7 TR+NS+MDAS TR + NS + MDAS 721,6+52,4** 721.6 + 52.4 ** 807,6+80,1** 807.6 + 80.1 ** 714+27,3*** 714 + 27.3 ***

*P<0,05 pret TR* P <0.05 versus TR

20. tabula (turp.) **P<0,005 pret TR *<0,0005 pret TR sP<0,05 pretNS &P<0,05 pret MDASTable 20 (cont.) ** P <0.005 vs. TR * <0.0005 vs. TR s P <0.05 vs. NS & P <0.05 vs. MDAS

KopsavilkumsSummary

Kombinēta MDAS un NS lietošana ir nozīmīgi efektīvāka nekā šo vielu atsevišķa lietošana.Combined use of MDAS and NS is significantly more effective than separate administration of these agents.

7. piemērs. Pētāmo vielu ietekme uz trombocītu salipšanu un trombu veidošanosExample 7. Effect of test substances on platelet adhesion and thrombus formation

7.1, Trombocītu salipšana7.1, Platelet adhesion

ASS ir viens no visplašāk lietotajiem profilaktiskajiem līdzekļiem pret trombocītu salipšanu (Miner J et al, Tex Heart Inst J 2007;34(2): 179-186). ASS ir kombinēta ar NS kā pretiekaisuma (US 3,312,593) un trombocītu pretsalipšanas līdzeklis (WO 9632942). Ir zināmi daudzi citi līdzekļi un to kombinācijas. Ir konstatēts, ka MD normalizē asinsvadu tonusu, inhibē trombocītu salipšanu un taukskābju oksidēšanu, kā arī optimizē skābekļa patēriņu miokarda išēmijas gadījumā (Tsirkin VI, Ros Kardiol Zh 2002; 1:45-52). NS ari nedaudz kavē trombocītu salipšanu (Lakin KM, Farmakol Toksikol, 1980,43; 43(5):581-5 (Rus). Tipiskais pretsalipšanas līdzeklis klopidogrels tiek lietots atsevišķi (US 4,529,596, US 4,847,265, US 5,576328) vai kombinācijā ar stariņu (WO9804259) vai ASS (WO9729753). Ar ASS var tikt kombinēts ari pretsalipšanas līdzeklis dipiridamols (Halkes PH et al, Lancet 2006,367(9523):1665-73). Klīniskā pieredze liecina, ka dažādu līdzekļu kombinācijām ir daudzpusīgāks pielietojums.ASA is one of the most widely used prophylactic antiplatelet agents (Miner J et al, Tex Heart Inst J 2007; 34 (2): 179-186). ASA is combined with NS as an anti-inflammatory (US 3,312,593) and antiplatelet agent (WO 9632942). Many other agents and combinations thereof are known. MD has been found to normalize vascular tone, inhibit platelet adhesion and fatty acid oxidation, and optimize oxygen consumption in myocardial ischemia (Tsirkin VI, Ros Kardiol Zh 2002; 1: 45-52). NS also slightly inhibits platelet aggregation (Lakin KM, Farmakol Toksikol, 1980.43; 43 (5): 581-5 (Rus). The typical anti-caking agent clopidogrel is used alone (US 4,529,596, US 4,847,265, US 5,576328) or in combination) with ray (WO9804259) or ASA (WO9729753) Dipyridamole, an anti-caking agent, can also be combined with ASA (Halkes PH et al, Lancet 2006,367 (9523): 1665-73) Clinical experience has shown that combinations of different agents have a more versatile use .

Metode. Trombocītu salipšana tika pētīta, izmantojot pilnasiņu impedances agregometriju ar Multiplate (Multiple Platelet Function Analyzer, Dynabyte Medical, Vācija) (Toth O et al, Thromb Haemost 2006;96:781-788. Velik-Salchner C et al, Anesth Analg 2008;107:1798-1806). Asins paraugi in vitro eksperimentam tika ņemti no vesela donora B. (37 g.v.), kas nebija lietojis ASS vai citus pretsalipšanas līdzekļus, plastmasas stobriņos ar hirudīna pārklājumu (Dynabyte Medical, Vācija) un izmantoti mērījumam laikā no 30 min. līdz 4 stundām pēc paņemšanas. Eksperimentam ex vivo asinis tika savāktas plastmasas stobriņos ar hirudīna pārklājumu (Dynabyte Medical, Vācija) no narkotizētām žurkām, kuras 3 iepriekšējās dienas bija saņēmušas pētāmās vielas p.o. Mērījumi tika veikti saskaņā ar modificētu Dynabyte Medical protokolu. Izotonisks nātrija hlorīda šķīdums (0,3 ml, vai sāls šķīdums ar pētāmo vielu galīgajā koncentrācijā 104 mmol/ml katram) tika sasildīts līdz 37 °C un pipetēts mērījuma šūnās, pieliekot 0,3 ml no pilnasiņu parauga, kam kā antikoagulants pievienots hirudīns. Pēc 5 minūšu inkubācijas un maisīšanas pie 37 °C tika pievienots atbilstošā agonista (no Dynabyte Medical, Vācija) šķīdums un veikti mērījumi:The method. Platelet adherence was studied using full-blood impedance aggregometry with Multiplate (Multiple Platelet Function Analyzer, Dynabyte Medical, Germany) (Toth O et al, Thromb Haemost 2006; 96: 781-788. Velik-Salchner C et al, Anesth Analg 2008; 107 : 1798-1806). Blood samples for the in vitro experiment were taken from healthy donor B. (37 years), who had not used ASA or other anti-caking agents, in hirudin-coated plastic tubes (Dynabyte Medical, Germany) and used for measurement within 30 min. up to 4 hours after collection. For the ex vivo experiment, blood was collected in plastic hirudin-coated tubes (Dynabyte Medical, Germany) from anesthetized rats that had received the test substance for the previous 3 days. Measurements were made according to a modified Dynabyte Medical protocol. Isotonic sodium chloride solution (0.3 ml, or saline with test substance at a final concentration of 10 4 mmol / ml each) was warmed to 37 ° C and pipetted into measuring cells with 0.3 ml of whole blood sample supplemented with hirudin as an anticoagulant. . After 5 minutes of incubation and mixing at 37 ° C, a solution of the appropriate agonist (from Dynabyte Medical, Germany) was added and measured as follows:

1) adenozīna difosfats (ADF) - ADF tests. ADF stimulē trombocītu aktivāciju ar ADF receptoriem (Ρ2Υ12 u.c.).1) adenosine diphosphate (ADF) - ADF test. ADF stimulates platelet activation by ADF receptors (Ρ2Υ12, etc.).

2) arahidonskābe (AS) - ASPI tests: aktivācija ar AS - vielu, no kuras ciklooksigenāze veido tromboksānu A2 (ΤΧΑ2), kas ir spēcīgs trombocītu agonists.2) arachidonic acid (AS) - ASPI test: activation with AS - a substance that produces cyclooxygenase to thromboxane A2 (ΤΧΑ2), a potent platelet agonist.

3) ADF HS tests (prostaglandīns Ej kopā ar ADF). Tāda endogēnā inhibitora kā PGEj pievienošana padara ADF HS testu jutīgāku pret klopidogrela un līdzīgu vielu efektiem, salīdzinot ar ADF testu.3) ADF HS test (prostaglandin Ej with ADF). Addition of an endogenous inhibitor such as PGEj makes the ADF HS assay more sensitive to the effects of clopidogrel and related substances compared to the ADF assay.

Agregācijas līknes tika reģistrētas 6 minūtes un analizētas ar Dynabyte Medical programmatūru. Tika aprēķināti šādi trombocītu salipšanas parametri:Aggregation curves were recorded for 6 minutes and analyzed with Dynabyte Medical software. The following platelet adhesion parameters were calculated:

1) Amax, trombocītu salipšanas maksimālā vērtība nosacītās salipšanas vienībās (AU);1) Amax, maximum value of platelet adhesion in units of relative adhesion (AU);

2) AUC, kopējais laukums zem agregacijas līknes (AU*min). To ietekmē kopējais agregācijas līknes augstums un tās slīpums un tas ir vislabāk piemērots kopējās trombocītu aktivitātes izteikšanai.2) AUC, total area under the aggregation curve (AU * min). It is influenced by the total height and slope of the aggregation curve and is best suited to express total platelet activity.

Statistika. Rezultāti tika izteikti kā vidējais lielums un vidējā standarta kļūda (Mean ± SEM). Lai novērtētu atšķirību ticamību, tika lietots vienvirziena ANOVA tests. Ja nulles hipotēze tika noraidīta, tika izmantots post-hoc Student-Newman-Keuls tests.Statistics. Results were expressed as mean and mean standard error (Mean ± SEM). A one-way ANOVA test was used to assess the reliability of the differences. If the null hypothesis was rejected, a post-hoc Student-Newman-Keuls test was used.

Rezultāti. Kā redzams 21. tabulā, MDAS koncentrācijā ΚΓ4 mol nozīmīgi aizsargāja pret ADF un īpaši pret trombocītu salipšanu AS un ADF+PGEi ietekmē (nozīmīgs AUC un Amax samazinājums, 21. tabula). NS (104 mmol/ml grupā) ari samazināja ADF izraisīto salipšanu (skat. Amax, 21. tabula). Abu vielu kombinētā darbība deva nozīmīgi augstāku un izteiktāku trombocītu salipšanas samazinājumu ADF vai ADF+PGEi testā, kas parādās kā AUC, tā ari Amax datos (21. tabula).Results. As shown in Table 21, MDAS concentration ΚΓ 4 mol significant protection against the ADF, and especially against platelet aggregation and ADP + AS PGEi affect (AUC and a significant decrease in Amax, Table 21). NS (10 4 mmol / ml) also reduced ADF-induced adhesion (see Amax, Table 21). Combined action of both agents resulted in significantly higher and more pronounced reduction in platelet adhesion in the ADF or ADF + PGEi assay, which appears in both AUC and Amax data (Table 21).

21. tabulaTable 21

MD, NS un to kombinācijas ietekme uz ADF, AS unADF+PGE, inducētu trombocītu salipšanu; N=5-8; Mean ± SEM.Effect of MD, NS and their combination on ADF, AS and ADF + PGE, induced platelet adhesion; N = 5-8; Mean ± SEM.

Grupa Group ADF ADF AUC (AU*min) AUC (AU * min) Amax (AU) Amax (AU) Kontrole Control 942+43,7 942 + 43.7 169,3+6,4 169.3 + 6.4 MDAS 10’5 MDAS 10 ' 5 828+63,5 828 + 63.5 153,5+8,8 153.5 + 8.8 MDAS 10 MDAS 10 798+38,9' 798 + 38.9 ' 140,5+7,2' 140.5 + 7.2 ' MD 10 MD 10 869 ±36,3 869 ± 36.3 153,2+6,1 153.2 + 6.1 ASS ΙΟ4 ASS ΙΟ 4 883+50.3 883 + 50.3 151,7+9,3 151.7 + 9.3 NS 10-4 NS 10- 4 859+62,5 859 + 62.5 148,0+5.2' 148.0 + 5.2 ' MD 10+NS 10 MD 10 + NS 10 474+ 34,934#SS3 474+ 34.9 34 # SS3 81,0±5.7444IIa 81.0 ± 5.7 444IIa MDAS 10+NS IC4 MDAS 10 + NS IC 4 403+ 403+ 75,3+6.82^3552244 75.3 + 6.8 2 ^ 3552244 ASS+NS ASS + NS 805+47,3lb 805 + 47.3 lb 137+7,l'b 137 + 7, l ' b

21. tabula (turp.)Table 21 (cont'd)

Grupa Group AS AS AUC (AU*min) AUC (AU * min) Amax (AU) Amax (AU) Kontrole Control 1023+46,3 1023 + 46.3 178,8+6,9 178.8 + 6.9 MDAS 10'5 MDAS 10 ' 5 832+54,11 832 + 54.1 1 148,4+5,7' 148.4 + 5.7 ' MDAS 10 MDAS 10 298+25,3 34AS 298 + 25.3 34AS 66,1±6,834&I 66.1 ± 6.8 34 & I MD 10 MD 10 1050+37,6& 1050 + 37.6 & 179,5+7,3* 179.5 + 7.3 * ASS 10 ASS 10 450+24,82i|®450 + 24.8 2i | ® 103,l±5.9-e+103, l ± 5.9- e + NS 10 NS 10 1010+41,7 1010 + 41.7 161,1+9,4 161.1 + 9.4 MD 10+NS 10 MD 10 + NS 10 1106+55,42 1106 + 55.4 2 173,3+12,1’ 173.3 + 12.1 ' MDAS 10+NS 10 MDAS 10 + NS 10 216i 18 216i 18 48 5±6 48 5 ± 6 ASS+NS ASS + NS 463+35,22bS4 463 + 35.2 2bS4 99,4+8,22654 99.4 + 8.2 2654

21. tabula (turp.)Table 21 (cont'd)

Grupa Group ADF+PGE, ADF + PGE, AUC (AU*min) AUC (AU * min) Amax (AU) Amax (AU) Kontrole Control 1005+46,5 1005 + 46.5 175,3+8,9 175.3 + 8.9 MDAS 10 MDAS 10 595+45,3' 595 + 45.3 ' 99,3+4,82 99.3 + 4.8 2 MDAS 10 MDAS 10 533+20,33 533 + 20.3 3 87,7+4,63 87.7 + 4.6 3 MD 10-4 MD 10- 4 587+37,42 587 + 37.4 2 101,4+2,22 101.4 + 2.2 2 ASS ΙΟ-4 ASS ΙΟ -4 - - - - NS 10-4 NS 10- 4 862+51,9 862 + 51.9 146,7+8,6 146.7 + 8.6 MD 10+NS 10 MD 10 + NS 10 306+35,534Sa 306 + 35.5 34Sa 54,5+5,83453 54.5 + 5.8 3453 MDAS 10+NS 10 MDAS 10 + NS 10 50,2+7,3 50.2 + 7.3 ASS+NS ASS + NS 603+42,51Jb 603 + 42.5 1Jb 98,0+7,2216 98.0 + 7.2 216

'P<0,05 pret Kontroli 2P<0,005 pret Kontroli 3P<0,0005 pret Kontroli 4P<0,00005 pret Kontroli &P<0,05 pret ASS *P<0,005 pret MD 10 **P<0,0005 pret MD 10 sP<0,005 pret NS 10 JIP<0,0005 pretNS 10 ®P<0,05 pret MDAS 10 ’P<0,05 pret ASS+NA Τ<0,05 pret MD+NS'P <0.05 versus Control 2 P <0.005 versus Control 3 P <0.0005 versus Control 4 P <0.00005 versus Control & P <0.05 versus Control * P <0.005 versus MD 10 ** P <0 , 0005 versus MD 10 s P <0.005 versus NS 10 JI P <0.0005 versus NS 10 ®P <0.05 versus MDAS 10 ′ P <0.05 versus ASS + NA Τ <0.05 versus MD + NS

MDAS nozīmīgi labāk nekā ASS vai MD aizsargaja trombocitus no AS inducētas salipšanas (21. tabula). Kombinācija MDAS+NS uzrādīja nozīmīgi augstāku aktivitāti pret trombocītu salipšanu AS ietekmē, pārsniedzot atsevišķu vielu aktivitāti, kā ari ASS+NS un MD+NS aktivitāti (21. tabula).MDAS was significantly better than ASA or MD in protecting platelets from AS-induced adhesion (Table 21). The combination of MDAS + NS showed significantly higher anti-platelet adhesion activity in AS, exceeding the activity of individual substances, as well as that of ASS + NS and MD + NS (Table 21).

Tika veikti paralēli eksperimenti ar dipiridamolu (DI) un DI kombināciju ar ASS vai MDAS uz ADF vai AS izraisītu trombocītu salipšanu (22. tabula). DI uzrāda prettrombu un pretsalipšanas aktivitāti (Mammen EF, Thrombosis Research Supplement 1990 XII, 1-3). Dipiridamols kopā ar aspirīnu ir aktīvāks nekā aspirīns pēc arteriālas izcelsmes smadzeņu išēmijas (Halkes PH et al. Lancet 2006, 367(9523):1665-73).Parallel experiments were conducted with dipyridamole (DI) and the combination of DI with ASA or MDAS on ADF or AS platelet adhesion (Table 22). DI exhibits anti-thrombotic and anti-adherent activity (Mammen EF, Thrombosis Research Supplement 1990 XII, 1-3). Dipyridamole with aspirin is more active than aspirin after arterial cerebral ischemia (Halkes PH et al. Lancet 2006, 367 (9523): 1665-73).

22. tabulaTable 22

Pētāmo vielu ietekme, atsevišķi un kombinācijas, uz ADF vai AS inducētu trombocītu salipšanu. Mean ± SEM; N= 5-8.Effects of test substances, individually and in combination, on ADF or AS-induced platelet adhesion. Mean ± SEM; N = 5-8.

Grupa Group ADF ADF AS AS AUC (AU*min) AUC (AU * min) Amax (AU) Amax (AU) AUC (AU*min) AUC (AU * min) Amax (AU) Amax (AU) Kontrole Control 942+43,7 942 + 43.7 169,3+6,4 169.3 + 6.4 1023+46,3 1023 + 46.3 178,8+6,9 178.8 + 6.9 MDAS KD MDAS KD 798+38,9' 798 + 38.9 ' 140,5+7,2' 140.5 + 7.2 ' 298+25,33aa& 298 + 25.3 3aa & 66,l±6,8Jaa& 66, l ± 6.8 Share & ASS lCfi ASS lCfi 883+50,3 883 + 50.3 151,7+9,3 151.7 + 9.3 450+24.83’®450 + 24.8 3 103,l±5,9Za®103, l ± 5.9 Za ® DI 3Χ10-4 DI 3Χ10- 4 665+44,1“ 665 + 44.1 " 111,1+6,9“ 111.1 + 6.9 " 1104+45,5*®’® 1104 + 45.5 * ®'® 173,9+5, 173.9 + 5, MDAS ĪOADI 3x1o-4 MDAS IOADI 3x1- 4 465+27.θ“465 + 27.θ " ! Ϊ́ " 69 7+3 2J®S69 7 + 3 2 J ® S 38,5±3,64®®'ilaaS 38.5 ± 3.6 4 ®® ' ilaaS ASS ĪOADI 3Χ10-4 ASS IOADI 3Χ10- 4 667+39,4“ 667 + 39.4 " 105,2x6,7“'- 105.2x6.7 "'- 207,9+27,5““ 207.9 + 27.5 "" 62,8+6,8““ 62.8 + 6.8 "

P<0,05 pret Kontroli 2P<0,005 pret Kontroli 3P<0,0005 pret Kontroli 4P<0,00005 pret Kontroli *P<0,05 pret ASS ®P<0,05 pret MDAS @@P<0,005 pret MDAS aP<0,05 pret DI “P<0,005 pret DI “+><0,0005 pret DI sP<0,05 pret ASS+DĪ siP<0,005 pret ASS+DIP <0.05 versus Control 2 P <0.005 versus Control 3 P <0.0005 versus Control 4 P <0.00005 versus Control * P <0.05 versus ASS ®P <0.05 versus MDAS @@ P <0.005 versus MDAS a P <0.05 versus DI “P <0.005 versus DI” +><0.0005 versus DI s P <0.05 versus ASS + DI si P <0.005 versus ASS + DI

Šaja sērija visaugstākā aktivitāte piemita MDAS+DI, kas bija nozīmīgi augstāka nekā ASS+DI aktivitāte (22. tabula).The highest activity in this series was MDAS + DI, which was significantly higher than that of ASS + DI (Table 22).

7.2. Tromboze7.2. Thrombosis

Divas nedēļas ilga perorāla izmantošana eksperimentālas artēriju trombozes terapijā trušiem un suņiem parādīja MD trombolītisku iedarbību (Logunova L et al, Experim Clin Pharmacoter 1991;19:91-98 (Rus). Nav zināmi dati par MD profilaktisko iedarbību trombozes ierobežošanā vai novēršanā. NS samazina trombozi ar dažādiem mehānismiem (Rosenson RS et al, Atherosclerosis 1998;140:271-80).Two weeks of oral treatment in experimental arterial thrombosis therapy in rabbits and dogs showed MD thrombolytic effects (Logunova L et al., Experim Clin Pharmacoter 1991; 19: 91-98 (Rus). No data are available on the prophylactic effect of MD on thrombosis control. NS reduces thrombosis by various mechanisms (Rosenson RS et al., Atherosclerosis 1998; 140: 271-80).

Metode. Mēs izvēlējāmies eksperimentālās trombozes modeli, kas pamatojas uz FeCfi inducētu žurku artēriju trombozi (Kurz K et al, Thromb Res 1990,60:269-280. Wang X, Xu L, Thromb Res 2005,115:95-100). Audu oksidatīvs bojājums ar dzelzs līdzdalību veicina trombocītu pieķeršanos bojātajai virsmai un salipšanu, kam seko koagulācijas aktivēšana un fibrina izgulsnēšanās. Eksperimentos tika lietoti Wistar žurku tēviņi ar masu 350-420 g. Dzīvnieki tika turēti grupās pa 7-8 piemērotos būros klimatizētās telpās pie 22±1 °C, relatīvā mitruma 60±5% un 12/12 stundu gaismas/tumsas cikla ar brivu pieeju barībai un ūdenim. Visi eksperimenti tika veikti saskaņā ar Eiropas Kopienas Padomes 1986. gada 24. novembra direktīvu (86/609/EK) par dzīvnieku izmantošanu zinātniskiem mērķiem. Tika pieliktas visas pūles, lai līdz minimumam samazinātu dzīvnieku ciešanas un samazinātu izmantoto dzīvnieku skaitu. Žurkas tika randomizētas vairākās pētījuma grupās, kurās katrā bija ne mazāk kā 7 dzīvnieki. Nesējs vai pētāmā viela MD (25 mg/kg), NS (25 mg/kg),The method. We chose an experimental thrombosis model based on FeCl2-induced rat arterial thrombosis (Kurz K et al, Thromb Res 1990, 60: 269-280. Wang X, Xu L, Thromb Res 2005, 115: 95-100). Oxidative damage to tissues with iron promotes adhesion of platelets to the damaged surface and adhesion, followed by activation of coagulation and fibrin deposition. Wistar male males weighing 350-420 g were used in the experiments. The animals were housed in groups of 7 to 8 in appropriate cages at 22 ± 1 ° C, 60 ± 5% relative humidity, and a 12/12 hour light / dark cycle with free access to food and water. All experiments were carried out in accordance with Council Directive 86/609 / EEC of 24 November 1986 on the use of animals for scientific purposes. Every effort was made to minimize animal suffering and reduce the number of animals used. Rats were randomized to several study groups with at least 7 animals each. Carrier or test substance MD (25 mg / kg), NS (25 mg / kg),

MDAS (10 mg/kg), ASS (5 mg/kg) un kombinācijas MD+NS (25+25 mg/kg), MDAS+NS (10+25 mg/kg) un ASS+NA (5+25 mg/kg) tika ievadītas perorāli 2 stundas pirms trombozes izraisīšanas. Tika veikti paralēli eksperimenti, lai salīdzinātu pētāmās vielas vienas devas (ievadot 2 stundas pirms trombozes izraisīšanas) un atkārtotu devu (reizi dienā 3 dienas) efektus. Dzīvnieku grupas (7-8) saņēma šādas vielas: MDAS (10 mg/kg), klopidogrels (CL) (5 mg/kg), ASS (5 mg/kg) un kombināciju MDAS+CL (10+5 mg/kg) vai ASS+CL (5+5 mg/kg). Žurkas tika anestezētas ar pentobarbitālnātriju (50 mg/kg, i.p. un 10 mg/kg/h) un eksperimenta laikā novietotas uz apsildāma operācijas galda, lai uzturētu ķermeņa temperatūru 37 °C. Viena no miega artērijām tika atklāta ar iegriezumu kaklā, atdalīta no apkārtējiem audiem, klejotājnerva un uz atklātā kopējās miega artērijas posma uzlikta plūsmas zonde (elektromagnētiskais asins plūsmas mērītājs MFV 1200, Nicon Kohden, Japāna) asins plūsmas reģistrēšanai. Pēc 15 min. ilga stabilizācijas perioda tika ierosināta tromboze, uzliekot uz artērijas, kontaktā ar asinsvadu aptverošajiem audiem, divus Whatman filtrpapīra gabaliņus (2x1 mm), kas samērcēti 15% FeCf šķīdumā. Miega artērijas trombozes laiks tika reģistrēts kā laiks, kurā asins plūsma apstājās pilnīgi un parādīts kā laiks līdz oklūzijai (LLO). Ja aktīvās ārstēšanas grupā 90 min. laikā asins plūsma neapstājās, LLO tika reģistrēts kā >90 min.MDAS (10 mg / kg), ASS (5 mg / kg) and combinations MD + NS (25 + 25 mg / kg), MDAS + NS (10 + 25 mg / kg) and ASS + NA (5 + 25 mg / kg) kg) were administered orally 2 hours before thrombosis was induced. Parallel experiments were conducted to compare the effects of a single dose of the test substance (administered 2 hours prior to thrombosis) and repeated doses (once daily for 3 days). Animal groups (7-8) received the following substances: MDAS (10 mg / kg), clopidogrel (CL) (5 mg / kg), ASS (5 mg / kg) and combination MDAS + CL (10 + 5 mg / kg). or ASS + CL (5 + 5 mg / kg). Rats were anesthetized with pentobarbital sodium (50 mg / kg, i.p. and 10 mg / kg / h) and placed on a heated operating table during the experiment to maintain a body temperature of 37 ° C. One of the carotid arteries was detected by a neck incision, separated from the surrounding tissue, the vagus nerve, and a flow probe (electromagnetic blood flow meter MFV 1200, Nicon Kohden, Japan) applied to the open total carotid artery. After 15 min. after a long period of stabilization, two pieces of Whatman filter paper (2x1 mm) soaked in 15% FeCf solution were induced by thrombosis upon application to the artery in contact with the vascular surrounding tissue. The time of carotid thrombosis was recorded as the time at which the blood flow stopped completely and is shown as the time to occlusion (LLO). If in the active treatment group 90 min. blood flow did not stop, LLO was recorded as> 90 min.

Trombozes eksperimenta laikā papildus tika mērīts žurkas astes asiņošanas ilgums. Aste tika pārgriezta ar skalpeli 5 mm no gala un aste tūlīt iemērkta 37 °C siltā izotoniskā sālsūdenī līdz tika konstatēta asiņošanas apstāšanās. Asiņošanas apstāšanās tika definēta kā laiks līdz pilnīgām asiņošanas beigām, kad asiņošana neatjaunojās nākamo 30 s laikā.The duration of the rat tail bleeding was further measured during the thrombosis experiment. The tail was cut with a scalpel 5 mm from the tip and immediately immersed in 37 ° C warm isotonic saline until the bleeding stopped. Bleeding stop was defined as the time to complete bleeding, when the bleeding did not recur within the next 30 s.

Pēc trombozes eksperimenta narkotizētie dzīvnieki, kuri saņēma pētāmās vielas 3 dienas, tika izmantoti trombocītu salipšanas testam ex vivo. Tika atvērts vēdera dobums un asinis no vēna cava inferior savāktas plastmasas stobriņos ar hirudīna pārklājumu (Dynabyte Medical, Vācija).Following the thrombosis experiment, narcotic animals receiving test substances for 3 days were used for the platelet adhesion test ex vivo. An abdominal cavity was opened and blood from a venous cava inferior was collected in plastic hirudin-coated tubes (Dynabyte Medical, Germany).

Asins paraugi tika izmantoti mērījumiem laikā no 30 min. līdz 4 stundas pēc savākšanas. Mērījumi tika veikti saskaņā ar modificētu Dynabyte Medical protokolu (skat. augstāk - Trombocītu salipšana).Blood samples were used for measurements within 30 min. up to 4 hours after collection. Measurements were made according to the modified Dynabyte Medical protocol (see Platelet Adherence above).

Statistika. Rezultāti tika analizēti ar Microsoft Excel 2007 programmatūru. Dati tiek parādīti kā vidējais ± vidējā standarta kļūda (Mean±SEM). Atšķirības starp eksperimenta grupām tika salīdzinātas, izmantojot vienvirziena ANOVA ar atkārtotu salīdzināšanu (Tukeja tests). Par nozīmīgu tika uzskatīts P<0,05.Statistics. The results were analyzed with Microsoft Excel 2007 software. Data are shown as Mean ± Mean Standard Error (Mean ± SEM). Differences between experimental groups were compared using one-way ANOVA with repeated comparison (Tukeja test). P <0.05 was considered significant.

Rezultāti. Vidējais laiks līdz FeCf ierosinātajai asinsvada trombozei un tas izraisītas artērijas plūsmas apstāšanās brīdim kontroles grupā bija 24,4 min. (23. tabula).Results. The mean time to FeCf-induced vascular thrombosis and the time to stop induced arterial flow in the control group was 24.4 min. (Table 23).

23. tabulaTable 23

Pētāmo vielu ietekme uz FeCl3 ierosināto miega artērijas trombozi. Mean ± SEM;N= 7-8.Effect of investigated substances on FeCl 3 induced carotid thrombosis. Mean ± SEM; N = 7-8.

Grupa Group Laiks līdz oklūzijai (LLO) Time to Occlusion (LLO) Astes asiņošanas ilgums Duration of tail bleeding min. min % % min min % % Kontrole Control 24,4+1,45 24.4 + 1.45 100 100 8,9+1,28 8.9 + 1.28 100 100 NS (25 mg/kg) NS (25 mg / kg) 30,3+3,12 30.3 + 3.12 124 124 11,5+1,39 11.5 + 1.39 129 129 MD (25 mg/kg) MD (25 mg / kg) 29,8+2,29 29.8 + 2.29 122 122 10,5+1,01 10.5 + 1.01 118 118 MD+NS (25+25 mg/kg) MD + NS (25 + 25 mg / kg) 34,0+2,78' 34.0 + 2.78 ' 139 139 11,4+1,42 11.4 + 1.42 128 , 128, MDAS (10 mg/kg) MDAS (10 mg / kg) 41,7±3,952*41.7 ± 3.95 2 * 171 171 12,1+2,20 12.1 + 2.20 136 136 MDAS+NS (10+25 mg/kg) MDAS + NS (10 + 25 mg / kg) 53,l±4,122iabc# 53, l ± 4.12 2iabc # 218 218 13,5+4,19 13.5 + 4.19 152 152 ASS (5 mg/kg) ASS (5 mg / kg) 35,2+3,02' 35.2 + 3.02 ' 144 144 13,8+3,27 13.8 + 3.27 155 155 ASS+NS (5 + 25 mg/kg) ASS + NS (5 + 25 mg / kg) 42,5±4,242S# 42.5 ± 4.24 2S # 174 174 15,2+2,12' 15.2 + 2.12 ' 171 171

’P<0,05 pret Kontroli 2P<0,005 pret Kontroli #P<0,05 pret MD sP<0,05 pretNS 3P<0,05 pret ASS bP<0,05 pret ASS+NS cP<0,05 pret MD+NS'P <0.05 versus Control 2 P <0.005 versus Control #P <0.05 versus MD s P <0.05 versus NS 3 P <0.05 versus ASS b P <0.05 versus ASS + NS c P < 0.05 vs. MD + NS

Profilaktiska MDAS ievadīšana deva nozīmīgi ilgāku LLO pagarinājumu (P<0,005 pret Kontroli), bet, atšķirībā no ASS, ar mazāku ietekmi uz astes asiņošanas testu (136 pret 155%). MDAS+NS (10+25 mg/kg) izraisīja salīdzinoši ilgāku trombozes aizkavēšanu, pārsniedzot MD+NS vai ASS+NS izraisīto aizkavēšanu (23. tabula). Jāatzīmē, ka, lietojot ASS un ASS+NS, LLO pieaugums iet paralēli ar astes asiņošanas laika pieaugumu, kamēr MDAS vai MDAS+NS gadījumā LLO pieaugums ir ievērojami lielāks nekā astes asiņošanas laika pieaugums (23. tabula).Prophylactic administration of MDAS yielded a significantly longer LLO prolongation (P <0.005 vs. Control) but, unlike ASA, had less effect on the tail bleeding assay (136 vs. 155%). MDAS + NS (10 + 25 mg / kg) resulted in comparatively longer thrombosis inhibition than MD + NS or ASS + NS (Table 23). It should be noted that with the use of ASS and ASS + NS, the increase in LLO goes hand in hand with the increase in tail bleeding time, whereas for MDAS or MDAS + NS, the increase in LLO is significantly greater than the increase in tail bleeding time (Table 23).

Paralēlos eksperimentos ar kopēju kontroli tika pētīta ASS, MDAS un CL un to kombināciju ietekme uz trombozi. Pētāmās vielas tika ievadītas ar vienu devu (2 stundas pirms testēšanas) vai ievadītas vienreiz dienā 3 dienas. ASS vai CL, ievadot 2 stundas pirms trombozes testa, nozīmīgi pagarināja LLO, salīdzinot ar kontroles grupu, kas saņēma ūdeni (24. tabula).The effect of ASS, MDAS, and CL, and combinations thereof, on thrombosis was studied in parallel experiments with a joint control. Test substances were administered as a single dose (2 hours before testing) or once daily for 3 days. ASA or CL, administered 2 hours prior to the thrombosis test, significantly prolonged LLO compared to the control group receiving water (Table 24).

24. tabulaTable 24

Vienas petamas vielas devas ietekme uz LLO un astes asiņošanas ilgumu FeCĻ inducētā miega artērijas trombozes eksperimentā. Mean ± SEM; N= 7-8.Effect of a single dose of test substance on LLO and tail bleeding duration in a FeCl-induced carotid artery thrombosis experiment. Mean ± SEM; N = 7-8.

Grupa Group Laiks līdz oklūzijai (LLO) Time to Occlusion (LLO) Astes asiņošanas ilgums Duration of tail bleeding min. min % % min min % % Kontrole Control 24,4+1,45 24.4 + 1.45 100 100 8,9+1,28 8.9 + 1.28 100 100 MDAS (10 mg/kg) MDAS (10 mg / kg) 41,7±3,952b 41.7 ± 3.95 2b 171 171 12,1+2,20 12.1 + 2.20 136 136 ASS (5 mg/kg) ASS (5 mg / kg) 35,2+3,02' 35.2 + 3.02 ' 144 144 13,8+3,27 13.8 + 3.27 155 155 CL(5 mg/kg) CL (5 mg / kg) 31,7+2,40’ 31.7 + 2.40 ' 130 130 11,9+3,62 11.9 + 3.62 134 134 MDAS+CL (10+5 mg/kg) MDAS + CL (10 + 5 mg / kg) 61,5+4,3 l3Sabc 61.5 + 4.3 L 3Sabc 252 252 15,7+3,16 15.7 + 3.16 176 176 ASS+CL (5+5 mg/kg) ASS + CL (5 + 5 mg / kg) 45,4±4,802ab 45.4 ± 4.80 2ab 186 186 16,3 ±2,25' 16.3 ± 2.25 ' 183 183

P<0,05 pret Kontroli 2P<0,005 pret Kontroli 3P<0,0005 pret Kontroli sP<0,05 pret MDAS aP<0,05 pret ASS bP<0,05 pret CL cP<0,05 pret ASS+CLP <0.05 vs Control 2 P <0.005 versus control 3 P <0.0005 vs Control of P <0.05 versus MDAS a P <0.05 versus ASA b P <0.05 versus CL c P <0, 05 against ASS + CL

Viena MDAS deva nodrošināja nozīmīgāku LLO pagarinājumu nekā CL. MDAS kopā ar CL nozīmīgi palielināja LLO, bet tikai nedaudz mainīja astes asiņošanas ilgumu (24. tabula). Jāatzīmē, ka kombinācija MDAS+CL izraisīja nozīmīgu LLO pieaugumu salīdzinājumā ar atsevišķām vielām un kombināciju ASS+CL.One dose of MDAS provided a more significant LLO extension than CL. MDAS in combination with CL significantly increased LLO but only slightly altered tail bleeding duration (Table 24). It should be noted that the combination of MDAS + CL resulted in a significant increase in LLO compared to the individual substances and the combination of ASS + CL.

Atkārtota pētāmo vielu ievadīšana izraisīja tālāku LLO un astes asiņošanas ilguma pagarināšanos (25. tabula).Repeated administration of test substances resulted in a further prolongation of LLO and tail bleeding (Table 25).

25. tabulaTable 25

Atkārtotās pētāmas vielas ievadīšanas ietekme uz LLO un astes asiņošanas ilgumu FeCl-ļ inducētā miega artērijas trombozes eksperimentā. Mean ± SEM; Ν= 7-8.Effect of repeated administration of test substance on LLO and tail bleeding time in FeCl-induced carotid artery thrombosis experiment. Mean ± SEM; Ν = 7-8.

Grupa Group Laiks līdz oklūzijai (LLO) Time to Occlusion (LLO) Astes asiņošanas ilgums Duration of tail bleeding min. min % % min. min % % Kontrole Control 25,3+1,75 25.3 + 1.75 100 100 8,6+1,37 8.6 + 1.37 100 100 MDAS (10 mg/kg) MDAS (10 mg / kg) 48,4+4,352 48.4 + 4.35 2 191 191 13,1+2,63 13.1 + 2.63 152 152 ASS (5 mg/kg) ASS (5 mg / kg) 40,9+3,25' 40.9 + 3.25 ' 162 162 17,8+3,17’ 17.8 + 3.17 ' 207 207 CL (5 mg/kg) CL (5 mg / kg) 49,1+7,75’ 49.1 + 7.75 ' 194 194 18,3+3,78’ 18.3 + 3.78 ' 213 213 MDAS+CL (10+5 mg/kg) MDAS + CL (10 + 5 mg / kg) 64,6+8,01“ 64.6 + 8.01 " 255 255 20,7+3,88’ 20.7 + 3.88 ' 241 241 ASS+CL (5+5 mg/kg) ASS + CL (5 + 5 mg / kg) 61,0+10,3223 61.0 + 10.32 23 241 241 27,4+4,98213 27.4 + 4.98 213 319 319

’P<0,05 pret Kontroli 2P<0,005 pret Kontroli *P<0,05 pret MDAS aP<0,05 pret ASS'P <0.05 versus Control 2 P <0.005 versus Control * P <0.05 versus MDAS a P <0.05 versus ASS

Atkārtota MDAS vai CL ievadīšana izraisīja nozīmīgi lielāku ietekmi uz LLO nekā ASS (attiecīgi, 191 un 194 pret 162%), bet MDAS, pretstatā CL vai ASS nepagarināja astes asiņošanas ilgumu (25. tabula). Atkārtota MDAS+CL vai ASS+CL ievadīšana izraisīja ievērojamu un samērā līdzīgu LLO pieaugumu, bet MDAS+CL salīdzinoši mazāk nekā ASS+CL (241% pret 319%) ietekmēja astes asiņošanas ilgumu (25. tabula).Repeated administration of MDAS or CL resulted in significantly greater effects on LLO than ASA (191 and 194 vs. 162%, respectively), but MDAS, in contrast to CL or ASA, did not prolong tail bleeding (Table 25). Repeated administration of MDAS + CL or ASS + CL resulted in a significant and relatively similar increase in LLO, but MDAS + CL had a relatively smaller effect on the duration of tail bleeding compared to ASS + CL (241% versus 319%) (Table 25).

Eksperimenti ex vivoExperiment ex vivo

Pēc trombozes eksperimenta tika savāktas dzīvnieka asinis un noteikti agregācijas parametri. Tris dienu ilga MDAS ievadīšana 10 mg/kg devā izraisīja nozīmīgu trombocītu salipšanas samazināšanos visu pārbaudīto salipšanas ierosinātāju gadījumā (26. tabula).Following the thrombosis experiment, animal blood was collected and aggregation parameters determined. Three-day administration of MDAS at a dose of 10 mg / kg resulted in a significant reduction in platelet adhesion for all tested adhesion promoters (Table 26).

26. tabulaTable 26

MDAS, ASS, CL un to kombināciju ietekme uz trombocītu salipšanu ex vivo', N=5-7; Mean ± SEM.Effect of MDAS, ASS, CL and combinations thereof on ex vivo platelet adhesion ', N = 5-7; Mean ± SEM.

Grupa Group ADF ADF AUC (AU*min) AUC (AU * min) Amax (AU) Amax (AU) Kontrole Control 794+33,5 794 + 33.5 149,7+9,4 149.7 + 9.4 MDAS (10 mg/kg/d) MDAS (10 mg / kg / d) 528+46,5’ 528 + 46,5 ' 75,5+12,82 75.5 + 12.8 2 ASS (5mg/kg/d) ASS (5mg / kg / d) 768+53,2 768 + 53.2 150,3+13,5 150.3 + 13.5 CL (5mg/kg/d) CL (5mg / kg / d) 423+39,4“ 423 + 39.4 " 68,2+15,1“ 68.2 + 15.1 " MDAS+CL (10+5 mg/kg/d) MDAS + CL (10 + 5 mg / kg / d) 140+16,8 3®&ab 140 + 16.8 3 ® & ab 35,3+9,4 35.3 + 9.4 ASS+CL (5+5 mg/kg/d) ASS + CL (5 + 5 mg / kg / d) 230+29,8“ 230 + 29.8 " 53,3+11,5“ 53.3 + 11.5 "

26. tabula (turp.)Table 26 (cont'd)

Grupa Group AS AS AUC .(AU*inin) AUC (AU * inin) Amax(AU) , Amax (AU), Kontrole Control 935+62,3 935 + 62.3 167,8+11,6 167.8 + 11.6 MDAS (10 mg/kg/d) MDAS (10 mg / kg / d) 232+44, l“ 232 + 44, l " 48,2+9,7“ 48.2 + 9.7 " ASS (5mg/kg/d) ASS (5mg / kg / d) 550+31,32 550 + 31.3 2 86,1+6,82 86.1 + 6.8 2 CL (5mg/kg/d) CL (5mg / kg / d) 905+53,5& 905 + 53.5 & 160,7+13,5^ 160.7 + 13.5 MDAS+CL (10+5 mg/kg/d) MDAS + CL (10 + 5 mg / kg / d) 187+29,4“* 187 + 29.4 "* 30,7±9,83& 30.7 ± 9.8 3 & ASS+CL (5+5 mg/kg/d) ASS + CL (5 + 5 mg / kg / d) 239+32,7“ 239 + 32.7 " 39,8+14,1“ 39.8 + 14.1 "

26. tabula (turp.)Table 26 (cont'd)

Grupa Group ADF+PGE, ADF + PGE, AUC (AU*min) AUC (AU * min) Amax (AU) Amax (AU) Kontrole Control 855+40,5 855 + 40.5 159,5+12,2 159.5 + 12.2 MDAS (10 mg/kg/d) MDAS (10 mg / kg / d) 195+35,33 195 + 35.3 3 41,4+14,82 41.4 + 14.8 2 ASS (5 mg/kg/d) ASS (5 mg / kg / d) - - - - CL (5 mg/kg/d) CL (5 mg / kg / d) 259+49,32 259 + 49.3 2 49,7+9,93 49.7 + 9.9 3 MDAS+CL (10+5 mg/kg/d, MDAS + CL (10 + 5 mg / kg / d, 87+15,83®^87 + 15.8 3 ® ^ 15,5±4,83®^15.5 ± 4.8 3 ® ^ ASS+CL (5+5 mg/kg/d) ASS + CL (5 + 5 mg / kg / d) 128+19.42®128 + 19.4 2 ® 24,5±4,83®b 24.5 ± 4.8 3 ® b

‘P<0,05 pret Kontroli 2P<0,005 pret Kontroli 3P<0,0005 pret Kontroli ®P<0,05 pret MDAS &P<0,05 pret ASS P<0,05 pret CL bP<0,05 pret ASS+CL'P <0.05 vs. Control 2 P <0.005 vs. Control 3 P <0.0005 vs. Control®P <0.05 vs. MDAS & P <0.05 vs. ASS P <0.05 vs. CL b P <0, 05 against ASS + CL

CL ievadīšana devā 5 mg/kg/d 3 dienas izraisīja ievērojamu aizsardzību pret salipšanu, ko ierosina ar ADF un ADF+PGEj, bet neaizsargāja no AS ierosinātas salipšanas. ASS izraisīja nozīmīgu aizsardzību pret AS ierosinātu salipšanu, bet nebija efektīva pret ADF (26. tabula). MASA un CL kombinācija (10+5 mg/kg/d x3) nodrošināja salīdzinoši labako aizsardzību pret dažadu vielu ierosināto salipšanu, kas bija nozīmīgi labāka nekā ASS+CL efekts ADF un ADF+PGE testos (26. tabula).Administration of CL at a dose of 5 mg / kg / d for 3 days resulted in significant anti-adhesion induced by ADF and ADF + PGEj but did not prevent AS-induced adhesion. ASA provided significant protection against AS-induced adhesion but was not effective against ADF (Table 26). The combination of MASA and CL (10 + 5 mg / kg / d x3) afforded comparatively superior protection against various substances induced adhesion, which was significantly better than that of ASS + CL in the ADF and ADF + PGE tests (Table 26).

KOPSAVILKUMSSUMMARY

MDAS ievērojami labāk nekā MD vai ASS līdzīgās molārās koncentrācijas aizsargā pret AS ierosinātu trombocītu salipšanu. MDAS+NS nozīmīgi pārspēj MD, NS un ASS, kā ari kombinācijas ASS+NS aizsardzību pret visiem salipšanas ierosinātājiem, kā ari MD+NS aizsardzību pret AS ierosinātu salipšanu.MDAS significantly better protects against AS-induced platelet adhesion than MD or ASA. MDAS + NS outperforms MD, NS and ASS, as well as the combination of ASS + NS against all adhesion initiators, and MD + NS against AS-induced adhesion.

Ņemot vērā MDAS un MDAS+NS pozitīvo ietekmi uz trombocītu salipšanu un LLO pagarinājumu in vivo, MDAS vai MDAS+NS kombinācija var atrast pielietojumu trombocītu salipšanas un trombozes riska samazināšanai pacientiem ar izteiktu aterosklerozi, iespējamu miokarda infarktu un insultu, kā ari periferās asinsrites traucējumiem. Fakts, ka MDAS un MDAS+NS kombinācija nepagarina astes asiņošanas ilgumu, norāda uz iespējamu šīs kombinācijas pielietojumu pacientiem ar palielinātu asiņošanas risku pirms- un pēcoperācijas periodā.Given the beneficial effects of MDAS and MDAS + NS on platelet adhesion and LLO prolongation in vivo, the combination of MDAS or MDAS + NS may find application in reducing the risk of platelet adhesion and thrombosis in patients with severe atherosclerosis, possible myocardial infarction and stroke, and peripheral blood flow. The fact that the combination of MDAS and MDAS + NS does not prolong the duration of tail bleeding suggests the potential use of this combination in patients at increased risk of pre- and postoperative bleeding.

MDAS+DI ievērojami labāk nekā ASS+DI aizsargā pret ADF un AS ierosinātu trombocītu salipšanu.MDAS + DI protects against ADF- and AS-induced platelet adhesion significantly better than ASS + DI.

Trombozes eksperimentā viena MDAS+CL deva nodrošina labāku aizsardzību pret FeCķ ierosinātu trombozi nekā ASS+CL. MDAS+CL salīdzinoši mazāk nekā ASS+CL pagarina astes asiņošanas ilgumu. Eksperimentā ex vivo MDAS+CL nodrošina ievērojami labāku aizsardzību pret trombocītu salipšanu nekā CL, ASS vai MDAS. MDAS+CL labāk nekā ASS+CL aizsargā pret ADF un ADF+PGEj ierosinātu trombocītu salipšanu.In the thrombosis experiment, a single dose of MDAS + CL provides better protection against FeCl 2 induced thrombosis than ASS + CL. MDAS + CL prolongs the duration of tail bleeding comparatively less than ASS + CL. In an ex vivo experiment, MDAS + CL provides significantly better protection against platelet adhesion than CL, ASS, or MDAS. MDAS + CL provides better protection against ADF and ADF + PGEj-induced platelet adhesion than ASS + CL.

Šie fakti norāda, ka MDAS+CL var atrast pielietojumu klīnikā tūlītējai aizsardzībai pret paaugstinātu trombocītu salipšanas risku, draudošu vai sākušos trombozi.These facts suggest that MDAS + CL may find application in the clinic for immediate protection against an increased risk of platelet adhesion, imminent or onset thrombosis.

8. piemērs. Salīdzinošs MDAS/NS, MD/NS un LA/NS kombinēta pielietojuma pētījums NS izraisīta sasarkuma samazināšanaiExample 8. Comparative Study of MDAS / NS, MD / NS and LA / NS Combined Applications for Reduction of NS-induced Redness

Nikotīnskābe (niacin, NS) efektīvi pazemina holesterīna, ZBL un trigliceridu līmeni asins serumā, paaugstinot ABL līmeni. Tomēr pacientiem, kas saņem tūlītējas vai palēninātas atbrīvošanas nikotīnskābes formu, novēro ierobežojošu blakusparādību: ātru, ievērojamu ādas sasilšanu un asinsvadu paplašināšanos, kas tiek apzīmēta ar terminu “flush” (sasarkums), kura smagos gadījumos noved pie lietošanas pārtraukšanas (Gupta EK, Ito MK, Heart Dis 2002;4:124-137). Laropiprants (MK0524) (LA) tika piedāvāts kā viens no visaktīvākajiem un perspektīvākajiem līdzekļiem NS izraisītā sasarkuma mazināšanai (Cheng K et al, PNAS 2006; 103:66826687).’Nicotinic acid (niacin, NS) is effective in lowering serum cholesterol, LDL and triglycerides, increasing HDL levels. However, in patients receiving the immediate or sustained release form of nicotinic acid, there is a limiting side effect: rapid, significant warming of the skin and vasodilation, which is termed flush, which in severe cases leads to discontinuation (Gupta EK, Ito MK , Heart Dis 2002; 4: 124-137). Laropiprant (MK0524) (LA) has been proposed as one of the most active and promising means to reduce NS-induced redness (Cheng K et al, PNAS 2006; 103: 66826687). '

Mūsu pētījuma mērķis bija eksperimentāla MDAS, MD un LA ietekmes salīdzināšana uz NS izraisīto sasarkumu (ādas temperatūras izmaiņām).The aim of our study was to compare experimentally the effects of MDAS, MD and LA on NS-induced redness (changes in skin temperature).

Metodes. Tika lietoti Wistar žurku tēviņi ar masu 280-330 g. Dzīvnieki tika turēti grupās pa 6 klimatizētās telpās pie 22+1 °C, relatīvā mitruma 60+5% un 12/12 stundu gaismas/tumsas cikla ar brīvu pieeju ūdenim un barībai (Lactamin AB, Zviedrija). Ādas temperatūras izmaiņu mērījumiem intaktām žurkām tika izmantota bezkontakta temperatūras mērīšanas metode (Papaliodis D et al, Br J Pharmacol 2008; 153:13821387). Temperatūras mērījumi tika veikti ar manuālu infrasarkano termometru (Modei Proscan 510, TFA-Dostman). Dzīvnieki tika pieradināti pie ņemšanas rokās un infrasarkanās zondes 3 dienas pirms tās lietošanas. Temperatūras nolasījumi no abu ausu dorsālās puses tika iegūti bez anestēzijas eksperimenta sākumā un tā gaitā. Ausu temperatūra tika mērīta ik pēc 5 minūtēm līdz 60 min. ilgā periodā. Starp mērījumiem dzīvnieki tika ievietoti atpakaļ būros. NS, MD un MDAS tika šķīdināti fizioloģiskā šķīdumā un pH tika koriģēts tieši pirms ievadīšanas. LA (MK 0524, Cayman Chemicals) vispirms tika šķīdināts DMSO un tad katru dienu pirms eksperimenta atšķaidīts ar 0,9% NaCl. NS un LA attiecība kombinācijā pamatota ar zāļu aprakstu Tredaptive™ (nikotīnskābe/laropiprants) 1000 mg/20 mg regulētas atbrīvošanas tabletēm.Methods. Wistar male males weighing 280-330 g were used. The animals were housed in groups of 6 in an air-conditioned room at 22 + 1 ° C, 60 + 5% relative humidity and a 12/12 hour light / dark cycle with free access to water and food (Lactamin AB, Sweden). A contactless temperature measurement method was used to measure skin temperature changes in intact rats (Papaliodis D et al, Br J Pharmacol 2008; 153: 13821387). Temperature measurements were made with a manual infrared thermometer (Modei Proscan 510, TFA-Dostman). Animals were habituated to hand-picking and infrared probe 3 days prior to use. Temperature readings from the dorsal side of both ears were obtained without anesthesia at the beginning and during the experiment. Ear temperature was measured every 5 minutes for up to 60 minutes. over a long period. Between measurements, animals were returned to cages. NS, MD and MDAS were dissolved in saline and pH was adjusted just prior to administration. LA (MK 0524, Cayman Chemicals) was first dissolved in DMSO and then diluted with 0.9% NaCl daily before the experiment. The NS to LA ratio in combination is based on the Tredaptive ™ (nicotinic acid / laropiprant) 1000 mg / 20 mg controlled-release tablet.

Statistika. Katram laika brīdim reģistrēts vidējais no sešiem temperatūras mērījumiem (katrai ausij). Dati tika analizēti ar Microsoft Excel programmatūru un rezultāti izteikti kā vidējais +/- vidējā standarta kļūda (Mean±SEM). Dažādu grupu vidējie rezultāti tika salīdzināti, izmantojot vienfaktora analīzi pēc ANOVA un t-Stjūdenta tests. Par nozīmīgu tika uzskatīts P<0,05.Statistics. For each time point, the average of the six temperature measurements (for each ear) was recorded. Data were analyzed with Microsoft Excel software and expressed as mean +/- Mean ± SEM. The mean scores of the different groups were compared using one-way ANOVA and t-Student test. P <0.05 was considered significant.

8.1. Laika un šķīdinātājā ietekmes uz adas temperatūru novērtējums8.1. Evaluation of the effect of time and solvent on skin temperature

GRUPA GROUP PROCEDŪRA PROCEDURE Dzīvnieku skaits Number of animals SolvLA SolvLA LA šķīdinātājs LA solvent 6 6th SolvNS SolvNS NS, MDAS un MD šķīdinātājs NS, MDAS and MD solvent 6 6th NS NS NS 15 mg/kg s.c. NS 15 mg / kg s.c. 6 6th

8.2. Atsevišķu pētāmo vielu ietekme uz ādas temperatūru pie vienlaicīgas Γ01 vai 30 min, apsteidzošas [301 s.c. ievadīšanas8.2. Effects of individual test substances on skin temperature at simultaneous Γ01 or 30 min, pre-emptive [301 s.c. administration

Tika pārbaudīta LA, MD vai MDAS atsevišķas ievadīšanas ietekme uz ādas temperatūru. Katru pētāmo vielu ievadīja s.c. vienlaikus ar NS kā LA+NS [0] vai 30 min. pirms NS kā LA+NS [30],The effect of separate administration of LA, MD or MDAS on skin temperature was examined. Each test substance was administered s.c. with NS as LA + NS [0] or 30 min. before NS as LA + NS [30],

GRUPA GROUP PROCEDŪRA Dzīvnieku skaits PROCEDURE Number of animals Kontrole/Šķīdinātāj s Control / Solvent 6 6th NS NS NS 15 mg/kg NS 15 mg / kg 6 6th LA LA LA 0,3 mg/kg LA 0.3 mg / kg 6 6th LA+NS LA + NS LA 0,3 mg/kg+NS 15 mg/kg LA 0.3 mg / kg + NS 15 mg / kg 6 6th MD MD MD 45 mg/kg MD 45 mg / kg 6 6th MD+NS MD + NS MD 45 mg/kg+NS 15 mg/kg MD 45 mg / kg + NS 15 mg / kg 6 6th MDAS MDAS MDAS 45 mg/kg MDAS 45 mg / kg 6 6th MDAS+NS MDAS + NS MDAS 45mg/kg+NS 15 mg/kg MDAS 45mg / kg + NS 15mg / kg 6 6th

8.3. MDAS/NS un MD/NS kombināciju ietekme uz ādas temperatūru pie vienlaicīgas [01 vai 45 min, apsteidzošas [45 ļ ievadīšanas p. o.8.3. Effect of MDAS / NS and MD / NS combinations on skin temperature at simultaneous [01 or 45 min, pre-emptive [45 ul administration p. o.

GRUPA PROCEDŪRA Dzīvnieku skaitsGROUP PROCEDURE Number of animals

Kontrole/Šķīdinātājs 6Control / Solvent 6

NS NS NS 40 mg/kg NS 40 mg / kg 8 8th MD MD MD 100 mg/kg MD 100 mg / kg 6 6th MD+NS MD + NS MD 100 mg/kg+NS 40 mg/kg MD 100 mg / kg + NS 40 mg / kg 6 6th MDAS 150 MDAS 150 MDAS 150 mg/kg MDAS 150 mg / kg 6 6th MDAS75+NS MDAS75 + NS MDAS 75 mg/kg+NS 40 mg/kg MDAS 75 mg / kg + NS 40 mg / kg 6 6th MDAS150+NS MDAS150 + NS MDAS 150 mg/kg+NS 40 mg/kg MDAS 150 mg / kg + NS 40 mg / kg 6 6th

REZULTĀTI.RESULTS.

R 8.1. Laika un šķīdinātāja ietekmes uz ādas temperatūru testēšanaR 8.1. Testing the effects of time and solvent on skin temperature

Vidējā auss temperatūra bāzlīnijā bija 28,4-30,6 °C, reģistrēta laikā no 10:00 līdz 14:00. Pētījums par reakciju uz NS laikā (15 mg/kg s.c.) parādīja, ka maksimālais temperatūras pieaugums 2,32±0,37 °C pret bāzlīniju un 2,57±0,43 °C pret šķīdinātāja grupu (P<0,005) novērojams pēc 10 minūtēm (Attēls). Tika konstatēts, ka LA šķīdinātāja ietekme uz auss temperatūru būtiski atšķiras no NS, MDAS un MD šķīdinātāja ietekmes tikai pirmajās 5 minūtēs pēc injekcijas, tāpēc temperatūras aprēķinos pēc 10 minūtēm tika izmantota tikai viena kontroles grupa.The mean baseline ear temperature was 28.4-30.6 ° C, recorded between 10am and 2pm. A study of the response to NS over time (15 mg / kg sc) showed a maximum temperature increase of 2.32 ± 0.37 ° C against the baseline and 2.57 ± 0.43 ° C against the solvent group (P <0.005). 10 minutes (Image). The effect of LA solvent on ear temperature was found to be significantly different from that of NS, MDAS and MD only in the first 5 minutes after injection, therefore only one control group was used in temperature calculations after 10 minutes.

R 8.2. Atsevišķu pētāmo vielu ietekme uz ādas temperatūru pie vienlaicīgas [0] vai 30 min, apsteidzošas [301 s.c. ievadīšanasR 8.2. Effects of individual test substances on skin temperature at simultaneous [0] or 30 min, pre-emptive [301 s.c. administration

MDAS, MD vai LA subkutāna injekcija neizsauca nozīmīgas izmaiņas žurku auss ādas temperatūrā (27. tabula). Nebija temperatūras atšķirības starp MD+NS [0], kad MD ievadīja kopā ar NS, un MD+NS [30], kad MD ievadīja par 30 min. apsteidzot NS.Subcutaneous injection of MDAS, MD, or LA did not cause significant changes in rat ear skin temperature (Table 27). There was no temperature difference between MD + NS [0] when MD was co-administered with NS and MD + NS [30] when MD was administered for 30 min. ahead of NS.

27. tabulaTable 27

MDAS, LA un MD ietekme uz NS izraisītam izmaiņām adas temperatūrā; N=6, Mean+SEMEffect of MDAS, LA, and MD on NS-induced changes in skin temperature; N = 6, Mean + SEM

Grupa Group Sākotnējā temperatūra °C Original temperature ° C Maksimāla temperatūra °C Maximum temperature ° C Pieaugums, % An increase, % Kontrole/Šķīdināt ājs Control / Dissolve hey 29,5+0,29 29.5 + 0.29 29,62+0,25$“ $ 29.62 + $ 0.25 " - - NS NS 29,61+0,40 29.61 + 0.40 32,2+0,42*** 32.2 + 0.42 *** 100 100 MDAS MDAS 29,3+0,35 29.3 + 0.35 29,2+0,38111 29.2 + 0.38 111 - - MDAS+NS Γ01 MDAS + NS Γ01 29,9+0,31 29.9 + 0.31 31,5 ±0,40** 31.5 ± 0.40 ** 62 62 MDAS+NS Γ301 MDAS + NS Γ301 29,6+0,32 29.6 + 0.32 30,9 ±0,32*$ 30.9 ± 0.32 * $ 50 50 LA LA 29,43+0,27 29.43 + 0.27 29,5+0,35$$$ 29.5 + 0.35 $$$ - - LA+NSfO] LA + NSfO] 29,72+0,31 29.72 + 0.31 31,45+0,40** 31.45 + 0.40 ** 67 67 LA+NS Γ301 LA + NS Γ301 29,51+0,32 29.51 + 0.32 30,73+0,34*$ 30.73 + 0.34 * $ 47 47 MD45 MD45 29,42+0,38 29.42 + 0.38 29,6+0,31$$$ 29.6 + 0.31 $$$ - - MD+NS roi MD + NS roi 2953+0,29 2953 + 0.29 31,33+0,48* 31.33 + 0.48 * 69 69 MD+NS 1301 MD + NS 1301 29,68+0,26 29.68 + 0.26 31,40+0,39* 31.40 + 0.39 * 65 65

*P<0,05 pret Kontroli **P<0,005 pret Kontroli ***p<0,0005 pret Kontroli *P<0,05 pretNS *P<0,0005 pretNS* P <0.05 versus Control ** P <0.005 versus Control *** p <0.0005 versus Control * P <0.05 versus Control * P <0.0005 versus Control

Vienlaicīga NS un MDAS (NS+MDAS [0] grupa; apsteidzošais laiks = 0) izraisīja NA sasarkuma samazinājumu, kas bija līdzīgs vienlaikus ievadītai NS un LA vai NS un MD, NS izraisītā temperatūras paaugstināšanās tika samazināta, attiecīgi, no 100% (NS efekts) līdz 62%, 67 un 69 % (27. tabula). Mūsu eksperimentā ar MDAS+NS un LA+NS, MDAS vai LA ievadīšana s.c. 30 min. pirms NS izraisīja nozīmīgu un līdzīgu aizsardzību pret NS izsaukto ādas temperatūras paaugstināšanos (27. tabula).Concurrent NS and MDAS (NS + MDAS [0] group; pre-emptive time = 0) resulted in a decrease in NA redness similar to that co-administered with NS and LA or NS and MD, the NS-induced increase in temperature was reduced from 100% (NS), respectively. effect) to 62%, 67 and 69% (Table 27). In our MDAS + NS experiment and LA + NS, MDAS or LA administration s.c. 30 min before NS resulted in significant and similar protection against NS-induced skin temperature increase (Table 27).

R 8.3. NS/MDAS un NS/MD kombinācijas ietekme uz ādas temperatūru, ievadot perorāliR 8.3. Effect of NS / MDAS and NS / MD combination on skin temperature upon oral administration

Perorāla (p.o.) NS ievadīšana devā 40 mg/kg izraisīja būtisku un ilgstošu (līdz 60 min.) žurku auss ādas temperatūras paaugstināšanos ar maksimumu starp 15 un 45 minūtēm (28. tabula).Oral (p.o.) administration of NS at 40 mg / kg resulted in a significant and sustained (up to 60 min) increase in rat ear skin temperature with a maximum between 15 and 45 minutes (Table 28).

28. tabulaTable 28

MDAS vai MD ietekme uz NS izraisītu ādas hipertermiju ar vienlaicīgu [0] vai apsteidzošu ievadīšanu [45]; N=6-8, Mean+SEMEffects of MDAS or MD on NS-induced skin hyperthermia with simultaneous [0] or pretreatment [45]; N = 6-8, Mean + SEM

Grupa Group Sākotnēja temperatūra °C Initial temperature ° C Temperatūra, 15 min. Temperature, 15 min. Temperatūra, 30 min. Temperature, 30 min. Temperatūra, 45 min. Temperature, 45 min Maks. pieaugums, % Max. An increase, % Kontrole/Šķīdinātājs Control / Solvent 29,9+0,32 29.9 + 0.32 30,2+0,48** 30.2 + 0.48 ** 30,0+0,33*** 30.0 + 0.33 *** 30,1+0,37** 30.1 + 0.37 ** 9 9th NS NS 30,0+0,41 30.0 + 0.41 32,3+0,46** 32.3 + 0.46 ** 33,1+0,41*** 33.1 + 0.41 *** 32,4+0,48** 32.4 + 0.48 ** 100 100 MDAS 150 MDAS 150 29,7+0,28 29.7 + 0.28 29,9+0,33** 29.9 + 0.33 ** 29,5+0,35“ 29.5 + 0.35 " 29,6+0,39** 29.6 + 0.39 ** 6 6th MDAS75+NS [0] MDAS75 + NS [0] 29,7+0,33 29.7 + 0.33 31,9+0,51* 31.9 + 0.51 * 32,3+0,37*** 32.3 + 0.37 *** 32,1+0,46* 32.1 + 0.46 * 84 84 MDAS150+NS [0] MDAS150 + NS [0] 29,8+0,37 29.8 + 0.37 30,9+0,47* 30.9 + 0.47 * 32,0+0,42** 32.0 + 0.42 ** 31,95+0,38* 31.95 + 0.38 * 70 70 MD MD 29,9+0,35 29.9 + 0.35 30,1+0,39** 30.1 + 0.39 ** 29,8+0,38*** 29.8 + 0.38 *** 30,0+0,34** 30.0 + 0.34 ** 6 6th MD+NS [0] MD + NS [0] 29,6 ±0,26 29.6 ± 0.26 31,3 ±0,35** 31.3 ± 0.35 ** 32,5 ±0,42** 32.5 ± 0.42 ** 32,2 ±0,40* 32.2 ± 0.40 * 96 96 MD100+NS [45] MD100 + NS [45] 29,3 ±0,35 29.3 ± 0.35 31,2+0,33** 31.2 + 0.33 ** 32,3+0,41** 32.3 + 0.41 ** 32,1+0,44* 32.1 + 0.44 * 95 95 MDAS75+NS [451 MDAS75 + NS [451 29,4+0,30 29.4 + 0.30 31,3+0,53* 31.3 + 0.53 * 31,9+0,45* 31.9 + 0.45 * 31,5+0,42** 31.5 + 0.42 ** 80 80 MDAS150+NS [45] MDAS150 + NS [45] 29,7+0,38 29.7 + 0.38 30,7+0,41* 30.7 + 0.41 * 31,2+0,44** 31.2 + 0.44 ** 30,2+0,38****® 30.2 + 0.38 **** ® 48 48

*P<0,05 pret Kontroli **P<0.005 pret Kontroli ***P<0,0005 pret Kontroli *P<0,05 pretNS **P<0,005 pretNS ***P<0,0005 pretNS &P<0,05 pret MDAS150+NS [0] ®P<0,05 pret MDAS 75+NS [45] *P<0,05 pret MD+NS [45]* P <0.05 vs. Control ** P <0.005 vs. Control *** P <0.0005 vs. Control * P <0.05 vs. Control ** P <0.005 vs. Control *** P <0.0005 vs. Control & P < 0.05 vs. MDAS150 + NS [0] ®P <0.05 vs. MDAS 75 + NS [45] * P <0.05 vs. MD + NS [45]

MDAS vai MD perorāla ievadīšana neizraisīja būtiskas izmaiņas ādas temperatūrā. Vienlaicīga p.o. MDAS un NS [0] ievadīšana devā 75 mg/kg izraisīja nelielu, bet devā 150 mg/kg - būtisku aizsardzību no NS izraisīta ādas temperatūras pieauguma (22. tabula). MD (100 mg/kg), ievadot vienlaikus ar NS, pasargāja no temperatūras paaugstināšanās 15 minūtes, bet nenodrošināja nozīmīgu aizsardzību no maksimālā NS izraisītā ādas temperatūras pieauguma (skat. temperatūru pēc 30 min., 45 min., 28. tabula). Rezultātu analīze liecina, ka MDAS devā 150 mg/kg, ievadot vienlaikus ar NS, samazina ādas temperatūras pieaugumu līdz 70%, kas ir būtiski labāk nekā samazinājums no NS+MD (96%). Pieaugums, ko izraisa NS tiek uzskatīts par 100%. Ievadot vielas profilaktiski - 45 min. pirms NS, MDAS150+NS (45] temperatūru pazeminošā ietekme palielinājās un bija nozīmīgi labāka nekā MD+NS [45] vai MDAS75+NS [45] gadījumā (28. tabula).Oral administration of MDAS or MD did not cause significant changes in skin temperature. Simultaneous p.o. Administration of MDAS and NS [0] at a dose of 75 mg / kg resulted in a minor protection and at a dose of 150 mg / kg a significant protection against NS-induced increase in skin temperature (Table 22). MD (100 mg / kg), co-administered with NS, prevented the rise in temperature for 15 minutes but did not provide significant protection against maximum NS-induced skin temperature increase (see 30 min, 45 min, Table 28). Analysis of the results showed that MDAS at 150 mg / kg, when co-administered with NS, reduced the skin temperature increase to 70%, which is significantly better than the decrease from NS + MD (96%). The increment caused by NS is considered 100%. Prophylactic administration - 45 min. before NS, the temperature-lowering effect of MDAS150 + NS (45) increased and was significantly better than that of MD + NS [45] or MDAS75 + NS [45] (Table 28).

MDAS, ievadot p.o. vai s.c., samazina NS izraisīto ādas temperatūras paaugstināšanos. Ievadot s.c., MDAS, līdzīgi laropiprantam, samazināja NS izraisīto ādas temperatūras paaugstināšanos, lietojot kā vienlaikus, tā arī profilaktiski. Ievērojamā MDAS aktivitāte pret sasarkumu, kad to ievada p.o. kopā ar NS vai profilaktiski, norāda uz potenciālu MDAS noderīgumu nevēlamo NS blakusparādību uz ādas (sasarkuma) mazināšanai.MDAS by administering p.o. or s.c., reduces NS-induced increase in skin temperature. When administered s.c., MDAS, like laropiprant, reduced NS-induced increase in skin temperature when given concomitantly and prophylactically. Significant MDAS activity against redness when administered p.o. in combination with NS or prophylactically, indicates the potential utility of MDAS for reducing the adverse effects of NS on the skin (redness).

KOPSAVILKUMSSUMMARY

Tā kā MDAS piemīt pretiekaisuma, antihiperlipidēmiska un trombocītu pretsalipšanas aktivitāte, to var uzskatīt par jaunu terapeitisku līdzekli dažādu patoloģiju ārstēšanai, kuras izraisa trombocītu salipšana. MDAS kombinācija ar NS, statiņiem, CL vai DI var ievērojami paplašināt potenciālās indikācijas.Because MDAS has anti-inflammatory, antihyperlipidemic and antiplatelet activity, MDAS can be considered as a novel therapeutic agent for the treatment of various pathologies caused by platelet adhesion. The combination of MDAS with NS, strut, CL or DI can significantly expand the potential indications.

IZGUDROJUMA REALIZĀCIJAS PAŅĒMIENIMETHODS OF IMPLEMENTING THE INVENTION

Aprakstītais izgudrojums piedāvā medicīnisku produktu, kas ietver MDAS, kā pretiekaisuma, pretsāpju, pretdrudža, pretreimatisma, antihiperlipidēmisku, antiaterosklerotisku, pretsalipšanas un prettrombu līdzekli. Izgudrojumā aprakstīto medicīnisko produktu var ievadīt farmaceitiskas kompozīcijas veidā. No šī viedokļa izgudrojumā tiek piedāvāta farmaceitiska kompozīcija, kas ietver MDAS maisījumā ar farmaceitiski pieņemamu atšķaidītāju vai nesēju.The present invention provides a medical product comprising MDAS as an anti-inflammatory, analgesic, antipyretic, anti-rheumatic, antihyperlipidemic, anti-atherosclerotic, anti-stick and anti-thrombotic agent. The medical product of the invention may be administered in the form of a pharmaceutical composition. In this regard, the invention provides a pharmaceutical composition comprising MDAS in admixture with a pharmaceutically acceptable diluent or carrier.

Tā kā medicīniskā produkta izmantošana par pretiekaisuma, pretsāpju, pretdrudža, pretreimatisma, antihiperlipidēmisku, antiaterosklerotisku, pretsalipšanas un prettrombu līdzekli paredz medicīniskā produkta ilgstošu lietošanu, vislabākais izgudrojuma realizēšanas veids ir ar formu, kas piemērota iekšķīgai lietošanai, piemēram, tabletes vai kapsulas.Since the use of a medical product as an anti-inflammatory, analgesic, antipyretic, anti-rheumatic, antihyperlipidemic, antiatherosclerotic, anti-caking and antithrombotic agent requires sustained use of the medical product, the best embodiment of the invention is in the form of an oral capsule, e.g.

Saskaņā ar vēl vienu šī izgudrojuma aspektu tiek piedāvāta šeit aprakstītā medicīniskā produkta pielietojums medikamenta ražošanā, kas paredzēts iekaisuma, sāpju, drudža, reimatisma, hiperlipidēmisku stāvokļu, aterosklerotisku stāvokļu ārstēšanai, trombocītu salipšanas un trombu veidošanās novēršanai.According to another aspect of the present invention there is provided the use of a medical product as described herein in the manufacture of a medicament for the treatment of inflammation, pain, fever, rheumatism, hyperlipidemic conditions, atherosclerotic conditions, antiplatelet and thrombus formation.

Vēl viens šī izgudrojuma aspekts attiecas uz kombinētiem medicīniskiem produktiem, kas ietver MDAS un citu līdzekli, kas izvēlēts no rindas: NS, statiņi, CL un DI. Šie produkti var balstīties uz farmaceitiskajām kompozīcijām, kas izveidotas uz MDAS bāzes.Another aspect of the present invention pertains to combination medical products comprising MDAS and another agent selected from the group consisting of NS, Stands, CL and DI. These products may be based on pharmaceutical compositions based on MDAS.

Claims (13)

PretenzijasClaims 1. 3-(Trimetilammonioamino)propanoāta (meldonija) acetilsalicilskabes aditīvais sāls, tā solvāti vai polimorfi izmantošanai par medikamentu.Addition salts of 3- (trimethylammonioamino) propanoate (meldonium) acetylsalicylic acid, solvates or polymorphs thereof for use as a medicament. 2. Farmaceitiska kompozīcija, kas satur 3-(trimetilammonioamino)propanoāta (meldonija) acetilsalicilskābes aditīvo sāli saskaņā ar 1. pretenziju un farmaceitiski pieņemamu nesēju.A pharmaceutical composition comprising the addition salt of 3- (trimethylammonioamino) propanoate (meldonium) acetylsalicylic acid according to claim 1 and a pharmaceutically acceptable carrier. 3. Farmaceitiskā kompozīcija saskaņā ar 2. pretenziju kā ātrās atbrīvošanas, palēninātas atbrīvošanas un ilgstošas atbrīvošanas zāļu forma.The pharmaceutical composition of claim 2, as a quick release, sustained release, and sustained release dosage form. 4. Farmaceitiskā kompozīcija saskaņā ar 2. pretenziju, kas piemērota ievadīšanai orāli.A pharmaceutical composition according to claim 2, suitable for oral administration. 5. Meldonija acetilsalicilskābes aditīvais sāls saskaņā ar 1. pretenziju, kas ir paredzēts iekaisuma, sāpju, drudža, reimatisko stāvokļu, hiperlipidēmiska un aterosklerotiska stāvokļa, trombocītu salipšanas izraisītas patoloģijas vai trombu veidošanas profilaksei un/vai ārstēšanai, kur trombocītu salipšanas izraisītā patoloģija ietver išēmiskus notikumus, piemēram, miokarda infarktu vai trieku, vai trombozi un tromboemboliju.Meldonium acetylsalicylic acid addition salt according to claim 1 for the prevention and / or treatment of inflammation, pain, fever, rheumatic conditions, hyperlipidemic and atherosclerotic state, platelet adhesion pathology or thrombus formation, wherein the platelet such as myocardial infarction or stroke, or thrombosis and thromboembolism. 6. Farmaceitiskā kompozīcija saskaņā ar 2. pretenziju, kas ir paredzēta iekaisuma, sāpju, drudža, reimatisko stāvokļu, hiperlipidēmiska un aterosklerotiska stāvokļa, trombocītu salipšanas izraisītas patoloģijas vai trombu veidošanas profilaksei un/vai ārstēšanai, kur trombocītu salipšanas izraisītā patoloģija ietver išēmiskus notikumus, piemēram, miokarda infarktu vai trieku, vai trombozi un tromboemboliju.A pharmaceutical composition according to claim 2 for the prophylaxis and / or treatment of inflammation, pain, fever, rheumatic conditions, hyperlipidemic and atherosclerotic state, platelet adhesion pathology or thrombus formation, wherein the platelet adhesion pathology, e.g. , myocardial infarction or stroke, or thrombosis and thromboembolism. 7. Kombinēts medicīniskais produkts, kas satur iedarbīgu daudzumu meldonija acetilsalicilskābes aditīvā sāls saskaņā ar 1. pretenziju un iedarbīgu daudzumu dipiridamola, kas irparedzēts trombocītu salipšanas izraisītas patoloģijas, sevišķi triekas, profilaksei un/vai ārstēšanai.A combination medical product comprising an effective amount of a meldonium acetylsalicylic acid addition salt according to claim 1 and an effective amount of dipyridamole for the prophylaxis and / or treatment of platelet adhesion pathology, particularly stroke. 8. Kombinēts medicīniskais produkts, kas satur iedarbīgu daudzumu meldonija acetilsalicilskābes aditīvā sāls saskaņā ar 1. pretenziju un iedarbīgu daudzumu klopidogrela vai tā farmaceitiski pieņemama sāls, kas ir paredzēts trombocītu salipšanas izraisītas patoloģijas profilaksei un/vai ārstēšanai, kur trombocītu salipšanas izraisītā patoloģija ietver išēmiskus notikumus, piemēram, miokarda infarktu vai trieku, vai trombozi un tromboemboliju, akūtu koronāro sindromu, pēkšņu sirds nāvi un komplikācijas pēc koronārās angioplastijas vai koronārās šuntēšanas.A combination medicinal product comprising an effective amount of a meldonium acetylsalicylic acid addition salt according to claim 1 and an effective amount of clopidogrel or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the prevention and / or treatment of platelet adhesion-related pathology, wherein the platelet adhesion-related pathology comprises: such as myocardial infarction or stroke, or thrombosis and thromboembolism, acute coronary syndrome, sudden cardiac death, and complications following coronary angioplasty or coronary bypass grafting. 9. Kombinēts medicīniskais produkts, kas satur iedarbīgu daudzumu meldonija acetilsalicilskābes aditīvā sāls saskaņā ar 1. pretenziju un iedarbīgu daudzumu nikotīnskābes vai tās farmaceitiski pieņemamas sāls, kās ir paredzēts trombocītu salipšanas izraisītas patoloģijas profilaksei un/var ārstēšanai, kur trombocītu salipšanas izraisītā patoloģija ietver išēmiskus notikumus, piemēram, miokarda infarktu vai trieku, vai trombozi un tromboemboliju.A combination medical product comprising an effective amount of a meldonium acetylsalicylic acid addition salt according to claim 1 and an effective amount of nicotinic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the prevention and / or treatment of platelet adhesion-induced pathology, wherein such as myocardial infarction or stroke, or thrombosis and thromboembolism. 10. Produkts saskaņā ar 9. pretenziju, kurā meldonija acetilsalicilskābes aditīvais sāls ir ātrās atbrīvošanas, palēninātas atbrīvošanas un ilgstošas atbrīvošanas zāļu formā.The product of claim 9, wherein the meldonium acetylsalicylic acid addition salt is in the form of a quick release, sustained release, and sustained release dosage form. 11. Produkts saskaņā ar 9. pretenziju, kurā nikotīnskābe vai tās farmaceitiski pieņemamais sāls ir ātrās atbrīvošanas, palēninātas atbrīvošanas un ilgstošas atbrīvošanas zāļu formā.The product of claim 9, wherein the nicotinic acid or pharmaceutically acceptable salt thereof is in the form of a quick release, sustained release, and sustained release dosage form. 12. Kombinētais medicīniskais produkts saskaņā ar 9. pretenziju, kas ir paredzēts dislipidēmijas, hiperlipidēmijas un aterosklerozes, profilaksei un/vai ārstēšanai.A combination medical product according to claim 9 for the prophylaxis and / or treatment of dyslipidemia, hyperlipidemia and atherosclerosis. 13. Kombinēts medicīnisks produkts, kas satur iedarbīgu daudzumu meldonija acetilsalicilskābes aditīvā sāls saskaņā ar 1. pretenziju un statīnu, kas atlasīts no grupas, kura sastāv no atorvastatīna, cerivastatīna, fluvastatīna, lovastatīna, mevastatīna, pitavastatīna, pravastatīna, rosuvastatīna un simvastatīna, kas ir paredzēts dislipidēmijas, hiperlipidēmijas un aterosklerozes, profilaksei un/vai ārstēšanai.A combination medical product comprising an effective amount of a meldonium acetylsalicylic acid addition salt of claim 1 and a statin selected from the group consisting of atorvastatin, cerivastatin, fluvastatin, lovastatin, mvastatin, pitavastatin, pravastatin, and rosuvastatin, intended for the prophylaxis and / or treatment of dyslipidemia, hyperlipidemia and atherosclerosis.
LVP-10-95A 2009-06-25 2010-06-21 Antiinflammatory agent LV14468B (en)

Priority Applications (14)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BRPI1009600A BRPI1009600A2 (en) 2009-06-25 2010-06-21
CA2766048A CA2766048A1 (en) 2009-06-25 2010-06-21 Novel acetylsalicylic acid salts
PCT/LV2010/000007 WO2010151095A1 (en) 2009-06-25 2010-06-21 Novel acetylsalicylic acid salts
EP10735094.4A EP2445861B1 (en) 2009-06-25 2010-06-21 Novel acetylsalicylic acid salts
GEAP201012546A GEP20146015B (en) 2009-06-25 2010-06-21 Novel acetylsalicylic acid salts
US13/377,926 US8889902B2 (en) 2009-06-25 2010-06-21 Acetylsalicylic acid salts
LVP-10-95A LV14468B (en) 2010-06-21 2010-06-21 Antiinflammatory agent
KR1020127001929A KR20120050437A (en) 2009-06-25 2010-06-21 Novel acetylsalicylic acid salts
JP2012517421A JP5706409B2 (en) 2009-06-25 2010-06-21 New salicylate
CN201080028833.9A CN102803199B (en) 2009-06-25 2010-06-21 Novel acetylsalicylic acid salts
EA201200038A EA021588B1 (en) 2009-06-25 2010-06-21 Betain salts of acetylsalicylic acid
NZ597510A NZ597510A (en) 2009-06-25 2010-06-21 NOVEL ACETYLSALICYLIC ACID SALTS, the salts are 4-trimethylammoniobutanoate, L-carnitine and meldonium
IL217036A IL217036A (en) 2009-06-25 2011-12-15 Acetylsalicylic acid addition salt, uses thereof in the preparation of medicaments, pharmaceutical compositions comprising the same and a combination medicinal product comprising such acid addition salt
HK12110406.3A HK1169648A1 (en) 2009-06-25 2012-10-19 Novel acetylsalicylic acid salts

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
LVP-10-95A LV14468B (en) 2010-06-21 2010-06-21 Antiinflammatory agent

Publications (2)

Publication Number Publication Date
LV14468A LV14468A (en) 2012-01-20
LV14468B true LV14468B (en) 2012-07-20

Family

ID=50152785

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
LVP-10-95A LV14468B (en) 2009-06-25 2010-06-21 Antiinflammatory agent

Country Status (1)

Country Link
LV (1) LV14468B (en)

Also Published As

Publication number Publication date
LV14468A (en) 2012-01-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5706409B2 (en) New salicylate
AU2015238924B2 (en) Compositions and methods comprising C16:1n7-palmitoleate
CZ20004778A3 (en) Farnesyl-protein transferase inhibitory employed for treating arthropaties
JP2018135372A (en) Pharmaceutical composition &lt;3&gt; containing loxoprofen or salt thereof
WO2010151096A1 (en) Therapeutic combinations of nicotinic acid and meldonium
JP5952944B2 (en) Loxoprofen or a pharmaceutical composition containing a salt thereof II
LV14468B (en) Antiinflammatory agent
Wallace et al. Nitric oxide-releasing NSAIDs: GI-safe antithrombotics
JP2000086629A (en) Net nitrogen oxide-releasing compound
WO2012158003A1 (en) Novel factor xii inhibitor
AU2010263409B2 (en) Novel acetylsalicylic acid salts
JP2016193943A (en) Pharmaceutical composition containing loxoprofen or salt thereof iii
TWI478715B (en) Novel acetylsalicylic acid salts
KR100782246B1 (en) Novel association consisting of an anti-atherothrombotic agent and of a platelet antiaggregating agent
Wallace et al. Nitric oxide-releasing non-steroidal anti-inflammatory drugs: a new generation of antithrombotics?
JP5923044B2 (en) Combination composition for preventing or treating chronic venous insufficiency comprising L-carnitine or propionyl L-carnitine as an active ingredient
LV14462B (en) A combination medicinal product for inhibition of platelet aggregation
EP2505196A1 (en) Antithrombotic agent
Schröder ASPIRIN PROTECTS THE GASTRIC MUCOSA.
Diener USING ASPIRIN INTRAVENOUSLY.
WO2014209092A1 (en) Corrector of endothelial dysfunction
TW201200131A (en) Use of dronedarone for the preparation of a medicament for the prevention of cardiovacular hospitalizations or death or cardiovascular events in patients with premanent atrial fibrillation
JP2012158590A (en) Pharmaceutical composition containing loxoprofen or its salt