LT4369B - -endorfino ir e1, e2, f2 , i2 prostaglandinų panaudojimas infuzijų, pasižyminčių gyvybinių funkcijų sutrikimų kompensacija anafilaksijos metu, paruošimui - Google Patents

Description

Išradimas priklauso medicinai ir gali būti panaudotas anafilaksinio šoko (AŠ), kitų ekstremalių būklių prevencinėje terapijoje, šalinant širdies aritmijas, širdies raumens išemiją, hemokoaguliacijos ir kitus gyvybinių funkcijų sutrikimus. Be to jis gali būti panaudotas atliekant mokslinius eksperimentinius tyrimus.

β-endorfinas (β-lipotropinas 61-91) išskirtas iš kupranugarių hipol'izės, žinomas kaip biologiškai aktyvus neuropeptidas, dalyvauja nervinių procesų reguliacijoje. Iš jo miltelių paruoštas tirpalas dažniausiai injekuojamas j smegenų skilvelius (Clin. Exp. Pharmacol. Physiol., 1990, 17, . 1, 33-37; Biomed. Pharmacothcr., 1993, 47, 8, 311-320; Neuropsyehologia, 1993, 31,7, 655-660).

Ei, E₂, F_2a, I₂ prostaglandinai (arąchidinės, linolinių polinesočiųjų lipidinių rūgščių derivatai), išskirti iš gyvulių prostatos ir kitų audinių, žinomi kaip biologiškai aktyvūs lipidai, reguliuojantys gyvybiškai svarbias širdies-kraujagyslių, kvėpavimo, hemokoaguliacijos ir kitas funkcijas. Jų tirpalai injekuojami intraveniniu būdu arba lokaliai į pažeistą vielą. Sušvirkšti į arteriją prostaglandinai veikia stipriau nei į veną, nes išvengiama juos suardančių plaučių ir kepenų fermentų (Ažgichin I-, Prostaglandiny. - M., 1978 - 565, rus.). Nors sušvirkšti į arteriją β-endorl'inas ir prostaglandinai lėčiau suyra ir dėl to veikia stipriau, bet taip jie gali būti panaudoti tik trumpą laiką, nes negali kompensuoti ilgalaikių AŠ padarinių, kadangi jų veikimas yra trumpesnis už AŠ metu vykstančius patologinius procesus. Be to, švirkščianl į arteriją β-endorfiną arba prostaglandinus jų veikimas būna santykinai lokalus ir todėl nepaveikia viso organizmo funkcijų, o ilgalaikės infuzijos į arterijas praktiškai netaikomos dėl didelio arterinio kraujospūdžio. Pastovios mikrolašelinės intraveninės βendorfino bei prostaglandinų-infuzijos labai sumažina katastrofiškus (letališkus) AŠ padarinius. Jų veikimas nustatomas registruojant ir sekant nurodytų funkcinių sutrikimų parametrus.

Tiek β-endorfinas, tiek Ei, E₂, F_2a, I₂ prostaglandinai lai labai greitai (sekundžių bėgyje) organizme suirsiančios medžiagos. Todėl jas panaudojus stresinių būsenų (anafilaksinio šoko) metu, kada būna sunkūs ir ilgalaikiai funkcinių sistemų pažeidimai, gaunamas tik trampalaikis - mažai efektyvus veikimas.

Kad veikimas būtų pastovesnis, šiame išradime pateikti β-endorfino, E_b E₂, F_2a, I₂ prostaglandinų įvedimo į organizmą intraveninių mikrolašelinių infuzijų būdai ir dozės, o taip pat jų koncentracijos, gyvybinių funkcijų sutrikimų kompensacijai anafilaksijos metu.

β-endorfino ir E_t E₂, F_2a, I₂ prostaglandinų intraveninių mikrolašelinių infuzijų paruošimo pavyzdžiai.

1.Pavyzdys

Pirminis β-endorfino tirpalas gautas ištirpinus jo kristalinius miltelius (Heidelberg Servą firma) 98% etilo alkoholyje santykiu 1:100. Iš jo (pirminio tirpalo), paėmę veiklią dozę (125 pg), ruošdami infuziją alskicdėme fiziologiniu (izotoniniu 0,9% natrio chlorido) tirpalu santykiu 1:130.

2. Pavyzdys

Eį E₂, F_2ct arba I₂ prostaglandinų tirpalai (kiekvieno atskirai) gauti ištirpinus jų miltelius (Talino gamybos) 98% etilo alkoholyje santykiu 1:100 ir iš jo paėmę Ei E₂ ir F_2a prostaglandinų veiklią dozę (8 mg) bei prostaglandino I₂ veiklią dozę - 80 mg, ruošėme infuzijas juos atskiesdami fiziologiniu (izotoniniu 0,9% natrio chlorido) tirpalu santykiu 1:130.

Biologinis išbandymas

Panaudojus intraveninių mikrolašelinių infuzijų būdu šias biologiškai aktyvias medžiagas, pasižyminčias adaptaciniu-kompensaciniu bei imunomoduliaciniu veikimu, atlikome bandymus, sukeldami AŠ ir registruodami funkcinius kraujospūdžio, širdies elektrokardiografinius (EKG), hemokoaguliografinius ir spirometrinius parametrus.

Šio tyrimo tikslas buvo nustatyti β-endorfino ir Εμ E₂, F_2a, I₂ prostaglandinų tirpalų sudėtį ir koncentracijas, paruošiant intravenines mikrolašelines infuzijas, įgalinančias dozuoti ir pastoviai kompensuoti sutrikusias organizmo gyvybines funkcijas (arterinį kraujospūdį, kvėpavimą, širdies veiklą, koronarinę kraujotaką ir hemokoaguliaciją) AŠ metu. Mes nustatėme, kad šis paruošimo ir panaudojimo būdas yra efektyvesnis nei vienkartinės intraveninės arba intraskilvelinės injekcijos, kadangi tai padeda pastoviai kompensuoti (sureguliuoti) minėtus funkcinius sutrikimus anafilaksijos metu. Pastovus intraveninių infuzijų veikimas nustatomas registruojant ir sekant nurodytų funkcinių sutrikimų parametrus.

Bandymai atlikti su 67 abiejų lyčių, 2,0-3,5 kg masės triušiais. Jie buvo suskirstyti į 6 eksperimentines grupes, gaunančias β-endorfiną arba Εμ E₂, F_2cc, I₂ prostaglandinus intraveninių mikrolašelinių infuzijų būdu, ir negavusius jų, sukėlus anafilaksinį šoką ir registruojant funkcinius kraujospūdžio, širdies elektrokardiografinius, hemokoaguliografinius ir spirometrinius rodiklius. Triušius sensibilizavome natyvinio vištos kiaušinio baltymo, praskiesto iki 20% izotoniniu 0,9% natrio chlorido tirpalu, 1 ml poodinėmis injekcijomis 4 kartus kas 5 paros. Praėjus 25-30 dienų nuo pirmos sensibilizuojančios injekcijos, triušiams sukeldavome anafilaksinį šoką to paties antigeno intravenine (1 ml/kg) injekcija. Kraujo spaudimą miego arterijoje matavome gyvsidabriniu manometru, išorinį kvėpavimą - pneumografu, širdies veiklą - elektrokardiografu ir kraujo krešėjimą tyrėme hemokoaguliografu.

Bandymų duomenys pateikti 1-5 lentelėse.

1. Eksperimentų grupė

Panaudojus sensibilizuotiems triušiams 10 min bėgyje 0,5 ųg/min (0,2 μ g/kg/min, vidutiniškai 2,5 kg triušiui) β-endorfino intravenines mikrolašelines infuzijas nustatėme, kad tokia β-endorfino dozė raiškiai mažina triušių arterinį kraujospūdį, blogina širdies intraskilvelinį laidumą ir apsunkina AŠ eigą (keli triušiai žuvo).

2. Eksperimentų grupė

Panaudojus sensibilizuotiems triušiams 10 min bėgyje po 0,15 ųg/kg/min βendorfino intravenines mikrolašelines infuzijas ir po to sukėlus anafilaksinį šoką nustatėme, kad šis β-endorfino kiekis mažai paveikė arterinį sensibilizuotų triušių kraujo spaudimą, o anafilaksinio šoko metu sinusinis širdies ritmas pakito nuo 236,5 k/min iki 215,5 k/min (3 lentelė). Pirmomis AŠ minutėmis 50% triušių registravome pavienes skilvelines ir vienam triušiui prieširdinę ekstrasistoles, o praėjus 6-10 min jos išnyko arba perėjo į S-T segmento dislokaciją. Pirmosiomis AŠ minutėmis arterinis kraujospūdis padidėjo (nuo 117,6 mm Hg iki 121,0 mm Hg), o 2-3 min sumažėjo iki 87,1 mm Hg. 10-15 min arterinis kraujo spaudimas stabilizavosi (106,0 mm Hg) (2 lentelė).

3. Eksperimentų grupė

Sukėlus sensibilizuotiems triušiams įprastinį AŠ natyvinio vištos kiaušinio baltymo (specifinis antigenas) intravenine injekcija (1 ml/kg) ir nepanaudojus nei β-endorfino, nei Εμ E2, F2_a, I2 prostaglandinų registravome anafilaksiniam šokui tipišką kraujo spaudimo ir išorinio kvėpavimo kitimų dinamiką: pradinį trumpalaikį kraujospūdžio padidėjimą, vidutiniškai 3-čią AŠ minutę jo maksimalų sumažėjimą (p < 0,01), išorinio kvėpavimo padažnėjimą (p < 0,05) ir pagilėjimą (1-2 lentelės). Pasireikšdavo ekstrasistolija (30%), širdies laidumo sutrikimai (30%) ir miokardo išemijos požymiai (35%), kurie keliais atvejais baigėsi miokardo infarktu (3 lenetelė). Antrą-trečią anafilaksinio šoko minutę paimtas kraujas daugumai triušių per 10 min nepradėdavo krešėti (4 lentelė). Anafilaksinio šoko metu žuvo 50% triušių.

4. Eksperimentinė grupė

Panaudojus po 10 pg/kg/min Εμ E₂, F_2ct prostaglandinų (kiekvieno atskirai) intravenines mikrolašelines infuzijas 10 min bėgyje iki triušiams sukeliant anafilaksinį šoką ir anafilaksinio šoko eigoje nustatėme, kad arterinis kraujo .spaudimas pirmą minutę po anafilaktizuojančios injekcijos vidutiniškai padidėjo 12,7%, 12,8% ir 20,1% atitinkamai veikiant nurodytiems atskiriems prostaglandinams, o išorinis kvėpavimas esminiai nesiskyrė nuo įprastino anafilaksinio šoko (1, 2 lentelės). Po anafilaktizuojančios injekcijos 30% triušių, gavusių Ei prostaglandino, 30% triušių; gavusių E2 prostaglandino ir 50% - F_2a prostaglandino anafilaksinio šoko metu registravome ekstrasistoles ir skilvelių virpėjimą, dar kitiems (10%, 10% ir 15%) širdies laidžiosios sistemos sutrikimus bei išemijos požymius (po 10%) (3 lentelė). Ekstrasistoles (išskyrus du atvejus) ir skilvelių virpėjimas per 5-10 min išnyko.

5. Eksperimentų grupė

Panaudojus 100 ųg/kg/min I2 prostaglandino mikrolašelines infuzijas iki anafilaksinio šoko ir anafilaksinio šoko metu nustatėme, jog gavusiems I2 prostaglandino AŠ metu dviems triušiams atsirado prieširdinės ekstrasistolės, dar dviems - išemijos reiškiniai (3 lentelė). Dėl I₂ prostaglandino sensibilizuotų triušių tromboelastografiniai (kraujo krešėjimo) rodikliai pagal H.Hartertą (Klin. Wschr., 1948, 26, 577-583) pakito: “r” (kraujo protrombino reakcijos laikas), “k” (krešulio susidarymo laikas) ir “t” (specifinė koaguliacijos trukmės konstanta) prailgėjo, o “ma” (maksimali amplitudė, atspindinti krešulio elastingumą) sumažėjo (p<0,01, p<0,05, p<0,05 ir p<0,05) (3 pav., 5 lentelė). Šių triušių kraujas AŠ metu, veikiant I^prostaglandinui per 10 min pradėjo krešėti (4 lentelė). Įprastinio AŠ metu kraujas nekreša dėl atsiradusios intravazalinės koaguliopatijos (Barkagan Z., Gemoragičeskije zabolevanija i sindromy. M. 1980, p. 5, rus.), susiformavus daugybiniams mikrotrombams kapiliaruose. Tai pažeidžia mikrocirkuliaciją ir sukelia audinių hipoksiją. Todėl svarbu neleisti išsivystyti pirminei hiperkoaguliacijai, sulėtinant kraujo krešėjimą prieš sukeliant anafilaksinį šoką infuzuojant I₂ prostaglandiną arba β-endorfiną (1 pav., 5 lentelė). Dėl to nuo AŠ žuvo tik 6% triušių gavusių I₂ prostaglandino, 8% - gavusių β-endorfino, po 10% gavusių E_b E2 prostaglandinų, 16% veikiant F₂« prostaglandinui ir 50% jų negavusių (2 pav.).

1. pav. Triušių hemokoaguliogramos: a - sensibilizuotų, b - antrą-trečią anafilaksinio šoko minutę, c - gavusių I₂ prostaglandino antrą-trečią anafilaksinio šoko minutę.

2. pav. Triušių kraujospūdžio kitimo tendencija ir anafilaksinio šoko baigtis: gavusių β-endorfino (β-End.), E_b E^, F_2a ir I₂ prostaglandinų, K - be prostaglandinų ir βendorfino, % - žuvusių procentas.

3. pav. Hemokoaguliogramos rodikliai (pagal H.Hartertą): r - kraujo protrombino reakcijos laikas (nuo registravimo pradžios iki 1 mm amplitudės); k - krešulio susidarymo laikas ( nuo 1 mm iki 20 mm amplitudės ); ma - maksimali amplitudė , atspindinti krešulio elastingumą (trombocitų ir fibrinogeno krešėjimo aktyvumą ); t - specifinė koaguliacijos konstanta (trukmė min, sek ).

Triušių kvėpavimo dažnumas (k/min) anafilaksinio šoko (AŠ) metu gavusių βendorfino (β-End) ir E_b E2, F_2a, I₂ prostaglandinų(Pg) lentelė

Tyrimo laikas Ekspel·^ pobūdis	Sensibiiizuotų (iki AŠ), k/min	1-mą AŠ min, k/min	10-tą AŠ min, k/min	Triušių skaičius (n)
AŠ metu Gavusių	115,6*13,2	130,0*16,5 p <0,05	110-14,8	10
β-End Gavusių	113,5 - 10,5	132,5 * 12,5 p < 0,05	110,3*12,5	12
Pgi2	114,3 12,2	131,5* 14,3 p < 0,05	115,3*13,5	15
Gavusių
Pg 1	120,0*12,5	145,0*23,5 p < 0,05	105,0*11,2	10
Gavusių
Pg^-2	121,5* 10,8	142,3*20,5 p < 0,05	106,5*10,3	10
Gavusių
Pgh2a	123,3 * 14,8	148,0*25,2	108,5*13,2	10

p < 0,05

Triušių arterinio kraujospūdžio (mmHg) kitimas anafilaksinio šoko (AS) metu ir gavusių β-endorfino (β-End) arba Ei, E_2> F_2a ir L prostaglandinų (Pg) lentelė

Tyrimo laikas	Sensibiliz. (iki AŠ), mm Hg	1-mą AŠ min., mm Hg	2-3-čią AŠ min., mm Hg	10-tą AŠ min., mm Hg	Žuvusių skaičius in)
-Eksper. pobūdis^
AŠ metu	120,0*2,5	128,0*2,0	68,5* 10,8 p<0,01	82,0*21,5 p <0,05	5
Gavisių β-End	117,6 *5,5	121,0*5,6	87,1 *14,3 p<0,01	106,0*18,5 p <0,02	1
Gavusių Pgl2	100,7-6,0	121,0*3,6	67,8* 30,7 p<0,01	79,5 * 15,8 p <0,05	1
Gavusių PG Ei	99,4*5,6	112,0*9,5	68,4 * 17,2 p <0,01	75,6*19,5 p <0,05	1
Gavusiu Pg E2	100,7*6,0	113,5*3,6	67,8*20,7 p<0,01	74,7*18,5 p <0,01	1
Gavusių PgF2«	94,0*5,3	112,9*6,0	60,5 *Ί4,2 p <0,01	60,8 *3,7 p<0,01	2

Triušių širdies susitraukimų dažnis (k/min) ir EKG duomenys anafilaksinio šoko (AŠ) metu ir gavusių β-endorfiną (β-End) arba ^El, ^E2, ^E2a, h prostaglandinų (Pg) lentelė

EKG pakitimai Lkspt^. pobūdis	Sensibi- lizuotų, k/min	AŠ metu, k/min	Jaudrumo sutrikimai, (atvejų skaičius)	Laidumo pakitimai, (atvejų skaičius)	Išemijos reiškiniai, (atvejų skaičius)
AŠ metu	255,0*5,0	261,0*7,0	Pr. Ex-1 Sk.Ex-2	7	5
Gavusių β-End	236,5*5,6	215,5^6,2	Pr.Ex-l Sk.Ex-3	2	2
Gavusių	260,0*7,8	277,5 *9,6	Pr.Ex-2	1	2

Gavusių PgEl	210,0*10,5 211,0*10,2	Pr.Ex-3	1	1
Gavusių Pg E2	208,0*9,5 210,5*9,3	Pr.Ex-3	1	1
Gavusių Pg E2cc	245,0*7,8 237,0*22,0	Sk. Ex-4	2	1

Pastaba: Pr.Ex - prieširdinės ekstrasistolės Sk. Ex - skilvelinės ekstrasistolės

Triušių hemokoaguliogramų duomenys anafilaksinio šoko (AŠ) metu ir gavusių β-endorfino (β-End) arba Ei, E2, F_2a> I2 prostaglandinų (Pg) lentelė

Hemokoaguliografiniai rodikliai Eksper>\ pobūdis	r min,sek	k min,sek	ma mm	t min,sek	Nekreša triušių skaičius (n)
Sensibilizuotų	2'50*Γ05	5Ί5*Γ40	50,2*3,0	12Ό-4Ί5	-
AŠ metu	18'54*6'40	21'54*8'30	19,0*3,8	-	6
Gavusių β-End	7Ό8*Γ45	9'1O*1'2O	17,5*3,3	-	1
Gavusių Pg	16'30 * 3'20	25'40 *7'30	22,0*3,5	-	-
Gavusių PgEi	18Ί5*6'20	20'51*5'40	20,3*3,8	-	4
Gavusių PgE2	18’30. 54θ	2Γ10*4'35	20,614,1	-	3
Gavusių P8F2a	17'40t5'15	19'30t6’20	18,4*3,2	-	5

r - kraujo protrombino reakcijos laikas (nuo registravimo pradžios iki 1 mm amplitudės);

k - krešulio susidarymo laikas (nuo 1 mm iki 20 mm amplitudės);

ma - maksimali amplitudė, atspindinti krešulio elastingumą (trombocitų ir fibrinogeno krešėjimo aktyvumą);

t - specifinė koaguliacijos konstanta (trukmė min, sek).

Triušių, gavusių β-endorfino (β-End) arba E^ E₂, F_2a, I₂ prostaglandinų (Pg) hemokoaguliogramų duomenys lentelė

Hemokoagu- liogramos rodikliai Ekspej\ pobūdis^	r min,sek	k min, sek	ma mm	t min,sek
Sensibilizuotų	2'48 *0'30	5'24^l’20	52,4*3,9	12'40 *4'30
	3,15”^l’3O”	6'40 *2'15		1630^53011 p <0,05
Gavusių	5'45*1'15	6'36 *2'30	37,0¾	15'51T5'45
pgi2	p<0,01	p <0,05	p <0,05	p <0,05
Gavusių Pg Ei	4'30 *T20 p <0,02	5'30 ri-40	50,313,6	13'20 *4'15
Gavusių P8E2	3'20 *O'45	5'40 rl'3O	51,5 -*3,2	14Ί0 *4'30
Gavusių PgF 6 2a	2'40t0'30	5'30*Γ45	52,0 *3,5	13Ί0 -+4'15

r - kraujo protrombino reakcijos laikas (nuo registravimo pradžios iki Ϊ mm amplitudės);

k - krešulio susidarymo laikas (nuo 1 mm iki 20 mm amplitudės);

ma - maksimali amplitudė, atspindinti krešulio elastingumą (trombocitų ir fibrinogeno krešėjimo aktyvumą); t - specifinė koaguliacijos konstanta (trukmė min, sek).

TYRIMŲ REZULTATŲ APIBENDRINIMAS

1. β-endorfino (0,15 pg/kg/min) mikrolašelinės intraveninės infuzijos stabilizavo anafilaksinio šoko kraujospūdžio kitimų dinamiką, sumažino širdies veiklos disfunkcijas ir letalinę anafilaksinio šoko baigtį.

2. Prieš pat anafilaktizuojančią injekciją sulašinus triušiams į veną Ep E₂ arba F_2a prostaglandinų (10 pg/kg/min) anafilaksinio šoko metu arterinis kraujo spaudimas padidėjo nežymiai, bet vėliau kraujospūdžio kritimo ir išorinio kvėpavimo dinamika beveik nesiskyrė nuo palankesnės anafilaksinio šoko eigos.

3. Ei, E₂, F_2a ir I₂ prostaglandinai anafilaksinio šoko metu veikė antiaritmiškai, o I₂ ir antiišemiškai.

4. Anafilaksiniam šokui būdingam kraujo krešėjimo sulėtėjimui Ei, E₂, F_2a prostaglandinai įtakos neturėjo, o I₂ prostaglandinas ir β-endorfinas kraujo krešėjimą stabilizavo ir matyt dėl to dauguma triušių liko gyvi.

Bandymais buvo įrodyta, kad biologiškai aktyvias medžiagas - β-endorfiną ir Ej, E₂, F₂a, I₂ prostaglandinus - butų tikslinga naudoti infuzijomis.

Siūlomo išradimo privalumas yra tas, kad panaudojus tokios koncentracijos tirpalus intraveninių mikrolašelinių infuzijų būdu galima susilpninti anafilaksinio šoko reiškinius ir kompensuoti sutrikusias funkcijas - sureguliuoti kraujospūdį, širdies veiklą, kraujo krešėjimą. Šiuo atveju β-endorfinas ir Ei, E₂, F_2a, I₂ prostaglandinai veikia kaip antianafilaksinis (antistresinis) faktorius.

Claims (4)

1. IŠRADIMO APIBRĖŽTIS

   1. Biologiškai aktyvių medžiagų β - endorfino (β - lipotropino 61 - 91) ir Ei,E₂, F_2a,I₂ prostaglandinų (arachidinės , linolinių polinesočiųjų lipidinių rūg»ų derivatų) panaudojimas intraveninių mikrolašelinių infuzijų , pasižyminčių gyvybinių funkcijų sutrikimų kompensacija anafilaksijos metu , paruošimui.
2. 2. Panaudojimas pagal 1 punktą , besiskiriantis tuo , kad naudojami β - endorfinas ir Ei, E₂,F_2a,I₂ prostaglandinai intraveninių mikrolašelinių infuzijų pavidalais , gautais ištirpinus jų kristalinius miltelius 98% etilo alkoholyje santykiais 1:100 ir gautą tirpalą atskiedus izotoniniu tirpalu santykiu 1:130.
3. 3.Intraveninė mikrolašelinė infuzija, besiskirianti tuo , kad joje aktyviu ingredienu yra β - endorfinas ir Ei, E₂, F_2a.I₂ prostaglandinai, skirta panaudoti gyvybinių funkcijų sutrikimų kompensacijai anafilaksijos metu.
4. 4.1nfuzija pagal 3 punktą, besiskirianti tuo , kad aktyvus ingredientas naudojamas sekančiai: β- endorfinas tirpalo pavidalu intraveninių mikrolašelinių infuzijų būdu po 0,15 pg/kg/min, Ei, E₂, F_2ct prostaglandinai tirpalo pavidalu intraveninių mikrolašelinių infuzijų būdu po 10 pg/kg/min, o I₂ prostaglandinas - po 100ųg/kg/min.