LT3265B - Supstained-release preparation and method for its preparing - Google Patents
Supstained-release preparation and method for its preparing Download PDFInfo
- Publication number
- LT3265B LT3265B LTIP1526A LTIP1526A LT3265B LT 3265 B LT3265 B LT 3265B LT IP1526 A LTIP1526 A LT IP1526A LT IP1526 A LTIP1526 A LT IP1526A LT 3265 B LT3265 B LT 3265B
- Authority
- LT
- Lithuania
- Prior art keywords
- group
- acid
- formula
- physiologically active
- peptide
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
ii
Šis išradimas skirtas nepertraukiamai atlaisvinamam preparatui, kurio sudėtyje yra fiziologiškai aktyvus peptidas ir preparato gavimo būdui.The present invention relates to a sustained release formulation comprising a physiologically active peptide and to a process for the preparation thereof.
Ankstyvesniuose straipsniuose, kaip nurodyta EP-A-481, 732, atskleidžiamas nepertraukiamai - atlaisvinamas preparatas, susidedantis iš vaistų, polilaktinės rūgšties ir glikolio rūgšties-hidroksikarboksilinės rūgšties (HOCH (C2-8 alkil) COOH) kopolimero. Atskleidžiamas procesas, susidedantis iš V/A emulsijos paruošimo, kurios vidinė vandens fazė yra fiziologiškai aktyvaus peptido vandeninis tirpalas, ir išorinė aliejinė fazė yra biodegraduojančio polimero organiniame tirpiklyje tirpalas, pridedant minėtą V/A emulsiją į vandenį arba vandeninę terpę ir paverčiant susidariusią V/A V emulsiją nepertraukiamai atlaisvinamomis mikrokapsulėmis (vandens išdžiovinimo metodu).The earlier article as described in EP-A-481 732, presents a continuous - loosened preparation consisting of drugs, polyactic acid and the glycolic acid-hydroxycarboxylic acid (HOCH (C 2-8 alkyl) COOH) copolymer. Disclosed is a process comprising preparing a V / A emulsion, the aqueous phase of which is an aqueous solution of a physiologically active peptide, and the outer oily phase is a solution of a biodegradable polymer in an organic solvent by adding said V / A emulsion to water or aqueous medium and converting emulsion by continuous release microcapsules (water drying method).
EP-A-52510 aprašoma mikrokapsulė, kurios sudėtyje yra hormoninis aktyvus polipeptidas, biodegraduojantis polimeras ir polimero hidrolizę kontroliuojantis agentas. Atskleidžiamas jo paruošimo būdas, apimantis susiliejimo procesą, kai pridedamas susiliejimo agentas į V/A emulsiją, susidedančią iš polipeptido vandeninio tirpalo, kaip vidinės vandens fazės ir halogeninio organinio tirpiklio, kaip aliejinės fazės, kurios sudaro mikrokapsulės.EP-A-52510 discloses a microcapsule containing a hormonal active polypeptide, a biodegradable polymer and a polymer hydrolysis controlling agent. Disclosed is a process for its preparation which comprises the fusion process of adding a fusing agent to a V / A emulsion consisting of an aqueous solution of the polypeptide as an internal aqueous phase and a halogen organic solvent as an oily phase which forms microcapsules.
GB-A-2209937 aprašoma farmacinė kompozicija, kurios sudėtyje yra polilaktidas, poliglikolidas, pieno rūgšties-glikolio rūgšties kopolimeras arba šių polimerų mišinys ir vandenyje netirpus peptidas. Taip pat atskleidžiamas jo gavimo procesas, kuris susideda iš vandenyje netirpaus peptido druskos dispersijos minėtame polilaktido, poliglikolido, pieno rūgštiesglikolio rūgšties kopolimero tirpale arba šių polimerų mišinyje, pašalinant tirpiklį garinant ir formuojant gautą mišinį į kietas daleles.GB-A-2209937 discloses a pharmaceutical composition comprising a polylactide, a polyglycolide, a lactic acid-glycolic acid copolymer or a mixture thereof, and a water-insoluble peptide. Also disclosed is a process for preparing it, which comprises dispersion of a salt of a water-insoluble peptide in said polylactide, polyglycolide, lactic acid-glycolic acid copolymer solution, or a mixture of these polymers, by removing the solvent by evaporation and forming the resulting mixture into solids.
EP-A-58481 aprašomas farmacinės kompozicijos gavimo 5 procesas, susidedantis iš polilaktido ir rūgščiai atsparaus polipeptido, kuris, pvz., apima tetragastrino hidrochlorido ir polilaktido ištirpinimą vandeniniame dioksane, tirpalą sulydant į plėvelę ir išgarinant tirpikli·EP-A-58481 describes a process for preparing a pharmaceutical composition comprising a polylactide and an acid-resistant polypeptide, which comprises, for example, dissolving a solution of tetragastrin hydrochloride and polylactide in aqueous dioxane by melting the film and evaporating the solvent.
EP-A-0467389 aiškinama technologija, kaip polimero precipitacijos arba mikrosferos technika vaistus paskirstyti baltymams, polipeptidams. Tačiau šioje literatūroje nėra atskleidžiama specifinė sistema, kurios sudėtyje yra LH-AH darinys.EP-A-0467389 discloses a technique for polymeric precipitation or microsphere technology for distributing drugs to proteins, polypeptides. However, this literature does not disclose a specific system containing the LH-AH derivative.
Luteinizuojantis hormonas - atlaisvinamas hormonas, žinomas kaip LH-AH (arba GnRH), išskiriamas iš antinksčio žievės ir surišamas hipofizio receptoriais. LH (luteinizuojantis hormonas) ir FSH (folikulą stimuliuojantis hormonas), kurie tuoj atlaisvinami, veikia lytines liaukas, sintezuojančias steroidinius hormonus. Žinoma, kad egzistuoja tiek teigiamą efektą, tiek antagonistini veikimą turintys peptidai, kaip LH-AH dariniai. Kai stiprų teigiamą veikimą turintys peptidai yra pakartotinai naudojami, žymiai sumažėja receptorių skaičius, todėl lytinių liaukų gaminamų steroidinių hormonų formavimas yra slopinamas. Taigi, LH-AH dariniai yra naudojami kaip nuo hormonų priklausančių susirgimų, tokių kaip prostatos vėžys, nepiktybinė prostatomegalija, endometriozė, histeromijoma, metrofibroma, ankstyvas lytinis subrendimas, pieno liaukų vėžys ir pan., terapiniai agentai arba kaip kontraceptinės priemonės. Ypač problematiškas buvo LH35 AH antagonistų, taip vadinamų pirmų ir antrų generacijų, histaminą atlaisvinantis aktyvumas (The Pharmaceuticals Monthly 32, 1599-1605, 1990), bet per tą laiką susintetintų junginių ir LH-AH antagonistinių peptidų, neturinčių pastebimo histaminą atlaisvinančio aktyvumo, skaičius paskutiniu metu buvo didinamas (pvz., JAV P Nr. 511094). Siekiant pabrėžti bet kokių LH-AH antagonistinių peptidų farmakologinį efektą, reikalinga kontroliuojanti atlaisvinimo sistema endogeniniam LH-AH konkuruojančiam slopinimui įveikti. Kadangi histaminą atlaisvinantis aktyvumas gali būti žemas, bet tokiuose peptiduose jis egzistuoja, tuomet reikalingas nepertraukiamai atlaisvinamas preparatas, kurio pirminis staigus, tuoj po įvedimo, suskilimas yra užslopintas.Luteinising hormone - a releasing hormone known as LH-AH (or GnRH), which is secreted from the adrenal cortex and bound to pituitary receptors. LH (luteinising hormone) and FSH (follicle stimulating hormone), which are released immediately, affect the glands that synthesize steroid hormones. Peptides with both positive and antagonistic activity are known to exist as LH-AH derivatives. When peptides with strong positive action are reused, the number of receptors is significantly reduced and steroid hormone production is inhibited. Thus, LH-AH derivatives are used as therapeutic agents or as contraceptives for hormone-dependent diseases such as prostate cancer, non-malignant prostatomegaly, endometriosis, hysteroma, metrofibroma, premature sexual maturation, mammary gland cancer and the like. Particularly problematic was the histamine-releasing activity of LH35 AH antagonists, the so-called first and second generations (The Pharmaceuticals Monthly 32, 1599-1605, 1990), but the number of compounds synthesized during that time and LH-AH antagonistic peptides lacking appreciable histamine releasing activity. has recently been increased (eg US P 511094). To emphasize the pharmacological effect of any LH-AH antagonistic peptides, a controlled release system is required to overcome endogenous LH-AH competing inhibition. Because histamine-releasing activity may be low but exists in such peptides, a sustained-release preparation is required, with the initial rapid, immediate disintegration of the product being inhibited.
Ypač svarbu nepertraukiamai atlaisvinamo (pvz., 1-3 mėn.) preparato atveju užtikrinti teigiamą ir pastovų peptido atlaisvinimą, norint užtikrinti norimą efektą.In the case of a sustained release formulation (e.g., 1-3 months), it is particularly important to ensure a positive and steady release of the peptide to achieve the desired effect.
Tuo pačiu metu reikalingas jautrus ilgalaikis nepertraukiamai atlaisvinamo preparato gavimo būdas su fiziologiškai aktyvaus peptido, ypač LH-AH antagonistinių peptidų, aukštu peptido atskyrimo greičiu, norint užtikrinti reikiamą efektyvumo laipsnį.At the same time, there is a need for a sensitive long-term sustained release formulation with a high peptide release rate of the physiologically active peptide, especially LH-AH antagonist peptides, to provide the required degree of efficacy.
Šis išradimas siejasi su:The present invention relates to:
1) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu, kurio sudėtyje yra fiziologiškai aktyvus peptidas, kurio formulė:1) A sustained release formulation comprising a physiologically active peptide of the formula:
CiKCHaJsCiKCHaJs
Cff2-Si CH2-S2 CH2-0H CH2-E4 CH2-S5 Cfl2 CH2-Be X-NH-Cfl-<OGW-<B-{^E3-rad;a-CO-K-Cfl-CO-if3-CH-CO-Na-Ca-CO-NH-Cfl-CO-i5-ČH-CO-B7-iffi2 (I)CFF 2 Si 2 CH 2 CH 2 -S -0H CH 2 CH 2 -E 4 -S 5 Cfl 2 CH 2 -B e X-NH-Cfl- <OGW- <B - {E ^ 3 -RAD; a -CO-K-Cfl-CO-if3-CH-CO-Na-Ca-CO-NH-Cfl-CO-15-CH-CO-B7-iffi 2 (I)
W ųDJ ! (0) kur X yra acilo grupė;W øDJ! (0) wherein X is an acyl group;
Rx, R2 ir R4 kiekvienas yra aromatinė grupė;R x , R 2 and R 4 are each an aromatic group;
R3 yra D-amino rūgšties liekana arba grupė, kurios formulė:R 3 is a D-amino acid residue or a group of the formula:
-NH-CH-CO(D) kur R3' yra heterociklinė grupė;-NH-CH-CO (D) wherein R 3 'is a heterocyclic group;
R5 yra grupė, kurios formulė -(CH2)n-R5', kur n reikšmė yra 2 arba 3, ir R5' yra amino grupė, kuri nebūtinai gali būti pakeista, aromatinė ciklinė grupė arba O glikozilo grupė;R 5 is a group of the formula - (CH 2 ) n -R 5 'where n is 2 or 3 and R 5 ' is an amino group which may be optionally substituted, an aromatic cyclic group or an O-glycosyl group;
R6 yra grupė, kurios formulė -(CH2)n-R6’, kur n reikšmė yra 2 arba 3, ir R/ yra amino grupė, kuri nebūtinai turi būti pakeista;R 6 is a group of the formula - (CH 2 ) n -R 6 'where n is 2 or 3 and R 1 is an amino group which does not need to be substituted;
R7 yra D-amino rūgšties liekana arba azaglicilo liekana; irR 7 is a D-amino acid residue or an azaglycyl residue; and
Q yra vandenilis arba žemesnė alkilo grupė arba jo druska ir biodegraduojantis polimeras, turintis galinę karboksilo grupę,Q is hydrogen or a lower alkyl group or a salt thereof and a biodegradable polymer having a carboxyl terminus,
2) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 1 punktą, kur X yra C2_7 alkanoilo grupė, kuri nebūtinai gali būti pakeista - arba 6- narių heterocikline karboksamido grupe,2) continuously released by a preparation according to claim 1, wherein X is C 2 _ 7 alkanoyl group which may optionally be replaced by - or 6-membered heterocyclic carboxamido group,
3) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal punktą 2, kur X yra C2_4 alkanoilo grupė, kuri nebūtinai gali būti pakeista tetrahidrofurilkarboksamido grupe,3) continuously released by a preparation according to claim 2, wherein X is C 2 _ 4 alkanoyl group which may optionally be substituted tetrahidrofurilkarboksamido group
4) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 1 punktą, kur X yra acetilas,4) A sustained release formulation according to claim 1, wherein X is acetyl,
5) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 1 punktą, kur biodegraduojantis polimeras yra (A) glikolio rūgšties ir hidroksikarboksilinės rūgšties kopolimero, kurio formulė:The sustained release formulation according to claim 1, wherein the biodegradable polymer is a copolymer of (A) glycolic acid and hydroxycarboxylic acid having the formula:
{ II} kur R yra alkilo grupė iš 2-8 anglies atomų, ir (B) polilaktinės rūgšties mišinys,{II} wherein R is an alkyl group of 2 to 8 carbon atoms and (B) a mixture of polylactic acid,
6) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 1 punktą, kur X yra acetilas, ir biodegraduojantis polimeras yra (A) glikolio rūgšties ir hidroksikarboksilinės rūgšties kopolimero, kurio formulė (II), ir (B) polilaktinės rūgšties mišinys,6) The sustained release formulation of claim 1, wherein X is acetyl and the biodegradable polymer is a mixture of (A) a copolymer of glycolic acid and a hydroxycarboxylic acid of formula (II) and (B) a polylactic acid,
7) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 5 punktą, kur kopolimero molekulinio svorio vidurkis nuo 2,000 iki 50,000, kaip nustatyta GPC,7) The sustained release formulation according to claim 5, wherein the copolymer has an average molecular weight of between 2,000 and 50,000 as determined by GPC,
8) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 5 punktą, kur kopolimero dispersijos reikšmė nuo 1.2 iki 4.0,8) A sustained release formulation according to claim 5, wherein the copolymer has a dispersion value of 1.2 to 4.0,
9) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 5 punktą, kur polilaktinės rūgšties molekulinio svorio vidurkis nuo 1,500 iki 30,000, kaip nustatyta GPC,9) A sustained release formulation according to claim 5, wherein the polylactic acid has an average molecular weight of between 1,500 and 30,000 as determined by GPC,
10) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 5 punktą, kur polilaktinės rūgšties dispersijos reikšmė nuo 1.2 iki 4.0, &10) A sustained release formulation according to claim 5, wherein the dispersion of polylactic acid has a value of 1.2 to 4.0, &
11) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 1 punktą, kur biodegraduojantis polimeras yra pieno rūgšties ir glikolio rūgšties kopolimeras,11) A sustained release formulation according to claim 1, wherein the biodegradable polymer is a copolymer of lactic acid and glycolic acid,
12) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 11 punktą, kur kopolimero molekulinio svorio vidurkis nuo 5,000 iki 25,000, kaip nustatyta GPC,12) A sustained release formulation according to claim 11, wherein the copolymer has an average molecular weight of 5,000 to 25,000 as determined by GPC,
13) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 11 punktą, kur kopolimero dispersijos reikšmė nuo 1.2 iki 4.0,13) A sustained release formulation according to claim 11, wherein the copolymer has a dispersion value of 1.2 to 4.0,
14) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 1 punktą, kur fiziologiškai aktyvaus peptido santykis su biodegraduojančių polimeru yra nuo 0.01 iki 50% (w/w),14) The sustained release formulation of claim 1, wherein the ratio of physiologically active peptide to biodegradable polymer is 0.01 to 50% (w / w),
15) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 1 punktą, kur fiziologiškai aktyvus peptidas yra LH-AH antagonistas,15) The sustained release formulation of claim 1, wherein the physiologically active peptide is an LH-AH antagonist,
16) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 1 punktą, kur fiziologiškai aktyvus peptidas yra (ζ] -CONHCH2COD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys (Nic)-Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAlaNH2 arba jo acetatas,16) The sustained release formulation of claim 1, wherein the physiologically active peptide is (?) -CONHCH 2 COD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys (Nic) -Leu-Lys (Nisp) -Pro-DAlaNH 2 or an acetate thereof,
17) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 1 punktą, kur fiziologiškai aktyvus peptidas yra NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(Nic)-Leu-Lys (Nisp)-Pro-DAlaNH2 arba jo acetatas,The sustained release formulation according to claim 1, wherein the physiologically active peptide is NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys (Nic) -Leu-Lys (Nisp) -Pro-DAlaNH 2 or acetate thereof,
18) Nepertraukiamai atlaisvinamu preparatu pagal 1 punktą, kur fiziologiškai aktyvus peptidas yra NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-Tyr-DhArg-DhArg(Et2) -LeuhArg(Et2)-Pro-DAlaNH2 arba jo acetatas,18) The sustained release formulation according to claim 1, wherein the physiologically active peptide is NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-Tyr-DhArg-DhArg (Et 2 ) -LeuhArg (Et 2 ) -Pro-DAlaNH 2 or its acetate,
19) Nepertraukiamai atlaisvinamo preparato gavimo būdu, kuris susideda iš fiziologiškai aktyvaus peptido, kurio formulė (I), arba jo druskos ir biodegraduojančio polimero, turinčio galinę karboksilinę grupę, ištirpinimo tirpiklyje, kuris pakankamai gerai nesimaišo su vandeniu, ir minėto tirpiklio pašalinimo,(19) A process for preparing a sustained release formulation comprising dissolving a physiologically active peptide of formula (I), or a salt thereof, and a biodegradable polymer having a terminal carboxyl group in a solvent which does not miscible with water, and removing said solvent,
20) Būdu pagal 19 punktą, kur biodegraduojantis polimeras yra (A) glikolinės rūgšties ir hidrokarboksilinės rūgšties kopolimero, kurio formulė (II), ir (B) polilaktinės rūgšties mišinys,The process of claim 19, wherein the biodegradable polymer is a mixture of (A) a copolymer of glycolic acid and a hydrocarboxylic acid of formula (II) and (B) a polylactic acid,
21) Būdu pagal 19 punktą, kur X yra acetilas ir biodegraduojantis polimeras yra (A) glikolinės rūgšties ir hidrokarboksilinės rūgšties, kopolimero, kurio formulė (II) bei (B) polilaktinės rūgšties mišinys,21) The process of claim 19, wherein X is acetyl and the biodegradable polymer is a copolymer of (A) glycolic acid and hydrocarboxylic acid, a compound of formula (II) and (B) polylactic acid,
22) Būdu pagal 19 punktą, kur biodegraduojantis polimeras yra pieno rūgšties ir glikolinės rūgšties kopolimeras,22) The method of claim 19, wherein the biodegradable polymer is a copolymer of lactic acid and glycolic acid,
23) Būdu pagal 19 punktą, susidedantį iš biodegraduojančio polimero ir fiziologiškai aktyvaus peptido, ištirpinimo tirpiklyje, kuris pakankamai gerai nesimaišo su vandeniu, ir pridedant gautą tirpalą į vandens terpę, kad susidarytų A/V emulsija,23) A process according to claim 19 consisting of dissolving a biodegradable polymer and a physiologically active peptide in a solvent which does not miscibly mix with water and adding the resulting solution to an aqueous medium to form an A / V emulsion,
24) Nepertraukiamai atlaisvinamo preparato gavimo būdu, apimančio biodegraduojančio polimero, kuris susideda iš (A) glikolio rūgšties ir hidroksikarboksilinės rūgšties kopolimero, kurio formulė:(24) A process for preparing a sustained release formulation comprising a biodegradable polymer consisting of a copolymer of glycolic acid (A) and hydroxycarboxylic acid of the formula:
kur R yra alkilo grupė su 2-8 anglies atomais, ir (B) polilaktinės rūgšties mišinio, ir vandenyje netirpaus fiziologiškai aktyvaus peptido arba jo druskos ištirpinimo tirpiklyje, kuris nepakankamai gerai maišosi su vandeniu, ir minėto tirpiklio pašalinimo,wherein R is an alkyl group having from 2 to 8 carbon atoms and dissolving a mixture of (B) a polylactic acid and a water-insoluble physiologically active peptide or salt thereof in a solvent which is miscible with water and removing said solvent,
25) Būdu pagal 24 punktą, kuris po biodegraduojančio polimero ir vandenyje nepakankamai tirpaus peptido arba jo druskos tirpinimo tirpiklyje, nesimaišančiame su vandeniu, toliau susideda iš A/V emulsijos susidarymo, gautą tirpalą pridedant į vandens terpę.The process of claim 24, which, after dissolving the biodegradable polymer and the water-insoluble peptide or salt thereof in a solvent immiscible with water, further comprises forming an A / V emulsion by adding the resulting solution to an aqueous medium.
Naudojamų sutrumpinimų reikšmės:Meanings of abbreviations used:
NAcD2Nal:NAcD2Nal:
D4ClPhe:D4ClPhe:
D3Pal:D3Pal:
NMeTyr:NMeTyr:
DLys(Nic):DLys (Nic):
Lys(Nisp):Lys (Nisp):
DLys(AzaglyNic) DLys(AzaglyFur)DLys (AzaglyNic) DLys (AzaglyFur)
N-Acetil-D-3-(2-naftil)alanilasN-Acetyl-D-3- (2-naphthyl) alanyl
D-3-(4-Chlorfenil)alanilasD-3- (4-Chlorophenyl) alanyl
D-3-(3-Piridil)alanilasD-3- (3-Pyridyl) alanyl
N-MetiltirozilasN-Methyltyrosyl
D-(Ipsilon-N-nikotinoil)lizilas (Ipsilon-N-izopropil)lizilas D-{ 1-Aza- (N-nikotinoil)glicil} lizilas D-{ 1-Aza-(Ν-2-furoil) glicil} lizilasD- (Ipsilon-N-nicotinoyl) lysyl (Ipsilon-N-isopropyl) lysyl D- {1-Aza- (N-nicotinoyl) glycyl} lysyl D- {1-Aza- (Ν-2-furoyl) glycyl} lysyl
Visų kitų amino rūgščių sutrumpinimai naudojami pagal IUPACIUB Komisijos Biocheminei Nomenklatūrai reikalavimus (European Journal of Biochemistry 138,9-37, 1984) arba trumpinama, kaip Įprasta. Esant junginių optiniams izomerams, naudojamas L-izomeras, jeigu kitaip nenurodyta .All other amino acid abbreviations are used according to the IUPACIUB Commission for Biochemical Nomenclature (European Journal of Biochemistry 138.9-37, 1984) or abbreviated as Normal. In the case of optical isomers of the compounds, the L-isomer is used unless otherwise stated.
Pagal šį išradimą peptidas (I) pasižymi LH-AH antagonistiniu aktyvumu ir efektyviai naudojamas nuo hormonų priklausančių susirgimų, tokių, kaip prostatos vėžys, prostatomegalija, endometriozė, histeromijoma, metrofiLT 3265 B bromą, ankstyvas lytinis subrendimas, pieno liaukų vėžys, gydymui, taip pat kaip kontraceptinė priemonė.The peptide (I) of the present invention exhibits LH-AH antagonistic activity and is effectively used in the treatment of hormone-dependent disorders such as prostate cancer, prostatomegaly, endometriosis, hysteromyoma, metrofiLT 3265 B bromine, early sexual maturation, mammary gland cancer. as a contraceptive.
Pagal formulę (I) acilo grupė X yra tinkama, kai gaunama iš karboksilinės rūgšties. Acilo grupės pavyzdžiai yra C2-7 alkanoilas, C7.15 cikloalkenoilas (pvz., cikloheksenoilas), C1.6 alkilkarbamoilas (pvz., etilokarbamoilas), 5- arba 6-naris heterociklinis karbonilas (pvz., piperidinokarbonilas) ir karbamoilo grupė, kuri nebūtinai turėtų būti pakeista. Tinkama acilo grupė yra C2.7 alkanoilo grupė (pvz., acetilo, propionilo, butirilo, izobutirilo, pentanoilo, heksanoilo ar heptanoilio), kuri nebūtinai turėtų būti pakeista, tinkamesnė C2.4 alkanoilo grupė (pvz., acetilo, propionilo, butirilo, izibutirilo), kuri nebūtinai turėtų būti pakeista. Pakaitai yra, pvz., Cx_6 alkilamino grupė (pvz., metilamino, etilamino, dietilamino, propilamino) , Cx_3 alkanoilo grupė (pvz., formilamino, acetiamino, propionilamino) , C7_15 cikloalkenoilo amino grupė (pvz., cikloheksenoilamino) , C7.15 arilkarbonilamino grupė (pvz., benzoilamino) 5- arba 6-narė heterociklinė karboksamido grupė (pvz., tetrahidrofurilkarboksamido, piridilkarboksamido, furilkarboksamido), hidroksilo grupė, karbamoilo grupė, formilo grupė, karboksilo grupė, 5- arba β-narė heterociklinė grupė (pvz., piridilo, morfolino). Tinkami pakaitai yra 5- arba β-narė heterociklinė karboksamido grupė (pvz., tetrahidrofurilkarboksamido, piridilkarboksamido, furilkarboksamido).According to formula (I), the acyl group X is suitable when obtained from a carboxylic acid. Acyl groups include C 2-7 alkanoyl, C 7th 15 cycloalkenoyl (e.g. cyclohexenoyl), C 1 . 6 alkylcarbamoyl (e.g. ethylocarbamoyl), 5- or 6-membered heterocyclic carbonyl (e.g. piperidinocarbonyl) and a carbamoyl group which does not necessarily need to be substituted. A suitable acyl group is C 2 . An alkanoyl group of 7 (e.g., acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, pentanoyl, hexanoyl or heptanoyl) which is not necessarily substituted is more preferably C 2 . 4 alkanoyl group (e.g., acetyl, propionyl, butyryl, isibutyryl) which is not necessarily substituted. It includes, for example. C x _ 6 alkylamino (eg., Methylamino, ethylamino, diethylamino, propylamino), C x _ 3 alkanoyl group (eg., Formylamino, acetiamino, propionylamino), C 7 _ 15 cikloalkenoilo amino group ( such as cyclohexenoylamino), C 7 . 15 arylcarbonylamino group (eg., Benzoylamino), 5- or 6-membered heterocyclic carboxamido group (eg., Tetrahidrofurilkarboksamido, piridilkarboksamido, furilkarboksamido) a hydroxyl group, a carbamoyl group, formyl group, carboxyl group, 5- or β-membered aromatic heterocyclic group ( e.g. pyridyl, morpholine). Suitable substituents include a 5- or β-membered heterocyclic carboxamide group (e.g., tetrahydrofurylcarboxamide, pyridylcarboxamide, furylcarboxamide).
X tinkamesnė yra C2.7 alkanoilo grupė, kuri nebūtinai turėtų būti pakeista 5- arba 6-nare heterocikline karboksamido grupe.X is more preferably C 2 . 7 alkanoyl group which is not necessarily substituted by a 5- or 6-membered heterocyclic carboxamide group.
X tinkamesnė C2.4 alkanoilo grupė, kuri nebūtinai turi būti pakeista tetrahidrofurilkarboksamido grupe.X more appropriate C 2 . 4 alkanoyl group which does not necessarily have to be replaced by tetrahydrofurylcarboxamide group.
Specifinai X pavyzdžiai yra acetilas.Specific examples of X are acetyl.
—OONHCH2CD- (tetrahidrofurilkarboksamidoacetilas) ir pan.—OONHCH 2 CD- (tetrahydrofurylcarboxamidoacetyl) and the like.
Aromatinė ciklinė Rx, R2 arba R4 grupė gali būti, pavyzdžiui, aromatinė ciklinė grupė iš 6-12 anglies atomų. Aromatinių ciklinių grupių pavyzdžiai yra fenilas, naftilas, antrilas ir pan. Tinkamos aromatinės ciklinės grupės iš 6-10 anglies atomų, tokios kaip fenilas ir naftilas. Šios aromatinės ciklinės grupės kiekviena gali turėti nuo 1 iki 5, geriau nuo 1 iki 3, tinkamus pakaitus atitinkamose žiedo vietose. Tokie pakaitai yra hidroksilas, halogenas, aminotriazolil pakeistas aminas, alkoksi ir pan. Geriau - hidroksi, halogenas ir aminotriazolil - pakeistas aminas.The aromatic cyclic group R x , R 2 or R 4 may be, for example, an aromatic cyclic group of 6 to 12 carbon atoms. Examples of aromatic cyclic groups are phenyl, naphthyl, anthryl and the like. Suitable aromatic cyclic groups of 6 to 10 carbon atoms such as phenyl and naphthyl. These aromatic cyclic groups may each have from 1 to 5, preferably from 1 to 3, suitable substituents on the corresponding ring sites. Such substituents include hydroxyl, halogen, aminotriazolyl substituted amine, alkoxy and the like. Preferably, hydroxy, halogen and aminotriazolyl substituted amine.
Aukščiau paminėtas halogenas yra fluorinas, chlorinas, brominas ir jodinas.The halogen mentioned above is fluorine, chlorine, bromine and iodine.
Minėto aminotriazolil - pakeisto amino aminotriazolio pusė įjungia tarp kitų 3-amino-lH-l,2,4-triazol-5-ilą1H-1,3,4-triazol-2-ilą, 5-amino-lH-l,2,4-triazol-3-ilą, 3-amino-2H-l,2,4-triazol-5-ilą, 4-amino-lH-l,2,3-triazol-5-ilą, 4-amino-2H-l, 2,3-triazol-5-ilą ir pan.The aminotriazole side of said aminotriazolyl-substituted amino activates, among other 3-amino-1H-1,2,4-triazol-5-yl, 1H-1,3,4-triazol-2-yl, 5-amino-1H-1,2, 4-triazol-3-yl, 3-amino-2H-1,2,4-triazol-5-yl, 4-amino-1H-1,2,3-triazol-5-yl, 4-amino-2H- 1,2,3-triazol-5-yl and the like.
Tinkama alkoksi grupė, susidedanti iš 1-6 anglies atomų (pvz., metoksi, etoksi, propoksi, izopropoksi, butoksi, izobutoksi ir t.t.).A suitable alkoxy group is 1 to 6 carbon atoms (e.g., methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy, etc.).
Labiau tinkamas Rx yra naftilas arba halofenilas. Labiau tinkamas R2 yra halofenilas. Labiau tinkamas R4 yra hidroksifenilas arba aminotriazolilamino pakeistas fenilas.More preferred R x is naphthyl or halophenyl. More preferred R 2 is halophenyl. More preferably R 4 is hydroxyphenyl or aminotriazolylamino substituted phenyl.
D-amino rūgšties liekana R3 tinkama α-D-amino rūgšties liekana iš 3-12 anglies atomų. Amino rūgščių pavyzdžiai uD-amino acid residue R 3 is a suitable α-D-amino acid residue of 3-12 carbon atoms. Examples of amino acids u
yra leucinas, izoleucinas, norleucinas, valinas, norvalinas, 2-aminobutirinė rūgštis, fenilalaninas, serinas, treoninas, metioninas, alaninas, triptofanas ir aminoizobutirinė rūgštis. Šios amino rūgštys gali turėti tinkamas apsaugines grupes (apsauginės grupės, minimos straipsnyje, yra t-butil, t-butoksi, t-butoksikarbonilas ir t.t.).are leucine, isoleucine, norleucine, valine, norvaline, 2-aminobutyric acid, phenylalanine, serine, threonine, methionine, alanine, tryptophan, and aminoisobutyric acid. These amino acids may have suitable protecting groups (the protecting groups mentioned in the article are t-butyl, t-butoxy, t-butoxycarbonyl, etc.).
Heterociklinę grupę R3 sudaro 5- arba 6-narės heterociklinės grupės, turinčios nuo 1 iki 2 azoto arba sieros atomų, kaip hetero-atomų, kurie nebūtinai turi susilydyti i, benzolo žiedą. Kaip būdingi gali būti paminėti tienilas, pirolilas, tiazolilas, izotiazolilas, imidazolilas, pirazolilas, piridilas, 3-piridilas, piridazinilas, pirimidinilas, pirazinilas, 3benzo {b} tienilas, 3-benzo{ b}-3-tienilas, indolilas, 2-indolilas, izoindolilas, ΙΗ-indazolilas, benzoimidazolilas, benzotiazolilas, kvinolilas, izokvinolilas ir 1.1. Ypač tinkamas R3' - piridilas arba 3-benzo {b} tienilas.The heterocyclic group R 3 is a 5- or 6-membered heterocyclic group containing 1 to 2 nitrogen or sulfur atoms as heteroatoms which do not necessarily have to be fused to a benzene ring. As examples may be mentioned thienyl, pyrrolyl, thiazolyl, isothiazolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, 3-pyridyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, 3-benzo {b} thienyl, 3-benzo {b} -3-thienyl, indolyl, 2- indolyl, isoindolyl, ΙΗ-indazolyl, benzoimidazolyl, benzothiazolyl, quinolyl, isoquinolyl and 1.1. Particularly suitable is R 3 '- pyridyl or 3-benzo {b} thienyl.
Aromatinės ciklinės R5 grupės gali būti tos pačios, kaip aromatinės ciklinės grupės Rx, R2 arba R4. Aromatinė ciklinė grupė gali turėti nuo 1 iki 5, geriau nuo 1 iki 3, tinkamus pakaitus atitinkamose žiedo pozicijose. Pakaitai gali būti tokie pat, kaip minėti pakaitai Rx, R2 arba R4. Ypač tinkamas pakaitas yra aminotriazolil - pakeistas aminas.Aromatic cyclic group R 5 may be the same as the aromatic cyclic group R x, R 2 or R 4th The aromatic cyclic group may have from 1 to 5, preferably from 1 to 3, suitable substituents at the respective ring positions. The substituents may be the same as the substituents R x , R 2 or R 4 mentioned above. A particularly suitable substitution is aminotriazolyl, a substituted amine.
O-Glikozilo R5 tinkama glikozilo grupė yra heksozė arba jos darinys. Kaip heksozė gali būti D-gliukozė, Dfruktozė, D-manozė, D-galaktozė, L-galaktozė ir 1.1. Kaip minėti dariniai gali būti ir deoksi cukrus (L- ir D-fukozė, D-kvinovozė, L-ramnozė ir kt.) bei amino cukrus (D-gliukozaminas, D-galaktozaminas ir kt.). Labiau tinkami deoksi cukrus (L- ir D-fukozė, DLT 3265 B kvinovozė, L-ramnozė ir kt.) . Tinkamiausia iš jų - Lramnozė.A suitable glycosyl group for O-Glycosyl R 5 is hexose or a derivative thereof. The hexose may be D-glucose, Dfructose, D-mannose, D-galactose, L-galactose and 1.1. Deoxy sugars (L- and D-fucose, D-quinovose, L-rhamnose, etc.) and amino sugars (D-glucosamine, D-galactosamine, etc.) may also be mentioned. Deoxy sugars (L- and D-fucose, DLT 3265 B quinovose, L-rhamnose, etc.) are more suitable. The most suitable of these is Lramnose.
Amino grupėje pakaitas, kuris nebūtinai turi būti 5 pakeistas, R'5 tarp kitų gali būti ir acilas, karbamoilas, kuris gali būti pakeistas acilu arba amidinu, o pastarasis gali būti vieną arba du kartus pakeistas alkilu.In the amino group, the substituent which does not necessarily have to be substituted, R'5, among others, may be acyl, carbamoyl, which may be substituted with acyl or amidine, and the latter may be substituted once or twice with alkyl.
Aukščiau minėtas acilas ir aukščiau minėto karbazoilo acilas yra nikotinoilas, furoilas, tenoilas ir t.t.The aforementioned acyl and the carbazoyl acyl mentioned above are nicotinoyl, furoyl, tenoyl and the like.
Aukščiau minėto mono- arba di-alkilamino, alkilo pusė yra tiesios grandinės arba šakotos grandinės alkilo grupės nuo 1 iki 4 anglies atomų, tai yra, metilas, etilas, propilas, izopropilas, butilas, izobutilas, sekbutilas ir tert-butilas ir t.t. Tinkamesnė alkilo pusė yra metilas arba etilas.The alkyl side of the above mono- or di-alkylamino, alkyl is a straight or branched chain alkyl group of 1 to 4 carbon atoms, i.e., methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, secbutyl and tert-butyl and the like. A preferred alkyl side is methyl or ethyl.
Amino grupės pakaitas, kuris nebūtinai turi būti pakeistas, R'6, yra alkilas ir amidinas, kuris gali būti vieną arba du kartus pakeistas alkilu.The amine substituent which does not need to be substituted, R'6, is alkyl and amidine which may be substituted once or twice with alkyl.
Aukščiau minėtas alkilas ir aukščiau minėto mono- arba dialkilamidino alkilas yra tokios alkilo grupės, kokios nurodytos Rs' .The above alkyl and alkyl of the aforementioned mono- or dialkylamidine are alkyl groups as defined for R s '.
D-amino rūgšties liekana R7 tinkama D-amino rūgšties liekana, turinti nuo 3 iki 9 anglies atomų, būtent, D30 alanilas, D-leucinas, D-valilas, D-izoleucilas, Dfenilalanilas ir 1.1. Labiau tinkamos amino rūgšties liekanos, turinčios nuo 3 iki 6 anglies atomų, būtent, D-alanilas, D-valilas ir 1.1. Tinkamiausia iš jų Dalanilas.D-amino acid residue R 7 is a suitable D-amino acid residue containing from 3 to 9 carbon atoms, namely, D 30 alanyl, D-leucine, D-valyl, D-isoleucyl, Dphenylalanyl and 1.1. More preferred amino acid residues having 3 to 6 carbon atoms, namely, D-alanyl, D-valyl and 1.1. The most suitable of these is Dalanil.
Žemesnio alkilo grupė Q gali būti alkilo grupė, kuri nurodyta Rs' . Tinkamiausia Q grupė yra metilas.The lower alkyl group Q may be an alkyl group represented by R s '. A preferred group Q is methyl.
Budingi Rx pavyzdžiai:Examples of R x are:
BūdingiCharacteristic
ir kt.etc.
R2 pavyzdžiai:Examples of R 2 :
ir kt.etc.
Budingi R3 pavyzdžiai:Examples of R 3 :
BudingiBuding
-NB-CH-CO(D)-NB-CH-CO (D)
R4 pavyzdžiai:Examples of R 4 :
-KB-Cfl-CO- ir kt.-KB-Cfl-CO- et al.
(D)(D)
ir kt.etc.
Būdingi R5 pavyzdžiai:Typical examples of R 5 are:
-(Cfi2)3-NH-CO-NH-NH-CO- (CH 2 ) 3 -NH-CO-NH-NH-CO
- CCH 2) 3-nh-co-nh-w-co-/Ą ~(CH2)3-NB2,- CCH 2) 3 -nh-co-nh-w-co- / - (CH 2 ) 3 -NB 2 ,
-(CH2)2-NE-C0-NS2 , -(CH2)3-NH-C0-NH2 nc2b5 - (CH 2 ) 2 -NE-CO-NS 2 , - (CH 2 ) 3 -NH-CO-NH 2 nc 2 b 5
-(CH2)3-NE-C-NB--C2H5 , ir kt.- (CH 2 ) 3 -NE-C-NB - C 2 H 5 , etc.
Būdingi R6 pavyzdžiai:Typical examples of R 6 are:
-(CB2)3-Nfi-CB' :b3 ή3 nh (CB2)2-NB-C-NB2 , nc2h5 - (CB 2 ) 3 -Nfi-CB ': b 3 ή 3 nh (CB 2 ) 2 -NB-C-NB 2 , nc 2 h 5
-(CH2)s-NB-C-NH-C2H5 ir kt.- (CH 2 ) s-NB-C-NH-C 2 H 5 and others.
Būdingi R7 pavyzdžiai:Typical examples of R 7 are:
Jeigu peptidas (I) turi vieną arba daugiau asimetrinių anglies atomų, susidaro du arba daugiau stereoizomerų. Tiek stereoizomerai, tiek jų mišinys yra taip pat šio išradimo tikslas.If peptide (I) has one or more asymmetric carbon atoms, two or more stereoisomers are formed. Both stereoisomers and mixtures thereof are also an object of the present invention.
Peptidas, kurio formulė (I) gaunamas žinomais būdais. Tipiškas gavimo būdas aprašytas JAV P Nr. 5110904.A peptide of formula (I) is obtained by known methods. A typical method of preparation is described in U.S. Pat. 5110904.
Peptidas (I) gali būti naudojamas druskos pavidalu, labiau priimtina farmacijai tinkama druska. Jei peptido bazinės grupės yra tokios kaip amino, tai susidarant druskoms, įjungiamos neorganinės rūgštys (pvz., druskos rūgštis, sieros rūgštis, azoto rūgštis ir kt.) arba organinės rūgštys (pvz., anglies rūgštis, hidrokarboninė rūgštis, sukcinilo rūgštis, acto rūgštis, propioninė rūgštis, trifluoracto rūgštis ir kt.). Jei peptidas turi rūgščias grupes, tokias, kaip karboksilas, tai druskos turi neorganines bazes (pvz., šarminius metalus, tokius kaip natris, kalis ir kt., ir šarminius žemės metalus, tokius kaip kalcis, magnis ir kt.) ir organines bazes (pvz., organinius aminus, tokius kaip trietilaminas tokias kaip argininas). kompleksinio junginio su kompleksinis junginys Tinkamesnės peptido ir bazines amino rūgštis,Peptide (I) may be used in the form of a salt, more preferably a pharmaceutically acceptable salt. In the case of peptide basic groups such as amino, inorganic acids (e.g. hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, etc.) or organic acids (e.g. carbonic acid, hydrocarbonic acid, succinic acid, acetic acid) are incorporated into the salts. , propionic acid, trifluoroacetic acid, etc.). If the peptide has acidic groups such as carboxyl, then the salts have inorganic bases (e.g., alkali metals such as sodium, potassium, etc., and alkaline earth metals such as calcium, magnesium, etc.) and organic bases ( such as organic amines such as triethylamine such as arginine). more complex peptide and basic amino acids,
Peptidas (I) gali būti metalu pavidalu (pvz., variu, su cinku ir kt.).The peptide (I) may be in the form of a metal (e.g. copper, zinc, etc.).
su organinėmis hidrokarboninė su druskos yra rūgštimis (pvz., anglies rūgštis, rūgštis, sukcinilo rūgštis, acto rūgštis, propioninė rūgštis, trifluoracto rūgštis ir kt.). Labiausiai tinkama yra acetatas.with organic hydrocarbon with salts are acids (e.g. carbonic acid, acid, succinic acid, acetic acid, propionic acid, trifluoroacetic acid, etc.). Most suitable is acetate.
Ypač tinkami peptidai (I) arba druskos:Particularly suitable peptides (I) or salts:
1) NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(Nic)-Leu-Lys (Nisp)-Pro-DAlaNH2 arba jo acetatas1) NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys (Nic) -Leu-Lys (Nisp) -Pro-DAlaNH 2 or its acetate
2) NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr=DLys(AzaglyNic)Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAlaNH2 arba jo acetatas2) NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr = DLys (AzaglyNic) Leu-Lys (Nisp) -Pro-DAlaNH 2 or its acetate
3) NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(AzaglyFur)Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAlaNH2 arba jo acetatas3) NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys (AzaglyFur) Leu-Lys (Nisp) -Pro-DAlaNH 2 or its acetate
4) ęUcONHCH2COD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyrDLys(Nic)-Leu-Lys-(Nisp)-Pro-DAlaNH2 arba jo acetatas4) OCONHCH 2 COD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyrDLys (Nic) -Leu-Lys- (Nisp) -Pro-DAlaNH 2 or its acetate
5) NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-Tyr-DhArg(Et2) -LeuhArg (Et2) -Pro-DAlaNH2 arba jo acetatas5) NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-Tyr-DhArg (Et 2 ) -LeuhArg (Et 2 ) -Pro-DAlaNH 2 or its acetate
Peptido (I) santykis nepertraukiamai atlaisviname preparate, be kitų faktorių, priklauso nuo peptido tipo, laukiamo farmakologinio efekto bei jo trukmės, ir sudaro apie 0.01-50% (w/w) nuo biodegraduojančio polimero kiekio. Tinkamos ribos yra apie 0.1-40% (w/w), o labiausiai tinkamos yra 1-30% (w/w).The ratio of peptide (I) in the sustained release formulation depends, among other factors, on the type of peptide, the expected pharmacological effect and its duration, and is about 0.01-50% (w / w) of the amount of biodegradable polymer. Suitable limits are about 0.1-40% (w / w), and most suitable are 1-30% (w / w).
Čia aprašomas polimeras, turintis galinę karboksilinę grupę.A polymer having a terminal carboxylic group is described herein.
Biodegraduojantis polimeras, apie 1-3 g, ištirpinamas acetono (25 ml), metanolo (5 ml) mišinyje, naudojant fenolftaleiną kaip indikatorių, tirpalo karboksilinės grupės greitai nutitruojamos 0.05 N spiritiniu kalio hidroksido tirpalu, pastoviai maišant kambario temperatūroje (20°C) . Molekulinių svorių vidurkių skaičius, pagal galinės grupės nustatymą, paskaičiuojamas pagal šią lygybę:The biodegradable polymer, about 1-3 g, was dissolved in a mixture of acetone (25 mL), methanol (5 mL) using phenolphthalein as indicator, and the carboxyl groups of the solution were rapidly titrated with 0.05 N potassium hydroxide solution under constant stirring at room temperature (20 ° C). The number of molecular weight averages, as determined by the terminal group, is calculated from the following equation:
Molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal galinės grupės nustatymą = 20000xA/B kur A yra biodegraduojančio polimero masė (g),Number of molecular weights as determined by the terminal group = 20000xA / B where A is the mass (g) of biodegradable polymer,
B yra nutitruotas 0.05 N spiritinio kalio hidroksido tirpalo kiekis (ml)B is the titrated volume (ml) of 0,05 N potassium hydroxide solution
Aukščiau nurodytas paskaičiavimas yra molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal galinės grupės nustatymą.The above calculation is the number of molecular weight averages as determined by the terminal group.
Tai galima pailiustruoti, kaip pavyzdį paėmus polimerą, turintį galinę karboksilo grupę, gaunamą nekatalitinės dehidratacinės polikondensacijos metu iš vienos arba daugiau α-hidroksi rūgščių, molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal galinės grupės nustatymą yra apytikriai lygus molekulinių svorių vidurkių skaičiui, nustatytam GPC. Priešingai, tuo atveju, kai polimeras neturi pakankamai laisvų galinių karboksilo grupių, susidarančių iš ciklinio dimero atviro žiedo polimerizacijos metu ir panaudojant katalizatorius, tada molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal galinių grupių nustatymą yra žymiai didesnis, negu molekulinių svorių vidurkių skaičius, nustatytas GPC. Pagal šį skirtumą polimeras, turintis galines karboksilinės grupes, gali būti aiškiai atskiriamas nuo polimero, neturinčio galinių karboksilo grupių. Taigi, čia naudojamas terminas biodegraduojantis polimeras, turintis galinę karboksilo grupę reiškia biodegraduojanti polimerą, kurio molekulinių svorių vidurkių skaičius, nustatytas GPC, pilnai atitinka molekulinių svorių vidurkių skaičių pagal galinių grupių nustatymą.This can be illustrated by taking, as an example, a polymer having a terminal carboxyl group obtained from non-catalytic dehydration polycondensation of one or more α-hydroxy acids, the number average molecular weights of the terminal group being approximately equal to the number of molecular weight averages determined by GPC. Conversely, when the polymer does not have enough free carboxyl terminus formed from the cyclic dimer during open-ring polymerization and using catalysts, the number of molecular weight averages determined by the terminal groups is significantly higher than the number of molecular weight averages determined by GPC. According to this difference, a polymer having a carboxyl-terminus may be clearly distinguished from a polymer having no carboxyl-terminus. Thus, as used herein, the term biodegradable polymer having a terminal carboxyl group refers to a biodegradable polymer having a number average molecular weight determined by GPC that fully corresponds to the number average molecular weight determined by the end group determination.
Jeigu molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal galinės grupės nustatymą yra absoliuti reikšmė, tai molekulinių svorių vidurkių skaičius, nustatytas GPC yra santykinė reikšmė, kuri priklauso nuo analitinių ir atlikimo sąlygų (tokių, kaip judrios fazės tipas ir kolonėlė, parenkama substancija, parenkamo pjūvio plotis, parinkta bazinė linija ir kt.) . Be to, dvi skaitmeninės reikšmės apibendrinant negali koreliuoti. Taigi, naudojant terminą, molekulinių svorių vidurkių skaičius, nustatytas GPC būdu pilnai atitinka molekulinių svorių vidurkių skaičių pagal galinės grupės nustatymą, reiškia, kad pastaruoju būdu nustatytas molekulinių svorių vidurkių skaičius yra 0.4-2 kartai, labiau tinkamas 0.5-2 kartai, labiausiai tinkamas 0.8-1.5 kartai, lyginant su GPC nustatytu molekulinių svorių vidurkių skaičiumi. Aukščiau panaudotas terminas, kad molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal galinės grupės nustatymą yra žymiai didesnis reiškia, kad jis yra du arba daugiau kartų didesnis, negu gautas GPC.If the number of molecular weight averages determined by the terminal group is absolute, then the number of molecular weight averages determined by GPC is a relative value that depends on analytical and performance conditions (such as mobile phase type and column, substance choice, slice width, baseline etc.). In addition, the two numerical values cannot be correlated in general. Thus, using the term, the number of molecular weight averages determined by GPC fully corresponds to the number of molecular weight averages as determined by the end group, meaning that the latter number of molecular weight averages is 0.4-2 times, more appropriate 0.5-2 times, most appropriate 0.8 -1.5 times the number of molecular weight averages determined by GPC. The term used above to mean that the number of molecular weight averages by the terminal group is significantly higher means that it is two or more times greater than the GPC obtained.
Šiame išradime siūlomas polimeras, kurio molekulinių svorių vidurkių skaičius, nustatytas GPC, pilnai atitinka molekulinių svorių vidurkių skaičių pagal galinės grupės nustatymą.The present invention provides a polymer having an average number of molecular weights as determined by GPC, which is fully consistent with the average number of molecular weights as determined by the terminal group.
Kaip būdingi pavyzdžiai biodegraduojančio polimero, turinčio galinę karboksilo grupę, gali būti paminėti polimerai ir kopolimerai, taip pat jų mišiniai, kurie nekatalitinės dehidratacinės polikondensacijos reakcijos metu sintezuojami iš vienos arba daugiau ahidroksi rūgščių rūšių (pvz., glikolinė rūgštis, pieno rūgštis, hidroksibutyrinė rūgštis ir kt.), iš hidroksidikarboksilinių rūgščių (pvz., obuolių rūgštis ir kt.), iš hidroksitrikarboksilinių rūgščių (pvz., citrinos rūgštis) ir t.t., poli-a-cianoakriliniai esterai, poliamino rūgštys (pvz., poli-y-benzil-Lglutaminė rūgštis ir kt.), obuolių rūgšties anhidrido kopolimerai (pvz., stirolo-maleininės rūgšties kopolimeras) ir t.t.Representative examples of a biodegradable polymer having a terminal carboxyl group include polymers and copolymers, as well as mixtures thereof, which are synthesized from one or more types of hydroxy acids (e.g., glycolic acid, lactic acid, hydroxybutyric acid, and the like) in a non-catalytic dehydration polycondensation reaction. etc.), from hydroxydicarboxylic acids (e.g. malic acid, etc.), from hydroxytricarboxylic acids (e.g. citric acid), etc., poly-a-cyanoacrylic esters, polyamino acids (e.g. poly-y-benzyl-). Lglutamic acid, etc.), copolymers of malic acid anhydride (e.g. styrene-maleic acid copolymer), etc.
Polimerizacija gali būti atsitiktinė, blokuota ir graft-polimerizacija. Kai bet kuriuose iš aukščiau minėtų α-hidroksi rūgščių, hidroksidikarboninių rūgščių ir hidroksitrikarboninių rūgščių molekulėje yra aktyvus optinis centras, gali būti naudojama bet kurios, tiek D-, tiek L- ir DL- formos.Polymerization can be random, blocked and graft-polymerization. When any of the aforementioned α-hydroxy acids, hydroxydicarboxylic acids and hydroxytricarboxylic acids have an active optical center in the molecule, any form of D-, L- and DL- can be used.
Biodegraduojantis polimeras, kurio galinė grupė yra karboksilas, tinkamas toks, kuriame yra (A) glikolio rūgšties ir hidroksikarboksilinės rūgšties kopolimero, kurio formulė:A biodegradable polymer having a carboxyl terminus suitable as such comprising a copolymer of (A) glycolic acid and hydroxycarboxylic acid having the formula:
RR
I (ii)I (ii)
HOCHCOOH kur R yra alkilo grupė nuo 2 iki 8 anglies atomų ir (B) polilaktinės rūgšties mišinys arba pieno rūgšties glikolio rūgšties kopolimeras.HOCHCOOH wherein R is an alkyl group of 2 to 8 carbon atoms and a mixture of (B) polylactic acid or a copolymer of lactic acid glycolic acid.
Pagal formulę (II) tiesios arba šakotos grandinės alkilo grupę nuo 2 iki 8 anglies atomų, kuri yra R, sudaro etilas, propilas, izopropilas, butilas, izobutilas, sek-butilas, tert-butilas, pentilas, izopentilas, neopentilas, tert-pentilas, 1-etilpropilas, heksilas, izoheksilas, 1,1-dimetilbutilas, 2,2-dimetilbutilas ir 2-etilbutilas. Iš jų tinkami tiesios arba šakotos grandinės alkilai nuo 2 iki 5 anglies atomų. Tinkamesni yra etilas, propilas, butilas ir izobutilas. Labiausiai tinkamas R yra etilas.According to formula (II), a straight or branched chain alkyl group of 2 to 8 carbon atoms which is R is ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, neopentyl, tert-pentyl. , 1-ethylpropyl, hexyl, isohexyl, 1,1-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl and 2-ethylbutyl. Of these, straight or branched chain alkyls of 2 to 5 carbon atoms are suitable. Ethyl, propyl, butyl and isobutyl are more suitable. Most preferred R is ethyl.
Hidroksikarboksilo rūgštis, kurios formulė (II), yra 2hidroksibutiro rūgštis, 2-hidroksivalerijono rūgštis,The hydroxycarboxylic acid of formula (II) is 2-hydroxybutyric acid, 2-hydroxy valeric acid,
2-hidroksi-3-metilbutiro? rūgštis, 2-hidroksikaprono rūgštis, 2-hidroksiizokaprono ir 2-hidroksikaprino rūgštis. Tinkamesnės yra 2-hidroksibutiro rūgštis, 2hidroksivalerijono rūgštis, 2-hidroksi-3-metil-butiro rūgštis ir 2-hidroksikaprono rūgštis. Labiausiai tinkama hidroksikarboksilo rūgštis, kurios formulė (II) yra 2-hidroksibutiro rūgštis. Kadangi šios hidroksikarboksilo rūgštys gali būti tiek D-, tiek L- ir D,L-junginiai, tinkamas D-/L- (mol%) santykis 75/2525/75 ribose. Labiau tinkama hidroksikarboksilo rūgštis, kai D-/L- (mol%) santykis 60/40-40/60 ribose. Labiausiai tinkama hidroksikarboksilo rūgštis, kai D/L- (mol%) santykis 55/45-45/55 ribose.2-hydroxy-3-methylbutyr? acid, 2-hydroxycaproic acid, 2-hydroxyisocaproic acid and 2-hydroxycapric acid. More preferred are 2-hydroxybutyric acid, 2-hydroxyvivaleric acid, 2-hydroxy-3-methyl-butyric acid, and 2-hydroxycaproic acid. Most preferred is hydroxycarboxylic acid of formula (II) which is 2-hydroxybutyric acid. Since these hydroxycarboxylic acids can be both D- and L- and D, L-compounds, a D- / L- (mol%) ratio within the 75/2525/75 range is suitable. Hydroxycarboxylic acid having a D- / L- (mol%) ratio of 60/40-40/60 is more suitable. Most preferred is hydroxycarboxylic acid with a D / L- (mol%) ratio of 55 / 45-45 / 55.
Pagal glikolio rūgšties ir minėtos hidroksikarboksilo rūgšties kopolimerą, kurio formulė (II) (toliau bus vadinama glikolio rūgšties kopolimeras), kopolimerizacijos tipas gali būti atsitiktinis, blokuotas arba graft-kopolimerizacija. Labiau tinkami yra atsitiktiniai kopolimerai.According to the copolymer of glycolic acid and said hydroxycarboxylic acid of formula (II) (hereinafter referred to as the glycolic acid copolymer), the type of copolymerization may be random, blocked or graft-copolymerization. Random copolymers are more suitable.
Hidroksikarboksilo rūgštys, kurių formulė (II), gali būti naudojamos vienos arba kombinacijoje.The hydroxycarboxylic acids of formula (II) may be used alone or in combination.
Glikolio rūgšties ir hidroksikarboksilo rūgšties (II) minėtame glikolio rūgšties kopolimere (A) tinkamas santykis yra apie 10-75 mol % nuo glikolio rūgšties ir hidroksikarboksilo rūgšties balanso. Labiau tinkamas kopolimeras, kuriame šis santykis yra 20-75 mol %. Tinkamiausias kopolimeras, kuriame yra šis santykis yra 40-70 mol %. Minėto glikolio rūgšties kopolimero molekulinio svorio vidurkis yra 2.000-50.000 ribose. Tinkamas vidurkis - 3.000-40.000 ribose. Tinkamesnis 8.000-30000 ribose. Tinkama dispersijos reikšmė (molekulinių svorių vidurkis/molekulinių svorių vidurkių skaičius) 1.2-4.0 ribose. Ypač tinkami kopolimerai, kurių dispersijos reikšmė 1.5-3.5 ribose.Glycolic acid and hydroxycarboxylic acid (II) in said glycolic acid copolymer (A) have a suitable ratio of about 10-75 mol% of glycolic acid to hydroxycarboxylic acid balance. A copolymer having a ratio of 20-75 mol% is more suitable. The preferred copolymer containing this ratio is 40-70 mol%. The said glycolic acid copolymer has an average molecular weight in the range of 2,000-50,000. A good average is between 3,000 and 40,000. More appropriate in the range of 8,000-30000. Valid dispersion value (average molecular weight / number average molecular weight) within the range 1.2-4.0. Particularly suitable copolymers having a dispersion value of 1.5-3.5.
Glikolio rūgšties kopolimeras (A) gali būti sintezuojamas pagal žinomą technologiją, pvz., pagal japonų atvirą paraišką patentui Nr. 28521/1986.The glycolic acid copolymer (A) can be synthesized according to known technology, e.g. 28521/1986.
Polilaktinė rūgštis, naudojama šiame išradime, gali būti L- ir D-junginiai arba bet kuris jų mišinys. Tinkamos tokios, kai D-/L-santykis (mol %) yra 75/2520/80 ribose. Labiau tinkamas polilaktinės rūgšties D/L- (mol %) santykis yra 60/40-25/75 ribose. Tinkamiausias polilaktinės rūgšties D-L- (mol %) santykis yra 55/45-25/75 ribose. Tinkamas polilaktinės rūgšties molekulinių svorių vidurkis 1,500-30,000 ribose, tinkamesnis 2,000-20,000 ribose ir tinkamiausias 3,000LT 3265 BThe polylactic acid used in the present invention can be L- and D-compounds or any mixture thereof. Suitable are those with a D / L ratio (mol%) within the 75/2520/80 range. A more preferred D / L- (mol%) ratio of polylactic acid is in the range of 60/40-25/75. A preferred ratio of D-L- (mol%) of polylactic acid is 55 / 45-25 / 75. Suitable mean molecular weights of polylactic acid are in the range of 1,500-30,000, more preferably in the range of 2,000-20,000, and most appropriate 3,000LT 3265 B
15,000 ribose. Polilaktinės rūgšties dispersijos reikšmė tinkama 1.2-4.0 ribose, tinkamesnė 1.5-3.5.15,000. The dispersion value for polylactic acid is in the range 1.2-4.0, more preferably 1.5-3.5.
Polilaktinė rūgštis gali būti sintezuojama dviem alternatyviniais būdais, būtent, laktido, kuris yra pieno rūgšties dimeras, atviro žiedo polimerizacijos būdu ir pieno rūgšties dehidratacinės polikondensacijos būdu. Šiame išradime naudojamos, palyginti, žemo molekulinio svorio, polilaktinės rūgšties gamybos tinkamas būdas, naudojant tiesioginę pieno rūgšties polikondensacijos dehidrataciją. Šis būdas aprašomas Japonijos atviroje paraiškoje patentui 28521/1986.Polylactic acid can be synthesized by two alternative methods, namely, open ring polymerization of lactide, which is a dimer of lactic acid, and polycondensation of lactic acid by dehydration. The present invention employs a suitable method for the production of relatively low molecular weight polylactic acid by direct dehydration of polycondensation of lactic acid. This method is described in Japanese Patent Application 28521/1986.
Šiame išradime farmacijai tinkamos glikolio rūgšties kopolimero (A) ir polilaktinės rūgšties (B) naudojamas santykis (A)/(B) (pagal svorį) yra 10/90-90/10 ribose. Tinkamas mišinio santykis 20/80-80/20 ribose. Tinkamiausias santykis 30/70-70/30 ribose. Jeigu proporcijoje arba (A), arba (B) yra per didelis, tai gautame preparate vaistus atlaisvinantis pavyzdys labai nesiskirs nuo pavyzdžio, gauto kai (A) arba (B) naudojami atskirai, todėl galima pasakyti, kad pavyzdį įmanoma gauti, naudojant tinkamą (A) ir (B) mišinį. Glikolio rūgšties kopolimero ir polilaktinės rūgšties degradacijos arba eliminavimo greitis žymiai priklauso nuo jų molekulinių svorių ir sudėties, bet apskritai, esant glikolio rūgšties kopolimero degradacijos ir eliminavimo greičiams santykinai per aukštiems, atlaisvinimo periodas gali būti prailginamas, padidinant polilaktinės rūgšties molekulinį svorį arba sumažinant mišinio santykį (A)/(B). Atvirkščiai, atlaisvinimo trukmė gali būti sutrumpinama, mažinant polilaktinės rūgšties molekulinį svorį arba padidinant mišinio (A)/(B) santykį. Toliau, atlaisvinimo trukmė gali būti reguliuojama, pakeitus rūšį arba santykinį hidroksikarboksilo rūgšties, kurios formulė (II), kiekį.In the present invention, the ratio (A) / (B) (by weight) used in the pharmaceutical glycolic acid copolymer (A) and polylactic acid (B) is in the range of 10 / 90-90 / 10. Suitable mixture ratio within the range 20/80-80/20. Preferred ratios are within the 30 / 70-70 / 30 range. If the ratio of either (A) or (B) is too high, the release formulation in the resulting formulation will not be very different from the one obtained when (A) or (B) is used alone, so that the sample can be obtained using a suitable ( A) and (B). The rate of degradation or elimination of the glycolic acid copolymer and the polylactic acid is significantly dependent on their molecular weights and composition, but generally, at relatively high rates of degradation and elimination of the glycolic acid copolymer, the release period can be extended by increasing the molecular weight of the polylactic acid. A) / (B). Conversely, the release time may be reduced by reducing the molecular weight of the polylactic acid or by increasing the mixture (A) / (B) ratio. Further, the release time can be adjusted by changing the species or relative amount of hydroxycarboxylic acid of formula (II).
Kai pieno rūgšties ir glikolio rūgšties kopolimeras naudojamas kaip biodegraduojantis polimeras, jo polimerizacijos santykis (pieno rūgštis/glikolio rūgštis) (mol %) tinkamas 100/0-40/60 ribose. Tinkamesnis santykis 90/10-50/50 ribose.When a copolymer of lactic acid and glycolic acid is used as a biodegradable polymer, its polymerization ratio (lactic acid / glycolic acid) (mol%) is suitable in the range 100/0 to 40/60. A ratio of 90 / 10-50 / 50 is more appropriate.
Minėto kopolimero molekulinių svorių vidurkis tinkamas 5,000-25,000 ribose. Labiau tinkamos ribos nuo 7,000 iki 20,000.The said copolymer has an average molecular weight in the range of 5,000-25,000. Better ranges from 7,000 to 20,000 are more appropriate.
Minėto kopolimero dispersijos laipsnis (molekulinių svorių vidurkis/molekulinių svorių vidurkių skaičius) tinkamas nuo 1.2 iki 4.0. Tinkamesnės ribos nuo 1.5 ikiThe degree of dispersion (average molecular weight / number average molecular weight) of said copolymer is in the range of 1.2 to 4.0. Better 1.5 to
3.5.3.5.
Aukščiau minėtas pieno rūgšties ir glikolio rūgšties kopolimeras gali būti sintezuojamas pagal žinomą technologiją, pavyzdžiui, pagal būdą, aprašytą Japo20 nijos atviroje paraiškoje patentui 28521/1986.The abovementioned copolymer of lactic acid and glycolic acid can be synthesized according to known technology, for example according to the method disclosed in Japanese Patent Application 28521/1986.
Pieno rūgšties ir glikolio rūgšties kopolimero suskaldymo ir išnykimo greitis labai priklauso nuo sudėties ir molekulinio svorio, bendrai paėmus, esant mažesnei glikolio rūgšties frakcijai, yra žemesnis suskaldymo ir išnykimo greitis. Taigi vaistų atlaisvinimo trukmė gali būti pratęsiama, sumažinant glikolio rūgšties frakciją arba padidinant molekulinį svorį. Atvirkščiai, atlaisvinimo trukmė gali būti sumažinama, padidinant glikolio rūgšties frakciją arba sumažinant molekulinį svorį. Prailginant nepertraukiamai atlaisvinamo preparato veikimą (pvz., iki 1-4 mėn.), tinkamas naudoti pieno rūgšties ir glikolio rūgšties kopolimeras, kurio polimerizacijos greitis yra aukščiau minėtose ribose ir tinkamas molekulinių svorių vidurkis taip pat aukščiau minėtose ribose. Jeigu pieno rūgšties ir glikolio rūgšties kopolimero suskaldymo greitis aukštesnis, negu aukščiau paminėto polimerizacijos santykio ir molekulinių svorių vidurkių ribos, tai sunku kontroliuoti pradinį skaldymą. Priešingai, jeigu pieno rūgšties ir glikolio rūgšties kopolimero suskaldymo greitis žemesnis, negu aukščiau minėto polimerizacijos santykio ir molekulinių svorių vidurkių ribos, tai susidarys periodai, per kuriuos nebus atlaisvinamas efektyvus vaistų kiekis.The degradation and extinction rates of the lactic acid and glycolic acid copolymer are highly dependent on the composition and molecular weight, and generally have a lower degradation and extinction rate at a lower glycolic acid fraction. Thus, the drug release time may be extended by reducing the glycolic acid fraction or by increasing the molecular weight. Conversely, the release time may be reduced by increasing the glycolic acid fraction or by reducing the molecular weight. For prolonged release (e.g. up to 1-4 months), a copolymer of lactic acid and glycolic acid having a polymerization rate within the above ranges and a suitable average molecular weight within the ranges mentioned above is suitable. If the cleavage rate of the lactic acid and glycolic acid copolymer is higher than the above mentioned polymerization ratio and molecular weight average, it is difficult to control the initial cleavage. Conversely, if the degradation rate of the lactic acid-glycolic acid copolymer is lower than the above-mentioned polymerization ratio and average molecular weight limits, there will be periods during which the effective amount of drug is not released.
Pagal šį išdėstymą molekulinio svorių vidurkis ir dispersijos laipsnis reiškia molekulinį svorį polistirolo sąlygomis, kaip nustatyta gelio pralaidumo chromatografija (GPC), naudojant 9 polistirolus, kurių molekulinių svorių vidurkiai sudaro 120,000, 52,000, 22,000, 9,200, 5,050, 2950, 1,050, 580 ir 162 ir dispersijos reikšmė skaičiuojama, atitinkamai panaudojant tą patą molekulinį svorį. Tai buvo nustatyta, naudojant GPC kolonėlę KF804Lx2 (Showa Denko), RI Monitor L-3300 (Hitachi) ir kaip judrią fazę naudojant chloroformą.In this arrangement, the molecular weight average and degree of dispersion represent the molecular weight under polystyrene conditions as determined by gel permeation chromatography (GPC) using 9 polystyrenes having average molecular weights of 120,000, 52,000, 22,000, 9,200, 5,050, 2950, 1,050, 580, and 162. and the value of the dispersion is calculated using the same molecular weight, respectively. This was determined using a GPC KF804Lx2 column (Showa Denko), RI Monitor L-3300 (Hitachi) and chloroform as the mobile phase.
Šio išradimo nepertraukiamai atlaisvinamas preparatas gaunamas, peptidą (I) ir biodegraduojantį polimerą, turintį galinę karboksilo grupę, ištirpinant tirpiklyje, nesimaišančiame pakankamai su vandeniu, ir tada pašalinant minėtą tirpiklį.The sustained release formulation of the present invention is obtained by dissolving the peptide (I) and the biodegradable polymer having the terminal carboxyl group in a solvent immiscible with water and then removing said solvent.
Tirpiklis, pakankamai nesimaišantis su vandeniu yra toks tirpiklis, kuris ne tik pakankamai nesimaišo su vandeniu ir sugeba ištirpinti biodegraduojantį polimerą, bet ir toks, kuris paverčia gautą polimero tirpalą sugebančiu ištirpinti peptidą (I). Tinkamas yra toks tirpiklis, kurio tirpumas vandenyje ne didesnis negu 3% (w/w) atmosferos temperatūroje (20°C). Tokio tirpiklio virimo taškas tinkamesnis ne aukštesnis negu 120°C. Taigi, tokie tirpikliai yra halogeninti angliavandeniliai (pvz., dichlormetanas, chloroformas, chloretanas, trichloretanas, anglies tetrachloridas ir pan.), alkilo eteriai iš 3 arba daugiau anglies atomų (pvz., izopropilo eteris ir pan.), riebalinės rūgšties alkilo esteris (iš 4 arba daugiau anglies atomų), (pvz., butilo acetatas), aromatiniai angliavandeniliai (pvz., benzolas, toluolas, ksilolas ir pan.) ir 1.1. Šie tirpikliai gali būti kombinuojami iš 2 arba daugiau rūšių. Labiau tinkami tirpikliai yra halogeninti angliavandeniliai (pvz., dichlormetanas, chloroformas, chloretanas, trichloretanas, anglies tetrachloridas ir pan.). Tinkamiausias yra dichlormetanas.A solvent which is immiscible with water is a solvent which is not only miscible with water and capable of dissolving a biodegradable polymer, but also one which renders the resulting polymer solution capable of dissolving the peptide (I). A solvent having a water solubility of not more than 3% (w / w) at atmospheric temperature (20 ° C) is suitable. The boiling point of such a solvent is preferably not higher than 120 ° C. Thus, such solvents include halogenated hydrocarbons (e.g., dichloromethane, chloroform, chloroethane, trichloroethane, carbon tetrachloride, etc.), alkyl ethers of 3 or more carbon atoms (e.g., isopropyl ether, etc.), an alkyl ester of a fatty acid (e.g. of 4 or more carbon atoms) (eg butyl acetate), aromatic hydrocarbons (eg benzene, toluene, xylene, etc.); and 1.1. These solvents can be combined from 2 or more species. More preferred solvents are halogenated hydrocarbons (e.g., dichloromethane, chloroform, chloroethane, trichloroethane, carbon tetrachloride, etc.). Dichloromethane is preferred.
Tirpiklio pašalinimas gali vykti si sistemoje žinomais būdais. Pavyzdžiui, išgarinant tirpiklį atmosferos slėgyje arba palaipsniui mažinant slėgį, pastoviai maišant propelerinių maišikliu arba magnetiniu maišikliu, arba išgarinant tirpiklį rotoriniame garintuve, kontroliuojant vakuumą.Removal of the solvent may be accomplished by methods known in the art. For example, evaporation of the solvent at atmospheric pressure or gradual reduction of pressure, constant stirring with a propeller stirrer or magnetic stirrer, or evaporation of the solvent in a rotary evaporator under vacuum control.
Pagal šį išradimą nepertraukiamai atlaisvinamo preparato gavimo būdas, tirpinant peptidą (I) biodegraduojantį polimerą, kuris turi galinę karboksilo grupę, reiškia pasiekti tokias sąlygas, kad gautame tirpale įprastoje temperatūroje (20°C) vizualiai nesimatytų neištirpusio peptido pastebimų liekanų. Šioje trikomponentinėje sistemoje, susidedančioje iš peptido (I), biodegraduojančio polimero ir tirpiklio, ištirpusio peptido kiekis, priklauso nuo galinių karboksilo grupių skaičiaus biodegraduojančio polimero svorio vienetui. Tuo atveju, kai peptido ir galinės karboksilo grupės santykis 1:1, teoriškai toks pat moliarinis peptido kiekis gali būti ištirpęs, kiek yra galinių karboksilo grupių. Tačiau apibendrinti yra sunku dėl tirpiklio, peptido molekulinio svorio ir biodegraduoj ančio polimero kombinacijos. Tačiau gaminant nepertraukiamai atlaisvinamą preparatą, peptido ištirpimas gali būti 0.1-100% ribose (w/w), tinkamos 1LT 3265 BAccording to the present invention, the process for preparing a sustained release formulation by dissolving a biodegradable polymer having peptide (I) having a carboxyl terminal end, is such that the resulting solution does not visually detect visible residues of the insoluble peptide at normal temperature (20 ° C). The amount of peptide dissolved in this ternary system consisting of peptide (I), biodegradable polymer, and solvent depends on the number of terminal carboxyl groups per unit weight of biodegradable polymer. In the case of a 1: 1 ratio of peptide to terminal carboxyl group, in theory, the same molar amount of peptide may be dissolved as there are terminal carboxyl groups. However, generalization is difficult due to the combination of solvent, molecular weight of the peptide and biodegradable polymer. However, for continuous release formulation, peptide dissolution may be in the range of 0.1-100% (w / w) suitable for
70% (w/w) ribos, tinkamiausios 2-50% (w.w) ribos, atsižvelgiant į biodegraduoj antį polimerą, ištirpintą tirpiklyje.70% (w / w), most preferably 2-50% (w.w) based on the biodegradable polymer dissolved in the solvent.
Toliau šis išradimas yra susijęs su nepertraukiamai atlaisvinamo preparato gavimo metodu, tirpinant biodegraduoj antį polimerą, kuris susideda iš (A) glikolio rūgšties ir hidroksikarboksilo rūgšties kopolimero, kurio formulėThe present invention further relates to a process for preparing a sustained release formulation by dissolving a biodegradable polymer consisting of a copolymer of (A) glycolic acid and hydroxycarboxylic acid of formula
R ho£hcooh kur R yra alkilo grupė nuo 2 iki 8 anglies atomų ir (B) polilaktinės rūgšties mišinio ir nepakankamai vandenyje tirpaus fiziologiškai aktyvaus peptido arba jo druskos, tirpiklyje, nepakankamai besimaišančiame su vandeniu, ir tada pašalinant minėtą tirpiklį.R ho £ hcooh wherein R is an alkyl group of a mixture of 2 to 8 carbon atoms and (B) a polylactic acid and a water-insoluble physiologically active peptide or salt thereof in a solvent miscible with water and then removing said solvent.
Fiziologiškai aktyvus nepakankamai vandenyje tirpus peptidas nėra ribojamas, jis gali būti natūraliai susidaręs peptidas, gali būti sintetinis arba pusiau sintetinis peptidas. Tinkami fiziologiškai aktyvūs peptidai, turintys vieną arba daugiau aromatinių grupių šoninėse grandinėse (pvz., grupės, susidariusios iš benzolo, naftalino, fenantreno, antraceno, piridino, pirolo, indolo ir pan.). Labiau tinkami fiziologiškai aktyvūs peptidai, turintys 2 arba daugiau aromatinių grupių šoninėse grandinėse. Ypač tinkami fiziologiškai aktyvūs peptidai, turintys 3 arba daugiau aromatinių grupių šoninėse grandinėse. Šios aromatinės grupės toliau gali būti pakeistos.The physiologically active water-insoluble peptide is not limited, it can be a naturally occurring peptide, it can be a synthetic or a semi-synthetic peptide. Suitable physiologically active peptides having one or more aromatic groups in the side chains (e.g., benzene, naphthalene, phenanthrene, anthracene, pyridine, pyrrole, indole, etc.). Physiologically active peptides having 2 or more aromatic groups in the side chains are more suitable. Physiologically active peptides having 3 or more aromatic groups in the side chains are particularly suitable. These aromatic groups may be further substituted.
Vandenyje nepakankamai tirpus fiziologiškai aktyvus peptidas, naudojamas šiame išradime, tinkamesnis toks, kurio tirpumas vandenyje ne didesnis kaip 1%, ir kuris susideda iš dviejų arba daugiau amino rūgščių ir molekulinis svoris 200-30000. Tinkamesnės molekulinio svorio ribos 300-20000, dar labiau tinkamesnės 50010000.The water-insoluble physiologically active peptide used in the present invention is more preferably one having a water solubility of up to 1% and consisting of two or more amino acids and a molecular weight of 200-30000. Molecular weight ranges of 300-20000 are more suitable, 50010000 are more suitable.
Fiziologiškai aktyvaus peptido pavyzdžiai paminėtini luteinizuojančių hormonų - atlaisvinančių hormonų (LHAH) antagonistai (JAV patentai Nr. 4,086,219, Nr. 4,124,577, Nr. 4,253,997 ir Nr. 4,317,815 ir pan.), insulinas, somatostatinas, somatostatino dariniai (JAV patentai Nr. 4,087,390, Nr. 4,093,574, Nr. 4,100,117, Nr. 4,253,998 ir pan.), augimo hormonas, prolaktinas, adrenokortikotropinis hormonas (ΑΚΤΗ), melanocitus stimuliuojantis hormonas (MSH), tiroidinio hormonoatlaisvinančio hormono druskos ir dariniai (žr. JP Kokai S-50-121273 ir S-52-116465), tiroidinis stimuliuojantis hormonas (TSH), luteinizuojantis hormonas (LH) , tolikulus stimuliuojantis hormonas (FSH), vazopresinas, vazopresino dariniai, oksitocinas, kalcitoninas, gastrinas, sekretinas, pankreoziminas, cholecistokininas, angiotenzinas, žmogaus placentos laktogenas, žmogaus choriono gonadotropinas (ŽCG), enkefalinai, enkefalino dariniai (JAV patentas Nr. 4,277,394, EP-A Nr. 31,567), endorfinas, kiotrifinas, tuftsinas, timopoetinas, timozinas, timostimulinas, užkrūčio liaukos humoralinis faktorius (ULHF), (FTS) ir jo dariniai (JAV patentas Nr. 4,229,439), kiti užkrūčio liaukos faktoriai, auglio nekrozės faktorius (ANF), kolonijas stimuliuojantis faktorius (KSF), motilinas, dinorfinas, bombezinas, neurotenzinas, ceruleinas, bradikininas, prieširdžiu natruretinis faktorius, nervų augimo faktorius, ląstelių augimo faktorius, neurotropinis faktorius, peptidai, turintys endotelinį antagonistinį aktyvumą (EP-A Nr. 436189, Nr. 457195 ir Nr. 496452, JP Kokai H-3-94692 ir 03-130299) ir šių fiziologiškai aktyvių peptidų fragmentai arba dariniai.Examples of physiologically active peptide include luteinising hormone-releasing hormone (LHAH) antagonists (U.S. Patents 4,086,219, 4,124,577, 4,253,997 and 4,317,815, etc.), insulin, somatostatin, somatostatin derivatives (U.S. Pat. No. 4,093,574, No. 4,100,117, No. 4,253,998, etc.), growth hormone, prolactin, adrenocorticotropic hormone (ΑΚΤΗ), melanocyte-stimulating hormone (MSH), salts and derivatives of thyroid hormone releasing hormone (see JP Kokai S-50-121273 and S-52-116465), thyroid stimulating hormone (TSH), luteinising hormone (LH), toliculin stimulating hormone (FSH), vasopressin, vasopressin derivatives, oxytocin, calcitonin, gastrin, secretin, pancreosimine, cholecystokinin, human angiotensin, , human chorionic gonadotropin (HCG), enkephalins, enkephalin derivatives (U.S. Patent No. 4,277,394, EP-A No. 31,567), endorphin, chiotrifin as, tuftsin, thymopoietin, thymosin, thymostimulin, thymus humoral factor (ULHF), (FTS) and its derivatives (U.S. Pat. 4,229,439), other thymus gland factors, tumor necrosis factor (ANF), colony stimulating factor (CSF), motilin, dynorphin, bombesin, neurotensin, cerulein, bradykinin, atrial natruretic factor, nerve growth factor, cell growth factor, neurotropic factor having endothelial antagonistic activity (EP-A Nos. 436189, 457195 and 496452, JP Kokai H-3-94692 and 03-130299) and fragments or derivatives of these physiologically active peptides.
Fiziologiškai aktyvių peptidų specifiniai pavyzdžiai gali būti fiziologiškai aktyvūs peptidai ir druskos, kurios yra luteinizuojančio hormono-atlaisvinančio hormono (LH-AH) antagonistai ir naudojami su hormonais susijusių ligų, tokių kaip prostatos vėžys, prostatinė hipertrofija, endometriozė, gimdos mioma, ankstyvas lytinis subrendimas, krūties vėžys ir kt., gydymui ir kaip kontraceptinė priemonė.Specific examples of physiologically active peptides may include physiologically active peptides and salts that are antagonists of luteinizing hormone releasing hormone (LH-AH) and are used in hormone-related diseases such as prostate cancer, prostatic hypertrophy, endometriosis, uterine subgenus, early sex. breast cancer, etc., for treatment and as a contraceptive.
Fiziologiškai aktyvus peptidas, naudojamas šiame išradime gali būti druskos pavidalu, tinkamesnė farmaciškai priimtina druska. Kai minėtas peptidas turi bazinę grupę, tokią, kaip amino, aukščiau minėta druska gali būti, pvz., druska su neorganine rūgštimi (pvz., druskos rūgštis, sieros rūgštis, azoto rūgštis ir pan.) arba su organine rūšimi (pvz., anglies rūgštis, angliavandenilio rūgštis, gintaro rūgštis, acto rūgštis, propioninė rūgštis, trifluoracto rūgštis ir pan.). Kai peptidas turi rūgščią grupę, tokią, kaip karboksilas, druska gali būti, pvz., su neorganine baze (pvz., šarminiais metalais tokiais, kaip natris, kalis, taip pat šarminiais žemės metalais, tokiais, kaip kalcis, magnis ir pan.) arba su organine baze (pvz., organiniais aminais, tokiais, kaip trietilaminas, taip pat bazinėmis amino rūgštimis, tokiomis, kaip argininas ir pan.). Peptidas gali būti kompleksinis su metalu junginys (pvz., kompleksas su variu, su cinku ir pan.).The physiologically active peptide used in the present invention may be in the form of a salt, more preferably a pharmaceutically acceptable salt. When said peptide contains a basic group such as amino, the above salt may be, for example, a salt with an inorganic acid (e.g., hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, etc.) or an organic species (e.g., carbon) acid, hydrocarbonic acid, succinic acid, acetic acid, propionic acid, trifluoroacetic acid, etc.). When the peptide has an acidic group such as carboxyl, the salt may be present, for example, with an inorganic base (e.g., alkaline metals such as sodium, potassium, as well as alkaline earth metals such as calcium, magnesium, etc.). or with an organic base (e.g., organic amines such as triethylamine as well as basic amino acids such as arginine, etc.). The peptide may be a complex compound with a metal (e.g., a complex with copper, zinc, etc.).
Fiziologiškai aktyvaus peptido arba jo druskos specifiniai pavyzdžiai nurodomi JAV patente Nr. 5110904, Journal of Medical Chemistry 34,2395-2402, 1991, Recent Results in Cancer Research 124, 113-136, 1992 ir kt. literatūroje.Specific examples of physiologically active peptide or salt thereof are disclosed in U.S. Pat. 5110904, Journal of Medical Chemistry 34,2395-2402, 1991, Recent Results in Cancer Research 124, 113-136, 1992 et al. in the literature.
Toliau tarp kitų gali būti paminėti fiziologiškai aktyvūs peptidai ir jų druskos, kurių formulė (I).Physiologically active peptides and their salts of formula (I) may be mentioned below.
Tačiau netgi kai fiziologiškai aktyvus peptidas yra vandenyje tirpus, jis gali būti paverčiamas netirpiu dariniu arba paverčiamas netirpia druska, kurios sudėtyje yra vandenyje netirpi rūgštis (pvz., pamoinė rūgštis, tanino rūgštis, stearino rūgštis, palmitino rūgštis ir pan.) ir tai panaudojama išradime.However, even when the physiologically active peptide is water soluble, it can be converted into an insoluble derivative or converted into an insoluble salt containing a water insoluble acid (e.g., pamoic acid, tannic acid, stearic acid, palmitic acid, etc.) and used in the invention. .
Šiame išradime preparate panaudojamo fiziologiškai aktyvaus peptido kiekis priklauso nuo peptido rūšies, laukiamo farmakologinio efekto, nuo pageidaujamo efekto trukmės ir t.t. Tačiau, paprastai naudojama tokia proporcija: 0.001-50% (w/w), tinkamesnė 0.01-40% (w/w), tinkamiausia 0.1-30% (w/w), lyginant su biodegraduojančiu polimeru.The amount of physiologically active peptide used in the formulation of the present invention will depend on the type of peptide, the expected pharmacological effect, the duration of the desired effect, and so on. However, the following proportions are generally used: 0.001-50% (w / w), more preferably 0.01-40% (w / w), most preferably 0.1-30% (w / w) compared to a biodegradable polymer.
Pagal šį metodą naudojamas tirpiklis yra toks pat, kaip aukščiau aprašytas.The solvent used in this method is the same as described above.
Tirpiklis gali būti pašalinamas aukščiau aprašytu būdu.The solvent may be removed as described above.
Šio išradimo nepertraukiamai atlaisvinamo preparato gavimo būdas yra mikroįkapsuliavimas, panaudojant vandens išdžiovinimo techniką arba fazės separavimo techniką, kuri aprašoma žemiau, arba šiems būdams analogišką techniką.The process for preparing the sustained release formulation of the present invention is by microencapsulation using a water drying technique or a phase separation technique described below, or an analogous technique.
Žemiau aprašomas būdas gali būti taikomas peptidui (I) arba vandenyje nepakankamai tirpiam fiziologiškai aktyviam peptidui, kuriame yra peptidas (I).The method described below can be applied to peptide (I) or to a water insoluble physiologically active peptide containing peptide (I).
Taigi, į biodegraduojančio polimero organiniame tirpiklyje tirpalą peptidas (I) pridedamas tokiu galiniu svorio santykiu, kaip aukščiau minėta, paruošiant organinio tirpiklio tirpalą, kuriame yra peptidas (I) ir biodegraduojantis polimeras.Thus, peptide (I) is added to the solution of the biodegradable polymer in an organic solvent at a final weight ratio as above to prepare an organic solvent solution containing the peptide (I) and the biodegradable polymer.
Dėl to biodegraduojančio polimero organiniame tirpiklyje koncentracija skiriasi priklausomai nuo biodegraduo j ančio polimero molekulinio svorio ir organinio tirpiklio tipo, bet paprastai parenkama 0.01-80% (w/w) ribose. Tinkamos ribos 0.1-70% (w/w). Labiausiai tinkamos ribos 1-60% (w/w).As a result, the concentration of the biodegradable polymer in the organic solvent varies depending on the molecular weight of the biodegradable polymer and the type of organic solvent, but is usually selected in the range of 0.01-80% (w / w). Suitable limits are 0.1-70% (w / w). Most suitable limits are 1-60% (w / w).
Taigi, šis organinio tirpiklio tirpalas, kuriame yra peptidas (I) ir biodegraduoj antis polimeras (aliejinė fazė), pridedamas į vandens fazę ir paruošiama A (aliejinė fazė) / V (vandens fazė) emulsija. Aliejinės fazės tirpiklis tada išgarinamas, ruošiant mikrokapsules. Pagal šį metodą paprastai vandens fazės tūris naudojamas 1-1000 kartų didesnis už aliejines fazės tūrą. Tinkamos ribos 2-5000 kartų, o tinkamiausios ribos 5-2000 kartų.Thus, this organic solvent solution containing the peptide (I) and the biodegradable polymer (oily phase) is added to the aqueous phase and an A (oily phase) / V (aqueous phase) emulsion is prepared. The oil phase solvent is then evaporated to prepare the microcapsules. In this method, the volume of the aqueous phase is usually used in the range of 1 to 1000 times the oil phase volume. Suitable limits are 2-5000 times and most appropriate limits are 5-2000 times.
Emulgatorius gali būti pridedamas į aukščiau minėtą vandens fazę. Emulgatorius paprastai gali būti bet kokia medžiaga, padedanti sudaryti stabilią A/V emulsiją. Tokiu būdu čia gali būti paminėtos anioninės paviršiaus aktyvios medžiagos (natrio oleatas, natrio stearatas, natrio laurilsulfatas ir pan.), neanioninės paviršiaus aktyvios medžiagos (polioksietileno-sorbito riebalinės rūgšties esteriai (Tween 80 ir Tween 60, Atlas milteliai), polioksietileno-ricinos aliejaus dariniai (HCO-60 ir HCO-50, Nikko chemikalai), polivinilpirolidonas, polivinilinis alkoholis, karboksimetilceliuliozė, lecitinas, želatina, hialuroninė rūgštis ir t.t. Šie emulgatoriai gali būti naudojami pavieniai ir deriniuose. Koncentracija gali būti parenkama 0.001-20% (w/w) ribose. Tinkamos ribos 0.0110% (w/w), tinkamiausios 0.05-5% (w/w).The emulsifier may be added to the aforementioned aqueous phase. The emulsifier can generally be any material that helps to form a stable A / V emulsion. Thus, anionic surfactants (sodium oleate, sodium stearate, sodium lauryl sulfate, etc.), non-anionic surfactants (polyoxyethylene sorbitol fatty acid esters (Tween 80 and Tween 60, Atlas powder), polyoxyethylene castor oil may be mentioned here. derivatives (HCO-60 and HCO-50, Nikko chemicals), polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, carboxymethylcellulose, lecithin, gelatin, hyaluronic acid, etc. These emulsifiers can be used singly and in combination. ), 0.0110% (w / w), 0.05-5% (w / w) being most suitable.
Susidariusios mikrokapsulės yra atstatomos centrifuguojant arba filtruojant ir praplaunant keliomis porcijomis distiliuoto vandens, kad pašalinti laisvą peptidą, tirpiklį ir emulgatorių nuo paviršiaus, tada vėl disperguoj ant distiliuotame vandenyje ar pan. ir liofilizuojant. Tada, jeigu reikia, mikrokapsulės yra kaitinamos, sumažinus slėgį, vėliau nuo visų mikro5 kapsulių pašalinamas vandens likutis ir organinis tirpiklis. Tinkamesnis būdas yra biodegraduojančio polimero mikrokapsulių kaitinimas prie temperatūros, kuri 5°C arba daugiau viršija vidutinę stiklo lydymosi temperatūrą, nustatytą pagal skanuojančio kalorimetro temperatūros padidėjimo nuo 10 iki 20°C/min. diferencialą, paprastai ne daugiau kaip 1 savaitę arba 2-3 dienas, tinkamesnis laikas ne daugiau negu 24 vai., po to, kai mikrokapsulės pasiekė nustatytą temperatūrą.The resulting microcapsules are reconstituted by centrifugation or filtration and washed with several portions of distilled water to remove free peptide, solvent, and emulsifier from the surface, then redispersed in distilled water or the like. and by lyophilization. The microcapsules are then heated, if necessary, under reduced pressure to remove any residual water and organic solvent from the microcapsules. A more preferred method is heating the biodegradable polymer microcapsules to a temperature of 5 ° C or more above the average melting point of the glass as determined by an increase in the temperature of the scanning calorimeter from 10 to 20 ° C / min. a differential, usually no more than 1 week or 2 to 3 days, more preferably 24 hours after the microcapsules have reached a set temperature.
Gaminant mikrokapsulės pagal fazės separavimo techniką, susiliejimo agentas yra palaipsniui pridedamas į minėto peptido (I) ir biodegraduojančio polimero organiniame tirpiklyje tirpalą, pastoviai maišant taip, kad biodegraduojantis polimeras galėtų atsiskirti ir sukietėti. Šis susiliejimo agentas yra pridedamas į tūrį, sudarantį 0.01-1000 kartų nuo peptido (I) ir biodegraduojančio polimero organiniame tirpiklyje tirpalo tūrio. Tinkamos ribos yra 0.05-500 kartų, o dar labiau tinkamesnės ribos 0.1-200 kartų.In the manufacture of microcapsules according to the phase separation technique, the crosslinking agent is gradually added to a solution of said peptide (I) and a biodegradable polymer in an organic solvent, with constant agitation such that the biodegradable polymer can separate and solidify. This crosslinking agent is added in a volume of 0.01 to 1000 times the volume of solution of the peptide (I) and the biodegradable polymer in the organic solvent. Suitable limits are 0.05-500 times, and even more suitable limits are 0.1-200 times.
Susiliejimo agentas turėtų būti polimerinis junginys, mineralinio aliejaus arba augalinio aliejaus tipas, kuris nesimaišo su biodegraduojančio polimero tirpikliu, ir dar neištirpina polimero. Kaip būdingi pavyzdžiai gali būti paminėti silikonas, kunžuto aliejus, sojos aliejus, medvilnės aliejus, kokoso aliejus, saulėgrąžų aliejus, mineralinis aliejus, nheksanas, n-heptanas ir pan. Šios medžiagos gali būti naudojamos deriniuose.The crosslinking agent should be a polymeric compound, a type of mineral oil or vegetable oil that does not mix with the solvent of the biodegradable polymer and does not dissolve the polymer yet. Typical examples include silicone, juniper oil, soybean oil, cotton oil, coconut oil, sunflower oil, mineral oil, n-hexane, n-heptane and the like. These materials can be used in combinations.
Gautos mikrokapsulės yra atstatomos filtruojant ir pakartotinai praplaunant su heptanu ar pan., pašalinant suliejimo agentą. Tada laisvas peptidas ir tirpiklis yra pašalinami tuo pačiu metodu, kaip aprašyta pagal vandens džiovinimo techniką.The resulting microcapsules are reconstituted by filtration and rinsing with heptane or the like to remove the fusing agent. The free peptide and solvent are then removed by the same method as described for water drying techniques.
Pagal džiovinimo vandens techniką arba susiliejimo techniką sukibimo inhibitorius pridedamas tam, kad apsaugoti dalelių sukibimą. Sukibimo inhibitoriai gali būti vandenyje tirpūs polisacharidai, tokie, kaip manitas, laktozė, gliukozė, krakmolas (pvz., kukurūzų krakmolas) ir kt., glicinas, tokie kaip fibrinas, kalogenas ir kt., neorganinės druskos, tokios, kaip natrio chloridas, natrio hidrofosfatas ir 1.1.According to the drying water technique or the adhesion technique, an adhesion inhibitor is added to protect the particle adhesion. The adhesion inhibitors may be water-soluble polysaccharides such as mannitol, lactose, glucose, starch (e.g. corn starch), etc., glycine such as fibrin, collagen, etc., inorganic salts such as sodium chloride, sodium. hydrophosphate and 1.1.
Gaminant mikrokapsules purkštuvinio džiovinimo metodu, minėtas peptido ir biodegraduojančio polimero organiniame tirpiklyje tirpalas yra leidžiamas rūko pavidalu per purkštuvą į purkštuvinės džiovyklos kamerą, nuo plonai pasiskirsčiusio skysčio lašelių per trumpą laiką išgarinant organinį tirpiklį, kad susidarytų plonos mikrokapsules. Purkštuvų tipai gali būti dviejų skysčių, veikiantys po slėgiu, rotaciniai ir 1.1. Naudingiau šiame procese minėto sukibimo inhibitoriaus vandeninį tirpalą purkšti iš kito purkštuvo, kad išvengti vidinio kapsulių sukibimo, laiką suderinant su minėto peptido (I) ir biodegraduojančio polimero organiniame tirpiklyje tirpalo išpurškimu.In microcapsule preparation by spray drying, said solution of the peptide and the biodegradable polymer in an organic solvent is injected through a nebulizer into a spray dryer chamber, evaporating from the droplets of finely divided liquid over a short period of time to form thin microcapsules. Sprayer types can be two-fluid, pressurized, rotary and 1.1. In this process, it is more advantageous to spray an aqueous solution of said adhesion inhibitor from another nebulizer to prevent internal adhesion of the capsules, adjusting the time to spraying a solution of said peptide (I) and a biodegradable polymer in an organic solvent.
Jeigu reikia, vandens likutis ir organinis tirpiklis yra pašalinami, kaitinant gautas mikrokapsules, sumažinus slėgi, aukščiau aprašytu būdu.If necessary, the residual water and the organic solvent are removed by heating the resulting microcapsules under reduced pressure as described above.
Mikrokapsules gali būti naudojamos tokiu pavidalu, kaip pagaminta, arba įvairių farmacinių preparatų pavidalu ne peroraliniais būdais (pvz., į raumenis, poodiniu būdu, vidine organų injekcija arba implantuojant, per nosį, per užpakalinės angos, gimdos gleivinės sistemas ir t.t.) arba oraliniu būdu (pvz., kietų preparatų, tokių kaip kapsulės, pavidalu) (tvirtos kapsulės, minkštos kapsulės ir pan.), granulių, miltelių pavidalu ir pan., skystų preparatų, tokių kaip sirupai, emulsijos, suspensijos ir pan. pavidalu.The microcapsules may be used as such or in the form of various pharmaceutical preparations for non-oral administration (eg intramuscular, subcutaneous, intravenous injection or implantation, nasal, posterior, uterine, etc.) or orally. (e.g., solid preparations such as capsules) (solid capsules, soft capsules, etc.), granules, powders, etc., liquid preparations such as syrups, emulsions, suspensions, and the like. in the form of.
Ruošiant mikrokapsules injekcijai, jos gali būti formuojamos, pavyzdžiui, su disperguoj ančių agentu (pvz., paviršiaus aktyvia medžiaga, tokia kaip Tween 80, HCO-60 ir pan., karboksimetilceliulioze, polisacharidu, tokiu kaip natrio alginatas ir pan.), konservantais (pvz., metilparabenu, propilparabenu ir pan.) arba izotoniniu agentu (pvz., natrio chloridu, manitu, sorbitu, gliukoze ir pan.), paruošiant vandeninį tirpalą, arba jos gali būti disperguojamos augaliniame aliejuje, tokiame kaip kunžuto aliejus, kukurūzų aliejus arba pan., ir aliejaus suspensiją panaudojant kontrolinei atlaisvinimo injekcijai.In preparing the microcapsules for injection, they may be formulated, for example, with a dispersing agent (e.g., a surfactant such as Tween 80, HCO-60, etc., carboxymethylcellulose, a polysaccharide such as sodium alginate, etc.), preservatives ( (e.g., methylparaben, propylparaben, etc.) or an isotonic agent (e.g., sodium chloride, mannitol, sorbitol, glucose, etc.) in aqueous solution, or they may be dispersed in a vegetable oil such as juniper oil, corn oil, or etc., and using the oil suspension for a controlled release injection.
Tokių injekcinių suspensijų mikrokapsulių dalelių dydis turi patenkinti dispersiškumo ir adatos praeinamumo reikalavimus ir gali būti 0.1-500 ųm ribose. Tinkamas dalelių dydis yra 1-300 μιη ribose, tinkamiausias 2-200 μτη ribose.The microcapsule particle size of such injection suspensions must meet the dispersion and needle penetration requirements and may be in the range of 0.1 to 500 µm. A suitable particle size is in the range of 1-300 μιη, most preferably in the range of 2-200 μτη.
Kad mikrokapsules būtų sterilus produktas, tam yra visas sterilumo kontrolės procesas, mikrokapsules yra sterilinamos γ spinduliais arba pridedamas konservuojantis agentas, nors tai nėra išskirtinės procedūros .To make a microcapsule a sterile product, it has the entire sterility control process, γ-ray sterilization or the addition of a preservative agent, although these are not exceptional procedures.
Be aukščiau paminėtų mikrokapsulių, biodegraduojančio polimero junginys, kurio sudėtyje yra aktyvus peptidas, gali būti gerai disperguotas, tinkamu būdu ištirpintas ir paverstas sferinės, lazdelės, adatos, rutuliuko, plėvelės forma, norint gauti šio išradimo nepertraukiamai atlaisvinamą preparatą. Aukščiau minėtas biodegraduojančio polimero junginys gali būti gaunamas metodu, aprašytu JP Publikacija S-50-17525. Kad veikimas būtų specifinis, peptidas vaistas ir polimeras yra ištirpinami tirpiklyje, ir po to tirpiklis pašalinamas atitinkamu būdu (pvz., džiovinant purškimu, išgarinant ir pan.), siekiant gauti norimą biodegraduojančio polimero junginį.In addition to the above-mentioned microcapsules, the biodegradable polymer compound containing the active peptide may be well dispersed, conveniently dissolved and converted into a spherical, stick, needle, bead, film to form a sustained release formulation of the present invention. The above biodegradable polymer compound can be obtained by the method described in JP Publication S-50-17525. For specific activity, the peptide drug and polymer are dissolved in a solvent and then removed by appropriate means (e.g., spray drying, evaporation, etc.) to provide the desired biodegradable polymer compound.
Šio išradimo nepertraukiamai atlaisvinamas preparatas gali būti įvedamas į raumenis, po oda arba injekcija į vidaus organus arba implantuojant per vidinę gleivinės sistemą, pritaikant nosies ertmės, užpakalinės angos arba gimdos gleivinės sistemą, taip pat preparatas gali būti naudojamas oraliniu būdu ( tai kietas preparatas, toks kaip kapsulė (pvz., kieta arba minkšta), granulės milteliai ir pan. arba skystas preparatas, toks kaip sirupas, emulsija, suspensija, ir pan.} .The sustained release formulation of the present invention may be administered intramuscularly, subcutaneously, or by injection into the internal organs, or by implantation through the internal mucosal system, nasal cavity, posterior or uterine mucosal system, or the oral preparation (such as a solid preparation such as as a capsule (e.g. hard or soft), granule powder, etc. or a liquid preparation such as a syrup, emulsion, suspension, etc.}.
Šio išradimo nepertraukiamai atlaisvinamas preparatas yra mažai toksiškas ir gali būti panaudojamas žinduoliams (pvz., žmogui, galvijams, kiaulėms, šunims, katėms, žiurkėms ir triušiams).The sustained release formulation of the present invention is of low toxicity and can be used in mammals (e.g., humans, cattle, pigs, dogs, cats, rats and rabbits).
Nepertraukiamai atlaisvinamo preparato dozė priklauso nuo aktyvaus vaistinio peptido tipo ir sudėties, galutinės dozavimo formos, nuo peptido atlaisvinimo trukmės, gydymo objekto (su hormonais susijusių ligų, tokių kaip prostatos vėžys, prostatomegalija, endometriozė, metrofibroma, išankstinis lytinis subrendimas, pieno liaukų vėžys ir pan. arba kaip kontraceptinė priemonė), nuo gydymo subjekto rūšies, tačiau bet kuriuo atveju būtina, kad efektyvus peptido kiekis būtų panaudojamas. Aktyvaus vaistinio peptido vienetinė dozė, imant, pvz., paskirstymo sistemą 1 mėn., tai naudingesnė dozė, kai parenkamos ribos nuo 0.01 iki 100 mg/kg kūno svorio suaugusiam žmogui. Tinkama dozė 0.05LT 3265 B mg/kg kūno svorio. Labiausiai tinkamos ribos 0.1-10 mg/kg kūno svorio.The dosage of a sustained release formulation depends on the type and composition of the active drug peptide, the final dosage form, the duration of peptide release, the subject being treated (hormone-related diseases such as prostate cancer, prostatomegaly, endometriosis, metrofibroma, premature sexual maturation, mammary gland cancer or as a contraceptive), depending on the type of subject being treated, but in any case an effective amount of the peptide is required. A unit dose of the active drug peptide, for example, for a 1 month delivery system, is a more useful dose when the range is 0.01 to 100 mg / kg for an adult. Appropriate dose 0.05LT 3265 B mg / kg body weight. The most suitable range is 0.1-10 mg / kg body weight.
Nepertraukiamai atlaisvinimo preparato vienetinė dozė suaugusiam žmogui gali būti parenkama nuo 0.1 iki 500 mg/kg kūno svorio. Tinkama dozė 0.2-300 mg/kg kūno svorio. Vartojimo dažnumas gali būti, pavyzdžiui, kartą per keletą savaičių, mėnesį arba kartą per keletą mėnesių ir parenkamas priklausomai nuo aktyvaus vaistinio peptido tipo ir sudėties, galutinės dozavimo formos, nustatytos peptido atlaisvinimo trukmės, įveikiamos ligos ir gydomo subjekto.The dosage unit for continuous release in an adult can be selected from 0.1 to 500 mg / kg body weight. A suitable dose is 0.2-300 mg / kg body weight. Frequency of administration may be, for example, once every few weeks, monthly or once every several months, depending on the type and composition of the active drug peptide, the final dosage form, the duration of peptide release, the disease to be treated and the subject being treated.
Šiomis nuorodomis ir darbo pavyzdžiais stengiamasi toliau išsamiau aprašyti išradimą ir turi būti taip pat nagrinėjami kaip apibrėžiantys išradimo tikslą. (Jeigu kitaip nenurodyta, % reiškia % pagal svorį).The following references and working examples are intended to further illustrate the invention in more detail and should also be understood as defining the object of the invention. (Unless otherwise stated,% means% by weight).
Išradime naudojamų sutrumpinimų reikšmės:The abbreviations used in the present invention have the following meanings:
BOC: tert-butoksikarbonilasBOC: tert-butoxycarbonyl
FMOC: 9-fluorenilmetoksikarbonilasFMOC: 9-fluorenylmethoxycarbonyl
Cbz: BenziloksikarbonilasCbz: Benzyloxycarbonyl
Nuorodos 1 pavyzdysReferences Example 1
Į 1000 ml keturiais kakleliais kolbą, kurioje įleistas vamzdelis azotui ir kondensatorius, buvo pridedama 300 g 90% vandeninio D,L-pieno rūgšties tirpalo ir 100 g 90% vandeninio L-pieno rūgšties tirpalo, ir visa tai, sumažinus slėgį, azoto dujų srovėje kaitinama nuo 100°C/500 mmHg iki 150°C/30 mmHg 4 vai., pastoviai pašalinant nudistiliuotą vandenį. Reakcijos mišinys toliau kaitinamas, sumažinus slėgį, prie 3-5 mmHg/150LT 3265 BTo a 1000 mL four-necked flask with a nitrogen tube and a condenser was added 300 g of 90% aqueous D, L-lactic acid solution and 100 g of 90% aqueous L-lactic acid solution, all under reduced pressure in a stream of nitrogen gas. heated at 100 ° C / 500 mmHg to 150 ° C / 30 mmHg for 4 hours with constant removal of distilled water. The reaction mixture was further heated under reduced pressure to 3-5 mmHg / 150LT 3265 B
180°C 7 vai., kad susidarytų gintarinės spalvos polilaktinė rūgštis.180 ° C for 7 hours to form an amber-colored polylactic acid.
Šis polimeras buvo ištirpinamas 1000 ml dichlormetano, ir tirpalas supilamas į karštą 60°C vandenį, pastoviai maišant. Susidariusios pastos pavidalu polimerinės dalelės buvo surenkamos ir išdžiovinamos vakuume prie 30°C temperatūros.This polymer was dissolved in 1000 ml of dichloromethane and the solution was poured into hot water at 60 ° C with constant stirring. The resulting paste polymer particles were collected and dried under vacuum at 30 ° C.
Aukščiau gautos polilaktinės rūgšties molekulinių svorių vidurkis ir molekulinių svorių vidurkių skaičius, kaip nustatyta GPC, ir molekulinių svorių vidurkių skaičius, kaip nustatyta pagal galinę grupę, buvo 3,000; 1,750; ir 1,297 atitinkamai.The mean molecular weight and number of molecular weight averages of the polylactic acid obtained above as determined by the GPC and the number of molecular weight averages determined by the terminal group were 3,000; 1,750; and 1,297 respectively.
Šie duomenys rodo, kad polimeras turi galines karboksilo grupes.These data indicate that the polymer has carboxyl end groups.
Nuorodos 2 pavyzdysReferences Example 2
Į 1000 ml su 4 kakleliais kolbą, į kurią įleistas vamzdelis azotui ir kondensatorius, buvo pridedama 500 g 90% vandeninio D,L-pieno rūgšties tirpalo ir visa tai, sumažinus slėgį, azoto dujų srovėje kaitinama nuo 100°C/500 mmHg iki 150°C/30 mmHg 4 vai., pastoviai pašalinant nudistiliuotą vandenį. Tada reakcijos mišinys toliau kaitinamas, sumažinus slėgį, prie 3-5 mmHg/150-180°C 12 vai., po to atšaldoma, ir susidaro gintarinės spalvos polilaktinė rūgštis.500 g 90% aqueous D, L-lactic acid solution were added to a 1000 ml 4-necked flask with nitrogen and the condenser heated to 100 ° C / 500 mmHg to 150 ° C under nitrogen pressure. ° C / 30 mmHg for 4 hours with constant removal of distilled water. The reaction mixture was then further heated under reduced pressure at 3-5 mmHg / 150-180 ° C for 12 hours, then cooled to give amber polylactic acid.
Šis polimeras ištirpinamas 1000 ml dichlormetano, tirpalas supilamas į karštą 60°C temperatūros vandenį, pastoviai maišant. Susidariusios pastos pavidalu polimero dalelės surenkamos ir išdžiovinamos vakuume 30°C temperatūroje.This polymer is dissolved in 1000 ml of dichloromethane and the solution is poured into hot water at 60 ° C with constant stirring. The resulting paste polymer particles are collected and dried under vacuum at 30 ° C.
Aukščiau minėtos polilaktinės rūgšties molekulinių svorių vidurkis ir molekulinių svorių vidurkių skaičius, kaip nustatyta GPC, ir molekulinių svorių vidurkių skaičius, nustatytas pagal galinę grupę, buvo atitinkamai 5,000; 2,561; ir 1,830.The average molecular weight and number of molecular weight averages of the above polylactic acid as determined by the GPC and the number of molecular weight averages determined by the terminal group were 5,000, respectively; 2,561; and 1,830.
Šie duomenys rodo, kad polimeras turi galines karboksilo grupes.These data indicate that the polymer has carboxyl end groups.
Nuorodos 3 pavyzdysReferences Example 3
Į 1000 ml su 4 kakleliais kolbą, į kurią įleistas vamzdelis azotui ir kondensatorius, buvo pridedama 300 g 90% vandeninio D,L-pieno rūgšties tirpalo ir 100 g 90% vandeninio D,L-pieno rūgšties tirpalo, ir visa tai, sumažinus slėgį, azoto dujų srovėje kaitinama nuo 100°C/500 mmHg 150°C/30 mmHg 5 vai., pastoviai pašalinant nudistiliuotą vandenį. Reakcijos mišinys prie sumažinto slėgio toliau kaitinamas 18 vai. 5-7 mmHg/15Q-180°C, po to atšaldoma, ir susidaro gintarinės spalvos polilaktinė rūgštis.300 g 90% aqueous D, L-lactic acid solution and 100 g 90% 90% aqueous D, L-lactic acid solution were added to a 1000 ml 4-necked nitrogen flask and condenser, all this under reduced pressure. , is heated at 100 ° C / 500 mmHg to 150 ° C / 30 mmHg for 5 hours in a stream of nitrogen gas, continuously removing distilled water. The reaction mixture was heated under reduced pressure for 18 hours. 5-7 mmHg / 15Q-180 ° C, then cooled to give amber-colored polylactic acid.
Šis polimeras ištirpinamas 1000 ml dichloretano, ir tirpalas pilamas į karštą 60°C temperatūros vandenį, pastoviai maišant. Susidariusi polimero dalelių pasta surenkama ir išdžiovinama vakuume 30°C temperatūroje.This polymer is dissolved in 1000 ml of dichloroethane and the solution is added to hot water at 60 ° C with constant stirring. The resulting polymer particle paste is collected and dried under vacuum at 30 ° C.
Aukščiau minėtos polilaktinės rūgšties molekulinių svorių vidurkis ir molekulinių svorių vidurkių skaičius, kaip nustatyta GPC, ir molekulinių svorių vidurkių skaičius, nustatytas pagal galinę grupę, buvo atitinkamai 7,500; 3,563; ir 2,301.The mean molecular weight and number of molecular weight averages of the above polylactic acid as determined by the GPC and the number of molecular weight averages determined by the terminal group were 7,500, respectively; 3,563; and 2,301.
Šie duomenys rodo, kad polimeras turi galines karboksilo grupes.These data indicate that the polymer has carboxyl end groups.
Nuorodos 4 pavyzdysReferences Example 4
Į 1000 ml su 4 kakleliais, į kurią įleistas vamzdelis azotui ir kondensatorius, pridedama 300 g 90% vandeninio D,L-pieno rūgšties tirpalo ir 100 g 90% vandeninio L-pieno rūgšties tirpalo, visa tai prie sumažinto slėgio azoto dujų srovėje 5 vai. kaitinama nuo 100°C/500mmHg iki 150°C, pastoviai pašalinant nudistiliuotą vandenį. Reakcijos mišinys prie sumažinto slėgio toliau kaitinamas 26 vai. prie 5-7 mmHg/150180°C, po to šaldomas ir susidaro gintarinės spalvos polilaktinė rūgštis.To 1000 ml of 4-necked nitrogen inlet tube and condenser add 300 g of 90% aqueous D, L-lactic acid solution and 100 g of 90% aqueous L-lactic acid solution, all under reduced pressure in a stream of nitrogen gas for 5 hours. . heated from 100 ° C / 500mmHg to 150 ° C with constant removal of distilled water. The reaction mixture was heated under reduced pressure for 26 h. at 5-7 mmHg / 150180 ° C, then cooled to form an amber-colored polylactic acid.
Šis polimeras ištirpinamas 1000 ml dichlormetane, ir tirpalas pilamas į karštą 60°C temperatūros vandenį, pastoviai maišant. Susidariusi polimero dalelių pasta surenkama ir išdžiovinama vakuume 30°C temperatūroje.This polymer is dissolved in 1000 ml of dichloromethane and the solution is added to hot water at 60 ° C with constant stirring. The resulting polymer particle paste is collected and dried under vacuum at 30 ° C.
Aukščiau minėtos polilaktinės rūgšties molekulinių svorių vidurkis ir molekulinių svorių vidurkių skaičius, kaip nustatyta GPC, ir molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal galinę grupę, buvo atitinkamai 9, 000, 3, 803; ir 2,800 .The mean molecular weight and number of molecular weight averages of the above polylactic acid as determined by GPC and number of molecular weight averages by terminal group were 9,000, 3, 803, respectively; and 2,800.
Šie duomenys rodo, kad polimeras turi galines karboksilo grupes.These data indicate that the polymer has carboxyl end groups.
Nuorodos 5 pavyzdysReferences Example 5
Į 1000 ml su 4 kakleliais kolbą, į kurią įleistas vamzdelis azotui ir kondensatorius, įdedama 182.5 g glikolio rūgšties ir 166.6 g D, L-2-hidroksibutiro rūgšties, visa tai prie sumažinto slėgio azoto dujų srovėje 4 vai. kaitinama nuo 100°C/500 mmHg iki 155°C/30 mmHg, pastoviai pašalinant distiliuotą vandenį. Reakcijos mišinys prie sumažinto slėgio toliau kaitinamas 27 vai. 3-6 mmHg/150-185°C, po to atšaldomas, ir susidaro gintarinės spalvos glikolio rūgšties-2-hidroksibutiro rūgšties kopolimeras.Place 182.5 g of glycolic acid and 166.6 g of D, L-2-hydroxybutyric acid in a 1000 ml 4-necked flask with a nitrogen tube and a condenser, all at reduced pressure in a stream of nitrogen for 4 hours. heated from 100 ° C / 500 mmHg to 155 ° C / 30 mmHg with constant removal of distilled water. The reaction mixture was heated under reduced pressure for 27 hours. 3-6 mmHg / 150-185 ° C, then cooled to form an amber-colored copolymer of glycolic acid-2-hydroxybutyric acid.
Šis polimeras ištirpinamas 1000 ml dichlormetano, ir tirpalas pilamas į karštą 60°C temperatūros vandenį, pastoviai maišant. Susidariusi polimero dalelių pasta surenkama ir išdžiovinama vakuume 25°C temperatūroje.This polymer is dissolved in 1000 ml of dichloromethane and the solution is added to hot water at 60 ° C with constant stirring. The resulting polymer particle paste is collected and dried under vacuum at 25 ° C.
Susidariusio glikolio rūgšties-2-hidroksibutiro rūgšties kopolimero molekulinių svorių vidurkis, kaip nustatyta GPC, buvo 13,000.The resulting glycolic acid-2-hydroxybutyric acid copolymer had an average molecular weight as determined by the GPC of 13,000.
Nuorodos 6 pavyzdysReferences Example 6
Į 1000 ml su 4 kakleliais kolbą, į kurią įleistas vamzdelis azotui ir kondensatorius, įdedama 197.7 g glikolio rūgšties ir 145.8 g D, L-hidroksibutiro rūgšties, visa tai prie sumažinto slėgio, azoto dujų srovėje 4 vai. kaitinama nuo 100°C/500 mmHg iki 155°C/30 mmHg, pastoviai pašalinant nudistiliuotą vandenį. Reakcijos mišinys toliau prie sumažinto slėgio 27 vai. kaitinamas 3-6 mmHg/150-185°C, vėliau atšaldomas, ir susidaro gintarinės spalvos glikolio rūgšties-2hidroksibutiro rūgšties kopolimeras.Add 197.7 g of glycolic acid and 145.8 g of D, L-hydroxybutyric acid, all at reduced pressure, under a stream of nitrogen gas for 4 hours to a 1000 ml 4-necked flask with a nitrogen tube and a condenser. heated from 100 ° C / 500 mmHg to 155 ° C / 30 mmHg with constant removal of distilled water. The reaction mixture was kept under reduced pressure for 27 h. heated to 3-6 mmHg / 150-185 ° C, then cooled to form an amber-colored glycolic acid-2-hydroxybutyric acid copolymer.
Šis kopolimeras ištirpinamas 1000 ml dichlormetano, ir tirpalas supilamas į karštą 60°C vandenį, pastoviai maišant. Susidariusi polimero dalelių pasta surenkama ir išdžiovinama vakuume 25°C temperatūroje.This copolymer is dissolved in 1000 ml of dichloromethane and the solution is poured into hot water at 60 ° C with constant stirring. The resulting polymer particle paste is collected and dried under vacuum at 25 ° C.
Susidariusio glikolio rūgšties-2-hidroksibutiro rūgšties kopolimero molekulinių svorių vidurkis, kaip nustatyta GPC, buvo 13,000.The resulting glycolic acid-2-hydroxybutyric acid copolymer had an average molecular weight as determined by the GPC of 13,000.
Nuorodos 7 pavyzdysReferences Example 7
Į 1000 ml su 4 kakleliais kolbą, į kurią įleistas vamzdelis azotui ir kondensatorius, pridedama 212.9 g glikolio rūgšties ir 124.9 g D, L-2-hidroksibutiro rūgšties, visa tai prie sumažinto slėgio, azoto dujų srovėje 3.5 vai. kaitinama nuo 100°C/500 mmHg iki 160°C/30 mmHg, pastoviai pašalinant nudistiliuotą vandenį. Reakcijos mišinys toliau prie sumažinto slėgio 27 vai. kaitinamas 3-6 mmHg/160-180°C, po to atšaldomas, ir gaunamas geltonos spalvos glikolio rūgšties-2-hidroksibutiro rūgšties kopolimeras.Add 212.9 g of glycolic acid and 124.9 g of D, L-2-hydroxybutyric acid, all under reduced pressure, under a stream of nitrogen for 3.5 hours to a 1000 ml 4-necked flask with a nitrogen tube and a condenser. heated from 100 ° C / 500 mmHg to 160 ° C / 30 mmHg with constant removal of distilled water. The reaction mixture was kept under reduced pressure for 27 h. heated at 3-6 mmHg / 160-180 [deg.] C., then cooled to give a yellow copolymer of glycolic acid-2-hydroxybutyric acid.
Šis polimeras ištirpinamas 1000 ml dichlormetano, ir tirpalas pilamas į karštą 60°C vandenį, pastoviai maišant. Susidariusi polimero dalelių pasta surenkama ir išdžiovinama vakuume 25°C temperatūroje.This polymer is dissolved in 1000 ml of dichloromethane and the solution is added to hot water at 60 ° C with constant stirring. The resulting polymer particle paste is collected and dried under vacuum at 25 ° C.
Susidariusio glikolio rūgšties-2-hidroksibutiro rūgšties kopolimero molekulinių svorių vidurkis, kaip nustatyta GPC, buvo 11,000.The resulting glycolic acid-2-hydroxybutyric acid copolymer had an average molecular weight as determined by the GPC of 11,000.
Nuorodos 8 pavyzdysReferences Example 8
Į 1000 ml su 4 kakleliais kolbą, į kurią įleistas vamzdelis azotui ir kondensatorius, pridedama 300 g 90% vandeninio D,L-pieno rūgšties tirpalo ir 100 g 90% vandeninio L-pieno rūgšties tirpalo, visa tai prie sumažinto slėgio, azoto dujų srovėje 4 vai. kaitinama nuo 100°C/500 mmHg iki 150°C/30 mmHg, pastoviai pašalinant distiliuotą vandenį. Po to reakcijos mišinys prie sumažinto slėgio 10 vai. kaitinamas 3-5 mmHg ir 150-180°C, po to atšaldomas ir gaunama gintarinės spalvos polilaktinė rūgštis.Add 300 g of 90% aqueous D, L-lactic acid solution and 100 g of 90% aqueous L-lactic acid solution, all at reduced pressure, under a stream of nitrogen gas into a 1000 ml 4-necked flask with a nitrogen tube and a condenser. 4 or. heated from 100 ° C / 500 mmHg to 150 ° C / 30 mmHg with constant removal of distilled water. The reaction mixture was then under reduced pressure for 10 hours. heated at 3-5 mmHg and 150-180 ° C, then cooled to give amber-colored polylactic acid.
Šis polimeras ištirpinamas 1,000 ml dichlormetano, ir tirpalas pilamas į karštą 60°C vandenį, pastoviai maišant. Susidariusi polimero dalelių pasta surenkama ir išdžiovinama vakuume 30°C temperatūroje.This polymer is dissolved in 1,000 ml of dichloromethane and the solution is added to hot water at 60 ° C with constant stirring. The resulting polymer particle paste is collected and dried under vacuum at 30 ° C.
Aukščiau minėtos polilaktinės rūgšties molekulinių 5- svorių vidurkis ir molekulinių svorių vidurkių skaičius, kaip GPC, ir molekulinių svorių vidurkių skaičius, nustatytas pagal galinę grupę, buvo atitinkamai 4,200; 2,192; ir 1,572.The molecular weight average of the above polylactic acid and the number of molecular weight averages as GPC and the number of molecular weight averages determined by the terminal group were 4,200, respectively; 2,192; and 1,572.
Šie duomenys rodo, kad polimeras turi galines kaboksilo grupes.These data indicate that the polymer has terminal caboxyl groups.
Nuorodos 9 pavyzdysReferences Example 9
Į 1000 ml su 4 kakleliais kolbą, į kurią įleistas vamzdelis azotui ir kondensatorius, pridedama 182.5 g glikolio rūgšties ir 166.6 g D,L-2-hidroksibutiro rūgšties, visa tai prie sumažinto slėgio, azoto dujų srovėje 3.5 vai. kaitinama nuo 100°C/500 mmHg ikiAdd 182.5 g of glycolic acid and 166.6 g of D, L-2-hydroxybutyric acid, all at reduced pressure, under a stream of nitrogen for 3.5 hours to a 1000 ml 4-necked nitrogen flask with a condenser. heated from 100 ° C / 500 mmHg to 100 ° C
150°C/30 mmHg, pastoviai pašalinant distiliuotą vandenį. Po to reakcijos mišinys prie sumažinto slėgio 32 vai. kaitinamas 5-7 mmHg ir 150-180°C, atšaldomas, ir susidaro gintarinės spalvos glikolio rūgšties-2hidroksibutiro rūgšties kopolimeras.150 ° C / 30 mmHg with constant removal of distilled water. The reaction mixture was then under reduced pressure for 32 hours. heated at 5-7 mmHg and 150-180 ° C, cooled to form an amber-colored copolymer of glycolic acid-2-hydroxybutyric acid.
Polimeras ištirpinamas 1,000 ml dichlormetano, ir tirpalas pilamas į karštą 60°C vandenį, pastoviai maišant. Susidariusi polimero dalelių pasta surenkama ir išdžiovinama vakuume 25°C temperatūroje.The polymer is dissolved in 1,000 ml of dichloromethane and the solution is added to hot water at 60 ° C with constant stirring. The resulting polymer particle paste is collected and dried under vacuum at 25 ° C.
Susidariusios glikolio rūgšties-2-hidroksibutiro rūgšties kopolimero molekulinių svorių vidurkis ir molekulinių svorių vidurkių skaičius, kaip nustatyta GPC, ir molekulinių svorių vidurkių skaičius, nustatytas pagal galinę grupę, atitinkamai buvo 16,300; 5,620; ir 2,904.The average molecular weight and number of molecular weights of the resulting glycolic acid-2-hydroxybutyric acid copolymer as determined by the GPC and the number of molecular weight averaged by the terminal group were 16,300, respectively; 5,620; and 2,904.
Šie duomenys rodo, kad polimeras turi galines karboksilo grupes.These data indicate that the polymer has carboxyl end groups.
Nuorodos 10 pavyzdysReferences Example 10
NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(AzaglyFur)-LeuLys(Nisp)-Pro-DAlaNH2 sintezėSynthesis of NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys (AzaglyFur) -LeuLys (Nisp) -Pro-DAlaNH 2
Nuorodose 10 ir 11 pavyzdžiai pateikti pagal JAV patentų Nr. 5, 110, 904 aprašymą ir pagal paraišką JAV patentui Nr. 07/987, 921.Examples 10 and 11 are given in U.S. Pat. 5, 110, 904 and according to U.S. Patent Application Ser. 07/987, 921.
Į reaktorių, sintetinant peptidą, pridedama 1 g D-AlaNH-derva (4-metil-benzohidrilamino derva), po to palaipsniui pridedant amino rūgštis visos sintezės metu, kol susidaro minėtas peptidas.1 g of D-AlaNH-resin (4-methyl-benzohydrylamine resin) is added to the reactor to synthesize the peptide, followed by the gradual addition of amino acids throughout the synthesis until said peptide is formed.
1. Apsauginės grupės pašalinimo reakcija1. The deprotection reaction
Pašalinant nuo peptido alfa amino grupės apsauginę BOC grupę, panaudotas 45% trifluoracto rūgšties (toliau bus vadinama TFA), 2.5% anizolo, 2.0% dimetilfosfito ir45% trifluoroacetic acid (hereinafter referred to as TFA), 2.5% anisole, 2.0% dimethylphosphite and 45% trifluoroacetic acid were used to remove the BOC protecting group from the peptide alpha amino group.
50.5% dichlormetano tirpalas. Derva praplaunama tirpalu 1 min., po to apsauginės grupės nuėmimo reakcija tęsiama 20 min.50.5% dichloromethane solution. The resin is rinsed with the solution for 1 min, after which the deprotection reaction is continued for 20 min.
2. Praplovimas bazės tirpalu2. Rinse with base solution
Trifluoracto rūgšties, panaudotos apsauginės grupės nuėmimui, pašalinimui ir neutralizavimui panaudotas dichlormetano tirpalas, kurio sudėtyje yra 10% N,Ndiizopropiletilaminas. Derva praplaunama 1 min. tris kartus kiekvienai apsauginės grupės nuėmimo reakcijai.A solution of 10% N, Ndiisopropylethylamine in dichloromethane was used to remove, remove and neutralize the trifluoroacetic acid used to remove the protecting group. The resin is rinsed for 1 min. three times for each deprotection reaction.
3. Sukabinimo reakcija3. Coupling reaction
Reakcija vykdoma, panaudojant kaip aktyvatorius trigubą moliarinį kiekį 0.3 M diizopropilkarbodiimido/dichlormetano tirpalo ir trigubą moliarinį kiekį 0.3 M BOC amino rūgšties darinio/DMF (N,N'-dimetilformamido) tirpalo. Aktyvuota amino rūgštis dervoje prikabinama prie peptido laisvos alfa amino grupės. Reakcijos laikas parodytas žemiau.The reaction is carried out using triple molar solution of 0.3 M diisopropylcarbodiimide / dichloromethane solution and triple molar amount of 0.3 M BOC amino acid derivative / DMF (N, N'-dimethylformamide) as activator. The activated amino acid in the resin is attached to the free alpha amino group of the peptide. The reaction time is shown below.
4. Praplovimas4. Flushing
Užbaigus kiekvienos reakcijos procesą, derva praplaunama dichlormetanu, dichlormetanu/DMF ir DMF, su kiekvienu po 1 min.After completion of each reaction, the resin was washed with dichloromethane, dichloromethane / DMF, and DMF for 1 min each.
Sintezės protokolasSynthesis Protocol
Amino grupė, apsauganti amino rūgštis, prie dervos prikabinama žemiau nurodyta eilės tvarka, dažnumu, laiku.The amino group protecting the amino acids is attached to the resin in the following order, frequency, time.
Pasibaigus sintezės reakcijai, apsauginės FMOC grupės pašalinimui, derva 4-24 vai. buvo veikiama 30% piperidino tirpalu, ištirpintu DMF. Derva keletą kartų praplaunama dichlormetanu ir tada veikiama 15 min. karbonildiimidazolu (0,9 g), ištirpintu DMF (18 ml), praplaunama tris kartus dichlormetanu, po to, kai sureaguoja, per naktą veikiama 2-furankarbono hidrazinu (0,53 g), ištirpintu DMF (18 ml) . Susidariusi peptidoderva praplaunama tris kartus dichlormetanu ir tada išdžiovinama per naktą fosforo pentoksidu, po to veikiama 1 vai. sausu fluoro vandeniliu 0°C, panaudojant anizolą peptido atskyrimui nuo dervos. Reakcijos reagento perteklius pašalinamas vakuumo sąlygomis. Tokiu būdu gauta derva pirmiausia praplaunama eteriu, tada maišoma kambario temperatūroje 15 min. 50 ml vandens/acetonnitrilo/acto rūgšties mišinyje (1:1:0.1) ir filtruojama. Filtratas liofilinamas, gaunamas nevalytas peptidas purių miltelių pavidalu. šis peptidas valomas aukšto slėgio skysčio chromatografija (HPLC) tokiomis sąlygomis.After the synthesis reaction, removal of the FMOC protecting group, resin for 4-24 hours. was treated with 30% piperidine solution in DMF. The resin is rinsed several times with dichloromethane and then exposed for 15 min. of carbonyldiimidazole (0.9 g) in DMF (18 mL) was washed three times with dichloromethane, after being reacted with 2-furancarbonate hydrazine (0.53 g) in DMF (18 mL) overnight. The resulting peptide resin is washed three times with dichloromethane and then dried overnight with phosphorus pentoxide, followed by 1 hour. dry hydrogen fluoride at 0 ° C using an anisole to separate the peptide from the resin. Excess reaction reagent is removed under vacuum. The resin thus obtained is first washed with ether and then stirred at room temperature for 15 minutes. 50 ml of water / acetonitrile / acetic acid (1: 1: 0.1) and filtered. The filtrate is lyophilized to give the crude peptide as a fluffy powder. this peptide is purified by high performance liquid chromatography (HPLC) under the following conditions.
(1) Kolona: Dynamax C-18(25x2.5 cm, 8 mikronai) (2) Tirpiklis: Acetonitrilas prieš gradientą virš 20 min. nuo 89% vandens/11% acetonitrilo/0.1% TFA (3) Bangos ilgis: 260 nm (UV metodas)(1) Column: Dynamax C-18 (25x2.5 cm, 8 microns) (2) Solvent: Acetonitrile before gradient over 20 min. from 89% water / 11% acetonitrile / 0.1% TFA (3) wavelength: 260 nm (UV method)
Peptidas, kuris nustatytas kaip viena viršūnė prie 25.7 min. sulaikymo laiko, buvo surenkamas, liofilinamas, ir gautas valytas produktas NAcD2NalD4ClPhe-D3Pal-SerNMeTyr-DLys(AzaglyFur)-Leu-Lys(Nisp)-Pro-DALaNH2, kaip trifluoracetatas. Fiziniai duomenys valyto produkto yra šie:Peptide set as a single peak at 25.7 min. retention time were collected, freeze dried and the resulting product purified NAcD2NalD4ClPhe-D3Pal-SerNMeTyr-DLys (AzaglyFur) -Leu-Lys (NISP) 2 -Pro-DALaNH as trifluoroacetate. The physical details of the purified product are as follows:
FAB (atomo bombardavimo greitis) masės spektrometrija: m/e 1591 (M+H)FAB (Atomic Bomb Speed) Mass Spectrometry: m / e 1591 (M + H)
Amino rūgšties analizė: 0.98 Ala, 1.02 Pro, 1.58 Lys, 1.00 Leu, 1.12 NMeTyr, 0.52 SerAmino Acid Analysis: 0.98 Ala, 1.02 Pro, 1.58 Lys, 1.00 Leu, 1.12 NMeTyr, 0.52 Ser
Aukščiau nurodytas peptido trifluoracetatas buvo paverčiamas acetatu, panaudojant gelio filtracijos koloną, prieš tai išlygintą 1 N acto rūgštimi. Gelio filtracijos sąlygos šios:The above peptide trifluoroacetate was converted to acetate using a gel filtration column pre-equilibrated with 1 N acetic acid. The gel filtration conditions are as follows:
(1) Pakrovimas: Sefadeksas G-25 (diametras kolonos viduje 16 mm, lovelio aukštis 40 mm) (2) Tirpiklis: 1 N acto rūgštis (3) Bangos ilgis: 254 nm (UV metodas)(1) Loading: Sephadex G-25 (inside column 16 mm, trough height 40 mm) (2) Solvent: 1 N acetic acid (3) Wavelength: 254 nm (UV method)
Pirmos eliuotos viršūnės frakcija surenkama ir liofilizuojama, gautas valytas produktas NAcD2NalD4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(AzaglyFur)-Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAlaNH2, kaip acetatas.The first eluted peaks are collected and lyophilized fraction obtained purified product NAcD2NalD4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys (AzaglyFur) -Leu-Lys (NISP) -Pro-DAlaNH 2 as the acetate.
Nuorodos 11 pavyzdysReferences Example 11
NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(AzaglyNic)-LeuLys(Nisp)-Pro-DAlaNH2 sintezė:Synthesis of NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys (AzaglyNic) -LeuLys (Nisp) -Pro-DAlaNH 2 :
Minėtas peptidas buvo sintezuojamas tuo pačiu būdu, kaip nurodyta 10 pavyzdyje, išskyrus tai, kad 2furankarbono hidrazidas apkeistas 2-nikotino hidrazidu (0.575 g). Valyto produkto HPLC nustatytas sulaikymo laikas 16.0 min. Valyto produkto fiziniai duomenys šie:Said peptide was synthesized in the same manner as in Example 10 except that 2-furancarbonate hydrazide was replaced with 2-nicotine hydrazide (0.575 g). The HPLC retention time of the purified product was 16.0 min. The physical data of the purified product are as follows:
FAB masės spektrometrija: m/e 1592 (M+H)FAB mass spectrometry: m / e 1592 (M + H)
Amino rūgščių analizė: 1.02 Ala, 1.01 Pro, 1.61 Lys, 0.99 Leu, 1.12 NMeTyr, 0.48 SerAmino Acid Analysis: 1.02 Ala, 1.01 Pro, 1.61 Lys, 0.99 Leu, 1.12 NMeTyr, 0.48 Ser
Aukščiau minėtas peptido trifluoracetatas verčiamas į acetatą tuo pačiu būdu, kaip nurodyta 10 pavyzdyje.The above peptide trifluoroacetate is converted to acetate in the same manner as in Example 10.
Nuorodos 12 pavyzdysReferences Example 12
Į 1000 ml su 4 kakleliais kolbą, į kurią įleistas vamzdelis azotui ir kondensatorius, pridedama 322 g 90% vandeninio D,L-pieno rūgšties tirpalo ir 133 g glikolio rūgšties ir panaudojant kaitintuvą (So-go Rikagaku Glass Co), prie sumažinto slėgio, azoto dujų srovėje 4 vai. kaitinama nuo 100°C/500 mmHg iki 150°C/30 mmHg, pastoviai pašalinant distiliuotą vandenį. Reakcijos mišinys prie sumažinto slėgio 23 vai. kaitinamas 3-30 mmHg/150-185°C, po to atšaldoma, ir susidaro pieno rūgšties-glikolio rūgšties kopolimeras.To a 1000 ml 4-necked nitrogen flask with a condenser was added 322 g of 90% aqueous D, L-lactic acid solution and 133 g of glycolic acid, using reduced pressure (So-go Rikagaku Glass Co.), in a stream of nitrogen gas for 4 hours. heated from 100 ° C / 500 mmHg to 150 ° C / 30 mmHg with constant removal of distilled water. Reaction mixture under reduced pressure for 23 h. heated at 3-30 mmHg / 150-185 ° C, then cooled to form a lactic acid-glycolic acid copolymer.
Šis polimeras ištirpinamas 1000 ml dichlormetano, ir tirpalas pilamas į karštą 60°C vandenį, pastoviai maišant. Susidariusi polimero dalelių pasta surenkama ir išdžiovinama vakuume 30°C temperatūroje.This polymer is dissolved in 1000 ml of dichloromethane and the solution is added to hot water at 60 ° C with constant stirring. The resulting polymer particle paste is collected and dried under vacuum at 30 ° C.
Gauto pieno rūgšties-glikolio rūgšties kopolimero molekulinių svorių vidurkis ir molekulinių svorių vidurkių skaičius, nustatytas GPC, ir molekulinių svorių vidurkių skaičius, kaip nustatyta pagal galinę grupę, atitinkamai buvo 10,000: 4,000; ir 4,000. Šie duomenys rodo, kad polimeras turi galines karboksilines grupes.The average molecular weight and number of molecular weights determined by GPC for the lactic acid-glycolic acid copolymer obtained and the mean number of molecular weights as determined by the terminal group were 10,000: 4,000, respectively; and 4,000. These data indicate that the polymer has terminal carboxyl groups.
Nuorodos 13 pavyzdysReferences Example 13
Į 1000 ml su 4 kakleliais kolbą, į kurią įleistas vamzdelis azotui ir kondensatorius, pridedama 347 g 90% vandeninio D,L-pieno rūgšties ir 266 g glikolio rūgšties tirpalo ir visa tai, panaudojant kaitintuvą su apsauginiu tinkleliu (So-go Rikagaku Glass Co) , prie sumažinto slėgio, azoto dujų srovėje 5 vai. kaitinama nuo 100°C/500 mmHg iki 150°C/30 mmHg, pastoviai pašalinant distiliuotą vandenį. Po to reakcijos mišinys prie sumažinto slėgio 23 vai. kaitinamas 3-30 mmHg/150185°C, tada atšaldoma ir susidaro pieno rūgštiesglikolio rūgšties kopolimeras.To a 1000 ml 4-necked nitrogen flask with a condenser was added 347 g of 90% aqueous D, L-lactic acid and 266 g of glycolic acid and all this using a so-go Rikagaku Glass Co ), under reduced pressure, in a stream of nitrogen gas for 5 hours. heated from 100 ° C / 500 mmHg to 150 ° C / 30 mmHg with constant removal of distilled water. The reaction mixture was then under reduced pressure for 23 hours. heated at 3-30 mmHg / 150185 ° C, then cooled to form a copolymer of lactic acid-glycolic acid.
Šis polimeras ištirpinamas 1000 ml dichlormetano, ir tirpalas pilamas į karštą 60°C vandenį, pastoviai maišant. Susidariusi polimero dalelių pasta surenkama ir išdžiovinama vakuume 30°C temperatūroje.This polymer is dissolved in 1000 ml of dichloromethane and the solution is added to hot water at 60 ° C with constant stirring. The resulting polymer particle paste is collected and dried under vacuum at 30 ° C.
Susidariusio pieno rūgšties-glikolio rūgšties kopolimero molekulinių svorių vidurkis ir molekulinių svorių vidurkių skaičius, nustatytas GPC, ir molekulinių svorių vidurkių skaičius, nustatytas pagal galinę grupę, atitinkamai buvo 10,000; 3,700: 3,900. Šie duomenys rodo, kad kopolimeras turi galines karboksilo grupes.The average molecular weight and average number of molecular weights of the resulting lactic acid-glycolic acid copolymer as determined by the GPC and the number of molecular weights determined by the terminal group were 10,000, respectively; 3,700: 3,900. These data indicate that the copolymer has carboxyl end groups.
pavyzdysexample
200 mg NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys-(Nic)Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAlaNH2 acetato (pagaminta pagal TAP; toliau sutrumpintai bus vadinama kaip fiziologiškai aktyvus peptidas A) ištirpinta mišinyje (3.8 g), susidedančiame iš santykiu 50:50 glikolio rūgšties-2hidroksibutiro rūgšties kopolimero, gauto pagal nuorodą 5 pavyzdyje, ir polilaktinės rūgšties, gautos pagal nuorodą 1 pavyzdyje, 5,3 g (4,0 ml) dichlormetano tirpale. Gautas tirpalas atšaldomas iki 17°C ir pilamas į 1000 ml 0.1% (w/w) vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą (EG-40, Nippon Syntetic Chemical Industry Co.,Ltd), prieš tai atreguliavus temperatūrą iki 10°C, ir mišinys emulguoj amas, panaudojant turbininį homomikserį prie 7000 rpm, norint gauti A/V emulsiją. Ši A/V emulsija maišoma kambario temperatūroje 3 vai., išgarinant dichlormetaną. Aliejaus fazė sukietinama ir nucentrifuguojama (05PR-22, Hitachi, Ltd), prie 2000 rpm. Ši kieta fazė buvo vėl disperguojama distiliuotame vandenyje ir toliau centrifuguojama, nuplaunant laisvus vaistus ir kt. Surinktos mikrokapsulės buvo vėl disperguojamos mažame distiliuoto vandens kiekyje, pridedant 0.3 g D-manito ir džiovinama užsaldant, kad susidarytų milteliai. Mikrokapsulių dalelių dydžių pasiskirstymas ir fiziologiškai aktyvaus peptido kiekis atitinkamai buvo nuo 5 iki 60 ųm ir 4.7% (w/w).200 mg of NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys- (Nic) Leu-Lys (Nisp) -Pro-DAlaNH 2 acetate (manufactured by TAP; hereinafter abbreviated as physiologically active peptide A) is dissolved in the mixture (3.8 g). consisting of a 50:50 glycolic acid-2-hydroxybutyric acid copolymer obtained by reference in Example 5 and a polylactic acid obtained by reference in Example 1 in a solution of 5.3 g (4.0 ml) of dichloromethane. The resulting solution is cooled to 17 ° C and added to 1000 ml of 0.1% (w / w) aqueous polyvinyl alcohol solution (EG-40, Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd), after adjusting the temperature to 10 ° C, and the mixture is emulsified. am using a turbine homomixer at 7000 rpm to produce an A / V emulsion. This A / V emulsion was stirred at room temperature for 3 hours by evaporation of dichloromethane. The oil phase is solidified and centrifuged (05PR-22, Hitachi, Ltd) at 2000 rpm. This solid phase was redispersed in distilled water and further centrifuged, washing off the free drugs and so forth. The collected microcapsules were redispersed in a small amount of distilled water by the addition of 0.3 g of D-mannitol and freeze-dried to form a powder. The particle size distribution of the microcapsules and the amount of physiologically active peptide were 5 to 60 µm and 4.7% (w / w), respectively.
Kiti fiziologiškai aktyvūs peptidai (1) ir (2) gaminami aukščiau nurodytu būdu.Other physiologically active peptides (1) and (2) are prepared as described above.
(1) NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NmeTyr-DLys(AzaglyFur)Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAlaNH2.(1) NAcD2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NmeTyr-DLys (AzaglyFur) Leu-Lys (Nisp) -Pro-DAlaNH 2 .
(2) NAcDNal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(AzaglyFur)Leu-Lys(Nisp)-Pro-DAlaNH2.(2) NAcDNal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys (AzaglyFur) Leu-Lys (NISP) -Pro-DAlaNH second
pavyzdysexample
6.7 g (5.0 ml) dichlormetano tirpale, susidedančiame iš 50:50 (3,8 g) glikolio rūgšties-2-hidroksibutiro rūgšties kopolimero, gauto pagal 5 pavyzdį nuorodoje, ir polilaktinės rūgšties, gautos pagal 2 pavyzdį nuorodoje, mišinio ištirpinamas 200 mg fiziologiškai aktyvaus peptido A acetatas. Šis tirpalas atšaldomas iki 17°C ir pilamas į 1000 ml 0.1% vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą prieš tai atreguliuotą iki 17°C, ir mišinys veikiamas, kaip nurodyta 1 pavyzdyje, norint gauti mikrokapsulės. Mikrokapsulėse dalelių dydžių pasiskirstymas ir fiziologiškai aktyvaus peptido kiekis atitinkamai buvo nuo 5 iki 65 ųm ir 5.0% (w/w).A solution of 6.7 g (5.0 ml) of dichloromethane in a 50:50 (3.8 g) mixture of glycolic acid-2-hydroxybutyric acid copolymer obtained in Example 5 and Reference Polylactic acid obtained in Example 2 is dissolved in 200 mg physiologically. active peptide A acetate. This solution is cooled to 17 ° C and added to 1000 ml of 0.1% aqueous polyvinyl alcohol solution previously adjusted to 17 ° C and the mixture is treated as in Example 1 to obtain microcapsules. In the microcapsules, the particle size distribution and the amount of physiologically active peptide were 5 to 65 µm and 5.0% (w / w), respectively.
pavyzdysexample
6.7 g (5:0 ml) dichlormetano tirpale, susidedančiame iš 50:50 (3.8 g) glikolio rūgšties-2-hidroksibutiro rūgšties kopolimero, gauto pagal 5 pavyzdį nuorodoje, ir polilaktinės rūgšties, gautos pagal 3 pavyzdį nuorodoje, mišinio, ištirpinamas 200 mg fiziologiškai aktyvaus peptido A acetatas. Šis tirpalas atšaldomas iki 17°C, ir pilamas į 1000 ml 0.1% vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą, prieš tai atreguliavus jo temperatūrą iki 17°C, ir mišinys veikiamas 1 pavyzdyje nurodytu būdu, kad susidarytų mikrokapsulės. Mikrokapsulėse dalelių dydis buvo nuo 10 iki 60 ųm, o fiziologiškai aktyvaus peptido A kiekis - 4.8% (w/w).In a solution of 6.7 g (5: 0 ml) of dichloromethane in a 50:50 (3.8 g) mixture of a glycolic acid-2-hydroxybutyric acid copolymer obtained in Example 5 in reference and a polylactic acid obtained in Example 3 in reference are dissolved in 200 mg. physiologically active peptide A acetate. This solution is cooled to 17 ° C and added to 1000 ml of a 0.1% aqueous solution of polyvinyl alcohol, after adjusting its temperature to 17 ° C, and the mixture is subjected to the procedure of Example 1 to form microcapsules. The microcapsules had a particle size of 10 to 60 µm and a physiologically active peptide A content of 4.8% (w / w).
pavyzdysexample
6.7 (5.0 ml) dichlormetano tirpale, susidedančiame iš6.7 (5.0 ml) in a dichloromethane solution consisting of
50:50 (3.8 g) glikolio rūgšties-2-hidroksibutiro rūgšties kopolimero, gauto pagal 5 pavyzdį nuorodoje, ir polilaktinės rūgšties, gautos pagal 4 pavyzdį nuorodoje, mišinio, ištirpinamas 200 mg fiziologiškai aktyvaus peptido A acetatas. Šis tirpalas atšaldomas iki 17°C ir pilamas į 1000 ml 0.1% vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą, prieš tai jo temperatūrą atreguliavus iki 17°C, ir mišinys veikiamas 1 pavyzdyje nurodytu būdu, kad susidarytų mikrokapsulės. Mikrokapsulėse dalelių dydis buvo nuo 10 iki 75 ųm, o fiziologiškai aktyvaus peptido A kiekis - 4.6% (w/w).50:50 (3.8 g) of a mixture of glycolic acid-2-hydroxybutyric acid copolymer obtained in Example 5 in Reference and polylactic acid obtained in Example 4 in Reference are dissolved in 200 mg of physiologically active peptide A acetate. This solution is cooled to 17 ° C and added to 1000 ml of 0.1% aqueous polyvinyl alcohol solution, after adjusting its temperature to 17 ° C, and the mixture is subjected to the procedure of Example 1 to form microcapsules. The microcapsules had a particle size of 10 to 75 µm and a physiologically active peptide A content of 4.6% (w / w).
pavyzdysexample
6.0 g (4.5 ml) dichlormetano tirpale, susidedančiame iš 50:50 (3.8 g) glikolio rūgšties-2-hidroksibutiro rūgšties kopolimero, gauto pagal 6 pavyzdį nuorodoje, ir polilaktinės rūgšties, gautos pagal 2 pavyzdį nuorodoje, mišinio, ištirpinamas fiziologiškai aktyvaus peptido A acetatas. Sis tirpalas atšaldomas iki 17 C ir pilamas į 1000 ml 0.1% vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą, prieš tai jo temperatūrą atreguliavus iki 10°C, ir mišinys veikiamas 1 pavyzdyje nurodytu būdu, kad susidarytų mikrokapsulės. Mikrokapsulėse dalelių dydis buvo nuo 5 iki 60 ųm ir fiziologiškai aktyvaus peptido kiekis - 4,9% (w/w).6.0 g (4.5 ml) of a dichloromethane solution consisting of a 50:50 (3.8 g) mixture of glycolic acid-2-hydroxybutyric acid copolymer obtained according to Example 6 and the polylactic acid obtained according to example 2 are dissolved in physiologically active peptide A. acetate. This solution is cooled to 17 ° C and added to 1000 ml of 0.1% aqueous polyvinyl alcohol solution, after adjusting its temperature to 10 ° C, and the mixture is subjected to the procedure of Example 1 to form microcapsules. The microcapsules had a particle size of 5 to 60 µm and a physiologically active peptide content of 4.9% (w / w).
pavyzdysexample
6.0 (4.5 ml) dichlormetano tirpale, susidedančiame iš6.0 (4.5 ml) in a dichloromethane solution consisting of
50:50 (3.8 g) glikolio rūgšties-2-hidroksibutiro rūgšties kopolimero, gauto pagal 7 pavyzdį nuorodoje, ir polilaktinės rūgšties, gautos pagal 2 pavyzdį nuorodoje, mišinio, ištirpinamas 200 g fiziologiškai aktyvaus peptido A acetatas. Šis tirpalas atšaldomas iki 17°C ir pilamas į 1000 ml 0.1% vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą, prieš tai atreguliavus temperatūrą iki 17°C, ir mišinys veikiamas 1 pavyzdyje nurodytu būdu, kad susidarytų mikrokapsulės. Dalelių dydis mikrokapsulėse buvo nuo 10 iki 65 ųm, o fiziologiškai aktyvaus peptido A kiekis buvo 4.9% (w/w) .50:50 (3.8 g) of a mixture of glycolic acid-2-hydroxybutyric acid copolymer of Example 7 in Reference and polylactic acid of Example 2 in Reference are dissolved in 200 g of physiologically active peptide A acetate. This solution is cooled to 17 ° C and added to 1000 ml of a 0.1% aqueous solution of polyvinyl alcohol, after having been adjusted to 17 ° C, and the mixture is subjected to the procedure of Example 1 to form microcapsules. The particle size in the microcapsules was 10 to 65 µm and the content of physiologically active peptide A was 4.9% (w / w).
pavyzdysexample
7.0 (5.3 ml) dichlormetano tirpale, susidedančiame iš7.0 (5.3 ml) in a solution of dichloromethane consisting of
50:50 (3.6 g) glikolio rūgšties-2-hidroksibutiro rūgšties kopolimero, gauto pagal 9 pavyzdį nuorodoje, ir polilaktinės rūgšties, gautos pagal 8 pavyzdį nuorodoje, mišinio, ištirpinamas 400 g fiziologiškai aktyvaus peptido A acetatas. Šis tirpalas atšaldomas iki 17°C ir pilamas į 1,000 ml 0.1% vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą, prieš tai atreguliavus temperatūrą iki 17°C, ir mišinys veikiamas 1 pavyzdyje nurodytu būdu, kad susidarytų mikrokapsulės. Dalelių dydis mikrokapsulėse buvo nuo 5 iki 65 ųm, ir fiziologiškai aktyvaus peptido A kiekis buvo 7.2% (w/w) .50:50 (3.6 g) of a mixture of glycolic acid-2-hydroxybutyric acid copolymer obtained in Example 9 in Reference and polylactic acid obtained in Example 8 in Reference are dissolved in 400 g of physiologically active peptide A acetate. This solution is cooled to 17 ° C and added to 1,000 ml of a 0.1% aqueous solution of polyvinyl alcohol, after adjusting the temperature to 17 ° C, and the mixture is subjected to the procedure of Example 1 to form microcapsules. The particle size in the microcapsules was 5 to 65 µm, and the amount of physiologically active peptide A was 7.2% (w / w).
pavyzdysexample
3.2 g (2,4 ml) dichlormetano tirpale, susidedančiame iš 50:50 (1.76 g) glikolio rūgšties-2-hidroksibutiro rūgšties kopolimero, gauto pagal 9 pavyzdį nuorodoje, ir polilaktinės rūgšties, gautos pagal 8 pavyzdį nuorodoje, mišinio, ištirpinamas 240 mg NAcD2NalD4ClPhe-D3Pal-Ser-NmeTyr-DLys(AzaglyNic)-Leu-Lys(Nisp)Pro-DAlaNH2 acetatas (toliau sutrumpintai bus vadinama fiziologiškai aktyvus peptidas B), gautas pagal 11 pavyzdį nuorodoje. Susidaręs tirpalas atšaldomas iki 18°C ir pilamas ą 400 ml 0.1% vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą, prieš tai jo temperatūrą atreguliavus iki 16°C, ir mišinys veikiamas 1 pavyzdyje nurodytu būdu, kad susidarytų mikrokapsulės. Dalelių dydis mikrokapsulėse buvo nuo 5 iki 70 μιη, o fiziologiškai aktyvaus peptido B kiekis buvo 10.3% (w/w).A solution of 3.2 g (2.4 ml) of dichloromethane in a 50:50 (1.76 g) copolymer of glycolic acid-2-hydroxybutyric acid obtained in Example 9 and Reference Example 8 is dissolved in 240 mg. NAcD2NalD4ClPhe-D3Pal-Ser-NmeTyr-DLys (AzaglyNic) -Leu-Lys (Nisp) Pro-DAlaNH 2 acetate (hereinafter abbreviated as physiologically active peptide B) obtained according to Example 11 in ref. The resulting solution is cooled to 18 ° C and poured into 400 ml of 0.1% aqueous polyvinyl alcohol solution, after adjusting its temperature to 16 ° C, and the mixture is subjected to the procedure of Example 1 to form microcapsules. The particle size in the microcapsules ranged from 5 to 70 μιη and the content of physiologically active peptide B was 10.3% (w / w).
pavyzdysexample
3.2 g (2.4 ml) dichlormetano tirpale, susidedančiame iš 50:50 (1.76 g) glikolio rūgšties-2-hidroksibutiro rūgšties kopolimero, gauto pagal 9 pavyzdį nuorodoje, ir polilaktinės rūgšties, gautos pagal 8 pavyzdį nuorodoje, mišinio, ištirpinamas 240 mg NAcD2NalD4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys(AzaglyFur)-Leu-Lys(Nisp)Pro-DAlaNH2 acetatas (toliau sutrumpintai bus vadinamas fiziologiškai aktyvus peptidas C) , gautas pagal 10 pavyzdį nuorodoje. Susidaręs tirpalas atšaldomas iki 18°C ir pilamas į 400 ml 0.1% vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą, prieš tai jo temperatūrą atreguliavus iki 16°C, ir mišinys veikiamas 1 pavyzdyje nurodytu būdu, kad susidarytų mikrokapsulės. Dalelių dydis mikrokapsulėse buvo nuo 5 iki 65 gm, ir fiziologiškai aktyvaus peptido C kiekis buvo 10.9% (w/w).A solution of 3.2 g (2.4 ml) of dichloromethane in a 50:50 (1.76 g) copolymer of glycolic acid-2-hydroxybutyric acid obtained in Example 9 and Reference Example 8 is dissolved in 240 mg of NAcD2NalD4ClPhe-. D3Pal-Ser-NMeTyr-DLys (AzaglyFur) -Leu-Lys (Nisp) Pro-DAlaNH 2 acetate (hereinafter abbreviated as physiologically active peptide C) obtained according to Example 10 in the reference. The resulting solution is cooled to 18 ° C and added to 400 ml of 0.1% aqueous polyvinyl alcohol solution, after adjusting its temperature to 16 ° C, and the mixture is subjected to the procedure of Example 1 to form microcapsules. The particle size in the microcapsules was from 5 to 65 gm and the content of physiologically active peptide C was 10.9% (w / w).
pavyzdysexample
3.2 g (2.4 ml) dichlormetano tirpale, susidedančiame iš 50:50 (1.76 g) glikolio rūgšties-2-hidroksibutiro rūgšties kopolimero, gauto pagal 9 pavyzdį nuorodoje, ir polilaktinės rūgšties, gautos pagal 8 pavyzdį nuorodoje, mišinio, ištirpintas 240 mg N-Tetrahydrofur2-oil-Gly-D2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-Dlys(Nic)-LeuLys(Nisp)-Pro-DAlaNH2 (gaminamas pagal TAP; toliau sutrumpintai vadinamas fiziologiškai aktyvus peptidas D) acetatas {FAB masės spektrometrija: m/e 1647 (M+H)). Gautas tirpalas atšaldomas iki 18°C ir pilamas į 400 ml 0.1% vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą, prieš tai atreguliavus jo temperatūrą iki 16°C, ir mišinys veikiamas 1 pavyzdyje nurodytu būdu, kad susidarytų mikrokapsulės. Dalelių dydis mikrokapsulėse buvo nuo 5 iki 70 gm, ir fiziologiškai aktyvaus peptido D kiekis buvo 10.5% (w/w).A solution of 3.2 g (2.4 ml) of dichloromethane in a 50:50 (1.76 g) copolymer of glycolic acid-2-hydroxybutyric acid obtained in Example 9 and Reference Example 8 and dissolved in 240 mg of N- Tetrahydrofur2-oil-Gly-D2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-NMeTyr-Dlys (Nic) -LeuLys (NISP) -Pro-DAlaNH 2 (manufactured according to the TAP, hereinafter termed the physiologically active peptide D) acetate {FAB mass spectrometry: m / e 1647 (M + H)). The resulting solution is cooled to 18 ° C and added to 400 ml of 0.1% aqueous polyvinyl alcohol solution, after adjusting its temperature to 16 ° C, and the mixture is subjected to the procedure of Example 1 to form microcapsules. The particle size in the microcapsules was from 5 to 70 gm, and the amount of physiologically active peptide D was 10.5% (w / w).
pavyzdysexample
5.3 g (4.0 ml) dichlormetano tirpale, susidedančiame iš pieno rūgšties-glikolio rūgšties kopolimero (pieno rūgštis/glikolio rūgštis=75/25 (moliai %) , molekulinių svorių vidurkis pagal GPC=5,000, molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal GPC=2,000, molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal galinę grupę = 2,200; gamintojas, Wako Pure Chemical (Lot. 920729)) ištirpinamas 200 mg fiziologiškai aktyvaus peptido A acetatas. Gautas tirpalas atšaldomas iki 17°C ir pilamas į 1000 ml 0.1% vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą (EG-40, Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd) , prieš tai atreguliavus temperatūrą iki 16°C, ir mišinys emulguojamas turbininiu mikseriu prie 7000 aps/min., tokiu būdu paruošiama A/V emulsija. Ši A/V emulsija maišoma 3 vai. kambario temperatūroje, išgarinant dichlormetaną. Aliejaus fazė sukietinama ir nucentrifuguojama prie 2000 aps/min. (05Pr-22, Hitachi). Kieta fazė vėl disperguojama distiliuotame vandenyje ir toliau centrifūguojama, nuplaunant laisvus vaistus ir kt. Surinktos mikrokapsulės vėl disperguojamos mažame distiliuoto vandens kiekyje, po to pridedama 0.3 g D-manito ir džiovinama užsaldžius, kad susidarytų milteliai. Mikrokapsulėse dalelių dydis buvo nuo 5 iki 60 μτη fiziologiškai aktyvaus peptido A kiekis buvo 4.7% (w/w).5.3 g (4.0 ml) of a dichloromethane solution consisting of lactic acid-glycolic acid copolymer (lactic acid / glycolic acid = 75/25 (mol%), average molecular weight by GPC = 5,000, number of molecular weight averages by GPC = 2,000, molecular weight average number of weights by end group = 2,200; manufacturer, Wako Pure Chemical (Lot 920729)) dissolved in 200 mg of physiologically active peptide A acetate. The resulting solution was cooled to 17 ° C and poured into 1000 ml of 0.1% aqueous polyvinyl alcohol solution (EG-40, Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd), after adjusting the temperature to 16 ° C, and the mixture was emulsified with a turbine mixer at 7000 rpm. / min to prepare an A / V emulsion. This A / V emulsion is stirred for 3 hours. at room temperature by evaporation of dichloromethane. The oil phase is solidified and centrifuged at 2000 rpm. (05Pr-22, Hitachi). The solid phase is redispersed in distilled water and further centrifuged to wash off the free drugs, etc. The collected microcapsules are redispersed in a small amount of distilled water, then 0.3 g of D-mannitol is added and dried to freeze-dry. The microcapsules had a particle size of 5 to 60 μτη with 4.7% (w / w) of physiologically active peptide A.
Peptidų (1) ir (2) nepertraukiamai atlaisvinamas preparatas gaminamas aukščiau nurodytu būdu.The sustained release formulation of peptides (1) and (2) is prepared as described above.
(1) Fiziologiškai aktyvaus peptido B acetatas (2) Fiziologiškai aktyvaus peptido C acetatas pavyzdys(1) Physiologically active peptide B acetate (2) Example of physiologically active peptide C acetate
6.7 g (5.0 ml) dichlormetano tirpale, susidedančiame iš 3.8 g pieno rūgšties-glikolio kopolimero tirpalo (pieno rūgštis/glikolio rūgštis=75/25 (moliai %) , molekulinių svorių vidurkis pagal GPC=10,000, molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal GPC=4,400, molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal galinę grupę=4,300; gamintojas; Wako Pure Chemical (Lot. 880530)) ištirpinamas 200 mg fiziologiškai aktyvaus peptido A acetatas. Gautas tirpalas atšaldomas iki 17°C ir pilamas į 1000 ml 0.1% vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą, prieš tai jo temperatūrą atreguliavus iki 11°C. Po to pakartojamas procesas pagal 11 pavyzdį, norint gauti mikrokapsulės. Mikrokapsulėse dalelių dydžių pasiskirstymas ir fiziologiškai aktyvaus peptido A kiekis buvo nuo 5 iki 65 μιη ir 4.5% (w/w) atitinkamai.6.7 g (5.0 ml) of a dichloromethane solution consisting of 3.8 g of lactic acid-glycolic copolymer solution (lactic acid / glycolic acid = 75/25 (mol%), average molecular weight by GPC = 10,000, number of molecular weight averages by GPC = 4,400 , mean number of molecular weights per terminal group = 4,300, manufacturer; Wako Pure Chemical (Lot 880530)) is dissolved in 200 mg of physiologically active peptide A acetate. The resulting solution is cooled to 17 ° C and poured into 1000 ml of 0.1% aqueous polyvinyl alcohol solution, after which the temperature is adjusted to 11 ° C. The process of Example 11 is then repeated to obtain the microcapsules. In the microcapsules, the particle size distribution and the content of physiologically active peptide A were between 5 and 65 μιη and 4.5% (w / w), respectively.
pavyzdysexample
8.0 g (6.0 ml) dichlormetane, susidedančiame iš 3.6 g pieno rūgšties-glikolio rūgšties kopolimero, gauto pagal 12 pavyzdį nuorodoje, tirpalo, ištirpinama 400 mg fiziologiškai aktyvaus peptido A acetato. Gautas tirpalas atšaldomas iki 15°C ir pilamas į 1000 ml 0.1% vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą, prieš tai atreguliavus jo temperatūrą iki 14°C. Po to pakartojamas procesas pagal 11 pavyzdį, norint gauti mikrokapsules. Dalelių dydžių pasiskirstymas mikrokapsulėse ir fiziologiškai aktyvaus peptido A kiekis buvo nuo 5 iki 65 μπι ir 8.2% (w/w) atitinkamai.Dissolve 400 mg of physiologically active peptide A acetate in 8.0 g (6.0 ml) of a solution of 3.6 g of lactic acid-glycolic acid copolymer obtained in Reference Example 12. The resulting solution is cooled to 15 ° C and poured into 1000 ml of 0.1% aqueous polyvinyl alcohol solution, after adjusting its temperature to 14 ° C. The process of Example 11 is then repeated to obtain microcapsules. The particle size distribution in the microcapsules and the content of physiologically active peptide A were between 5 and 65 μπι and 8.2% (w / w), respectively.
pavyzdysexample
8.0 g (6.0 ml) dichlormetane, susidedančiame iš 3.6 g pieno rūgšties-glikolio rūgšties kopolimero, gauto pagal 13 pavyzdį nuorodoje, tirpalo, ištirpinamas 400 g fiziologiškai aktyvaus peptido A acetatas. Gautas tirpalas atšaldomas iki 15°C ir pilamas į 1000 ml 0.1% vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą, prieš tai atreguliavus jo temperatūrą iki 15°C. Po to pakartojamas 11 pavyzdyje nurodytas procesas, kad susidarytų mikrokapsules. Mikrokapsulėse dalelių dydis buvo nuo 5 iki 65 ųm, o fiziologiškai aktyvaus peptido A kiekis buvo 8.4% (w/w).Dissolve 400 g of physiologically active peptide A acetate in 8.0 g (6.0 ml) of a solution of 3.6 g of lactic acid-glycolic acid copolymer obtained according to Example 13 in the reference. The resulting solution is cooled to 15 ° C and poured into 1000 ml of 0.1% aqueous polyvinyl alcohol solution, after adjusting its temperature to 15 ° C. The process of Example 11 is then repeated to form microcapsules. The microcapsules had a particle size of 5 to 65 µm and the content of physiologically active peptide A was 8.4% (w / w).
pavyzdysexample
8.0 g (60 ml) dichlormetane, susidedančiame iš 3.6 g pieno rūgšties-glikolio rūgšties kopolimero tirpalo, kuris naudojamas 12 pavyzdyje, ištirpinama 400 mg leuprolerino acetato (gamintojas: Takeda ChemicalDissolve 400 mg of leuprolerine acetate (manufactured by Takeda Chemical) in 8.0 g (60 ml) of dichloromethane containing 3.6 g of the lactic acid-glycolic acid copolymer solution used in Example 12.
Industries) ir paruošiamas skaidrus homogeninis tirpalas. Gautas tirpalas atšaldomas iki 15°C ir pilamas į 1000 ml 0.1% vandeniną polivinilo alkoholio tirpalą, prieš tai atreguliavus jo temperatūrą iki 15°C. Po to pakartojamas tas pats procesas, kaip 11 pavyzdyje, kad susidarytų mikrokapsulės.Industries) and prepare a clear homogeneous solution. The resulting solution is cooled to 15 ° C and poured into 1000 ml of 0.1% aqueous polyvinyl alcohol solution, after adjusting its temperature to 15 ° C. The same process as in Example 11 is then repeated to form microcapsules.
Eksperimento 1 pavyzdysExample 1 of Experiment
Apie 30 mg mikrokapsulių, gautų 1 pavyzdyje, disperguoj ama terpėje (tirpale, susidedančiame iš distiliuotame vandenyje ištirpintų 2.5 mg karboksimetilceliuliozės, 0.5 mg polisorbito 80 ir 25 mg manito) ir dispersinis tirpalas buvo leidžiamas po oda 22G adata ą 10 savaičių amžiaus SD žiurkių patinėlių užpakalinę dalą (mikrokapsulių dozė 60 mg/kg). Po įvedimo žiurkių serija buvo užmušama, mikrokapsulių likučiai pašalinami nuo įvedimo vietos, ir mikrokapsulėse nustatomas fiziologiškai aktyvaus peptido A kiekis. Rezultatai pateikti 1 lentelėje.About 30 mg of the microcapsules obtained in Example 1 were dispersed in a medium (in a solution of 2.5 mg carboxymethylcellulose dissolved in distilled water, 0.5 mg polysorbite 80 and 25 mg mannitol) and the dispersion solution was injected subcutaneously with a 22G needle into the back of 10 weeks old SD male rats. (dose of microcapsules 60 mg / kg). Following administration, a series of rats were sacrificed, residues of the microcapsules removed from the site of administration, and the amount of physiologically active peptide A was determined in the microcapsules. The results are shown in Table 1.
Eksperimento 2-6 pavyzdžiaiExamples of Experiment 2-6
Naudojant mikrokapsulės, gautas 2-6 pavyzdžiuose, mikrokapsulėse likęs fiziologiškai aktyvaus peptido A kiekis nustatomas taip pat, kaip eksperimento 1 pavyzdyje. Rezultatai taip pat pateikti 1 lentelėje.Using the microcapsules obtained in Examples 2-6, the amount of physiologically active peptide A remaining in the microcapsules is determined in the same manner as in Experiment 1. The results are also presented in Table 1.
lentelėtable
Fiziologiškai aktyvaus peptido A liekana (%)Physiologically active peptide A residue (%)
mento 6 pavyzdys lentelėje pateikti duomenys mikrokapsulės pagal šį išradimą pakankamu pastoviu fiziologiškai rodo, kad visos charakterizuojamos aktyvaus peptido atlaisvinimu ir pasižymi staigiu pradiniu skilimu.Example 6 The data presented in the table in the microcapsule according to the present invention, at a sufficiently constant physiological level, show that all are characterized by the release of the active peptide and exhibit rapid initial degradation.
lentelėje pateikti duomenys rodo linijinius regresijos modelius, koreliacijos koeficientus, atlaisvinimo periodus, paskaičiuotus kaip X-atėminius, kurie nustatyti pagal metodą, aprašytą Methods ofthe data in the table show the linear regression models, the correlation coefficients, the release periods calculated as X-samples determined by the method described in Methods of
Bioassay (autorius Akira Šaunia, Tokyo University Press, June 5, 1978, p. 111).Bioassay (by Akira Shaunia, Tokyo University Press, June 5, 1978, p. 111).
lentelėtable
su glikolinės rūgšties-2-hidroksibutirinės rūgšties 10 kopolimeru, atlaisvinimo trukmė laisvai gali būti kontroliuojama 3.5-11.5 savaičių laikotarpyje.with glycolic acid-2-hydroxybutyric acid 10 copolymer, the release time can be freely controlled over a period of 3.5-11.5 weeks.
lentelėje pateikti duomenys rodo linijinius regresijos modelius, koreliacijos koeficientus ir atlaisvinimo periodus, kaip X-atėminius, kurie buvo nustatyti iš 1 lentelės duomenų, panaudojant 2 lentelėje nurodytus skaičiavimo būdus.The data presented in Table 2 show the linear regression models, correlation coefficients, and release periods as X-samples, which were determined from the data in Table 1 using the calculation methods in Table 2.
lentelėtable
lentelės duomenys rodo, kad keičiantis molinei glikolio rūgšties frakcijai glikolio rūgsties-2hidroksibutiro rūgšties kopolimere, sumaišius su polilaktine rūgštimi, atlaisvinimo trukmė gali būti laisvai kontroliuojama 3.1-6.6 savaičių laikotarpiu.The data in the table below show that the change in the molar fraction of glycolic acid in the copolymer of glycolic acid-2-hydroxybutyric acid, when mixed with polylactic acid, can be freely controlled over a period of 3.1 to 6.6 weeks.
Eksperimento 7-9 pavyzdžiaiExamples of Experiment 7-9
Naudojant mikrokapsules, gautas 7-9 pavyzdžiuose, aktyvaus peptido liekana mikrokapsulėse nustatyta kaip ir eksperimento 1 pavyzdyje, išskyrus tai, kad mikrokapsulės dozė buvo apie 30 mg/kg. Rezultatai pateikti 4 lentelėje. 5 lentelėje pateikti duomenys rodo linijinius regresijos modelius, koreliacijos koeficientus ir atlaisvinimo periodus, paskaičiuotus, kaip X-atėminius, nustatytus iš duomenų 4 lentelėje 2 lentelėje nurodytu būdu.Using the microcapsules obtained in Examples 7-9, the residual active peptide in the microcapsules was determined as in Experiment 1 except that the microcapsule dose was about 30 mg / kg. The results are shown in Table 4. The data in Table 5 shows the linear regression models, correlation coefficients, and release periods calculated as X -strings determined from the data in Table 4, as shown in Table 2.
lentelėtable
Fiziologiškai aktyvaus peptido (%) liekanaResidue of physiologically active peptide (%)
pavyzdys lentelėexample table
ir 5 lentelių duomenys rodo, kad mikrokapsulės pagal ši, išradimą charakterizuojamos pakankamai pastoviu fiziologiškai aktyvaus peptido atlaisvinimu ir pradiniu staigiu skilimu.and Table 5 show that the microcapsules of the present invention are characterized by a relatively constant release of physiologically active peptide and an initial rapid degradation.
Eksperimento 10 pavyzdysExample 10 of Experiment
Naudojant mikrokapsulės, gautas pagal 10 pavyzdį, fiziologiškai aktyvaus peptido liekanos nustatomos taip pat, kaip eksperimento 7 pavyzdyje. Rezultatai pateikti 6 lentelėje. 7 lentelėje pateikti linijiniai regresijos modeliai, koreliacijos koeficientai ir atlaisvinimo periodai, paskaičiuoti kaip X-atėminiai, kurie nustatyti iš duomenų 6 lentelėje pagal 2 lentelėje nurodytą būdą.Using the microcapsules obtained in Example 10, the residues of the physiologically active peptide were determined in the same manner as in Example 7 of the experiment. The results are shown in Table 6. Table 7 shows the linear regression models, correlation coefficients, and release periods calculated as X-samples, which were determined from the data in Table 6 according to the method shown in Table 2.
lentelėtable
lentelėtable
ir 7 lentelėse pateikti duomenys rodo, kad mikrokapsulės pagal šį išradimą yra charakterizuojamos fiziologiškai aktyvaus peptido pakankamai pastoviu atlaisvinimu, nepriklausomai nuo pradinio staigaus suskilimo.and Table 7 show that the microcapsules of the present invention are characterized by a sufficiently constant release of the physiologically active peptide, irrespective of the initial rapid degradation.
Eksperimento 11 pavyzdysExample 11 of Experiment
Apie 30 mikrokapsulių, gautų 11 pavyzdyje, disperguojama 0.5 ml dispersinėje terpėje, {paruoštoje, ištirpinus distiliuotame vandenyje karboksimetilceliuliazę (2.5 mg)}, polisorbitą 80 (0.5 mg) ir manitą (25 mg), ir dispersinis tirpalas buvo leidžiamas po oda 22G adata į 10 savaičių amžiaus SD žiurkių patinėlių užpakalinę dalį (mikrokapsulėse dozė 60 mg/kg). Po įvedimo žiurkės serijomis buvo užmušamos, mikrokapsulių likučiai nuo įvedimo vietos buvo pašalinami ir mikrokapsulėse nustatomas aktyvaus peptido A kiekio likutis. Rezultatai pateikiami 8 lentelėje.About 30 microcapsules obtained in Example 11 were dispersed in 0.5 ml dispersion medium {prepared by dissolving carboxymethylcellulase (2.5 mg) in distilled water}, polysorbite 80 (0.5 mg) and mannitol (25 mg), and the dispersion solution was injected subcutaneously into a 22G needle. 10 weeks old SD rat male hindquarters (microcapsule dose 60 mg / kg). After administration, rats were serially sacrificed, residues of the microcapsules were removed from the site of administration, and residues of active peptide A were determined in the microcapsules. The results are shown in Table 8.
Eksperimento 12 pavyzdysExample 12 of Experiment
Naudojant mikrokapsulės, gautas 12 pavyzdyje, eksperimento 11 procedūra buvo kitaip pakartota ir nustatoma fiziologiškai aktyvaus peptido A liekana. Rezultatai pateikti 8 lentelėje.Using the microcapsules obtained in Example 12, the procedure of Experiment 11 was otherwise repeated and the residue of physiologically active peptide A was determined. The results are shown in Table 8.
Eksperimento 13 pavyzdysExample 13 of Experiment
Naudojant mikrokapsules, gautas 13 pavyzdyje, kitaip pakartota eksperimento 11 pavyzdžio procedūra, ir nustatyta fiziologiškai aktyvaus peptido A liekana, rezultatai pateikti 8 lentelėje.Using the microcapsules obtained in Example 13, otherwise repeating the procedure of Experiment 11, and determining the physiologically active peptide A residue, the results are shown in Table 8.
Eksperimento 14 pavyzdysExample 14 of Experiment
Naudojant mikrokapsules, gautas 14 pavyzdyje, buvo kitaip pakartota eksperimento 11 pavyzdžio procedūra, ir nustatyta fiziologiškai aktyvaus peptido A liekana. Rezultatai pateikti 8 lentelėje.Using the microcapsules obtained in Example 14, the procedure of Example 11 of Experiment 11 was otherwise repeated and the residue of physiologically active peptide A was determined. The results are shown in Table 8.
8 lentelėTable 8
Fiziologiškai aktyvaus peptido A liekana (%)Physiologically active peptide A residue (%)
(-: nenustatyta) lentelėje pateikti duomenys rodo linijinius regresijos modelius, koreliacijos koeficientus ir atlaisvinimo periodus, kaip X-atėminius, kurie buvo nustatyti iš 8 lentelės duomenų pagal 2 lentelėje nurodytą būdą.(-: not determined) The data in the table show linear regression models, correlation coefficients, and release periods as X -strings determined from the data in Table 8 following the procedure in Table 2.
lentelėtable
nepertraukiamai atlaisvinamas preparatas pagal šį išradimą užtikrina nekintamą pakankamai pastovų peptido atlaisvinimą įvairiais laiko tarpais.the sustained release formulation of the present invention provides for a consistent, sustained release of the peptide at various times.
Palyginimo 1 pavyzdysComparison Example 1
400 mg fiziologiškai aktyvaus peptido A acetato pridedama į pieno rūgšties-glikolio rūgšties kopolimero tirpalą {pieno rūgštis/glikolio rūgštis=50/50 (moliai %) , molekulinių svorių vidurkis pagal GPC=58,000, molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal GPC=14,000, molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal galinės grupės nustatymą=45,000; gamintojas: BoehringerIngelheim (Lot.RG505-05077)} , kurio 3.6 g ištirpinami 33.2 g (25.0 ml) dichloretano, bet fiziologiškai aktyvaus peptido A acetatas negalėjo būti gerai ištirpinamas.400 mg of physiologically active peptide A acetate is added to a solution of lactic acid-glycolic acid copolymer {lactic acid / glycolic acid = 50/50 (mol%), mean molecular weight by GPC = 58,000, number of molecular weight average by GPC = 14,000, molecular weight number of averages according to end group setting = 45,000; manufacturer: BoehringerIngelheim (Lot.RG505-05077)}, 3.6 g of which are dissolved in 33.2 g (25.0 ml) of dichloroethane, but the physiologically active peptide A acetate cannot be well dissolved.
Palyginimo 2 pavyzdysComparison Example 2
400 mg fiziologiškai aktyvaus peptido A acetato pridedama i, pieno rūgšties-glikolio rūgšties kopolimero tirpalą {pieno rūgštis/glikolio rūgštis=75/25 (moliai %) , molekulinių svorių vidurkiai pagal GPC=18,000, molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal GPC=8,400, molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal galinės grupės nustatymą=30,000: gamintojas: BoehringerIngelheim (Lot. RG752-15057)} , kurio 3.0 g ištirpinta 8.0 g (6.0 ml) dichloretano, bet fiziologiškai aktyvus peptidas A negali būti gerai ištirpinamas. Šis tirpalas atšaldomas iki 17°C ir pilamas į 1,000 ml 0.1% vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą, prieš tai atreguliavus jo temperatūrą iki 15°C, kad gauti mikrokapsulės 11 pavyzdyje nurodytu būdu. Dalelių dydžiai mikrokapsulėse buvo nuo 10 iki 90 μιη, ir fiziologiškai aktyvaus peptido kiekis 2.5% (w/w).400 mg of physiologically active peptide A acetate is added to a solution of lactic acid-glycolic acid copolymer {lactic acid / glycolic acid = 75/25 (mol%), average molecular weight by GPC = 18,000, number of molecular weight by GPC = 8,400, molecular weight average number of weights according to end group determination = 30,000: Manufacturer: BoehringerIngelheim (Lot RG752-15057)} with 3.0 g dissolved in 8.0 g (6.0 ml) dichloroethane but physiologically active peptide A cannot be dissolved well. This solution is cooled to 17 ° C and added to 1,000 ml of a 0.1% aqueous solution of polyvinyl alcohol, after adjusting its temperature to 15 ° C, to obtain the microcapsules as described in Example 11. The particle sizes in the microcapsules ranged from 10 to 90 μιη and the content of physiologically active peptide was 2.5% (w / w).
Palyginimo 3 pavyzdysComparison Example 3
400 mg fiziologiškai aktyvaus peptido A acetato pridedama į pieno rūgšties-glikolio rūgšties kopolimero tirpalą {pieno rūgštis/glikolio rūgštis=75/25 (moliai %), molekulinių svorių vidurkiai pagal GPC=58,000, molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal GPC=15,000, molekulinių svorių vidurkių skaičius pagal galinės grupės nustatymą=53,000: gamintojas: BoehringerIngelheim (Lot. RG755-05019)} , kurio 3.6 g ištirpinta 21.2 g (16.0 ml) dichlormetano, bet fiziologiškai aktyvus peptidas A negali būti gerai ištirpinamas. Šis tirpalas atšaldomas iki 17°C ir pilamas i 1,000 ml 0.1% vandeninį polivinilo alkoholio tirpalą, prieš tai jo temperatūrą atreguliavus iki 16°C, kad gauti mikrokapsulės 11 pavyzdyje nurodytu būdu. Dalelių dydis mikrokapsulėse buvo nuo 10 iki 90 ųm, ir fiziologiškai aktyvaus peptido A kiekis - 3.6% (w/w).400 mg of physiologically active peptide A acetate is added to a solution of lactic acid-glycolic acid copolymer {lactic acid / glycolic acid = 75/25 (mol%), mean molecular weight based on GPC = 58,000, number of molecular weight average based on GPC = 15,000, molecular weight mean number by end group determination = 53,000: Manufacturer: BoehringerIngelheim (Lot RG755-05019)} with 3.6 g dissolved in 21.2 g (16.0 ml) dichloromethane but physiologically active peptide A cannot be dissolved well. This solution is cooled to 17 ° C and added to 1,000 ml of 0.1% aqueous polyvinyl alcohol solution, after adjusting its temperature to 16 ° C, to obtain the microcapsules in the manner described in Example 11. The particle size of the microcapsules ranged from 10 to 90 µm and the content of physiologically active peptide A was 3.6% (w / w).
Palyginimo 4 pavyzdysComparison Example 4
400 mg leuprolerino acetato (gamintojas: Takeda Chemical Industries) pridedama į tą patį, naudojamą palyginimo 2 pavyzdyje, pieno rūgšties-glikolio rūgšties kopolimero tirpalą, kurio 3.6 g ištirpinti 8.0 g (6.0 ml) dichlormetano, bet leuprolerino acetatas negali būti gerai ištirpintas.400 mg of leuprolerine acetate (manufactured by Takeda Chemical Industries) are added to the same solution of the lactic acid-glycolic acid copolymer used in Comparison Example 2, containing 3.6 g of 8.0 g (6.0 ml) of dichloromethane, but the leuprolerine acetate cannot be well dissolved.
Šio išradimo nepertraukiamai atlaisvinamame preparate pastoviai atlaisvinami vaistai, ypač peptidas (I), gana ilgą laiką, tokiu būdu užtikrinamas ilgalaikis ir stabilus efektas. Taigi, vaistų atlaisvinimo trukmė gali būti lengvai kontroliuojama ir atlaisvinamas perteklius tuojau po įvedimo gali būti slopinamas. Būdinga, kad histaminą atlaisvinantis aktyvumas peptide (I) tuojau po nepertraukiamai atlaisvinamo preparato įvedimo yra slopinamas. Nepertraukiamai-atlaisvinamas preparatas yra labai dispersiškas. Be to, preparatas yra stabilus (pvz., šviesai, karščiui, drėgmei, spalvinimui), yra netoksiškas ir todėl nepavojingas naudojant.The sustained release formulation of the present invention provides sustained release of drugs, particularly peptide (I), over a relatively long period of time, thereby providing a sustained and stable effect. Thus, the duration of drug release can be easily controlled and the excess released immediately after administration can be suppressed. Typically, histamine-releasing activity in peptide (I) is inhibited shortly after continuous administration of the preparation. The sustained release formulation is highly dispersible. In addition, the preparation is stable (eg light, heat, humidity, color), non-toxic and therefore non-hazardous in use.
Pagal šio išradimo metodą nepertraukiamai atlaisvinamas preparatas, kurio sudėtyje yra fiziologiškai aktyvus peptidas, gali būti lengvai gaunamas dideliais kiekiais. Gauto nepertraukiamai atlaisvinamo preparato paviršius yra lygus ir labai judrus.In accordance with the method of the present invention, a sustained release formulation containing a physiologically active peptide can be readily obtained in bulk. The resulting sustained release formulation has a smooth and highly mobile surface.
IŠRADIMO APIBRĖŽTISDEFINITION OF INVENTION
Claims (10)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP32707092 | 1992-12-07 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
LTIP1526A LTIP1526A (en) | 1994-10-25 |
LT3265B true LT3265B (en) | 1995-05-25 |
Family
ID=18194959
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
LTIP1526A LT3265B (en) | 1992-12-07 | 1993-12-03 | Supstained-release preparation and method for its preparing |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN100463672C (en) |
LT (1) | LT3265B (en) |
UA (1) | UA61046C2 (en) |
ZA (1) | ZA939163B (en) |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US511094A (en) | 1893-12-19 | Rope or cable drive for machinery | ||
EP0052510A2 (en) | 1980-11-18 | 1982-05-26 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Microencapsulation of water soluble polypeptides |
EP0058481A1 (en) | 1981-02-16 | 1982-08-25 | Zeneca Limited | Continuous release pharmaceutical compositions |
GB2209937A (en) | 1987-09-21 | 1989-06-01 | Depiopharm S A | Water insoluble polypeptides |
EP0467389A2 (en) | 1990-07-19 | 1992-01-22 | University Of Kentucky Research Foundation | Drug delivery system involving interaction between protein or polypeptide and hydrophobic biodegradable polymer |
EP0481732A1 (en) | 1990-10-16 | 1992-04-22 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Prolonged release preparation and polymers thereof |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4690916A (en) * | 1984-11-13 | 1987-09-01 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Nona and decapeptide analogs of LHRH useful as LHRH antagonists |
US4897268A (en) * | 1987-08-03 | 1990-01-30 | Southern Research Institute | Drug delivery system and method of making the same |
US5110904A (en) * | 1989-08-07 | 1992-05-05 | Abbott Laboratories | Lhrh analogs |
-
1993
- 1993-07-12 UA UA95062699A patent/UA61046C2/en unknown
- 1993-12-03 LT LTIP1526A patent/LT3265B/en not_active IP Right Cessation
- 1993-12-07 CN CNB2006100997237A patent/CN100463672C/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-12-07 ZA ZA939163A patent/ZA939163B/en unknown
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US511094A (en) | 1893-12-19 | Rope or cable drive for machinery | ||
EP0052510A2 (en) | 1980-11-18 | 1982-05-26 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Microencapsulation of water soluble polypeptides |
EP0058481A1 (en) | 1981-02-16 | 1982-08-25 | Zeneca Limited | Continuous release pharmaceutical compositions |
GB2209937A (en) | 1987-09-21 | 1989-06-01 | Depiopharm S A | Water insoluble polypeptides |
EP0467389A2 (en) | 1990-07-19 | 1992-01-22 | University Of Kentucky Research Foundation | Drug delivery system involving interaction between protein or polypeptide and hydrophobic biodegradable polymer |
EP0481732A1 (en) | 1990-10-16 | 1992-04-22 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Prolonged release preparation and polymers thereof |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
UA61046C2 (en) | 2003-11-17 |
CN100463672C (en) | 2009-02-25 |
LTIP1526A (en) | 1994-10-25 |
ZA939163B (en) | 1995-06-07 |
CN1911214A (en) | 2007-02-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0601799B1 (en) | Sustained-release preparation | |
RU2434644C2 (en) | Composition of prolonged action and method of obtaining said composition | |
JP4557312B2 (en) | Sustained release composition and method for producing the same | |
TWI481424B (en) | Sustained-release composition and method for producing the same | |
EP1778278B1 (en) | Gonadotropin releasing hormone antagonists | |
WO2002012369A1 (en) | Lactic acid polymer and process for producing the same | |
SK15602003A3 (en) | Controlled release composition comprising lactic acid polymer and hydroxynaphthoic acid, and method of producing same | |
KR20020012312A (en) | Sustained release compositions, process for producing the same and use thereof | |
JPH10273447A (en) | Delayed-release microsphere and its production and use | |
JPH07278277A (en) | Ester at terminal carboxyl group of in-vivo decomposable polymer | |
RU2128055C1 (en) | Pharmaceutical composition of the delayed agent releasing and a method of its preparing | |
LT3265B (en) | Supstained-release preparation and method for its preparing | |
JP3524195B2 (en) | Base for sustained release formulation | |
JP2003206243A (en) | Sustained release composition and method for producing the same |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM9A | Lapsed patents |
Effective date: 20031203 |