KR980002249A - 아스퍼질러스 플레버스로부터 분리한 아미노펩티다제 및 그를 이용한 재조합 단백질의 아미노말단에 부착된 메티오닌 잔기의 제거방법 - Google Patents

아스퍼질러스 플레버스로부터 분리한 아미노펩티다제 및 그를 이용한 재조합 단백질의 아미노말단에 부착된 메티오닌 잔기의 제거방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 아스퍼질러 플레버스(Aspergillus flavus) KCTC 6961로 분리한 아미노펩티다제(aminopeptidase) 및 그를 이용한 재조합 단백질의 아미노말단에 부착된 메티오닌 잔기의 제거방법에 관한 것이다. 아스퍼질러스 플레버스(Aspergillus flavus) KCTC 6961 균주의 포자를 멸균배지에 접종하여 배양하고, 배양액을 이온 교환 크로마토그래피와 2회에 걸쳐 겔 여과 크로마토그래피 처리를 하여 아미노펩티다제를 제조한다. 본 발명의 아미노펩티다제를 이용하며, 비천연형의 유전자 재조합 단백질의 아미노 말단에 위치하는 메티오닌 잔기를 제거하여 천연형의 단백질로 전환할 수 있다.

Description

아스퍼질러스 플레버스로부터 분리한 아미노펩티다제 및 그를 이용한 재조합 단백질의 아미노말단에 부착된 메티오닌 잔기의 제거방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 아스퍼질리스 플레버스 배양액으로부터 분리·정제한 아미노펩티다제의 SDS-폴리아크릴아미드겔 전기영동 사진이다.
제2도는 본 발명의 아미노펩티다제를 N-글루코시다제로 처리하고 전기 영동시킨 결과를 나타내는 사진이다.
제3도는 본 발명에 의한 아미노펩티다제의 활성을 pH 변화에 따라 나타낸 그래프이다.

Claims (6)

  1. ⅰ) 아스퍼질러스 플레버스(Aspergillus flavus) KCTC 6961 균주의 포자를 멸균배지에 접종하여 20 내지 35℃에서 2 내지 4일간 배양하여 배양액을 수득하는 공정; 및 ⅱ) 전기에서 수득한 배양액에 대하여 이온 교환 크로마토그래피를 수행하여 0.5M 염화나트륨을 포함하는 인산완충액을 용출시켜 아미노펩티다제 활성분획을 얻고 한외여과를 통하여 농축한 다음, 겔 여과 크로마토그래피를 2회 수행하는 공정을 포함하는 아미노펩티다제의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 이온 교환 크로마토그래피는 인산나트륨 완충용액으로 평형화된 세파로즈가 충진된 칼럼을 사용하는 것을 특징으로 하는 아미노펩티다제의 제조방법.
  3. 제1항에 있어서, 겔 여과 크로마토그래피는 염화나트륨을 포함하는 트리스 완충액으로 평형화된 세파크릴이 충진된 칼럼을 사용하는 것을 특징으로 하는 아미노펩티다제의 제조방법.
  4. 아스퍼질러스 플레버스(Aspergillus flavus) KCTC 6961로부터 생산되며, 다음과 같은 특성을 가지는 아미노펩티다제; ⅰ)분자량은 약 60 내지 80kD이고; ⅱ)Asp/Asn 14.83몰%, Glu/Gln 9.07몰%, Ser 7.28몰%, Gly 9.76몰%, His 1.53몰%, Thr 4.99몰%, Ala 11.86몰%, Arg 2.44몰%, Pro 4.17몰%, Tyr 5.30몰%, Val 6.03몰%, Met 0.86몰%, Ile 4.23몰%, Leu 8.19몰%, Phe 3.73몰% 및 Lys 5.66몰%,의 아미노산 조성을 가지며; ⅲ) 아미노 말단의 아미노산 서열은 글라이신-아지닌-알라닌-루이신-세린 혹은 그외의 아미노산 프롤린-아스파산-글루탐산-페닐알라닌 (Gly-Arg-Ala-Leu-Ser/Xaa-Pro-Asp-Glu-Phe)의 서열로 구성되어 있으며, 또한 아미노 말단의 서열로부터 아미노 말단에서 한개의 아미노산이 제거된 형태로도 존재하고; 및, ⅳ) 단백질의 질소분자와 당쇄가 연결되어 있는 당단백질로서 당쇄를 제외한 단백질의 분자량은 약 50 내지 60 kD이다.
  5. 메티오닌 잔기가 아미노말단에 부착된 재조합 단백질과 제4항의 아미노펩티다제를 중량대비 200:1 내지 2,000:1의 비율로 반응완충액에 가한 다음, 약 37℃에서 약 24시간 동안 반응시키는 단계를 포함하는 재조합 단백질의 아미노말단에 부착된 메티오닌 잔기의 제거방법.
  6. 제5항에 있어서, 반응완충액은 0.1M 트리스(8.0)를 사용하는 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 아미노말단에 부착된 메티오닌 잔기의 제거방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019970058850A 1997-11-07 1997-11-07 아스퍼질러스 플레버스로부터 분리한 아미노펩티다제 및 그를 이용한 재조합 단백질의 아미노말단에 부착된 메티오닌 잔기의 제 거방법 KR100243526B1 (ko)

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