KR970001161B1 - 아미노푸테리딘 메틸티오벤조인산 유도체 및 그 제법 - Google Patents

Abstract

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Description

아미노푸테리딘 메틸티오벤조인산 유도체 및 그 제법

본 발명은 약정종창 치료작용을 갖는 하기 구조식(I)의 신규의 아미노푸테리딘 메틸티오벤조인산 유도체 및 그 제법에 관한 것이다.

상기 식에서, R은 수소 또는 메틸이고, R¹및 R²는 수소, 메틸, 에틸, 푸로필 또는 이소푸로필이다.

상기 구조식(I)의 화합물과 유사한 악성종창치료 작용을 갖으며 유사한 구조를 갖는 공지 화합물로는, 메소트렉세이트(methotrexate, MTX^R; The Merck Index 11판, 5908, 1989참조)가 있으며 하기와 같은 구조식을 갖는다.

상기 메소트렉세이트 화합물은 부작용으로 골수기능의 억제, 백혈구 감소증, 소화기의 궤양발생, 간 및 신장기능의 장애등 많은 부작용이 있으며, 독성(LD₅₀iv in rats: 14mg/kg, scherf) 또한 심각하여 투여시 많은 주의가 필요한 것이 사실이다.

따라서, 본 발명자는 보다 안전한 악성종양 치료작용을 갖는 항암제를 연구하던 중, 푸테리딘(pteridine) 모핵을 갖으며 C₂위치에 있는 아미노(-NH₂)기 대신 CH₃와 H를 도입하고, 또 C₁₀위치의 N-CH₃대신 S(티오)기로 치환시켜 합성한 중간체인 프테로익엑시드(Pteroic acid)에 디에틸구루타메이트(diethylutamate)를 반응시켜 구조식(I)의 새로운 새로운 안정한 항암제를 얻게 되어 특허로서 출원하는 바이다.

본 발명의 구조식(I)의 화합물은 다음과 같은 두가지 경로에 의하여 제조한다.

1)

파라 아미노벤조인산(1)의 p-Amino기를 티오(S)기로 치환하기 위해 Sandm eyer 반응을 도입하여 화합물(2)를 얻고 이를 벤질알콜로 에스테르화 반응을 시킨 다음, EtOH속에서 NaBH₄로 환원한 다음 pyrazine유도체인 (4)를 가하여 중간체(5)를 얻는다. 이렇게 해서 얻어진 신규의 화합물(5)에 포름아미딘 염산염 또는 아세트아미딘염산을 각각 가하여 (6A)와 (6B)의 신규 푸테리딘 유도체를 얻게 된다. 이 벤질에스텔 화합물을 알칼리 가수분해하여 푸테로익에시드 유도체인(7A)와 (7B)를 각각 얻는다. 이 푸테로익에시드 유도체 (7A)와 (7B)를 DMF(디메틸포름아미드)존재하에서 DEPC (Diethylphosphorcyanidate)을 사용해서 디에틸 L-구로타메이트(8)와 반응시켜 구조식(I)의 에스텔형의 화합물을 얻고, 필요시 산가수분해시켜 구조식(I)의 유리산 형태의 화합물을 얻는다.

이를 도식화하면 다음과 같다.

상기 식에서, R, R¹및 R²는 전기 정의한 바와 같다.

2)

또 다른 방법으로 아미노푸테린 유도체를 합성하기 위해 화합물(2)와 diethyl L-glutamate를 DCC(디싸이클로헥실카보디이마이드)를 사용하여 bis sulfide 화합물인 (9)를 합성하고 EtOH 속에서 NaBH₄로 환원한 다음 실온에서 화합물(4)를 가하면 pyrazine 유도체(10)가 얻어진다. 이렇게 해서 얻어진 중간체(10)를 EtOH과 NaOEt와 같은 알칼리 존재하에서 포름아미딘 염산염 또는 아세크아미딘염산염과 반응시켜 구조식(I)의 에스텔형 화합물을 얻고 필요시 이를 산가수분해시켜 구조식(I)의 유리산형의 화합물을 얻는다.

이를 도식화 하면 다음과 같다.

상기 식에서, R, R¹및 R²는 전기 정의한 바와 같다.

상기 구조식(I) 화합물중 바람직한 화합물로는 다음의 것을 둘 수 있다.

이하, 실시예를 들어 설명하면 다음과 같다.

실시예 1

4,4'-디티오비스벤조인산(2)의 합성

flask에 증류수 90ml을 가하고 NaS · 9HO 26g(0.11mol)을 가하여 용해시키고 이어서 S3.4g(0.05mol)을 소량씩 가하여 30분간 교반한 다음 용해시키고 ice-bath를 장치하여 냉각시킨 다음 방치한다. 또한 별도로 증류수 50ml에 P-amino benzoic acid(1) 13.7g(0.1mol)를 가한 다음 ice-bath 장치하에서 -10 C 로 냉각한 다음 C-HCl 26ml를 10분간 가하여 0 C 로 냉각시키고 여기에 NaNO6.9g(0.1mol)를 증류수 30ml에 용해한 용액을 소량씩 10분간 가하여 교반하면서 동일한 온도로 위에서 방치한 용액과 30분 동안 혼합하고 다시 30분 동안 교반한 다음 혼합물을 여과하고 여액을 pH 3으로 조절하여 생성된 결정 화합물을 여과하고 건조하여 위 화합물 18.0g을 얻었다.

수율 ; 49.9%

MP ; 322∼324 C

IR(KBr)Cm ; 3500(-OH), 1500(C=0)

11.0(S,lH,)

¹H-NMR(DMSO-d₆) ; 8.0(q,4H,-C₆H₅-)

11.0(S,lH,)

실시예 2

디벤질-4,4'-디티오비스벤조에이트(3)의 합성.

4,4'-디티오비스벤조인산(2) 1.53g(0.001mol)을 벤질알콜 100ml에 가하고 HCl(g)로 1.5시간 동안 ice-bath하에서 포화시키고 95-110^oC 에서 6시간 동안 가온 교반한 다음 냉각시킨다. 여기에 NaHCO₃포화용액을 가하여 pH 8로 조정한 다음 냉각하여 결정 화합물을 석출시킨다. 이를 감압 여과하여 H₂O로 씻어준 다음 건조하여 상기 화합물 0.4g을 얻었다.

수율 ; 83.3%

MP ; 102∼104^oC

IR(KBr)Cm^-1; 3400(NH₂), 3020(=C-H), 2220(C≡N), 1750(C=0), 163 6,1457(C=C)

¹H-NMR(DMSO-d₆) δ: 4.9(s,2H,CH₂-), 6.9(s,5H,C₆H₅),7.1(d,2H,s- C₆H₅-), 7.5(d,2H,s-C₆H₅-)

실시예 3

2-아미노-3-시아노 -5-[(S-ρ-카벤질옥시페닐)티오메틸]-피라진(5) 합성

디벤질 4,4'-디티오비스벤조에이트(3) 0.91g(0.001mol)을 EtOH 30ml에 가하고 이어서 NaBH₄0.069g(0.002mol)을 소량씩 5분간에 걸쳐서 가한다. 음 실온에서 환원하였다. 이어서 2-아미노-3-시아노-5-클로로메틸피라진(4) 화합물 0.31g( 0.002mol)을 소량씩 10분간 가하고 실온에서 2시간 동안 교반하여 생성된 고체 생성물을 여과한 후 증류수 및 EtOH과 Et₂O로 씻어준 다음 건조하여 상기 화합물 0.65g을 얻었다.

수율 ; 88.6%

MP ; 168∼170^oC

IR(KBr)Cm^-1; 3420∼3320(NH₂), 2220(C=N), 1710(C=0), 1625,158 5(C=C)

¹H-NMR(CDCl₃) δ: 4.2(s,2H,-CH₂-S), 5.15(s,5H,CH₂-C₆H₅),7.32( d,2H,S-C₆H₄-), 8.9(d,2H,S-C₆H₄-), 8.1(s,1H,C₅-H)

실시예 4

4-[[(4-아미노푸테리딘-6-일)메틸]티오]벤조인산의 벤질에스텔(6A) 합성

화합물(5) 1.5g(0.004mole)과 포름아미딘염산염 0.48g(0.006mol)을 디메틸포름아미드 15ml에 가하여 용해한 다음 ab-EtOH 100ml를 가하고, NaOEt 0.4g(0.0 06mol)을 가한다.

이를 20시간 동안 환류시킨 다음 더운 용액을 감압 여과하여 불용물질을 제거하고 여액에 활성탄을 가하여 탈색시킨 다음 여과하고 여액을 감압 농축시켰다. 그리고 증류수 50ml을 가하여 생성된 고체 화합물을 여과하여 증류수 및 Et₂O와 EtOH로 씻어준 다음 건조하여 상기 화합물 1.2g을 얻었다.

수율 ; 77.8%

MP ; 145∼148^oC

IR(KBr)Cm^-1; 3450~3310(-NH₂), 1710(C=O), 1620, 1540(C=C)

¹H-NMR(CF₃COOD) δ: 4.7(s,2H,-CH₂-S), 5.5(S,2H,CH₂-C₆-H₅), 7.4∼7.5(s,5H,-C₆H₅), 7.5(d,2H,S-C₆H₄-), 8.0(d,2H,S-C₆H₄-),9.0(s,1H,C₂-H), 8.2(s,1H,C₆-H), 9.4(S,1H,pterdine ring C₇-H)

실시예 5

4-[[(4-아미노-2-메틸 프테리딘-6-일)티오]메틸 아미노]벤조인산의 벤질에스텔(6B)의 합성

화합물(5) 1.42(0.004mol)과 아세트아미딘 염산염 2.95g(0.031mol)을 디메틸포름아미드 12ml에 용해시키고 ab-EtOH 300ml를 가하고, NaOEt 0.4g(0.006mo l)을 가하여 화합물(6A)의 합성법과 동일한 방법으로 상기 화합물 1.01g을 얻었다.

수율 ; 67%

MP ; 105∼107^oC

IR(KBr)Cm^-1; 3450~3310(NH₂), 3100∼3200(C=C-H), 2990∼2989(C-H), 710(C=0), 1620, 1550(C=C)

¹H-NMR(CF₃COOD) δ: 2.7(s,3H,-CH₃), 3.0(s,2H,-CH₂S-),6.1(S,2H ,-CH₂-S), 8.1(s,5H,C₆H₅), 8.15(d,2H,S-C₆H₄-), 8.4(d,2H,S-C₆H₄-), 10.0(s, 1H,C₆-H)

실시예 6

4-[[(4-아미노푸테리딘-6-일)메틸]티오]벤조인산(7A)의 합성

화합물(6A) 1.1g(0.003mol)을 1.5N NaOH-EtOH 혼합용액 100ml에 가하고 질소기류하에서 5시간 동안 환류하였다. 혼합액에 활성탄을 가하여 약 15분간 교반한 다음 여과하고 여액을 냉각하여 1N HCl를 소량씩 가하여 pH 3.5로 조절하고 생성된 결정 화합물을 원심분리하여 여과한다. 이를 2회에 걸쳐 증류수 및 CH₃CN과 Et₂O순으로 씻어준 다음 건조하여 노란색 결정 화합물 0.5g을 얻었다.

수율 ; 61%

MP ; 210^oC

IR(KBr)Cm^-1; 3400(NH2), 2620(C-H), 1682(C=O), 1591(C=C)

¹H-NMR(CF₃COOD) δ: 4.85(s,2H,CH₂S), 7.4(d,2H,C₆H₅),8.0(s,2H,C₆H₅), 8.2(s,1H,pteriding ring, C₂-H), 8.9(s,pteriding ring C₆-H)

실시예 7

4-[[(4-아미노-2-메틸푸테리딘-6-일)메틸]티오]벤조인산(7B)의 합성

화합물(6B) 1.0g(0.03mol)을 1.5N NaOH-EtOH 혼합액 100ml에 가하고 질소기류하에서 6시간동안 환류한 다음 혼합액에 활성탄을 가하여 약 15분간 교반한 다음 여과하고 여액을 냉각하여 1N-HCl를 소량씩 가하여 pH 3.0으로 조절하고 생성된 결정 화합물은 원심분리하여 여과하고 이를 2회 걸쳐 증류수 및 EtOH 및CH₃CN 등으로 씻어준 다음 건조하여 노란색 결정 0.3g을 얻었다.

수율 ; 35.6%

MP ; 266∼268^oC

IR(KBr)Cm^-1; 3400(NH₂), 2910,2850,(C-H), 1690(C=O),1640,1585(C =C)

¹H-NMR(CF₃COOD) δ: 2.9(s,3,H,pteriding ring,C₂-CH₃), 4.5(s,2H,-CH₂,-S-), 7.5(d,2H,-C₆H₅-), 8.0(d,2H,-C₆H₅-), 9.2(S,1H,C₂-H)

실시예 8

디에틸 N-[[(4-아미노푸테리딘-6-일)메틸]티오]벤조일-L-글루타메이트(I-1)의 합성

재증류한 DMF 15ml에(7A) 화합물 0.156g(0.005mol)을 5분 동안 소량씩 가하고 이어서 디에틸포스포시아니데이트(diethylphophorcyanidate) 98ml(0.61mol)을 가한 다음, Et₃N 202mg(2mol)을 가하고 실온에서 30분 동안 교반한다. 그리고 diethyl-L-glutamate 117mg(0.6mol)을 일시에 가하여 교반시키고 TLC(91:1 CHCl₃-MeoH)로 확인 다음 여과하여 불용성 화합물을 여과하여 제거한다. 여액을 감압 농축하여 증류수를 가하고 결정화 시킨 다음 원심분리하여 생성된 결정 화합물을 증류수 및 CH₃CN으로 세척하고 건조시켜 상기 화합물을 0.1g을 얻었다.

수율 ; 43.4%

MP ; 205^oC

IR(KBr)Cm^-1; 3500(NH₂), 1710(C=O), 1550,1400(C=C)

¹H-NMR(CDCl₃) δ; 1.2(m,3H,-CH₂ ), 2.2∼2.4(m,4H,--CO), 4.2(q,2H,2·OCH₂CH₃), 4.3(s,2H,-S), 7.5(d,2H,-C₆H₄-),7.8(d,2H,- C₆H₄-), 8.7(s,1H,Pteridine ring C₇H), 9.0(s,1H, Pteridine ring C₂H)

실시예 9

디에틸 N-[[(4-아미노-2-메틸푸레리딘-6-일)메틸]티오]벤조일-L-글루타메이트(I-2)의 합성

재증류한 DMF 15ml에(7B) 화합물 0.156g(0.01mol)을 5분 동안 소량씩 가하고 이어서 디에틸포스포시아니데이트(diethyphosphorcyanidate) 98ml(0.6mol)와 Et₃N 202mg(2mol)을 가하고 실온에서 30분 동안 교반시킨다. 그리고 diethylL-glutamate 117mg(0.6mol)을 일시에 가하여 교반시키고 TLC(91:1CHCl₃-MeoH)로 확인 다음 불용성 화합물을 여과하여 제거한다. 여액을 감압 농축하여 증류수를 가하고 결정화 시킨 다음 30분간 더 교반하여 이를 여과하여 결정 화합물을 증류수 이소푸로필에텔로 세적하여 상기 화합물 0.13g을 얻었다.

수율 ; 52.48%

MP ; 126∼128^oC

IR(KBr)Cm^-1; 3300,3200(NH₂), 1730,1630(C=O), 1600,1500(C=C)

¹H-NMR(CDCl₃) δ; 1.2∼1.3(m,6H,2-CH₂ ), 2.8(s,3H,Pteridine ring -C₂-CH₃), 2.1∼2.5(m,4H,-CO), 4.0∼4.1(m,4H,2-OCH₃),4.2(S,3H,-CH₂-S), 4.7(m,1H,-NH-), 7.4(d,2H,-C₆H₄-), 7.7(d,2H,-C₆H₄-),9.1(s,1 H,pteridine ring C₇-H)

실시예 10

N-[[(4-아미노-2-메틸푸레리딘-6-일)메틸]티오]벤조일-L-글루타민산(I-4)의 합성

Flask에 CH₂Cl₂-CF₃COOH(2:1)용액 21ml에 (I-2)화합물 1.13g(0.002mol )을 가하고 질소기체하에서 3시간동안 교반한 다음 여과하여 불용성을 제거시킨다. 활성탄을 가하여 탈색한 다음 여액을 감압 농축하여 증류수를 20ml를 가하고 5% NH₄OH로 pH3으로 조절한 후 냉각시켜서 생성된 결정 화합물을 여과한다. 그리고 증류수, 이소푸로필에텔 및 Et₂O순으로 세척하고 건조시켜 상기 화합물 0.4g을 얻었다.

수율 ; 39.8%

MP ; 250^oC

IR(KBr)Cm^-1:

¹H-NMR(DMSO-d₆) δ: 2.3∼3.0(b,3H,-CO), 3.4(S,3H,Pteridi ne ring C₂-CH₃), 5.15(S,2H,-CH₂-S), 7.7(d,2H,C₆H₄-), 7.9(d,2H,C₆H₄-), 9.4 (S,1H,pterdine ring C₇-H)

실시예 11

(I-1) 화합물로부터 실시예 10의 방법으로 산가수분해시켜 (I-3)의 화합물을 얻는다.

실시예 12

테트라에틸 4,4'-디티오비스(N-벤조일-L-글루타메이트)(9,R¹=R²=Et)의 합성

Flask에 CH₃CN 200ml에 4,4'-dithiobis(benzoic acid) 7.7g(25mmol) 가하고 이어서 diethyl L-glutamate 10.3g(50mmol)을 가하여 10분간 교반한 다음 DCC(디싸이클로헥실카보다이마이드) 11.9g(55mmol)을 가한다. 화합물을 무수 조건하의 실온에서 1일 동안 교반시켰다. 생성된 dicyclohexylurea를 여과하여 제거한 다음 여액을 감압 농축하여 용매를 제거하고 생성된 oilic 잔유물을 CHCl₃300ml 용액에 용해시킨다. 다시 용액을 10% NaHCO₃(2×50ml), 0.1N HCl(2×50ml)와 증류수 순으로 세척한 다음 분별 깔대기로 층분리 시킨다. 분리된 유기층을 무수 MgSO₄를 가하여 탈수한 다음 여과하여 여액을 감압 농축한다. 생성된 잔유물을 CH₃CN 300ml에 용해시키고 불용 화합물은 여과하여 제거한다. 여액을 다시 감압 농축하여 냉각시켜서 상기 화합물 7.9g을 얻었다.

수율 ; 46%

MP ; 58∼61^oC

IR(KBr)Cm^-1; 3350(NH), 1720(CC=O), 1620,1510(C=C)

¹H-NMR(CDCl₃) ; 1.23(m,6H,2-OCH₂ ), 4.08(m,4H,2-OCH₃), 7.44 and 7.7(aromatic quartec 4H,J=8.3HZ), 8.9(d,1H,-CONHCH=)

실시예 13

디에틸 N-[p-[(2-아미노-3-시아노피라진-5-일)메틸티오]벤조일]-L- 글루타메이트(10) 화합물의 합성

EtOH 100ml에 화합물(9) 3.38g(5mmol)을 가하고 실온에서 NaBH₄0.38g( 10mmol)을 가하여 환원시킨 다음 2-아미노-3-시아노-5-클로로메틸피라진 1.68g (10mmol)을 5분간 소량씩 가한다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하여 2-아미노-3-시아노-5-클로로메틸피라진이 TLC상 Rf 0.48; CHCl₃-MeoH(9:1)으로 확인한 다음, 용매를 감압 농축하여 증류수 100ml를 가하고 CHCl₃(3×50ml)로 추출한다. 층분리 한 다음 유기층을 무수 MgSO₄로 탈수한 다음 여과하고 여액을 감압 농축한 다음 생성된 oil 화합물을 감압 건조하여 thick oil 상태의 상기 화합물 2.2g을 얻었다.

수율 ; 93%

IR(KBr)Cm^-1; 3300(NH₂), 2200(C=N), 1720,1620(C=O)

¹H-NMR(CDCl₃) ; 1.25(m,3H,2-OCH_2- ), 2.1∼2.5(m,4H), 4.16(q,2H,2-OCH₃), 5.6(s,2H-CH₂S), 7.5 and 7.9(armatic quartec 4H,-C₆H₄-), 8.35(s,1H,pteridine ring C₆-H)

실시예 14

디에틸 4-[[(4-암미노푸테리딘-6-일)메틸]티오]벤조일-L-글루타메이트(I-1)의 합성

재증류한 DMF 50ml에 화합물(10) 0.62g(0.002mmol)을 소량씩 가하고 이어서 프롬아미딘염산염 0.48g(0.006mmol)과 at-EtOH 100ml를 가한다. 이어서 NaOEt 0.4g(0.005mmol)을 가하고 7시간 동안 환류시킨 다음 활성탄을 가해 더운 용액에서 10분간 교반하고 이를 여과하여 여액을 감압 농축 시킨다. 그리고 증류수 500ml를 가하여 생성된 고체 화합물을 여과하여 증류수, Et₂O, EtOH액으로 씻어준 다음 건조하여 고체 화합물 0.3g을 얻었다.

수율 ; 28.13%

실시예 15

디에틸 4-[[(4-아미노-2-메틸푸테리딘-6-일)메틸]티오]벤조일-L-글 루타메이트(I-2)의 합성

재증류한 DMF 50ml에 (10)화합물 1.7g(0.004mmol)을 소량씩 가하고 이어서 아세트아미딘염산염 0.48g(0.006mmol)을 가하여 용해시키고 ab-EtOH 100ml를 가한다. 이어서 NaOEt 0.4g(0.005mmol)을 가하고 7시간 동안 환류시킨 다음 활성탄을 가해 더운 용액에서 10분간 교반하고 이를 여과하여 여액을 감압 농축 시킨다. 그리고 증류수 500ml를 가하여 생성된 고체 화합물을 여과하여 증류수, Et₂O, EtOH액으로 씻어준 다음 건조하여 고체 화합물 1.11g을 얻었다.

수율 ; 60.3%

본 발명에 따른 화합물들의 약리시험을 수행한 결과 다음과 같았다.

1) 항종양활성도 시험

본 발명에따른 구조식(I-1),(I-2),(I-3) 및 (I-4)의 화합물에 대한 항조양활성은 생존기간의 증가로 평가하였다. 1×10⁶의 백혈병 P388 세포를 BDF₁, 새앙쥐의 복강내로 주사한다. 각군은 6마리의 새앙쥐로 구성된다. 다음날, 상기 화합물 4종을 각각 생리식염수내 0.2% 트윈 80용액에 현탁시켜 복강내 투여하고 생존기간을 일수로 결정한다. 그 결과를 하기표 1에 나타낸다. 생존기간의 %증가를 하기식으로 계산한다.

D₀: 무처리군의 평균생존기간(일수)

D : 처리군과 평균생존기간(일수)

2) 급성독성시험

ddY 스트레인의 수컷 새앙쥐(체중 25g)을 사용하여, 본 발명에 따른 구조식(I-1),(I-2),(I-3) 및 (I-4)의 화합물에 대한 급성독성시험을 하였다.

상기 4종의 화합물을 각각 생리식염수내 0.2% 트윈 80용액에 현탁시켜 새앙쥐에 복강내 투여한다.

LD값을 승강법(up and down method)으로 측정하였으며 그 결과를 하기 표 2에 나타낸다.

본 발명의 화합물의 제제예를 설명한다.

화합물(I-1) 4mg

락토오즈 43mg

콘스타치 50mg

결정셀룰로오즈 50mg

히드록시프로필셀룰로오즈 15mg

활석 2mg

마그네슘스테아레이트 2mg

에틸셀룰로오즈 30mg

지방상글리세린에스테르 2mg

이산화티타늄 2mg

1정제당 200mg

기타, 과립제, 세립제, 캡슐제, 주사제, 좌제등의 형태로 제제화 할 수 있다.

Claims (6)

1. 하기 구조식(I)의 아미노푸테리딘 메틸티오 벤조인산 유도체 화합물.

   상기 식에서, R은 수소 또는 메틸이고, R¹및 R²은 각각 수소, 메틸, 에틸, 푸로필 또는 이소푸로필이다.
2. 제1항에 있어서, R=H인 경우, R¹및 R²가 다같이 수소이거나 에틸인 구조식(I)의 화합물.
3. 제1항에 있어서, R=CH₃인 경우,R¹및 R²가 다같이 수소이거나 에틸인 구조식(I)의 화합물.
4. 파라아미노벤조인산(1)을 샌드마이어반응시키고, 계속하여 벤질알콜과 반응시켜 구조식(3)의 화합물을 제조한 후, 여기에 구조식(4)의 피라진 유도체를 반응시켜 합성중간체인 구조식(5)을 제조한 다음, 포름아미딘염산염 또는 아세트아미딘염산염을 반응시켜 구조식(6)의 벤질에스텔 화합물을 얻고 계속하여 알카리가수분해하여 구조식(7)의 화합물을 제조한 다음, 구조식(8)의 글루타민산의 에스텔 화합물을 반응시켜 구조식(I)의 아미노푸테리딘메틸티오벤조인산 유도체 화합물을 제조하는 방법.

   상기 식에서, R은 수소 또는 메틸이고 R¹및 R²는 각각 수소, 메틸, 에틸, 푸로필 또는 이소푸로필이다.
5. 구조식(10)의 N-[(2-아미노-3-시아노피라진-5-일)메틸티오]벤조일-L-글루타민산의 에스텔화합물을 알칼리존재하에서 포름아미딘염산염 또는 아세트아미딘염산염과 반응시켜 구조식(I)의 아미노푸레딘메틸티오벤조인산 유도체 화합물을 제조하는 방법.
6. 상기 식에서, R은 수소 또는 메틸이고, R¹및 R²는 각각 수소, 메틸, 에틸, 푸로필 또는 이소푸로필이다.