KR920005688B1

KR920005688B1 - Composition of polypeptide which releasing continously

Info

Publication number: KR920005688B1
Application number: KR1019900001689A
Authority: KR
Inventors: 김남중; 이병건
Original assignee: 주식회사 럭키; 최근선
Priority date: 1990-02-12
Filing date: 1990-02-12
Publication date: 1992-07-13
Also published as: KR910015302A

Abstract

A compsn. releasing one or more bioactive polypeptides controllably in an animal or human body on parenteral administration comprises (a) at least one bio-active polypeptide; (b) at least one tocopherol component selected from tocopherol, its acetate, and derivs.; and (c) an assistant delaying agent. Most bioactive polypeptides have a short half life in vivo, necessitating frequency admin. The present compsn. gives good release initially and over a duration in vivo. It does not have the side effects of other compsns., is stable, and the components have synergistic effect. Pref. the assistant delaying agent is selected from aluminium monostearate, calcium stearate, beeswax, carnaba wax or paraffin wax.

Description

Compositions for Continuous Release of Polypeptides Having In Vivo Activity

제1도는 표 1에 따른 그래프이고,1 is a graph according to Table 1,

제2도는 표 2에 따른 그래프이며,2 is a graph according to Table 2,

제3도는 표 3에 따른 그래프이고,3 is a graph according to Table 3,

제4도는 표 4에 다른 그래프이며,4 is another graph in Table 4,

제5도는 표 5에 따른 그래프이고,5 is a graph according to Table 5,

제6도는 표 6에 따른 그래프이다.6 is a graph according to Table 6.

본 발명은 생체내 활성을 갖는 폴레펩티드를 지속적으로 방출시키는 조성물에 관한 것으로서, 특히, 인간 및 동물에 비경구적으로 투여했을 때 생체내 활성을 갖는 폴리펩티드를 지속적으로 방출시키는 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for sustained release of a polypeptide having activity in vivo, and more particularly to a composition for sustained release of polypeptide having activity in vivo when administered parenterally to humans and animals.

생체내 활성을 갖는 폴리펩티드의 대부분은 생체내에서 그 반감기가 짧기 때문에, 생물학적인 효과를 충분히 나타내면서 동시에 원하는 기간동안 그 효과를 유지시키기 위해서는 유효량보다 과량을 투여시키야 하거나 또는 투여빈도를 높여야 하므로 상대적으로 투여대상에게는 큰 손상을 입힐 수 있다. 따라서, 이러한 폴리펩티드를 생체내에 투여할 경우에는 한번의 투여로 효과를 장기간동안 지속시킬 필요가 있기 때문에, 이러한 요구에 따라 생체내 활성을 갖는 물질을 지속적으로 방출시키는 조성물을 개발하여 투여빈도를 최소화시키므로써 투여대상의 손상을 줄이는 한편, 잦은 투여에 따른 번거로움과 노동력을 절감하기 위한 연구가 다각적으로 이루어져 왔다.Since most of the polypeptides having in vivo activity have a short half-life in vivo, relatively high doses should be administered in excess of the effective amount, or the frequency of administration should be relatively high in order to have sufficient biological effects while maintaining the effect for a desired period of time. It can cause great damage to the subject. Therefore, in the case of administering such a polypeptide in vivo, it is necessary to maintain the effect for a long time in one administration. Therefore, according to such a requirement, a composition for continuously releasing a substance having in vivo activity is developed to minimize the frequency of administration. Therefore, various studies have been conducted to reduce the damage of the administration target and to reduce the inconvenience and labor associated with frequent administration.

그 예로서, 대한민국 특허공고 제89-2631호에는 식물성 오일이나 광물성 오일, 특히, 땅콩오일과 참깨오일을 사용하여 부형제 및 보습제를 첨가시켜서 된 농화유 비히클을 형성한 후 전이금속 착체, 특히 아연을 결합시킨 성장호르몬을 농화유 비히클과 혼합하여 유효성분의 방출지속성을 연장시키고자 하였다. 그러나, 이 방법에 따른 조성물은 지속효과가 2주 정도이며, 성장호르몬을 그대로 사용할 수가 없고 복잡한 공정을 거쳐 금속 또는 전이금속을 성장호르몬과 결합시켜 사용해야 한다. 예를들어 성장호르몬과 아연이온의 착체를 형성시키기 위해서는 제한된 조건하에서 성장호르몬에 염화아연을 첨가시켜 현탁액을 만들고, 살균탈이온수로 침전물의 응집을 방지한 다음 원심분리시키는 일련의 과정을 수회 반복하고 동결건조시켜야 하는데, 이러한 공정은 매우 까다로우며 많은 시간을 요하는 것이다.As an example, Korean Patent Publication No. 89-2631 discloses a thickening oil vehicle formed by adding an excipient and a moisturizer using vegetable oils or mineral oils, especially peanut oil and sesame oil, and then adding a transition metal complex, especially zinc. The combined growth hormone was mixed with a thickening vehicle to extend the sustained release of the active ingredient. However, the composition according to this method has a lasting effect of about two weeks, and growth hormone cannot be used as it is, and a complex process must be used in combination with a growth hormone or a metal or transition metal. For example, to form a complex of growth hormone and zinc ions, a suspension is formed by adding zinc chloride to growth hormone under limited conditions, and a series of processes are performed in which sterilized deionized water is prevented from flocculation and then centrifuged. It must be lyophilized, which is very demanding and time consuming.

또, 유럽특허 제246,540호에는 팔미트산, 스테아린산 및 라울릴산 등의 지방산을 인슐린과 혼합하여 정제형태로 체내에 이식시키는 방법이 기술되어 있는 바, 이때에는 약 40일 정도의 지속효과를 보였으나, 이 방법은 동물에게 투여시 수술적인 방법이나 특수기구를 사용해야 한다는 단점이 있을 뿐만 아니라, 동물이 느끼는 이물감도 액체상보다는 크다고 하는 단점이 있었다.In addition, European Patent No. 246,540 describes a method of implanting fatty acids such as palmitic acid, stearic acid and lauryl acid into the body by mixing them with insulin, which showed a sustained effect of about 40 days. However, this method has the disadvantage of using a surgical method or a special apparatus when administering to the animal, and also has a disadvantage that the foreign body felt by the animal is larger than the liquid phase.

또한, 유럽특허 제193,917호에는 동물 성장호르몬을 수용성 또는 물에 분산되는 탄수화물 중합체(덱스트란,덱스트린,전분,글리코겐,셀룰로우스 및 치토산 등)와 혼합시켜 소와 양에 투여시켜 실험했으나, 지속기간이 7일 정도이고, 덱스트란과 같은 탄수화물 중합체는 가끔 항원으로 작용하여 감수성 반응을 보일 수도 있으므로 의약 조성물로서는 바람직하지 못하였다.European Patent No. 193,917 also tested animal growth hormones by mixing them with carbohydrate polymers (dextran, dextrin, starch, glycogen, cellulose and chitosan, etc.) which are water soluble or dispersed in water. Carbohydrate polymers such as dextran, which are about 7 days in duration, are sometimes undesirable as pharmaceutical compositions because they can sometimes act as antigens and show a sensitive response.

또한 유럽특허 제314,421호에서도 역시 오일을 주성분으로 하여 보조제 및 탄수화물 중합체인 덱스트란을 사용하는 조성물에 대해 기술하고 있으나, 근본적으로는 상기 유럽특허 제193,917호와 유사하다.European Patent No. 314,421 also describes a composition using dextran, an adjuvant and a carbohydrate polymer, based on oil as a main component, but is essentially similar to European Patent No. 193,917.

그리고, 대한민국 공개특허 제87-1825호에서도 역시 아연을 사용하여 성장호르몬에 부착시켜 땅콩오일을 이용한 오일 비히클을 제조한 후, 이것 8mg과 성장호르몬 40mg을 돼지에게 투여시켰으나, 9일 정도의 짧은 지속효과를 보였다. 이 방법도 상기 대한민국 특허공고 제89-2631호에서와 거의 유사하며 아연을 성장 호르몬에 부착시키는 번거로움과 함께 짧은 지속효과를 나타내었다.In addition, Korean Patent Application Publication No. 87-1825 also used zinc to attach growth hormone to prepare an oil vehicle using peanut oil, and then 8 mg of this and 40 mg of growth hormone were administered to pigs. It showed an effect. This method is also similar to that of the Republic of Korea Patent Publication No. 89-2631 and showed a short lasting effect with the trouble of attaching zinc to growth hormone.

상술한 바와 같은 공지의 조성물을 이용하여 생물학적 활성을 갖는 폴리펩티드를 생체내에 투여시켰을 경우에는, 초기 방출이 지나치게 과다하거나 생체내에서의 손실이 많기 때문에 그 지속성이 짧을 뿐만 아니라, 조성성분에 의한 부작용이 따르기도 하고, 투여시키고자 하는 폴리펩티드를 사전에 미리 금속 또는 전이금속과 결합시켜야 하는 등의 문제점이 있었다.When a biologically active polypeptide is administered in vivo using the known composition as described above, the initial release is excessively excessive or the loss in vivo is high, so that its sustainability is short, and side effects caused by the components of the composition In some cases, there is a problem in that the polypeptide to be administered must be combined with a metal or a transition metal in advance.

이에, 본 발명자들은 생물학적으로 활성인 폴리펩티드를 생체내에 투여시키기에 가장 적합하고도 지속효과가 우수한 조성물에 대해 예의 연구해 온 결과, 본 발명을 완성하게 되었다.Accordingly, the present inventors have intensively studied a composition which is most suitable for administering a biologically active polypeptide in vivo and has an excellent sustaining effect, thereby completing the present invention.

즉, 본 발명은 초산 토코페롤 또는 토코페롤 및 그 유도체를 조성물의 주성분으로 하므로써 초기 방출을 최적으로 하고 지속효과를 극대화시킬 수 있을 뿐만 아니라, 생체내 부작용이 전혀 없으면서 오히려 생체내 활성을 갖는 폴리펩티드와 함께 상승효과를 발휘할 수 있으며, 게다가 조성물에 적용될 생물학적 활성을 갖는 폴리펩티드에 금속 또는 전이금속을 결합시키지 않고서도 결합시킨 것과 동등하거나 또는 그 이상의 우수한 지속효과를 나타내는 생체내 활성을 갖는 폴리펩티드를 비경구적으로 투여하여 유효성분을 지속적으로 방출시키는 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.That is, the present invention not only optimizes the initial release and maximizes the sustained effect by using tocopherol acetate or tocopherol acetate and its derivatives as a main component of the composition, but also increases with the polypeptide having in vivo activity without any side effects in vivo. Parenterally administering a polypeptide having an in vivo activity that can exert an effect, and which exhibits a superior sustained effect equivalent to or greater than that of the polypeptide having a biological activity to be applied to the composition, without binding a metal or transition metal. It is an object of the present invention to provide a composition that continuously releases an active ingredient.

이하 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 초산토코페롤 또는 토코페롤 및 그의 유도체로 구성된 군에서 선택된 1종 또는 2종 이상의 물질과 지연보조제로 이루어진 것을 특징으로 하는 생체내 활성을 갖는 폴리펩티드를 지속적으로 방출시키는 조성물인 것이다.The present invention is a composition for continuously releasing a polypeptide having in vivo activity, characterized in that consisting of one or two or more substances selected from the group consisting of tocopherol acetate or tocopherol and derivatives thereof and a delayed adjuvant.

이하 본 발명을 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명은 초산 토코페롤 또는 토코펠롤 및 그의 유도체로 구성된 군에서 선택된 1종 또는 2종 이상의 물질과 지연보조체로 이루어진 것을 특징으로 하는 생체내 활성을 갖는 폴리펩티드를 비경구적으로 투여시켰을 때 생체내에서 유효성분을 지속적으로 방출시키는 조성물로서, 이때, 본 발명의 조성물에 분산시켜 사용할 수 있는 생체내 활성을 갖는 폴리펩티드로는 우형 소마토트로핀(BST : Bovine Somatotropine)을 포함한 각종 동물의 성장호르몬, 인간성장호르몬 및 기타의 호르몬, 인슐린, 인터페론, 인터루킨-Ⅱ, 종양괴사인자, 클로니자극인자 및 유사체 등의 비교적 생체내 반감기가 짧은 폴리펩티디는 모두 바람직하게 사용될 수 있고, 본 발명의 조성물에 적용되는 폴리펩티드의 형태는 화학적으로 비결합된 형태로서도 충분하다. 즉, 착이온금속이나 기타 일반적으로 본 발명의 분야에서 수용성 유체에 대한 폴리펩티드의 용해도를 낮추기 위해 사용되어지는 물질들과 화학적으로 결합시켜 사용하지 않아도 본 발명의 조성물에 분산시켜 투여되는 폴리펩티드는 충분한 정도의 지속성을 나타낸다. 그러나, 사용목적에 따라서는 결합된 형태의 폴리펩티드를 사용해도 무방하다.The present invention is effective in vivo when parenterally administering a polypeptide having in vivo activity, characterized in that it comprises one or two or more substances selected from the group consisting of tocopherol acetate or tocopherol and derivatives thereof and a delayed complement. As a composition for continuously releasing the components, wherein the polypeptide having in vivo activity that can be dispersed and used in the composition of the present invention, growth hormone, human growth of various animals, including bovine somatotropine (BST) Polypeptides with relatively short half-lives, such as hormones and other hormones, insulin, interferon, interleukin-II, tumor necrosis factor, clony stimulator and analogues, can all preferably be used and are applied to the compositions of the present invention. The form of the polypeptide is also sufficient as a chemically unbound form. That is, the polypeptide to be dispersed and administered in the composition of the present invention to a sufficient degree, even if not chemically combined with complex ion metal or other materials generally used to reduce the solubility of the polypeptide in the water-soluble fluid in the field of the present invention. It shows the persistence of. However, depending on the purpose of use, the combined form of the polypeptide may be used.

한편, 본 발명에서 사용된 폴리펩티드는 성장호르몬, 특히 우형 소마토트로핀으로서, 이러한 성장호르몬은 각종 동물의 뇌하수체로부터 추출하여 농축시키는 방법을 이용하여 얻어질 수 있으며, 재조합 DNA방법으로 제조된 성장호르몬도 적합하다.On the other hand, the polypeptide used in the present invention is a growth hormone, in particular, bovine somatotropin, such growth hormone can be obtained by extracting from the pituitary gland of various animals and concentrating, growth hormone produced by recombinant DNA method Also suitable.

본 발명에 따른 조성물에 사용되는 초산 토코페롤 또는 토코페롤과 그 유도체는 자체가 약리 활성을 갖고 있으므로 쥐, 새앙쥐, 기니아 피그, 돼지 및 가금에서는 정상적인 생식과정을 도와주고, 어린 면양, 송아지 및 개에서는 근육발달 이상을 예방해주며, 병아리에서는 뇌연화증, 근육활동 불규칙, 근 경축, 운동 실조 및 강직성 경련을 예방할 수 있다. 그리고 밍크, 돼지 및 고양이에서는 지방 조직염(steatitis)을 예방하는데 도움이 된다.Tocopherol acetate or tocopherol acetate and its derivatives used in the composition according to the present invention have its own pharmacological activity, thus aiding the normal reproduction process in rats, young rats, guinea pigs, pigs and poultry, and muscle development in young sheep, calves and dogs. It prevents abnormalities, and can prevent malaise, irregular muscle activity, muscle spasms, ataxia and tonic spasm in chicks. It also helps to prevent steatitis in mink, pigs, and cats.

본 발명에 따른 조성물에 적용시켜 사용되는 생체내 활성을 갖는 폴리펩티드가 차지하는 비율은 상당히 넓은 범위인 바, 그 하한선은 생체내에서 요구되는 폴리펩티드의 최소 유효량이며, 상한선은 조성물내에서 초산 토코페롤 등이 폴리펩티드 전부를 사실상 포함할 수 있는 양이면 무방하나 특별한 목적이 없는 한 폴리펩티드를 과량으로 사용할 필요는 없다.The proportion of the polypeptide having in vivo activity to be used in the composition according to the present invention occupies a fairly wide range, the lower limit is the minimum effective amount of the polypeptide required in vivo, the upper limit is a polypeptide such as tocopherol acetate in the composition Any amount may be included in nature, but there is no need to use the polypeptide in excess unless there is a specific purpose.

본 발명에 따른 조성물에서 폴리펩티드의 방출을 더욱 지연시키기 위한 초산 토코페롤류 이외의 지연보조제가 많이 공지되어 있으나, 그중 알루미늄 모노스테아레이트, 칼슘 스테아레이트, 밀랍, 카르나우바왁스 또는 파라핀 등이 적합하게 사용될 수 있다.Although many delaying aids other than tocopherol acetates are further known to further delay the release of the polypeptide in the composition according to the present invention, aluminum monostearate, calcium stearate, beeswax, carnauba wax or paraffin may be suitably used. Can be.

본 발명에 따른 조성물은 초산 토코페롤류와 지연보조제를 합한 중량을 100으로 했을 때 이에 대하여 일반적으로 초산 토코페롤류를 90 내지 100% 포함시킬 수 있으나, 바람직하기로는 95 내지 98%를 포함시키고 나머지 2 내지 5%는 지연보조제를 포함시키는 것이 좋다. 초산 토코페롤류와 지연보조제의 중탕 가열온도는 130 내지 160℃, 바람직하게는, 140 내지 150℃가 좋고, 가열시간은 10 내지 40분, 바람직하게는, 20 내지 30분 정도가 좋다.The composition according to the present invention may include 90 to 100% of tocopherol acetate in general when the combined weight of tocopherol acetate and the delaying aid is 100, preferably 95 to 98% and the remaining 2 to 5% should include delay aids. The bath heating temperature of the tocopherol acetate and the delay aid is 130 to 160 ° C, preferably 140 to 150 ° C, and the heating time is 10 to 40 minutes, preferably 20 to 30 minutes.

종래에 알려진 조성물의 경우, 그 자체만으로는 방출 지속효과가 충분치 못하여 투여되는 폴리펩티드의 체내 용해도를 낮춰주지 않으면 소기의 목적을 달성할 수 없었기 때문에 투석(dialysis)등의 복잡한 공정을 거치면서까지 금속 또는 전이금속 등을 결합시켜야 했을 뿐만 아니라, 과다한 초기 방출에 의한 손실을 메우기 위해 폴리펩티드를 과량으로 튜여시킬 수 밖에 없었으나, 본 발명에 따른 조성물은 방출지속성이 우수한 것외에는 종래와는 달리 생체내 활성을 갖는 폴리펩티디를 금속염 또는 착화합물의 형태가 아닌 화학적으로 비결합된 상태로 사용해도 놀라운 정도의 지속효과를 나타내었다. 또한, 초산 토코페롤류 단독 또는 약간의 지연보조제를 첨가시키는 것만으로도 우수한 지속효과를 나타내므로 그 제조공정이 매우 간편해졌으며, 초기 방출이 온화하고 폴리펩티드의 생체이용율 또한 종래기술에 비해 월등하게 향상되므로써 소량을 투여해도 원하는 효과를 거둘 수 있게 되었다. 더우기, 종래기술에서 폴리펩티드와 결합시키기 위해 사용되었던 금속 또는 전이금속들은 비록 심한 정도의 부작용은 아니라 할지라도 생체에 대하여 상당한 부작용을 유발할 수 있으나, 본 발명에서는 이러한 부작용의 우려가 없으며 오히려 초산 토코페롤류가 생체에 대해 유용한 약리작용을 가지고 있기 때문에 이물질에 대한 생체 거부반응을 예방하거나 완화시키는 작용도 겸하게 된다.In the case of the known composition, the self-sustaining effect by itself is not sufficient, and thus the desired purpose cannot be achieved without lowering the solubility of the polypeptide to be administered. Therefore, the metal or the transition metal may be passed through complicated processes such as dialysis. Not only had to bind and the like, but also had to inject the polypeptide in excess in order to compensate for the loss due to excessive initial release, the composition according to the present invention, unlike the prior The use of peptidis in chemically unbound state, rather than in the form of metal salts or complexes, has been surprisingly long lasting. In addition, the addition of tocopherol acetate alone or a little delayed adjuvant alone provides an excellent sustaining effect, which greatly simplifies the manufacturing process. The initial release is gentle and the bioavailability of the polypeptide is also significantly improved compared to the prior art. Even if administered can achieve the desired effect. Furthermore, the metals or transition metals used to bind the polypeptides in the prior art can cause significant adverse effects on the living body, even if they are not severely adverse. Because it has a useful pharmacological action on the living body will also act to prevent or mitigate biorejection of the foreign body.

이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 더욱 상세하게 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on Examples.

[실시예 1]Example 1

50ml 용량의 비이커에 초산 토코페롤 30ml 및 알루미늄 모노스테아레이트 600mg을 투입하고, 별도로 온도조절이 가능한 핫 플레이트 위에서 500ml 용량의 비이커에 초산 토코페롤 150ml을 투입한 것을 150℃의 온도로 가열시킨 후, 여기에다 상기 반응혼합물을 첨가시킨 다음 마그네틱 바를 사용하여 혼합시키면서 중탕가열했다. 20분정도 가열하여 알루미늄 모노스테아레이트는 충분히 용해되면서도 초산 토코페롤은 타지 않도록 하고, 이어서, 비이커를 꺼내 진공상태에서 냉각하여 젤리를 형성시킨 다음, 우형 소마토트로핀((주)럭키의 재조합 우형 소마토트로핀) 3g을 첨가시키고 약 40℃정도로 승온시킨 후, 마그네틱 바를 사용하여 2시간동안 혼합했다. 그리고 나서 15게이지 니들이 달린 20ml 일회용 주사기에다 충분히 혼합된 상기 조성물 10ml(우형 소마토트로핀 : 두당 1g)을 채워넣었다.30 ml of tocopherol acetate and 600 mg of aluminum monostearate were added to a 50 ml beaker, and 150 ml of tocopherol acetate was added to a 500 ml beaker on a temperature-controlled hot plate at 150 ° C., followed by the reaction. The mixture was added and then heated in hot water while mixing using a magnetic bar. After heating for 20 minutes, aluminum monostearate is sufficiently dissolved, but tocopherol acetate is not burned. Then, the beaker is taken out and cooled in a vacuum to form jelly, followed by bovine somatotropin (Lucky's recombinant bovine soma). Toropine) 3 g was added and heated to about 40 ° C., and then mixed for 2 hours using a magnetic bar. Then, a 20 ml disposable syringe with a 15 gauge needle was filled with 10 ml of the composition (well-type somatotropin: 1 g per head).

실험에 사용된 젖소는 2번째 수유기 제2기의 3개월간의 기간에 있는 홀스타인 젖소로서, 젖소수는 2마리이며 대조군은 아무것도 주사하지 않은 2마리의 젖소를 사용했다. 충진된 조성물을 젖소의 견갑골 위쪽 피하에 주사한 다음, 주사후 매일의 산유량을 측정하고 일일 산유량을 누적 정리하여 다음 표 1에 나타내었고, 시간의 추이에 따른 산유량 증가율의 그래프는 제1도에 나타내었으며, 단위는 하루당 kg으로 표시했다.The cows used in the experiment were Holstein cows in the three month period of the second lactation phase, with two cows and the control group using two cows with no injection. The filled composition was injected subcutaneously above the scapula of the cow, and the daily milk flow was measured after the injection, and the daily milk flow was cumulatively shown in the following Table 1, and the graph of the rate of milk flow increase with time was shown in FIG. The unit is expressed in kg per day.

[표 1]TABLE 1

혈액내에 존재하는 소마토트로핀을 검출하기 위해 매일 일정한 시간에 꼬리정맥에서 진공튜브 주사기를 사용하여 혈액을 채취하여 원심분리한 후 혈장을 취한 다음, 방사선 면역분석법(Radioimmunoassay)으로 분석한 결과를 다음 표 2에 나타내었고, 시간의 추이에 따른 혈장 BST농도의 변화는 제2도에 나타내었다.In order to detect somatotropin present in the blood, blood was collected by using a vacuum tube syringe from the tail vein at a certain time every day, centrifuged, and then plasma was collected. The result of analysis by radioimmunoassay was as follows. Table 2 shows the change in plasma BST concentration over time.

[표 2]TABLE 2

본 발명에 따른 조성물에 의해 투여된 성장호르몬이 우유내로 유리되는 양을 검출하기 위해 착유시 우유를 10ml 정도 채취하여 방사선 면역분석법으로 분석한 결과를 다음 표 3에 나타내고, 시간의 추이에 따른 우유내 BST의 농도는 제3도에 나타내었다.In order to detect the amount of growth hormone administered by the composition according to the present invention into the milk, the milk was collected by milking at about 10ml and analyzed by radioimmunoassay. The results are shown in Table 3 below. The concentration of BST is shown in FIG.

[표 3]TABLE 3

[실시예 2]Example 2

상기 실시예 1에서와 동일하게 제조된 조성물을 젖소당 5ml(우형 소마토트로핀 : 두당 500mg)씩 상기 실시예 1과 동일하게 투여했다. 실험에 사용된 젖소수는 투여군 5마리, 대조군 4마리였고, 실시예 1과 동일한 분석법으로 측정하여 그 결과는 다음 표 4, 표 5 및 표 6에 각각 나타내었으며, 시간의 추이에 따른 산유량 증가율, 혈장 BST 농도 및 우유내 BST농도는 제4도, 제5도 및 제6도에 각각 나타내었다.The composition prepared in the same manner as in Example 1 was administered in the same manner as in Example 1 each 5 ml (cow bovine somatotropin: 500 mg per head) per cow. The number of cows used in the experiment was 5 mice and 4 controls, and the results were measured by the same method as in Example 1, and the results are shown in Tables 4, 5, and 6, respectively. Plasma BST concentration and milk BST concentration are shown in FIGS. 4, 5 and 6, respectively.

[표 4]TABLE 4

[표 5]TABLE 5

[표 6]TABLE 6

이상의 실시예 1 및 실시예 2와 그에 따른 표 1 내지 표 6 및 제1도 내지 제6도에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 조성물에 우형 소마토트로핀을 분산시켜 피하주사로 간편하게 투여시킨 결과, 산유량이 지속적이면서도 현격하게 개선되었으며 우유내로 우형 소마토트로핀이 배설되지 않아 우유에는 물리화학적 성상의 변화를 전혀 주지 않고 있다.As shown in Examples 1 and 2 and Tables 1 to 6 and FIGS. 1 to 6, according to the present invention, the result of simple administration of subcutaneous injection by dispersing bovine somatotropin in the composition according to the present invention. In addition, milk production is consistently and markedly improved, and milk-like somatotropin is not excreted in milk, which does not change milk physicochemical properties.

Claims

A composition for continuously releasing a polypeptide having in vivo activity, characterized in that it comprises one or two or more substances selected from the group consisting of tocopherol acetate or tocopherol and derivatives thereof and a delayed adjuvant.

The composition of claim 1, wherein the delayed adjuvant is aluminum monostearate, calcium stearate, beeswax, carnauba wax or paraffin.

The composition of claim 1, wherein the tocopherol acetate or tocopherol and its derivatives are used in an amount of 95 to 98% by weight based on the total weight of the composition.

The composition of claim 1 or 2, wherein the retardation aid is used in an amount of 2 to 5% by weight based on the total weight of the composition.

According to claim 1, wherein the polypeptide is a living growth hormone, human growth hormone and a living body, characterized in that one polypeptide selected from the group consisting of insulin, interferon, interleukin-II, tumor necrosis factor, colony stimulating factor and the like A composition that continuously releases a polypeptide having activity in the stomach.

6. The composition of claim 5, wherein said animal growth hormone does not have a complex ion metal attached thereto or has a complex metal attached thereto.

In vivo activity according to claim 5 or 6, wherein the animal growth hormone is bovine somatotropin, pig growth hormone, goat and sheep growth hormone, poultry growth hormone, salmon growth hormone or shellfish growth hormone A composition for sustaining release of a polypeptide having a.