KR890002755B1 - 엉겅퀴의 종실로부터 실리마린을 추출하는 방법 - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

엉겅퀴의 종실로부터 실리마린을 추출하는 방법

제1도는 본 발명의 시료와 스탠다드(silybin)의 함량을 DNPH법으로 축정한 비교그라프이다.

본 발명은 엉겅퀴의 열매(카르두스 마리아누스 또는 실리붐 마리아눔 가에르튼)에서 간편한 추출방법에 의하여 80％이상의 순도를 갖는 실리마린을 추출분리하는방법에 관한 것이다. 실리마린은 실물계에 많이 분포하고 있는 플라본 노이드계 물질중 분자식 C₂₅H₂₂O₁₀(분자량 482.45)를 공통으로 가지는 구조적 이성체로서 실리빈(Silybin)과 실리디아닌(Silydianin) 및 시리크리스틴(Silychristin)의 3개성분을 합하여 실리마틴(또는 Silymarin gruuop)이라 하고, 그 동일 분자식을 가지나 구조적 이성체인 이들의 분자구조는 다음과 같다.

위물질은 문헌상 박층크로마토그라피(Thin Layer Chromatography :TLC)에서 실리빈, 실리디아닌, 실리크리스틴의 Rf치가 각각 0.54, 0.37, 0.22이며, 실리마린의 함량측정은 독일약전 8개정(1978)에 의한 디니트로페닐히드라진(DNPH)법에 의하여 추출물중의 함량을 알 수 있으며, 각각의 이성체의 함량은 공정서상(보건원 고시 제85-9호(85.10.10))고속 액체크로마토그라피(HPLC)에 의하여 각각의 실리빈, 실리디아닌, 시리크리스틴의 함량을 측정할 수 있다.

TLC문헌 : Wagner et al, Arzneim. Forsch. 24 Nr 4(1974). 469P.

DNPH법 문헌 : 독일약전 8개정(1978)297P.

HPLC법 문헌 : 국립보건원 고시 제85-9호(85.10.10)

실리마린의 추출방법은 초기에는 함량에 구애됨이 없이 추출성분과 추출액 자체로서 성상이 어떻든 기름오일 상태의 카르두스마리아누스엑기스든 다만 엑기스를 제조만 하고 그 중의 함량을 DNPH법등에 의해 단지 분석하였으나, 그중에 간질환치료제로 사용되는 이 의약품을 제제화(정제, 시럽제)하는데는 규격이 필요하고, 그 제제의 형태의 변질, 변패를 유발할 수 있는 엑기스중 지방의 제거와 기타 종실에 혼합된 고분자, 단백 등 성분의 제거가 필요하게 되어 순도가 높은 것을 요구하게 되었다. 실리마린의 순도가 높은 엑기스 추출물을 사용하면 그만큼 약제의 안정성을 얻을 수 있으므로 이 식물의 종실에서 효과적으로 순도가 높은 실리마린을 추출하고자 많은 문헌과 특허가 나왔으며, 각기 독특하다고 주장하고 있다.

그러나 이 실미마린 성분이 종실에 포함되어 있다는 사실 자체로서의 문제는 지방유와 고분자 물질, 펙틴, 단백, 탄수화물등이 있어 높은 수율로 뽑아내는 것은 용이하지 않음을 알 수 있다.

즉, 분리할 수 있는 유기 용매의 선택에도 불구하고, 주성분에 타물질이 계속 혼재할 수 있는 가능성이 많은 것이다.또한 가압탈지 중에 변질, 분자중합등 어려운 문제가 발생하는 점이 있다. 이중 가장 문제되는 것이 식물 지방유이다. 이 지방유는 종실에서 10-30％차지하고 있음으로서 이것을 제거하는 만큼 주성분의 손실도 커지기 마련이었다. 지방유는 유기용매의 상분리를 어렵게하고, 많은 유기용매의 량을 수차에 결쳐 다단계적으로 반복 사용할 수 밖에 없으므로 용매의 손실이 많게 되고, 공정상의 문제를 가져오기도 한다. 이러한 실예로 국내 특허 제297호(76.11.10)에서 나타난 발명에 의하면 종실에서 최초 탈지를 완전히 할 필요가 없더라도(사실상 완벽한 탈지가 어려운 까닭으로)유기용매의 다단식 분배기능을 가진 추출 유화 및 기름과 물을 자동분리하는 유수분리기를 6단계 이상 사용하는 고도 및 고가의 유수원심(기름 및 물충)분리기를 동원하여 해결하고자 한 노력이 보인다.

이것은 종실의 압착탈지가 완벽하지 못하기 때문에 이것을 개선하고자 독일특허 DT-AS 1923082 및 DT-OS 2017789는 사전탈지 이후 과정을 좀더 기계화시켰으나, 함량은 70-80％수준이었으며, 다시 프랑스특허제721404호는 사전 탈지조작없이 유기용매의 특성으로 다시 순도가 높은 실리마린을 얻고자 하였다. 이것은 실리마린은 비극성 유기용매(석유 에텔, 헥산, 사염화탄소 등)에는 녹지않고, 종실중 지방만이 녹는 것을 이용하여 유기용매로 탈지하고 다음 실리마린이 잘 녹는 친수성 극성 유기용매(메탄올, 에탄올, 에칠아세테이트)등 으로 추출하여 계속 이 과정을 반복하여 순도를 높이고자 한 방법이나, 지방유가 계속 많이 잔류하여 생산성이 좋지 않았다.

즉, 함량은 50％에 불과하였다. 다시 국내특허 제894호(83.12.14)는 종실의 탈지를 사전에 하기로 하고, 종실에서 지방유를 탈지하게 위해 종실의 껍질이 파괴되도록 2-3회 압착한 후 여기에 비극성요매를 가하고, "교반후 압착하는 속스테트부 압착추출기(속스테트장치가 달린 압축추출기를 의미)를 사용하여 용매와 함께 압착하여 반복탈지하여 추출하였고", 다시 유기용매로 저온에서 자연방치 등 침전물 제거 등을 위해, 오랜시간에 걸쳐 방치여과, 농축과정으로 추출하는 방식을 사용하고 있으나, 함량 80％이하이며, 추출에 연속공정의 도입이 어려울 것으로 판단된다.

또한 국내측허 제19763호(85.7.31)에 의하면 주성분 실리마린의 추출에서 문제종실에 함유된 수분에 영향이 있다고 판단하고 추출에서 무수용매(에칠 아세테이트)사용을 특허권으로 주장하고 있다. 사전 탈지 조작을 함은 같고 열매를 사전분쇄하지 않고 가압탈지에 의하여 분쇄될 수 있다하며, 이것은 국내특허 제894호(83.12.14)와같이 종실의 사전분쇄가 필요없다하고, 공정을 줄인점을 공통주장하고 있으며, 여하튼 종실 자체를 가압탈지와 동시 분쇄하며, 가압탈지된 것을 다시 분쇄하여 추출과정으로 공정 진입이 시작이 되고 있다.

특히 위 측허 제894호(83.12.14)는 종실에 함유된 수분이 추출에 좋지않은 영향을 준다고 믿고 있으며, 추출시 고분자 물질이 함께 추출되거나 유화되어 차후방해가 될 것으로 고려하고 있다. 따라서 위 특허는 종실을 감압 건조시켜야 하는 것으로 주장하고 20-40℃온도에서 감압건조가 필수적이며, 특히 제894호 발명의 둘째 요소로 주장하고 있다. 또한 국내특허 제19763호(85.7.31)는 추출해서 수분의 존재가 추출에 영향을 주므로 종실의 탈지후 추출시에 무수용매의 사용을 주장하며, 국내특허 제894호(83.12.14)는 가압탈지나 가압탈지 전 종실의 감압건조 또는 종자부의 감압탈수조작을 발명으로 주장하고 있는 점은 공정상에서 차이는 있지만, 수분이 금기(타부)시 되는 점은 동일 하다. 이것은 수분이 추출시에 영향을 줄 수 있다는 것은. 수분존재하에 종실을 추출하여 보면 제일 먼저 여과공정부터 문제가 야기됨은 사실이며, 그후 실리마린 함량이 상승되지 않는 것은 사실이기 때문이다. 위와같은 종래의 추출방법에 대해 본 발명은 바로 여기에서 문제점을 찾고 수분의 동태적 연구를 면밀히 검토한 바 실로 놀라운 사실을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 근원은 먼저 탈지방법을 찾은데에 잇었던 것이 아니라 금기사항인 수분을 집중적으로 실험 검토한 바 수분은 가열에 의해서 실리마린의 성상변화, 구조적 변화에 크게 영향이 없다는 것을 먼저 확인하였다.

제일 최근의 국내특허 제19783호(85.7.31)에 의하면 실리마린의 생산수율이 압착탈지한 생약의 양에서 1.7％(순도 90-96％주장)이며, 종실원로에서는 1.18％에 지나지 않고 있는 점이며, 국내특허 제297호(76.11.10)에 비하면 수율이 경신되지 못하고 순도만 높이는데 끝나 있으므로 이러한 종래 특허의 난점을 분석하면 비극성 및 극성용매의 용매상의 차이로 추출정제하는 것은 그 구성비율에 대해 발명권리등을 주장하고 있지만, 이것은 통상 공지공법의 범위중 일부 선택적 비율 선정방법에 속하며, 그 조건에 특수성이 있지만 본 말명자의연구에 의한, 문제는 이것에 있는 것이 아니라 실리마린의 추출은 최초 탈지 공정에서 얼마나 탈지하였는가 하는데 선택적으로 결정되고, 이후의 추출공정은 단순히 여러가지 유기용매로 여러 비율로 처리해 보는 방법으로 큰 차이가 없음을 알게 되었다.

본 발명은 초기 단계에서 가능한 지방유를 재거하는 것이 함량과 순도를 높이는 길이라는 것을 알게 되었고, 완벽한 최초 가압탈지가 문제를 해결하는 조건이며, 연구검토한 요점은 종래의 특허등이 등한시한 점인 가압탈지조작(사실 압력을 높여도 일정이상 더 지방유가 나오지 못하여 결국 대충 가압탈지할 수 밖에 없음)을 재검토한 결과, 가열저압 또는 고압 수증기로 짧은 시간동안 습윤(찜)시킨 다음 탈지하면1％이하 밖에 지방유를 함유한 정도로 압착잔사(괴)를 얻고, 이것을 추출공정으로 진입시켜 비극성, 극성용매로 연속처리하여 함량 80％이상, 수율 3％이상의 실리마린을 얻을 수 있는 새롭고 놀랄만한 사실을 발견하여 본 발명을 완성하게 된 것이다.

이렇게 증기로 처리할 경우 당연히 종실은 사전 분쇄되어야 하며, 그렇다고 이 공정이 종래의 특허주장과 같이 번거로운 것이 아니고, 간단한 로라밀로 연속적으로 할 수 있고, 증기에 의해 주성분은 전혀 영향이 없다는 사실은 최종제품에서 증명되지만 그 근본적 이론은 증기가 치밀한 종실의 조직을 팽윤시키고, 지방유를 용이하게 탈지될 수 있게 하며, 과도한 증기는 응축수 과다로 좋지않지만 최소한 습윤(찜)에 의해서는 여과 및 분리정체에 전혀 영향이 없다는 것을 증명하고 있다.또한 이렇게 증기로 처리된 탈지생약의 덩이(피)는 살균, 멸균, 살충의 효과도 추가되어 6개월 이상 보존에도 주성분이 변질하지 않고 생약이 변패되지 않았으며, 탈지하여 얻은 지방유도 우수한 상태였으며, 다음 추출단계에서는 무수의 조건을 가진 유기용매가 필요없으며, 물이 첨가된 극성용매와 비극성용매의 분리상에서 실리마린의 분리효과는 탁월하게 짧은 시간에 분리되었으며, 특히 제297호(76.11.10)에서 사용되는 고가의 고도의 기계적유수(기름과 물)원심분리기를 사용할 필요가 전혀 없고, 최종 정제시에 물로 제척하는 폐액도 재이용 가능하며, 또한 비극성 용매와 물이 첨가된 극성용매의 분리수단이 가능한 어떤 용매들의 비율에 대해서는 물이 첨가된 극성용매(메탄올 수용액)이면 분리가 가능하여 임의로 80％이상의 순도를 갖는 실리마린을 수율 3％로 추출하는 방법을 발명하였다. 그러나 정확한 수율은 종실자체의 함량에 좌우된다. 본 발명을 요약하면 다음과 같다.

(1) 종실을 먼저 분쇄하여 적당한 입도로 하고, 저압 또는 고압의 수증기로 1분-1시간이네 습윤(찐)다음가압 탈지한다.

(2) 탈지후 생성된 덩어리(괴)를 분쇄, 함수 극성용매로 추출한다.

(3) 함수극성용매를 유거하고, 잔사에 비극성 및 함수극성 용매를 적당비율로 가하여 분리하고(1-10회 실시)함수 극성용매를 유거하여 실리마린 잔사를 얻는다.

(4) 함수극성용매에 녹아있는 실리마린을 용매유거한후 잔사로 얻은 다음 온수에 풀어서 불순물을 용출시키고 다시 그대로 냉각하여 침전생성된 실리마린 잔사덩이(괴)를 취하여 건조한다.

(5) 압착탈지산사를 함수 극성용매로 1차 추출함으로서 정제과정에 발생하는 온수 온침에서 발생하는 손실분의 주성분을 수용액 그대로 재사용 할 수 있으므로 수율을 증가시키고, 폐수가 발생되지 않는다.

(6) 이미 지방유가 완전히 제거되어 추출시 무수에칠아세테이트를 쓰지않고 오히려 물을 첨가하여도 조금도 지장이 없고, 오히려 여과가 더 양호하게 된다.

(7) 제조공정의 설비가 극히 간단하고, 염가이며, 고순도 고수율의 실리마린 생산으로 공정이 단기간에 이루어진다.

본 발명을 다음에서 상세히 설명한다.

가) 사용하는 종실 및 유기용매

(1) 종실은 카르두스 마리아누스(학명 Silybun marianum Gaertner)로서 독일 약전규격(실리마린 1％이상함유)으로 5％이하 수분을 함유하고 있는 건조된 종실로서 덜 말린, 수분이 많은 경우 종실이 보관중 부패한다. 부패된 종실은 사용해서는 안된다.

(2) 유기용매는 에칠아세테이트와 메탄올, 에탄올등 극성 유기용매와 비극성유기용매로서 석유 에텔, 헥산, 사염화 탄소, 트리클로로에틸렌 등 할로겐치환 비가연성용매를 사용할 수 있다. 단, 독성이 있는 할로겐치환 탄화수소는 사용하여서는 안된다.

나) 가압탈지에 사용한는 기계기구

(1) 종실을 분쇄하는데 사용하는 것은 로라밀 분쇄기를 사용한다. (적당한 입도는 추출장치의 여과기의 선택과 유관한다.)

(2) 스팀 가습 습윤기는 일종의 원통형 스팀 분사기로 순간적으로 일정용량의 분쇄종실을 균등히 분사할 수 있는 간단한 원통장치로 내부에 수직으로 다공성 파이프라인이 설치되어 원통안에 넣은 분쇄종실을 수평으로 스팀이 분사되게 하는 소형장치이다. 종실은 수평으로 다공성 파이프 위까지 덮여져야 한다.

(3) 가압탈지기 : 일반 상하왕복식 가압 탈지기 또는 스크류프레샤도 가능하다.

(4) 압착탈지 생약 덩이(괴)의 분쇄기 : 이 분쇄기는 함머밀형이 바람직하다.

(5) 추출기 : 1차 극성유기용매 에칠아세테이트 또는 메탄올을 사용하는 추출기로 하부에 스텐망이 있는 일반형 추출기이다.

(6) 함수 극성용매분리기 : 일반 물 오일 분리기이며, 내부에 교반창치가 있는 간단한 원추형 분리기이다.이것은 전기저항을 이용하여 자동벨브가 부착되어 계면이 분리 바뀔때 자동적 차단이 가능하다.(에어밸브로서 자동식이며, 비극성 용매와 함수 극성용매의 전위차 이용하는 간단한 장치이고, 육안으로 판단하여 수동적으로 분리조작이 가능하다)

(7) 기타 농축기, 여과기, 원심분리기등은 일반형이다.

다) 추출방법

종실을 로라밀에 호퍼를 통하여 넣어 분쇄한다. 30-120메위(60메쉬-80메쉬가 바람직하다)로 분쇄한 다음 소량씩 일회 압착탈지할 량 만큼 소규모의 스팀 분사기통에 넣고 1분-1시간 (약 2-10분이 바람직하다) 0.1-10kg/㎠(0.2-3kg/㎠이 바람직하다)의 압력으로 분사한다. 이때 필요 이상 스팀을 분사하지 않는 것이 좋다. 습윤된(찐) 종실을 유압식 탈지기에 넣고 200-1000PSI까지 탈지한다. 필요하면 그 이상 탈지하여도 무방하다. 탈지가 완료되면 이덩어리(괴)를 함머밀로 분쇄한다. 입도를 맞출 필요는 없으나 분쇄하지 않고 오래두면 돌처럼 석질화하는 문제점이 있다. 분쇄한 압착탈지된 생약을 추출기에 넣고 물(최종공정 세척용출수 또는 새로첨가수)를 압착탈지생약의 삼분의 일 가량 넣고, 에칠아세테이트를 생약의 2-20배의 용량을 가하고 30분-5시간, 30℃ -75℃내지로 환류하여 교반한다. 냉각후 여과하고 잔사는 동일 반보하나, 다시 물은 첨가하지 않는다.

시간은 전보다 반으로 감소시켜도 무방하다. 전체 추출액을 모아서 용매를 회수하고, 잔사를 얻는다. 황갈색 잔사에 친수극성용매 : 물 : 비극성용매=3 : 1 : 3의 비율로 된 혼액을 2-15배의 용량으로 가하고, 10분-2시간 강교반한 후 방치하면, 5분-1시간 이내 분리완료되고, 하층 또는 상층에 녹아 있는 지방유(비극성용매의 비중에 따라 상하 구분)을 분리한다. 일반 분리기 사용시에는 수불용성 비극성용매를 할로겐치환탄화수소, 사염화탄소, 클로로포름, 트리클로로에틸렌등을 사용할 경우, 연속작업이 용이하다.(하층만 연속제거)이와 같이 분리된 경계면을 육안으로 분리하던가 전기저항을 이용하여 자동발브로 분리하여2-10회실시하고, 실리마린이 용해되어 있는 수가용성 극성유기용매(메탄올, 아세톤)를 감압에서 용매를 유거하고, 잔사를 잔류수분과 함께 취하여 냉각하고, 생성된 결정을 온수 적당량(출발생약과 동량)에 온침 용출시켜 불순물을 용출시키고 다시 냉각하여 생성된 실리마린 잔사를 원심분리하여 감압건조기 또는 일반 건조기 105°이하에서 수분1％이하로 될때까지 건조하고, 분쇄하여 제품으로 한다. 최종제품은 DNPH법에 의하여 80％-90％의 순도로 수율 약 3％를 얻는다.

이것을 아세토 니트릴 기타 유기용매로 재결정할 경우, 95％이상의 실리마린 결정을 얻을 수 있다. 이제 품의 IR chart 및 UV.HPLC방법에 의하여 확인된다. HPLC에 의하면 실리마린의 이성체를 각각 분리정량 할 수 있으며, 기타 Dehydrosilybin과 Silybin dimer등도 일부 함유되어 있다. 이것의 함량은 종실원산지에 따라 다소 차이가 있다.

다음의 실시예로서 본 발명을 더욱 상세히 설명하며, 본 발명이 이들 실시예에 의하여 제한 받는 것은 아니다.

[실시예 1]

(1) 종실(종자) 100kg을 로라밀로 분쇄하여 60-80메쉬가 되게하고, 약 20kg씩 다공성파이프로된 스팀분사기가 중앙에 수직으로 부착된 원통용기에 넣고, 편편히하고, 스팀 0.3kg/㎠압력으로 수평으로 스팀을 분사시킨다. 압력은 분사압력이며, 용기내부의 압력은 아니다.(분쇄된 종실은 수직 다공성 스팀파이프 위로 수평으로 넣어 두어야 한다.) 5분 이내 습윤(찜)이 끝나면 차례로 가압탈지기에 넣고, 400PSI까지 최대한 탈지한다.

지방유 25kg-30kg을 얻은 다음 가압탈지기의 압력을 풀고 생약덩이를 취하여 함머밀로 분쇄한다. 약 70-75kg생약덩이를 얻는다.

(2) 분쇄된 생약 70-75kg을 추출기에 넣고, 물 40리터와 에칠아세테이트 400리터를 넣고, 75℃로 2-3시간 환류교반 추출한다.상온으로 냉각한후 여과하고, 잔사는 다시 에칠아세테이트 400리터를 넣고 75℃로 1시간 환류교반 추출한다.역시 상온으로 냉각 여과한후 여액을 감압에서 용매를 회수한다.

(3) 위의 잔사에 메탄올 300리터, 물100리터, 트리클로로에틸렌 300리터를 넣고, 30분간 교반한 다음 하층을 분리제거하고, 상층에 다시 트리클로로에틸렌 300리터를 넣어 반복 추출5-6회실시한다. 하층은 전부 합하여 용매를 회수하고, 실리마린이 함유된 상층은 활성탄 1kg으로 처리여과한 다음 농축기에서 진공감압농축한다. 진공도와 온도는 임으로 할 수 있으나 진공도에 따라(100mmHg)40-50℃에서 주의하여 증류한다.

(4) 잔사 및 잔액이 50리터가 될때까지 농축한 다음 냉각하면 결정이 생성한다. 이를 원심분리하여 결정을 다시 물 30리터에 넣고 가열 온침시킨다음 냉각하고, 생성된 결정을 원심분리 여과한다.

(5) 원심분리된 결정을 감압 건조기 또는 일반 상압건조기에서 수분 함량 1％이하로 건조한 다음 분쇄하여 제품으로 한다. 수율은 2.9로 실리마린 함량 80-90％를 함유한다.

(6) 상기 (4)항에서 50리터가 될때까지 농축한 다음 여기에 에틸아세테이트 300리터를 넣고, 물 50리터를 추가하여 녹인다음 하층 수층을 분리하고, 상승 유기층을 분리하여 여과한 다음 감압농축하여 잔사를 취하여 감압건조기에서 건조하여 분쇄하여 제품으로 할 수 있다. 수율은 3％, 실리마린 함량 80-90％.

(7) 의 (4), (5), (6)항에서 발생되는 수용액은 합하여 40리터로 농축하여 냉각시킨액을 (2)항의 물사용 대신으로 쓸수 있다.이 경우 수율은 증가된다. 이때의 수율은 3.1％, 함량 80-85％이다. 시리마틴 함량의 측정은 DNPH법이며, 각각 이성체는 HPLC에 의하여 측정한다. 주성분은 실리빈이다.

HPLC조건

용매 : 아세토 니트릴

칼럼 : Lichrosorb NH₂10micron/250×4mm

이동상 : 95％ CH₃CN, 2％ Acetic acid, 3％Water.

유속 : 2m/min, detector 288nm.

[실시예 2]

실시예1에서 스팀압력 0.5kg, 4분간 스팀분사하여 이하 동일 공정으로 80-90％함유하는 실리마린 제품을 얻는다. 수율 3％

[실시예 3]

실시예 1에서 스팀압력 1kg,3분간 스팀분사하여 이하 동일 공정으로 80-90％함유하는 실리마린 제품을 얻는다. 수율 3.1％

[실시예 4]

실시예 1에서 스팀압력 0.5kg, 4분간 분사하고, (2)항 에칠아세테이트 대신 메탄올(98％)을 가하여 이하 동일 조작하여 75-85％의 실리마린을 함유한 제품을 얻는다. 수율 3.2％. 이경우에는 유수분리에서 30분 정도의 시간이 지연된다.

[실시예 5]

실시예 1에서 스팀압력 0.5kg, 수분간분사하고, (3)항 크리클로로에틸렌 대신 클로로포름을 가하여 이하 동일 조작하여 80-90％의 실리마린을 함유하는 제품을 얻는다. 수율 3.0％

[실시예 6]

실시예 1에서 스팀압력 2kg, 2분간 분사하고, (3)항 트리클로로에틸렌 대신 석유에틸을 가하여 상층을 분리하고, 하층에 석유 에텔을 가하여 계속반복하여 이하 동일 조작하여 80-90％의 실리마린을 함유하는 제품을 얻는다. 수율 2.9％

[실시예 7]

실시예6에서 (3)항 트리클로로에틸렌 대신 헥산을 가하여 이하 동일 조작하여 80-90％의 실리마린을 함유하는 제품을 얻는다. 수율 3％.

Claims (5)

1. 엉겅퀴의 종실을 분쇄한 후 가열증기로 처리한후 압착탈지하여 지방유를 제거한후 물이 함유된 유기용매로 추출하고 통상의 방법으로 처리하여 실리마린을 추출하는 방법
2. 제1항에서 가열증기로 0.1-10kg/㎠압의 증기를 사용하는방법.
3. 제1항에서 증기처리를 1분-1시간 행하는 방법.
4. 제1항에서 물이 함유된 유기용매로 물 : 극성용매 : 비극성용매의 혼합용매를 사용하는 방법.
5. 제1항에서 추출용매로 수가 용성유기용매 : 물 : 비극성유기용매의혼합용매를 사용하는 방법.

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