Claims (21)
N-말단에 해독 출발코오돈 ATG에 해당하는 메티오닌을 함유하지 않는 단백질의 수율을 증가시키기 위하여, (1) 철이온원, 망간이온원 또는 그의 흔합물 및 (2) 천연질소원을 포함하는 배지 내에서 해독 출발 코오돈의 하류에 단백질의 구조 유전자를 포함하는 형질전환벡터를 갖는 에스케리키아 콜리를 배양함을 특징으로 하는 단백질의 증수법.In order to increase the yield of the protein containing no methionine corresponding to the detoxification start codon ATG at the N-terminus, in a medium comprising (1) an iron ion source, a manganese ion source or a combination thereof and (2) a natural nitrogen source A method for multiplying a protein characterized by culturing Escherichia coli having a transformation vector comprising a structural gene of a protein downstream of a translational start codon.
제1항에 있어서, 단백질이 시토킨, 형질전환 성장인자, 펩티드 단백질 호르몬, 병원성 미생물의 항원 단백질, 효소 및 혈청 단백질로 구성된 군으로부터 선택된 생리적으로 활성인 단백질임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 1, wherein the protein is a physiologically active protein selected from the group consisting of cytokines, transforming growth factors, peptide protein hormones, antigenic proteins of pathogenic microorganisms, enzymes and serum proteins.
제2항에 있어서, 시토킨이 인터페론 또는 인터로이킨임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 2, wherein the cytokine is interferon or interleukin.
제3항에 있어서, 인터페론이 인터페론-α 또는 인터페론-β임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 3, wherein the interferon is interferon-α or interferon-β.
제3항에 있어서, 인터로이킨이 인터로이킨-2임을 특징으로 하는 방법.4. The method of claim 3 wherein the interleukin is interleukin-2.
제1항에 있어서, 형질 전환벡터가 프로모터를 함유함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 1, wherein the transformation vector contains a promoter.
제6항에 있어서, 프로모터가 λPL프로모터임을 특징으로 하는 방법.7. The method of claim 6, wherein the promoter is a λ PL promoter.
제6항에 있어서, 프로모터가 트립토판 프로모터임을 특징으로 하는 방법.7. The method of claim 6, wherein the promoter is a tryptophan promoter.
제1항에 있어서, 철이온원이 이온염임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 1 wherein the iron ion source is an ionic salt.
제9항에 있어서, 이온 염이 3가 철의 무기산염임을 특징으로 하는 방법.10. The process of claim 9, wherein the ionic salt is an inorganic acid salt of trivalent iron.
제1항에 있어서, 망간 이온원이 망간염임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 1 wherein the manganese ion source is manganese.
제11항에 있어서, 망간염이 무기산염임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 11, wherein the manganese salt is an inorganic acid salt.
제1항에 있어서, 배지가 10-6-10-3몰농도의 칠이온원을 함유함을 특징으로 하는 방법.2. The method of claim 1, wherein the medium contains a chilled ion source at a molar concentration of 10 -6 -10 -3 .
제1항에 있어서, 배지가 10-6-10-3몰농도의 망간이온원을 함유함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 1 wherein the medium contains a manganese ion source at a molar concentration of 10 −6 −10 −3 .
제1항에 있어서, 배지가 총 106-10-3몰농도의 철이온원 및 망간 이온원의 혼합물을 함유함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 1 wherein the medium contains a mixture of iron and manganese ion sources in a total of 10 6 -10 -3 molar concentrations.
제1항에 있어서, 천연 질소원이 카사미노산, 펩톤, 효모 추출액 및 맥아 추출액으로 구성된 군으로부터 선택된 것임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 1 wherein the natural nitrogen source is selected from the group consisting of casamino acid, peptone, yeast extract and malt extract.
제16항에 있어서. 질소원이 카사미노산임을 특징으로 하는 방법.The method of claim 16. Characterized in that the nitrogen source is casamino acid.
제1항에 있어서, 배지가 Ig/ℓ-50g/ℓ농도의 질소원을 함유함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 1 wherein the medium contains a nitrogen source at an Ig / L-50 g / L concentration.
제1항에 있어서, 배양을 산성조건하에 실시함을 특징으로 하는 방법.The method of claim 1, wherein the culture is carried out under acidic conditions.
제7항에 있어서, 배양을 증식중에는 25-35℃에서 실시하고 그 추에 42℃ 근처로 변화시켜 실시함을 특징으로 하는 방법.8. The method of claim 7, wherein the culturing is carried out at 25-35 ° C. during propagation and by changing the weight to near 42 ° C.
제8항에 있어서, 성장의 중간 단계까지는 37℃ 근처의 온도를 유지한채 성장을 실시하고 그 후에는 증식상태에 비례하여 20-30℃로 낮춤을 특징으로 하는 방법.The method of claim 8, wherein the growth is carried out at a temperature near 37 ° C. until the intermediate stage of growth and thereafter lowered to 20-30 ° C. in proportion to the growth state.
※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.※ Note: The disclosure is based on the initial application.