Claims (18)
(a) 좌측에서 우측으료, 즉 아미노-말단에서 카복시 말단의 방향으로 다음 일반식(Ⅰ-A)로 표시되는 아미노산 잔기 서열을 함유하는 제1 폴리펩타이드를 제조하고; (b) 생성된 제1 리펩타이드를 수성 조성물에 ㎖당 약 5㎎미만의 농도로 용해시키거나 분산시켜; (c) 생성된 조성물을 pH를 약 7.0 내지 약 9.5로 유지하면서 산화제로써 분자상 산소와 접촉시키고; (d) 접촉 반응을 약 1 내지 24시간동안 유지시켜 적어도 2개의 폴리펩타이드 CsH 잔기를 산화시키고, 산화된 폴리펩타이드내에 제1 폴리펩타이드에 존재하는 적어도 2개의 CysH 잔기로부터 적어도 하나의 분자내 디설파이드 결합을 형성시킴을 특징으로 하여,에쉐리키아 콜리의 열안정성 장독소의 적어도 약10%의 항원성을 갖는 합성 폴리펩타이드를 제조하는 방법.(a) preparing a first polypeptide containing an amino acid residue sequence represented by the following general formula (I-A) in the direction from left to right, ie, amino-terminus to carboxy terminus; (b) dissolving or dispersing the resulting first polypeptide in an aqueous composition at a concentration of less than about 5 mg per ml; (c) contacting the resulting composition with molecular oxygen with an oxidant while maintaining the pH at about 7.0 to about 9.5; (d) maintaining a contact reaction for about 1 to 24 hours to oxidize at least two polypeptide CsH residues and at least one intramolecular disulfide bond from at least two CysH residues present in the first polypeptide in the oxidized polypeptide. To form a synthetic polypeptide having an antigenicity of at least about 10% of the thermostable enterotoxin of Escherichia coli .
(Tyr) (Ⅰ-A)(Tyr) (Ⅰ-A)
상기식에서, 괄호안의 3개의 특정 아미노산 잔기는 각각 상기 서열중의 바로 앞의 아미노산 잔기의 대체 아미노산이며; a 내지 f 및 g 내지 ℓ은 각각 0 또는 1의 정수이고, 단 a 내지 f 또는 g 내지 ℓ이 0이면 상응하는또는그룹은 존재하지 않으며, a 내지 f 또는 g 내지 ℓ중의 어떤것이 1이면 상응하는또는그릅운 존재하고;그룹들은 각각으로는 Cys 잔기의 황원자에 결합된 같거나 다른 잔기로 수소, 탄소수 1내지 약 4의 알킬 그룹, 탄소수 2내지 약 20의 치환된 알킬 그룹, 탄소수 1내지 약 8의 아실 그룹 및 탄소수 2내지 약 10의 치환된 아실 그룹 중에서 선택되며;그룹들은 같거나 다르며, 각각 바로 앞의 Cys 잔기에 대한 대체 아미노산 잔기이고; a 내지 f 중의 적어도 둘은 1이고, g 내지 ℓ중의 적어도 둘은 0이며, 언급한 a내지 f중의 2개가 1인 경우에는 상응하는그룹은 수소이고, 따라서 상기 제1 폴리펩타이드는 적어도 2개의 CysH 잔기를 함유하고; m은 0 또는 1의 정수이며 단 m이 0이면그룹은 존재하지 않고 m이 1이면은 1개 내지 약 54개의 아미노산 잔기를 함유하는 체인, 연결 그룹, 및 아미노-말단 잔기의 아민과 아미드 결합을 형성하는 탄소수 1내지 약 20의 카복실산의 아실 부분으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.Wherein the three specific amino acid residues in parentheses are each the replacement amino acid of the amino acid residue immediately preceding it in the sequence; a to f and g to l are each an integer of 0 or 1, provided that a to f or g to l are 0 or No groups are present and if any of a to f or g to l is 1, the corresponding or Is wrong; The groups are each the same or different residues bonded to the sulfur atom of the Cys residue, hydrogen, an alkyl group of 1 to about 4 carbon atoms, a substituted alkyl group of 2 to about 20 carbon atoms, an acyl group of 1 to about 8 carbon atoms, and 2 carbon atoms. To about 10 substituted acyl groups; The groups are the same or different and each is an alternative amino acid residue for the immediately preceding Cys residue; at least two of a to f are 1, at least two of g to l are 0, and if two of the mentioned a to f are 1, the corresponding The group is hydrogen and thus the first polypeptide contains at least two CysH residues; m is an integer of 0 or 1, provided that m is 0 If no group exists and m is 1 Is selected from the group consisting of a chain containing 1 to about 54 amino acid residues, a linking group, and an acyl moiety of a carboxylic acid having 1 to about 20 carbon atoms that forms an amide bond with an amine of an amino-terminal residue.
제1항에 있어서, a내지 f중의 4개가 1이고, g내지 ℓ중의 적어도 4개가 0이며, 언급한 a내지 f 중의 4개가 1인 경우에는 상응하는그룹은 수소이며, 따라서 제1 폴리펩타이드는 적어도 4개의 CysH 잔기를 함유하게 되며, 단계 (d)에서 생성된 산화된 폴리펩타이드는 적어도 2개의 분자내 시스틴디설파이드 결합을 함유하는 방법.The method according to claim 1, wherein four of a to f are 1, at least four of g to l are zero, and four of the mentioned a to f are one. The group is hydrogen, so that the first polypeptide will contain at least four CysH residues, and the oxidized polypeptide produced in step (d) contains at least two intramolecular cystine disulfide bonds.
제1항에 있어서, a내지 f가 각각 1이고 g내지 ℓ은 각각 0이며, 상응하는그룹들은 수소로 상기 제1 폴리펩타이드는 6개의 CysH 잔기를 함유하고, 단계 (d)에서 생성된 산화된 폴리펩타이이드는 3개의 분자내 시스틴 디설파이드 결합을 함유하는 방법.The compound of claim 1, wherein a to f are each 1 and g to L are each 0, and the corresponding The groups are hydrogen, wherein the first polypeptide contains six CysH residues, and the oxidized polypeptide produced in step (d) contains three intramolecular cystine disulfide bonds.
제1항에 있어서, 언급한 적어도 하나의 분자내 시스틴 디설파이드 결합이 폴리펩타이드내 디설파이드 결합인 방법.The method of claim 1, wherein the at least one intramolecular cystine disulfide bond mentioned is a disulfide bond in a polypeptide.
제1항에 있어서, 언급한 적어도 하나의 분자내 시스틴 디설파이드 결합이 폴리펩타이드간 디설파이드 결합인 방법.The method of claim 1, wherein the at least one intramolecular cystine disulfide bond mentioned is an interpolypeptide disulfide bond.
제1항에 있어서, 산화된 폴리펩타이드를 모아서 정제하고 정제된 산화 폴리펩타이드를 모으는 추가의 단계가 포함되는 방법.The method of claim 1, further comprising collecting and purifying the oxidized polypeptide and collecting the purified oxidized polypeptide.
제1항에 있어서, 정제하여 모은 산화 폴리펩타이드가 상기 제1 폴리펩타이드의 아미노산 잔기 서열을 갖는 반복단위를 다수 함유하는 상기 제1 폴리펩타이드의 멀티머이며, 여기에서 반복단위 분자내 폴리펩타이드간 시스틴 디서파이드 결합에 의해 함께 결합되는 방법.The method of claim 1, wherein the purified oxidized polypeptide is a multimer of the first polypeptide containing a plurality of repeat units having an amino acid residue sequence of the first polypeptide, wherein the interspeptide cystine in the repeat unit molecule A method of joining together by disulfide bonds.
제1항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드의 합성을 비-산화 조건하에서 수행하고, 합성된 제1 폴래펩타이드는 상기 일반식(Ⅰ-A)의 서열에 상응하는 아미노산 잔기 서열을 갖는 반복단위를 다수 함유하며, 상기 반복단위는 제1 폴리펩타이드 반복단위의 아미노-말단 잔기의 카복실 그룹 사이에서 형성된 아미드 결합에 의해 함께 결합되는 방법.The method of claim 1, wherein the synthesis of the first polypeptide is carried out under non-oxidizing conditions, the synthesized first polypeptide is a repeating unit having an amino acid residue sequence corresponding to the sequence of Formula (I-A) Wherein the repeating units are joined together by an amide bond formed between the carboxyl groups of the amino-terminal residues of the first polypeptide repeating unit.
제1항에 있어서, m이 1이며은 좌측에서 우측으로, 즉 아미노-말단에서 카복시-말단의 방향으로 식 Asn(Ser)Thr(Ser)dhe(Ash)Tyr 로 표시되는 서열[여기에서, 괄호안의 아미노산 잔기는 각각 바로 앞의 아미노산 잔기에 대한 대체 아미노산이다]를 갖는 4개의 아미노산 잔기를 함유하는 펩타이드인 방법.The compound of claim 1, wherein m is 1 Is a sequence represented by the formula Asn (Ser) Thr (Ser) dhe (Ash) Tyr from left to right, i.e., amino-terminus to carboxy-terminus, wherein the amino acid residues in parentheses are each immediately preceding an amino acid residue. Wherein the peptide is a peptide containing four amino acid residues.
(a) 비-산화성 조건하에서 좌측에서 우측으로, 즉 아미노-말단에서 카복시 말단의 방향으로 다음 일반식(Ⅴ)로 표시되는 아니모산 서열을 함유하는 제1 폴리펩타이드를 합성하고; (b) 생성된 제1 폴라펩타이드를 약 10.5미만의 알카리성 pH를 갖는 수성 용액에 ㎖당 약 2㎎미만의 농도로 용해시켜; (c) 생성된 용액을 pH를 약 7.0 내지 약9.5로 유지하면서 산화제로써 분자상 산소와접속시키고; (d) 접촉 반응을 약 1내지 약 24시간 동안 유지시켜 일반식(Ⅴ)에서그룹의 앞의 인접하지 않은 Cys 잔기의 쌍, 즉 ST Ib 폴리타이드의 아미노-말단으로 부터 5 또는 6과 9 또는 10, 5 또는 6과 14, 및 9 또는 10과 17위치에 상응하는 Cys 자기로 이루어진 그룹중에서 선택된 Cys 잔기 쌍 사이에서 적어도 하나의 분자내 디설파이드 결합을 형성시킴을 특징으로 하여,에쉐리키아 콜리의 열안정성 장독소의 적어도 약 10%의 항원성을 갖는 합성 폴리펩타이드를 제조하는 방법.(a) synthesizing a first polypeptide containing an animonic sequence represented by the following general formula (V) from left to right, ie, from the amino-terminus to the carboxy terminus, under non-oxidative conditions; (b) dissolving the resulting first polypeptide at an concentration of less than about 2 mg per ml in an aqueous solution having an alkaline pH of less than about 10.5; (c) connecting the resulting solution with molecular oxygen as an oxidant while maintaining the pH at about 7.0 to about 9.5; (d) maintaining the contact reaction for about 1 to about 24 hours in formula (V). From the pair of nonadjacent Cys residues preceding the group, ie from the amino-terminus of the ST Ib polytide, to the Cys pores corresponding to positions 5 or 6 and 9 or 10, 5 or 6 and 14, and 9 or 10 and 17 Forming at least one intramolecular disulfide bond between Cys residue pairs selected from the group consisting of: thereby preparing a synthetic polypeptide having antigenicity of at least about 10% of the thermostable enterotoxin of Escherichia coli . .
상기식에서, 괄호안의 3개의 특정 아미노산 잔기와그룹이 없는 상기 아미노산 잔기 서열 ST Ib은 폴리펩타이이드의 아미노-말단으로부터 5번 내지 18번 위치의 아미노산 자기에 상응하며; 괄호안의 3개의 특정 아미노산 잔기는 각각 바로 앞의 아미노산 잔기에 대한 대체 아미노산이고;,및은 같거나 다르며 앞의 Cys 잔기에 대한 대체 아미노산 잔기이며, g 내지 ℓ은 0 또는 1의 정수이고, 단 g 내지 ℓ 중의 어떤것이 0이면 상응하는 개개그룹은 존재하지 않으며, g 내지 ℓ 중의 적어도 2개는 0이고, 또한 개개그룹 앞의 Cys 잔기로부터 인접하지 않은 적어도 하나의 Cys 잔기 쌍이 존재하며 상기 인접하지 않은 Cys 잔기 쌍은 ST Ib 폴리펩타이드의 아미노-말단으로 부터 5 또는 6과 9 또는 10, 5 또는 6과 14, 및 9 또는 10과 17 위치에 상응하는 Cys 잔기들로 구성된 그룹들 중에서 선택된다.Wherein three specific amino acid residues in parentheses The amino acid residue sequence ST Ib without group corresponds to amino acid self at positions 5-18 from the amino-terminus of the polypeptide; The three specific amino acid residues in parentheses are the replacement amino acids for each immediately preceding amino acid residue; , And Is the same or different and is an alternative amino acid residue for the preceding Cys residue, where g to l are integers of 0 or 1, provided that any of g to l is zero No groups are present, at least two of g to l are zero, and each There is at least one non-contiguous Cys residue pair from the Cys residue preceding the group, wherein the non-contiguous Cys residue pair is 5 or 6 and 9 or 10, 5 or 6 and 14 from the amino-terminus of the ST Ib polypeptide, and Selected from the group consisting of Cys residues corresponding to positions 9 or 10 and 17;
제10항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드가 추가로 상기 폴리펩타이드의 아미노-말단에 결합된, 좌측에서 우측으로, 즉 아미노-말단에서 카복시-말단의 방향으로 식 Asn(Ser)Thr(Ser)dhe(Ash)Tyr 로 표시되는 아미노산 서열을 함유하는 방법.The formula Asn (Ser) Thr (Ser) of claim 10, wherein the first polypeptide is further bound to the amino-terminus of the polypeptide, from left to right, ie, from the amino-terminus to the carboxy-terminus. A method containing an amino acid sequence represented by dhe (Ash) Tyr.
좌측으로 우측으로, 즉 아미노-말단에서 카복시-말단의 방향으로 다음 일반식(Ⅰ-A)로 표시되는 아미노산 잔기 서열을 함유하는,에쉐리키아 콜리의 생물학적 열 안정성 장독소의 항원성의 적어도 약 10%를 갖는 합성 폴리펩타이드를 제조하고; 생성된 폴리펩타이드를 담체에 결합시켜 결합체를 형성시키고; 생성된 결합체의 유효량을 생리적으로 허용되는 희석제에 용해시키거나 분산시킴을 특징으로 하여, 백신을 제조하는 방법.At least about 10 of the antigenicity of the biological heat stable enterotoxin of Escherichia coli , containing the amino acid residue sequence represented by the following general formula (I-A) from left to right, ie from amino-terminus to carboxy-terminus Preparing a synthetic polypeptide having%; Binding the resulting polypeptides to a carrier to form a conjugate; A method for producing a vaccine, characterized in that the effective amount of the resulting conjugate is dissolved or dispersed in a physiologically acceptable diluent.
Asn(Tyr) (Ⅰ-A)Asn (Tyr) (Ⅰ-A)
상기식에서, 괄호안의 3개의 특정 아미노산 잔기는 각각 상기 서열중의 바로 앞의 아미노산 잔기의 대체 아미노산이며; a 내지 f 및 g 내지 ℓ은 각각 0 또는 1의 정수이고, 단 a 내지 f 또는 g 내지 ℓ중의 어떤것이 0이면 상응하는또는그룹은 존재하지 않으며,그룹이 존재하지 않은 경우, 부재하는그룹을 갖는 Cys 잔기의 황원자는 시스틴 더설파이드 결합을 형성하며, a 내지 f 또는 g 내지 ℓ이 1이면 상응하는또는그룹은 존재하고;그룹들은 각각으로는 Cys 잔기의 황원자에 결합된 같거나 다른 잔기로 수소, 탄소수 1내지 약 4의 알킬 그룹, 탄소수 2내지 약 20의 치환된 알킬 그룹, 탄소수 1내지 약 8의 아실 그룹 및 탄소수 3내지 약 10의 치환된 아실 그룹 중에서 선택되며;그룹들은 같거나 다르며, 각각 바로 앞의 Cys 잔기에 대한 대체 아미노산 잔기이고; a 내지 f 중의 적어도 둘 및 g 내지 ℓ중의 둘은 0이며 2개의 Cys 잔기가 존재하고, 단 상기 합성 폴리펩타이드는 존재하는 적어도 2개의 Cys 잔기로부터 형성된 적어도 하나의 분자내 시스틴 디설파이드 결합을 함유하며, m은 0 또는 1의 정수이며, 단 m이 0이면그룹은 존재하지 않고 m이 1이면은 1개 내지 약 54개의 아미노산 잔기를 함유하는 체인, 연결 그룹, 및 아미노-말단 잔기의 아민과 아미드 결합을 형성하는 탄소수 1내지 약 20의 카복실산의 아실 부분으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.Wherein the three specific amino acid residues in parentheses are each the replacement amino acid of the amino acid residue immediately preceding it in the sequence; a to f and g to l are each an integer of 0 or 1, provided that any of a to f or g to l is 0 or Group does not exist, If the group does not exist, The sulfur atom of the Cys residue with a group forms a cystine desulphide bond and if a to f or g to l are 1, the corresponding or Group exists; The groups are each the same or different residues bonded to the sulfur atom of the Cys residue, hydrogen, an alkyl group of 1 to about 4 carbon atoms, a substituted alkyl group of 2 to about 20 carbon atoms, an acyl group of 1 to about 8 carbon atoms, and 3 carbon atoms. To about 10 substituted acyl groups; The groups are the same or different and each is an alternative amino acid residue for the immediately preceding Cys residue; at least two of a to f and two of g to l are zero and there are two Cys residues provided that the synthetic polypeptide contains at least one intramolecular cystine disulfide bond formed from at least two Cys residues present, m is an integer of 0 or 1, provided that m is 0 If no group exists and m is 1 Is selected from the group consisting of a chain containing 1 to about 54 amino acid residues, a linking group, and an acyl moiety of a carboxylic acid having 1 to about 20 carbon atoms that forms an amide bond with an amine of an amino-terminal residue.
좌측에서 우측으로, 아미노-말단에서 카복시-말단의 방향으로 다음 일반식(Ⅰ-A)로 표시되는 아미노산 잔기 서열을 함유하는 다수의 폴리펩티타이드 반복 단위로 이루어지는,에쉐리키아 콜리의 생물학적 열안정성 장독소의 항원성의 약 10%의 항원성을 갖는 합성 멀티머를 제조하고; 생성된 멀티머를 담체에 결합시켜 각합체를 형성시키고; 생성된 결합체의 유효량을 생리적으로 허용되는 희석제에 용해 시키거나 분산시킴을 특징으로 하여, 백신을 제조하는 방법.Biological thermostability of Escherichia coli , consisting of a plurality of polypeptide repeat units containing an amino acid residue sequence represented by the following general formula (I-A) from left to right and from amino-terminus to carboxy-terminus Preparing a synthetic multimer having about 10% antigenicity of the enterotoxin; The resulting multimer is bound to a carrier to form a conjugate; Dissolving or dispersing an effective amount of the resulting conjugate in a physiologically acceptable diluent.
Asn(Tyr) (Ⅰ-A)Asn (Tyr) (Ⅰ-A)
상기식에서, 괄호안의 3개의 특정 아미노산 잔기는 각각 상기 서열중의 바로 앞의 아미노산 잔기의 대체 아미노산이며; a 내지 f 및 g 내지 ℓ은 각각 0 또는 1의 정수이고, 단 a 내지 f 또는 g 내지 ℓ중의 어떤것이 0이면 상응하는또는그룹은 존재하지 않으며,그룹이 존재하지 않은 경우, 부재하는그룹을 갖는 Cys 잔기의 황원자는 시스틴 더설파이드 결합을 형성하며, a 내지 f 또는 g 내지 ℓ중의 어떤것이 1이면 상응하는또는그릅운 존재하고;그룹들은 각각으로는 Cys 잔기의 황원자에 결합된 같거나 다른 잔기로 수소, 탄소수 1내지 약 4의 알킬 그룹, 탄소수 2내지 약 20의 치환된 알킬 그룹, 탄소수 1내지 약 8의 아실 그룹 및 탄소수 3내지 약 10의 치환된 아실 그룹 중에서 선택되며;그룹들은 같거나 다르며, 각각 바로 앞의 Cys 잔기에 대한 대체 아미노산 잔기이고; a 내지 f 중의 적어도 둘 및 g 내지 ℓ중의 둘은 0이며 2개의 Cys 잔기가 존재하고, 단 상기 합성 폴리펩타이드는 존재하는 적어도 2개의 Cys 잔기로부터 형성된 적어도 하나의 분자내 시스틴 디설파이드 결합을 함유하며, m은 0 또는 1의 정수이며, 단 m이 0이면그룹은 존재하지 않고 m이 1이면은 1개 내지 약 54개의 아미노산 잔기를 함유하는 체인, 연결 그룹, 및 아미노-말단 잔기의 아민과 아미드 결합을 형성하는 탄소수 1내지 약 20의 카복실산의 아실 부분으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.Wherein the three specific amino acid residues in parentheses are each the replacement amino acid of the amino acid residue immediately preceding it in the sequence; a to f and g to l are each an integer of 0 or 1, provided that any of a to f or g to l is 0 or Group does not exist, If the group does not exist, The sulfur atom of the Cys residue with a group forms a cystine desulphide bond and if any of a to f or g to l is 1, the corresponding or Is wrong; The groups are each the same or different residues bonded to the sulfur atom of the Cys residue, hydrogen, an alkyl group of 1 to about 4 carbon atoms, a substituted alkyl group of 2 to about 20 carbon atoms, an acyl group of 1 to about 8 carbon atoms, and 3 carbon atoms. To about 10 substituted acyl groups; The groups are the same or different and each is an alternative amino acid residue for the immediately preceding Cys residue; at least two of a to f and two of g to l are zero and there are two Cys residues provided that the synthetic polypeptide contains at least one intramolecular cystine disulfide bond formed from at least two Cys residues present, m is an integer of 0 or 1, provided that m is 0 If no group exists and m is 1 Is selected from the group consisting of a chain containing 1 to about 54 amino acid residues, a linking group, and an acyl moiety of a carboxylic acid having 1 to about 20 carbon atoms that forms an amide bond with an amine of an amino-terminal residue.
분자내 시스틴 디설파이드 결합은 폴리펩타이드내 디설파이드 결합이며, 반복단위는 제1 폴리펩타이드 반복단위의 아미노-말단 잔기의 아민 그룹과 제2 폴리펩타이드 반복단위의 카복시-말단 전기의 카복실 그룹 사이에서 형성된 아미드 결합을 통해 수미식으로 결합된 제13항에서 정의한 합성 멀티머를 제조하고; 생성된 멀티머를 담채에 결합시켜 결합체를 형성시키고; 생성된 결합체의 유효량을 생리적으로 허용되는 담체에 용해시키거나 분산시킴을 특징으로 하여, 백신을 제조하는 방법.An intramolecular cystine disulfide bond is a disulfide bond in a polypeptide, the repeating unit being an amide bond formed between the amine group of the amino-terminal residue of the first polypeptide repeat and the carboxyl-terminal carboxyl group of the second polypeptide repeat. Preparing a synthetic multimer as defined in claim 13 in a water-tight manner; Binding the resulting multimer to the tin to form a conjugate; A method for preparing a vaccine, characterized in that an effective amount of the resulting conjugate is dissolved or dispersed in a physiologically acceptable carrier.
분자내 시스틴 디설파이드 결합은 폴리펩타이드내 디설파이드 결합이며, 반복단위는 폴리펩타이드 반복단위의 Cys 잔기 사이에서 형성된 폴리펩타이드간 시스틴 디설파이드 결합에 의해 결합된 제13항에서 정의한 합성 멀티머를 제조하고; 생성된 멀티머를 담채에 결합시켜 결합체를 형성시키고; 생성된 결합체의 유효량을 생리적으로 허용되는 희석제에 용해시키거나 분산시킴을 특징으로 하여, 백신을 제조하는 방법.Intramolecular cystine disulfide bonds are disulfide bonds in polypeptides, and repeating units are prepared by the synthetic multimer as defined in claim 13 bound by inter-polypeptide cystine disulfide bonds formed between Cys residues of the polypeptide repeat units; Binding the resulting multimer to the tin to form a conjugate; A method for producing a vaccine, characterized in that the effective amount of the resulting conjugate is dissolved or dispersed in a physiologically acceptable diluent.
분자내 시스틴 디설파이드 결합이 폴리펩타이드내간 디설파이드 결합이며, 반복단위는 폴리펩타이드 반복단위의 Cys 잔기 사이에서 형성된 폴리펩타이드간 시스틴 디설파이드 결합에 의해 결합된 제13항에서 정의한 합성 멀티머를 제조하고; 생성된 멀티머의 유효량을 생리적으로 허용되는 희석제에 용해시키거나 분산시킴을 특징으로 하여, 백신을 제조하는 방법.Preparing a synthetic multimer as defined in claim 13 wherein the intramolecular cystine disulfide bond is an interspeptide disulfide bond and the repeating unit is bound by an interpolypeptide cystine disulfide bond formed between Cys residues of the polypeptide repeating unit; Dissolving or dispersing an effective amount of the resulting multimer in a physiologically acceptable diluent.
개별 용기중의, 좌측에서 우측으로, 즉 아미노-말단에서 카복시-말달의 방향으로 다음 일반식(Ⅰ-A)로 표시되는 아미노산 잔기 서열을 함유하며에퀘리키아 콜리의 열 안정성 장독소의 항원성의 적어도 약 10%의 항원성을 갖는 합성 폴리펩타이드로 이루어진 제1 시약 및 상기 합성 폴리펩타이드와 면역반응하며 또한에쉐리키아 콜리의 생물학적 열-안정성 작동소와 면역반응하는 수용체로 이루어진 제2 시약으로 구성되며, 상기 제1 시약과 제2 시약의 혼합물은 열 안정성 장독소가 분석용 샘플에 존재하는 경우, 일정량의 분석용 샘플 존재하에서, 기지의 면역반응과는 다른 면역 반응의 양을 제공하고, 상기 면역반응의 양은 확인 수단에 의해 표시됨을 특징으로 하는 진단 시스템.It contains the amino acid residue sequence represented by the following general formula (I-A) in a separate container, from left to right, ie, from amino-terminus to carboxy-maldal, and to the antigenicity of the heat stable enterotoxin of E. coli . A first reagent consisting of a synthetic polypeptide having at least about 10% antigenicity and a second reagent consisting of a receptor that immunoreacts with the synthetic polypeptide and also immunoreacts with a biological heat-stable agonist of Escherichia coli Wherein the mixture of the first reagent and the second reagent provides an amount of an immune response that is different from the known immune response in the presence of a certain amount of the analytical sample, when thermally stable toxins are present in the analytical sample, A diagnostic system, characterized in that the amount of immune response is indicated by means of identification.
(Tyr) (Ⅰ-A)(Tyr) (Ⅰ-A)
상기식에서, 괄호안의 3개의 특정 아미노산 잔기는 각각 상기 서열중의 바로 앞의 아미노산 잔기의 대체 아미노산이며; a 내지 f 및 g 내지 ℓ은 각각 0 또는 1의 정수이고, 단 a 내지 f 또는 g 내지 ℓ중의 어떤것이 0이면 상응하는또는그룹은 존재하지 않으며,그룹이 존재하지 않은 경우, 부재하는그룹을 갖는 Cys 잔기의 황원자는 시스틴 디설파이드 결합을 형성하며, a 내지 f 또는 g 내지 ℓ이 1이면 상응하는또는그룹은 존재하고;그룹들은 각각으로는 Cys 잔기의 황원자에 결합된 같거나 다른 잔기로 수소, 탄소수 1내지 약 4의 알킬 그룹, 탄소수 2내지 약 20의 치환된 알킬 그룹, 탄소수 1내지 약 8의 아실 그룹 및 탄소수 2내지 약 10의 치환된 아실 그룹 중에서 선택되며;그룹들은 같거나 다르며, 각각 바로 앞의 Cys 잔기에 대한 대체 아미노산 잔기이고; a 내지 f중의 적어도 둘 및 g내지 ℓ중의 둘은 0이며 2개의 Cys 잔기가 존재하고, 단 상기 합성프롤리펩타이드는 존재하는 적어도 2개의 Cys 잔기로 부터 형성된 적어도 하나의 분자내시시틴 디설파이드 결합을 함유하며; m은 0 또는 1의 정수이며, 단 m이 0이면그룹은 존재하지 않고 m이 1이면은 1개 내지 약 54개의 아미노산 잔기를 함유하는 체인, 연결 그룹, 및 아미노-말단 잔기의 아민과 아미드 결합을 형성하는 탄소수 1내지 약 20의 카복실산의 아실 부분으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다.Wherein the three specific amino acid residues in parentheses are each the replacement amino acid of the amino acid residue immediately preceding it in the sequence; a to f and g to l are each an integer of 0 or 1, provided that any of a to f or g to l is 0 or Group does not exist, If the group does not exist, Sulfur atoms of the Cys residue with a group form a cystine disulfide bond and if a to f or g to l are 1, the corresponding or Group exists; The groups are each the same or different residues bonded to the sulfur atom of the Cys residue, hydrogen, an alkyl group of 1 to about 4 carbon atoms, a substituted alkyl group of 2 to about 20 carbon atoms, an acyl group of 1 to about 8 carbon atoms, and 2 carbon atoms. To about 10 substituted acyl groups; The groups are the same or different and each is an alternative amino acid residue for the immediately preceding Cys residue; At least two of a to f and two of g to l are 0 and there are two Cys residues, provided that the synthetic prolipeptides contain at least one molecular endocytin disulfide bond formed from at least two Cys residues present Contains; m is an integer of 0 or 1, provided that m is 0 If no group exists and m is 1 Is selected from the group consisting of a chain containing 1 to about 54 amino acid residues, a linking group, and an acyl moiety of a carboxylic acid having 1 to about 20 carbon atoms that forms an amide bond with an amine of an amino-terminal residue.
제17항에 있어서, 상기 확인 수단이 상기 제2 시약 수용체와 면역반응하는 추가의 수용체로 이루어지며, 상기 추가의 수용체는 표지물(tag)에 결합된 진단 시스템.18. The diagnostic system of claim 17, wherein said identifying means consists of additional receptors that immunoreact with said second reagent receptor, said additional receptor coupled to a tag.
※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.※ Note: The disclosure is based on the initial application.