KR810001653B1 - 7-(치환된)-7H-피롤로〔3, 2-f〕퀴나졸린-1, 3-디아민 유도체의 제조방법 - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

7-(치환된)-7H-피롤로[3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민 유도체의 제조방법

본 발명는 신규의 다음 구조식(Ⅰ)의 피롤로 [3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민과 이의 7-(치환) 및 7,8-(디치환)유도체 및 이의 무독성 산부가염의 제조방법에 관한 것이다.

상기 구조식에서 (가) X는 수소이고 Y는 -CH₂R 또는 -R¹여기에서 R은 수소, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소-부틸, n-펜틸, n-헥실, 2-메틸-1-프로페닐, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로 헥실, 2-페닐에틸, 2-페닐비닐, 페닐; 2,3,4-위치에서 일치환된 페닐(치환체로는 염소, 브롬, 요드, 불소, 트리플루오로메틸, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, 3급-부틸, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 트리플루오로메톡시, 시아노, 메틸설포닐, 아세틸, 프로피오닐, 메틸티오, 에틸티오, 카브에톡시, 카복실, 나트륨 카복시 또는 칼륨 카복시임); 3위치에서 아미노 또는 니트로로 일치환된 페닐, 2,3-2,4-2,5-2,6-3,4-또는 3,5-위치에서 메틸, 에틸, n-프로필, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 염소, 브롬, 요드 또는 불소로 이치환된 페닐; 2,4,6-또는 3,4,5-위치에서 메틸, 에틸, 메톡시 또는 에톡시로 삼치환된 페닐; 2,3,5,6-테트라메틸페닐, 3,4-(메틸렌디옥시)페닐, 1-나프탈레닐, 2-나프탈레닐, 2-메틸-1-나프탈레닐, 1-브로모-2-나프탈레닐, 2-피리디닐, 3-피리디닐, 4-피리디닐, 2-퀴놀리닐, 8-퀴놀리닐, 2-티에닐, 3-티에닐, 4-티아졸릴, 3,5-디메틸-4-이속사졸릴, 테트라하이드로-2-푸라닐, 또는 벤조 [b]티엔-3-일이고

R¹은 수소; 2-또는 4-위치에서 아미노, 니트로, 시아노, 아세틸, 프로피오닐, 메틸설포닐, 트리플루오로메틸 또는 카브에톡시로 일치환된 페닐; 2,4-디니트로페닐, 2,4-디아미노페닐, 2-시아노-4-니트로페닐, 2-시아노-4-아미노페닐, 3-메틸-4-니트로페닐, 3-메틸-4-아미노페닐, 2-트리플루오로메틸-4-니트로페닐, 2-트리플루오로메틸-4-아미노페닐, 2-티아졸릴, 2-피리디닐, 5-니트로-2-피리디닐, 2-피리미디닐, 2-피라지닐, 2-퀴놀리닐, 4-퀴놀리닐, 4-메틸-2-퀴놀리닐, 7-클로로-4-퀴놀리닐, 7-트리플루오로메틸-4-퀴놀리닐, 2-메틸-4-퀴놀리닐, 3-메틸-2-퀴녹살리닐, 2-페닐-4-퀴놀리닐 또는 2-벤조티아졸릴임)이거나,

(나)X는 메틸, 페닐 또는 염소이고

Y는 수소, 메틸, 벤질, 3-시아노벤질, 4-시아노벤질 또는 2,5-디메틸벤질이며

단 X가 페닐인 경우 Y는 수소 또는 메틸이어야 하며, X가 염소인 경우에 Y는 벤질이어야 한다.

본 발명은 생물학적 환성을 나타내는 피롤로 [3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민의 7-(치환) 및 7,8-(디치환)유도체의 제시방법에 관한 것이고, 또 이들 화합물을 함유하는 약학적 조성물 및 화합물 제조중에 사용되는 중간체에 관한 것이다.

2,4-디아미노퀴나졸린 및 2,4,6-트리아미노퀴나졸린의 수많은 유도체는 문헌에 기재되어 있으며 세균계에 대해 항엽산작용을 나타내는 것으로 알려지고 있다. 이러한 화합물은 또한 항균 또는 항원충작용을 나타내는 것으로 알려져 있다. 예를 들면 5-위치 및/또는 6-위치에 알킬그룹을 갖고 있는 2,4-디아미노퀴나졸린, 또는 5-와 6-위치사이가 트리메틸렌 다리를 갖는 2,4-디아미노퀴나졸린은 항균작용를 나타낸다.

[참조 : Hitchings 등의 미합중국 특허 제2,945,859호, 또는 De Graw 등의 J. Med. Chem., 17, 762(1974]. 2,4-디아미노-6-[(아릴메틸)아미노]퀴나졸린, 2,4-디아미노-6-[[(치환된 아릴)메틸]아미노]-퀴나졸린 및 2,4-디아미노-6-[[(헤테로사이클릭)메틸]아미노]퀴나졸린 및 이의 5-알킬치환체 또는 N⁶-알킬치환체를 갖는 유도체는 항말라리아 작용을 나타낸다 [참조 : Davoll등의 J. Med.Chem., 1812(1972), Elslager등의 J. Med. Chem, 15, 1138(1672); Elslager의 ＂New Perspectives on the Chemotherapy of Malaria, Filariasis and Leprosy＂, Process in Drug Research 18, 1972(1974) p. 111-116 및 152-164].

본 발명에 다른 피롤로 [3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민은 기지의 화합물인 2,4,6-트리아미노퀴나졸린이 5-위치 및 N⁶위치가 에틸렌부위로 연결되어 새로운 트리사이클릭 헤테로사이클을 형성한다는 점에서 기지의 화합물과는 다르다.

＂이치환된＂과 ＂삼치환된＂이란 구조식(Ⅰ)화합물의 페닐환상의 치환체로, ＂이치환＂ 또는 ＂삼치환＂된 화합물외에는 치환체가 디클로로페닐, 디메틸페닐, 디메톡시페닐, 트리메톡시페닐, 트리메틸페닐등과 같은 화합물이다.

상기 구조식(Ⅰ)화합물은 구체적으로 다음과 같이 세분화 할 수 있다.

(가)다음 구조식(Ⅱ)화합물 또는 이의 무독성 산부가염

상기 구조식에서

R은 구조식(Ⅰ)에서 정의한 바와 같다.

(나) 다음 구조식(Ⅲ)화합물 또는 이의 무독성 산부가염

상기 구조식에서

R¹은 구조식(Ⅰ)에서 정의한 바와 같다.

(다)다구 조식식(Ⅳ)화합물 또는 이의 무독성 산부가염

상기 구조식에서

X는 메틸, 페닐, 또는 염소이고

Y는 수소, 메틸, 벤질, 3-시아노벤질 4-시아노벤질 또는 2,5-디메틸벤질이며

단, X가 페닐일 경우 Y는 수소 또는 메틸이고, X가 염소일 경우 Y는 벤질이다.

7H-피롤로 [3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민 및 8-메틸 또는 8-페닐 치환체를 갖는 이의 유도체는 N⁷-위치에 하나의 치환체를 갖는 구조식(Ⅰ)화합물을 제조하는데 중간체로 사용될 수 있다는 점에서 특히 유용하다.

X, Y, R 및 R¹가 전술한 바와 같은 구조식(Ⅰ) 화합물 또는 이의 염은유리관내 시험에서 세균의 성장을 저해하는데 이는 성장배지로서 응혈된 말의 피를 5%함유시킨 웰코테스트(wellcotest)민감성 시험 한천배지 또는 정액 한천배지를 사용하는 표준시험관 희석법으로 입증할 수 있다. 본 발명 화합물은 다음과 같은 균주, 스타피로코키스 아우레우스스미스(S. aureus smith), 스라피로코키스 아우레우스 53-180(S. aureus 53-180), 나이세리아 카타라할리스 8193(N. catarrhalis 8193), 에스케리키아콜리 9637(E. coli 9637), 살모넬라 파라티피 11737(S. paratyphii 11737), 클렙시엘라 뉴모니아에 10031(K. pneumoniae 10031), 또는 프로테우스 볼가리스(P. vulgaris 6896)중의 하나 또는 그 이상에 대한 유리관내 활성을 나타낸다. 전술한 시험관 희석법으로 시험할 때, 본 발명화합물은 시험균에 대해 ＜0.0009δ/ml-250δ/ml범위의 최소억제농도(MIC)를 갖는다.

그밖에 구조식(Ⅰ)화합물을 유리관내에 나타내는데 함염산 활성작용을 염산배지에서 스트립토코쿠스 페카리스 Aicc 8043(streptoccus faecalis)의 성장을 저해시킴으로써 입증할 수 있다.

본 발명 화합물들은 설파제의 항균작용을 강화시키는 작용을 나타낸다. 생쥐에 경구투여하여 시험한 결과 다음과 같은 화합물들은 설파메톡사졸과 함께 세균감염에 대해 상승작용을 나타낸다.

7-(페닐메틸)-7H-피롤로[3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민,

7-[(4-플루오로페닐)메틸]-7H-피롤로[3,2-f]-퀴나졸린-1,3-디아민,

7-[(4-시아노페닐)메틸]-7H-피롤로[3,2-f]-퀴나졸린-1,3-디아민,

7-[(3-시아노페닐)메틸]-7H-피롤로[3,2-f]-퀴나졸린-1,3-디아민,

8-메틸-7-(페닐메틸)-7H-피롤로[3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민

7-(4-시아노페닐)-7H-피롤로[3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민,

7-(2-티아졸릴)-7H-피롤로 [3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민.

그밖에, 본 발명에 따른 화합물들은 플라스모디움 베르게이 KBG 173(plasmodian berghei)로 감염시킨 생쥐에 대한 혈중 열충박멸표준 시험법으로 입증되는 생체내 항말라리아작용을 나타낸다. 다음 구조식(Ⅰ)화합물이 전술한 시험에서 유효한 항말라리아작용을 나타낸다.

(가)X는 수소이고

Y는 -CH₂R

(여기에서 R은 이소-부틸, n-헥실, 2-메틸-1-프로페닐, 사이클로헥실, 2-페닐에틸, 페닐, 2,3-또는 4-위치에서 염소, 불소, 메틸, 시아노 또는 메톡시로 일치환된 페닐, 4-이소프로필페닐, 2-트리플루오로메틸페닐, 3-트리플루오로메틸페닐, 4-(메틸설포닐)페닐, 4-아세틸페닐, 4-메틸티오페닐, 4-카브에톡시페닐, 4-트리플루오로메톡시페닐, 3위치에서 아미노 또는 니트로로 일치환된 페닐, 2,4-디메틸페닐, 2,5-디메틸페닐, 3,4-디메틸페닐, 3,4-디메톡시페닐, 2,6-디클로로페닐, 3,4-디클로로페닐, 2,4,6-트리메틸페닐, 3,4,5-트리메톡시페닐, 3,4-(메틸렌디옥시)페닐, 1-나프탈레닐, 2-나프탈레닐, 2-메틸-1-나프탈레닐, 2-피리디닐, 3-피리디닐, 4-피리디닐, 2-퀴놀리닐, 8-퀴놀리닐 또는 3-티에닐인화합물,

(나)X는 수소이고

Y는 R¹(여기서 R¹은 2-또는 4-위치에서 니트로 또는 아세틸로 일치환된 페닐, 4-시아노페닐, 3-메틸-4-니트로페닐, 2-티아졸릴 또는 5-니트로-2-피리디닐인 화합물, 및

(다)X는 메틸이고

Y는 수소 또는 2,5-디메톡시벤질인화합물.

레서스(Rhesus)원숭이를 말라리아원충(Plasmodium cynomolgi)으로 감염시켜서 수행한 생체내 시험에서 7-(페닐메틸)-7H-피롤로[3,2-f]퀴나졸린-1,37-디아민, 7-[(4-메톡시페닐)메틸]-7H-피롤로[3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민, 및 7-[(2,5-디메틸페닐)메틸]-7H-피롤로[3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민이 유효한 작용을 나타낸다. 전술한 화합물들의 CD₅₀은 7일간 화합물을 경구투여한 후 각각 0.1g/kg/일, 0.316mg/kg/1일, 1.0mg/kg/1일이었다.

7-(페닐메틸)-7H-피롤로[3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민 및 7-[(2,5-디메틸페닐)메틸]-7H-피롤로[3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민 화합물은 클로로퀸, 설폰, 사이클로구아닐, 피리메타민에 대해 내성이 있는 플라스모디움 베르게이 균주에 대해 활성을 나타낸다.

어떤 화합물은 다음 문헌에 기술된 방법으로 시험할 때 임파세포 백혈병 P-388을 갖는 생쥐에 대해(복강내 주사)생체내 활성을 나타낸다[참조 : Cancer Chemotherapy Reports 제3권 2호, 9페이지(Protocol 1,200), 1972년 9월].

이러한 활성을 나타내는, X가 수소이고 Y가 -CH₂R인 구조식(Ⅰ)화합물은 다음과 같다.

본 발명에 따른 화합물은 다음과 같이 제조한다; 즉, 다음 구조식(X)화합물의 산부가염을 지방족 알콜 존재하에 185°내지 210℃에서 알칼리금속 디시안아마이드와 반응시켜 다음 구조식(Ⅸ)화합물을 제조한다.

상기 구조식에서

X는 수소, 메틸, 페닐 또는 염소이고

Y¹은 수소 또는 -CH₂R(여기에서 R은 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, n-펜틸, n-헥실, 2-메틸-1-프로페닐, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 2-페닐에틸-2-페닐비닐, 페닐; 2-, 3-또는 4-위치에서 염소, 브롬, 요드, 불소, 트리플루오로메틸, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, 3급-부틸, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 트리플루오로메톡시, 시아노, 메틸설포닐, 아세틸, 프로피오닐, 메틸티오, 에틸티오, 카브에톡시, 카복실, 나트륨카복시 또는 칼륨카복시로 일치환된 페닐; 3-위치에서 니트로로 일치환되니 페닐; 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4-또는 3,5-위치에서 메틸, 에틸, n-프로필, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 염소, 브롬, 요드 또는 불소로 이치환된 페닐; 2,4,6-또는 3,4,5-위치에서 메틸, 에틸, 메톡시 또는 에톡시로 삼치환된 페닐; 2,3,5,6-테트라메틸페닐, 3,4-(메틸렌디옥시)페닐, 1-나프탈레닐, 2-나프탈레닐, 2-메틸-1-나프탈레닐, 1-브로모-2-나프탈레닐, 2-피리디닐, 3-피리디닐, 4-피리디닐, 2-퀴놀리닐, 8-퀴놀리닐, 2-티에닐, 3-티에닐, 4-티아졸릴, 3,5-디메틸-4-이속사졸릴, 테트라하이드로-2-푸라닐, 또는 벤조 [b]티엔-3-일이다)이미 단 X가 염소일 경우 Y¹는 -CH₂R이다.

상기 반응에서, 산부가염형태의 적합한 5-아미노인들 (X)을 지방족 알콜용매 존재하에 185°내지 215℃에서 나트륨 디시안 아마이드 또는 칼륨 디시안아마이드 같은 알칼리금속 디시안 아마이드와 함께 가열한다. 가장 바람직한 결과는 디시안 아마이드 5-아미노인돌 산부가염의 몰비를＞2 : 1로 사용하였을 때 얻어지며 약 2.5 : 1하여금 몰비가 바람직하다. 반응은 통상적으로 반응물을 용매의 환류온도에서 가열함으로써 수행한다. 비점이 약 185°내지 215℃인 지방족 알콜이 바람직한 용매이다. 바람직한 방법에서는 5-아미노인돌 산부가염(X)을 1-옥틸알콜내에서 나트륨 디시안아마이드와 반응이 완결될 때까지 환류온도에서 가열한다.

출발물질인 구조식(X)의 5-아미노인돌은 기지의 화합물이거나 공지의 방법으로 제조할 수 있다. 구조식(Ⅰ)의 화합물은 유리염기나 또는 산부가염형태로 분리, 정제시킬 수 있다. 이러한 한 형태를 다른 형태로 전환 시키는 방법은 화학분야에서 공지이다.

약물학적 사용에 있어, 구조식(Ⅰ)화합물은 무독성의 유기 또는 무기산의 산부 가염형태로 투여할 수 있다. 이러한 염들은 이 분야에 잘 알려진 방법으로 제조할 수 있다. 적합한 염은 다음과 같은 산으로부터 형성된 것이다. 염산, 브롬산, 말레산, 벤조산, 파모산, 메탄설폰산 또는 아세트산.

약물학적 사용에 있어, 구조식(Ⅰ)의 화합물은 단독으로 또는 약학적으로 무독한 담체와 혼합하여 투여할 수 있는데 이들 담체의 혼합비율과 성질은 선택된 화합물의 용해도 및 화학적 성질, 투여방법, 기준적인 약학적 실용예에 따라 결정된다. 예를 들어, 구조식(Ⅰ)의 화합물은 캡슐제, 정제 또는 산제같은 고체 투여형태나 또는 용제나 현탁제 같은 액체형태로 경구투여할 수 있다. 또한 본 발명 화합물은 멸균용액이나 멸균현탁액형태로 비경구적 투여될 수도 있다. 고형의 경구투여용 제제는 통상의 부형제, 예를들면 유당, 시당, 마그네슘 스아테이트, 수지등과 같은 물질을 함유할 수 있다. 액체의 경구투여용 제제는 여러 가지 풍미제, 착색제, 보존제, 안정화제, 용해제 또는 현탁제를 함유할 수 있다. 비경구용 제제는 여러 가지 보존제, 안정화제, 완충제, 용해제 또는 현탁제를 함유한 멸균수용액 또는 멸균 비수성용액 또는 멸균 현탁액이다. 필요에 따라 소금물 또는 포도당 같은 첨가제를 가하여 용액을 등장액으로 만들 수 있다.

음실 시예들은 본 발명 화합물을 제조, 사용하는 방법에 관한 것이며 모든 온도는 섭씨에 관한 것이다.

[실시예 1]

7H-피롤로[3,ε-f]퀴나졸린-1,3-디아민

5-아미노인돌 염산염 168.6g의 현탁액(5-아미노인돌의 메탄올성 현탁액을 과량의 이소프로판올 성염산용액으로 처리한 다음 이 염용액을 에테르로 희석하여 제조함), 222g의 나트륨디시안아마이드(미리 메탄올로 재결정함) 및 3ℓ의 1-옥탄올을 질소기류하에 격렬히 교반하면서 13시간동안 환류시킨다음 뜨거운 혼합물을, 여과한다. 불용성물질을 500ml의 뜨거운 1-옥탄올로 세척한 다음, 여액을 합치고 등용적의 에테르로 희석한 후 이소프로판을 성염산용액을 가해 pH 1로 만든다. 미세한 황색침전물을 서서히 여과하여 수집하고 3ℓ의 온수에 녹인다. 수용액을 거친, 소결된 유리편넬을 통해여과한다. 약 25°로 냉각한 후 이 용액을 에틸아세테이트와 에테르로 세척한다. 용액에 수산화나트륨수용액을 가해 염기성으로 만들면 황색침전이 얻어지는데 이를 수집하고 물로 철저히 세척한 후 항량이 될 때까지 건조시킨다. 조생성물(141.5g)을 약 10ℓ의 메탄올에 녹이고 목탄으로 처리한 후 셀라이트를 통과시켜 여과한다. 메탄성올 용액을 약 400ml의 용적이 되도록 농축하고, 200ml의 아세톤으로 희석한 후 냉각시킨다.

분리된 고체를, 냉각시킨 아세톤으로 세척하고 건조시켜 표제화합물 77.6g을 수득한다.

융점 : 263내지 265°(분해). 모액을 약 40ml의 용적까지 농축하고 40ml의 아세톤을 가한 후 냉각시키면 융점 262내지 264°(분해)인 생성물 17.2g을 추가로 수득한다. 융점이 263내지 25°6(분해)인생성물 1.0g을 메탄올 아세톤으로 재결정시켜 표제화합물 395mg을 수득한다. 융점 264°(분해).

NMR(d-DMSO) : δ7.14(d, J-3Hz, 9H), 7.20(d, J-9Hz, 5 또는 6H), 7,54(d, J-3Hz, 8H), 7.78(d, J-9Hz, 5 또는 6H), 11.65(브로드 s, 교환될 수 있음, 7H) ppm;

5.62g의 7H-피롤로[3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민(전술한 바와 같은 방법으로 제조함)을 300ml의 메탄올 용액에 녹이고 과량의 이소프로판올성염산용액으로 처리한 후 이 용액을 약 100ml의 용적이 되도록 농축하고 200ml의 디메톡시에탄으로 희석한 다음 충분히 냉각시킨다. 염을 수집하고 건조시킨다. 중량 2.7g, 모액을 농축시켜 3.8g의 염을 추가로 생성하고 이 두가지 고체물질을 메탄올-에탄올로 재결정 시켜 표제화합물 65.26g을 모노 하이드로클로라이드염으로 수득한다. 융점 : ＞310°

원소분석 : C₁₀H₉N₅·HCl

치계산 : C 50.96, H 4.28, N 29.72, Cl 15.05

치실측 : 50.81, 4.22, 30.01, 14.88

전술한 바와 유사한 조건을 사용하여, 나프틸아민을 2,4-디아미노벤조 [b]-퀴나졸린으로 전환시켰다. [참조, A. Rosowsky와 N. Papathanasopoulos의 J. Org. Chem., 39, 3293(1974)].

[실시예 2]

7-(페닐메틸)-7H-피롤로[3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민

16.215g의 5-니트로인돌을 무수 디메틸포름아마이드(1.25ml)에 녹인 현탁액에 5,280g의 약 50% 수소화나트륨-무기유 분산액을 가하면서 질소기류하에 교반한다. 1.5시간동안 교반한 후 13.3g의 벤질클로라이드를 25ml의 무수 디메틸포름아마이드에 녹인 용액(12.1ml)을 가하고 5시간동안 계속하여 교반한다. 175ml의 아세트산을 가한 후 용매를 진공하에 제거하고 잔사를 과량의 탄산칼륨 수용액과 함께 교반한 후 여과한다. 고체를 수집하고, 물로 세척한 후 건조시킨다. 조생성물을 2.5ℓ의 끓는 메탄올중에 용해시키고 목탄으로 처리한 후 셀라이트를 통해 여과한다. 여액을 약 400ml가 되도록 농축하고 냉각시킨다. 결정성 고체를 수집하여 융점 104내지 150°인 고체 20.3g을 수득한다. 이중 4.0g을 메탄올로 재결정시켜 3.6g의 1-벤질-니트로인돌을 수득한다. 융점 : 103°

원소분석치 : C₁₅H₁₂N₂O₂

계산치 : C 71.41, H 4.80, N 11.11

실측치 : 71.31, 4.84, 11.02

15.3g의 1-벤질-5-니트로인돌, 1.0g의 pd/c(10%) 및 400ml의 에틸알콜로 된 현탁액을 수소흡입이 중지될 때까지 1기압하에서 수소화시킨다. 현탁액을 여과하고 화매를 제거한다. 얻어진 고체를 이소프로판올 성염산을 가해 산성으로 만든 메틸알콜 50ml에 용해시키고 5-아미노-1-벤질인돌 염산염을, 450ml의 에테르를 가하여 침전시킨다. 융점 : 244내지 245°(분해)

원소분석치 : C₁₅H₁₅N₂·HCl

계산치 : C 69.8, H 5.87, N 10.87, Cl 13.37

실측치 : 69.54, 5.73, 10.91, 13.63

2.578g의 5-아미노-1-벤질인돌 염산염, 2.228g나트륨 디시안 아마이드(메탄올로 미리 재결정함) 및 약 50ml의 무수 옥탄올로 된 현탁액을 4시간동안 질소기류하에 충분히 교반하면서 환류시킨다. 반응 혼합물을 여과하고 여액을 150ml의 에테르로 희석한다. 이소프로판올성 염산으로 산성화하여 얻은 침전물을 여과하고 메탄올로 재결정시켜 염 0.3g을 얻는다. 3ml의 1N-수산화나트륨과 1ml의 메틸알콜로된 용액을 상기 염과 함께 충분히 혼합하고 생성된 화합물을 메탄올로 재결정시켜 표제화합물(융점 223내지 224°)을 수득한다.

[실시예 3]

8-메틸-7H-피롤로[3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민

(가)52.47g의 2-메틸인돌을 320ml의 농황산에 녹여 충분히 냉각시키고 교반한 용액에 반응온도를 0내지 5°로 유지시키면서 65분간에 걸쳐 34.00g의 질산나트륨을 가한다. 10분간 계속하여 교반한 후 반응 물질을 3kg의 얼음에 붓고 약 20분후에 황색고체를 수정하고 충분히 물로 세척한 다음 건조시킨다. 조생성물을 활성 도를 갖는 알루미나(Ⅲ) 컬럼(1kg)상에서 클로로포름(3ℓ)을 용매로 사용하여 용출시킨다. 클로로포름 용출물에서 용매를 제거한후 고체를 건조시켜 2-메틸-5-니트로인돌 57.2g을 수득한다. 융점 : 169내지 172°(연화점 162°)

[W.E. Noand J. Org 등의 chcm. 28,2262(1963)에는 유사한 방법으로 이 화합물을 제조하며 융점이 176.0내지 176.5°라고 보고하였다].

(나)그레이스 번호 28라니니켈(물 및 무수 에탄올로 충분히 세척한 후 습윤상태 중량 8.8g)을 30ml의 무수에탄올에 녹인 용액을 8.81g의 2-메틸-5니트로인돌을 140ml의 무수 에탄올에 녹인 용액을 가한다. 이 혼합물을 파르(Parr)기구내에서 약 29° 및 3기압하에 수소화시킨다. 약 1시간내에 수소흡입을 멈춘 후 촉매를 셀라이트상을 통과시킴으로써 여과하여 제거한다. 침전물을 끓는 에탄올로 충분히 세척하고 합친 에탄올 분획물에서 용매를 제거한다. 조생성물을 에탄올-물로 재결정시켜 5-아미노-2-메틸인돌 5.5g을 자주색 고체로서 수득한다.

융점 : 151.5내지 154.5°. [W.E. Noland등의 J. Org. Chem. 28,2262(1963)에는 이 화합물을 유사한 방법으로 제조하였으며 융점이 157내지 159°라고 보고하였다.]

상기 아민 5.44g을 50ml의 메탄올에 녹인 용액을 빙수욕중에서 냉각시키고 과량의 이소프로판올 성열산으로 처리한 다음 50ml의 무수 에테르로 처리한다. 생성된 혼합물을 0°에서 분 10간 냉각시킨 후 염을 수집하고 에테르로 세척한 후 건조시킨다. 염을 메탄올(이소프로판올 성염산 몇방울로 산성화한 것)-에테르로 재결정하고 충분히 건조시켜 5-아미노 2-메틸인돌 하이드로클로다이드 3.28g을 수득한다. 분해온도 : 280내지 189°(268°에서 흑화됨).

(다)23.75g의 5-아미노-2-메틸인돌 염산염, 28.94g의 나트륨 디시안아마이드(미리 메탄올로 재결정 시킴)와 800ml의 1-옥탄올로 된 혼합물을 환류하에 가열하고, 용매 약 100ml룰 무수 조건이 되도록 약 196°에서 증류시킨후 이 혼합물을 21시간동안 교반하면서 환류시킨다. 뜨거운 반응혼합물을 여과하고 불용성물질을 끓는 1-옥탄올로 세척한다. 옥탄올 분획물을 합하고 약 25°로 냉각한 다음 과량이 이소프로판올성염산으로 산성화시키고 약 2ℓ의 무수 에테르로 희석한다. 약 1.5시간동안 방치한 후 고체를 수집하고, 무수 에테르로 세척한 후 약 100ml의 냉각한 메탄올로 2회 처리하고 에테르로 세척한 다음 건조시킨다. 조 하이드로클로라이드를 물(400ml), 염산(50ml)에 용해시키고 여과한 다음 산용액을 에테르로 세척하고 냉각시킨 후 과량의 수산화나트륨 용액을 가해 염기성으로 한다. 황갈색 고체를 염기성 용액에서 분리하고 수집한 후 물로 세척하고 건조시킨 다음 메탄올로 재결정시켜 담황색 고체 11.68g을 수득한다. 이 디아민중 4.08g을 메탄올로 재결정시켜 표제화합물 3.67g을 수득한다. 분해 : 324내지 327°

NMR(d DMSO) : δ2.48(s,8-CH₃), 6.88(s, 9H), 7.15(d, J=9Hz, 5 또는 6H), 7.68(d, J=9Hz, 5 또는 6H), 11.38(브로드 S, 교환됨) ppm.

원소분석 : C₁₁H₁₁N₅

계산치 : C 61.95, H 5.20, N 32.85

실측치 : 61.72, 5.11, 32.86

[실시예 4]

8-클로로-7-(페닐메틸)-7H-피롤로[3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민

(가)다음 문헌에 기술된 방법으로 6.66g의 옥신돌을 25ml의 농황산내에서 21.ml의 발연황산으로 니트로화시킨다.

[참조 : W.C.Sumpter등의 J. Amer. chem. soc. 67,499(1945)].

조생성물을 50%아세트산 및 메탄올로 결정화시켜 3.85g의 5-니트로옥신돌을 수득한다. 융점 : 240내지 242°

(sumpter 등은 이의 융점이 240내지 241°라고 보고 하였다)

(나)피롤리딘(600g) 및 5-니트로옥신돌(110.0g)을 1.5시간동안 환류시키고 흑색용액을 약 25°에서 철야 방치한다. 분리된 황색결정을 수집하고 에테르로 세척한다음 건조시켜 143g의 고체를 얻는다. 이중 20g을 메탄올로 재결정시켜 1-[(2-아미노-5-니트로페닐)아세틸]피롤리딘을 수득한다. 융점 : 210내지 211°

(다)벤조알데히드(51.15g) 및 10.0g의 1-[(2-아미노-5-니트로페닐)아세틸]피롤리딘을 합하고 짧은 증류컬럼하에서 10분간 가열한다. 이동안 증류온도를 100내지 176°로 올리고 증류물 15ml쯤 수집한 다음 반응혼합물을 냉각시키고 700ml의 무수 에테르에 부은후 냉각시킨다. 분리된 고체를 메탄올로 재결정 시켜 9.70g의 1-[[5-니트로-2-[(페닐메틸렌)]아미노]페닐]아세틸 피롤리딘을 수득한다. 융점 170내지 171°

(라)16.0g의 1-[[5-니트로-2-[(페닐메틸렌)아미노]페닐]아세틸]피롤리딘을 400ml의 뜨거운 메탄올에 녹인 용액을 질소기류하에 교반하고 16.0g의 수소화나트륨을 환류를 계속하면서 약 20분간에 걸쳐 소량씩 가한다. 이 반응혼합물을 20분간 계속하여 환류시킨다음 동량의 물로 희석한다. 황색침전이 형성된 후 고체를 수집하고 건조시킨 다음 메탄올로 재결정하고 건조시켜 1-[[5-니트로-2-(페닐메틸)아미노페닐]아세틸]피롤리딘 13.2g을 아미노 아마이드 1분자당 물 1/8분자를 갖는 수화물로서 수득한다. 융점 : 128내지 129°

원소분석치 : C₁₈H₂₁N₃O₃·O.125H₂O

계산치 : C 66.79, H 6.27, N 12.30

실측치 : 66.72, 6.36, 12.29

(마)아세트산(2.5ℓ), N-염산(500ml), 1-[[5-니트로-2-[페닐메틸)아미노]페닐]아세틸]피롤리딘 90.0g을 3시간동안 환류시키고 반응물질을 진공상태에서 약 0.5ℓ의 용적으로 농축시킨다음 냉각시킨다. 황색고체를 수집하고 건조시켜 67.3g의 고체를 얻는다. 융점 : 137내지 138°

이중 5.0g을 메탄올로 재결정시키고 건조시켜 1-벤질-5-니트로옥신돌 3.50g을 수득한다.

NMR(dDMSO) : δ3.83(2개의 수소 s, 3H, 3H), 4.92(2개의 s, -N-CH₂), 7.10(α, J=9Hz, 7H), 7.33(5개의 수소 s, 페닐기 수소), 8.17(2개의 수소 s, 4 및 6개의 수소) ppm.

(바)포스포러스 옥시클로라이드(100ml), 5ml의 피리딘 및 10.0g의 벤질-5-니트로옥신돌을 3시간 환류시키고 반응물을 진공하에 농축시켜 0.5ℓ의 검상물질로 만든 후 이를 500㎖의 클로로포름에 녹이고 0.5ℓ의 중탄산나트륨 포화수용액과 함께 4시간 교반한다. 탄산칼륨을 가하여 pH9로 조절하고 1시간 교반한다. 유기상을 분리하고 염수로 세척한 후 황산마그네슘상에서 탈수시키고 중성의 활성도 Ⅲ알루미나컬럼(500g)을 통과시킨다. 클로로포름 유출물로부터 용매를 제거하여 고체를 얻고 이를 건조시켜 9.1g의 1-벤질-2-클로로-5-니트로인들을 수득한다. 융점 : 106내지 107°

NMR(CDCl₃) δ5.40(두개의 수소 s, -N-CH₂), 6.68(s, 3H), 6.98내지 7.36(6개의 수소 다중선; 페닐기 수소 및 7H), 8.00(이중선의 이중선, J=9Hz, J=2Hz, 6H), 8.42(d, J=2Hz, 4)ppm.

(사)25.7g의 1-벤질-2-클로로-5-니트로 옥신돌을 600ml의 메탄올과 180ml의 톨루엔에 녹여 환류 및 교반시킨 용액을 시판용 NaSH (XH₂O) 45g을 320ml의 메탄올에 녹인 용액으로 10분에 걸쳐 처리하고 계속하여 환류시킨다. 30분 및 1시간 간격으로 NaSH(XH₂O)을 메탄올에 녹인 용액을 정확히 반복하여 가하고 반응혼합물을 2.5시간동안 이상으로 환류시킨다. 여과한 다음, 유기용액에서 용매를 제거하고 잔사를 물로 충분히 세척한 후 건조시킨다. 얻은 고체(19.7g)을 200ml의 아세톤에 용해시키고 용액을 과량의 이소프로판올염성산으로 산성화시킨 후 1ℓ의 무수 에테르로 희석한다. 형성되는 검상물질을 경사시켜 분리하고 아세톤으로 충분히 세척한 다음 건조시켜 5-아미노-1-벤질-2-클로로인돌 하이로클로라이드 16.1g을 수득한다. 융점 : 228°(분해)

원소분석치 : C₁₅H₁₃Cl N₂·HCl

계산치 : C 61.44, H 4.81, Cl 24.19, N 9.56

실측치 : 61.16, 4.17, 23.78, 9.42

(아)14.65g의 5-아미노-1-벤질-2-클로로인돌 하이드로 클로라이드, 11.14g의 나트륨 디시안아마이드(메탄올로 미리 재결정시킴)과 300ml의 1-옥탄올로 된 혼합물을 3시간동안 환류시킨다음 실온에서 철야 방치한다. 고체(A)을 여과하여 분리하고 200ml의 뜨거운 메탄올 및 400ml의 물과 혼합한 후 이를 여과하여 고체를 얻고 이를 에테르로 세체한다. 융점 : 280내지 283°

고체 A를 제거하여 얻은 옥탄올 여액을 700ml위 무수 에테르로 회석하고 과량의 이소프로판올성 염산으로 산성화시킨다. 형성된 염을 메탄올로 재결정시키고 메탄올(50ml)-N-수산화나트륨(100ml)과 함께 교반한다. 조 디아민을 수집하고 물로 세척한 다음 건조시키면 280내지 283°에서 응용한다. 280내지 283°에서 녹는 고체를 합하고 디메틸포름아마이드로 재결정시킨 후 메탄올로 세척하고 충분히 건조시켜 표제화합물 4.26g을 수득한다. 융점 : 285내지 286°

원소분석치 : C₁₇H₁₄Cl N₅

계산치 : C 63.06, H 4.36, Cl 10.95, N 21.62

실측치 : 62.89, 4.34, 10.84, 21.58

[실시예 5]

8-페닐-7H-피롤로[3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민

(가)다음 문헌에 기술된 방법으로, 2-페닐인돌 [미리톨루엔에서 재결정하고 무수 에테르에 용해시킨후 목탄으로 처리하고 여과한 다음 용매를 제기하여 정제시킴, 융점 : 184내지 186°(연화점 : 186°)].]9.66g을 200ml의 농환산에 녹인 용액을 4.67g의 질산나트륨을 100ml의 농황산에 녹인 용액으로 니트로화시킨다[참조 : W.E. Noland 등의 J.Org. chem. 31,65(1966)]. 조생성물을 메탄올로 재결정시켜 8.28g의 5-니트로-2-페닐인돌을 수득한다. 융점 : 192내지 194°(노란드등은 융점이 201내지 203°라고 보고하였음)

(나)5-니트로-2-페닐인돌 7.86g과 무수 에탄올 100ml 및 10g (습윤상태중량)의 그래이스 라니니켈(미리물과 무수 에탄올로 세척함)의 혼합물을 약 3기압하에 27°하에 파로 기구중에서 수소화시킨다. 3시간내에 수소흡입을 중지시킨 후 약 300ml의 메틸렌클로라이드로 희석하고 셀라이트상을 통과시킨다. 불용성물질을 메틸렌클로라이드 및 끓는 에탄올로 세척한다. 합한 유기용액에서 용매를 제거하여 5-아미노-2-페닐인돌 6.51g을 수득한다. 융점; 227내지 229°(연화점 : 217°)

(노란드등은 유사한 방법으로 이 아민을 제조하여 융점이 234내지 235°라고 보고하였다)

6.42g의 5-아미노-2-페닐인돌을 125ml의 메탄올에 녹인 용액에 과량의 이소프로판올성 염산을 가하고 700ml의 무수 에테르로 희석한 후 냉각시킨다. 형성된 염을 수집하고 메탄올(이소프로판올성 염산수적을 가해 산성화 한 것임)-에테르로 재결정시킨 후 건조시켜 4.98g의 아민 하이드로클로로라이드를 수득한다. 이중 1.1g을 동일한 방법으로 재결정하여 0.82g의 5-아미노-2-페닐인돌 하이드로클로라이드를 수득한다. 융점 : 314내지 318°(분해, 연화점 : 28°)

원소분석치 : C₁₄H₁₂N₂·HCl

계산치 : C 68.71, H 5.35, Cl 14.49, N 11.45

실측치 : 68.48, 5.32, 14.50, 11.49

22.26g의 나트륨 디시안아마이드(미리 메탄올로 재결정시킴)과 24.47g의 5-아미노-2-페닐인돌 하이드로클로라이드 및 700ml의 1-옥탄올을 환류하에 교반하면서 가열하고, 용매 100ml를 증류시켜 무수조건으로 만들고 3시간동안 계속 환류시킨다. 뜨거운 반응혼합물을 여과하고 불용성물질을 끓는 1-옥탄올로 세척한다. 합한 옥탄올 분획물을 냉각시킨 후 25ml의 농염산으로 처리하고 3ℓ 아세톤으로 희석한다. 약 30분간 방치한 후 분리된 염산염을 수집하고 아세톤으로 세척한 후 건조시킨다. 이 염을 약 800ml의 끓는 물에 녹인 용액을 여과하고 냉각시킨 다음 수산화나트륨 수용액으로 염기성화시킨다. 형성된 갈색의 염기를 충분히 물로 세척하고 건조시킨후 메탄올로 결정화시켜 14.98g의 디아민을 수득한다. 융점 : 322내지 323°(분해, 연화점 : 320°)

원소분석치 : C₁₆H₁₃N₅

계산치 : C 69.80, H 4.76, N 25.44

실측치 : 69.85, 4.61, 25.51

[실시예 6]

8,9,10,11-테트라하이드로-7H-피리미도[4,5-c]카바졸-1,3-디아민

(가)91.88g의 (4-니트로페닐)히드라진을 1ℓ의 끓는 무수 에탄올에 녹인 용액에 58.88g의 사이클로헥사논과 0.34ml의 빙초산을 차례로 가한다. 짙은 적갈색용액을 1시간동안 교반한 다음 충분히 냉각시킨다. 분리된 고체를 수집하고, 냉각시킨 메탄올로 세척한 다음 건조시켜 사이클로헥사논의 4-니트로페닐 하이드라존 결정 102g을 수득한다. (융점 : 143내지 146°). 합한 에탄올-메탄올 용액에서 용매를 제거하여 악간의 검상고체를 얻고 이를 메틸렌클로라이드로 재결정시키고 헥산으로 세척한 후 건조시켜 하이드라존 20.8g을 추가로 수득한다. 융점 : 138내지 141°(연화점 : 133°)

[W.Borsche, A.Witte 및 W.Bothe는 C.Ann., 359, 49(1908); C.A. 2, 17163(1908)에서 이 화합물의 융점이 146내지 147°라고 보고하였다]

(나)상기 히드라존(122.6g)을 1.5ℓ의 농염산에 조심스럽게 가열한다. 심한 거품이 일어나며 환류될 때 수분내에 갈색고체가 분리되기 시작한다. 이 혼합물을 1시간동안 환류시키고 냉각한 다음 고체를 수집하고 물로 세척한 후 건조시킨다. 조생성물을 메탄올로 재결정시키고 건조시켜 6-니트로-1,2,3,4-테트라하이드로카바졸 92.1g을 수득한다. 융점 : 171.5내지 173.0°(연화점 : 169°)

[D.S. Deorha 및 S.S. Joshi는 J. Org. Chem. 26, 3527(1961)에서 융점이 177°라고 보고하였다]

(다)43.25g의 6-니트로-1,2,3,4-테트라하이드로카바졸을 750ml의 무수 에탄올에 녹인 용액을 실시예 98에 기술된 방법으로 그레이스번호 28라니니켈 50g(습윤상태 중량)으로 수소화시켜 36.1g의 연분홍색 고체를 얻는다. 이 아민과 동일한 실험으로 제조한 물질 26.7g을 합하고 톨루엔으로 재결정시켜 55.95g의 6-아미노-1,2,3,4-테트라하이드로카바졸을 수득한다. 융점 : 146내지 150°[R.T. Brinton 등은 J. Chem. Soc. 1956, 4783에서-6니트로-1,2,3,4-테트라하이드로카바졸을 라니니켈-히드라진으로 환원시켜 삼환성 아민을 제조하며 융점이 151내지 152°라 보고한 바 있다]

상기 아민(55.80g)을 300ml의 메탄올에 녹인 용액을 과량의 이소프판올성염산으로 산성화하고 용액을 2.6ℓ의 무수에테르로 희석한 다음 냉각시킨다. 이 염을 수집하고 에테르로 세척한후 건조시켜 6-아미노-1,2,3,4-테트라하이드로카바졸하이드로클로라이드 61.82g을 수득한다. 융점 : 285내지 288°(분해)

(라)나트륨디시안아마이드 71.23g(미리 메탄올로 재결정시킴), 71.27g의 6-아미노-1,2,3,4-테트라하이드로카바졸 하이드로클로라이드와 2ℓ의 1-옥탄올 환류하에 가열하고, 용매 230ml를 증류시켜 무수조건으로 만들고 21시간동안 계속하여 환류시킨다. 뜨거운 반응혼합물을 여과하고 불용성물질을 뜨거운 1-옥탄올로 세척한다. 합한 옥탄올 분획물을 냉각시킨 후 과량의 이소프로판을 성염산으로 산성화시키고 2.6ℓ의 무수 에테르로 희석한 후 냉각시킨다. 겨자색를 띤 침전물을 수집하고 건조시킨 다음 400ml의 찬 메탄올(이소프로판올 성염산수적을 가해 산성으로 만든 것)로 조금씩 2회 처리하고 에테르로 세척한 다음 건조시킨다. 담황색 하이드로클로라이드를 1.5ℓ의 물에 현탁시킨 현탁액을 과량의 수산화나트륨수용액으로 처리하고 이 혼합물을 액 1시간동안 격렬히 교반한다. 이 염기를 수집하고 물로 세척한 후 건조시키고 메탄올을 재결정시켜 24.66g의 담황색 디아민을 수득한다. 융점 : 300내지 303°(연화점 : 297°)

염기 7.00g을 메탄올로 재결정시키고 건조시켜 표제화합물 6.17g을 수득한다. 융점 : 303내지 306°(연화점 : 285°)

NMR(d DMSO); δ1.67-1.97(4개의 수소, 다중선, -CH₂CH₂CH₂CH₂), 2.63-3.17(4개의 수소, 다중선, -CH₂CH₂CH₂CH₂-), 6.92(d, J=9Hz, 5 또는 6H), 7.50(d, J=9Hz, 5 또는 6H), 11.07(브로드 s, 교환됨, 7 H)ppm.

원소분석치 : C₁₄H₁₅N₅

계산치 : C 66.38, H 5.97, N 27.65

실측치 : 66.33, 5.94, 27.46

[실시예 7]

시험관 내에서 세균의 성장을 저해하는 구조식(Ⅰ)화합물의 작용은 다음과 같은 시험방법으로 시현할 수 있다.

농도가 2500㎍/ml인 시험화합물 원액 또는 현탁액을 수산화나트륨수용, 액락트산수용액, 메틸셀루로즈, 디메틸설폭사이드, 디메틸아세트아마이드, 에틸렌글리콜, 디메틸포름아마이드, 포름아마이드, 프로필렌글리콜, 아세톤 또는 메탄올 같은 적당한 용매나 매질을 사용하여 제조한다. 시험물질 용액이나 현탁액에 적당한 양의 멸균수를 가하여 2배로 희석한다. 각각의 희석액 1ml를, 페트리접시에 담은 용혈된 말의 피(용적 9ml)를 5% 함유한 시드 한천배지나 웰스트민감성 시험 한천배지에 넣어 시험화합물을 각기 다른 농도로 함유시킨 플레이트를 만든다. 각각의 플레이트의 경화된 표면에 시험미생물을 접종하고 35°에서 18시간동안 배양시킨다. 시험된 화합물의 시험관내 항균 활성도는 최소억제농도(MIC)로 표시하며 이 최소억제농도는 시험균을 완전히 저해하는 최소한의 물질의 량(㎍/ml)이다.

본 발명에 따른 화합물들이 시험관내 항균 활성도는 다음 표 Ⅰ-Ⅳ에 나타나 있는데 전술한 방법으로 시험할 때의 여러화합물의 최소억제농도 값(MIC)도 기술되어 있다.

[표 1]

(a)성장배지; B=용혈된 말의 피를 5% 함유하는 웰코스트 민감성 시험 한천배지

(b)이 화합물은 유리디아민으로서 시험한다.

[표 2]

a : 성장배지 : A=용혈된 말의 피를 5% 함유시킨 시드한천배지

b : 이 화합물은 하이드로클로라이드염으로서 시험한다.

[표 3]

a : 성장배지 : B=용혈된 말의 피를 5% 함유시킨 웰코스트 민감성 시험한천배지

[표4]

a : 성장배지 : B=용혈된 말의 피를 5% 함유시킨 웰코스트 민감성 시험한천배지

[실시예 8]

본 발명 화합물을 설포메톡 사졸과 함께 균에 감염된 쥐에 투여할 때 항균작용을 상승시키는 효과를 다음과 같은 시험방법으로 입증할 수 있다.

시험제제를 평량하고 0.5%카복시메틸 셀루로즈 수용액에 현탁화시킨 후 유리로 된 조직 마쇄기에서 균질화하고 실험방법에 따라 희석한다. 생쥐(숫쥐, 18±1g, CD-1종족)를 미리 평량하고 세균을 5% 위점액에 녹인 표준화 현탁액 0.5ml (LD₉₅±56%)를 복강내 투여하여 생쥐에 감염시킨다음 시험제제를 단일용량으로 감염시킬 때 또는 감염시킨지 6시간후에 투여한다. 처치된 그룹은 투여군당 10마리의 쥐로 구성된다. 죽은 마를수를 14일간 날마다 기록하고 PD₅₀(생쥐를 감염시 처리하는 경우)와 CD₅₀(감염시킨지 6시간후에 처리하는 경우)값을 다음 문헌에 기술된 방법으로 계산한다[참조 : Rood와 Muench의 Amer J.Hyg., 27,493(1938)]

[표 5]

(a)이값(PD₅₀)은 생쥐를 감염시킨 후 즉시 처리할 때 생쥐의 반을 죽지 않게끔 하는 데에 필요한 투여용량

(b)이 값(CD₅₀)은 생쥐를 감염시킨 후 6시간이 경과된 다음 처리할 때 생쥐의 반을 죽지 않게끔 하는 데에 필요한 투여용량이다.

(c)이 값은 감염시킨 때와 생쥐를 처치한 때 사이의 시간수이다.

(d)설포메톡사졸

(e)이 화합물은 유리디아민으로서 시험한다.

[실시예 9]

구조식(Ⅰ)화합물의 항말라리아작용은 다음과 같이 기술된 시험방법으로 입증할 수 있다.

어린 ICH/HA 스위스생쥐 및 표준접종 균주 플라스모디움 베르게이 KBG173을 사용하여 6내지 8일내에 평균 생존기간이 6.2일이 되도록 하는 비처리된 동물 100%에 치명적으로 균일한 질병을 유발시킨다. 시험동물의 중량은 18내지 22g이나 실험군 또는 대조군에서의 중량 편차는 2내지 3g으로 제한된다. 모든 시험에 사용된 동물은 대략 비슷한 년령을 갖는다. 시험도중의 동물은 금속으로 된 플라스틱 우리에 가두고 표준적인 실험사료와 물을 임의로 투여한다.

플라스모디움 베르게이로 일주전에 감염시킨 급혈 생쥐에서 뽑아낸 최소한 90% 감염된 세포(4×10⁷개)로 희석시킨 헤파린을 가한 심장의 희석액(1 : 100)0.5ml를 시험동물에 복강내 투여한다. 급혈 균주(donor strain)는 헤파린을 가한 심장피 희석액(1 : 500)0.5ml로 생쥐에 일주일마다 접종시켜 유지한다.

시험 화합물은 땅콩기름에 녹이거나 현탁화시켜 투여한다. 생쥐를 플라스모디움 베르게이로 감염시킨후 72시간이 경과되었을 때 단일용량을 피하로 투여한다. 10내지 15%의 기생충혈증이 일어날 때 질병이 생길 것으로 할 수 있으나 시험도중에 약물의 독작용에 대해 숙주의 반응을 변화시킬 정도로 식약한 상태는 아니다. 처치는 감염이 될 때까지 3일간 보류하고 미처치군에서는 6내지 8일내에 죽는 것도 있기 때문에 이러한 시험개가 어떤 화합물의 최대작용능력을 알게 할 수 있는 것으로 사료된다. 플라스모디움 베르게이의 감염성 또는 숙주의 민감성의 변화같은 어떤 요인을 검사하거나 기술적 오차를 확인하기 위해, 생존기간을 일정하게 증가시키는 투여량의 피테라민으로 처치한 일단의 감염동물이 모든 실험에 양성대조군으로 사용된다.

각각의 실험에서 시험화합물은 각기 다른 투여량으로 투여한다. 활성이 큰 화합물의 경우 투여량을 증가시키면 통상 처치된 생쥐의 생존기간을 증가된다. 그러나, 만일 활성약물이 숙주에 독성을 나타내면, 이의 독성은 제한인자가 될 수 있으며 투여량을 증가시키면 독성작용은 증가되고 생존기간이 감소된다. 비처치군이 죽기 시작하는 경우 6일전에 죽는 것들은 기생병원충에 의한 것이 아닌 것으로 간주되므로 독성 평가의 기준이 된다. 처치된 동물은 60일간 관찰한다. 이 기간이 경과할 때까지 살아 남은 것들은 치료된 것으로 간주한다. 평균 생존기간을 계산함에서 독성으로 인해 죽은 것과 60일간 생존된 것은 포함되지 않았다.

적어도 하나의 시험동물군에 대해 치료를 나타내거나, 비처치 대조군의 평균 생존시간과 비교하여 처치 동물군의 평균 생존기간을 상당히 증가된 경우 화합물은 활성인 것으로 간주하며, 단 약물에 의해 죽은 것들(독성)은 활성투여용량에서 주사하지 않는다.

본 발명에 따른 화합물의 항말라리아 시험결과는 다음표(Ⅵ) 및 (Ⅶ)에 기술하였다.

[표 6]

(a)어떠한 이유이든 죽지않게 하는 최대 투여용량이다.

(b)투여량 란에 나타난 투여랑으로 처치할 때 비처리군에 비해 처치동물군에 증가된 평균 생존 기간을 나타낸다.

(c)이 화합물은 실시예 2에 기술한 일초산염으로 시험한다.

(d)이것은 시험된 최소 투여용량이다.

[표 7]

생쥐에 플라스모디움 베르게이 KBG(73으로 유발시킨 말라리아에 대한 7,80치환된-7H-피클로[3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민의 완성(모든 투여량은 mg/kg으로 피하로 투여됨)

(a)이것은 어떠한 이유에서이든 생쥐를 죽지 않게 하는 최대투여량이다.

(b)투여량란에 표시된 투여량으로 처치할 때 비처리 대조군에 대한 처치된 동물군의 증가된 평균생존 기간

[실시예 10]

7-(페닐메틸)-7H-피롤로[3,2-f]퀴나졸린-1,3-디아민(활성물질)을 0.5%카복시메틸셀루로즈에 녹인 용액으로 한 후 일정 투여용량 10mg/kg으로 하여 투여군당 10마리의 생쥐 그룹에 투여한다(Charles River COBS CD종의 알비노 숫생쥐, 중량 21.0내지 25.29g). 실험기간(14일)동안에 매일 모든 생쥐를 관찰한다. LD₅₀은 54.5mg/kg으로(95% 신뢰한계는 48.6내지 93.4)약물을 투여한지 4내지 5일내에 모두 죽게된다.

이 화합물은 복강내 주사한 후 1시간내에 모든 생쥐에 대해 호흡완서, 안검하수, 흡기의 신장 및 볼수 외적 운동작용을 감소시킨다. 그밖에, 약물 투여한 후 2일이 경과하면 털이 거칠어지고 변배성이 감소된다. 이러한 효과는 저용량으로 투여하는 동물군에는 14일나 지속된다. 14일간 생존한 모든 생쥐를 죽인다음 시체를 검사한다. 육안적으로, 조직은 정상인 것으로 나타난다.

Claims (1)

1. 다음 구조식 (X)화합물의 산부가염을 지방족 알콜 존재하에 185내지 210℃에서 알칼리 금속 디시안아마이드와 반응시킴을 특징으로 하여 다음 구조식(Ⅸ)의 화합물을 제조하는 방법.

   

   상기 구조식에서

   X는 수소, 메틸, 페닐 또는 염소이고

   Y¹은 수소 또는 -CH₂R(여기에서 R은 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, n-펜틸, n-헥실, 2-메틸-1-프로페닐, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 2-페닐에틸, 2-페닐비닐, 페닐 2-, 3-또는 4-위치에서 염소, 브롬, 요드, 불소, 트리플루오로메틸, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, 3급-부틸, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 트리플루오로메톡시, 시아노, 메틸설포닐, 아세틸, 프로피오닐, 메틸티오, 에틸티오, 카브에톡시, 카복실, 나트륨카복시 또는 칼륨카복시로 일치환된 페닐; 3-위치에서 니트로로 일치환 된페; 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4-또는 3,5-위치에서 메틸, 에틸, n-프로필, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 염소, 브롬, 요드 또는 불소로 이치환된 페닐; 2,4,6-또는 3,4,5-위치에서 메틸, 에틸, 메톡시 또는 에톡시로 삼치환된 페닐; 2,3,5,6-테트라메틸페닐, 3,4-(메틸렌디옥시)페닐, 1-나프탈레닐, 2-나프탈레닐, 2-메틸-1-나프탈레닐, 1-브로모-2-나프탈레닐, 2-피리디닐, 3-피리디닐, 4-피리디닐, 2-퀴놀리닐, 8-퀴놀리닐, 2-티에닐, 3-티에닐, 4-티아졸릴, 3,4-디메틸-5-이속사졸릴, 테트라하이드로-2-푸라닐, 또는 벤조[b]티엔-3-일이다)이며 단 X가 염소일 경우 Y¹는 -CH₂R이다.