KR20240117026A - Composition for improvement, treatment or prevention of muscular disorders, or improvement of muscular functions comprising melinjo leaf - Google Patents

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Abstract

본 발명은 멜린조(melinjo) 잎 분쇄물 또는 추출물과 같은 멜린조 잎을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 예방 및 치료용, 또는 근 기능 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎은 근 단백질 분해에 관여하는 MuRF-1과 atrogin-1의 mRNA 발현을 감소시키고, 근 단백질 합성에 관여하는 mTOR의 활성을 증가시키며, 근기능과 근육량을 증가시킴으로써 근감소증(sarcopenia), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 긴장감퇴증(atony), 근육 퇴화(muscle degeneration), 근무력증(myasthenia), 악액질(cachexia) 등 각종 근육 질환의 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 이용될 수 있다.The present invention relates to a composition for preventing and treating muscle disease, or improving muscle function, containing melinjo leaves, such as melinjo leaf powder or extract, as an active ingredient. Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract according to the present invention, reduce the mRNA expression of MuRF-1 and atrogin-1, which are involved in muscle protein degradation, and increase the activity of mTOR, which is involved in muscle protein synthesis. By increasing muscle function and muscle mass, it reduces sarcopenia, muscular atrophy, muscular dystrophy, atony, muscle degeneration, myasthenia, and cachexia. It can be useful in preventing, improving, or treating various muscle diseases.

Description

멜린조 잎을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 개선, 치료 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 조성물{Composition for improvement, treatment or prevention of muscular disorders, or improvement of muscular functions comprising melinjo leaf}Composition for improvement, treatment or prevention of muscular disorders, or improvement of muscular functions comprising melinjo leaf}

본 발명은 근육 질환 개선, 치료 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 멜린조 잎 분쇄물(melinjo leaf powder) 또는 멜린조 잎 추출물(melinjo leaf extract)과 같은 멜린조 잎을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 개선, 치료 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for improving, treating or preventing muscle disease, or for improving muscle function, and more specifically, to a composition for improving muscle disease, such as melinjo leaf powder or melinjo leaf extract. It relates to a composition for improving, treating or preventing muscle disease, or improving muscle function, containing leaves as an active ingredient.

근위축(Muscle atrophy)이란 근육량의 점진적 감소에 의하여 발생하는 것으로, 근육의 약화 및 퇴행을 일컫는다(Cell, 119(7): 907-910, 2004). 근 위축은 비활동, 산화적 스트레스, 만성 염증에 의해 촉진되며 근육 기능과 운동 능력을 약화시킨다(Clinical Nutrition, 26(5): 524-534, 2007). 근 기능을 결정짓는 가장 중요한 요소는 근육량이며, 이는 단백질 합성과 분해의 균형에 의해 유지된다. 근 위축증은 단백질 분해가 합성보다 더 일어날 때 발생한다(The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 37(10): 1985-1996, 2005).Muscle atrophy is caused by a gradual decrease in muscle mass and refers to muscle weakness and degeneration (Cell, 119(7): 907-910, 2004). Muscle atrophy is promoted by inactivity, oxidative stress, and chronic inflammation and weakens muscle function and exercise capacity (Clinical Nutrition, 26(5): 524-534, 2007). The most important factor determining muscle function is muscle mass, which is maintained by the balance of protein synthesis and breakdown. Muscular dystrophy occurs when protein degradation occurs more than synthesis (The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 37(10): 1985-1996, 2005).

근육 크기는 근육 내에서 일어나는 동화작용(anabolism)이나 이화작용(catabolism)을 유도하는 세포 내 신호전달 과정(signaling pathways)에 의해 조절된다. 근 단백질의 분해보다 합성을 유도하는 신호전달 반응이 많이 일어날 경우 근 단백질 합성이 증가되는데, 이는 근 단백질 증가에 따른 근육 크기 증가(hypertrophy)나 근섬유 수 증가(hyperplasia)로 나타난다(The Korea Journal of Sports Science, 20(3): 1551-1561, 2011).Muscle size is regulated by intracellular signaling pathways that induce anabolism or catabolism within the muscle. If more signaling reactions that induce synthesis rather than decomposition of muscle protein occur, muscle protein synthesis increases, which is manifested as an increase in muscle size (hypertrophy) or an increase in the number of muscle fibers (hyperplasia) due to an increase in muscle protein (The Korea Journal of Sports Science, 20(3): 1551-1561, 2011).

근 단백질 합성에 관여하는 인자들은 근 세포 내에서 phosphatidylinositol-3 kinase (PI3K)/Akt pathway의 자극을 기점으로 다운스트림 단백질(downstream proteins)을 인산화시킴으로써 단백질 합성을 유도한다. PI3K/Akt 신호전달에 의한 mammalian target of rapamycin (mTOR)의 활성은 세포 내에서 다양한 성장 신호를 통합하는 중심 성장 신호전달 인자로 인정되고 있다. mTOR는 mRNA translation을 개시하는 두 인자, 4E-binding protein (4EBP1)과 phosphorylated 70-kDa ribosomal S6 kinase (p70S6K)를 활성화시킴으로써 근 단백질 합성을 유도하여 근육량 증가에 기여한다(The Korea Journal of Sports Science, 20(3): 1551-1561, 2011; The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 43(9): 1267-1276, 2011). 반면에 전사 인자(transcription factor)인 forhead box (FoxO)가 세포질에서 핵 내로 이동하면 단백질 분해에 관여하는 E3 ubiquitin ligase인자 atrogin-1과 MuRF1의 발현을 증가시킨다(Disease Models and Mechanisms, 6: 25-39, 2013). 이들의 발현량이 증가하면 근육 내의 단백질 분해가 촉진되어 근육량이 줄어들게 된다. 따라서 mTOR의 활성 촉진과 atrogin-1과 MuRF1 발현 억제는 근육 단백질의 양을 증가시켜 근육량을 증가시킨다. Factors involved in muscle protein synthesis induce protein synthesis by phosphorylating downstream proteins starting from stimulation of the phosphatidylinositol-3 kinase (PI3K)/Akt pathway within muscle cells. Activation of mammalian target of rapamycin (mTOR) by PI3K/Akt signaling is recognized as a central growth signaling factor that integrates various growth signals within cells. mTOR induces muscle protein synthesis by activating two factors that initiate mRNA translation, 4E-binding protein (4EBP1) and phosphorylated 70-kDa ribosomal S6 kinase (p70S6K), thereby contributing to increased muscle mass (The Korea Journal of Sports Science, 20(3): 1551-1561, 2011; The International Journal of Biochemistry and Cell Biology, 43(9): 1267-1276, 2011). On the other hand, when the transcription factor forhead box (FoxO) moves from the cytoplasm into the nucleus, it increases the expression of atrogin-1 and MuRF1, E3 ubiquitin ligase factors involved in protein degradation (Disease Models and Mechanisms, 6: 25- 39, 2013). As their expression level increases, protein breakdown within the muscle is promoted, resulting in a decrease in muscle mass. Therefore, promoting the activity of mTOR and suppressing the expression of atrogin-1 and MuRF1 increases the amount of muscle protein and thus increases muscle mass.

근육세포의 분화와 근육 형성은 다양한 근육 조절 인자(muscle regulatory factors)에 의해 조절된다. 그 중, MyoD의 활성에 의한 myogenin 발현의 유도는 근원세포의 결합(fusion)에 가장 중요한 요소로, 근관세포(myotube)의 형성에 관여한다. 이와 같은 과정을 통해 형성된 근섬유는 다발을 이루어 최종적으로 근육을 형성하게 된다(Cellular and Molecular Life Sciences, 70: 4117-4130, 2013).Differentiation of muscle cells and muscle formation are regulated by various muscle regulatory factors. Among them, induction of myogenin expression by MyoD activity is the most important factor in the fusion of myogenic cells and is involved in the formation of myotube cells. Muscle fibers formed through this process form bundles and ultimately form muscles (Cellular and Molecular Life Sciences, 70: 4117-4130, 2013).

멜린조(Melinjo)는 네타과(Gnetaceae)에 속하는 식물로서 학명은 네툼 네몬(Gnetum gnemon Linn.)으로 알려져 있다. 멜린조는 태국, 말레이시아, 인도네시아, 피지 등이 주산지이며, 주로 잎과 씨앗이 식용으로 사용되고 있다. 지금까지 멜린조 잎과 관련하여 항산화, 항염증, 항균, 항암, 항고혈압, 항당뇨 등의 다양한 생리활성이 보고된 바 있다(Journal of Plant Biochemistry and Biotechnology 20(2): 234-24, 2011; International Journal of Pharmacognosy and Phytochemical Research 7(3): 531-539, 2015; Food Sci. Technol, Campinas, 42, e100121, 2022). Melinjo is a plant belonging to the Gnetaceae family and its scientific name is Gnetum gnemon Linn. Melinjo is mainly produced in Thailand, Malaysia, Indonesia, and Fiji, and its leaves and seeds are mainly used as food. So far, various physiological activities such as antioxidant, anti-inflammatory, antibacterial, anticancer, antihypertensive, and antidiabetic have been reported in relation to Melinjo leaves (Journal of Plant Biochemistry and Biotechnology 20(2): 234-24, 2011; International Journal of Pharmacognosy and Phytochemical Research 7(3): 531-539, 2015; Food Sci. Campinas, 42, e100121, 2022).

그러나, 본 발명의 이전에는 멜린조 잎의 근육 질환 예방 및 치료, 또는 근 기능 개선에 관해서는 알려진 바 없었다.However, prior to the present invention, nothing was known about the prevention and treatment of muscle disease or improvement of muscle function of Melinjo leaves.

이에 본 발명자들은 우수한 근 기능 조절 활성을 가지며 안전하게 적용될 수 있는 천연물질을 탐색한 결과, 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎이 근육 질환 개선, 치료 또는 예방용, 또는 근 기능 개선 활성이 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors searched for natural substances that have excellent muscle function regulating activity and can be safely applied, and as a result, Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract, were used to improve, treat, or prevent muscle diseases, or to improve muscle function. The present invention was completed by confirming that there was improvement activity.

따라서, 본 발명의 목적은 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다Therefore, the object of the present invention is to provide a food composition for improving or preventing muscle disease or improving muscle function containing Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract, as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적은 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for treating or preventing muscle disease containing Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract, as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적은 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for improving or preventing muscle disease, or improving muscle function, containing Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract, as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적은 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎을 유효성분으로 함유하는 유효성분으로 함유하는 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 사료 첨가제를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a feed additive for improving or preventing muscle disease or improving muscle function containing Melinjo leaves as an active ingredient, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract. will be.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 식품 조성물을 제공한다.To achieve the above object, the present invention provides a food composition for improving or preventing muscle disease, or improving muscle function, containing Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract, as an active ingredient.

또한, 본 발명은 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for treating or preventing muscle disease containing Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract, as an active ingredient.

또한, 본 발명은 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a cosmetic composition for improving or preventing muscle disease, or improving muscle function, containing Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract, as an active ingredient.

또한, 본 발명은 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 사료 첨가제를 제공한다.In addition, the present invention provides a feed additive for improving or preventing muscle disease, or improving muscle function, containing Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract, as an active ingredient.

또한, 본 발명은 인간, 또는 인간을 제외한 동물에게 상기 조성물을 투여하는 근육질환의 치료 방법을 제공한다.Additionally, the present invention provides a method of treating muscle disease by administering the composition to humans or non-human animals.

또한, 본 발명은 근육질환 치료용 의약 제조를 위한 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎의 신규 용도를 제공한다.In addition, the present invention provides new uses of Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract, for manufacturing medicines for treating muscle diseases.

본 발명에 따른 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎은 근 단백질 분해에 관여하는 MuRF1과 atrogin-1의 mRNA 발현을 억제시키고, 근 단백질 합성에 관여하는 mTOR의 활성을 증가시키는데 우수한 효과가 있다. 또한, 근기능과 근육량을 증가시킴으로써 각종 질병에 의하여 유발되는 근육의 기능 저하, 근육의 손실 등을 예방, 치료 또는 개선 할 수 있다. 본 발명은 천연물이므로 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있어 식품, 의약품, 화장품 또는 사료첨가제의 제조에 유용하게 사용될 수 있다.Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract according to the present invention, inhibit the mRNA expression of MuRF1 and atrogin-1, which are involved in muscle protein degradation, and increase the activity of mTOR, which is involved in muscle protein synthesis. It has excellent effects. Additionally, by increasing muscle function and muscle mass, it is possible to prevent, treat, or improve muscle function decline and muscle loss caused by various diseases. Since the present invention is a natural product, it can be used safely without side effects and can be usefully used in the production of food, medicine, cosmetics, or feed additives.

도 1은 C2C12 근육세포에서, 실시예 1의 멜린조 잎 열수 추출물 처리에 따른 MuRF1 및 atrogin-1의 mRNA 발현량 감소 효과를 확인한 결과이다.
도 2는 C2C12 근육세포에서, 실시예 1의 멜린조 잎 열수 추출물 처리에 따른 mTOR의 활성 증가 효과를 확인한 결과이다. 각 그래프는 평균값(means±SEM, n=3)을 나타낸다. **은 대조군과 비교하여 p<0.01에서 유의적 차이가 있음(Tukey's test)을 의미한다.
Figure 1 shows the results confirming the effect of reducing the mRNA expression levels of MuRF1 and atrogin-1 in C2C12 muscle cells following treatment with the Melinjo leaf hot water extract of Example 1.
Figure 2 shows the results confirming the effect of increasing mTOR activity in C2C12 muscle cells following treatment with the Melinjo leaf hot water extract of Example 1. Each graph represents the average value (means±SEM, n=3). ** means there is a significant difference at p<0.01 compared to the control group (Tukey's test).

이하, 본 발명의 구성을 구체적으로 설명한다.Hereinafter, the configuration of the present invention will be described in detail.

본 발명은 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎의 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 식품 조성물; 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎을 함유하는 근육 질환 치료 또는 예방용 약학 조성물; 또는 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎의 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 화장료 조성물; 또는 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎의 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 사료 첨가제; 또는 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎을 인간, 또는 인간을 제외한 포유동물에 적용하는 것을 함유하는 근육 질환의 치료 방법을 제공한다.The present invention provides a food composition for improving or preventing muscle disease of Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract, or for improving muscle function; Pharmaceutical compositions for treating or preventing muscle diseases containing Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract; Or a cosmetic composition for improving or preventing muscle disease of Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract, or for improving muscle function; or feed additives for improving or preventing muscle diseases of Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract, or for improving muscle function; or a method of treating muscle disease comprising applying Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract, to a human or non-human mammal.

본 명세서에서 '멜린조 잎'은 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물을 사용할 수 있다. 본 발명에 있어서, 상기 멜린조 잎은 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있다.In this specification, 'Melinjo leaf' can be used as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract. In the present invention, the Melinzo leaves can be purchased and used commercially, or those collected or cultivated in nature can be used.

본 명세서에서 '멜린조 잎 분쇄물'은 건조된 멜린조 잎을 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 인간을 포함한 포유동물이 용이하게 섭취할 수 있으면서 섭취 후 장에서 유효성분이 건조 분쇄물로부터 쉽게 유리되어 결과적으로 포유동물 체내로 용이하게 흡수될 수 있는 형태로 준비되어 사용될 수 있다. 이를 위한 건조 분쇄물 입자의 모양이나 크기는 제한되지 않으나, 입자의 표면이 극대화 될수록 상기에 기재한 유효성분의 유리가 용이하므로 가급적 고운 가루형태로 제조함이 바람직하다. 본 발명의 일실시예에서는 건조된 멜린조 잎을 믹서로 분쇄하여 분쇄물을 제조하였다.In the present specification, 'Pulverized Melinjo leaves' refers to dried Melinjo leaves that can be easily ingested by mammals, including humans, according to a method that can be easily performed by a person skilled in the art to which the present invention pertains. It can be prepared and used in a form in which the active ingredient is easily released from the dry powder in the intestine after ingestion and can be easily absorbed into the mammalian body. The shape or size of the dried pulverized particles for this purpose is not limited, but the more the surface of the particles is maximized, the easier it is to release the active ingredients described above, so it is preferable to prepare them in the form of fine powder as much as possible. In one embodiment of the present invention, dried Melinjo leaves were pulverized with a mixer to prepare a pulverized product.

본 명세서에서 '멜린조 잎 추출물'은 건조된 멜린조 잎을 적합한 용매를 사용하여 추출하여 수득한 것으로, 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들의 조정제물 또는 정제물의 형태를 모두 포함한다. In this specification, 'Melinjo leaf extract' is obtained by extracting dried Melinjo leaves using a suitable solvent, and is an extract, a diluted or concentrated solution of the extract, a dried product obtained by drying the extract, or a crude or purified product thereof. Includes all shapes.

구체적으로, 상기 멜린조 잎 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 유기용매, 아임계 유체 및 초임계 유체 중에서 선택된 하나 이상의 용매로 멜린조 잎을 추출하여 수득한 것일 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 6의 유기용매는 탄소수 1 내지 6의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌 클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 및 석유에테르(petroleum ether) 중에서 선택되는 1종 이상인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 멜린조 잎 추출물을 추출하기 위한 더욱 바람직한 용매는 물, 에탄올, 에틸아세테이트, 헥산, 아임계 유체 또는 초임계 유체이다.Specifically, the Melinjo leaf extract may be obtained by extracting Melinjo leaves with one or more solvents selected from water, an organic solvent having 1 to 6 carbon atoms, a subcritical fluid, and a supercritical fluid. The organic solvent having 1 to 6 carbon atoms is alcohol, acetone, ether, benzene, chloroform, ethyl acetate, and methylene chloride. It is preferable to use at least one selected from chloride, hexane, cyclohexane, and petroleum ether, but is not limited thereto. More preferred solvents for extracting the Melinjo leaf extract of the present invention are water, ethanol, ethyl acetate, hexane, subcritical fluid, or supercritical fluid.

본 발명의 구체적인 예시로서, 상기 멜린조 잎은 추출용매와 1 : 2 내지 20, 바람직하게는 1 : 5 내지 15, 더욱 바람직하게는 1 : 8 내지 12의 중량비로 혼합하여 추출물을 제조한 것일 수 있다. 상기 멜린조 잎과 추출용매의 중량비가 상기 범위를 벗어나는 경우에는 추출물에 멜린조 잎의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있다.As a specific example of the present invention, the extract may be prepared by mixing the Melinjo leaves with an extraction solvent at a weight ratio of 1:2 to 20, preferably 1:5 to 15, more preferably 1:8 to 12. there is. If the weight ratio of the Melinjo leaves and the extraction solvent is outside the above range, the active ingredient of the Melinjo leaves may be extracted in a small amount in the extract.

다른 구체적인 예시로서, 본 발명의 멜린조 잎 추출물은 멜린조 잎을 100 MPa 이상의 초고압 조건 하에서 추출하여 수득할 수도 있다. 필요한 경우에는 당업계에 공지된 방법에 따라 여과 및 농축 단계를 추가적으로 포함하여 제조할 수 있다.As another specific example, the Melinjo leaf extract of the present invention may be obtained by extracting Melinzoa leaves under ultra-high pressure conditions of 100 MPa or more. If necessary, it can be prepared by additionally including filtration and concentration steps according to methods known in the art.

상기 추출은 가열 추출법, 냉침 추출법, 환류냉각 추출법, 또는 초음파 추출법, 초고압 추출법, 아임계 유체 추출법 또는 초임계 유체 추출법 등에 의해 수행될 수 있으며, 당업자에게 자명한 추출법이라면 제한이 없다. 상기 추출은 실온에서 수행할 수도 있으나, 보다 효율적인 추출을 위해서는 가온 조건 하에서 수행할 수 있으며, 20 내지 100℃, 바람직하게는 약 30 내지 100℃의 온도에서 추출할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 추출시간은 1 내지 10 시간, 바람직하게는 2 내지 8 시간, 더욱 바람직하게는 3 내지 5 시간 동안 수행할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니며, 추출 용매 및 추출 온도 등의 조건에 따라 달라질 수 있다. 상기 추출은 활성성분을 보다 다량 수득하기 위해 1 회 이상 여러 번 추출할 수 있으며, 바람직하게는 1 내지 5회, 더욱 바람직하게는 2 내지 3회 반복 추출할 수 있다.The extraction may be performed by a heating extraction method, a cold needle extraction method, a reflux cooling extraction method, an ultrasonic extraction method, an ultra-high pressure extraction method, a subcritical fluid extraction method, or a supercritical fluid extraction method, and there is no limitation as long as it is an extraction method that is obvious to those skilled in the art. The extraction may be performed at room temperature, but for more efficient extraction, it may be performed under heated conditions, and extraction may be performed at a temperature of 20 to 100°C, preferably about 30 to 100°C, but is not limited thereto. The extraction time may be 1 to 10 hours, preferably 2 to 8 hours, and more preferably 3 to 5 hours, but is not limited thereto and may vary depending on conditions such as extraction solvent and extraction temperature. The extraction may be repeated one or more times to obtain a larger amount of the active ingredient, preferably 1 to 5 times, and more preferably 2 to 3 times.

상기 멜린조 잎 추출물은 멜린조 잎의 조추출물일 수 있고, 상기 조추출물을 제2의 용매로 재분획하여 얻어진 용매의 가용성 분획물일 수 있다. 상기의 방법으로 추출한 추출물 또는 그 추출물의 가용성 분획물을 그대로 사용할 수도 있으나, 여과 후 농축하여 엑기스 형태로 사용할 수 있으며, 농축 후 감압 증류, 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 형태로 제조하여 사용할 수 있다.The Melinjo leaf extract may be a crude extract of Melinjo leaves, or may be a solvent-soluble fraction obtained by refractionating the crude extract with a second solvent. The extract extracted by the above method or the soluble fraction of the extract can be used as is, but it can be used in the form of extract by filtering and concentrating, and after concentration, it can be prepared in powder form by additional processes such as reduced pressure distillation, freeze drying, or spray drying. You can use it.

본 명세서에서 '분획물'은 다양한 구성성분을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 그룹을 분리하는 분획 방법에 의하여 얻어진 결과물을 의미한다. 본 발명에서는 상기와 같이 제조된 멜린조 잎 추출물로부터 특정 성분 또는 특정 그룹을 분리하는 분획 방법에 의하여 얻어진 결과물을 의미한다.In this specification, 'fraction' refers to a result obtained by a fractionation method that separates a specific component or specific group from a mixture containing various components. In the present invention, it refers to the result obtained by a fractionation method for separating a specific component or specific group from the Melinjo leaf extract prepared as described above.

본 발명에 따른 멜린조 잎 분획물을 얻기 위하여 당업계에서 공지된 통상적인 분획 용매, 예를 들어, 물, 에탄올, 메탄올과 같은 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 저급 알코올 등의 극성 용매 및 헥산, 부탄올, 에틸아세테이트, 클로로포름, 디클로로메탄 등의 비극성 용매, 또는 이들의 혼합 용매가 사용될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In order to obtain the Melinjo leaf fraction according to the present invention, conventional fractionation solvents known in the art, such as water, polar solvents such as anhydrous or hydrous lower alcohols with 1 to 4 carbon atoms such as ethanol and methanol, and hexane and butanol , non-polar solvents such as ethyl acetate, chloroform, dichloromethane, or mixed solvents thereof may be used, but are not limited thereto.

본 발명의 멜린조 잎 분획물은 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 멜린조 잎 추출물을 일정한 분자량 컷-오프(cut-off) 값을 갖는 한외 여과막(ultrafiltration membrane)을 통과시켜 얻은 분획물, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등으로 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획물도 본 발명의 멜린조 잎 추출물에 포함된다.The Melinjo leaf fraction of the present invention may also include one obtained by additionally applying a purification process. For example, the fraction obtained by passing the Melinjo leaf extract according to the present invention through an ultrafiltration membrane with a certain molecular weight cut-off value, subjected to various chromatography (size, charge, hydrophobicity or affinity) Fractions obtained through various purification methods additionally performed, such as separation by (produced for separation according to the present invention), are also included in the Melinjo leaf extract of the present invention.

또한, 멜린조 잎 분쇄물이나 멜린조 잎 추출물에 인체에 적용이 가능한 미생물(박테리아, 효모 곰팡이 등)을 가하여 얻어진 발효 산물 혹은 발효 산물의 추출물도 멜린조 잎 추출물에 포함시킬 수 있다. In addition, fermentation products or extracts of fermentation products obtained by adding microorganisms (bacteria, yeast, mold, etc.) applicable to the human body to Melinjo leaf pulverization or Melinjo leaf extract can also be included in the Melinjo leaf extract.

본 명세서에서 '근'은 심줄, 근육, 건을 포괄적으로 지칭하고, '근 기능'은 근육의 수축에 의해 힘을 발휘하는 능력을 의미하며, 근육이 저항을 이겨내기 위하여 최대한으로 수축력을 발휘할 수 있는 능력인 근력, 근육이 주어진 중량에 얼마나 오랫동안 또는 얼마나 여러 번 수축과 이완을 반복할 수 있는지를 나타내는 능력인 근지구력, 단시간 내에 강한 힘을 발휘하는 능력인 순발력을 포함한다. 본 명세서의 용어 '근 기능 개선'은 근육량을 증가시켜 근 기능을 더 좋게 향상시키는 것을 말한다.In this specification, 'muscle' comprehensively refers to tendons, muscles, and tendons, and 'muscle function' refers to the ability to exert force through muscle contraction, and allows the muscle to exert maximum contractile force to overcome resistance. These include muscular strength, which is the ability to exert strength, muscular endurance, which is the ability to express how long or how many times a muscle can repeat contraction and relaxation with a given weight, and quickness, which is the ability to exert strong force in a short period of time. The term 'improvement of muscle function' in this specification refers to improving muscle function better by increasing muscle mass.

본 발명의 구체적인 실시예에 있어서, 본 발명자들은 멜린조 잎을 열수, 에탄올, 에틸아세테이트 또는 헥산을 용매로 하여 추출하거나, 초고압 추출, 아임계 유체 추출 또는 초임계 유체 추출을 이용하여 멜린조 잎 추출물을 제조하였다(실시예 1 내지 7).In a specific embodiment of the present invention, the present inventors extract Melinjo leaf extract using hot water, ethanol, ethyl acetate, or hexane as a solvent, or use ultra-high pressure extraction, subcritical fluid extraction, or supercritical fluid extraction. was prepared (Examples 1 to 7).

상기와 같이 제조된 멜린조 잎 추출물을 C2C12 근육세포에 처리한 결과, 근 단백질 분해에 관여하는 MuRF-1과 atrogin-1의 mRNA 발현을 유의적으로 억제시키는 것을 확인하였다(도 1, 표 1). 또한, 멜린조 잎 추출물을 C2C12 근육세포에 처리한 결과, 근 단백질 합성에 관여하는 mTOR의 활성이 유의적으로 증가되는 것을 확인하였다(도 2, 표 2). 피부 스테이플러(Skin stapler)를 이용한 부동화(immobilization) 근 위축 동물 모델을 이용하여 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물을 처리한 결과 근력과 근육 무게가 근위축군에 비하여 각각 유의적으로 증가하였다(표 3). As a result of treating C2C12 muscle cells with the Melinjo leaf extract prepared as above, it was confirmed that the mRNA expression of MuRF-1 and atrogin-1, which are involved in muscle protein degradation, was significantly suppressed (Figure 1, Table 1) . In addition, as a result of treating C2C12 muscle cells with Melinjo leaf extract, it was confirmed that the activity of mTOR, which is involved in muscle protein synthesis, was significantly increased (Figure 2, Table 2). As a result of treating Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract using an immobilization muscle atrophy animal model using a skin stapler, muscle strength and muscle weight each significantly increased compared to the muscle atrophy group (Table 3).

본 발명의 조성물이 근육 질환 개선 및 예방, 또는 근 기능 개선용 식품 조성물인 경우, 근육 소모 또는 퇴화로 인한 근육 질환의 예방 또는 개선에 사용될 수 있다. 근육 소모 및 퇴화는 유전적 요인, 후천적 요인, 노화 등을 원인으로 발생하며, 근육 소모는 근육량의 점진적 손실, 근육, 특히 골격근 또는 수의근 및 심장근육의 약화 및 퇴행을 특징으로 한다. 이와 관련된 질환의 예로는 근감소증(sarcopenia), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 긴장감퇴증(atony), 근육 퇴화(muscle degeneration), 근무력증(myasthenia), 악액질(cachexia) 등을 들 수 있다. 본 발명의 조성물은 근육량 증대 효과가 있으며, 근육은 그 종류를 제한하지 않는다. When the composition of the present invention is a food composition for improving and preventing muscle disease or improving muscle function, it can be used to prevent or improve muscle disease caused by muscle wasting or degeneration. Muscle wasting and degeneration occur due to genetic factors, acquired factors, aging, etc. Muscle wasting is characterized by gradual loss of muscle mass and weakness and degeneration of muscles, especially skeletal or voluntary muscles and cardiac muscles. Examples of diseases related to this include sarcopenia, muscular atrophy, muscular dystrophy, atony, muscle degeneration, myasthenia, cachexia, etc. You can. The composition of the present invention has the effect of increasing muscle mass, and the type of muscle is not limited.

본 명세서에서 '예방'은 상기 근육 질환을 억제시키거나 또는 지연시키는 모든 것을 의미한다. In this specification, 'prevention' means everything that suppresses or delays the muscle disease.

본 발명의 용어 '개선’이란, 본 발명의 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 것을 의미한다.The term 'improvement' of the present invention means at least reducing the degree of symptoms, for example, parameters related to the condition being treated by administration of a composition comprising Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract of the present invention.

본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food), 식품 첨가제(food additives), 사료 등의 모든 형태를 포함하며, 인간 또는 가축을 비롯한 동물을 취식대상으로 한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당 업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.The food composition of the present invention includes all forms of functional food, nutritional supplements, health food, food additives, feed, etc., and includes all forms of food such as functional food, nutritional supplement, health food, food additives, feed, etc., and can be used for human or animals including livestock. It is intended for consumption. Food compositions of this type can be prepared in various forms according to conventional methods known in the art.

예를 들면, 건강식품으로는 본 발명의 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물을 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용하도록 하거나, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. For example, as a health food, the pulverized Melinjo leaf or the Melinjo leaf extract of the present invention can be prepared and consumed in the form of tea, juice, and drink, or granulated, encapsulated, and powdered.

또한, 기능성 식품으로는 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지 콘비이프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게이트, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치이즈 등), 식용식물유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 본 발명의 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다.In addition, functional foods include beverages (including alcoholic beverages), fruits and their processed foods (e.g. canned fruit, bottled foods, jam, mamalade, etc.), fish, meat and their processed foods (e.g. ham, sausages, corned beef, etc.) etc.), bread and noodles (e.g. udon, buckwheat noodles, ramen, spagate, macaroni, etc.), fruit juice, various drinks, cookies, taffy, dairy products (e.g. butter, cheese, etc.), edible vegetable oil, margarine, vegetable oil It can be produced by adding the pulverized Melinjo leaf or extract of Melinjo leaf of the present invention to proteins, retort foods, frozen foods, various seasonings (e.g., soybean paste, soy sauce, sauce, etc.).

또한, 본 발명의 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물을 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다. Additionally, in order to use the crushed Melinjo leaf or extract of Melinjo leaf of the present invention in the form of a food additive, it can be prepared and used in the form of a powder or concentrate.

멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물은 근육 질환 개선 및 예방, 또는 근 기능 개선용 식품 조성물의 유효성분으로 함유될 수 있는데, 그 양은 근육 질환 개선 및 예방, 또는 근 기능 개선 작용을 달성하기에 유효한 양으로 특별히 한정되는 것은 아니나, 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량%인 것이 바람직하다. 본 발명의 식품 조성물은 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 함께 근육 질환 개선 및 예방, 또는 근 기능 개선에 효과가 있는 것으로 알려진 다른 활성 성분과 함께 혼합하여 제조될 수 있다.Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract may be contained as an active ingredient in a food composition for improving and preventing muscle disease or improving muscle function, and the amount is sufficient to achieve the effect of improving and preventing muscle disease or improving muscle function. The effective amount is not particularly limited, but is preferably 0.01 to 100% by weight based on the total weight of the entire composition. The food composition of the present invention can be prepared by mixing Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract with other active ingredients known to be effective in improving and preventing muscle disease or improving muscle function.

또한, 본 발명의 조성물이 근육 질환 치료 또는 예방용 약학 조성물인 경우, 근육 소모 또는 퇴화로 인한 근육 질환의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다. 근육 소모 및 퇴화는 유전적 요인, 후천적 요인, 노화 등을 원인으로 발생하며, 근육 소모는 근육량의 점진적 손실, 근육, 특히 골격근 또는 수의근 및 심장근육의 약화 및 퇴행을 특징으로 한다. 이와 관련된 질환의 예로는 근감소증, 근위축증, 근이영양증, 긴장감퇴증, 근육 퇴화, 근무력증, 악액질 등을 들 수 있다. 본 발명의 조성물은 근육량 증대 효과가 있으며, 근육은 그 종류를 제한하지 않는다.Additionally, when the composition of the present invention is a pharmaceutical composition for treating or preventing muscle disease, it can be used to prevent or treat muscle disease caused by muscle wasting or degeneration. Muscle wasting and degeneration occur due to genetic factors, acquired factors, aging, etc. Muscle wasting is characterized by gradual loss of muscle mass and weakness and degeneration of muscles, especially skeletal or voluntary muscles and cardiac muscles. Examples of diseases related to this include sarcopenia, muscular dystrophy, muscular dystrophy, tension dystrophy, muscle degeneration, myasthenia gravis, and cachexia. The composition of the present invention has the effect of increasing muscle mass, and the type of muscle is not limited.

본 명세서에서 '예방'은 상기 근육 질환을 억제시키거나 또는 지연시키는 모든 것을 의미한다.As used herein, 'prevention' means anything that suppresses or delays the muscle disease.

본 명세서에서 '치료'는 상기 근육 질환의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미한다. As used herein, ‘treatment’ means reversing, alleviating, inhibiting the progression of, or preventing the symptoms of the muscle disease.

본 발명에 따른 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물은 근육 질환 치료 또는 예방을 목적으로 그 자체 또는 약학적으로 허용 가능한 형태로 사용될 수 있다. 상기에서 '약학적으로 허용 가능한'이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 활성성분의 작용을 저해하지 않으며 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 비독성의 조성물을 말한다.Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract according to the present invention can be used as such or in a pharmaceutically acceptable form for the purpose of treating or preventing muscle diseases. In the above, 'pharmaceutically acceptable' means a non-toxic composition that is physiologically acceptable and does not inhibit the action of the active ingredient when administered to humans and does not usually cause gastrointestinal disorders, allergic reactions such as dizziness, or similar reactions. says

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양의 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 상기에서 '약학적으로 유효한 양'이란 음성 대조군에 비해 그 이상의 반응을 나타내는 양을 말하며 바람직하게는 근육 질환 치료 또는 예방에 충분한 양을 말한다. The pharmaceutical composition of the present invention may contain a pharmaceutically effective amount of Melinjo leaf powder or Melinzoa leaf extract alone or may include one or more pharmaceutically acceptable carriers. In the above, 'pharmaceutically effective amount' refers to an amount that shows a greater response than the negative control, and preferably refers to an amount sufficient to treat or prevent muscle disease.

본 발명의 약학적 조성물에 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물이 0.01 내지 99.99 중량% 포함될 수 있으며, 잔량은 약학적으로 허용가능한 담체가 차지할 수 있다. The pharmaceutical composition of the present invention may contain 0.01 to 99.99% by weight of Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract, and the remaining amount may be accounted for by a pharmaceutically acceptable carrier.

상기 담체로는 모든 종류의 용매, 분산매질, 수중유 또는 유중수 에멀젼, 수성 조성물, 리포좀, 마이크로비드 및 마이크로좀이 포함된다. 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).The carrier includes all types of solvents, dispersion media, oil-in-water or water-in-oil emulsions, aqueous compositions, liposomes, microbeads and microsomes. As pharmaceutically acceptable carriers, those described in the following literature may be referred to (Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).

한편, 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여 경로로는 이에 한정되지는 않으나 경구적 또는 비경구적으로 투여될 수 있다. 비경구적 투여 경로로는 예를 들면, 경피, 비강, 복강, 근육, 피하 또는 정맥 등의 여러 경로가 포함된다.Meanwhile, the route of administration of the pharmaceutical composition according to the present invention is not limited thereto, but may be administered orally or parenterally. Parenteral routes of administration include several routes, such as transdermal, intranasal, intraperitoneal, intramuscular, subcutaneous, or intravenous.

또한, 본 발명의 약학적 조성물은 근육 질환 치료 또는 예방에 효과가 있다고 알려진 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.Additionally, the pharmaceutical composition of the present invention can be administered in combination with known compounds known to be effective in treating or preventing muscle diseases.

또한, 본 발명의 근육 질환 개선 및 예방, 또는 근 기능 개선용 조성물은 화장료 조성물일 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물을 유효성분으로 함유하며, 피부학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 기초 화장품 조성물(화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 보디오일), 색조 화장품 조성물(화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 제품 조성물(샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤), 비누 등의 형태로 제조될 수 있다.Additionally, the composition for improving and preventing muscle disease or improving muscle function of the present invention may be a cosmetic composition. The cosmetic composition of the present invention contains Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract as an active ingredient, and is used as a basic cosmetic composition (face wash such as lotion, cream, essence, cleansing foam, and cleansing water) along with dermatologically acceptable excipients. It can be manufactured in the form of color cosmetic compositions (foundation, lipstick, mascara, makeup base), hair product compositions (shampoo, rinse, hair conditioner, hair gel), soap, etc.

상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다. The excipients are not limited thereto, but may include, for example, skin emollients, skin penetration enhancers, colorants, fragrances, emulsifiers, thickeners, and solvents. In addition, it may additionally contain fragrances, pigments, disinfectants, antioxidants, preservatives, moisturizers, etc., and may include thickeners, inorganic salts, synthetic polymer materials, etc. for the purpose of improving physical properties.

본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 멜린조 잎 분쇄물과 멜린조 잎 추출물의 함량은 이에 한정되지 않지만 전체 조성물 총중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%인 것이 바람직하고, 0.01 내지 5 중량%인 것이 더욱 바람직하다. 상기 함량이 0.001중량% 미만에서는 목적하는 효과를 기대할 수 없고, 10중량% 초과에서는 안전성 또는 제형상의 제조에 어려움이 있을 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 함께 근육 질환 개선 및 예방, 또는 근 기능 개선에 효과가 있는 것으로 알려진 다른 활성 성분과 함께 혼합하여 제조될 수 있다.The content of Melinjo leaf powder and Melinjo leaf extract contained in the cosmetic composition of the present invention is not limited thereto, but is preferably 0.001 to 10% by weight, more preferably 0.01 to 5% by weight, based on the total weight of the entire composition. . If the content is less than 0.001% by weight, the desired effect cannot be expected, and if the content is more than 10% by weight, there may be difficulties in safety or formulation manufacturing. The cosmetic composition of the present invention can be prepared by mixing Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract with other active ingredients known to be effective in improving and preventing muscle disease or improving muscle function.

또한, 본 발명의 조성물이 근육 질환 개선 및 예방, 또는 근 기능 개선용 사료 첨가제인 경우, 동물의 근육 소모 또는 퇴화로 인한 근육 질환의 예방 또는 개선에 사용될 수 있다.Additionally, when the composition of the present invention is a feed additive for improving and preventing muscle disease or improving muscle function, it can be used to prevent or improve muscle disease caused by muscle wasting or degeneration in animals.

본 명세서에서 '사료 첨가제'는 영양소 보충 및 체중감소 예방, 사료 내 섬유소의 소화 이용성 증진, 유질개선, 번식장애 예방 및 수태율 향상, 하절기 고온 스트레스 예방 등 다양한 효과를 목적으로 사료에 첨가하는 물질을 포함한다. 본 발명의 사료 첨가제는 사료 관리법상의 보조 사료에 해당하며, 탄산수소나트륨, 벤토나이트(bentonite), 산화마그네슘, 복합광물질 등의 광물질제제, 아연, 구리, 코발트, 셀레늄 등의 미량 광물질인 미네랄제제, 케로틴, 비타민 A D, E, 니코틴산, 비타민 B 복합체 등의 비타민제, 메티오닌, 라이신 등의 보호아미노산제, 지방산 칼슘염 등의 보호지방산제, 생균제(유산균제), 효모배양물, 곰팡이 발효물 등의 생균, 효모제 등이 추가로 포함될 수 있다.In this specification, 'feed additive' includes substances added to feed for various effects such as nutrient supplementation and weight loss prevention, improvement of digestibility of fiber in feed, improvement of oil quality, prevention of reproductive disorders and improvement of conception rate, and prevention of high temperature stress in summer. do. The feed additive of the present invention corresponds to supplementary feed under the Feed Management Act, and includes mineral preparations such as sodium bicarbonate, bentonite, magnesium oxide, and complex minerals, mineral preparations such as trace minerals such as zinc, copper, cobalt, and selenium, and kerotene. , vitamins such as vitamins A, D, E, nicotinic acid, and vitamin B complex, protective amino acids such as methionine and lysine, protective fatty acids such as fatty acid calcium salts, probiotics (lactic acid bacteria), yeast cultures, and live bacteria such as mold fermentation products, Yeast agents, etc. may be additionally included.

본 명세서에서 '사료'는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분으로, 본 발명에 따른 근육 질환 치료 또는 예방용 조성물을 유효성분으로 포함하는 사료는 당업계에 공지된 다양한 형태의 사료로 제조가능하며, 바람직하게는 농후 사료, 조사료 및/또는 특수사료가 포함될 수 있으나, 이로 한정되지 않는다.In this specification, 'feed' refers to any natural or artificial diet, meal, etc., or a component of the meal, for eating, ingestion, and digestion by animals, or a composition for treating or preventing muscle disease according to the present invention. Feed containing as an active ingredient can be manufactured from various types of feed known in the art, and may preferably include concentrated feed, roughage and/or special feed, but is not limited thereto.

본 발명에 따른 상기 근육 질환 개선 및 예방, 또는 근 기능 개선용 사료 첨가제는 당업계에 공지된 다양한 사료 제조방법에 따라 적절한 유효 농도 범위에서 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다.The feed additive for improving and preventing muscle disease or improving muscle function according to the present invention can be prepared by adding Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract in an appropriate effective concentration range according to various feed manufacturing methods known in the art. You can.

또한, 본 발명은 포유동물에게 유효량의 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 근육 질환의 치료 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method of treating muscle disease comprising administering to a mammal a pharmaceutical composition containing an effective amount of Melinjo leaf powder or Melinzoa leaf extract as an active ingredient.

여기에서 사용된 용어 '포유동물'은 치료, 관찰 또는 실험의 대상인 포유동물을 말하며, 바람직하게는 인간을 말한다.As used herein, the term 'mammal' refers to a mammal that is the subject of treatment, observation or experiment, and preferably refers to a human.

여기에서 사용된 용어 '유효량'은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상의에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양을 의미하는 것으로, 이는 해당 질환 또는 장애 증상의 완화를 유도하는 양을 포함한다. 본 발명의 유효 성분에 대한 유효량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 수 있다. As used herein, the term 'effective amount' refers to the amount of an active ingredient or pharmaceutical composition that, as believed by a researcher, veterinarian, physician, or other clinician, induces a biological or medical response in a tissue system, animal, or human. Includes an amount that induces relief of symptoms of a disease or disorder. The effective amount and frequency of administration of the active ingredient of the present invention may vary depending on the desired effect.

본 발명에 따른 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물의 약학적으로 유효한 양으로는 0.001 내지 100mg/day/체중kg, 바람직하게는 0.01 내지 10mg/day/체중kg이다. 그러나, 상기 약학적으로 유효한 양은 질환 및 이의 중증정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로, 치료기간 등의 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다.The pharmaceutically effective amount of Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract according to the present invention is 0.001 to 100 mg/day/kg of body weight, preferably 0.01 to 10 mg/day/kg of body weight. However, the pharmaceutically effective amount may be adjusted according to various factors such as the disease and its severity, the patient's age, weight, health status, gender, administration route, and treatment period.

이하, 본 발명에 따른 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물에 대해 실시예 및 시험예를 들어 상세히 설명하기로 한다.Hereinafter, the crushed Melinjo leaf or the Melinjo leaf extract according to the present invention will be described in detail through examples and test examples.

<실시예><Example>

실시예 1: 멜린조 잎 열수 추출물의 제조Example 1: Preparation of Melinjo leaf hot water extract

건조된 멜린조 잎을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 멜린조 잎 시료 10 g을 물 100 mL에 넣고 80℃에서 3시간 동안 추출하였다. 추출된 시료를 와트만(Whatman) 1번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매를 제거함으로써 멜린조 잎 열수 추출물을 얻었다.The dried Melinjo leaves were pulverized with a mixer, and then 10 g of the crushed Melinjo leaf sample was added to 100 mL of water and extracted at 80°C for 3 hours. The extracted sample was filtered under reduced pressure with Whatman No. 1 filter paper, and the filtered extract was concentrated in a vacuum rotary concentrator to remove the solvent, thereby obtaining a melinjo leaf hot water extract.

실시예 2: 멜린조 잎 에탄올 추출물의 제조Example 2: Preparation of Melinjo leaf ethanol extract

건조된 멜린조 잎를 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 멜린조 잎 시료 10 g을 100% 에탄올 100 mL에 넣고 40℃에서 3시간 동안 추출하였다. 추출된 시료를 와트만 1번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축한 후 용매를 제거함으로써 멜린조 잎 에탄올 추출물을 얻었다.The dried Melinjo leaves were pulverized with a mixer, and then 10 g of the crushed Melinjo leaf sample was added to 100 mL of 100% ethanol and extracted at 40°C for 3 hours. The extracted sample was filtered under reduced pressure with Whatman No. 1 filter paper, the filtered extract was concentrated in a vacuum rotary concentrator, and the solvent was removed to obtain an ethanol extract of Melinjo leaf.

실시예 3: 멜린조 잎 에틸아세테이트 추출물의 제조Example 3: Preparation of Melinjo leaf ethyl acetate extract

건조된 멜린조 잎를 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 멜린조 잎 시료 10 g을 에틸아세테이트 100 mL에 넣고 40℃에서 3시간 동안 추출하였다. 추출된 시료를 와트만 1번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매를 제거함으로써 멜린조 잎 에틸아세테이트 추출물을 얻었다.The dried Melinjo leaves were pulverized with a mixer, and then 10 g of the crushed Melinjo leaf sample was added to 100 mL of ethyl acetate and extracted at 40°C for 3 hours. The extracted sample was filtered under reduced pressure using Whatman No. 1 filter paper, and the filtered extract was concentrated using a vacuum rotary concentrator to remove the solvent, thereby obtaining an ethyl acetate extract from Melinjo leaf.

실시예 4: 멜린조 잎 헥산 추출물의 제조Example 4: Preparation of Melinjo leaf hexane extract

건조된 멜린조 잎를 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 멜린조 잎 시료 10 g을 헥산 100 mL에 넣고 40℃에서 3시간 동안 추출하였다. 추출된 시료를 와트만 1번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매를 제거함으로써 멜린조 잎 헥산 추출물을 얻었다.The dried Melinjo leaves were pulverized with a mixer, and then 10 g of the crushed Melinjo leaf sample was added to 100 mL of hexane and extracted at 40°C for 3 hours. The extracted sample was filtered under reduced pressure using Whatman No. 1 filter paper, and the filtered extract was concentrated using a vacuum rotary concentrator to remove the solvent, thereby obtaining a hexane extract of Melinjo leaf.

실시예 5: 멜린조 잎 초고압 추출물의 제조Example 5: Preparation of Melinjo leaf ultra-high pressure extract

건조된 멜린조 잎를 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 멜린조 잎 1g과 18%(v/v) 에탄올 76 mL을 폴리에틸렌(polyethylene) 팩에 넣고 밀봉한 후 초고압 추출장치(Frescal MFP-7000; Mitsubishi Heavy Industries)를 이용하여 추출하였다. 초고압 추출 조건은 추출압력이 320 MPa, 추출시간은 5 min 이였다. 추출된 시료를 와트만(Whatman) 2번 여과지로 여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매를 제거함으로써 멜린조 잎 초고압 추출물을 얻었다.After pulverizing the dried Melinjo leaves with a mixer, place 1g of the crushed Melinzoa leaves and 76 mL of 18% (v/v) ethanol in a polyethylene pack, seal it, and use an ultra-high pressure extraction device (Frescal MFP-7000; Mitsubishi Heavy). Industries) was used to extract the extract. Ultra-high pressure extraction conditions were extraction pressure of 320 MPa and extraction time of 5 min. The extracted sample was filtered through Whatman No. 2 filter paper, and the filtered extract was concentrated in a vacuum rotary concentrator to remove the solvent, thereby obtaining an ultra-high pressure extract of Melinjo leaf.

실시예 6: 멜린조 잎 아임계 추출물의 제조Example 6: Preparation of Melinjo leaf subcritical extract

건조된 멜린조 잎를 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 멜린조 잎 50 g을 1 L 물과 함께 아임계 추출장치(Biovan, Gyeonggi, Korea)의 아임계수 반응기에 넣고 밀폐하였다. 밀폐 후, 반응기의 온도를 200℃로 상승시켰으며, 반응기의 온도가 200℃에 도달하면 가열을 중단하고, 상기 온도를 20분간 유지하여 추출을 하였다. 20분 후 추출물을 냉각수가 공급되는 저장탱크로 이송하여 30℃까지 급속 냉각시킨 후, 부유 잔사를 분리하기 위해 3,600 rpm으로 30분 동안 원심분리하여 상등액만 취하였다. 동결건조기(Ilshin Lab Co. Ltd., Seoul, Korea)를 이용하여 용매를 전부 제거함으로써 멜린조 잎 아임계 추출물을 얻었다.The dried Melinjo leaves were pulverized with a mixer, and then 50 g of the pulverized Melinjo leaves were placed together with 1 L of water in the subcritical water reactor of a subcritical extraction device (Biovan, Gyeonggi, Korea) and sealed. After sealing, the temperature of the reactor was raised to 200°C, and when the temperature of the reactor reached 200°C, heating was stopped and the temperature was maintained for 20 minutes to perform extraction. After 20 minutes, the extract was transferred to a storage tank supplied with cooling water and rapidly cooled to 30°C. Then, it was centrifuged at 3,600 rpm for 30 minutes to separate the floating residue, and only the supernatant was collected. A subcritical extract of Melinjo leaves was obtained by removing all solvents using a freeze dryer (Ilshin Lab Co. Ltd., Seoul, Korea).

실시예 7: 멜린조 잎 초임계 추출물의 제조Example 7: Preparation of Melinjo leaf supercritical extract

건조된 멜린조 잎를 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 멜린조 잎 10 g을 시료 카트리지에 충전하고 초임계 유체 추출 장치(SFX 3560, Isco Inc., Lincoln, NE, USA)를 이용하여 추출하였다. 초임계 추출 조건은 추출 압력이 300 bar, 추출 온도는 50℃, 초임계 이산화탄소의 유속은 60 mL/min, 추출시간은 2시간으로 하였다. 초임계 유체 추출이 완료되면, 추출 장치의 압력을 낮춰 초임계 유체 상태를 해제하여 멜린조 잎 초임계 추출물을 얻었다.The dried Melinjo leaves were pulverized with a mixer, and then 10 g of the crushed Melinjo leaves were charged into a sample cartridge and extracted using a supercritical fluid extraction device (SFX 3560, Isco Inc., Lincoln, NE, USA). The supercritical extraction conditions were extraction pressure of 300 bar, extraction temperature of 50°C, supercritical carbon dioxide flow rate of 60 mL/min, and extraction time of 2 hours. When supercritical fluid extraction was completed, the pressure of the extraction device was lowered to release the supercritical fluid state to obtain a Melinjo leaf supercritical extract.

<시험예><Test example>

시험예 1: 근 단백질 분해 생체지표 발현량 억제 효과Test Example 1: Effect of suppressing the expression level of muscle protein degradation biomarkers

근육세포인 C2C12 myoblast (ATCC; Manassas, VA, USA)를 10% fetal bovine serum (FBS; Hyclone, Logan, UT, USA)가 함유된 Dulbecco's modified Eagle's media (DMEM; Hyclone)과 함께 6-웰 플레이트에 5×105 cell/mL이 되도록 넣었다. 세포밀도가 약 80~85%가 되었을 때, 웰에 있는 배지를 제거하고 2% horse serum (HS; Hyclone)이 함유된 DMEM (Hyclone)을 세포에 처리하여 근관세포(myotube) 분화를 유도하였다. 2일에 한 번씩 새로운 배지로 교체하여 총 4일 동안 분화를 진행하였다. 분화 후, 상기 상기 실시예 1의 멜린조 잎 열수 추출물 10 μg/mL와 20 μg/mL를 덱사메타손(dexamethasone; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) 10 μM이 함유된 DMEM (Hyclone)에 녹인 후, 세포에 처리하였다. 24시간 후, TRIzol시약(Takara, Otsu, Japan)을 사용하여 총 RNA를 분리하였다. 분리한 총 RNA는 나노드랍(NanoDrop 1000; Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA)을 이용하여 정량하였다. 정량된 16 μL의 RNA를 Reverse Transcriptase Premix (ELPIS-Biotech)와 PCR 기계(Gene Amp PCR System 2700; Applied Biosystems, Foster City, CA, USA)를 이용하여 42℃, 55분 및 70℃, 15분의 조건에서 cDNA로 합성하였다. 다음, 생성된 16 μL의 cDNA 중 1 μL의 cDNA를 PCR premix (ELPIS-Biotech) 및 하기의 특정 프라이머(Bioneer, Daejeon, Korea)와 함께 PCR로 증폭(amplification)시켰다. 증폭은 95℃에서 5분간 전처리 후, 95℃에서 30초 denaturation, 58℃에서 15초 annealing, 72℃에서 45초 extension을 1 cycle로 하여 총 35 cycle의 조건으로 PCR을 진행하였고, 72℃에서 5분간 최종 extension을 실시하였다.Muscle cells, C2C12 myoblast (ATCC; Manassas, VA, USA) were cultured in a 6-well plate with Dulbecco's modified Eagle's media (DMEM; Hyclone) containing 10% fetal bovine serum (FBS; Hyclone, Logan, UT, USA). It was added to make 5×10 5 cell/mL. When the cell density reached about 80-85%, the medium in the well was removed and the cells were treated with DMEM (Hyclone) containing 2% horse serum (HS; Hyclone) to induce myotube differentiation. Differentiation was carried out for a total of 4 days, with new medium replaced every 2 days. After differentiation, 10 μg/mL and 20 μg/mL of the Melinjo leaf hot water extract of Example 1 were added to DMEM (Hyclone) containing 10 μM of dexamethasone (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). After melting, it was treated with cells. After 24 hours, total RNA was isolated using TRIzol reagent (Takara, Otsu, Japan). The isolated total RNA was quantified using NanoDrop 1000 (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA). 16 μL of quantified RNA was incubated at 42°C for 55 minutes and at 70°C for 15 minutes using Reverse Transcriptase Premix (ELPIS-Biotech) and a PCR machine (Gene Amp PCR System 2700; Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). cDNA was synthesized under these conditions. Next, 1 μL of cDNA among the generated 16 μL of cDNA was amplified by PCR with PCR premix (ELPIS-Biotech) and the following specific primers (Bioneer, Daejeon, Korea). Amplification was performed with a total of 35 cycles of pretreatment at 95°C for 5 minutes, denaturation at 95°C for 30 seconds, annealing at 58°C for 15 seconds, and extension at 72°C for 45 seconds as 1 cycle, and 5 cycles at 72°C. A final extension was performed for 1 minute.

MuRF1MuRF1

Forward primer: 5'-CCGGACGGAAATGCTATGGA-3'(서열번호 1)Forward primer: 5'-CCGGACGGAAATGCTATGGA-3' (SEQ ID NO: 1)

Reverse primer: 5'-AGCCTGGAAGATGTCGTTGG-3'(서열번호 2)Reverse primer: 5'-AGCCTGGAAGATGTCGTTGG-3' (SEQ ID NO: 2)

Atrogin-1Atrogin-1

Forward primer: 5'-GTTACTGCAACAAGGAGAATCTGTT-3'(서열번호 3)Forward primer: 5'-GTTACTGCAACAAGGAGAATCTGTT-3' (SEQ ID NO: 3)

Reverse primer: 5'-CCGTATGAGTCTTATGTTTTGCTGG-3'(서열번호 4)Reverse primer: 5'-CCGTATGAGTCTTATGTTTTGCTGG-3' (SEQ ID NO: 4)

β-Actin:β-Actin:

Forward primer: 5'-TGACAGGATGCAGAAGGAGATTAC-3’(서열번호 5)Forward primer: 5'-TGACAGGATGCAGAAGGAGATTAC-3' (SEQ ID NO: 5)

Reverse primer: 5'-TAAAACGCAGCTCAGTAACAGTC-3’(서열번호 6)Reverse primer: 5’-TAAAACGCAGCTCAGTAACAGTC-3’ (SEQ ID NO: 6)

PCR 생성물은 1.5% agarose gel로 전기영동하여 분리하였으며, G;BOX EF imaging system (Syngene, Cambridge, UK)을 이용하여 band를 확인하였다. 이 때, β-actin을 내부표준(internal standard)으로 사용하였다. The PCR product was separated by electrophoresis using a 1.5% agarose gel, and the band was confirmed using the G;BOX EF imaging system (Syngene, Cambridge, UK). At this time, β-actin was used as an internal standard.

그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 덱사메타손(DEX)에 의해 근 단백질 분해에 관여하는 MuRF1과 atrogin-1의 mRNA 발현이 증가한 반면, 실시예 1의 멜린조 잎 열수 추출물을 처리한 경우 MuRF1과 atrogin-1의 mRNA 발현이 감소한 것을 확인할 수 있다. 이는 본 발명의 멜린조 잎 열수 추출물이 근육세포 내에서 근 단백질 분해에 관여하는 생체지표의 발현을 억제시키는 능력이 우수한 것을 의미한다.As a result, as shown in Figure 1, the mRNA expression of MuRF1 and atrogin-1, which are involved in muscle protein degradation, increased by dexamethasone (DEX), while when the hot water extract of Melinjo leaves of Example 1 was treated, MuRF1 and atrogin-1 It can be seen that the mRNA expression of 1 has decreased. This means that the Melinjo leaf hot water extract of the present invention has an excellent ability to inhibit the expression of biomarkers involved in muscle protein degradation in muscle cells.

시험예 2: 멜린조 잎 추출물의 근 단백질 분해 억제 효과Test Example 2: Inhibitory effect of muscle protein degradation of Melinjo leaf extract

C2C12 근원세포에 실시예 2 내지 7에 따른 멜린조 잎 추출물을 각각 20 μg/mL씩 처리한 것을 제외하고는 상기 시험예 1과 동일한 방법으로 총 3회 반복하여 시험을 진행하였다. 다음, Image J 프로그램(National Institute of Health, Bethesda, MD, USA)을 이용하여 MuRF1 및 atrogin-1 mRNA의 band density를 측정한 다음, 각 측정값은 대조군에 대한 백분율(%)을 계산하여 평균±표준편차로 나타내었다.The test was repeated a total of three times in the same manner as Test Example 1, except that C2C12 myogenic cells were treated with 20 μg/mL of Melinjo leaf extract according to Examples 2 to 7, respectively. Next, the band density of MuRF1 and atrogin-1 mRNA was measured using the Image J program (National Institute of Health, Bethesda, MD, USA), and then each measured value was calculated as a percentage (%) relative to the control group and averaged ± Expressed as standard deviation.

그 결과, 표 1에 나타난 바와 같이 덱사메타손을 처리함에 따라 대조군에 비해 MuRF1과 atrogin-1의 mRNA 발현량이 유의적으로(##p < 0.01) 증가하였으나, 실시예에 따른 멜린조 잎 추출물을 20 μg/mL 처리한 경우 덱사메타손 처리군에 비해 MuRF과 Atrogin-1의 mRNA 발현량이 모두 유의적(**p < 0.01)으로 감소한 것을 확인할 수 있다. 이는 본 발명의 멜린조 잎 추출물이 근육세포 내에서 근 단백질 분해를 억제하는 능력이 우수하다는 것을 의미한다. As a result, as shown in Table 1, the mRNA expression levels of MuRF1 and atrogin-1 increased significantly (##p < 0.01) compared to the control group as treated with dexamethasone, but 20 μg of the Melinjo leaf extract according to the example It can be seen that in the case of /mL treatment, the mRNA expression levels of both MuRF and Atrogin-1 were significantly (**p < 0.01) decreased compared to the dexamethasone treatment group. This means that the Melinjo leaf extract of the present invention has an excellent ability to inhibit muscle protein degradation within muscle cells.

구분division MuRF-1 발현량
(대조군 대비 %)
MuRF-1 expression level
(% compared to control group)
Atrogin-1 발현량
(대조군 대비 %)
Atrogin-1 expression level
(% compared to control group)
대조군control group 100±36.1100±36.1 100±41.8100±41.8 덱사메타손dexamethasone 598.4±42.1## 598.4±42.1 ## 392.2±32.8## 392.2±32.8 ## 실시예 2Example 2 216.9±34.6** 216.9±34.6 ** 140.8±44.3** 140.8±44.3 ** 실시예 3Example 3 255.0±33.9** 255.0±33.9 ** 151.3±39.0** 151.3±39.0 ** 실시예 4Example 4 201.5±44.1** 201.5±44.1 ** 134.1±28.1** 134.1±28.1 ** 실시예 5Example 5 239.7±42.6** 239.7±42.6 ** 152.0±40.8** 152.0±40.8 ** 실시예 6Example 6 260.7±32.1** 260.7±32.1 ** 160.3±28.1** 160.3±28.1 ** 실시예 7Example 7 209.5±36.0** 209.5±36.0 ** 129.9±45.0** 129.9±45.0 **

시험예 3: 근 단백질 합성 생체지표 mTOR 활성 증가 효과Test Example 3: Effect of increasing muscle protein synthesis biomarker mTOR activity

mTOR 단백질은 인산화되어 활성화되었을 때, 근육 세포 내의 PI3K/Akt 신호전달경로에서 근 단백질 합성 및 근육량 증가에 관여하는 단백질의 활성화를 유도할 수 있음이 알려져 있다. 이에, 멜린조 잎 추출물의 근육 생성 유도 활성을 확인하기 위해, mTOR Sandwich ELISA kit (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA)를 이용하여 mTOR의 활성을 확인하였다.It is known that when mTOR protein is phosphorylated and activated, it can induce the activation of proteins involved in muscle protein synthesis and muscle mass increase in the PI3K/Akt signaling pathway within muscle cells. Therefore, in order to confirm the muscle creation-inducing activity of the Melinjo leaf extract, the activity of mTOR was confirmed using the mTOR Sandwich ELISA kit (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA).

구체적으로, C2C12 근원세포(ATCC; Manassas, VA, USA)를 10% fetal bovine serum (FBS; Hyclone, Logan, UT, USA)이 함유된 Dulbecco's modified Eagle's media (DMEM; Hyclone)와 함께 6-웰 플레이트에 5X105 cell/well이 되도록 seeding 후 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, 웰에 있는 배지를 제거하고 2% horse serum (HS; Hyclone)이 함유된 DMEM (Hyclone)로 교환하여 4일간 추가 배양하여 C2C12 세포를 근관세포(myotube)로 분화시켰다. 다음, 상기 실시예 1의 멜린조 잎 열수 추출물을 10 μg/mL와 20 μg/mL의 농도로 DMEM (Hyclone)에 녹인 후, 세포에 처리하고 12시간 동안 배양하였다. 배양 후, 세포 용해 완충용액(cell lysis buffer)을 처리하여 세포를 용해시켰다. 수득한 세포 용해물 내 단백질을 브래드포드(Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, USA)를 이용하여 1 mg/mL 농도로 정량하였다. 항-mTOR 항체가 부착된 마이크로웰에 세포 용해물을 50 μL씩 분주하여 37℃에서 2시간 동안 방치하였다. 세척 완충용액(Washing buffer)으로 총 4회 씻은 후, 확인용 항체(detection antibody)를 처리하고 37℃에서 1시간 방치했으며, 다시 세척 완충용액으로 총 4회 씻은 후, 겨자무 과산화효소(horseradish peroxidase)가 접합된 2차 항체를 넣고 37℃에서 30분 동안 방치하였다. 마지막으로 세척 완충용액으로 총 4회 씻은 후, TMB 기질을 각 웰에 넣고 37℃에서 10분 동안 방치하고 정지 완충용액(stop solution)을 가하여 TMB의 반응을 멈추었다. 2분 뒤, 450 nm의 파장으로 흡광도를 측정하여 멜린조 잎 추출물을 처리한 근관 세포 내 mTOR 수준을 측정하였다. 실험은 총 3회 반복하여 진행하였으며, 각각 얻은 측정값은 대조군에 대한 백분율(%)을 계산하여 평균±표준편차로 나타내었다. 군 간의 차이는 SPSS25.0 통계 패키지(SPSS Inc., Chicago, IL, USA)를 이용하여 일원배치분산분석(one-way analysis of variance)에 의한 Duncan 다중범위 분석을 통해 확인하였다. 이 때, p 값이 5% 미만일 경우 통계적으로 유의성이 있다고 표기하였다. Specifically, C2C12 myoblasts (ATCC; Manassas, VA, USA) were cultured in 6-well plates with Dulbecco's modified Eagle's media (DMEM; Hyclone) containing 10% fetal bovine serum (FBS; Hyclone, Logan, UT, USA). After seeding to reach 5X10 5 cells/well, the cells were cultured for 24 hours. After culture, the medium in the well was removed, replaced with DMEM (Hyclone) containing 2% horse serum (HS; Hyclone), and cultured for an additional 4 days to differentiate C2C12 cells into myotube cells. Next, the Melinjo leaf hot water extract of Example 1 was dissolved in DMEM (Hyclone) at a concentration of 10 μg/mL and 20 μg/mL, then treated with cells and cultured for 12 hours. After culturing, cells were lysed by treatment with cell lysis buffer. The protein in the obtained cell lysate was quantified at a concentration of 1 mg/mL using Bradford (Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, USA). 50 μL of cell lysate was dispensed into each microwell with anti-mTOR antibody attached and left at 37°C for 2 hours. After washing a total of 4 times with washing buffer, treatment with detection antibody and leaving at 37°C for 1 hour, washing again with washing buffer a total of 4 times, horseradish peroxidase ) conjugated secondary antibody was added and left at 37°C for 30 minutes. Finally, after washing a total of four times with the washing buffer solution, TMB substrate was added to each well, left at 37°C for 10 minutes, and stop buffer solution was added to stop the TMB reaction. After 2 minutes, the absorbance was measured at a wavelength of 450 nm to measure the level of mTOR in root canal cells treated with Melinjo leaf extract. The experiment was repeated a total of three times, and each measured value was calculated as a percentage (%) of the control group and expressed as mean ± standard deviation. Differences between groups were confirmed through Duncan multi-range analysis using one-way analysis of variance using the SPSS25.0 statistical package (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). At this time, if the p value was less than 5%, it was indicated as statistically significant.

그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이 C2C12 근육세포에 실시예 1의 멜린조 잎 열수 추출물을 처리했을 때 대조군에 비하여 mTOR의 활성이 유의적(*p < 0.01)으로 증가한 것을 확인할 수 있다. 이는 본 발명의 멜린조 잎 열수 추출물이 근육세포 내에서 근 단백질 합성을 촉진시키는 능력이 우수하다는 것을 의미한다.As a result, as shown in Figure 2, it can be seen that when C2C12 muscle cells were treated with the Melinjo leaf hot water extract of Example 1, mTOR activity was significantly (*p < 0.01) increased compared to the control group. This means that the Melinjo leaf hot water extract of the present invention has an excellent ability to promote muscle protein synthesis in muscle cells.

시험예 4: 멜린조 잎 추출물의 근 단백질 합성 촉진 효과Test Example 4: Effect of Melinjo leaf extract on promoting muscle protein synthesis

C2C12 근원세포에 실시예 2 내지 7에 따른 멜린조 잎 추출물을 각각 20 μg/mL씩 처리한 것을 제외하고는 상기 시험예 3과 동일한 방법으로 mTOR 활성을 측정하였다. mTOR activity was measured in the same manner as in Test Example 3, except that C2C12 myogenic cells were treated with 20 μg/mL of Melinjo leaf extract according to Examples 2 to 7, respectively.

그 결과, 표 2에 나타난 바와 같이 본 발명의 실시예에 따른 멜린조 잎 추출물을 처리함에 따라 추출물을 처리하지 않은 대조군에 비하여 mTOR의 활성이 모두 유의적(**p < 0.01)으로 증가한 것을 확인할 수 있다. 이는 본 발명의 멜린조 잎 추출물이 근육세포 내에서 근 단백질 합성을 촉진시키는 능력이 우수하다는 것을 의미한다.As a result, as shown in Table 2, it was confirmed that the activity of mTOR was significantly (**p < 0.01) increased as compared to the control group that was not treated with the extract as the Melinjo leaf extract was treated according to the example of the present invention. You can. This means that the Melinjo leaf extract of the present invention has an excellent ability to promote muscle protein synthesis in muscle cells.

구분division mTOR 활성
(대조군 대비 %)
mTOR activity
(% compared to control group)
대조군control group 100±3.8100±3.8 실시예 2Example 2 139.6±4.6** 139.6±4.6 ** 실시예 3Example 3 136.0±3.8** 136.0±3.8 ** 실시예 4Example 4 140.1±4.1** 140.1±4.1 ** 실시예 5Example 5 139.9±3.7** 139.9±3.7 ** 실시예 6Example 6 138.1±3.4** 138.1±3.4 ** 실시예 7Example 7 144.8±4.7** 144.8±4.7 **

시험예 5: 부동화(Immobilization) 동물모델에서 멜린조 잎 분쇄물과 추출물의 근 기능 및 근육량 증가 효과Test Example 5: Effect of Melinzoa leaf pulverization and extract on muscle function and muscle mass increase in immobilization animal model

실험동물로 생후 7주된 수컷쥐(C57BL/6J; DBL, Korea)를 구입하여 실험을 진행하였다. 모든 동물의 사육실 환경은 온도 23 ± 2℃, 상대습도 55 ± 10%로 유지시켰다. 실험 시작 전, 총 25마리의 쥐를 무작위로 1군당 5마리가 되도록 나누었다. 1주일간 적응시킨 후, 325 mg/kg의 트리브로모메탄올(tribromoethanol, Sigma-Aldrich)을 복강 주사하여 마취를 유도하였다. 마취 후, 근위축군과 시료 투여군에 있는 쥐의 오른쪽 뒷다리(hindlimb) 장딴지근육(gastrocnemius muscle)과 오른쪽 발바닥을 피부 스테이플러(skin stapler)(Unidus, Chungcheongbuk-do, Korea)를 사용하여 스테이플러 심으로 근육을 손상시켜 오른쪽 뒷다리가 움직이지 못하게 하였으며, 이 상태를 일주일 간 유지시켰다. 일주일 후, 장딴지근과 발바닥에 고정되어 있던 스테이플러 심을 제거하고, 다시 일주일간 상기 멜린조 잎 분쇄물 500mg/kg, 실시예 1-1의 멜린조 잎 열수 추출물 300 mg/kg, 실시예 1-2의 멜린조 잎 에탄을 추출물 300 mg/kg을 매일 7일간 경구투여하였다. 이 때, 정상군과 근위축군은 시료 대신에 식염수로 경구투여를 실시하였다.As experimental animals, 7-week-old male mice (C57BL/6J; DBL, Korea) were purchased and tested. The breeding room environment for all animals was maintained at a temperature of 23 ± 2°C and a relative humidity of 55 ± 10%. Before starting the experiment, a total of 25 rats were randomly divided into 5 rats per group. After a week of adaptation, anesthesia was induced by intraperitoneal injection of 325 mg/kg tribromoethanol (Sigma-Aldrich). After anesthesia, the gastrocnemius muscle of the right hindlimb and the right sole of the rats in the muscle atrophy group and the sample administration group were stapled using a skin stapler (Unidus, Chungcheongbuk-do, Korea). The right hind leg was damaged and unable to move, and this condition was maintained for a week. One week later, the staple core fixed to the gastrocnemius muscle and sole was removed, and for another week, 500 mg/kg of the above-mentioned Melinjo leaf pulverization, 300 mg/kg of Melinjo leaf hot water extract of Example 1-1, Example 1-2 300 mg/kg of Melinjo leaf ethane extract was orally administered daily for 7 days. At this time, the normal group and the muscle atrophy group were orally administered saline solution instead of the sample.

경구 투여 기간이 끝나고, 근력측정기(Panlab, Barcelona, Spain)를 이용하여 쥐의 근력을 측정하였다. 쥐가 근력측정기의 막내를 놓을 때까지 일정한 힘으로 쥐의 꼬리를 당겼으며, 한 마리당 총 5회 연속 테스트를 실시하였다.After the oral administration period, the muscle strength of the rats was measured using a muscle strength meter (Panlab, Barcelona, Spain). The rat's tail was pulled with a constant force until the rat let go of the last part of the muscle strength meter, and a total of 5 consecutive tests were performed per animal.

근력 측정이 끝난 후, 실험동물을 325 mg/kg의 트리브로모메탄올(Sigma-Aldrich)을 복강 주사하여 마취 후 심채혈을 통해 희생을 하였다. 심장박동이 멈춘 것을 확인한 뒤, 오른쪽 뒷다리에서 손상을 입지 않은 전경골근(tibialis anterior muscle)을 적출하여 무게를 측정하였다.After muscle strength measurements were completed, the experimental animals were anesthetized by intraperitoneal injection of 325 mg/kg of tribromomethanol (Sigma-Aldrich), and then sacrificed through cardiac blood sampling. After confirming that the heartbeat had stopped, the undamaged tibialis anterior muscle was removed from the right hind leg and its weight was measured.

그 결과, 표 3에 나타난 바와 같이 정상군에 비해 근위축군에서 근력(# p < 0.05)과 근육 무게(## p < 0.01)가 유의적으로 감소하였으나, 멜린조 잎 분쇄물과 추출물 처리 군에서 근력과 근육 무게가 근 위축군에 비하여 유의적(** p < 0.01)으로 증가한 것을 확인하였다. 이는 본 발명의 멜린조 잎 분쇄물과 추출물이 근위축으로 인해 감소한 근력과 근육 무게를 증가시키는 효과가 우수하다는 것을 의미한다.As a result, as shown in Table 3, muscle strength ( # p < 0.05) and muscle weight ( ## p < 0.01) were significantly decreased in the muscle atrophy group compared to the normal group, but in the group treated with crushed Melinjo leaf and extract. It was confirmed that strength and muscle weight increased significantly ( ** p < 0.01) compared to the muscle atrophy group. This means that the Melinjo leaf powder and extract of the present invention are excellent in increasing muscle strength and muscle weight decreased due to muscle atrophy.

실험군experimental group 근력(g)Muscle strength (g) 근육 무게(mg)Muscle weight (mg) 정상군 Jeongsang-gun 245.0±13.1245.0±13.1 58.4±5.158.4±5.1 근위축군Muscular atrophy group 162.5±12.7## 162.5±12.7 ## 42.7±3.8## 42.7±3.8 ## 멜린조 잎 분쇄물Melinjo leaf powder 188.8±10.9**188.8±10.9** 52.7±4.6**52.7±4.6** 멜린조 잎 열수 추출물Melinzoa leaf thermal water extract 212.3±15.2**212.3±15.2** 53.2±5.1**53.2±5.1** 멜린조 잎 에탄올 추출물Melinjo Leaf Ethanol Extract 226.1±13.0**226.1±13.0** 54.9±5.3**54.9±5.3**

이하, 본 발명에 따른 멜린조 잎 분쇄물 및 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품, 의약품 또는 화장품의 제조예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다. 상기 근육 질환 예방 및 치료, 또는 근 기능 개선 효과가 우수한 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물을 이용하여 하기와 같은 조성성분 및 조성비에 따라 제조예 1 내지 3의 식품, 의약품 또는 화장료 조성물을 통상적인 방법에 따라서 제조하였다.Hereinafter, an example of manufacturing food, medicine or cosmetics containing Melinjo leaf powder and extract as an active ingredient according to the present invention will be described, but the present invention is not intended to be limited, but merely explained in detail. The food, pharmaceutical or cosmetic compositions of Preparation Examples 1 to 3 are conventionally prepared using Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract, which is excellent for preventing and treating muscle diseases or improving muscle function, according to the composition and composition ratio as follows. It was prepared according to the method.

<제조예 1> 식품<Production Example 1> Food

제조예 1-1. 건강식품Production Example 1-1. health food

본 발명의 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물 1000 mg, 비타민 A 아세테이트 70 ug, 비타민 E 1.0 mg, 비타민 B1 0.13 mg, 비타민 B2 0.15 mg, 비타민 B6 0.5 mg, 비타민 B12 0.2 ug, 비타민 C 10 mg, 비오틴 10 ug, 니코틴산아미드 1.7 mg, 엽산 50 ug, 판토텐산 칼슘 0.5 mg, 황산제1철 1.75 mg, 산화아연 0.82 mg, 탄산마그네슘 25.3 mg, 제1인산칼륨 15 mg, 제2인산칼슘 55 mg, 구연산칼륨 90 mg, 탄산칼슘 100 mg, 염화마그네슘 24.8 mg를 혼합하여 제조할 수 있으며, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.1000 mg of crushed Melinjo leaf or extract of Melinjo leaf of the present invention, 70 ug of vitamin A acetate, 1.0 mg of vitamin E, 0.13 mg of vitamin B1, 0.15 mg of vitamin B2, 0.5 mg of vitamin B6, 0.2 ug of vitamin B12, 10 ug of vitamin C mg, biotin 10 ug, nicotinic acid 1.7 mg, folic acid 50 ug, calcium pantothenate 0.5 mg, ferrous sulfate 1.75 mg, zinc oxide 0.82 mg, magnesium carbonate 25.3 mg, potassium phosphate monobasic 15 mg, calcium phosphate dibasic 55 mg. , can be prepared by mixing 90 mg of potassium citrate, 100 mg of calcium carbonate, and 24.8 mg of magnesium chloride, and the mixing ratio may be modified arbitrarily. After mixing the above ingredients according to a normal health food manufacturing method, Granules can be prepared and used to manufacture health food compositions according to conventional methods.

제조예 1-2. 건강음료Production Example 1-2. health drink

본 발명의 멜린조 잎 추출물 1000 mg, 구연산 1000 mg, 올리고당 100 g, 매실농축액 2 g, 타우린 1 g에 정제수를 가하여 전체 900 mL 통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강음료 조성물 제조에 사용할 수 있다.Add purified water to 1000 mg of Melinzoa leaf extract of the present invention, 1000 mg of citric acid, 100 g of oligosaccharides, 2 g of plum concentrate, and 1 g of taurine to make a total of 900 mL. Mix the above ingredients according to a typical health drink manufacturing method, then add approx. After stirring and heating at 85°C for 1 hour, the resulting solution is filtered, placed in a sterilized 2 L container, sealed, sterilized, stored in the refrigerator, and then used to manufacture a health drink composition.

제조예 1-3. 츄잉껌Production Example 1-3. chewing gum

껌 베이스 20 중량%, 설탕 76.9 중량%, 향료 1 중량% 및 물 2 중량%와 본 발명의 멜린조 잎 추출물 0.1 중량%를 배합하여 통상의 방법으로 츄잉껌을 제조하였다.Chewing gum was prepared in a conventional manner by mixing 20% by weight of gum base, 76.9% by weight of sugar, 1% by weight of flavor, 2% by weight of water, and 0.1% by weight of Melinjo leaf extract of the present invention.

제조예 1-4. 캔디Production Example 1-4. candy

설탕 60 중량%, 물엿 39.8 중량% 및 향료 0.1 중량%와 본 발명의 멜린조 잎 추출물 0.1 중량%를 배합하여 통상의 방법으로 캔디를 제조하였다.Candy was prepared in a conventional manner by mixing 60% by weight of sugar, 39.8% by weight of starch syrup, 0.1% by weight of flavoring, and 0.1% by weight of the Melinjo leaf extract of the present invention.

제조예 1-5. 비스켓Production Example 1-5. biscuit

박력 1급 25.59 중량%, 중력 1급 22.22 중량%, 정백당 4.80 중량%, 식염 0.73 중량%, 포도당 0.78 중량%, 팜쇼트닝 11.78 중량%, 암모늄 1.54 중량%, 중조 0.17 중량%, 중아황산나트륨 0.16 중량%, 쌀가루 1.45 중량%, 비타민 B 0.0001 중량%, 밀크향 0.04 중량%, 물 20.6998 중량%, 전지분유 1.16 중량%, 대용분유 0.29 중량%, 제1인산칼슘 0.03 중량%, 살포염 0.29 중량% 및 분무유 7.27 중량%와 본 발명의 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물 0.8301 중량%를 배합하여 통상의 방법으로 비스켓을 제조하였다.25.59% by weight of strength grade 1, 22.22% by weight of gravity grade 1, 4.80% by weight of refined sugar, 0.73% by weight of table salt, 0.78% by weight of glucose, 11.78% by weight of palm shortening, 1.54% by weight of ammonium, 0.17% by weight of sodium bicarbonate, 0.16% by weight of sodium bisulfite. , 1.45% by weight of rice flour, 0.0001% by weight of vitamin B, 0.04% by weight of milk flavor, 20.6998% by weight, 1.16% by weight of whole milk powder, 0.29% by weight of powdered milk, 0.03% by weight of monobasic calcium phosphate, 0.29% by weight of spray salt and spray. Biscuits were prepared in a conventional manner by mixing 7.27% by weight of oil and 0.8301% by weight of Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract of the present invention.

<제조예 2> 의약품<Manufacturing Example 2> Medicine

제조예 2-1. 산제Manufacturing Example 2-1. Sanje

본 발명의 멜린조 잎 추출물 50 mg, 결정셀룰로오즈 2 g을 혼합한 후 통상의 산제 제조방법에 따라서 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.A powder was prepared by mixing 50 mg of the Melinjo leaf extract of the present invention and 2 g of crystalline cellulose and filling it into an airtight envelope according to a conventional powder production method.

제조예 2-2. 정제Production Example 2-2. refine

본 발명의 멜린조 잎 추출물 50 mg, 결정셀룰로오즈 400 mg, 스테아린산 마그네슘 5 mg을 혼합한 후 통상의 정제 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.Tablets were prepared by mixing 50 mg of Melinzoa leaf extract of the present invention, 400 mg of crystalline cellulose, and 5 mg of magnesium stearate and then tableting according to a conventional tablet manufacturing method.

제조예 2-3. 캡슐제Production Example 2-3. capsule

본 발명의 멜린조 잎 추출물 30 mg, 유청단백질 100 mg, 결정셀룰로오즈 400 mg, 스테아린산 마그네슘 6 mg을 혼합한 후 통상의 캡슐제 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.Capsules were prepared by mixing 30 mg of Melinzoa leaf extract of the present invention, 100 mg of whey protein, 400 mg of crystalline cellulose, and 6 mg of magnesium stearate and filling them into gelatin capsules according to a conventional capsule preparation method.

<제조예 3> 화장품<Production Example 3> Cosmetics

제조예 3-1. 영양화장수(밀크로션)Manufacturing Example 3-1. Nutritional lotion (milk lotion)

본 발명의 멜린조 잎 추출물을 하기 표 4의 영양화장수 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 영양화장수를 제조하였다.Nutritional lotion was prepared according to a conventional method using the Melinjo leaf extract of the present invention according to the nutritional lotion formulation ratio in Table 4 below.

배합성분 Ingredients 제조예 3-1 (중량%)Preparation Example 3-1 (% by weight) 멜린조 잎 추출물Melinjo Leaf Extract 2.02.0 스쿠알란squalane 5.05.0 밀납beeswax 4.04.0 폴리솔베이트 60Polysorbate 60 1.51.5 솔비탄세스퀴올레이트Sorbitan sesquioleate 1.51.5 유동파라핀liquid paraffin 0.50.5 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드Caprylic/Capric Triglyceride 5.05.0 글리세린glycerin 3.03.0 부틸렌글리콜Butylene glycol 3.03.0 프로필렌글리콜propylene glycol 3.03.0 카르복시비닐폴리머Carboxy vinyl polymer 0.10.1 트리에탄올아민Triethanolamine 0.20.2 방부제, 색소, 향료Preservatives, coloring, flavoring 적량Appropriate amount 정제수Purified water to 100to 100

제조예 3-2. 유연화장수(스킨로션)Production Example 3-2. Soft lotion (skin lotion)

본 발명의 멜린조 잎 추출물을 하기 표 5의 유연화장수 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 유연화장수를 제조하였다.Soft lotion was prepared according to a conventional method using the Melinjo leaf extract of the present invention according to the softening lotion formulation ratio in Table 5 below.

배합성분 Ingredients 제조예 3-2 (중량%)Preparation Example 3-2 (% by weight) 멜린조 잎 추출물Melinjo Leaf Extract 2.02.0 글리세린glycerin 3.03.0 부틸렌글리콜Butylene glycol 2.02.0 프로필렌글리콜propylene glycol 2.02.0 카르복시비닐폴리머Carboxy vinyl polymer 0.10.1 PEG 12 노닐페닐에테르PEG 12 nonylphenyl ether 0.20.2 폴리솔베이트 80Polysorbate 80 0.40.4 에탄올ethanol 10.010.0 트리에탄올아민Triethanolamine 0.10.1 방부제, 색소, 향료Preservatives, coloring, flavoring 적량Appropriate amount 정제수Purified water to 100to 100

제조예 3-3. 영양크림Manufacturing Example 3-3. Nutrition cream

본 발명의 멜린조 잎 추출물을 하기 표 6의 영양크림 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 영양크림을 제조하였다.A nutritional cream was prepared according to a conventional method using the Melinjo leaf extract of the present invention according to the nutritional cream formulation ratio in Table 6 below.

배합성분 Ingredients 제조예 3-3 (중량%)Preparation Example 3-3 (% by weight) 멜린조 잎 추출물Melinjo Leaf Extract 2.02.0 폴리솔베이트 60Polysorbate 60 1.51.5 솔비탄세스퀴올레이트Sorbitan sesquioleate 0.50.5 PEG60 경화피마자유PEG60 hydrogenated castor oil 2.02.0 유동파라핀liquid paraffin 1010 스쿠알란squalane 5.05.0 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드Caprylic/Capric Triglyceride 5.05.0 글리세린glycerin 5.05.0 부틸렌글리콜Butylene glycol 3.03.0 프로필렌글리콜propylene glycol 3.03.0 트리에탄올아민Triethanolamine 0.20.2 방부제antiseptic 적량Appropriate amount 색소pigment 적량Appropriate amount 향료Spices 적량Appropriate amount 정제수Purified water to 100to 100

제조예 3-4. 마사지크림Production Example 3-4. massage cream

본 발명의 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물을 하기 표 7의 마사지크림 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 마사지크림을 제조하였다.Massage cream was prepared according to a conventional method by using the pulverized Melinjo leaf extract or Melinjo leaf extract of the present invention according to the massage cream formulation ratio in Table 7 below.

배합성분 Ingredients 제조예 3-4 (중량%)Preparation Example 3-4 (% by weight) 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract 1.01.0 밀납beeswax 10.010.0 폴리솔베이트 60Polysorbate 60 1.51.5 PEG 60 경화피마자유PEG 60 hydrogenated castor oil 2.02.0 솔비탄세스퀴올레이트Sorbitan sesquioleate 0.80.8 유동파라핀liquid paraffin 40.040.0 스쿠알란squalane 5.05.0 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드Caprylic/Capric Triglyceride 4.04.0 글리세린glycerin 5.05.0 부틸렌글리콜Butylene glycol 3.03.0 프로필렌글리콜propylene glycol 3.03.0 트리에탄올아민Triethanolamine 0.20.2 방부제, 색소, 향료Preservatives, coloring, flavoring 적량Appropriate amount 정제수Purified water to 100to 100

제조예 3-5. 팩Production Example 3-5. pack

본 발명의 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물을 하기 표 8의 팩 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 팩을 제조하였다.A pack was prepared according to a conventional method using the pulverized Melinjo leaf or extract of Melinjo leaf of the present invention according to the pack formulation ratio in Table 8 below.

배합성분 Ingredients 제조예 3-5 (중량%)Preparation Example 3-5 (% by weight) 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract 1.01.0 폴리비닐알콜polyvinyl alcohol 13.013.0 소듐카르복시메틸셀룰로오스Sodium Carboxymethylcellulose 0.20.2 글리세린glycerin 5.05.0 알란토인allantoin 0.10.1 에탄올ethanol 6.06.0 PEG 12 노닐페닐에테르PEG 12 nonylphenyl ether 0.30.3 폴리솔베이트 60Polysorbate 60 0.30.3 방부제, 색소, 향료Preservatives, coloring, flavoring 적량Appropriate amount 정제수Purified water to 100to 100

제조예 3-6. 젤Production Example 3-6. gel

본 발명의 멜린조 잎 추출물을 하기 표 9의 젤 제형 비율대로 하여 통상적인 방법에 따라 젤을 제조하였다.A gel was prepared according to a conventional method using the Melinjo leaf extract of the present invention according to the gel formulation ratio in Table 9 below.

배합성분Ingredients 제조예 3-6 (중량%)Preparation Example 3-6 (% by weight) 멜린조 잎 추출물Melinjo Leaf Extract 0.50.5 에틸렌디아민초산나트륨Sodium ethylenediamine acetate 0.050.05 글리세린glycerin 5.05.0 카르복시비닐폴리머Carboxy vinyl polymer 0.30.3 에탄올ethanol 5.05.0 PEG 60 경화피마자유PEG 60 hydrogenated castor oil 0.50.5 트리에탄올아민Triethanolamine 0.30.3 방부제, 색소, 향료Preservatives, coloring, flavoring 적량Appropriate amount 정제수Purified water to 100to 100

상기 표에서 '적량'은 기호도에 따라 적정량이 첨가될 수 있음을 의미하고, 'to 100'은 총 100중량% 에서 정제수를 제외한 나머지 배합성분의 중량%의 합을 제한 후 남은 중량%를 정제수의 중량%로 할 수 있다는 것을 의미한다.In the table above, 'appropriate amount' means that an appropriate amount can be added depending on preference, and 'to 100' means that the remaining weight% after subtracting the sum of the weight% of the remaining mixing ingredients excluding purified water from the total 100% by weight is added to the purified water. This means that it can be done in weight percent.

비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한, 첨부된 청구범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.Although the present invention has been described in terms of the above-mentioned preferred embodiments, various modifications and variations can be made without departing from the gist and scope of the invention. Furthermore, the appended claims cover such modifications or variations as fall within the subject matter of the present invention.

이상 살펴본 바와 같이, 본 발명은 멜린조 잎 분쇄물 또는 멜린조 잎 추출물과 같은 멜린조 잎을 함유하는 근육 질환 개선, 치료 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 조성물을 제공한다. 보다 상세하게는 본 발명의 멜린조 잎은 MuRF1과 atrogin-1의 mRNA 발현량을 감소시키고, mTOR의 활성을 증가시킴으로써 근육량과 근력을 향상시켜 근육 질환 개선, 치료 또는 예방용, 또는 근 기능 개선에 우수한 효과를 나타낸다. 따라서, 본 발명은 근육 질환 개선, 치료 또는 예방용, 또는 근 기능 개선에 탁월한 효과를 보이는 조성물을 제공할 수 있으므로 산업상 이용 가능성이 높다.As described above, the present invention provides a composition for improving, treating or preventing muscle disease, or improving muscle function, containing Melinjo leaves, such as Melinjo leaf powder or Melinjo leaf extract. More specifically, the Melinjo leaves of the present invention reduce the mRNA expression levels of MuRF1 and atrogin-1 and increase the activity of mTOR to improve muscle mass and strength, thereby improving, treating or preventing muscle diseases, or improving muscle function. It shows excellent effects. Therefore, the present invention has high industrial applicability because it can provide a composition that shows excellent effects for improving, treating or preventing muscle diseases, or improving muscle function.

Claims (8)

멜린조 잎(Melinjo leaf)을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 식품 조성물.A food composition for improving or preventing muscle disease or improving muscle function containing Melinjo leaf as an active ingredient. 제 1항에 있어서,
상기 멜린조 잎은 멜린조 잎의 분쇄물이고,
상기 멜린조 잎 추출물은 멜린조 잎을 추출하여 수득한 것을 특징으로 하는 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 식품 조성물.
According to clause 1,
The Melinjo leaves are the pulverized product of Melinjo leaves,
The Melinjo leaf extract is a food composition for improving or preventing muscle disease or improving muscle function, characterized in that it is obtained by extracting Melinjo leaves.
제 1항에 있어서,
상기 멜린조 잎 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 유기용매, 아임계 유체 및 초임계 유체로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용매로 멜린조 잎을 추출하여 수득한 것을 특징으로 하는 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 식품 조성물.
According to clause 1,
The Melinjo leaf extract is obtained by extracting Melinjo leaves with one or more solvents selected from the group consisting of water, organic solvents having 1 to 6 carbon atoms, subcritical fluids, and supercritical fluids. Improving or preventing muscle disease. For, or food composition for improving muscle function.
제 3 항에 있어서,
상기 유기용매는 탄소수 1 내지 6의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌 클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 및 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군 중에서 선택되는 하나 이상의 용매인 것을 특징으로 하는 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 식품 조성물.
According to claim 3,
The organic solvent includes alcohol having 1 to 6 carbon atoms, acetone, ether, benzene, chloroform, ethyl acetate, methylene chloride, and hexane ( A food composition for improving or preventing muscle disease, or improving muscle function, characterized in that it is one or more solvents selected from the group consisting of hexane, cyclohexane, and petroleum ether.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 근육 질환은 근감소증(sarcopenia), 근위축증(muscular atrophy), 근이영양증(muscular dystrophy), 긴장감퇴증(atony), 근육 퇴화(muscle degeneration), 근무력증(myasthenia) 및 악액질(cachexia)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 식품 조성물.
The method according to any one of claims 1 to 4,
The muscle disease is selected from the group consisting of sarcopenia, muscular atrophy, muscular dystrophy, atony, muscle degeneration, myasthenia, and cachexia. A food composition for improving or preventing muscle disease, or improving muscle function, characterized by one or more of the following:
멜린조 잎을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 치료 또는 예방용 약학 조성물.A pharmaceutical composition for treating or preventing muscle disease containing melinjo leaves as an active ingredient. 멜린조 잎을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 화장료 조성물.A cosmetic composition for improving or preventing muscle disease or improving muscle function containing Melinjo leaves as an active ingredient. 멜린조 잎을 유효성분으로 함유하는 근육 질환 개선 또는 예방용, 또는 근 기능 개선용 사료 첨가제.A feed additive for improving or preventing muscle disease or improving muscle function containing melinjo leaves as an active ingredient.
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