KR20240103324A - Method for rapid decomposition of peracetic acid - Google Patents

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peracetic acid
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권종희
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경상국립대학교산학협력단
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Abstract

본 발명은 과초산을 혼합하는 단계 및 과초산 반응물을 초산, 물 및 산소로 분해시키는 단계를 포함하는 과초산의 분해방법에 관한 것으로서, 본 발명의 과초산 분해방법을 활용하는 경우 멸균과정에서 사용되는 과산화물을 현저히 빠른 속도로 분해할 수 있는 기술적 특징이 있다.The present invention relates to a method for decomposing peracetic acid, including the step of mixing peracetic acid and decomposing the peracetic acid reactant into acetic acid, water, and oxygen. When using the peracetic acid decomposition method of the present invention, it is used in the sterilization process. It has a technical feature that allows it to decompose peroxide at a significantly faster rate.

Description

과초산의 신속한 분해 방법{Method for rapid decomposition of peracetic acid}{Method for rapid decomposition of peracetic acid}

본 발명은 과초산(peracetic acid (CH₃COOOH, PAA))을 물에 혼합하는 단계; 및 상기 혼합물에 차아황산나트륨(Na₂S₂O₄)을 첨가하고 반응시켜 과산화물을 최종적으로 초산(CH₃COOH, AA), 물 및 산소로 분해시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 과초산의 분해방법 및 상기 방법을 이용한 미생물의 배양방법에 관한 것이다.The present invention includes the steps of mixing peracetic acid (CH₃COOOH, PAA) in water; And a method for decomposing peracetic acid, comprising the step of adding sodium hyposulfite (Na₂S₂O₄) to the mixture and reacting to finally decompose peroxide into acetic acid (CH₃COOH, AA), water and oxygen, and microorganisms using the method. It relates to culturing methods.

수중 서식지에서 발견되는 운동성을 가진 단세포 광학성 진핵생물인 유글레나는 식물(광영양)과 동물(종속영양) 특성을 모두 갖고 있으므로 유글레나의 생산과 활용은 오늘날의 인류가 직면한 많은 환경 문제에 대한 해결책을 제공한다.Euglena, a motile, single-celled, optotrophic eukaryote found in aquatic habitats, has both plant (phototrophic) and animal (heterotrophic) characteristics, so its production and utilization is a solution to many environmental problems facing humanity today. provides.

유글레나는 생분해성 플라스틱, 바이오 디젤, 높은 농도의 단백질, 필수 지방산, 비타민C 와 같은 항산화 비타민, 토코페놀(tocopherols) 및 면역력을 높여주는 파라밀론(paramylon)등을 생산하며 이를 식품이나 의약품의 원료로 활용하기 위해서는 배양단계에서 다른 미생물에 오염되지 않게끔 순수하게 배양하여야 한다.Euglena produces biodegradable plastic, biodiesel, high-concentration protein, essential fatty acids, antioxidant vitamins such as vitamin C, tocopherols, and paramylon, which increases immunity, and uses them as raw materials for food and medicine. In order to utilize it, it must be cultured pure so as not to be contaminated with other microorganisms during the cultivation stage.

고압멸균(Autoclaving)은 단일 배양을 실현하기 위한 기존의 방법이지만 이 방법은 열에 민감한 물질 또는 장비를 사용하는 것이 불가능하며 또한 많은 에너지를 소모한다, 즉 산업화 스케일에 적용시 많은 비용이 발생한다. 하지만 화학적 멸균의 경우에는 열에 민감한 물질(플라스틱)도 사용할 수 있다.Autoclaving is an existing method to realize monoculture, but this method does not allow the use of heat-sensitive materials or equipment and also consumes a lot of energy, i.e., it incurs high costs when applied on an industrial scale. However, in the case of chemical sterilization, heat-sensitive materials (plastics) can also be used.

화학적 멸균 방법에는 에탄올(Ethanol solution (CH₃CH₂OH)), 차아염소산나트륨(sodium hypochlorite (NaClO)) 및 과초산(peracetic acid (CH₃COOOH, PAA)) 등을 사용한 방법들이 있으며 그 중에서 과초산을 활용한 화학적 멸균은 강한 산화력 때문에 높은 살생능력을 가진 것으로 알려져 있고 다른 멸균제와 마찬가지로 원하는 미생물을 배양하기 위해선 미생물 접종전에 잔여 과초산을 완벽하게 제거하는 것이 필수적이다.Chemical sterilization methods include methods using ethanol (Ethanol solution (CH₃CH₂OH)), sodium hypochlorite (NaClO), and peracetic acid (CH₃COOOH, PAA). Among them, chemical sterilization using peracetic acid. is known to have a high killing ability due to its strong oxidizing power, and like other sterilants, it is essential to completely remove residual peracetic acid before inoculating the microorganism in order to cultivate the desired microorganism.

과초산의 완벽한 제거를 위해 배양액의 2~3배에 해당하는 멸균수를 가열 또는 여과하는 방법으로 준비하여 세척하거나 철 이온의 촉매 반응을 이용하여 직접 분해하는 비용과 시간이 많이 소요되는 방식이 사용되었다. To completely remove peracetic acid, a costly and time-consuming method is used: prepare and wash sterilized water 2 to 3 times the volume of the culture medium by heating or filtering it, or decompose it directly using the catalytic reaction of iron ions. It has been done.

이러한 문제점을 해결하기 위해 강력한 수용성 환원제를 통해 멸균에 사용된 과초산을 직접적으로 순간 분해할 수 있는 기술을 개발했다. 과초산의 직접분해를 이용한 멸균 공정은 열에 민감한 물질로 이루어진 반응기를 미생물의 배양에 이용할 수 있고 에너지 효율적으로 멸균된 미생물 배지를 제조할 수 있어 경제적인 대규모 미생물 배양이 가능한 장점이 있다.To solve this problem, we developed a technology that can directly and instantaneously decompose the peracetic acid used for sterilization using a strong water-soluble reducing agent. The sterilization process using direct decomposition of peracetic acid has the advantage of being able to use a reactor made of heat-sensitive materials for culturing microorganisms and producing an energy-efficient sterilized microbial medium, enabling economical large-scale microbial culture.

게다가 이 공정은 미생물 생육에 영향을 미치는 고압멸균(autoclave)을 사용했을 때 생길 수 있는 열에 의한 배지성분의 화학적 변화를 피할 수 있다.In addition, this process avoids chemical changes in media components caused by heat that can occur when using autoclave, which affects microbial growth.

강력한 수용성 환원제를 사용하는 방식에 비해 철 촉매에 의한 과초산 용액의 분해는 pH나 EDTA의 여부, 유기질소원의 유무에 따라 제한되고 안정제로 사용되는 인산계 화합물(HEDP(1-Hydroxy Ethylidene-1,1-Diphosphonic Acid))의 유무에 따라 과초산 용액의 분해는 더욱더 느려진다. 그리고 글루코스가 철촉매를 이용한 과초산의 분해에 있어서 촉진제 역할을 한다는 것을 알아냈다.Compared to the method using a strong water-soluble reducing agent, the decomposition of peracetic acid solution using an iron catalyst is limited by pH, EDTA, and the presence or absence of an organic nitrogen source, and is limited by the use of a phosphate-based compound (HEDP (1-Hydroxy Ethylidene-1, Depending on the presence or absence of 1-Diphosphonic Acid)), the decomposition of peracetic acid solution becomes even slower. And it was found that glucose acts as an accelerator in the decomposition of peracetic acid using an iron catalyst.

과초산 용액에 HEDP가 포함되어 있고 배지에 펩톤이나 효모추출물(yeast extract)같은 유기질소원이 있거나 글루코스가 없다면 철 촉매에 의한 과초산의 분해는 굉장히 지연된다.If the peracetic acid solution contains HEDP and the medium contains an organic nitrogen source such as peptone or yeast extract or does not contain glucose, the decomposition of peracetic acid by the iron catalyst is greatly delayed.

그러므로 실제 배양에 철 이온의 촉매 반응을 이용하여 과초산 용액을 시간효율적으로 분해하기위해서는 HEDP를 함유하지 않는 과초산 용액을 사용해야하나 이럴경우 과초산 용액의 안정적인 보관이 어렵고, 배지에 충분한 양의 글루코스를 첨가해야 하는데 이럴경우 글루코스 사용하지 않는 배지에 적용이 어렵고 추가 비용이 발생한다. 또한, 펩톤과 같은 유기질소를 필요로 하는 배지의 경우 과초산 용액의 완전한 분해 이후에 유기질소원을 첨가해야하는데 이런경우 따로 유기질소원을 멸균해야하는 번거로움과 추가로 첨가하는 과정에서 외부오염에 노출될 위험이 커질 수 있다.Therefore, in order to efficiently decompose the peracetic acid solution using the catalytic reaction of iron ions in actual culture, a peracetic acid solution that does not contain HEDP must be used. However, in this case, stable storage of the peracetic acid solution is difficult, and a sufficient amount of glucose is required in the medium. must be added, but in this case it is difficult to apply to media that does not use glucose and additional costs are incurred. In addition, in the case of media that require organic nitrogen, such as peptone, the organic nitrogen source must be added after complete decomposition of the peracetic acid solution. In this case, there is the inconvenience of having to sterilize the organic nitrogen source separately and exposure to external contamination during the additional addition process. The risk may increase.

이러한 문제점을 극복하기 위하여, 본 연구에서는 차아황산나트륨(Na₂S₂O₄)을 이용한 과초산 용액의 순간적인 직접분해 기술을 선보인다.To overcome these problems, this study presents a technology for instantaneous direct decomposition of peracetic acid solution using sodium hyposulfite (Na₂S₂O₄).

차아황산나트륨은 수용성 환원제로 수처리, 수족관 정수기, 가스정화, 세정, 스트리핑에 사용되는 조성물로 강한 환원력을 가지고 있고 강한 환원력에 의한 과초산의 직접분해는 인산계화합물(HEDP), 유기질소원, 글루코스 및 pH 농도에 영향받지 않는다.Sodium hyposulfite is a water-soluble reducing agent used in water treatment, aquarium water purifier, gas purification, cleaning, and stripping. It has strong reducing power. Direct decomposition of peracetic acid by strong reducing power leads to phosphoric acid-based compounds (HEDP), organic nitrogen source, glucose, and pH. Not affected by concentration.

본 발명은 유글레나 배양을 위해 차아황산나트륨에 의한 과초산분해를 사용하는 멸균공정에 적용하고 이 시스템의 생물공정 공학의 일반적인 적용의 잠재력에 대해 논의한다.The present invention is applied to a sterilization process using peracetic acid digestion with sodium hyposulphite for Euglena culture and the potential of this system for general applications in bioprocess engineering is discussed.

이러한 문제점을 해결하기 위하여, 한국공개특허공보 제10-2015-0097295호에 개시된 바와 같이 과초산을 이용한 멸균 방법이 개발되었다. 한국공개특허공보 제10-2015-0097295호는 광을 필요로 하는 미세조류를 순수배양함에 있어서, 과초산을 이용하여 광생물 반응기를 멸균하는 방법을 개시하고 있다. 하지만, 상기 선행문헌에는 차아황산나트륨에 의해 과초산 용액안에 있는 과초산 및 과산화수소(H₂O₂)를 현저히 빠른 속도로 분해할 수 있는 방법에 대해서는 전혀 개시되어 있지 않다.To solve this problem, a sterilization method using peracetic acid was developed as disclosed in Korean Patent Publication No. 10-2015-0097295. Korean Patent Publication No. 10-2015-0097295 discloses a method of sterilizing a photobioreactor using peracetic acid when pure culturing microalgae that require light. However, the above prior literature does not disclose at all a method for decomposing peracetic acid and hydrogen peroxide (H₂O₂) in a peracetic acid solution at a significantly faster rate using sodium hyposulfite.

본 발명의 목적은 과초산을 물에 혼합하는 단계; 및The object of the present invention is to mix peracetic acid with water; and

상기 혼합물에 차아황산나트륨(Na₂S₂O₄)을 첨가하고 반응시켜 과초산 반응물을 최종적으로 초산, 물 및 산소로 분해시키는 단계를 포함하는, 과초산의 분해방법을 제공하는 것이다.To provide a method for decomposing peracetic acid, including the step of adding sodium hyposulfite (Na₂S₂O₄) to the mixture and reacting to finally decompose the peracetic acid reactant into acetic acid, water, and oxygen.

본 발명의 다른 목적은 차아황산나트륨을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는, 과초산 분해용 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a composition for decomposing peracetic acid, characterized in that it contains sodium hyposulfite as an active ingredient.

본 발명의 다른 목적은 배지에 과초산을 첨가하고, 반응시켜 멸균하는 단계; 및Another object of the present invention is to add peracetic acid to the medium and react to sterilize it; and

상기 멸균한 배지에 차아황산나트륨을 첨가하고, 반응시켜 과초산 반응물을 최종적으로 초산, 물 및 산소로 분해시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 배지의 멸균방법을 제공하는 것이다.A method for sterilizing a medium is provided, which includes the step of adding sodium hyposulfite to the sterilized medium and reacting to finally decompose the peracetic acid reactant into acetic acid, water and oxygen.

본 발명의 다른 목적은 생물 반응기에 상기 배지의 멸균방법에 의해 멸균된 배지를 첨가하는 단계; 및 Another object of the present invention is to add a medium sterilized by the above medium sterilization method to a bioreactor; and

상기 첨가된 배지에 미생물을 접종하고, 순수배양하는 단계를 포함하는 미생물의 배양방법을 제공하는 것이다.To provide a method for cultivating microorganisms including the step of inoculating microorganisms into the added medium and culturing them in pure form.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 과초산을 물에 혼합하는 단계; 및In order to achieve the above object, the present invention includes the steps of mixing peracetic acid with water; and

상기 혼합물에 차아황산나트륨(Na₂S₂O₄)을 첨가하고 반응시켜 과초산 반응물을 최종적으로 초산, 물 및 산소로 분해시키는 단계를 포함하는, 과초산의 분해방법을 제공한다.A method for decomposing peracetic acid is provided, comprising the step of adding sodium hyposulfite (Na₂S₂O₄) to the mixture and reacting to finally decompose the peracetic acid reactant into acetic acid, water, and oxygen.

또한, 본 발명의 다른 목적은 차아황산나트륨을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는, 과초산 분해용 조성물을 제공한다.Another object of the present invention is to provide a composition for decomposing peracetic acid, characterized in that it contains sodium hyposulfite as an active ingredient.

또한, 본 발명은 당 및 유기질소원을 포함하는 배지에 과초산을 첨가하고, 반응시켜 멸균하는 단계; 및In addition, the present invention includes the steps of adding peracetic acid to a medium containing sugar and an organic nitrogen source and reacting to sterilize it; and

상기 멸균한 배지에 차아황산나트륨을 첨가하고, 반응시켜 과초산 반응물을 최종적으로 초산, 물 및 산소로 분해시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 배지의 멸균방법을 제공한다.A method for sterilizing a medium is provided, comprising the step of adding sodium hyposulfite to the sterilized medium and reacting to finally decompose the peracetic acid reactant into acetic acid, water and oxygen.

아울러, 본 발명은 생물 반응기에 상기 배지의 멸균방법에 의해 멸균된 배지를 첨가하는 단계; 및 In addition, the present invention includes the steps of adding a medium sterilized by the above medium sterilization method to a bioreactor; and

상기 첨가된 배지에 미생물을 접종하고, 순수배양하는 단계를 포함하는 미생물의 배양방법을 제공한다.A method for cultivating microorganisms is provided, including the step of inoculating microorganisms into the added medium and culturing them in pure form.

본 발명은 과초산 분해 방법 및 상기방법을 이용한 미생물 배양 방법에 관한 것으로서, 본 발명의 방법을 이용하여 미생물을 배양하는 경우 생물반응기와 배지를 열을 이용하지 않고 완벽하게 멸균시킬 수 있으며 멸균된 세척수의 사용 없이 화학적 멸균제로 사용된 배지에 존재하는 과초산 및 과산화수소를 분해시켜 효과적으로 제거할 수 있고, 그 분해시간을 현저하게 단축시켜 미생물 배양공정에 소요되는 시간을 획기적으로 감소시킬 수 있다.The present invention relates to a method for decomposing peracetic acid and a method for cultivating microorganisms using the method. When cultivating microorganisms using the method of the present invention, the bioreactor and medium can be completely sterilized without using heat and sterilized washing water. Without the use of a chemical sterilizer, peracetic acid and hydrogen peroxide present in the medium used as a chemical sterilizer can be decomposed and removed effectively, and the decomposition time can be significantly shortened, dramatically reducing the time required for the microbial culture process.

도 1은 과초산 분해에 있어서 차아황산나트륨을 농도별로 첨가하고 1분뒤에 측정한 과초산, 과산화수소 및 총과산화물(total peroxides)의 분해정도를 그래프로 나타낸 것이다.
도 2은 과초산 분해에 있어서 철 이온, 알칼리금속의 수산화물, EDTA(Ethylenediaminetetraacetic acid) 및 당을 첨가하고 반응시켜 과초산, 과산화수소 및 총과산화물(total peroxides)의 분해정도를 그래프로 나타낸 것이다.
도 3은 과초산 분해에 있어서 유기질소성분(펩톤)을 첨가한 조건에서 철 이온, 알칼리금속의 수산화물, EDTA(Ethylenediaminetetraacetic acid) 및 당을 첨가하고 반응시켜 과초산, 과산화수소 및 총과산화물(total peroxides)의 분해정도를 그래프로 나타낸 것이다.
도 4은 과초산 분해에 있어서 철 이온, 알칼리금속의 수산화물 및 EDTA(Ethylenediaminetetraacetic acid) 첨가하고 반응시켜 과초산, 과산화수소 및 총과산화물(total peroxides)의 분해정도를 그래프로 나타낸 것이다.
Figure 1 is a graph showing the degree of decomposition of peracetic acid, hydrogen peroxide, and total peroxides measured 1 minute after adding sodium hyposulfite at various concentrations in the decomposition of peracetic acid.
Figure 2 is a graph showing the degree of decomposition of peracetic acid, hydrogen peroxide, and total peroxides by adding and reacting iron ions, alkali metal hydroxides, EDTA (Ethylenediaminetetraacetic acid), and sugar in the decomposition of peracetic acid.
Figure 3 shows that in the decomposition of peracetic acid, iron ions, alkali metal hydroxides, EDTA (Ethylenediaminetetraacetic acid), and sugar are added and reacted under the condition of adding an organic nitrogen component (peptone) to produce peracetic acid, hydrogen peroxide, and total peroxides. The degree of decomposition is shown graphically.
Figure 4 is a graph showing the degree of decomposition of peracetic acid, hydrogen peroxide, and total peroxides in the decomposition of peracetic acid by adding and reacting iron ions, alkali metal hydroxides, and EDTA (Ethylenediaminetetraacetic acid).

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 과초산(peracetic acid (CH₃COOOH, PAA))을 물에 혼합하는 단계; 및 The present invention includes the steps of mixing peracetic acid (CH₃COOOH, PAA) in water; and

상기 혼합물에 차아황산나트륨(Na₂S₂O₄)을 첨가하고 반응시켜 과초산 반응물을 최종적으로 초산, 물 및 산소로 분해시키는 단계를 포함하는, 과초산의 분해방법을 제공한다.A method for decomposing peracetic acid is provided, comprising the step of adding sodium hyposulfite (Na₂S₂O₄) to the mixture and reacting to finally decompose the peracetic acid reactant into acetic acid, water, and oxygen.

본 발명의 상기 과초산의 분해 방법에서, 상기 과초산 반응물은 차아황산나트륨에 의해서 분해가 되거나, 차아황산나트륨에 의해서 그 분해가 촉진되는 것을 의미할 수 있다.In the method for decomposing peracetic acid of the present invention, the peracetic acid reactant may be decomposed by sodium hyposulfite, or the decomposition may be promoted by sodium hyposulfite.

본 발명에서 사용된 차아황산나트륨은 수용성 환원제로 수처리, 수족관 정수기, 가스정화, 세정, 스트리핑에 사용되는 조성물로 강한 환원력을 가지고 있고 강한 환원력에 의한 과초산의 직접분해는 적용할 경우 HEDP, 유기질소원, 글루코스의 유무 및 pH 값에 영향받지 않는다.Sodium hyposulfite used in the present invention is a water-soluble reducing agent and is a composition used for water treatment, aquarium water purifier, gas purification, cleaning, and stripping. It has strong reducing power, and when applied to direct decomposition of peracetic acid by strong reducing power, HEDP, organic nitrogen source, It is not affected by the presence or absence of glucose and pH value.

이러한, 상기 과초산의 직접분해는 3.9 mM 과초산, 6.8mM 과산화수소 및 12 mM 차아황산나트륨이 되도록 첨가하고 마그네틱 교반기를 이용해 RPM 40에서 교반하는 경우 최종적으로 초산, 물 및 산소로 분해되며 과초산 및 과산화수소가 완전히 분해되는 시간은 10분 이내, 바람직하게는 5분 이내, 더욱 바람직하게는 1분 이내 일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.In this direct decomposition of peracetic acid, when 3.9mM peracetic acid, 6.8mM hydrogen peroxide and 12mM sodium hyposulfite are added and stirred at RPM 40 using a magnetic stirrer, it is finally decomposed into acetic acid, water and oxygen and peracetic acid and hydrogen peroxide. The time for complete decomposition may be within 10 minutes, preferably within 5 minutes, and more preferably within 1 minute, but is not limited thereto.

본 발명에서 사용된 용어 "멸균(sterilization)"이라 함은 미생물의 영양세포 및 포자를 사멸시키는 것을 의미한다.The term “sterilization” used in the present invention means killing vegetative cells and spores of microorganisms.

본 발명에서 사용된 용어 "과산화물(peroxides)"은 용액속에 포함된 전체 과산화물을 의미할 수 있고, 본 발명의 일 실시예에 있어서 과초산에 물을 혼합한 이후 존재하는 과초산 및 과산화수소를 의미한다.The term "peroxides" used in the present invention may refer to the entire peroxide contained in a solution, and in one embodiment of the present invention, it refers to peracetic acid and hydrogen peroxide present after mixing peracetic acid with water. .

본 발명에서 사용된 용어 "총과산화물(total peroxides)"은 용액속에 포함된 전체 과산화물의 농도 총합을 의미할 수 있고, 본 발명의 일 실시예에 있어서 과초산에 물을 혼합한 이후 존재하는 과초산 및 과산화수소 농도의 총합 수치를 의미한다.The term "total peroxides" used in the present invention may mean the total concentration of all peroxides contained in the solution, and in one embodiment of the present invention, the peracetic acid present after mixing peracetic acid with water and the total value of hydrogen peroxide concentration.

본 발명의 상기 과초산의 분해 방법에서, 상기 과초산은 물과 반응하여 다음과 같이 반응하여 초산과 과산화수소를 형성한다.In the method for decomposing peracetic acid of the present invention, the peracetic acid reacts with water to form acetic acid and hydrogen peroxide as follows.

i) CH₃CO₃H + H₂O → H₂O₂ + CH₃CO₂Hi) CH₃CO₃H + H₂O → H₂O₂ + CH₃CO₂H

한편, 과초산 및 물이 반응하여 생성된 과산화수소는 차아황산나트륨이 환원시켜 최종적으로 하기의 반응식과 같이 초산, 물 및 산소로 분해된다.Meanwhile, hydrogen peroxide produced by the reaction of peracetic acid and water is reduced by sodium hyposulfite and is finally decomposed into acetic acid, water, and oxygen as shown in the reaction equation below.

ii) 2H₂O₂ → 2H₂O + O₂ii) 2H₂O₂ → 2H₂O + O₂

본 발명은 차아황산나트륨(Na₂S₂O₄)을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는, 과초산 분해용 조성물을 제공한다.The present invention provides a composition for decomposing peracetic acid, characterized in that it contains sodium hyposulfite (Na₂S₂O₄) as an active ingredient.

본 발명에 있어서 상기 과초산의 분해방법의 특징적 구성은 과초산 분해용 조성물에 적용가능하고, 미생물의 배양방법을 실시함에 있어서 기술적으로 배치되지 않는 선에서 동일 또는 유사하게 적용가능할 수 있다.In the present invention, the characteristic configuration of the method for decomposing peracetic acid is applicable to a composition for decomposing peracetic acid, and may be applied in the same or similar manner to the method for cultivating microorganisms as long as it is not technically inconvenient.

본발명은 배지에 과초산을 첨가하고, 반응시켜 멸균하는 단계; 및The present invention includes the steps of adding peracetic acid to the medium and reacting to sterilize it; and

상기 멸균한 배지에 차아황산나트륨을 첨가하고, 상기 배지내에서 상기 과초산 및 차아황산나트륨을 반응시켜 과산화물을 최종적으로 초산, 물 및 산소로 분해시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 배지의 멸균방법을 제공한다.A method for sterilizing a medium, comprising the step of adding sodium hyposulfite to the sterilized medium and reacting the peracetic acid and sodium hyposulfite in the medium to finally decompose the peroxide into acetic acid, water and oxygen. to provide.

본 발명에 있어서 상기 배지는 미생물 배양하기 위한 영양원을 의미한다.In the present invention, the medium refers to a nutrient source for culturing microorganisms.

본 발명에 있어서 상기 과초산의 분해방법의 특징적 구성은 배지의 멸균방법에 적용가능하고, 미생물의 배양방법을 실시함에 있어서 기술적으로 배치되지 않는 선에서 동일 또는 유사하게 적용가능할 수 있다.In the present invention, the characteristic configuration of the method for decomposing peracetic acid is applicable to the sterilization method of the medium, and may be applied in the same or similar manner to the method of cultivating microorganisms as long as it is not technically inconvenient.

본 발명에서 상기 영양원은 당 및 유기질소원을 포함할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.In the present invention, the nutritional source may include sugar and organic nitrogen source, but is not limited thereto.

본 발명에 있어서 상기 배지가 포함하는 당은 글루코오스(glucose), 수크로스(sucrose) 및 폐당 일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.In the present invention, the sugar contained in the medium may be glucose, sucrose, and waste sugar, but is not limited thereto.

본 발명에 있어서 상기 배지가 포함하는 유기질소원은 펩톤, Yeast extract, 또는 유청일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.In the present invention, the organic nitrogen source contained in the medium may be peptone, yeast extract, or whey, but is not limited thereto.

본 발명의 상기 방법과 같이 배지를 멸균하면, 분해하기 전까지 고압 멸균하지 않고도, 또한 개방된 용기에 서도 오염되지 않고 오랫동안 보관할 수 있다는 장점이 있다.Sterilizing the medium according to the method of the present invention has the advantage of being able to store it for a long time without high-pressure sterilization before decomposition and without contamination even in an open container.

본 발명은 멸균된 생물 반응기 또는 생물 반응기에 상기 배지의 멸균방법에 의해 멸균된 배지를 첨가하는 단계; 및The present invention includes the steps of adding a sterilized bioreactor or a medium sterilized by the medium sterilization method to a bioreactor; and

상기 첨가된 배지에 미생물을 접종하고, 순수배양하는 단계를 포함하는 미생물의 배양방법을 제공한다.A method for cultivating microorganisms is provided, including the step of inoculating microorganisms into the added medium and culturing them in pure form.

본 발명에 있어서 상기 과초산의 분해방법의 특징적 구성은 미생물의 배양방법에 적용가능하고, 미생물의 배양방법을 실시함에 있어서 기술적으로 배치되지 않는 선에서 동일 또는 유사하게 적용가능할 수 있다.In the present invention, the characteristic configuration of the method for decomposing peracetic acid is applicable to a method for cultivating microorganisms, and may be applied in the same or similar manner to the method for cultivating microorganisms as long as it is not technically inconvenient.

본 발명의 상기 미생물의 배양방법에서, 상기 배양은 해수종, 담수종 등과 같은 미세조류를 배양할 경우와 같이, 광(light)을 필요로 할 수 있다.In the method for cultivating microorganisms of the present invention, the culture may require light, as in the case of culturing microalgae such as seawater species, freshwater species, etc.

본 발명의 상기 미생물의 배양방법에서, 상기 미생물의 예로는 오란티오키토리움 속(Aurantiochytrium sp.), 시조키트리움 속(Schizochytrium sp.) 클로렐라 속(Chlorella sp.), 시네코시스티스 속(Synechocystis sp.), 데바리오미세스 속(Debaryomyces sp.), 효모균군(Yeasts), 유산균군(Lactic acid bacteria), 방선균군(Actinomycetes), 유글레나 속(Euglena sp.), 모티리엘라(Mortierella) 사상균군(dermatophytes), 스피룰리나 속(Spirulina sp.) 및 광합성 세균으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.In the method for cultivating the microorganism of the present invention, examples of the microorganism include Aurantiochytrium sp., Schizochytrium sp., Chlorella sp., and Synechocystis sp. .), Debaryomyces sp., Yeasts, Lactic acid bacteria, Actinomycetes, Euglena sp., Mortierella filamentous bacteria ( dermatophytes), Spirulina sp., and photosynthetic bacteria, but is not limited thereto.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 과초산 용액에 차아황산나트륨(Na₂S₂O₄)을 첨가하고 교반하여 반응시킨 경우 과산화물이 1분 이내에 초산, 물 및 산소로 현저히 빠른 속도로 분해됨을 확인하였다(실험예 1).According to one embodiment of the present invention, when sodium hyposulfite (Na₂S₂O₄) was added to a peracetic acid solution and stirred to react, it was confirmed that peroxide was decomposed into acetic acid, water and oxygen at a significantly faster rate within 1 minute (Experimental Example 1) .

본 발명의 일 실시예에 따르면, 유기질소원(펩톤)을 포함한 과초산 용액에 차아황산나트륨(Na₂S₂O₄)을 첨가한 경우 차아황산나트륨 대신 FeCl₃ EDTA 용액 및 글루코스(glucose) 20 g/L을 첨가하고 5 M NaOH로 pH 농도를 7로 조정하였을 경우에 비해 과초산 및 과산화수소가 현저히 빠른속도로 분해됨을 확인하였다(실험예 1).According to one embodiment of the present invention, when sodium hyposulfite (Na₂S₂O₄) is added to a peracetic acid solution containing an organic nitrogen source (peptone), 20 g/L of FeCl₃ EDTA solution and glucose are added instead of sodium hyposulfite, and 5 M NaOH It was confirmed that peracetic acid and hydrogen peroxide were decomposed at a significantly faster rate compared to when the pH concentration was adjusted to 7 (Experimental Example 1).

본 발명의 일 실시예에 따르면, 펩톤을 포함한 과초산에 FeCl₃ EDTA 용액 및 글루코스(glucose) 20 g/L을 첨가하고 5 M NaOH로 pH 농도를 7로 조정하여 과산화물을 분해하였을 경우 펩톤을 포함하지 않는 경우에 비해 과산화물이 분해되는 속도가 현저히 감소함을 확인하였으나, 펩톤을 포함한 과초산 용액에 차아황산나트륨을 첨가하여 과산화물을 분해하였을 경우 펩톤을 포함하지 않는 경우에 비해 과산화물이 분해되는 속도가 감소하지 않았음을 확인하였다(실험예 1).According to one embodiment of the present invention, when 20 g/L of FeCl₃ EDTA solution and glucose are added to peracetic acid containing peptone and the pH concentration is adjusted to 7 with 5 M NaOH to decompose peroxide, peptone is not included. It was confirmed that the rate of decomposition of peroxide was significantly reduced compared to the case without peptone. However, when sodium hyposulfite was added to a peracetic acid solution containing peptone to decompose peroxide, the rate of decomposition of peroxide did not decrease compared to the case without peptone. It was confirmed that this was not the case (Experimental Example 1).

이하, 본 발명을 실시예에 의하여 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail through examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.However, the following examples illustrate the present invention, and the content of the present invention is not limited by the examples.

실시예 1: 과초산 및 과산화수소의 분해여부 확인Example 1: Confirmation of decomposition of peracetic acid and hydrogen peroxide

1 %(w/w) 1-Hydroxy Ethylidene-1,1-Diphosphonic Acid(HEDP), 3.9 mM 과초산(peracetic acid (CH₃COOOH, PAA)(동명O&C, 160126)) 6.8 mM 과산화수소 및 12 mM 차아황산나트륨(Na₂S₂O₄, 대정화금)이 되도록 각각의 성분을 첨가하고, 마그네틱 교반기를 이용해 RPM 40에서 교반하며 과초산 농도 시험(DPD method) 및 H₂O₂ 농도 시험(TiO-OX method)으로 과초산 및 과산화수소의 분해여부를 측정하였다.1 % (w/w) 1-Hydroxy Ethylidene-1,1-Diphosphonic Acid (HEDP), 3.9 mM peracetic acid (CH₃COOOH, PAA) (Dongmyeong O&C, 160126), 6.8 mM hydrogen peroxide and 12 mM sodium hyposulfite ( Add each ingredient to form Na₂S₂O₄, Daejeong Chemical Gold), stir at RPM 40 using a magnetic stirrer, and check whether peracetic acid and hydrogen peroxide are decomposed through a peracetic acid concentration test (DPD method) and H₂O₂ concentration test (TiO-OX method). was measured.

실시예 2: 펩톤 첨가Example 2: Peptone addition

실시예 1과 동일한 방법으로 실험을 수행하되, 펩톤(peptone) 5 g/L를 첨가하였다.The experiment was performed in the same manner as Example 1, except that 5 g/L of peptone was added.

실시예 3 내지 6: 차아황산나트륨 농도의 차이Examples 3 to 6: Differences in sodium hyposulfite concentration

실시예 1과 동일한 방법으로 실험을 수행하되, 차아황산나트륨의 농도를 각각 3 mM(실시예 3), 6 mM(실시예 4), 9 mM(실시예 5), 15 mM(실시예 6)로 하였다.The experiment was performed in the same manner as in Example 1, except that the sodium hyposulfite concentration was 3mM (Example 3), 6mM (Example 4), 9mM (Example 5), and 15mM (Example 6), respectively. did.

비교예 1: 차아황산나트륨 대신 FeCl₃및 EDTA 첨가Comparative Example 1: Addition of FeCl₃ and EDTA instead of sodium hyposulfite

실시예 1과 동일한 방법으로 실험을 수행하되, 차아황산나트륨 대신 96 μM FeCl₃, 96 μM EDTA 용액 및 글루코스(glucose) 20 g/L을 첨가하고 5 M NaOH로 pH 농도를 7로 조정하였다.The experiment was performed in the same manner as Example 1, but instead of sodium hyposulfite, 96 μM FeCl₃, 96 μM EDTA solution, and 20 g/L of glucose were added, and the pH concentration was adjusted to 7 with 5 M NaOH.

비교예 2: 펩톤 첨가Comparative Example 2: Addition of peptone

비교예 1과 동일한 방법으로 실험을 수행하되, 펩톤(peptone) 5 g/L를 첨가하였다.The experiment was performed in the same manner as Comparative Example 1, except that 5 g/L of peptone was added.

비교예 3: 차아황산나트륨 미첨가 Comparative Example 3: No sodium hyposulfite added

실시예 1과 동일한 방법으로 실험을 수행하되, 차아황산나트륨을 첨가하지 않았다.The experiment was performed in the same manner as Example 1, but sodium hyposulfite was not added.

실험예 1: 차아황산나트륨에 의한 과산화물 분해여부의 확인Experimental Example 1: Confirmation of decomposition of peroxide by sodium hyposulfite

차아황산나트륨에 의한 과산화물 분해여부를 확인하기 위해서, 실시예1 내지 6 및 비교예 1 내지 3과 같은 방법으로 실험을 수행하였다.In order to confirm whether peroxide was decomposed by sodium hyposulfite, experiments were performed in the same manner as Examples 1 to 6 and Comparative Examples 1 to 3.

그 결과, FeCl₃ EDTA 용액 및 글루코스(glucose) 20 g/L을 첨가하고 5 M NaOH로 pH 농도를 7로 조정하여 과산화물을 분해하였을 경우(비교예 1, 도 2)에서는 완전히 분해시키는데 24시간이 소요되었지만, 차아황산나트륨을 이용하여 과산화물을 분해하였을 경우(실시예 1)에는 과산화물을 완전히 분해시키는데 1분이 소요되어 과산화물이 분해되는 속도가 현저히 증가함을 확인할 수 있었고(표 1) 차아황산나트륨을 넣지 않았을 경우(비교예 3)에는 과산화물이 거의 분해되지 않았지만, 첨가하는 차아황산나트륨의 농도가 증가할 수록 과산화물이 분해되는 속도가 증가하는 것을 확인할 수 있었다(표 2, 도 1).As a result, when peroxide was decomposed by adding 20 g/L of FeCl₃ EDTA solution and glucose and adjusting the pH concentration to 7 with 5 M NaOH (Comparative Example 1, Figure 2), it took 24 hours to completely decompose. However, when peroxide was decomposed using sodium hyposulfite (Example 1), it took 1 minute to completely decompose peroxide, confirming that the rate of decomposition of peroxide was significantly increased (Table 1), and when sodium hyposulfite was not added, (Comparative Example 3), peroxide was hardly decomposed, but it was confirmed that the rate of decomposition of peroxide increased as the concentration of sodium hyposulfite added increased (Table 2, Figure 1).

또한, 펩톤이 첨가된 과초산을 FeCl₃, EDTA 용액 및 글루코스(glucose)를 첨가하고 pH 농도를 7로 조정하여 분해하였을 경우(비교예 2, 도 3) 펩톤을 첨가하지 않는 경우(비교예 1, 도 2)에 비해 과산화물이 분해되는 속도가 현저히 감소하였지만, 펩톤이 첨가된 과초산을 차아황산나트륨을 이용하여 분해하였을 경우(실시예 2) 펩톤을 첨가하지 않는 경우(실시예 1)와 과산화물이 분해되는 속도에 차이가 없으므로 차아황산나트륨을 이용한 과산화물의 분해는 유기질소성분의 영향을 받지않는 것을 확인할 수 있었다(표 1).In addition, when peracetic acid to which peptone was added was decomposed by adding FeCl₃, EDTA solution, and glucose and adjusting the pH concentration to 7 (Comparative Example 2, Figure 3), when peptone was not added (Comparative Example 1, Although the rate of decomposition of peroxide was significantly reduced compared to Figure 2), when peracetic acid to which peptone was added was decomposed using sodium hyposulfite (Example 2) and when peptone was not added (Example 1), peroxide was decomposed Since there was no difference in the rate of decomposition, it was confirmed that the decomposition of peroxide using sodium hyposulfite was not affected by organic nitrogen components (Table 1).

실시예 1Example 1 비교예 1Comparative Example 1 비교예 2Comparative Example 2 실시예 2Example 2 timetime P(H)+Na₂S₂O₄P(H)+Na₂S₂O₄ P(H) + F(E) + N + G (20)P(H) + F(E) + N + G (20) P(H) + F(E) + N + G (20) + PeptoneP(H) + F(E) + N + G (20) + Peptone P(H) + Na₂S₂O₄
+ Peptone
P(H) + Na₂S₂O₄
+ Peptone
Minute Minute PAAPAA H₂O₂H₂O₂ PAAPAA H₂O₂H₂O₂ PAAPAA H₂O₂H₂O₂ PAAPAA H₂O₂H₂O₂ 00 3.93.9 6.86.8 3.93.9 6.86.8 3.93.9 6.86.8 3.93.9 6.86.8 1One 00 00 3.93.9 6.86.8 3.93.9 6.86.8 00 00 22 00 00 3.93.9 6.86.8 3.93.9 6.86.8 00 00 55 00 00 3.93.9 6.86.8 3.93.9 6.86.8 00 00 1010 00 00 3.93.9 6.86.8 3.93.9 6.86.8 00 00 720720 00 00 0.10.1 2.32.3 0.70.7 5.65.6 00 00 14401440 00 00 00 00 0.20.2 5.65.6 00 00 28802880 00 00 00 00 0.00.0 5.05.0 00 00

N: NaOH, G: 글루코스, F(E): FeCl+ EDTA, P(H): PAA + H₂O₂+ HEDP 상기 표안의 숫자는 존재하는 과산화물의 농도를 의미하고, 예를 들어 6.8은 6.8 mM의 과산화물이 남아 있음을 의미함N: NaOH, G: Glucose, F(E): FeCl+ EDTA, P(H): PAA + H₂O₂+ HEDP The numbers in the table above indicate the concentration of peroxide present, for example, 6.8 means 6.8 mM peroxide. means remaining

비교예 3Comparative Example 3 실시예 3Example 3 실시예 4Example 4 실시예 5Example 5 실시예 1Example 1 실시예 6Example 6 P(H)P(H) P(H) +
Na₂S₂O₄
(3 mM)
P(H) +
Na₂S₂O₄
(3mM)
P(H) +
Na₂S₂O₄
(6 mM)
P(H) +
Na₂S₂O₄
(6mM)
P(H) +
Na₂S₂O₄
(9 mM)
P(H) +
Na₂S₂O₄
(9mM)
P(H) +
Na₂S₂O₄
(12 mM)
P(H) +
Na₂S₂O₄
(12mM)
P(H) +
Na₂S₂O₄
(15 mM)
P(H) +
Na₂S₂O₄
(15mM)
PAA (mM)PAAs (mM) 3.93.9 1.41.4 00 00 00 00 H₂O₂(mM)H₂O₂(mM) 6.86.8 4.14.1 2.22.2 0.80.8 00 00 Total peroxidesTotal peroxides 10.710.7 5.55.5 2.22.2 0.80.8 00 00

P(H): PAA + H₂O₂+ HEDP 상기 표안의 숫자는 차아황산나트륨 투입 후 1분이 지난 시점에 존재하는 과산화물의 농도를 의미함P(H): PAA + H₂O₂+ HEDP The numbers in the table above indicate the concentration of peroxide present 1 minute after adding sodium hyposulfite.

Claims (15)

과초산을 물에 혼합하는 단계; 및
상기 혼합물에 차아황산나트륨(Na₂S₂O₄)을 첨가하고 반응시켜 과초산 반응물을 최종적으로 초산, 물 및 산소로 분해시키는 단계를 포함하는, 과초산의 분해방법.
Mixing peracetic acid with water; and
A method for decomposing peracetic acid, comprising the step of adding sodium hyposulfite (Na₂S₂O₄) to the mixture and reacting to finally decompose the peracetic acid reactant into acetic acid, water, and oxygen.
제1항에 있어서,
상기 혼합물은 과산화수소 및 과초산을 포함하는, 과초산의 분해방법.
According to paragraph 1,
A method of decomposing peracetic acid, wherein the mixture includes hydrogen peroxide and peracetic acid.
제1항에 있어서,
상기 과초산 반응물은 차아황산나트륨에 의해서 분해되는 것을 특징으로 하는, 과초산의 분해방법.
According to paragraph 1,
A method for decomposing peracetic acid, characterized in that the peracetic acid reactant is decomposed by sodium hyposulfite.
제3항에 있어서,
상기 과초산 반응물은 10분 이내로 분해되는 것을 특징으로 하는, 과초산의 분해방법.
According to clause 3,
A method for decomposing peracetic acid, characterized in that the peracetic acid reactant is decomposed within 10 minutes.
차아황산나트륨을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는, 과초산 분해용 조성물.
A composition for decomposing peracetic acid, characterized in that it contains sodium hyposulfite as an active ingredient.
제5항에 있어서,
상기 과초산은 차아황산나트륨에 의해서 분해되는 것을 특징으로 하는, 과초산 분해용 조성물.
According to clause 5,
A composition for decomposing peracetic acid, characterized in that the peracetic acid is decomposed by sodium hyposulfite.
제5항에 있어서,
상기 분해의 촉진은 과초산이 10분 이내로 분해되는 것을 특징으로 하는, 과초산 분해용 조성물.
According to clause 5,
A composition for decomposing peracetic acid, wherein the acceleration of the decomposition is such that peracetic acid is decomposed within 10 minutes.
배지에 과초산을 첨가하고, 반응시켜 멸균하는 단계; 및
상기 멸균한 배지에 차아황산나트륨을 첨가하고, 반응시켜 과초산 반응물을 최종적으로 초산, 물 및 산소로 분해시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 배지의 멸균방법.
Adding peracetic acid to the medium and reacting to sterilize it; and
A method for sterilizing a medium, comprising the step of adding sodium hyposulfite to the sterilized medium and reacting to finally decompose the peracetic acid reactant into acetic acid, water and oxygen.
제8항에 있어서,
상기 배지는 당 및 유기질소원으로 이루어진 그룹에서 선택된 어느하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는, 배지의 멸균방법.
According to clause 8,
A method of sterilizing a medium, characterized in that the medium contains at least one selected from the group consisting of sugar and organic nitrogen source.
제9항에 있어서,
상기 당은 글루코오스(glucose), 수크로스(sucrose) 및 폐당으로 이루어진 그룹에서 선택된 어느하나 이상을 포함하는, 배지의 멸균방법.
According to clause 9,
A method of sterilizing a medium, wherein the sugar includes at least one selected from the group consisting of glucose, sucrose, and waste sugar.
제9항에 있어서,
상기 유기질소원은 펩톤, Yeast extract 및 유청으로 이루어진 그룹에서 선택된 어느하나 이상을 포함하는, 배지의 멸균방법.
According to clause 9,
A method of sterilizing a medium, wherein the organic nitrogen source includes at least one selected from the group consisting of peptone, yeast extract, and whey.
제8항에 있어서,
상기 과초산 반응물은 과산화수소 및 과초산을 포함하는, 배지의 멸균방법.
According to clause 8,
A method of sterilizing a medium, wherein the peracetic acid reactant includes hydrogen peroxide and peracetic acid.
제8항에 있어서,
상기 과초산 반응물은 차아황산나트륨에 의해서 분해되는 것을 특징으로 하는, 배지의 멸균방법.
According to clause 8,
A method of sterilizing a medium, characterized in that the peracetic acid reactant is decomposed by sodium hyposulfite.
생물 반응기에 상기 제8항의 방법에 의해 멸균된 배지를 첨가하는 단계; 및
상기 첨가된 배지에 미생물을 접종하고, 순수배양하는 단계를 포함하는, 미생물의 배양방법.
Adding a medium sterilized by the method of claim 8 to the bioreactor; and
A method of cultivating microorganisms, comprising the step of inoculating microorganisms into the added medium and culturing them in pure culture.
제14항에 있어서,
상기 미생물은 오란티오키토리움 속(Aurantiochytrium sp.), 시조키트리움 속(Schizochytrium sp.) 클로렐라 속(Chlorella sp.), 시네코시스티스 속(Synechocystis sp.), 데바리오미세스 속 (Debaryomyces sp.), 효모균군(Yeasts), 유산균군(Lactic acid bacteria), 방선균군(Actinomycetes), 유글레나 속(Euglena sp.), 모티리엘라(Mortierella), 사상균군(dermatophytes), 스피룰리나 속(Spirulina sp.) 및 광합성 세균으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상인것을 특징으로 하는, 미생물의 배양방법.
According to clause 14,
The microorganisms include Aurantiochytrium sp., Schizochytrium sp., Chlorella sp., Synechocystis sp., and Debaryomyces sp. , Yeasts, Lactic acid bacteria, Actinomycetes, Euglena sp., Mortierella, dermatophytes, Spirulina sp., and A method of cultivating microorganisms, characterized in that at least one selected from the group consisting of photosynthetic bacteria.
KR1020220185383A 2022-12-27 Method for rapid decomposition of peracetic acid KR20240103324A (en)

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