KR20240081872A - 산사나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 산사나무 뿌리 추출물을 포함하는 지방간 예방, 치료, 또는 개선용 조성물에 관한 것으로, 본 발명자들은 산사나무 뿌리 추출물이 세포 독성 없이 지방 전구 세포 분화를 효과적으로 억제하고, 지방세포 내 지질 축적을 감소시킬 뿐만 아니라, 지방 세포 형성 및 분화에 관여하는 전사인자 또는 아디포넥틴의 발현을 억제함을 확인하였고, 고지방 식이 마우스에서 지방증 저해효과 및 고지방 식이로 인한 간 손상의 개선 효과를 확인하였다. 따라서, 본 발명의 산사나무 뿌리는 지방간 예방, 치료, 또는 개선용 약학적 조성물 및 건강기능식품 등으로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

산사나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical Composition comprising Crataegus pinnatifida root extract as an active ingredient for Preventing or Treating fatty liver}

본 발명은 산사나무(Crataegus pinnatifida) 추출물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 등에 관한 것이다.

비만은 일반적으로 체내에 지방조직이 과다한 상태인 것을 의미하며, 음식물로 섭취한 에너지가 신체활동 등으로 소비한 에너지와 균형을 이루지 못하여 잉여의 에너지가 체지방으로 축적되는 현상이다. 비만은 유전적인 요인, 불규칙한 식습관이나 운동부족 또는 서구화되는 식생활에 의한 환경적인 영향, 우울감, 지루감, 과다한 스트레스에 의한 심리적인 영향, 갑상선이나 부신피질 호르몬 변화에 의한 병적인 요인 등 매우 다양한 원인에 의해 유발되는 것으로 알려져 있다. 최근에는 경제성장과 생활방식의 변화에 따라 식습관에도 많은 변화가 생겨 바쁜 현대인들은 패스트푸드 등의 고열량 식이와 적은 운동량으로 인하여 과체중 및 비만이 증가하고 있는 추세이다.

또한, 비만은 지방세포의 비대에 의해 유발되므로, 지방세포 분화의 억제는 비만 치료에 도움이 될 수 있다. 종래에 지방세포 분화 및 지질 축적의 억제와 관련된 항비만 연구가 보고된 바 있으며, 이 때 3T3-L1 마우스 섬유아세포는 지방 전구세포의 분화를 위한 잘 특성화된 모델로 일반적으로 시험관 내 연구에 사용된다.

한편, 간은 우리 몸에서 대사, 해독 및 배설과 관련하여 가장 중요한 장기이다. 바이러스, 음주, 약물, 영양불량, 비만 등에 의해 간 기능이 저하되는데, 특히 현대인의 고당, 고지방 섭취에 따른 지방간은 나아가 지방간염으로 진행될 수 있다.

지방간은 알코올성 지방간과 비알코올성 지방간으로 나누어지는데, 알코올에 기인하지 않은 지방축적으로 5% 이상 무게가 증가하면 비알코올성 지방간 질환으로 정의한다. 음주와는 무관한 비알코올성 지방간질환(nonalcoholic fatty liver disease)은 전 세계적으로 적게는 6.3%, 많게는 33%가 보고되고 있으며, 적지만 정상체중 성인에게도 비알코올성 지방간병변이 나타나는 것으로 보고되고 있다. 비알코올성 지방간질환은 지방조직으로부터 간으로 유리지방산 흡수가 증가하거나, 간에서 중성지방의 생합성이 증가하여 발생하는데, 특히 인슐린 저항성이 일어나는 경우 지방조직에서 지방분해가 촉진되어 간으로 유입되는 지방산을 증가시키고, 근육세포에서 포도당 이용 장애를 유발하여 고인슐린혈증 및 탄수화물의 지방 전환(de novo lipogenesis)을 증가시켜 간내 지방축적을 더욱 증가시킨다.

비만으로 인한 비알코올성 지방간은 체내의 중성지방이 축적되면서 단순 지방간(steatosis)부터, 증상이 심하면 지방간염(non-alcoholic steatohepatitis)으로 진행되며, 다른 질병과는 달리 일반적 증상 없이 간경변, 간 기능 상실, 간암 등의 복잡하고 점진적 간 손상을 진행시키기 때문에 조기 치료 및 예방이 필요하다.

산사나무(Crataegus pinnatifida)는 장미목 장미과에 해당하는 낙엽 교목으로 국내에서는 전국 산지에서 자생하며 열매의 경우 예로부터 식용 및 약용으로 즐겨 사용되었으나, 산사나무 뿌리에 대해서는 생리활성 효과가 많이 알려진 바가 없다.

이에, 본 발명자들은 산사나무 뿌리 추출물의 지방간 개선 효과를 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.

공개특허 제10-2022-0076653호 등록특허 제10-1931305호

본 발명의 목적은 산사나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 산사나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 산사나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 산사나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 산사나무 뿌리 추출물 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 지방간의 예방, 개선, 또는 치료 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 산사나무 뿌리 추출물 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물의 지방간 예방, 개선, 또는 치료 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 지방간의 예방, 개선, 또는 치료용 약제를 제조하기 위한 산사나무 뿌리 추출물 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물의 용도를 제공한다.

본 발명의 일실시예에서, 상기 산사나무 뿌리 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6개의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane), 석유에테르(petroleum ether), 디클로로메탄(dichloromethane), 아임계 유체, 및 초임계 유체로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매에 의한 추출물일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일실시예에서, 상기 지방간은 비알콜성 지방간일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일실시예에서, 상기 조성물은 고지방식이로 유도된 간 손상을 개선하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일실시예에서, 상기 조성물은 고지방식이군의 혈청 ALT 또는 AST 활성을 감소시키는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일실시예에서, 상기 산사나무 뿌리 추출물은 지방세포 분화 및 성숙에 관여하는 전사인자 또는 아디포넥틴의 발현을 억제하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일실시예에서, 상기 전사인자는 퍼옥시좀 증식제 활성화 수용체 감마(PPARγ), 스테롤 조절인자 결합 단백질-1(SREBP-1) 또는 CCAAT-인핸서 결합 단백질 알파(C/EBPα)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일실시예에서, 상기 식품 조성물은 건강기능성 식품 조성물일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명자들은 산사나무 뿌리 추출물이 세포 독성 없이 지방 전구 세포 분화를 효과적으로 억제하고, 지방세포 내 지질 축적을 감소시킬 뿐만 아니라, 지방 세포 분화 및 성숙에 관여하는 전사인자의 발현을 억제함을 확인하였고, 고지방 식이 마우스에서 고지방 식이로 인한 간 지방증의 저해 및 간 손상의 개선효과를 확인하였다. 따라서 본 발명의 산사나무 뿌리 추출물은 지방간 예방, 치료, 또는 개선용 약학적 조성물 및 건강기능식품 등으로 유용하게 사용될 수 있다.

도 1a는 3T3-L1 지방 전구 세포를 595 nm 흡광도에서 MTT 분석으로 생존력을 측정한 결과를 나타낸 것이다. CON은 CRE와 동일한 양의 DMSO를 처리하였다.
도 1b는 3T3-L1 지방 전구 세포에서 Oil Red O 용액 염색한 후 관찰한 이미지(왼쪽), 및 Oil Red O 용액의 함량을 450 nm 흡광도로 측정한 결과(오른쪽, *p <0.05)를 나타낸 것이다.
도 1c는 3T3-L1 지방 전구 세포 내 트리글리세라이드 함량을 570 nm 흡광도로 측정한 결과를 나타낸 것이다. *p <0.05
도 1d는 3T3-L1 지방 전구 세포에서 Adiponectin, C/EBPα, PPARγ 및 SREBP-1의 mRNA 발현 수준을 측정한 결과이다. *p <0.05
도 1e는 3T3-L1 지방 전구 세포에서 C/EBPα 및 PPARγ의 단백질 발현 수준을 측정한 결과이다. *p <0.05
도 2a는 iWAT, eWAT 및 간 조직을 H&E로 염색하여 지방구를 관찰한 이미지이다.
도 2b는 iWAT 조직에서 SREBP-1 및 PPARγ의 단백질 발현 수준을 측정한 결과이다. *p <0.05
도 2c는 각 마우스 그룹의 간 대표 이미지를 나타낸 것이다.
도 2d는 각 마우스 그룹의 혈장 내 AST 및 ALT 수준을 측정한 결과를 나타낸 것이다. *p <0.05

본 발명자들은 본 발명의 산사나무 뿌리 추출물이 뛰어난 지방간 개선 효과를 가지는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.

본 발명은 산사나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 지방간의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명에서 사용되는 용어 “산사나무(Crataegus pinnatifida for. pinnatifida)”는 장미과 산사나무속에 속하는 낙엽성 소교목으로 국내에서는 전국 산지에서 자생하고 산사나무의 잎과 꽃, 열매, 껍질, 뿌리는 예로부터 식용 또는 약용으로 사용되었다.

본 발명에서 “산사나무 뿌리 추출물”은 상기 산사나무 뿌리의 추출처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.

본 발명의 상기 산사나무 뿌리 추출물에 있어서, 상기 산사나무 뿌리를 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서 상기 산사나무 뿌리를 추출하는 데에 사용되는 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 천연물로부터 추출물을 추출하는 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라, 즉 통상적인 온도, 압력의 조건 하에서 통상적인 용매를 사용하여 추출할 수 있다. 예를 들어, 물, 탄소수 1 내지 6개의 유기용매 및 아임계 또는 초임계 유체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출될 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 6개의 유기용매는 탄소수 1 내지 6개의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 디클로로메탄(dichloromethane), 시클로헥산(cyclohexane) 및 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 일 구현예에 따르면 상기 용매는 50% 내지 100%, 55% 내지 100%, 60% 내지 100%, 65% 내지 100%, 70% 내지 100%, 75% 내지 100%, 80% 내지 100%, 85% 내지 100%, 90% 내지 100%, 95% 내지 100% 또는 100% 메탄올일 수 있으며 바람하게는 100% 메탄올 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 추출방법은 상기 용매를 사용하여 냉침, 온침, 가열 등 통상의 추출방법이 사용 가능하다.

본 발명의 상기 산사나무 뿌리 추출물은 지방세포 분화 및 성숙에 관여하는 전사인자 또는 아디포넥틴의 발현을 억제하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 전사인자는 퍼옥시좀 증식제 활성화 수용체 감마(PPARγ), 스테롤 조절인자 결합 단백질-1(SREBP-1) 또는 CCAAT-인핸서 결합 단백질 알파(C/EBPα)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 산사나무 뿌리 추출물은 지방세포의 분화를 억제하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 산사나무 뿌리 추출물은 세포 내 지질 축적을 감소시키는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일실시예에서는 산사나무 뿌리 추출물이 세포 독성을 야기하지 않고 3T3-L1 지방 전구 세포 분화를 억제하여 지방 함량을 감소시킴을 확인하였다 (실시예 1 참조).

본 발명의 다른 일실시예에서는, 산사나무 뿌리 추출물이 HFD 유도된 비만 마우스에서 지방증의 저해 효과 및 간 손상의 개선 효과를 확인하였다 (실시예 2 참조).

본 발명의 용어, "백색 지방세포"는 중성 지방으로 대량의 지방 에너지를 체내에 축적하는 기능을 갖는 세포로서, 임신말기, 유아기, 사춘기에 집중하여 증식하며, 15배까지 부풀어 올라 지방 비대화 현상의 원인이 되기도 하며, 일반적으로 "지방세포"라 함은 "백색 지방세포"를 의미한다.

본 발명의 용어, "분화(differentiation)"는 세포가 분열 증식하여 성장하는 동안에 서로 구조나 기능이 특수화하는 현상, 즉 생물의 세포, 조직 등이 각각에게 주어진 일을 수행하기 위하여 형태나 기능이 변해가는 것을 말한다. 일반적으로 비교적 단순한 계(系)가 둘 이상의 질적으로 다른 부분계(部分系)로 분리되는 현상이다. 예를 들면, 개체 발생에서 처음에 동질적이었던 알 부분 사이에 머리나 몸통 등의 구별이 생기거나 세포에도 근세포 또는 신경세포 등의 구별이 생기는 것과 같이 처음에 거의 동질이었던 어떤 생물계의 부분 사이에 질적인 차이가 생기는 것, 또는 그 결과로서 질적으로 구별할 수 있는 부역 또는 부분계로 나누어져 있는 상태를 분화라고 한다.

본 발명의 조성물 내의 상기 산사나무 뿌리 추출물의 함량은 질환의 증상, 증상의 진행 정도, 환자의 상태 등에 따라서 적절히 조절 가능하며, 예컨대, 전체 조성물 중량을 기준으로 0.0001 내지 99.9중량%, 또는 0.001 내지 50중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 함량비는 용매를 제거한 건조량을 기준으로 한 값이다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 예를 들어, 희석제, 결합제, 붕해제, 활택제, 흡착제, 보습제, 필름-코팅 물질, 및 제어방출첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 서방형 과립제, 장용과립제, 액제, 점안제, 엘실릭제, 유제, 현탁액제, 주정제, 트로키제, 방향수제, 리모나아데제, 정제, 서방형정제, 장용정제, 설하정, 경질캅셀제, 연질캅셀제, 서방캅셀제, 장용캅셀제, 환제, 틴크제, 연조엑스제, 건조엑스제, 유동엑스제, 주사제, 캡슐제, 관류액, 경고제, 로션제, 파스타제, 분무제, 흡입제, 패취제, 멸균주사용액, 또는에어로졸 등의 외용제 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 외용제는 크림, 젤, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 등의 제형을 가질 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

본 발명에 따른 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 트로키제의 첨가제로 옥수수전분, 감자전분, 밀전분, 유당, 백당, 포도당, 과당, 디-만니톨, 침강탄산칼슘, 합성규산알루미늄, 인산일수소칼슘, 황산칼슘, 염화나트륨, 탄산수소나트륨, 정제 라놀린, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 알긴산나트륨, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 카올린, 요소, 콜로이드성실리카겔, 히드록시프로필스타치, 히드록시프로필메칠셀룰로오스(HPMC), HPMC 1928, HPMC 2208, HPMC 2906, HPMC 2910, 프로필렌글리콜, 카제인, 젖산칼슘, 프리모젤 등 부형제; 젤라틴, 아라비아고무, 에탄올, 한천가루, 초산프탈산셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 포도당, 정제수, 카제인나트륨, 글리세린, 스테아린산, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 히드록시셀룰로오스, 히드록시프로필스타치, 히드록시메칠셀룰로오스, 정제쉘락, 전분호, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제가 사용될 수 있으며, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 옥수수전분, 한천가루, 메칠셀룰로오스, 벤토나이트, 히드록시프로필스타치, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 알긴산나트륨, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 구연산칼슘, 라우릴황산나트륨, 무수규산, 1-히드록시프로필셀룰로오스, 덱스트란, 이온교환수지, 초산폴리비닐, 포름알데히드처리 카제인 및 젤라틴, 알긴산, 아밀로오스, 구아르고무(Guar gum), 중조, 폴리비닐피롤리돈, 인산칼슘, 겔화전분, 아라비아고무, 아밀로펙틴, 펙틴, 폴리인산나트륨, 에칠셀룰로오스, 백당, 규산마그네슘알루미늄, 디-소르비톨액, 경질무수규산 등 붕해제; 스테아린산칼슘, 스테아린산마그네슘, 스테아린산, 수소화식물유(Hydrogenated vegetable oil), 탈크, 석송자, 카올린, 바셀린, 스테아린산나트륨, 카카오지, 살리실산나트륨, 살리실산마그네슘, 폴리에칠렌글리콜(PEG) 4000, PEG 6000, 유동파라핀, 수소첨가대두유(Lubri wax), 스테아린산알루미늄, 스테아린산아연, 라우릴황산나트륨, 산화마그네슘, 마크로골(Macrogol), 합성규산알루미늄, 무수규산, 고급지방산, 고급알코올, 실리콘유, 파라핀유, 폴리에칠렌글리콜지방산에테르, 전분, 염화나트륨, 초산나트륨, 올레인산나트륨, dl-로이신, 경질무수규산 등의 활택제;가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 액제의 첨가제로는 물, 묽은 염산, 묽은 황산, 구연산나트륨, 모노스테아린산슈크로스류, 폴리옥시에칠렌소르비톨지방산에스텔류(트윈에스텔), 폴리옥시에칠렌모노알킬에텔류, 라놀린에텔류, 라놀린에스텔류, 초산, 염산, 암모니아수, 탄산암모늄, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 프롤아민, 폴리비닐피롤리돈, 에칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 시럽제에는 백당의 용액, 다른 당류 혹은 감미제 등이 사용될 수 있으며, 필요에 따라 방향제, 착색제, 보존제, 안정제, 현탁화제, 유화제, 점조제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 유제에는 정제수가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 유화제, 보존제, 안정제, 방향제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 현탁제에는 아카시아, 트라가칸타, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 미결정셀룰로오스, 알긴산나트륨, 히드록시프로필메칠셀룰로오스(HPMC), HPMC 1828, HPMC 2906, HPMC 2910 등 현탁화제가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 계면활성제, 보존제, 안정제, 착색제, 방향제가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 주사제에는 주사용 증류수, 0.9%염화나트륨주사액, 링겔주사액, 덱스트로스주사액, 덱스트로스+염화나트륨주사액, 피이지(PEG), 락테이티드 링겔주사액, 에탄올, 프로필렌글리콜, 비휘발성유-참기름, 면실유, 낙화생유, 콩기름, 옥수수기름, 올레인산에칠, 미리스트산 이소프로필, 안식향산벤젠과 같은 용제; 안식향산나트륨, 살리실산나트륨, 초산나트륨, 요소, 우레탄, 모노에칠아세트아마이드, 부타졸리딘, 프로필렌글리콜, 트윈류, 니정틴산아미드, 헥사민, 디메칠아세트아마이드와 같은 용해보조제; 약산 및 그 염(초산과 초산나트륨), 약염기 및 그 염(암모니아 및 초산암모니움), 유기화합물, 단백질, 알부민, 펩 톤, 검류와 같은 완충제; 염화나트륨과 같은 등장화제; 중아황산나트륨(NaHSO₃)이산화탄소가스, 메타중아황산나트륨(Na₂S₂O₅), 아황산나트륨(Na₂SO₃),질소가스(N₂),에칠렌디아민테트라초산과 같은 안정제; 소디움비설파이드 0.1%, 소디움포름알데히드 설폭실레이트, 치오우레아, 에칠렌디아민테트라초산디나트륨, 아세톤소디움비설파이트와 같은 황산화제; 벤질알코올, 클로로부탄올, 염산프로카인, 포도당, 글루콘산칼슘과 같은 무통화제; 시엠시나트륨, 알긴산나트륨, 트윈 80, 모노스테아린산알루미늄과 같은 현탁화제를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 좌제에는 카카오지, 라놀린, 위텝솔, 폴리에틸렌글리콜, 글리세로젤라틴, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 스테아린산과 올레인산의 혼합물, 수바날(Subanal), 면실유, 낙화생유, 야자유, 카카오버터+콜레스테롤, 레시틴, 라네트왁스, 모노스테아린산글리세롤, 트윈 또는 스판, 임하우젠(Imhausen), 모놀렌(모노스테아린산프로필렌글리콜), 글리세린, 아뎁스솔리두스(Adeps solidus), 부티룸 태고-G(Buytyrum Tego-G), 세베스파마 16 (Cebes Pharma 16), 헥사라이드베이스 95, 코토마(Cotomar), 히드록코테 SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), 히드록코테(Hydrokote) 25, 히드록코테 711, 이드로포스탈 (Idropostal), 마사에스트라리움(Massa estrarium, A, AS, B, C, D, E, I, T), 마사-MF, 마수폴, 마수폴-15, 네오수포스탈-엔, 파라마운드-B, 수포시로(OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L), 좌제기제 IV 타입 (AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299), 수포스탈 (N, Es), 웨코비 (W, R, S, M ,Fs), 테제스터 트리글리세라이드 기제 (TG-95, MA, 57)와 같은 기제가 사용될 수 있다.

경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 복용, 피하 주사, 복강 투여, 정맥 주사, 근육 주사, 척수 주위 공간(경막내) 주사, 설하 투여, 볼점막 투여, 직장 내 삽입, 질 내 삽입, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등에 따라 투여될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중등도 등의 여러 관련 인자와 함께 활성성분인 약물의 종류에 따라 결정된다.

또한, 본 발명은 산사나무 뿌리 추출물 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 지방간의 예방, 개선, 또는 치료 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 산사나무 뿌리 추출물 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물의 지방간 예방, 개선, 또는 치료 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 지방간의 예방, 개선, 또는 치료용 약제를 제조하기 위한 산사나무 뿌리 추출물 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물의 용도를 제공한다.

본 발명에서 “개체”란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐 (mouse), 쥐 (rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서 “투여”란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명에서 “예방”이란 목적하는 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “치료”란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 그에 따른 대사 이상 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미하며, “개선”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.

아울러, 본 발명은 산사나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물을 제공한다.

또한, 산사나무 뿌리 추출물은 지방간의 예방 또는 개선을 목적으로 식품에 첨가될 수 있다.

본 발명에 있어서 식품은 기능성 식품 및 건강기능성 식품을 포함한다.

본 발명의 산사나무 뿌리 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 산사나무 뿌리 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 산사나무 뿌리 추출물은 원료에 대하여 15 중량% 이하, 또는 10 중량% 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당 및 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스 및 수크로오스와 같은 디사카라이드, 덱스트린 및 시클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 및 자일리톨, 소르비톨 및 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL당 일반적으로 약 0.01-0.20g, 또는 약 0.04-0.10g 이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01-0.20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

또한, 본 발명은 산사나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는, 시험관 내(in vitro) 지방세포 분화 억제용 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

실험예 1. 산사나무 뿌리 추출물의 준비

산사나무(Crataegus pinnatifida) 뿌리 추출물은 한국 식물 추출물 은행 (충청북도 오창읍)에서 분양받았다. 추출물은 100% 메탄올로 추출되었으며, 추출 후 추출액을 여과하고 진공 증발 건조 시켰다. 시험관 실험에 사용하기 위하여 획득한 추출물을 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide, 이하 ‘DMSO’)에 50mg/ml로 용해시킨 후 희석하여 사용하였다. 전임상실험의 경우 획득한 추출물을 멸균수에 용해시켜 사용하였다.

실험예 2. 동물 및 산사나무 뿌리 추출물 (CRE) 투여

6 주령 수컷 C57BL/6 마우스는 효창 사이언스 (대한민국, 대구)에서 구입하였다. 마우스는 순응을 위해 25-30 ℃에서 12 시간의 명암 주기에서 2 주 동안 우리에서 사육하였다. 2 주일의 순응 후, 마우스를 식이에 따라 무작위로 5 개의 그룹 (n=7)으로 나누었다; (1) 정상적인 식단 (ND); (2) 고지방 식단(HFD); (3) HFD에 CRE를 1.25 mg/kg/일로 투여; (4) HFD에 CRE를 2.5 mg/kg/일로 투여 및 (5) HFD에 CRE를 5 mg/kg/일로 투여. 음식과 물은 12주동안 무제한으로 제공하였다. 체중과 식이섭취는 2일에 한 번 측정되었고, 추출물은 경구투여로 2일에 한 번 투여하였다. 동물 실험 마지막 날 장기와 혈액을 채취하여 분석에 이용하였다. 동물 실험은 대한민국 대구의 경북대학교 동물병원 동물보호위원회의 승인을 받았다 (승인번호 : KNU 2022-0125).

실험예 3. 조직 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 염색

마우스로부터 서혜부 백색 지방 조직 (inguinal white adipose tissue 이하 ‘iWAT’), 부고환 백색 지방 조직 (epididymal white adipose tissue 이하 ‘eWAT’) 및 간(liver)을 적출한 뒤, 4% 파라포름알데히드(parpaformaldehyde)에 1일 동안 보관하여 조직을 고정한 뒤, 조직을 파라핀에 포매하고 5μm 두께로 절단한 뒤 표준 프로토콜에 따라 H & E로 염색한 다음 현미경으로 검사하였다.

실험예 4. 혈액 생화학 분석

동물실험 12주 마지막 날 희생하였으며, 휙득한 혈액은 3,500rpm에서 15분간 원심분리하여 혈장을 분리해내었다. 혈장 내 AST (Aspartate aminotrasnferase) 및 ALT (Alanine aminotransferase) 수준은 Olympus AU 400 (Olympus Optical, Tokyo, Japan) 분석기를 사용하여 제조업체의 절차에 따라 측정하였다.

실험예 5. 지방 세포 분화

3T3-L1 지방 전구 세포는 10% Bovine calf serum(BCS)가 보충된 둘베코의 변형된 이글 배지(DMEM)에서 유지되었다. 3T3-L1 지방 전구 세포를 100파이 실험접시에 컨플루언스가 80%가 되면 6-웰 플레이트에 시딩하고 2 일 동안 컨플루언스에 도달하도록 성장시켰다. 컨플루언스 후 2 일째에, 지방 세포 분화를 시작하기 위해, 배지를 0.5 mM 3-이소부틸-1-메틸크산틴 (IBMX), 0.25 mM 덱사메타손 (DEX), 1 μg/mL 인슐린, 0.125 mM 인도메타신을 함유하는 분화 배지-I(Differentiaion medium I, DMI)로 변경하였다. 그 후, 분화 배지-II(Differentiaion medium II, DMII)로 6일간 지방세포의 성숙을 유도하여 총 8일간 분화 하였다.

실험예 6. 오일 레드 O 염색

3T3-L1 지방 전구 세포를 CRE의 존재 또는 부재 하에 분화하도록 유도하였다. 분화 8일 차의 지방 세포를 인산 완충 식염수(PBS)로 세척하고, 파라포름알데히드로 고정시킨 뒤 여과된 0.3% 오일 레드 O 용액으로 30분간 상온에서 염색하였다. 이어서, 반응 생성물을 이소프로필알코올에 용해시켰다. 반응의 흡광도는 450 nm에서 측정되었다.

실험예 7. 세포 생존율 분석

3T3-L1 지방 전구 세포를 96-웰 플레이트에 시딩 하였다. 배양한 후, 세포를 48시간 동안 CRE 또는 DMSO로 처리하였다. MTT(3-(4,5)-디메틸티아조-2-일-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드) 용액을 각 웰에 첨가하고 4시간 동안 37℃에서 인큐베이션 하였다. 반응 생성물을 이소프로필알코올에 용해시켰다. 반응의 흡광도는 595 nm에서 측정되었다.

실험예 8. 트리글리세라이드(TG) 분석

3T3-L1 지방 전구 세포를 CRE의 존재 또는 부재 하에 분화하도록 유도하였다. 분화 8일 차의 지방 세포를 인산 완충 식염수(PBS)로 세척하였고, 세포를 5% NP-40 용해 완충액에 용해시켰다. 이 후 Triglyceride assay kit를 사용하여 제조업체의 절차에 따라 측정하였다.

실험예 9. 웨스턴 블롯 분석

분화 8일차의 3T3-L1 지방 전구 세포를 포스파타제 억제제 및 프로테아제 억제제를 함유하는 방사선 면역 침전 분석(RIPA) 용해 완충액으로 용해시켰다. 총 단백질(30 ㎍) 함량을 전기 영동을 통해 10% SDS-폴리아크릴아미드 겔에서 분리하고 니트로셀룰로스 막으로 옮겼다. 막을 1시간 동안 PBS 중의 5% 탈지유로 차단하고, 관련 1차 항체와 함께 4℃에서 밤새 인큐베이션한 후, 막을 TBS-T 완충액으로 10분동안 3회 세척하였다. 이어서 막을 HRP-접합된 이차 항체와 함께 1시간 동안 반응시켰다. 단백질 밴드를 ECL을 사용하여 가시화하고 퓨전 솔로 검출기(Vilber Lourmat, Marne La Vallee, France)에서 검출하였고, β-액틴에 대하여 표준화함으로써 평가되었다.

실험예 10. 실시간 역전사 폴리머라제 연쇄 반응(RT-PCR)

3T3-L1 지방 전구 세포를 6-웰 플레이트에 시딩하여 CRE의 존재 여부에 따라 그룹을 나누어 분화하였다. 분화 8일차의 3T3-L1 세포를 PBS로 세척한 후, 트리졸(Trizol) 시약을 사용하여 세포로부터 총 RNA를 추출하였다. cDNA 라이브러리는 PrimeScript^TM RT 시약 키트(TaKaRa Bio)로 합성하였다. mRNA 발현 수준은 SYBR Green(TOYOBO, Japan)을 사용하여 iCycler iQTM Real-Time PCR Detection System(Bio-Rad Laboratories, USA)에 의해 구현된 cDNA의 분석에 의해 정량화되었고, β-액틴에 대하여 표준화하였으며 상대적 수준의 유전자 발현을 배수로 표시하였다.

실험예 11. 통계 분석

모든 실험은 3회 반복으로 진행하였으며, 통계 분석 데이터는 평균±SEM 및 SD로 표시되고 일원 분산 분석을 사용하여 분석되었다. 0.05 미만의 p-값은 통계적으로 유의한 것으로 간주되었다.

실시예 1. 산사나무 뿌리 추출물(CRE)의 3T3-L1 지방 전구세포에서 지방 세포 분화 억제 효과 확인

3T3-L1 지방 전구 세포에 CRE를 처리하였을 때 지방 세포 분화 억제 효과를 조사하였다. 먼저, 상기 실험예 7의 방법으로 세포 생존율을 분석한 결과, 도 1a에 나타난 바와 같이, CRE는 3T3-L1 세포의 생존율에 영향을 끼치지 않는 점을 확인하였다.

또한, 상기 실험예 6의 방법으로 오일 레드 O 염색을 통해 지방 함량을 분석한 결과, 도 1b에 나타난 바와 같이, 3T3-L1 세포 성숙 과정에서 CRE를 투여한 그룹은 지방 함량이 감소하는 점을 확인하였고, 이는 CRE 농도 의존적으로 감소하는 점을 확인하였다.

또한, 상기 실험예 8을 통해 상기 현상이 3T3-L1 세포의 트리글리세라이드(TG) 함량에도 영향을 미치는지 확인해본 결과, 도 1c에 나타난 바와 같이, CRE 처리시 농도 의존적으로 세포내 TG 함량이 감소하는 점을 확인하였다.

또한, 상기 현상이 분자 수준에서도 재현이 되는지 확인해 보기 위해 상기 실험예 9 및 10의 방법으로 지방 세포 분화 관련 유전자의 발현을 확인해보았다.

도 1d에 나타난 바와 같이, CRE를 처리하였을 때 지방 세포 분화에 관여하는 유전자인 아디포넥틴, C/EBPα, PPARγ. SREBP-1의 mRNA발현이 농도 의존적으로 감소하는 점을 확인하였고, 도 1e에 나타난 바와 같이, CRE를 처리하였을 때 C/EBPα, PPARγ의 단백질 발현도 감소한 점을 확인하였다.

종합하면, 이러한 결과는 CRE는 세포 독성을 야기하지 않고 지방 전구 세포 분화 억제를 통한 항비만 효과를 나타내는바, 지방간의 개선 또는 치료에 이용될 수 있음을 시사한다.

실시예 2. HFD 유도된 비만 마우스에서 CRE의 지방증 저해 효과 및 간 손상 개선 효과

CRE의 생체 내에서의 지방증 저해 효과를 확인하고자, HFD 유도된 비만 마우스의 iWAT, eWAT, 간에서 CRE 투여를 통한 지방구 크기 변화를 조사하였다.

상기 실험예 3의 방법으로 마우스의 iWAT, eWAT 및 간 조직을 H&E로 염색하고 관찰한 결과, 도 2a에 나타난 바와 같이, HFD 대비 CRE 처리군에서 지방구의 크기가 유의하게 감소한 것을 확인하였다.

또한, 상기 결과가 CRE의 지방세포 분화 관련 유전자 조절에 기인한 것인지 확인해보았다.

그 결과 도 2b에 나타난 바와 같이, iWAT에서 CRE 처리를 통해 SREBP-1의 발현이 감소한 것을 확인하였고, SREBP-1의 하류영역인 PPARγ의 발현 또한 감소한 것을 확인하였다.

또한, 앞서 CRE 처리를 통해 간에서 지방구의 크기가 감소한 것을 확인한 바, CRE의 HFD로 유도된 간 손상의 개선 효과 여부를 확인하였다.

그 결과 도 2c에 나타난 바와 같이, CRE를 처리할 경우 HFD로 유도된 간의 손상된 형태가 개선되는 것을 확인하였다.

또한, 상기 실험예 4의 방법으로 상기 간 손상의 개선을 AST, ALT 지표를 통해서도 확인해본 결과, 도 2d에 나타난 바와 같이, 혈장 내 AST, ALT 수치도 CRE 처리시 유의적으로 감소한 것을 확인하였으며 특히 ALT의 경우 그 감소폭이 큰 것을 확인하였다.

상기 결과는 CRE가 HFD로 유도된 비만 마우스에서 간의 지방증 저해 및 HFD로 유도된 간 손상을 개선하는데 도움이 됨을 시사한다.

이상의 실시예를 종합하여, 본 발명자들은 산사나무 뿌리 추출물이 세포 독성 없이 지방 전구 세포 분화를 효과적으로 억제하고, 지방세포 내 지질 축적을 감소시킬 뿐만 아니라, 지방 세포 분화 및 성숙에 관여하는 전사인자 또는 아디포넥틴의 발현을 억제함을 확인하였고, 고지방 식이 마우스에서 고지방 식이로 인한 간의 지방증 저해 및 간 손상 개선을 확인하였는바, 이러한 결과는 산사나무 뿌리 추출물을 지방간의 예방, 치료, 또는 개선을 위한 약제 및 건강기능식품과 이들의 개발을 위한 물질에 이용할 수 있음을 보여준다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (15)

1. 산사나무(Crataegus pinnatifida) 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는, 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6개의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane), 석유에테르(petroleum ether), 디클로로메탄(dichloromethane), 아임계 유체, 및 초임계 유체로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매에 의한 추출물인 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 지방간은 비알콜성 지방간인, 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 고지방식이로 유도된 간 손상을 개선하는 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 고지방식이군의 혈청 ALT 또는 AST 활성을 감소시키는 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
6. 제1항에 있어서,
   상기 산사나무 뿌리 추출물은 지방세포 분화 및 성숙에 관여하는 전사인자 또는 아디포넥틴의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
7. 제6항에 있어서,
   상기 전사인자는 퍼옥시좀 증식제 활성화 수용체 감마(PPARγ), 스테롤 조절인자 결합 단백질-1(SREBP-1) 또는 CCAAT-인핸서 결합 단백질 알파(C/EBPα)인 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
8. 산사나무 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는, 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
   
9. 제8항에 있어서,
   상기 조성물은 건강기능성 식품 조성물인 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
   
10. 제8항에 있어서,
    상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6개의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane), 석유에테르(petroleum ether), 디클로로메탄(dichloromethane), 아임계 유체, 및 초임계 유체로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매에 의한 추출물인 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
    
11. 제8항에 있어서,
    상기 지방간은 비알콜성 지방간인, 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
    
12. 제8항에 있어서,
    상기 조성물은 고지방식이로 유도된 간 손상을 개선하는 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
    
13. 제8항에 있어서,
    상기 조성물은 고지방식이군의 혈청 ALT 또는 AST 활성을 감소시키는 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
    
14. 제8항에 있어서,
    상기 산사나무 뿌리 추출물은 지방세포 분화 및 성숙에 관여하는 전사인자 또는 아디포넥틴의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
    
15. 제14항에 있어서,
    상기 전사인자는 퍼옥시좀 증식제 활성화 수용체 감마(PPARγ), 스테롤 조절인자 결합 단백질-1(SREBP-1) 또는 CCAAT-인핸서 결합 단백질 알파(C/EBPα)인 것을 특징으로 하는, 지방간의 예방 또는 개선용 식품 조성물.