KR20240067143A - Powder-type adhesive hemostatic agent and method of preparing same - Google Patents
Powder-type adhesive hemostatic agent and method of preparing same Download PDFInfo
- Publication number
- KR20240067143A KR20240067143A KR1020220142899A KR20220142899A KR20240067143A KR 20240067143 A KR20240067143 A KR 20240067143A KR 1020220142899 A KR1020220142899 A KR 1020220142899A KR 20220142899 A KR20220142899 A KR 20220142899A KR 20240067143 A KR20240067143 A KR 20240067143A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- powder
- type adhesive
- das
- hemostatic agent
- starch
- Prior art date
Links
- 229940030225 antihemorrhagics Drugs 0.000 title claims abstract description 67
- 239000002874 hemostatic agent Substances 0.000 title claims abstract description 67
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 title claims abstract description 59
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 title claims abstract description 57
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 239000001254 oxidized starch Substances 0.000 claims abstract description 42
- 235000013808 oxidized starch Nutrition 0.000 claims abstract description 42
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 claims abstract description 38
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 claims abstract description 37
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims abstract description 32
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 22
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 16
- 229940043430 calcium compound Drugs 0.000 claims abstract description 12
- 150000001674 calcium compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229920002085 Dialdehyde starch Polymers 0.000 claims description 150
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 136
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 136
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 136
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 claims description 71
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 claims description 71
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 37
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 37
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 37
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N glyoxal Chemical group O=CC=O LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 16
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 15
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 14
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 14
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 14
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 12
- 229940015043 glyoxal Drugs 0.000 claims description 9
- ZNZYKNKBJPZETN-WELNAUFTSA-N Dialdehyde 11678 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1[C@H](C[C@H](/C(=C/O)C(=O)OC)[C@@H](C=C)C=O)NCC2 ZNZYKNKBJPZETN-WELNAUFTSA-N 0.000 claims description 8
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 8
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 claims description 8
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 claims description 8
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 8
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 8
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 claims description 8
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 claims description 8
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 claims description 8
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 claims description 8
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 claims description 8
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 claims description 8
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 claims description 8
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 claims description 8
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 8
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 claims description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 8
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 8
- 229940068984 polyvinyl alcohol Drugs 0.000 claims description 8
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 claims description 8
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 7
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 6
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 6
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N calcium nitrate Chemical compound [Ca+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ZCCIPPOKBCJFDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 6
- 229920002201 Oxidized cellulose Polymers 0.000 claims description 5
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 5
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 5
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 claims description 5
- 229940107304 oxidized cellulose Drugs 0.000 claims description 5
- 239000000376 reactant Substances 0.000 claims description 5
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 4
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 4
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 4
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims description 4
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 4
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 claims description 4
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 claims description 4
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 claims description 4
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 claims description 4
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 claims description 4
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 claims description 4
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 4
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 claims description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 claims description 4
- 239000001814 pectin Substances 0.000 claims description 4
- 229960000292 pectin Drugs 0.000 claims description 4
- 229920001690 polydopamine Polymers 0.000 claims description 4
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 claims description 4
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 claims description 3
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 claims description 3
- 239000005997 Calcium carbide Substances 0.000 claims description 3
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000011837 N,N-methylenebisacrylamide Substances 0.000 claims description 3
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 claims description 3
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 claims description 3
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 claims description 3
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 claims description 3
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 claims description 3
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 claims description 3
- VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L calcium acetate Chemical compound [Ca+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 239000001639 calcium acetate Substances 0.000 claims description 3
- 235000011092 calcium acetate Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960005147 calcium acetate Drugs 0.000 claims description 3
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 claims description 3
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 claims description 3
- JGIATAMCQXIDNZ-UHFFFAOYSA-N calcium sulfide Chemical compound [Ca]=S JGIATAMCQXIDNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- -1 glutaraldehye Natural products 0.000 claims description 3
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 claims description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 3
- CLZWAWBPWVRRGI-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2-[2-[2-[2-[bis[2-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-2-oxoethyl]amino]-5-bromophenoxy]ethoxy]-4-methyl-n-[2-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-2-oxoethyl]anilino]acetate Chemical compound CC1=CC=C(N(CC(=O)OC(C)(C)C)CC(=O)OC(C)(C)C)C(OCCOC=2C(=CC=C(Br)C=2)N(CC(=O)OC(C)(C)C)CC(=O)OC(C)(C)C)=C1 CLZWAWBPWVRRGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims description 3
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 claims description 3
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 claims description 3
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 claims description 3
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 claims description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 abstract description 30
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 22
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 22
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 abstract description 21
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 abstract description 20
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 abstract description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 142
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 30
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 29
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 19
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 18
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 12
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 12
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 description 11
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 9
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 9
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 description 8
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 8
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 8
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine hydrochloride Chemical compound Cl.ON WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 6
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 6
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 5
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000002149 energy-dispersive X-ray emission spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 4
- 208000031737 Tissue Adhesions Diseases 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- SFMJNHNUOVADRW-UHFFFAOYSA-N n-[5-[9-[4-(methanesulfonamido)phenyl]-2-oxobenzo[h][1,6]naphthyridin-1-yl]-2-methylphenyl]prop-2-enamide Chemical compound C1=C(NC(=O)C=C)C(C)=CC=C1N1C(=O)C=CC2=C1C1=CC(C=3C=CC(NS(C)(=O)=O)=CC=3)=CC=C1N=C2 SFMJNHNUOVADRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 3
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 3
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 3
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 3
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001241 acetals Chemical class 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 3
- 238000000445 field-emission scanning electron microscopy Methods 0.000 description 3
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 3
- 238000009616 inductively coupled plasma Methods 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- MKYBYDHXWVHEJW-UHFFFAOYSA-N N-[1-oxo-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propan-2-yl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(C(C)NC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 MKYBYDHXWVHEJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VCUFZILGIRCDQQ-KRWDZBQOSA-N N-[[(5S)-2-oxo-3-(2-oxo-3H-1,3-benzoxazol-6-yl)-1,3-oxazolidin-5-yl]methyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C1O[C@H](CN1C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1)CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F VCUFZILGIRCDQQ-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 2
- 230000006624 extrinsic pathway Effects 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 2
- WCDDVEOXEIYWFB-VXORFPGASA-N (2s,3s,4r,5r,6r)-3-[(2s,3r,5s,6r)-3-acetamido-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5,6-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WCDDVEOXEIYWFB-VXORFPGASA-N 0.000 description 1
- LPZOCVVDSHQFST-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-3-ethylpyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C(=NN(C=1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2)CC LPZOCVVDSHQFST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYELSNVLZVIGTI-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-5-ethylpyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C=NN(C=1CC)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 FYELSNVLZVIGTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMUDPLZKKRQECS-UHFFFAOYSA-K 3-[18-(2-carboxyethyl)-8,13-bis(ethenyl)-3,7,12,17-tetramethylporphyrin-21,24-diid-2-yl]propanoic acid iron(3+) hydroxide Chemical compound [OH-].[Fe+3].[N-]1C2=C(C)C(CCC(O)=O)=C1C=C([N-]1)C(CCC(O)=O)=C(C)C1=CC(C(C)=C1C=C)=NC1=CC(C(C)=C1C=C)=NC1=C2 BMUDPLZKKRQECS-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 description 1
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 description 1
- 206010060964 Arterial haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 1
- 150000004753 Schiff bases Chemical class 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001586 anionic polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000004836 anionic polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-QIUUJYRFSA-N beta-D-glucuronic acid Chemical group O[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-QIUUJYRFSA-N 0.000 description 1
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 125000000600 disaccharide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229910052732 germanium Inorganic materials 0.000 description 1
- GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N germanium atom Chemical compound [Ge] GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229940109738 hematin Drugs 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 229940014041 hyaluronate Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000006623 intrinsic pathway Effects 0.000 description 1
- TWNIBLMWSKIRAT-VFUOTHLCSA-N levoglucosan Chemical group O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2CO[C@@H]1O2 TWNIBLMWSKIRAT-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N pyrrolidin-2-one Chemical compound O=C1CCCN1 HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 description 1
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- YFDSDPIBEUFTMI-UHFFFAOYSA-N tribromoethanol Chemical compound OCC(Br)(Br)Br YFDSDPIBEUFTMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950004616 tribromoethanol Drugs 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/04—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices containing macromolecular materials
- A61L24/043—Mixtures of macromolecular materials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/001—Use of materials characterised by their function or physical properties
- A61L24/0015—Medicaments; Biocides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/02—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices containing inorganic materials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
- A61L24/04—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices containing macromolecular materials
- A61L24/08—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
- A61L2400/04—Materials for stopping bleeding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Surgery (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
본 발명은 파우더형 점착성 지혈제 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 보다 구체적으로, 전분을 산화시킨 산화 전분과 생체적합성 고분자를 가교제에 의해 가교시킨 지혈제에 관한 것으로, 높은 점착력을 가지며, 혈액 흡수율이 우수한 것에 특징이 있다. 특히, 제1 고분자는 조직에 대한 초기점착력을 제공하고, 산화 전분은 조직에 존재하는 단백질 등과 2차적인 공유결합을 형성함으로써 점착력을 유지하도록 고안되었다.
또한, 칼슘화합물과 지혈물질을 더 포함함으로써 혈액 응고능이 우수하며, 빠른 지혈시간과 적은 출혈량으로 뛰어난 지혈 효과를 제공할 수 있다.The present invention relates to a powder-type adhesive hemostatic agent and a method for manufacturing the same. More specifically, it relates to a hemostatic agent obtained by cross-linking oxidized starch and a biocompatible polymer using a cross-linking agent, which has high adhesive strength and excellent blood absorption rate. There is a characteristic. In particular, the first polymer provides initial adhesion to the tissue, and the oxidized starch is designed to maintain adhesion by forming secondary covalent bonds with proteins present in the tissue.
In addition, by further containing calcium compounds and hemostatic substances, it has excellent blood coagulation ability and can provide excellent hemostatic effects with a quick hemostasis time and small amount of bleeding.
Description
본 발명은 파우더형 점착성 지혈제 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 보다 구체적으로, 전분을 산화시킨 산화 전분과 생체적합성 고분자를 가교제에 의해 가교시킨 지혈제에 관한 것으로, 높은 점착력을 가지며, 혈액 흡수율이 우수한 것에 특징이 있다. 특히, 산화 전분과 수소결합을 이루며 지혈제로서 초기 조직점착력을 부여하는 생체적합성 고분자를 함유하고, 뒤 이어 산화 전분에 의한 조직 단백질과의 공유결합을 유도함으로서 지혈제의 조직점착력을 오래 유지하여 재출혈을 억제하는 효과가 있다.The present invention relates to a powder-type adhesive hemostatic agent and a method for manufacturing the same. More specifically, it relates to a hemostatic agent obtained by cross-linking oxidized starch and a biocompatible polymer using a cross-linking agent, which has high adhesive strength and excellent blood absorption rate. There is a characteristic. In particular, it contains a biocompatible polymer that forms hydrogen bonds with oxidized starch and provides initial tissue adhesion as a hemostatic agent, and subsequently induces covalent bonding with tissue proteins by oxidized starch to maintain the tissue adhesion of the hemostatic agent for a long time, preventing rebleeding. It has a deterrent effect.
또한, 칼슘화합물과 지혈물질을 더 포함함으로써 혈액 응고능이 우수하며, 빠른 지혈시간과 적은 출혈량으로 뛰어난 지혈 효과를 제공할 수 있다.In addition, by further containing calcium compounds and hemostatic substances, it has excellent blood coagulation ability and can provide excellent hemostatic effects with a quick hemostasis time and small amount of bleeding.
혈액은 외부적, 내부적 요인에 의하여 출혈(hemorrhaging)이 발생할 수 있으며, 출혈이 일어나게 되면 혈관벽의 손상으로 인하여 혈관의 콜라겐을 노출시키게 되고, 콜라겐을 움직이게 하여 지혈(hemostasis)로 이어지게 된다.Hemorrhaging of blood may occur due to external or internal factors. When bleeding occurs, the collagen in the blood vessel is exposed due to damage to the blood vessel wall, causing the collagen to move, leading to hemostasis.
지혈은 혈관벽, 혈소판, 응고인자 및 섬유소 용해 시스템 간의 상호 작용에 따라 복잡한 과정을 이루고 있으며, 혈관 내피의 손상으로 인해 조직액이 혈액으로 들어와 작용하는 외인성 경로와, 혈액 내의 응고인자들로 인한 내인성 경로를 통해 이루어진다. 지혈은 또한 1차 지혈과 2차 지혈로 구분된다. 먼저 출혈이 발생하면 혈관 수축이 일어나면서 혈류량을 감소시킨다. 1차 지혈은 혈관의 상처 부위에 혈소판이 모여들게 되고 혈소판 마개를 형성하여 발생한 상처를 막게 된다. 2차 지혈은 혈소판 마개를 견고하게 하여 완전한 지혈을 한다. 이 두 가지 과정은 거의 동시에 이루어지게 된다.Hemostasis is a complex process depending on the interaction between the blood vessel wall, platelets, coagulation factors, and the fibrinolytic system. It consists of an extrinsic pathway, in which tissue fluid enters the blood due to damage to the vascular endothelium, and an intrinsic pathway, due to coagulation factors in the blood. It is accomplished through Hemostasis is also divided into primary hemostasis and secondary hemostasis. First, when bleeding occurs, blood vessels constrict and blood flow decreases. Primary hemostasis occurs when platelets gather at the wound site of a blood vessel and form a platelet plug to close the resulting wound. Secondary hemostasis ensures complete hemostasis by strengthening the platelet plug. These two processes occur almost simultaneously.
일반적으로 발생하는 출혈은 체내 지혈 작용으로 인해 충분히 지혈될 수 있지만, 수술 중 출혈은 환자에게 심각한 결과를 나타낼 수 있으므로 지혈제의 사용은 필수적이게 된다.Generally, bleeding that occurs can be sufficiently hemostatic due to the body's hemostatic function, but bleeding during surgery can have serious consequences for the patient, so the use of hemostatic agents becomes essential.
지혈제는 일반적으로 기계적, 열/에너지 기반, 화학적 방법으로 분류될 수 있을 뿐만 아니라, 거즈, 스펀지, 시트, 하이드로젤, 파우더 등 다양한 형태로도 분류될 수 있다. 스펀지나 거즈 형태의 지혈제는 넓은 출혈부위에 적용한 후 간단히 압력을 주어 많은 양의 혈액을 흡수하면서 지혈할 수 있지만 활발한 동맥 출혈에 사용한다면 지혈제가 떨어져 나갈 수 있으며 제거 시 재출혈, 감염, 약한 지혈능의 문제가 있다. 하이드로젤 형태의 지혈제는 형태에 따른 제약이 없고, 좁고 깊은 곳에 사용할 수 있다는 장점을 가지고 있지만 바이러스의 감염이나 저장문제와 사용자의 숙련도가 어느 정도 필요하다는 단점이 있다. 파우더 형태의 지혈제는 표면적이 넓고 복잡한 구조를 갖는 출혈 부위에도 도입하기가 쉬우며 사용과 보관에 있어 다른 형태의 지혈제의 비해 편하다는 장점이 있다. 하지만 파우더형 지혈제의 경우 상대적으로 낮은 지혈능을 가지고 있으며 상처부위에 도입시 떨어져 나갈 수 있다는 단점을 가지고 있다.Hemostatic agents can generally be classified into mechanical, heat/energy-based, and chemical methods, as well as various forms such as gauze, sponge, sheet, hydrogel, and powder. Hemostatic agents in the form of sponges or gauze can be applied to a large bleeding area and then simply apply pressure to stop bleeding while absorbing a large amount of blood. However, if used for active arterial bleeding, the hemostatic agents may fall off, and upon removal, they may cause rebleeding, infection, and weak hemostatic properties. There is a problem. Hemostatic agents in the form of hydrogels have the advantage of not being restricted by shape and being able to be used in narrow and deep areas, but they have the disadvantages of virus infection, storage problems, and the need for some level of skill on the part of the user. Powder-type hemostatic agents have the advantage of being easy to introduce into bleeding areas with a large surface area and complex structure, and being more convenient to use and store than other types of hemostatic agents. However, powder-type hemostatic agents have a relatively low hemostatic ability and have the disadvantage that they may fall off when applied to the wound area.
이러한 지혈제는 여러 가지 종류의 재료를 이용하여 제작되고 있다. 그 중 히알루론산은 생체적합성, 생분해성, 비면역원성 및 친수성의 고유한 특성으로 인하여 약물전달, 조직 재생 및 상처 치유에 광범위하게 사용되고 있으며, 특히 수분 보유 및 젤화 특성으로 지혈 과정 촉진, 염증 매개, 염증 감소 및 재상피화 과정 가속화와 같은 지혈제로서 큰 장점을 갖는다. 그러나 약한 접착 특성으로 인하여 상처 부위에 달라붙는 것이 힘들고 약한 기계적 성질과 체내에서 히알루론산 분해 효소에 인하여 쉽게 분해되는 단점이 있다.These hemostatic agents are manufactured using various types of materials. Among them, hyaluronic acid is widely used in drug delivery, tissue regeneration, and wound healing due to its unique characteristics of biocompatibility, biodegradability, non-immunogenicity, and hydrophilicity. In particular, hyaluronic acid promotes the hemostatic process due to its moisture retention and gelling properties, mediates inflammation, and It has great advantages as a hemostatic agent, such as reducing inflammation and accelerating the re-epithelialization process. However, due to its weak adhesive properties, it is difficult to stick to the wound area, and it has weak mechanical properties and is easily decomposed by hyaluronic acid decomposing enzyme in the body.
이와 관련하여 대한민국 등록특허 제10-2260452호는 흡수성 체내용 지혈조성물의 제조방법 및 그에 따라 제조된 지혈조성물에 대하여 개시하고 있다.In this regard, Republic of Korea Patent No. 10-2260452 discloses a method of manufacturing an absorbable hemostatic composition for internal use and a hemostatic composition prepared thereby.
본 발명은 상기한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로써, 전분을 산화시킨 산화 전분을 포함하여 점착력이 높은 파우더형 점착성 지혈제를 제공하는 것에 있다. 이때, 조직점착력이 우수한 생체고분자를 적용하여 지혈 초기의 조직점착력을 제공하고, 산화 전분은 조직 단백질과의 공유결합에 의한 2차적인 점착성을 제공하도록 설계 되었다.The present invention was devised to solve the problems of the prior art described above, and its object is to provide a powder-type adhesive hemostatic agent with high adhesiveness containing oxidized starch obtained by oxidizing starch. At this time, biopolymers with excellent tissue adhesion were applied to provide tissue adhesion in the early stage of hemostasis, and oxidized starch was designed to provide secondary adhesion through covalent bonding with tissue proteins.
또한 본 발명은 산화 전분과 생체적합성 고분자를 가교시켜 혈액 흡수율이 우수한 파우더형 점착성 지혈제를 제공하는 것에 있다.In addition, the present invention aims to provide a powder-type adhesive hemostatic agent with excellent blood absorption rate by crosslinking oxidized starch and biocompatible polymer.
또한 본 발명은 혈액 응고능이 우수하며, 빠른 지혈시간 및 적은 출혈량으로 뛰어난 지혈 효과를 나타내는 파우더형 점착성 지혈제 및 이의 제조방법을 제공하는 것에 있다.Another object of the present invention is to provide a powder-type adhesive hemostatic agent that has excellent blood coagulation ability and exhibits excellent hemostatic effect with a quick hemostatic time and low bleeding amount, and a method for manufacturing the same.
전술한 기술적 과제를 달성하기 위한 기술적 수단으로써, 본 발명의 일 측면은, As a technical means for achieving the above-described technical problem, one aspect of the present invention is,
산화 전분(oxidized starch); 및 생체적합성 고분자;를 포함하고, 상기 생체적합성 고분자는 제1 고분자 및 제2 고분자를 포함하며, 상기 산화 전분과 상기 제1 고분자가 수소결합으로 점착된 복합체가 상기 제2 고분자와 공유결합하며 서로 가교된 것인 파우더형 점착성 지혈제가 제공된다.oxidized starch; and a biocompatible polymer; wherein the biocompatible polymer includes a first polymer and a second polymer, and a complex in which the oxidized starch and the first polymer are adhered by hydrogen bonding is covalently bonded to the second polymer and is bonded to each other. A powder-type adhesive hemostatic agent that is cross-linked is provided.
또한, 상기 산화 전분은 디알데히드 전분(dialdehyde starch)을 포함하는 것일 수 있다.Additionally, the oxidized starch may include dialdehyde starch.
또한, 상기 생체적합성 고분자는 히알루론산, 콜라겐, 키토산, 전분, 셀룰로오스, 산화 셀룰로오스(oxidized cellulose), 알지네이트, 젤라틴, 폴리비닐알코올(PVA), 알긴산, 펙틴, 카라기난, 덱스트란, 아가로스, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 폴리에틸렌글리콜(PEG), 히드록시프로필셀룰로스(HPC), 히드록시에틸셀룰로스(HEC), 히드록시프로필메틸셀룰로스(HPMC), 풀루란(pullulan) 및 폴리아크릴산으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다.In addition, the biocompatible polymers include hyaluronic acid, collagen, chitosan, starch, cellulose, oxidized cellulose, alginate, gelatin, polyvinyl alcohol (PVA), alginic acid, pectin, carrageenan, dextran, agarose, and polyvinyl. From the group consisting of pyrrolidone (PVP), polyethylene glycol (PEG), hydroxypropylcellulose (HPC), hydroxyethylcellulose (HEC), hydroxypropylmethylcellulose (HPMC), pullulan and polyacrylic acid. It may include one or more selected species.
또한, 상기 생체적합성 고분자는 히알루론산을 포함하는 것일 수 있다.Additionally, the biocompatible polymer may include hyaluronic acid.
또한, 상기 제1 고분자는 폴리아크릴산, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 풀루란(pullulan) 및 폴리도파민(polydopamine)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다.Additionally, the first polymer may include one or more selected from the group consisting of polyacrylic acid, polyvinylpyrrolidone (PVP), pullulan, and polydopamine.
또한, 상기 산화 전분과 생체적합성 고분자는 중량비가 1:0.1 내지 10인 것일 수 있다.Additionally, the oxidized starch and the biocompatible polymer may have a weight ratio of 1:0.1 to 10.
또한, 상기 파우더형 점착성 지혈제는 입자 크기가 1 내지 500 μm인 것일 수 있다.Additionally, the powder-type adhesive hemostatic agent may have a particle size of 1 to 500 μm.
또한, 상기 파우더형 점착성 지혈제는 칼슘화합물 및 지혈물질로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 더 포함하는 것일 수 있다.In addition, the powder-type adhesive hemostatic agent may further include one or more selected from the group consisting of calcium compounds and hemostatic substances.
또한, 상기 칼슘화합물은 염화칼슘, 질산칼슘, 탄산칼슘, 아세트산칼슘, 탄산칼슘, 황화칼슘, 탄화칼슘 및 인산칼슘으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다.Additionally, the calcium compound may include one or more selected from the group consisting of calcium chloride, calcium nitrate, calcium carbonate, calcium acetate, calcium carbonate, calcium sulfide, calcium carbide, and calcium phosphate.
또한, 상기 지혈물질은 트롬빈, 프로트롬빈, 트롬보플라스틴, 피브리노겐, 아프로티닌, 비타민 C 및 비타민 K로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다.Additionally, the hemostatic substance may include one or more selected from the group consisting of thrombin, prothrombin, thromboplastin, fibrinogen, aprotinin, vitamin C, and vitamin K.
본 발명의 다른 일 측면은,Another aspect of the present invention is,
전분을 산화시켜 산화 전분을 제조하는 단계; 상기 산화 전분을 포함하는 제1 용액을 제조하는 단계; 생체적합성 고분자를 포함하는 제2 용액을 제조하는 단계; 상기 제1 용액 및 제2 용액을 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 상기 혼합물에 가교제를 첨가하여 상기 산화 전분과 생체적합성 고분자를 가교시키는 단계; 및 상기 가교된 반응물을 건조 및 분쇄하여 파우더형 점착성 지혈제를 제조하는 단계;를 포함하는 파우더형 점착성 지혈제의 제조방법이 제공된다.Producing oxidized starch by oxidizing starch; Preparing a first solution containing the oxidized starch; Preparing a second solution containing a biocompatible polymer; Preparing a mixture by mixing the first solution and the second solution; Crosslinking the oxidized starch and the biocompatible polymer by adding a crosslinking agent to the mixture; and drying and pulverizing the cross-linked reactant to prepare a powder-type adhesive hemostatic agent.
또한, 상기 산화 전분과 생체적합성 고분자를 가교시키는 단계에서, 상기 가교는 1 내지 24 시간 동안 수행되는 것일 수 있다.Additionally, in the step of crosslinking the oxidized starch and the biocompatible polymer, the crosslinking may be performed for 1 to 24 hours.
또한, 상기 혼합물 100 중량부에 대하여 상기 가교제 0.001 내지 5 중량부를 첨가하는 것일 수 있다.Additionally, 0.001 to 5 parts by weight of the crosslinking agent may be added based on 100 parts by weight of the mixture.
또한, 상기 가교제는 글리옥살(glyoxal), 글루타알데히드(glutaraldehye), 시트르산(citric acid), N,N-메틸렌 비스아크릴아마이드(N,N-methylene bisacrylamide), 디알데하이드(dialdehyde), 옥살릭액시드(oxalic acid) 및 시트르산(citric acid)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다.In addition, the cross-linking agent is glyoxal, glutaraldehye, citric acid, N,N-methylene bisacrylamide, dialdehyde, and oxalic acid. It may contain one or more types selected from the group consisting of oxalic acid and citric acid.
또한, 상기 파우더형 점착성 지혈제를 제조하는 단계 이후에, 상기 파우더형 점착성 지혈제를 용매에 분산시켜 제3 용액을 제조하고, 상기 제3 용액에 칼슘화합물 및 지혈물질로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 첨가하여 혼합한 다음, 상기 혼합한 혼합물을 건조 및 분쇄하는 단계;를 더 포함하는 것일 수 있다.In addition, after the step of preparing the powder-type adhesive hemostatic agent, the powder-type adhesive hemostatic agent is dispersed in a solvent to prepare a third solution, and at least one selected from the group consisting of calcium compounds and hemostatic substances is added to the third solution. After adding and mixing, the step of drying and pulverizing the mixed mixture may be further included.
본 발명의 파우더형 점착성 지혈제는 점착력이 높은 생체고분자와 전분을 산화시킨 산화 전분을 포함함으로써 점착력이 높은 효과가 있다.The powder-type adhesive hemostatic agent of the present invention has a high adhesive effect by containing biopolymers with high adhesiveness and oxidized starch obtained by oxidizing starch.
또한, 본 발명의 파우더형 점착성 지혈제는 산화 전분과 생체적합성 고분자가 서로 가교된 구조를 가짐으로써 혈액 흡수율이 우수한 효과가 있다.In addition, the powder-type adhesive hemostatic agent of the present invention has an excellent blood absorption rate by having a structure in which oxidized starch and biocompatible polymer are cross-linked.
또한, 본 발명의 파우더형 점착성 지혈제는 혈액 응고능이 우수하며, 빠른 지혈시간 및 적은 출혈량으로 뛰어난 지혈 효과가 있다.In addition, the powder-type adhesive hemostatic agent of the present invention has excellent blood coagulation ability and has an excellent hemostatic effect with a quick hemostasis time and small bleeding amount.
도 1은 본 발명의 파우더형 점착성 지혈제의 손상된 혈관에서의 지혈 과정을 나타낸 개략도이다.
도 2는 제조예에 따른 DAS 분말의 제조공정을 나타낸 개략도이다.
도 3은 실시예 1에 따른 DAS/HA 분말의 제조공정을 나타낸 개략도이다.
도 4는 제조예 5에 따라 제조된 1.0 DAS 및 비교제조예 1에 따른 Pure starch의 FT-IR 분석 결과이다.
도 5는 제조예 1 내지 5에 따라 제조된 DAS의 FT-IR 분석 결과로, 도 5의 (a) 및 (b)는 파장 범위가 각각 4000-800 cm-1 및 1850-1500 cm-1이다.
도 6은 제조예 1 내지 5에 따라 제조된 DAS 및 비교제조예 1에 따른 Pure starch의 점착력을 비교한 그래프이다.
도 7은 실시예 1-1 내지 1-7에 따라 제조된 DAS/HA 파우더의 흡수율을 나타낸 그래프이다.
도 8은 실시예 1-4, 1-8 내지 1-11에 따라 제조된 DAS/HA 파우더의 흡수율을 나타낸 그래프이다.
도 9는 실시예 1-10, 1-12 내지 1-16에 따라 제조된 DAS/HA 파우더의 흡수율을 나타낸 그래프이다.
도 10은 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더의 입자 크기에 따른 흡수율을 나태는 그래프이다.
도 11은 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더의 FT-IR 분석 결과이다.
도 12의 (a)는 가교되지 않은 DAS/HA 파우더의 XPS 분석 결과이고, (b)는 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더의 XPS 분석 결과이다.
도 13은 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, 비교제조예 1에 따른 Pure starch, 비교제조예 2에 따른 Pure hyaluronic acid, 비교예 1에 따른 ARISTA? AH의 점착력을 비교한 그래프이다.
도 14는 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더의 FE-SEM 분석 결과로, 입자 크기가 (a) 및 (b)는 500 μm 이상이고, (c) 및 (d)는 500-250 μm이다.
도 15은 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더의 FE-SEM 분석 결과로, 입자 크기가 (a) 및 (b)는 250-125 μm이고, (c) 및 (d)는 125 μm 이다.
도 16은 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더의 EDS 원소 분석 결과이다.
도 17은 ICP/OES에 의해 결정된 Ca2+ 농도의 함수로서 강도를 플로팅한 교정 곡선(calibration curve)이다.
도 18은 Bradford protein assay에 의해 결정된 트롬빈 농도의 함수로서 강도를 플로팅한 교정 곡선(calibration curve)이다.
도 19는 S-2238을 기질로 사용하여 트롬빈 활성의 함수로서 강도를 플로팅한 교정 곡선(calibration curve)이다.
도 20은 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더, 비교예 1에 따른 ARISTA™ AH의 Lee-White법에 따른 혈액 응고 시간을 나타낸 그래프이다.
도 21은 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더, 비교예 1에 따른 ARISTA™ AH의 Imai-Nose법에 따른 혈전 생성량을 나타낸 그래프이다.
도 22는 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더, 비교예 1에 따른 ARISTA™ AH의 적혈구 용혈 검사 결과를 나타낸 그래프이다.
도 23은 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더, 비교예 1에 따른 ARISTA™ AH의 세포독성평가 결과를 나타낸 그래프이다.
도 24는 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더, 비교예 1에 따른 ARISTA™ AH에 따른 출혈 시간을 나타낸 그래프이다.
도 25는 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더, 비교예 1에 따른 ARISTA™ AH에 따른 출혈량을 나타낸 그래프이다.
도 26은 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더, 비교예 1에 따른 ARISTA™ AH에 따른 출혈률을 나타낸 그래프이다.
도 27은 손상된 간의 H&E staining 이미지로, (a)는 대조군, (b)는 비교예 1에 따른 ARISTA™ AH, (c)는 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, (d)는 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더이다.
도 28은 손상된 간의 Carstair's staining 이미지로, (a)는 대조군, (b)는 비교예 1에 따른 ARISTA™ AH, (c)는 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, (d)는 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더이다.
(참고로, 본 발명의 도면에서 N.S.: Not significant, *: P<0.05, **: P<0.01, ***: P<0.001이다.)Figure 1 is a schematic diagram showing the hemostatic process of the powder-type adhesive hemostatic agent of the present invention in damaged blood vessels.
Figure 2 is a schematic diagram showing the manufacturing process of DAS powder according to a manufacturing example.
Figure 3 is a schematic diagram showing the manufacturing process of DAS/HA powder according to Example 1.
Figure 4 shows the FT-IR analysis results of 1.0 DAS prepared according to Preparation Example 5 and Pure starch according to Comparative Preparation Example 1.
Figure 5 shows the results of FT-IR analysis of DAS prepared according to Preparation Examples 1 to 5. In Figures 5 (a) and (b), the wavelength ranges are 4000-800 cm-1 and 1850-1500 cm-1, respectively. .
Figure 6 is a graph comparing the adhesion of DAS prepared according to Preparation Examples 1 to 5 and Pure starch according to Comparative Preparation Example 1.
Figure 7 is a graph showing the absorption rate of DAS/HA powder prepared according to Examples 1-1 to 1-7.
Figure 8 is a graph showing the absorption rate of DAS/HA powder prepared according to Examples 1-4, 1-8 to 1-11.
Figure 9 is a graph showing the absorption rate of DAS/HA powder prepared according to Examples 1-10, 1-12 to 1-16.
Figure 10 is a graph showing the absorption rate according to particle size of DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14.
Figure 11 shows the results of FT-IR analysis of DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14.
Figure 12 (a) is the XPS analysis result of the non-crosslinked DAS/HA powder, and (b) is the XPS analysis result of the DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14.
Figure 13 shows DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, Pure starch according to Comparative Preparation Example 1, Pure hyaluronic acid according to Comparative Preparation Example 2, and ARISTA? according to Comparative Example 1. This is a graph comparing the adhesive strength of AH.
Figure 14 shows the FE-SEM analysis results of DAS/HA/CaCl2/thrombin powder prepared according to Example 2, wherein (a) and (b) have particle sizes of 500 μm or more, and (c) and (d) have particle sizes of 500 μm or more. It is 500-250 μm.
Figure 15 shows the FE-SEM analysis results of DAS/HA/CaCl2/thrombin powder prepared according to Example 2, with particle sizes of 250-125 μm in (a) and (b) and (c) and (d). is 125 μm.
Figure 16 shows the results of EDS elemental analysis of DAS/HA/CaCl2/thrombin powder prepared according to Example 2.
Figure 17 is a calibration curve plotting intensity as a function of Ca2+ concentration determined by ICP/OES.
Figure 18 is a calibration curve plotting intensity as a function of thrombin concentration as determined by Bradford protein assay.
Figure 19 is a calibration curve plotting intensity as a function of thrombin activity using S-2238 as a substrate.
Figure 20 shows blood coagulation according to the Lee-White method of DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, DAS/HA/CaCl2/thrombin powder prepared according to Example 2, and ARISTA™ AH according to Comparative Example 1 This is a graph showing time.
Figure 21 shows the amount of blood clots produced according to the Imai-Nose method of DAS/HA powder prepared according to Example 1-14, DAS/HA/CaCl2/thrombin powder prepared according to Example 2, and ARISTA™ AH according to Comparative Example 1 This is a graph showing .
Figure 22 is a graph showing the red blood cell hemolysis test results of DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, DAS/HA/CaCl2/thrombin powder prepared according to Example 2, and ARISTA™ AH according to Comparative Example 1 .
Figure 23 is a graph showing the cytotoxicity evaluation results of DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, DAS/HA/CaCl2/thrombin powder prepared according to Example 2, and ARISTA™ AH according to Comparative Example 1. .
Figure 24 is a graph showing the bleeding time according to DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, DAS/HA/CaCl2/thrombin powder prepared according to Example 2, and ARISTA™ AH according to Comparative Example 1.
Figure 25 is a graph showing the amount of bleeding according to DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, DAS/HA/CaCl2/thrombin powder prepared according to Example 2, and ARISTA™ AH according to Comparative Example 1.
Figure 26 is a graph showing the bleeding rate according to DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, DAS/HA/CaCl2/thrombin powder prepared according to Example 2, and ARISTA™ AH according to Comparative Example 1.
Figure 27 is an H&E staining image of a damaged liver, (a) is a control group, (b) is ARISTA™ AH according to Comparative Example 1, (c) is DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, (d) is DAS/HA/CaCl2/thrombin powder prepared according to Example 2.
Figure 28 is a Carstair's staining image of a damaged liver, (a) is a control group, (b) is ARISTA™ AH according to Comparative Example 1, (c) is DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, (d) is DAS/HA/CaCl2/thrombin powder prepared according to Example 2.
(For reference, in the drawing of the present invention, NS: Not significant, *: P<0.05, **: P<0.01, ***: P<0.001.)
이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 의해 본 발명이 한정되지 않으며 본 발명은 후술할 청구범위의 의해 정의될 뿐이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail. However, the present invention can be implemented in various different forms, and the present invention is not limited to the embodiments described herein, and the present invention is only defined by the claims to be described later.
덧붙여, 본 발명에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 발명의 명세서 전체에서 어떤 구성요소를 '포함'한다는 것은 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있다는 것을 의미한다.In addition, the terms used in the present invention are only used to describe specific embodiments and are not intended to limit the present invention. Singular expressions include plural expressions unless the context clearly dictates otherwise. In the entire specification of the present invention, 'including' a certain element means that other elements may be further included rather than excluding other elements, unless specifically stated to the contrary.
본원의 제1측면은,The first aspect of this application is,
산화 전분(oxidized starch); 및 생체적합성 고분자;를 포함하는 파우더형 점착성 지혈제를 제공한다.oxidized starch; and a biocompatible polymer. It provides a powder-type adhesive hemostatic agent comprising a.
이하, 본원의 제1측면에 따른 파우더형 점착성 지혈제에 대해 설명하도록 한다. Hereinafter, the powder-type adhesive hemostatic agent according to the first aspect of the present application will be described.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 파우더형 점착성 지혈제는 산화 전분(oxidized starch); 및 생체적합성 고분자;를 포함하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the powder-type adhesive hemostatic agent includes oxidized starch; And it may include a biocompatible polymer.
또한, 상기 생체적합성 고분자는 제1 고분자 및 제2 고분자를 포함하는 것일 수 있으며, 상기 산화 전분과 상기 제1 고분자가 수소결합으로 점착된 복합체가 상기 제2 고분자와 공유결합하며 서로 가교된 것일 수 있다.In addition, the biocompatible polymer may include a first polymer and a second polymer, and a complex in which the oxidized starch and the first polymer are adhered by hydrogen bonding may be covalently bonded with the second polymer and cross-linked to each other. there is.
전분은 아밀로오스(amylose)와 아밀로펙틴(amylopectin)의 두 가지 고분자 형태로 이루어져 있다. 전분은 생체적합성, 생분해성이 뛰어나며 혈액 흡수를 통해 혈액 내 혈소판, 적혈구, 응고인자의 응집을 유도하며 혈액 흡수 후 젤화되어 적용부위를 밀폐하여 혈액 응고 촉진 및 추가적인 혈액 손실을 방지하기 때문에 지혈제로서 사용되고 있다. 본원의 일 실시예에 따르면, 점착력을 향상시키기 위해 전분을 산화시켜 사용하는 것일 수 있다. 산화된 전분 즉, 산화 전분(oxidized starch)의 경우에는 주변의 pH를 감소시켜 적혈구 용해를 유발하고 방출된 헤모글로빈이 산과 반응하여 산성 헤마틴(hematin)을 형성하여 갈색으로 변색이 된다. 이러한 낮은 pH는 인공적으로 혈전을 형성하여 물리적 지혈작용을 하며 혈소판 및 2차 지혈과정의 외인성 경로를 활성화하여 지혈능을 보인다.Starch consists of two types of polymers: amylose and amylopectin. Starch has excellent biocompatibility and biodegradability, and through blood absorption, it induces the aggregation of platelets, red blood cells, and coagulation factors in the blood. After absorption, it gels and seals the application area, promoting blood coagulation and preventing additional blood loss, so it is used as a hemostatic agent. there is. According to one embodiment of the present application, starch may be oxidized and used to improve adhesion. In the case of oxidized starch, it reduces the surrounding pH, causing red blood cell lysis, and the released hemoglobin reacts with acid to form acidic hematin, which turns brown. This low pH produces physical hemostasis by artificially forming blood clots and shows hemostatic properties by activating the extrinsic pathways of platelets and secondary hemostatic processes.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 산화 전분은 디알데히드 전분(dialdehyde starch)을 포함하는 것일 수 있다. 상기 디알데히드 전분에 존재하는 알데하이드기는 조직에 존재하는 더 많은 아민기, 하이드록시기와 결합할 수 있기 때문에 안정적인 가교 네트워크를 가진 접착제 역할을 할 수 있으며, 따라서 상기 파우더형 점착성 지혈제의 점착력을 향상시킬 수 있다.According to one embodiment of the present application, the oxidized starch may include dialdehyde starch. The aldehyde group present in the dialdehyde starch can bind to more amine groups and hydroxy groups present in the tissue, so it can act as an adhesive with a stable cross-linking network, thereby improving the adhesion of the powder-type adhesive hemostatic agent. there is.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 산화 전분과 생체적합성 고분자는 서로 가교된 것일 수 있다. 본원의 일 실시예에 따르면, 상기 산화 전분과 생체적합성 고분자는 가교제에 의해 서로 가교된 것일 수 있다. 도 1을 참조하면, 가교제에 의한 acetal reaction으로 상기 산화 전분과 생체적합성 고분자 사이에 가교 반응이 일어나는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the oxidized starch and the biocompatible polymer may be cross-linked with each other. According to one embodiment of the present application, the oxidized starch and the biocompatible polymer may be cross-linked to each other using a cross-linking agent. Referring to Figure 1, a crosslinking reaction may occur between the oxidized starch and the biocompatible polymer due to an acetal reaction caused by a crosslinking agent.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 생체적합성 고분자는 히알루론산, 콜라겐, 키토산, 전분, 셀룰로오스, 산화 셀룰로오스(oxidized cellulose), 알지네이트, 젤라틴, 폴리비닐알코올(PVA), 알긴산, 펙틴, 카라기난, 덱스트란, 아가로스, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 폴리에틸렌글리콜(PEG), 히드록시프로필셀룰로스(HPC), 히드록시에틸셀룰로스(HEC), 히드록시프로필메틸셀룰로스(HPMC), 풀루란(pullulan) 및 폴리아크릴산으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 히알루론산을 포함하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the biocompatible polymer is hyaluronic acid, collagen, chitosan, starch, cellulose, oxidized cellulose, alginate, gelatin, polyvinyl alcohol (PVA), alginic acid, pectin, carrageenan, and dextran. , agarose, polyvinylpyrrolidone (PVP), polyethylene glycol (PEG), hydroxypropylcellulose (HPC), hydroxyethylcellulose (HEC), hydroxypropylmethylcellulose (HPMC), pullulan, and It may contain one or more types selected from the group consisting of polyacrylic acid, and may preferably contain hyaluronic acid.
히알루론산은 β-D-glucuronic acid와 N-acetyl-β-D-glucosamine으로 결합한 이당류 반복 단위를 갖는 전형적인 음이온 다당류(polysaccharide)이다. 히알루론산은 세포외 기질의 주요 구성요소로서 hyaluronate 형태로 존재하며 생체적합성, 생분해성, 비면역원성 및 친수성의 고유한 특성으로 인하여 약물전달, 조직 재생 및 상처 치유에 광범위하게 사용되고 있다. 특히 수분 보유 및 젤화 특성으로 지혈 과정 촉진, 염증 매개, 염증 감소 및 재상피화 과정 가속화와 같은 지혈제로서 큰 장점을 갖는다.Hyaluronic acid is It is a typical anionic polysaccharide with a disaccharide repeating unit bonded to β-D-glucuronic acid and N-acetyl-β-D-glucosamine. Hyaluronic acid, a major component of the extracellular matrix, exists in the form of hyaluronate and is widely used in drug delivery, tissue regeneration, and wound healing due to its unique characteristics of biocompatibility, biodegradability, non-immunogenicity, and hydrophilicity. In particular, it has great advantages as a hemostatic agent, such as promoting the hemostatic process due to its water retention and gelling properties, mediating inflammation, reducing inflammation, and accelerating the re-epithelialization process.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 생체적합성 고분자는 제1 고분자 및 제2 고분자를 포함하는 것일 수 있으며, 상기 제1 고분자는 폴리아크릴산, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 풀루란(pullulan) 및 폴리도파민(polydopamine)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the biocompatible polymer may include a first polymer and a second polymer, and the first polymer is polyacrylic acid, polyvinylpyrrolidone (PVP), pullulan, and It may contain one or more types selected from the group consisting of polydopamine.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 산화 전분과 생체적합성 고분자는 중량비가 1:0.1 내지 10인 것일 수 있으며, 바람직하게는 1:0.5 내지 2, 보다 바람직하게는 1:1인 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the weight ratio of the oxidized starch and the biocompatible polymer may be 1:0.1 to 10, preferably 1:0.5 to 2, and more preferably 1:1.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 파우더형 점착성 지혈제는 입자 크기가 1 내지 500 μm인 것일 수 있으며, 바람직하게는 125 내지 500 μm, 보다 바람직하게는 125 내지 250 μm인 것 일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the powder-type adhesive hemostatic agent may have a particle size of 1 to 500 μm, preferably 125 to 500 μm, and more preferably 125 to 250 μm.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 파우더형 점착성 지혈제는 칼슘화합물 및 지혈물질로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 더 포함하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the powder-type adhesive hemostatic agent may further include at least one selected from the group consisting of calcium compounds and hemostatic substances.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 칼슘화합물은 염화칼슘, 질산칼슘, 탄산칼슘, 아세트산칼슘, 탄산칼슘, 황화칼슘, 탄화칼슘 및 인산칼슘으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 염화칼슘(CaCl2)을 포함하는 것일 수 있다. 상기 칼슘화합물에 포함된 Ca2+ 이온은 지혈과정에서 여러 응고인자들의 활성을 도와줄 수 있어 상기 파우더형 점착성 지혈제의 혈액응고능을 향상시킬 수 있다. 본원의 일 실시예에 따르면, 상기 파우더형 점착성 지혈제는 25 mM CaCl2을 포함하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the calcium compound may include one or more selected from the group consisting of calcium chloride, calcium nitrate, calcium carbonate, calcium acetate, calcium carbonate, calcium sulfide, calcium carbide, and calcium phosphate, and is preferably It may include calcium chloride (CaCl 2 ). Ca 2+ ions contained in the calcium compound can help activate various coagulation factors during the hemostasis process, thereby improving the blood coagulation ability of the powder-type adhesive hemostatic agent. According to one embodiment of the present application, the powder-type adhesive hemostatic agent may contain 25mM CaCl 2 .
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 지혈물질은 트롬빈, 프로트롬빈, 트롬보플라스틴, 피브리노겐, 아프로티닌, 비타민 C 및 비타민 K로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 트롬빈을 포함하는 것일 수 있다. 상기 트롬빈은 피브리노겐을 피브린으로 활성화시켜준다. 본원의 일 실시예에 따르면, 상기 파우더형 점착성 지혈제는 150 μg/mL 트롬빈을 포함하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the hemostatic substance may include one or more selected from the group consisting of thrombin, prothrombin, thromboplastin, fibrinogen, aprotinin, vitamin C, and vitamin K, preferably thrombin. It may include. The thrombin activates fibrinogen into fibrin. According to one embodiment of the present application, the powder-type adhesive hemostatic agent may contain 150 μg/mL thrombin.
본원의 제2측면은,The second aspect of this institution is,
전분을 산화시켜 산화 전분을 제조하는 단계; 상기 산화 전분을 포함하는 제1 용액을 제조하는 단계; 생체적합성 고분자를 포함하는 제2 용액을 제조하는 단계; 상기 제1 용액 및 제2 용액을 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 상기 혼합물에 가교제를 첨가하여 상기 산화 전분과 생체적합성 고분자를 가교시키는 단계; 및 상기 가교된 반응물을 건조 및 분쇄하여 파우더형 점착성 지혈제를 제조하는 단계;를 포함하는 파우더형 점착성 지혈제의 제조방법을 제공한다.Producing oxidized starch by oxidizing starch; Preparing a first solution containing the oxidized starch; Preparing a second solution containing a biocompatible polymer; Preparing a mixture by mixing the first solution and the second solution; Crosslinking the oxidized starch and the biocompatible polymer by adding a crosslinking agent to the mixture; and drying and pulverizing the cross-linked reactant to prepare a powder-type adhesive hemostatic agent.
이하, 본원의 제2측면에 따른 파우더형 점착성 지혈제의 제조방법에 대해 설명하도록 한다.Hereinafter, a method for manufacturing a powder-type adhesive hemostatic agent according to the second aspect of the present application will be described.
먼저, 전분을 산화시켜 산화 전분을 제조한다.First, starch is oxidized to produce oxidized starch.
본원의 일 실시예에 따르면, 점착력을 향상시키기 위해 전분을 산화시키는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, starch may be oxidized to improve adhesion.
본원의 일 실시예에 따르면, sodium (meta)periodate를 이용하여 상기 전분을 산화시키는 것일 수 있다. 상기 sodium (meta)periodate는 전분의 1,4-glucan에 작용하여 C2-C3 결합을 깨어 dialdehyde로 산화시키는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the starch may be oxidized using sodium (meta)periodate. The sodium (meta)periodate may act on 1,4-glucan of starch to break the C2-C3 bond and oxidize it to dialdehyde.
다음으로, 상기 산화 전분을 포함하는 제1 용액을 제조한다.Next, a first solution containing the oxidized starch is prepared.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 산화 전분을 증류수에 넣고, 가열하여 제1 용액을 제조하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the oxidized starch may be added to distilled water and heated to prepare a first solution.
다음으로, 생체적합성 고분자를 포함하는 제2 용액을 제조한다.Next, a second solution containing a biocompatible polymer is prepared.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 생체적합성 고분자를 증류수에 넣고, 교반하여 제2 용액을 제조하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the biocompatible polymer may be added to distilled water and stirred to prepare a second solution.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 생체적합성 고분자는 히알루론산, 콜라겐, 키토산, 전분, 셀룰로오스, 산화 셀룰로오스(oxidized cellulose), 알지네이트, 젤라틴, 폴리비닐알코올(PVA), 알긴산, 펙틴, 카라기난, 덱스트란, 아가로스, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 폴리에틸렌글리콜(PEG), 히드록시프로필셀룰로스(HPC), 히드록시에틸셀룰로스(HEC), 히드록시프로필메틸셀룰로스(HPMC), 풀루란(pullulan) 및 폴리아크릴산으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 히알루론산을 포함하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the biocompatible polymer is hyaluronic acid, collagen, chitosan, starch, cellulose, oxidized cellulose, alginate, gelatin, polyvinyl alcohol (PVA), alginic acid, pectin, carrageenan, and dextran. , agarose, polyvinylpyrrolidone (PVP), polyethylene glycol (PEG), hydroxypropylcellulose (HPC), hydroxyethylcellulose (HEC), hydroxypropylmethylcellulose (HPMC), pullulan, and It may contain one or more types selected from the group consisting of polyacrylic acid, and may preferably contain hyaluronic acid.
또한, 본원의 일 실시예에 따르면, 상기 생체적합성 고분자는 제1 고분자 및 제2 고분자를 포함하는 것일 수 있으며, 상기 제1 고분자는 폴리아크릴산, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 풀루란(pullulan) 및 폴리도파민(polydopamine)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다.Additionally, according to an embodiment of the present application, the biocompatible polymer may include a first polymer and a second polymer, and the first polymer may be polyacrylic acid, polyvinylpyrrolidone (PVP), or pullulan. ) and may include one or more selected from the group consisting of polydopamine.
다음으로, 상기 제1 용액 및 제2 용액을 혼합하여 혼합물을 제조한다.Next, the first solution and the second solution are mixed to prepare a mixture.
다음으로, 상기 혼합물에 가교제를 첨가하여 상기 산화 전분과 생체적합성 고분자를 가교시킨다.Next, a cross-linking agent is added to the mixture to cross-link the oxidized starch and the biocompatible polymer.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 가교는 1 내지 24 시간 동안 수행되는 것일 수 있으며, 바람직하게는 6 내지 24시간, 보다 바람직하게는 6시간 동안 수행되는 것일 수 있다. 상기 가교 시간이 1 시간 미만인 경우에는 가교가 충분히 일어나지 않을 수 있어 바람직하지 않고, 24 시간을 초과하는 경우에는 조밀한 네트워크 구조의 형성으로 인하여 상대적으로 수분이 침투하지 못할 수 있어 바람직하지 않다.According to one embodiment of the present application, the crosslinking may be performed for 1 to 24 hours, preferably 6 to 24 hours, and more preferably 6 hours. If the crosslinking time is less than 1 hour, crosslinking may not sufficiently occur, which is undesirable. If it exceeds 24 hours, moisture may be relatively unable to penetrate due to the formation of a dense network structure, which is undesirable.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 혼합물 100 중량부에 대하여 상기 가교제 0.001 내지 5 중량부를 첨가하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 0.02 내지 0.25 중량부, 보다 바람직하게는 0.25 중량부를 포함하는 것일 수 있다. 상기 가교제가 0.001 중량부 미만인 경우에는 가교제의 양이 부족하여 충분히 네트워크를 형성하지 못해 바람직하지 않고, 5 중량부를 초과하는 경우에는 조밀한 네트워크 구조의 형성으로 인하여 흡수율이 낮아질 수 있어 바람직하지 않다.According to one embodiment of the present application, 0.001 to 5 parts by weight of the crosslinking agent may be added to 100 parts by weight of the mixture, preferably 0.02 to 0.25 parts by weight, and more preferably 0.25 parts by weight. If the amount of the cross-linking agent is less than 0.001 parts by weight, it is not desirable because the amount of the cross-linking agent is insufficient and a network cannot be sufficiently formed. If it exceeds 5 parts by weight, the water absorption rate may be lowered due to the formation of a dense network structure, which is not preferable.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 가교제는 글리옥살(glyoxal), 글루타알데히드(glutaraldehye), 시트르산(citric acid), N,N-메틸렌 비스아크릴아마이드(N,N-methylene bisacrylamide), 디알데하이드(dialdehyde), 옥살릭액시드(oxalic acid) 및 시트르산(citric acid)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 글리옥살을 포함하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the cross-linking agent is glyoxal, glutaraldehye, citric acid, At least one selected from the group consisting of N,N-methylene bisacrylamide, dialdehyde, oxalic acid, and citric acid. It may contain, and preferably may contain glyoxal.
마지막으로, 상기 가교된 반응물을 건조 및 분쇄하여 파우더형 점착성 지혈제를 제조한다.Finally, the cross-linked reactant is dried and ground to prepare a powder-type adhesive hemostatic agent.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 파우더형 점착성 지혈제는 상술한 본 발명의 파우더형 점착성 지혈제에서의 설명과 동일하므로 구체적인 내용은 그 부분을 참조하기로 한다.According to one embodiment of the present application, the powder-type adhesive hemostatic agent is the same as the description of the powder-type adhesive hemostatic agent of the present invention described above, so reference will be made to that section for specific details.
본원의 일 실시예에 따르면, 상기 파우더형 점착성 지혈제를 제조하는 단계 이후에, 상기 파우더형 점착성 지혈제를 용매에 분산시켜 제3 용액을 제조하고, 상기 제3 용액에 칼슘화합물 및 지혈물질로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 첨가하여 혼합한 다음, 상기 혼합한 혼합물을 건조 및 분쇄하는 단계;를 더 포함하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, after the step of preparing the powder-type adhesive hemostatic agent, the powder-type adhesive hemostatic agent is dispersed in a solvent to prepare a third solution, and a group consisting of a calcium compound and a hemostatic material is added to the third solution. It may further include the step of adding and mixing one or more types selected from and then drying and pulverizing the mixed mixture.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail so that those skilled in the art can easily implement it. However, the present invention may be implemented in many different forms and is not limited to the embodiments described herein.
< 실시예 ><Example>
제조예: DAS(Dialdehyde starch) 파우더의 제조Manufacturing example: Preparation of DAS (Dialdehyde starch) powder
제조예 1Manufacturing Example 1
도 2를 참조하면, Starch 6 g을 300 mL 증류수에 넣고 85℃로 가열하여 녹여준 다음, Starch의 1,4-glucan에 작용하여 C2-C3 결합을 깨어 dialdehyde로 산화시키는 sodium (meta)periodate를 1.584 g 넣어주었다. 24시간 동안 상온에서 dark condition을 유지시켜 주며 반응을 진행하였다. 24시간이 지난 뒤 glycerine을 5 mL 넣어 30분간 종결 반응을 진행하였다. 종결 반응이 끝난 용액은 dialysis tubing cellulose membrane (12,000-14,000 cut-off MW)을 이용하여 증류수에서 3일간 투석한 뒤 동결 건조를 통해 DAS 파우더(0.2 DAS)를 제조하였다.Referring to Figure 2, 6 g of Starch was dissolved in 300 mL of distilled water and heated to 85°C. Then, sodium (meta)periodate was added, which acts on the 1,4-glucan of Starch to break the C2-C3 bond and oxidize it to dialdehyde. 1.584 g was added. The reaction proceeded while maintaining dark conditions at room temperature for 24 hours. After 24 hours, 5 mL of glycerine was added to proceed with the termination reaction for 30 minutes. The solution after the termination reaction was dialyzed in distilled water for 3 days using a dialysis tubing cellulose membrane (12,000-14,000 cut-off MW), and then freeze-dried to prepare DAS powder (0.2 DAS).
제조예 2 내지 5Preparation Examples 2 to 5
하기 표 1을 참조하면, 제조예 1에서 sodium (meta)periodate를 1.584 g 사용하는 대신에 3.169, 4.753, 6.338, 7.922 g을 사용하는 것을 제외하고는 제조예 1과 동일한 방법으로 제조예 2 내지 5의 DAS 파우더(0.4 DAS, 0.6 DAS, 0.8 DAS, 1.0 DAS)를 각각 제조하였다. starch와 sodium (meta)periodate의 몰 비율에 따라 0.2/0.4/0.6/0.8/1.0 DAS라 명명하였다.Referring to Table 1 below, Preparation Examples 2 to 5 were prepared in the same manner as Preparation Example 1, except that instead of using 1.584 g of sodium (meta)periodate in Preparation Example 1, 3.169, 4.753, 6.338, and 7.922 g were used. DAS powders (0.4 DAS, 0.6 DAS, 0.8 DAS, 1.0 DAS) were prepared, respectively. It was named 0.2/0.4/0.6/0.8/1.0 DAS according to the molar ratio of starch and sodium (meta)periodate.
[표 1][Table 1]
비교제조예 1: Pure starch의 제조Comparative Preparation Example 1: Preparation of Pure starch
Daejung (Korea) 社의 Starch를 구입하여 비교제조예 1로 사용하였다.Starch from Daejung (Korea) was purchased and used in Comparative Preparation Example 1.
비교제조예 2: Pure hyaluronic acid의 제조Comparative Preparation Example 2: Preparation of Pure hyaluronic acid
Bloomage Freda Biopham Co. (China) 社의 sodium hyaluronate (HA, Mw: 1,000 kDa)를 구입하여 비교제조예 2로 사용하였다.Bloomage Freda Biopham Co. Sodium hyaluronate (HA, Mw: 1,000 kDa) was purchased from (China) and used in Comparative Preparation Example 2.
실시예 1: DAS/HA 파우더의 제조Example 1: Preparation of DAS/HA powder
실시예 1-1Example 1-1
제조예 3에 따라 제조된 0.6 DAS와 생체적합성 물질인 Hyaluronic acid(HA)를 가교하여 DAS/HA 파우더를 제조하였다. DAS/HA powder was prepared by crosslinking 0.6 DAS prepared according to Preparation Example 3 and Hyaluronic acid (HA), a biocompatible material.
구체적으로, 도 3을 참조하면, 제조예 3에 따라 제조된 0.6 DAS 0.25 g을 증류수 100 mL에 넣은 뒤 85℃로 가열하여 충분히 녹이고, HA 1.75 g을 증류수 100 mL에 넣은 뒤 inter mixer를 이용하여 녹인 후 일정시간 동안 식혀 준 다음, 두 수용액을 혼합하였다. 200 mL 수용액은 acetic acid를 이용하여 pH를 3.0으로 맞추어준 뒤 glyoxal 10 mL를 넣어 12시간 동안 overhead stirrer를 이용하여 가교반응을 진행하였다. 12시간 후 미 반응 glyoxal을 제거하기 위하여 acetone에 30분간 교반하여 반응물을 침전시키는 과정을 2회 진행 후 건조하였다. 건조된 샘플은 다시 증류수에 녹이고 동결 건조를 진행하였다. 동결 건조된 샘플은 액체 질소를 사용하여 분쇄해 DAS/HA 파우더를 제조하였다.Specifically, referring to Figure 3, 0.25 g of 0.6 DAS prepared according to Preparation Example 3 was added to 100 mL of distilled water, heated to 85°C to sufficiently dissolve, and 1.75 g of HA was added to 100 mL of distilled water using an inter mixer. After melting and cooling for a certain period of time, the two aqueous solutions were mixed. The pH of the 200 mL aqueous solution was adjusted to 3.0 using acetic acid, then 10 mL of glyoxal was added, and a cross-linking reaction was performed using an overhead stirrer for 12 hours. After 12 hours, to remove unreacted glyoxal, the reactant was precipitated by stirring in acetone for 30 minutes, followed by drying. The dried sample was again dissolved in distilled water and freeze-dried. The freeze-dried sample was ground using liquid nitrogen to prepare DAS/HA powder.
실시예 1-2 내지 1-7 (DAS 및 HA 함량비 조절)Examples 1-2 to 1-7 (Adjustment of DAS and HA content ratio)
하기 표 2를 참조하면, 실시예 1-1에서 DAS 및 HA를 0.25 g 및 1.75 g 사용하는 대신에 (0.5 g, 1.5 g), (0.75 g, 1.25 g), (1 g, 1 g), (1.25 g, 0.75 g), (1.5 g, 0.5 g), (1.75 g, 0.25 g)을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1-1과 동일한 방법으로 실시예 1-2 내지 1-7의 DAS/HA 파우더를 각각 제조하였다.Referring to Table 2 below, instead of using 0.25 g and 1.75 g of DAS and HA in Example 1-1, (0.5 g, 1.5 g), (0.75 g, 1.25 g), (1 g, 1 g), DAS of Examples 1-2 to 1-7 were prepared in the same manner as Example 1-1, except for using (1.25 g, 0.75 g), (1.5 g, 0.5 g), and (1.75 g, 0.25 g). /HA powder was prepared respectively.
실시예 1-8 내지 1-11 (가교시간 조절)Examples 1-8 to 1-11 (Crosslinking time control)
하기 표 2를 참조하면, 실시예 1-4에서 12시간 동안 가교시키는 대신에 1, 3, 6, 24시간 동안 가교시키는 것을 제외하고는 실시예 1-4와 동일한 방법으로 실시예 1-8 내지 1-11의 DAS/HA 파우더를 각각 제조하였다.Referring to Table 2 below, Examples 1-8 to 8 were prepared in the same manner as Example 1-4, except that crosslinking was performed for 1, 3, 6, and 24 hours instead of crosslinking for 12 hours in Example 1-4. DAS/HA powders 1-11 were prepared respectively.
실시예 1-12 내지 1-16 (가교제 함량 조절)Examples 1-12 to 1-16 (Control of cross-linking agent content)
하기 표 2를 참조하면, 실시예 1-10에서 glyoxal 10 mL (10000 μL)를 사용하는 대신에 50, 100, 500, 1000, 5000 μL를 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1-10과 동일한 방법으로 실시예 1-12 내지 1-16의 DAS/HA 파우더를 각각 제조하였다.Referring to Table 2 below, the same method as Example 1-10 except that instead of using 10 mL (10000 μL) of glyoxal in Example 1-10, 50, 100, 500, 1000, and 5000 μL were used. The DAS/HA powders of Examples 1-12 to 1-16 were prepared respectively.
[표 2][Table 2]
실시예 2: DAS/HA/CaClExample 2: DAS/HA/CaCl 22 /thrombin의 제조Preparation of /thrombin
CaCl2 41.618 mg을 증류수 10 mL에 녹이고, 트롬빈 2.250 mg을 증류수 10 mL에 녹여주었다. 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더 1 g을 증류수 100 mL에 넣어 분산시켜 준 뒤, CaCl2와 트롬빈 용액을 넣고 150 rpm으로 30분간 교반하여 균일하게 섞이도록 하였다. 균일하게 섞인 용액은 예비 동결 후 동결 건조 한 뒤 액체 질소를 통해 분쇄하여 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더를 제조하였다.41.618 mg of CaCl 2 was dissolved in 10 mL of distilled water, and 2.250 mg of thrombin was dissolved in 10 mL of distilled water. 1 g of DAS/HA powder prepared according to Example 1-14 was dispersed in 100 mL of distilled water, then CaCl 2 and thrombin solution were added and stirred at 150 rpm for 30 minutes to mix evenly. The uniformly mixed solution was pre-frozen, freeze-dried, and then pulverized with liquid nitrogen to prepare DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder.
비교예 1Comparative Example 1
시중에 판매중인 지혈제 ARISTA? AH를 구입하여 비교예 1로 사용하였다.ARISTA, a commercially available hemostatic agent? AH was purchased and used as Comparative Example 1.
< 실험예 ><Experimental example>
실험예 1: DAS의 산화 확인Experimental Example 1: Confirmation of oxidation of DAS
Dialdehyde starch (DAS)의 산화가 이루어졌는지 확인하기 위해 FT-IR (300E, Jasco)을 이용하여 분석하였다. 구체적으로, germanium crystal의 ATR 프리즘을 이용하여 분석을 진행하였으며, 파장은 4000-800 cm-1 범위에서 스캔 수 64회로 설정하여 측정하였다.To confirm whether oxidation of dialdehyde starch (DAS) occurred, analysis was performed using FT-IR (300E, Jasco). Specifically, analysis was conducted using a germanium crystal ATR prism, and the wavelength was measured in the range of 4000-800 cm -1 with the number of scans set to 64.
도 4는 제조예 5에 따라 제조된 1.0 DAS 및 비교제조예 1에 따른 Pure starch의 FT-IR 분석 결과이다. 도 4를 참조하면, sodium (meta)periodate가 starch의 anhydroglucose ring에 존재하는 2번, 3번 탄소를 공격하여 dialdehyde를 형성하면서 3340 cm-1에서 나타나는 O-H stretching peak가 감소하였으며 1726 cm-1에서 dialdehyde에 의한 C=O stretching peak가 나타나게 되면서 성공적으로 starch의 산화가 됨을 확인하였다.Figure 4 shows the FT-IR analysis results of 1.0 DAS prepared according to Preparation Example 5 and Pure starch according to Comparative Preparation Example 1. Referring to Figure 4, as sodium (meta)periodate attacks the 2nd and 3rd carbons present in the anhydroglucose ring of starch to form dialdehyde, the OH stretching peak appearing at 3340 cm -1 decreased and dialdehyde at 1726 cm -1 As the C=O stretching peak appeared, it was confirmed that starch was successfully oxidized.
도 5는 제조예 1 내지 5에 따라 제조된 DAS의 FT-IR 분석 결과로, 도 5의 (a) 및 (b)는 파장 범위가 각각 4000-800 cm-1 및 1850-1500 cm-1이다. 도 5를 참조하면, 제조시 사용한 산화제의 양에 비례하여 1726 cm-1에서 C=O stretching peak가 점차 증가하는 것을 확인할 수 있다.Figure 5 shows the results of FT-IR analysis of DAS prepared according to Preparation Examples 1 to 5. In Figures 5 (a) and (b), the wavelength ranges are 4000-800 cm -1 and 1850-1500 cm -1 , respectively. . Referring to Figure 5, it can be seen that the C=O stretching peak gradually increases at 1726 cm -1 in proportion to the amount of oxidizing agent used during production.
이어서 starch와 산화제의 비율에 따라 산화된 정도를 측정하기 위해 제조된 DAS 파우더들의 degree of oxidation (DO)을 구하였다. 실험방법으로는 먼저 hydroxylamine hydrochloride (HAHC) 0.4343 g을 증류수 15 mL에 넣어 녹여주었다. 각 비율별로 산화된 DAS 파우더 0.1 g을 증류수 10 mL에 넣어 85℃로 가열하여 녹여준 뒤, 두 용액을 섞어 0.25 M HAHC 용액을 제조하였다. 만들어진 용액을 50℃에서 2시간 동안 반응시켜 준 뒤, 0.1 M NaOH를 이용하여 pH 5.5까지 적정한 후 사용한 NaOH의 부피를 측정하였다. DO값은 하기 식 1을 통하여 계산하였다.Next, the degree of oxidation (DO) of the manufactured DAS powders was determined to measure the degree of oxidation according to the ratio of starch and oxidizing agent. As an experimental method, first, 0.4343 g of hydroxylamine hydrochloride (HAHC) was dissolved in 15 mL of distilled water. 0.1 g of oxidized DAS powder at each ratio was dissolved in 10 mL of distilled water by heating to 85°C, and then the two solutions were mixed to prepare a 0.25 M HAHC solution. The resulting solution was reacted at 50°C for 2 hours, titrated to pH 5.5 using 0.1 M NaOH, and the volume of NaOH used was measured. The DO value was calculated using Equation 1 below.
[식 1][Equation 1]
상기 식 1에서, Mw,starch는 starch의 unit당 분자량, MNaOH는 NaOH의 몰 농도, Vsample는 sample 적정에 사용한 NaOH의 양, VControl는 Control인 pure starch 적정에 사용한 NaOH의 양, mstarch는 사용한 starch의 무게이다.In Equation 1, M w,starch is the molecular weight per unit of starch, M NaOH is the molar concentration of NaOH, V sample is the amount of NaOH used in sample titration, V Control is the amount of NaOH used in titration of pure starch, which is Control, m starch is the weight of starch used.
제조예 1 내지 5에 따라 제조된 DAS 파우더의 DO값을 하기 표 3에 나타내었다.The DO values of the DAS powder prepared according to Preparation Examples 1 to 5 are shown in Table 3 below.
[표 3][Table 3]
상기 표 3을 참조하면, 산화제의 양과 DO값이 비례하다는 기존 연구 결과와 마찬가지로 고정된 양의 starch에 산화제인 sodium (meta)periodate의 양이 증가할수록 점차 DO값이 증가하는 것을 볼 수 있으며, 몰 비율과 DO값이 근사한 값을 보였다.Referring to Table 3 above, similar to previous research results showing that the amount of oxidizing agent and DO value are proportional, it can be seen that the DO value gradually increases as the amount of sodium (meta)periodate, an oxidizing agent, increases in a fixed amount of starch. The ratio and DO values showed close values.
실험예 2: DAS 파우더의 점착성 확인Experimental Example 2: Confirmation of adhesion of DAS powder
다양한 산화도를 갖는 DAS 파우더들의 점착력 차이를 비교하기 위해, Instro 5900R Univeral Testing Machine equipped with Bluehill® 3 software (MA, USA)를 이용하여 점착성을 측정하였다. 측정조건으로는 ASTM F2255-05를 참고하여 상온에서 sample size 20 mm x 20 mm, crosshead speed 2 mm/min, load cell 100 N으로 설정하였으며 실제 조직에 적용하였을 때의 점착력을 측정하기 위하여 porcine skin 40 mm x 20 mm를 이용하여 실험을 진행하였다. Porcine skin에 0.05 g의 파우더와 일정량의 증류수를 흡수시킨 후 3분간 충분히 시간을 준 뒤 일정 속도로 인장하여 최대 점착력을 갖는 값을 측정하였으며, 그 결과를 도 6에 나타내었다.To compare the differences in adhesion of DAS powders with various degrees of oxidation, adhesion was measured using an Instro 5900R Universal Testing Machine equipped with Bluehill® 3 software (MA, USA). The measurement conditions were set to sample size 20 mm The experiment was conducted using mm x 20 mm. After absorbing 0.05 g of powder and a certain amount of distilled water into the porcine skin, it was given sufficient time for 3 minutes and then stretched at a constant speed to measure the maximum adhesive force. The results are shown in Figure 6.
도 6을 참조하면, 전체적으로 starch가 산화됨에 따라 점착력이 증가한 것을 볼 수 있었으며, 제조예 3에 따라 제조된 0.6 DAS에서 가장 높은 점착력을 보였다. 이는 dialdehyde와 점착력을 측정하기 위해 사용한 porcine skin이 Schiff base reaction과 acetal reaction 반응으로 인해 사라진 hydroxyl 작용기에 의한 수소결합보다 더 강한 화학적 결합이 가능하기 때문으로 보인다. 또한, 산화도가 증가할수록 점차 점착력이 증가하는 모습을 보이다가 제조예 4에 따라 제조된 0.8 DAS 샘플에서부터 점착력이 감소하는 모습을 보이는데, 이는 산화됨에 따라 분자량이 감소되는 것이 요인으로 보인다. 산화도가 증가하면서 DAS와 porcine skin과의 결합력은 증가하여 porcine skin과 DAS는 더 강하게 결합되어 있지만 분자량이 감소하면서 분자간 entanglement가 감소하면서 점착력이 낮아지는 것으로 보인다. Referring to Figure 6, it can be seen that the overall adhesion increased as the starch was oxidized, and the highest adhesion was shown at 0.6 DAS prepared according to Preparation Example 3. This appears to be because dialdehyde and the porcine skin used to measure adhesion are capable of chemical bonding that is stronger than the hydrogen bond caused by the hydroxyl functional group lost due to the Schiff base reaction and acetal reaction. In addition, as the degree of oxidation increases, the adhesive strength gradually increases, but the adhesive strength decreases starting from the 0.8 DAS sample prepared according to Preparation Example 4. This appears to be due to the decrease in molecular weight as oxidation occurs. As the degree of oxidation increases, the bonding strength between DAS and porcine skin increases, so that porcine skin and DAS are bonded more strongly. However, as the molecular weight decreases, the entanglement between molecules decreases, and the adhesion appears to decrease.
실험예 3: DAS/HA 파우더의 함량비에 따른 흡수율 확인Experimental Example 3: Confirmation of absorption rate according to content ratio of DAS/HA powder
실시예 1-1 내지 1-7에 따라 제조된 DAS/HA 파우더를 각각 0.02 g씩 무게를 재어 증류수를 흡수시켜 파우더가 더 이상 수분을 흡수하지 못하고 일부분이 떨어져 나갈 때의 무게를 측정하여 흡수율을 계산하였다. 흡수율은 하기 식 2를 통해 계산하였다.Weigh 0.02 g of each of the DAS/HA powders prepared according to Examples 1-1 to 1-7, absorb distilled water, and measure the weight when the powder no longer absorbs moisture and a portion falls off to determine the absorption rate. Calculated. The absorption rate was calculated using Equation 2 below.
[식 2][Equation 2]
상기 식 2에서, Wo는 파우더의 최초 무게, Wmax는 파우더의 일부분이 떨어져 나갈 때의 무게이다.In Equation 2 above, W o is the initial weight of the powder, and W max is the weight when a portion of the powder falls off.
도 7은 실시예 1-1 내지 1-7에 따라 제조된 DAS/HA 파우더의 흡수율을 비교한 그래프이다. 도 7을 참조하면, DAS와 HA가 1:1로 가교된 파우더가 흡수율이 950%로 최대 흡수율을 가지는 것을 확인할 수 있었다.Figure 7 is a graph comparing the absorption rates of DAS/HA powders prepared according to Examples 1-1 to 1-7. Referring to Figure 7, it was confirmed that the powder crosslinked with DAS and HA at a ratio of 1:1 had the highest absorption rate of 950%.
실험예 4: 가교시간 및 가교제 함량에 따른 흡수율 확인Experimental Example 4: Confirmation of water absorption according to crosslinking time and crosslinking agent content
상기 식 2를 사용하여 실시예 1-4, 1-8 내지 1-11에 따라 제조된 DAS/HA 파우더의 흡수율을 계산하였으며, 그 결과를 도 8에 나타내었다. The absorption rate of the DAS/HA powder prepared according to Examples 1-4, 1-8 to 1-11 was calculated using Equation 2, and the results are shown in Figure 8.
도 8을 참조하면, 가교반응 초기 6시간까지 점차 흡수량이 증가하는 것을 볼 수 있는데, 이는 가교가 충분히 일어나지 않아 엉성한 네트워크 구조를 형성한 것으로 보인다. 가교시간이 6시간에서 780%로 최대 흡수율을 보였으며 그 이후로는 흡수율이 감소하는 모습을 보였다. 이는 조밀한 네트워크 구조의 형성으로 인하여 상대적으로 수분이 침투하지 못하기 때문으로 보인다.Referring to Figure 8, it can be seen that the absorption gradually increases until the first 6 hours of the cross-linking reaction, which appears to have formed a coarse network structure due to insufficient cross-linking. The maximum absorption rate was 780% at 6 hours of cross-linking time, and the absorption rate decreased thereafter. This appears to be because moisture is relatively unable to penetrate due to the formation of a dense network structure.
또한, 상기 식 2를 사용하여 실시예 1-10, 1-12 내지 1-16에 따라 제조된 DAS/HA 파우더의 흡수율을 계산하였으며, 그 결과를 도 9에 나타내었다. In addition, the absorption rate of the DAS/HA powder prepared according to Examples 1-10, 1-12 to 1-16 was calculated using Equation 2, and the results are shown in FIG. 9.
도 9를 참조하면, 가교제 500 μL 양에서 1003%로 최대 흡수율을 보였다. 50 μL와 100 μL 가교제 양은 가교제의 양이 부족하여 충분히 네트워크를 형성하지 못하고 1000, 5000, 10000 μL의 가교제의 양은 조밀한 네트워크의 형성으로 흡수율이 낮아지는 것으로 보인다.Referring to Figure 9, the maximum absorption rate was 1003% at 500 μL of crosslinker. The 50 μL and 100 μL cross-linker amounts did not sufficiently form a network due to the insufficient amount of cross-linker, and the cross-linker amounts of 1000, 5000, and 10000 μL seemed to lower the absorption rate due to the formation of a dense network.
실험예 5: 파우더 입자 크기에 따른 흡수율 확인Experimental Example 5: Confirmation of absorption rate according to powder particle size
상기 식 2를 사용하여 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더의 입자 크기에 따른 흡수율을 계산하였으며, 그 결과를 도 10에 나타내었다. Using Equation 2 above, the absorption rate according to the particle size of the DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14 was calculated, and the results are shown in FIG. 10.
도 10을 참조하면, 500-250 μm, 250-125 μm, 125 μm 이하의 입자 크기에서 각각 866%, 1045%, 632%를 보이며 250-125 μm에서 가장 높은 흡수율을 보였다.Referring to Figure 10, particle sizes of 500-250 μm, 250-125 μm, and 125 μm or less showed 866%, 1045%, and 632%, respectively, with the highest absorption rate at 250-125 μm.
따라서, 실험예 3 내지 5를 참조하면 DAS와 HA를 1:1 함량비로 하여 가교시간 6시간, 가교제의 양 500 μL로 제조한 실시예 1-14에 따른 DAS/HA 파우더의 흡수율이 가장 높았으며, 그 중에서도 입자 크기가 250-125 μm인 DAS/HA 파우더의 흡수율이 가장 높은 것을 확인할 수 있었다. Therefore, referring to Experimental Examples 3 to 5, the absorption rate of DAS/HA powder according to Examples 1-14, prepared with DAS and HA at a 1:1 content ratio, crosslinking time of 6 hours, and crosslinking agent amount of 500 μL, was the highest. , Among them, it was confirmed that DAS/HA powder with a particle size of 250-125 μm had the highest absorption rate.
실험예 6: DAS/HA 파우더의 가교 확인Experimental Example 6: Confirmation of crosslinking of DAS/HA powder
실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더의 가교를 확인하기 위하여 FT-IR 분석을 진행하였으며, 그 결과를 도 11에 나타내었다. 도 11을 참조하면, DAS와 HA의 가교가 진행되면서 DAS의 C=O stretching 피크가 1726 cm-1에서 나타났으며, HA의 카르복실산에 의한 C=O stretching, C-O stretching peak가 1615 cm-1, 1405 cm-1에서 각각 나타났다. 가교제로 사용한 glyoxal에 의한 acetal reaction으로 DAS와 HA 사이의 C-O-C 결합에 대한 peak가 1040 cm-1에서 나타나면서 가교 반응이 일어났음을 확인하였다. FT-IR analysis was performed to confirm crosslinking of the DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, and the results are shown in Figure 11. Referring to Figure 11, as the crosslinking of DAS and HA progressed, the C=O stretching peak of DAS appeared at 1726 cm -1 , and the C=O stretching and CO stretching peaks due to the carboxylic acid of HA appeared at 1615 cm -1. 1 and 1405 cm -1 respectively. It was confirmed that a cross-linking reaction occurred as the peak for the COC bond between DAS and HA appeared at 1040 cm -1 through acetal reaction using glyoxal as a cross-linking agent.
이어서 XPS를 이용하여 C 원소의 결합에너지를 측정하여 가교를 확인하였으며, 그 결과를 도 12에 나타내었다. 도 12를 참조하면, Peak fitting 결과 C-C, C-O-C, C-C=O, O-C=O 결합에 의해 284.6, 286, 288, 290 eV peak에서 각각 나타났으며, C-C 결합을 기준으로 하여 C-O-C 결합을 비교하면 가교되지 않은 DAS/HA 파우더(a)는 0.818, 가교된 DAS/HA 파우더(b)는 0.868로 증가하면서 glyoxal에 의한 가교를 확인하였다.Next, the bonding energy of the C element was measured using XPS to confirm crosslinking, and the results are shown in Figure 12. Referring to Figure 12, peak fitting results showed peaks at 284.6, 286, 288, and 290 eV due to C-C, C-O-C, C-C=O, and O-C=O bonds, respectively. When comparing C-O-C bonds based on C-C bonds, crosslinking Crosslinking by glyoxal was confirmed as the value increased to 0.818 for the uncrosslinked DAS/HA powder (a) and 0.868 for the crosslinked DAS/HA powder (b).
실험예 7: DAS/HA 파우더의 점착성 확인Experimental Example 7: Confirmation of adhesion of DAS/HA powder
실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더의 점착력 향상을 확인하기 위하여 실험예 2에 기재된 방법으로 점착력을 측정하였으며, 그 결과를 도 13에 나타내었다. 도 13을 참조하면, 비교제조예 1에 따른 Pure starch와 비교예 1에 따른 ARISTA? AH가 크게 차이가 없는 것을 확인하였으며, DAS의 도입에 따라 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더의 점착력이 Pure starch 대비 53.8% 증가하는 것을 보이며 향상된 점착력을 갖는 것을 확인하였다.In order to confirm the improvement in adhesion of the DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, the adhesion was measured by the method described in Experimental Example 2, and the results are shown in Figure 13. Referring to Figure 13, Pure starch according to Comparative Preparation Example 1 and ARISTA? according to Comparative Example 1. It was confirmed that there was no significant difference in AH, and with the introduction of DAS, the adhesion of the DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14 increased by 53.8% compared to pure starch, confirming that it had improved adhesion.
실험예 8: DAS/HA/CaClExperimental Example 8: DAS/HA/CaCl 22 /thrombin 파우더의 형태 및 EDS 원소 분석Morphology and EDS elemental analysis of /thrombin powder
실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더의 미세구조를 관찰하기 위하여 전계방사형 주사전자현미경 (Field Emission Scanning Electron Microscope, FE-SEM, TESCAN Inc., Brno, Czech Republic)을 이용하였다. 먼저, sputter coater (Hitachi E-1010, Hitachi Inc., Tokyo, Japan)를 이용하여 10 Pa 미만에서 10 nm/min 조건으로 60초간 코팅하였다. 코팅된 샘플은 가속 전압 20 kV, 작동거리 10 mm 조건으로 관찰하였으며, 그 결과를 도 14 및 15에 나타내었다. 입자 크기별로 도 14의 (a) 및 (b)는 500 μm 이상이고, (c) 및 (d)는 500-250 μm이며, 도 15의 (a) 및 (b)는 250-125 μm이고, (c) 및 (d)는 125 μm 이다.To observe the microstructure of the DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder prepared according to Example 2, a Field Emission Scanning Electron Microscope (FE-SEM, TESCAN Inc., Brno, Czech Republic) was used. did. First, coating was performed for 60 seconds at 10 nm/min at less than 10 Pa using a sputter coater (Hitachi E-1010, Hitachi Inc., Tokyo, Japan). The coated sample was observed under the conditions of an acceleration voltage of 20 kV and an operating distance of 10 mm, and the results are shown in Figures 14 and 15. By particle size, (a) and (b) of Figure 14 are 500 μm or more, (c) and (d) are 500-250 μm, and (a) and (b) of Figure 15 are 250-125 μm, (c) and (d) are 125 μm.
또한, 파우더의 미세구조의 관찰과 더불어 도입된 혈액응고인자를 확인하기 위하여 에너지 분산 X선 분광분석기(Energy-Dispersive X-ray Spectroscopy, EDS)를 이용하였다. 구체적으로 mapping을 이용하여 샘플에 존재하는 원소를 측정하였으며, 그 결과를 도 16 및 아래 표 4에 나타내었다.In addition, energy-dispersive X-ray spectroscopy (EDS) was used to observe the microstructure of the powder and to confirm the introduced blood coagulation factors. Specifically, the elements present in the sample were measured using mapping, and the results are shown in Figure 16 and Table 4 below.
[표 4][Table 4]
도 16 및 상기 표 4를 참조하면, CaCl2의 도입은 Ca2+ 이온을 통해 확인하였고, 트롬빈의 도입은 단백질에 존재하는 메티오닌(methionine)과 시스테인(cysteine)의 S 원소를 통해 확인하였다. DAS/HA 파우더에 도입한 Ca2+ 이온의 원소 함량은 0.31%였고, S의 원소 함량은 0.02%였다. S 원소 함량의 경우 트롬빈 아미노산 서열 중 메티오닌과 시스테인의 구성 비율이 낮고, 도입된 트롬빈의 양이 적기 때문으로 보인다. 또한, EDS mapping을 통해 파우더에 도입한 CaCl2와 트롬빈이 균일하게 도입된 것을 확인하였다.Referring to FIG. 16 and Table 4, the incorporation of CaCl 2 was confirmed through Ca 2+ ions, and the incorporation of thrombin was confirmed through the S elements of methionine and cysteine present in the protein. The elemental content of Ca 2+ ions introduced into the DAS/HA powder was 0.31%, and the elemental content of S was 0.02%. In the case of S element content, this appears to be because the composition ratio of methionine and cysteine in the thrombin amino acid sequence is low and the amount of introduced thrombin is small. In addition, it was confirmed through EDS mapping that CaCl 2 and thrombin introduced into the powder were uniformly introduced.
실험예 9: DAS/HA/CaClExperimental Example 9: DAS/HA/CaCl 22 /thrombin 파우더에 포함된 CaCa contained in /thrombin powder 2+2+ 이온의 정량 Quantification of ions
실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더에 도입된 혈액응고인자 중 Ca2+이온의 정량적 분석을 위하여 유도 결합 플라즈마 분광기(Inductively Coupled Plasma Spectrometer, ICP/OES, 720-ES, Varian Inc., California, U.S.)를 이용하였다. 0, 2.5, 5, 10 ppm으로 제조된 표준 용액의 결과 값으로 표준검정곡선을 그리고 파우더에 존재하는 Ca2+ 이온을 계산하였으며, 그 결과를 도 17 및 아래 표 5에 나타내었다.For quantitative analysis of Ca 2+ ions among the blood coagulation factors introduced into the DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder prepared according to Example 2, an inductively coupled plasma spectrometer (ICP/OES, 720-ES, Varian Inc., California, US) was used. A standard calibration curve was drawn using the results of standard solutions prepared at 0, 2.5, 5, and 10 ppm, and the Ca 2+ ions present in the powder were calculated, and the results are shown in Figure 17 and Table 5 below.
[표 5][Table 5]
도 17 및 상기 표 5를 참조하면, 파우더에 존재하는 Ca2+ 이온의 양은 5.23 ppm으로 파우더 1 mg당 Ca2+ 이온 41.62 μg을 도입하였지만 동결 건조 후 파우더 1 mg당 Ca2+ 이온 38.36 μg이 함유되었음을 알 수 있다. 이를 통해 실제 도입된 양과 비교하여 92.17%가 수득됨을 확인할 수 있었다.Referring to Figure 17 and Table 5, the amount of Ca 2+ ions present in the powder was 5.23 ppm, and 41.62 μg of Ca 2+ ions were introduced per mg of powder, but after freeze-drying, 38.36 μg of Ca 2+ ions were introduced per mg of powder. It can be seen that it is contained. Through this, it was confirmed that 92.17% was obtained compared to the amount actually introduced.
실험예 10: DAS/HA/CaClExperimental Example 10: DAS/HA/CaCl 22 /thrombin 파우더에 포함된 트롬빈의 정량 및 활성도 측정Quantification and activity measurement of thrombin contained in /thrombin powder
실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더에 도입된 트롬빈의 정량적 분석을 위하여 Bradford protein assay를 이용하였다. 0, 25, 50, 75, 100 μg/mL 제조된 표준 용액의 결과 값으로 표준검정곡선을 그리고 파우더에 존재하는 트롬빈의 양을 계산하였으며, 그 결과를 도 18 및 아래 표 6에 나타내었다.For quantitative analysis of thrombin introduced into the DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder prepared according to Example 2, Bradford protein assay was used. A standard calibration curve was drawn using the results of the standard solutions prepared at 0, 25, 50, 75, and 100 μg/mL, and the amount of thrombin present in the powder was calculated. The results are shown in Figure 18 and Table 6 below.
[표 6][Table 6]
도 18 및 상기 표 6을 참조하면, 파우더 1 mg당 트롬빈을 2.250 μg 도입하였지만 동결 건조 후 파우더 1 mg당 트롬빈이 2.238 μg 도입되면서 파우더에 존재하는 트롬빈의 양은 44.8 μg/mL로 실제 도입된 양과 비교하여 99.5%가 수득됨을 확인할 수 있었다.Referring to Figure 18 and Table 6 above, 2.250 μg of thrombin was introduced per 1 mg of powder, but after freeze-drying, 2.238 μg of thrombin was introduced per mg of powder, and the amount of thrombin present in the powder was 44.8 μg/mL, compared to the amount actually introduced. It was confirmed that 99.5% was obtained.
또한, 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더에 트롬빈이 도입됨을 확인하고 혈장단백질로서의 역할을 충분히 수행하는지 확인하기 위하여 chromogenix S-2238 (werfen Co., Barcelona, Spain)을 이용하여 트롬빈 활성도 측정을 하였다. 0, 25, 50, 75, 100 μg/mL로 제조된 표준 용액의 결과값으로 표준검정곡선을 그리고 트롬빈의 활성도를 계산하였으며, 그 결과를 도 19 및 아래 표 7에 나타내었다.In addition, in order to confirm that thrombin was introduced into the DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder prepared according to Example 2 and to confirm that it sufficiently performed its role as a plasma protein, chromogenix S-2238 (werfen Co., Barcelona, Spain) was used. Thrombin activity was measured using A standard calibration curve was drawn using the results of standard solutions prepared at 0, 25, 50, 75, and 100 μg/mL, and the thrombin activity was calculated, and the results are shown in Figure 19 and Table 7 below.
[표 7][Table 7]
도 19 및 상기 표 7을 참조하면, 트롬빈 도입 전과 후를 비교 시 활성도가 97.3%를 나타내어 파우더에 도입된 트롬빈이 활성을 유지한다는 것을 확인할 수 있었다.Referring to Figure 19 and Table 7 above, when comparing before and after the introduction of thrombin, the activity was 97.3%, confirming that the thrombin introduced into the powder maintained its activity.
실험예 11: DAS/HA/CaClExperimental Example 11: DAS/HA/CaCl 22 /thrombin 파우더의 /thrombin powder in vitroin vitro 혈액응고능 평가 Blood coagulation function evaluation
실험예 11-1: 전혈응고실험Experimental Example 11-1: Whole blood coagulation experiment
실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더의 혈액응고능을 평가하기 위하여 전형의 응고를 관찰하는 Lee-White법과 Imai-Nose법을 진행하였다.To evaluate the blood coagulation ability of the DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder prepared according to Example 2, the Lee-White method and Imai-Nose method to observe typical coagulation were performed.
먼저, Lee-Whit법은 개의 1.2형 전혈을 이용하였으며, 항응고제의 탈칼슘화를 억제하기 위하여 0.0125 M 농도가 되도록 CaCl2 용액을 도입하였다. 파우더를 도입하지 않은 혈액을 대조군(control)으로 설정하였으며, 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더, 비교예 1에 따른 ARISTA? AH를 도입한 후에 혈액이 흐르지 않을 때까지의 시간을 측정하여 비교하였고, 그 결과를 도 20에 나타내었다.First, the Lee-Whit method used dog type 1.2 whole blood, and CaCl 2 solution was introduced to a concentration of 0.0125 M to inhibit decalcification of the anticoagulant. Blood without introduction of powder was set as a control, and DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder prepared according to Example 2, and Comparative Example 1 According to ARISTA? The time until blood stopped flowing after introducing AH was measured and compared, and the results are shown in Figure 20.
도 20을 참조하면, 혈액응고인자의 유무에 상관없이 DAS/HA 파우더와 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더가 대조군(control)보다 빠르게 혈액이 응고되는 것을 확인하였다. 혈액응고인자가 들어간 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더는 대조군 대비 3.04배 빠르게 응고되었으며, 혈액응고인자를 도입하지 않은 DAS/HA 파우더는 대조군 대비 1.74배 빠르게 응고가 진행되었다. 혈액응고인자를 도입하지 않은 DAS/HA 파우더의 알데하이드기가 낮은 pH를 가지면서 혈소판과 같은 지혈인자의 구조에 영향을 주게 되면서 혈전 형성을 촉진하는 것으로 보인다.Referring to Figure 20, it was confirmed that DAS/HA powder and DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder coagulate blood faster than the control, regardless of the presence or absence of blood coagulation factors. DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder containing blood coagulation factors coagulated 3.04 times faster than the control group, and DAS/HA powder without blood coagulation factors coagulated 1.74 times faster than the control group. The aldehyde group of DAS/HA powder, which does not contain blood coagulation factors, appears to promote blood clot formation by affecting the structure of hemostatic factors such as platelets at a low pH.
Imai-Nose법은 개의 1.2형 전혈을 이용하였으며 항응고제의 탈칼슘화를 억제하기 위하여 0.0125 M 농도가 되도록 CaCl2 용액을 도입하였다. 파우더를 도입하지 않은 혈액을 대조군(control)으로 설정하였다. 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더, 비교예 1에 따른 ARISTA? AH 각각에 전혈과 CaCl2를 도입하여 혈액 응고 반응을 진행하였고, 일정 시간이 지난 뒤 증류수를 넣어 혈액 응고반응을 종료시켰다. 그 후, 생성된 혈전을 분리하여 포르말린으로 10분간 고정하고 증류수로 5분간 세척 후 건조하여 무게를 재어 혈액응고능을 비교하였으며, 그 결과를 도 21에 나타내었다.The Imai-Nose method used dog type 1.2 whole blood, and CaCl 2 solution was introduced to a concentration of 0.0125 M to inhibit decalcification of the anticoagulant. Blood to which no powder was introduced was set as the control. DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder prepared according to Example 2, ARISTA? according to Comparative Example 1. Whole blood and CaCl 2 were introduced into each AH to proceed with the blood coagulation reaction, and after a certain period of time, distilled water was added to terminate the blood coagulation reaction. Afterwards, the generated blood clots were separated, fixed with formalin for 10 minutes, washed with distilled water for 5 minutes, dried, weighed, and compared for blood coagulation ability. The results are shown in Figure 21.
도 21을 참조하면, DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더의 경우 반응 시간 5분이 지나면서 급격한 차이를 보이며 우수한 혈액응고능을 보였다. 한편, Lee-White법과 동일하게 DAS/HA 파우더에서도 상대적으로 우수한 혈액응고능을 보였다.Referring to Figure 21, DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder showed excellent blood coagulation ability with a sharp difference after 5 minutes of reaction time. Meanwhile, similar to the Lee-White method, DAS/HA powder also showed relatively excellent blood coagulation ability.
실험예 11-2: 적혈구 용혈 실험Experimental Example 11-2: Red blood cell hemolysis experiment
혈액의 응고과정에 참여하지 않고 남아있는 적혈구를 용혈시켜 흡광도를 측정하여 혈액응고능을 평가하였다. 적혈구는 삼투압으로 인해 용혈되면서 내부에 존재하는 헤모글로빈이 방출되므로 540 nm에서 헤모글로빈의 흡광도를 측정하였다. 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더, 비교예 1에 따른 ARISTA? AH 각각에 혈액과 CaCl2를 도입하고 일정 시간이 지난 후 증류수를 넣어 혈액 응고반응을 종료시켰다. 그 후, 상층액을 다시 증류수에 넣어 용혈시키는 과정을 2회 진행하고 흡광도를 측정하여 혈액응고능을 비교하였다. 파우더를 도입하지 않은 혈액을 대조군으로 설정하였으며, 그 결과를 도 22에 나타내었다.The blood coagulation ability was evaluated by hemolyzing the remaining red blood cells that did not participate in the blood coagulation process and measuring the absorbance. As red blood cells are hemolyzed due to osmotic pressure, the hemoglobin present inside them is released, so the absorbance of hemoglobin was measured at 540 nm. DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder prepared according to Example 2, ARISTA? according to Comparative Example 1. Blood and CaCl 2 were introduced into each AH, and after a certain period of time, distilled water was added to terminate the blood coagulation reaction. Afterwards, the supernatant was again placed in distilled water and the hemolysis process was performed twice, and the blood coagulation ability was compared by measuring the absorbance. Blood without introduction of powder was set as a control group, and the results are shown in Figure 22.
도 22를 참조하면, DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더가 반응 시간 5분인 지점에서 혈전형성의 차이가 크게 나타나면서 우수한 혈액응고능을 보였다. 또한, 다른 실험과 마찬가지로 DAS/HA 파우더가 대조군보다 우수한 혈액응고능을 보였다.Referring to Figure 22, DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder showed excellent blood coagulation ability with a significant difference in thrombus formation at 5 minutes of reaction time. Also, like other experiments, DAS/HA powder showed better blood coagulation ability than the control group.
실험예 12: 생체적합성 평가Experimental Example 12: Biocompatibility evaluation
In vivo 동물 실험을 진행하기 전 체내에서의 안전성을 평가하기 위해 MTT assay를 이용하여 세포독성평가를 진행하였다. 대조군으로 24-well plate를 사용하였고, 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더, 비교예 1에 따른 ARISTA? AH를 1, 2.5, 5, 10%로 희석하여 실험을 진행하였으며, 그 결과를 도 23에 나타내었다.Before conducting in vivo animal experiments, cytotoxicity evaluation was performed using MTT assay to evaluate safety in vivo. A 24-well plate was used as a control, DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder prepared according to Example 2, and ARISTA? according to Comparative Example 1. The experiment was conducted by diluting AH to 1, 2.5, 5, and 10%, and the results are shown in Figure 23.
도 23을 참조하면, 1%와 2.5%로 희석한 샘플은 모두 70% 이상의 세포 생착율을 보이며 독성이 없는 것으로 나타났다. DAS/HA 파우더를 5%와 10%로 희석하여 진행한 샘플은 각각 58.4, 11.5%의 세포 생착율을 보였으며, DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더를 5%와 10%로 희석하여 진행한 샘플은 각각 57.3%와 10.1%의 세포 생착율을 보이며 세포 독성을 나타내었다. 이는 DAS에 존재하는 aldehyde에 의한 배지의 성분에 영향을 주어 세포에 영향을 준 것으로 보인다.Referring to Figure 23, samples diluted to 1% and 2.5% both showed a cell engraftment rate of over 70% and showed no toxicity. Samples prepared with DAS/HA powder diluted to 5% and 10% showed cell engraftment rates of 58.4 and 11.5%, respectively, and samples prepared with DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder diluted to 5% and 10%. showed cytotoxicity with cell engraftment rates of 57.3% and 10.1%, respectively. This appears to have affected the cells by affecting the components of the medium due to the aldehyde present in DAS.
실험예 13: Experimental Example 13: In vivoIn vivo 동물실험 animal testing
실험예 13-1: 지혈능 평가Experimental Example 13-1: Evaluation of hemostatic ability
파우더의 지혈능을 평가하기 위하여 8주령 SD rat을 사용하여 in vivo 동물실험을 진행하였다. SD rat은 avertin 마취제를 복부에 마취하여 절개한 후 간을 꺼내 disposable biopsy punch를 사용하여 직경 6 mm, 깊이 7 mm로 상처를 내어 출혈을 유도하였다. 이후 5 g 추와 거즈를 사용하여 30초간 압박 후 파우더를 적용하여 지혈시간을 측정하였다. 지혈이 이루어지면 생리식염수 5 mL를 이용하여 파우더를 걷어내어 재출혈 여부를 확인하였다. 혈액과 생리식염수를 흡수한 거즈, 필터페이퍼와 파우더의 무게를 측정 후 미리 측정한 거즈와 필터페이퍼의 무게와 비교하여 출혈량을 계산하였다. 대조군은 파우더를 적용하지 않고 자가 지혈되도록 하였고, 실험군으로는 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더, 비교예 1에 따른 ARISTA? AH를 사용하였으며, 그 결과를 도 24 및 25에 나타내었다.To evaluate the hemostatic ability of the powder, an in vivo animal experiment was conducted using 8-week-old SD rats. SD rats were anesthetized with avertin anesthetic in the abdomen, an incision was made, the liver was taken out, and a wound of 6 mm in diameter and 7 mm in depth was made using a disposable biopsy punch to induce bleeding. Afterwards, pressure was applied for 30 seconds using a 5 g weight and gauze, and powder was applied to measure hemostasis time. Once hemostasis was achieved, the powder was removed using 5 mL of physiological saline to check for rebleeding. The weight of the gauze, filter paper, and powder that absorbed the blood and saline solution was measured and compared with the previously measured weight of the gauze and filter paper to calculate the amount of bleeding. The control group was allowed to self-hemostasis without applying powder, and the experimental group was DAS/HA powder prepared according to Examples 1-14, DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder prepared according to Example 2, and Comparative Example 1. According to ARISTA? AH was used, and the results are shown in Figures 24 and 25.
도 24를 참조하면, 지혈시간은 대조군, ARISTA? AH, DAS/HA 파우더와 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더가 각각 약 5분 24초, 3분 30초, 2분 24초, 1분 6초의 결과를 보였다. ARISTA? AH와 DAS/HA 파우더, DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더는 대조군 대비 약 1.5배, 2.3배, 4.9배 빠른 지혈시간을 보이면서, DAS/HA 파우더와 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더는 ARISTA? AH보다 빠른 지혈시간을 보였다.Referring to Figure 24, the hemostasis time is the control group, ARISTA? AH, DAS/HA powder and DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder showed results of approximately 5 minutes 24 seconds, 3 minutes 30 seconds, 2 minutes 24 seconds, and 1 minute 6 seconds, respectively. ARISTA? AH, DAS/HA powder, and DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder showed hemostasis times about 1.5, 2.3, and 4.9 times faster than the control group, and DAS/HA powder and DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder showed ARISTA ? It showed faster hemostasis time than AH.
도 25를 참조하면, 출혈량의 경우 대조군, ARISTA? AH, DAS/HA 파우더와 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더가 각각 3870 mg, 2424 mg, 907 mg, 210 mg으로 측정되었으며, 출혈시간이 줄어듦에 따라 출혈량이 함께 줄어드는 것을 보였다. Referring to Figure 25, in the case of bleeding amount, control group, ARISTA? AH, DAS/HA powder and DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder were measured at 3870 mg, 2424 mg, 907 mg, and 210 mg, respectively, and the amount of bleeding was shown to decrease as the bleeding time decreased.
위의 실험 결과를 토대로 지혈능을 비교하기 위하여 시간당 출혈량을 계산하여 비교하였으며, 그 결과를 도 26에 나타내었다. 도 26을 참조하면, 대조군, ARISTA? AH, DAS/HA 파우더와 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더가 각각 725 mg/min, 686 mg/min, 392 mg/min, 207 mg/min으로 계산되었다. ARISTA? AH는 대조군과 큰 차이를 보이지 않는 것에 비하여 DAS/HA 파우더와 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더는 대조군 대비 약 2-3배의 차이를 보였다. 이는 ARISTA? AH는 혈액의 빠른 흡수를 통한 지혈을 하기 때문에 대조군과 큰 차이를 보이지 않았다. DAS/HA 파우더는 대조군 대비 빠른 지혈능을 보였다. 이는 oxidized cellulose인 DAS가 내인성 경로에 있는 인자에게 영향을 주기 때문으로 보인다. DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더는 기존 DAS/HA 파우더의 지혈능과 더불어 혈액응고인자의 도입으로 인해 대조군 대비 뛰어난 지혈능을 보였다. 이를 통해 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더는 시판중인 ARISTA? AH 보다 뛰어난 지혈능을 갖는 것을 확인하였다.In order to compare the hemostatic ability based on the above experimental results, the amount of bleeding per hour was calculated and compared, and the results are shown in Figure 26. Referring to Figure 26, control group, ARISTA? AH, DAS/HA powder, and DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder were calculated to be 725 mg/min, 686 mg/min, 392 mg/min, and 207 mg/min, respectively. ARISTA? While AH did not show much difference from the control group, DAS/HA powder and DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder showed about 2-3 times difference compared to the control group. Is this ARISTA? Because AH achieves hemostasis through rapid absorption of blood, there was no significant difference from the control group. DAS/HA powder showed rapid hemostatic activity compared to the control group. This appears to be because DAS, an oxidized cellulose, affects factors in the endogenous pathway. DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder showed superior hemostatic ability compared to the control group due to the introduction of blood coagulation factors in addition to the hemostatic ability of the existing DAS/HA powder. Through this, DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder is a commercially available ARISTA? It was confirmed that it has superior hemostatic ability than AH.
실험예 13-2: 조직학적(Histology) 분석Experimental Example 13-2: Histological Analysis
상기 지혈된 간 조직을 채취하여 H&E staining과 Carstair's staining을 진행하였다. The hemostatic liver tissue was collected and subjected to H&E staining and Carstair's staining.
H&E staining은 세포핵을 푸른색으로 염색하고 에오신은 헤마톡실린으로 염색되지 않은 부분을 붉은색으로 염색한다. 도 27은 H&E staining 이미지로, (a)는 대조군, (b)는 비교예 1에 따른 ARISTA? AH, (c)는 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, (d)는 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더이다. 도 27을 참조하면, 간 조직의 상처 부위에 붉은색으로 적혈구가 응집되어 있는 모습을 확인할 수 있다.H&E staining stains the cell nucleus blue, and eosin stains the parts not stained with hematoxylin red. Figure 27 is an H&E staining image, (a) is the control group, and (b) is the ARISTA? according to Comparative Example 1. AH, (c) is the DAS/HA powder prepared according to Example 1-14, and (d) is the DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder prepared according to Example 2. Referring to Figure 27, it can be seen that red blood cells are aggregated in the wounded area of the liver tissue.
Carstair's staining은 피브린을 밝은 붉은색, 혈소판을 파란색 그리고 적혈구를 선명한 노란색을 염색한다. 도 28은 Carstair's staining 이미지로, (a)는 대조군, (b)는 비교예 1에 따른 ARISTA? AH, (c)는 실시예 1-14에 따라 제조된 DAS/HA 파우더, (d)는 실시예 2에 따라 제조된 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더이다. 도 28을 참조하면, 대조군과 ARISTA? AH 보다 DAS/HA와 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더에서 밝은 붉은색과 파란색이 더 많이 보이면서 피브린과 혈소판이 많이 존재함을 알 수 있다. DAS/HA 파우더 자체의 지혈능과 혈액응고인자로 사용한 CaCl2와 트롬빈으로 인하여 혈전 형성을 촉진하여 DAS/HA와 DAS/HA/CaCl2/thrombin 파우더에서 우수한 지혈능을 보였다.Carstair's staining stains fibrin bright red, platelets blue, and red blood cells bright yellow. Figure 28 is a Carstair's staining image, (a) is the control group, and (b) is the ARISTA? according to Comparative Example 1. AH, (c) is the DAS/HA powder prepared according to Example 1-14, and (d) is the DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder prepared according to Example 2. Referring to Figure 28, control group and ARISTA? More bright red and blue colors are visible in DAS/HA and DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powder than in AH, indicating the presence of a lot of fibrin and platelets. DAS/HA and DAS/HA/CaCl 2 /thrombin powders showed excellent hemostatic properties by promoting blood clot formation due to the hemostatic properties of DAS/HA powder itself and CaCl 2 and thrombin used as blood coagulation factors.
이상, 도면을 참조하여 바람직한 실시예와 함께 본 발명에 대하여 상세하게 설명하였으나, 이러한 도면과 실시예로 본 발명의 기술적 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 따라서, 본 발명의 기술적 사상의 범위 내에서 다양한 변형예 또는 균등한 범위의 실시예가 존재할 수 있다. 그러므로 본 발명에 따른 기술적 사상의 권리범위는 청구범위에 의해 해석되어야 하고, 이와 동등하거나 균등한 범위 내의 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 속하는 것으로 해석되어야 할 것이다.Above, the present invention has been described in detail along with preferred embodiments with reference to the drawings, but the scope of the technical idea of the present invention is not limited to these drawings and examples. Accordingly, various modifications or equivalent embodiments may exist within the scope of the technical idea of the present invention. Therefore, the scope of rights of the technical idea according to the present invention should be interpreted in accordance with the claims, and technical ideas within the scope equivalent or equivalent thereto should be interpreted as falling within the scope of the rights of the present invention.
Claims (15)
상기 생체적합성 고분자는 제1 고분자 및 제2 고분자를 포함하며,
상기 산화 전분과 상기 제1 고분자가 수소결합으로 점착된 복합체가 상기 제2 고분자와 공유결합하며 서로 가교된 것인 파우더형 점착성 지혈제.
oxidized starch; And biocompatible polymers;
The biocompatible polymer includes a first polymer and a second polymer,
A powder-type adhesive hemostatic agent in which a complex of the oxidized starch and the first polymer is covalently bonded to the second polymer and cross-linked to each other by hydrogen bonding.
상기 산화 전분은 디알데히드 전분(dialdehyde starch)을 포함하는 것을 특징으로 하는 파우더형 점착성 지혈제.
According to paragraph 1,
A powder-type adhesive hemostatic agent, wherein the oxidized starch includes dialdehyde starch.
상기 생체적합성 고분자는 히알루론산, 콜라겐, 키토산, 전분, 셀룰로오스, 산화 셀룰로오스(oxidized cellulose), 알지네이트, 젤라틴, 폴리비닐알코올(PVA), 알긴산, 펙틴, 카라기난, 덱스트란, 아가로스, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 폴리에틸렌글리콜(PEG), 히드록시프로필셀룰로스(HPC), 히드록시에틸셀룰로스(HEC), 히드록시프로필메틸셀룰로스(HPMC), 풀루란(pullulan) 및 폴리아크릴산으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 파우더형 점착성 지혈제.
According to paragraph 1,
The biocompatible polymers include hyaluronic acid, collagen, chitosan, starch, cellulose, oxidized cellulose, alginate, gelatin, polyvinyl alcohol (PVA), alginic acid, pectin, carrageenan, dextran, agarose, and polyvinylpyrroli. 1 selected from the group consisting of PVP, polyethylene glycol (PEG), hydroxypropylcellulose (HPC), hydroxyethylcellulose (HEC), hydroxypropylmethylcellulose (HPMC), pullulan, and polyacrylic acid. A powder-type adhesive hemostatic agent comprising more than one species.
상기 생체적합성 고분자는 히알루론산을 포함하는 것을 특징으로 하는 파우더형 점착성 지혈제.
According to paragraph 3,
A powder-type adhesive hemostatic agent, wherein the biocompatible polymer contains hyaluronic acid.
상기 제1 고분자는 폴리아크릴산, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 풀루란(pullulan) 및 폴리도파민(polydopamine)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 파우더형 점착성 지혈제.
According to paragraph 3,
The first polymer is a powder-type adhesive hemostatic agent, characterized in that it contains at least one selected from the group consisting of polyacrylic acid, polyvinylpyrrolidone (PVP), pullulan, and polydopamine.
상기 산화 전분과 생체적합성 고분자는 중량비가 1:0.1 내지 10인 것을 특징으로 하는 파우더형 점착성 지혈제.
According to paragraph 1,
A powder-type adhesive hemostatic agent, characterized in that the oxidized starch and the biocompatible polymer have a weight ratio of 1:0.1 to 10.
상기 파우더형 점착성 지혈제는 입자 크기가 1 내지 500 μm인 것을 특징으로 하는 파우더형 점착성 지혈제.
According to paragraph 1,
The powder-type adhesive hemostatic agent is characterized in that the particle size is 1 to 500 μm.
상기 파우더형 점착성 지혈제는 칼슘화합물 및 지혈물질로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 파우더형 점착성 지혈제.
According to paragraph 1,
The powder-type adhesive hemostatic agent is characterized in that it further comprises at least one selected from the group consisting of calcium compounds and hemostatic substances.
상기 칼슘화합물은 염화칼슘, 질산칼슘, 탄산칼슘, 아세트산칼슘, 탄산칼슘, 황화칼슘, 탄화칼슘 및 인산칼슘으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 파우더형 점착성 지혈제.
According to clause 8,
The calcium compound is a powder-type adhesive hemostatic agent, characterized in that it contains at least one selected from the group consisting of calcium chloride, calcium nitrate, calcium carbonate, calcium acetate, calcium carbonate, calcium sulfide, calcium carbide, and calcium phosphate.
상기 지혈물질은 트롬빈, 프로트롬빈, 트롬보플라스틴, 피브리노겐, 아프로티닌, 비타민 C 및 비타민 K로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 파우더형 점착성 지혈제.
According to clause 10,
The hemostatic substance is a powder-type adhesive hemostatic agent, characterized in that it contains at least one selected from the group consisting of thrombin, prothrombin, thromboplastin, fibrinogen, aprotinin, vitamin C, and vitamin K.
상기 산화 전분을 포함하는 제1 용액을 제조하는 단계;
생체적합성 고분자를 포함하는 제2 용액을 제조하는 단계;
상기 제1 용액 및 제2 용액을 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계;
상기 혼합물에 가교제를 첨가하여 상기 산화 전분과 생체적합성 고분자를 가교시키는 단계; 및
상기 가교된 반응물을 건조 및 분쇄하여 파우더형 점착성 지혈제를 제조하는 단계;를
포함하는 파우더형 점착성 지혈제의 제조방법.
Producing oxidized starch by oxidizing starch;
Preparing a first solution containing the oxidized starch;
Preparing a second solution containing a biocompatible polymer;
Preparing a mixture by mixing the first solution and the second solution;
Crosslinking the oxidized starch and the biocompatible polymer by adding a crosslinking agent to the mixture; and
Preparing a powder-type adhesive hemostatic agent by drying and pulverizing the cross-linked reactant;
Method for producing a powder-type adhesive hemostatic agent comprising:
상기 산화 전분과 생체적합성 고분자를 가교시키는 단계에서,
상기 가교는 1 내지 24 시간 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 파우더형 점착성 지혈제의 제조방법.
According to clause 11,
In the step of crosslinking the oxidized starch and the biocompatible polymer,
A method for producing a powder-type adhesive hemostatic agent, characterized in that the crosslinking is performed for 1 to 24 hours.
상기 혼합물 100 중량부에 대하여 상기 가교제 0.001 내지 5 중량부를 첨가하는 것을 특징으로 하는 파우더형 점착성 지혈제의 제조방법.
According to clause 11,
A method for producing a powder-type adhesive hemostatic agent, characterized in that 0.001 to 5 parts by weight of the crosslinking agent is added to 100 parts by weight of the mixture.
상기 가교제는 글리옥살(glyoxal), 글루타알데히드(glutaraldehye), 시트르산(citric acid), N,N-메틸렌 비스아크릴아마이드(N,N-methylene bisacrylamide), 디알데하이드(dialdehyde), 옥살릭액시드(oxalic acid) 및 시트르산(citric acid)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 파우더형 점착성 지혈제의 제조방법.
According to clause 11,
The cross-linking agent is glyoxal, glutaraldehye, citric acid, At least one selected from the group consisting of N,N-methylene bisacrylamide, dialdehyde, oxalic acid, and citric acid. A method for producing a powder-type adhesive hemostatic agent comprising:
상기 파우더형 점착성 지혈제를 제조하는 단계 이후에,
상기 파우더형 점착성 지혈제를 용매에 분산시켜 제3 용액을 제조하고,
상기 제3 용액에 칼슘화합물 및 지혈물질로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 첨가하여 혼합한 다음, 상기 혼합한 혼합물을 건조 및 분쇄하는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 파우더형 점착성 지혈제의 제조방법.
According to clause 11,
After preparing the powder-type adhesive hemostatic agent,
Preparing a third solution by dispersing the powder-type adhesive hemostatic agent in a solvent,
Manufacturing a powder-type adhesive hemostatic agent further comprising adding and mixing at least one selected from the group consisting of a calcium compound and a hemostatic material to the third solution, and then drying and pulverizing the mixed mixture. method.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020220142899A KR20240067143A (en) | 2022-10-31 | 2022-10-31 | Powder-type adhesive hemostatic agent and method of preparing same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020220142899A KR20240067143A (en) | 2022-10-31 | 2022-10-31 | Powder-type adhesive hemostatic agent and method of preparing same |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20240067143A true KR20240067143A (en) | 2024-05-16 |
Family
ID=91276409
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020220142899A KR20240067143A (en) | 2022-10-31 | 2022-10-31 | Powder-type adhesive hemostatic agent and method of preparing same |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20240067143A (en) |
-
2022
- 2022-10-31 KR KR1020220142899A patent/KR20240067143A/en unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN114712550B (en) | Hydrogel adhesive capable of being injected for rapid hemostasis and preparation method and application thereof | |
| KR102135484B1 (en) | Hemostatic compositions | |
| KR102143252B1 (en) | Hemostatic composition | |
| AU2003231147B2 (en) | Chemically activated carboxypolysaccharides and uses | |
| CN114767919B (en) | Hydrogel powder for rapid hemostasis as well as preparation method and application thereof | |
| JP4159682B2 (en) | Hemostatic material | |
| KR102465366B1 (en) | Powder type hemostatic agent manufacturing method and powder type hemostatic agent thereof | |
| CN104474575A (en) | Chitosan hemostatic material formed through covalent crosslinking and preparation method thereof | |
| CN110935058A (en) | Double-component medical glue for rapid hemostasis and preparation method thereof | |
| Yan et al. | Synthesis and properties of poly (DEX-GMA/AAc) microgel particle as a hemostatic agent | |
| CN111848855A (en) | Injectable hydrogel dressing with pH response and preparation method and application thereof | |
| CN109453420A (en) | Hemostatic composition and its preparation method and application | |
| Atashgahi et al. | Epinephrine-entrapped chitosan nanoparticles covered by gelatin nanofibers: A bi-layer nano-biomaterial for rapid hemostasis | |
| CN113663116A (en) | Ion-based hydrogel with hemostasis and adhesion resistance and preparation method and application thereof | |
| WO2009072146A1 (en) | Biocompatible and biodegradable biopolymer matrix | |
| CN112300418B (en) | Adhesive high-efficiency hemostatic microsphere and preparation method thereof | |
| KR20240067143A (en) | Powder-type adhesive hemostatic agent and method of preparing same | |
| CN114306715A (en) | Dry pad comprising thrombin and pectin | |
| KR102029926B1 (en) | Hydrogel hemostatic material comprising pullulan and manufacturing method thereof | |
| CN114887110B (en) | Hemostatic material capable of quickly stopping bleeding and preparation method thereof | |
| CN113289052B (en) | Controllable cross-linking and degradation material and application thereof | |
| KR102280553B1 (en) | Improved hydrogel hemostatic agent manufacturing method, and hemostatic agent thereof | |
| EP4056204A1 (en) | Starch-based fluffy particles and preparation method therefor and application thereof | |
| KR102521769B1 (en) | Topical Hemostat Powder Composition and Manufacturing Method Thereof | |
| CN113512132A (en) | Quick hemostatic hydrogel and preparation method thereof |