KR20240063809A - 아밀로이드 장애를 치료하기 위한 펩타이드-Fc 융합체 - Google Patents

아밀로이드 장애를 치료하기 위한 펩타이드-Fc 융합체 Download PDF

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KR20240063809A
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조나단 에스. 월
제임스 에스. 포스터
자우메 폰즈
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유니버시티 오브 테네시 리서치 파운데이션
아트라러스, 인크.
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Abstract

본원에는 인간 Fc 영역에 연결된 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하는 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질이 제공된다. 또한, 본원에는 인간 Fc 영역에 연결된 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하는 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 투여함으로써 아밀로이드계 질환을 치료하고 아밀로이드 침착물을 식별하는 방법이 제공된다.

Description

아밀로이드 장애를 치료하기 위한 펩타이드-Fc 융합체
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 5월 5일자로 출원된 미국 가출원 제63/184,682호 및 2021년 5월 10일자로 출원된 미국 가출원 제63/186,605호에 대한 우선권을 주장하며, 이들 각각의 내용은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
ASCII 텍스트 파일로의 서열 목록 제출
ASCII 텍스트 파일로의 다음 제출 내용은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다: 서열 목록의 컴퓨터 판독 가능 형식(CRF)(파일명: 165992000840SEQLIST.TXT, 기록 날짜: 2022년 5월 4일, 크기: 16,694 바이트).
발명의 분야
본 발명은 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 투여하여 아밀로이드 관련 장애를 치료하는 방법, 및 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 사용하여 아밀로이드를 검출하는 방법에 관한 것이다.
아밀로이드증은 AA 아밀로이드증, AL 아밀로이드증, AH 아밀로이드증, Aβ 아밀로이드증, ATTR 아밀로이드증, hATTR 아밀로이드증, ALect2 아밀로이드증 및 II형 당뇨병의 IAPP 아밀로이드증, 알츠하이머병, 다운증후군, 네덜란드형의 아밀로이드증을 동반한 유전성 뇌출혈, 뇌 베타 아밀로이드 혈관병증, 해면상 엔셀로할로패씨(encelohalopathy), 갑상선 종양, 파킨슨병, 루이소체를 동반한 치매, 타우병증, 헌팅턴병, 노인성 전신성 아밀로이드증, 가족성 혈액투석, 노인성 전신 노화, 노화 뇌하수체 장애, 의인성 증후군, 해면상 뇌병증, 반응성 만성 염증, 갑상선 종양, 골수종 또는 다른 형태의 암과 같은 다른 질환을 포함하는, 입체형태적 단백질 질환의 그룹에 속하는 광범위한 그룹의 질환이다.
아밀로이드증은 조직에서 비정상적인 원섬유 입체형태를 갖는 불용성 단백질 침착물이 존재하는 것을 특징으로 하는 희귀 질환이다. 가장 흔히, 원인은 혈청 전구체 단백질의 단편이다. 많은 기관은 "아밀로이드 물질"이라고 불리는 이들 세포외 침착물에 의해 영향을 받을 수 있다. 아밀로이드 침착물의 영향을 받는 주요 기관은 신장, 심장, 소화관, 간, 피부, 말초 신경 및 눈이다. 이 질환의 영향을 받는 기관은 일반적으로 상당한 양이다. 궁극적으로, 아밀로이드증은 중추신경계뿐만 아니라 모든 기관에 영향을 미칠 수 있어, 증상이 매우 많이 다양하다.
따라서, 아밀로이드증 및 아밀로이드 관련 질환에 대한 효과적인 치료가 요구된다.
한 측면에서, 본원에는 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드를 포함하는 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질이 제공되며, 여기서 제1 폴리펩타이드는 제1 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 제2 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하며, 제1 및 제2 인간 Fc 도메인은 이량체를 형성한다.
일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드는 서열번호 1-13으로 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인은 인간 IgG1, IgG2, 또는 IgG4 Fc이다.
일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인은 인간 IgG1 Fc이다.
일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인은 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드는 스페이서를 통해 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인에 연결된다.
일부 실시양태에서, 스페이서는 펩타이드 스페이서이다.
일부 실시양태에서, 스페이서는 서열번호 14-17 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제1 인간 Fc 도메인, 제1 스페이서, 및 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로 제2 인간 Fc 도메인, 제2 스페이서, 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 rVλ6Wil, Aβ, Aβ(1-40), IAAP, ALκ4, ALλ1, 또는 ATTR 아밀로이드에 결합한다.
일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 검출가능한 표지에 접합된다.
또 다른 측면에서, 본원에는 단락 [0006]-[0017] 중 어느 하나의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
또 다른 측면에서, 본원에는 단락 [0006]-[0017] 중 어느 하나의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 암호화하는 핵산(들)이 제공된다.
또 다른 측면에서, 본원에는 단락 [0019]의 핵산(들)을 포함하는 벡터가 제공된다.
또 다른 측면에서, 본원에는 단락 [0020]의 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다.
일부 실시양태에서, 숙주 세포는 포유동물 세포, 선택적으로 중국 햄스터 난소(CHO) 세포이다.
또 다른 측면에서, 본원에는 융합 단백질을 암호화하는 벡터의 발현에 적합한 조건 하에 단락 [0021] 또는 단락 [0022]의 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 제조하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 방법은 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 회수하는 것을 추가로 포함한다.
또 다른 측면에서, 본원에는 단락 [0006]-[0017] 중 어느 하나의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 치료 유효량을 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 아밀로이드 질환을 치료하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 아밀로이드 관련 질환은 전신성 또는 국소성 아밀로이드증이다.
일부 실시양태에서, 아밀로이드 관련 질환은 AL, AH, Aβ2M, ATTR, 트랜스티레틴, AA, AApoAI, AApoAII, AGel, ALys, ALEct2, AFib, ACys, ACal, AMed, AIAPP, APro, AIns, APrP 또는 Aβ 아밀로이드증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 사용한 치료는 아밀로이드의 클리어런스(clearance)를 초래한다.
또 다른 측면에서, 본원에는 아밀로이드 침착물을 단락 [0006]-[0017] 중 어느 하나의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질과 접촉시키는 것을 포함하는, 클리어런스를 위해 아밀로이드 침착물을 표적화하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 클리어런스를 위해 아밀로이드 침착물을 표적화하는 것은 아밀로이드 침착물의 클리어런스를 초래한다.
일부 실시양태에서, 클리어런스는 아밀로이드 침착물의 옵소닌화로부터 초래된다.
일부 실시양태에서, 개체는 인간이다.
또 다른 측면에서, 본원에는 아밀로이드계 질환을 앓고 있거나, 또는 아밀로이드계 질환을 앓고 있는 것으로 의심되는 개체를 치료하는 방법이 제공되며, 이 방법은 문단 [0006]-[0017] 중 어느 하나의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 검출가능하게 표지화하는 단계, 표지된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 개체에게 투여하는 단계, 검출가능한 표지와 연관된 신호가 개체로부터 검출될 수 있는지 여부를 결정하는 단계; 및 신호가 검출되면, 개체에게 아밀로이드증 치료를 투여하는 단계에 의해 개체가 아밀로이드 질환을 갖고 있는지 여부를 결정하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 신호가 검출되지 않으면, 아밀로이드 침착물의 추후 발달에 대해 개체를 모니터링한다.
일부 실시양태에서, 방법은 신호의 강도를 결정하고 신호를 역치 값과 비교하는 단계를 추가로 포함하며, 이 값을 초과하면 개체는 아밀로이드 침착물을 보유하는 것으로 결정된다.
일부 실시양태에서, 아밀로이드증 치료는 단락 [0006]-[0017] 중 어느 하나의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 개체에게 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본원에는 단락 [0006]-[0017] 중 어느 하나의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 검출가능하게 표지화하는 단계, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 개체에게 투여하는 단계, 및 융합 단백질로부터 신호를 검출하는 단계를 포함하는, 개체의 아밀로이드 침착물을 식별하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 개체는 아밀로이드가 없거나, 의미 불명의 단클론 감마병증(MGUS), 다발성 골수종(MM), 또는 하나 이상의 관련 형질세포 질환을 앓고 있는 것으로 결정된다.
도 1은 각 작제물을 지칭하기 위해 본원에서 사용된 명명법과 함께 예시적인 펩타이드-Fc 작제물의 개략도를 보여준다.
도 2는 2% FBS의 존재 하에 중국 햄스터 난소(CHO) 세포에서 생성된 단백질의 소듐 도데실 설페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE) 분석 결과를 보여준다. 레인은 왼쪽에서 오른쪽으로 분자량 표준, IgG1 항체 대조군("VH9/VL4 IgG1"), 인간 IgG의 N-말단에 융합된 펩타이드 p5R을 갖는 펩타이드-항체 융합 단백질("hFcNV1"), IgG1 Fc 대조군("hFc1") 및 IgG1 Fc의 C-말단에 융합된 펩타이드 p5R을 갖는 펩타이드-Fc 융합체("hFc1CV1")를 보여준다. 선은 변형된 펩타이드-융합 경쇄(레인 3) 및 펩타이드-Fc 융합체(레인 5 및 6)와 비교하기 위한 천연 면역글로불린 경쇄(레인 2) 및 대조군 Fc 도메인(레인 4)의 전기영동적 이동성을 나타낸다. 레인 6의 별표는 Fc-도메인과 연관된 완전히 온전한 펩타이드를 갖는 Fc-펩타이드 변이체를 나타낸다.
도 3은 Fcp5RCV1(밝은 회색 선, 하단 다이어그램) 및 Fcp5RNV1(검은색 선, 상단 다이어그램) 펩타이드-Fc 융합 단백질의 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 분석 결과를 보여준다. x축은 시간(분)을 보여주고, 왼쪽 y축은 Fcp5RCV1에 대한 280nm에서의 흡광도를 보여주며, 오른쪽 y축은 Fcp5RNV1에 대한 280nm에서의 흡광도를 보여준다.
도 4는 항체 11-1F4와 비교하여 Fcp5R CV1 펩타이드-Fc 작제물을 방사성요오드화한 결과를 보여준다. 단백질은 2% FBS의 존재 하에 CHO 세포에서 생성되었다. Fcp5RCV1 및 11-1F4는 각각 환원형("레드") 및 비환원형("NR")으로 보여준다. 11-1F4 IgG, IgG 중쇄("HC"), IgG 경쇄("LC") 및 Fcp5R CV1의 위치가 표시된다.
도 5는 125I-hFc1CV1 주사 1시간 후(검은색 막대), 주사 4시간 후(중간 회색 막대), 또는 주사 24시간 후(밝은 회색 막대)에 AA 마우스에서의 125I-hFc1CV1(125I-I-CV1)의 생체분포를 보여준다. x축은 측정된 조직(왼쪽에서 오른쪽으로 근육, 간, 췌장, 비장, 좌측 신장, 우측 신장, 위, 상부 장, 하부 장, 심장, 폐, 및 혈액 포함)을 나타내고, y축은 조직 그램당 주사된 용량의 백분율로서의 생체분포 수준(그룹 당 3마리 마우스의 평균 + SD)을 나타낸다.
도 6은 125I-hFc1CV1 주사후 1, 4, 또는 24시간 후의 AA 마우스에서의 125I-hFc1CV1의 단일 광자 방출 컴퓨터 단층촬영(SPECT) 영상을 보여준다.
도 7은 125I-hFc1CV1 주사 1시간 후 AA 마우스에서 125I-hFc1CV1을 보여주는 비장(왼쪽), 심장(중앙) 및 간(오른쪽) 조직의 미세자기방사선술(ARG; 아랫줄) 및 콩고 레드 염색(윗줄)을 보여준다.
도 8은 125I-hFc1CV1 주사 24시간 후에 AA 마우스에서 125I-hFc1CV1을 보여주는 비장(왼쪽), 심장(중앙) 및 간(오른쪽) 조직의 미세자기방사선술(ARG; 아랫줄) 및 콩고 레드 염색(윗줄)을 보여준다.
도 9는 x축의 왼쪽에서 오른쪽으로 표시된 바와 같이, 1시간 동안 인간 PMA-활성화된 THP-1 대식세포 단독(대조군), 또는 인간(h) Fc1, 1μg Fc1NV1, 3μg Fc1NV1, 10μg Fc1NV1, 1μg Fc1CV1, 3μg Fc1CV1 또는 10μg Fc1CV1의 존재 하의 pHrodo 레드-표지된 rVλ6Wil 원섬유 흡수를 보여준다. y축은 rVλ6Wil 원섬유 흡수 수준을 보여준다(형광 단위로 측정됨). 데이터는 평균 + 표준 편차(n=4)를 나타낸다.
도 10은 x축의 왼쪽에서 오른쪽으로 표시된 바와 같이, 인간 PMA-활성화된 THP-1 대식세포 단독(대조군), 또는 1μg 인간 Fc1(hFc1 대조군), 1μg hFc1CV1, 3μg hFc1, 3μg hFc1CV1, 10μg hFc1, 10μg hFc1CV1, 30μg hFc1 또는 30μg Fcp5R CV1의 존재하의 pHrodo 레드-표지된 rVλ6Wil 원섬유 흡수를 보여준다. y축은 rVλ6Wil 원섬유 흡수 수준(형광 단위로 측정됨)을 보여주고 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다. hFc1 및 Fcp5R CV1은 CHO 세포에 의해 생산되었다. 데이터는 평균 + 표준 편차(n=4)를 나타낸다.
도 11은 인간(h) Fc1 대조군(진한 회색)과 비교하여 rVλ6Wil 원섬유(밝은 회색)에 대한 hFc1CV1의 결합을 보여준다. x축은 Fcp5R CV1 또는 hFc1의 농도를 nM 단위로 보여주고, y축은 결합된 시약의 양을 형광 임의 단위(au)로 보여준다. rVλ6Wil 원섬유에 대한 hFc1CV1 결합의 EC50은 2.5nM이었다.
도 12a-12b는 시스템 아밀로이드 단백질 A 연관 아밀로이드증이 있는 마우스에서 hFc1CV1의 결합을 보여준다. SPECT/Ct 이미지는 Fcp5RCV1 주사 후 1, 4, 24 및 48시간째 방사성표지된 Fcp5RCV1을 검출하여 수득했다. 도 12a는 AA 마우스에서 각 시점마다 다양한 기관에서의 분포를 보여준다. 도 12b는 주사 후 48시간째 야생형 마우스와 비교하여 AA 마우스의 다양한 기관에서의 분포를 보여준다.
도 13a-13b는 다양한 조직에서 I-125 표지된 hFc1CV1(125I Fcp5RCV1) 및 아밀로이드의 공동-국재화를 보여준다. ARG(자기방사선사진)는 표지된 hFc1CV1의 국재화를 보여주고, CR(콩고 레드)은 hFc1CV1 주사 후 1시간(도 13a) 및 24시간(도 13b)째 아밀로이드의 국재화를 보여준다.
도 14a-d는 Fcp5RCV1 또는 인간 IgG1 대조군을 사용하여 수행된 생체외 식세포작용 검정의 결과를 보여준다. 식세포작용은 pH 민감성 염료 숙신이미딜-pHrodo 레드 형광단으로 표지화하여 검출한다.
도 15는 20% 인간 혈장(보체 공급원)의 존재(+C) 또는 부재 하에 rVλWIL, ALκ 및 ALλ 원섬유에 대해 hFc1CV1을 사용하여 수행된 생체외 식세포작용 검정 결과를 보여준다.
도 16은 ATTRV, ATTRwt, rVλWIL, ALκ 및 ALλ에 대한 hFc1CV1의 친화도를 테스트한 결합 실험 결과를 보여준다. ATTRwt는 야생형 트랜스티레틴 연관 아밀로이드증이다. ATTRv는 트랜스티레틴 연관 아밀로이드증의 변종이다.
도 17은 합성 아밀로이드 유사 원섬유 Tau 441, α-시누클레인 및 Aβ(1-40)에 대한 Fcp5RCV1의 친화도를 테스트한 결합 실험의 결과를 보여준다.
도 18a-18c는 원섬유 침착물이 있는 개체의 인간 조직 절편에서 아밀로이드 원섬유를 검출하기 위한 콩고 레드 형광 및 hFc1CV1을 검출하기 위한 면역조직화학적 염색(상부 패널)을 보여준다. 도 18a는 인간 뇌 조직 절편에서 ATTR 및 ALκ 원섬유에 대한 hFc1CV1 결합을 보여준다. 도 18b는 인간 신장 및 간 조직 절편에서 ALκ 및 ALλ 아밀로이드 침착물에 대한 hFc1CV1 결합을 보여준다. 도 18c는 인간 심장 조직 절편에서 ATTR 및 ALκ 원섬유에 대한 hFc1CV1 결합을 보여준다. 화살표는 아밀로이드의 위치 및 hFc1CV1의 결합을 보여준다.
본원에는 아밀로이드에 결합하여 식세포작용을 유도할 수 있는 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질이 제공된다.
I. 정의
본원에 사용된 바와 같이, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥에서 명백하게 다르게 나타내지 않는 한 단수 및 복수 모두를 지칭한다. 약어 "e.g."는 라틴어 예컨대(exempli gratia)에서 유래되었으며, 본원에서 비제한적인 예를 나타내기 위해 사용된다. 따라서, 약어 "e.g."는 용어 "예를 들어"와 동의어이다. 본원에서 사용된 용어 "포함한다(comprises)"는 "포함한다(includes)"를 의미한다.
범위는 본원에서 "약" 하나의 특정 값부터, 및/또는 "약" 또 다른 특정 값까지로 표현될 수 있다. 이러한 범위가 표현되는 경우, 또 다른 측면은 범위의 하나의 특정 값부터 및/또는 범위의 다른 특정 값까지를 포함한다. 각 범위의 종점은 다른 종점과 관련하여 그리고 다른 종점과 무관하게 유의미한 것으로 추가로 이해될 것이다. 마찬가지로, 선행사 "약"을 사용하여 값이 근사치로 표현되는 경우, 특정 값이 또 다른 측면을 형성한다는 것이 이해될 것이다. 특정한 예의 실시양태에서, 용어 "약"은 관련 기술분야에서 정상적인 허용 범위 내, 예를 들어 평균의 2 표준 편차 이내인 것으로 이해한다. 약은 제시된 값의 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05% 또는 0.01% 이내로 이해될 수 있다. 문맥상 달리 명시되지 않는 한, 본원에 제공된 모든 수치 값은 약이라는 용어에 의해 수식될 수 있다. 또한, 본원에서 사용되는 "예", "예시적인", "예시된" 등의 용어는 선호도를 나타내기 위한 것이 아니고, 이하에서 논의되는 측면이 단지 제시되는 측면의 하나의 예일 뿐임을 설명하기 위한 것이다.
아밀로이드, 아밀로이드 침착물, 아밀로이드 원섬유 및 아밀로이드 섬유라는 용어는 특정 구조적 특색을 공유하는 불용성 섬유질 단백질 응집체를 지칭한다. 단백질 응집체는 예를 들어 임의의 여러 가지 다른 단백질의 응집에 의해 형성되고 섬유 축에 수직으로 적층된 β 시트의 정렬된 배열로 이루어지는 3차 구조를 갖는다. Sunde 등, J. Mol. Biol. (1997) 273:729-39 참조. 기관에 아밀로이드의 비정상적인 축적은 아밀로이드증을 야기할 수 있다. 아밀로이드는 이들의 발생이 다양하지만, 모든 아밀로이드는 콩고 레드와 같은 특정 염료로 염색된다는 점 및 염색 후 편광에서 특징적인 적록색 복굴절 현상을 갖는다는 점에서 공통된 형태학적 특성을 갖는다. 아밀로이드는 또한 일반적인 초미세구조 특징 및 일반적인 x선 회절 및 적외선 스펙트럼을 공유한다.
아밀로이드증은 아밀로이드 침착물의 존재와 같은 아밀로이드의 존재를 특징으로 하는 병리학적 상태 또는 질환을 지칭한다. "아밀로이드 질환" 또는 "아밀로이드증"은 아밀로이드 원섬유의 형성, 침착, 축적 또는 지속과 연관된 질환이다. 이러한 질환으로는 알츠하이머병, 다운증후군, 네덜란드형 아밀로이드증을 동반한 유전성 뇌출혈, 및 뇌 베타-아밀로이드 혈관병증을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 전신 AA 아밀로이드증, AL 아밀로이드증, ATTR 아밀로이드증, ALect2 아밀로이드증 및 II형 당뇨병의 IAPP 아밀로이드증과 같은 다른 아밀로이드 질환도 아밀로이드 질환이다.
아밀로이드원성은 아밀로이드 침착물을 생성하거나 생성하는 경향을 지칭한다. 예를 들어, 특정 가용성 단량체 단백질은 광범위한 입체형태적 변화를 거쳐 잘 정렬되고, 비분지성인 8 내지 10nm 폭의 원섬유로의 응집을 야기하고, 이는 결국 아밀로이드 응집체를 형성한다. 사람에서는, 예를 들어 30개 초과의 단백질이 아밀로이드 침착물(또는 아밀로이드)을 형성하는 것으로 발견되었다. 면역글로불린 경쇄와 같이 다양한 단백질 부류 내의 모든 단백질이 아밀로이드를 형성할 수 있는 것은 아니며, 즉, 일부 단백질은 비-아밀로이드원성이고, 이는 이들이 아밀로이드를 형성하는 경향이 없음을 의미한다. 그러나, 이 부류의 다른 단백질은 아밀로이드 침착물을 형성할 수 있어 아밀로이드원성이다. 더욱이, 경쇄 단백질 부류 내에서 일부는 아밀로이드 원섬유를 형성하는 용이성에 기초하여 다른 것보다 더욱 "아밀로이드원성"인 것으로 간주될 수 있다. 특정 경쇄 단백질은 환자에서 또는 시험관내에서 쉽게 아밀로이드 원섬유를 형성할 수 없기 때문에 비-아밀로이드원성 또는 더 적은 아밀로이드원성으로 간주된다.
동물: 살아있는 다세포 척추동물 유기체, 예를 들어 포유동물 및 조류를 포함하는 카테고리. 포유동물이라는 용어는 인간 및 비인간 포유동물을 모두 포함한다. 마찬가지로, "대상체" 및 "개체"라는 용어는 인간 및 수의사 둘 모두를 포함한다. 일부 예에서, 동물은 아밀로이드 질환을 앓고 있는 개체이다.
클리어런스: "클리어" 또는 "클리어런스"라는 용어는 측정 가능한 정도로 감소시키거나 제거하는 것을 지칭한다. 예를 들어, 본원에 기술된 아밀로이드 침착물의 클리어런스는 침착물을 측정 가능하거나 식별 가능한 정도로 감소시키거나 제거하는 것에 관한 것이다. 클리어런스는 100% 제거를 초래할 수 있지만, 반드시 그럴 필요는 없다. 오히려, 클리어런스는 100% 미만의 제거, 예를 들어 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60% 이상의 제거를 초래할 수 있다.
접합체: 본원에 사용된 용어 "접합체"는 2개 이상의 물질의 커플링 또는 결합의 생성물을 지칭하며, 결과적으로 생성된 생성물은 적어도 2개의 도메인과 같은 적어도 2개의 별개의 요소를 갖는다. 커플링된 물질은 동일할 수도 있고 상이할 수도 있다. 이러한 커플링은 하나 이상의 연결 기를 통해 이루어질 수 있다. 예를 들어, "단백질 접합체"는 2개 이상의 아미노산 서열의 커플링으로부터 초래된다. 예를 들어 두 단백질의 접합체는 개별적으로 연결된 각 단백질에 상응하는 도메인을 갖는 단일 단백질을 초래한다.
유효량 또는 치료 유효량: 임의의 장애 또는 질환의 증상 및/또는 근본 원인을 방지, 치료(예방 포함), 감소 및/또는 호전시키기에 충분한, 예를 들어 아밀로이드증을 방지 및/또는 억제하기에 충분한 작용제의 양. 일부 실시양태에서, "유효량"은 질환의 증상을 감소시키거나 없애기에 충분하다. 유효량은 1회 이상 투여될 수 있다.
억제하다: 측정 가능한 정도로 감소시키는 것. 억제는 예를 들어 측정되는 측면의 완전한 중단 또는 완전한 기능 상실을 필요로 하지 않는다. 예를 들어, 플라크 형성을 억제한다는 것은 플라크의 추가 성장을 중단시키거나, 플라크의 추가 성장을 둔화시키거나, 또는 플라크의 크기를 감소시키는 것을 의미할 수 있다.
질환을 억제하거나 치료하는: 질환 또는 상태의 완전한 발달을 억제하는 것, 예를 들어 아밀로이드증을 억제하는 것. "치료"는 질환 또는 병리학적 상태가 발달하기 시작한 후의 징후 또는 증상을 호전시키는 치료적 개입을 지칭한다. 질환 또는 병리학적 상태와 관련하여 용어 "호전시키는"은 임의의 관찰 가능한 치료의 유익한 효과를 지칭한다. 유익한 효과는 예를 들어 민감한 개체에서 질환의 임상 증상의 지연된 발병, 질환의 일부 또는 모든 임상 증상의 중증도 감소, 질환의 보다 느린 진행, 개체의 전반적인 건강 또는 웰빙의 개선, 또는 특정 질환에 특이적인 관련 기술분야에 잘 알려진 다른 매개변수에 의해 입증될 수 있다. "예방적" 치료는 병리상태의 발달 위험을 감소시킬 목적으로 초기 징후만을 나타내거나 질환의 징후를 나타내지 않는 개체에게 투여되는 치료이다.
아밀로이드 침착물 형성과 관련하여, "억제"는 예컨대 대조군과 비교할 때 아밀로이드 침착물 형성의 감소 방지를 지칭한다. 예를 들어, 억제는 대조군과 비교하여 아밀로이드 침착물을 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60% 이상 감소시킬 수 있다.
표지는 다른 분자에 직접 또는 간접적으로 접합되어 해당 분자의 검출을 용이하게 하는 임의의 검출 가능한 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 표지의 구체적이고 비제한적인 예로는 형광 태그, 화학발광 태그, 합텐, 효소 연결 및 방사성동위원소를 포함한다. 예를 들어, "검출 가능하게 표지된" 단백질은 단백질의 존재가 단백질과 연관된 표지에 의해 결정될 수 있음을 의미한다.
단리된: 펩타이드(예를 들어, 본원에 개시된 펩타이드 중 하나 이상), 세포, 핵산 또는 혈청 샘플과 같은 "단리된" 생물학적 구성요소는 이 구성요소가 자연적으로 발생하는 유기체의 세포에 있는 다른 생물학적 구성요소, 예를 들어 다른 염색체 및 염색체외 DNA 및 RNA, 및 단백질로부터 실질적으로 분리되거나, 별도로 생산되거나, 또는 정제되어 있다. 따라서, "단리된" 핵산, 펩타이드 및 단백질은 표준 정제 방법에 의해 정제된 핵산 및 단백질을 포함한다. 이 용어는 또한 세포 내에서 재조합 발현에 의해 제조된 핵산, 펩타이드 및 단백질, 뿐만 아니라 화학적으로 합성된 펩타이드 및 핵산을 포괄한다. "단리된" 또는 "정제된"이라는 용어는 절대적인 순도를 필요로 하지 않으며; 오히려 상대적인 용어로서 의도된다. 따라서, 예를 들어 단리된 펩타이드 제제는 펩타이드 또는 단백질이 세포 내 자연 환경에 있는 것보다 더욱 농축된 것이다. 바람직하게는, 제제는 단백질 또는 펩타이드가 제제의 전체 펩타이드 또는 단백질 함량의 적어도 50%, 예컨대 펩타이드 또는 단백질 농도의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 심지어 적어도 99%를 나타낼 정도로 정제된다.
결합(join): 본원에 사용된 용어 "결합하다(join)", "결합된(joined)", "연결(link)" 또는 "연결된(linked)"은 단백질 및/또는 단백질 도메인을 기능적으로 연결하기 위한 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 지칭한다. 예를 들어, 하나의 단백질 도메인은 중재 서열 또는 도메인이 있거나 없는 재조합 융합 단백질에서와 같이 공유 결합을 통해 다른 단백질 도메인에 연결될 수 있다. 결합된은 또한 예를 들어 2개의 서열을 함께 통합시키는 것, 예컨대 서열이 함께 발현되도록 동일한 핵산 가닥에 2개의 핵산 서열을 함께 배치한 것을 포함한다.
핵산: 포스포디에스테르 결합을 통해 연결된 뉴클레오타이드 단위(리보뉴클레오타이드, 데옥시리보뉴클레오타이드, 관련된 자연 발생의 구조 변이체, 및 이의 합성 비-자연 발생의 유사체)로 구성된 중합체, 관련된 자연 발생의 구조 변이체 및 이의 합성 비-자연 발생의 유사체. 따라서, 이 용어는 뉴클레오타이드 및 이들 사이의 연결이 비-자연 발생의 합성 유사체, 예를 들어 제한 없이 포스포로티오에이트, 포스포라미데이트, 메틸 포스포네이트, 키랄-메틸 포스포네이트, 2-O-메틸 리보뉴클레오타이드, 펩타이드-핵산(PNA) 등을 포함하는 뉴클레오타이드 중합체를 포함한다. 이러한 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어 자동화된 DNA 합성기를 사용하여 합성할 수 있다. "올리고뉴클레오타이드"라는 용어는 전형적으로 짧은 폴리뉴클레오타이드, 일반적으로 약 50개 이하의 뉴클레오타이드를 지칭한다. 뉴클레오타이드 서열이 DNA 서열(즉, A, T, G, C)로 표시되는 경우, 이는 또한 "U"가 "T"를 대체하는 RNA 서열(즉, A, U, G, C)도 포함하는 것으로 이해될 것이다.
뉴클레오타이드는 피리미딘, 퓨린 또는 이의 합성 유사체와 같이 당에 연결된 염기를 포함하는 단량체, 또는 펩타이드 핵산(PNA)에서와 같이 아미노산에 연결된 염기를 포함하는 단량체를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 뉴클레오타이드는 폴리뉴클레오타이드의 하나의 단량체이다. 뉴클레오타이드 서열은 폴리뉴클레오타이드의 염기 서열을 지칭한다.
본원에서 뉴클레오타이드 서열을 기술하는 데에는 통상적인 표기법이 사용된다: 단일 가닥 뉴클레오타이드 서열의 왼쪽 말단은 5'-말단이고; 이중 가닥 뉴클레오타이드 서열의 왼쪽 방향은 5' 방향이라고 지칭된다. 초기 RNA 전사체에 대한 뉴클레오타이드의 5'에서 3'로의 첨가 방향은 전사 방향이라고 지칭된다. mRNA와 동일한 서열을 갖는 DNA 가닥은 "암호 가닥"이라고 지칭되고; 해당 DNA로부터 전사된 mRNA와 동일한 서열을 갖고 RNA 전사체의 5'-말단에 대해 5'에 위치하는 DNA 가닥의 서열은 "상류 서열"이라고 지칭되며; RNA와 동일한 서열을 갖고 암호 RNA 전사체의 3' 말단에 대해 3'인 DNA 가닥의 서열은 "하류 서열"이라고 지칭된다.
cDNA는 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태로 mRNA에 상보적이거나 동일한 DNA를 지칭한다.
암호화는 뉴클레오타이드(예를 들어, rRNA, tRNA 및 mRNA)의 한정된 서열 또는 아미노산의 한정된 서열, 및 이로부터 초래되는 생물학적 특성을 갖는, 생물학적 과정 중의 다른 중합체 및 거대분자의 합성을 위해 주형 역할을 하는 유전자, cDNA 또는 mRNA와 같은 폴리뉴클레오타이드 중 특정 뉴클레오타이드 서열의 고유 특성을 지칭한다. 따라서, 해당 유전자에 의해 생산된 mRNA의 전사 및 해독이 세포 또는 다른 생물학적 시스템에서 단백질을 생산한다면 유전자는 단백질을 암호화한다. 뉴클레오타이드 서열이 mRNA 서열과 동일하고 일반적으로 서열 목록에 제공되는 암호 가닥, 및 전사 주형으로서 사용되는, 유전자 또는 cDNA의 비-암호 가닥은 해당 유전자 또는 cDNA의 단백질 또는 다른 생성물을 암호하는 것으로서 지칭될 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, "아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열"은 서로의 축퇴성 버전이고 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 모든 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 단백질 및 RNA를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 인트론을 포함할 수 있다.
약제학적으로 허용되는 담체: 사용되는 약제학적으로 허용되는 담체는 통상적인 것이다. 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, by E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 19판(1995)]에는 본원에 개시된 융합 단백질의 약제학적 전달에 적합한 조성물 및 제형이 기술되어 있다.
일반적으로, 담체의 본성은 사용되는 특정 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, 비경구 제형은 일반적으로 물, 생리 식염수, 균형 염 용액, 수성 덱스트로스, 글리세롤 등과 같은 약제학적 및 생리학적으로 허용되는 유체를 비히클로서 포함하는 주사 가능한 유체를 포함한다. 고체 조성물(예를 들어, 분말, 알약, 정제 또는 캡슐 형태)의 경우, 통상적인 무독성 고체 담체는 예를 들어 약제학적 등급의 만니톨, 락토스, 전분 또는 스테아르산마그네슘을 포함할 수 있다. 생물학적으로 중성인 담체 외에, 투여될 약제학적 조성물은 습윤제 또는 유화제, 보존제, 및 pH 완충제 등과 같은 소량의 무독성 보조 물질, 예를 들어 아세트산나트륨 또는 소르비탄 모노라우레이트를 함유할 수 있다.
폴리펩타이드: 단량체가 아미드 결합을 통해 함께 결합된 아미노산 잔기인 중합체. 아미노산이 알파-아미노산인 경우, L-광학 이성질체 또는 D-광학 이성질체가 사용될 수 있으며, L-이성질체가 바람직하다. 본원에 사용된 용어 "폴리펩타이드" 또는 "단백질"은 임의의 아미노산 서열을 포괄하고 당단백질과 같은 변형된 서열을 포함하는 것으로 의도된다. "폴리펩타이드"라는 용어는 특히 자연 발생의 단백질뿐만 아니라 재조합 또는 합성으로 생성된 단백질도 포함하는 것으로 의도된다. 일부 예에서, 펩타이드는 본원에 개시된 펩타이드 중 하나 이상이다.
정제된: 용어 "정제된"은 절대적인 순도를 필요로 하지 않으며; 오히려 상대적인 용어로서 의도된다. 따라서, 예를 들어, 정제된 단백질 제제는 지칭된 단백질이 세포 내의 자연 환경에 있는 단백질보다 또는 생산 반응 챔버(적절한 경우) 내에서보다 더 순수한 것이다.
서열 동일성: 2개의 핵산 서열 또는 2개의 아미노산 서열 사이의 유사성은 서열 사이의 유사성 면에서 표현되며, 달리 서열 동일성으로 지칭된다. 서열 동일성은 동일성(또는 유사성 또는 상동성) 백분율 면에서 종종 측정되고; 백분율이 높을수록 두 서열은 더욱 유사하다.
비교를 위한 서열 정렬 방법은 관련 기술분야에 잘 알려져 있다. 다양한 프로그램과 정렬 알고리즘은 문헌[Smith & Waterman Adv. Appl. Math. 2: 482, 1981; Needleman & Wunsch J. Mol. Biol. 48: 443, 1970; Pearson & Lipman Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 2444, 1988; Higgins & Sharp Gene 73: 237-244, 1988; Higgins & Sharp CABIOS 5: 151-153, 1989; Corpet 등 Nuc. Acids Res. 16, 10881-90, 1988; Huang 등 Computer Appls. In the Biosciences 8, 155-65, 1992; 및 Pearson 등 Meth. Mol. Bio. 24, 307-31, 1994]에 기술되어 있다. 문헌[Altschul 등 J. Mol. Biol. 215:403-410, 1990]은 서열 정렬 방법 및 상동성 계산에 대한 상세한 고려사항을 제시한다.
NCBI Basic Local Alignment Search Tool(BLAST)(Altschul 등 J. Mol. Biol. 215:403-410, 1990)는 국립 생명공학 정보 센터(NCBI, 매릴랜드주 베데스다) 및 인터넷을 포함하는 여러 출처로부터 서열 분석 프로그램인 blastp, blastn, blastx, tblastn 및 tblastx와 관련지어 사용하는 데 이용가능하다.
작동 가능하게 연결된: 제1 핵산 서열이 제2 핵산 서열과 기능적 관계에 위치할 때 제1 핵산 서열은 제2 핵산 서열과 작동 가능하게 연결되어 있다. 예를 들어, 프로모터가 암호 서열의 전사 또는 발현에 영향을 미친다면, 프로모터는 암호 서열에 작동가능하게 연결된 것이다. 일반적으로, 작동 가능하게 연결된 DNA 서열은 연속적이며, 2개의 단백질 암호 영역을 결합하기 위해 필요한 경우 동일한 판독 프레임 내에 있다.
약제학적 제제: 개체 또는 세포에 적절하게 투여될 때 원하는 치료 또는 예방 효과를 유도할 수 있는 화학적 화합물 또는 조성물.
벡터: 숙주 세포 내로 도입되어 형질전환된 숙주 세포를 생산하는 경우의 핵산 분자. 재조합 DNA 벡터는 재조합 DNA를 갖는 벡터이다. 벡터는 복제 기점과 같이 숙주 세포에서 복제를 허용하는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 벡터는 또한 하나 이상의 선택 가능한 마커 유전자 및 관련 기술분야에 공지된 다른 유전자 요소를 포함할 수 있다. 바이러스 벡터는 하나 이상의 바이러스로부터 유래된 적어도 일부 핵산 서열을 갖는 재조합 DNA 벡터이다. 벡터라는 용어는 플라스미드, 선형 핵산 분자, 및 본원에 전반적으로 기술된 바와 같이 아데노바이러스 벡터 및 아데노바이러스를 포함한다.
대상체 또는 개체는 포유동물, 예를 들어 인간을 지칭한다. 개체는 인간 환자일 수 있다. 개체는 질환 또는 병태를 앓고 있거나 앓고 있는 것으로 의심되는 환자일 수 있으며, 치료 또는 진단을 필요로 할 수 있거나 또는 질환 또는 병태의 진행에 대해 모니터링을 필요로 할 수 있다. 환자는 또한 효능을 모니터링해야 할 필요가 있는 치료 요법 중에 있을 수도 있다. 일부 예의 실시양태에서, 개체는 알츠하이머병, 헌팅턴병 또는 프리온병과 같은 아밀로이드증, 또는 경쇄(AL) 아밀로이드증 및 2형 당뇨병이 있는 환자에서 나타나는 것과 같은 말초 아밀로이드증을 앓고 있는 개체를 포함한다.
치료하는 또는 치료라는 용어는 질환 또는 병리학적 상태가 발병하기 시작한 후의 징후 또는 증상을 호전시키는 치료적 개입을 지칭한다. 질환 또는 병리학적 상태와 관련하여 용어 "호전시키는"은 임의의 관찰 가능한 치료의 유익한 효과를 지칭한다. 유익한 효과는 예를 들어 민감한 개체에서 질환의 임상 증상의 지연된 발병, 질환의 일부 또는 모든 임상 증상의 중증도 감소, 질환의 더 둔화된 진행, 개체의 전반적인 건강 또는 웰빙의 개선에 의해, 또는 특정 질환에 특이적인 관련 기술분야에 잘 알려진 다른 매개변수에 의해 입증될 수 있다. "예방적" 치료는 병리 상태를 발달시킬 위험을 감소시키는 것을 목적으로 질환의 징후를 나타내지 않거나 초기 징후만을 나타내는 개체에게 투여되는 치료이다.
II. 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질
본원에는 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질이 제공된다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드를 포함하고, 여기서 제1 폴리펩타이드는 제1 인간 Fc 도메인에 연결된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 제2 인간 Fc 도메인에 연결된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하며, 여기서 제1 및 제2 인간 Fc 도메인은 이량체를 형성한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 동종이량체이다. 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 예컨대 본 개시내용의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 개체에게 투여하는 것 등에 의해 아밀로이드증을 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드는 하기 표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 하기 표 1에 제시된 펩타이드 중 하나 이상은 인간 Fc 영역의 N-말단 또는 인간 Fc 영역의 C-말단을 통해 인간 Fc 영역에 결합되어 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 형성할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드는 단일 인간 Fc 영역에 결합될 수 있는 표 1에 제시된 펩타이드 중 2개 이상을 포함한다. 예를 들어, 아밀로이드 반응성 펩타이드 중 2개는 단일 인간 Fc 영역과 결합될 수 있다.
임의의 특정 이론에 얽매이기를 원하지는 않지만, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 펩타이드 도메인은 개체에게 투여될 때 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 아밀로이드 침착물에 대해 표적화하는 것으로 여겨진다. 그 다음, Fc 도메인은 아밀로이드 부위에서 면역 반응을 촉발하여 옵소닌화 등에 의해 아밀로이드의 제거를 초래한다. 또한, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 아밀로이드 반응성 펩타이드 단독보다 반감기가 더 긴 것으로 여겨진다. 특정 예의 실시양태에서, 아밀로이드 침착물을 본 개시내용의 융합 단백질과 접촉시키면, 아밀로이드 반응성 펩타이드 단독과 아밀로이드 침착물을 접촉시키는 경우와 비교하여, 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 이상 증가되는 반감기를 초래한다. 이와 같이, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 개체에게 투여 시 아밀로이드 침착물 부위에서 면역자극 효과를 더 오랫동안 발휘하여 아밀로이드 침착물 부위에서 면역반응을 증가시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 아밀로이드 반응성 펩타이드는 서열번호 1-13 중 어느 하나로 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 85%, 90% 이상 동일한 아미노산 서열, 예컨대 서열번호 1-13 중 어느 하나로 제시된 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간 Fc 영역에 연결된 아밀로이드 반응성 펩타이드는 약 10개 내지 약 55개 아미노산을 포함하거나 이들로 이루어질 수 있다. 본 발명의 아밀로이드 반응성 펩타이드는 예를 들어 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54 또는 55개의 아미노산을 포함하거나, 이것으로 이루어질 수 있다. 이러한 펩타이드는 예를 들어 본원에 전체가 포함되는 국제 특허 출원 WO2016032949에 기술되어 있다. 일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드는 서열번호 1-13에 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드는 서열번호 1-13으로 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환을 포함하는 서열번호 1-13으로 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드는 서열번호 1에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드는 서열번호 12에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드는 서열번호 13에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
인간 Fc 영역에 연결된 아밀로이드 반응성 펩타이드의 전부 또는 일부를 형성하는 아미노산은 자연 발생의 아미노산의 입체이성질체 및 변형, 비-자연 발생의 아미노산, 해독후 변형된 아미노산, 효소적으로 합성된 아미노산, 유도체화된 아미노산, 아미노산을 모방하도록 설계된 작제물 또는 구조물 등일 수 있다. 본 발명의 펩타이드를 형성하는 아미노산은 자연 발생의 단백질에서 발견되는 20개의 일반 아미노산 중 하나 이상, 또는 하나 이상의 변형 및 특이 아미노산 중 하나 이상일 수 있다.
일부 실시양태에서, 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드는 제1 인간 Fc 도메인의 N-말단에 연결되고, 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드는 제2 인간 Fc 도메인의 N-말단에 연결된다. 일부 실시양태에서, 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드는 제1 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결되고, 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드는 제2 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결된다. 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 예시적인 구조는 도 1에 제공된다.
일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인은 인간 IgG1, IgG2, 또는 IgG4 Fc이다. 일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인은 인간 IgG1 Fc이다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 인간 Fc 도메인은 인간 IgG1 Fc이다. 일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인은 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 인간 Fc 도메인은 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 서열번호 18의 아미노산 서열은 하기에 제공된다.
인간 IgG1 Fc(서열번호 18)
일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인은 향상된 이펙터 기능(들)을 갖는 Fc 변이체이다. 일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인은 식세포작용을 촉진하는 능력이 향상된 Fc 변이체이다. 일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인은 FcγR에 결합하는 능력이 향상된 Fc 변이체이다. 일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인은 보체를 동원하는 능력이 향상된 Fc 변이체이다. 일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인은 향상된 이펙터 기능 및/또는 FcγR에 대한 향상된 결합을 부여하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 이러한 아미노산 치환은 예를 들어 국제 공개 번호 WO2004/099249, WO2005/063815, WO2006/019447, WO2006/020114, WO2007/041635, WO2009/058492, WO2009/086320 및 미국 공개 번호 US20070224192 및 US20080161541에 기술되어 있으며, 이들 각각은 본원에 참고로 포함된다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 인간 Fc 도메인은 식세포작용을 촉진하는 향상된 능력을 갖는다. 일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인은 글리코엔지니어링(glycoengineering)된다. 일부 실시양태에서, 글리코엔지니어링된 인간 Fc 도메인은 식세포작용을 촉진하는 향상된 능력을 갖는다.
일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 인간 Fc 영역과 아밀로이드 반응성 펩타이드 사이에 아미노산의 스페이서 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드는 스페이서를 통해 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인에 연결된다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 펩타이드 스페이서이다. 일부 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드는 펩타이드 스페이서를 통해 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인에 융합된다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 유연한 스페이서 펩타이드이다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 글리신 및 세린 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 GGGGS 모티프를 포함한다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 글리신 및 세린 잔기로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 강성(rigid) 스페이서 펩타이드이다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 비하전성이다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 글리신 세린 링커이다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 글리신 세린 링커를 포함한다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 약 3 내지 약 55개의 아미노산을 포함하거나, 이것으로 이루어진다. 본 발명의 스페이서 펩타이드는 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54 또는 55개의 아미노산을 포함하거나, 이것으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 스페이서 펩타이드는 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 50, 100 또는 155개의 아미노산 길이, 예를 들어, 이들 값 사이의 임의의 값 또는 범위이다. 일부 실시양태에서, 스페이서 펩타이드는 15개의 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 스페이서 펩타이드는 하기 표 2에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 서열번호 14-17에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제1 스페이서, 및 제1 인간 Fc 도메인을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제2 스페이서 및 제2 인간 Fc 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 폴리펩타이드는 동일한 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 폴리펩타이드는 상이한 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 서열번호 2에 제시된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제1 스페이서, 및 제1 인간 Fc 도메인을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 서열번호 2에 제시된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제2 스페이서, 및 제2 인간 Fc 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제1 스페이서, 및 제1 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제2 스페이서, 및 제2 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제1의 짧고 강성인 스페이서, 및 제1 인간 Fc 도메인을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제2의 짧고 강성인 스페이서, 및 제2 인간 Fc 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 짧고 강성인 스페이서는 서열번호 14에 제시된 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 서열번호 2에 제시된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제1의 짧고 강성인 스페이서, 및 제1 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로 서열번호 2에 제시된 제2의 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제2의 짧고 강성인 스페이서, 및 제2 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 서열번호 19에 제시된 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열번호 19에 제시된 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 서열번호 19에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열번호 19에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 hFc1NV1의 구조 및/또는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제1 인간 Fc 도메인, 제1 스페이서, 및 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제2 인간 Fc 도메인, 제2 스페이서, 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제1 인간 Fc 도메인, 제1 스페이서, 및 서열번호 2에 제시된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로 제2 인간 Fc 도메인, 제2 스페이서, 및 서열번호 2에 제시된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로 제1 인간 IgG1 Fc 도메인, 제1 스페이서, 및 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로 제2 인간 IgG1 Fc 도메인, 제2 스페이서, 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제1 인간 Fc 도메인, 제1의 짧고 강성인 스페이서, 및 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제2 인간 Fc 도메인, 제2의 짧고 강성인 스페이서 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제1 인간 IgG1 Fc 도메인, 제1의 짧고 강성인 스페이서, 및 서열번호 2에 제시된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제2 인간 IgG1 Fc 도메인, 제2의 짧고 강성인 스페이서, 및 서열번호 2에 제시된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 짧고 강성인 스페이서는 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 서열번호 20에 제시된 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 hFc1CV1의 구조 및/또는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제1 인간 Fc 도메인, 제1의 유연하고 긴 스페이서, 및 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제2 인간 Fc 도메인, 제2의 유연하고 긴 스페이서, 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제1 인간 Fc 도메인, 제1의 유연하고 긴 스페이서, 및 서열번호 2에 제시된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제2 인간 Fc 도메인, 제2의 유연하고 긴 스페이서, 및 서열번호 2에 제시된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C 말단으로, 제1 인간 IgG1 Fc 도메인, 제1의 유연하고 긴 스페이서, 및 서열번호 2에 제시된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제2 인간 IgG1 Fc 도메인, 제2의 유연하고 긴 스페이서, 및 서열번호 2에 제시된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제1 인간 IgG1 Fc 도메인, 제1 스페이서, 및 서열번호 13에 제시된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제2 인간 IgG1 Fc 도메인, 제2 스페이서, 및 서열번호 13에 제시된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제1 인간 Fc 도메인, 제1 스페이서, 및 서열번호 13에 제시된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제2 인간 Fc 도메인, 제2 스페이서, 및 서열번호 13에 제시된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제1 인간 Fc 도메인, 제1의 유연하고 긴 스페이서, 및 서열번호 13에 제시된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제2 인간 Fc 도메인, 제2의 유연하고 긴 스페이서, 및 서열번호 13에 제시된 제2의 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제1 인간 IgG1 Fc 도메인, 제1의 유연하고 긴 스페이서, 및 서열번호 13에 제시된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제2 인간 IgG1 Fc 도메인, 제2의 유연하고 긴 스페이서, 및 서열번호 13에 제시된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 서열번호 21에 제시된 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열번호 21에 제시된 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 서열번호 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열번호 21에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에는 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드를 포함하는 융합 단백질이 제공되며, 여기서 제1 폴리펩타이드는 제1 인간 Fc 도메인에 연결된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 여기서 제2 폴리펩타이드는 제2 인간 Fc 도메인에 연결된 제3 아밀로이드 반응성 펩타이드 및 제4 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 여기서 제1 및 제2 인간 Fc 도메인은 이량체를 형성한다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 인간 Fc 도메인은 항체 힌지 영역에서 공유 연결에 의해 이량체를 형성한다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 인간 Fc 도메인은 이황화 결합에 의해 연결된다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 동종이량체이다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제1 스페이서, 제1 인간 Fc 도메인, 제2 스페이서, 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 N-말단부터 C-말단으로, 제3 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제3 스페이서, 제2 인간 Fc 도메인, 제4 스페이서, 및 제4 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1, 제2, 제3 및 제4 아밀로이드 반응성 펩타이드는 본원에 기술된 아밀로이드 반응성 펩타이드 중 어느 하나, 예를 들어 표 1에 기술된 아밀로이드 반응성 펩타이드 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 제1, 제2, 제3, 및 제4는 본원에 기술된 스페이서 중 어느 하나이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 아밀로이드 침착물 또는 원섬유에 결합한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 아밀로이드 내 하나 이상의 아밀로이드원성 펩타이드에 결합한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 아밀로이드 내의 헤파린 설페이트 글리코소아미노글리칸에 결합한다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 인간 원섬유에 결합한다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 합성 원섬유에 결합한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 rVλ6Wil 원섬유, Per125 wtATTR 추출물, KEN hATTR 추출물, SHI ALλ 간 추출물 및/또는 TAL ALκ 간 추출물에 결합한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질에 의해 결합된 아밀로이드는 아밀로이드원성 λ6 가변 도메인 단백질(Vλ6Wil) 또는 아밀로이드원성 면역글로불린 경쇄(AL), Aβ(1-40) 아밀로이드 유사 원섬유 또는 아밀로이드원성 Aβ 전구체 단백질 또는 혈청 아밀로이드 단백질 A(AA)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 rVλ6Wil, Aβ, Aβ(1-40), IAAP, ALκ, ALλ, 또는 ATTR 아밀로이드에 결합한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 ALκ4, ALλ 아밀로이드에 결합한다. 다른 실시양태에서, 인간화 항체 또는 항체-펩타이드 융합 단백질에 의해 결합된 아밀로이드는 면역글로불린 중쇄(AH), β2-마이크로글로불린(Aβ2M), 트랜스티레틴 변이체(ATTR), 아포지단백질 AI(AApoAI), 아포지단백질 AII(AApoAII), 젤솔린(AGel), 리소자임(ALys), 백혈구 화학주성 인자(ALect2), 피브리노겐 a 변이체(AFib), 시스타틴 변이체(ACys), 칼시토닌((ACal), 락타데린(AMed), 섬 아밀로이드 폴리펩타이드(AIAPP), 프로락틴(APro), 인슐린(AIns), 사전 단백질(APrP)의 아밀로이드원성 형태; α-시누클레인(AαSyn), 타우(ATau), 심방 나트륨이뇨 인자(AANF) 또는 IAAP, ALκ4, Alλ1 기타 아밀로이드원성 펩타이드를 포함한다. 인간화 항체 또는 항체-펩타이드 융합 단백질에 의해 결합된 아밀로이드원성 펩타이드는 단백질, 단백질 단편, 또는 단백질 도메인일 수 있다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 침착물 또는 아밀로이드 원섬유는 재조합 아밀로이드원성 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드는 질환의 병리상태의 일부이다.
일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc-융합 단백질은 범-아밀로이드 반응성을 가지며 다양한 아밀로이드 조직에서 다양한 아밀로이드 유형에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 중추신경계의 아밀로이드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 뇌의 아밀로이드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 타우 원섬유 및/또는 알파 시누클레인 응집체에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 약 1, 10, 100 또는 1000 nM 미만인 최대 유효 농도의 절반(EC50)으로 인간 아밀로이드 원섬유에 결합한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 100, 250, 500, 750 또는 1000nM, 예를 들어, 이러한 값들 사이의 임의의 값 또는 범위인 EC50으로 인간 아밀로이드 원섬유에 결합한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 약 1 nM, 2 nM, 2.5 nM, 3 nM, 4 nM, 또는 5 nM인 EC50으로 인간 아밀로이드 원섬유에 결합한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 약 2.5 nM인 EC50으로 인간 아밀로이드 원섬유에 결합한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 약 3 nM, 4 nM, 5 nM, 10 nM, 20 nM, 80 nM, 또는 100 nM 미만의 EC50으로 인간 아밀로이드 원섬유에 결합한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 인간 아밀로이드 원섬유에 결합하는 대조 인간 Fc 영역의 EC50보다 낮은 EC50으로 인간 아밀로이드 원섬유에 결합한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 인간 Fc1 대조군보다 더 큰 정도로 아밀로이드 침착물 또는 원섬유에 결합한다. EC50을 계산하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 예를 들어 표면 플라즈몬 공명을 포함한다. 일부 실시양태에서, EC50은 rVλ6Wil 원섬유에 대한 결합을 측정함으로써 결정된다. 아밀로이드 원섬유에 대한 결합을 측정하는 예시적인 방법은 도 11에 도시된 바와 같이, 실시예 4에 제공된다.
일부 실시양태에서, 인간 아밀로이드에 대한 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 결합은 인간 아밀로이드 원섬유의 식세포작용을 촉진한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 인간 아밀로이드 원섬유를 옵소닌화한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 rVλ6Wil 원섬유를 옵소닌화한다. 일부 실시양태에서, 대식세포의 존재 하에 본 개시내용의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질과 인간 아밀로이드 원섬유의 접촉은 대식세포에 의한 인간 아밀로이드 원섬유의 흡수를 촉진시킨다. 일부 실시양태에서, 대식세포의 존재 하에 본 개시내용의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질과 인간 아밀로이드 원섬유의 접촉은 인간 아밀로이드 원섬유의 옵소닌화를 촉진시킨다. 일부 실시양태에서, 인간 아밀로이드에 대한 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 결합은 인간 아밀로이드 원섬유의 식세포작용을 대조군 분자(예를 들어, 인간 Fc 영역)와 동일하거나 더 큰 정도로 촉진시킨다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 항체 의존적 세포 식세포작용을 촉진시킨다.
일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 검출가능한 표지에 접합된다. 일부 실시양태에서, 검출가능한 표지는 방사성핵종(예를 들어, I-124, I-125, I-123, I-131, Zr-89, Tc-99m, Cu-64, Br-76, F-18); 효소(양고추냉이 퍼옥시다제); 비오틴; 및 형광단 등으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 단백질을 검출가능하게 표지하기 위한 관련 기술분야에 공지된 임의의 수단은 본원에 기술된 방법과 함께 사용되고/되거나 사용하기 위해 조정될 수 있다. 예를 들어, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 방사성동위원소로 방사성 표지되거나, 형광 태그 또는 화학발광 태그로 표지화될 수 있다. 예시적인 방사성동위원소로는, 예를 들어 18F, 111In, 99mTc, 123I 및 125I를 포함한다. 이들 및 다른 방사성동위원소는 예를 들어 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질에 공유 연결된 DTPA 또는 DOTA와 같은 킬레이트제의 사용을 수반하거나 수반하지 않을 수 있는 잘 알려진 화학을 사용하여 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질에 부착될 수 있다. 예시적인 형광 또는 화학발광 태그로는 리신, 시스테인, 글루탐산 및 아스파르트산 측쇄와의 반응에 의해 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질에 접합될 수 있는 플루오레세인, 텍사스 레드, 로다민, 알렉사 염료 및 루시퍼라제를 포함한다. 한 예의 실시양태에서, 표지는 사용되는 태그에 적절한 여기 및 방출 파장을 사용하는 형광 마이크로플레이트 판독기 또는 형광계를 사용하여 검출된다. 방사성 표지는 예를 들어 방사성 방출 유형에 따라 감마 또는 섬광 계수기를 사용하고 특정 방사성핵종의 정확한 검출에 적합한 에너지 창을 사용하여 검출할 수 있다. 그러나, 방사성동위원소 검출에 적합한 임의의 다른 기술도 표지를 검출하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 검출가능한 표지는 125I이다.
또한, 본원에는 본원에 기술된 임의의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함한다.
III. 핵산, 벡터, 숙주 세포 및 융합 단백질의 제조 방법
또한, 본원에는 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 암호화하는 핵산이 제공된다. 일부 실시양태에서, 핵산은 본원에 기술된 임의의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 암호화한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 핵산은 하나 이상의 벡터에 있다. 일부 실시양태에서, 벡터는 본 개시내용의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 암호화하는 핵산(들)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 동종이량체이다. 일부 실시양태에서, 벡터는 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드 둘 모두를 암호화하는 핵산을 포함한다.
일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 이종이량체이다. 일부 실시양태에서, 벡터는 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 제1 폴리펩타이드를 암호화하는 제1 핵산, 및 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 제2 폴리펩타이드를 암호화하는 제2 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 벡터는 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 제1 폴리펩타이드를 암호화하는 제1 핵산을 포함하고, 제2 벡터는 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 제2 폴리펩타이드를 암호화하는 제2 핵산을 포함한다.
아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질 생산을 위해, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질 발현 벡터(들)는 관련 기술분야에 공지된 적절한 생산 세포주에 도입될 수 있다. 발현 벡터(들)의 도입은 전기천공을 통한 공동형질감염에 의해 또는 관련 기술분야에서 이용가능한 임의의 다른 적합한 형질전환 기술에 의해 달성될 수 있다. 그 다음, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질 생산 세포주가 선택되고, 확장되고, 항체 정제될 수 있다. 정제된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 그 다음 SDS-PAGE 또는 SEC와 같은 표준 기술에 의해 분석될 수 있다.
또한, 본원에는 본원에 기술된 임의의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 암호화하는 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질 암호화 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포로는 본원에 기술된 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은, 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않은 경우, 박테리아에서 생산될 수 있다. 박테리아에서 폴리펩타이드의 발현에 대해서는, 예를 들어 미국 특허 제5,648,237호, 제5,789,199호 및 제5,840,523호를 참조한다. (Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254 참조). 발현 후, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 박테리아 세포 페이스트로부터 가용성 분획으로 분리되어 추가로 정제될 수 있다.
일부 실시양태에서, 숙주 세포는 본 개시내용의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 암호화하는 핵산(들)을 포함하는 벡터를 포함한다.
글리코실화된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체(무척추동물 및 척추동물)로부터 유래된다. 무척추동물 세포의 예로는 식물 세포 및 곤충 세포를 포함한다. 곤충 세포와 함께, 특히, 스포돕테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포의 형질감염을 위해 사용될 수 있는 수많은 바큘로바이러스 균주가 식별되어 있다.
식물 세포 배양물은 또한 숙주로서 활용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,959,177호, 제6,040,498호, 제6,420,548호, 제7,125,978호 및 제6,417,429호(트랜스제닉 식물에서 항체를 생산하기 위한 PLANTIBODIES™ 기술을 기술함)를 참조한다.
척추동물 세포도 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 현탁액에서 성장하도록 적응된 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주(COS-7); 인간 배아 신장 세포주(예를 들어, Graham 등, J. Gen Virol. 36:59(1977)에 기술된 바와 같은 293 또는 293 세포); 새끼 햄스터 신장 세포(BHK); 마우스 세르톨리 세포(예를 들어, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251(1980)에 기술된 바와 같은 TM4 세포); 원숭이 신장 세포(CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76); 인간 자궁경부암종 세포(HELA); 개 신장 세포(MDCK; 버팔로 랫트 간 세포(BRL 3A); 인간 폐 세포(W138); 인간 간 세포(Hep G2); 마우스 유방 종양(MMT 060562); 예를 들어, Mather 등, Annals NY. Acad. Sci. 383:44-68(1982)에 기술된 바와 같은 TRI 세포; MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR-CHO 세포(Urlaub 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))를 포함한 중국 햄스터 난소(CHO) 세포; 및 Y0, NS0 및 Sp2/0과 같은 골수종 세포주를 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주에 대한 검토는 예를 들어, 문헌[Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)]을 참조한다.
또한, 본원에는 본 개시내용의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 제조하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 암호화하는 벡터의 발현에 적합한 조건 하에 본 개시내용의 숙주 세포를 배양하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 회수하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질 회수는 예를 들어 삼투압 충격, 초음파 처리 또는 용해에 의해 숙주 세포를 파괴하는 것을 수반한다. 세포가 파괴되면 원심분리나 여과를 통해 세포 잔해물을 제거한다. 이어서 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 추가로 정제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 다양한 단백질 정제 방법, 예를 들어 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피 및 크기 배제 컬럼 크로마토그래피), 원심분리, 차등 용해성 또는 단백질 정제를 위한 임의의 다른 표준 기술에 의해 정제된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 Protein A 컬럼(예를 들어, POROS Protein A 크로마토그래피)과 같은 친화성 컬럼을 크로마토그래피 컬럼(예를 들어, POROS HS-50 양이온 교환 크로마토그래피), 여과, 한외여과, 탈염 및 투석 절차와 함께 적절하게 선택 및 조합함으로써 단리 및 정제된다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 정제를 용이하게 하기 위해 펩타이드와 같은 마커 서열에 접합된다. 마커 아미노산 서열의 예는 마이크로몰 친화도로 니켈-작용기화된 아가로스 친화성 컬럼에 결합할 수 있는 헥사-히스티딘 펩타이드이다. 대안적으로, 인플루엔자 헤마글루티닌 단백질로부터 유래된 에피토프에 상응하는 헤마글루티닌 "HA" 태그가 사용될 수 있다.
아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 화학적 합성 또는 표준 분자 생물학적 기술을 사용한 재조합 수단을 포함하여 관련 기술분야의 기술자에게 공지된 임의의 기술에 의해 제조될 수 있다.
IV. 치료 방법
또한, 본원에는 본원에 개시된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 아밀로이드 관련 장애를 치료하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질 중 어느 하나의 치료 유효량을 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 아밀로이드 질환을 치료하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 아밀로이드 침착물은 질환의 병리상태에 기여할 수 있다. 다른 실시양태에서, 아밀로이드 침착물은 개체의 아밀로이드증 또는 아밀로이드 관련 질환을 나타낼 수 있다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 아밀로이드증이 있는 개체의 아밀로이드에 결합한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드증은 간, 심장 또는 중추신경계와 같은 특정 조직 또는 기관계에 국재화된다.
다른 실시양태에서, 아밀로이드증은 전신성 아밀로이드증이다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드증은 가족성 아밀로이드증이다. 다른 실시양태에서, 아밀로이드증은 산발성 아밀로이드증이다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드증 또는 아밀로이드 관련 질환은 AA 아밀로이드증, AL 아밀로이드증, AH 아밀로이드증, Aβ 아밀로이드증, ATTR 아밀로이드증, hATTR 아밀로이드증, ALect2 아밀로이드증, 및 II형 당뇨병의 IAPP 아밀로이드증, 알츠하이머병, 다운증후군, 네덜란드형 아밀로이드증을 동반한 유전성 뇌출혈, 대뇌 베타-아밀로이드 혈관병증, 해면상 엔셀로할로패씨, 갑상선 종양, 파킨슨병, 루이소체 치매, 타우병증, 헌팅턴병, 노인성 전신 아밀로이드증, 가족성 혈액투석, 노인성 전신 노화, 노화 뇌하수체 장애, 의인성 증후군, 해면상 뇌병증, 반응성 만성 염증, 갑상선 종양, 골수종 또는 다른 형태의 암이다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 관련 질환은 AL, AH, Aβ2M, ATTR, 트랜스티레틴, AA, AApoAI, AApoAII, AApoAIV, AApoCII, AApoCII, AGel, ALys, ALEct2, AFib, ACys, ACal, AMed, AIAPP, APro, AIns, APrP, ASPC, AGal7, ACor, Aker, ALac, AOAPP, ASem1, AEnf 또는 Aβ 아밀로이드증으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 사용한 치료는 아밀로이드 클리어런스를 초래한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 정상적인 노화와 연관된 아밀로이드에 결합한다. 다른 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 개체의 아밀로이드증 또는 아밀로이드 관련 질환의 진단, 치료 또는 예후에 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에는 본원에 제공된 융합 단백질을 투여하는 것을 포함하는 개체의 아밀로이드 관련 장애를 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 개체는 신장, 간 및/또는 심장에 아밀로이드를 가지고 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 신장에 ALλ 침착물을 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 신장에 ALκ 침착물을 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 간에 ALλ 침착물을 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 간에 ALκ 침착물을 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 심장에 ATTR 침착물을 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 심장에 ALκ 침착물을 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 알츠하이머병을 갖고 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 타우 원섬유 또는 알파 시누클레인 응집체를 갖고 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 파킨슨병을 갖고 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 비장에 원섬유를 갖고 있다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 제1 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하는 제1 폴리펩타이드를 포함하고, 여기서 제2 폴리펩타이드는 제2 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 여기서 제1 및 제2 인간 Fc 도메인은 이량체를 형성한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드는 서열번호 1-13에 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1/및 또는 제2 인간 Fc 도메인은 펩타이드 스페이서를 포함한다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 서열번호 14-17 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에는 본원에 제공된 융합 단백질을 투여하는 것을 포함하는 개체의 아밀로이드 관련 장애를 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 아밀로이드 관련 장애는 AA 아밀로이드증, AL 아밀로이드증 및 ATTR 아밀로이드증으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 제1 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하는 제1 폴리펩타이드를 포함하고, 여기서 제2 폴리펩타이드는 제2 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 여기서 제1 및 제2 인간 Fc 도메인은 이량체를 형성한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드는 서열번호 1-13으로 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1/및 또는 제2 인간 Fc 도메인은 펩타이드 스페이서를 포함한다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 서열번호 14-17 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 개체는 비장, 신장, 간 및/또는 심장에 아밀로이드 침착물을 갖는다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 보체를 고정함으로써 식세포작용을 촉진한다.
일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 피내, 피하, 근육내, 심장내, 혈관내, 정맥내, 안구내, 동맥내, 경막외, 척수내, 체외, 척수강내, 복강내, 흉막내, 관강내, 유리체내, 해면체내, 뇌실내, 뼈내, 관절내, 세포내 또는 폐 경로를 통해 투여된다.
일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 면역계 세포(예를 들어, 대식세포)에 의한 아밀로이드의 식세포작용을 유도하기에 충분한 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 개체는 영장류, 소, 설치류 또는 돼지와 같은 포유동물이다. 일부 실시양태에서, 개체는 인간이다.
또한, 본원에는 클리어런스를 위해 아밀로이드 침착물을 표적화하는 방법이 제공되며, 이 방법은 본원에 기술된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질 중 어느 하나와 아밀로이드 침착물을 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 클리어런스를 위해 아밀로이드 침착물을 표적화하면 아밀로이드 침착물의 클리어런스가 초래된다. 일부 실시양태에서, 클리어런스는 아밀로이드 침착물의 옵소닌화로부터 초래된다. 일부 실시양태에서, 방법은 아밀로이드의 식세포작용을 초래한다. 일부 실시양태에서, 개체는 인간이다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 제1 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하는 제1 폴리펩타이드를 포함하고, 여기서 제2 폴리펩타이드는 제2 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 여기서 제1 및 제2 인간 Fc 도메인은 이량체를 형성한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드는 서열번호 1-13으로 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1/및 또는 제2 인간 Fc 도메인은 펩타이드 스페이서를 포함한다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 서열번호 14-17 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
또한, 본원에는 아밀로이드계 질환을 갖거나, 가진 것으로 의심되는 개체를 치료하는 방법이 제공되며, 이 방법은 본원에 기술된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질 중 어느 하나를 검출가능하게 표지화하는 단계, 표지된 융합 단백질을 개체에게 투여하는 단계, 검출 가능한 표지와 연관된 신호가 개체로부터 검출될 수 있는지 여부를 결정하는 단계, 및 신호가 검출되면 개체에게 아밀로이드증 치료를 투여하는 단계에 의해 개체가 아밀로이드 침착물을 갖고 있는지 여부를 결정하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 신호가 검출되지 않으면, 아밀로이드 침착물의 추후 발달에 대해 개체를 모니터링한다. 일부 실시양태에서, 방법은 신호의 강도를 결정하고 신호를 역치 값과 비교하는 것을 추가로 포함하며, 이 값을 초과하면 개체는 아밀로이드 침착물을 보유하는 것으로 결정된다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드증 치료는 본원에 기술된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질 중 어느 하나를 개체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 제1 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하는 제1 폴리펩타이드를 포함하고, 여기서 제2 폴리펩타이드는 제2 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 여기서 제1 및 제2 인간 Fc 도메인은 이량체를 형성한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드는 서열번호 1-13으로 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1/및 또는 제2 인간 Fc 도메인은 펩타이드 스페이서를 포함한다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 서열번호 14-17 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에는 검출 가능하게 표지된 융합 단백질을 개체에게 투여하고 융합 단백질로부터의 신호를 검출하는 것을 포함하는, 개체의 아밀로이드 침착물을 식별하는 방법이 제공된다.
V. 검출 방법
또한, 본원에는 개체의 아밀로이드 침착물을 식별하는 방법이 제공된다.
방법은 대상체로부터 조직 샘플을 수득하는 단계, 펩타이드 또는 융합 펩타이드를 조직 샘플에 적용하는 단계, 아밀로이드에 대한 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합체의 결합을 검출하는 단계를 포함한다. 아밀로이드의 존재를 검출하는 것은 형광 또는 표준 조직화학적 기술을 사용하여 아밀로이드에 대한 펩타이드 또는 융합 펩타이드의 결합을 시각화하는 것을 수반할 수 있다. 방법은 조직 샘플로부터 조직 절편을 수득하는 단계, 조직 절편을 염색하는 단계, 및 형광 또는 표준 조직화학적 기술을 사용하여 아밀로이드에 대한 펩타이드의 결합을 시각화함으로써 조직 샘플 중 아밀로이드의 존재를 검출하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에는 본원에 기술된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질 중 어느 하나를 검출가능하게 표지화하는 단계, 융합 단백질을 개체에게 투여하는 단계, 및 융합 단백질로부터 신호를 검출하는 단계를 포함하는, 개체의 아밀로이드 침착물을 식별하는 방법이 제공된다. 본원에 기술된 검출 가능하게 표지된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질 중 어느 하나가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩타이드-Fc 융합 단백질은 방사성 표지된다. 일부 실시양태에서, 펩타이드-Fc 융합 단백질은 I-125로 방사성 표지된다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 SPECT/CT 영상화, PET/CT 영상화, 감마 신티그래피 또는 광학 영상화에 의해 검출된다. 일부 실시양태에서, 펩타이드-Fc 융합 단백질은 형광 표지된다. 일부 실시양태에서, 방법은 신호 강도를 결정하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 신호 강도는 SPECT/CT 스캔 또는 마이크로방사선 사진에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 제1 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하는 제1 폴리펩타이드를 포함하고, 여기서 제2 폴리펩타이드는 제2 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하며, 여기서 제1 및 제2 인간 Fc 도메인은 이량체를 형성한다. 일부 실시양태에서, 아밀로이드 반응성 펩타이드는 서열번호 1-13으로 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1/및 또는 제2 인간 Fc 도메인은 펩타이드 스페이서를 포함한다. 일부 실시양태에서, 스페이서는 서열번호 14-17 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 기관 및 조직에서 아밀로이드의 영상화에 유용한 영상화제에 부착될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 영상화제에 부착되어 대상체에게 제공될 수 있고, 아밀로이드의 정확한 위치는 표준 영상화 기술에 의해 결정될 수 있다. 아밀로이드에 대해 비선택적인 펩타이드는 비교용 대조군으로서 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 생체분포는 하나 이상의 비선택적 또는 대조군 펩타이드의 생체분포와 비교되어 아밀로이드의 검출 및/또는 국재화에 대한 훨씬 더 큰 차별성을 제공할 수 있다.
아밀로이드를 영상화하는 방법으로는 자기공명영상(MRI), 컴퓨터 축 단층촬영(CAT) 스캐닝, 양전자 방출 단층촬영(PET), 초음파 영상화, X-선, 방사성핵종 영상화, 단일 광자 방출 컴퓨터 단층촬영술(SPECT), 및 다광자 현미경검사를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
스캔의 감도를 높이기 위해 다양한 조영제가 사용될 수 있다. 스캔용 조영제는 x선을 감쇠시키는 모든 분자를 포함할 수 있다. 양전자 방출 단층촬영 및 방사성핵종 영상화에는 방사성동위원소가 사용될 수 있다. 모든 양전자 방출 동위원소는 양전자 방출 단층 촬영 방사성핵종 영상화에 유용하며, 모든 γ-광자 방출 동위원소는 단일 광자 방출 컴퓨터 단층 촬영을 위한 방사성핵종 영상화 또는 신티그래피 영상화에 유용하다.
초음파 영상화를 위한 조영제로는 양성 작용제 및 음성 작용제를 포함한다. 양성 작용제는 초음파 에너지를 반사하여 양(광)의 영상을 생성한다. 이에 상응하게, 음성 작용제는 투과율 또는 초음파투과성을 향상시켜 음성(암) 영상을 생성한다. 다양한 물질 - 기체, 액체, 고체 및 이들의 조합이 잠재적인 조영증강제로서 조사되었다. 미국 특허 제5,558,854호에 개시된 고체 입자 조영제의 예로는 IDE 입자 및 SHU454를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 유럽 특허 출원 제0231091호는 초음파 영상에서 향상된 대비를 제공하기 위해 고도로 플루오르화된 유기 화합물을 함유하는 수중유 유제를 개시한다. 퍼플루오로옥틸 브로마이드(PFOB)를 함유하는 유제도 초음파 영상화제로서 검사되었다. 미국 특허 제4,900,540호는 조영증강제로서 기체 또는 기체 전구체를 함유하는 인지질계 리포솜의 사용을 기술한다.
영상화제는 공지된 방법을 사용하여 본 발명의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질에 부착될 수 있다. 특정 부착 방법으로는 예를 들어 DTPA와 같은 유기 킬레이트제를 사용하는 금속 킬레이트 착물의 사용을 수반한다. 허용되는 킬레이트는 관련 기술분야에 알려져 있다. 이는 1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸-N,N',N",N'"-테트라아세트산(DOTA); 1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸-N,N',N"-트리아세트산(DO3A); 1,4,7-트리스(카르복시메틸)-10-(2-하이드록시프로필)-1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸(HP-DO3A); 디에틸렌트리아민펜타아세트산(DPTA); 및 기타 다수를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
여러 부류의 화합물이 MRI 조영제로서 잠재력을 갖고 있다. 이러한 부류로는 초상자성 산화철 입자, 질산화물, 및 상자성 금속 킬레이트를 포함한다(Mann 등, 1995). 강한 상자성 금속이 바람직하다. 일반적으로, 상자성 란탄족 원소 및 전이 금속 이온은 생체내에서 독성이다. 따라서, 이들 화합물을 유기 리간드와 함께 킬레이트에 혼입시키는 것이 필요하다. 본 발명의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 아밀로이드에 대한 이러한 킬레이트화 금속의 표적화를 향상시키는 데 사용될 수 있으며, 이는 달리 필요로 되는 영상화 조성물의 총 용량의 감소를 가능하게 한다.
광범위한 상자성 금속은 킬레이트화에 적합하다. 적합한 금속으로는 22-29(모두 포함해서), 42, 44 및 58-70(모두 포함해서)의 원자번호를 갖고, 2 또는 3의 산화 상태를 갖는 것을 포함한다. 이러한 금속의 예로는 크롬(III), 망간(II), 철(II), 코발트(II), 니켈(II), 구리(II), 프라세오디뮴(III), 네오디뮴(III), 사마륨(III), 가돌리늄(III), 테르븀(III), 디스프로슘(III), 홀뮴(III), 에르븀(III), 이테르븀(III) 및 바나듐(II)을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. X선 영상술과 같은 다른 정황에서 유용한 이온으로는 란타늄(III), 금(III), 납(II) 및 특히 비스무트(III)를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
국재화 연구에 적합한 본 발명의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 표지화하는데 사용될 수 있는 방사성동위원소 중에는 감마 방출제, 양전자 방출제, X선 방출제 및 형광 방출제가 있다. 펩타이드 및 융합 단백질의 표지화에 적절한 방사성동위원소로는 아스타틴211, 브롬76, 14탄소, 11탄소, 51크롬, 36염소, 57코발트, 58코발트, 구리67, 구리64, 152유로듐, 불소18, 갈륨67, 갈륨68, 3수소, 요오드123, 요오드124, 요오드125, 요오드126, 요오드131, 인듐111, 인듐113m, 59철, 177루테튬, 수은107, 수은203, 32인, 레늄186, 레늄188, 루테늄95, 루테늄97, 루테늄103, 루테늄105, 레늄99m, 레늄105, 레늄101, 75셀레늄, 35황, 테크니튬99m, 텔루륨121m, 텔루륨122m, 텔루륨125m, 툴륨165, 툴륨167, 툴륨168 및 이트륨90을 포함한다. 할로겐은 표지로서 다소 상호교환적으로 사용될 수 있다. 감마 방출제인 요오드123 및 테크네튬99m도 이러한 방사성금속이 감마 카메라에 의해 검출될 수 있고, 생체내에서 영상화에 유리한 반감기를 갖고 있기 때문에 사용될 수 있다. PET 영상술에 적합하고 펩타이드 영상술에 적합한 반감기를 갖는 양전자 방출제인 18-불소 또는 124요오드도 사용될 수 있다. 본 발명의 펩타이드 및 융합 펩타이드는 DTPA(디에틸렌트리아민펜타아세트산)와 같은 공액 금속 킬레이트를 통해 인듐111 또는 테크네튬99m에 의해 표지화되거나, 또는 Cys 잔기를 함유하는 측면 펩타이드에 대해 공유 및 직접적으로 표지화될 수 있다.
본 발명의 방사성 표지된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 관련 기술분야에 공지된 방법에 따라 생성될 수 있다. 예를 들어, 이들은 요오드화나트륨 또는 요오드화칼륨, 및 차아염소산나트륨과 같은 화학적 산화제, 또는 락토페록시다제와 같은 효소적 산화제와의 접촉에 의해 요오드화될 수 있다. 본 발명에 따른 펩타이드 또는 융합 펩타이드는 리간드 교환 공정, 예를 들어 퍼테크네이트를 주석 용액으로 환원시키고, 환원된 테크네튬을 Sephadex 컬럼에 킬레이트화하고 펩타이드를 이 컬럼에 적용함으로써, 또는 직접 표지화 기술, 예를 들어 퍼테크네이트, SnCl2와 같은 환원제, 소듐-포타슘 프탈레이트 용액과 같은 완충액, 및 펩타이드를 인큐베이션함으로써, 테크네튬99m으로 표지화될 수 있다. 금속 이온으로 존재하는 방사성동위원소를 펩타이드에 결합시키기 위해 흔히 사용되는 중간 작용기는 앞서 언급된 바와 같은 디에틸렌트리아민펜타아세트산(DTPA) 및 에틸렌 디아민테트라아세트산(EDTA)이다.
다른 유용한 표지로는 형광 표지, 발색원성 표지, 및 비오틴 표지를 포함한다. 형광 표지로는 로다민, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 플루오레세인 나트륨, 레노그라핀 및 텍사스 레드 설포닐 클로라이드를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 펩타이드 및 융합 펩타이드는 발색원성 기질과 접촉 시 유색 생성물을 생성할 효소(효소 태그) 또는 2차 결합 리간드에 연결될 수 있다. 적합한 효소의 예로는 우레아제, 알칼리성 포스파타제, (서양고추냉이) 수소 퍼옥시다제 및 글루코스 옥시다제를 포함한다. 2차 결합 리간드는 비오틴 및 아비딘 또는 스트렙타비딘 화합물을 포함한다. 이러한 표지의 사용은 관련 기술분야의 기술자에게 잘 알려져 있고, 예를 들어 미국 특허 제3,817,837호; 제3,850,752호; 제3,939,350호; 제3,996,345호; 제4,277,437호; 제4,275,149호 및 제4,366,241호에 기술되어 있으며; 이들 각각은 본원에 참고로 포함된다.
본 발명의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 또한 글루타르알데하이드 또는 과요오드산염과 같은 커플링제의 존재 하에 효소와 반응할 수도 있다. 플루오레세인 마커와의 접합체는 이러한 커플링제의 존재 하에 또는 이소티오시아네이트와의 반응에 의해 제조된다.
본 발명의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 아밀로이드를 표적화하고 결합하여 아밀로이드의 검출을 가능하게 하는 작용제로서 역할을 한다. 본 발명의 펩타이드 및 융합 펩타이드는 대상체가 아밀로이드를 갖고 있는지 여부 및 대상체가 아밀로이드증 또는 아밀로이드 매개 병태를 앓고 있는지 여부를 결정하는 데 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 대상체에서 아밀로이드를 검출하는 방법을 제공한다. 방법은 본 발명의 하나 이상의 펩타이드 또는 융합 펩타이드의 유효량을 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계 및 아밀로이드에 결합된 펩타이드 또는 융합 펩타이드를 검출하는 단계를 포함한다. 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 방사성동위원소와 같은 영상화제에 의해 표지화될 수 있다. 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 침착물에 대한 특이적 결합 친화도를 가지며 결합은 검출 가능하다. 아밀로이드에 대한 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질 펩타이드의 결합은 MRI, CAT 스캔, PET 영상화, 초음파 영상화, SPECT 영상화, X선 영상화, 형광 영상화 또는 방사성핵종 영상화에 의해 검출될 수 있다.
일부 실시양태에서, 개체는 아밀로이드 관련 질환과 연관된 하나 이상의 위험 인자를 갖는다. 일부 실시양태에서, 개체는 아밀로이드 관련 질환의 하나 이상의 증상을 갖는다.
아밀로이드증과 관련하여, 이러한 표지화는 예를 들어 아밀로이드의 존재를 진단하고, 아밀로이드 단백질 로드를 결정하고, 특정 개체에서 아밀로이드에 결합하는 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 능력을 모니터링하고, 아밀로이드증의 진행을 모니터링하고, 및/또는 아밀로이드 치료(예를 들어, 개체에 대한 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 투여과 연관된 치료)에 대한 개체의 반응을 모니터링하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 본원에 기술된 바와 같이 검출 가능한 표지로 표지된 후, 아밀로이드계 질환(예를 들어, 아밀로이드증, 의미 불명의 단클론성 감마병증(MGUS), 다발성 골수종(MM) 또는 관련 형질세포 질환)을 앓고 있거나 앓고 있는 것으로 의심되는 개체에게 투여된다. 그 후, 개체는 예를 들어 검출 가능하게 표지된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 존재를 검출하기 위해 영상화될 수 있다.
특정 예의 실시양태에서, 검출 가능하게 표지된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질로부터의 신호는 정량화되어, 개체의 아밀로이드 침착물 수준의 지표를 제공할 수 있다. 예를 들어, 신호 강도는 표준 신호 역치와 비교될 수 있고, 이를 초과하면 아밀로이드증이 존재하는 것이지만, 그 미만이면 아밀로이드증이 없거나 낮은 수준인 것이다. 개체는 아밀로이드가 있는 것으로 진단될 수 있으며, 이 경우 화학요법, 코르티코스테로이드 약물(레날리도마이드 또는 탈리도마이드) 및/또는 보르테조밉(Velcade)과 같은 치료가 투여될 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 본원에 기술된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질은 본원에 기술된 바와 같이 개체를 치료하기 위한 노력으로 개체에게 투여될 수 있다. 특정 예의 실시양태에서, 개체는 낮은 아밀로이드 로드, 중간 아밀로이드 로드, 또는 높은 아밀로이드 로드와 같은 하나 이상의 그룹으로 계층화될 수 있고, 그 다음 이에 따라 치료될 수 있다. 치료 진행을 모니터링하기 위해, 개체에게 검출 가능하게 표지된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 재투여하여 이들의 아밀로이드 로드에 대해 재평가할 수 있다.
실시양태
1. 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드를 포함하는 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질로서, 제1 폴리펩타이드는 제1 인간 Fc 도메인의 N-말단 또는 C-말단에 연결된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드는 제2 인간 Fc 도메인의 N-말단 또는 C-말단에 연결된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하며, 여기서 제1 및 제2 인간 Fc 도메인은 이량체를 형성하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
2. 실시양태 1에 있어서, 제1 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드가 제1 및 제2 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결되는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
3. 실시양태 1 또는 2에 있어서, 제1 및/또는 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드가 서열번호 1-13에 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
4. 실시양태 1-3 중 어느 하나에 있어서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인이 인간 IgG1, IgG2, 또는 IgG4 Fc인, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
5. 실시양태 1-4 중 어느 하나에 있어서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인이 인간 IgG1 Fc인, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
6. 실시양태 1-5 중 어느 하나에 있어서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인이 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
7. 실시양태 1-6 중 어느 하나에 있어서, 제1 및/또는 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드가 스페이서를 통해 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인에 연결되는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
8. 실시양태 7에 있어서, 스페이서가 펩타이드 스페이서인, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
9. 실시양태 8에 있어서, 스페이서가 서열번호 14-17 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 실시양태 8의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
10. 실시양태 1-9 중 어느 하나에 있어서, 제1 폴리펩타이드가 N-말단부터 C-말단으로, 제1 인간 Fc 도메인, 제1 스페이서, 및 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드가 N-말단부터 C-말단으로 제2 인간 Fc 도메인, 제2 스페이서, 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
11. 실시양태 10에 있어서, 아밀로이드 반응성 펩타이드가 서열번호 2 또는 서열번호 13에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
12. 실시양태 10에 있어서, 아밀로이드 반응성 펩타이드가 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하고 스페이서가 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
13. 실시양태 10에 있어서, 아밀로이드 반응성 펩타이드가 서열번호 13에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 스페이서가 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
14. 실시양태 10에 있어서, 아밀로이드 반응성 펩타이드가 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 스페이서가 서열번호 17에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 융합 단백질.
15. 실시양태 1-10 중 어느 하나에 있어서,
i) 제1 폴리펩타이드 및/또는 제2 폴리펩타이드가 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하고;
ii) 제1 폴리펩타이드 및/또는 제2 폴리펩타이드가 서열번호 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하며;
iii) 제1 폴리펩타이드 및/또는 제2 폴리펩타이드가 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
16. 실시양태 15에 있어서, 제1 폴리펩타이드가 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드가 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
17. 실시양태 1-9 중 어느 하나에 있어서, 제1 폴리펩타이드가 N-말단부터 C-말단으로, 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제1 스페이서, 및 제1 인간 Fc 도메인을 포함하고, 제2 폴리펩타이드가 N-말단부터 C-말단으로 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제2 스페이서, 및 제2 인간 Fc 도메인을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
18. 실시양태 16에 있어서, 아밀로이드 반응성 펩타이드가 서열번호 2 또는 서열번호 13에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
19. 실시양태 17 또는 18에 있어서, 아밀로이드 반응성 펩타이드가 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하고 스페이서가 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
20. 실시양태 17에 있어서, 제1 및/또는 제2 폴리펩타이드가 서열번호 19에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
21. 실시양태 1-20 중 어느 하나에 있어서, 제1 및 제2 폴리펩타이드가 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
22. 실시양태 1-15 및 17-21 중 어느 하나에 있어서, 제1 및 제2 폴리펩타이드가 상이한 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
23. 실시양태 1-22 중 어느 하나에 있어서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질이 rVλ6Wil, Aβ, Aβ(1-40), IAAP, ALκ, ALλ, 또는 ATTR 아밀로이드에 결합하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
24. 실시양태 1-23 중 어느 하나에 있어서, 융합 단백질이 검출가능한 표지에 접합되는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
25. 실시양태 23에 있어서, 검출가능한 표지가 형광 표지 및 방사성 표지로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
26. 실시양태 1-24 중 어느 하나의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물.
27. 실시양태 1-25 중 어느 하나의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 암호화하는 핵산(들).
28. 실시양태 26의 핵산(들)을 포함하는 벡터.
29. 실시양태 28의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
30. 실시양태 29에 있어서, 숙주 세포가 포유동물 세포, 선택적으로 중국 햄스터 난소(CHO) 세포인, 숙주 세포.
31. 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 암호화하는 벡터의 발현에 적합한 조건 하에 실시양태 29 또는 30의 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 제조하는 방법.
32. 실시양태 31에 있어서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 회수하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
33. 실시양태 1-24 중 어느 하나의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 치료 유효량을 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는 아밀로이드 질환을 치료하는 방법.
34. 실시양태 33에 있어서, 아밀로이드 관련 질환이 전신성 또는 국소성 아밀로이드증인, 방법.
35. 실시양태 33에 있어서, 아밀로이드 관련 질환이 AL, AH, Aβ2M, ATTR, 트랜스티레틴, AA, AApoAI, AApoAII, AGel, ALys, ALEct2, AFib, ACys, ACal, AMed, AIAPP, APro, AIns, APrP, 파킨슨병, 알츠하이머병 또는 Aβ 아밀로이드증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
36. 실시양태 33-35 중 어느 하나에 있어서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질로의 치료가 아밀로이드의 클리어런스를 초래하는, 방법.
37. 실시양태 1-25 중 어느 하나의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질과 아밀로이드 침착물을 접촉시키는 것을 포함하는, 클리어런스를 위해 아밀로이드 침착물을 표적화하는 방법.
38. 실시양태 37에 있어서, 클리어런스를 위해 아밀로이드 침착물을 표적화하는 것이 아밀로이드 침착물의 클리어런스를 초래하는, 방법.
39. 실시양태 37 또는 38에 있어서, 클리어런스가 아밀로이드 침착물의 옵소닌화로부터 초래되는, 방법.
40. 아밀로이드계 질환을 갖고 있거나 가진 것으로 의심되는 개체를 치료하는 방법으로서,
개체가 아밀로이드 침착물을 갖고 있는지 여부를
실시양태 1-25 중 어느 하나의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 검출 가능하게 표지화하는 단계,
표지된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 개체에게 투여하는 단계,
검출 가능한 표지와 연관된 신호가 개체로부터 검출될 수 있는지 여부를 결정하는 단계; 및
신호가 검출되면, 개체에게 아밀로이드증 치료를 투여하는 단계
에 의해 결정하는 것을 포함하는 방법.
41. 실시양태 40에 있어서, 신호가 검출되지 않으면, 아밀로이드 침착물의 추후 발달에 대해 개체를 모니터링하는, 방법.
42. 실시양태 40 또는 41에 있어서, 신호의 강도를 결정하고 신호를 역치 값과 비교하는 단계를 추가로 포함하며, 이 값을 초과하면 개체는 아밀로이드 침착물을 보유하는 것으로 결정되는 방법.
43. 실시양태 40-42 중 어느 하나에 있어서, 아밀로이드증 치료가 실시양태 1-25 중 어느 하나의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
44. 실시양태 1-25 중 어느 하나의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 검출가능하게 표지화하는 단계, 융합 단백질을 개체에게 투여하는 단계, 및 융합 단백질로부터의 신호를 검출하는 단계를 포함하는, 개체의 아밀로이드 침착물을 식별하는 방법.
45. 실시양태 40-44 중 어느 하나에 있어서, 개체가 아밀로이드가 없거나 의미 불명의 단클론 감마병증(MGUS), 다발성 골수종(MM), 또는 하나 이상의 관련 형질세포 질환을 앓고 있는 것으로 결정되는 방법.
46. 실시양태 44 또는 45에 있어서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질이 검출가능하게 표지되는, 방법.
47. 실시양태 40-43 및 46 중 어느 하나에 있어서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질이 방사성핵종 또는 형광단에 의해 검출가능하게 표지되는, 방법.
48. 실시양태 47에 있어서, 방사성핵종이 I-123, I-124, F-18, ZR-89 또는 Tc-99m인 방법.
49. 실시양태 40-43 및 46-48 중 어느 하나에 있어서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질이 SPECT/CT 영상화, PET/CT 영상화, 감마 신티그래피 또는 광학 영상화에 의해 검출되는 방법.
50. 실시양태 33-49 중 어느 하나에 있어서, 개체가 인간인 방법.
51. 실시양태 1-25 중 어느 하나에 있어서, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드가 Fc 도메인에서 이황화 결합에 의해 공유 연결되는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
1A. 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드를 포함하는 융합 단백질로서, 제1 폴리펩타이드가 제1 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드가 제2 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 여기서 제1 및 제2 인간 Fc 도메인이 이량체를 형성하는, 융합 단백질.
2A. 실시양태 1A에 있어서, 제1 및/또는 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드가 서열번호 1-13으로 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 융합 단백질.
3A. 실시양태 1A 또는 실시양태 2A에 있어서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인이 인간 IgG1, IgG2, 또는 IgG4 Fc인, 융합 단백질.
4A. 실시양태 1A-3A 중 어느 하나에 있어서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인이 인간 IgG1 Fc인, 융합 단백질.
5A. 실시양태 1A-4A 중 어느 하나에 있어서, 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인이 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 융합 단백질.
6A. 실시양태 1A-5A 중 어느 하나에 있어서, 제1 및/또는 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드가 스페이서를 통해 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인에 연결되는, 융합 단백질.
7A. 실시양태 6A에 있어서, 스페이서가 펩타이드 스페이서인, 융합 단백질.
8A. 실시양태 7A에 있어서, 스페이서가 서열번호 14-17 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 융합 단백질.
9A. 실시양태 6A-8A 중 어느 하나에 있어서, 제1 폴리펩타이드가 N-말단부터 C-말단으로, 제1 인간 Fc 도메인, 제1 스페이서, 및 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 제2 폴리펩타이드가 N-말단부터 C-말단으로, 제2 인간 Fc 도메인, 제2 스페이서 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하는, 융합 단백질.
10A. 실시양태 1A-9A 중 어느 하나에 있어서, 제1 폴리펩타이드가 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 제2 폴리펩타이드가 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
11A. 실시양태 1A-10A 중 어느 하나에 있어서, 융합 단백질이 rVλ6Wil, Aβ, Aβ(1-40), IAAP, ALκ4, Alλ1, 또는 ATTR 아밀로이드에 결합하는, 융합 단백질.
12A. 실시양태 1A-11A 중 어느 하나에 있어서, 융합 단백질이 검출가능한 표지에 접합되는, 융합 단백질.
13A. 실시양태 1A-12A 중 어느 하나의 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물.
14A. 실시양태 1A-12A 중 어느 하나의 융합 단백질을 암호화하는 핵산(들).
15A. 실시양태 14A의 핵산(들)을 포함하는 벡터.
16A. 실시양태 15A의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
17A. 실시양태 16A에 있어서, 숙주 세포가 포유동물 세포, 선택적으로 중국 햄스터 난소(CHO) 세포인, 숙주 세포.
18A. 융합 단백질을 암호화하는 벡터의 발현에 적합한 조건 하에 실시양태 16A 또는 17A의 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 융합 단백질을 제조하는 방법.
19A. 실시양태 18A에 있어서, 융합 단백질을 회수하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
20A. 실시양태 1A-12A 중 어느 하나의 융합 단백질의 치료 유효량을 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 아밀로이드 질환을 치료하는 방법.
21A. 실시양태 20A에 있어서, 아밀로이드 관련 질환이 전신성 또는 국소성 아밀로이드증인, 방법.
22A. 실시양태 20A에 있어서, 아밀로이드 관련 질환이 AL, AH, Aβ2M, ATTR, 트랜스티레틴, AA, AApoAI, AApoAII, AGel, ALys, ALEct2, AFib, ACys, ACal, AMed, AIAPP, APro, AIns, APrP 또는 Aβ 아밀로이드증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
23A. 실시양태 20A-22A 중 어느 하나에 있어서, 융합 단백질로의 치료가 아밀로이드의 클리어런스를 초래하는, 방법.
24A. 아밀로이드 침착물을 실시양태 1A-12A 중 어느 하나의 융합 단백질과 접촉시키는 단계를 포함하는, 클리어런스를 위해 아밀로이드 침착물을 표적화하는 방법.
25A. 실시양태 24A에 있어서, 클리어런스를 위해 아밀로이드 침착물을 표적화하는 것이 아밀로이드 침착물의 클리어런스를 초래하는, 방법.
26A. 실시양태 24A 또는 25A에 있어서, 클리어런스가 아밀로이드 침착물의 옵소닌화로부터 초래되는, 방법.
27A. 실시양태 20A-26A 중 어느 하나에 있어서, 개체가 인간인 방법.
28A. 아밀로이드계 질환을 앓고 있거나 앓고 있는 것으로 의심되는 개체를 치료하는 방법으로서,
개체가 아밀로이드 침착물을 갖고 있는지 여부를
실시양태 1A-12A 중 어느 하나의 융합 단백질을 검출가능하게 표지화하는 단계,
표지된 융합 단백질을 개체에게 투여하는 단계,
검출 가능한 표지와 연관된 신호가 개체로부터 검출될 수 있는지 여부를 결정하는 단계; 및
신호가 검출되면, 개체에게 아밀로이드증 치료를 투여하는 단계
에 의해 결정하는 것을 포함하는 방법.
29A. 실시양태 28A에 있어서, 신호가 검출되지 않으면, 아밀로이드 침착물의 추후 발달에 대해 개체를 모니터링하는, 방법.
30A. 실시양태 29A에 있어서, 신호의 강도를 결정하고 신호를 역치 값과 비교하는 단계를 추가로 포함하며, 이 값을 초과하면 개체는 아밀로이드 침착물을 보유하는 것으로 결정되는, 방법.
31A. 실시양태 28A-30A 중 어느 하나에 있어서, 아밀로이드증 치료가 실시양태 1A-12A 중 어느 하나의 융합 단백질을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
32A. 실시양태 1A-12A 중 어느 하나의 융합 단백질을 검출가능하게 표지화하는 단계, 융합 단백질을 개체에게 투여하는 단계, 및 융합 단백질로부터 신호를 검출하는 단계를 포함하는, 개체의 아밀로이드 침착물을 식별하는 방법.
33A. 실시양태 28A-32A 중 어느 하나에 있어서, 개체가 아밀로이드가 없거나 의미 불명의 단클론 감마병증(MGUS), 다발성 골수종(MM), 또는 하나 이상의 관련 형질세포 질환을 앓고 있는 것으로 결정되는 방법.
실시예
다음 실시예는 본 발명을 추가로 예시하지만 어떤 방식으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 개시내용 및 관련 기술분야의 일반적인 기술 수준을 고려하여, 관련 기술분야의 기술자는 다음 실시예가 단지 예시적인 것으로 의도되었으며 다수의 변화, 수정 및 변경이 현재 개시된 주제의 범위에서 벗어남이 없이 이용될 수 있는 것으로 이해될 것이다. 첨부된 도면은 본 개시내용의 명세서 및 상세한 설명의 필수적인 부분으로서 간주되는 것으로 의도된다.
실시예 1. 펩타이드-Fc 작제물의 생산
다음 실시예는 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질 작제물의 생산을 기술한다. 예시적인 작제물의 구조는 도 1에 제공되어 있다. Fcp5R NV1로 명명되는 하나의 작제물에서, p5R 펩타이드는 도 1의 윗줄에 도시된 바와 같이 짧은 강성 스페이서(VSPSV, 서열번호 15)를 통해 제1 및 제2 Fc 도메인의 N-말단에 융합되었다. Fcp5R CV1로 명명된 제2 작제물에서 p5R 펩타이드는 도 1의 2번째 줄에 도시된 바와 같이, 짧은 강성 스페이서(VSPSV, 서열번호 15)를 통해 제1 및 제2 Fc 도메인의 C 말단에 융합되었다. Fcp5R NV1 및 Fcp5R CV1의 아미노산 서열은 하기 표 3에 제공된다.
소듐 도데실 설페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE) 분석을 수행하여 펩타이드-Fc 융합 작제물의 제제를 펩타이드-항체 융합 작제물과 비교했다. 융합 작제물은 2% 소태아혈청(FBS)의 존재하에 중국 햄스터 난소(CHO) 세포에서 생산되었다. 샘플을 환원 및 비등시켰다. 4-12% 비스-트리스 겔을 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산(MES) 완충액과 함께 사용하고 쿠마시 블루 염색을 사용하여 단백질을 검출했다. 도 2에 도시된 바와 같이, Fcp5R CV1 작제물(레인 6)은 Fcp5R NV1 작제물(레인 5)보다 크기가 더 컸다. 이론에 구애됨이 없이, 이 생산 방법은 아밀로이드 결합 펩타이드의 절단에 민감성(Fcp5R NV1의 경우, 레인 5)이거나, 또는 펩타이드 절단에 저항성(Fcp5R CV1의 경우, 레인 6)인 작제물을 초래하는 것으로 여겨진다. 데이터는 Fc 도메인 상의 펩타이드 위치가 생산 동안 단백질분해로부터 이를 보호할 수 있음을 시사했다.
Fcp5R NV1 및 Fcp5R CV1을 추가로 분석하기 위해 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 수행했다. 도 3에 도시된 바와 같이, Fcp5R NV1 및 Fcp5R CV1은 서로 다른 시간에 컬럼에서 용출되었고, 이는 두 작제물의 크기가 서로 다르다는 것을 나타낸다. Fcp5R CV1은 NV1 이전에 용출되었으며, 이는 펩타이드가 시약 생산 동안 단백질 분해에 저항성이라는 SDS-PAGE 분석(도 2)의 관찰과 일치하는 더 높은 분자량을 갖고 있음을 나타낸다. 대조적으로, Fcp5R NV1은 단백질분해 절단에 민감했다.
실시예 2. 마우스내 펩타이드-Fc의 생체분포
다음 실시예는 Fcp5R CV1의 방사성 요오드화 및 AA 아밀로이드증 마우스에 대한 방사성 표지된 Fcp5R CV1의 투여를 기술한다.
Fcp5R CV1은 I-125로 방사성 표지했다. 항체 11-1F4는 방사성표지 반응에 대한 대조군 역할을 했다. 도 4에 도시된 바와 같이, 2% FBS에서 성장한 HD CHO 세포에 의해 생산된 Fcp5R CV1은 I-125로 쉽게 방사성 표지되었으며 블루 덱스트란과 함께 용출되었다. 컬럼 및 튜브로부터의 회수율은 뛰어났다. SDS-PAGE 겔은 방사성 표지 절차 중에 응집체가 형성되지 않았으며, 제제가 고순도 및 고 방사성순도임을 나타냈다(즉, SDS-PAGE 겔에서 유리 방사성요오드화물에 대한 증거가 없었음).
125I-Fcp5R CV1은 전신 AA 아밀로이드증이 있는 마우스에게 투여했다. AA 아밀로이드증 마우스 모델은 인간 인터루킨-6 이식유전자를 구성적으로 발현하는 H2-Ld-huIL-6 Tg Balb/c 트랜스제닉 마우스에서 멸균 인산염 완충 식염수(PBS) 100μL 중 단리된 아밀로이드 강화 인자(AEF, Axelrad 등, Lab Invest (1982)47: 139-146) 0.1 mg을 IV 투여하여 생성시켰다. 이들 연구에 사용된 마우스는 아밀로이드증 유도 후 4 내지 6주였다. AA 마우스 모델은 간의 광범위한 S자형 아밀로이드 침착물, 비장의 초기 및 대규모 모낭주위 아밀로이드 침착물, 및 이후 췌장, 신장, 부신, 장의 아밀로이드 침착물, 및 빈약한 간질성 심장 아밀로이드 침착을 특징으로 한다.
125I-Fcp5R CV1(약 10μg, 약 100μCi)을 AA 아밀로이드증이 있는 마우스에게 정맥내 꼬리 정맥 주사로 투여했고, 주사 후의 시점에서 125I-Fcp5R CV1의 생체분포를 검출했다. 구체적으로, AA 마우스 그룹(그룹당 n = 4)에게 125I 표지된 Fcp5R CV1을 주사한 후, 주사 후 1, 4 또는 24시간째에 안락사시켰다. 안락사 후 AA 마우스로부터 비장, 췌장, 좌우 신장, 간, 심장, 근육, 위, 상부 장 및 하부 장, 및 폐 조직의 샘플을 수확했다. 각 샘플을 빈 플라스틱 바이알에 넣고 무게를 재고, 자동화된 Wizard 3 감마 계수기(1480 Wallac Gamma Counter, PERKIN ELMER®)를 사용하여 125I 방사능을 측정했다. 생체분포 데이터는 조직 그램당 주사된 용량의 백분율(ID/g %)로 표현했다. 또한, 각 조직의 샘플을 10% 완충 포르말린에 24시간 동안 고정했고, 조직학 및 자기방사선술을 위해 파라핀에 매립시켰다. 자기방사선술을 위해, 포르말린-고정되고, 파라핀-매립된 블록으로부터 4 내지 6μm 두께의 절편을 절단하여 Plus 현미경 슬라이드(FISHER SCIENTIFIC®) 상에 놓고, NTB2 유제(EASTMAN KODAK®)에 침지시킨 뒤, 암실에서 보관하고, 96시간 노출 후 발색시켰다. 각 절편은 헤마톡실린으로 대비염색했다.
도 5-8에 도시된 바와 같이, 125I-Fcp5R CV1은 마우스, 특히 이 마우스 모델에서 아밀로이드 침착의 주요 부위인 간 및 비장에서 검출되었다. 추적자(tracer)의 추가 흡수는 신장에서 관찰되었다(도 5). 간 및 비장에서 아밀로이드 침착물에 대한 결합은 주사 후 24시간 초과 동안 방사성요오드화된 Fcp5R CV1의 간비장 흡수를 입증하는 소형 동물 SPECT/CT 영상술을 사용하여 시각화했다(도 6). 심장, 간 및 비장에서의 아밀로이드 침착물에 대한 특이적 결합은 미세자기방사선술을 사용하여 입증했다(도 7-8). 미세자기방사선사진(ARG)에서, 방사성표지된 Fcp5R CV1의 존재는 검은색 은 알갱이의 침착에 의해 나타났다. 은 알갱이, 및 이에 따라 125I-Fcp5R CV1의 분포는 콩고 레드 염색된 연속 조직 절편(콩고 레드)에서 보여지는 아밀로이드의 분포와 상관관계가 있었다. 이들 조직에서 아밀로이드와 125I-Fcp5R CV1의 특이적 반응성은 주사 후 추후 시점(24시간)에서도 관찰되었다(도 8).
실시예 3. rVλ6Wil 원섬유의 결합 및 식세포작용
아밀로이드 원섬유 식세포작용을 촉진하는 펩타이드-Fc 융합 단백질의 능력은 pHrodo 레드-표지화된 rVλ6Wil 원섬유 시스템을 사용하여 연구했다.
인간 THP1 세포(106 세포/웰)를 24웰 조직 배양-처리된 플레이트의 웰에 코팅했다. 50 ng/ml 포르볼 미리스테이트 아세테이트(PMA) 분취량을 첨가하고 세포를 5% CO2 인큐베이터에서 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션했다. 24시간 후, PMA를 함유하는 배양 배지를 조심스럽게 제거하고 완전 DMEM-F12 배지로 교체하고 세포를 최소 48시간 동안 방치했다. 식세포작용 검정을 수행하기 위해, 배지를 웰에서 제거하고 둘베코 PBS로 헹군 후, 각 웰에 500 μL의 RPMI 분취량을 첨가했다. Fcp5R 변이체 또는 대조군 hFc1은 시작 전에 적절한 농도의 pHrodo 적색-표지화된 원섬유와 혼합한 후, 24웰 플레이트의 세포에 첨가했다. 부드럽게 혼합한 후, 식세포작용을 촉진하기 위해 플레이트를 5% CO2 인큐베이터에서 37℃로 1시간 동안 인큐베이션한다. 1시간 인큐베이션이 끝나면 pHrodo 적색 형광단으로부터의 형광 방출을 4x 대물렌즈 및 적색 형광 필터를 사용하는 표면형광 현미경을 사용하여 영상화했다. 각 웰마다 4개의 영상을 포착하여, 어떠한 편향 없이, 웰의 모든 영역을 커버하여 나타내도록 했다. 각 영상 중 형광의 양은 영상 분할 및 정량(Image ProPlus)을 사용하여 정량화했다. 형광 단위는 디지털 스펙트럼 카운트로 측정했다.
도 9에 도시된 바와 같이, Fcp5R CV1은 Fcp5R NV1보다 더 크게 Wil 원섬유 흡수를 촉진했다. 이론에 얽매임이 없이, Fcp5R CV1에 의해 유도된 향상된 식세포활성은 Fcp5R NV1에 비해 전체 길이의 아밀로이드 반응성 펩타이드가 이 변이체에 존재하기 때문인 것으로 생각된다. 추가로, Fcp5R CV1은 도 10에 도시된 바와 같이 Wil 원섬유 흡수에 있어서 용량 의존적 반응을 나타내었다.
추가로, rVλ6Wil 원섬유에 결합하는 Fcp5R CV1의 능력은 인간 Fc1 대조군과 비교하여 측정했다. 도 11에 도시된 바와 같이, Fcp5R CV1은 2.5 nM의 EC50으로 rVλ6Wil 원섬유에 결합한 반면, 인간 Fc1 대조군은 원섬유에 결합하지 않았다.
실시예 4. 추가 펩타이드-Fc 작제물의 설계
추가의 펩타이드-Fc 작제물이 고려된다. 한 작제물에서, p5R 펩타이드는 도 1의 3번째 줄에 도시된 바와 같이 유연하고 긴 스페이서(GGGGSGGGGS, 서열번호 16)를 통해 제1 및 제2 Fc 도메인의 C-말단에 융합된다. 또 다른 작제물에서, p5R+14 펩타이드(추가 4개의 아밀로이드 결합 아르기닌 잔기를 포함하는 14개 이상의 아미노산을 갖는 연장된 p5R 변이체)는 도 1의 하단 줄에 도시된 바와 같이 짧은 강성 스페이서(VSPSV, 서열번호 15)를 통해 제1 및 제2 Fc 도메인의 C-말단에 융합된다. 이들 작제물의 아미노산 서열은 아래 표 4에 제공된다.
실시예 5 - 전신 혈청 아밀로이드 단백질 A 연관(AA) 아밀로이드증이 있는 마우스에서 125I-Fcp5RCV1의 생체분포.
hFc1CV1은 일시적으로 형질감염된 CHO 세포에 의해 발현되었다. Fc-펩타이드 융합체는 Protein A에 의해 정제되었다. hFc1CV1은 티로신 측쇄 내로의 산화적 혼입에 의해 요오드-125에 의해 방사성 표지되었다. 유리 방사성 요오드화물은 크기 배제 크로마토그래피로 분리했고 SDS-PAGE 및 자기방사선술로 방사능순도를 평가했다.
대략 100μCi(10μg 시약)를 전신 AA 아밀로이드증이 있는 마우스 또는 아밀로이드가 없는 WT 마우스(대조군)의 측면 꼬리 정맥으로 IV 주사했다. 트랜스제닉 AA 마우스는 모든 기관 및 조직에서 전신 아밀로이드를 발달시키지만 간, 비장 및 신장에서는 심각한 아밀로이드가 발달하고 심장에서는 빈약한 침전물만이 관찰되는 것을 특징으로 한다. 주사 후 1시간, 4시간, 24시간 및 48시간째 마우스(그룹당 n=4)를 이소플루란 과다복용으로 안락사시키고 SPECT/CT 영상을 획득했다.
그 직후, 기관 내 시약의 생체분포의 척도로서 조직 연관 방사능을 측정하기 위해 샘플 또는 기관 및 혈액을 수집했다. 이 분석은 주사 후 1시간 이내에 아밀로이드 적재된 기관에서의 급속한 축적을 특히 간, 비장, 신장, 위 및 심장에서 125I-hFc1CV1의 보유로 밝혀냈고, 시간이 지남에 따라 이들 기관에서 방사능 감소가 관찰되었다(도 12a).
주사 후 48시간째 WT 마우스의 125I-hFc1CV1과 비교하여 간, 비장, 췌장, 위 및 심장에서 방사성표지된 hFc1CV1이 상당히 보유되었는데, 이는 이들 기관에서 리간드인 아밀로이드에 대한 특이적 결합을 나타낸다(도 12b).
AA 마우스 기관에서 방사성표지된 hFc1CV1의 분포는 미세자기방사선술을 사용하여 평가했다. 조직 샘플을 10% 완충된 포르말린에 24시간 동안 고정시키고 파라핀 블록에 매립시키고, 유리 슬라이드 상에 6μm 두께의 조직 절편을 준비했다. 슬라이드를 3일 동안 사진 유제에 노출시킨 다음 H&E로 대비염색했다. 조직에 방사능의 존재는 검은색 은 알갱이의 침착에 의해 입증되었다. 평가된 모든 기관에서 방사성 표지된 hFc1CV1의 결합이 병리상태에 대한 특이적 결합을 나타내는 조직 내 아밀로이드 침착물과 연관된 것으로 관찰되었다(도 13a 및 도 13b). 주사 후 1시간째(도 13a), 125I-hFc1CV1은 자기방사선사진(ARG)에서 입증되는 조직 내 특정 부위에서 이미 축적 중이었고, 이는 콩고 레드(CR)-염색된 조직 절편에서 녹색/금색 복굴절로서 관찰되는 아밀로이드의 존재와 상관관계가 있었다. 주사 후 24시간째(도 13b), 125I-hFc1CV1의 강렬하고 특이적인 아밀로이드 결합은 ARG에서 여전히 명백했다.
실시예 6 - hFc1CV1은 시험관내에서 인간 AL 아밀로이드 추출물의 식세포작용을 향상시킨다.
hFc1CV1은 관류 배양 조건 하에서 성장한, 안정적으로 형질감염된 CHO 세포에 의해 발현되었고, 7일째 정제했다. Fc-펩타이드 융합체는 Protein A로 정제했다.
아밀로이드 유사 원섬유(rVλ6WIL), 인간 AL 추출물(ALλ 또는 ALκ) 및 인간 ATTRwt 아밀로이드 추출물을 생체외 식세포작용 검정에 사용하기 위해 pH 민감성 염료 숙신이미딜-pHrodo 레드 형광단으로 표지화했다. 인간 THP-1 세포는 포르볼 미리스테이트 아세테이트(PMA)를 첨가하여 활성화시켰고, 24-웰 조직 배양 플레이트의 웰에 파종했다. 20μg 질량의 아밀로이드 추출물은 증가하는 양의 hFc1CV1 또는 대조 hIgG1 항체(6nM, 20nM, 60nM 및 200nM)와 함께 웰에 첨가하고 플레이트를 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션했다. 역상 형광현미경(Keyance BZ X800)을 사용하여 웰을 관찰했고, 각 웰에 대해 4개의 디지털 영상(4x 대물렌즈)를 포착했다. 스펙트럼 분할을 사용하여 각 영상의 형광을 정량화하고 4개 이미지의 평균 및 SD를 결정했다(도 14a-14d).
결과는 활성화된 인간 THP-1 대식세포에 의한 다양한 아밀로이드 추출물의 식세포작용을 hFc1CV1이 용량 의존적 방식으로 향상시키고, AL 및 ATTRwt 추출물 둘 모두가 대략 60 nM에서 효과의 포화를 나타낸다는 것을 입증한다. 아밀로이드 기질의 증가된 식세포작용으로 인한 형광 방출의 향상은 모든 농도에서 대조군 hIgG1보다 유의미하게 더 컸다.
이들 데이터는 hFc1CV1에 의한 인간 아밀로이드의 옵소닌화가 인간 대식세포에 의한 아밀로이드의 유의미한 식세포작용을 초래한다는 것을 입증한다.
실시예 7 보체 공급원으로서 인간 혈장은 시험관내에서 인간 AL 아밀로이드 추출물의 hFc1CV1 매개의 식세포작용을 향상시킨다.
hFc1CV1은 관류 배양 조건 하에서 성장된 안정적으로 형질감염된 CHO 세포에 의해 발현되었고, 7일째 정제했다. Fc-펩타이드 융합체는 Protein으로 정제했다.
아밀로이드 유사 원섬유(rVλ6WIL) 및 인간 AL 추출물(ALλ 또는 ALκ) 아밀로이드 추출물은 pH 민감성 염료 숙신이미딜-pHrodo 레드 형광단으로 표지화했다. 인간 THP-1 세포는 포르볼 미리스테이트 아세테이트(PMA)를 첨가하여 활성화시켰고, 24-웰 조직 배양 플레이트의 웰에 파종했다. 20% 인간 혈장(보체 공급원)의 존재 또는 부재 하에 60 nM hFc1CV1이 담긴 웰에 20μg 질량의 아밀로이드 추출물을 첨가했다. 역상 형광현미경(Keyance BZ X800)을 사용하여 웰을 관찰했고, 각 웰에 대해 4개의 디지털 영상(4x 대물렌즈)을 포착했다. 스펙트럼 분할을 사용하여 각 영상의 형광을 정량화하고 4개 영상의 평균 및 SD를 결정했다. 결과는 활성화된 인간 THP-1 대식세포에 의한 인간 아밀로이드 추출물의 식세포작용을 유도하기 위해 혈장/보체가 hFc1CV1의 효능을 유의미하게 향상시킨다는 것을 입증한다(도 15).
이들 데이터는 혈장내 보체 성분의 존재 하에 hFc1CV1에 의한 인간 아밀로이드의 옵소닌화가 인간 대식세포에 의한 아밀로이드의 식세포작용을 유의미하게 향상시킨다는 것을 입증한다.
실시예 8 hFc1CV1은 나노몰이하의 효력으로 다양한 형태의 아밀로이드와 결합한다.
hFc1CV1은 관류 배양 조건 하에서 성장된 안정적으로 형질감염된 CHO 세포에 의해 발현되었고 7일째 정제했다. Fc-펩타이드 융합체는 Protein A로 정제했다.
합성 아밀로이드 유사 원섬유(rVλ6WIL), 뿐만 아니라 인간 AL 추출물(ALλ 또는 ALκ) 및 인간 ATTRV 및 ATTRwt 아밀로이드 추출물을 hFc1CV1의 결합에 대한 기질로서 사용했다. Fc-펩타이드 접합체는 400 nM에서 시작하여 2배 연속 희석으로 웰에 첨가했다. 결합된 hFc1CV1의 검출은 비오티닐화된 염소 항-인간 Fc-반응성 2차 항체 및 스트렙타비딘-유로퓸 접합체를 첨가한 후 시간 분해 형광을 측정함으로써 평가했다(도 16). 3회 반복의 평균 및 SD를 계산하고, 효력(EC50)은 로그 x축(Prism)과 S자형 4 PL 방정식으로 피팅시킨 후 결정했다(표 5).
아밀로이드 기질에 대한 hFc1CV1의 결합에 대해 추정된 효력(EC50) 값은 0.5nM(합성 원섬유의 경우) 내지 ATTRv 아밀로이드 추출물에서 획득된 1.8nM 범위였다. 이들 데이터는 합성 원섬유 및 인간 AL 및 ATTR 아밀로이드 추출물에 대한 hFc1CV1의 높은 친화성 결합을 입증한다.
합성 아밀로이드 유사 원섬유(Tau 441, α-시누클레인 및 Aβ(1-40))를 hFcCV1의 결합에 대한 기질로서 사용했다. hFc1CV1을 400 nM(제시된 Aβ 원섬유에 대해서는 50nM)에서 시작하여 2배 연속 희석으로 웰에 첨가했다. 결합된 hFcCV1의 검출은 비오티닐화된 염소 항-인간 Fc-반응성 2차 항체 및 스트렙타비딘-유로퓸 접합체를 첨가한 후 시간 분해 형광을 측정함으로써 평가했다(도 17). 3회 반복의 평균 및 SD를 계산하고 로그 x축(Prism)과 S자형 4 PL 방정식으로 피팅시킨 후 효력(EC50)을 결정했다(표 5). 원섬유에 hFc1CV1이 결합하는 추정된 효력(EC50) 값은 α-시누클레인, Tau 441 및 Aβ(1-40)에 대해 7.3 nM, 7 nM 및 0.7 nM이었다(표 5).
실시예 8 - 조직 절편 중 아밀로이드에 대한 비오티닐화 hFc1CV1의 결합
AL 또는 ATTR 아밀로이드를 함유하는 조직으로부터 포르말린 고정되고 파라핀 매립된 절편을 준비했다. 알츠하이머병 환자로부터의 추가 뇌 조직 샘플도 평가했다. 표준 면역조직화학적 방법을 사용하여 조직을 비오티닐화 hFc1CV1(PBS 중 2 μg/mL)로 염색하고 디아미노벤지딘을 첨가한 후 시각화했다. 동일한 조직의 슬라이드에서 아밀로이드의 존재는 알칼리성 콩고 레드 용액으로 조직을 염색한 후 콩고 레드 형광으로 시각화했다.
hFcCV1은 알츠하이머병 환자의 뇌에 있는 A베타 아밀로이드뿐만 아니라 혈관벽에 있는 A베타 아밀로이드로 구성된 미만성 및 중심부 플라크에 특이적으로 결합했다(도 18a).
유사하게, 아밀로이드와의 특이적 결합은 신장 및 간에서 AL 아밀로이드 침착물에 의해 관찰되었다(도 18b). ATTR 및 AL 심장 아밀로이드증의 2가지 샘플에서 심근세포를 둘러싸는 심장 아밀로이드 침착물에 대한 hFc1CV1의 특이적 결합이 관찰되었다(도 18c).
이들 데이터는 다양한 조직에서 다양한 유형의 조직 아밀로이드 침착물과 hFc1CV1의 특이적 반응성을 입증한다. 따라서, p5R 펩타이드에 의해 매개되는 hFc1CV1의 범아밀로이드 반응성은 가장 흔한 3가지 아밀로이드 관련 질환 형태의 조직을 사용한 면역조직화학적 염색에 의해 입증된다.
SEQUENCE LISTING <110> University of Tennessee Research Foundation Attralus, Inc. <120> PEPTIDE-FC FUSIONS FOR TREATING AMYLOID DISORDERS <130> 16599-20008.40 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> US 63/186,605 <151> 2021-05-10 <150> US 63/184,682 <151> 2021-05-05 <160> 22 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Lys Ala Gln Lys Ala Gln Ala Lys Gln Ala Lys Gln Ala Gln Lys Ala 1 5 10 15 Gln Lys Ala Gln Ala Lys Gln Ala Lys Gln 20 25 <210> 2 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 Arg Ala Gln Arg Ala Gln Ala Arg Gln Ala Arg Gln Ala Gln Arg Ala 1 5 10 15 Gln Arg Ala Gln Ala Arg Gln Ala Arg Gln 20 25 <210> 3 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 Lys Ala Lys Ala Lys Ala Lys Ala Lys Ala Lys Ala Lys Ala Lys 1 5 10 15 <210> 4 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 Lys Ala Gln Ala Lys Ala Gln Ala Lys Ala Gln Ala Lys Ala Gln Ala 1 5 10 15 Lys Ala Gln Ala Lys Ala Gln Ala Lys Ala Gln Ala Lys 20 25 <210> 5 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 5 Lys Ala Gln Gln Ala Gln Ala Lys Gln Ala Gln Gln Ala Gln Lys Ala 1 5 10 15 Gln Gln Ala Gln Ala Lys Gln Ala Gln Gln 20 25 <210> 6 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 6 Gln Ala Gln Lys Ala Gln Ala Gln Gln Ala Lys Gln Ala Gln Gln Ala 1 5 10 15 Gln Lys Ala Gln Ala Gln Gln Ala Lys Gln 20 25 <210> 7 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 7 Lys Ala Gln Lys Ala Gln Ala Lys Gln Ala Lys Gln Ala Gln Lys Ala 1 5 10 15 Gln Lys Ala Gln Ala Lys Gln Ala Lys Gln 20 25 <210> 8 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 8 Lys Thr Val Lys Thr Val Thr Lys Val Thr Lys Val Thr Val Lys Thr 1 5 10 15 Val Lys Thr Val Thr Lys Val Thr Lys Val 20 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Synthetic Construct <400> 13 Arg Ala Gln Arg Ala Gln Ala Arg Gln Ala Arg Gln Ala Gln Arg Ala 1 5 10 15 Gln Arg Ala Gln Ala Arg Gln Ala Arg Gln Ala Gln Arg Ala Gln Arg 20 25 30 Ala Gln Ala Arg Gln Ala Arg Gln 35 40 <210> 14 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 14 Val Ser Pro Ser Val 1 5 <210> 15 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 15 Val Ser Pro Ser Val Val Ser Pro Ser Val 1 5 10 <210> 16 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 16 Gly Gly Ser Gly Gly 1 5 <210> 17 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 17 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 18 <211> 227 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 1 5 10 15 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Lys 225 <210> 19 <211> 263 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 19 Ala Pro Gly Gly Gly Arg Ala Gln Arg Ala Gln Ala Arg Gln Ala Arg 1 5 10 15 Gln Ala Gln Arg Ala Gln Arg Ala Gln Ala Arg Gln Ala Arg Gln Val 20 25 30 Ser Pro Ser Val Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 35 40 45 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 50 55 60 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 65 70 75 80 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 85 90 95 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 100 105 110 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 115 120 125 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 130 135 140 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 145 150 155 160 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 165 170 175 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 180 185 190 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 195 200 205 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 210 215 220 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 225 230 235 240 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 245 250 255 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 260 <210> 20 <211> 266 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 20 Ala Pro Gly Gly Gly Ser Val Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 1 5 10 15 Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 20 25 30 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 35 40 45 Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 50 55 60 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 65 70 75 80 Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 85 90 95 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 100 105 110 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 115 120 125 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 130 135 140 Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 145 150 155 160 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 165 170 175 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 180 185 190 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 195 200 205 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 210 215 220 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val Ser Pro Ser Val 225 230 235 240 Arg Ala Gln Arg Ala Gln Ala Arg Gln Ala Arg Gln Ala Gln Arg Ala 245 250 255 Gln Arg Ala Gln Ala Arg Gln Ala Arg Gln 260 265 <210> 21 <211> 271 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 21 Ala Pro Gly Gly Gly Ser Val Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 1 5 10 15 Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 20 25 30 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 35 40 45 Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 50 55 60 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 65 70 75 80 Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 85 90 95 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 100 105 110 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 115 120 125 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 130 135 140 Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 145 150 155 160 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 165 170 175 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 180 185 190 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 195 200 205 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 210 215 220 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser 225 230 235 240 Gly Gly Gly Gly Ser Arg Ala Gln Arg Ala Gln Ala Arg Gln Ala Arg 245 250 255 Gln Ala Gln Arg Ala Gln Arg Ala Gln Ala Arg Gln Ala Arg Gln 260 265 270 <210> 22 <211> 280 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> 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195 200 205 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 210 215 220 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val Ser Pro Ser Val 225 230 235 240 Arg Ala Gln Arg Ala Gln Ala Arg Gln Ala Arg Gln Ala Gln Arg Ala 245 250 255 Gln Arg Ala Gln Ala Arg Gln Ala Arg Gln Ala Gln Arg Ala Gln Arg 260 265 270 Ala Gln Ala Arg Gln Ala Arg Gln 275 280

Claims (44)

  1. 제1 폴리펩타이드 및 제2 폴리펩타이드를 포함하는 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질로서, 상기 제1 폴리펩타이드는 제1 인간 Fc 도메인의 N-말단 또는 C-말단에 연결된 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 상기 제2 폴리펩타이드는 제2 인간 Fc 도메인의 N-말단 또는 C-말단에 연결된 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하며, 상기 제1 및 상기 제2 인간 Fc 도메인은 이량체를 형성하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  2. 제1항에 있어서, 상기 제1 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드가 상기 제1 및 제2 인간 Fc 도메인의 C-말단에 연결되는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 제1 및/또는 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드가 서열번호 1-13으로 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인이 인간 IgG1, IgG2, 또는 IgG4 Fc인, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인이 인간 IgG1 Fc인, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인이 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 및/또는 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드가 스페이서를 통해 상기 제1 및/또는 제2 인간 Fc 도메인에 연결되는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  8. 제7항에 있어서, 상기 스페이서가 펩타이드 스페이서인, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  9. 제8항에 있어서, 상기 스페이서가 서열번호 14-17 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드가 N-말단부터 C-말단으로, 제1 인간 Fc 도메인, 제1 스페이서, 및 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하고, 상기 제2 폴리펩타이드가 N-말단부터 C-말단으로 제2 인간 Fc 도메인, 제2 스페이서, 및 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드를 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  11. 제10항에 있어서, 상기 아밀로이드 반응성 펩타이드가 서열번호 2 또는 서열번호 13에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  12. 제10항에 있어서, 상기 아밀로이드 반응성 펩타이드가 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 스페이서가 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  13. 제10항에 있어서, 상기 아밀로이드 반응성 펩타이드가 서열번호 13에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 스페이서가 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  14. 제10항에 있어서, 상기 아밀로이드 반응성 펩타이드가 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 스페이서가 서열번호 17에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 융합 단백질.
  15. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    i) 상기 제1 폴리펩타이드 및/또는 제2 폴리펩타이드가 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하고;
    ii) 상기 제1 폴리펩타이드 및/또는 제2 폴리펩타이드가 서열번호 21에 제시된 아미노산 서열을 포함하며;
    iii) 상기 제1 폴리펩타이드 및/또는 제2 폴리펩타이드가 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  16. 제15항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드가 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 상기 제2 폴리펩타이드가 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  17. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드가 N-말단부터 C-말단으로, 제1 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제1 스페이서, 및 제1 인간 Fc 도메인을 포함하고, 상기 제2 폴리펩타이드가 N-말단부터 C-말단으로 제2 아밀로이드 반응성 펩타이드, 제2 스페이서, 및 제2 인간 Fc 도메인을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  18. 제16항에 있어서, 상기 아밀로이드 반응성 펩타이드가 서열번호 2 또는 서열번호 13에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  19. 제17항에 있어서, 상기 아밀로이드 반응성 펩타이드가 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 스페이서가 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  20. 제17항에 있어서, 상기 제1 및/또는 제2 폴리펩타이드가 서열번호 19에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 및 제2 폴리펩타이드가 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  22. 제1항 내지 제15항 및 제17항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 및 제2 폴리펩타이드가 상이한 아미노산 서열을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질이 rVλ6Wil, Aβ, Aβ(1-40), IAAP, ALκ, ALλ, 또는 ATTR 아밀로이드에 결합하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 융합 단백질이 검출가능한 표지에 접합되는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  25. 제23항에 있어서, 상기 검출가능한 표지가 형광 표지 및 방사성 표지로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
  26. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물.
  27. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 암호화하는 핵산(들).
  28. 제26항의 핵산(들)을 포함하는 벡터.
  29. 제28항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  30. 제29항에 있어서, 상기 숙주 세포가 포유동물 세포, 선택적으로 중국 햄스터 난소(CHO) 세포인, 숙주 세포.
  31. 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 암호화하는 벡터의 발현에 적합한 조건 하에 제29항 또는 제30항의 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 제조하는 방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 회수하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  33. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질의 치료 유효량을 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는 아밀로이드 질환을 치료하는 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 아밀로이드 관련 질환이 전신성 또는 국소성 아밀로이드증인, 방법.
  35. 제33항에 있어서, 상기 아밀로이드 관련 질환이 AL, AH, Aβ2M, ATTR, 트랜스티레틴, AA, AApoAI, AApoAII, AGel, ALys, ALEct2, AFib, ACys, ACal, AMed, AIAPP, APro, AIns, APrP, 파킨슨병, 알츠하이머병 또는 Aβ 아밀로이드증으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
  36. 제33항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 이용한 치료가 아밀로이드의 클리어런스를 초래하는, 방법.
  37. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질과 아밀로이드 침착물을 접촉시키는 것을 포함하는, 클리어런스를 위해 아밀로이드 침착물을 표적화하는 방법.
  38. 제37항에 있어서, 클리어런스를 위해 아밀로이드 침착물을 표적화하는 것이 아밀로이드 침착물의 클리어런스를 초래하는, 방법.
  39. 제37항 또는 제38항에 있어서, 클리어런스가 상기 아밀로이드 침착물의 옵소닌화로부터 초래되는, 방법.
  40. 아밀로이드계 질환을 갖고 있거나 아밀로이드계 질환을 가진 것으로 의심되는 개체를 치료하는 방법으로서,
    상기 개체가 아밀로이드 침착물을 갖고 있는지 여부를
    제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 검출 가능하게 표지화하는 단계,
    상기 표지된 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 상기 개체에게 투여하는 단계,
    상기 검출 가능한 표지와 연관된 신호가 상기 개체로부터 검출될 수 있는지 여부를 결정하는 단계; 및
    상기 신호가 검출되면, 상기 개체에게 아밀로이드증 치료를 시행하는 단계
    에 의해 결정하는 것을 포함하는 방법.
  41. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질을 검출 가능하게 표지화하는 단계, 상기 융합 단백질을 개체에게 투여하는 단계, 및 상기 융합 단백질로부터의 신호를 검출하는 단계를 포함하는, 개체에서 아밀로이드 침착물을 식별하는 방법.
  42. 제40항 또는 제41항에 있어서, 상기 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질이 검출가능하게 표지화되는, 방법.
  43. 제31항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체가 인간인, 방법.
  44. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩타이드 및 상기 제2 폴리펩타이드가 상기 Fc 도메인에서 이황화 결합에 의해 공유 연결되는, 아밀로이드 반응성 펩타이드-Fc 융합 단백질.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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EP3186273A4 (en) * 2014-08-26 2018-05-02 University of Tennessee Research Foundation Targeting immunotherapy for amyloidosis
AU2018212860A1 (en) * 2017-01-30 2019-08-15 National Research Council Of Canada Blood-brain barrier transmigrating compounds and uses thereof
MX2020007389A (es) * 2018-01-10 2020-10-14 Denali Therapeutics Inc Polipéptidos de unión al receptor de transferrina y usos de estos.
WO2021097360A1 (en) * 2019-11-15 2021-05-20 University Of Tennessee Research Foundation Modified immunoglobulins for targeting amyloid deposits

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