KR20240055016A - 면역억제성 b 세포와 연관된 암을 치료하는 방법 - Google Patents
면역억제성 b 세포와 연관된 암을 치료하는 방법 Download PDFInfo
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- C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
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Abstract
CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체를 개체에게 투여하여 CD19 양성, CD38 양성, CD20 음성 면역억제성 B 세포와 연관된 암 또는 종양을 치료하는 것을 포함하는, 개체에서 CD19 양성, CD38 양성, CD20 음성 면역억제성 B 세포와 연관된 암 또는 종양을 치료하는 방법이 본원에 기재되어 있다.
Description
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 그 전체 내용이 본 개시내용에 참고로 포함된, 2021년 8월 25일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 63/236,953을 기초로 한 우선권을 주장한다.
항체 치료제는 다양한 질병을 치료하는데 성공적으로 사용되어 왔다. 그러나, 암과 같은 복잡한 질병에 대한 임상적 효능과 관련하여 그 적용이 제한될 수 있다. 표적 결합 친화도 및 결합가를 변경하기 위한 항체 기반 치료제의 조작은 효능 증가 및 치료 결과 개선을 향한 잠재적인 경로를 제공한다. 따라서, 이중특이적 또는 다가 항체는 복잡한 질병의 다인성 특성과 관련된 문제를 해결하기 위한 잠재적인 접근 방식을 제공한다. 두 개의 서로 다른 항원 분자 또는 동일한 항원의 서로 다른 에피토프에 결합함으로써, 이중특이적 항체는 더 큰 기능성을 제공하고, 다양한 질병 치료를 위한 표적화제로서 다양한 응용 분야를 제공한다.
요약
암 생물학과 면역계 사이의 역동적인 관계는 임상 결과와 관련된 요소이다. 면역 반응은 암이 발생하는 동안 종양 미세환경을 조절하는 데 중요한 역할을 한다. 따라서, T 세포 및 B 세포와 같은 면역 세포는 암 진행 또는 전이의 조절자 및 효과자 역할을 한다. 특히, 면역억제성 세포는 항종양 면역 반응에서 중요한 역할을 하며, 여기서 면역억제는 일반적으로 종양 성장 및 침입과 연관되고, 부정적인 결과와 상관관계가 있다. B 세포는 면역 반응을 적극적으로 조절하는 것으로 알려져 있지만, 면역억제성 B 세포의 집단은 항종양 면역 반응을 억제하여 종양 성장을 촉진하는 기능을 한다.
면역억제성 B 세포와 연관된 특정 암을 치료하는 방법이 본원에 기술되어 있다. 본 방법에 따른 면역억제성 B 세포는 CD38 양성, CD19 양성, CD20 음성인 B 계통 세포, B 세포 또는 형질 세포이다. 이들 세포는 CD38의 높은 발현(CD38high)을 나타내고, CD20low 또는 CD20음성일 수 있다. 이들 방법은 CD19 및 CD38 둘 모두를 표적으로 하는 이중특이적 항체를 투여하는 것을 포함한다. 이러한 방법은 환자의 순환 림프구 또는 종양 침윤성 림프구 내의 CD38high B 세포 또는 형질 세포의 존재에 기초하여 이러한 투여를 위한 환자를 선택하는 것을 추가로 포함한다. 이러한 표적화는 종양 내에서 또는 주변에서 또는 말초에서 면역억제성 B 세포의 기능을 결실시키거나 억제할 수 있게 한다. 이들 B 세포 기능의 결실 및/또는 억제는 종양 환경으로부터 면역억제를 제거하고, 적응성 CD4 또는 CD8 T 세포 반응을 포함하지만 이에 국한되지 않는 종양에 대한 면역 반응을 증가시킨다.
이중특이적 또는 다가 표적화 분자로 면역억제성 B 세포 집단을 표적으로 하는 특정 결합 분자가 본원에서 제공된다. 면역 억제성 B 세포 집단을 표적으로 하는 것은 항종양 면역 반응을 효과적으로 조절하여 치료 결과를 개선하는(예를 들어, 상피 암 세포 집단의 선택적 고갈과 대조적으로) 암에 대한 치료 개입 경로를 제시한다. 본원에서 제공되는 결합 분자는 B 세포 계통 표면 마커(예를 들어, CD19, CD138, IgA 및/또는 CD20) 및 면역억제성 B 세포의 표면 마커(예를 들어, IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3 및/또는 잠복성 TGF-β(예를 들어, TGF-베타 LAP))에 결합하는 이중특이적 항체를 포함할 수 있다. 특정 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD19 및 CD38에 결합하여 특정 면역억제성 B 세포 집단에 대한 선택성을 보유한다.
특정 예에서, 이중특이적 또는 다가 표적화 분자는 종양 세포를 직접 표적화하는 것과 비교하여 면역억제성 B 세포 집단을 표적으로 하여(예를 들어, 이에 따라 면역억제를 감소시켜) 종양 제거를 촉진하거나 종양 성장을 억제한다. 이 경우, 종양 세포를 직접 표적으로 하지 않을 때, 항체에 의해 유발된 표적 세포의 세포 사멸 또는 세포 독성은 바람직하지 않으며, 더욱이 항체에 의해 유발된 표적 세포(예를 들어, 종양 세포가 아닌)의 세포 사멸 또는 세포 독성은 원치 않는 부작용(예를 들어, 림프구 감소증)을 초래할 수 있다.
특정 측면에서 CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체를 개체에게 투여하여 CD19 양성, CD38 양성, CD20 음성 면역억제성 B 세포와 연관된 암 또는 종양을 치료하는 것을 포함하는, 개체에서 CD19 양성, CD38 양성, CD20 음성 면역억제성 B 세포와 연관된 암 또는 종양을 치료하는 방법이 본원에 기재되어 있다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 야생형 Fc 영역에 비해 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 변이체 Fc 영역을 포함하며, 여기서 변이체 Fc 영역은 야생형 Fc 영역에 비해 감소된 효과기 기능을 나타낸다. 특정 실시양태에서, 감소된 이펙터 기능은 감소된 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC), 감소된 보체 매개 세포독성(CDC), C1q에 대한 감소된 친화도, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 IgG1 Fc 영역을 포함하고, 여기서 하나 이상의 돌연변이는 카바트(Kabat) 넘버링에 따른 (a) 297A, 297Q, 297G, 또는 297D, (b) 279F, 279K, 또는 279L, (c) 228P, (d) 235A, 235E, 235G, 235Q, 235R, 또는 235S, (e) 237A, 237E, 237K, 237N, 또는 237R, (f) 234A, 234V, 또는 234F, (g) 233P, (h) 328A, (i) 327Q 또는 327T, (j) 329A, 329G, 329Y, 또는 329R, (k) 331S, (l) 236F 또는 236R, (m) 238A, 238E, 238G, 238H, 238I, 238V, 238W, 또는 238Y, (n) 248A, (o) 254D, 254E, 254G, 254H, 254I, 254N, 254P, 254Q, 254T, 또는 254V, (p) 255N, (q) 256H, 256K, 256R, 또는 256V, (r) 264S, (s) 265H, 265K, 265S, 265Y, 또는 265A, (t) 267G, 267H, 267I, 또는 267K, (u) 268K, (v) 269N 또는 269Q, (w) 270A, 270G, 270M, 또는 270N, (x) 271T, (y) 272N, (z) 292E, 292F, 292G, 또는 292I, (aa) 293S, (bb) 301W, (cc) 304E, (dd) 311E, 311G, 또는 311S, (ee) 316F, (ff) 328V, (gg) 330R, (hh) 339E 또는 339L, (ii) 343I 또는 343V, (jj) 373A, 373G, 또는 373S, (kk) 376E, 376W, 또는 376Y, (ll) 380D, (mm) 382D 또는 382P, (nn) 385P, (oo) 424H, 424M, 또는 424V, (pp) 434I, (qq) 438G, (rr) 439E, 439H, 또는 439Q, (ss) 440A, 440D, 440E, 440F, 440M, 440T, 또는 440V, (tt) K322A, (uu) L235E, (vv) L234A 및 L235A, (ww) L234A, L235A, 및 G237A, (xx) L234A, L235A, 및 P329G, (yy) L234F, L235E, 및 P331S, (zz) L234A, L235E, 및 G237A, (aaa) L234A, L235E, G237A, 및 P331S, (bbb) L234A, L235A, G237A, P238S, H268A, A330S, 및 P331S, (ccc) L234A, L235A, 및 P329A, (ddd) G236R 및 L328R, (eee) G237A, (fff) F241A, (ggg) V264A, (hhh) D265A, (iii) D265A 및 N297A, (jjj) D265A 및 N297G, (kkk) D270A, (lll) A330L, (mmm) P331A 또는 P331S, 또는 (nnn) E233P, (ooo) L234A, L235E, G237A, A330S, 및 P331S 또는 (ppp) (a) - (uu)의 임의의 조합을 포함한다. 특정 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 표 1로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 야생형 Fc 영역에 대한 하나 이상의 돌연변이는 카바트 넘버링에서 의한 L234A, L235E, G237A, A33OS 및/또는 P331S를 포함한다. 특정 실시양태에서, 야생형 Fc 영역에 대한 하나 이상의 돌연변이는 카바트 넘버링에 의한 L234A, L235E, G237A, A330S 및 P331S를 포함한다. 특정 실시양태에서, 야생형 Fc 영역에 대한 하나 이상의 돌연변이는 카바트 넘버링에 의한 K322A를 포함한다. 특정 실시양태에서, 야생형 Fc 영역에 대한 하나 이상의 돌연변이는 카바트 넘버링에 의한 K322A로 구성된다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 a) 서열 번호(SEQ ID NO:) 71-75 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1); b) 서열 번호 81-85, 또는 151-155 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2); c) 서열 번호 91-95 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3); d) 서열 번호 101-105 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1); e) 서열 번호 111-115 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및 f) 서열 번호 121-125 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)을 포함하는 CD38 항원 결합 성분; 및 g) 서열 번호 11-15 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1); h) 서열 번호 21-25 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2); i) 서열 번호 31-35 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3); j) 서열 번호 101-105 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1); k) 서열 번호 111-115 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및 l) 서열 번호 121-125 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)을 포함하는 CD19 항원 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD38 항원 결합 성분은 서열 번호 151-155에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD38 항원 결합 성분은 서열 번호 154에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 81-85에 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함하는 CD38 항원 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 3 또는 5에 대해 적어도 약 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 4에 대해 적어도 약 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 3 또는 5와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 4와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 1, 6 또는 7에 대해 적어도 약 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 2에 대해 적어도 약 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 1, 6 또는 7과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 2와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역은, 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 동종이량체화를 선호하지 않고 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 비-항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화를 촉진하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 비-항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화가 항-CD38 면역글로불린 중쇄의 동종이량체화에 비해 선호되도록, T366W 치환(EU 넘버링) 또는 T366S/L368A/Y407V 치환(EU 넘버링)을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역은, 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 동종이량체화를 선호하지 않고 제2 중쇄 불변 영역과 비-항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화를 촉진하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역은 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 비-항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화가 항-CD19 면역글로불린 중쇄의 동종이량체화에 비해 선호되도록, T366W 치환(EU 넘버링) 또는 T366S/L368A/Y407V 치환(EU 넘버링)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 면역글로불린 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 301 또는 304에 제시된 중쇄 면역글로불린 서열 및 서열 번호 213에 제시된 경쇄 면역글로불린 서열을 포함하는 CD19 항원 결합 성분, 및 서열 번호 302, 303, 305-310에 제시된 중쇄 면역글로불린 서열 및 서열 번호 213에 제시된 경쇄 면역글로불린 서열을 포함하는 CD38 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 카바트 넘버링에 따른 A84S 또는 A108L 치환을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 카바트 넘버링에 따른 W32H 치환을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 단일 이중특이적 결합 분자는 CD38 항원 결합 성분 및 CD19 항원 결합 성분으로부터 형성된다. 특정 실시양태에서, 복합 결합 분자는 일반적인 경쇄 이중특이적 항체이다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 약제학상 허용되는 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 제제에 포함된다. 특정 실시양태에서, 암 또는 종양은 고형 조직 암이다. 특정 실시양태에서, 고형 조직 암은 유방암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 신장암, 위암, 식도암, 피부암, 결장직장암, 또는 두경부암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 유방암은 삼중 음성 유방암이고, 폐암은 비소세포 폐암이고, 두경부암은 두경부 편평 세포암이고, 신장암은 신세포 암종이고, 뇌암은 다형성 교모세포종이고, 피부암은 흑색종이다. 특정 실시양태에서, CD19 양성, CD38 양성, CD20 음성 면역억제성 B 세포와 연관된 암 또는 종양은 CD19 양성, CD38 양성, CD20 음성 B 세포 침윤을 포함하는 암 또는 종양이다. 특정 실시양태에서, CD19 양성, CD38 양성, CD20 음성 면역억제성 B 세포는 B 세포 활성화 마커를 발현한다. 특정 실시양태에서, B 세포 활성화 마커는 CD30을 포함한다.
종양 또는 암에 걸린 개체를 치료하는 방법이 본원에 기술되어 있으며, 이 방법은 개체의 생물학적 샘플의 B 세포에 대해 CD38high 표현형에 대한 검정을 수행하는 단계; 및 개체의 생물학적 샘플의 B 세포에 대한 검정 결과에 기초하여 종양 또는 암에 걸린 개체에게 CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, 개체의 생물학적 샘플의 B 세포에 대한 검정 결과는 CD38high 표현형을 나타낸다. 특정 실시양태에서, 개체의 생물학적 샘플은 말초 혈액 샘플이다. 특정 실시양태에서, 개체의 생물학적 샘플은 종양 생검이다. 특정 실시양태에서, 개체의 B 세포에 대한 검정은 생물학적 샘플을 항-CD38 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 검정은 유세포 분석을 포함한다. 특정 실시양태에서, 검정은 면역조직화학을 포함한다. 특정 실시양태에서, 개체의 약 2% 초과의 B 세포가 CD38high 표현형을 나타내는 경우, 종양 또는 암에 걸린 개체에게 CD38 및 CD19에 결합하는 이중특이적 항체가 투여된다. 특정 실시양태에서, B 세포가 약 30,000개 초과의 세포 표면 CD38 분자를 발현하는 경우, 개체의 생물학적 샘플의 B 세포는 CD38high 표현형을 나타낸다. 특정 실시양태에서, B 세포가 약 35,000개 초과의 세포 표면 CD38 분자를 발현하는 경우, 개체의 생물학적 샘플의 B 세포는 CD38high 표현형을 나타낸다. 특정 실시양태에서, B 세포가 약 40,000개 초과의 세포 표면 CD38 분자를 발현하는 경우, 개체의 생물학적 샘플의 B 세포는 CD38high 표현형을 나타낸다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 a) 서열 번호 71-75 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1); b) 서열 번호 81-85, 또는 151-155 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2); c) 서열 번호 91-95 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3); d) 서열 번호 101-105 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1); e) 서열 번호 111-115 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및 f) 서열 번호 121-125 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)을 포함하는 CD38 항원 결합 성분; 및 g) 서열 번호 11-15 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1); h) 서열 번호 21-25 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2); i) 서열 번호 31-35 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3); j) 서열 번호 101-105 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1); k) 서열 번호 111-115 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및 l) 서열 번호 121-125 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)을 포함하는 CD19 항원 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD38 항원 결합 성분은 서열 번호 151-155에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD38 항원 결합 성분은 서열 번호 154에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 81-85에 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함하는 CD38 항원 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 3 또는 5에 대해 적어도 약 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 4에 대해 적어도 약 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 3 또는 5와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 4와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 1 또는 6에 대해 적어도 약 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 4에 대해 적어도 약 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 1 또는 6과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 4와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역은, 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 동종이량체화를 선호하지 않고 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 비-항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화를 촉진하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 비-항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화가 항-CD38 면역글로불린 중쇄의 동종이량체화에 비해 선호되도록, T366W 치환(EU 넘버링) 또는 T366S/L368A/Y407V 치환(EU 넘버링)을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역은, 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 동종이량체화를 선호하지 않고 제2 중쇄 불변 영역과 비-항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화를 촉진하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역은 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 비-항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화가 항-CD19 면역글로불린 중쇄의 동종이량체화에 비해 선호되도록, T366W 치환(EU 넘버링) 또는 T366S/L368A/Y407V 치환(EU 넘버링)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 면역글로불린 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 301 또는 304에 제시된 중쇄 면역글로불린 서열 및 서열 번호 213에 제시된 경쇄 면역글로불린 서열을 포함하는 CD19 항원 결합 성분, 및 서열 번호 302, 303, 305-310에 제시된 중쇄 면역글로불린 서열 및 서열 번호 213에 제시된 경쇄 면역글로불린 서열을 포함하는 CD38 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 카바트 넘버링에 따른 A84S 또는 A108L 치환을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 카바트 넘버링에 따른 W32H 치환을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 단일 이중특이적 결합 분자는 CD38 항원 결합 성분 및 CD19 항원 결합 성분으로부터 형성된다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 결합 분자는 일반적인 경쇄 이중특이적 항체이다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 약제학상 허용되는 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 제제에 포함된다.
또한, 종양 또는 암에 걸린 개체를 치료하는 방법이 본원에 기술되어 있으며, 이 방법은 개체의 생물학적 샘플의 B 세포에 대한 검정 결과에 기초하여 종양 또는 암에 걸린 개체에게 CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, 개체의 생물학적 샘플의 B 세포에 대한 검정 결과는 CD38high 표현형을 나타낸다. 특정 실시양태에서, 개체의 생물학적 샘플은 말초 혈액 샘플이다. 특정 실시양태에서, 개체의 생물학적 샘플은 종양 생검이다. 특정 실시양태에서, 개체의 B 세포에 대한 검정은 생물학적 샘플을 항-CD38 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 검정은 유세포 분석을 포함한다. 특정 실시양태에서, 검정은 면역조직화학을 포함한다. 특정 실시양태에서, 개체의 약 2% 초과의 B 세포가 CD38high 표현형을 나타내는 경우, 종양 또는 암에 걸린 개체에게 CD38 및 CD19에 결합하는 이중특이적 항체가 투여된다. 특정 실시양태에서, B 세포가 약 30,000개 초과의 세포 표면 CD38 분자를 발현하는 경우, 개체의 생물학적 샘플의 B 세포는 CD38high 표현형을 나타낸다. 특정 실시양태에서, B 세포가 약 35,000개 초과의 세포 표면 CD38 분자를 발현하는 경우, 개체의 생물학적 샘플의 B 세포는 CD38high 표현형을 나타낸다. 특정 실시양태에서, B 세포가 약 40,000개 초과의 세포 표면 CD38 분자를 발현하는 경우, 개체의 생물학적 샘플의 B 세포는 CD38high 표현형을 나타낸다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 a) 서열 번호 71-75 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1); b) 서열 번호 81-85, 또는 151-155 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2); c) 서열 번호 91-95 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3); d) 서열 번호 101-105 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1); e) 서열 번호 111-115 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및 f) 서열 번호 121-125 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)을 포함하는 CD38 항원 결합 성분; 및 g) 서열 번호 11-15 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1); h) 서열 번호 21-25 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2); i) 서열 번호 31-35 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3); j) 서열 번호 101-105 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1); k) 서열 번호 111-115 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및 l) 서열 번호 121-125 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)을 포함하는 CD19 항원 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD38 항원 결합 성분은 서열 번호 151-155에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD38 항원 결합 성분은 서열 번호 154에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 81-85에 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함하는 CD38 항원 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 3 또는 5에 대해 적어도 약 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 4에 대해 적어도 약 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 3 또는 5와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 4와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 1 또는 6에 대해 적어도 약 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 4에 대해 적어도 약 90% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 1 또는 6과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 4와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역은, 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 동종이량체화를 선호하지 않고 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 비-항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화를 촉진하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 비-항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화가 항-CD38 면역글로불린 중쇄의 동종이량체화에 비해 선호되도록, T366W 치환(EU 넘버링) 또는 T366S/L368A/Y407V 치환(EU 넘버링)을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역은, 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 동종이량체화를 선호하지 않고 제2 중쇄 불변 영역과 비-항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화를 촉진하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역은 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 비-항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화가 항-CD19 면역글로불린 중쇄의 동종이량체화에 비해 선호되도록, T366W 치환(EU 넘버링) 또는 T366S/L368A/Y407V 치환(EU 넘버링)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역은 면역글로불린 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 서열 번호 301 또는 304에 제시된 중쇄 면역글로불린 서열 및 서열 번호 213에 제시된 경쇄 면역글로불린 서열을 포함하는 CD19 항원 결합 성분, 및 서열 번호 302, 303, 305-310에 제시된 중쇄 면역글로불린 서열 및 서열 번호 213에 제시된 경쇄 면역글로불린 서열을 포함하는 CD38 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 카바트 넘버링에 따른 A84S 또는 A108L 치환을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 카바트 넘버링에 따른 W32H 치환을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 단일 이중특이적 결합 분자는 CD38 항원 결합 성분 및 CD19 항원 결합 성분으로부터 형성된다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 일반적인 경쇄 이중특이적 항체이다. 특정 실시양태에서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체는 약제학상 허용되는 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 제제에 포함된다.
참조에 의한 통합
본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 마치 각각의 개별 간행물, 특허 또는 특허 출원이 참조로 포함된다고 구체적이고 개별적으로 표시된 것과 동일한 정도로 본 개시내용에 참조로 포함된다.
본 발명의 신규한 특징은 첨부된 청구범위에서 구체적으로 설명된다. 본 발명의 특징과 이점에 대한 더 나은 이해는 본 발명의 원리가 활용되는 예시적인 실시양태를 설명하는 다음의 상세한 설명 및 첨부 도면을 참조하여 얻어질 것이다.
도 1은 일반적인 경쇄 이중특이적 IgG의 구조를 도시한 것이다.
도 2는 Fab-Fc:scFv-Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 3은 Fab-Fc-Fab:Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 4는 Fab-Fc-scFv:Fab-Fc-scFv 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 5는 Fab-Fc-scFv:Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 6은 Fab-Fc-Fab:Fab-Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 7은 scFv-Fab-Fc:scFv-Fab-Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 8은 Fab-Fab-Fc:Fab-Fab-Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 9는 Fab-Fc-Fab:Fab-Fc-Fab 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 10은 Fab-Fc-scFv:Fab-Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 11은 scFv-Fab-Fc:Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 12a 내지 12b는 다우디(다우디) 세포에 대한 항체의 결합 데이터를 보여준다.
도 13a 내지 13b는 REH 세포에 대한 항체의 결합 데이터를 보여준다.
도 14a 내지 14b는 CD19 형질감염된 HEK293 세포에 대한 항체의 결합 데이터를 보여준다.
도 15a 내지 15b는 CD38 형질감염된 HEK293 세포에 대한 항체의 결합 데이터를 보여준다.
도 16a 내지 16b는 형질감염되지 않은 CHO 세포에 대한 항체의 결합 데이터를 보여준다.
도 17a 내지 17b는 항체 시험품의 다우디 세포에 대한 직접적인 아폽토시스 데이터를 보여준다.
도 18a 내지 18b는 항체 시험품의 다우디 세포에 대한 가교결합 유도된 아폽토시스 데이터를 나타낸다.
도 19a 내지 19c는 항체 시험품에 걸친 3명의 공여자에 대한 ADCC 데이터를 보여준다.
도 20a 내지 20c는 항체 시험품에 걸친 3명의 공여자에 대한 ADCC 데이터를 보여준다.
도 21a 내지 21b는 시험품에 걸친 CDC 프로파일을 보여준다.
도 22는 항체 시험품에 걸친 ADCP 데이터를 보여준다.
도 23은 항체 시험품에 걸친 RBC 결합 데이터를 보여준다.
도 24a 내지 24b는 항체 시험품에 대한 혈구응집 프로파일을 보여준다.
도 25는 항체 시험품에 걸친 용혈 데이터를 보여준다.
도 26a 내지 26g는 변이체가 있는 시험품을 포함하는 항체 시험품에 걸친 3명의 공여자에 대한 ADCC 데이터를 보여준다.
도 27a는 건강한 공여자 및 비소세포 폐암 환자의 말초 혈액 내의 CD20-, CD19+, CD38+ 세포 구획의 유세포 분석을 보여준다.
도 27b는 종양에서 유래한 HCC를 제외하고 특정 종양 유형을 갖는 환자의 말초 혈액 내의 CD20-, CD19+, CD38+ 세포 구획의 유세포 분석을 보여준다.
도 28은 다양한 유형의 암 환자의 종양 및 말초 혈액으로부터의 CD20- 세포에 대한 CD19 및 CD38의 수용체 밀도를 보여준다.
도 29는 CD20-, CD19+, CD38+ 환자에서 CD38 수용체 수준에 대한 말초 혈액과 종양 사이의 양의 상관관계를 보여준다.
도 30은 암 환자의 종양 및 말초 혈액 내의 CD19 및 CD38+ 세포가 면역억제성 사이토카인 IL-10을 분비한다는 것을 보여준다.
도 1은 일반적인 경쇄 이중특이적 IgG의 구조를 도시한 것이다.
도 2는 Fab-Fc:scFv-Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 3은 Fab-Fc-Fab:Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 4는 Fab-Fc-scFv:Fab-Fc-scFv 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 5는 Fab-Fc-scFv:Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 6은 Fab-Fc-Fab:Fab-Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 7은 scFv-Fab-Fc:scFv-Fab-Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 8은 Fab-Fab-Fc:Fab-Fab-Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 9는 Fab-Fc-Fab:Fab-Fc-Fab 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 10은 Fab-Fc-scFv:Fab-Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 11은 scFv-Fab-Fc:Fc 이중특이적 IgG의 구조를 예시한 것이다.
도 12a 내지 12b는 다우디(다우디) 세포에 대한 항체의 결합 데이터를 보여준다.
도 13a 내지 13b는 REH 세포에 대한 항체의 결합 데이터를 보여준다.
도 14a 내지 14b는 CD19 형질감염된 HEK293 세포에 대한 항체의 결합 데이터를 보여준다.
도 15a 내지 15b는 CD38 형질감염된 HEK293 세포에 대한 항체의 결합 데이터를 보여준다.
도 16a 내지 16b는 형질감염되지 않은 CHO 세포에 대한 항체의 결합 데이터를 보여준다.
도 17a 내지 17b는 항체 시험품의 다우디 세포에 대한 직접적인 아폽토시스 데이터를 보여준다.
도 18a 내지 18b는 항체 시험품의 다우디 세포에 대한 가교결합 유도된 아폽토시스 데이터를 나타낸다.
도 19a 내지 19c는 항체 시험품에 걸친 3명의 공여자에 대한 ADCC 데이터를 보여준다.
도 20a 내지 20c는 항체 시험품에 걸친 3명의 공여자에 대한 ADCC 데이터를 보여준다.
도 21a 내지 21b는 시험품에 걸친 CDC 프로파일을 보여준다.
도 22는 항체 시험품에 걸친 ADCP 데이터를 보여준다.
도 23은 항체 시험품에 걸친 RBC 결합 데이터를 보여준다.
도 24a 내지 24b는 항체 시험품에 대한 혈구응집 프로파일을 보여준다.
도 25는 항체 시험품에 걸친 용혈 데이터를 보여준다.
도 26a 내지 26g는 변이체가 있는 시험품을 포함하는 항체 시험품에 걸친 3명의 공여자에 대한 ADCC 데이터를 보여준다.
도 27a는 건강한 공여자 및 비소세포 폐암 환자의 말초 혈액 내의 CD20-, CD19+, CD38+ 세포 구획의 유세포 분석을 보여준다.
도 27b는 종양에서 유래한 HCC를 제외하고 특정 종양 유형을 갖는 환자의 말초 혈액 내의 CD20-, CD19+, CD38+ 세포 구획의 유세포 분석을 보여준다.
도 28은 다양한 유형의 암 환자의 종양 및 말초 혈액으로부터의 CD20- 세포에 대한 CD19 및 CD38의 수용체 밀도를 보여준다.
도 29는 CD20-, CD19+, CD38+ 환자에서 CD38 수용체 수준에 대한 말초 혈액과 종양 사이의 양의 상관관계를 보여준다.
도 30은 암 환자의 종양 및 말초 혈액 내의 CD19 및 CD38+ 세포가 면역억제성 사이토카인 IL-10을 분비한다는 것을 보여준다.
상세한 설명
항종양 면역 반응을 억제하는 면역억제성 B 세포 집단(즉, 조절 B 세포 또는Breg)은 일반적으로 하나 이상의 세포 표면 바이오마커의 존재로 정의될 수 있다. 따라서, 면역억제성 B 세포를 효과적이고 특이적으로 표적화하는 치료제는 종양 내에서, 종양에 인접하여 또는 종양 주변에서 또는 종양 환경 내에서 면역억제를 예방 및/또는 면역억제를 제거하는 데 사용될 수 있다. 면역억제성 B 세포를 표적화하는 복합 결합 분자가 본원에서 제공된다. 또한, 제1 표적에 결합하도록 구성된 제1 결합 성분 및 제2 표적에 결합하도록 구성된 제2 결합 성분을 포함하는 복합 결합 분자가 제공되며, 여기서 제1 표적은 B 세포 계통 표면 마커를 포함하고, 제2 표적은 억제성 B 세포 표면 마커를 포함한다. 항종양 반응의 음성 조절 또는 면역억제와 연관된 B 세포 집단에 특이적으로 결합하는 다가 항체가 본원에서 개시된다. 면역억제성 B 세포는 세포 표면 바이오마커 CD19 및 CD38을 포함하거나 이에 의해 정의될 수 있다. 본원에서 제공되는 이중특이적 항체는 CD19 및 CD38 둘 모두를 표적으로 하여 면역 억제성 B 세포의 기능을 억제할 수 있다. 특정 예에서, 면역억제성 B 세포의 기능은 IL10, IL35, TGF-베타 또는 이들의 조합의 방출 또는 발현을 포함한다. CD19 및 CD38을 표적으로 하는 다가 또는 이중특이적 항체는 또한 면역억제성 B 세포 및/또는 면역 기능 장애와 연관된 종양 형성성(tumorigenic) 질환 및/또는 암을 치료하는 데 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 특정 세포 집단과 관련하여 용어 "면역억제(immunosuppression)" 또는 "면역저하(immunodepression)" 또는 "음성 면역 조절" 또는 "조절성"은 면역계 기능의 감소 또는 억제를 담당하는 과정 또는 세포를 의미한다. 면역억제는 일반적으로 세포 면역, 항체 기반 면역 또는 선천 면역 기능과 같은 기능 중 하나와 관련하여 면역계 기능이 감소되거나 부재하는 상태를 나타낸다. 특정 예에서, 면역억제는 일반적으로 종양에 대한 면역계 기능 또는 종양 미세환경 내부의, 주변의 또는 인접 환경의 면역계 기능이 감소하거나 부재하는 상태를 의미한다. 전체 면역 반응이 저하될 수 있고, 국소 또는 특정 부위 내의 면역 반응이 감소할 수 있거나, 면역학적으로 활성인 림프구의 특정 집단이 선택적으로 영향을 받을 수 있다. 항원 특이적 면역억제는 특정 항원 특이적 세포 집단의 결실 또는 억제의 결과일 수도 있거나, 항원 특이적 억제 세포에 의한 면역 반응의 강화된 조절의 결과일 수도 있다. 면역억제성 B 세포에 대한 언급은 면역 반응에 대한 부정적인 조절을 발휘하고 CD38과 같은 이러한 집단과 관련된 특정 표면 마커에 의해 확인될 수 있는 B 세포 또는 B 세포 집단을 의미한다. 특정 예에서, 면역억제는 IL-10, IL-35, TGF-베타 또는 이들의 조합의 존재 또는 방출에 의해 확인될 수 있다. 특정 예에서, 면역억제는 B 세포에 의한 IL-10, IL-35, TGF-베타 또는 이들의 조합의 존재 또는 방출에 의해 확인될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "암"은 전형적으로 조절되지 않은 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물의 생리학적 상태를 지칭하거나 설명할 수 있다. 또한, 암은 고형 종양을 포함할 수 있다. 암은 방광, 혈액, 뼈, 뇌, 유방, 자궁경부, 흉부, 결장, 자궁내막, 식도, 눈, 머리, 신장, 간, 폐, 림프절, 입, 목, 난소, 췌장, 전립선, 직장, 신장, 피부, 위, 고환, 인후 및 자궁을 포함하지만 이에 국한되지 않는 혈액, 뼈, 장기, 피부 조직 및 혈관계의 질병을 의미할 수 있다. 특정 암에는 위장 종양(예를 들어, 위장관 기질 종양(GIST)), 여포성 림프종, 외투세포 림프종/백혈병, 미만성 B 세포 림프종, 종격동(흉선) 거대 B 세포 림프종, 혈관내 거대 B 세포 림프종, 원발성 삼출성 림프종, 및 버킷(Burkitt)의 림프종(버킷 림프종), 성숙 T 세포 및 자연 살해 세포(NK) 종양(전림프구성 백혈병, T 세포 거대림프구성 백혈병, 침습성 NK세포 백혈병, 성인 T 세포 백혈병/림프종, 림프절외 NK/T 세포 림프종, 장병성 T 세포 림프종, 간비장 T 세포 림프종, 모세포 NK 세포 림프종, 균상 식육종(세자리(Sezary) 증후군), 원발성 피부 퇴행성 대세포 림프종, 림프종성 구진증, 혈관면역모구성 T 세포 림프종, 상세불명의 말초 T 세포 림프종 및 변성 대세포 림프종, 호지킨(Hodgkin) 림프종(결절성 경화증, 혼합 세포형, 림프구 풍부형, 림프구 고갈형 또는 비감소형, 결절형 림프구형), 골수종(다발성 골수종, 불활성 골수종, 무증상 골수종), 만성 골수증식성 질환, 골수이형성증/골수증식성 질환, 골수이형성증후군, 면역결핍과 관련된 림프구 증식성 질환, 조직구 및 수지상 세포 종양, 세포증가증, 연골육종, 유잉(Ewing) 육종, 섬유육종, 악성 거대세포 종양, 골수종 골 질환, 골육종, 유방암(호르몬 의존성, 비호르몬 의존성), 부인과 암(소아 자궁경부, 자궁내막, 나팔관, 임신 융모성 질환, 난소, 복막, 자궁, 질 및 외음부), 기저 세포 암종(BCC), 편평 세포 암종(SCC), 악성 흑색종, 돌기성 피부 섬유육종, 메르켈(Merkel) 세포 암종, 카포시(Kaposi) 육종, 성상세포종, 유모 세포 성상세포종, 배아 모발 성장 신경상피 신생물, 희소돌기아교세포종, 뇌실막종, 다형성 교모세포종, 혼합 신경아교종, 희소돌기아교세포 성상세포종, 수모세포종, 망막모세포종, 신경모세포종, 배아 조직 종양, 기형종, 악성 중피종(복막 중피종, 심막 중피종, 흉막 중피종), 위-장-췌장 또는 위장 췌장 신경내분비 종양(GEP-NET), 카르시노이드(carcinoid) 종양, 췌장 내분비 종양(PET), 결장직장 선암종, 매듭(knot) 직장암, 침윤성 신경내분비 종양, 평활근육종, 점액성 선암종, 반지 세포 선암종, 간세포 암종, 간담도 간암, 간 모세포종, 혈관종, 간 선종, 국소 결절성 증식증(결절성 재생 증식증, 과오종), 비소세포 폐암(NSCLC)(편평세포폐암, 선암종, 대세포 폐암), 소세포 폐암, 갑상선암, 전립선암(호르몬 불응성, 비안드로겐 의존성 성별, 안드로겐 의존성, 호르몬 비감수성), 신세포 암종 및 연조직 육종(섬유육종, 악성 섬유성 조직구종, 피부 섬유육종, 지방육종, 횡문근육종, 평활근육종, 혈관육종, 활막육종, 악성 말초신경초 종양/신경섬유육종, 골외 골육종)이 포함되지만, 이에 국한되지는 않다.
용어 "CD19" 또는 "분화 클러스터 19"(B4, T 세포 표면 항원 Leu-12 및 CVID3으로도 알려짐)는 인간에서 CD19 유전자에 의해 코딩되는 B 세포 계통 표면 바이오마커 또는 막횡단 단백질을 의미한다. CD19는 하류 신호전달 경로의 활성화 및 항원에 대한 B 세포 반응의 유발에 대한 역치를 감소시키는, B 림프구의 B 세포 항원 수용체 복합체(BCR)에 대한 보조수용체로서 기능할 수 있다. 구조적으로, CD19 아미노산 서열은 적어도 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500개 아미노산의 서열 길이에 걸쳐 또는 폴리펩타이드의 전체 길이에 걸쳐, 예를 들어 GenBank 수탁 번호 NM_001178098.2→NP_001171569.1 또는 NM_001770.6→NP_001761.3의 아미노산 서열과 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는다. 구조적으로, CD19 핵산 서열은 적어도 300, 500, 750, 1000, 1250, 1500개 핵산의 서열 길이에 걸쳐 또는 폴리뉴클레오타이드의 전체 길이에 걸쳐, 예를 들어 GenBank 수탁 번호 NG_007275.1 또는 NCBI 유전자 ID 930의 핵산 서열과 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는다. 서열 정렬은 관련 기술 분야에 공지된 임의의 정렬 알고리즘, 예를 들어 기본 설정으로 설정된 BLAST, ALIGN을 사용하여 수행될 수 있다.
용어 "CD38" 또는 "분화 클러스터 38"(ADPRC1로도 알려짐)은 인간에서 유전자 CD38에 의해 코딩되는 B 세포 표면 바이오마커 또는 막횡단 단백질을 의미한다. CD38은 세포 활성화 및 증식을 유도하는 B 세포 신호전달에서 기능할 수 있다. 구조적으로, CD38 아미노산 서열은 적어도 50, 100, 150, 200, 250개 아미노산의 서열 길이에 걸쳐 또는 폴리펩타이드의 전체 길이에 걸쳐, 예를 들어 GenBank 수탁 번호 NM_001775.4→NP_001766.2의 아미노산 서열과 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는다. 일부 세포에서 낮은 수준으로 발현될 수 있는 조기 정지 코돈을 갖는 CD38의 제2 이소형이 있다. 구조적으로, CD19 핵산 서열은 적어도 300, 500, 750개 핵산의 서열 길이에 걸쳐 또는 폴리뉴클레오타이드의 전체 길이에 걸쳐, 예를 들어 GenBank 수탁 번호 NC_000004.12 또는 NCBI 유전자 ID 952의 핵산 서열과 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는다. 서열 정렬은 관련 기술 분야에 공지된 임의의 정렬 알고리즘, 예를 들어 기본 설정으로 설정된 BLAST, ALIGN을 사용하여 수행될 수 있다.
용어 "CD20" 또는 "분화 클러스터 20"(B-림프구 표면 항원 B1로도 알려짐)은 인간에서 유전자 CD20에 의해 코딩되는 B 세포 계통 표면 바이오마커 또는 막횡단 단백질을 의미한다. 구조적으로, CD20 아미노산 서열은 적어도 50, 100, 150, 200, 250개 아미노산의 서열 길이에 걸쳐 또는 폴리펩타이드의 전체 길이에 걸쳐, 예를 들어 Uniprot 엔트리 P11836의 아미노산 서열과 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "생물학적 샘플"은 하나 이상의 생물학적 거대분자(예를 들어, 폴리펩타이드, 핵산 또는 세포)를 포함하는 임의의 샘플을 의미한다. 생물학적 샘플은 개체로부터 유래될 수 있으며, 질병이 있는 조직(또는 질병이 의심되는 조직)의 생검 샘플, 혈액, 혈청 또는 혈장 샘플, 대변 샘플, 타액 샘플, 소변 샘플, 세척 샘플, 협측 또는 비인두 면봉 채취 샘플 등을 포함하지만, 이에 국한되지 않는다. 생물학적 샘플은 냉장, 냉동, 고정, 여과, 효소 처리, 원심분리, 세척, 추출(예를 들어, 세포, 폴리펩타이드 또는 핵산의)을 포함하지만 이에 국한되지 않는 추가의 처리를 거칠 수 있으며, 여전히 생물학적 샘플로 간주된다.
본원에서 설명되는 바와 같이, "검정"은 생물학적 거대분자(예를 들어, 폴리펩타이드, 핵산, 세포, 조직 등)의 정량적, 정성적 또는 비교용 양을 포함하는 특정 생물학적 거대분자의 존재 또는 부재를 결정하는 데 사용되는 모든 방법 또는 절차를 의미한다.
항체 및 이중특이적 항체와 같은 결합 분자와 관련하여 본원에서 설명되는 바와 같이, "결합"은 표적 항원과 상보성 결정 영역의 가변 영역의 하나 이상의 아미노산 잔기의 특이적 상호작용을 의미한다. 이러한 특이적 결합은 일반적으로 약 1 x 10-6 M 미만의 해리 상수를 초래할 것이며, 이러한 친화도는 표면 플라스몬 공명과 같은 관련 기술 분야에 공지된 기술을 사용하여 숙련된 기술자에 의해 결정될 수 있다.
본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 온전한 항체, 및 단편 항원 결합(Fab) 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, Fv 단편, 재조합 IgG(rIgG) 단편, 단일쇄 가변 단편(sFv 또는 scFv)을 포함하는 단일쇄 항체 단편, 및 단일 도메인 항체(예를 들어, sdAb, sdFv, 나노바디) 단편을 포함하는 그의 기능적(항원 결합) 항체 단편을 포함하는 다가 또는 이중특이적 항체 및 모노클로날 항체를 포함한다. 이 용어는 인트라바디, 펩티바디, 키메라 항체, 완전 인간 항체, 인간화 항체 및 이종접합 항체, 다중특이적, 예를 들어 이중특이적 항체, 디아바디, 트리아바디 및 테트라바디, 직렬 디-scFv, 직렬 트리-scFv와 같은 유전자 조작 및/또는 달리 변형된 형태의 면역글로불린을 포함한다. 달리 명시되지 않는 한, 용어 "항체"는 이의 기능성 항체 단편을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 이 용어는 또한 IgG 및 이의 하위 클래스인 IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 클래스 또는 하위 클래스의 항체를 포함하는 온전한 또는 전장 항체를 포함한다. 항체는 인간 IgG1 불변 영역을 포함할 수 있다. 항체는 인간 IgG4 불변 영역을 포함할 수 있다.
제공된 항체 중에는 다중특이적 또는 다가 항체(예를 들어, 이중특이적 항체 및 다중반응성 항체) 및 이의 항체 단편이 있다. 항체에는 항체-접합체 및 항체를 포함하는 분자(예를 들어, 키메라 분자)가 포함된다. 따라서, 항체에는 전장 및 천연 항체뿐만 아니라, 결합 특이성을 유지하는 단편 및 부분, 예를 들어 임의의 수의 면역글로불린 클래스 및/또는 이소형(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA, IgD, IgE 및 IgM)을 갖는 것을 포함하는 이의 임의의 특이적 결합 부분; 및 Fab, F(ab')2, Fv 및 scFv(단일쇄 또는 관련 엔티티)를 포함하지만 이에 국한되지 않는 생물학적으로 관련된(항원 결합) 단편 또는 이의 특이적 결합 부분을 포함한다. 모노클로날 항체는 일반적으로 실질적으로 균질한 항체의 조성물 내에 있는 항체이다. 따라서, 모노클로날 항체 조성물 내에 포함된 임의의 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 인간 IgG1 불변 영역 또는 인간 IgG4 불변 영역을 포함할 수 있다.
"초가변 영역" 또는 "HVR"과 동의어인 용어 "상보성 결정 영역" 및 "CDR"은 관련 기술 분야에 공지되어 있으며, 항원 특이성 및/또는 결합 친화도를 부여하는 항체 가변 영역 내의 아미노산의 비연속 서열을 의미한다. 일반적으로, 각각의 중쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)이 있고, 각각의 경쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3)이 있다. "프레임워크 영역" 및 "FR"은 중쇄 및 경쇄의 가변 영역의 비-CDR 부분을 지칭하는 것으로 관련 기술 분야에 알려져 있다. 일반적으로, 각각의 전장 중쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-H1, FR-H2, FR-H3 및 FR-H4)이 있고, 각각의 전장 경쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4)이 있다. 주어진 CDR 또는 FR의 정확한 아미노산 서열 경계는 문헌 [Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD ("Kabat" numbering scheme), Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 ("Chothia" numbering scheme); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), "Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography," J. Mol. Biol. 262, 732-745." ("Contact" numbering scheme); Lefranc MP et al., "IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains," Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77 ("IMGT" numbering scheme); Honegger A and Plueckthun A, "Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool," J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70, ("Aho" numbering scheme); 및 Whitelegg NR andRees AR, "WAM: an improved algorithm for modelling antibodies on the WEB," Protein Eng. 2000 Dec;13(12):819-24 ("AbM" numbering scheme]에 기재된 것을 비롯하여 다수의 잘 알려진 임의의 방식을 사용하여 쉽게 결정될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에서 설명되는 항체의 CDR은 카바트, 코티아(Chothia), IMGT, Aho, AbM, 또는 이들의 조합으로부터 선택된 방법에 의해 정의될 수 있다.
주어진 CDR 또는 FR의 경계는 확인에 사용되는 방식에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 카바트 방식은 구조적 정렬을 기반으로 하는 반면, 코티아 방식은 구조적 정보를 기반으로 한다. 카바트 및 코티아 방식 둘 모두에 대한 넘버링은 가장 일반적인 항체 영역 서열 길이를 기반으로 하며, 삽입은 삽입 문자, 예를 들어, "30a"에 의해 수용되고, 일부 항체에는 결실이 나타난다. 두 가지 방식은 특정 삽입 및 결실("indel")를 서로 다른 위치에 배치하여 차등 넘버링을 초래한다. 접촉 방식은 복잡한 결정 구조 검정을 기반으로 하며, 여러 측면에서 코티아 넘버링 방식과 유사하다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체를 항원에 결합시키는 데 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인(각각 VH 및 VL)은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(FR) 및 3개의 CDR을 포함한다(예를 들어, 문헌 [Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91(2007)] 참조). 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원 결합 특이성을 부여하는데 충분할 수 있다. 더욱이, 특정 항원에 결합하는 항체는 각각 상보적인 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)] 참조).
제공된 항체 중에는 항체 단편이 있다. "항체 단편"은 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 일부를 포함하는 온전한 항체 이외의 분자를 의미할 수 있다. 항체 단편의 예에는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 단일쇄 항체 분자(예를 들어, scFv 또는 sFv); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하지만, 이에 국한되지 않는다. 특정 실시양태에서, 항체는 scFv와 같은 가변 중쇄 영역 및/또는 가변 경쇄 영역을 포함하는 단일쇄 항체 단편이다. 항체 단편은 온전한 항체의 단백질 분해 소화 및 재조합 숙주 세포에 의한 생산을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 재조합적으로 생산된 단편, 예를 들어 두 개 이상의 항체 영역 또는 사슬이 합성 링커, 예를 들어 폴리펩타이드 링커에 의해 연결된 배열, 및/또는 자연 발생하는 온전한 항체의 효소 소화에 의해 생성되지 않는 배열과 같이 자연적으로 발생하지 않는 배열을 포함하는 단편이다.
본 명세서에서, 분자, 펩타이드, 폴리펩타이드, 항체 또는 항체 단편은 문법적 동등어를 포함하여 "이중특이적" 또는 "이중 특이적"으로 지칭될 수 있다. 이중특이적 분자는 적어도 두 개의 구조적으로 구별되는 표적에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한다. 특이적 결합은 별개의 동일하지 않은 아미노산 서열을 포함하지만 이에 국한되지 않는, 분자 수준에서 구조적으로 구별되는 2개의 구별되는 결합 모이어티; 또는 높은 친화도로(예를 들어, 약 1x10-6 미만의 KD로) 2개의 구조적으로 구별되는 표적에 특이적으로 결합할 수 있는 단일 결합 모이어티의 결과일 수 있다. "다중특이적"으로 지칭되는 분자, 펩타이드, 폴리펩타이드, 항체 또는 항체 단편은 구조적으로 구별되는 적어도 3개의 표적에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 분자를 의미한다. 문법적 동등어를 포함하는 "이중특이적 항체"는 표적과 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 적어도 하나의 단편, 예를 들어 가변 영역, 중쇄 또는 경쇄, 또는 항체 분자의 하나 이상의 상보성 결정 영역을 보존하는 이중특이적 분자를 의미한다. 문법적 동등어를 포함하는 "다중특이적 항체"는 표적과 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 적어도 하나의 단편, 예를 들어 가변 영역, 중쇄 또는 경쇄, 또는 항체 분자의 상보성 결정 영역을 보존하는 다중특이적 분자를 의미한다.
본 명세서에서 "링커"는 "링커 서열", "스페이서", "테더링 서열" 또는 그의 문법적 등가물로 지칭된다. 본원에서 언급되는 바와 같이, "링커"는 그 자체로 표적 결합, 촉매 활성을 보유하거나 별도의 폴리펩타이드로서 자연적으로 발현되고 조립되는 두 개의 별개의 분자, 예를 들어, 두 개의 구별되는 결합 모이어티 또는 중쇄/경쇄 쌍을 연결한다. 분자를 함께 공유적으로 연결하기 위해 다양한 전략을 사용할 수 있다. 여기에는 단백질 또는 단백질 도메인의 N-말단과 C-말단 사이의 폴리펩타이드 연결, 디설파이드 결합을 통한 연결, 화학적 가교결합 시약을 통한 연결이 포함되지만, 이에 국한되지는 않다. 이 실시양태의 한 측면에서, 링커는 재조합 기술 또는 펩타이드 합성에 의해 생성된 펩타이드 결합이다. 링커 펩타이드는 주로 다음과 같은 아미노산 잔기를 포함할 수 있다: Gly, Ser, Ala 또는 Thr. 링커 펩타이드는 두 분자가 원하는 활성을 유지하도록 서로에 대해 올바른 입체형태를 취하는 방식으로 두 분자를 연결하기에 적합한 길이를 가져야 한다. 한 실시양태에서, 링커의 길이는 약 1 내지 50개 아미노산 또는 약 1 내지 30개 아미노산이다. 한 실시양태에서, 1 내지 20개 아미노산 길이의 링커가 사용될 수 있다. 유용한 링커는 예를 들어 (GS)n, (GSGGS)n(서열 번호 224), (GGGGS)n(서열 번호 225) 및 (GGGS)n(서열 번호 226)을 포함하는 글리신-세린 중합체(여기서, n은 적어도 1의 정수임), 글리신-알라닌 중합체, 알라닌-세린 중합체 및 기타 유연한 링커를 포함한다. 항체 단편 또는 단일쇄 가변 단편을 연결하기 위한 예시적인 링커는 AAEPKSS(서열 번호 227), AAEPKSSDKTHTCPPCP(서열 번호 228), GGGG(서열 번호 229), 또는 GGGGDKTHTCPPCP(서열 번호 230)을 포함할 수 있다. 대안적으로, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시알킬렌, 또는 폴리에틸렌 글리콜과 폴리프로필렌 글리콜의 공중합체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는 다양한 비단백질성 중합체가 링커로서 유용할 수 있다.
본 개시내용의 "단편 기반" 이중특이적 항체 또는 "단일쇄 가변 단편" 또는 "scFv"를 포함하는 이중특이적 항체는 2개의 결합 모이어티 및 상기 2개의 결합 모이어티를 연결하는 링커를 포함하는 단일쇄 항체 또는 그의 단편을 의미할 수 있다. 링커는 어느 하나의 표적화 모이어티의 결합을 억제하지 않도록 적합한 유연성을 갖는 폴리펩타이드 링커 또는 다른 링커일 수 있다. 단편 기반 이중특이적 항체 형식에는 직렬 VHH 항체, 직렬 scFv, scFv-Fab, F(ab)2, 이중 친화도 재표적화 항체(DART)가 포함된다. 이러한 단편 기반 항체는 주어진 표적, 예를 들어 A2:B1, A1:B2 또는 A2:B2에 대한 특이성을 갖는 또는 약동학을 개선하거나 ADCC, ADCP 또는 CDC를 촉진하기 위해 Fc 영역의 단편을 갖는 추가의 결합 모이어티를 포함하도록 추가로 조작될 수 있다.
"결합 모이어티"는 언급된 표적 또는 항원 또는 에피토프에 대한 특이적 결합을 매개하는 분자, 펩타이드, 폴리펩타이드, 항체 또는 항체 단편의 부분을 의미한다. 예를 들어, 항체의 결합 모이어티는 중쇄/경쇄 가변 영역 쌍 또는 하나 이상의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함할 수 있다.
본원에서 언급되는 바와 같이, "표적"은 분자, 펩타이드, 폴리펩타이드, 항체 또는 항체 단편의 결합 모이어티에 참여하는 분자의 부분을 의미한다. 표적은 아미노산 서열 및/또는 탄수화물, 지질 또는 기타 화학적 엔티티를 포함할 수 있다. "항원"은 항체 또는 항체 단편, B 세포 수용체 또는 T 세포 수용체와 같은 적응 면역 분자에 의해 결합될 수 있는 부분을 포함하는 표적이다.
이중특이적 또는 다중특이적 분자의 "결합가"는 언급된 분자, 펩타이드, 폴리펩타이드, 항체 또는 항체 단편이 결합할 수 있는 표적의 수를 의미한다. 예를 들어, 1가 분자는 특정 표적의 한 분자와 결합할 수 있고, 2가 분자는 두 분자와 결합할 수 있으며, 4가 분자는 네 개의 표적과 결합할 수 있다. 예를 들어, 이중특이적 2가 분자는 두 개의 표적과 두 개의 구조적으로 상이한 표적에 결합할 수 있는 분자이다. 예를 들어, 이중특이적 2가 분자는 표적 A 및 표적 B를 포함하는 용액과 접촉하게 될 때 A2, B2 또는 A:B에 결합할 수 있다.
"인간화" 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 아미노산 잔기가 비-인간 CDR로부터 유래되고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 아미노산 잔기가 인간 FR로부터 유래되는 항체이다. 인간화 항체는 선택적으로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 비인간 항체의 "인간화 형태"는 일반적으로 인간에 대한 면역원성을 감소시키면서 모 비인간 항체의 특이성 및 친화도를 유지하기 위해 인간화를 거친 비인간 항체의 변이체를 의미한다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체의 일부 FR 잔기는 예를 들어 항체 특이성 또는 친화도를 회복하거나 개선하기 위해 비인간 항체(예를 들어, CDR 잔기가 그로부터 유래되는 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.
제공된 항체 중에는 인간 항체가 있다. "인간 항체"는 인간 또는 인간 세포, 또는 인간 항체 레퍼토리 또는 인간 항체 라이브러리를 포함하는 다른 인간 항체 코딩 서열을 활용하는 비인간 공급원에 의해 생산된 항체의 서열에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체이다. 이 용어는 비인간 항원 결합 영역, 예를 들어 모든 또는 실질적으로 모든 CDR이 비인간 유래의 것을 포함하는 비인간 항체의 인간화 형태를 제외한다. 인간 항체는 항원 공격에 반응하여 온전한 인간 항체 또는 인간 가변 영역을 갖는 온전한 항체를 생성하도록 변형된 형질전환 동물에 면역원을 투여함으로써 제조될 수 있다. 이러한 동물은 전형적으로 내인성 면역글로불린 유전자좌를 대체하거나 염색체외에 존재하거나 동물의 염색체에 무작위로 통합되는 인간 면역글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유한다. 이러한 형질전환 동물에서는 내인성 면역글로불린 유전자좌가 일반적으로 불활성화되어 있다. 인간 항체는 또한 인간 레퍼토리로부터 유래된 항체 코딩 서열을 함유하는 파지 디스플레이 및 무세포 라이브러리를 비롯한 인간 항체 라이브러리로부터 유래될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, ADCC" 또는 "항체 의존성 세포 매개 세포독성"은 FcγR을 발현하는 비특이적 세포독성 세포가 표적 세포에 결합된 항체를 인식하고 이어서 표적 세포의 용해를 일으키는 세포 매개 반응을 의미한다. ADCC는 FcγRIIIa에 대한 결합과 상관관계가 있을 수 있으며, 여기서 FcγRIIIa에 대한 증가된 결합은 ADCC 활성의 증가를 유도한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "ADCP" 또는 항체 의존성 세포 매개 식세포 작용은 FcγR을 발현하는 비특이적 세포독성 세포가 표적 세포에 결합된 항체를 인식하고 이어서 표적 세포의 식세포 작용을 일으키는 세포 매개 반응을 의미할 수 있다.
용어 "폴리펩타이드" 및 "단백질"은 교환 가능하게 사용되며, 아미노산 잔기의 중합체를 의미하며, 최소 길이로 제한되지는 않는다. 제공된 항체 및 항체 사슬 및 다른 펩타이드, 예를 들어 링커 및 결합 펩타이드를 포함하는 폴리펩타이드는 천연 및/또는 비천연 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 이 용어는 또한 폴리펩타이드의 발현 후 변형, 예를 들어 글리코실화, 시알릴화, 아세틸화, 인산화 등을 포함한다. 일부 측면에서, 폴리펩타이드는 단백질이 원하는 활성을 유지하는 한, 천연 또는 자연 서열에 대한 변형을 함유할 수 있다. 이러한 변형은 부위 지정 돌연변이 유발과 같이 의도적일 수도 있고, 단백질을 생성하는 숙주의 돌연변이 또는 PCR 증폭으로 인한 오류와 같이 우발적일 수도 있다.
참조 폴리펩타이드 서열에 대한 서열 동일성 퍼센트(%)는 서열을 정렬하고, 필요한 경우 최대 서열 동일성 백분율을 달성하기 위해 갭을 도입한 후, 보존적 치환을 서열 동일성의 일부로 고려하지 않으면서 참조 폴리펩타이드 서열의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열의 아미노산 잔기의 백분율이다. 아미노산 서열 동일성 백분율을 결정하기 위한 정렬은 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 공지된 다양한 방식으로 달성될 수 있다. 비교되는 서열의 전체 길이에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는 데 필요한 알고리즘을 포함하여 서열 정렬을 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 그러나, 본원의 목적을 위해, 아미노산 서열 동일성 % 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성된다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 제넨테크, 인크.(Genentech, Inc.)에 의해 작성되었으며, 소스 코드는 미국 저작권청(US Copyright Office, 미국 20559 워싱턴 디씨 소재)에 사용자 문서와 함께 제출되었으며, 미국 저작권 등록 번호 TXU510087로 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은 미국 캘리포니아주 사우스 샌프란시스코에 소재하는 제넨테크, 인크.에서 공개적으로 이용 가능하거나, 소스 코드에서 컴파일링될 수 있다. ALIGN-2 프로그램은 디지털 UNIX V4.0D를 포함한 UNIX 운영 체제에서 사용하기 위해 컴파일링되어야 한다. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되며, 변하지 않는다. ALIGN-2가 아미노산 서열 비교를 위해 사용되는 상황에서, 주어진 아미노산 서열 B에 대한, 서열 B와, 또는 서열 B에 대비한 주어진 아미노산 서열 A의 아미노산 서열 동일성 %(대안적으로, 주어진 아미노산 서열 B에 대한, 서열 B와, 또는 서열 B에 대비한 특정 아미노산 서열 동일성 %를 갖거나 포함하는 주어진 아미노산 서열 A로 표현될 수 있음)는 다음과 같이 계산된다: 분수 X/Y의 100배 (여기서, A와 B의 해당 프로그램 정렬에서 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의해 동일한 매치로서 기록되는 아미노산 잔기의 수이고, Y는 B의 아미노산 잔기의 총 수이다). 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 같지 않은 경우, B에 대한 A이 아미노산 서열 동일성 %는 A에 대한 B의 아미노산 서열 동일성 %와 같지 않을 것임이 이해될 것이다. 달리 구체적으로 언급하지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 아미노산 서열 동일성 % 값은 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 바로 앞 단락에 기재된 바와 같이 얻는다.
본원에서 제공되는 항체의 아미노산 서열 변이체가 고려되고, 구상될 수 있다. 변이체는 전형적으로 하나 이상의 치환, 결실, 부가 및/또는 삽입에서 본원에 구체적으로 개시된 폴리펩타이드와 상이하다. 이러한 변이체는 자연적으로 발생할 수 있거나, 예를 들어 본 발명의 상기 폴리펩타이드 서열 중 하나 이상을 변형하고 본원에서 설명되는 폴리펩타이드의 하나 이상의 생물학적 활성을 평가하고/하거나 다수의 알려진 기술을 사용하여 합성에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 항체의 결합 친화도 및/또는 기타 생물학적 특성을 개선하는 것이 바람직할 수 있고, 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열에 적절한 변형을 도입하거나 펩타이드 합성을 통해 제조할 수 있다. 이러한 변형에는 예를 들어 항체의 아미노산 서열 내의 잔기로부터의 결실, 및/또는 삽입 및/또는 치환이 포함된다. 최종 구축물이 원하는 특성, 예를 들어 항원 결합을 보유하는 경우, 결실, 삽입 및 치환의 임의의 조합을 통해 최종 구축물에 도달할 수 있다. 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공될 수 있다. 치환에 의한 돌연변이 유발을 위한 관심 부위에는 CDR 및 FR이 포함된다. 아미노산 치환은 관심 항체에 도입될 수 있으며, 원하는 활성, 예를 들어, 항원 결합의 유지/향상, 면역원성의 감소 또는 ADCC 또는 CDC의 개선에 대해 생성물을 스크리닝할 수 있다.
본 개시내용은 또한 하나 이상의 이종 분자(들)에 접합된 항체를 지칭하는 "면역접합체" 또는 "항체 접합체" 또는 "항체-약물 접합체"를 제공한다. 예를 들어, 면역접합체는 하나 이상의 세포독성제, 예를 들어 화학요법제 또는 약물, 성장 억제제, 단백질 도메인, 독소(예를 들어, 단백질 독소, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소, 또는 그의 단편), 또는 방사성 동위원소에 접합된 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역접합체는 본원에 개시된 복합 결합 분자 또는 그의 단편(예를 들어, scFv)을 포함할 수 있다.
본원에서 설명되는 항체는 핵산에 의해 코딩될 수 있다. 핵산은 2개 이상의 뉴클레오타이드 염기를 포함하는 폴리뉴클레오타이드의 한 유형이다. 특정 실시양태에서, 핵산은 폴리펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 세포 내로 전달하는데 사용될 수 있는 벡터의 성분이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "벡터"는 연결된 또 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 의미한다. 벡터의 한 유형은 게놈 통합 벡터, 즉 숙주 세포의 염색체 DNA에 통합될 수 있는 "통합 벡터"이다. 벡터의 또 다른 유형은 "에피솜" 벡터, 예를 들어 염색체외 복제가 가능한 핵산이다. 작동 가능하게 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있는 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로 지칭된다. 적합한 벡터에는 플라스미드, 박테리아 인공 염색체, 효모 인공 염색체, 바이러스 벡터 등이 포함된다. 발현 벡터에서, 전사 조절에 사용하기 위한 프로모터, 인핸서, 폴리아데닐화 신호와 같은 조절 요소는 포유동물, 미생물, 바이러스 또는 곤충 유전자로부터 유래될 수 있다. 일반적으로, 복제 기점에 의해 부여되는 숙주 내에서의 복제 능력 및 형질전환체의 인식을 용이하게 하는 선택 유전자가 추가로 포함될 수 있다. 렌티바이러스, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스 등과 같은 바이러스로부터 유래된 벡터가 사용될 수 있다. 플라스미드 벡터는 염색체 위치에 통합하기 위해 선형화될 수 있다. 벡터는 게놈의 정의된 위치 또는 제한된 부위 세트(예를 들어, AttP-AttB 재조합)로의 부위 특이적 통합을 지시하는 서열을 포함할 수 있다. 추가로, 벡터는 전치가능한(transposable) 요소로부터 유래된 서열을 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 참조 서열과 비교하여 아미노산 서열 또는 핵산 서열을 기술하기 위해 본원에서 사용될 때, 용어 "상동성의", "상동성" 또는 "상동성 백분율"은 문헌 [Karlin and Altschul (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 2264-2268, 1990, modified as in Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877, 1993)]에 기재된 식을 사용하여 결정될 수 있다. 이러한 식은 문헌 [Altschul et al. (J. Mol. Biol. 215: 403-410, 1990)]의 기본 로컬 정렬 검색 도구(BLAST) 프로그램에 통합되어 있다. 서열의 상동성 %는 본 출원의 출원일 당시 가장 최신 버전의 BLAST를 사용하여 결정될 수 있다.
본원에서 설명되는 항체를 코딩하는 핵산은 적합한 세포를 감염, 형질감염, 형질전환하거나 또는 핵산의 형질도입에 이용 가능하게 만들어 상업적 또는 치료적 용도를 위한 항체의 생산을 가능하도록 하기 위해 사용될 수 있다. 대규모 세포 배양물로부터 항체를 생산하기 위한 표준 세포주 및 방법은 관련 기술 분야에 알려져 있다. 예를 들어, 문헌 [Li et al., "Cell culture processes for monoclonal antibody production." Mabs. 2010 Sep-Oct; 2(5): 466-477]을 참조한다. 특정 실시양태에서, 세포는 진핵 세포이다. 특정 실시양태에서, 진핵 세포는 포유동물 세포이다. 특정 실시양태에서, 포유동물 세포는 항체를 생성하는데 유용한 세포주로서, 차이니즈 햄스터 난소 세포(CHO) 세포, NS0 뮤린 골수종 세포 또는 PER.C6® 세포이다. 특정 실시양태에서, 항체를 코딩하는 핵산은 항체 생산에 유용한 세포의 게놈 유전자좌 내로 통합된다. 특정 실시양태에서, 항체의 생산 및 분비를 허용하기에 충분한 시험관내 조건 하에서 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 세포를 배양하는 것을 포함하는, 항체를 제조하는 방법이 본원에 기재되어 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "개체", "환자" 또는 "대상체"는 기술된 조성물 및 방법이 치료에 유용한 적어도 하나의 질병으로 진단되었거나, 상기 질병을 앓고 있다고 의심되거나, 발병할 위험이 있는 개체를 의미한다. 특정 실시양태에서, 개체는 포유동물이다. 특정 실시양태에서, 포유동물은 마우스, 래트, 토끼, 개, 고양이, 말, 소, 양, 돼지, 염소, 라마, 알파카 또는 야크이다. 특정 실시양태에서, 개체는 인간이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 특정 숫자를 수식하는 데 사용되는 용어 "약"은 해당 숫자에 해당 숫자의 10%를 더하거나 뺀 값을 지칭한다. 범위를 수식하는 "약"이라는 용어는 해당 범위에서 가장 낮은 값의 10%를 뺀 값에서 가장 큰 값의 10%를 더한 값까지의 범위를 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료" 또는 "치료하는"은 수여자에게 유익하거나 원하는 결과를 얻기 위해 사용되는 약제학적 또는 다른 개입 요법과 관련하여 사용된다. 유익하거나 원하는 결과에는 치료적 이점 및/또는 예방적 이점이 포함되지만, 이에 국한되지는 않다. 치료적 이점은 치료 중인 증상 또는 기저 장애의 근절 또는 개선을 의미할 수 있다. 또한, 대상체가 여전히 기저 장애를 앓고 있을 수 있음에도 불구하고 대상체에서 개선이 관찰되도록 기저 장애와 관련된 하나 이상의 생리학적 증상을 근절 또는 개선함으로써 치료적 이점을 달성할 수 있다. 예방 효과에는 질병 또는 병태의 출현을 지연, 예방 또는 제거하는 것, 질병 또는 병태의 증상의 시작을 지연하 또는 제거하는 것, 질병 또는 병태의 진행을 늦추거나 멈추거나 역전시키는 것, 또는 이들의 조합이 포함된다. 예방적 이익을 위해, 특정 질병이 발생할 위험이 있는 대상체 또는 질병의 생리학적 증상 중 하나 이상을 보고하는 대상체는 이 질병의 진단이 내려지지 않았을지라도 치료를 받을 수 있다. 숙련된 기술자는 치료를 위한 잠재적 개체의 집단이 주어지면 모든 사람이 치료에 반응하거나 동일하게 반응하지는 않는다는 것을 인식할 것이다. 이러한 개체는 치료를 받은 것으로 간주된다.
본 명세서에서 사용되는 섹션 제목은 단지 구성의 목적을 위한 것이며, 설명된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
이중특이적 분자
CD19 양성, CD38 양성, CD20 음성 B 세포와 연관된 암을 치료하는 데 유용한 이중특이적 또는 다가 또는 복합 결합 분자가 본원에서 제공된다. 제1 표적에 결합하도록 구성된 제1 결합 성분 및 제2 표적에 결합하도록 구성된 제2 결합 성분을 포함하는 이중특이적 또는 다가 또는 복합 결합 분자가 본원에서 제공되며, 여기서 제1 표적은 B 세포 계통 표면 마커를 포함하고, 제2 표적은 표적은 억제성 B 세포 표면 마커를 포함한다. 면역억제성 B 세포 또는 B 세포 집단은 B 세포 계통 표면 바이오마커 및 억제성 B 세포 표면 바이오마커를 포함할 수 있다. B 세포 계통 표면 마커는 CD19, CD20, CD138, IgA 또는 CD45를 포함할 수 있다. 면역억제성 B 세포 표면 마커는 IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3 또는 잠복성 TGF-베타(예를 들어, TGF-베타 LAP)를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19를 포함한다. 특정 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19로 구성된다. 일부 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38을 포함한다. 특정 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38로 구성된다. 특정 실시양태에서, 복합 결합 분자는 CD38 및 CD19에 결합한다. 일부 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD20을 포함한다. 특정 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD20으로 구성된다.
다가 또는 이중특이적 또는 복합 결합 분자는 적어도 2개의 구조적으로 구별되는 표적에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한다. 특이적 결합은 구별되는 동일하지 않은 아미노산 서열; 또는 2개의 구조적으로 구별되는 표적에 특이적으로 결합할 수 있는 단일 결합 모이어티를 포함하지만 이로 제한되지 않는, 분자 수준에서 구조적으로 구별되는 2개의 구별되는 결합 모이어티의 결과일 수 있다. "다중특이적" 또는 "다가" 또는 "이중특이적"으로 지칭되는 분자, 펩타이드, 폴리펩타이드, 항체 또는 항체 단편은 적어도 2개의 구조적으로 구별되는 표적에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 분자를 의미할 수 있다. 일부 실시양태에서, 복합 결합 분자의 제1 또는 제2 결합 성분은 폴리펩타이드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 또는 제2 결합 성분은 폴리펩타이드로 구성된다. 일부 실시양태에서, 복합 결합 분자의 제1 및 제2 결합 성분은 폴리펩타이드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제2 결합 성분은 폴리펩타이드로 구성된다. 특정 실시양태에서, 제1 또는 제2 결합 성분의 폴리펩타이드는 길이가 적어도 100개의 아미노산 잔기인 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제2 결합 성분의 폴리펩타이드는 길이가 적어도 100개의 아미노산 잔기인 아미노산 서열을 포함한다.
이중특이적 분자는 표적, 예를 들어 항체 분자의 가변 영역, 중쇄 또는 경쇄, 또는 하나 이상의 상보성 결정 영역과 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 적어도 하나의 단편을 보유하는 이중특이적 항체일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에서 설명되는 복합 결합 분자는 이중특이적 항체 및/또는 그의 이중 항원 결합 단편이다. 이중특이적 항체는 구조적으로 구분되는 두 개의 표적 또는 항원에 결합하는 능력을 가지고 있다. 일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 제1 표적에 결합하도록 구성된 제1 결합 성분 및 제2 표적에 결합하도록 구성된 제2 결합 성분을 포함하며, 여기서 제1 표적은 B 세포 계통 표면 마커(예를 들어, CD19, CD138, IgA, 또는 CD45)를 포함하고, 제2 표적은 억제성 B 세포 표면 마커(예를 들어, IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3, 또는 잠복성 TGF-베타(예를 들어, TGF-베타 LAP)를 포함한다. 일부 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19를 포함한다. 특정 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19로 구성된다. 일부 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38을 포함한다. 특정 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38로 구성된다.
면역억제성 B 세포 또는 면역억제성 B 세포 계통 세포는 세포 표면 바이오마커 CD19 및 CD38을 포함할 수 있다. CD19 및 CD38을 표적으로 하는 이중특이적 항체가 본원에 추가로 개시된다. 일부 실시양태에서, CD19 결합 성분은 서열 번호 1을 포함하는 가변 중쇄(VH)를 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분은 서열 번호 11, 서열 번호 12, 서열 번호 13, 서열 번호 14, 또는 서열 번호 15 중 어느 하나를 포함하는 VH CDR1 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분은 서열 번호 21, 서열 번호 22, 서열 번호 23, 서열 번호 24, 또는 서열 번호 25 중 어느 하나를 포함하는 VH CDR2 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분은 서열 번호 31, 서열 번호 32, 서열 번호 33, 서열 번호 34, 또는 서열 번호 35 중 어느 하나를 포함하는 VH CDR3 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, CD19 결합 성분은 서열 번호 2를 포함하는 가변 경쇄(VL)를 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분은 서열 번호 41, 서열 번호 42, 서열 번호 43, 서열 번호 45, 또는 서열 번호 45 중 어느 하나를 포함하는 VL CDR1 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분은 서열 번호 51, 서열 번호 52, 서열 번호 53, 서열 번호 54, 또는 서열 번호 55 중 어느 하나를 포함하는 VL CDR2 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분은 서열 번호 61, 서열 번호 62, 서열 번호 63, 서열 번호 64, 또는 서열 번호 65 중 어느 하나를 포함하는 VL CDR3 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 제1 결합 성분을 포함하며, 여기서 제1 결합 성분은 서열 번호 11-15 중 어느 하나에 제시된 HCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 21-25 중 어느 하나에 제시된 HCDR2 아미노산 서열, 서열 번호 31-35 중 어느 하나에 제시된 HCDR3 아미노산 서열, 서열 번호 41-45 중 어느 하나에 제시된 LCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 51-55 중 어느 하나에 제시된 LCDR2 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 61 내지 65 중 어느 하나에 제시된 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD19 결합 성분을 포함하며, 여기서 CD19 결합 성분은 서열 번호 11에 제시된 HCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 21에 제시된 HCDR2 아미노산 서열, 서열 번호 31에 제시된 HCDR3 아미노산 서열, 서열 번호 41에 제시된 LCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 51에 제시된 LCDR2 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 61에 제시된 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD19 결합 성분을 포함하며, 여기서 CD19 제1 결합 성분은 서열 번호 12에 제시된 HCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 22에 제시된 HCDR2 아미노산 서열, 서열 번호 32에 제시된 HCDR3 아미노산 서열, 서열 번호 42에 제시된 LCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 52에 제시된 LCDR2 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 62에 제시된 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD19 결합 성분을 포함하며, 여기서 CD19 결합 성분은 서열 번호 15에 제시된 HCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 25에 제시된 HCDR2 아미노산 서열, 서열 번호 35에 제시된 HCDR3 아미노산 서열, 서열 번호 45에 제시된 LCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 55에 제시된 LCDR2 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 65에 제시된 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, CD19 결합은 이네빌리주맙, 타파시타맙, 타플리투모맙, 오벡셀리맙, 블리나투모맙, 콜툭시맙, 데닌투주맙, 또는 론카스툭시맙, MOR208, MEDI-551, XmAb 5871, MDX-1342, 또는 AFM11에 상응하거나 그로부터 유래된 가변 중쇄 및 경쇄 또는 CDR을 포함한다.
일부 실시양태에서, CD38 결합 성분는 서열 번호 3을 포함하는 가변 중쇄(VH)를 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분은 서열 번호 71, 서열 번호 72, 서열 번호 73, 서열 번호 75, 또는 서열 번호 75 중 어느 하나를 포함하는 VH CDR1 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분은 서열 번호 81, 서열 번호 82, 서열 번호 83, 서열 번호 84, 또는 서열 번호 85 중 어느 하나를 포함하는 VH CDR2 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분은 서열 번호 91, 서열 번호 92, 서열 번호 93, 서열 번호 94, 또는 서열 번호 95 중 어느 하나를 포함하는 VH CDR3 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, CD38 결합 성분은 서열 번호 4를 포함하는 가변 경쇄(VL)를 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분은 서열 번호 101, 서열 번호 102, 서열 번호 103, 서열 번호 105, 또는 서열 번호 105 중 어느 하나를 포함하는 VL CDR1 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분은 서열 번호 111, 서열 번호 112, 서열 번호 113, 서열 번호 114, 또는 서열 번호 115 중 어느 하나를 포함하는 VL CDR2 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분은 서열 번호 121, 서열 번호 122, 서열 번호 123, 서열 번호 124, 또는 서열 번호 125 중 어느 하나를 포함하는 VL CDR3 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD38 결합 성분을 포함하며, 여기서 CD38 결합 성분은 서열 번호 71에 제시된 HCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 81에 제시된 HCDR2 아미노산 서열, 서열 번호 91에 제시된 HCDR3 아미노산 서열, 서열 번호 101에 제시된 LCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 111에 제시된 LCDR2 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 121에 제시된 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD38 결합 성분을 포함하며, 여기서 CD38 결합 성분은 서열 번호 72에 제시된 HCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 82에 제시된 HCDR2 아미노산 서열, 서열 번호 92에 제시된 HCDR3 아미노산 서열, 서열 번호 102에 제시된 LCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 112에 제시된 LCDR2 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 122에 제시된 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD38 결합 성분을 포함하며, 여기서 CD38 결합 성분은 서열 번호 75에 제시된 HCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 85에 제시된 HCDR2 아미노산 서열, 서열 번호 95에 제시된 HCDR3 아미노산 서열, 서열 번호 105에 제시된 LCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 115에 제시된 LCDR2 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 125에 제시된 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태(예를 들어, 이전 실시양태 중 임의의 실시양태)에서, CD38 결합 성분의 CDR-H2는 아미노산 잔기 P(X1)LG(X2)A(서열 번호 150)를 포함하며, 여기서 X1 및 X2는 CD38에 대한 결합을 유지하면서 아미노산 치환을 허용한다. 특정 실시양태에서, X1 및 X2는 CDRH2 아미노산 서열의 소수성을 감소시키는 아미노산으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 소수성을 감소시키는 아미노산에는 H, Q, T, N, S, G, A, R, K, D 또는 E가 포함된다. 특정 실시양태에서, X1은 H이고, X2는 T이다.
일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD38 결합 성분 및 CD19 결합 성분을 포함하며, 여기서 CD38 결합 성분은 VH 아미노산 서열 및 VL 아미노산 서열을 포함하고, VH 아미노산 서열은 서열 번호 3에 대해 적어도 약 90%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 4에 대해 적어도 약 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; CD19 결합 성분은 VH 아미노산 서열 및 VL 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 VH 아미노산 서열은 서열 번호 1에 대해 적어도 약 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 2에 대해 적어도 약 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD38 결합 성분 및 CD19 결합 성분을 포함하며, 여기서 CD38 결합 성분은 VH 아미노산 서열 및 VL 아미노산 서열을 포함하고, VH 아미노산 서열은 서열 번호 3과 동일한 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 4와 동일한 아미노산 서열을 포함하고; CD19 결합 성분은 VH 아미노산 서열 및 VL 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 VH 아미노산 서열은 서열 번호 1과 동일한 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 2와 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD38 결합 성분 및 CD19 결합 성분을 포함하며, 여기서 CD38 결합 성분은 VH 아미노산 서열 및 VL 아미노산 서열을 포함하고, VH 아미노산 서열은 서열 번호 3, 215, 또는 218-223에 대해 적어도 약 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, VL은 서열 번호 4 또는 223에 대해 적어도 약 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; CD19 결합 성분은 VH 아미노산 서열 및 VL 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 VH 아미노산 서열은 서열 번호 1, 201, 또는 216-217에 대해 적어도 약 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 2에 대해 적어도 약 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD19 결합 성분은 A84 및 A108에 치환을 포함하는 VH 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 A84S 및 A108L을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD38 결합 성분 및 CD19 결합 성분을 포함하며, 여기서 CD38 결합 성분은 VH 아미노산 서열 및 VL 아미노산 서열을 포함하고, VH 아미노산 서열은 서열 번호 3, 215, 또는 218-223과 동일한 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 4 또는 223과 동일한 아미노산 서열을 포함하고; CD19 결합 성분은 VH 아미노산 서열 및 VL 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 VH 아미노산 서열은 서열 번호 1, 201, 216-217과 동일한 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열 번호 2와 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD19 결합 성분은 A84 및 A108에 치환을 포함하는 VH 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치환은 A84S 및 A108L을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD38 결합 성분 및 CD19 결합 성분을 포함하며, 여기서 CD38 결합 성분은 서열 번호 71에 제시된 HCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 81에 제시된 HCDR2 아미노산 서열, 서열 번호 91에 제시된 HCDR3 아미노산 서열, 서열 번호 101에 제시된 LCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 111에 제시된 LCDR2 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 121에 제시된 LCDR3 아미노산 서열을 포함하고; CD19 결합 성분은 서열 번호 11에 제시된 HCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 21에 제시된 HCDR2 아미노산 서열, 서열 번호 31에 제시된 HCDR3 아미노산 서열, 서열 번호 41에 제시된 LCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 51에 제시된 LCDR2 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 61에 제시된 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD38 결합 성분 및 CD19 결합 성분을 포함하며, 여기서 CD38 결합 성분은 서열 번호 72에 제시된 HCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 82에 제시된 HCDR2 아미노산 서열, 서열 번호 92에 제시된 HCDR3 아미노산 서열, 서열 번호 102에 제시된 LCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 112에 제시된 LCDR2 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 122에 제시된 LCDR3 아미노산 서열을 포함하고; CD19 결합 성분은 서열 번호 12에 제시된 HCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 22에 제시된 HCDR2 아미노산 서열, 서열 번호 32에 제시된 HCDR3 아미노산 서열, 서열 번호 42에 제시된 LCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 52에 제시된 LCDR2 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 62에 제시된 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 CD38 결합 성분 및 CD19 결합 성분을 포함하며, 여기서 CD38 결합 성분은 서열 번호 75에 제시된 HCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 85에 제시된 HCDR2 아미노산 서열, 서열 번호 95에 제시된 HCDR3 아미노산 서열, 서열 번호 105에 제시된 LCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 115에 제시된 LCDR2 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 125에 제시된 LCDR3 아미노산 서열을 포함하고; CD19 결합 성분은 서열 번호 15에 제시된 HCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 25에 제시된 HCDR2 아미노산 서열, 서열 번호 35에 제시된 HCDR3 아미노산 서열, 서열 번호 45에 제시된 LCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 55에 제시된 LCDR2 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 65에 제시된 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, CD38 결합은 다라투무맙 또는 이사툭시맙에 상응하거나 그로부터 유래된 가변 중쇄 및 경쇄 또는 CDR을 포함한다.
치환, 삽입 또는 결실은 하나 이상의 CDR 내에서 발생할 수 있으며, 여기서 치환, 삽입 또는 결실은 항원에 대한 항체 결합을 실질적으로 감소시키지 않는다. 예를 들어, 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 치환이 CDR에서 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 CDR "핫스팟(hotspot)" 외부에 있을 수 있다. 일부 실시양태에서, 변이체 VH 및 VL 서열 중 각각의 CDR은 변경되지 않는다. 아미노산 서열 삽입 및 결실에는 1개의 잔기부터 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩타이드까지의 길이의 아미노- 및/또는 카르복실 말단 융합뿐만 아니라, 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입 및 결실이 포함된다. 말단 삽입의 예에는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체가 포함된다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체에는 항체의 N- 또는 C-말단에 효소(예를 들어, ADEPT의 경우) 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩타이드에 대한 융합이 포함된다. 항체 분자의 서열내 삽입 변이체의 예에는 경쇄의 3개의 아미노산의 삽입이 포함된다. 말단 결실의 예에는 경쇄 말단에 7개 이하의 아미노산이 결실된 항체가 포함된다.
예를 들어, 항체 친화도를 개선하기 위해 CDR에 변경(예를 들어, 치환)이 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 체세포 성숙 동안 높은 돌연변이 비율로 CDR 코딩 코돈에서 이루어질 수 있고(예를 들어, 문헌 [Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)] 참조), 생성된 변이체는 결합 친화도에 대해 시험될 수 있다. 친화도 성숙(예를 들어, 오류 빈발 PCR, 사슬 셔플링, CDR의 무작위화 또는 올리고뉴클레오타이드 지정 돌연변이 유발을 사용함)을 사용하여 항체 친화도를 개선시킬 수 있다(예를 들어, 문헌 [Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (2001)] 참조). 항원 결합에 관여하는 CDR 잔기는 예를 들어 알라닌 스캐닝 돌연변이 유발 또는 모델링을 사용하여 구체적으로 확인될 수 있다(예를 들어, 문헌 [Cunningham and Wells Science, 244:1081-1085 (1989)] 참조). 특히 CDR-H3 및 CDR-L3이 표적이 되는 경우가 많다. 대안적으로 또는 추가로, 항원-항체 복합체의 결정 구조를 분석하여 항체와 항원 사이의 접촉점을 확인하는 것이 유익할 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 인접 잔기는 치환 후보로 표적화되거나 제거될 수 있다. 변이체를 스크리닝하여 원하는 특성을 포함하는지 확인할 수 있다.
항체는 글리코실화를 증가시키거나 감소시키기 위해 변경될 수 있다(예를 들어, 하나 이상의 글리코실화 부위가 생성되거나 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써). 항체의 Fc 영역에 부착된 탄수화물이 변경될 수 있다. 포유동물 세포로부터의 천연 항체는 전형적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 대한 N-연결에 의해 부착된 분지형 바이안테너리(biantennary) 올리고사카라이드를 포함한다(예를 들어, 문헌 [Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)] 참조). 올리고사카라이드는 다양한 탄수화물, 예를 들어 바이안테너리 올리고사카라이드 구조의 줄기에 있는 GlcNAc에 부착된 만노스, N-아세틸 글루코사민(GlcNAc), 갈락토스, 시알산, 푸코스일 수 있다. 예를 들어, 특정 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 생성하기 위해 항체의 올리고사카라이드를 변형할 수 있다. 항체 글리코실화 변이체는 향상된 ADCC 및/또는 CDC 기능을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, Fc 영역에 (직접적으로 또는 간접적으로) 부착된 푸코스가 결여된 탄수화물 구조를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들어, 이러한 항체에서 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 푸코스의 양은 Asn297에 부착된 모든 당구조의 합계에 대해 Asn297의 당 사슬 내의 푸코스의 평균 양을 계산하여 결정된다(예를 들어, WO 08/077546 참조). Asn297은 Fc 영역의 대략 위치 297에 위치하는 아스파라긴 잔기를 의미한다(Fc 영역 잔기의 EU 넘버링; 예를 들어, 문헌 [Edelman et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 1969 May; 63(1):78-85] 참조). 그러나, Asn297은 또한 항체의 사소한 서열 변화로 인해 위치 297의 약 ±3개 아미노산의 상류 또는 하류에, 즉 위치 294와 300 사이에 위치할 수도 있다. 이러한 푸코실화 변이체는 향상된 ADCC 기능을 가질 수 있다(예를 들어, 문헌 [Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); 및 Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)] 참조). 세포주, 예를 들어, 낙아웃 세포주 및 그의 사용 방법, 예를 들어 단백질 푸코실화가 결핍된 Lecl3 CHO 세포 및 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자(FUT8) 낙아웃 CHO 세포가 탈푸코실화된 항체를 생산하는 데 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌 [Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)] 참조). 다른 항체 글리코실화 변이체도 포함된다(예를 들어, 미국 특허 번호 6,602,684 참조).
일부 실시양태에서, 본원에서 제공되는 복합 결합 분자는 항체 표적에 대해 약 10 μM, 1 μM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM, 10 nM, 5 nM, 2 nM, 1 nM, 0.5 nM, 0.1 nM, 0.05 nM, 0.01 nM, 또는 0.001 nM 이하(예를 들어, 10-8 M 이하 , 예를 들어, 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수(KD)를 갖는다. 항체 표적은 CD19 표적, CD38 표적, 또는 CD19 및 CD38 둘 모두를 포함하는 표적일 수 있다. KD는 임의의 적합한 검정에 의해 측정될 수 있다. 특정 실시양태에서, KD는 표면 플라스몬 공명 검정을 사용하여(예를 들어, 비아코어(BIACORE)®-2000 또는 비아코어®-3000 또는 옥텟(Octet)을 사용하여) 측정될 수 있다.
항체는 증가된 반감기를 가질 수 있고, 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 개선된 결합을 가질 수 있다(예를 들어, US 2005/0014934 참조). 이러한 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 향상시키는 하나 이상의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함할 수 있고, EU 넘버링 시스템에 따른 Fc 영역 잔기 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434 중 하나 이상에 치환을 갖는 항체를 포함할 수 있다(예를 들어, 미국 특허 번호 7,371,826 참조). Fc 영역 변이체의 다른 예도 고려된다(예를 들어, 문헌 [Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)]; 미국 특허 번호 5,648,260 및 5,624,821; 및 WO94/29351] 참조).
일부 실시양태에서, 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 시스테인 조작된 항체, 예를 들어 "thioMAb"을 생성하는 것이 바람직할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치환된 잔기는 항체의 접근 가능한 부위에서 발생한다. 반응성 티올기는 면역접합체를 생성하기 위해 약물 모이어티 또는 링커 약물 모이어티와 같은 다른 모이어티에 대한 접합을 위한 부위에 위치할 수 있다. 일부 실시양태에서, 다음 잔기 중 어느 하나 이상이 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205(카바트 넘버링); 중쇄의 A118(EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400(EU 넘버링).
일부 실시양태에서, 본원에서 제공되는 항체는 공지되고 이용 가능한 추가의 비단백질성 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체의 유도체화에 적합한 모이어티에는 수용성 중합체가 포함되지만 이에 국한되지 않는다. 수용성 중합체의 비제한적인 예에는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산(단독중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n 비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올(예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알코올 및 이들의 혼합물이 포함되지만 이에 국한되지 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데하이드는 물에 대한 안정성으로 인해 제조 시에 이점을 가질 수 있다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있으며, 분지형이거나 비분지형일 수 있다. 항체에 부착된 중합체의 수는 다양할 수 있으며, 2개 이상의 중합체가 부착되는 경우에는 동일하거나 상이한 분자일 수 있다.
복합 결합 분자 또는 이중특이적 항체는 이들 분자와 연관된 결합 모이어티에 따라 다를 수 있으며, 여기서 이용될 수 있고 본원에서 구상되는 여러 가지 다른 형식도 또한 존재한다. 복합 결합 분자 또는 이중특이적 항체는 항체 단편, 실질적으로 온전한 항체, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 또는 제2 결합 성분은 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 쌍, scFv, F(ab), F(ab')2, 단일 도메인 항체, 면역글로불린 신규 항원 수용체로부터의 가변 영역 단편(VNAR), 또는 중쇄 항체로부터 유래된 가변 영역(VHH)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제2 결합 성분은 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 쌍, scFv, F(ab), F(ab')2, 단일 도메인 항체, 면역글로불린 신규 항원 수용체로부터의 가변 영역 단편(VNAR), 또는 중쇄 항체로부터 유래된 가변 영역(VHH)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 또는 제2 결합 성분은 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 쌍을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제2 결합 성분은 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 쌍을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 또는 제2 결합 성분은 scFv를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 및 제2 결합 성분은 scFv를 포함한다.
본 개시내용에 따른 이중특이적 항체는 온전한 항체 분자 또는 실질적으로 완전히 온전한 항체 분자를 포함하고, 비대칭 또는 대칭일 수 있다.
비대칭 이중특이적 항체는 일반적으로 표적 A에 특이적인 항체로부터의 중쇄/경쇄(HC/LC) 쌍 및 표적 B에 특이적인 항체로부터의 HC/LC 쌍을 포함하여 이종이중기능성 항체를 생성한다. 이와 같은 이종이중기능성 항체는 분자가 생산될 때 분자가 비생산적으로 형성된다는 문제에 직면한다. HC/LC-A:HC/LC-B가 요구되지만, 일반적으로 열역학적으로 또는 통계적으로 가능한 모든 조합 중에서 불리하다. 이 문제를 회피하기 위해 여러 가지 방식이 도입되었다. 일부 경우에, A에 대한 특이성을 갖는 항체로부터의 HC/LC 쌍 및 B에 대한 특이성을 갖는 항체로부터의 HC/LC 쌍은 HC/LC-A:HC/LC-B를 갖는 항체의 형성 확률을 증가시키기 위해 FC 영역에 대한 돌연변이를 추가로 포함한다. 이는 HC-A의 경우 FC 영역에 "놉(knob)", HC-B에 "홀(hole)" 또는 그 반대의 구조적 특징을 조작하여 HC-A와 HC-B 사이의 이종이량체 형성을 촉진함으로써 달성할 수 있다. HC-A:HC-B 이종이량체를 촉진하는 또 다른 방식은 HC-A와 HC-B의 FC 부분에 있는 아미노산 잔기를 조작하여 HC-B와 HC-A 사이의 정전기적 상호작용을 선호하는 전하쌍을 포함하는 것이다. 사슬 회합 문제를 해결하기 위한 또 다른 방식은 HC/LC 쌍 중 하나의 가변 영역을 단일쇄 결합 분자(예를 들어, VHH 또는 scFv)로 대체하는 것이다. 분자의 절반은 전형적인 HC/LC 쌍을 포함하고 다른 절반은 단일쇄 결합 분자에 융합되거나 연결된 HC 불변 영역을 포함한다. 적절한 HC/LC 페어링을 촉진하기 위해 추가의 변형이 이루어질 수 있으며, 적절한 HC/LC 쌍의 형성을 선호하도록 A 또는 B의 HC 및 LC에 대한 조작 돌연변이를 포함할 수 있다(HC/LC 쌍의 해당 불변 영역을 교환하는 것을 수반하는 CrossMab 기술). 대칭 이중특이적 항체는 이종이중기능성 분자의 형성에 의존하지 않음으로써 사슬 회합 문제를 회피한다. 이러한 예에는 다음이 포함된다: 상이한 특이성의 적층된 가변 영역을 포함하는 이중 가변 도메인 분자; 고전적인 항체 분자의 중쇄의 C-말단에 융합된 상이한 특이성의 scFv를 포함하는 IgG-scFv 분자; Ig의 Fc 영역에 의해 연결된 2개의 scFv를 포함하는 (scFV)4-FC(Fc는 이량체화되어 이중특이적, 4가 분자를 생성함); DART-Fc 및 투-인-원(two-in-one).
복합 결합 분자 또는 이중특이적 항체의 구조는 복합 결합 분자 또는 이중특이적 항체의 기능 또는 결합 특성을 변경하도록 고안되고 설계될 수 있다(예를 들어, 문헌 ["Bispecific antibodies: a mechanistic review of the pipeline." Nat Rev Drug Discovery. 2019 Aug; 18(8):585-608] 참조) (예를 들어, 문헌 ["The making of bispecific antibodies" MAbs. 2017 Feb-Mar; 9(2): 182-212)] 참조). 예를 들어, 이중특이적 항체는 다음 형식 중 하나에서 선택될 수 있다: 일반적인 경쇄 이중특이적 IgG, Fab-Fc:scFv-Fc 이중특이적 IgG, Fab-Fc-Fab:Fc 이중특이적 IgG, Fab-Fc-scFv:Fab-Fc-scFv 이중특이적 IgG, Fab-Fc-scFv:Fc 이중특이적 IgG, Fab-Fc-Fab:Fab-Fc 이중특이적 IgG, an scFv-Fab-Fc:scFv-Fab-Fc 이중특이적 IgG, Fab-Fab-Fc:Fab-Fab-Fc 이중특이적 IgG, Fab-Fc-Fab:Fab-Fc-Fab 이중특이적 IgG, 및 Fab-Fc-scFv:Fab-Fc 이중특이적 IgG.
일반 경쇄 이중특이적 IgG
일반적인 경쇄 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체가 본 발명에서 사용될 수 있다. 도 1은 일반적인 경쇄 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체를 예시한 것이다. 구조는 제1 및 제2 IgG 중쇄를 포함한다. 각각의 중쇄는 VH, CH1, CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 제1 중쇄는 VH 102, CH1 104, CH2 106 및 CH3 108을 포함한다. 제2 중쇄는 VH 112, CH1 114, CH2 116 및 CH3 118을 포함한다. 일반적인 경쇄 이중특이적 IgG 구조는 또한 VL 도메인 120 및 CL 도메인 122를 포함하는 경쇄를 포함한다. 일반적으로, 제1 중쇄는 제1 특이성을 갖는 항체의 중쇄로부터 유래된 서열을 포함할 것이며; 제2 중쇄는 제2 특이성을 갖는 항체로부터의 중쇄를 포함할 것이다. 제1 및 제2 중쇄와 쌍을 이루는 경쇄는 동일할 것이며, 특이성 또는 별도의 특이성을 갖는 항체의 경쇄로부터 유래될 수 있다. 중쇄는 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 130)을 통해 경쇄 분자에 공유적으로 커플링될 수 있다. 중쇄는 하나 이상의 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 134 및/또는 136)을 통해 또 다른 중쇄에 커플링될 수 있다. 일반적인 경쇄 이중특이적 IgG 구조는 제1 중쇄와 제2 중쇄의 커플링을 촉진하고/하거나 제1 중쇄가 또 다른 제1 중쇄에 또는 제2 중쇄가 또 다른 제2 중쇄에 커플링하는 것을 방지하는, CH3 도메인 내의 돌연변이를 추가로 포함하는 제1 및 제2 중쇄 분자를 포함할 수 있다. 돌연변이는 물리적으로(예를 들어, 입체 장애, "놉" 인투 "홀"("knob" into "hole")) 또는 생화학적으로(예를 들어, 정전기적 상호작용) 두 개의 제1 중쇄 분자 또는 두 개의 제2 중쇄 분자의 커플링을 방지할 수 있다. 예시적인 놉 인투 홀 돌연변이는 하나의 중쇄에 T366W(EU 넘버링) 및 제2 중쇄에 T366S/L368A/Y407V(EU 넘버링)를 포함할 수 있다. 제1 중쇄 분자와 제2 중쇄 분자의 커플링을 촉진하는 예시적인 돌연변이는 예를 들어 WO2009089004, US 8,642,745, US PG-PUB: US20140322756 및 문헌 ["The making of bispecific antibodies" MAbs. 2017 Feb-Mar; 9(2): 182-212]에 개시되어 있다. 일반적인 경쇄 이중특이적 IgG 구조는 또한 이에 커플링된 탄수화물 분자 140 또는 이의 추가의 변형을 포함할 수 있다.
일반적인 경쇄 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체는 B 세포 계통 표면 마커(예를 들어, CD19, CD138, IgA 또는 CD45) 및 억제성 B 세포 표면 마커(예를 들어, IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3, 또는 잠복성 TGF-베타(예를 들어, TGF-베타 LAP))를 표적으로 할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄는 B 세포 계통 표면 마커에 결합하도록 구성되고, 제2 중쇄는 억제성 B 세포 표면 마커에 결합하도록 구성된다. 일부 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19를 포함한다. 특정 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19로 구성된다. 일부 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38을 포함한다. 특정 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38로 구성된다.
일부 실시양태에서, 제1 중쇄는 CD19 결합 성분을 포함하는 VH 서열을 포함하고, 제2 중쇄는 CD38 결합 성분을 포함하는 VH 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 CD19 결합 성분은 서열 번호 201, 1, 또는 서열 번호 201의 A84 및 A108 중 어느 하나 또는 둘 모두에서의 돌연변이를 포함하는 변이체를 포함하고, 중쇄 CD38 결합 성분은 서열 번호 202, 215, 218-221을 포함한다. 특정 실시양태에서, 변이체는 돌연변이 A84S 및 A108L을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 일반적인 경쇄를 포함한다. 특정 실시양태에서, 일반적인 경쇄 서열은 CD19 결합 성분(예를 들어, 서열 번호 2)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 일반적인 경쇄 서열은 CD38 결합 성분(예를 들어, 서열 번호 4 또는 서열 번호 222)을 포함한다.
본원에서 설명되는 BS1은 CD19에 결합하도록 구성된 CD19 결합 성분 및 CD38에 결합하도록 구성된 CD38 결합 성분을 갖는 일반적인 경쇄 형식을 포함하며, 여기서 CD19 결합 성분은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고, CD38 결합 성분은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하며, 여기서 CD38 항체 또는 항원 결합 단편은 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역과 쌍을 이루는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하고, CD19 항체 또는 항원 결합 단편은 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역과 쌍을 이루는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 CD38 항체 또는 항원 결합 성분은 a) 서열 번호 71-75 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), b) 서열 번호 81-85 또는 150-155 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2); c) 서열 번호 91-95 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3); d) 서열 번호 101-105 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1); e) 서열 번호 111-115 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및/또는) f) 서열 번호 121-125 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)을 포함하고; CD19 항원 결합 성분은 g) 서열 번호 11-15 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), h) 서열 번호 21-25 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2), i) 서열 번호 31-35 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3); j) 서열 번호 101-105 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1); k) 서열 번호 111-115 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및/또는 l) 서열 번호 121-125 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD38 항원 결합 성분은 서열 P-X1-L-G-X2-A(서열 번호 156)를 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 X1 및 X2는 각각 H, Q, T, N, S, G, A, R, K, D, 또는 E로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, X1은 H이고, X2는 T이다. 일부 실시양태에서, CD19 중쇄 서열은 A84S 및/또는 A108L 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD19 경쇄는 W32H를 포함한다.
Fab-Fc:scFv-Fc 이중특이적 IgG
Fab-Fc:scFv-Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체가 본 발명에서 사용될 수 있다. 도 2는 Fab-Fc:scFv-Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체를 예시한 것이다. 구조는 제1 중쇄 분자 및 단일쇄 가변 단편을 포함하는 변형된 제2 IgG 중쇄 분자를 포함한다. 제1 중쇄는 각각 N-말단에서 C-말단으로 VH 202, CH1 204, CH2 206 및 CH3 208을 포함한다. 변형된 제2 중쇄는 각각 N-말단에서 C-말단으로 단일쇄 가변 단편(scFv) 210, CH2 216 및 CH3 218을 포함한다. 단일쇄 가변 단편(scFv)은 가변 경쇄 도메인에 상응하는 제1 도메인 212 또는 이의 단편, 가변 중쇄에 상응하는 제2 도메인 214 또는 이의 단편, 및 링커 폴리펩타이드 215를 포함할 수 있다. Fab-Fc:scFv-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 VL 도메인 220 및 CL 도메인 222를 포함하는 경쇄를 포함한다. 제1 중쇄는 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 230)을 통해 경쇄 분자에 공유적으로 커플링될 수 있다. 제1 중쇄는 하나 이상의 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 234 및/또는 236)을 통해 변형된 제2 중쇄에 커플링될 수 있다. Fab-Fc:scFv-Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 중쇄와 제2 중쇄의 커플링을 촉진하고/하거나 제1 중쇄가 또 다른 제1 중쇄에 또는 제2 중쇄가 또 다른 제2 중쇄에 커플링하는 것을 방지하는, CH3 도메인 내의 돌연변이를 추가로 포함하는 제1 및 변형된 제2 중쇄 분자를 포함할 수 있다. 돌연변이는 물리적으로(예를 들어, 입체 장애) 또는 생화학적으로(예를 들어, 정전기적 상호작용) 두 개의 제1 중쇄 분자 또는 두 개의 제2 중쇄 분자의 커플링을 방지할 수 있다. 제1 중쇄 분자와 제2 중쇄 분자의 커플링을 촉진하는 예시적인 돌연변이는 예를 들어 US PG-PUB: US20140322756 및 문헌 ["The making of bispecific antibodies" MAbs. 2017 Feb-Mar; 9(2): 182-212]에 개시되어 있다. Fab-Fc:scFv-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 이에 커플링된 탄수화물 분자 240 또는 이의 추가의 변형을 포함할 수 있다.
Fab-Fc:scFv-Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체는 B 세포 계통 표면 마커(예를 들어, CD19, CD138, IgA 또는 CD45, 예를 들어 CD19, CD138, IgA, 또는 CD45) 및 억제성 B 세포 표면 마커(예를 들어, IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3, 또는 잠복성 TGF-베타(예를 들어, TGF-베타 LAP))를 표적으로 할 수 있다. 일부 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19를 포함한다. 특정 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19로 구성된다. 일부 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38을 포함한다. 특정 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38로 구성된다.
Fab-Fc:scFv-Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄는 CD19 결합 성분을 포함하는 VH 서열을 포함하고, 제2 중쇄는 CD38 결합 성분을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD38 단일쇄 가변 단편을 포함하는 중쇄는 서열 번호 205 또는 서열 번호 206을 포함한다. 특정 실시양태에서, VL 서열은 CD19 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD38 결합 성분을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열은 항체 중쇄 및 경쇄 가변 서열에 상응하는 CD38 결합 성분, 또는 이의 CD38 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄는 CD38 결합 성분을 포함하는 VH 서열을 포함하고, 제2 중쇄는 CD19 결합 성분을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 단일쇄 가변 단편을 포함하는 중쇄는 서열 번호 203 또는 서열 번호 204 또는 서열 번호 217을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열은 항체 중쇄 및 경쇄 가변 서열에 상응하는 CD19 결합 성분, 또는 그의 CD19 결합 단편을 포함한다.
Fab-Fc:scFv-Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄는 CD38 결합 성분을 포함하는 VH 서열을 포함하고, 제2 중쇄는 CD19 결합 성분을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VL 서열은 CD38 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열은 항체 중쇄 및 경쇄 가변 서열에 상응하는 CD19 결합 성분, 또는 이의 CD19 결합 단편을 포함한다.
본원에서 설명되는 BS2는 CD19에 결합하도록 구성된 CD19 결합 성분 및 CD38에 결합하도록 구성된 CD38 결합 성분을 포함하며, 여기서 CD19 결합 성분은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고, CD38 결합 성분은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하며, CD38 항원 결합 성분은 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역과 쌍을 이루는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하는 CD38에 결합하는 Fab를 포함하고, CD19 항원 결합 성분은 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역과 쌍을 이루는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하는 CD19에 결합하는 scFv를 포함하고, CD38 결합 성분은 서열 번호 71-75 중 어느 하나에 제시된 HCDR1 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄, 서열 번호 81-85 또는 150-155 중 어느 하나에 제시된 HCDR2 아미노산 서열, 서열 번호 91-95 중 어느 하나에 제시된 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄를 포함하고; 면역글로불린 경쇄는 서열 번호 101-105 중 어느 하나에 제시된 LCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 111-115 중 어느 하나에 제시된 LCDR2 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 121-125 중 어느 하나에 제시된 LCDR3 아미노산 서열을 포함하고; CD19 결합 성분은 서열 번호 11-15 중 어느 하나에 제시된 HCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 21-25 중 어느 하나에 제시된 HCDR2 아미노산 서열, 서열 번호 31-35 중 어느 하나에 제시된 HCDR3 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 중쇄를 포함하고; 면역글로불린 경쇄는 서열 번호 41-45 중 어느 하나에 제시된 LCDR1 아미노산 서열, 서열 번호 51-55 중 어느 하나에 제시된 LCDR2 아미노산 서열, 및/또는 서열 번호 61-65 중 어느 하나에 제시된 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD38 항원 결합 성분은 서열 P-X1-L-G-X2-A(서열 번호 156)를 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 X1 및 X2는 H, Q, T, N, S, G, A, R, K, D, 또는 E로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, X1은 H이고, X2는 T이다. 일부 실시양태에서, CD19 중쇄 서열은 A84S 및/또는 A108L 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD38 경쇄는 W32H 치환을 포함한다.
Fab-Fc-Fab:Fc 이중특이적 IgG
Fab-Fc-Fab:Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 조작된 이중특이적 항체가 본원에서 사용될 수 있다. 도 3은 Fab-Fc-Fab:Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체를 예시한 것이다. 구조는 제1 중쇄 분자 및 변형된 IgG 중쇄 분자를 포함한다. 제1 중쇄는 각각 N-말단에서 C-말단으로 VH 도메인 302, CH1 도메인 304, CH2 도메인 306, CH3 도메인 308, 링커 310, 제2 VH 도메인 312, 및 제2 CH1 도메인 314를 포함한다. 변형된 중쇄는 각각 N-말단에서 C-말단으로 CH2 도메인 316 및 CH3 도메인 318을 포함한다. Fab-Fc-Fab:Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 VL 도메인 320 및 CL 도메인 322를 포함하는 제1 경쇄를 포함한다. Fab-Fc-Fab:Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 VL 도메인 324 및 CL 도메인 326을 포함하는 제2 경쇄를 포함한다. 중쇄는 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 330)을 통해 경쇄 분자에 공유적으로 커플링될 수 있다. 제1 중쇄는 또한 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 332)을 통해 제1 경쇄 분자에 공유적으로 커플링될 수 있다. 중쇄 및 경쇄는 제1 중쇄의 VH 도메인 및 CH1 도메인이 제1 경쇄의 VL 도메인 및 CL 도메인과 쌍을 이루는 방식으로 커플링될 수 있다. 제1 중쇄 및 제2 경쇄는 제1 중쇄의 제2 VH 도메인 및 제2 CH1 도메인이 제2 경쇄의 VL 도메인 및 CL 도메인과 쌍을 이루는 방식으로 커플링될 수 있다. 제1 중쇄는 하나 이상의 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 334 및/또는 336)을 통해 변형된 제2 중쇄에 커플링될 수 있다. Fab-Fc-Fab:Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 중쇄 및 제2 중쇄의 커플링을 촉진하고/하거나 제1 중쇄가 또 다른 제1 중쇄에 또는 제2 중쇄가 또 다른 제2 중쇄에 커플링하는 것을 방지하는, CH3 도메인 내의 돌연변이를 추가로 포함하는 제1 및 변형된 제2 중쇄 분자를 포함할 수 있다. 돌연변이는 물리적으로(예를 들어, 입체 장애) 또는 생화학적으로(예를 들어, 정전기적 상호작용) 두 개의 제1 중쇄 분자 또는 두 개의 제2 중쇄 분자의 커플링을 방지할 수 있다. 제1 중쇄 분자와 제2 중쇄 분자의 커플링을 촉진하는 예시적인 돌연변이는 예를 들어 US PG-PUB: US20140322756 및 문헌 ["The making of bispecific antibodies" MAbs. 2017 Feb-Mar; 9(2): 182-212]에 개시되어 있다. Fab-Fc-Fab:Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 이에 커플링된 탄수화물 분자 340 또는 이의 추가의 변형을 포함할 수 있다.
Fab-Fc-Fab:Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체는 B 세포 계통 표면 마커(예를 들어, CD19, CD138, IgA 또는 CD45, 예를 들어 CD19, CD138, IgA, 또는 CD45) 및 억제성 B 세포 표면 마커(예를 들어, IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3, 또는 잠복성 TGF-베타(예를 들어, TGF-베타 LAP))를 표적으로 할 수 있다. 일부 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19를 포함한다. 특정 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19로 구성된다. 일부 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38을 포함한다. 특정 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38로 구성된다.
Fab-Fc-Fab:Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄 VH 도메인(예를 들어, 302) 및 VL 도메인(예를 들어, 320)은 CD19 결합 성분을 포함하고, 여기서 제2 VH 도메인(예를 들어, 312) 및 VL 도메인(예를 들어, 324)은 CD38 결합 성분을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fab-Fc-Fab 중쇄는 서열 번호 207을 포함하고, Fc 중쇄는 서열 번호 208을 포함한다.
Fab-Fc-Fab:Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 제1 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄 VH 도메인(예를 들어, 302) 및 VL 도메인(예를 들어, 320)은 CD38 결합 성분을 포함하며, 여기서 제2 VH 도메인(예를 들어, 312) 및 VL 도메인(예를 들어, 324)은 CD19 결합 성분을 포함한다.
Fab-Fc-scFv:Fab-Fc-scFv 이중특이적 IgG
Fab-Fc-scFv:Fab-Fc-scFv 이중특이적 IgG 구조를 갖는 조작된 이중특이적 항체가 본원에서 사용될 수 있다. 도 4는 Fab-Fc-scFv:Fab-Fc-scFv 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체를 예시한 것이다. 구조는 두 개의 제1 중쇄 분자를 포함한다. 제1 중쇄는 각각 N-말단에서 C-말단으로 VH 도메인 402, CH1 도메인 404, CH2 도메인 406, CH3 도메인 408, 링커 410 및 단일쇄 가변 단편(scFv) 412를 포함한다. 단일쇄 가변 단편(scFv)은 가변 경쇄 도메인에 상응하는 제1 도메인 414 또는 이의 단편, 가변 중쇄에 상응하는 제2 도메인 416 또는 이의 단편, 및 제2 링커 폴리펩타이드 415를 포함할 수 있다. Fab-Fc-scFv:Fab-Fc-scFv 이중특이적 IgG 구조는 또한 VL 도메인 420 및 CL 도메인 422를 포함하는 제1 경쇄를 포함한다. 중쇄는 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 430)을 통해 경쇄 분자에 공유적으로 커플링될 수 있다. 중쇄는 하나 이상의 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 434 및/또는 436)을 통해 또 다른 중쇄에 커플링될 수 있다. Fab-Fc-scFv:Fab-Fc-scFv 이중특이적 IgG 구조는 또한 이에 결합된 탄수화물 분자 440 또는 이의 추가의 변형을 포함할 수 있다.
Fab-Fc-scFv:Fab-Fc-scFv 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체는 B 세포 계통 표면 마커(예를 들어, CD19, CD138, IgA 또는 CD45, 예를 들어 CD19, CD138, IgA, 또는 CD45) 및 억제성 B 세포 표면 마커(예를 들어, IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3, 또는 잠복성 TGF-베타(예를 들어, TGF-베타 LAP))를 표적으로 할 수 있다. 일부 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19를 포함한다. 특정 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19로 구성된다. 일부 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38을 포함한다. 특정 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38로 구성된다.
Fab-Fc-scFv:Fab-Fc-scFv 이중특이적 IgG 구조는 제1 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄 VH 도메인(예를 들어, 402) 및 VL 도메인(예를 들어, 420)은 CD19 결합 성분을 포함하고, 여기서 단일쇄 가변 단편(scFv)(예를 들어, 412) 서열은 CD38 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD38 결합 성분을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열은 항체 중쇄 및 경쇄 가변 서열에 상응하는 CD38 결합 성분, 또는 이의 CD38 결합 단편을 포함한다.
Fab-Fc-scFv:Fab-Fc-scFv 이중특이적 IgG 구조는 또한 제1 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄 VH 도메인(예를 들어, 402) 및 VL 도메인(예를 들어, 420)은 CD38 결합 성분을 포함하며, 여기서 단일쇄 가변 단편(scFv)(예를 들어, 412) 서열은 CD19 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열은 항체 중쇄 및 경쇄 가변 서열에 상응하는 CD19 결합 성분, 또는 그의 CD19 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, Fab-Fc-scFv 중쇄는 서열 번호 209를 포함한다.
Fab-Fc-scFv:Fc 이중특이적 IgG
Fab-Fc-scFv:Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 조작된 이중특이적 항체가 본원에서 사용될 수 있다. 도 5는 Fab-Fc-scFv:Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체를 예시한 것이다. 구조는 제1 중쇄 분자 및 제2 IgG 중쇄 분자를 포함한다. 제1 중쇄는 각각 N-말단에서 C-말단으로 VH 도메인 502, CH1 도메인 504, CH2 도메인 506, CH3 도메인 508, 링커 510 및 단일쇄 가변 단편(scFv) 512를 포함한다. 단일쇄 가변 단편(scFv)은 가변 경쇄 도메인에 상응하는 제1 도메인 514 또는 이의 단편, 가변 중쇄에 상응하는 제2 도메인 516 또는 이의 단편, 및 제2 링커 폴리펩타이드 515를 포함할 수 있다. Fab-Fc-scFv:Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 VL 도메인 520 및 CL 도메인 522를 포함하는 제1 경쇄를 포함한다. Fab-Fc-scFv:Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 VL 도메인 524 및 CL 도메인 526을 포함하는 제2 경쇄를 포함한다. 중쇄는 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 530)을 통해 경쇄 분자에 공유적으로 커플링될 수 있다. 중쇄는 하나 이상의 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 534 및/또는 536)을 통해 또 다른 중쇄에 커플링될 수 있다. Fab-Fc-scFv:Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 중쇄 및 제2 중쇄의 커플링을 촉진하고/하거나 제1 중쇄가 또 다른 제1 중쇄에 또는 제2 중쇄가 또 다른 제2 중쇄에 커플링하는 것을 방지하는, CH3 도메인 내의 돌연변이를 추가로 포함하는 제1 및 변형된 제2 중쇄 분자를 포함할 수 있다. 돌연변이는 물리적으로(예를 들어, 입체 장애) 또는 생화학적으로(예를 들어, 정전기적 상호작용) 두 개의 제1 중쇄 분자 또는 두 개의 제2 중쇄 분자의 커플링을 방지할 수 있다. 제1 중쇄 분자와 제2 중쇄 분자의 커플링을 촉진하는 예시적인 돌연변이는 예를 들어 US PG-PUB: US20140322756 및 문헌 ["The making of bispecific antibodies" MAbs. 2017 Feb-Mar; 9(2): 182-212]에 개시되어 있다. Fab-Fc-scFv:Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 이에 커플링된 탄수화물 분자 540 또는 이의 추가의 변형을 포함할 수 있다.
Fab-Fc-scFv:Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체는 B 세포 계통 표면 마커(예를 들어, CD19, CD138, IgA 또는 CD45, 예를 들어 CD19, CD138, IgA, 또는 CD45) 및 억제성 B 세포 표면 마커(예를 들어, IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3, 또는 잠복성 TGF-베타(예를 들어, TGF-베타 LAP))를 표적으로 할 수 있다. 일부 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19를 포함한다. 특정 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19로 구성된다. 일부 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38을 포함한다. 특정 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38로 구성된다.
Fab-Fc-scFv:Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄 VH 도메인(예를 들어, 502) 및 VL 도메인(예를 들어, 520)은 CD19 결합 성분을 포함하고, 여기서 단일쇄 가변 단편(scFv)(예를 들어, 512) 서열은 CD38 결합 성분을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD38 결합 성분을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열은 항체 중쇄 및 경쇄 가변 서열에 상응하는 CD38 결합 성분, 또는 이의 CD38 결합 단편을 포함한다
Fab-Fc-scFv:Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 제1 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄 VH 도메인(예를 들어, 502) 및 VL 도메인(예를 들어, 520)은 CD38 결합 성분을 포함하며, 여기서 단일쇄 가변 단편(scFv)(예를 들어, 512) 서열은 CD19 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열은 항체 중쇄 및 경쇄 가변 서열에 상응하는 CD19 결합 성분, 또는 그의 CD19 결합 단편을 포함한다.
Fab-Fc-Fab:Fab-Fc 이중특이적 IgG
Fab-Fc-Fab:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 조작된 이중특이적 항체가 본원에서 사용될 수 있다. 도 6은 Fab-Fc-Fab:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체를 예시한 것이다. 구조는 제1 중쇄 분자 및 제2 IgG 중쇄 분자를 포함한다. 제1 중쇄는 각각 N-말단에서 C-말단으로 VH 도메인 602, CH1 도메인 604, CH2 도메인 606, CH3 도메인 608, 링커 610, 제2 VH 도메인 612, 및 제2 CH1 도메인 614를 포함한다. 제2 중쇄는 제1 중쇄와 마찬가지로 각각 N-말단에서 C-말단으로 VH 도메인 652, CH1 도메인 654, CH2 도메인 656, 및 CH3 도메인 658을 포함한다. Fab-Fc-Fab:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 VL 도메인 620 및 CL 도메인 622를 포함하는 제1 경쇄를 포함한다. Fab-Fc-Fab:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 VL 도메인 624 및 CL 도메인 626을 포함하는 제2 경쇄를 포함한다. 중쇄는 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 630)을 통해 경쇄 분자에 공유적으로 커플링될 수 있다. 제1 중쇄 및 제1 경쇄는 제1 중쇄의 VH 도메인 및 CH1 도메인이 제1 경쇄의 VL 도메인 및 CL 도메인과 쌍을 이루는 방식으로 커플링될 수 있다. 제1 중쇄 및 제2 경쇄는 제1 중쇄의 제2 VH 도메인 및 제2 CH1 도메인이 제2 경쇄의 VL 도메인 및 CL 도메인과 쌍을 이루는 방식으로 커플링될 수 있다. 중쇄는 하나 이상의 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 634 및/또는 636)을 통해 또 다른 중쇄에 커플링될 수 있다. Fab-Fc-Fab:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 및 제2 중쇄의 커플링을 촉진하고/하거나 제1 중쇄가 또 다른 제1 중쇄에 또는 제2 중쇄가 또 다른 제2 중쇄에 커플링하는 것을 방지하는, CH3 도메인 내의 돌연변이를 추가로 포함하는 제1 및 제2 중쇄 분자를 포함할 수 있다. 돌연변이는 물리적으로(예를 들어, 입체 장애) 또는 생화학적으로(예를 들어, 정전기적 상호작용) 두 개의 제1 중쇄 분자 또는 두 개의 제2 중쇄 분자의 커플링을 방지할 수 있다. 제1 중쇄 분자와 제2 중쇄 분자의 커플링을 촉진하는 예시적인 돌연변이는 예를 들어 US PG-PUB: US20140322756 및 문헌 ["The making of bispecific antibodies" MAbs. 2017 Feb-Mar; 9(2): 182-212]에 개시되어 있다. Fab-Fc-Fab:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 이에 커플링된 탄수화물 분자 또는 이의 추가의 변형을 포함할 수 있다.
Fab-Fc-Fab:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체는 B 세포 계통 표면 마커(예를 들어, CD19, CD138, IgA 또는 CD45) 및 억제성 B 세포 표면 마커(예를 들어, IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3, 또는 잠복성 TGF-베타(예를 들어, TGF-베타 LAP))를 표적으로 할 수 있다. 일부 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19를 포함한다. 특정 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19로 구성된다. 일부 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38을 포함한다. 특정 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38로 구성된다.
Fab-Fc-Fab:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄 VH 도메인(예를 들어, 602) 및 VL 도메인(예를 들어, 620)은 CD19 결합 성분을 포함하고, 제2 VH 도메인(예를 들어, 612) 및 VL 도메인(예를 들어, 624)은 CD38 결합 성분을 포함한다.
Fab-Fc-Fab:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 제1 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄 VH 도메인(예를 들어, 602) 및 VL 도메인(예를 들어, 620)은 CD38 결합 성분을 포함하며, 여기서 제2 VH 도메인(예를 들어, 612) 및 VL 도메인(예를 들어, 624)은 CD19 결합 성분을 포함한다.
scFv-Fab-Fc:scFv-Fab-Fc 이중특이적 IgG
scFv-Fab-Fc:scFv-Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 조작된 이중특이적 항체가 본원에서 사용될 수 있다. 도 7은 scFv-Fab-Fc:scFv-Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체를 예시한 것이다. 구조는 두 개의 제1 중쇄 분자로 구성된다. 제1 중쇄는 단일쇄 가변 단편(scFv) 712, 링커 710, VH 도메인 702, CH1 도메인 704, CH2 도메인 706 및 CH3 도메인 708을 각각 N-말단에서 C-말단으로 포함한다. 단일쇄 가변 단편(scFv)은 가변 경쇄 도메인에 상응하는 제1 도메인 714 또는 이의 단편, 가변 중쇄에 상응하는 제2 도메인 716 또는 이의 단편, 및 제2 링커 폴리펩타이드 715를 포함할 수 있다. scFv-Fab-Fc:scFv-Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 VL 도메인 720 및 CL 도메인 722를 포함하는 제1 경쇄를 포함한다. 중쇄는 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 730)을 통해 경쇄 분자에 공유적으로 커플링될 수 있다. 중쇄는 하나 이상의 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 734 및/또는 736)을 통해 또 다른 중쇄에 커플링될 수 있다. scFv-Fab-Fc:scFv-Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 이에 결합된 탄수화물 분자 740 또는 이의 추가의 변형을 포함할 수 있다.
scFv-Fab-Fc:scFv-Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체는 B 세포 계통 표면 마커(예를 들어, CD19, CD138, IgA 또는 CD45) 및 억제성 B 세포 표면 마커(예를 들어, IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3, 또는 잠복성 TGF-베타(예를 들어, TGF-베타 LAP))를 표적으로 할 수 있다. 일부 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19를 포함한다. 특정 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19로 구성된다. 일부 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38을 포함한다. 특정 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38로 구성된다.
scFv-Fab-Fc:scFv-Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄 VH 도메인(예를 들어, 702) 및 VL 도메인(예를 들어, 720)은 CD19 결합 성분을 포함하고, 여기서 단일쇄 가변 단편(scFv)(예를 들어, 712) 서열은 CD38 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD38 결합 성분을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열은 항체 중쇄 및 경쇄 가변 서열에 상응하는 CD38 결합 성분, 또는 이의 CD38 결합 단편을 포함한다.
scFv-Fab-Fc:scFv-Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 제1 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄 VH 도메인(예를 들어, 702) 및 VL 도메인(예를 들어, 720)은 CD38 결합 성분을 포함하며, 여기서 단일쇄 가변 단편(scFv)(예를 들어, 712) 서열은 CD19 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열은 항체 중쇄 및 경쇄 가변 서열에 상응하는 CD19 결합 성분, 또는 이의 CD19 결합 단편을 포함한다.
Fab-Fab-Fc:Fab-Fab-Fc 이중특이적 IgG
Fab-Fab-Fc:Fab-Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 조작된 이중특이적 항체가 본원에서 사용될 수 있다. 도 8은 Fab-Fab-Fc:Fab-Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체를 예시한 것이다. 구조는 두 개의 중쇄 분자를 포함한다. 중쇄는 추가의 VH 도메인 812, 및 추의가 CH1 도메인 814, 링커 810, VH 도메인 802, CH1 도메인 804, CH2 도메인 806 및 CH3 도메인 808을 각각 N-말단에서 C-말단으로 포함한다. Fab-Fab-Fc:Fab-Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 VL 도메인 820 및 CL 도메인 822를 포함하는 제1 경쇄를 포함한다. Fab-Fab-Fc:Fab-Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 VL 도메인 824 및 CL 도메인 826을 포함하는 제2 경쇄를 포함한다. 중쇄 분자는 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 830)을 통해 경쇄 분자에 공유적으로 커플링될 수 있다. 중쇄 및 제1 경쇄는 중쇄의 VH 도메인 및 CH1 도메인이 제1 경쇄의 VL 도메인 및 CL 도메인과 쌍을 이루는 방식으로 커플링될 수 있다. 중쇄 및 제2 경쇄는 중쇄의 추가의 VH 도메인 및 추가의 CH1 도메인이 제2 경쇄의 VL 도메인 및 CL 도메인과 쌍을 이루는 방식으로 커플링될 수 있다. 중쇄는 하나 이상의 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 834 및/또는 836)을 통해 변형된 제2 중쇄에 커플링될 수 있다. Fab-Fab-Fc:Fab-Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 이에 커플링된 탄수화물 분자 840 또는 이의 추가의 변형을 포함할 수 있다.
Fab-Fab-Fc:Fab-Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체는 B 세포 계통 표면 마커(예를 들어, CD19, CD138, IgA 또는 CD45) 및 억제성 B 세포 표면 마커(예를 들어, IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3, 또는 잠복성 TGF-베타(예를 들어, TGF-베타 LAP))를 표적으로 할 수 있다. 일부 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19를 포함한다. 특정 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19로 구성된다. 일부 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38을 포함한다. 특정 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38로 구성된다.
Fab-Fab-Fc:Fab-Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 VH 도메인(예를 들어, 802) 및 VL 도메인(예를 들어, 820)은 CD19 결합 성분을 포함하고, 제2 VH 도메인(예를 들어, 812) 및 VL 도메인(예를 들어, 824)은 CD38 결합 성분을 포함한다.
Fab-Fab-Fc:Fab-Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 제1 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, VH 도메인(예를 들어, 802) 및 VL 도메인(예를 들어, 820)은 CD38 결합 성분을 포함하며, 여기서 제2 VH 도메인(예를 들어, 812) 및 VL 도메인(예를 들어, 824)은 CD19 결합 성분을 포함한다.
Fab-Fc-Fab:Fab-Fc-Fab 이중특이적 IgG
Fab-Fc-Fab:Fab-Fc-Fab 이중특이적 IgG 구조를 갖는 조작된 이중특이적 항체가 본원에서 사용될 수 있다. 도 9는 Fab-Fc-Fab:Fab-Fc-Fab 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체를 예시한 것이다. 구조는 두 개의 중쇄 분자 및 두 개의 경쇄 분자를 포함한다. 중쇄는 각각 N-말단에서 C-말단으로 VH 도메인 902, CH1 도메인 904, CH2 도메인 906, CH3 도메인 908, 링커 910, 제2 VH 도메인 912, 및 제2 CH1 도메인 914를 포함한다. Fab-Fc-Fab:Fab-Fc-Fab 이중특이적 IgG 구조는 또한 VL 도메인 920 및 CL 도메인 922를 포함하는 제1 경쇄를 포함한다. Fab-Fc-Fab:Fab-Fc-Fab 이중특이적 IgG 구조는 또한 VL 도메인 924 및 CL 도메인 926을 포함하는 제2 경쇄를 포함한다. 중쇄는 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 930)을 통해 경쇄 분자에 공유적으로 커플링될 수 있다. 중쇄 및 제1 경쇄는 중쇄의 VH 도메인 및 CH1 도메인이 제1 경쇄의 VL 도메인 및 CL 도메인과 쌍을 이루는 방식으로 커플링될 수 있다. 중쇄 및 제2 경쇄는 중쇄의 제2 VH 도메인 및 제2 CH1 도메인이 제2 경쇄의 VL 도메인 및 CL 도메인과 쌍을 이루는 방식으로 커플링될 수 있다. 중쇄는 또한 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 934 및 936)을 통해 또 다른 중쇄 분자에 공유적으로 커플링될 수 있다. Fab-Fc-Fab:Fab-Fc-Fab 이중특이적 IgG 구조는 또한 이에 결합된 탄수화물 분자 940 또는 이의 추가의 변형을 포함할 수 있다.
Fab-Fc-Fab:Fab-Fc-Fab 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체는 B 세포 계통 표면 마커(예를 들어, CD19, CD138, IgA 또는 CD45) 및 억제성 B 세포 표면 마커(예를 들어, IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3, 또는 잠복성 TGF-베타(예를 들어, TGF-베타 LAP))를 표적으로 할 수 있다. 일부 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19를 포함한다. 특정 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19로 구성된다. 일부 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38을 포함한다. 특정 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38로 구성된다.
Fab-Fc-Fab:Fab-Fc-Fab 이중특이적 IgG 구조는 제1 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 VH 도메인(예를 들어, 902) 및 VL 도메인(예를 들어, 920)은 CD19 결합 성분을 포함하고, 제2 VH 도메인(예를 들어, 912) 및 VL 도메인(예를 들어, 924)은 CD38 결합 성분을 포함한다.
Fab-Fc-Fab:Fab-Fc-Fab 이중특이적 IgG 구조는 또한 제1 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, VH 도메인(예를 들어, 902) 및 VL 도메인(예를 들어, 920)은 CD38 결합 성분을 포함하며, 여기서 제2 VH 도메인(예를 들어, 912) 및 VL 도메인(예를 들어, 924)은 CD19 결합 성분을 포함한다.
Fab-Fc-scFv:Fab-Fc 이중특이적 IgG
Fab-Fc-scFv:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 조작된 이중특이적 항체가 본원에서 사용될 수 있다. 도 10은 Fab-Fc-scFv:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체를 예시한 것이다. 구조는 제1 중쇄 분자 및 제2 IgG 중쇄 분자를 포함한다. 제1 중쇄는 각각 N-말단에서 C-말단으로 VH 도메인 1002, CH1 도메인 1004, CH2 도메인 1006, CH3 도메인 1008, 링커 1010 및 단일쇄 가변 단편(scFv) 1012를 포함한다. 단일쇄 가변 단편(scFv)은 가변 경쇄 도메인 또는 이의 단편에 상응하는 제1 도메인 1014, 가변 중쇄 또는 이의 단편에 상응하는 제2 도메인 1016, 및 제2 링커 폴리펩타이드 1015를 포함할 수 있다. 제2 중쇄는 제1 중쇄와 마찬가지로 각각 N-말단에서 C-말단으로 VH 도메인 1002, CH1 도메인 1004, CH2 도메인 1004 및 CH3 도메인 1008을 포함한다. Fab-Fc-scFv:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 VL 도메인 1020 및 CL 도메인 1022를 포함하는 제1 경쇄를 포함한다. 중쇄는 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 1030)을 통해 경쇄 분자에 공유적으로 커플링될 수 있다. 중쇄는 공유 결합(예를 들어, 디설파이드 결합 1034 및/또는 1036)을 통해 또 다른 중쇄 분자에 커플링될 수 있다. Fab-Fc-scFv:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 및 제2 중쇄의 커플링을 촉진하고/하거나 제1 중쇄가 또 다른 제1 중쇄에 또는 제2 중쇄가 또 다른 제2 중쇄에 커플링하는 것을 방지하는, CH3 도메인 내의 돌연변이를 추가로 포함하는 제1 및 제2 중쇄 분자를 포함할 수 있다. 돌연변이는 물리적으로(예를 들어, 입체 장애) 또는 생화학적으로(예를 들어, 정전기적 상호작용) 두 개의 제1 중쇄 분자 또는 두 개의 제2 중쇄 분자의 커플링을 방지할 수 있다. 제1 중쇄 분자와 제2 중쇄 분자의 커플링을 촉진하는 예시적인 돌연변이는 예를 들어 US PG-PUB: US20140322756 및 문헌 ["The making of bispecific antibodies" MAbs. 2017 Feb-Mar; 9(2): 182-212]에 개시되어 있다. Fab-Fc-scFv:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 이에 결합된 탄수화물 분자 1040 또는 이의 추가의 변형을 포함할 수 있다.
Fab-Fc-scFv:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체는 B 세포 계통 표면 마커(예를 들어, CD19, CD138, IgA 또는 CD45) 및 억제성 B 세포 표면 마커(예를 들어, IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3, 또는 잠복성 TGF-베타(예를 들어, TGF-베타 LAP))를 표적으로 할 수 있다. 일부 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19를 포함한다. 특정 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19로 구성된다. 일부 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38을 포함한다. 특정 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38로 구성된다.
Fab-Fc-scFv:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄 VH 도메인(예를 들어, 1002) 및 VL 도메인(예를 들어, 1020)은 CD19 결합 성분을 포함하고, 단일쇄 가변 단편(scFv)(예를 들어, 1012) 서열은 CD38 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD38 결합 성분을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열은 항체 중쇄 및 경쇄 가변 서열에 상응하는 CD38 결합 성분, 또는 이의 CD38 결합 단편을 포함한다.
Fab-Fc-scFv:Fab-Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 제1 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄 VH 도메인(예를 들어, 1002) 및 VL 도메인(예를 들어, 1020)은 CD38 결합 성분을 포함하며, 여기서 단일쇄 가변 단편(scFv)(예를 들어, 1012) 서열은 CD19 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열은 항체 중쇄 및 경쇄 가변 서열에 상응하는 CD19 결합 성분, 또는 이의 CD19 결합 단편을 포함한다.
scFv-Fab-Fc:Fc 이중특이적 IgG
scFv-Fab-Fc:Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 조작된 이중특이적 항체가 본원에서 사용될 수 있다. 도 11은 scFv-Fab-Fc:Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체를 예시한 것이다. 구조는 scFv, VH 및 Fc 영역을 포함하는 제1 중쇄 분자 및 Fc를 포함하는 제2 중쇄 분자를 포함한다. scFv-Fab-Fc:Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 및 제2 중쇄의 커플링을 촉진하고/하거나 제1 중쇄가 또 다른 제1 중쇄에 또는 제2 중쇄가 또 다른 제2 중쇄에 커플링하는 것을 방지하는, CH3 도메인 내의 돌연변이를 추가로 포함하는 제1 및 제2 중쇄 분자를 포함할 수 있다. 돌연변이는 물리적으로(예를 들어, 놉 인 홀 구조) 또는 생화학적으로(예를 들어, 정전기적 상호작용) 제1 중쇄 분자의 제2 중쇄 분자에 대한 회합을 촉진할 수 있다. scFv-Fab-Fc:Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 항원 결합 부위를 생성하는 제1 중쇄 분자와 회합된 경쇄 분자를 포함한다. 제2 항원 결합 부위는 제1 중쇄의 N-말단부에 커플링된 scFv 단편에 의해 제공된다. 제1 중쇄 분자와 제2 중쇄 분자의 커플링을 촉진하는 예시적인 돌연변이는 예를 들어 US PG-PUB: US20140322756 및 문헌 ["The making of bispecific antibodies" MAbs. 2017 Feb-Mar; 9(2): 182-212]에 개시되어 있다. scFv-Fab-Fc:Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 이에 커플링된 탄수화물 분자 1140 또는 이의 추가의 변형을 포함할 수 있다.
scFv-Fab-Fc:Fc 이중특이적 IgG 구조를 갖는 이중특이적 항체는 B 세포 계통 표면 마커(예를 들어, CD19, CD138, IgA 또는 CD45) 및 억제성 B 세포 표면 마커(예를 들어, IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3, 또는 잠복성 TGF-베타(예를 들어, TGF-베타 LAP))를 표적으로 할 수 있다. 일부 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19를 포함한다. 특정 실시양태에서, B 세포 계통 표면 마커는 CD19로 구성된다. 일부 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38을 포함한다. 특정 실시양태에서, 억제성 B 세포 표면 마커는 CD38로 구성된다.
scFv-Fab-Fc:Fc 이중특이적 IgG 구조는 제1 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제1 중쇄 VH 도메인 및 VL 도메인은 CD19 결합 성분을 포함하고, 여기서 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열은 CD38 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열은 항체 중쇄 및 경쇄 가변 서열에 상응하는 CD38 결합 성분, 또는 이의 CD38 결합 단편을 포함한다.
scFv-Fab-Fc:Fc 이중특이적 IgG 구조는 또한 제1 항원 결합 부위가 CD38을 표적화하고 제2 항원 결합 부위가 CD19를 표적화하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 중쇄 VH 도메인 및 VL 도메인은 CD38 결합 성분을 포함하며, 여기서 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열은 CD19 결합 성분을 포함한다. 특정 실시양태에서, CD19 결합 성분을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열은 항체 중쇄 및 경쇄 가변 서열에 상응하는 CD19 결합 성분, 또는 이의 CD19 결합 단편을 포함한다.
특정 실시양태에서, 제1 중쇄 분자는 서열 번호 212에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 중쇄 분자는 서열 번호 212에 제시된 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 경쇄 분자는 서열 번호 213에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 경쇄 분자는 서열 번호 213에 제시된 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 제2 중쇄 분자는 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 중쇄 분자는 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
Fc 변이체
일부 실시양태에서, 하나 이상의 아미노산 변형이 인간 또는 인간화 항체의 결정 가능 단편(Fc) 영역에 도입되어 Fc 영역 변이체가 생성된다. Fc 영역은 힌지 영역, CH2 도메인, CH3 도메인, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형(예를 들어, 치환, 부가 또는 결실)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열(예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 Fc 영역에 적어도 하나의 아미노산 변형을 포함한다. 또한, 아미노산 변형을 조합하는 것도 유용하다. 예를 들어, 변이체 Fc 영역은 그 안에, 예를 들어 본원에서 확인된 특정 Fc 영역 위치에 2개, 3개, 4개, 5개 등의 치환을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에서 설명되는 항체는 인간 IgG와 비교하여 감소된 이펙터 기능을 갖는다. 이펙터 기능은 일반적으로 항체 Fc 영역과 Fc 수용체 또는 리간드의 상호작용으로 인해 발생하는 생물학적 사건을 의미한다. 비제한적 이펙터 기능에는 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), Fc 수용체 결합, 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC), 항체 의존성 세포 식세포 작용(ADCP), 사이토카인 분비, 항원 제시 세포에 의한 면역 복합체 매개 항원 흡수, 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체)의 하향 조절 및 B 세포 활성화가 포함된다. 일부 경우에, 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)은 Fc 수용체를 발현하는 비특이적 세포독성 세포(예를 들어, 자연 살해 세포, 호중구, 대식세포)가 표적 세포에 결합된 항체를 인식하여 결과적으로 표적 세포의 용해를 유발하는 세포 매개 반응을 의미한다. 일부 경우에, 보체 의존성 세포독성(CDC)은 보체의 존재 하에 표적 세포가 용해되는 것을 의미하며, 여기서 보체 작용 경로는 표적과 결합된 항체에 C1q가 결합함으로써 시작된다.
특정 경우에, 본원에서 설명되는 항체의 이펙터 기능을 감소시키는 것이 유익하다. 일부 경우에, Fc 영역의 변형은 (a) 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)이 감소하고/하거나, (b) 보체 매개 세포독성(CDC)이 감소하고/하거나, (c) C1q에 대한 친화도가 감소한 Fc 변이체를 생성한다. 일부 실시양태에서, Fc 영역은 다음 위치에서 하나 이상의 아미노산을 변형함으로써 항체 의존성 세포 독성(ADCC)을 감소시키고/시키거나, 항체 의존성 세포 매개 식세포 작용(ADCP)을 감소시키고/시키거나, 보체 매개 세포독성(CDC)을 감소시키고/시키거나 C1q에 대한 친화도를 감소시키기 위해 변형된다: 234, 235, 236, 238, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 262, 263, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 313, 315, 320, 322, 324, 325, 326, 327, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 433, 434, 435, 436, 437, 438 또는 439(카바트 넘버링). 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 표 1로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 표 1의 돌연변이 중 하나 이상을 포함한다.
관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 검정의 비제한적인 예는 미국 특허 번호 5,500,362 및 5,821,337에 기술되어 있다. 대안적으로, 비방사성 검정법이 사용될 수 있다(예를 들어, ACTI™ 및 CytoTox 96® 비방사성 세포독성 검정). 이러한 검정에 유용한 이펙터 세포에는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 단핵구, 대식세포 및 자연 살해(NK) 세포가 포함된다.
일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 비변이체 Fc 영역을 포함하는 항체, 즉 동일한 서열 동일성을 갖지만 ADCC를 감소시키는 치환(들)을 갖는 항체(예를 들어, 인간 IgG1)에 비해 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70% 또는 그 초과로 감소된 ADCC를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 비변이체 Fc 영역을 포함하는 항체, 즉 동일한 서열 동일성을 갖지만 CDC를 감소시키는 치환(들)을 갖는 항체(예를 들어, 인간 IgG1)에 비해 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70% 또는 그 초과로 감소된 CDC를 나타낸다.
특정 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 약 10% 내지 약 100% 만큼 감소된 ADCC를 나타낸다. 특정 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 약 10% 내지 약 20%, 약 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 40%, 약 10% 내지 약 50%, 약 10% 내지 약 60%, 약 10% 내지 약 70%, 약 10% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 90%, 약 10% 내지 약 100%, 약 20% 내지 약 30%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 50%, 약 20% 내지 약 60%, 약 20% 내지 약 70%, 약 20% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 100%, 약 30% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 60%, 약 30% 내지 약 70%, 약 30% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 90%, 약 30% 내지 약 100%, 약 40% 내지 약 50%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 70%, 약 40% 내지 약 80%, 약 40% 내지 약 90%, 약 40% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 100%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 100%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 100%, 또는 약 90% 내지 약 100% 감소된 ADCC를 나타낸다. 특정 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 또는 약 100% 감소된 ADCC를 나타낸다. 특정 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 적어도 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 또는 약 100% 감소된 ADCC를 나타낸다.
특정 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 약 10% 내지 약 100% 감소된 CDC를 나타낸다. 특정 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 약 10% 내지 약 20%, 약 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 40%, 약 10% 내지 약 50%, 약 10% 내지 약 60%, 약 10% 내지 약 70%, 약 10% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 90%, 약 10% 내지 약 100%, 약 20% 내지 약 30%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 50%, 약 20% 내지 약 60%, 약 20% 내지 약 70%, 약 20% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 100%, 약 30% 내지 약 40%, 약 30% 내지 약 50%, 약 30% 내지 약 60%, 약 30% 내지 약 70%, 약 30% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 90%, 약 30% 내지 약 100%, 약 40% 내지 약 50%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 70%, 약 40% 내지 약 80%, 약 40% 내지 약 90%, 약 40% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 60%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 100%, 약 60% 내지 약 70%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 100%, 약 70% 내지 약 80%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 100%, 또는 약 90% 내지 약 100% 감소된 CDC를 나타낸다. 특정 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 또는 약 100% 감소된 CDC를 나타낸다. 특정 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 적어도 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 또는 약 90% 감소된 CDC를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 야생형 인간 IgG1과 비교하여 감소된 이펙터 기능을 나타낸다. 특정 경우에, ADCC 및/또는 CDC를 감소시키는 IgG1의 Fc 돌연변이의 비제한적 예에는 IgG1의 위치 231, 232, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 264, 265, 267, 269, 270, 297, 299, 318, 320, 322, 325, 327, 328, 329, 330, 및 331 중 하나 이상의 위치에 치환을 포함하고, 여기서 불변 영역의 넘버링 시스템은 카바트에서 제시한 EU 인덱스의 넘버링 시스템이다.
일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 N297A 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 N297Q 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 N297D 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 D265A 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 S228P 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 L235A 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 L237A 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 L234A 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 E233P 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 L234V 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 C236 결실을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 P238A 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 A327Q 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 P329A 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 P329G 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 L235E 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 P331S 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 L234F 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 235G 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 235Q 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 235R 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 235S 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 236F 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 236R 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 237E 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 237K 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 237N 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 237R 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 238A 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 238E 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 238G 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 238H 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 238I 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 238V 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 238W 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 238Y 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 248A 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 254D 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 254E 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 254G 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 254H 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 254I 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 254N 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 254P 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 254Q 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 254T 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 254V 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 255N 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 256H 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 256K 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 256R 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 256V 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 264S 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 265H 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 265K 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 265S 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 265Y 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 267G 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 267H 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 267I 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 267K 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 268K 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 269N 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 269Q 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 270A 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 270G 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 270M 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 270N 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 271T 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 272N 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 279F 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 279K 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 279L 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 292E 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 292F 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 292G 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 292I 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 293S 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 301W 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 304E 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 311E 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 311G 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 311S 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 316F 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 327T 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 328V 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 329Y 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 330R 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 339E 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 339L 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 343I 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 343V 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 373A 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 373G 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 373S 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 376E 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 376W 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 376Y 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 380D 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 카바트 넘버링 시스템에 따라. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 382D 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 382P 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 385P 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 424H 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 424M 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 424V 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 434I 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 438G 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 439E 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 439H 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 439Q 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 440A 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 440D 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 440E 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 440F 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 440M 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 440T Fc 영역 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 440V 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링에 따라 L234A, L235E, G237A, A330S 및/또는 P331S를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 E233P를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 S228P 및 L235E를 포함하는 IgG4 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 L235E를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 L234A 및 L235A를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 L234A, L235A 및 G237A를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 L234A, L235A, P329G를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 L234F, L235E 및 P331S를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 L234A, L235E 및 G237A를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 L234A, L235E, G237A 및 P331S를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 L234A, L235A, G237A, P238S, H268A, A330S 및 P331S(IgG1)를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 L234A, L235A 및 P329A를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 G236R 및 L328R을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 G237A를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 F241A를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 V264A를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 D265A를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 D265A 및 N297A를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 D265A 및 N297G를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 D270A를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 N297A를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 N297G를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 N297D를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 N297Q를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 P329A를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 P329G를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 P329R을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 A330L을 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 P331A를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 P331S를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 IgG2 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 IgG4 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 S228P를 포함하는 IgG4 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 S228P, F234A 및 L235A를 포함하는 IgG4 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 IgG2-IgG4 교차 하위 클래스(IgG2/G4) Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 IgG2-IgG3 교차 하위 클래스 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 H268Q, V309L, A330S 및 P331S를 포함하는 IgG2 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S 및 P331S를 포함하는 IgG2 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 고만노스 글리코실화를 포함하는 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 S228P 치환을 포함하는 IgG4 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 A330S 치환을 포함하는 IgG4 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 P331S 치환을 포함하는 IgG4 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 A330S 치환을 포함하는 IgG2 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 P331S 치환을 포함하는 IgG2 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 234A 치환을 포함하는 IgG2 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 카바트 넘버링 시스템에 따라 237A 치환을 포함하는 IgG2 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 IgG1 Fc 영역을 포함하고, 여기서 하나 이상의 돌연변이는 다음을 포함한다: 카바트 넘버링에 따른 (a) 297A, 297Q, 297G, 또는 297D, (b) 279F, 279K, 또는 279L, (c) 228P, (d) 235A, 235E, 235G, 235Q, 235R, 또는 235S, (e) 237A, 237E, 237K, 237N, 또는 237R, (f) 234A, 234V, 또는 234F, (g) 233P, (h) 328A, (i) 327Q 또는 327T, (j) 329A, 329G, 329Y, 또는 329R, (k) 331S, (l) 236F 또는 236R, (m) 238A, 238E, 238G, 238H, 238I, 238V, 238W, 또는 238Y, (n) 248A, (o) 254D, 254E, 254G, 254H, 254I, 254N, 254P, 254Q, 254T, 또는 254V, (p) 255N, (q) 256H, 256K, 256R, 또는 256V, (r) 264S, (s) 265H, 265K, 265S, 265Y, 또는 265A, (t) 267G, 267H, 267I, 또는 267K, (u) 268K, (v) 269N 또는 269Q, (w) 270A, 270G, 270M, 또는 270N, (x) 271T, (y) 272N, (z) 292E, 292F, 292G, 또는 292I, (aa) 293S, (bb) 301W, (cc) 304E, (dd) 311E, 311G, 또는 311S, (ee) 316F, (ff) 328V, (gg) 330R, (hh) 339E 또는 339L, (ii) 343I 또는 343V, (jj) 373A, 373G, 또는 373S, (kk) 376E, 376W, 또는 376Y, (ll) 380D, (mm) 382D 또는 382P, (nn) 385P, (oo) 424H, 424M, 또는 424V, (pp) 434I, (qq) 438G, (rr) 439E, 439H, 또는 439Q, (ss) 440A, 440D, 440E, 440F, 440M, 440T, 또는 440V, (tt) K322A, (uu) L235E, (vv) L234A 및 L235A, (ww) L234A, L235A, 및 G237A, (xx) L234A, L235A, 및 P329G, (yy) L234F, L235E, 및 P331S, (zz) L234A, L235E, 및 G237A, (aaa) L234A, L235E, G237A, 및 P331S, (bbb) L234A, L235A, G237A, P238S, H268A, A330S, 및 P331S, (ccc) L234A, L235A, 및 P329A, (ddd) G236R 및 L328R, (eee) G237A, (fff) F241A, (ggg) V264A, (hhh) D265A, (iii) D265A 및 N297A, (jjj) D265A 및 N297G, (kkk) D270A, (lll) A330L, (mmm) P331A 또는 P331S, 또는 (nnn) E233P, (ooo) L234A, L235E, G237A, A330S, 및 P331S 또는 (ppp) (a) - (uu)의 임의의 조합.
일부 실시양태에서, 변이체 Fc 영역은 서열 번호 311에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 복합 결합 분자에서, CD19 항원 결합 성분은 서열 번호 301 또는 304에 제시된 중쇄 면역글로불린 서열을 포함하고, CD38 결합 성분은 서열 번호 302, 303, 305-310에 제시된 중쇄 면역글로불린 서열을 포함한다.
프레임워크 영역
중쇄 및 경쇄의 프레임워크 영역 내에 만들어진 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀(reversion)는 본원에서 설명되는 CD19 및 CD38 결합 분자의 약동학적 및 약력학적 특성의 개선을 위해 유용할 수 있다. 특정 예에서, 중쇄 및/또는 경쇄 내에 만들어진 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀는 CD19 및 CD38 결합 분자(예를 들어, 본원에서 설명되는 이중특이적 항체)의 안정성을 개선한다. 특정 예에서, 중쇄 및/또는 경쇄 내에 만들어진 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀는 CD19 및 CD38 결합 분자(예를 들어, 본원에서 설명되는 이중특이적 항체)의 면역원성을 감소시킨다. 따라서, 일부 실시양태에서, 중쇄 및/또는 경쇄의 프레임워크 영역은 1, 2, 3, 4, 5, 8 또는 10개의 돌연변이 또는 생식계열로의 복귀를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 및/또는 경쇄의 프레임워크 영역은 1개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 10개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 및/또는 경쇄의 프레임워크 영역은 적어도 1개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 및/또는 경쇄의 프레임워크 영역은 최대 10개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 및/또는 경쇄의 프레임워크 영역은 1개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 2개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 1개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 3개의 돌연변이 또는 생식계열로의 복귀, 1개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 4개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 1개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 5개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 1개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 8개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 1개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 10개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 2개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 3개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 2개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 4개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 2개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 5개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 2개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 8개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 2개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 10개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 3개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 4개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 3개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 5개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 3개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 8개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 3개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 10개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 4개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 5개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 4개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 8개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 4개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 10개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 5개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 8개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 5개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 10개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 8개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀 내지 10개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 및/또는 경쇄의 프레임워크 영역은 1개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 2개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 3개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 4개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 5개의 돌연변이 또는 생식계열로의 복귀, 8개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀, 또는 10개의 돌연변이 또는 생식계열 서열로의 복귀를 포함한다. 일부 실시양태에서, CD38 결합 모이어티는 서열 번호 5에 제시된 중쇄 프레임워크 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD 결합 모이어티는 서열 번호 6 또는 7에 제시된 중쇄 프레임워크 영역을 포함한다.
약제학적으로 허용되는 부형제, 담체 및 희석제
본 개시내용의 복합 결합 분자를 포함하는 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제, 담체 및 희석제를 포함하는 약제학적 조성물에 포함된다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 멸균 및/또는 등장성 용액에 현탁되어 투여된다. 특정 실시양태에서, 용액은 약 0.9% NaCl을 포함한다. 특정 실시양태에서, 용액은 약 5.0%의 덱스트로스를 포함한다. 특정 실시양태에서, 용액은 완충제, 예를 들어 아세테이트, 시트레이트, 히스티딘, 숙시네이트, 포스페이트, 중탄산염 및 하이드록시메틸아미노메탄(Tris); 계면활성제, 예를 들어 폴리소르베이트 80(트윈(Tween) 80), 폴리소르베이트 20(트윈 20) 및 폴록사머 188; 폴리올/디사카라이드/폴리사카라이드, 예를 들어 글루코스, 덱스트로스, 만노스, 만니톨, 소르비톨, 수크로스, 트레할로스 및 덱스트란 40; 아미노산, 예를 들어 글리신 또는 아르기닌; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산, 메티오닌; 또는 킬레이팅제, 예를 들어 EDTA 또는 EGTA 중 하나이상을 추가로 포함한다.
항체 투여를 위한 피하 제제는 완충제, 예를 들어 아세테이트, 시트레이트, 히스티딘, 숙시네이트, 포스페이트, 중탄산염 및 하이드록시메틸아미노메탄(Tris); 계면활성제, 예를 들어 폴리소르베이트 80(트윈 80), 폴리소르베이트 20(트윈 20) 및 폴록사머 188; 폴리올/디사카라이드/폴리사카라이드, 예를 들어, 글루코스, 덱스트로스, 만노스, 만니톨, 소르비톨, 수크로스, 트레할로스 및 덱스트란 40; 아미노산, 예를 들어 글리신 또는 아르기닌; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산, 메티오닌; 또는 킬레이팅제, 예를 들어 EDTA 또는 EGTA 중 하나이상을 추가로 포함한다. 추가로, 히알루로니다제와 같이 주사 부위에서 통증을 완화시키는 화합물 또는 분자가 예를 들어 약 2,000 U/ml 내지 약 12,000 U/ml의 농도로 포함될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 복합 결합 분자는 동결건조되어 운송/보관되고, 투여 전에 재구성된다. 특정 실시양태에서, 동결건조된 항체 제제는 만니톨, 소르비톨, 수크로스, 트레할로스, 덱스트란 40 또는 이들의 조합과 같은 증량제를 포함한다. 동결건조된 제제는 유리 또는 기타 적합한 비반응성 물질로 구성된 바이알에 포함될 수 있다. 재구성 여부에 관계없이 제제화될 때, 항체는 일반적으로 7.0 미만의 특정 pH에서 완충될 수 있다. 특정 실시양태에서, pH는 4.5 내지 6.5, 4.5 내지 6.0, 4.5 내지 5.5, 4.5 내지 5.0, 또는 5.0 내지 6.0일 수 있다.
또한, 적합한 용기에 본원에서 설명되는 복합 결합 분자 중 하나 이상, 및 사용 설명서, 희석제, 부형제, 담체 및 투여용 장치로부터 선택되는 하나 이상의 추가의 성분을 포함하는 키트가 본원에서 설명된다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 약제학상 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제 및 본 개시내용의 복합 결합 분자를 혼합하는 것을 포함하는 암 치료제의 제조 방법이 본원에 기재되어 있다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 하나 이상의 항체를 동결건조시키는 것을 포함하는, 보관 또는 운송을 위한 암 치료제의 제조 방법이 본원에 기재되어 있다.
생산 및 제조
본원에서 설명되는 복합 결합 분자(예를 들어, 이중특이적 항체)를 코딩하는 핵산은 세포를 감염, 형질감염, 형질전환시키거나 또는 핵산의 형질전환에 적합하도록 만들어, 상업적 또는 치료 용도의 복합 결합 분자의 생산을 가능하게 하기 위해 사용될 수 있다. 대규모 세포 배양물로부터 항체를 생산하기 위한 표준 세포주 및 방법은 관련 기술 분야에 알려져 있다. 예를 들어, 문헌 [Li et al., "Cell culture processes for monoclonal antibody production." Mabs. 2010 Sep-Oct; 2(5): 466-477]을 참조한다.
특정 실시양태에서, 핵산 서열은 본원에 개시된 복합 결합 분자 또는 이중특이적 항체를 코딩한다. 특정 실시양태에서, 복합 결합 분자를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 진핵생물 조절 서열에 작동 가능하게 커플링된다. 일부 실시양태에서, 세포는 핵산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 세포는 본원에 개시된 복합 결합 분자를 코딩하는 핵산을 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포는 원핵 세포를 포함한다. 특정 실시양태에서, 원핵 세포는 에셔리키아 콜라이(Escherichia coli) 세포이다. 특정 실시양태에서, 세포는 진핵 세포를 포함한다. 특정 실시양태에서, 진핵 세포는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, NS0 래트 골수종 세포, 또는 인간 PER.C6 세포이다.
특정 실시양태에서, 시험관 내에서 복합 결합 분자의 생산 및 분비를 허용하기에 충분한 조건 하에서 복합 결합 분자를 코딩하는 핵산을 포함하는 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 복합 결합 분자를 제조하는 방법이 본원에서 설명된다.
특정 실시양태에서, (a) 게놈 위치에 통합된 본원에서 설명되는 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 포유동물 세포주; 및 (b) 동결 방지제를 포함하는 마스터 세포 은행(master cell bank)이 본원에서 설명된다. 특정 실시양태에서, 동결 방지제는 글리세롤을 포함한다. 특정 실시양태에서, 마스터 세포 은행은 (a) 게놈 위치에 통합된 복합 결합 분자를 코딩하는 핵산을 포함하는 CHO 세포주; 및 (b) 동결 방지제를 포함한다. 특정 실시양태에서, 동결 방지제는 글리세롤을 포함한다. 특정 실시양태에서, 마스터 세포 은행은 액체 질소에 의한 동결을 견딜 수 있는 적합한 바이알 또는 용기에 함유되어 있다.
또한, 본원에서 설명되는 복합 결합 분자를 제조하는 방법이 본원에서 설명된다. 이러한 방법은 복합 결합 분자의 발현 및 분비를 허용하기에 충분한 조건 하에 세포 배양 배지에서 복합 결합 분자를 코딩하는 핵산을 포함하는 세포 또는 세포주를 인큐베이팅하는 단계, 및 추가로 세포 배양 배지로부터 복합 결합 분자를 수확하는 단계를 포함한다. 수확은 살아있는 세포, 세포 잔해, 비복합 결합 분자 단백질 또는 폴리펩타이드, 바람직하지 않은 염, 완충제 및 배지 성분을 제거하기 위한 하나 이상의 정제 단계를 추가로 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 추가의 정제 단계(들)에는 원심분리, 초원심분리, 단백질 A, 단백질 G, 단백질 A/G 또는 단백질 L 정제 및/또는 이온 교환 크로마토그래피가 포함된다.
사용 방법
면역조절 세포에 의한 면역 반응의 억제는 종양 성장, 이동 및 전이를 촉진할 수 있다. 면역억제 또는 음성 면역 조절에는 면역 반응의 전체 또는 부분 감소를 초래하는 과정 또는 경로가 포함될 수 있다. 면역억제는 대상체 또는 환자의 신체의 특정 부위(예를 들어, 종양 미세환경), 조직 또는 영역에 전신적이거나 국지화될 수 있다. B 세포는 주로 병원체의 중화를 촉진하는 항체의 생산을 통해 양성 면역 조절자로 알려져 있지만, B 세포의 특정 집단은 면역 반응을 억제하거나 음성으로 조절하는 기능을 수행할 수 있다. 이러한 B 세포 집단은 하나 초과의 세포 표면 바이오마커의 발현으로 정의될 수 있다. 면역억제성 B 세포 또는 B 세포 집단은 B 세포 계통 표면 바이오마커 및 억제성 B 세포 표면 바이오마커를 포함할 수 있다. B 세포 계통 표면 마커는 CD19, CD138, IgA 또는 CD45를 포함할 수 있다. B 세포 표면 마커는 IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3 또는 잠복성 TGF-베타(예를 들어, TGF-베타 LAP)를 포함할 수 있다. 면역억제성 B 세포 또는 면역억제성 B 세포 집단은 사이토카인과 같은 항염증 매개체의 분비를 통해 T 세포를 포함한 다양한 세포 아형 세트를 억제함으로써 면역 반응을 억제하는 기능을 할 수 있다. 면역억제성 B 세포는 또한 림프 구조를 음성으로 조절하고/하거나 T 세포가 조절 T 세포로 전환되는 것을 촉진함으로써 면역 반응을 약화시키는 기능을 할 수 있다. 따라서, 면역억제성 B 세포 집단을 표적화하여 반응을 효과적으로 조절하는 방법이 본원에 개시되어 있다.
면역억제성 B 세포 또는 B 세포 집단을 표적화하면, 종양 또는 종양 형성성 세포에 대한 면역 활성화 또는 면역 반응의 양성 조절이 발생할 수 있다. 암 또는 종양에 걸린 개체에게 본원에서 개시되는 복합 결합 분자를 투여하는 것을 포함하는, 암 또는 종양에 걸린 개체를 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. 또한, 종양 또는 암에 걸린 개체에게 본원에서 개시되는 복합 결합 분자를 투여하여 종양 내의, 종양에 인접한, 또는 종양 주위에 있는 면역억제성 B 세포를 감소시키는 것을 포함하는, 종양 또는 암에 걸린 개체의 면역억제성 B 세포를 감소시키는 것을 포함하는, 종양 또는 암에 걸린 개체의 종양 내의, 종양에 인접한, 또는 종양 주위에 있는 면역억제성 B 세포를 감소시키는 방법이 본원에서 제공된다. 대상체의 면역억제성 B 세포를 복합 결합 분자와 접촉시키는 방법이 추가로 개시되며, 상기 방법은 복합 결합 분자를 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 대상체는 종양 또는 암을 앓고 있다.
종양 또는 암의 유형, 하위유형 또는 형태는 치료 전략 및 방법에서 중요한 요소가 될 수 있다. 일부 실시양태에서, 암 또는 종양은 고형 조직 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 신장암, 위암, 식도암, 피부암, 결장직장암, 또는 두경부암을 포함한다.
면역억제성 B 세포는 항종양 면역 반응을 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 종양 또는 암은 B 세포 계통 표면 바이오마커 및 억제성 B 세포 표면 바이오마커를 포함하는 B 세포를 포함한다. B 세포 계통 표면 마커는 CD19, CD138, IgA 또는 CD45를 포함할 수 있다. B 세포 표면 마커는 IgD, CD1, CD5, CD21, CD24, CD38, HM13, SLAMF7, AQP3 또는 TGFB를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, B 세포 표면 마커는 CD19(예를 들어, CD19+) 및 CD38(예를 들어, CD38+)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 종양 침윤성 B 세포 또는 면역억제성 B 세포는 CD19+, CD38+ B 세포를 포함한다.
특정 실시양태에서, CD19, CD38, CD20 음성 암 또는 종양과 관련된 암 또는 종양의 치료에 유용한 이중특이적 항체가 본원에서 개시된다. 치료란 치료 중인 병태를 개선하거나 호전시키려는 방법을 말한다. 암과 관련하여, 치료에는 종양 부피의 감소, 종양 부피의 성장 감소, 무진행 생존율의 증가, 또는 전체 기대 수명의 증가가 포함되지만, 이에 국한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 치료는 치료되는 암의 완화에 영향을 미칠 것이다. 특정 실시양태에서, 치료는 이전에 치료된 암 또는 종양의 재발 또는 진행을 예방하기 위한 예방적 또는 유지 용량으로서의 사용을 포함한다. 투여되는 치료에 대해 모든 개체가 동등하게 반응하지 않거나 전혀 반응하지 않을지라도, 이들 개체는 치료받는 것으로 간주된다는 것이 관련 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 이해된다.
CD19 양성, CD38 양성, CD20 음성 면역억제성 B 세포와 연관된 암은 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 또는 80% CD20 음성인 CD19 양성, CD38 양성 집단(예를 들어, 종양 침윤성 또는 인접한 백혈구)을 갖는는 암 또는 종양이다. CD20 음성성은 예를 들어 유세포 분석법에 의해 결정될 수 있다(예를 들어, 염색되지 않은 세포 또는 이소형 대조군 염색 세포와 비교하여 CD20 염색이 증가하지 않음). 이와 반대로, CD19 양성, CD38 양성 집단은 예를 들어 유세포 분석법에 의해 결정될 수 있다(예를 들어, 염색되지 않은 또는 이소형 대조군 염색 세포와 비교하여 CD19 및 CD38 염색의 증가를 나타냄). 특정 실시양태에서, CD19 양성, CD38 양성, CD20 음성 B 세포는 CD30을 발현한다.
특정 실시양태에서, CD19 양성, CD38 양성, CD20 음성 암 또는 종양은 고형 암 또는 종양이다. 특정 실시양태에서, 암 또는 종양은 혈액암 또는 종양이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 하나 이상의 항체로 치료될 종양/암은 뇌암, 두경부암, 결장직장 암종, 방광암, 성상세포종, 바람직하게는 등급 II, III 또는 IV 성상세포종, 교모세포종, 다형성 교모세포종, 소세포암 및 비소세포암, 바람직하게는 비소세포 폐암, 폐 선암종, 전이성 흑색종, 안드로겐 비의존성 전이성 전립선암, 안드로겐 의존성 전이성 전립선암, 전립선 선암종, 및 유방암, 바람직하게는 유방관암 및/또는 유방 암종을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항체로 치료되는 암은 교모세포종을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 하나 이상의 항체로 치료되는 암은 췌장암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 하나 이상의 항체로 치료되는 암은 난소암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 하나 이상의 항체로 치료되는 암은 폐암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 하나 이상의 항체로 치료되는 암은 전립선암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 하나 이상의 항체로 치료되는 암은 결장암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 치료되는 암은 교모세포종, 췌장암, 난소암, 결장암, 전립선암 또는 폐암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 암은 다른 치료에 불응성이다. 특정 실시양태에서, 치료되는 암은 재발된다. 특정 실시양태에서, 치료되는 암은 하나 이상의 표준 치료에 불응성이다. 특정 실시양태에서, 암은 재발성/불응성 교모세포종, 췌장암, 난소암, 결장암, 전립선암 또는 폐암이다. 특정 실시양태에서, 암 또는 종양은 혈액암이다. 특정 실시양태에서, 혈액암은 미만성 거대 B 세포 림프종이다. 특정 실시양태에서, 혈액암은 골수종이다. 특정 실시양태에서, 혈액암은 버킷 림프종이다. 특정 실시양태에서, 혈액암은 공격성 B 세포 림프종이다. 특정 실시양태에서, 공격성 B 세포 림프종은 이중 히트(double hit) 림프종, 이중 발현자(double expressor) 림프종, 또는 삼중 히트 림프종을 포함한다. 특정 실시양태에서, 암 또는 종양은 PD-L1 또는 PD-L2 양성이다. 특정 실시양태에서, 암 또는 종양은 PD-L1 양성이다.
또한. 치료를 위해 CD19 양성, CD38 양성, CD20 음성 면역억제성 B 세포와 연관된 특정 암을 확인하는 방법이 본원에 설명되어 있다. 이러한 암은 CD38high 표현형을 나타내는 CD19 양성, CD38 양성, CD20 음성 B 세포와 연관된 암이다. 상기 방법은 a) 개체로부터 생물학적 샘플(예를 들어, 말초 혈액 또는 종양)을 얻는 단계; b) 생물학적 샘플의 B 세포(예를 들어, 말초 순환 B 세포 또는 종양 침윤성 또는 종양 인접 B 세포)에 대한 검정을 수행하는 단계; 및 c) B 세포가 CD38high 표현형을 나타내는 경우 CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체를 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, 방법은 a) 개체로부터 생물학적 샘플(예를 들어, 말초 혈액 또는 종양)을 얻는 단계; b) 생물학적 샘플의 B 세포(예를 들어, 말초 순환 B 세포 또는 종양 침윤성 또는 종양 인접 B 세포)에 대한 검정을 수행하는 단계; 및 c) CD19 및 CD38에 결합하는 별개의 항체를 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
특정 실시양태에서, 종양 또는 암에 걸린 개체를 치료하는 방법이 본원에 기재되어 있으며, 이 방법은 개체의 생물학적 샘플의 B 세포에 대해 CD38high 표현형에 대한 검정을 수행하는 단계; 및 개체의 생물학적 샘플의 B 세포에 대한 검정 결과에 기초하여 종양 또는 암에 걸린 개체에게 CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, 검정 결과는 생물학적 샘플로부터의 B 세포에서 CD38high 표현형을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 종양 또는 암에 걸린 개체를 치료하는 방법이 본원에 기술되어 있으며, 이 방법은 개체의 생물학적 샘플의 B 세포에 대한 검정 결과에 기초하여 종양 또는 암에 걸린 개체에게 CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, 검정 결과는 생물학적 샘플로부터의 B 세포에서 CD38high 표현형을 나타낸다.
CD38high 표현형은 관련 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 적절하게 결정될 수 있다. 특정 실시양태에서, CD38high 표현형은 CD38의 세포 표면 발현에 대한 검정(예를 들어, 유세포 분석법, 형광 플레이트 판독기에 의해 판독되는 플레이트 검정, 또는 현미경 검사)에 의해 결정된다. 그러나, 특정 경우에, CD38의 높은 표면 발현 수준과 상관관계가 있다면 다른 방법을 사용하여 CD38high 표현형을 결정할 수 있다(예를 들어, 생물학적 샘플에서 mRNA 또는 세포내 또는 총 CD38 단백질의 수준을 분석함).
CD38high 표현형은 말초 혈액 내의 CD38 양성 B 세포의 백분율로 표시될 수 있다. 특정 실시양태에서, 검정 결과는 말초 혈액 내의 CD19+ CD20- 세포의 약 1%, 1.5%, 2.0%, 2.5%, 3.0%, 3.5% 또는 4.0% 초과의 세포가 CD38 양성인 경우, CD38high 표현형을 나타낸다. 이러한 양성은 대조군(예를 들어, 형광 비드 대조군의 이소형 일치 대조군 항체)과 비교하여 유세포 분석법 또는 현미경 검사에 의해 결정될 수 있다. 특정 실시양태에서, CD38high 표현형은 고형 종양이 있는 환자에서 나타난다.
CD38high 표현형은 종양의 생검 샘플에서 CD38 양성 B 세포의 백분율로 표시될 수 있다. 특정 실시양태에서, 검정 결과는 말초 혈액 내의 CD19+ CD20- 세포의 약 10 %, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 또는 50% 초과의 세포가 CD38 양성인 경우, CD38high 표현형을 나타낸다. 이러한 양성은 대조군(예를 들어, 형광 비드 대조군의 이소형 일치 대조군 항체)과 비교하여 유세포 분석법 또는 현미경 검사에 의해 결정될 수 있다. 특정 실시양태에서, CD38high 표현형은 고형 종양이 있는 환자에서 나타난다.
CD38high 표현형은 B 세포의 표면 상의 CD38 분자의 절대적인 수를 결정함으로써 표시될 수 있다. 특정 실시양태에서, 검정 결과는 평균적으로 약 30,000, 35,000, 40,000, 45,000, 50,000, 55,000, 60,000, 65,000개 초과의 세포가 CD19에 양성인 B 세포에 존재하면 CD38high 표현형을 나타낸다.
CD20 음성 표현형은 유세포 분석과 같은 표준 검정에 의해 CD20의 검출 가능한 발현의 결여(이소형 대조군과 비교 시에)로 확인될 수 있다. CD20low 표현형은 낮은 수준의 CD20 발현(예를 들어, 성숙한 비면역억제성 또는 조절성 B CD19 양성, CD20 양성 B 세포 미만의)으로 확인할 수 있다. 특정 실시양태에서, CD201ow B 세포는 비조절성 또는 면역억제성 B 세포보다 2배, 3배 또는 4배 더 적은 세포 표면 CD20을 발현한다.
일부 실시양태에서, 항체는 항체 함유 약제학적 조성물의 투여에 적합한 임의의 경로, 예를 들어 피하, 복강내, 정맥내, 근육내, 종양내 또는 뇌내 경로 등에 의해 이를 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 항체는 정맥 내로 투여된다. 특정 실시양태에서, 항체는 피하로 투여된다. 특정 실시양태에서, 항체는 종양 내로 투여된다. 특정 실시양태에서, 항체는 적합한 투여 일정, 예를 들어 매주, 매주 2회, 매월, 매월 2회, 2주 1회, 3주 1회 또는 월 1회 등으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 항체는 3주에 한 번씩 투여된다. 항체는 임의의 치료 유효량으로 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 치료상 허용되는 양은 약 0.1 mg/kg 내지 약 50 mg/kg이다. 특정 실시양태에서, 치료상 허용되는 양은 약 1 mg/kg 내지 약 40 mg/kg이다. 특정 실시양태에서, 치료상 허용되는 양은 약 5 mg/kg 내지 약 30 mg/kg이다. 치료 유효량에는 치료할 질병 또는 고통과 관련된 하나 이상의 증상을 개선하기에 충분한 양이 포함된다.
실시예
다음 실시예는 단지 예시 목적으로만 포함되며, 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
실시예 1: 옥텟 결합 데이터
모 항체 및 이중특이적 항체의 결합 친화도는 생물층 간섭계를 사용하여 결정되었다. 결합 실험은 0.1% BSA, 1X PBS, 0.02% 트윈-20, 0.05% NaN3으로 구성된 검정 완충제를 사용하여 25℃에서 옥텟 Red96에서 수행되었다. 항체를 항-hIgG Fc 포획 바이오센서에 300초 동안 로딩하였다. 리간드 로딩된 센서를 회합을 위해 항원의 계열 희석액(300 nM에서 시작: CD19의 경우 2배 계열 희석액 및 CD38의 경우 3배 계열 희석액)에 담근 후(CD19의 경우 200초, CD38의 경우 150초), 해리시켰다(CD19의 경우 600초, CD38의 경우 400초). 동역학 상수는 1가(1:1) 결합 모델을 사용하여 계산되었다.
모 시험품은 다음을 포함한다:
851A = 항-CD19 3C10
851B = 항-CD19 3C10 중쇄 및 항-CD38 003 경쇄
851C = 항-CD38 003 중쇄 및 항-CD193 C10 경쇄
851D = 항-CD38 003
851E = 항-CD19 3C1O(scFv-Fc)2
851F = 항-CD38 003(scFv-Fc)2
항-CD19 3C10 VH 및 VL(851A/851E)을 포함하는 2개의 모 항체는 유사한 KD로 CD19에 결합하였다. 항-CD19 3C10 VL을 항-CD38 VL(851B)로 대체하면, CD19에 대한 결합이 약 5배 감소되었다. 항-CD38 003 VH 및 VL(851D/851F)을 갖는 모 항체는 예상한 대로 CD19에 결합하지 않았다.
표 2는 결합 데이터를 보여준다. 항-CD38 003 VH 및 VL(851D/851F)을 갖는 2개의 모 항체는 유사한 KD로 CD38에 결합하였다. 항-CD38 003 VL을 항-CD19 VL(851C)로 대체하면, CD38에 대한 결합이 크게 감소하였다. 항-CD19 VH 및 VL(851A/851E)을 포함하는 모 항체는 예상한 대로 CD38에 결합하지 않았고; 851B 또한 CD38에 결합하지 않았다. 이 데이터는 항-CD38 003 VL만이 항-CD19 3C10 VH에 대한 일반적인 경쇄로 기능할 수 있음을 보여준다.
이중특이적 항체(형식) 시험품은 다음을 포함하였다:
BS1 = 1:1:2 비율 003HC:3C10HC:003LC (일반적인 경쇄)
BS1b = 2:1:2 비율 003HC:3C10HC:003LC (일반적인 경쇄)
BS2 = 1:1:1 비율 003Knob:3C10scFvHole:003LC (Fab-Fc: scFv-Fc 이중특이적 IgG1)
BS2b = 4:1:4 비율 003Knob:3C10scFvHole:003LC (Fab-Fc: scFv-Fc 이중특이적 IgG1)
BS3 = 1:1:1 비율 3C10scFv-003Fab-FcKnob:FcHole:003LC) (scFv-Fab-Fc: Fc 이중특이적 IgG1)
BS4 = 1:1:1 비율 003Fab-FcKnob-3C10scFv:FcHole (Fab-Fc-scFv: Fc 이중특이적 IgG1)
BS4b = 4:1:4 비율 003Fab-FcKnob-3C10scFv:FcHole (Fab-Fc-scFv: Fc 이중특이적 IgG1)
CM1 = 1:1:2 비율 3C10Hole:VZVKnob:003LC 항-CD19 대조군 항체
CM1b = 1:3:3 비율 3C10Hole:VZVKnob:003LC
CM2 = 1:1:2 비율 003Knob:VZVHole:003LC 항-CD38 대조군 항체
CM2b = 3:1:3 비율 003Knob:VZVHole:003LC
표 3은 단일 항원 형식의 이중특이적 시험품에 대한 결합 데이터를 보여준다. 이중특이적 항체 BS1/BS2/BS4는 모 항체의 4배 이내의 KD로 두 표적 항원 모두에 결합하였다(회색 음영으로 표시). BS3은 CD19에만 결합하였지만, CD38에는 결합하지 않았는데, 이는 항-CD38 Fab 결합 부위가 항-CD19 scFv N-말단 융합에 의해 차단되었거나 항-CD38이 결합을 위해 유리 VH N-말단을 필요로 한다는 것을 시사한다. 하나의 아암의 대조군 항체(CM1, CM2)는 의도된 표적 항원에만 결합하였다.
2-항원 형식의 경우, 항체를 항-hIgG Fc 포획 바이오센서에 300초 동안 로딩하였다. 리간드가 로딩된 센서는 500초 동안 500 nM의 제1 항원으로 포화된 후, 240초 동안 300 nM의 제2 항원으로 포화되었다. 동역학 상수는 1가(l:l) 결합 모델을 사용하여 계산되었다. 표 5는 이중특이적 항체 BS1/BS2/BS4가 모 항체(851B, 851D 및 851E)의 2배 이내의 k(1/Ms)로 두 표적 항원 모두에 동시에 결합할 수 있음을 보여준다. 단일 항원 형식과 마찬가지로, BS3은 CD19에만 결합되고 CD38에는 결합되지 않는다.
CD19 및/또는 CD38에 결합하는 능력에 대해 변이체를 추가로 시험하였다. 결합 실험은 25℃에서 옥텟 레드(Octet Red)에서 수행되었다. 항체를 항-hIgG Fc 포획(AHC) 바이오센서에 300초 동안 로딩하였다. 리간드가 로딩된 센서를 항원(CD19 및 CD38)의 2배 계열 희석액(300 nM에서 시작)에, CD19의 경우 240초 동안, CD38의 경우 150초 동안 담가서 회합시킨 후, CD19의 경우 600초 동안, CD38의 경우 130초 동안 해리시켰다. 동역학 상수는 1가(1:1) 결합 모델을 사용하여 계산되었다. 표 5는 항-CD38 CDRH2 변이체의 결합을 보여준다. 표 6은 CD38 경쇄 W32H 변이체의 결합을 보여준다. 표 7은 CD19 중쇄 프레임워크 돌연변이 A84S A108L의 결합을 보여준다.
실시예 2: 세포 결합 연구
세포 결합 연구 프로토콜: 5개의 세포주(HEK293-CD19, HEK293-CD38, HEK293-CD19/CD38, 다우디 및 REH)를 133 nM에서 시험품과 함께 인큐베이팅한 후, 비처리 대조군에 추가하여 3배 계열 희석액(총 7점)에 대해 시험을 삼중으로 수행하였다. HEK293 세포주를 일시적으로 형질감염시켰다.
다우디, 라지(Raji) 및 REH 세포주에서 CD19 및 CD38의 세포 표면 발현을 평가하기 위한 연구가 수행되었다. 세포를 PE에 접합된 시판 항체로 삼중으로 염색하고, 세척하고, 유세포 분석을 통해 획득하였다. 세포 표면의 분자 발현을 정량하기 위해, 뱅스 래보러토리즈(Bangs Laboratories)(카탈로그 #815-A)의 퀀텀 심플리 셀룰러(Quantum Simply Cellular) 항-마우스 IgG 키트를 사용하여 MFI를 세포 값당 분자수에 보간하기 위한 표준 곡선을 생성하였다(표 8).
도 12a는 모 항체(851A, 851B, 851D) 및 두 개의 대조군 이중특이적 항체(각각 CD19 또는 CD38에 대한 한 쪽 아암 및 수두 대상포진 바이러스에 대한 다른 쪽 아암이 있음)의 다우디 세포에 대한 결합을 보여준다. 다우디 세포의 표면에는 약 100만 개의 CD38 카피가 있지만 CD19는 약 200,000개의 카피만 있다는 점을 고려하면, 도 12a는 항-CD38 851D 및 38K-VZVH의 효율적인 결합을 보여주지만, 항-CD19 851A, 851B, 19H-VZVK는 중간 정도의 결합만을 보여준다. 2개의 CD38 결합 Fab를 갖는 851D는 CD38에 대해 단 하나의 결합 Fab를 갖는 38K-VZVH보다 약 5배 더 잘 결합한다는 점에 유의한다.
도 12b는 이중특이적 항체 BS1, BS2 및 BS4의 다우디 세포에 대한 결합을 보여준다. CD38 및 CD19 둘 모두에 결합하는 이중특이적 항체의 결합력은 CD38에만 결합하는 38K-VZVH와의 결합을 비교함으로써 명백해진다.
도 13a는 모 항체(851A, 851B, 851D) 및 2개의 대조군 이중특이적 항체(각각 CD19 또는 CD38에 대한 한쪽 아암 및 수두 대상포진 바이러스에 대한 다른 쪽 아암을 가짐)의 REH 세포에 대한 결합을 보여준다. REH 세포의 표면에는 약 30만 개의 CD38 카피가 있지만 CD19는 약 50,000개의 카피만 있다는 점을 고려하면, 도 13a는 항-CD38 851D 및 38K-VZVH의 효율적인 결합을 보여주지만, 항-CD19 851A, 851B, 19H-VZVK는 중간 정도의 결합만을 보여준다. REH 세포에서 CD38 및 CD19 둘 모두의 발현 수준이 낮기 때문에, MFI의 크기는 다우디 세포에 비해 상당히 더 작다(도 2a, 2b). 2개의 CD38 결합 Fab를 갖는 851D는 CD38에 대해 단 하나의 결합 Fab를 갖는 38K-VZVH보다 약 5배 더 잘 결합한다는 점에 유의한다.
도 13b는 이중특이적 항체 BS1, BS2 및 BS4의 REH 세포에 대한 결합을 보여준다. CD38 및 CD19 둘 모두에 결합하는 이중특이적 항체의 결합력은 CD38에만 결합하는 38K-VZVH와의 결합을 비교함으로써 명백해진다.
도 14a는 모 항체(851A, 851B, 851D) 및 2개의 대조군 이중특이적 항체(38K-VZVH, 19H-VZVK)의 CD19 형질감염 HEK293 세포에 대한 결합을 보여준다. 예상한 대로, 2개의 항-CD38 항체는 이들 세포에 결합하지 않는다. 각각 2개의 CD19 결합 Fab를 갖는 851A 및 851B는 CD19에 대해 단 하나의 결합 Fab를 갖는 19H-VZVK보다 유의하게 더 잘 결합한다는 점에 유의한다.
도 14b는 이중특이적 항체 BS1, BS2 및 BS4의 CD19 형질감염 HEK293 세포에 대한 결합을 보여준다. BS2 및 BS4는 BS1보다 결합력이 약간 더 좋고, BS2 및 BS4는 BS1이 항-CD38 경쇄를 갖기 때문에 BS1보다 CD19에 약 10배 더 잘 결합한다(표 옥텟 데이터 참조).
도 15a는 모 항체(851A, 851B, 851D) 및 2개의 대조군 이중특이적 항체(38K-VZVH, 19H-VZVK)의 CD38 형질감염 HEK293 세포에 대한 결합을 보여준다. 예상한 대로, 3개의 항-CD19 항체는 이들 세포에 결합하지 않는다. 2개의 CD38 결합 Fab를 갖는 851D는 CD38에 대해 단 하나의 결합 Fab를 갖는 38K-VZVH보다 더 잘 결합한다.
도 15b는 이중특이적 항체 BS1, BS2 및 BS4의 CD38 형질감염 HEK293 세포에 대한 결합을 보여준다.
세포 결합 연구 프로토콜 - 비특이적 배경 결합: 3개의 모 모노클로날 항체(항-CD19 클론 851A 및 851B 및 항-CD38 클론 851D), 인간 IgG1 이소형 대조군, 다라투무맙의 CHO-S 및 Expi293T 세포주에 대한 결합을 평가하기 위한 연구를 수행하였다. 2개의 세포주를 생존성 염료로 염색한 다음, 최고 농도 1,250 nM의 시험품과 함께 인큐베이팅한 후, 비처리 대조군, 및 비처리, 2차 항체 비함유 대조군에 추가하여 5배 계열 희석액(총 4점)에 대해 시험을 삼중으로 수행하였다.
도 16a는 모 항체(851A, 851B, 851D)의 형질감염되지 않은 CHO-S 세포에 대한 결합을 보여준다. 비특이적 결합은 세 가지 모 항체 모두에 대해 25O nM에서 시작하는 것으로 나타났으며, 항-CD38 851D에서 더 두드러졌다.
도 16b는 모 항체(851A, 851B, 851D)의 형질감염되지 않은 Expi293T 세포에 대한 결합을 보여준다. 비특이적 결합은 세 가지 모 항체 모두에 대해 25O nM에서 시작하는 것으로 나타났으며, 항-CD38 851D에서 더 두드러졌다.
실시예 3: 직접적인 및 가교결합 유도 아폽토시스
직접적인 아폽토시스의 평가를 위해, 세포를 시험품으로 처리하고, 37℃/5% CO2에서 48시간 동안 인큐베이팅하였다. 가교결합 유도 아폽토시스의 평가를 위해, 토끼 항-인간 Fc 감마 특이적 F(ab')2를 5 μg/mL로 첨가하기 전에 세포를 얼음 위에서 30분 동안 시험품과 함께 인큐베이팅하였다. 이어서, 세포를 37℃/5% CO2에서 48시간 동안 인큐베이팅하였다. 인큐베이팅 후, 세포를 세척하고, 애넥신(Annexin) V로 염색한 다음, 유세포 분석법 획득 전에 생존성 염료(요오드화프로피듐, PI)를 함유하는 애넥신 V 완충제에 재현탁하였다. 초기 아폽토시스 세포는 애넥신 V+/PI- 단일 세포로 정의되었으며, 후기 아폽토시스/괴사 세포는 애넥신 V+/PI+ 단일 세포로 정의되었다. 애넥신 V+/PI- 및 애넥신 V+/PI-의 합을 총 아폽토시스/괴사 세포로 정의하였다. 다양한 아폽토시스 조건을 비교하기 위해 애넥신 V+/PI- 세포 또는 애넥신 V+/PI+의 백분율을 플로팅하였다.
직접적인 아폽토시스 평가를 위해, 시험품을 각각 33 nM의 최종 최고 농도에서 시험한 후, 비처리 대조군에 추가하여 7점 5배 계열 희석액에 대해 시험을 삼중으로 수행하였다. 가교결합 유도된 아폽토시스의 경우, 다라투무맙 및 IgG1 이소형 대조군에 더하여 개별 시험품(BS1, BS2, BS4, 851A, 851B 및 851D) 및 시험품의 조합(851A 및 851D; 851B 및 851D; 및 38K-VZVH 및 19H-VZVK)을 각각 33 nM의 최종 최고 농도에서 시험한 후, 비처리 대조군에 추가하여 7점 5배 계열 희석액에 대해 시험을 삼중으로 수행하였다. 애넥신 V 염색에 대한 양성 대조군으로서, 세포를 5 mM 스타우로스포린으로 처리하였다.
도 17a는 모 항체(851A, 851B, 851D), 2개의 대조군 이중특이적 항체(38K-VZVH, 19H-VZVK), 다라투무맙 및 IgG1 이소형 대조군의 다우디 세포에 대한 직접적인 아폽토시스를 보여준다. 다라투무맙은 가장 높은 수준의 아폽토시스를 나타냈다. 두 항-CD19 모 항체(851A, 851B) 모두 다라투무맙에 비해 더 낮은 수준의 아폽토시스를 나타냈다. 2개의 이중특이적 대조군 및 항-CD38 모 항체 851D는 검출할 수 있는 직접적인 아폽토시스를 나타내지 않았다.
도 17b는 이중특이적 항체 BS1, BS2, BS4, 다라투무맙 및 IgG1 이소형 대조군의 다우디 세포에 대한 직접적인 아폽토시스를 보여준다. BS1 및 BS2 형식은 다라투무맙에 비해 훨씬 더 높은 수준의 직접적인 아폽토시스를 보여주었다. 이중특이적 형식 BS4는 모 항-CD19 851A/851B 항체에 필적하는 직접적인 아폽토시스 수준을 나타냈고(도 17a와 비교); 이는 BS4 형식이 아폽토시스를 시작하기 위해 CD19 및 CD38을 근접하게 가져올 수 없기 때문일 수 있다.
도 18a는 모 항체(851A, 851B, 851D), 모 항체의 두 가지 조합(851A+851D; 851B+851D), 다라투무맙 및 IgG1 이소형 대조군의 다우디 세포에 대한 가교결합 유도 아폽토시스를 보여준다. 가교결합은 다라투무맙에 의한 아폽토시스의 수준을 증가시켰다. 가교결합은 직접적인 아폽토시스를 나타내지 않은 항-CD38 851D의 아폽토시스 수준을 상당히 증가시켰다. 항-CD19 모 항체 851A 및 851B를 가교결합시킬 때 아폽토시스 수준의 증가는 CD38 항체에 대한 것보다 적었는데, 이는 아마도 다우디 세포에서 CD38과 비교하여 더 낮은 수준의 CD19 때문일 것이다(표 9 참조). 항-CD19 851A 또는 851B와 항-CD38 851D의 가교결합 조합은 851D 단독에 비해 아폽토시스 수준을 증가시키지 않았다.
도 18b는 이중특이적 항체 BS1, BS2, BS4, (38K-VZVH+19H-VZVK), 다라투무맙 및 IgG1 이소형 대조군의 다우디 세포에 대한 가교결합 유도된 아폽토시스를 보여준다. 가교결합되었을 때, BS1 및 BS2 형식은 다라투무맙과 비슷한 수준의 아폽토시스를 보여주었다. 특히, 이중특이적 형식 BS4는 BS1, BS2 및 다라투무맙과 비슷한 가교결합 유도된 아폽토시스 수준을 나타냈지만; 가교결합이 없으면 BS4는 아폽토시스를 나타내지 않았다(그림 6b 참조). 두 개의 대조군 항체인 38K-VZVH 및 19H-VZVK의 조합은 유의한 아폽토시스를 나타내었지만, 이중특이적 형식 중 어느 하나보다는 적었고, 이것은 단일 항체에 항-CD19 및 항-CD38 결합 부위를 포함하는 것이 독립적인 항체에서보다 더 유리하다는 것을 보여준다.
실시예 4: 세포독성
다우디 표적 세포를 시험품의 용량 반응으로 처리하고, 37℃/5% CO2에서 15분 동안 인큐베이팅하였다. 시험품은 133 nM의 최종 최고 농도에서 시험되었으며, 이어서 0 nM 대조군에 추가하여 7점 5배 계열 희석액에 대해 시험을 수행하였다. 다라투무맙 및 IgG1 이소형 대조군을 양성 및 음성 대조군으로 사용하였다.
전처리된 표적 세포를 n=3 공여자(E:T 25:1)로부터의 인간 PBMC와 공동 배양하였다. PBMC는 100 U/mL의 IL-2로 밤새 "프라이밍"되었다. PBMC는 ViaFluor 405 (VF405)로 표지되었다. 세포독성에 대한 유세포 분석법에 앞서 샘플을 37℃/5% CO2에서 4시간 동안 인큐베이팅하였다. 세포독성 분석을 위해, 세포를 요오드화프로피듐(P.I.)으로 염색하고, 고처리량 유세포 분석법으로 분석하였다. VF405- 집단 내의 P.I.+ 세포의 백분율을 표적 세포 세포독성의 척도로서 분석하였다.
도 19a, 19b 및 19c는 3명의 공여자에 대한 항체 의존성 세포독성(ADCC)을 보여준다. 3명의 공여자 모두에서, 결과는 비슷하였다. 세 가지 이중특이적 형식(BS1, BS2, BS4) 및 다라투무맙은 유사한 수준의 ADCC를 나타냈다. 항-CD19 이중특이적 대조군 19H-VZVK는 ADCC를 유도하지 않았고, IgG1 대조군 항체와 동등하였는데, 이는 아마도 표적 다우디 세포 상의 낮은 수준의 CD19 때문일 것이다(표 9 참조). 이와 대조적으로, 항-CD38 이중특이적 대조군 38K-VZVH는 이중특이적 항체 및 다라투무맙과 동등한 ADCC를 나타냈고, 이것은 CD19에 비해 다우디 세포의 CD38 수준이 훨씬 높기 때문일 가능성이 높다.
도 20a, 도 20b 및 20c는 3명의 공여자에 대한 ADCC를 보여준다. 3명의 공여자 모두에서, 결과는 비슷하였다. 세 가지 이중특이적 형식(BS1, BS2, BS4)은 비슷한 수준의 ADCC를 나타냈다. BS1, BS2, BS4의 비푸코실화된(afucosylated) 버전은 푸코실화된 버전에 비해 약 10배 증가된 ADCC를 보여주었다.
보체 의존성 세포독성(CDC) 검정도 수행되었다. 표적 세포를 다음 시험품의 용량 반응으로 처리하였다: BS1, BS2, 38K-VZVH, 19H-VZVH, 38K-VZVH/19H-VZVH 조합, 및 다잘렉스(Darzalex), 항-CD20, WT IgG1 타파시타맙 및 인간 IgG1 이소형 대조군. 모두 133 nM의 최고 농도에서 시험되었으며, 이어서 비처리 대조군에 추가하여 총 7점 5배 계열 희석액에 대해 시험을 수행하였다. 37℃, 5% CO2에서 15분간 인큐베이팅한 후, 보체를 처리된 세포에 최종 농도 25%로 첨가하였다. 이어서, 세포를 37℃, 5% CO2에서 추가로 2시간 동안 보체와 함께 인큐베이팅하였다. 보체 인큐베이팅 후, 세포를 세척하고, 5 ug/mL의 생존성 염료인 요오드화프로피듐(P.I.)으로 재현탁하고, 고처리량 유세포 분석을 통해 획득하였다.
도 21a 및 21b는 보체 의존성 세포독성(CDC) 검정 결과를 보여준다. 양성 기술적 대조군인 항-CD20은 강력하고 용량 의존적인 CDC 활성을 유도하였다. 38K-VZVH 및 19H-VZVH(단독 또는 조합), 항-CD19 타파시타맙(wt IgG1) 및 인간 IgG1 이소형 대조군은 임의의 CDC 활성을 유도하지 않았다. 다잘렉스, BS1 및 BS2는 모두 CDC 활성을 나타냈다(문헌에서 예상되는 항-CD20과 동일한 규모는 아니지만). 다잘렉스의 최대 세포독성은 BS1 및 BS2보다 높았다.
항체 의존성 세포 식세포 작용(ADCP)은 시험품의 용량 반응으로 처리되고 37℃, 5% CO2에서 15분 동안 인큐베이팅된 pHrodo 그린 AM(pHG) 표지된 라지 세포에 의해 추가로 검정되었다. pHG는 pH 민감성 염료로서, 중성 pH에서는 약한 형광을 나타내지만, 대식세포의 성숙한 파고솜(phagosome)에서는 낮은 pH에서 높은 형광을 나타낸다. 항-CD20 항체 및 IgG1 이소형 대조군을 갖는 pHG 표지된 라지 표적 세포를 양성 대조군 및 음성 대조군으로 사용하였고, 최고 농도 133 nM, 7점 5배 희석 계열 및 0 nM 대조군을 사용하였다. 전처리된 표적 세포를 n=3 공여자(E:T 1:2)로부터의 인간 대식세포(시험관 내에서 단핵구로부터 분화됨)와 공동배양하였다. 대식세포는 셀 트레이스 바이올렛(CTV: Cell Trace Violet)로 표지되었다. 식세포 작용에 대한 유세포 분석을 하기 전에 샘플을 37℃, 5% CO2에서 4시간 동안 인큐베이팅하였다. pHGhi/CTV+ 세포의 백분율은 표적 세포 식세포 작용의 척도로서 분석되었다. 시험품 농도의 로그에 대해 XY 차트에 백분율을 표시하고, EC50이 계산되는 4개 파라미터 비선형 회귀 곡선에 데이터를 피팅하였다.
도 22는 라지 세포를 표적 및 공여자 대식세포로 사용한 항체 의존성 세포 식세포 작용(ADCP) 검정의 결과를 보여준다. 양성 대조군인 항-CD20은 4시간 후에 3명의 공여자 모두에 대해 용량 의존적 식세포 작용을 나타냈다(최대 식세포 작용 5-10%). 음성 대조군인 IgG1 이소형 대조군은 4시간 후에 3명의 공여자 모두에 대해 용량 의존적 식세포 작용을 나타내지 않았다. 다잘렉스는 4시간 후에 3명의 공여자 모두에 대해 용량 의존적 식세포 작용을 보여주었다(최대 식세포 작용 4-10%). BS-1, BS-2, 비푸코실화된 BS-1 및 비푸코실화된 BS-2는 약간의 용량 의존적 식세포 작용을 나타냈으며, 비푸코실화된 형식은 ADCP를 증가시켰다.
실시예 5: 적혈구와의 상호작용
n=3 시노몰구스 원숭이 및 n=3 인간 공여자로부터의 적혈구에 대한 시험품의 결합을 평가하기 위해 유세포 분석 기반 적혈구(RBC) 결합 연구를 수행하였다. 전혈을 1X PBS로 세척한 다음, 시험품으로 처리하기 전에 PBS로 20배 희석하였다. 이중특이적(BS1, BS2), 모 모노클로날(851A, 851D) 및 대조군(항-CD38 다잘렉스, 재조합 항-CD19 타파시타맙, IgG1 이소형 대조군, 알렉사 플루오르(Alexa Fluor) 647에 접합된 항-CD47)을 최고 최종 농도 133 nM에서 시험한 후, 0 nM 대조군에 추가하여 총 7점의 5배 계열 희석액에 대해 시험을 삼중으로 수행하였다. 단일 아암 대조군(38K-VZVH, 19H-VZVK)은 최고 농도 133 nM 및 동일한 용량 반응에서 조합하여 시험되었다.
얼음 위에서 30분 동안 1차 항체와 함께 인큐베이팅한 후, 세포를 세척하고, 5 ug/mL의 2차 항체(알렉사 플루오르 647로 표지된 염소 항-인간 Fcγ F(ab')2)로 염색하여 적혈구에 대한 시험품을 검출하였다. 항-CD47-A647 염색 세포에는 2차가 사용되지 않았다. 얼음 위에서 추가로 30분 동안 2차 항체와 함께 인큐베이팅한 후, 염색된 세포를 세척하고, 희석하고, 고처리량 유세포 분석법으로 획득하였다. 단일 세포 집단의 알렉사 플루오르 647 기하 평균 형광 강도(MFI)가 계산되었다. AF647의 MFI를 XY 차트에 플로팅하여 농도의 로그에 대한 MFI를 그래프로 표시하고, 데이터를 EC50이 계산되는 비선형 회귀 곡선에 피팅하였다.
도 23은 AF647-접합 항-CD47이 세 명의 인간 적혈구 공여자 모두와 용량 반응 결합 곡선을 나타냄을 보여준다. 다잘렉스는 또한 3명의 공여자 모두와의 결합이 최대 MFI는 항-CD47보다 10배 더 작지만 용량 의존적으로 증가한 것으로 나타났다. 항-CD38 851D는 다잘렉스 다음으로 가장 높은 최대 MFI를 나타냈고, BS1, BS2, 38K-VZVH와 19H-VZVK 조합, 및 항-CD19 타파시타맙이 그 뒤를 이었다. 마지막으로, 항-CD19 851A 및 IgG1 이소형은 최고 농도에서만 MFI가 약간 증가한 것으로 나타났다.
총 3명의 건강한(n=3) 시노몰구스 원숭이(Cyno) 공여자 및 3명의 건강한(n=3) 인간 공여자로부터의 적혈구에 대해 시험관내 적혈구 응집 검정을 수행하였다. 연구 당일 전혈을 채취하여 응고 여부를 검사하였다. 그런 다음, 혈액을 PBS로 세척하고, 1:50으로 희석하여 "전혈 기질"을 얻었다. 전혈 기질을 96웰 둥근 바닥 플레이트에 플레이팅하고, PBS 내의 시험품(BS1, BS2, 38K-VZVH+19H-VZVK, 851A 및 851D), 대조군(야생형 IgG1이 포함된 타파시타맙), 다잘렉스, 및 인간 IgG1 이소형 대조군), 또는 양성 기술적 대조군(IGM-55.5)을 최고 최종 농도 133 nM로 처리한 후, 0 nM 대조군에 추가하여 6점의 5배 계열 희석액에 대해 시험을 삼중으로 수행하였다. 37℃, 5% CO2에서 1시간 동안 인큐베이팅한 후, 플레이트(들)의 사진을 찍어 적혈구 응집 수준을 확인하였다. 각각의 웰은 사진을 참조로 사용하여 0-5의 특정 적혈구 응집 척도로 점수를 매겼다. 각각의 점수의 구체적인 표시는 개개의 공여자에 따라 다소 다르다.
도 24a는 인간 공여자 3에 대한 적혈구 응집 검정의 결과를 보여준다. 양성 대조군인 항-CD47은 0.04 내지 1.1 nM에서 시작하여 3명의 인간 공여자 모두에 대해 적혈구 응집을 유도하였다. BS1, BS2, 38K-VZVH+19H-VZVK, 다잘렉스, 타파시타맙 및 인간 IgG1 이소형 대조군은 모두 3명의 공여자 모두에 대해 어떤 농도에서도 적혈구 응집 유도를 나타내지 않았다. 모노클로날 항체 851A(항-CD19) 및 851D(항-CD38)는 모두 3명의 공여자 모두에 대해 각각 0.2 또는 1.1 nM에서 시작하여 기술적 대조군(항-CD47)와 비슷한 크기의 반응으로 적혈구 응집을 유도하였다. 모 모노클로날 항체와 대조적으로, BS1 및 BS2는 어느 농도에서도 적혈구 응집의 유도를 나타내지 않았다.
도 24b는 시노몰구스 공여자 3에 대한 적혈구 응집 검정 결과를 보여준다. 양성 대조군인 IGM-55.5(항-작은 i 항원 IgM 항체)는 0.04 또는 0.2 nM에서 시작하여 3명의 시노몰구스 공여자 모두에 대해 적혈구 응집을 유도하였다. BS1, BS2, 38K-VZVH+19H-VZVK, 다잘렉스, 타파시타맙 및 인간 IgG1 이소형 대조군은 모두 3명의 공여자 모두에 대해 어떤 농도에서도 적혈구 응집 유도를 나타내지 않았다. 모노클로날 항체 851A(항-CD19) 및 851D(항-CD38)는 모두 3명의 공여자 모두에 대해 각각 1.1 nM에서 시작하여 적혈구 응집을 유도하였다. 모 모노클로날 항체와 대조적으로, BS1 및 BS2는 어떤 농도에서도 적혈구 응집 유도를 나타내지 않았다.
세 마리(n=3)의 건강한 시노몰구스 원숭이(cyno) 및 세 명(n=3)의 건강한 인간 공여자로부터 얻은 적혈구에 대해 시험관내 용혈 검정을 또한 수행하였다. 연구 당일 전혈을 채취하여 응고 여부를 검사하였다. 혈액을 PBS로 세척하고, 1:10으로 희석하여 "전혈 기질"을 얻었다. 전혈 기질을 PBS 중의 시험품 및 대조군으로 처리하였다. 이중특이적(BS1, BS2), 모 모노클로날(851A, 851D) 및 대조군(항-CD38 다잘렉스, 재조합 항-CD19 타파시타맙, IgG1 이소형 대조군)을 133 nM의 최고 최종 농도에서 시험한 후, 0 nM 대조군에 추가하여 7점의 5배 계열 희석액에 대해 시험을 삼중으로 수행하였다. 단일 아암 대조군(38K-VZVH, 19H-VZVK)은 최고 농도 133 nM 및 동일한 용량 반응에서 조합하여 시험되었다. 사포닌은 최고 농도 0.1%에서 총 7점의 3배 계열 희석을 통해 시험되었다. 37℃, 5% CO2에서 1시간 동안 인큐베이팅한 후, 플레이트를 원심분리하고, 상청액을 수집하였다. 상청액을 플레이트 판독기를 통해 540 nm에서의 광학 밀도(OD)에 대해 분석하였다. 양성 대조군인 사포닌은 모든 종 및 공여자에 대해 0.001%에서 0.10%까지 용량 의존적인 용혈을 유도하였다. 시험된 모든 농도에서 어느 시험품도 용혈을 유발하지 않았다.
도 25는 시험품 중 어느 것도 시험된 모든 농도에서 용혈을 유발하지 않았음을 보여준다. 양성 대조군인 사포닌은 모든 종 및 공여자에 대해 0.001%에서 0.10%까지 용량 의존적 용혈을 유도하였다.
실시예 6: FcR 변이체는 CD38 및 CD19 결합 이중특이적 항체의 ADCC를 저하시킨다.
건강한 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 단리된 B 세포를 시험품의 용량 반응으로 처리하고, 15분 동안 인큐베이팅하였다. 라지 및 다우디 표적 세포를 또한 리툭산, 다잘렉스 또는 IgG1 이소형 대조군의 용량 반응으로 처리하고, 37℃, 5% CO2에서 15분 동안 인큐베이팅하였다. N=5의 시험품 및 n=3의 대조군(리툭산, 다잘렉스 및 인간 IgG1 이소형)을 133 nM의 최종 최고 농도에서 시험한 후, 0 nM 대조군에 추가하여 7점의 5배 계열 희석액에 대해 시험을 삼중으로 수행하였다.
전처리된 표적 세포를 n=3 공여자(E:T 25:1)로부터의 인간 PBMC와 공동 배양하였다. PBMC를 100 U/mL의 IL-2로 밤새 프라이밍하였다. PBMC는 ViaFluor 405로 표지되었다. 샘플을 37℃, 5% CO2에서 4시간 동안 인큐베이팅하였다. 시험품에는 BS1, 비푸코실화된 BS1, Fc 변이체("죽은 Fc", 예를 들어 서열 번호 301 및 302)를 갖는 BS1, 및 대조군 리툭산, 다잘렉스 및 인간 IgG1 이소형이 포함되었다. BS1은 이미 유리하게 낮은 ADCC 프로파일을 나타냈고, 따라서 각각의 경우에 변이체 Fc(죽은 Fc)가ADCC를 추가로 낮추고/낮추거나 감소시킨다는 점에서 흥미로웠다.
세포독성 검정을 위해, 세포를 요오드화프로피듐(P.I.)으로 염색하고, 고처리량 유세포 분석법으로 분석하였다. VF405 집단 내의 P.I.+ 세포의 백분율을 표적 세포 세포독성의 척도로 분석하였다. 도 26a는 공여자 3으로부터의 PMBC를 사용하여 라지 및 다우디 대조군 표적 세포에 대한 ADCC 수준을 보여준다. 도 26b는 공여자 1로부터의 PMBC를 사용하여 공여자 1로부터의 표적 B 세포에 대한 ADCC 수준을 보여준다. 도 26c는 공여자 1로부터의 PMBC를 사용하여 공여자 3으로부터의 표적 B 세포에 대한 ADCC 수준을 보여준다. 도 26d는 공여자 2로부터의 PMBC를 사용하여 공여자 1로부터의 표적 B 세포에 대한 ADCC 수준을 보여준다. 도 26e는 공여자 2로부터의 PMBC를 사용하여 공여자 3으로부터의 표적 B 세포에 대한 ADCC 수준을 보여준다. 도 26f는 공여자 3으로부터의 PMBC를 사용하여 공여자 1로부터의 표적 B 세포에 대한 ADCC 수준을 보여준다. 도 26g는 공여자 3으로부터의 PMBC를 사용하여 공여자 3으로부터의 표적 B 세포에 대한 ADCC 수준을 보여준다. BS1은 유리한 ADCC 프로파일(예를 들어, 낮은 ADCC)을 나타냈고, 따라서 BS1 ADCC가 변이체 Fc(예를 들어, "죽은" Fc)를 사용하여 추가로 감소될 수 있다는 것은 예상치 못한 일이었다. 이러한 추가의 감소는 면역학적 부작용의 가능성을 훨씬 더 낮춤으로써 치료적 처치에 유리할 수 있다. 이것은 원치 않는 세포, 비종양 세포(즉, CD19xCD38 억제성 B 세포)가 특이적으로 표적화될 수 있는 가능한 작용 메커니즘에 대해서 특히 적용된다.
실시예 7: 암 환자는 말초 혈액 및 종양 샘플에서 증가된 면역억제성 CD19 양성, CD38 양성, CD20 음성 B 세포를 나타낸다.
먼저, 건강한 공여자 및 암 환자의 말초 혈액에서 CD19 양성, CD38 양성, CD20low 또는 CD20 음성 B 세포의 존재를 검정하였다. 도 27a에 도시된 바와 같이, 비소세포폐암 환자로부터의 말초 혈액 샘플은 건강한 공여자에 비해 CD19 양성, CD38 양성, CD20 음성 B 세포의 양이 증가한 것으로 나타났다(예를 들어, NSCLC의 6.76% 대 공여자 1의 0.59%, 공여자 2의 0.59%, 공여자 3의 0.81%, 공여자 4의 1.56%, 및 공여자 5의 1.19%). 도 27b는 비슷한 수준의 CD19 양성, CD38 양성, CD20low 또는 CD20 음성 B 세포가 다른 암에서도 관찰되었음을 보여준다(2명의 서로 다른 NSCL 환자의 경우 6.76% 및 5.30%, 두경부 편평 세포 암종의 경우 11.63%, 신장 세포 암종의 경우 7.41%, 및 간세포 암종의 경우 41.94%(이 마지막 샘플은 종양 생검에서 나온 것임)).
CD38 수용체 밀도 수준은 PBMC와 종양 샘플이 일치하는 8명의 환자(N = 2 신장 세포 암종; N = 4 비소세포 폐암; N = 2 두경부 편평 세포 암종)에서 측정되었고, CD19에 대해서는 8명의 환자 중 6명에서 측정되었다. 도 28은 CD38이 T 세포 또는 골수계 세포와 같은 다른 세포 유형과 비교하여 종양 및 말초 혈액 모두에서 CD20 음성, CD19 양성 B 세포에서 적어도 10배 더 우세하다는 것을 보여준다. CD38에 대해 대략 30,000 내지 35,000의 수용체 밀도가 암 환자의 말초 혈액에서 나타났다. 도 29는 종양과 말초 혈액 사이의 CD38 수용체 수준에 대한 강한 상관관계(스피어만(Spearman)의 Rho = 0.7870; p<0.0001 만-휘트니(Mann-Whitney) 검정)를 보여준다. 도 30은 종양 침윤성 B 세포 및 말초의 B 세포가 높은 수준의 면역 억제성 사이토카인 IL-10을 발현하였음을 보여준다.
본 발명의 바람직한 실시양태가 본 명세서에 도시되고 설명되었지만, 이러한 실시양태는 단지 예로서 제공된다는 것이 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 관련 기술 분야의 통상의 기술자라면 본 발명을 벗어나지 않으면서 다양한 변형, 변경 및 대체를 실시할 수 있을 것이다. 본 명세서에 기술된 본 발명의 실시양태에 대한 다양한 대안이 본 발명을 실시하는데 채용될 수 있다는 것이 이해되어야 한다. 다음의 청구범위는 본 발명의 범위를 정의하고, 이들 청구범위 및 그 등가물 범위 내의 방법 및 구조가 이에 의해 포괄되도록 의도된다.
Claims (81)
- CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체를 개체에게 투여하여 CD19 양성, CD38high 면역억제성 B 세포와 연관된 암 또는 종양을 치료하는 것을 포함하는, 개체에서 CD19 양성, CD38high 면역억제성 B 세포와 연관된 암 또는 종양을 치료하는 방법.
- 제1항에 있어서, 이중특이적 항체가 야생형 Fc 영역에 비해 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 변이체 Fc 영역을 포함하고, 변이체 Fc 영역이 야생형 Fc 영역과 비교하여 변경된 이펙터 기능을 나타내는 것인 방법.
- 제2항에 있어서, 감소된 이펙터 기능이 감소된 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC), 감소된 보체 매개 세포독성(CDC), C1q에 대한 감소된 친화도 및 이들의 임의의 조합으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인 방법.
- 제2항 또는 제3항에 있어서, 변이체 Fc 영역이 IgG1 Fc 영역을 포함하고, 하나 이상의 돌연변이가 EU 넘버링에 따른 (a) 297A, 297Q, 297G, 또는 297D, (b) 279F, 279K, 또는 279L, (c) 228P, (d) 235A, 235E, 235G, 235Q, 235R, 또는 235S, (e) 237A, 237E, 237K, 237N, 또는 237R, (f) 234A, 234V, 또는 234F, (g) 233P, (h) 328A, (i) 327Q 또는 327T, (j) 329A, 329G, 329Y, 또는 329R, (k) 331S, (l) 236F 또는 236R, (m) 238A, 238E, 238G, 238H, 238I, 238V, 238W, 또는 238Y, (n) 248A, (o) 254D, 254E, 254G, 254H, 254I, 254N, 254P, 254Q, 254T, 또는 254V, (p) 255N, (q) 256H, 256K, 256R, 또는 256V, (r) 264S, (s) 265H, 265K, 265S, 265Y, 또는 265A, (t) 267G, 267H, 267I, 또는 267K, (u) 268K, (v) 269N 또는 269Q, (w) 270A, 270G, 270M, 또는 270N, (x) 271T, (y) 272N, (z) 292E, 292F, 292G, 또는 292I, (aa) 293S, (bb) 301W, (cc) 304E, (dd) 311E, 311G, 또는 311S, (ee) 316F, (ff) 328V, (gg) 330R, (hh) 339E 또는 339L, (ii) 343I 또는 343V, (jj) 373A, 373G, 또는 373S, (kk) 376E, 376W, 또는 376Y, (ll) 380D, (mm) 382D 또는 382P, (nn) 385P, (oo) 424H, 424M, 또는 424V, (pp) 434I, (qq) 438G, (rr) 439E, 439H, 또는 439Q, (ss) 440A, 440D, 440E, 440F, 440M, 440T, 또는 440V, (tt) K322A, (uu) L235E, (vv) L234A 및 L235A, (ww) L234A, L235A, 및 G237A, (xx) L234A, L235A, 및 P329G, (yy) L234F, L235E, 및 P331S, (zz) L234A, L235E, 및 G237A, (aaa) L234A, L235E, G237A, 및 P331S, (bbb) L234A, L235A, G237A, P238S, H268A, A330S, 및 P331S, (ccc) L234A, L235A, 및 P329A, (ddd) G236R 및 L328R, (eee) G237A, (fff) F241A, (ggg) V264A, (hhh) D265A, (iii) D265A 및 N297A, (jjj) D265A 및 N297G, (kkk) D270A, (lll) A330L, (mmm) P331A 또는 P331S, 또는 (nnn) E233P, (ooo) L234A, L235E, G237A, A330S, 및 P331S 또는 (ppp) (a) - (uu)의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
- 제2항 또는 제3항에 있어서, 변이체 Fc 영역이 표 1로부터 선택되는 것인 방법.
- 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 야생형 Fc 영역에 대한 하나 이상의 돌연변이가 EU 넘버링에 따른 L234, L235, G237, A330 또는 P331에서의 하나 이상의 치환을 포함하는 것인 방법.
- 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 야생형 Fc 영역에 대한 하나 이상의 돌연변이가 EU 넘버링에 따른 L234A, L235E, G237A, A330S, 또는 P331S를 포함하는 것인 방법.
- 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 야생형 Fc 영역에 대한 하나 이상의 돌연변이가 EU 넘버링에 따른 K322A를 포함하는 것인 방법.
- 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 야생형 Fc 영역에 대한 하나 이상의 돌연변이가 EU 넘버링에 따른 K322A로 이루어지는 것인 방법.
- 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 야생형 Fc 영역에 대한 하나 이상의 돌연변이가 EU 넘버링에 따른 S329D 및 I332E를 포함하거나 이로 이루어지는 것인 방법.
- 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 야생형 Fc 영역에 대한 하나 이상의 돌연변이가 EU 넘버링에 따른 L234A, L235E, G237A, A330S 및 P331S를 포함하거나 이로 이루어지는 것인 방법.
- 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 야생형 Fc 영역에 대한 하나 이상의 돌연변이가 EU 넘버링에 따른 L234A, L235A 및 P329G를 포함하거나 이로 이루어지는 것인 방법.
- 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 야생형 Fc 영역에 대한 하나 이상의 돌연변이가 N297A/Q/G; L235A/G237A/E318A; L234A/L235A; G236R/L328R; S298G/T299A; L234F/L235E/P331S; H268Q/V309L/A330S/P331S; L234A/L235A/P329G; V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S; 및 L234F/L235E/D265A로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인 방법.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가
a) 서열 번호 71-75 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1);
b) 서열 번호 81-85, 또는 151-155 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2);
c) 서열 번호 91-95 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3);
d) 서열 번호 101-105 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1);
e) 서열 번호 111-115 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및
f) 서열 번호 121-125 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)
을 포함하는 CD38 항원 결합 성분; 및
g) 서열 번호 11-15 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1);
h) 서열 번호 21-25 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2);
i) 서열 번호 31-35 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3);
j) 서열 번호 101-105 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1);
k) 서열 번호 111-115 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및
l) 서열 번호 121-125 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)
을 포함하는 CD19 항원 결합 성분
을 포함하는 것인 방법. - 제14항에 있어서, CD38 항원 결합 성분이 서열 번호 151 내지 155에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
- 제14항에 있어서, CD38 항원 결합 성분이 서열 번호 154에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
- 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 서열 번호 81 내지 85에 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함하는 CD38 항원 결합 성분을 포함하는 것인 방법.
- 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 서열 번호 3 또는 5에 대해 적어도 약 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 4에 대해 적어도 약 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
- 제18항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 서열 번호 3 또는 5와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 4와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 서열 번호 1, 6 또는 7에 대해 적어도 약 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 2에 대해 적어도 약 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
- 제20항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 서열 번호 1, 6 또는 7과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 2와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
- 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역은, 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 동종이량체화를 선호하지 않고 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 비-항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화를 촉진하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 것인 방법.
- 제22항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 비-항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화가 항-CD38 면역글로불린 중쇄의 동종이량체화에 비해 선호되도록, T366W 치환(EU 넘버링) 또는 T366S/L368A/Y407V 치환(EU 넘버링)을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 포함하는 것인 방법.
- 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 이중특이적 항체가 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역은, 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 동종이량체화를 선호하지 않고 제2 중쇄 불변 영역과 비-항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화를 촉진하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 것인 방법.
- 제24항에 있어서, 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역이 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 비-항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화가 항-CD19 면역글로불린 중쇄의 동종이량체화에 비해 선호되도록, T366W 치환(EU 넘버링) 또는 T366S/L368A/Y407V 치환(EU 넘버링)을 포함하는 것인 방법.
- 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역이 면역글로불린 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 서열 번호 301 또는 304에 제시된 중쇄 면역글로불린 서열 및 서열 번호 213에 제시된 경쇄 면역글로불린 서열을 포함하는 CD19 항원 결합 성분, 및 서열 번호 302, 303, 305-310에 제시된 중쇄 면역글로불린 서열 및 서열 번호 213에 제시된 경쇄 면역글로불린 서열을 포함하는 CD38 결합 성분을 포함하는 것인 방법.
- 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 카바트 넘버링에 따른 A84S 또는 A108L 치환을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
- 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 카바트 넘버링에 따른 W32H 치환을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
- 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 이중특이적 결합 분자가 CD38 항원 결합 성분 및 CD19 항원 결합 성분으로 형성되는 것인 방법.
- 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 일반적인 경쇄 이중특이적 항체인 방법.
- 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 약제학적으로 허용되는 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 제제에 포함되는 것인 방법.
- 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 암 또는 종양이 고형 조직 암인 방법.
- 제33항에 있어서, 고형 조직 암이 유방암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 신장암, 위암, 식도암, 피부암, 결장직장암, 또는 두경부암을 포함하는 것인 방법.
- 제34항에 있어서, 유방암이 삼중 음성 유방암이고, 폐암이 비소세포 폐암이고, 두경부암이 두경부 편평 세포암이고, 신장암이 신세포 암종이고, 뇌암이 다형성 교모세포종이고, 피부암이 흑색종인 방법.
- 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 암 또는 종양이 혈액암인 방법.
- 제36항에 있어서, 혈액암이 미만성 거대 B 세포 림프종인 방법.
- 제36항에 있어서, 혈액암이 골수종인 방법.
- 제36항에 있어서, 혈액암이 버킷 림프종인 방법.
- 제36항에 있어서, 혈액암이 공격성 B 세포 림프종인 방법.
- 제40항에 있어서, 공격성 B 세포 림프종이 이중 히트 림프종, 이중 발현자 림프종, 또는 삼중 히트 림프종을 포함하는 것인 방법.
- 제37항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 혈액암이 재발성 또는 불응성인 방법.
- 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 양성, CD38high, 면역억제성 B 세포와 연관된 암 또는 종양이 CD19 양성, CD38high, B 세포 침윤을 포함하는 암 또는 종양인 방법.
- 제43항에 있어서, CD19 양성, CD38high, 면역억제성 B 세포가 B 세포 활성화 마커를 발현하는 것인 방법.
- 제44항에 있어서, B 세포 활성화 마커가 CD30을 포함하는 방법.
- 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 양성, CD38high B 세포와 연관된 암 또는 종양이 PD-L1을 발현하는 것인 방법.
- 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 양성, CD38high B 세포와 연관된 암 또는 종양이 CD20low 또는 CD20 음성 B 세포와 연관되는 것인 방법.
- 제47항에 있어서, CD38high B 세포가 세포 표면에서 적어도 약 30,000개의 CD38 단백질을 발현하는 것인 방법.
- 제47항에 있어서, CD38high B 세포가 세포 표면에서 적어도 약 35,000개의 CD38 단백질을 발현하는 것인 방법.
- 제47항에 있어서, CD38high B 세포가 세포 표면에서 적어도 약 40,000개의 CD38 단백질을 발현하는 것인 방법.
- 종양 또는 암에 걸린 개체를 치료하는 방법으로서, 방법이 개체의 생물학적 샘플의 B 세포에 대해 CD38high 표현형에 대한 검정을 수행하는 단계; 및 개체의 생물학적 샘플의 B 세포에 대한 검정 결과에 기초하여 종양 또는 암에 걸린 개체에게 CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체를 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
- 종양 또는 암에 걸린 개체를 치료하는 방법으로서, 방법이 개체의 생물학적 샘플의 B 세포에 대한 검정 결과에 기초하여 종양 또는 암에 걸린 개체에게 CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체를 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
- 제51항 또는 제52항에 있어서, 개체의 생물학적 샘플의 B 세포에 대한 검정 결과가 CD38high 표현형을 나타내는 것인 방법.
- 제51항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 개체의 생물학적 샘플이 말초 혈액 샘플인 방법.
- 제51항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 개체의 생물학적 샘플이 종양 생검인 방법.
- 제51항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 개체의 B 세포에 대한 검정이 생물학적 샘플을 항-CD38 항체와 접촉시키는 것을 포함하는 것인 방법.
- 제51항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 검정이 유세포 분석을 포함하는 것인 방법.
- 제51항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 검정이 면역조직화학을 포함하는 것인 방법.
- 제51항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 개체의 약 2% 초과의 B 세포가 CD38high 표현형을 나타내는 경우, 종양 또는 암에 걸린 개체에게 CD38 및 CD19에 결합하는 이중특이적 항체가 투여되는 것인 방법.
- 제51항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, B 세포가 약 30,000개 초과의 세포 표면 CD38 분자를 발현하는 경우, 개체의 생물학적 샘플의 B 세포는 CD38high 표현형을 나타내는 것인 방법.
- 제51항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, B 세포가 약 35,000개 초과의 세포 표면 CD38 분자를 발현하는 경우, 개체의 생물학적 샘플의 B 세포는 CD38high 표현형을 나타내는 것인 방법.
- 제51항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, B 세포가 약 40,000개 초과의 세포 표면 CD38 분자를 발현하는 경우, 개체의 생물학적 샘플의 B 세포는 CD38high 표현형을 나타내는 것인 방법.
- 제51항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가
a) 서열 번호 71-75 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1);
b) 서열 번호 81-85, 또는 151-155 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2);
c) 서열 번호 91-95 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3);
d) 서열 번호 101-105 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1);
e) 서열 번호 111-115 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및
f) 서열 번호 121-125 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)
을 포함하는 CD38 항원 결합 성분; 및
g) 서열 번호 11-15 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1);
h) 서열 번호 21-25 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(HCDR2);
i) 서열 번호 31-35 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(HCDR3);
j) 서열 번호 101-105 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1);
k) 서열 번호 111-115 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(LCDR2); 및
l) 서열 번호 121-125 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(LCDR3)
을 포함하는 CD19 항원 결합 성분
을 포함하는 것인 방법. - 제63항에 있어서, CD38 항원 결합 성분이 서열 번호 151 내지 155에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
- 제63항에 있어서, CD38 항원 결합 성분이 서열 번호 154에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
- 제51항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 서열 번호 81 내지 85에 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하는 HCDR2 아미노산 서열을 포함하는 CD38 항원 결합 성분을 포함하는 것인 방법.
- 제51항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 서열 번호 3 또는 5에 대해 적어도 약 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 4에 대해 적어도 약 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
- 제67항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 서열 번호 3 또는 5와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 4와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
- 제51항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 서열 번호 1, 6 또는 7에 대해 적어도 약 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 2에 대해 적어도 약 90%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
- 제69항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 서열 번호 1, 6 또는 7과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역; 및 서열 번호 2와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
- 제51항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역은, 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 동종이량체화를 선호하지 않고 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 비-항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화를 촉진하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 것인 방법.
- 제71항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 비-항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화가 항-CD38 면역글로불린 중쇄의 동종이량체화에 비해 선호되도록, T366W 치환(EU 넘버링) 또는 T366S/L368A/Y407V 치환(EU 넘버링)을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 포함하는 것인 방법.
- 제51항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 이중특이적 항체가 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역은, 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 동종이량체화를 선호하지 않고 제2 중쇄 불변 영역과 비-항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화를 촉진하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 것인 방법.
- 제73항에 있어서, 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역이 항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 비-항-CD19 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 이종이량체화가 항-CD19 면역글로불린 중쇄의 동종이량체화에 비해 선호되도록, T366W 치환(EU 넘버링) 또는 T366S/L368A/Y407V 치환(EU 넘버링)을 포함하는 것인 방법.
- 제51항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역이 면역글로불린 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제51항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 서열 번호 301 또는 304에 제시된 중쇄 면역글로불린 서열 및 서열 번호 213에 제시된 경쇄 면역글로불린 서열을 포함하는 CD19 항원 결합 성분, 및 서열 번호 302, 303, 305-310에 제시된 중쇄 면역글로불린 서열 및 서열 번호 213에 제시된 경쇄 면역글로불린 서열을 포함하는 CD38 결합 성분을 포함하는 것인 방법.
- 제51항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 카바트 넘버링에 따른 A84S 또는 A108L 치환을 포함하는 항-CD19 면역글로불린 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
- 제51항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, CD19 및 CD38에 결합하는 이중특이적 항체가 카바트 넘버링에 따른 W32H 치환을 포함하는 항-CD38 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
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